PL218235B1 - Allogeneic and autologous fibrin carrier, method for its preparation and the use of a fibrin carrier for transplantation of cells, especially human cells - Google Patents

Allogeneic and autologous fibrin carrier, method for its preparation and the use of a fibrin carrier for transplantation of cells, especially human cells

Info

Publication number
PL218235B1
PL218235B1 PL396313A PL39631311A PL218235B1 PL 218235 B1 PL218235 B1 PL 218235B1 PL 396313 A PL396313 A PL 396313A PL 39631311 A PL39631311 A PL 39631311A PL 218235 B1 PL218235 B1 PL 218235B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
platelet
plasma
fibrinogen
rich plasma
blood
Prior art date
Application number
PL396313A
Other languages
Polish (pl)
Other versions
PL396313A1 (en
Inventor
Henryk Bursig
Stanisław Dyląg
Fabian Kępski
Dorota Król
Patrycja Sitek
Aleksandra Wysocka-Wycisk
Jolanta Żyła
Original Assignee
Henryk Bursig
Stanisław Dyląg
Fabian Kępski
Dorota Król
Regionalne Ct Krwiodawstwa I Krwiolecznictwa
Patrycja Sitek
Wysocka Wycisk Aleksandra
Jolanta Żyła
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Henryk Bursig, Stanisław Dyląg, Fabian Kępski, Dorota Król, Regionalne Ct Krwiodawstwa I Krwiolecznictwa, Patrycja Sitek, Wysocka Wycisk Aleksandra, Jolanta Żyła filed Critical Henryk Bursig
Priority to PL396313A priority Critical patent/PL218235B1/en
Priority to PCT/PL2012/000029 priority patent/WO2013039411A1/en
Publication of PL396313A1 publication Critical patent/PL396313A1/en
Publication of PL218235B1 publication Critical patent/PL218235B1/en

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
    • A61L27/225—Fibrin; Fibrinogen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
    • A61L27/3616—Blood, e.g. platelet-rich plasma
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

An autologous and allogenic fibrin carrier characterized in that it is a gel-like mixture of fibrinogen and platelet-rich plasma combined at a ratio 0.1-2 to 0.1 -2, favorably 1 : 1 of volume share, and a calcium chloride in a 0.1-99% solution, favorably a 10% solution at a ratio 0.1-2 to 0.1-2, favorably 1 : 1 relative to the mixture of fibrinogen and platelet-rich plasma. A method of obtaining an autologous fibrin carrier comprising blood collection, separation of blood plasma from blood cells, freezing and thawing of blood plasma, characterized in that the blood donation collected from the blood donor is separated from the concentrate of blood cells, i.e. erythrocytes, leukocytes being removed, said separation having the form of centrifugation at + 20 to + 24°C for 5 to 15 minutes, with centrifugation force of 700 to 2000 x g; afterwards plasma is pushed through to an empty satellite container, wherein centrifugation takes place at + 20°C to +24°C for 5-15 minutes at a centrifugation force of 2100 to 5000 x g to separate platelet-rich plasma, which is stored in bags, favorably breathable swinging bags for maximum 7 days and favorably 3 days. The remaining platelet-poor plasma is used for preparation of fibrinogen in cryoprecipitate, by freezing blood plasma twice to the temperature of -30°C to -90°C and thawing blood plasma at about + 4°C, for example in a water bath, then it is centrifuged at about + 4°C for 5-20 minutes at centrifugation force of 1000 to 5000 x g, wherein supernatant is removed and resultant cryoprecipitate is mixed with platelet-rich plasma from the container, at a ratio from 0.1 -2 to 0.1 -2, favorably 1 : 1, and with a calcium compound solution, favorably a 10% calcium chloride solution at a favorable ratio 1 : 1 relative to the mixture of fibrinogen and platelet-rich plasma. Use of an autologous fibrin carrier for obtaining a gel-like transplant, that is a carrier formed by mixing fibrinogen and platelet-rich plasma obtained from the recipient's blood, favorably of a single donation, or ready-made fibrinogen characterized by an adequate phenotype and platelet-rich plasma taken directly from the blood donation of the patient-recipient using the operating room's apparatus, wherein in the process of obtaining a carrier and prior to the addition of a 0.1%-99% calcium chloride solution at a ratio 0.1 -2 do 0.1-2, favorably 1 : 1 of volume share relative to the mixture of fibrinogen and platelet-rich plasma, from 5 thousand to 100 million recipient's cells or allogenic and xenogenic cells are added, cultured in a known way and processed on the transplantation's date by trypsinization, washing in a serum- containing medium and vitality assessment.

Description

Przedmiotem wynalazku jest nośnik fibrynowy autologiczny i allogeniczny, sposób otrzymywania nośnika fibrynowego autologicznego i allogenicznego komórek ssaczych oraz zastosowanie go do przeszczepu wyhodowanych komórek, zwłaszcza ludzkich.The present invention relates to an autologous and allogeneic fibrin carrier, a method for the preparation of an autologous and allogeneic fibrin carrier of mammalian cells, and its use in transplantation of cultured cells, especially human cells.

Fibrynogen jest białkiem osocza krwi, z którego powstaje fibryna, czyli włóknik - końcowy produkt procesu krzepnięcia krwi. Polimeryzacja fibrynogenu w nierozpuszczalną fibrynę zachodzi w obecności trombiny, jonów wapnia i czynnika XII. Powstająca fibryna wykazuje zdolność wiązania się z wieloma czynnikami wzrostu ochraniając je przed denaturacją i proteolizą. Dlatego też fibrynę można stosować jako system kontrolująco-regulujący uwalniania czynników wzrostowych, cytokin lub innych molekuł bioaktywnych, które mają wpływ na adhezję, proliferację, migrację, różnicowanie i produkcję macierzy zewnątrzkomórkowej.Fibrinogen is a blood plasma protein from which fibrin is formed, i.e. fibrin - the end product of the blood clotting process. The polymerization of fibrinogen to insoluble fibrin occurs in the presence of thrombin, calcium ions and factor XII. The resulting fibrin shows the ability to bind to many growth factors, protecting them against denaturation and proteolysis. Therefore, fibrin can be used as a controlling and regulating system for the release of growth factors, cytokines or other bioactive molecules that have an effect on adhesion, proliferation, migration, differentiation and production of the extracellular matrix.

Stąd też zaczęto stosować fibrynogen do przeszczepów komórek. Główną cechą fibrynogenu jest plastyczność, dzięki, której można dostosować przygotowany przeszczep do wielkości ubytku oraz dobra tolerancja przez pacjentów. Duża zdolność do polimeryzacji ze stanu ciekłego w żel sprawia, że można przygotować dowolnego kształtu trwałe podłoże do zawieszania komórek i czynników wzrostu.Hence the use of fibrinogen for cell transplantation. The main feature of fibrinogen is plasticity, thanks to which the prepared graft can be adapted to the size of the defect and good tolerance by patients. The high ability to polymerize from a liquid state to a gel makes it possible to prepare any shape, durable medium for suspending cells and growth factors.

Znany jest z polskiego opisu patentowego nr 54175 sposób otrzymywania czystego fibrynogenu uzyskiwanego przy frakcjonowaniu osocza polegający na tym, że za stałą pozostałość otrzymaną przez rozpuszczenie osadu z I frakcji Cohna w temperaturze +30°C w roztworze wodnym zawierającym 0,9% NaCl i 1% glikozy zastosowanym w ilości odpowiadającej 1/5 objętości osocza wyjściowego, w czasie 1-2 minut w temperaturze +30°C, następnie przez inkubacje i odwirowanie w temperaturze 0°C rozpuszcza się mieszając w temperaturze +30°C w roztworze wodnym stabilizatora, zawierającym w 1000 ml 6,72 g dwuwodnego cytrynianu trójsodowego, 3,4 g NaCl i 13 g glukozy zakwaszonej stężonym kwasem solnym do pH = 6,3. Otrzymany roztwór natychmiast zamraża się do temperatury -40°C i liofilizuje. Do rozpuszczania pozostałości uzyskanej z 400 - 500 ml osocza wyjściowego stosuje się 75 ml roztworu stabilizatora. Otrzymany po liofilizacji czysty fibrynogen rozpuszcza się przed stosowaniem leczniczym apirogenną wodą destylowaną.There is known from the Polish patent specification No. 54175 a method of obtaining pure fibrinogen obtained in plasma fractionation, consisting in the fact that a solid residue obtained by dissolving the sediment from Cohn fraction I at a temperature of + 30 ° C in an aqueous solution containing 0.9% NaCl and 1% glucose applied in an amount corresponding to 1/5 of the initial plasma volume, during 1-2 minutes at + 30 ° C, then by incubation and centrifugation at 0 ° C, it is dissolved by stirring at + 30 ° C in an aqueous solution of the stabilizer containing in 1000 ml of 6.72 g of trisodium citrate dihydrate, 3.4 g of NaCl and 13 g of glucose acidified with concentrated hydrochloric acid to pH = 6.3. The resulting solution is immediately frozen to -40 ° C and lyophilized. 75 ml of stabilizer solution are used to dissolve the residue obtained from 400-500 ml of starting plasma. The pure fibrinogen obtained after lyophilization is dissolved before treatment with pyrogen-free distilled water.

