PL165811B1

PL165811B1 - Sposób otrzymywania drozdzy selenowych PL

Info

Publication number: PL165811B1
Application number: PL28909691A
Authority: PL
Inventors: Bohdan Achremowicz; Eugenia Podgorska
Original assignee: Akad Rolnicza
Priority date: 1991-02-15
Filing date: 1991-02-15
Publication date: 1995-02-28

Abstract

Sposób otrzymywania drozdzy selenowych, w którym hodowle prowadzi sie na pozywce zawierajacej selen, znamienny tym, ze najpierw przygotowuje sie sterylnie pozywke, korzystnie mineralna, z dodatkiem sacharozy jako zródla wegla, witamin; w szczególnosci: chlorowodorku tiaminy, biotyny, pantotenianu wapnia oraz buforu o pH okolo 4,8, do której sterylnie dodaje sie zawiesine drozdzy Yarovia lipolityca i prowadzi sie hodowle w temperaturze od 24° do 30°C przez minimum 2 doby, po czym drozdze odwirowuje sie sterylnie, a cala biomase przenosi do pozywki z dodatkami jak na poczatku hodowli lecz ubogiej w zwiazki siarki, przy czym takie pasazowanie powtarza sie co najmniej dwukrotnie, a nastepnie drozdze odwirowuje sie sterylnie i wprowadza do pozywki stosowanej do pasazowania z dodanym sterylnie i wyjalowionym uprzednio selenianem amonu, przy czym adaptacje taka powtarza sie co najmniej dwukrotnie zwiekszajac stezenie selenu, a ostatecznie uzyskana biomase poddaje sie ewentualnie suszeniu w znany sposób. PL

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania drożdży selenowych stosowanych w szczególności do celów farmakologicznych i paszowych.

Znany jest z opisu patentowego polskiego nr 135 706 sposób otrzymywania drożdży selenowych polegający na tym, że najpierw przygotowuje się pożywkę rozpuszczając w wodzie sacharozę z seleninem sodu, a następnie do pożywki tej wprowadza się ożywione drożdże handlowe. Tak sporządzaną mieszaninę poddaje się inkubacji w warunkach tlenowych, a następnie poinkubacyjną mieszaninę poddaje się obróbce w znany sposób dla uzyskania suchej masy drożdży selenowych. Uzyskane tym sposobem drożdże selenowe są jedynie mieszaniną drożdży handlowych i seleninu sodu.

Istotą wynalazku jest sposób otrzymywania drożdży selenowych, w których hodowlę prowadzi się na pożywce zawierającej selen, charakteryzujący się tym, że najpierw przygotowuje się sterylnie pożywkę, korzystnie mineralną, z dodatkiem sacharozy jako źródła węgla, witamin; w szczególności: chlorowodorku tiaminy, biotyny, pantotenianu wapnia oraz buforu o pH około 4,8. Wprowadzenie buforu pozwala na utrzymanie stałego pH w hodowli. Do tak przygotowanej pożywki dodaje się zawiesinę drożdży Yarovia lipolityca i prowadzi się hodowlę w temperaturze od 24° do 30°C przez minimum 2 doby po czym drożdże odwirowuje się sterylnie, a całą biomasę przenosi do pożywki z dodatkami jak na początku hodowli lecz ubogiej w związki siarki, przy czym takie pasażowanie powtarza się co najmniej dwukrotnie. Stosowanie tej pożywki ma na celu wygłodzenie drożdży pod względem wewnętrznych zapasów siarki. Następnie drożdże odwirowuje się sterylnie i wprowadza do pożywki stosowanej do pasażowania z dodanym sterylnie i wyjałowionym uprzednio selenianem amonu, przy czym taką adaptację powtarza się co najmniej dwukrotnie zwiększając każdorazowo stężenie selenu. Oddzielne przeprowadzenie sterylizacji selenianu amonu zapobiega wytrąceniu się selenu podczas sterylizacji pożywki z roztworem selenianu amonu. Ostatecznie, uzyskaną biomasę poddaje się ewentualnie suszeniu w znany sposób.

Sposób według wynalazku pozwala uzyskać drożdże selenowe, w których selen wbudowany jest w struktury białkowe. Ma to szczególne znaczenie, gdyż jak wykazały badania, tylko ograniczona forma selenu hamuje rozwój komórek nowotworowych i jest najdogodniejszą formą do wprowadzania selenu do organizmów ludzi i zwierząt.

Hodowlę drożdży prowadzi się w kolbach stożkowych o pojemności 500 cm³. Najpierw przygotowuje się pożywkę o składzie:

(NHąjiSOą w iiości 0,5 g,

MgSO4 X 7H2O w iioścć 0,05 g,

CaCl2 X 2 H 2O wiioścć 0,01 g,

165 811

NaCl w ilości 0,01 g, sacharoza w ilości 5 g.

