PL203145B1 - Sposób wydzielania krezolu z moczu ciężarnych klaczy - Google Patents
Sposób wydzielania krezolu z moczu ciężarnych klaczyInfo
- Publication number
- PL203145B1 PL203145B1 PL360596A PL36059601A PL203145B1 PL 203145 B1 PL203145 B1 PL 203145B1 PL 360596 A PL360596 A PL 360596A PL 36059601 A PL36059601 A PL 36059601A PL 203145 B1 PL203145 B1 PL 203145B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- cresol
- pmu
- urine
- solution
- pervaporation
- Prior art date
Links
- QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 2-methylphenol;3-methylphenol;4-methylphenol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1.CC1=CC=CC(O)=C1.CC1=CC=CC=C1O QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 54
- 229930003836 cresol Natural products 0.000 title claims abstract description 54
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 title claims abstract description 37
- 238000000926 separation method Methods 0.000 title abstract description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 27
- 238000005373 pervaporation Methods 0.000 claims abstract description 21
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- 239000010703 silicon Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000012466 permeate Substances 0.000 claims description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 30
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 25
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 24
- 229940035811 conjugated estrogen Drugs 0.000 claims description 23
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 claims description 20
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 13
- 239000012465 retentate Substances 0.000 claims description 11
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 10
- 230000029142 excretion Effects 0.000 claims description 7
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 claims description 7
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 claims description 2
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 claims 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 abstract description 13
- 229920005597 polymer membrane Polymers 0.000 abstract 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 12
- DNXHEGUUPJUMQT-CBZIJGRNSA-N Estrone Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 DNXHEGUUPJUMQT-CBZIJGRNSA-N 0.000 description 11
- 229960003399 estrone Drugs 0.000 description 11
- DNXHEGUUPJUMQT-UHFFFAOYSA-N (+)-estrone Natural products OC1=CC=C2C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CCC2=C1 DNXHEGUUPJUMQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 150000001896 cresols Chemical class 0.000 description 10
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 10
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 10
- WKRLQDKEXYKHJB-UHFFFAOYSA-N Equilin Natural products OC1=CC=C2C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3=CCC2=C1 WKRLQDKEXYKHJB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 9
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 9
- HVDGDHBAMCBBLR-UHFFFAOYSA-N enterolactone Chemical compound OC1=CC=CC(CC2C(C(=O)OC2)CC=2C=C(O)C=CC=2)=C1 HVDGDHBAMCBBLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- WKRLQDKEXYKHJB-HFTRVMKXSA-N equilin Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4C3=CCC2=C1 WKRLQDKEXYKHJB-HFTRVMKXSA-N 0.000 description 7
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 7
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 7
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 6
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 6
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 6
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 5
- 238000000622 liquid--liquid extraction Methods 0.000 description 4
- 229920002379 silicone rubber Polymers 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 3
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 3
- 239000004945 silicone rubber Substances 0.000 description 3
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- JHIVVAPYMSGYDF-UHFFFAOYSA-N cyclohexanone Chemical compound O=C1CCCCC1 JHIVVAPYMSGYDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 238000002414 normal-phase solid-phase extraction Methods 0.000 description 2
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- -1 sulfate salt Chemical class 0.000 description 2
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003439 Artificial menopause Diseases 0.000 description 1
- HVDGDHBAMCBBLR-PBHICJAKSA-N Enterolactone Chemical compound OC1=CC=CC(C[C@H]2[C@@H](C(=O)OC2)CC=2C=C(O)C=CC=2)=C1 HVDGDHBAMCBBLR-PBHICJAKSA-N 0.000 description 1
- 229920013685 Estron Polymers 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N Silane Chemical compound [SiH4] BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000012496 blank sample Substances 0.000 description 1
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000002019 doping agent Substances 0.000 description 1
- 229920001971 elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 1
- QTTMOCOWZLSYSV-QWAPEVOJSA-M equilin sodium sulfate Chemical compound [Na+].[O-]S(=O)(=O)OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4C3=CCC2=C1 QTTMOCOWZLSYSV-QWAPEVOJSA-M 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002657 hormone replacement therapy Methods 0.000 description 1
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000006911 nucleation Effects 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical group CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 150000003961 organosilicon compounds Chemical class 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 239000003495 polar organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000005060 rubber Substances 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 229910000077 silane Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000004073 vulcanization Methods 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 238000010626 work up procedure Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J1/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, androstane
- C07J1/0051—Estrane derivatives
- C07J1/0059—Estrane derivatives substituted in position 17 by a keto group
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J1/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, androstane
- C07J1/0051—Estrane derivatives
- C07J1/0066—Estrane derivatives substituted in position 17 beta not substituted in position 17 alfa
- C07J1/007—Estrane derivatives substituted in position 17 beta not substituted in position 17 alfa the substituent being an OH group free esterified or etherified
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/20—Oxygen containing
- Y10T436/203332—Hydroxyl containing
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Separation Using Semi-Permeable Membranes (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Absorbent Articles And Supports Therefor (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Transition And Organic Metals Composition Catalysts For Addition Polymerization (AREA)
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest ogólnie otrzymywanie naturalnej mieszaniny sprzężonych estrogenów z moczu klaczy ciężarnych, a zwłaszcza wydzielanie krezoli z moczu klaczy.
