PL166420B1

PL166420B1 - Rapid testing kit for detecting and semi-quantitati vely determining the content of urea in biological fluids, in particular in blood plasma, and method of making such kit

Info

Publication number: PL166420B1
Application number: PL29316192A
Authority: PL
Inventors: Andrzej Chwojnowski; Anna Ziolkowska
Original assignee: Pan
Priority date: 1992-01-13
Filing date: 1992-01-13
Publication date: 1995-05-31
Also published as: PL293161A1

Abstract

Pasek testowy do szybkiego wykrywania i półilościowego oznaczania sulfonamidów w płynach biologicznych, zwłaszcza w plaźmie krwi, znamienny tym, że składa się z dwuwarstwowego pola testowego, przy czym pierwsza warstwa zawiera kompozycję barwną, w skład której wchodzi aromatyczna amina drugo- i/lub trzeciorzędowa jako czynnik sprzęgający się ze związkiem dwuazowym, w ilości 0,2-5% oraz silny kwas organiczny, korzystnie sulfonowy w ilości 0,6-15%, natomiast druga warstwa pola testowego zawiera azotyn metalu alkalicznego, korzystnie sodu lub potasu w ilości 0,1-5% jako czynnik dwuazujący. 4. Sposśp wóbonania paska testowego do szybkieyo wykrywania i pi^łiiościowcgo oznaczania sulfonamidów w płynach biologicznych, zwłaszcza w plaźmie krwi, znamienny tym, że pierwszą warstwę pola testowego nasyca się roztworem w rozpuszczalniku organicznym, korzystnie metanolu, kompozycji zawierającej 0,2-5% aromatycznej aminy drugo-i/lub trzeciorzędowej oraz 0,6-15% silnego kwasu organicznego, korzystnie sulfonowego, a warstwę drugą pola testowego nasyca się czynnikiem dwuazującymw postaci 0,1-5% roztworu azotynu metalu alkalicznego, korzystnie sodu lub potasu, po czym oba pola testowe suszy się w temperaturze poniżej 370 K i skleja ze sobą.Test strip for the rapid detection and semi-quantitative determination of sulfonamides in biological fluids, especially in the blood plasma, characterized in that it consists of a bilayer test field, the first layer containing the color composition in which includes an aromatic secondary and / or tertiary amine as a coupling agent a diazo compound in an amount of 0.2-5% and a strong organic acid, preferably sulfonic acid, in an amount of 0.6-15%, while the second layer of the test field contains alkali metal nitrite, preferably sodium or potassium in an amount of 0.1-5% as the diazotizing agent. 4. Method of making a test strip for quick detection and grading sulfonamides in biological fluids, especially in the blood plasma, characterized in that the first layer of the test field is saturated with a solution in an organic solvent, preferably methanol, a composition containing 0.2-5% of an aromatic secondary and / or tertiary amine and 0.6-15% of a strong organic acid, preferably sulfonic acid, and the second layer the test field is saturated with a diazotizing agent in the form of 0.1-5% metal nitrite solution alkali, preferably sodium or potassium, and both test fields are dried at temperature below 370 K and sticks together.

Description

Przedmiotem wynalazku jest pasek testowy do szybkiego wykrywania i półilościowego oznaczania sulfonamidów w płynach biologicznych, zwłaszcza w plaźmie krwi oraz sposób jego wytwarzania.The subject of the invention is a test strip for rapid detection and semi-quantitative determination of sulfonamides in biological fluids, especially blood plasma, and a method of its production.

