PL212077B1 - Nowy szczep bakterii Raoultella ornithinolytica wyizolowany z jelita dżdżownicy endrobaena veneta oraz sposób wyizolowania tego szczepu z jelita dżdżownicy Dendrobaena veneta - Google Patents
Nowy szczep bakterii Raoultella ornithinolytica wyizolowany z jelita dżdżownicy endrobaena veneta oraz sposób wyizolowania tego szczepu z jelita dżdżownicy Dendrobaena venetaInfo
- Publication number
- PL212077B1 PL212077B1 PL387583A PL38758309A PL212077B1 PL 212077 B1 PL212077 B1 PL 212077B1 PL 387583 A PL387583 A PL 387583A PL 38758309 A PL38758309 A PL 38758309A PL 212077 B1 PL212077 B1 PL 212077B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- intestine
- earthworm
- isolating
- dendrobaena
- veneta
- Prior art date
Links
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 title claims description 16
- 241000531124 Raoultella ornithinolytica Species 0.000 title claims description 15
- 241000326734 Dendrobaena veneta Species 0.000 title claims description 11
- 241000361919 Metaphire sieboldi Species 0.000 title claims description 9
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 title claims description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 9
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 6
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 claims description 3
- 239000007980 Sørensen’s phosphate buffer Substances 0.000 claims description 3
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 claims description 3
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 claims description 3
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 3
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 3
- 239000003193 general anesthetic agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 2
- 229920000715 Mucilage Polymers 0.000 claims 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 claims 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 13
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000187481 Mycobacterium phlei Species 0.000 description 3
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 3
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 2
- 241000243818 Annelida Species 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 241000187480 Mycobacterium smegmatis Species 0.000 description 2
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 2
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 2
- 230000003444 anaesthetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 238000010876 biochemical test Methods 0.000 description 2
- 238000006114 decarboxylation reaction Methods 0.000 description 2
- 241001233061 earthworms Species 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- VCOPTHOUUNAYKQ-WBTCAYNUSA-N (3s)-3,6-diamino-n-[[(2s,5s,8e,11s,15s)-15-amino-11-[(6r)-2-amino-1,4,5,6-tetrahydropyrimidin-6-yl]-8-[(carbamoylamino)methylidene]-2-(hydroxymethyl)-3,6,9,12,16-pentaoxo-1,4,7,10,13-pentazacyclohexadec-5-yl]methyl]hexanamide;(3s)-3,6-diamino-n-[[(2s,5s,8 Chemical compound N1C(=O)\C(=C/NC(N)=O)NC(=O)[C@H](CNC(=O)C[C@@H](N)CCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CNC(=O)[C@@H]1[C@@H]1NC(N)=NCC1.N1C(=O)\C(=C/NC(N)=O)NC(=O)[C@H](CNC(=O)C[C@@H](N)CCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CNC(=O)[C@@H]1[C@@H]1NC(N)=NCC1 VCOPTHOUUNAYKQ-WBTCAYNUSA-N 0.000 description 1
- HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 2-(3,4-dimethoxyphenyl)-5-hydroxy-7-methoxychromen-4-one Chemical compound C=1C(OC)=CC(O)=C(C(C=2)=O)C=1OC=2C1=CC=C(OC)C(OC)=C1 HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WUBBRNOQWQTFEX-UHFFFAOYSA-N 4-aminosalicylic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C(O)=C1 WUBBRNOQWQTFEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 238000009010 Bradford assay Methods 0.000 description 1
- 108010065839 Capreomycin Proteins 0.000 description 1
- 241000156961 Coenonympha Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- DYDCUQKUCUHJBH-UWTATZPHSA-N D-Cycloserine Chemical compound N[C@@H]1CONC1=O DYDCUQKUCUHJBH-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- DYDCUQKUCUHJBH-UHFFFAOYSA-N D-Cycloserine Natural products NC1CONC1=O DYDCUQKUCUHJBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000258963 Diplopoda Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 206010042209 Stress Diseases 0.000 description 1
- 241001185310 Symbiotes <prokaryote> Species 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 108010015940 Viomycin Proteins 0.000 description 1