W medycynie stosuje się estrogeny w terapii zastę powania hormonów. Mieszaniny estrogenów stosuje się w szczególności w leczeniu i zapobieganiu dolegliwościom występującym u kobiet w okresie przekwitania po naturalnej lub sztucznej menopauzie. Szczególnie skuteczne i dobrze tolerowane okazały się przy tym naturalne mieszaniny sprzężonych estrogenów występujące w moczu klaczy ciężarnych.
Zawartość rozpuszczonych substancji stałych w moczu klaczy ciężarnych (= pregnant mares' urine, następnie w skrócie nazywanej „PMU”) w naturalnych warunkach może wahać się w szerokich granicach, przy czym na ogół mieści się w zakresie od 40 g do 90 g suchej substancji na 1 litr. Oprócz mocznika i innych szczególnych składników mocznikowych w stałej substancji PMU znajdują się także składniki fenolowe w ilości od około 2% wagowych do około 5% wagowych, w przeliczeniu na suchą substancję. W tych składnikach fenolowych znajdują się krezole oraz dihydro-3,4-bis[(3-hydroksyfenylo)metylo]-2(3H)-furanon znany jako HPMF.
Składniki te mogą występować w postaci wolnej lub sprzężonej. W PMU znajduje się naturalna mieszanina estrogenów, która ma przeważnie postać sprzężonych estrogenów, na przykład postać soli sodowej półestru kwasu siarkowego (nazywanej następnie w skrócie „solą siarczanową”). Zawartość sprzężonych estrogenów (= conjugated estrogen, następnie nazywanych w skrócie „CE”) można obliczyć jako zawartość soli siarczanu estrogenu i wynosi od 0,3 do 1,0% wagowego, w przeliczeniu na suchą substancję.
W stanie techniki opisano różne sposoby postę powania podczas bezpośredniego przerobu i wytwarzania sprzężonych estrogenów. Ekstrakty zawierające sprzężone estrogeny otrzymuje się zwykle z PMU przez ekstrakcję polarnym rozpuszczalnikiem organicznym, niemieszalnym lub tylko nieznacznie mieszalnym z wodą, na przykład octanem etylu, n-butanolem lub cykloheksanonem.
Jednak podczas takich ekstrakcji ciecz-ciecz występuje szereg trudności, spowodowanych na przykład silnym pienieniem, tworzeniem się emulsji i złym podziałem fazowym. Zwykle potrzeba przeprowadzania kilkakrotnej ekstrakcji, co zwiększa straty i powoduje tylko częściowe odzyskanie estrogenów. Dla uniknięcia tych strat w znanym stanie techniki zaproponowano prowadzenie kilku ekstrakcji w fazie stałej.
Dla przygotowania małych ilości cieczy moczu i cieczy plazmowych do analitycznego oznaczania estrogenów metodą chromatografii gazowej, Heikkinnen et al. (Clin. Chem. 27/7 (1981), 1186-1189) i Shackleton et al. (Clinica Chimica Acta 107 (1980), 231-243) zaproponowali zastosowanie ekstrakcji estrogenów w fazie stałej przy użyciu naboju zawierającego silanowany żel krzemionkowy zawierający ugrupowania oktadecylosilanowe (nabój Sep-PakR C18, producent Waters Ass. Inc. Milford, MA, USA). W tym przypadku estrogeny eluowano z naboju metanolem.
H. L. Bradlow w roku 1968 (patrz Steroids 11 (1968), 265-272) zaproponował zastosowanie do ekstrakcji sprzężonych estrogenów z moczu obojętnej niepolarnej hydrofobowej żywicy polistyrenowej Amberlite XAD-2R firmy Rohm & Haas. Podana pojemność adsorpcyjna jest nieznaczna. Według Bradlowa, mocz, ewentualnie po rozcieńczeniu, przemieszczano z małą szybkością przepływu przez kolumnę zawierającą żywicę. Estrogeny eluowano metanolem lub etanolem.
Nowsze zgłoszenia patentowe opisują sposób wytwarzania ekstraktu zawierającego naturalną mieszaninę sprzężonych estrogenów z moczu klaczy ciężarnych na drodze ekstrakcji w fazie stałej mieszaniny sprzężonych estrogenów z moczu klaczy ciężarnych przy użyciu na przykład żelu krzemionkowego RP (WO 98/08525) lub niejonowych semipolarnych polimerycznych żywic adsorpcyjnych (WO 98/08526).
