PL167997B1

PL167997B1 - Method of obtaining the mixture of anhydrous hexitoles exhibiting osmotherapeutic properties and method of quantitatively determining the content of individual components of such mixture

Info

Publication number: PL167997B1
Application number: PL29366392A
Authority: PL
Inventors: Andrzej Wisniewski; Eugenia Skorupowa; Janusz Madaj; Janusz Sokolowski; Stanislaw Janicki; Anna Halkiewicz; Izabela Barteczko; Roman Kaliszan; Jacek Petrusewicz; Barbara Damasiewicz; Stanislaw Duchnowski
Original assignee: Akad Medyczna; Przed Przemyslowe Terpol; Univ Gdanski
Priority date: 1992-02-28
Filing date: 1992-02-28
Publication date: 1995-12-30
Also published as: PL293663A1

Abstract

Sposób otrzymywania mieszaniny anhydroheksitoli mającej właściwości osmoterapeutyczne, znamienny tym, że umieszczone w szczelnie zamkniętym ciśnieniowym naczyniu technologicznym, zwłaszcza w autoklawie 30 części wagowych krystalicznego D-mannitolu i 100 części wagowych 10%o wodnego roztworu kwasu siarkowego ogrzewa się w temperaturze 190°C±5°C przez czas od 18 do 22 godzin, najkorzystniej 20 godzin, po upływie którego naczynie technologiczne ochładza się w warunkach naturalnych do temperatury otoczenia, po czym otwiera się i jeżeli roztwór nie jest klarowny poddaje się go przesączeniu, a następnie zobojętnia się go przepuszczając przez kolumnę jonowymienną, wypełnioną świeżo zaktywowanym anionitem, uzyskując eluat o wartości pH w granicach 6,5-6,9, po czym eluat zadaje się porcją od dwu do trzech części wagowych sproszkowanego węgla aktywnego i całość ogrzewa w otwartym naczyniu technologicznym do temperatury nie wyższej niż 60°C i przetrzymuje w tej temperaturze przez czas od 5 minut do 15 minut, najkorzystniej 10 minut i następnie po naturalnym ochłodzeniu do temperatury otoczenia oddziela się z mieszaniny węgiel aktywowany na gęstych (twardych) sączkach bibułowych pod obniżonym ciśnieniem, zwłaszcza na pompce wodnej i ostatecznie również pod zmniejszonym ciśnieniem, korzystnie na pompce wodnej usuwa zeń wodę w temperaturze od 50°C do 60°C.The method of obtaining the mixture of anhydrohexitol having osmotherapeutic properties, characterized in that it is placed in a sealed pressure processing vessel, especially in an autoclave 30 parts by weight of crystalline D-mannitol and 100 parts 10% by weight of aqueous sulfuric acid solution is heated to 190 ° C ± 5 ° C for a period of 18 to 22 hours, most preferably 20 hours, after which the processing vessel naturally cooled to ambient temperature, then opens and if the solution is not clear it is filtered and then neutralized by passing through an ion exchange column filled with freshly activated anion exchanger, obtaining an eluate with a pH value within the range of 6.5-6.9, and then the eluate is mixed with a portion from two to three parts by weight of powdered activated carbon and heated in an open vessel technological up to a temperature of not more than 60 ° C and stored at this temperature for from 5 minutes to 15 minutes, most preferably 10 minutes, and then after natural cooling to ambient temperature, activated carbon is separated from the mixture into dense (hard) filter papers under reduced pressure, especially on a water pump and finally also under reduced pressure, preferably using a water pump to remove water therefrom temperature from 50 ° C to 60 ° C.

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania mieszaniny anhydroheksitoli mającej właściwości osmoterapeutyczne.The subject of the invention is a method for the preparation of an anhydrohexitol mixture having osmotherapeutic properties.

Wynalazek dotyczy również sposobu otrzymywania roztworu do wlewu dożylnego z przeznaczeniem do osmoterapii. Spośród roztworów do wlewu dożylnego używanych w osmoterapii, największe zastosowanie znajdują roztwory D-mannitolu. Podane drogą wlewu kroplowego bardzo szybko rozmieszczają się w przestrzeni zewnątrzkomórkowej, zwiększając jej ciśnienie osmotyczne, co powoduje przesunięcie wody z komórek i tkanek, a tym samym ich odwodnienie.The invention also relates to a method of preparing an intravenous infusion solution for osmotherapy. Among the solutions for intravenous infusion used in osmotherapy, D-mannitol solutions are the most used. Given by drip infusion, they very quickly distribute in the extracellular space, increasing its osmotic pressure, which causes the displacement of water from cells and tissues, and thus their dehydration.