- OZKXLOZHHUHGNV-UHFFFAOYSA-N Viomycin Natural products NCCCC(N)CC(=O)NC1CNC(=O)C(=CNC(=O)N)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(NC1=O)C2CC(O)NC(=N)N2 OZKXLOZHHUHGNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 229960004821 amikacin Drugs 0.000 description 1
- LKCWBDHBTVXHDL-RMDFUYIESA-N amikacin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](N)C[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O[C@@H]1[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)NC(=O)[C@@H](O)CCN)[C@H]1O[C@H](CN)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LKCWBDHBTVXHDL-RMDFUYIESA-N 0.000 description 1
- 229960004909 aminosalicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 229940035674 anesthetics Drugs 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002365 anti-tubercular Effects 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000005282 brightening Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 229960004602 capreomycin Drugs 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229960003077 cycloserine Drugs 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 208000015355 drug-resistant tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- AEOCXXJPGCBFJA-UHFFFAOYSA-N ethionamide Chemical compound CCC1=CC(C(N)=S)=CC=N1 AEOCXXJPGCBFJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002001 ethionamide Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000052637 human pathogen Species 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- QRXWMOHMRWLFEY-UHFFFAOYSA-N isoniazide Chemical compound NNC(=O)C1=CC=NC=C1 QRXWMOHMRWLFEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 201000009671 multidrug-resistant tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 229960005206 pyrazinamide Drugs 0.000 description 1
- IPEHBUMCGVEMRF-UHFFFAOYSA-N pyrazinecarboxamide Chemical compound NC(=O)C1=CN=CC=N1 IPEHBUMCGVEMRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001225 rifampicin Drugs 0.000 description 1
- JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N rifampicin Chemical compound O([C@](C1=O)(C)O/C=C/[C@@H]([C@H]([C@@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)\C=C\C=C(C)/C(=O)NC=2C(O)=C3C([O-])=C4C)C)OC)C4=C1C3=C(O)C=2\C=N\N1CC[NH+](C)CC1 JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229950001272 viomycin Drugs 0.000 description 1
- GXFAIFRPOKBQRV-GHXCTMGLSA-N viomycin Chemical compound N1C(=O)\C(=C\NC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](N)CCCN)CNC(=O)[C@@H]1[C@@H]1NC(=N)N[C@@H](O)C1 GXFAIFRPOKBQRV-GHXCTMGLSA-N 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest nowy szczep bakterii Raoultella ornithinolytica zdeponowany w Narodowym Instytucie Leków w Warszawie pod Nr 02/01/2009, wytwarzający substancje antybiotyczne przeciw bakteriom z rodzaju Mycobacterium i sposób wyizolowania tego szczepu z jelita dżdżownicy Dendrobaena veneta należącej do pierścienic, których jelito obfituje w pewne gatunki bakterii stanowiące ich symbionty.
Gruźlica, jako główna przyczyna zgonów wśród chorób zakaźnych, jest jednym z najważniejszych problemów zdrowotnych i społecznych na świecie. Jej głównymi sprawcami są mykobakterie Mycobacterium tuberculosis, wykazujące dużą odporność zarówno na czynniki zewnętrzne środowiska jak i oporność na działanie znanych antybiotyków oraz substancji chemicznych szkodliwych dla innych bakterii.
Trudna terapia przeciwgruźlicza oparta jest na takich antybiotykach jak: streptomycyna, cykloseryna, kanamycyna, kapreomycyna, wiomycyna, amikacyna lub ryfampicyna, czy też lekach syntetycznych jak etionamid, bądź zawierających kwas paraaminosalicylowy, hydrazyd kwasu izonikotynowego lub pirazynamid.
Stosowanie wymienionych leków nie dało jednak całkowitego zwycięstwa nad Mycobacterium tuberculosis, albowiem prątki szybko uodparniają się na leki, a chorzy w czasie terapii doznają poważnych dolegliwości związanych z ich niepożądanymi, toksycznymi działaniami. Ponadto nie ma jednego skutecznego antybiotyku i leczenie gruźlicy wymaga terapii skojarzonej.
Coraz większe rozpowszechnienie lekoopornych prątków gruźlicy oznacza, że w przyszłości może zwiększać się liczba zachorowań, toteż na świecie nieustannie prowadzone są badania ukierunkowane na poszukiwanie nowych leków i szczepionek.
Od setek lat w krajach południowej Azji - Japonia, Chiny czy Wietnam, wykorzystuje się w medycynie preparaty otrzymywane z bezkręgowców, które stanowią wręcz obowiązkowy składnik wielu środków farmaceutycznych stosowanych przede wszystkim w leczeniu infekcji bakteryjnych i wirusowych.
