PL161007B1

PL161007B1 - Sposób i urządzenie do wytwarzania skokowego gradientu składu eluentu w chromatografii cienkowarstwowej

Info

Publication number: PL161007B1
Application number: PL26813487A
Authority: PL
Priority date: 1987-10-07
Filing date: 1987-10-07
Publication date: 1993-05-31
Also published as: PL268134A1

Abstract

Sposób wytwarzania skokowego gradientu składu eluentu w chromatografii cienkowarstwowej przez wprowadzenie frakcji eluentu o rosnącej zawartości składnika modyfikującego pod dystrybutor po wchłonięciu poprzedniej frakcji przez warstwę adsorbentu, znamienny tym, ze przeznaczone do elucji gradientowej rozpuszczalniki, umieszcza się w probówkach, których liczba jest równa liczbie stopni gradientu, po czym określone porcje tych rozpuszczalników zasysa się, do spiralnie płasko zwiniętej cienkiej rurki umieszczonej poniżej poziomu dystrybutora o 0,5-5 mm, a następnie wylot spirali wprowadza się do warstwy adsorbentu i kolejnymi porcjami rozpuszczalnika kontynuuje się rozwijanie chromatogramu. 2. Urządzenie do wytwarzania skokowego gradientu składu eluentu w chromatografu cienkowarstwowej, posiadające komorę chromatograficzną z dystrybutorem eluentu oraz zestaw doprowadzający eluent, znamienny tym, że zestaw doprowadzający eluent stanowi płaska spirala (6) wykonana z cienkiej rurki z materiału chemoodpornego, której końce zagięte są, korzystnie pod kątem prostym oraz strzykawka (8) 1 zestaw probówek (1-5), których liczba jest równa liczbie stopni gradientu.

Description

Przedmiotem wynalazku Jest sposób i urządzenie do wytwarzania skokowego gradientu składu el^uentu w cłroαmtogΓ8tfi cienkoearstegweJ, mmaący szczególne zastosowanie w analizie chΓgmmtoggβticznjj złożonych z wielosktadnigoeycł mieszanin. Jak na przykład ekstrakty roślinne.

Dotychczasowe prace ^^t^^as^ay, że elucja gradientowa, ciągła lub skokowa, znacznie zwiększają rozdzielczość układu cłrommtoggaficznegg, niejednokrotnie podwwaając liczbę rozdzielonych pasm.

Znane sposoby wytwarzania skokowego gradientu składu eluentu w komorze typu sandwicz z dystrybutorem, najczęściej polegają na wprowadzaniu frakcji jluentu o rosnącej zawartości bardziej polarnego składnika, mikroplpetą bezpośrednio pod dystrybutor, po wchłonięciu poprzedniej frakcji przez warstwę adsorbentu /G.Matysik, E.Soczewihski, □ .Chroma^ę^^. 369,19.19866. Metoda ta jest czasochłonna, gdyż wymaga obserweail komory i okresowego wprowadzania el^uentu mikroplpetą. Gradient skokowy można też osiągnąć w aparaturze automatycznej opisanej przez DcEOSnchena /nnstuumental HPTLC, 3 rd Internationa! Sympooium, Wurzburg 1985, p.71, Inst.of Chrommaograptiy, Bad Ourkheim/1985· zajada pracy tej aparatury polega na okresowym napełnianiu elueniem koryta, w którym Jest zanurzona krawędź płytki z rozwijanym chromatogemmem 1 suszeniu płytki, po czym następuje każdorazowo napełnianie nowym ilujn^m. Innym sposobem zastosowanym po raz pierwszy przez ^^jder^^esera 1 Honeggera /Helv·Chem.Aita 48, 893, 1965/ jest *oagazynoweniJ^a serii frakcji jluentu w cienkiej rurce, do której wprowadza się frakcje ilujmu. Zastosowana rurka posiada keztałt helisy /linii śrubowwj/· Sposób ten stosowany do nagazynowenla eluentu o zmiennym składzie /gradient ciągły lub skokowy/ w przypadku komór płaskich, na przykład typu sai^»^e^^₁ powoduj trudności w regułami szybkości dopływu jl^uentu do komooy. Szybkość ta początkowo ainna być większe, a następniespadać.

161 007

Wynalazek rozwiązuje zagadnienie generacji gradientu skokowego w czasie rozwijania chromatografu, baz konieczności kona roli wizualnej przebiegu proceeu, zapewnnając mmoliwość równoległego stosowania kilku komór chroaatoggeficzaych oraz automatyczną regulacja szybkości dopływu eluentu do komory.