Ponadto znany jest ze zgłoszenia nr P-383247 sposób otrzymywania fibrynogenu, zwłaszcza do otrzymywania kleju tkankowego oraz sposób jego wytwarzania. Zgodnie z wynalazkiem sposób otrzymywania fibrynogenu, zwłaszcza do otrzymywania kleju tkankowego, złożony z pobrania donacji krwi do potrójnego pojemnika do krwi, wirowania pobranej krwi, oddzielania osocza od elementów komórkowych oraz dwukrotnego zamrażania i rozmrażania z ludzkiej krwi osocza polega na tym, że oddzielone osocze przelewa się do pojemnika transferowego pustego, poddaje się zamrażaniu w temperaturze -30°C, przechowuje w temperaturze poniżej -25°C w ciągu 12 - 24 godzin, a następnie z zamrażarki przenosi się do łaźni wodnej i rozmraża się w temperaturze +4°C w ciągu do 2 godzin. Następnie osocze ponownie zamraża się w temperaturze -30°C i przechowuje w temperaturze poniżej -25°C w ciągu 12 - 24 godzin. Po tej operacji pojemnik z osoczem wyjmuje się z zamrażarki i łączy się z pustym pojemnikiem transferowym, dren zabezpiecza się zaciskiem a następnie zanurza się w medium płynnym o temperaturze +4°C. Pojemnik z osoczem zawierającym precypitat poddaje się wirowaniu, a po odwirowaniu pojemnik umieszcza się w prasie ręcznej i szybko oddziela nadsącz od osadu, zwalniając zacisk, pojemnik z osadem fibrynogenu przenosi się do zamrażarki i przechowuje w temperaturze poniżej -25°C.Moreover, from the application No. P-383247, a method for obtaining fibrinogen, especially for obtaining a tissue glue, and a method for its production are known. According to the invention, the method of obtaining fibrinogen, in particular for the preparation of tissue glue, consisting of the collection of a blood donation into a triple blood container, centrifugation of the collected blood, separation of the plasma from cellular elements and the double freezing and thawing of the plasma from human blood consists in the separated plasma being poured over transferred to an empty transfer container, frozen at -30 ° C, stored below -25 ° C for 12-24 hours, then transferred from a freezer to a water bath and thawed at + 4 ° C at within 2 hours. The plasma is then re-frozen at -30 ° C and stored below -25 ° C for 12-24 hours. After this operation, the container with plasma is removed from the freezer and connected to the empty transfer container, the drain is secured with a clamp and then immersed in a liquid medium at a temperature of + 4 ° C. The container with the plasma containing the precipitate is centrifuged, and after centrifugation, the container is placed in a hand press and the supernatant is quickly separated from the pellet by releasing the clamp, the container with the fibrinogen pellet is transferred to a freezer and stored at a temperature below -25 ° C.

Celem i zadaniem wynalazku jest opracowanie nośnika fibrynowego, sposobu otrzymywania nośnika fibrynowego bardziej uniwersalnego dla przeszczepów autologicznych i allogeniczny dla wszystkich komórek ssaczych, w tym chondrocytów charakteryzującego się lepszymi właściwościami użytkowymi i leczniczymi takimi jak: większa stabilność, zwiększone możliwości wzrostowo-zdrowotne oraz stwarzającego możliwość rezygnacji z dodatkowych czynników sieciujących, przykładowo trombina ksenogeniczna, która może wywołać odczyn alergiczny oraz czynników antyfibrynolitycznych: kwas traneksamowy, aprotynina.The aim and task of the invention is to develop a fibrin carrier, a method of obtaining a fibrin carrier that is more universal for autologous transplants and allogeneic for all mammalian cells, including chondrocytes, characterized by better functional and therapeutic properties, such as: greater stability, increased growth and health possibilities and the possibility of resignation. additional cross-linking agents, for example xenogeneic thrombin, which can cause allergic reaction, and antifibrinolytic agents: tranexamic acid, aprotinin.

Ponadto celem wynalazku jest zastosowanie nośnika fibrynowego do przeszczepu komórek ssaczych. Okazało się, że wprowadzenie do fibrynogenu dodatkowego środka krwiopochodnego nie tylko nie spowodowało degradacji żelu, lecz wpłynęło korzystnie na stabilizację przeszczepu i jego szybsze oddziaływanie na komórki.Furthermore, it is an object of the invention to use a fibrin carrier for transplantation of mammalian cells. It turned out that the addition of an additional blood derivative to fibrinogen not only did not degrade the gel, but also had a positive effect on the stabilization of the graft and its faster effect on cells.

Wytyczone zagadnienie rozwiązuje nośnik fibrynowy autologiczny i allogeniczny, charakteryzujący się tym, że stanowi żelowatą mieszaninę fibrynogenu i osocza bogatopłytkowego połączonychThe identified problem is solved by the autologous and allogeneic fibrin carrier, characterized by the fact that it is a gel-like mixture of fibrinogen and platelet-rich plasma combined

PL 218 235 B1 w stosunku 0,1 - 2 do 0,1 - 2, korzystnie 1:1 udziałów objętościowych oraz chlorku wapnia w roztworze o stężeniu od 0,1 - 99%, korzystnie 10%-wego roztworu w stosunku 0,1 - 2 do 0,1 - 2 korzystnie 1:1 względem mieszaniny fibrynogenu z osoczem bogatopłytkowym. Nośnik fibrynowy autologiczny i allogeniczny stanowi żelowatą mieszaninę fibrynogenu i osocza bogatopłytkowego połączonych w stosunku 0,1 - 2 do 0,1 do 2, korzystnie 1:1 udziałów objętościowych oraz roztwór trombiny z chlorkiem wapnia we wzajemnym stosunku dogodnie 1:1 a względem mieszaniny fibrynogenu z osoczem bogatopłytkowym jak 0,1 - 2 do 0,1 - 2 korzystnie 1:1. Jako fibrynogen stosuje się fibrynogen krioprecypitat, otrzymany z donacji krwi biorcy lub dawcy, gotowy fibrynogen komercyjny.PL 218 235 B1 in a ratio of 0.1-2 to 0.1-2, preferably 1: 1, by volume, and calcium chloride in the solution at a concentration of 0.1-99%, preferably 10% of the solution in the ratio 0.1 - 2 to 0.1 - 2, preferably 1: 1 to the mixture of fibrinogen and platelet-rich plasma. The autologous and allogeneic fibrin carrier is a gel-like mixture of fibrinogen and platelet-rich plasma combined in a ratio of 0.1 - 2 to 0.1 to 2, preferably 1: 1, by volume, and a solution of thrombin with calcium chloride in a relative ratio of preferably 1: 1 relative to the fibrinogen mixture. with platelet rich plasma like 0.1-2 to 0.1-2, preferably 1: 1. As fibrinogen, fibrinogen is cryoprecipitate, obtained from the blood of a recipient or donor, ready-made commercial fibrinogen.

Jako osocze bogatopłytkowe stosuje się osocze bogatopłytkowe otrzymane z donacji krwi biorcy lub dawcy, osocze otrzymane bezpośrednio z krwi od pacjenta za pomocą aparatury, gotowe oso56 cze bogatopłytkowe. Osocze bogatopłytkowe zawiera od 4,6 x 10 /μ| do 2 x 10 /μ| krwinek płytkowych.The platelet-rich plasma used is platelet-rich plasma obtained from the blood donation of the recipient or donor, plasma obtained directly from the patient's blood with the use of apparatus, ready-made platelet-rich plasma. Platelet rich plasma contains from 4.6 x 10 / μ | up to 2 x 10 / μ | platelets.