Roztwory D-mannitolu służą wyłącznie jako osmotyczny środek moczopędny ze względu na nieprzyswajalność tej substancji po podaniu pozajelitowym. Stwierdzono, że D-mannitol jest zale_dwie w 5% metabolizowany w wątrobie do glikogenu, reszta zaś jest wydalana z moczem w formie niezmienionej.D-mannitol solutions only serve as an osmotic diuretic due to the non-digestibility of the substance after parenteral administration. It has been found that D-mannitol is metabolised only to 5% in the liver to glycogen, the rest is excreted unchanged in the urine.

Wdecznictwie szpitalnym znajdują zastosowanie 10, 15, 20 i 25% roztwory D-mannitolu z przeznaczeniem do usuwania obrzęków pochodzenia nerkowego, sercowego, wątrobowego a także nowotworowego. Stosuje się je również w celu zmniejszenia podwyższonego ciśnienia śródczaszkowego i obrzęku mózgu o różnej etiologii, a także w celu zmniejszenia podwyższonego ciśnienia śródgałkowego, na przykład w ostrych napadach jaskry.In hospital use, 10, 15, 20 and 25% D-mannitol solutions are used to remove edema of renal, cardiac, hepatic and neoplastic origin. They are also used to reduce elevated intracranial pressure and cerebral edema of various etiologies, as well as to reduce elevated intraocular pressure, for example in acute attacks of glaucoma.

Z uwagi, na ograniczoną rozpuszczalność D-mannitolu w wodzie (1g rozpuszcza się w 5,5 ml wody o temperaturze pokojowej) dla celów leczniczych można uzyskać jedynie roztwory o maksymalnym stężeniu 25%. Są to jednak roztwory przesycone, co powoduje, że w okresie przechowywania nie tylko w 25%, ale również 20% a nawet 15% roztworach wytrąca się krystaliczny osad D-mannitolu. Powoduje to, że takie roztwory nie mogą być podane chorym. Wymagają ogrzewania na łaźni wodnej aż do całkowitego rozpuszczenia kryształów, a następnie ochłodzenia do temperatury ciała ludzkiego.Due to the limited solubility of D-mannitol in water (1 g is dissolved in 5.5 ml of water at room temperature), only solutions with a maximum concentration of 25% can be obtained for therapeutic purposes. However, these are supersaturated solutions, which means that during the storage period not only in 25%, but also 20% and even 15% solutions, a crystalline precipitate of D-mannitol is formed. As a result, such solutions cannot be administered to the sick. They require heating in a water bath until the crystals are completely dissolved, and then cooled to the temperature of the human body.

Wynalazek rozwiązuje zagadnienie opracowania sposobu otrzymywania mieszaniny anhydroheksitoli na drodze dehydaratacji D-mannitolu z zamiarem otrzymania oczyszczonej mieszaniny o silniejszych właściwościach osmoterapeutycznych od dotychczas stosowanego D-mannitolu.The invention solves the problem of the development of a method for the preparation of an anhydrohexitol mixture by dehydratation of D-mannitol, with the intention of obtaining a purified mixture with stronger osmotherapeutic properties than the previously used D-mannitol.

167 997167 997

Kolejnym celem wynalazku jest uzyskanie 40-50% roztworu, który po termicznym wyjałowieniu można podawać chorym metodą kroplo wego wlewu dożylnego, przy czym roztwór taki powinien się charakteryzować trwałością i toksycznością zbliżoną do roztworów D-mannitolu.Another aim of the invention is to obtain a 40-50% solution which, after thermal sterilization, can be administered to patients by intravenous drip infusion, and such a solution should be characterized by stability and toxicity similar to D-mannitol solutions.

