PL196148B1 - Application of bacteriphages - Google Patents
Application of bacteriphagesInfo
- Publication number
- PL196148B1 PL196148B1 PL356853A PL35685302A PL196148B1 PL 196148 B1 PL196148 B1 PL 196148B1 PL 356853 A PL356853 A PL 356853A PL 35685302 A PL35685302 A PL 35685302A PL 196148 B1 PL196148 B1 PL 196148B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- cells
- preparation
- mice
- effect
- rejection
- Prior art date
Links
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 claims abstract description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 14
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 claims abstract description 11
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 23
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 claims description 13
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 7
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 claims description 6
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 claims description 6
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 claims description 6
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 5
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 5
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 5
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 claims description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 5
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 claims description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 claims description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 20
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 9
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 6
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 5
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 4
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 4
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 4
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 3
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 3
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100025137 Early activation antigen CD69 Human genes 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000934374 Homo sapiens Early activation antigen CD69 Proteins 0.000 description 2
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 2
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- -1 for example Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 229910021555 Chromium Chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 108010033737 Pokeweed Mitogens Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 101000582398 Staphylococcus aureus Replication initiation protein Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- KQNZDYYTLMIZCT-KQPMLPITSA-N brefeldin A Chemical compound O[C@@H]1\C=C\C(=O)O[C@@H](C)CCC\C=C\[C@@H]2C[C@H](O)C[C@H]21 KQNZDYYTLMIZCT-KQPMLPITSA-N 0.000 description 1
- JUMGSHROWPPKFX-UHFFFAOYSA-N brefeldin-A Natural products CC1CCCC=CC2(C)CC(O)CC2(C)C(O)C=CC(=O)O1 JUMGSHROWPPKFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N chloral hydrate Chemical compound OC(O)C(Cl)(Cl)Cl RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002327 chloral hydrate Drugs 0.000 description 1
- QSWDMMVNRMROPK-UHFFFAOYSA-K chromium(3+) trichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cr+3] QSWDMMVNRMROPK-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L disodium;(2',7'-dibromo-3',6'-dioxido-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-4'-yl)mercury;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C([Hg])=C1OC1=C2C=C(Br)C([O-])=C1 BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N ionomycin Chemical compound O1[C@H](C[C@H](O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)/C=C/C[C@@H](C)C[C@@H](C)C(/O)=C/C(=O)[C@@H](C)C[C@@H](C)C[C@@H](CCC(O)=O)C)CC[C@@]1(C)[C@@H]1O[C@](C)([C@@H](C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N 0.000 description 1
- PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N ionomycin Natural products O1C(CC(O)C(C)C(O)C(C)C=CCC(C)CC(C)C(O)=CC(=O)C(C)CC(C)CC(CCC(O)=O)C)CCC1(C)C1OC(C)(C(C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- IAIWVQXQOWNYOU-FPYGCLRLSA-N nitrofural Chemical compound NC(=O)N\N=C\C1=CC=C([N+]([O-])=O)O1 IAIWVQXQOWNYOU-FPYGCLRLSA-N 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-M perchlorate Inorganic materials [O-]Cl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 102220240796 rs553605556 Human genes 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
- A01K67/0271—Chimeric vertebrates, e.g. comprising exogenous cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2795/00—Bacteriophages
- C12N2795/00011—Details
- C12N2795/10011—Details dsDNA Bacteriophages
- C12N2795/10111—Myoviridae
- C12N2795/10132—Use of virus as therapeutic agent, other than vaccine, e.g. as cytolytic agent
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Virology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
(12) OPIS PATENTOWY (19PL πυ196148 (13) B1 (21) Numer zgłoszema: 356853 (5) ) Int.Cl.(12) PATENT DESCRIPTION ( 19PL πυ 196148 (13) B1 ( 21 ) Application number: 356853 ( 5) ) Int.Cl.
C12N 7/00 (2006.01) A61P 37/06 (2006.01) (22) Data zgłoszenia: 15.11.2002 (54)C12N 7/00 (2006.01) A61P 37/06 (2006.01) (22) Date of notification: 15.11.2002 (54)
Zastosowanie bakteriofagówThe use of bacteriophages
(57) 1. Zastooownnie zczepuu akkteriofgoowggo oo wytwaraa preaaratu oo opprawinnia stnuu ddrowia pacjentów poddawanych przeszczepom, przy czym korzystnie wytwarzany preparat służy do leczenia lub zapobiegania zakażeniom bakteryjnym i/lub przedłużeniu przeżywalności przeszczepu i/lub zwalczaniu procesu odrzucania przeszczepu.(57) 1. The implantation of an acteriopathic graft has been produced by a preparation against the health of patients undergoing transplantation, the preparation preferably being used to treat or prevent bacterial infections and / or to prolong the survival of the graft and / or to combat the process of transplant rejection.
2. Zastosowanie szczepu bakteriofagowego do wytwarza preparatu do wywoływania immunosupresji, przy czym korzystnie wytwarzany preparat służy do hamowania aktywności komórek NK i/lub do hamowania produkcji immunoglobulin przez limfocyty B.2. The use of a bacteriophage strain for the production of a preparation for inducing immunosuppression, the preparation preferably being used for inhibiting the activity of NK cells and / or for inhibiting the production of immunoglobulins by B lymphocytes.
PL 196 148 B1PL 196 148 B1
Opis wynalazkuDescription of the invention
Przedmiotem wynalazku jest nowe zastosowanie bakteriofagów w medycynie.The subject of the invention is the new use of bacteriophages in medicine.
Mimo znaczącego postępu transplantologii klinicznej, odrzucanie alloprzeszczepu pozostaje nadal poważnym problemem klinicznym. Szczególnym zagrożeniem dla przeszczepu jest jego odrzucanie przewlekłe. O ile bowiem z reguły udaje się opanować incydenty odrzucania ostrego, praktycznie nie dysponujemy skutecznym leczeniem odrzucania przewlekłego, którego postęp nieuchronnie prowadzi do utraty przeszczepionego narządu (1).Despite significant progress in clinical transplantology, allograft rejection remains a serious clinical problem. Chronic rejection is a particular threat to a transplant. For while acute rejection episodes are usually managed, there is practically no effective treatment for chronic rejection, the progression of which inevitably leads to loss of the transplanted organ (1).