Dowiedziono, że symbiotyczne bakterie jelitowe wyizolowane z przewodu pokarmowego owadów i krocionogów oprócz funkcji odżywczej pełnią ważną rolę w powstrzymywaniu kolonizacji jelita przez patogeny, dzięki swym przeciwbakteryjnym i przeciwgrzybicznym właściwościom antybiotycznym. Badania te zostały opisane przez Gebhardta i innych, w pracy opublikowanej w FEMS Microbiological Letters., 2002, 217, 199-205.
W ostatnich kilku latach, popularnym modelem w badaniach nad odpornością bezkręgowców stały się pierścienice posiadające konserwatywne mechanizmy odporności nieswoistej, właściwej zarówno dla bezkręgowców jak i kręgowców.
Benkendorff i inni, w pracy opublikowanej w Journal of Invertebrate Pathology, 2001, 78, 109-118, stwierdzili aktywność przeciwbakteryjną białek z kokonów pierścienic, działających na takie patogeny człowieka jak: Escherichia coli, Pseudommonas aeruginosa oraz Staphylococcus aureus.
Dotychczasowe badania nad mikroorganizmami związanymi z pierścienicami, skupiają się głównie na poznaniu składu mikroflory bakteryjnej.
Badania z udziałem samej Dendrobaena veneta, dotyczyły głównie odporności komórkowej, a takż e wpł ywu metali ciężkich na ten typ odpowiedzi immunologicznej - Wieczorek-Olchawa i inni, Pedobiologia, 2003, 47, 702-709.
Nie ma opublikowanych danych o wykorzystaniu aktywności przeciwbakteryjnej białek wyizolowanych z dżdżownicy, wykazujących odporność skierowaną przeciwko patogenom z rodzaju Mycobacterium.
W preparatyce anatomicznej bezkręgowców, znanymi ś rodkami anestezjologicznymi są octan etylu oraz eter. Opary tych związków powodują u dżdżownicy stres, objawiający się wyrzucaniem przez otwory nefrydialne dużej puli celomocytów i płynu celomatycznego wraz z częścią mikroflory organizmu.
Innym powszechnie stosowanym sposobem anestezy dżdżownic jest zanurzanie ich w gorącej, odtlenionej wodzie, jak opisali Byzov i inni oraz Molinares i inni w European Journal of Soil Biology 2007, 43, jednakże powoduje on wyginięcie części bakterii jelitowych.
Badania podjęte przez twórców wynalazku nad symbiotycznymi bakteriami jelitowymi dżdżownicy Dendrobaena veneta, miały na celu wyizolowanie z jej jelita, identyfikację i określenie właściwości mikroorganizmu wytwarzającego substancje antybiotyczne skierowane zwłaszcza przeciw bakteriom z rodzaju Mycobacterium.
PL 212 077 B1
Cel ten osiągnięto stosując nowy sposób izolacji mikroorganizmów, pozwalający na zachowanie całej mikroflory w organizmie dżdżownicy.
Nowym szczepem bakterii według wynalazku jest Raoultella ornithinolytica, wyizolowany z jelita dżdżownicy Dendrobaena veneta i zdeponowany w Narodowym Instytucie Leków w Warszawie pod numerem: 02/01/2009, wykazujący przeciwbakteryjne działanie skierowane na bakterie z rodzaju Mycobacterium, do których należą również prątki będące czynnikiem etiologicznym gruźlicy i choroby Leśniewskiego-Crohna.
Sposób wyizolowania nowego szczepu bakterii Raoultella ornithinolytica, nr depozytu 02/01/2009, z jelita dżdżownicy Dendrobaena veneta, polegający na uśpieniu żywego organizmu celem przeprowadzenia preparatyki anatomicznej i wyodrębnienia materiału do identyfikacji charakteryzuje się tym, że dojrzałe osobniki Dendrobaena veneta z uprzednio oczyszczonym jelitem znanymi sposobami, poddaje się łagodnej, bez objawów stresu anestezie, dla zachowania w organizmie całej mikroflory, z użyciem środka anestezjologicznego w postaci dwutlenku węgla otrzymywanego in statu nascendi w reakcji kwasu cytrynowego z węglanem sodowym. Z tak uśpionej dżdżownicy wycina się środkowy odcinek jelita około 1 cm poniżej clitellum, płucze w soli fizjologicznej, a po osuszeniu i zważeniu zadaje porcją buforu fosforanowego Sorensena, korzystnie o pH = 6,4 w stosunku wagowym 1:2. Następnie preparat homogenizuje się w jałowych warunkach, posiewa na podłoże Sautona, zawierające prątki saprofityczne i inkubuje przez 3 doby w temp. 37°C. Spośród wyrosłych mikroorganizmów wybiera się charakterystyczne śluzowe kolonie o białym kolorze z perłowym połyskiem, wokół których występują strefy przejaśnienia.