Sposób otrzymywania mieszaniny anhydroheksitoli o właściwościach osmoterapeutycznych charakterystyczny dla tego wynalazku polega na tym, że umieszczone w szczelnie zamkniętym ciśnieniowym naczyniu technologicznym (zwłaszcza w autoklawie) 30 części wagowych krystalicznego D-mannitolu i 100 części wagowych 10% wodnego roztworu kwasu siarkowego ogrzewa się w temperaturze 190°C±5°C przez czas od 18 do 22 godzin, lecz najkorzystniej 20 godzin, po upływie którego naczynie technologiczne ochładza się w warunkach naturalnych do temperatury otoczenia, po czym otwiera się i jeżeli roztwór nie jest klarowny poddaje się go przesączeniu. Następnie zobojętnia się go przepuszczając przez kolumnę jono-wymienną, wypełnioną świeżo zaktywowanym anionitem, uzyskując eluat o wartości wykładnika stężenia jonów wodorowych w granicach 6,5-6,9 (mierzonej pH-metrem). Eluat zadaje się porcją od dwu do trzech części wagowych sproszkowanego węgla aktywnego i całość ogrzewa się w otwartym naczyniu technologicznym do temperatury nie wyższej jak 60°C i przetrzymuje w tej temperaturze przez czas od 5 minut do 15 minut, lecz najkorzystniej 10 minut. Po naturalnym ochłodzeniu do temperatury otoczenia oddziela się z mieszaniny węgiel aktywowany na gęstych (twardych) sączkach bibułowych pod obniżonym ciśnieniem (zwłaszcza na pompce wodnej) i ostatecznie również pod zmniejszonym ciśnieniem (na przykład na pompce wodnej) usuwa zeń wodę w temperaturze od 50°C do 60°C.The method of obtaining an anhydrohexitol mixture with osmotherapeutic properties, characteristic of this invention, consists in heating 30 parts by weight of crystalline D-mannitol and 100 parts by weight of a 10% aqueous sulfuric acid solution in a sealed pressure processing vessel (especially in an autoclave) at a temperature of 190 ° C ± 5 ° C for 18 to 22 hours, but most preferably 20 hours, after which the processing vessel is naturally cooled to ambient temperature, then opened and, if the solution is not clear, it is filtered. It is then neutralized by passing it through an ion-exchange column packed with freshly activated anion exchanger, yielding an eluate with a hydrogen ion concentration index value of 6.5-6.9 (measured with a pH meter). The eluate is mixed with two to three parts by weight of powdered activated carbon, and the whole is heated in an open processing vessel to a temperature of not more than 60 ° C and kept at this temperature for a period of 5 minutes to 15 minutes, but most preferably 10 minutes. After natural cooling to ambient temperature, the activated carbon is separated from the mixture on dense (hard) filter papers under reduced pressure (especially with a water pump) and finally also under reduced pressure (e.g. with a water pump), water is removed from the mixture at a temperature of 50 ° C up to 60 ° C.

Otrzymane sposobem według wynalazku, termicznie wyjałowione 40% - w roztwory mieszaniny anhydroheksitoli wykazują w pierwszych 5 godzinach od podania drogą wlewu dożylnego szczurom, działanie diuretyczne około 2,5 raza silniejsze od dotychczas stosowanego D-mannitolu. Wydaje się, że taki efekt terapeutyczny może mieć istotne znaczenie, zwłaszcza w urazach powypadkowych (obrzęki), w których pierwsze godziny często decydują o przeżyciu pacjenta.The thermally sterilized 40% - anhydrohexitol mixtures obtained by the method according to the invention show in the first 5 hours after intravenous infusion to rats a diuretic effect about 2.5 times stronger than that of the previously used D-mannitol. It seems that such a therapeutic effect may be of significant importance, especially in post-accident injuries (edema), in which the first hours often determine the patient's survival.

Stwierdzono nietoksyczność i stopień wydalania tej mieszaniny przez organizm szczurów podobne do stosowanego w farmakoterapii D-mannitolu, oraz że każdy z czterech wyizolowanych składników tej mieszaniny jako pojedyncze indywiduum chemiczne ma silniejsze właściwości niż D-mannitol.The non-toxicity and degree of excretion of this mixture by rats was found to be similar to that of D-mannitol used in pharmacotherapy, and that each of the four isolated components of this mixture as a single chemical entity had stronger properties than D-mannitol.

Wynalazek jest szczegółowo opisany na przykładzie jego wykonania i zobrazowany schematem dehydratacji - cyklizacji D-mannitolu (fig. 1) i chromatogramem gazowym uzyskanej mieszaniny (fig. 2).The invention is described in detail in an embodiment and illustrated by the D-mannitol dehydration-cyclization scheme (Fig. 1) and the gas chromatogram of the resulting mixture (Fig. 2).