Poważnym problemem w transplantologii są również zakażenia, w tym bakteriami opornymi na wszelkie dostępne antybiotyki. Waga tego problemu została ostatnio podkreślona przez zorganizowanie na Światowym Kongresie Transplantologicznym (USA, sierpień 2002) oddzielnej sesji naukowej poświęconej właśnie tym zakażeniom bakteryjnym.Infections, including bacteria resistant to all available antibiotics, are also a serious problem in transplantology. The importance of this problem has recently been highlighted by the holding of a separate scientific session at the World Transplant Congress (USA, August 2002) devoted to these bacterial infections.
W kontekście narastającego problemu zakażeń bakteriami opornymi na leczenie antybiotykami obserwuje się w ostatnich latach wielki wzrost zainteresowania potencjalnym stosowaniem w tych sytuacjach bakteriofagów (wirusów niszczących bakterie). Można by zatem również rozważyć możliwość leczenia BF zakażeń u biorców przeszczepów, jednak w tej sytuacji nie powinno to wpływać niekorzystnie na losy przeszczepu (np. powodować jego nasilone odrzucanie).In the context of the growing problem of infections with bacteria resistant to antibiotic treatment, a great increase in interest in the potential use of bacteriophages (viruses destroying bacteria) in these situations has been observed in recent years. Therefore, the option of treating BF infections in transplant recipients could also be considered, but in this situation it should not adversely affect the fate of the transplant (e.g. cause its increased rejection).
Celem wynalazku jest dostarczenie środków, które mogłyby być stosowane w leczeniu lub zapobieganiu zakażeniom bakteryjnym, zwłaszcza bakteriami lekoopornymi, występującym u pacjentów poddawanych przeszczepom bez zwiększania ryzyka odrzucenia przeszczepu. Zgodnie z celem wynalazku, korzystnie środki takie powinny posiadać również właściwości immunosupresyjne. W szczególności, celem wynalazku jest dostarczenie środków, które mogłyby być stosowane do zwalczania odrzucania przeszczepów, zwłaszcza procesu ostrego i przewlekłego odrzucania alloprzeszczepu. Nieoczekiwanie okazało się, że tak określony cel może być zrealizowany za pomocą niniejszego wynalazku.An object of the invention is to provide agents that can be used in the treatment or prevention of bacterial infections, especially drug-resistant bacteria, occurring in transplant patients without increasing the risk of transplant rejection. According to the object of the invention, such agents should preferably also possess immunosuppressive properties. In particular, it is an object of the invention to provide agents that can be used to combat graft rejection, especially the process of acute and chronic allograft rejection. It has surprisingly turned out that the objective thus defined can be achieved with the present invention.
Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie bakteriofagów do przygotowywania preparatu do podawania pacjentom poddawanym przeszczepom. Korzystnie, preparat ten służy do leczenia i zapobiegania zakażeniom bakteryjnym i/lub do przedłużania przeżywalności przeszczepu i/lub do zwalczania procesu ostrego i przewlekłego odrzucania alloprzeszczepu.The present invention relates to the use of bacteriophages in the preparation of a formulation for administration to transplant patients. Preferably, the formulation is for the treatment and prevention of bacterial infections and / or for prolonging the survival of the graft and / or for combating the process of acute and chronic allograft rejection.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie bakteriofagów do wywoływania immunosupresji. Zgodnie z tym przedmiotem wynalazku, korzystnie bakteriofagi stosuje się do hamowania aktywności komórek NK i/lub do hamowania produkcji immunoglobulin przez limfocyty B.Another object of the invention is the use of bacteriophages to induce immunosuppression. According to this object of the invention, bacteriophages are preferably used to inhibit the activity of NK cells and / or to inhibit the production of immunoglobulins by B lymphocytes.
Bakteriofagi wykorzystywane zgodnie z niniejszym wynalazkiem powinny być pozbawione niekorzystnych zanieczyszczeń, takich jak przykładowo endotoksyny bakteryjne. Odpowiednie szczepy bakteryjne mogą być otrzymane na przykład metodami opisanymi w polskich zgłoszeniach patentowych dokonanych przez Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN we Wrocławiu: P. 348740 z dnia 18 lipca 2001, P 354822 z dnia 30 czerwca 2002, P. 355355 z dnia 5 sierpnia 2002 albo międzynarodowym zgłoszeniu patentowym PCT/PL02/000053 z dnia 18 lipca 2002.Bacteriophages used in the present invention should be free from unfavorable contaminants such as, for example, bacterial endotoxins. Appropriate bacterial strains can be obtained, for example, by the methods described in Polish patent applications filed by the Institute of Immunology and Experimental Therapy of the Polish Academy of Sciences in Wrocław: P. 348740 of July 18, 2001, P 354822 of June 30, 2002, P. 355355 of August 5, 2002 or the international patent application PCT / PL02 / 000053 of July 18, 2002.
Nieoczekiwanie okazało się, że preparaty bakteriofagowe, obok korzystnych właściwości antybakteryjnych nie pobudzają odpowiedzi immunologicznej, a nawet wykazują właściwości immunosupresyjne.Surprisingly, it turned out that bacteriophage preparations, apart from favorable antibacterial properties, do not stimulate the immune response and even exhibit immunosuppressive properties.
Nieoczekiwanie okazało się, czego dowodzą zaprezentowane poniżej wyniki, że bakteriofagi mogą być z powodzeniem stosowane w transplantologii klinicznej.Unexpectedly, as evidenced by the results presented below, it turned out that bacteriophages can be successfully used in clinical transplantation.
Po pierwsze, BF mogą być bezpiecznie podawane pacjentom po przeszczepach celem leczenia występujących u nich opornych na antybiotyki zakażeń bakteryjnych, ponieważ leczenie takie nie wiąże się z ryzykiem odrzucenia alloprzeszczepu.First, BF can be safely administered to transplant patients to treat their antibiotic-resistant bacterial infections, as there is no risk of allograft rejection in this treatment.