W sposobach ujawnionych w tych mię dzynarodowych zgł oszeniach patentowych stosowane są jeszcze substancje wyjściowe PMU, zawierające stosunkowo duże ilości substancji fenolowych w moczu, takich jak na przykład krezoli i HPMF, które chociaż mogły być skutecznie wydzielane już za pomocą znanych sposobów, jednak z drugiej strony jako niepożądane domieszki ograniczały wydajność właściwego przerobu, na przykład przez zmniejszanie wydajności adsorbenta.
W zależ noś ci od pochodzenia moczu albo od rodzaju karmy koni moż na był o znaleźć, takż e w świeżym naturalnym moczu, zawartość krezoli powyżej 500 mg/l, czasem nawet powyż ej 1500 mg/l. Zawartość krezoli wzrasta w zależności od pochodzenia i świeżości moczu, stopnia jego zarodkowania i warunków przechowywania, a zwłaszcza na przykład od temperatury przechowywania, do wartości
PL 203 145 B1
2000 mg/l i ewentualnie nawet do wartości większej. Chociaż na przykład alkaliczne przemywanie kolumny adsorpcyjnej z niejonową semipolarną polimeryczną żywicą adsorpcyjną według sposobu ujawnionego w międzynarodowym zgłoszeniu patentowym WO 98/08526 zapewnia dobre wydzielanie krezoli, to duża zawartość krezoli jest przy tym szkodliwa z dwóch powodów:
a) wydajność hormonów na żywicy jest mniejsza, ponieważ obok hormonów także krezol jest adsorbowany przez żywicę,
b) w przypadku dużych zawartości krezoli przy alkalicznym przemywaniu traci się kilka procent hormonów.
Dla uniknięcia tych strat pożądany jest przerób moczu zawierającego możliwie mało krezoli. Ponieważ nie można zapewnić małych zawartości krezoli w PMU ze względu na transport, na przykład przy zbieraniu moczu z całego świata, także z odległych stron - albo też w zależności od rasy i rodzaju karmy koni, należy znaleźć inne sposoby zmniejszenia zawartości krezoli w PMU i wytwarzania mieszanin sprzężonych estrogenów.
Dotychczasowe próby, na przykład z zastosowaniem adsorpcji, nie dały dobrych wyników, ponieważ oprócz zmniejszenia zawartości krezoli następowała mniejsza lub większa strata hormonów w każdym razie strata ta była nie do przyjęcia.
Obok optymalizacji opisanego w stanie techniki bezpośredniego całego przerobu moczu klaczy ciężarnych (PMU) dla uzyskania naturalnych mieszanin sprzężonych estrogenów (CE) szczególnie duże znaczenie dla wytwarzania z dużą wydajnością i o dobrej jakości mieszaniny sprzężonych estrogenów, mają również etapy przerobu, na przykład chroniący estrogeny sposób usuwania niepożądanych substancji towarzyszących, takich jak krezole.
Zadaniem niniejszego wynalazku jest więc opracowanie technicznego sposobu wydzielania krezoli z PMU, w którym otrzymuje się PMU zawierający znacznie zmniejszoną ilość krezolu. Takie PMU zasadniczo nie zawierające krezolu są dobrą jakościowo i ilościowo substancją wyjściową dla właściwego przerobu wytwarzania z PMU naturalnej mieszaniny sprzężonych estrogenów.
Opracowano więc sposób będący szczególnym rodzajem filtracji, zwany „perwaporacją” (odparowanie przez półprzepuszczalną przegrodę), za pomocą którego można łatwo i skutecznie zmniejszyć zawartość krezoli w moczu klaczy ciężarnych (PMU).
Sposób wydzielania krezolu z moczu klaczy ciężarnych (PMU) według niniejszego wynalazku charakteryzuje się tym, że zawartość krezolu w wodnym roztworze wyjściowym PMU zmniejsza się przez perwaporację za pomocą nieporowatej polimerycznej membrany silikonowej, przy czym krezol przenika na stronę permeatu membrany, a poddany obróbce roztwór PMU otrzymuje się jako retentat zawierający mieszaninę sprzężonych estrogenów ze zmniejszoną zawartością krezolu.
Perwaporacja jest szczególnym rodzajem filtracji, w której jeden składnik ciekłej mieszaniny (roztworu wyjściowego) jest przenoszony ze strony zasilania nieporowatej membrany polimerycznej na stronę permeatu. Często zachodzi to razem ze zmianą fazy - z fazy ciekłej na fazę gazową (obszar gazu lub próżnia), ale także może występować przejście fazy ciekłej roztworu wyjściowego, z którego ma być wydzielona określona substancja, do drugiej fazy ciekłej, która odbiera wydzielaną substancję na stronie permeatu. Membrana stanowi prawie całkowitą barierę dla pozostałych składników mieszaniny lub roztworu wyjściowego.