Sulfonamidy stanowią jedną z najczęściej stosowanych grup leków bakteriobójczych. Ich znaczenie dla współczesnej terapii jest bardzo duże. Jak dla wszystkich leków wchłanianych przez organizm, pierwszoplanowymi parametrami terapii sulfonamidowej są zakresy stężeń, stężenia toksyczne, półokres trwania, czas całkowitej emilinacji, stopień wiązania z białkiem, drogi eliminacji i metabolizm. Jednak najważniejszym parametrem jest terapeutyczny zakres stężeń. Poniżej dolnej granicy terapeutycznej lek nie działa, a powyżej szkodzi, aż do zatrucia włącznie. Dlatego precyzyjna znajomość stężenia leku we krwi ma zasadnicze znaczenie dla terapii i to zarówno dla jej skuteczności jak i dla ekonomii użycia leku.Sulfonamides are one of the most commonly used groups of bactericidal drugs. Their importance for modern therapy is very great. As with all absorbed drugs, the primary parameters for sulfa therapy are concentration ranges, toxic concentrations, half-life, total emilination time, protein binding, elimination pathways, and metabolism. However, the most important parameter is the therapeutic concentration range. Below the lower therapeutic limit, the drug does not work, and above it it does harm, up to and including poisoning. Therefore, precise knowledge of the concentration of the drug in the blood is essential for the therapy, both for its effectiveness and for the economy of the drug.

Szacuje się, że powszechne zastosowanie terapeutycznego monitorowania leków obniżyłoby koszt wszystkich kuracji farmakologicznych o około 30%.It is estimated that the widespread use of therapeutic drug monitoring would reduce the cost of all pharmacological treatments by approximately 30%.

Dotychczas nie był znany sposób wykonania szybkiego testu pozwalającego na ocenę stężenia sulfonamidów w plaźmie krwi. Stosowane były natomiast różne metody instrumentalne mające jednak tę zasadniczą wadę, że wymagają skomplikowanej i drogiej aparatury oraz są czaso- iUntil now, it was not known how to perform a quick test to assess the concentration of sulfonamides in the blood plasma. On the other hand, various instrumental methods have been used, but they have the fundamental disadvantage that they require complicated and expensive equipment and are time- and

166 420 pracochłonne. Kalorymetryczna metoda Rieder'a (Rieder J., Quantitative Determination the Bacteriostatically Actives Fraction of Sulfonamides and the Sum of Their Inactives Metabolites in Body Fluids, Chromatography. 17, /1972//, 1-21), oparta o technikę Brattona i Marshalla (Bratton A. C. and Marshall E. K., A New Conpling Component for Sulfonamide Determination, J. Biol. Chem., 128, /1939./, 537-550), wykorzystuje reakcję tworzenia barwnika dwuazowego i pomiar spektrofotometryczny przy długości fali 545 nm. Fluorometryczna metoda Bridges'a i wsp. (Brodges J. W., Gifford L. A., Hages W. P., Miller J. N. and Burns D. T., Luminescence Properties of Sulfonamides Drugs, Anal. Chem., 46, /1974./, 1010-1017), ma dostateczną czułość praktyczną. Natomiast pochodne N-podstawione oznaczane są dopiero po hydrolizie. Najbardziej popularne i najczęściej stosowane metody to metody chromatograficzne, przy czym wysokosprawna chromatografia cieczowa jest zdecydowanie najbardziej popularna i najczęściej stosowana.166,420 time-consuming. Calorimetric Rieder method (Rieder J., Quantitative Determination the Bacteriostatically Actives Fraction of Sulfonamides and the Sum of Their Inactives Metabolites in Body Fluids, Chromatography. 17, / 1972 //, 1-21), based on the Bratton and Marshall technique ( Bratton AC and Marshall EK, A New Conpling Component for Sulfonamide Determination, J. Biol. Chem., 128, (1939. /, 537-550), uses a diazo dye formation reaction and spectrophotometric measurement at a wavelength of 545 nm. The fluorometric method of Bridges et al. (Brodges JW, Gifford LA, Hages WP, Miller JN and Burns DT, Luminescence Properties of Sulfonamides Drugs, Anal. Chem., 46, /1974./, 1010-1017), has sufficient sensitivity practical. In contrast, N-substituted derivatives are determined only after hydrolysis. The most popular and most frequently used methods are chromatographic methods, with high performance liquid chromatography being by far the most popular and most used.

