PL183041B1 - Sposób testowania jakości kolumn chromatograficznych - Google Patents
Sposób testowania jakości kolumn chromatograficznychInfo
- Publication number
- PL183041B1 PL183041B1 PL97319774A PL31977497A PL183041B1 PL 183041 B1 PL183041 B1 PL 183041B1 PL 97319774 A PL97319774 A PL 97319774A PL 31977497 A PL31977497 A PL 31977497A PL 183041 B1 PL183041 B1 PL 183041B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- quality
- column
- chromatographic columns
- test substance
- peak
- Prior art date
Links
Landscapes
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Sposób testowania jakości kolumn chromatograficznych w wysokosprawnej chromatografii cieczowej, zwłaszcza w układzie faz odwróconych, polegający na wstrzyknięciu próbki substancji testowej i dokonaniu obliczeń parametrów charakterystycznych dla oceny jakości kolumny na podstawie chromatogramu, znamienny tym, że jako substancję testową stosuje się 2-bromo-2-nitropropan-1,3-diol.
Description
Przedmiotem wynalazku jest sposób testowania jakości kolumn chromatograficznych w wysokosprawnej chromatografii cieczowej, zwłaszcza w układzie faz odwróconych.
Wysokosprawna chromatografia cieczowa jest jedną z najbardziej rozpowszechnionych technik analitycznych umożliwiających jakościowe i ilościowe oznaczenie różnych substancji chemicznych, zwłaszcza do analizy biomedycznej, farmakologicznej czy farmaceutycznej, gdzie techniką tą wykonuje się ponad 80% wszystkich analiz. Stało się to możliwe dzięki wprowadzeniu na rynek coraz to nowszych i doskonalszych wypełnień i kolumn chromatograficznych.
W kolumnie chromatograficznej przebiegają procesy związane z termodynamicznym rozdzieleniem stref na adsorbencie stanowiącym złoże (wypełnienie) o modyfikowanej powierzchni. Modyfikacja odbywa się poprzez wytwarzanie trwałego kowalencyjnego wiązania i blokowanie aktywnych centrów, jakimi są powierzchniowo dostępne silanole. Niezablokowane silanole oraz utworzone ligandy stanowią aktywne centra umożliwiające przebieg oddziaływań specyficznych i niespecyficznych pomiędzy fazą ruchomą, powierzchnią wypełnienia a analitem.
Chromatografia cieczowa w układzie odwróconych faz realizowana jest w warunkach hydroorganicznych z dużym udziałem wody jako składnika podstawowego fazy ruchomej oraz organicznego modyfikatora np. metanolu, tetrahydrofuranu, acetonitrylu. Przed wykonaniem analizy konieczna jest ocena jakości kolumny w celu stwierdzenia, czy może być ona użyta bez ryzyka zniekształcenia wyników. Jakość kolumny określa się za pomocą wyznaczenia symetrii piku (fAS) i ilości półek teoretycznych (NT). Przeprowadzany test powinien umożliwiać ocenę kolumny zarówno z pozytywnej jak i negatywnej strony. Tzw. „dobra kolumna” (Knox, Bristow - Chromatographia vol. 10, 1987, Buszewski- Wiadomości Chemiczne 1986, 40, 369) powinna charakteryzować się tym, że miara retencji wyrażona przez współczynnik pojemnościowy (k') powinna mieścić się w granicy 1-10 przy liczbie półek teoretycznych (Nt) dla złoża o dp = 5 pm powyżej 5000/10 cm i współczynniku asymetrii fAS = 0,9-1,25. Substancja testowa nie powinna reagować z fazą ruchomą ani z fazą stacjonarna. powinna szybko reagować na reakcję detektora (najlepiej UV) a współczynnik pojemnościowy (k') powinien mieścić się w granicy 1-5.
Znany jest szereg substancji testowych selektywnych zwłaszcza wobec grup funkcyjnych oraz warunków detekcji. Znana jest z publikacji Chromatographia vol. 18, 1984 trójskładnikowa mieszanina testująca składająca się z diazepamu, difenhydraminy i 5-(pmetylfenyl)-5-fenylhydantoiny (MPPH). Każdy ze składników tej mieszaniny ma spełniać inny cel, mianowicie difenhydramina oddziaływuje z wolnymi niezablokowanymi silanolami (efekt asymetrii piku) a sprawność półkowa i rozdzielczość (różnica retencji między dwoma pikami) są oznaczane na difenhydraminie i MPPH.