Przykładl . Umieszczone w szczelnie zamkniętym ciśnieniowym naczyniu technologicznym (zwłaszcza w autoklawie) 30 części wagowych krystalicznego D-mannitolu i 100 części wagowych 10% wodnego roztworu kwasu siarkowego ogrzewa się w temperaturze 190°C±5°C przez czas od 18 do 22 godzin, lecz najkorzystniej 20 godzin, po upływie którego reakcję uznaje się za zakończoną na skutek braku w produkcie reakcji substratowego D-mannitolu. Naczynie technologiczne ochładza się w warunkach naturalnych do temperatury otoczenia, po czym otwiera się i jeżeli roztwór nie jest klarowny poddaje się go przesączeniu. Następnie zobojętnia się go przepuszczając przez kolumnę jonowymienną wypełnioną świeżo zaktywowanym anionitem, najkorzystniej Amberlitem IRA-400, uzyskując eluat o wartości pH w granicach 6,5-6,9 (mierzonej pH-metrem). Eluat zadaje się porcją od dwu do trzech części wagowych sproszkowanego węgla aktywowanego i całość ogrzewa w otwartym naczyniu technologicznym do temperatury nie wyższej niż 60°C i przetrzymuje w tej temperaturze przez czas od 5 min do 15 min, lecz najkorzystniej 10 min. Po naturalnym ochłodzeniu do temperatury otoczenia oddziela się z mieszaniny węgiel aktywowany na gęstych (twardych) sączkach bibułowych pod obniżonym ciśnieniem (zwłaszcza na pompce wodnej) i ostatecznie również pod zmniejszonym ciśnieniem (na przykład na pompce wodnej) usuwa zeń wodę w temperaturze od 50°C do 60°C, uzyskując bezbarwny oleisty syrop w ilości od 24 części wagowych do 25 części wagowych w stosunku do 30 części wagowych użytego do obróbki D-mannitolu.Example Placed in a sealed pressure processing vessel (especially in an autoclave), 30 parts by weight of crystalline D-mannitol and 100 parts by weight of a 10% aqueous solution of sulfuric acid are heated at 190 ° C ± 5 ° C for 18 to 22 hours, but most preferably 20 hours, at which point the reaction is deemed complete as no substrate D-mannitol is reacted. The technological vessel is cooled under natural conditions to ambient temperature, then it is opened and, if the solution is not clear, it is filtered. It is then neutralized by passing through an ion exchange column packed with freshly activated anion exchanger, most preferably Amberlite IRA-400, yielding an eluate with a pH in the range 6.5-6.9 (measured with a pH meter). The eluate is mixed with two to three parts by weight of powdered activated carbon, and the whole is heated in an open process vessel to a temperature of no more than 60 ° C and kept at this temperature for 5 minutes to 15 minutes, but most preferably 10 minutes. After natural cooling to ambient temperature, the activated carbon is separated from the mixture on dense (hard) filter papers under reduced pressure (especially with a water pump) and finally also under reduced pressure (e.g. with a water pump), water is removed from the mixture at a temperature of 50 ° C to 60 ° C, giving a colorless oily syrup in an amount of 24 parts by weight to 25 parts by weight based on 30 parts by weight of the D-mannitol used for treatment.

Oddzielnym problemem jest określenie składu jakościowego i ilościowego uzyskanego oleistego produktu. Skład jakościowy został określony poprzez preparatywne wyizolowanie czterech składników z powyższego produktu drogą kilkakrotnej ekstrakcji octanem etylu i tyleżkrotnej krystalizacji z 96% alkoholu etylowego. Wszystkie uzyskane związki były krystaliczne, a ich charakterystyka przedstawia się następująco:A separate problem is to determine the qualitative and quantitative composition of the obtained oily product. The qualitative composition was determined by preparative isolation of the four components from the above product by repeated extraction with ethyl acetate and the same number of recrystallization from 96% ethyl alcohol. All the obtained compounds were crystalline and their characteristics are as follows:

167 997 związek 1, 1,4:3,6-dianhydro-D-mannitol, temp. topn. 87°C [α]ο= +91° w wodzie (2g 100 ml) związek 2,1,4-anhydro-D-mannitol, temp. topn. 145-148°C [g]d = -24° w wodzie (2g 100ml) ____w___i_ i c__5____d___*___im — cno......ζ^~ιλλ_i \ ^5^^. j, i^-duuyciu-b-uuiuuuOi, wmp. ι°μιι. u v^l^ujd w wu<kic(xg mluu;167,997 compound 1, 1,4: 3,6-dianhydro-D-mannitol, m.p. 87 ° C [α] ο = + 91 ° in water (2g 100 ml) compound 2,1,4-anhydro-D-mannitol, mp. 145-148 ° C [g] d = -24 ° in water (2g 100ml) ____w___i_ i c__5 ____ d ___ * ___ im - cno ...... ζ ^ ~ ιλλ_i \ ^ 5 ^^. j, i ^ -duration-b-uuiuuuOi, wmp. ι ° μιι. uv ^ l ^u jd w wu <kic (xg mluu;

związek 4, 2,5-anhydro-D-glucitol, temp. topn. 56-57°C [g]d = + 23° w wodzie (2 g 100 ml) Wszystkie te związki powstały w wyniku odwodnienia D-mannitolu w/g mechanizmu Sn2 a drogę tej reakcji przedstawia załączony schemat (fig. 1).compound 4, 2,5-anhydro-D-glucitol, mp. 56-57 ° C [g] d = + 23 ° in water (2 g 100 ml) All these compounds were formed as a result of D-mannitol dehydration by the Sn2 mechanism and the path of this reaction is shown in the attached diagram (Fig. 1).

Opracowano również metodę ilościowego oznaczania składników tej samej mieszaniny, wykorzystując do tego celu kapilarny chromatograf gazowy. Przed analizą chromatograficzną w fazie gazowej składniki badanej mieszaniny należy przeprowadzić w lotne i trwałe pochodne. Najkorzystniejszymi są pochodne O-acetylowe (prosta synteza i wysoka trwałość). W tym celu 5 mg poddawanej oznaczeniu mieszaniny anhydroheksitoli o właściwościach osmoteraopeutycznych rozpuszcza' się ' w 10 ml wody destylowanej, pobiera się przy pomocy mikrostrzykawki Hamiltona 20 μΐ tak otrzymanego roztworu i umieszcza się w szczelnie zamykanej specjalnej ampułce szklanej o pojemności 1,5 ml. Następnie usuwa się wodę w strumieniu azotu, w temperaturze pokojowej lub pod zmniejszonym ciśnieniem, na przykład na pompce wodnej, w temperaturze około 60°C a suchą pozostałość zadaje się 200// bezwodnika kwasu octowego. Po ponowym uszczelnieniu ampułki jej zawartość podgrzewa się do temperatury 100°C i przetrzymuje w tej temperaturze przez czas nie krótszy jak 1 godz., po upływie którego usuwa się z niej lotne składniki w strumieniu azotu, w temperaturze pokojowej lub pod zmniejszonym ciśnieniem (na pompce wodnej) w temperaturze około 60°C. Ostatecznie rozpuszcza się pozostałość w 100μ/ chloroformu podgrzewając całość do 50°C. Po naturalnym ochłodzeniu do temperatury pokojowej pobiera się z ampułki 1 μΐ mieszaniny i nastrzykuje na kolumnę kapilarną chromatografu gazowego. Wykorzystano do tego celu chromatograf gazowy Carlo Erba Vega 6180, wyposażony w kolumnę kapilarną „fused silica“ DB-23, detektor płomieniowo-jonizacyjny (FID), iniektor bezpośredniego wprowadzenia próbki na kolumnę „on column“ i integrator Spectra Physics DP 700. Rozdział tej mieszaniny przedstawia załączony chromatogram (fig. 2). Otrzymywana wielokrotnie mieszanina anhydroheksitoli charakteryzuje się zawsze tym samym składem jakościowym i ilościowym.A method of quantifying the components of the same mixture was also developed, using a capillary gas chromatograph. Before the gas-phase chromatographic analysis, the components of the test mixture should be converted into volatile and stable derivatives. The O-acetyl derivatives (simple synthesis and high stability) are most preferred. To this end, 5 mg of the mixture of anhydrohexitols with osmoteraopoietic properties to be determined are dissolved in 10 ml of distilled water, 20 μΐ of the solution obtained in this way is withdrawn with a Hamilton microsyringe and placed in a sealed special glass ampoule with a capacity of 1.5 ml. The water is then removed under a stream of nitrogen at room temperature or under reduced pressure, for example by a water pump, at a temperature of about 60 ° C and the dry residue is mixed with 200 µl acetic anhydride. After resealing the ampoule, its content is heated to a temperature of 100 ° C and kept at this temperature for at least 1 hour, after which the volatile components are removed from it in a nitrogen stream, at room temperature or under reduced pressure (using a pump water) at a temperature of about 60 ° C. Finally dissolve the residue in 100μ / chloroform by heating it to 50 ° C. After natural cooling to room temperature, 1 μΐ of the mixture is taken from the ampoule and injected onto the capillary column of the gas chromatograph. For this purpose, a Carlo Erba Vega 6180 gas chromatograph was used, equipped with a capillary column "fused silica" DB-23, a flame ionization detector (FID), an injector for direct injection of the sample onto the column and a Spectra Physics DP 700 integrator. The mixture is shown in the attached chromatogram (Fig. 2). The mixture of anhydrohexitols obtained many times over is always characterized by the same qualitative and quantitative composition.