Sposób otrzymywania nośnika fibrynowego autologicznego obejmujący pobieranie krwi, oddzie|enie osocza od e|ementów komórkowych krwi, zamrażanie i rozmrażanie osocza, charakteryzujący się tym, że z pobranej od biorcy donacji krwi, oddzie|one przez wirowanie w temperaturze +20 do +24°C przez 5 do 15 minut, przy si|e wirowania od 700 do 2000 x g od koncentratu krwinek: erytrocytów, |eukocytów, który się usuwa, - osocze przeciska się do pustego pojemnika sate|itarnego, po czym z osocza przez wirowanie w temperaturze +20 do +24°C przez 5 - 15 minut przy si|e wirowania od 2100 do 5000 x g oddzie|a się osocze bogatopłytkowe, które przechowuje się w pojemnikach, dogodnie pojemnikach oddychających w warunkach kołysania najwyżej 7 dób dogodnie 3 doby. Z pozostałego osocza ubogopłytkowego przygotowuje się fibrynogen w postaci krioprecypitatu przez dwukrotne zamrożenie osocza do temperatury -30°C do -90°C i rozmrożenie w temperaturze około +4°C, przykładowo w łaźni wodnej, następnie wirowanie w temperaturze około +4°C przez 5 - 20 minut przy si|e wirowania od 1000 do 5000 x g, po czym usuwa się nadsącz, a otrzymany krioprecypitat miesza się z osoczem bogatopłytkowym z pojemnika, w stosunku od 0,1 - 2 do 0,1 - 2, korzystnie 1:1 i ze związkiem wapnia w roztworze dogodnie 10% roztworem ch|orku wapnia w stosunku korzystnie 1:1 wzg|ędem mieszaniny fibrynogenu z osoczem bogatopłytkowym. Natomiast sposób otrzymywania nośnika fibrynowego a||ogenicznego charakteryzuje się tym, że z pobranej donacji krwi, co najmniej od dwóch dawców, oddzie|one przez wirowanie w temperaturze + 20 do + 24°C przez 5 do 15 minut przy si|e wirowania od 700 do 2000 x g od koncentratu krwinek: erytrocytów, |eukocytów, który się usuwa - osocze przeciska się do pustego pojemnika sate|itarnego, po czym przez wirowanie w temperaturze +20 do +24°C przez 5 - 10 minut przy si|e wirowania od 750 do 2000 x g oddzie|a się osocze bogatopłytkowe, które się przechowuje w pojemnikach, dogodnie pojemnikach oddychających w warunkach kołysania przez najwyżej 7 dób dogodnie 3 doby. Z pozostałego osocza ubogopłytkowego przygotowuje się fibrynogen w postaci krioprecypitatu przez dwukrotne zamrożenie osocza do temperatury 30°C do -90°C i rozmrożenie w temperaturze około +4°C przykładowo w łaźni wodnej, następnie wirowanie w temperaturze około +4°C przez 5 - 15 minut przy si|e wirowania od 1000 do 5000 x g, po czym usuwa się nadsącz a otrzymany krioprecypitat miesza się z osoczem bogatopłytkowym przechowywanym w pojemniku w stosunku od 0,1 - 2 do 0,1 - 2, korzystnie 1:1 i ze związkiem wapnia w roztworze dogodnie 10% roztworem ch|orku wapnia w stosunku korzystnie 1:1 wzg|ędem mieszaniny fibrynogenu z osoczem bogatopłytkowym. Fibrynogen przygotowuje się z osocza innego dawcy, zamrożonego w temperaturze -30°C do -90°C i po 16 tygodniowej karencji przez rozmrożenie w temperaturze około +4°C, przykładowo w łaźni wodnej, ponowne zamrożenie w temperaturze -30°C do -90°C i rozmrożenie w temperaturze około +4°C, następnie wirowanie w temperaturze około +4°C przez 5 do 15 minut przy si|e wirowania od 1000 do 5000 x g, po czym usuwa się nadsącz a otrzymany krioprecypitat miesza się z osoczem bogatopłytkowym z pojemnika w stosunku od 0,1 - 2 do 0,1 - 2 korzystnie 1:1 i ze związkiem wapnia w roztworze, dogodnie 10% roztworem ch|orku wapnia w stosunku od 0,1 - 2 do 0,1 - 2 korzystnie 1:1 wzg|ędem mieszaniny fibrynogenu z osoczem bogatopłytkowym. Oddzie|anie osocza zostaje zakończone na poziomie 0,1 cm do 1 cm nad powierzchnią koncentratu krwinek: erytrocytów, |eukocytów. Oddzie|anie osocza bogatopłytkowego zostaje zakończone, gdy nad jego powierzchnią pozostaje od 10 do 100 m| osocza.A method for obtaining an autologous fibrin carrier involving blood collection, separation of plasma from blood cell elements, freezing and thawing of plasma, characterized in that from the blood donation taken from the recipient, they are separated by centrifugation at a temperature of +20 to +24 ° C C for 5 to 15 minutes, with a centrifugation force of 700 to 2000 xg from the concentrate of blood cells: erythrocytes, eukocytes, which is removed, - the plasma is pressed into an empty satellar container, and then from the plasma by centrifugation at At 20 to + 24 ° C for 5 - 15 minutes with a centrifugation force of 2100 to 5000 xg, platelet-rich plasma is separated and stored in containers, conveniently breathable containers under rocking conditions at most 7 days, suitably 3 days. From the remaining platelet poor plasma, fibrinogen is prepared as cryoprecipitate by freezing the plasma twice to -30 ° C to -90 ° C and thawing at about + 4 ° C, for example in a water bath, followed by centrifugation at about + 4 ° C for 5 - 20 minutes with a centrifugation force of 1000 to 5000 xg, after which the supernatant is removed and the obtained cryoprecipitate is mixed with the platelet-rich plasma from the container in a ratio of 0.1-2 to 0.1-2, preferably 1: 1 and a calcium compound in solution suitably with a 10% calcium chloride solution in a ratio of preferably 1: 1 relative to the mixture of fibrinogen with platelet-rich plasma. On the other hand, the method of obtaining the fibrin carrier is characterized by the fact that from the blood donation collected, from at least two donors, they are separated by centrifugation at a temperature of + 20 to + 24 ° C for 5 to 15 minutes with centrifugation from 700 to 2000 xg from the concentrate of red blood cells: erythrocytes, eukocytes, which is removed - the plasma is pressed into an empty satellite container, then by centrifugation at a temperature of +20 to +24 ° C for 5 - 10 minutes with centrifugation from 750 to 2000 xg, platelet-rich plasma is separated and stored in containers, suitably breathable containers under rocking conditions for up to 7 days, suitably 3 days. From the remaining platelet poor plasma, fibrinogen is prepared as cryoprecipitate by freezing the plasma twice to 30 ° C to -90 ° C and thawing at about + 4 ° C e.g. in a water bath, followed by centrifugation at about + 4 ° C for 5 - 15 minutes at centrifugation from 1000 to 5000 xg, after which the supernatant is removed and the obtained cryoprecipitate is mixed with platelet-rich plasma stored in the container in a ratio of 0.1-2 to 0.1-2, preferably 1: 1, and with a calcium compound in solution preferably a 10% calcium chloride solution in a ratio of preferably 1: 1 relative to the mixture of fibrinogen and platelet-rich plasma. Fibrinogen is prepared from plasma of another donor, frozen at -30 ° C to -90 ° C and after a 16-week grace period by thawing at about + 4 ° C, for example in a water bath, re-freezing at -30 ° C to - 90 ° C and thawing at about + 4 ° C, followed by centrifugation at about + 4 ° C for 5 to 15 minutes at a centrifugation force of 1000 to 5000 xg, after which the supernatant is removed and the obtained cryoprecipitate is mixed with plasma platelet rich from the container in a ratio of 0.1-2 to 0.1-2, preferably 1: 1, and with a calcium compound in solution, preferably with a 10% solution of calcium chloride in a ratio of 0.1-2 to 0.1-2 preferably 1: 1 with respect to the mixture of fibrinogen and platelet-rich plasma. Plasma separation is completed at 0.1 cm to 1 cm above the surface of the concentrate of blood cells: erythrocytes, eukocytes. Separation of the platelet-rich plasma is complete when 10 to 100 m remains above the surface | plasma.

Ponadto istotę wyna|azku stanowi okreś|one zastosowanie nośnika fibrynowego auto|ogicznego i a||ogenicznego. Zastosowanie nośnika fibrynowego auto|ogicznego do otrzymania że|owatego przeszczepu - czy|i nośnika powstałego przez zmieszanie fibrynogenu i osocza bogatopłytkowego uzyskanych z krwi biorcy, korzystnie z jednej donacji, wzg|ędnie - gotowego fibrynogenu o odpowiednim fenotypie i osocza bogatopłytkowego pobranego bezpośrednio z donacji krwi za pomocą aparatury na b|oku operacyjnym od pacjenta-biorcy, przy czym w trakcie otrzymywania nośnika, przed dodaniemIn addition, the essence of the invention is the specific use of an autoimmune and an alpha-fibrin fibrin carrier. The use of an auto fibrin carrier to obtain a fibrin graft and a carrier obtained by mixing fibrinogen and platelet-rich plasma obtained from the recipient's blood, preferably from one donation, or rather - ready-made fibrinogen with an appropriate phenotype and platelet-rich plasma collected directly from the donation blood using the apparatus on the operating bladder from the recipient patient, while receiving the carrier, before adding

PL 218 235 B1 roztworu chlorku wapnia o stężeniu 0,1 - 99% w stosunku 0,1 - 2 do 0,1 - 2, korzystnie 1:1 udziałów objętościowych względem mieszaniny fibrynogenu z osoczem bogatopłytkowym dodaje się od 5 tyś. do 100 mln komórek od biorcy względnie allogenicznych i ksenogenicznych w znany sposób wyhodowanych i poddanych w dniu przeszczepu obróbce polegającej na trypsynizowaniu, płukaniu w pożywce z surowicą, liczeniu i ocenie żywotności.A solution of calcium chloride with a concentration of 0.1 - 99% in a ratio of 0.1 - 2 to 0.1 - 2, preferably 1: 1, by volume of the mixture of fibrinogen and platelet-rich plasma, is added from 5 thousand. up to 100 million cells from the recipient relatively allogeneic and xenogeneic, cultured in a known manner and treated on the day of transplantation by trypsinization, washing in serum with medium, counting and assessment of viability.