Z publikacji Journal of Chromatographic Science vol. 27, 1989 znane jest stosowanie substancji o charakterze zasadowym, gdzie za niekorzystne uznaje się nadwyżki atomów metali wbudowanych jako heteroatomy w strukturę krzemionki. Oddziaływania te śledzi się na
183 041 przykładzie teobrominy, teofiliny, kofeiny, fenolu, prokainamidu, N-acetyloprokainamidu i alkoholu benzylowego.
Buszewski i inni w Chromatography 360, 1986, 241-246 proponują toluen, lutydynę i pirydynę jako mieszankę testującą jakość wypełnienia kolumn w układzie faz normalnych. Badają oni ogonowanie pików oraz ich szerokość w funkcji stężenia silanoli.
Wszystkie ze znanych testów charakteryzują się istotnymi niedogodnościami a przede wszystkim koniecznością stosowania wieloskładnikowych mieszanin, za pomocą których wyznacza się parametry charakterystyczne dla kolumny.
Sposób według wynalazku polega na tym, że jako substancję testującą jakość kolumn chromatograficznych w wysokosprawnej chromatografii cieczowej, zwłaszcza w układzie faz odwróconych, stosuje się 2-bromo-2-nitropropan-1,3-diol. Substancja ta w warunkach hydroorganicznych lub zbliżonych do czysto wodnych bądź w czysto wodnych, podczas testowania kolumn chromatograficznych daje dla dobrej kolumny (k' = 1-10 przy NT powyżej 5000/10 cm) symetryczny pik, którego schodząca do wschodzącej równa jest 1. Wartość ta odpowiada idealnemu kształtowi krzywej rozkładu Gaussa.
Otrzymany sposobem według wynalazku pik 2-bromo-2-nitropropan-1,3-diolu stanowi podstawę do szybkiego i prostego wyznaczenia współczynnika asymetrii i ilości półek teoretycznych. Obliczeń dokonuje się przy pomocy integratora lub współpracującego komputera.
Sposobem według wynalazku można ocenić zarówno kolumnę nową jak też w trakcie jej pracy. Ponadto sposób według wynalazku może być stosowany w procesie regeneracji kolumny w celu oceny, czy kolumna spełnia warunki do podjęcia na niej oznaczeń analitycznych.
Przykład. Testowano kolumnę firmy Supelco do faz odwróconych CuDB o numerze 088140AK.
Warunki oznaczenia:
- substancja testowa: 2-bromo-2-nitropropan-1,3-diol
- stężenie próbki: 5 mg/100 ml
- objętość wstrzykiwanej próbki: 0,02 ml
- faza ruchoma: woda
- przepływ: 1 m//min
-detekcja: 210nm.
Testowano kolumnę nową oraz kolumnę po 120, 150, 200 i 220 nastrzykach.
Test przeprowadzono na kolumnie przemytej wodą.
Współczynnik pojemnościowy k’ obliczano ze wzoru:
U gdzie tR - czas retencji badanej próbki t0 - czas retencji rozpuszczalnika
Ilość półek teoretycznych NT obliczano ze wzoru:
(¾) gdzie W1/- szerokość piku w połowie jego wysokości (w sekundach)
Współczynnik asymetrii fAS obliczano według wzoru:
f =Jas b gdzie a - odległość schodzącej piku od jego wysokości mierzona na wysokości 10% od podstawy piku b - odległość wschodzącej piku od jego wysokości mierzona na wysokości 10%o od podstawy piku
Uzyskane wyniki przedstawiono w poniższej tabeli.
183 041
Tabela
| Ilość nastrzyków | k' | Nt | Fas |
| Nowa kolumna | 6,52 | 8520,5 | 1,091 |
| 120 | 5,50 | 6793,5 | 1,100 |
| 150 | 5,36 | 4167,03 | 1,370 |
| 200 | 3,64 | 3341,17 | 3,674 |
| 220 | 3,39 | 2460,74 | 5,215 |
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 50 egz.
Cena 2,00 zł.