Na chromatogramie gazowym (fig. 2) widać cztery intensywne i dobrze rozdzielone sygnały. Identyfikacja tych sygnałów dokonana metodą CGC-MS (kapilarna chromatografia gazowaspektrometria masowa) oraz poprzez koiniekcję standardów wykazała, że są to produkty cykliczne przedstawione na schemacie. Oznaczenia cyfrowe sygnałów chromatograficznych (fig. 2) odpowiadających poszczególnym związkom są identyczne z odpowiednimi strukturami przedstawionymi na schemacie (fig. 1). Są to: 1,4:3,6-dianhydro-D-mannitol (zw. 1), 1,4-anhydro-D-mannitol (zw. 2), 1,5-anhydro-D-mannitol (zw. 3) i 2,5-anhydro-D-glucitol (zw. 4). Ponadto na chromatografie gazowym (fig. 2) widać mały sygnał (pik 5) mogący odpowiadać 1,4-anhydro-talitolowi. Związek ten może powstawać z D-mannitolu w wyniku cyklizacji 1,4 lub 3,6 z inwersją konfiguracji odpowiednio atomu C-4 lub C-3, będącej następstwem protonowania atomów tlenu związanych z C-3 lub C-4.The gas chromatogram (Fig. 2) shows four intense and well-separated signals. Identification of these signals by CGC-MS (Capillary Gas Chromatography Mass Spectrometry) and by co-injection of the standards showed that they are cyclic products shown in the diagram. The numerical designations of the chromatographic signals (Fig. 2) corresponding to the individual compounds are identical to the corresponding structures depicted in the diagram (Fig. 1). These are: 1,4: 3,6-dianhydro-D-mannitol (comp. 1), 1,4-anhydro-D-mannitol (comp. 2), 1,5-anhydro-D-mannitol (comp. 3 ) and 2,5-anhydro-D-glucitol (comp. 4). In addition, the gas chromatograph (Fig. 2) shows a small signal (peak 5) that may correspond to 1,4-anhydro-talitol. This compound can be formed from D-mannitol by cyclization of 1,4 or 3,6 with inversion of the configuration of the C-4 or C-3 atom, respectively, resulting from the protonation of oxygen atoms bound to C-3 or C-4.

Widmo masowe substancji eluującej się jako pik 5 potwierdza jego strukturę 1,4-dihydroheksitolową. Określenie konfiguracji tego związku jest możliwe jedynie metodą koiniekcji standardu: Jego otrzymanie jest uzależnione od posiadania czystości i składu mieszaniny jest możliwe w oparciu D-talitolu jako substratu. Ocena stopniania o metodę chromatografu gazowej z wykorzystaniem kolumn kapilarnych. Zastosowano następujące warunki rozdziału: chromatograf gazowy Carlo Erba Vega 6180, iniektor bezpośredniego wprowadzenia próbki na kolumnę „on colum“, detektor płomieniowo-jonizacyjny (FID), kolumna kapilarna „fused silica“ DB-23 (60 m X 0,258 mm), temperatura pieca (80-150°C, 3°C min, 150-200,4°C min, 200-240°C, 5°C min), wodór jako gaz nośny o szybkości przepływu 2 ml/min (mierzono w temperaturze pokojowej).The mass spectrum of the substance eluting as peak 5 confirms its 1,4-dihydrohexitol structure. It is possible to determine the configuration of this compound only by the co-injection method of the standard: its preparation depends on the purity and composition of the mixture, it is possible on the basis of D-talitol as a substrate. Evaluation of the melting by the gas chromatograph method with the use of capillary columns. The following separation conditions were used: Carlo Erba Vega 6180 gas chromatograph, "on colum" direct injection injector, flame ionization detector (FID), "fused silica" DB-23 capillary column (60 m X 0.258 mm), oven temperature (80-150 ° C, 3 ° C min, 150-200.4 ° C min, 200-240 ° C, 5 ° C min), hydrogen as carrier gas with a flow rate of 2 ml / min (measured at room temperature) .