Zastosowanie nośnika fibrynowego autologicznego do otrzymania żelowatego przeszczepu czyli nośnika powstałego przez zmieszanie w specjalnej formie fibrynogenu i osocza bogatopłytkowego uzyskanych z krwi biorcy, korzystnie z jednej donacji, względnie gotowego fibrynogenu o odpowiednim fenotypie i osocza bogatopłytkowego pobranego bezpośrednio z donacji krwi za pomocą aparatury na bloku operacyjnym od pacjenta - biorcy, przy czym w trakcie otrzymywania nośnika przed dodaniem roztworu chlorku wapnia o stężeniu 0,1 - 99% w stosunku 0,1 - 2 do 0,1 - 2, korzystnie 1:1 udziałów objętościowych względem mieszaniny fibrynogenu z osoczem bogatopłytkowym dodaje się od 5 tyś. do 100 mln uzyskanych od biorcy komórek oddzielonych mechanicznie bądź enzymatycznie od otaczających je tkanek.The use of an autologous fibrin carrier to obtain a gel-like transplant, i.e. a carrier created by mixing fibrinogen and platelet-rich plasma obtained from the recipient's blood in a special form, preferably from one donation, or ready-made fibrinogen with an appropriate phenotype and platelet-rich plasma collected directly from the blood donation by means of the equipment in the operating room from the patient-recipient, but during the preparation of the carrier, before adding the calcium chloride solution with a concentration of 0.1 - 99% in the ratio 0.1 - 2 to 0.1 - 2, preferably 1: 1 volumetric ratio in relation to the mixture of fibrinogen and platelet-rich plasma is added from 5 thousand. up to 100 million cells obtained from the recipient, separated mechanically or enzymatically from the surrounding tissues.

Zastosowanie nośnika fibrynowego allogenicznego do otrzymania żelowatego przeszczepu, zatem nośnika powstałego przez zmieszanie fibrynogenu i osocza bogatopłytkowego uzyskanych z krwi dawcy, co najmniej dwóch donacji, względnie z fibrynogenu od jednego dawcy a osocza bogatopłytkowego od drugiego dawcy, względnie z fibrynogenu gotowego i osocza bogatopłytkowego gotowego, przy czym, w trakcie otrzymywania nośnika - przed dodaniem roztworu chlorku wapnia o stężeniu 0,1 - 99% i w stosunku 0,1 - 2 do 0,1 - 2, korzystnie 1:1 udziałów objętościowych względem mieszaniny fibrynogenu z osoczem bogatopłytkowym - dodaje od 5 tyś. do 100 mln komórek od biorcy względnie allogenicznych, ksenogenicznych w znany sposób wyhodowanych i poddanych w dniu przeszczepu obróbce polegającej na trypsynizowaniu, płukaniu w pożywce z surowicą, liczeniu i ocenie żywotności.The use of an allogeneic fibrin carrier to obtain a gel-like graft, therefore a carrier made by mixing fibrinogen and platelet-rich plasma obtained from the blood of a donor, at least two donations, or from fibrinogen from one donor, and platelet-rich plasma from a second donor, or from finished fibrinogen and platelet-rich plasma, wherein, during the preparation of the carrier - before adding a calcium chloride solution with a concentration of 0.1 - 99% and in a ratio of 0.1 - 2 to 0.1 - 2, preferably 1: 1, by volume of the fibrinogen-platelet-rich plasma mixture - adds from 5 thousand up to 100 million cells from the recipient relatively allogeneic, xenogeneic in a known manner, cultured and treated on the day of transplantation by trypsinization, washing in serum with medium, counting and assessment of viability.

Zastosowanie nośnika fibrynowego allogenicznego do otrzymywania żelowatego przeszczepu, zatem nośnika fibrynowego powstałego przez zmieszanie fibrynogenu i osocza bogatopłytkowego uzyskanych z krwi dawcy, co najmniej dwóch donacji, względnie fibrynogenu od jednego dawcy a osocza bogatopłytkowego od drugiego dawcy, względnie z fibrynogenu gotowego i osocza bogatopłytkowego gotowego, przy czym w trakcie otrzymywania nośnika - przed dodaniem roztworu chlorku wapnia o stężeniu 0,1 - 99% w stosunku 0,1 - 2 do 0,1 - 2, korzystnie 1:1 udziałów objętościowych względem mieszaniny fibrynogenu z osoczem bogatopłytkowym - dodaje się od 5 tyś. do 100 mln pozyskanych od biorcy komórek oddzielonych mechanicznie bądź enzymatycznie od otaczających je tkanek.The use of an allogeneic fibrin carrier for the preparation of a gel-like graft, thus a fibrin carrier formed by mixing fibrinogen and platelet-rich plasma obtained from donor blood, at least two donations, or fibrinogen from one donor, and platelet-rich plasma from the second donor, or from finished fibrinogen and platelet-rich plasma, wherein during the preparation of the carrier - before adding a calcium chloride solution with a concentration of 0.1 - 99% in a ratio of 0.1 - 2 to 0.1 - 2, preferably 1: 1, by volume of the fibrinogen-platelet-rich plasma mixture - is added from 5 thousand up to 100 million cells obtained from the recipient, separated mechanically or enzymatically from the surrounding tissues.

Nośnik fibrynowy - według wynalazku - wzbogacony o osocze bogatopłytkowe stanowi mocniejsze rusztowanie biologiczne o synergicznych właściwościach wzrostowych wskutek pobudzenia czynników wzrostu - płytkowozależnych. Skutkuje to szybszym procesem regeneracji tkanek, gojenia się ran. Ponadto ulepszony nośnik fibrynowy posiada szerokie zastosowanie: do przeszczepów autologicznych i allogenicznych oraz do wszelkiego rodzaju komórek, zarówno ludzkich jak i zwierzęcych. Można go też stosować zewnętrznie w postaci żelu, sprayu itp.The fibrin carrier - according to the invention - enriched with platelet-rich plasma is a stronger biological scaffold with synergistic growth properties due to the stimulation of platelet-dependent growth factors. This results in a faster process of tissue regeneration and wound healing. In addition, the improved fibrin carrier has a wide range of applications: for autologous and allogeneic transplants and for all kinds of cells, both human and animal. It can also be used externally in the form of a gel, spray, etc.

Sposób otrzymywania nośnika fibrynowego cechuje łatwość przygotowania, możliwość pełnego wykorzystania składników krwi - przykładowo z jednej donacji oraz stosunkowo niewysokie koszty produkcji.The method of obtaining the fibrin carrier is easy to prepare, the possibility of full use of blood components - for example from one donation, and relatively low production costs.

Korzystną cechą wynalazku jest też możliwość rezygnacji z używania trombiny pochodzenia odzwierzęcego, co może skutkować reakcją alergiczną, a także możliwością zakażenia chorobą odzwierzęcą.Another advantage of the invention is the possibility of resigning from the use of thrombin of zoonotic origin, which may result in an allergic reaction, as well as the possibility of infection with a zoonotic disease.

P r z y k ł a d 1P r z k ł a d 1

Nośnik fibrynowy autologiczny zawiera:The autologous fibrin carrier contains:

krioprecypitat FBG o stężeniu autologicznego fibrynogenu 65 g/l -9 ml autologiczne osocze bogatopłytkowe KKP o zawartości 0,70 x 1011 krwinek płytkowych -9 ml 10% roztwór chlorku wapnia -18 ml P r z y k ł a d 2FBG cryoprecipitate with the concentration of autologous fibrinogen 65 g / l -9 ml autologous platelet-rich plasma KKP with the content of 0.70 x 10 11 platelets -9 ml 10% solution of calcium chloride -18 ml Example 2

Nośnik fibrynowy allogeniczny zawiera:The allogeneic fibrin carrier contains:

krioprecypitat FBG o stężeniu allogenicznego fibrynogenu 80 g/l -9 ml allogeniczne osocze bogatopłytkowe KKP o zawartości 0,70 x 1011 krwinek płytkowych -50 ml roztwór soli wapnia z przeliczeniem na jony Ca+2 -9 mlFBG cryoprecipitate with the concentration of allogeneic fibrinogen 80 g / l -9 ml allogeneic platelet-rich plasma KKP with the content of 0.70 x 10 11 platelets -50 ml calcium salt solution converted to Ca + ions -9 ml

PL 218 235 B1PL 218 235 B1

P r z y k ł a d 3P r z k ł a d 3

Z 450 ml krwi, czyli 1 donacji krwi pobranej od pacjenta - biorcy na 3 doby przed przeszczepem do pojemnika z płynem konserwującym CPD oddziela się przez wirowanie w temperaturze około +22°C przez 8 minut przy sile wirowania 1400 x g, około 280 ml koncentratu krwinek: erytrocytów i leukocytów KKCz, od 200 ml osocza zawierającego płytki, które przeciska się przez prasę do pustego pojemnika satelitarnego.From 450 ml of blood, i.e. 1 blood donation taken from the patient-recipient, 3 days before transplantation into the container with the CPD preservative fluid, it is separated by centrifugation at a temperature of about + 22 ° C for 8 minutes at a centrifugation force of 1400 xg, about 280 ml of blood cell concentrate : RBC erythrocytes and leukocytes, from 200 ml of plasma containing platelets, which are pressed through a press into an empty satellite container.