Po drugie, nieoczekiwane stwierdzono, że BF nie pobudzają odpowiedzi komórkowej i humoralnej u człowieka (a nawet mogą hamować odpowiedź humoralną) i wywierają istotne działanie immunosupresyjne. Stwarza to racjonalne przesłanki do stosowania BF jako immunosupresanta, posiadającego dodatkowo korzystne właściwości bakteriobójcze. Jednocześnie nieoczekiwanie wykazano, że powodują one znaczące wydłużenie przeżywalności przeszczepu skóry u myszy.Second, it has been surprisingly found that BF does not stimulate a cellular and humoral response in humans (and can even inhibit the humoral response) and exerts a significant immunosuppressive effect. This creates a rationale for the use of BF as an immunosuppressant, additionally having favorable bactericidal properties. At the same time, it was unexpectedly shown that they significantly prolong skin graft survival in mice.
BF mogą być zatem wykorzystywane m.in. do zwalczania procesu ostrego i przewlekłego odrzucania alloprzeszczepu. Ma to wielkie znaczenie kliniczne, zwłaszcza w przypadku odrzucania przewlekłego, gdzie, jak stwierdzono powyżej, transplantologia kliniczna nie dysponuje obecnie żadnym skutecznym środkiem leczniczym dla zwalczania tego poważnego powikłania.BF can therefore be used, among others to combat acute and chronic allograft rejection. This is of great clinical importance, especially in the case of chronic rejection, where, as stated above, clinical transplantology currently has no effective therapeutic agent to combat this serious complication.
PL 196 148 B1PL 196 148 B1
Reasumując, niniejszy wynalazek otwiera nowe perspektywy leczniczego zastosowania BF, m. in. w transplantologii klinicznej.Overall, the present invention opens up new perspectives for the therapeutic use of BF, incl. in clinical transplantology.
Opis wynalazku uzupełniono następującymi figurami:The description of the invention is supplemented by the following figures:
Na figurze 1 zaprezentowano wpływ preparatów zawierających fagi T4 na przeżywalność alloprzeszczepów skóry u myszy.Figure 1 shows the effect of T4 phage preparations on skin allograft survival in mice.
Na figurze 2 zaprezentowano wpływ preparatów zawierających fagi Pseudomonas F8 na przeżywalność alloprzeszczepów skóry u myszy.Figure 2 shows the effect of preparations containing Pseudomonas F8 phage on skin allograft survival in mice.
Na figurze 3 zaprezentowano wpływ preparatów zawierających fagi Pseudomonas F8 na przeżywalność alloprzeszczepów skóry u myszy.Figure 3 shows the effect of preparations containing Pseudomonas F8 phage on skin allograft survival in mice.
Na figurze 4 zaprezentowano wpływ fagów Pseudomonas na aktywność cytotoksyczną komórek NK.Figure 4 shows the effect of Pseudomonas phages on the cytotoxic activity of NK cells.
Na figurze 5 zaprezentowano wpływ fagów Pseudomonas na odpowiedź proliferacyjną limfocytów T indukowaną OKT3.Figure 5 shows the effect of Pseudomonas phages on the OKT3-induced T cell proliferative response.
Na figurze 6 zaprezentowano wpływ fagów Pseudomonas na odpowiedź proliferacyjną limfocytów T indukowaną PHA.Figure 6 shows the effect of Pseudomonas phages on PHA-induced T cell proliferative response.
Na figurze 7 zaprezentowano wpływ fagów Pseudomonas na syntezę in vitro przeciwciał indukowaną PWM.Figure 7 shows the effect of Pseudomonas phages on PWM-induced antibody synthesis in vitro.
Dla lepszego zrozumienia istoty wynalazku została ona zilustrowana poniższymi przykładami. Błędne byłoby jednak ograniczanie zakresu wynalazku jedynie do tych przykładowych realizacji.For a better understanding of the essence of the invention, it has been illustrated by the following examples. It would be wrong, however, to limit the scope of the invention to only these exemplary implementations.
Pr zy kł a d 1Example of a d 1
Wpływ BF na odrzucanie alloprzeszczepów skóry u myszyEffect of BF on skin allograft rejection in mice
Celem wykluczenia ewentualności niekorzystnego wpływu bakteriofagów na losy przeszczepów wykonaliśmy badania nad wpływem BF na przeżycie allogenicznych przeszczepów skóry u myszy w układzie silnej niezgodności tkankowej (H-2, myszy Balb/c i C57B1). Przeszczepy skóry wykonywano wg metody opisanej przez J. J. Mond'a (2) zmodyfikowanej przez Z. Łagodzińskiego (3). Dawcami skóry były samce szczepu C57B16, a biorcami samce szczepu Balb/c (wiek 10-12 tygodni).In order to exclude the possible adverse effect of bacteriophages on the fate of transplants, we conducted studies on the effect of BF on the survival of allogeneic skin grafts in mice in a system of strong tissue incompatibility (H-2, Balb / c and C57B1 mice). The skin grafts were performed according to the method described by J. J. Mond (2) and modified by Z. Łagodziński (3). The skin donors were males of the C57B16 strain and the recipients were males of the Balb / c strain (10-12 weeks old).