Odważone składniki rozpuszcza się w 75 cm³ wody destylowanej, po czym dodaje się 25 cm³buforu o pH = 4,8 przygotowanego z:

kwasu cytrynowego w ilości 0,65 g, glicyny w ϋοό^ 0,95 g,

KH2PO4 w iioścć 0,95 g,

NaOH 30% roztwór wodny w ilości 0,6cm³

Podane odczynniki rozpuszcza się w 20 cm³ wody destylowanej i uzupełnia wodą destylowaną do 25 cm³. Tak przygotowaną pożywkę sterylizuje się w autoklawie przez 30 min, w temperaturze 111°C, którą to temperaturę uzyskuje się przy nadciśnieniu 49,5 kPa.

Po ostudzeniu do temperatury pokojowej wprowadza się do pożywki w sposób sterylny roztwory witamin:

- roztwór biotyny zawierający 0,0004 g w 100 cm³ wody destylowanej po 20 min sterylizacji w autoklawie przy nadciśnieniu 49,5 kPa w ilości 0,1 cm³.

- roztwór pantotenianu wapnia zawierający 0,0109 g w 100 cm³ wody destylowanej po przesączeniu przez sterylny sączek G-4 do sterylnej kolbki stożkowej w ilości 1 cm³,

- roztwór chlorowodorku tiaminy zawierający 0,020 g w 100 cm³ wody destylowanej zakwaszonej do pH 3,5 po 20 min sterylizacji w autoklawie przy nadciśnieniu 49,5 kPa w ilości 0,1 cm³.

Do tak przygotowanego podłoża dodaje się sterylnie 1 cm³ zawiesiny drożdży Yarovia lipolityca i prowadzi się hodowlę na wytrząsarce w pokoju „termostacie w temperaturze od 28° do 30°C. Po trzech dobach drożdże odwirowuje się sterylnie i całą biomasę przenosi się do pożywki o składzie:

CH3COONH4 w ilości 0,55 g,

MgCl2 w iiości 0,02 g oraz pozostałymi składnikami to jest: chlorkiem wapnia 2-wodnym, chlorkiem sodu, sacharozą, buforem i witaminami w ilościach podanych wyżej. Z pożywki tej wyeliminowano siarczan amonu i siarczan magnezu 7-wodny.

Po 48 godzinach drożdże odwirowuje się sterylnie, przemywa wodą sterylną i ponownie przenosi do pożywki o takim samym składzie. Następnie drożdże odwirowuje się sterylnie i wprowadza do pożywki o składzie podanym do pasażowania drożdży, czyli bez związków siarki, do której dodaje się wyjałowiony uprzednio roztwór selenianu amonu sporządzony z 0,045 g (NH4)2 SeO4 w 100 cm3 wody destylowanej.

Przy pierwszej adaptacji do pożywki dodaje się 0,5 cm³ tego roztworu, przy drugiej 1,5 cm³, a hodowlę kończy się na trzeciej adaptacji dodając 2,5 cm³ roztworu selenianu amonu. Każdą adaptację prowadzi się przez dwie doby, po czym drożdże odwirowuje się sterylnie i przemywa wodą sterylną. Tak uzyskaną biomasę suszy się. Tak namnożone drożdże zawierają w 1g suchej masy od 400pg do 700 pg selenu w zależności od przebiegu hodowli.

Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 90 egz. Cena 1,00 zł.

Claims

Zastrzeżenie patentowe

Sposób otrzymywania drożdży selenowych, w którym hodowlę prowadzi się na pożywce zawierającej selen, znamienny tym, że najpierw przygotowuje się sterylnie pożywkę, korzystnie mineralną, z dodatkiem sacharozy jako źródła węgla, witamin; w szczególności: chlorowodorku tiaminy, biotyny, pantotenianu wapnia oraz buforu o pH około 4,8, do której sterylnie dodaje się zawiesinę drożdży Yarovia lipolityca i prowadzi się hodowlę w temperaturze od 24° do 30°C przez minimum 2 doby, po czym drożdże odwirowuje się sterylnie, a całą biomasę przenosi do pożywki z dodatkami jak na początku hodowli lecz ubogiej w związki siarki, przy czym takie pasażowanie powtarza się co najmniej dwukrotnie, a następnie drożdże odwirowuje się sterylnie i wprowadza do pożywki stosowanej do pasażowania z dodanym sterylnie i wyjałowionym uprzednio selenianem amonu, przy czym adaptację taką powtarza się co najmniej dwukrotnie zwiększając stężenie selenu, a ostatecznie uzyskaną biomasę poddaje się ewentualnie suszeniu w znany sposób.