Proces oddzielania osocza jest zakończony, gdy nad powierzchnią KKCz pozostaje około 1,0 cm osocza. Koncentrat krwinek czerwonych KKCz usuwa się. Natomiast osocze poddaje się wirowaniu w temperaturze około +22°C przez 9 minut przy sile wirowania 5000 x g. Po wirowaniu oddziela się osocze bogatopłytkowe KKP w ilości około 50 ml, nad którego powierzchnią pozostaje 0,5 cm osocza a następnie przechowuje się w pojemniku oddychającym w warunkach kołysania przez 3 doby. Z kolei ze 150 ml pozostałego osocza ubogopłytkowego przygotowuje się przez 2 doby fibrynogen w postaci krioprecypitatu przez zamrożenie osocza do temperatury 60°C i przechowywanie w pojemniku w zamrażarce przez okres 14 godzin, a następnie rozmrożenie w temperaturze +4°C w łaźni wodnej. Powtórne zamrożenie w temperaturze -72°C i przechowywanie w pojemniku w zamrażarce przez okres 12 godzin a następnie rozmrożenie w temperaturze +4°C. Rozmrożone osocze poddaje się wirowaniu w temperaturze +4°C przez 9 minut przy sile wirowania 5000 x g. Po wirowaniu i po usunięciu nadsączu uzyskuje się krioprecypitat w ilości 5 - 10 ml. Do 1 ml krioprecypitatu dodaje się 1 ml osocza bogatopłytkowego KKP i miesza się. Następnie do otrzymanej mieszaniny w ilości 2 ml dodaje się 2 ml 10% roztworu chlorku wapnia i otrzymuje się 4 ml zawiesiny nośnika fibrynowego autologicznego.The separation of plasma is complete when approximately 1.0 cm of plasma remains above the RBC surface. The RBC red cell concentrate is removed. On the other hand, the plasma is centrifuged at a temperature of about + 22 ° C for 9 minutes at a centrifugation force of 5000 x g. After centrifugation, the KKP platelet-rich plasma is separated in an amount of about 50 ml, above the surface of which 0.5 cm of plasma remains and then stored in a container. breathing under rocking conditions for 3 days. From 150 ml of the remaining platelet poor plasma, fibrinogen in the form of cryoprecipitate is prepared for 2 days by freezing the plasma to 60 ° C and storing it in a container in a freezer for 14 hours, and then thawing at a temperature of + 4 ° C in a water bath. Re-freezing at -72 ° C and storage in a container in a freezer for 12 hours, and then thawing at + 4 ° C. The thawed plasma is centrifuged at + 4 ° C for 9 minutes at a centrifugation force of 5000 x g. After centrifugation and removal of the supernatant, 5-10 ml of cryoprecipitate is obtained. To 1 ml of cryoprecipitate, 1 ml of KKP platelet-rich plasma is added and mixed. Then, 2 ml of a 10% solution of calcium chloride are added to the obtained mixture in the amount of 2 ml, and 4 ml of autologous fibrin carrier suspension are obtained.

P r z y k ł a d 4P r z k ł a d 4

Z 1 jednostki zamrożonego osocza ok. 270 ml po 16 tygodniowej karencji pochodzącej z 1 donacji krwi honorowego dawcy, przygotowuje się fibrynogen allogeniczny w postaci krioprecypitatu przez zamrożenie w temperaturze -55°C, przechowywane w pojemniku w zamrażarce przez 15 godzin, rozmrożenie w temperaturze około +4°C i powtórzenie procesu. Rozmrożone osocze poddaje się wirowaniu w temperaturze +4°C przez 9 minut przy sile wirowania 1000 x g. Po wirowaniu usuwa się nadsącz i uzyskuje krioprecypitat w ilości 5 do 10 ml. Niezależnie, na około 3 doby przed przeszczepem z 1 donacji, czyli 450 ml krwi pochodzącej od honorowego dawcy oddziela się przez wirowanie w temperaturze +22°C przez 8 minut przy sile wirowania 1400 x g około 280 ml koncentratu krwinek czerwonych leukocytów, KKCz, które się usuwa, od 195 ml osocza zawierającego płytki, które przeciska się przez prasę do pustego pojemnika satelitarnego. Aby uniknąć wprowadzenia do pojemnika satelitarnego krwinek KKCz proces oddzielania osocza kończy się, gdy nad powierzchnią KKCz pozostaje około 1,0 cm osocza. Otrzymane osocze zawierające płytki poddaje się wirowaniu w temperaturze +22°C przy sile wirowania 2300 x g przez 15 minut. Po wirowaniu oddziela się ok. 50 ml osocza bogatopłytkowego KKP od osocza ubogopłytkowego, które się usuwa. Następnie otrzymane osocze bogatopłytkowe z pozostawionymi nad jego powierzchnię 60 mm osocza, przechowuje się przez 3 doby w pojemniku w warunkach kołysania. Do 1 ml krioprecypitatu dodaje się 1 ml osocza bogatopłytkowego KKP i miesza się. Następnie do otrzymanej zawiesiny w ilości 2 ml dodaje się 2 ml 10% roztworu chlorku wapnia i otrzymuje się 4 ml nośnika fibrynowego allogenicznego.From 1 unit of frozen plasma of approx. 270 ml, after a 16-week grace period from 1 donation of honorary donor, allogeneic fibrinogen is prepared in the form of cryoprecipitate by freezing at -55 ° C, stored in a container in a freezer for 15 hours, thawing at a temperature of approx. + 4 ° C and repeat the process. The thawed plasma is centrifuged at + 4 ° C for 9 minutes at a centrifugation force of 1000 x g. After centrifugation, the supernatant is removed and the cryoprecipitate is obtained in an amount of 5 to 10 ml. Independently, about 3 days before transplantation from 1 donation, i.e. 450 ml of blood from a donor, are separated by centrifugation at a temperature of + 22 ° C for 8 minutes at the centrifugation force of 1400 xg, about 280 ml of concentrate of red blood cells, RBC removes from 195 ml of plasma containing the plates, which is pressed through the press into an empty satellite container. To avoid introducing RBC blood cells into the satellite container, the plasma separation process is terminated when approximately 1.0 cm of plasma remains above the surface of RBC. The obtained plasma containing the platelets is centrifuged at + 22 ° C at a centrifugal force of 2300 x g for 15 minutes. After centrifugation, approximately 50 ml of the platelet-rich plasma KKP is separated from the platelet-rich plasma, which is removed. Then, the obtained platelet-rich plasma with 60 mm of plasma left above its surface, is stored for 3 days in a container under rocking conditions. To 1 ml of cryoprecipitate, 1 ml of KKP platelet-rich plasma is added and mixed. Then, 2 ml of a 10% solution of calcium chloride are added to the obtained suspension in the amount of 2 ml, and 4 ml of allogeneic fibrin carrier are obtained.

P r z y k ł a d 5P r z k ł a d 5

Do 1,8 ml zawiesiny otrzymanej przez połączenie 0,9 ml krioprecypitatu o stężeniu FBG 50 g/l z 0,9 ml osocza bogatopłytkowego KKP o zawartości 0,80 x 106 ul krwinek płytkowych otrzymanych z 1 donacji krwi biorcy, w specjalnej formie dodaje się 30 min komórek od biorcy w znany sposób wyhodowanych, które w dniu przeszczepu poddaje się trypsynizowaniu, płukaniu w pożywce z surowicą liczeniu i ocenie żywotności. Następnie dodaje się 1,8 ml 10%-wego wodnego roztworu chlorku wapnia. Formę zaciska się z dwóch stron, tak, aby grubość uzyskanego żelowego przeszczepu z nośnikiem fibrynowym autologicznym wyniosła 1 cm.To 1.8 ml of suspension obtained by combining 0.9 ml of cryoprecipitate with a concentration of FBG 50 g / l with 0.9 ml of platelet-rich plasma KKP with a content of 0.80 x 106 ul of platelets obtained from 1 donation of the recipient's blood, in a special form, 30 min of cells from the recipient, cultured in a known manner, and trypsinized on the day of transplantation, rinsed with serum, counted and assessed for viability. Then 1.8 ml of a 10% aqueous solution of calcium chloride are added. The mold is clamped on both sides so that the thickness of the obtained gel graft with the autologous fibrin carrier is 1 cm.

P r z y k ł a d 6P r z k ł a d 6

Tak jak w Przykładzie 5 do zawiesiny krioprecypitatu i osocza dodaje się 35 mln komórek otrzymanych z fragmentu tkanki pobranego od biorcy, po mechanicznym oddzieleniu komórek od otaczających je tkanek Następnie dodaje się 6 ml wodnego 10%-wego roztworu chlorku wapnia i otrzymuje się żelowy przeszczep zawierający nośnik fibrynowy autologiczny.As in Example 5, 35 million cells obtained from a tissue fragment taken from the recipient are added to the cryoprecipitate and plasma suspension, after the cells have been mechanically separated from the surrounding tissues, then 6 ml of 10% aqueous calcium chloride solution are added to obtain a gel graft containing autologous fibrin carrier.

P r z y k ł a d 7P r z k ł a d 7

Do 5 ml zawiesiny otrzymanej przez połączenie 2,5 ml krioprecypitatu o stężeniu fibrynogenu 57 g/l i 2,5 ml osocza bogatopłytkowego KKP o liczbie krwinek płytkowych w osoczu 0,65 x 106 krwinekTo 5 ml of the suspension obtained by combining 2.5 ml of cryoprecipitate with a fibrinogen concentration of 57 g / l and 2.5 ml of platelet-rich plasma KKP with the number of platelets in the plasma of 0.65 x 106 blood cells

PL 218 235 B1 płytkowych /ul otrzymanych z dwóch donacji, dwóch różnych dawców dodaje się, w specjalnej formie 30 milionów komórek otrzymanych z fragmentu tkanki pobranego od biorcy po mechanicznym oddzieleniu ich od otaczających tkanek.PL 218 235 B1 obtained from two donations, two different donors are added, in a special form, 30 million cells obtained from a tissue fragment taken from the recipient after they were mechanically separated from the surrounding tissues.