Zwierzęta usypiano 3,6% wodzianem chloralu (0,1 ml/l10 wagi ciała). Wypreparowaną skórę dawcy nakładano na uprzednio przygotowanym boku biorcy. Osuszony przeszczep stabilizowano Acutolem i nakładano na niego opatrunek. Opatrunek zdejmowano po 7 dniach i oceniano stopień reakcji odrzucania przeszczepu. Myszom biorcom przeszczepów skóry podawano BF dootrzewnowo 0,11 ml (lizaty bakteryjne S. aureus, E. Coli i Pseudomonas, wysoko oczyszczone BF Pseudomonas). Jako kontroli użyto bakterii rozbitych ultradźwiękami i w dodatkowych grupach kontrolnych 0,9% NaCl. W kolejnych seriach doświadczeń wykazano, że podawanie BF nie tylko nie skraca przeżycia przeszczepu, ale powoduje znaczące wydłużenie czasu jego przeżycia. Efekt ten był widoczny przy podawaniu BF od momentu przeszczepienia do czasu wystąpienia odrzucania (tj. przez pierwsze 7-10 dni po przeszczepieniu) (fig.1, 2), a także przy jednorazowym podaniu w dniu poprzedzającym wykonanie przeszczepu oraz w dniu przeszczepienia (fig. 3). Opóźnione podanie BF (następnego dnia po przeszczepieniu skóry) nie powodowało już tego efektu.The animals were anesthetized with 3.6% chloral hydrate (0.1 ml / 110 body weight). The prepared donor skin was placed on the previously prepared side of the recipient. The dried graft was stabilized with Acutol and a dressing was applied over it. The dressing was removed after 7 days and the degree of the graft rejection reaction was assessed. Skin graft recipient mice were administered BF intraperitoneally with 0.11 ml (bacterial lysates S. aureus, E. Coli and Pseudomonas, highly purified BF Pseudomonas). Ultrasonically disrupted bacteria were used as controls and 0.9% NaCl in additional control groups. In subsequent series of experiments, it was shown that the administration of BF not only did not shorten the survival of the graft, but also caused a significant increase in its survival time. This effect was seen with the administration of BF from the moment of transplantation to the time of rejection (i.e. the first 7-10 days after transplantation) (Figures 1, 2), and also with a single administration on the day preceding transplantation and on the day of transplantation (Fig. 3). Delayed administration of BF (the day after skin transplantation) no longer had this effect.
Wyniki te oznaczają, że BF wywierają działanie immunosupresyjne i wpływają na przedłużenie przeżycia przeszczepów allogenicznych. Sugerujemy, że mechanizm działania BF może być podobny do opisanego przez nas niedawno efektu hamowania przez BF tworzenia przerzutów nowotworowych u myszy (4). Jest prawdopodobne, że BF reagują z integrynami grupy beta 3 (które odgrywają ważną rolę we wzroście i przerzutowaniu nowotworów) i na tej drodze blokują szerzenie się nowotworu. Ostatnie badania wskazują na ważną rolę tych integryn w odrzucaniu przeszczepu. Jest zatem możliwe, że wydłużenie przeżycia przeszczepu zależy od blokowania przez BF integryn beta 3 umożliwiających atakującym limfocytom T biorcy napływ do przeszczepu i inicjację reakcji jego odrzucania.These results indicate that BF exerts an immunosuppressive effect and prolong the survival of allografts. We suggest that the mechanism of action of BF may be similar to the recently described effect of BF inhibiting the formation of neoplastic metastases in mice (4). It is likely that BF reacts with group beta 3 integrins (which play an important role in tumor growth and metastasis) and thereby block the spread of the tumor. Recent studies indicate an important role for these integrins in transplant rejection. It is therefore possible that prolongation of graft survival depends on BF blocking beta 3 integrins that allow invading recipient T cells to enter the graft and initiate rejection reactions.
Wpływ BF na odporność u człowieka in vitroEffect of BF on human immunity in vitro
Powyższe badania in vivo wykazały, że BF nie powinny stymulować niepożądanej aktywności układu odpornościowego u myszy, było zatem interesujące sprawdzenie wpływu BF na parametry odpowiedzi immunologicznej u człowieka.The above in vivo studies showed that BF should not stimulate the undesired activity of the immune system in mice, therefore it was interesting to test the influence of BF on the parameters of the immune response in humans.
Pr zy kł a d 2Example of a d 2
Badania aktywności komórek NK (Natural Killer)NK cell activity tests (Natural Killer)
Określano wpływ BF na aktywność cytotoksyczną limfocytów NK ocenianą zdolnością do zabijania komórek linii nowotworowej K562 metodę opracowano na podstawie piśmiennictwa światowego (5, 6) w skrócie: komórki mononuklearne izolowano z heparynizowanej krwi obwodowej przez rozdział na gradisolu L (Aqua Medica). Jako komórki docelowe stosowano komórki białaczki erytrocytarnej - K562.The effect of BF on the cytotoxic activity of NK lymphocytes assessed by the ability to kill cells of the K562 tumor line was determined, the method was developed on the basis of international literature (5, 6) in short: mononuclear cells were isolated from heparinized peripheral blood by separation into L gradisol (Aqua Medica). Erythrocyte leukemia cells - K562 were used as target cells.
PL 196 148 B1PL 196 148 B1
Komórki K562 płukano i zawieszono w 1 ml PBS. Następnie znakowano 1,2 μΙ DIO (3,3 dioctadecyloxacarbocyxacarbocyanine perchlorate, Sigma) - (fluorochrom, wbudowujący się w błonę komórki K562) i inkubowano 20 min. w 37°C, w atmosferze 5% CO2. Wypłukane 2 x w PBS komórki zawieszono w 1 ml RPMI z 1% FCS i doprowadzono do stężenia 1,2 min komórek/ml.K562 cells were washed and resuspended in 1 ml PBS. Then 1.2 μΙ DIO (3.3 dioctadecyloxacarbocyxacarbocyanine perchlorate, Sigma) - (fluorochrome, K562 cell membrane assembly) was labeled and incubated for 20 min. at 37 ° C, in an atmosphere of 5% CO2. 2 x PBS washed cells were resuspended in 1 ml RPMI with 1% FCS and adjusted to 1.2 min cells / ml.
Mononukleary inkubowano 4 h w 37°C,5% CO2 wraz z komórkami docelowymi K562 w stosunku 50:1 oraz 12:1 ( kontrola: MNC w RPMI 10% FCS oraz K562 w RPMI 10% FCS). Do każdej próby dodano 25 μl roztworu jodku propidyny (01Ι μ^/ml PI, Sigma). Po inkubacji akwizycję i analizę wykonano w programie Celi Quest (Becton Dickinson).Mononuclears were incubated for 4 h at 37 ° C, 5% CO2 together with K562 target cells in the ratio of 50: 1 and 12: 1 (control: MNC in RPMI 10% FCS and K562 in RPMI 10% FCS). 25 µl of propidium iodide solution (01 µl / ml PI, Sigma) was added to each sample. After incubation, the acquisition and analysis were performed in the Celi Quest program (Becton Dickinson).