Selektywny transport substancji wydzielanej z mieszaniny występuje wtedy, gdy stężenia tego składnika mieszaniny są różne w zasilaniu i w membranie. Selektywność wynika z oddziaływania przenikającego składnika, to znaczy wydzielanego składnika mieszaniny, ze stosowaną membraną, która umożliwia selektywną sorpcję wydzielanego składnika mieszaniny, jego dyfuzję przez membranę i jego desorpcję na stronie permeatu.
Stwierdzono według wynalazku, że nieporowate polimeryczne membrany silikonowe nadają się doskonale do zmniejszania ilości lub do daleko idącego wydzielania krezolu z moczu klaczy ciężarnych (PMU), przy czym pożądane, zawarte w PMU sprzężone estrogeny, takie jak estron i ekwilina, pozostają całkowicie bez uszczerbku w retentacie.
W ramach niniejszego wynalazku można stosować dowolne urządzenia perwaporacyjne, które w każdej postaci są wyposażone w jedną lub kilka nieporowatych polimerycznych membran silikonowych.
W jednym z wariantów sposobu wedł ug niniejszego wynalazku wydzielania krezolu z moczu klaczy ciężarnych (PMU) zawartość krezolu w wyjściowym roztworze wodnym PMU zmniejsza się metodą perwaporacji, w której wyjściowy wodny roztwór PMU zawierający krezol pompuje się przez rurkę silikonową służącą jako nieporowata membrana polimeryczna lub przez moduł z pustych włókien
PL 203 145 B1 silikonowych, przy czym krezol przenika na stronę permeatu, a poddany obróbce roztwór PMU otrzymuje się jako retentat zawierający mieszaninę sprzężonych estrogenów ze zmniejszoną zawartością krezolu.
W opisanych powyż ej wariantach sposobu wedł ug wynalazku na stronie permeatu moż e znajdować się próżnia, faza gazowa lub ciecz permeatu odbierająca krezol.
Korzystny wariant sposobu według wynalazku charakteryzuje się tym, że na stronie permeatu znajduje się ciecz permeatu, a zwłaszcza woda lub wodny roztwór etanolu. Stwierdzono przy tym, że podczas perwaporacji jest korzystne odnawianie z przerwami lub w sposób ciągły cieczy permeatu odbierającej krezol. W ten sposób można korzystnie podtrzymywać czynny gradient stężenia.
W sposobie według wynalazku można oczywiście zastosować także nieporowatą membranę polimeryczną z różnorodnych typów silikonów. Można na przykład korzystnie zastosować nieporowate polimeryczne membrany silikonowe, takie jak wyroby techniczne produkowane w skali przemysłowej
[patrz - na przykład Winnacker-Kiichler (3.) 5: 252 - 286]. Takie silikony należą do obszernej grupy syntetycznych polimerycznych związków krzemoorganicznych, w których atomy krzemu są połączone ze sobą poprzez atomy tlenu, a pozostałe wartościowości krzemu są wysycone przez reszty węglowodorowe (przeważnie przez reszty metylowe, czasem także przez inne reszty, na przykład przez grupy etylowe, propylowe lub fenylowe). Należy wymienić tu na przykład „kauczuki silikonowe”, na przykład wulkanizowane na gorąco masy kauczuku silikonowego („kauczuk na gorąco”), które są najczęściej jeszcze płynnymi materiałami formowanymi plastycznie, które po wulkanizacji dają odporną termicznie, elastyczną gumę silikonową, którą można jeszcze przetwarzać do wielu różnych zastosowań, a zwłaszcza na gumowe rurki silikonowe, które można stosować w przemyśle chemicznym i w medycynie.
Opracowanie konkretnych rozwiązań sposobu według wynalazku w ramach warunków ogólnych nie powinno dla fachowca stwarzać żadnych specjalnych trudności. W szczególności można w każdym wypadku określić optymalne warunki sposobu na podstawie niewielu prób wstępnych, na przykład prób rodzaju jak objaśnione bliżej w podanych poniżej przykładach według wynalazku.
Zaletą niniejszego wynalazku jest to, że przez usunięcie z moczu krezoli zwiększa się objętość właściwa moczu, która może być wprowadzana na 1 litr żywicy kolumny do wydzielania i wyodrębnienia sprzężonych estrogenów. Dzięki temu podczas następującego dalszego właściwego przerobu PMU na kolumnie żywicy można uniknąć niepożądanej adsorpcji krezolu na żywicy (na przykład w wypadku stosowanej często jonowymiennej żywicy XAD-7) i uzyskaną dodatkową pojemność wykorzystać do adsorpcji cennych składników hormonów. Ponadto zmniejszenie zawartości krezoli w PMU wpływa korzystnie także na ograniczenie strat hormonów podczas przerobu PMU, na przykład podczas alkalicznego przemywania kolumny (patrz na przykład WO 98/08526).