Następnie dodaje się 5 ml 10%-wego wodnego roztworu chlorku wapnia. Formę zaciska się z dwóch stron tak, aby grubość uzyskanego żelu zwanego fibrograftem wyniosła 1 cm.Then 5 ml of a 10% aqueous solution of calcium chloride are added. The mold is clamped on both sides so that the thickness of the obtained gel, called a fibrograft, is 1 cm.

Wykaz przebadanej literatury patentowejList of tested patent literature

1. Pat nr 54174 MPKA61K 23/001. Pat. No. 54174 MPKA61K 23/00

2. Pat nr 54175 MPKA61K 23/002. Pat. No. 54175 MPKA61K 23/00

3. Pat nr 167173 Int. Cl6 A61K35/163. Pat No 167173 Int. Cl 6 A61K35 / 16

4. Pat nr 171788 Int. Cl6 C12P21/00 i C12N5/00 i C12N15/124. Pat No. 171788 Int. Cl 6 C12P21 / 00 and C12N5 / 00 and C12N15 / 12

5. Pat nr 174426 Int. Cl6 A61K35/38Pat No 5 174 426 Int. Cl 6 A61K35 / 38

6. Pat nr 177555 Int. Cl6 A61K35/16 i GON33/48Pat No 6 177 555 Int. Cl 6 A61K35 / 16 and GON33 / 48

7. Pat nr 191497 Int. Cl6 A61L27/247. Pat No 191497 Int. Cl 6 A61L27 / 24

8. Pat nr 194109 A61L31/04 i A61K31/702 i A614P41/008. Pat. No. 194109 A61L31 / 04 and A61K31 / 702 and A614P41 / 00

9. Pat nr 194316 A61L24/10iA61K38/399. Pat. No. 194316 A61L24 / 10iA61K38 / 39

10. Pat nr 196844 C12N15/40 i A61K39/12 i C12Q1/68 i A61K39/9510. Pat No. 196844 C12N15 / 40 and A61K39 / 12 and C12Q1 / 68 and A61K39 / 95

11. Pat nr 206261 Int Cl7 A61L 27/2411. Pat. No. 206261 Int Cl 7 A61L 27/24

12. Pat nr 208538 Int Cl7 A61L31/0412. Pat. No. 208538 Int Cl 7 A61L31 / 04

13. P-296052A61L25/0013. P-296052A61L25 / 00

14. P-317022 A61K39/00 i A61P37/0614. P-317022 A61K39 / 00 and A61P37 / 06

15. P-328922 A61L25/00, A61K39/12 i C12N5/00 i C07K14/50515. P-328922 A61L25 / 00, A61K39 / 12 and C12N5 / 00 and C07K14 / 505

16. P-340141 A61L27/60 i A61L27/38 i A61L27/2216. P-340141 A61L27 / 60 and A61L27 / 38 and A61L27 / 22

17. P-346653 A61L31/04 i A61L27/3817. P-346653 A61L31 / 04 and A61L27 / 38

18. P-349595 Int. Cl7A61L27/22 i A61L27/22 i A61L27/04 i A61K38/1818. P-349595 Int. Cl 7 A61L27 / 22 and A61L27 / 22 and A61L27 / 04 and A61K38 / 18

19. P-357234 Int. Cl7A61L27/2419. P-357234 Int. Cl 7 A61L27 / 24

20. P-368749 C12N5/00 i C12P21/02 i C07K14/50520. P-368749 C12N5 / 00 and C12P21 / 02 and C07K14 / 505

21. P-383248 A61F2/30 i A61L24/00 i A61K38/32 i C12Q1/5621. P-383248 A61F2 / 30 and A61L24 / 00 and A61K38 / 32 and C12Q1 / 56

Claims (14)