Żywe komórki K562 (T) identyfikowano na podstawie intensywnej fluorescencji w paśmie zielonym (FL1). Natomiast martwe (Td) na podstawie intensywnej fluorescencji w paśmie zielonym i czerwonym (FL1, FL2). Odsetek martwych komórek docelowych K562 oceniano na podstawie wzoru: % Td = (Td / T) x 100%, natomiast lizę specyficzną komórek oceniano jako: %Td (inkubowanych z MNC) - %Td (inkubowanych bez MNC). W powyższych doświadczeniach stwierdzono zahamowanie aktywności NK przez BF Pseudomonas (fig. 4).Viable K562 (T) cells were identified by their intense green band fluorescence (FL1). However, dead (Td) based on intense fluorescence in the green and red bands (FL1, FL2). The percentage of dead K562 target cells was assessed by the formula:% Td = (Td / T) x 100%, while specific cell lysis was assessed as:% Td (incubated with MNC) -% Td (incubated without MNC). In the above experiments, inhibition of NK activity by BF Pseudomonas was found (Fig. 4).
P rz y kła d 3Example 3
Badanie wpływu BF na syntezę wewnątrzkomórkowych cytokin przez limfocyty i monocyty w hodowliStudy of the influence of BF on the synthesis of intracellular cytokines by lymphocytes and monocytes in culture
Syntezę wewnątrzkomórkowych cytokin oceniano metodą opracowaną na podstawie piśmiennictwa światowego (7, 8, 9). Komórki jednojądrzaste zawieszano w środowisku hodowlanym (na bazie płynu Parkera) w stężeniu 1 x 106 komórek/ml. Do hodowli dodawano aktywator PMA (50 ng/ml), ionomycynę (1 μg/ml) oraz brefeldinę A (1 μg/ml). Hodowlę prowadzono ok. 18 h w temperaturze 37°C i 5% CO2 (płytki 6-dołkowe firmy Nunc). Komórki zebrano z płytki, a następnie płukano w Staining Buffer [SB-PBS z dodatkiem FCS (roztwór 1%) oraz azydku sodu (0,1%)]. Komórki zawieszano w 500 μl SB. Następnie do każdej z 5 probówek dodawano po 100 μl roztworu komórek w SB. Z jednej wersji hodowlanej dokonywano 5 oznaczeń (CD69, kontrola, IL-2, IFN-γ, TNF-α). Do każdej wymienionej wersji dodawano po 15 μl CD3-PE (znakuje populację limf. T).The synthesis of intracellular cytokines was assessed using a method developed on the basis of international literature (7, 8, 9). Mononuclear cells were suspended in a culture medium (based on Parker fluid) at a concentration of 1 x 10 6 cells / ml. PMA activator (50 ng / ml), ionomycin (1 µg / ml) and brefeldin A (1 µg / ml) were added to the cultures. The cultivation was carried out for approx. 18 h at the temperature of 37 ° C and 5% CO2 (Nunc 6-well plates). Cells were harvested from the plate and then washed in Staining Buffer [SB-PBS supplemented with FCS (1% solution) and sodium azide (0.1%)]. Cells were resuspended in 500 µl SB. Then, 100 µl of the cell solution in SB was added to each of the 5 test tubes. From one culture version, 5 determinations (CD69, control, IL-2, IFN-γ, TNF-α) were performed. To each mentioned version, 15 µl of CD3-PE (marks the T cell population) was added.
Inkubowano 15 min. w temperaturze pokojowej w ciemności i odpłukiwano SB. Do peletki komórek dodawano powoli 500 μl Cytofix-utrwalacz (w zestawie PharMinger) i inkubowano 20 min. w ciemności w temperaturze pokojowej. Następnie odwirowywano, zawieszano w Perm Wash (w zestawie PharMinger) i inkubowano 10 min. w ciemności w temperaturze pokojowej. Do każdej probówki dodawano 100 μl Perm Wash, a potem odpowiedniego MoAb (CD69 - 20 μΙ, kontrola - 2 μ) IL- 2-2 μ|, IFN-γ - 2 μ( TNF-α - 2 μ). Inkubowano 30 mim. w ciemności w temperaturze pokojowej, następnie odpłukiwano Perm Wash. Do każdej probówki dodawano 500 μl 2% formaliny w PBS i dokonywano akwizycji i analizy z użyciem cytometru przepływowego FACS Calibur (Becton-Dickinson). Nie wykazano istotnego wzrostu syntezy cytokin pod wpływem BF w obu typach komórek (poziom pobudzenia wynosił 0-3%, co nie różniło się od tła).Incubated for 15 minutes. at room temperature in the dark and rinsed with SB. 500 µl of Cytofix-fixer (in PharMinger kit) was slowly added to the cell pellet and incubated for 20 min. in the dark at room temperature. It was then centrifuged, resuspended in the Perm Wash (PharMinger kit) and incubated for 10 min. in the dark at room temperature. 100 μl Perm Wash was added to each tube, followed by the appropriate MoAb (CD69 - 20 μΙ, control - 2 μ) IL-2-2 μ |, IFN-γ - 2 μ (TNF-α - 2 μ). 30 mim was incubated. in the dark at room temperature, then rinsed off the Perm Wash. 500 µl of 2% formalin in PBS was added to each tube and acquisitions and analyzes were performed using a FACS Calibur flow cytometer (Becton-Dickinson). There was no significant increase in cytokine synthesis under the influence of BF in both types of cells (the level of stimulation was 0-3%, which did not differ from the background).
P rz y kła d 4Example 4
Badanie wpływu BF na odpowiedź komórkową i humoralnąStudy of the influence of BF on the cellular and humoral response
Określono wpływ BF na proliferację limfocytów T indukowaną przez przeciwciało monoklonalne OKT3 oraz mitogen (PHA) oceniając stopień odpowiedzi w sposób standardowy z zastosowaniem znakowanej izotopowo tymidyny (10, 11). Komórki jednojądrzaste stymulowano roztworem fitohemaglutyniny (PHA, Sigma) w stężeniu 10 μg/ml lub hodowano w płytkach uprzednio opłaszczonych roztworem OKT3 (ORTHO) w stężeniu 1 μg/ml.The effect of BF on the proliferation of T lymphocytes induced by the monoclonal antibody OKT3 and mitogen (PHA) was determined by assessing the degree of response in a standard manner using radiolabelled thymidine (10, 11). Mononuclear cells were stimulated with a solution of phytohaemagglutinin (PHA, Sigma) at a concentration of 10 µg / ml or grown in plates previously coated with a solution of OKT3 (ORTHO) at a concentration of 1 µg / ml.