Wydruk komputerowy z integratora DP 700 (zamieszczony pod fig. 2), w drugiej kolumnie zatytułowanej „AR-EA“ zawiera pola powierzchni każdego z pięciu pików widocznych na chromatogramie. Przeliczenie tych wartości na rzeczywiste relacje wagowe poszczególnych komponentów tej mieszaniny wymaga uwzględnienia odpowiednio wyznaczonych mnożników. W tym celu naważono po 5 mg chromatograficznie czystych substancji: 1,4:3,6-diahydro-D-mannitolu,The computer printout of the DP 700 integrator (located under Fig. 2), in the second column entitled "AR-EA", shows the area of each of the five peaks visible in the chromatogram. Converting these values to actual weight relationships of individual components of this mixture requires taking into account appropriately determined multipliers. For this purpose, 5 mg of chromatographically pure substances were weighed: 1,4: 3,6-diahydro-D-mannitol,

167 997167 997

1,4-anhydro-D-mannitolu, 1,5-anhydro-D-mannitolu, 2,5-anhydro-D-glucitolu oraz pentaerytrytolu jako standardu wewnętrznego i rozpuszczono w 10 ml wody. Pobrano 20//l roztworu, umieszczono w ampułce do chromatografii gazowej, usunięto wodę w strumieniu azotu i ostatecznie wyczerpująco o-acetylowano identycznie jak opisano wyżej. Rozdział chromatograficzny tej’ mieszaniny z wykorzystaniem integratora DP 700, pozwolił określić wzajemne relacje powierzchni sygnałów chromatograficznych (pików) odpowiadających tym samym ilościom wagowym wszystkich naważonych składników. Z tych danych wyliczono wartości relatywnych (w stosunku do pentaerytrytolu) wagowych współczynników odpowiedzi w FID-zie chromatografu gazowego (w.w.o.) dla czterech interesujących nas substancji. Z kolei wyliczono odpowiednie mnożniki, które należy zastosować przy przeliczeniu powierzchni pól pików chromatograficznych odpowiadających wymienionym wyżej związkom na ich relacje wagowe. Uzyskane wartości zestawiono w tabeli 1.1,4-anhydro-D-mannitol, 1,5-anhydro-D-mannitol, 2,5-anhydro-D-glucitol and pentaerythritol as an internal standard and dissolved in 10 mL of water. 20 µl of solution was withdrawn, placed in a gas chromatography ampoule, water removed in a nitrogen stream and finally exhaustively o-acetylated identically as described above. The chromatographic separation of this mixture with the use of the DP 700 integrator allowed to determine the mutual relations of the area of the chromatographic signals (peaks) corresponding to the same weight amounts of all weighed components. From these data, the values of the relative (in relation to pentaerythritol) weight response factors in the FID of the gas chromatograph (w.o.) were calculated for the four substances of interest to us. Then, appropriate multipliers were calculated, which should be used to convert the area of the chromatographic peaks corresponding to the above-mentioned compounds into their weight relationships. The obtained values are summarized in Table 1.

Tabela 1Table 1

Substancja mnożnik Substance multiplier Pole powierzchni* Surface area* w.w.o. w.w.o. standard standard 63800 63800 1,00 1.00 1,00 1.00 związek 1 relationship 1 35100 35100 0,55 0.55 1,81 1.81 związek 2 relationship 2 60600 60600 0,95 0.95 1,05 1.05 związek 3 relationship 3 56800 56800 0,89 0.89 112 112 związek 4 relationship 4 58700 58700 0,92 0.92 1,09 1.09 ^xprzedstawiono ^{x is} shown w jednostkach własnych integratora DP 700. in the own units of the DP 700 integrator.