1. Nośnik fibrynowy autologiczny i allogeniczny, znamienny tym, że stanowi żelowatą mieszaninę fibrynogenu i osocza bogatopłytkowego połączonych w stosunku 0,1 - 2 do 0,1 - 2, korzystnie 1:1 udziałów objętościowych oraz chlorku wapnia w roztworze o stężeniu od 0,1 - 99%, korzystnie 10%-wego roztworu w stosunku 0,1 - 2 do 0,1 - 2 korzystnie 1:1 względem mieszaniny fibrynogenu z osoczem bogatopłytkowym.1. Autologous and allogeneic fibrin carrier, characterized in that it is a gel-like mixture of fibrinogen and platelet-rich plasma combined in a ratio of 0.1-2 to 0.1-2, preferably 1: 1 by volume, and calcium chloride in the solution with a concentration of 0, 1-99%, preferably 10%, solution in a ratio of 0.1-2 to 0.1-2, preferably 1: 1 relative to the mixture of fibrinogen and platelet-rich plasma. 2. Nośnik fibrynowy autologiczny i allogeniczny, znamienny tym, że stanowi żelowatą mieszaninę fibrynogenu i osocza bogatopłytkowego połączonych w stosunku 0,1-2 do 0,1 do 2, korzystnie 1:1 udziałów objętościowych oraz roztwór trombiny z chlorkiem wapnia we wzajemnym stosunku dogodnie 1:1 a względem mieszaniny fibrynogenu z osoczem bogatopłytkowym jak 0,1 - 2 do 0,1 - 2 korzystnie 1:1.2. An autologous and allogeneic fibrin carrier, characterized in that it is a gel-like mixture of fibrinogen and platelet-rich plasma combined in a ratio of 0.1-2 to 0.1 to 2, preferably 1: 1, by volume, and a solution of thrombin with calcium chloride in a mutual ratio suitably 1: 1 a relative to a mixture of fibrinogen and platelet-rich plasma like 0.1-2 to 0.1-2, preferably 1: 1. 3. Nośnik według zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, że jako fibrynogen stosuje się fibrynogen krioprecypitat, otrzymany z donacji krwi biorcy lub dawcy, gotowy fibrynogen komercyjny.3. A carrier according to claim 1 A method according to claim 1 or 2, characterized in that the fibrinogen used is fibrinogen, cryoprecipitate obtained from the blood donation of the recipient or donor, ready-made commercial fibrinogen. 4. Nośnik według zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, że jako osocze bogatopłytkowe stosuje się osocze bogatopłytkowe otrzymane z donacji krwi biorcy lub dawcy, osocze otrzymane bezpośrednio z krwi od pacjenta za pomocą aparatury, gotowe osocze bogatopłytkowe.4. The carrier according to claim 1 The method of claim 1 or 2, characterized in that the platelet-rich plasma obtained from the donation of the recipient's or donor's blood, plasma obtained directly from the patient's blood by means of apparatus, ready-made platelet-rich plasma is used as the platelet-rich plasma. 5. Nośnik według zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, że osocze bogatopłytkowe zawiera od 4,6 x 105 do 2 x 106 krwinek płytkowych /μ|.5. The carrier according to claim 1 The method of claim 1 or 2, characterized in that the platelet-rich plasma comprises 4.6 x 10 5 to 2 x 10 6 platelets / µl. 6. Sposób otrzymywania nośnika fibrynowego autologicznego obejmujący pobieranie krwi, oddzie|enie osocza od elementów komórkowych krwi, zamrażanie i rozmrażanie osocza, znamienny tym, że z pobranej od biorcy donacji krwi, oddzielone przez wirowanie w temperaturze +20 do +24°C przez 5 do 15 minut, przy sile wirowania od 700 do 2000 x g od koncentratu krwinek: erytrocytów, leukocytów, który się usuwa, - osocze przeciska się do pustego pojemnika sate|itarnego, po czym z osocza przez wirowanie w temperaturze +20 do +24°C przez 5 - 15 minut przy si|e wirowania od 2100 do 5000 x g oddziela się osocze bogatopłytkowe, które przechowuje się w pojemnikach, dogodnie pojemnikach oddychających w warunkach kołysania najwyżej 7 dób dogodnie 3 doby a z pozostałego6. A method for obtaining an autologous fibrin carrier comprising blood collection, separation of plasma from blood cell elements, freezing and thawing of plasma, characterized in that from the blood donation taken from the recipient, separated by centrifugation at a temperature of +20 to +24 ° C for 5 up to 15 minutes, at a centrifugation force of 700 to 2000 xg from the concentrate of red blood cells: erythrocytes, leukocytes, which is removed, - the plasma is pressed into an empty satellite vessel, and then from the plasma by centrifugation at a temperature of +20 to + 24 ° C for 5 - 15 minutes with centrifugation force from 2,100 to 5,000 xg, platelet-rich plasma is separated, which is stored in containers, suitably breathable containers under rocking conditions, at most 7 days, conveniently 3 days and from the rest PL 218 235 B1 osocza ubogopłytkowego przygotowuje się fibrynogen w postaci krioprecypitatu przez dwukrotne zamrożenie osocza do temperatury -30°C do -90°C i rozmrożenie w temperaturze około +4°C, przykładowo w łaźni wodnej, następnie wirowanie w temperaturze około +4°C przez 5 - 20 minut przy sile wirowania od 1000 do 5000 x g, po czym usuwa się nadsącz, a otrzymany krioprecypitat miesza się z osoczem bogatopłytkowym z pojemnika, w stosunku od 0,1 - 2 do 0,1 - 2, korzystnie 1:1 i ze związkiem wapnia w roztworze dogodnie 10% roztworem chlorku wapnia w stosunku korzystnie 1:1 względem mieszaniny fibrynogenu z osoczem bogatopłytkowym.In platelet poor plasma, fibrinogen is prepared as cryoprecipitate by freezing the plasma twice to -30 ° C to -90 ° C and thawing at about + 4 ° C, for example in a water bath, followed by centrifugation at about + 4 ° C. C for 5 - 20 minutes at a centrifugation force of 1000 to 5000 xg, after which the supernatant is removed and the obtained cryoprecipitate is mixed with platelet-rich plasma from the container in a ratio of 0.1-2 to 0.1-2, preferably 1: 1 and a calcium compound in solution suitably with a 10% calcium chloride solution in a ratio of preferably 1: 1 to a mixture of fibrinogen and platelet-rich plasma. 7. Sposób otrzymywania nośnika fibrynowego allogenicznego obejmujący pobieranie krwi, oddzielanie osocza od elementów komórkowych krwi, zamrażanie i rozmrażanie osocza, znamienny tym, że z pobranej donacji krwi, co najmniej od dwóch dawców, oddzielone przez wirowanie w temperaturze +20 do +24°C przez 5 do 15 minut przy sile wirowania od 700 do 2000 x g od koncentratu krwinek: erytrocytów, leukocytów, który się usuwa - osocze przeciska się do pustego pojemnika satelitarnego, po czym z osocza przez wirowanie w temperaturze +20 do +24°C przez 5 - 10 minut przy sile wirowania od 750 do 2000 x g oddziela się osocze bogatopłytkowe, które się przechowuje w pojemnikach, dogodnie pojemnikach oddychających w warunkach kołysania przez najwyżej 7 dób dogodnie 3 doby, a z pozostałego osocza ubogopłytkowego przygotowuje się fibrynogen w postaci krioprecypitatu przez dwukrotne zamrożenie osocza do temperatury -30°C do -90°C i rozmrożenie w temperaturze około +4°C przykładowo w łaźni wodnej, następnie wirowanie w temperaturze około +4°C przez 5 - 15 minut przy sile wirowania od 1000 do 5000 x g, po czym usuwa się nadsącz a otrzymany krioprecypitat miesza się z osoczem bogatopłytkowym przechowywanym w pojemniku w stosunku od 0,1 - 2 do 0,1 - 2, korzystnie 1:1 i ze związkiem wapnia w roztworze dogodnie 10% roztworem chlorku wapnia w stosunku korzystnie 1:1 względem mieszaniny fibrynogenu z osoczem bogatopłytkowym.7. The method of obtaining an allogeneic fibrin carrier comprising blood collection, plasma separation from blood cell elements, plasma freezing and thawing, characterized in that from the collected blood donation from at least two donors, separated by centrifugation at a temperature of +20 to +24 ° C for 5 to 15 minutes at a centrifugation force of 700 to 2000 xg from the concentrate of red blood cells: erythrocytes, leukocytes, which is removed - the plasma is pressed into an empty satellite container, then from the plasma by centrifugation at +20 to + 24 ° C for 5 - 10 minutes with a centrifugation force of 750 to 2000 xg, platelet-rich plasma is separated, which is stored in containers, conveniently breathing containers under rocking conditions for a maximum of 7 days, preferably 3 days, and fibrinogen is prepared in the form of cryoprecipitate from the remaining platelet-poor plasma by freezing the plasma twice to a temperature of -30 ° C to -90 ° C and thawing at a temperature of about + 4 ° C, for example in a water bath, then centrifugation at a temperature of about + 4 ° C for 5 - 15 minutes at a centrifugation force of 1000 to 5000 xg, then the supernatant is removed and the obtained cryoprecipitate is mixed with platelet-rich plasma stored in the container in a ratio of 0.1 - 2 to 0.1 - 2, preferably 1: 1 and with a calcium compound in solution suitably 10% calcium chloride solution in a ratio of preferably 1: 1 relative to the mixture of fibrinogen and platelet-rich plasma. 8. Sposób według zastrz. 6, znamienny tym, że fibrynogen przygotowuje się z osocza innego dawcy, zamrożonego w temperaturze -30°C do -90°C i po 16 tygodniowej karencji przez rozmrożenie w temperaturze około +4°C, przykładowo w łaźni wodnej, ponowne zamrożenie w temperaturze -30°C do -90°C i rozmrożenie w temperaturze około +4°C, następnie wirowanie w temperaturze około +4°C przez 5 do 15 minut przy sile wirowania od 1000 do 5000 x g, po czym usuwa się nadsącz a otrzymany krioprecypitat miesza się z osoczem bogatopłytkowym z pojemnika w stosunku od 0,1 - 2 do 0,1 - 2 korzystnie 1:1 i ze związkiem wapnia w roztworze, dogodnie 10% roztworem chlorku wapnia w stosunku od 0,1 - 2 do 0,1 - 2 korzystnie 1:1 względem mieszaniny fibrynogenu z osoczem bogatopłytkowym.8. The method according to p. 6. A method according to claim 6, characterized in that fibrinogen is prepared from the plasma of another donor, frozen at -30 ° C to -90 ° C and after a 16-week waiting period by thawing at a temperature of about + 4 ° C, for example in a water bath, re-freezing at a temperature of -30 ° C to -90 ° C and thawing at about + 4 ° C, followed by centrifugation at about + 4 ° C for 5 to 15 minutes using a centrifugation force of 1000 to 5000 xg, after which the supernatant is removed and the resulting cryoprecipitate mixed with the platelet-rich plasma from the container in a ratio of 0.1-2 to 0.1-2, preferably 1: 1, and with a calcium compound in solution, preferably a 10% calcium chloride solution in a ratio of 0.1-2 to 0.1 - 2, preferably 1: 1 to the mixture of fibrinogen and platelet-rich plasma. 9. Sposób według zastrz. 5 albo 6, znamienny tym, że oddzielanie osocza zostaje zakończone na poziomie 0,1 cm do 1 cm nad powierzchnią koncentratu krwinek: erytrocytów, leukocytów.9. The method according to p. The method according to claim 5 or 6, characterized in that the separation of the plasma is completed at a level of 0.1 cm to 1 cm above the surface of the concentrate of blood cells: erythrocytes, leukocytes. 10. Sposób według zastrz. 5 albo 6, znamienny tym, że oddzielanie osocza bogatopłytkowego zostaje zakończone gdy nad jego powierzchnią pozostaje od 10 do 100 mm osocza.10. The method according to p. The method according to claim 5 or 6, characterized in that the separation of platelet-rich plasma is completed when 10 to 100 mm of plasma remain above its surface. 11. Zastosowanie nośnika fibrynowego autologicznego określonego w zastrzeżeniu 1 do otrzymania żelowatego przeszczepu - czyli nośnika powstałego przez zmieszanie fibrynogenu i osocza bogatopłytkowego uzyskanych z krwi biorcy, korzystnie z jednej donacji, względnie - gotowego fibrynogenu o odpowiednim fenotypie i osocza bogatopłytkowego pobranego bezpośrednio z donacji krwi za pomocą aparatury na bloku operacyjnym od pacjenta-biorcy, przy czym w trakcie otrzymywania nośnika, przed dodaniem roztworu chlorku wapnia o stężeniu 0,1 - 99% w stosunku 0,1 - 2 do 0,1 - 2, korzystnie 1:1 udziałów objętościowych względem mieszaniny fibrynogenu z osoczem bogatopłytkowym dodaje się od 5 tysięcy do 100 milionów komórek od biorcy względnie allogenicznych i ksenogenicznych w znany sposób wyhodowanych i poddanych w dniu przeszczepu obróbce polegającej na trypsynizowaniu, płukaniu w pożywce z surowicą, liczeniu i ocenie żywotności.11. The use of an autologous fibrin carrier according to claim 1 to obtain a gel-like graft - i.e. a carrier made by mixing fibrinogen and platelet-rich plasma obtained from the recipient's blood, preferably from one donation, or - ready-made fibrinogen with an appropriate phenotype and platelet-rich plasma collected directly from the blood donation. by means of the apparatus in the operating theater from the patient-recipient, during the preparation of the carrier, before adding the calcium chloride solution with a concentration of 0.1 - 99% in a ratio of 0.1 - 2 to 0.1 - 2, preferably 1: 1 by volume 5,000 to 100 million cells from the recipient relatively allogeneic and xenogeneic in known manner, cultured and treated on the day of transplantation with trypsinization, serum rinse, counting and viability evaluation are added to the fibrinogen-platelet-rich plasma mixture. 12. Zastosowanie nośnika fibrynowego autologicznego określonego w zastrzeżeniu 1 do otrzymania żelowatego przeszczepu - czyli nośnika powstałego przez zmieszanie w specjalnej formie fibrynogenu i osocza bogatopłytkowego uzyskanych z krwi biorcy, korzystnie z jednej donacji, względnie gotowego fibrynogenu o odpowiednim fenotypie i osocza bogatopłytkowego pobranego bezpośrednio z donacji krwi za pomocą aparatury na bloku operacyjnym od pacjenta - biorcy, przy czym w trakcie otrzymywania nośnika - przed dodaniem roztworu chlorku wapnia o stężeniu 0,1 - 99% i w stosunku 0,1 - 2 do 0,1 - 2, korzystnie 1:1 udziałów objętościowych względem mieszaniny fibrynogenu z osoczem bogatopłytkowym - dodaje się od 5 tysięcy do 100 milionów uzyskanych od biorcy komórek oddzielonych mechanicznie bądź enzymatycznie od otaczających je tkanek.12. The use of an autologous fibrin carrier according to claim 1 to obtain a gel-like graft - i.e. a carrier obtained by mixing fibrinogen and platelet-rich plasma obtained from the recipient's blood in a special form, preferably from one donation, or ready-made fibrinogen with an appropriate phenotype and platelet-rich plasma collected directly from the donation blood using the apparatus in the operating theater from the patient-recipient, and during the preparation of the carrier - before adding a calcium chloride solution with a concentration of 0.1 - 99% and in a ratio of 0.1 - 2 to 0.1 - 2, preferably 1: 1 volumetric fractions in relation to the mixture of fibrinogen and platelet-rich plasma - from 5,000 to 100 million of cells obtained from the recipient are added, mechanically or enzymatically separated from the surrounding tissues. 13. Zastosowanie nośnika fibrynowego allogenicznego określonego w zastrzeżeniu 1 do otrzymania żelowatego przeszczepu, zatem nośnika powstałego przez zmieszanie fibrynogenu i osocza13. The use of an allogeneic fibrin carrier according to claim 1 to obtain a gel-like graft, thus a carrier obtained by mixing fibrinogen and plasma PL 218 235 B1 bogatopłytkowego uzyskanych z krwi dawcy, co najmniej dwóch donacji, względnie z fibrynogenu od jednego dawcy a osocza bogatopłytkowego od drugiego dawcy, względnie z fibrynogenu gotowego i osocza bogatopłytkowego gotowego, przy czym, w trakcie otrzymywania nośnika - przed dodaniem roztworu chlorku wapnia o stężeniu 0,1 - 99% i w stosunku 0,1 - 2 do 0,1 - 2, korzystnie 1:1 udziałów objętościowych względem mieszaniny fibrynogenu z osoczem bogatopłytkowym - dodaje od 5 tyś. do 100 mln komórek od biorcy względnie allogenicznych, ksenogenicznych w znany sposób wyhodowanych i poddanych w dniu przeszczepu obróbce polegającej na trypsynizowaniu, płukaniu w pożywce z surowicą, liczeniu i ocenie żywotności.PL 218 235 B1 obtained from the blood of a donor, at least two donations, or from fibrinogen from one donor, and from platelet-rich plasma from the other donor, or from ready-made fibrinogen and platelet-rich plasma, and during the preparation of the carrier - before adding the calcium chloride solution with a concentration of 0.1 - 99% and in a ratio of 0.1 - 2 to 0.1 - 2, preferably 1: 1, by volume of the mixture of fibrinogen and platelet-rich plasma - adds 5 thousand. up to 100 million cells from the recipient relatively allogeneic, xenogeneic in a known manner, cultured and treated on the day of transplantation by trypsinization, serum washing, counting and viability evaluation. 14. Zastosowanie nośnika fibrynowego allogenicznego określonego w zastrzeżeniu 1 do otrzymywania żelowatego przeszczepu zatem nośnika fibrynowego powstałego przez zmieszanie fibrynogenu i osocza bogatopłytkowego uzyskanych z krwi dawcy, co najmniej dwóch donacji, względnie fibrynogenu od jednego dawcy a osocza bogatopłytkowego od drugiego dawcy, względnie z fibrynogenu gotowego i osocza bogatopłytkowego gotowego, przy czym w trakcie otrzymywania nośnika przed dodaniem roztworu chlorku wapnia o stężeniu 0,1 - 99% w stosunku 0,1 - 2 do 0,1 - 2, korzystnie 1:1 udziałów objętościowych względem mieszaniny fibrynogenu z osoczem bogatopłytkowym dodaje się od 5 tyś. do 100 mln pozyskanych od biorcy komórek oddzielonych mechanicznie bądź enzymatycznie od otaczających je tkanek.14. Use of an allogeneic fibrin carrier according to claim 1 for the preparation of a gel-like graft, therefore a fibrin carrier obtained by mixing fibrinogen and platelet-rich plasma obtained from the blood of a donor, at least two donations or fibrinogen from one donor, and platelet-rich plasma from a second donor or ready-made fibrinogen and ready-made platelet-rich plasma, with the preparation of the carrier prior to the addition of a 0.1 - 99% calcium chloride solution in the ratio 0.1 - 2 to 0.1 - 2, preferably 1: 1, by volume of the fibrinogen-platelet-rich plasma mixture is added from 5 thousand. up to 100 million cells obtained from the recipient, separated mechanically or enzymatically from the surrounding tissues.
PL396313A 2011-09-12 2011-09-12 Allogeneic and autologous fibrin carrier, method for its preparation and the use of a fibrin carrier for transplantation of cells, especially human cells PL218235B1 (en)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL396313A PL218235B1 (en) 2011-09-12 2011-09-12 Allogeneic and autologous fibrin carrier, method for its preparation and the use of a fibrin carrier for transplantation of cells, especially human cells
PCT/PL2012/000029 WO2013039411A1 (en) 2011-09-12 2012-04-30 Autologous and allogenic fibrin carrier, method of obtaining thereof and use of a fibrin carrier for transplantation of cells, particularly human cells