Wyizolowane bakterie namnaża się na skosach Hawigera, przygotowując do identyfikacji testami biochemicznymi: Api 20 E oraz testami w kierunku wytwarzania przez badane bakterie - histaminy i indolu oraz dekarboksylacji ornityny.
Wyniki testów świadczą o przynależności badanego szczepu bakterii do Raoultella ornithinolytica. Ostateczną identyfikację szczepu potwierdziła analiza sekwencji genu 16S rRNA, przeprowadzona przez certyfikowaną firmę Genomed w Warszawie.
Sposób wyizolowania nowego szczepu bakterii Raoultella ornithinolytica 02/01/2009 przedstawiono w przykładzie wykonania.
Osobniki Dendrobaena veneta pochodzące z jednej linii hodowlanej, utrzymywano przez co najmniej 2 lata, w warunkach laboratoryjnych, w temperaturze pokojowej, w ziemi ogrodowej przy całkowitym zaciemnieniu. Dojrzałe osobniki przekładano do pojemnika z jałową, wilgotną bibułą, gdzie przebywały przez 3 doby bez ziemi, aby przewód pokarmowy uległ oczyszczeniu. Ponownie dżdżownice płukano w jałowej wodzie, osuszano jałową bibułą i przenoszono do zamkniętego naczynia z odprowadzeniem umożliwiającym dostarczanie środka anestezjologicznego w postaci dwutlenku węgla, otrzymywanego in statu nascendi, w reakcji kwasu cytrynowego z węglanem sodowym. Z uśpionej dżdżownicy wycinano środkowy odcinek jelita około 1 cm poniżej clitellum, płukano go w soli fizjologicznej, a po osuszeniu i zważeniu, zadawano porcją buforu fosforanowego Sorensena, o pH = 6,4 w stosunku wagowym 1:2. Preparat rozcierano w jałowym szklanym homogenizatorze, a następnie homogenat posiewano na podłoże Sautona, zawierające prątki saprofityczne. Płytki z podłożem inkubowano przez 3 doby w temp. 37°C. Spośród wyrosłych mikroorganizmów wybierano śluzowe kolonie o białym kolorze z charakterystycznym perłowym połyskiem, wokół których zaobserwowano strefy przejaśnienia.
Wyizolowane szczepy, namnażano na skosach Hawigera, przygotowując do identyfikacji testami biochemicznymi: Api 20 E oraz testami w kierunku wytwarzania przez badane bakterie - histaminy i indolu oraz dekarboksylacji ornityny.
Ostatecznie identyfikację potwierdzono analizą sekwencji genu 16S rRNA, dokonaną w certyfikowanej firmie Genomed w Warszawie.
Dla określenia właściwości nowego szczepu bakterii Raoultella ornithinolytica 02/01/2009 w kierunku wytwarzania substancji antybiotycznych skierowanych przeciw bakteriom z rodzaju Mycobacterium sporządzono ekstrakt białkowy.
Wyizolowane bakterie namnażano w podłożu Hawigera w temp. 37°C przez 24 godz. w termostacie z funkcją mieszania. Bakterie wirowano w temp. 4°C, przez 10 min, przy 14000 rpm. Supernatant zlewano, a uzyskany osad bakterii mieszano z buforem Sorensena o pH = 6,0, zawierającym inhibitory proteaz 1 mM PMSF i Complete-Protease Inhibitor Cocktail Tabletes (Roche) (20 μΐ/l ml). Tak przygotowane próbki umieszczano w ciekłym azocie na 10 min, a następnie w lodzie. Czynność tę powtarzano trzykrotnie. Uzyskane próbki jeszcze raz wirowano w warunkach jak wyżej, a następnie
PL 212 077 B1 supernatant przesączano przez sączek Millipore o średnicy porów 0,22 μm. Uzyskany ekstrakt białkowy o stężeniu białka określonym metodą Bradforda, używano dalej do inkubacji z prątkami saprofitycznymi.
Płynny ekstrakt białkowy z bakterii Raoultella ornithinolytica inkubowano z bakteriami z rodzaju Mycobacterium w płynnym podłożu Sautona zawierającym prątki saprofityczne: M. butiricum, M. juho, M. phlei i M. smegmatis. Preparaty inkubowano przez 4-9 dni w temp. 37°C, w termostacie z funkcją mieszania.