Przykładem takiego oznaczenia może być oznaczenie sulfopirydyny (Owerback J., Johuson N. F., Bates T. R., Pieniaszek H. J., and Jusko W. J., High Performance Liquid Chromatographic Assay of Sulfapiridine and Acetylosulfapyridine in Biological Fluids, J. Pharm. Sci., 67, /1978/, 1250-1253).An example of such a determination may be the determination of sulfopyridine (Owerback J., Johuson NF, Bates TR, Pieniaszek HJ, and Jusko WJ, High Performance Liquid Chromatographic Assay of Sulfapiridine and Acetylsulfapyridine in Biological Fluids, J. Pharm. Sci., 67, / 1978 / , 1250-1253).

Te wszystkie znane metody oznaczeń nie mogą jednak spełnić postulatu masowego monitorowania terapii sulfonamidowej. Dokładność tych metod mająca wielkie znaczenie w pracach badawczych, nie jest niezbędna w szybkiej diagnostyce, natomiast jest kosztowna. Konieczne było opracowanie metody, na podstawie której można szybko, w 10-15 minut, ocenić czy poziom leku jest poniżej zakresu terapeutycznego, w zakresie terapeutycznym, czy powyżej tego zakresu i grozi zatruciem.However, all these known assay methods cannot fulfill the postulate of mass monitoring of sulfonamide therapy. The accuracy of these methods, which is of great importance in research work, is not necessary for quick diagnostics, but it is expensive. It was necessary to develop a method, on the basis of which it is possible to quickly, in 10-15 minutes, assess whether the level of the drug is below the therapeutic range, within the therapeutic range, or above this range and the risk of poisoning.

Pasek testowy do szybkiego wykrywania i półilościowego oznaczania sulfonamidów w płynach biologicznych, zwłaszcza w plaźmie krwi, według wynalazku charakteryzuje się tym, że składa się z dwuwarstwowego pola testowego, przy czym pierwsza warstwa zawiera kompozycję barwną w skład, której wchodzi aromatyczna amina drugo- i/lub trzeciorzędowa jako czynnik sprzęgający się ze związkiem dwuazowym, w ilości 0,2-5% oraz silny kwas organiczny, korzystnie sulfonowy w ilości 0,6-15%, natomiast druga warstwa pola testowego zawiera azotyn metalu alkalicznego, korzystnie sodu lub potasu w ilości 0,1-5% jako czynnik dwuazujący.The test strip for the rapid detection and semi-quantitative determination of sulfonamides in biological fluids, especially in blood plasma, according to the invention is characterized in that it consists of a two-layer test field, the first layer containing a color composition consisting of an aromatic secondary amine and / or or tertiary as a diazo coupling agent in an amount of 0.2-5% and a strong organic acid, preferably sulfonic acid in an amount of 0.6-15%, while the second test field layer contains an alkali metal, preferably sodium or potassium nitrite in an amount 0.1-5% as a diazotizing agent.

Pasek testowy według wynalazku jako aminę aromatyczną korzystnie zawiera aminę aromatyczną trzeciorzędową.The test strip according to the invention preferably comprises a tertiary aromatic amine as the aromatic amine.

Druga warstwa pola testowego, korzystnie wykonana jest z bibuły niemięknącej w wodzie, najkorzystniej wiskozowej.The second layer of the test field is preferably made of non-softening in water, most preferably viscose paper.