Opis figur
Figura 1. Szkic struktury prób ekstrakcji ciecz-ciecz krezolu z PMU metodą perwaporacji przez rurkę silikonową jako nieporowatą membranę polimeryczną.
Figura 2. Szkic struktury prób ekstrakcji ciecz-ciecz krezolu na PMU metodą perwaporacji z zastosowaniem modułu z pustych włókien silikonowych.
P r z y k ł a d y
Podane poniżej przykłady mają na celu bliższe objaśnienie wynalazku, ale nie ograniczają jego zakresu.
Zasada perwaporacji
Perwaporacja jest szczególnym rodzajem filtracji, w której jeden składnik ciekłej mieszaniny (roztworu wyjściowego) jest przenoszony ze strony zasilania nieporowatej membrany polimerycznej na stronę permeatu. Często zachodzi to razem ze zmianą fazy - z fazy ciekłej na fazę gazową (obszar gazu lub próżnia), ale także może występować przejście fazy ciekłej roztworu wyjściowego, z którego ma być wydzielona określona substancja, do drugiej fazy ciekłej, która odbiera wydzielaną substancję na stronie permeatu. Membrana stanowi prawie całkowitą barierę dla pozostałych składników mieszaniny lub roztworu wyjściowego.
Selektywny transport występuje wtedy, gdy stężenia składnika mieszaniny są różne w zasilaniu i w membranie. Selektywność wynika z oddziaływania składnika przenikającego, to znaczy składnika wydzielanego z mieszaniny, ze stosowaną membraną, która umożliwia selektywną sorpcję wydzielanego składnika mieszaniny, jego dyfuzję przez membranę i jego desorpcję na stronie permeatu.
W podanych poniżej próbach dla przykładu 1 zastosowano urządzenie perwaporacyjne, w którym na stronie permeatu umieszczono strumień cieczy.
PL 203 145 B1
Sposób według przykładu 1 nie jest sposobem ograniczającym, ponieważ można pracować także w takich urządzeniach perwaporacyjnych, które na stronie permeatu mają przestrzeń gazową lub próżni odbierającej wydzielaną substancję.
Inny, także nieograniczający sposób postępowania z zastosowaniem modułu z pustych włókien, podano w przykładzie 3.
P r z y k ł a d 1.
Próby perwaporacji (ekstrakcja ciecz-ciecz, rurka silikonowa).
W próbach perwaporacji przeprowadzonych w tym przykł adzie zastosowano strukturę prób z rurek (membrana) i z sąsiedniego strumienia cieczy (strona permeatu).
Szkic struktury prób ekstrakcji przedstawia Fig. 1.
Ponieważ pożądanymi są membrany o dużej powierzchni właściwej, dlatego zastosowano rurki o ś rednicy wewnę trznej okoł o 1 mm i gruboś ci ś cianki okoł o 0,4 mm.
Próba 1.
Ze zbiornika pompowano przez rurkę silikonową o długości 25 m mocz w ilości 30 ml/h. Zwiniętą rurkę umieszczono na szalce z 1 l 30-proc. roztworu etanolu.
Analiza wykazała, że zwiększa się tylko ilość krezolu w moczu i dyfunduje on do roztworu etanolu.
T a b e l a 1. Wyniki próby 1.
| estron, mg/l | ekwilina, mg/l | krezol, mg/l | HPMF, mg/l | |
| wyjściowy roztwór moczu | 41,5 | 15,8 | 89,4 | 1,2 |
| na wyjściu z rurki po 1 h (retentat) | 41,4 | 16,0 | 15,5 | 1,5 |
| na wyjściu z rurki po 4 h (retentat) | 41,4 | 15,9 | 10,9 | 1,5 |
| roztwór etanolu po 4 h (permeat) | 0 | 0 | 9,8 | 0 |
Próba 2.
Przeprowadzono próbę jak poprzednio w próbie 1, tylko roztwór etanolu zastąpiono wodą-VE (VE oznacza wodę całkowicie demineralizowaną). Analiza wykazała w zasadzie taki sam obraz jak próba 1. Także w tej próbie krezol dyfundował do fazy wodnej służącej jako permeat. Nie było strat estronu i ekwiliny.
T a b e l a 2. Wyniki próby 2.
| estron, mg/l | ekwilina, mg/l | krezol, mg/l | HPMF, mg/l | |
| wyjściowy roztwór moczu | 41,5 | 15,8 | 89,4 | 1,2 |
| na wyjściu z rurki po 7 h (retentat) | 42,8 | 16,4 | 16,0 | 1,3 |
| faza wodna po 7 h (permeat) | 0 | 0 | 16,2 | 0 |
Próba 3.
Zestaw prób 1 i 2 rozszerzono na 4 równoległe rurki, każda długości 25 m. Mocz wyjściowy zawierał dużą ilość krezolu. Strukturę prób przedstawia przykładowo Fig. 1.