Hodowle prowadzono przez 3 dni w temperaturze 37°C w atmosferze 5% CO2, w środowisku hodowlanym (podłoże Parkera (Wytwórnia Surowic i Szczepionek, Lublin) uzupełnionym 10% inaktywowanej cielęcej surowicy płodowej (Sigma), roztworem 20 mM Hepesu (Sigma), 2 mM L-glutaminy (Sigma) oraz 5 x 10-5 M 2-merkaptoetanolu (Sigma).Cultures were carried out for 3 days at 37 ° C in an atmosphere of 5% CO2, in a culture medium (Parker medium (Wytwórnia Serowic i Szczepionek, Lublin) supplemented with 10% inactivated fetal calf serum (Sigma), 20 mM Hepesu (Sigma) solution, 2 mM L-glutamine (Sigma) and 5 x 10-5 M 2-mercaptoethanol (Sigma).
Syntezę DNA w dzielących się komórkach mierzono stopniem wbudowania tymidyny znakowanej trytem (Polatom), którą dodawano na 17 godzin przed końcem hodowli. Kwas nukleinowy uwolniony z komórek przenoszono przy pomocy harwestera (Skatron) na bibułę filtracyjną z włókna szklanego (LKB Wallac). Pomiar promieniowania emitowanego przez związany z DNA tryt był wykonywany w liczniku scyntylacyjnym (Microbeta plus, Wallac).DNA synthesis in dividing cells was measured by the degree of incorporation of tritium-labeled thymidine (Polatom), which was added 17 hours before the end of the culture. The nucleic acid released from the cells was transferred by a harvester (Skatron) to glass fiber filter paper (LKB Wallac). Measurement of radiation emitted by DNA bound tritium was performed in a scintillation counter (Microbeta plus, Wallac).
Nie stwierdzono znaczącego wpływu BF na tę odpowiedź (fig. 5, 6). Badając wpływ BF na odpowiedź humoralną wykazano, że BF mogą hamować produkcję immunoglobulin in vitro przez limfocyty B (fig. 7), reaktywność tę oceniano standardowo tzw. odwróconym testem łysinkowym Jernego (12).There was no significant influence of BF on this response (Figs. 5, 6). By examining the effect of BF on the humoral response, it was shown that BF can inhibit the production of immunoglobulins in vitro by B lymphocytes (Fig. 7). Jerne's inverted plaque test (12).
PL 196 148 B1PL 196 148 B1
Komórki jednojądrzaste aktywowano mitogenem szkarłatki (10 pg/ml) (PWM, Sigma) w środowisku hodowlanym RPMI (Wytwórnia Surowic i Szczepionek, Lublin) uzupełnionym 10% pulowanej surowicy ludzkiej pochodzącej od co najmniej 25 dawców, 20 mM Hepesu i 2 mM L-glutaminy (Sigma) orazMononuclear cells were activated with pokeweed mitogen (10 pg / ml) (PWM, Sigma) in RPMI culture medium (Wytwórnia Serowic i Szczepionek, Lublin) supplemented with 10% pooled human serum from at least 25 donors, 20 mM Hepes and 2 mM L-glutamine (Sigma) and
2-merkaptoetanolu (5 x 10 - 5M) (Sigma). Komórki inkubowano w stężeniu 105 komórek/0,2ml/oczko w 37°C w atmosferze 5% CO2 przez siedem dni.2-mercaptoethanol (5 x 10 - 5M) (Sigma). Cells were incubated at a concentration of 105 cells / 0.2ml / mesh at 37 ° C in an atmosphere of 5% CO2 for seven days.
Erytrocyty barana (SRBC - sheep red blood cells) inkubowano przez 60 minut w łaźni wodnej w temperaturze 37°C w roztworze 0,9% soli fizjologicznej uzupełnionym 0,5 mg/ml białka A Staphylococcus aureus (SpA, Sigma), 55 pg/ml chlorku chromu (Polskie Odczynniki Chemiczne) w 0,9% roztworze soli fizjologicznej. Opłaszczone białkiem A erytrocyty płukano dwukrotnie PBS i przygotowywano 30% zawiesinę komórek w środowisku hodowlanym RPMI 1640 (Wytwórnia Surowic i Szczepionek, Lublin).Ram sheep red blood cells (SRBC) were incubated for 60 minutes in a water bath at 37 ° C in 0.9% saline supplemented with 0.5 mg / ml Staphylococcus aureus protein A (SpA, Sigma), 55 pg / ml of chromium chloride (Polish Chemical Reagents) in 0.9% saline solution. The erythrocytes coated with protein A were washed twice with PBS and a 30% suspension of cells was prepared in RPMI 1640 culture medium (Wytwórnia Surowic i Szczepionek, Lublin).
Na płytki Petriego o średnicy 40 mm wylewano 1% roztwór agarozy (Serva) w płynie Hanksa (Wytwórnia Surowic i Szczepionek, Lublin), a następnie aktywowane komórki jednojądrzaste zawieszone w 0,08% roztworze agarozy niskotopliwej (Seaplaque, Serva) łączono z 30% zawiesiną erytrocytów barana opłaszczonych białkiem A oraz roztworem (1:20) króliczych przeciwciał przeciwko ludzkim immunoglobulinom (Dako).1% agarose solution (Serva) in Hanks liquid (Wytwórnia Surowic i Szczepionek, Lublin) was poured onto Petri dishes with a diameter of 40 mm, and then activated mononuclear cells suspended in a 0.08% low-melting agarose solution (Seaplaque, Serva) were combined with 30% a suspension of ram erythrocytes coated with protein A and a solution (1:20) of rabbit antibodies against human immunoglobulins (Dako).