Sposób wykonania paska testowego do szybkiego wykrywania i półilościowego oznaczania sulfonamidów w płynach biologicznych, zwłaszcza w plaźmie krwi, według wynalazku charakteryzuje się tym, że pierwszą warstwę pola testowego nasyca się roztworem w rozpuszczalniku organicznym, korzystnie metanolu, kompozycji zawierającej 0,2-5% aromatycznej aminy drugo- i/lub trzeciorzędowej oraz 0,6-15% silnego kwasu organicznego, korzystnie sulfonowego, a warstwę drugą pola testowego nasyca się czynnikiem dwuazującym w postaci 0,1-5% roztworu azotynu metalu alkalicznego, korzystnie sodu lub potasu, po czym oba pola testowe suszy się w temperaturze poniżej 370 K i skleja ze sobą.The method of making a test strip for the rapid detection and semi-quantitative determination of sulfonamides in biological fluids, especially in blood plasma, according to the invention, is characterized in that the first layer of the test field is saturated with a solution in an organic solvent, preferably methanol, of a composition containing 0.2-5% of aromatic a secondary and / or tertiary amine and 0.6-15% of a strong organic acid, preferably sulphonic acid, and the second layer of the test field is saturated with a diazotizing agent in the form of 0.1-5% alkali metal nitrite, preferably sodium or potassium, and then both test fields are dried below 370 K and glued together.

W sposobie według wynalazku pierwsze pole testowe nasyca się korzystnie roztworem zawierającym 2-3% aminy aromatycznej trzeciorzędowej.In the method according to the invention, the first test field is preferably saturated with a solution containing 2-3% of a tertiary aromatic amine.

Czułość testu według wynalazku pokrywa się z dolną granicą terapeutyczną sulfonamidów przenikających do krwi oraz pozwala na określenie stężenia w zakresie aż do stężeń toksycznych. Odczytu dokonuje się za pomocą skali barwnej, dobranej do stosowanego sulfonamidu. Wprawdzie różnice w zabarwieniu dla różnych stosowanych w terapii sulfonamidów sprowadzają się do nieznacznych różnic w odcieniach. Dlatego też, leczenie skojarzone dwoma sulfonamidami nie stanowi istotnej przeszkody w oznaczeniu stężenia. Również fakt, że sulfonamidy są wiązane z białkiem w 90-98%, nie stanowi istotnej przeszkody w oznaczeniu. Kwas organiczny, zawarty w teście, w sposób całkowicie skuteczny uwalnia sulfonamidy z wiązania z białkiem. Powoduje to wyeliminowanie błędów związanych z postacią leku w plaźmie krwi. Do testu można użyć aminy aromatyczne drugo- i trzeciorzędowe. Przy czym użycie amin trzeciorzędowych jest korzytsniejsze, ponieważ nie zachodzi niebezpieczeństwo powstania nitrozoamin mających żółte, a następnie różowe zabarwienie.The sensitivity of the test according to the invention coincides with the lower therapeutic limit of the penetrating blood sulfonamides and allows the determination of concentrations in the range up to toxic concentrations. The reading is made with the help of a color scale, selected for the used sulfonamide. It is true that the differences in the color of the various sulfonamides used in therapy are limited to slight differences in shades. Therefore, the combination therapy with two sulfonamides does not constitute a significant obstacle in determining the concentration. Also, the fact that sulfonamides are 90-98% bound to protein is not a significant obstacle in the determination. The organic acid contained in the assay is completely effective in releasing sulfonamides from binding to the protein. This results in the elimination of errors related to the form of the drug in the blood plasma. Secondary and tertiary aromatic amines can be used for the test. The use of tertiary amines is more advantageous, since there is no risk of nitrosamines having a yellow and then pink color.

166 420166 420

Poniżej przedstawiono przykłady wykonania wynalazku, nie ograniczające jego zakresu. Przykład I. Bibułę chromatograficzną Whatman Nr 3 nasycono roztworem o następującym składzie:The following are non-limiting examples of the invention. Example I. Whatman No. 3 chromatography paper was saturated with a solution of the following composition:

N,N-dimetyloanilina 2,1 cm³ N, N-dimethylaniline 2.1 cm ³

Poliwinylopirolidon 7,5 gPolyvinylpyrrolidone 7.5 g

Kwas p-toluenosulfonowy 65 gP-toluenesulfonic acid 65 g

Metanol 99,8% 100 cm³ Methanol 99.8% 100 cm ³

Nasyconą bibułę odciśnięto w celu usunięcia nadmiaru roztworu i suszono w temperaturze 20-90°C, korzystnie 40-60°C.The saturated filter paper was pressed to remove excess solution and dried at 20-90 ° C, preferably 40-60 ° C.