Otrzymaną zawiesinę mieszano w stosunku objętościowym 1:1 z 1% krzemowolframianem sodu i przenoszono pipetą na siatki z filmem formvarowym. Roztwór ponownie inkubowano na siatkach przez 10-15 minut, a następnie odsączano bibułą i suszono w próżni podczas transferu do kolumny mikroskopu. Zaadsorbowane na filmie komórki obserwowano po 6 dniach metodą kontrastu negatywowego pod transmisyjnym mikroskopem elektronowym Zeiss/LEO LEO912AB.
Obrazy spod mikroskopu dowodzą, że komórki Mycobacterium pęczniały, ulegały skróceniu, dzieliły się na mniejsze struktury o kształcie owalnym bądź okrągłym, czy też tworzyły struktury filamentowe, powstałe z połączenia się komórek w trakcie zaburzonego podziału.
Na załączonym rysunku przedstawiono wyżej opisane obrazy mikroskopowe, na którym:
Fig. 1 przedstawia: A - kontrolne komórki prątków M. butiricum, B i C - komórki prątków M. butiricum poddane działaniu ekstraktu z bakterii R. ornithinolytica.
Fig. 2 przedstawia: D - kontrolne komórki prątków M. juho, E i F - komórki prątków M. juho poddane działaniu ekstraktu z bakterii R. ornithinolytica.
Fig. 3 przedstawia: G - kontrolne komórki prątków M. phlei, H i I - komórki prątków M. phlei poddane działaniu ekstraktu z bakterii R. ornithinolytica.
Fig. 4 przedstawia: J - kontrolne komórki prątków M smegmatis, K i L - komórki prątków M. smegmatis poddane działaniu ekstraktu z bakterii R. ornithinolytica.
Tak udokumentowane eksperymenty są dowodem na bakteriobójcze działanie szczepu Raoultella ornithinolytica 02/01/2009 w kierunku prątków z rodzaju Mycobacterium.
Claims (2)
1. Nowy szczep bakterii Raoultella ornithinolytica wyizolowany jelita dżdżownicy Dendrobaena veneta, zdeponowany pod numerem 02/01/2009.
2. Sposób wyizolowania nowego szczepu bakterii Raoultella ornithinolytica, nr depozytu 02/01/2009, z jelita dżdżownicy Dendrobaena veneta, polegający na uśpieniu żywego organizmu z uprzednio oczyszczonym jelitem i wyodrębnieniu materiału do identyfikacji, znamienny tym, że dojrzałe osobniki Dendrobaena veneta, po oczyszczeniu jelita znanymi sposobami, poddaje się łagodnej, bez objawów stresu anestezie, dla zachowania w organizmie całej flory bakteryjnej, z udziałem środka anestezjologicznego w postaci dwutlenku węgla, otrzymywanego in statu nascendi w reakcji kwasu cytrynowego z węglanem sodowym i z uśpionej dżdżownicy wycina się środkowy odcinek jelita około 1 cm poniżej clitellum, płucze w soli fizjologicznej, a po osuszeniu i zważeniu zadaje porcją buforu fosforanowego Sorensena, korzystnie o pH = 6,4, w stosunku wagowym 1:2, preparat następnie homogenizuje się w jałowych warunkach, posiewa na podłoże Sautona, zawierające prątki saprofityczne i inkubuje przez 3 doby w temp. 37°C, po czym spośród wyrosłych mikroorganizmów wybiera się charakterystyczne śluzowe kolonie o białym kolorze z perłowym połyskiem, wokół których występują strefy przejaśnienia.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL387583A PL212077B1 (pl) | 2009-03-23 | 2009-03-23 | Nowy szczep bakterii Raoultella ornithinolytica wyizolowany z jelita dżdżownicy endrobaena veneta oraz sposób wyizolowania tego szczepu z jelita dżdżownicy Dendrobaena veneta |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL387583A PL212077B1 (pl) | 2009-03-23 | 2009-03-23 | Nowy szczep bakterii Raoultella ornithinolytica wyizolowany z jelita dżdżownicy endrobaena veneta oraz sposób wyizolowania tego szczepu z jelita dżdżownicy Dendrobaena veneta |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL387583A1 PL387583A1 (pl) | 2010-09-27 |
| PL212077B1 true PL212077B1 (pl) | 2012-08-31 |
Family
ID=42941024
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL387583A PL212077B1 (pl) | 2009-03-23 | 2009-03-23 | Nowy szczep bakterii Raoultella ornithinolytica wyizolowany z jelita dżdżownicy endrobaena veneta oraz sposób wyizolowania tego szczepu z jelita dżdżownicy Dendrobaena veneta |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL212077B1 (pl) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106978368B (zh) * | 2017-03-31 | 2020-04-21 | 浙江工业大学 | 解鸟氨酸拉乌尔菌及其应用 |