Claims (1)
- Zastrzeżenie patentoweSposób testowania jakości kolumn chromatograficznych w wysokosprawnej chromatografii cieczowej, zwłaszcza w układzie faz odwróconych, polegający na wstrzyknięciu próbki substancji testowej i dokonaniu obliczeń parametrów charakterystycznych dla oceny jakości kolumny na podstawie chromatogramu, znamienny tym, że jako substancję testową stosuje się 2-bromo-2-nitropropan-1,3-diol.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL97319774A PL183041B1 (pl) | 1997-04-30 | 1997-04-30 | Sposób testowania jakości kolumn chromatograficznych |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL97319774A PL183041B1 (pl) | 1997-04-30 | 1997-04-30 | Sposób testowania jakości kolumn chromatograficznych |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL319774A1 PL319774A1 (en) | 1998-11-09 |
| PL183041B1 true PL183041B1 (pl) | 2002-05-31 |
Family
ID=20069785
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL97319774A PL183041B1 (pl) | 1997-04-30 | 1997-04-30 | Sposób testowania jakości kolumn chromatograficznych |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL183041B1 (pl) |
-
1997
- 1997-04-30 PL PL97319774A patent/PL183041B1/pl not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL319774A1 (en) | 1998-11-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wiczling et al. | Determination of p K a by pH Gradient Reversed-Phase HPLC | |
| Fornstedt et al. | A closer study of chiral retention mechanisms | |
| Lu et al. | Study on the mechanism of chiral recognition with molecularly imprinted polymers | |
| Dorsey et al. | Hydrophobicity estimations by reversed-phase liquid chromatography: Implications for biological partitioning processes | |
| Tanaka et al. | Estimation of binding constants by capillary electrophoresis | |
| Karkare et al. | Determination of the air− water interfacial area in wet “unsaturated” porous media | |
| Kim et al. | Comparison of the thermodynamic properties of particulate and monolithic columns of molecularly imprinted copolymers | |
| Moein et al. | Molecularly imprinted polymer cartridges coupled on-line with high performance liquid chromatography for simple and rapid analysis of human insulin in plasma and pharmaceutical formulations | |
| Sander et al. | A new standard reference material for column evaluation in reversed‐phase liquid chromatography | |
| Romdhane et al. | Polymer‐solvent diffusion and equilibrium parameters by inverse gas‐liquid chromatography | |
| Yan et al. | Rapid and selective screening of melamine in bovine milk using molecularly imprinted matrix solid-phase dispersion coupled with liquid chromatography-ultraviolet detection | |
| Lendero et al. | Simple method for determining the amount of ion-exchange groups on chromatographic supports | |
| Lu et al. | Molecular recognition through the exact placement of functional groups on non-covalent molecularly imprinted polymers | |
| Galea et al. | Method optimization for drug impurity profiling in supercritical fluid chromatography: application to a pharmaceutical mixture | |
| Katz et al. | AlphaLogD determination: An optimized reversed-phase liquid chromatography method to measure lipophilicity on neutral and basic small and Beyond-Rule-of-Five compounds | |
| Jumde et al. | Review on development of analytical method and validation by reverse phase–high performance liquid chromatography | |
| Cortés et al. | Solute–solvent interactions in hydrophilic interaction liquid chromatography: characterization of the retention in a silica column by the Abraham linear free energy relationship model | |
| Courtois et al. | Interactions of bupivacaine with a molecularly imprinted polymer in a monolithic format studied by NMR | |
| Nasal et al. | Progress in the use of HPLC for evaluation of lipophilicity | |
| Andrzejewska et al. | Theoretical study of the accuracy of the pulse method, frontal analysis, and frontal analysis by characteristic points for the determination of single component adsorption isotherms | |
| Sun et al. | Dummy molecularly imprinted polymer nanochannel sensor for ultrasensitive detection of aniline compounds | |
| PL183041B1 (pl) | Sposób testowania jakości kolumn chromatograficznych | |
| Lunn et al. | Retention and effective diffusion of model metabolites on porous graphitic carbon | |
| Waite et al. | Temperature-jump investigation of sorption/desorption kinetics at reversed-phase chromatographic silica/solution interfaces | |
| McCalley | Practical examination of flow rate effects and influence of the stationary phase water layer on peak shape and retention in hydrophilic interaction liquid chromatography |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20060430 |