Określono skład procentowy mieszaniny anhydroheksitoli, uwzględniając wyznaczone mnożniki i przedstawiono je w tabeli 2. Zamieszczone w tej tabeli czasy retencji badanych związków w kapilarnej chromatografii gazowej są charakterystyczne dla tych połączeń i mogą służyć do ich identyfikacji. The percentage composition of the anhydrohexitol mixture was determined, taking into account the determined multipliers, and they are presented in Table 2. The retention times of the tested compounds in capillary gas chromatography presented in this table are characteristic for these connections and can be used for their identification. Tabel Tabel a 2 a 2 Nazwa związku Relationship name Zawartość Content retencji (min) retention (min) j.wag. as above % wag. wt.% Czasy Times 1,4:3,6-dianhydro-D-mannitol 35,48 1,4: 3,6-dianhydro-D-mannitol 35.48 50,3 50.3 39,1 39.1 (±3,0%) (± 3.0%) 1,4-anhydro-D-mannitol 43,42 1,4-anhydro-D-mannitol 43.42 6,1 6.1 4,7 4.7 (±0,5) (± 0.5) 1,5-anhydro-D-mannitol 43,59 1,5-anhydro-D-mannitol 43.59 13,0 13.0 10,0 10.0 (±1,0) (± 1.0) 2,5-anhydro-D-glucitol 43,98 2,5-anhydro-D-glucitol 43.98 55,6 55.6 43,2 43.2 (±3.0) (± 3.0) 1,4-anhydro-D-talitol 44,27 1,4-anhydro-D-talitol 44.27 3,9 3.9 3,0 3.0 (±0,5) (± 0.5) 128,9 128.9 100,0% 100.0%

Wartości podane w nawiasach dotyczą maksymalnych odchyleń w składzie ilościowym wielokrotnie otrzymywanej mieszaniny.The values given in parentheses refer to the maximum deviations in the quantitative composition of the mixture obtained repeatedly.

PEAK# PEAK # areaz areaz RT RT AREA BC AREA BC 1 1 27.858 27,858 35 .38 35 .38 14021 Ot 14021 Ot Z WITH 5 .787 5 .787 43 .42 43 .42 307? 01 307? 01 3 3 It .62 It .62 43 57 43 57 6102 Ol 6102 Ol 4 4 50 .778 50 .778 4 3 70 4 3 70 27132 (31 27132 (31 5 5 3 .737 3 .737 44 .27 44 .27 1700 01 1700 01

FIG.2 ch₂ohHO— (40— —04—OHCK-₂O«-FIG. ₂ ch ₂ ohHO— (40— —04 — OHCK- ₂ O «-

=2,5-anhydro-L-gulitol= 2,5-anhydro-L-gulitol

związek 1relationship 1

1,4:3, ś-dianhydro-D-manmtol1.4: 3, di-dianhydro-D-manmtol

FIG. 1FIG. 1

Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 90 egz Cena ł ,50 złPublishing Department of the UP RP. Mintage 90 copies Price PLN 50

Claims

Patent claim

The method of obtaining an anhydrohexitol mixture having osmotherapeutic properties, characterized in that 30 parts by weight of crystalline D-mannitol and 100 parts by weight of a 10% aqueous solution of sulfuric acid are heated to 190 ° C ± 5 ° in a sealed pressure processing vessel, especially in an autoclave. C for 18 to 22 hours, most preferably 20 hours, after which the processing vessel is cooled down to ambient temperature under natural conditions, then opened and, if the solution is not clear, it is filtered and then neutralized by passing it through the column ion-exchange, filled with freshly activated anion exchanger, obtaining an eluate with a pH value in the range of 6.5-6.9, then the eluate is added with a portion of two to three parts by weight of powdered activated carbon and the whole is heated in an open process vessel to a temperature not higher than 60 ° C and kept at this temperature for 5 minutes d o 15 minutes, most preferably 10 minutes and then, after natural cooling to ambient temperature, the activated carbon is separated from the mixture on dense (hard) filter papers under reduced pressure, especially on a water pump and finally also under reduced pressure, preferably on a water pump, removes water from it at a temperature of 50 ° C to 60 ° C.