Po 25 m rurki silikonowej (średnica wewnętrzna 1 mm, grubość ścianki 0,4 mm) nawinięto na 4 krzyżulcowe usztywnienia i następnie umieszczono je w pojemniku. Każdą z 4 rurek przyłączono pojedynczo do pompy perystaltycznej. Na stronie permeatu, to znaczy na stronie zewnętrznej dookoła rurek, umieszczono 8 l wodnego roztworu etanolu. Roztwór ten był mieszany. Następnie wyjściowy roztwór PMU pompowano przez rurki z szybkością 8 obrotów na minutę (= 15,6 ml/h). Dla każdej rurki, zawsze w odstępie co 2 h, pobierano retentat (to znaczy PMU po obróbce) i oznaczano stężenia składników tych frakcji. Próbę skończono po 6 h, to znaczy po trzeciej frakcji. Całkowita ilość PMU przeprowadzonego przez wszystkie rurki w ciągu 6 h wynosiła około 374 ml, co odpowiadało łącznie 232 mg krezolu.
Analiza składników retentatu i permeatu dała taki sam obraz jak w poprzednich próbach 1 i 2: zatrzymano estron i ekwilinę oraz wydzielono 95% krezolu.
PL 203 145 B1
T a b e l a 3.
Wyniki próby 3; wydzielanie krezolu przez ekstrakcję ciecz-ciecz przy użyciu rurki silikonowej (perwaporacja).
| Próba | zawartość TS | wartość pH | ekwilina, mg/l | estron, mg/l | krezol, mg/g | HPMF, mg/l |
| próba zerowa | 5,82 | 8,04 | 25,7 | 17,4 | 620,2 | 129,3 |
| rurka 1, 2 h | 5,81 | 8,63 | 26,8 | 17,6 | 32,2 | 110,5 |
| rurka 2, 2 h | 5,87 | 8,63 | 27,8 | 17,8 | 35,6 | 111,2 |
| rurka 3, 2 h | 5,78 | 8,65 | 28,5 | 18,6 | 32,2 | 109,7 |
| rurka 4, 2 h | 5,78 | 8,69 | 28,0 | 18,4 | 37,1 | 108,3 |
| rurka 1, 4 h | 5,91 | 8,62 | 28,1 | 18,1 | 36,4 | 112,4 |
| rurka 2, 4 h | 5,82 | 8,61 | 28,4 | 19,8 | 36,2 | 109,1 |
| rurka 3, 4 h | 5,82 | 8,61 | 26,3 | 18,7 | 32,5 | 115,0 |
| rurka 4, 4 h | 5,79 | 8,61 | 27,7 | 18,4 | 35,8 | 111,4 |
| rurka 1, 6 h | 5,81 | 8,59 | 28,0 | 18,5 | 46,1 | 111,5 |
| rurka 2, 6 h | 5,73 | 8,59 | 28,8 | 17,8 | 45,2 | 110,3 |
| rurka 3, 6 h | 5,76 | 8,59 | 28,3 | 19,9 | 44,4 | 114,7 |
| rurka 4, 6 h | 5,89 | 8,59 | 28,8 | 19,3 | 47,7 | 111,7 |
| permeat, koniec próby | 0,00 | 5,55 | 0,0 | 0,0 | 38,4 | 0,0 |
Wzrost ilości krezolu w pojedynczych rurkach po 2 h lub 4 h wynika prawdopodobnie ze zwiększenia ilości krezolu w odbierającej fazie wodnej. W ten sposób zmniejsza się podtrzymujący permeację gradient stężenia. Jeśli to jest pożądane, to w celu przeciwsterowania można zastosować zwiększenie objętości lub częstszą wymianę permeatu.
Wynik prób 1 - 3.
Zbadana w przykładzie 1 nieporowata membrana silikonowa umożliwia selektywne wydzielanie krezolu z moczu klaczy. Estron i ekwilina są zatrzymywane ilościowo. Tym samym otrzymano zasadniczo do dyspozycji sposób zmniejszania zawartości krezolu w PMU różnego pochodzenia i w ten sposób zwiększono wydajność hormonów z kolumn adsorpcyjnych podczas następującego przerobu PMU w celu wytwarzania mieszanin sprzężonych estrogenów i zmniejszenia strat powstających podczas przemywania sprzężonych estrogenów.
P r z y k ł a d 2.
P r z y k ł a d p o r ó w n a w c z y.
Spośród pięciu zbadanych nieporowatych membran tylko silikon nadaje się do selektywnego wydzielania krezolu z moczu klaczy, przy czym estron i ekwilina były zatrzymywane ilościowo.
W pierwszych próbach obok silikonu także zbadano analogicznie do przykładu 1 (próby 1 i 2) poniższe materiały w postaci rurek: polietylen (PE), poli(chlorek winylu) (PVC), celulozę (2 próby).