Płytki inkubowano przez 60 minut w temperaturze 37°C w atmosferze 5% CO2, a następnie dodawano rozcieńczony 1:10 dopełniacz świnki morskiej (Biomed), który uprzednio absorbowano w proporcji 1:1 erytrocytami barana inkubowano 90 minut w temperaturze 370, w atmosferze 5% CO2. Następnie z płytek Petriego usuwano nadsącz i liczono obszary powstałej hemolizy („łysinki”). Liczbę uzyskanych „łysinek” przeliczano na 105 komórek jednojądrzastych.Plates were incubated for 60 minutes at 37 ° C in 5% CO2, then 1:10 diluted guinea pig complement (Biomed) was added, which had been previously absorbed 1: 1 with ram erythrocytes, incubated 90 minutes at 370, 5% atmosphere. % CO2. The supernatant was then removed from the Petri dishes and the areas of hemolysis formed ("plaques") were counted. The number of "plaques" obtained was converted into 10 5 mononuclear cells.
Piśmiennictwo:Literature:
1. Gourishankar S, Halloran P. Late deterioration of organ transplants: problems in injury and homeostasis. Curr. Opin. Immunol. 2002, 14,5761. Gourishankar S, Halloran P. Late deterioration of organ transplants: problems in injury and homeostasis. Curr. Opin. Immunol. 2002, 14,576
2. Mond J. J., Brunswick M.: Assays for B cell function. In vitro antibody production. In: Cologan J. E., Kruisbcek A. M., Margulies D. H., Shevach E. M., Strober W., eds. Current protocols in immunology. New York: Wiley, 1992: Ch 7, 12. Mond J. J., Brunswick M .: Assays for B cell function. In vitro antibody production. In: Cologan J. E., Kruisbcek A. M., Margulies D. H., Shevach E. M., Strober W., eds. Current protocols in immunology. New York: Wiley, 1992: Ch 7, 1
3. Łagodziński A., Górski A., Wąsik M.: Immunosuppressive action of low-dose heparin. Effect on skin allograft survival. Transplantation, 1990, 50,4: 7143. Łagodziński A., Górski A., Wąsik M .: Immunosuppressive action of low-dose heparin. Effect on skin allograft survival. Transplantation, 1990, 50.4: 714
4. Górski A., Dąbrowska K., Wietrzyk J., et al.: Bacteriophage inhibits metastasis in mouse transplantable model” doniesienie prezentowane na konferencji American Association for Cancer Research „Proteases, Extracellular Matrix and Cancer” 9-13. 10. 02 The Westin Resort, Hilton Head Island, South Carolina, USA4. Górski A., Dąbrowska K., Wietrzyk J., et al .: Bacteriophage inhibits metastasis in mouse transplantable model ”report presented at the American Association for Cancer Research conference“ Proteases, Extracellular Matrix and Cancer ”9-13. 10. 02 The Westin Resort, Hilton Head Island, South Carolina, USA
5. Johann Sabine, Gunther Bliimel, Martin Lipp, Reinhold Fórster, A versatile flow cytometrybased assay for the determination of short and long-term natural killer cell activity, J. Immunol. Meth., 1995, 185: 2095. Johann Sabine, Gunther Bliimel, Martin Lipp, Reinhold Fórster, A versatile flow cytometrybased assay for the determination of short and long-term natural killer cell activity, J. Immunol. Meth., 1995, 185: 209
6. Kimberly L. Kane, Faith A. Ashton, John L. Schmitz, James D. Folds, Determination of Natural Killer Cell Function by Flow Cytometry, Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology, 1996, Vol. 3: 2956. Kimberly L. Kane, Faith A. Ashton, John L. Schmitz, James D. Folds, Determination of Natural Killer Cell Function by Flow Cytometry, Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology, 1996, Vol. 3: 295
7. Gagro Alenka, Rabatić Sabina, Bendelja Kreśimir, Jelacić Jasenka, Gotovac Katja et al, Detection of intracellular cytokines by flow cytometry, Central-European Journal of Immunology 1999, 24:1257. Gagro Alenka, Rabatić Sabina, Bendelja Kreśimir, Jelacić Jasenka, Gotovac Katja et al, Detection of intracellular cytokines by flow cytometry, Central-European Journal of Immunology 1999, 24: 125
8. Carrock Sewell W. A., North Margaret, Webster A., David B., Farrant John, Determination of intracellular cytokines by flow-cytometry following whole-blood culture, Journal of Immunological Methods 1997, 209: 678. Carrock Sewell W. A., North Margaret, Webster A., David B., Farrant John, Determination of intracellular cytokines by flow-cytometry following whole-blood culture, Journal of Immunological Methods 1997, 209: 67
9. O'Mahony L., Holland J., Jackson J., Feighery C., Hennessy T. P. J., Mealy K., Quantitative intracellular cytokine measurement: age-related changes in proinflammatory cytokine production, Clin. Exp. Immunol. 1998,113: 2139. O'Mahony L., Holland J., Jackson J., Feighery C., Hennessy T. P. J., Mealy K., Quantitative intracellular cytokine measurement: age-related changes in proinflammatory cytokine production, Clin. Exp. Immunol. 1998, 113: 213
10. A Górski, V. Castronovo, B. Stępień-Sopniewska, et al.: Depressed Immune Surveillance Against Cancer: Role of Deficient T Cell: Extracellular Matrix Interactions, Cell Adhesion and Communication, 1994, 2: 22510. A Górski, V. Castronovo, B. Stępień-Sopniewska, et al .: Depressed Immune Surveillance Against Cancer: Role of Deficient T Cell: Extracellular Matrix Interactions, Cell Adhesion and Communication, 1994, 2: 225
11. M. Wąsik, B. Stępień-Sopniewska, Z. Łagodziński, A. Górski: „Effects of FK-506 and cyclosporine on human T and B lymphoprolifarative responses” Immunophannacology, 20 (1990) 5711. M. Wąsik, B. Stępień-Sopniewska, Z. Łagodziński, A. Górski: "Effects of FK-506 and cyclosporine on human T and B lymphoprolifarative responses" Immunophannacology, 20 (1990) 57