Drugim roztworem będącym 2% roztworem azotynu sodowego w wodzie redestylowanej nasycono bibułę wiskozową (nie mięknącą w wodzie) i suszono w temperaturze poniżej 100°C. Bibuły sklejono ze sobą za pomocą kleju poliakrylowego naniesionego metodą rasterową (kroplową) na bibułę pierwszą, pocięto na pasy o szerokości 10 mm. Pasy te naklejono na nośnik za pomocą folii dwustronnie samoprzylepnej i pocięto na paski o szerokości 5 mm, będące gotowymi testami.The second solution, which was a 2% solution of sodium nitrite in redistilled water, was saturated with viscose paper (not softening in water) and dried at a temperature below 100 ° C. The papers were glued together by means of a polyacrylic glue applied by the raster (drop) method to the first paper, cut into 10 mm wide strips. These strips were glued to the carrier with a double-sided adhesive film and cut into strips 5 mm wide, which are ready-made tests.

Przykład II. Bubłę chromatograficzną Whatman Nr 3 nasycono roztworem o następującym składzie:Example II. Whatman No. 3 chromatography bubble was saturated with a solution of the following composition:

N-fenylo-1-naftyloamina 2,4 gN-phenyl-1-naphthylamine 2.4 g

Poliwinylopirolidon 7,7 gPolyvinylpyrrolidone 7.7 g

Kwas szczawiowy 6,5 gOxalic acid 6.5 g

Metanol 99,8% 100cm3Methanol 99.8% 100 cm3

Nasyconą bibułę odciśnięto w celu usunięcia nadmiaru roztworu i suszono w temperaturze 40-60°C. Dalej postępowano jak w przykładzie I.The saturated filter paper was pressed to remove excess solution and dried at 40-60 ° C. The next step was as in example 1.

Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 90 egz.Publishing Department of the UP RP. Circulation of 90 copies

Cena 1,00 zł.Price PLN 1.00.

Claims

Patent claims

A test strip for the rapid detection and semi-quantitative determination of sulfonamides in biological fluids, especially blood plasma, characterized in that it consists of a two-layer test field, the first layer containing a color composition consisting of an aromatic secondary amine and / or tertiary as a diazo coupling agent in an amount of 0.2-5% and a strong organic acid, preferably sulfonic acid in an amount of 0.6-15%, while the second test field layer contains an alkali metal, preferably sodium or potassium nitrite in an amount of 0 1-5% as a diazotizing agent.

2. The strap according to claim The process of claim 1, wherein the aromatic amine is a tertiary aromatic amine.

3. Belt according to claim The method of claim 1, characterized in that the second layer of the test field is made of non-softening in water, most preferably viscose paper.

4. Method of making a test strip for the rapid detection and semi-quantitative determination of sulfonamides in biological fluids, especially in blood plasma, characterized in that the first layer of the test field is saturated with a solution in an organic solvent, preferably methanol, of a composition containing 0.2-5% of an aromatic amine secondary and / or tertiary acid and 0.6-15% of a strong organic acid, preferably sulfonic acid, and the second layer of the test field is impregnated with a diazotizing agent in the form of 0.1-5% alkali metal nitrite, preferably sodium or potassium, and both the test fields shall be dried at a temperature below 370 K and glued together.

5. The method according to p. The process of claim 4, characterized in that the first test field is preferably saturated with a solution containing 2-3% of a tertiary aromatic amine.