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL396313A PL218235B1 (en) 2011-09-12 2011-09-12 Allogeneic and autologous fibrin carrier, method for its preparation and the use of a fibrin carrier for transplantation of cells, especially human cells

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL396313A1 PL396313A1 (en) 2013-03-18
PL218235B1 true PL218235B1 (en) 2014-10-31

Family

ID=46229905

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL396313A PL218235B1 (en) 2011-09-12 2011-09-12 Allogeneic and autologous fibrin carrier, method for its preparation and the use of a fibrin carrier for transplantation of cells, especially human cells

Country Status (2)

Country Link
PL (1) PL218235B1 (en)
WO (1) WO2013039411A1 (en)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL231230A0 (en) * 2014-02-27 2014-08-31 Omrix Biopharmaceuticals Ltd Fibrinogen formulation
PL446279A1 (en) * 2023-09-30 2024-04-22 Keymed Spóła Z Ograniczoną Odpowiedzialnością Kit for producing an autologous dressing from blood, dressing, method of its production and its application

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PL54175Y1 (en) 1992-10-01 1996-06-28 Tomasz Nowakowski Cake baking mould
US5674394A (en) * 1995-03-24 1997-10-07 Johnson & Johnson Medical, Inc. Single use system for preparation of autologous plasma
CN101053679B (en) * 2007-04-17 2010-05-26 浙江大学 Method for preparing polymer multiporous holder filled with fiber protein gel
CN101221186A (en) * 2007-12-14 2008-07-16 天津理工大学 Fibrin gel with protein recognition function and its preparing method
PL388247A1 (en) 2009-06-10 2010-12-20 Danuta Foicik Dispensing screw-cap

Also Published As

Publication number Publication date
PL396313A1 (en) 2013-03-18
WO2013039411A1 (en) 2013-03-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5550732B2 (en) Composition for activating platelet-rich plasma (PRP) to induce tissue regeneration and method for producing the same
JP6649257B2 (en) Bioactive composition derivable from concentrated platelets, and methods for preparing and using the same
EP2884992B1 (en) A method of preparing a growth factor concentrate derived from human platelets
US9011846B2 (en) Thrombin isolated from blood and blood fractions
JP2010005410A (en) Platelet glue wound sealant
WO2013003045A2 (en) Procoagulant peptides and their derivatives and uses therefor
WO2004018615A1 (en) Fibrin-containing composition
Sonker et al. Determining the effect of preparation and storage: an effort to streamline platelet components as a source of growth factors for clinical application
EP0107688B1 (en) Processes for the production of blood products
EP3258945A1 (en) Modified blood clots
PL218235B1 (en) Allogeneic and autologous fibrin carrier, method for its preparation and the use of a fibrin carrier for transplantation of cells, especially human cells
ES2705704T3 (en) Method of obtaining a composition rich in cytokines and composition obtained by this method
JP7291972B2 (en) Tissue Preparations or Adhesives Obtained from Platelet-Containing Blood Compositions and Methods of Preparing Such Preparations
WO2005072753A1 (en) Composition comprising platelet-rich plasma
US20100086529A1 (en) Methods of making concentrated fibrinogen- and platelet-containing compositions
US20180369346A1 (en) Methods, compositions and kits for reducing tissue adhesions
Alsousou et al. Platelet-rich plasma in regenerative medicine
JP5442310B2 (en) Method for preparing thrombin solution
RU2820448C2 (en) Tissue composition or adhesive obtained from blood composition containing thrombocytes, and method for preparing said composition
Pavlenko et al. PLASMA RICH IN PLATELETS: CURRENT VIEWS ON THE DEVELOPMENT OF PREVENTIVE MEDICINE
CN113573718A (en) Method for obtaining and preserving high purity growth factors and uses thereof
TWI344963B (en) Clottable concentrate of platelet growth factors and preparation method thereof
JP2013063924A (en) Method for accelerating gelling of platelet-rich plasma and/or platelet-poor plasma, kit and coagulation accelerator used therefor, and bone prosthetic material