Bez wchodzenia w dalsze szczegóły uzyskano dla tych materiałów następujące wyniki: dla PE i PVC nie stwierdzono żadnej dyfuzji krezolu, HPPF i estronu.
W przypadku dwóch zbadanych celulozowych rurek do dializy częściowo dyfundował tylko krezol i estron, ale nie HPMF.
Tylko rurki silikonowe umożliwiały, jak pokazał przykład 1, selektywne wydzielanie tylko krezolu.
P r z y k ł a d 3.
Próby perwaporacji (moduł z pustych włókien silikonowych).
W próbie perwaporacji z tego przykładu zastosowano urządzenie z modułem z pustych włókien silikonowych: długość 30 mm, 100 kapilar o średnicy wewnętrznej 0,005 m. Łączna powierzchnia per2 waporacji wynosiła 0,09425 m2.
Figura 2 przedstawia szkic struktury prób. Próbę wykonano w temperaturze 19°C w warunkach analogicznych do warunków przykładu 1, i próbkę pobrano po 3 h. Wyniki wydzielania krezolu z PMU za pomocą modułu z pustych włókien silikonowych przedstawiono w następującej tabeli 4.
PL 203 145 B1
T a b e l a 4. Wyniki dla przykładu 3
| estron, mg/l | ekwilina, mg/l | krezol, mg/l | HPMF, mg/l | |
| wyjściowy roztwór moczu | 13,0 | 27,4 | 770,8 | 12,5 |
| retentat po 3 h | 12,6 | 26,9 | 545,5 | 11,7 |
| permeat do 3 h | 0,0 | 0,0 | 8,9 | 0,0 |
Zastrzeżenia patentowe
Claims (5)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób wydzielania krezolu z moczu ciężarnych klaczy (PMU), znamienny tym, że zawartość krezolu w wodnym roztworze wyjściowym PMU zmniejsza się metodą perwaporacji za pomocą nieporowatej polimerycznej membrany silikonowej, przy czym krezol przenika na stronę permeatu membrany, a poddany obróbce roztwór PMU otrzymuje się jako retentat zawierający mieszaninę sprzężonych estrogenów ze zmniejszoną zawartością krezolu.
- 2. Sposób wydzielania krezolu z moczu ciężarnych klaczy (PMU) według zastrz. 1, znamienny tym, że zawartość krezolu w wyjściowym roztworze wodnym PMU zmniejsza się metodą perwaporacji, przy czym wyjściowy roztwór PMU zawierający krezol pompuje się przez rurkę silikonową służącą jako nieporowata membrana polimeryczna lub przez moduł z pustych włókien silikonowych, przy czym krezol przenika na stronę permeatu, a poddany obróbce roztwór PMU otrzymuje się jako zawierający mieszaninę sprzężonych estrogenów retentat ze zmniejszoną zawartością krezolu.
- 3. Sposób według jednego z zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, że na stronie permeatu znajduje się próżnia, faza gazowa lub ciecz permeatu odbierająca krezol.
- 4. Sposób według zastrz. 3, znamienny tym, że na stronie permeatu znajduje się ciecz permeatu, korzystnie woda i wodny roztwór etanolu.
- 5. Sposób według zastrz. 4, znamienny tym, że podczas perwaporacji odnawia się z przerwami lub w sposób ciągły ciecz permeatu odbierającą krezol.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE10048524A DE10048524A1 (de) | 2000-09-29 | 2000-09-29 | Kresolabtrennung aus Stutenharn |
| PCT/EP2001/011115 WO2002026760A2 (de) | 2000-09-29 | 2001-09-26 | Kresolabtrennung aus stutenharn |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL360596A1 PL360596A1 (pl) | 2004-09-20 |
| PL203145B1 true PL203145B1 (pl) | 2009-08-31 |
Family
ID=7658248
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL360596A PL203145B1 (pl) | 2000-09-29 | 2001-09-26 | Sposób wydzielania krezolu z moczu ciężarnych klaczy |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7220733B2 (pl) |
| EP (1) | EP1324762B1 (pl) |
| CN (1) | CN1286847C (pl) |
| AT (1) | ATE337012T1 (pl) |
| AU (2) | AU1396302A (pl) |
| CA (1) | CA2423960C (pl) |
| DE (2) | DE10048524A1 (pl) |
| ES (1) | ES2266278T3 (pl) |
| HU (1) | HU228342B1 (pl) |
| PL (1) | PL203145B1 (pl) |
| WO (1) | WO2002026760A2 (pl) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE10037389A1 (de) * | 2000-08-01 | 2002-02-14 | Solvay Pharm Gmbh | Verfahren und Vorrichtung zur Anreicherung und Stabilisierung von konjugierten Oestrogenen aus Stutenharn |
| US8349819B2 (en) | 2002-10-09 | 2013-01-08 | Dr. Reddy's Laboratories New York, Inc. | Steroid extraction process from urine sources |