12. A. Górski, M. Wąsik, B. Stępień-Sopniewska, T. Glapiński: „Heparin and platelet interactions influence alloantihen-induced proliferative responses of human T lymphocytes and immunoglobulin synthesis in vitro Immunology Letters, 28 (1991): 16112. A. Górski, M. Wąsik, B. Stępień-Sopniewska, T. Glapiński: "Heparin and platelet interactions influence alloantihen-induced proliferative responses of human T lymphocytes and immunoglobulin synthesis in vitro Immunology Letters, 28 (1991): 161
PL 196 148 B1PL 196 148 B1
Claims (2)
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL356853A PL196148B1 (en) | 2002-11-15 | 2002-11-15 | Application of bacteriphages |
| PCT/PL2003/000122 WO2004045630A1 (en) | 2002-11-15 | 2003-11-15 | An application of bacteriophages in transplantation |
| AU2003286983A AU2003286983A1 (en) | 2002-11-15 | 2003-11-15 | An application of bacteriophages in transplantation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL356853A PL196148B1 (en) | 2002-11-15 | 2002-11-15 | Application of bacteriphages |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL356853A1 PL356853A1 (en) | 2004-05-17 |
| PL196148B1 true PL196148B1 (en) | 2007-12-31 |
Family
ID=32322589
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL356853A PL196148B1 (en) | 2002-11-15 | 2002-11-15 | Application of bacteriphages |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| AU (1) | AU2003286983A1 (en) |
| PL (1) | PL196148B1 (en) |
| WO (1) | WO2004045630A1 (en) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110563815B (en) * | 2019-08-06 | 2022-04-08 | 天津科技大学 | Pseudomonas aeruginosa bacteriophage K8 putative protein GP075, and mutant strain, mutant protein and application thereof |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5620960A (en) * | 1994-08-15 | 1997-04-15 | Uop | Use of D-allose as an immunosuppressive agent |
| DE19828596A1 (en) * | 1997-06-26 | 1999-02-11 | A Daniela Dr Nodar | Use of polyvalent bacteriophages |
-
2002
- 2002-11-15 PL PL356853A patent/PL196148B1/en unknown
-
2003
- 2003-11-15 AU AU2003286983A patent/AU2003286983A1/en not_active Abandoned
- 2003-11-15 WO PCT/PL2003/000122 patent/WO2004045630A1/en not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU2003286983A1 (en) | 2004-06-15 |
| PL356853A1 (en) | 2004-05-17 |
| WO2004045630A1 (en) | 2004-06-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Alvarez-Jiménez et al. | Extracellular vesicles released from Mycobacterium tuberculosis-infected neutrophils promote macrophage autophagy and decrease intracellular mycobacterial survival | |
| DE102009040716B4 (en) | Use of CD154 for the identification and separation of non-regulatory T cells from a mixture with regulatory T cells | |
| US10821178B2 (en) | Methods of treating biofilm infections comprising administering inhibitors of myeloid-derived suppressor cells | |
| Weidt et al. | Stem cell migration: a quintessential stepping stone to successful therapy | |
| US20240197848A1 (en) | Therapeutic vaccine for treatment of diabetes type 1 in children, application of the cell sorter and the method of multiplying treg cells to produce therapeutic vaccine for treatment of diabetes type 1 | |
| Zeis et al. | Allogeneic MHC‐mismatched activated natural killer cells administered after bone marrow transplantation provide a strong graft‐versus‐leukaemia effect in mice | |
| Arnold et al. | Analysis of innate defences against Plasmodium falciparum in immunodeficient mice | |
| Martens et al. | CD3xCD19 DART molecule treatment induces non-apoptotic killing and is efficient against high-risk chemotherapy and venetoclax-resistant chronic lymphocytic leukemia cells | |
| Rios et al. | Poly-2-vinylpyridine N-oxide reverses the immunosuppressive effects of silica and carrageenan | |
| Ottonello et al. | Nonleukoreduced red blood cell transfusion induces a sustained inhibition of neutrophil chemotaxis by stimulating in vivo production of transforming growth factor‐β1 by neutrophils: role of the immunoglobulinlike transcript 1, sFasL, and sHLA‐I | |
| JP2018516881A (en) | NK cells and antibodies for cancer treatment | |
| JP2014520115A (en) | Methods for treating or preventing graft-versus-host disease | |
| US11072779B2 (en) | Method for ex vivo expansion of regulatory T cells | |
| PL196148B1 (en) | Application of bacteriphages | |
| US20210348126A1 (en) | Method for ex vivo expansion of regulatory t cells | |
| Cleary et al. | Activated macrophages demonstrate direct cytotoxicity, antibody-dependent cellular cytotoxicity, and enhanced binding of Naegleria fowleri amoebae | |
| Moreno-Cortes et al. | ICOS and OX40 tandem co-stimulation enhances CAR T-cell cytotoxicity and promotes T-cell persistence phenotype | |
| Ellison et al. | Depletion of natural killer cells from the graft reduces interferon-γ levels and lipopolysaccharide-induced tumor necrosis factor-α release in F1 hybrid mice with acute graft-versus-host disease1 | |
| Bork et al. | Release of the pre-assembled naRNA-LL37 composite DAMP re-defines neutrophil extracellular traps (NETs) as intentional DAMP webs | |
| Wecke et al. | Inhibition of the bacteriolytic effect of β‐lactam‐antibiotics on Staphylococcus aureus by the polyanionic drugs suramin and Evans Blue | |
| CN108486054B (en) | Method for in vitro amplification of I-type natural cytotoxic lymphocyte ILC1/NK | |
| CN117980470A (en) | Therapeutic NK cell populations | |
| BEHELAK et al. | CELLS INVOLVED IN CELL-MEDIATED AND TRANSPLANTATION IMMUNITY IN THE RABBIT: VIII. THE KILLER CELL ACTIVITY OF THE LYMPHOCYTES IN THE GASTROINTESTINE-ASSOCIATED LYMPHOID ORGANS OF THE NORMAL UNSENSITIZED ADULT RABBIT | |
| Zapf | The interplay of HIF-1α and LC3-II controls Histoplasma capsulatum survival in human macrophages | |
| Hazeldine et al. | Immunesenescence and Compromised Removal of Senescent Cells: Implications for Health in Old Age |