-
2009
- 2009-03-23 PL PL387583A patent/PL212077B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL387583A1 (pl) | 2010-09-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Chmit et al. | Antibacterial and antibiofilm activities of polysaccharides, essential oil, and fatty oil extracted from Laurus nobilis growing in Lebanon | |
| Thanigaivel et al. | In vivo and in vitro antimicrobial activity of Azadirachta indica (Lin) against Citrobacter freundii isolated from naturally infected Tilapia (Oreochromis mossambicus) | |
| Junaid et al. | The antimicrobial properties of Ocimum gratissimumextracts on some selected bacterial gastrointestinal isolates | |
| Sherpa et al. | Application of iChip to grow “uncultivable” microorganisms and its impact on antibiotic discovery | |
| Shaheen et al. | Antibacterial activity of herbal extracts against multi-drug resistant Escherichia coli recovered from retail chicken meat. | |
| Amertha et al. | In vitro inhibition zone test of binahong (Anredera cordifolia) towards Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Escherichia coli, and Pseudomonas aeruginosa | |
| Alli et al. | In-vitro assessments of the effects of garlic (Allium sativum) extract on clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus | |
| Sinott et al. | Larvicidal activity of Bacillus circulans against the gastrointestinal nematode Haemonchus contortus in sheep | |
| RU2546253C2 (ru) | Способ получения персонифицированного аутопробиотического продукта и способ лечения синдрома раздраженной кишки с использованием этого продукта | |
| Hairul Islam et al. | Myroides pelagicus from the gut of Drosophila melanogaster attenuates inflammation on dextran sodium sulfate-induced colitis | |
| PL212077B1 (pl) | Nowy szczep bakterii Raoultella ornithinolytica wyizolowany z jelita dżdżownicy endrobaena veneta oraz sposób wyizolowania tego szczepu z jelita dżdżownicy Dendrobaena veneta | |
| Lawal et al. | The antibacterial activity of Clausena anisata hook, a South African medicinal plant | |
| Ibrahim et al. | STUDY THE ANTIBACTERIAL ACTIVITY OF AQUEOUS EXTRACTION OF ONION (Allium cepaL) AGAINST Staphylococcus aureus ISOLATED | |
| WO2014028848A1 (en) | Compositions and method for treating neutralizing microorganisms | |
| Dulger et al. | Evaluation of Antimicrobial Activities of Salvia verbenaca | |
| Kempraj et al. | Bacteriostatic potential of Argemone mexicana Linn. against enteropathogenic bacteria | |
| Youssouf et al. | Evaluation of the antistaphylococcic activity of Terminalia macroptera Guill et Perr (Combretaceae) stem bark extracts | |
| Muazzam et al. | Anti-MRSA activity of ethyl acetate crude extract from endophytic fungus Ceratobasidium ramicola IBRLCM127 isolated from rhizome of Curcuma mangga Valeton & Zijp | |
| Al-daan et al. | Effect of piper cubeba fruits extract on bacteriocin production of E. coli isolated from patient with urinary tract infection | |
| Mohammad et al. | Effect of four plant extracts on opportunistic bacteria: Sphingomonas paucimobilis and Enterococcus faecium | |
| Oyagbemi et al. | The effect of Cnidoscolus aconitifolius on multi-drug resistant micro-organisms | |
| CZ33363U1 (cs) | Potravinářský výrobek nebo výživový doplněk obsahující kmen mikroorganismu Lactobacillus plantarum | |
| Kadhom et al. | The effect of supernatant of Lactobacillus plantarum against Salmonella Typhi biofilm formation | |
| Unissa et al. | Evaluation of Antibacterial Activity of Achyranthes aspera Extract against Vibrio alginolyticus: An in Vitro Study | |
| Kalwat et al. | Antibacterial, Antiparasitic and Antifungal Properties of Natural Pyrethrins Obtained from Dalmatian Tansy Used in the Treatment and Care of Sensitive Skin |