| CN115974656A (zh) * | 2022-12-12 | 2023-04-18 | 南京工业大学 | 一种膜分离甲酚异构体的方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4806245A (en) * | 1986-10-14 | 1989-02-21 | Bend Research, Inc. | Pervaporation of phenols |
| US5464540A (en) * | 1993-12-09 | 1995-11-07 | Bend Research, Inc. | Pervaporation by countercurrent condensable sweep |
| HU9500322D0 (en) * | 1994-02-08 | 1995-03-28 | Solvay Deutschland | Process for separating estrogenes from the urine of mares with foal |
| HU9500323D0 (en) * | 1994-02-08 | 1995-03-28 | Solvay Deutschland | Process for separating estrogenes from urine of mares with foal |
-
2000
- 2000-09-29 DE DE10048524A patent/DE10048524A1/de not_active Withdrawn
-
2001
- 2001-09-26 AT AT01982356T patent/ATE337012T1/de active
- 2001-09-26 EP EP01982356A patent/EP1324762B1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-09-26 ES ES01982356T patent/ES2266278T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-09-26 AU AU1396302A patent/AU1396302A/xx active Pending
- 2001-09-26 HU HU0303058A patent/HU228342B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2001-09-26 CN CN01816102.2A patent/CN1286847C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-09-26 PL PL360596A patent/PL203145B1/pl unknown
- 2001-09-26 CA CA2423960A patent/CA2423960C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-09-26 AU AU2002213963A patent/AU2002213963B2/en not_active Ceased
- 2001-09-26 DE DE50110821T patent/DE50110821D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-09-26 WO PCT/EP2001/011115 patent/WO2002026760A2/de not_active Ceased
-
2003
- 2003-03-28 US US10/400,936 patent/US7220733B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US7220733B2 (en) | 2007-05-22 |
| CA2423960A1 (en) | 2003-03-28 |
| ES2266278T3 (es) | 2007-03-01 |
| AU2002213963B2 (en) | 2007-05-31 |
| AU1396302A (en) | 2002-04-08 |
| WO2002026760A2 (de) | 2002-04-04 |
| EP1324762A2 (de) | 2003-07-09 |
| HUP0303058A3 (en) | 2010-03-29 |
| PL360596A1 (pl) | 2004-09-20 |
| HUP0303058A2 (hu) | 2004-01-28 |
| CA2423960C (en) | 2010-06-08 |
| DE50110821D1 (de) | 2006-10-05 |
| US20030215953A1 (en) | 2003-11-20 |
| WO2002026760A3 (de) | 2003-03-20 |
| DE10048524A1 (de) | 2002-06-06 |
| HU228342B1 (hu) | 2013-03-28 |
| ATE337012T1 (de) | 2006-09-15 |
| EP1324762B1 (de) | 2006-08-23 |
| CN1627952A (zh) | 2005-06-15 |
| CN1286847C (zh) | 2006-11-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL203145B1 (pl) | Sposób wydzielania krezolu z moczu ciężarnych klaczy | |
| US7524833B2 (en) | Method and apparatus for concentrating and stabilizing conjugated estrogens from mare urine | |
| JP4285773B2 (ja) | 牝馬の尿からエストロゲンを取得する方法 | |
| US5723454A (en) | Method for obtaining estrogens from pregnant mare urine by solid phase extraction on a semi-polar adsorber resin | |
| JP4125788B2 (ja) | 牝馬の尿からエストロゲンを取得する方法 | |
| AU2002352161B2 (en) | Method for obtaining oestrogen from mare urine | |
| US5814624A (en) | Method for obtaining estrogens from pregnant mare urine by solid-phase extraction | |
| US20090023699A1 (en) | Method For Obtaining a Natural Mixture of Conjugated Equine Estrogens Depleted in Non-Conjugated Lipophilic Compounds | |
| US20040072812A1 (en) | Process for isolating conjugated estrogens | |
| RU2179029C2 (ru) | Способ получения эстрогенов из кобыльей мочи | |
| CN100422206C (zh) | 结合型马雌激素天然混合物的获取方法 | |
| CN1101683C (zh) | 由牝马尿获取雌激素的方法 | |
| CN1526721A (zh) | 结合态雌性激素的提取方法 | |
| AU2003301237B2 (en) | Method for extracting a natural mixture of conjugated equine estrogens that is depleted of non-conjugated lipophilic compounds | |
| TSUMURAYA et al. | Prolactin Producing Cells in Human Pituitary Adenomas Observation by Consecutive Semithin-thin Section Method | |
| 円谷勝 et al. | Prolactin Producing Cells in Human Pituitary Adenomas | |
| JPS58223404A (ja) | 高効率カラム抽出・分画法 | |
| HK1021884B (en) | Method to obtain oestrogens from mare's urine |