Istota sposobu według wynalazku polega na tym, że przeznaczone do alucji gradientowej rr2puuzccztnaki umieszcza się w probówkach, których liczba Jeet równa liczbie stopni gradientu, po czym określone porcje tych rozpuszczalników o rosnącej zawartości składnika moolyfikującego zśsysa się, do spiralnie płasko zwiniętej cienkiej rurki umieszczonej poniżej poziomu dystrybutora o 0,5 - 5 mm, a następnie wylot spirali wprowadza się do warstwy adsorbentu i kolejnymi porcjami rozpuszczalnika kontynuuje się rozwijanie chromatogremu.

Główną zaletę sposobu według wynalazku Jest mooliwość stosowania dowolnego programu gradientu skokowego oraz automatycznie dozowania poszczególnych frakcji pod dystrybutor komory santtoicz z szybkością określoną przez szybkość wchłaniania eluentu przez warstwę o adsorbentu· Zużycie rozpuszczalników jest minimalne i wynosi około 2 em dla cienkich warstw o wymiarach 0,3 x 100 x 200 mm. W kapilarnej spirali można także przechowywać eluent o gradiencie cięgłym.

Przedmiotem wynalazku jest ponadto urzędzenie do wytwaazenia gradientu skokowego składu eluentu w jhrommtorΓatii cienkowarstwowej.

Zasadniczymi elementami urzędzania do wytwarzania gradientu składu eluentu w chrommtorΓatfi cienkowarstwowej Jest komora typu sąndwicz z dystrybutorem eluentu oraz zestaw generujęcy gradient składu eluentu. Z najczęściej spotykanych komór należy wyCenić komorę typu sant^^z z dwuudielną płytę przykrywaJęcą,, zaopatrzoną w syfon oraz rurkę doprowadzającą eluent za pośrednictwem szklanego dystrybutora, co znane jest z polskiego opisu patentowego nr 103 834. Niedogodnością zestawu Jest przede wszystkie konieczność przygotowywania frakcji eluentu w probówkach szklanych ze szczelnymi korkami na szlifie.

Będące przedmiotem wynalazku urządzenie posiada komorę chrommtorgaticznę, korzystnie płaską typu tanywijz z dystrybutorem eluentu oraz zastaw doi^^oi^^^^i^^ący eluent, składający się z płaskiej rurki z mitθriąłu chemoodpornego zwiniętej spiralnie, której końce zagięte są korzystnie pod kątem prostym, co ummożiwia wylotu rurki do otworu płytki przykrywającej komorę oraz połączenie wlotu rurki ze strzykawką. Ponadto w skład zestawu doprowadzającego eluent strzykawka oraz probówki ze szlifami, których liczba

Jest równa liczbie stopni gradientu, a objętość uzależniona jest od lcczebności doświadczeń wykonywanych z danym progammem gradientu.

Hynalązak w przykładzie wykonania przedstawiony jest na rysunku, na którym fig.l pokazuje zastaw doprowaddający eluent w trakcie napełniania, a fig.2 pokazuje zestaw połączony z komorą chroβitorratijznę. Oak uwidoczniono na flg.l, spiralę 6 ^^t^wr^i.ętą na płaski krążek 7 napełnia się z serii pięciu probówek 1-5. ΝθροΙπΙ^Ιι odbywa się przez zasysanie strzykawką 8, połączoną z drugim końcem spirali. Frakcje eluentu zasysa się z kolejnych probówek zaczynając od frakcji o najwyższej sile elucyjnej/poobówkaS/. Koniec spiral.! połączony jest z krótką zagiętą pod kątem prostym stalową rurką 9. Po napełnieniu pięjromą frakcjami spirali 6, Jej wylot wprowadza się przez otwór w płytce przykrywkowej do komory łaa(Moz w ten sposób, że stąrowa końcówka 9 styka się z dystrybutorem 10 pod płytkę przykrywkową co uwidoczniono na flg<>2. Poziom spirali 6 Jest o 4 mm niższy od poziomu dystrybutora

10. Wytwetzająj nadciśnienie na drugim końcu spirali 6 zapoczątkowuje się rozwijanie chromatogromu, po czym odłącza się strzykawkę. Oako pierwsza wprowadzana Jest pod dystrybutor frakcja z probówki 1. Po Jej wyczerpaniu wprowadzone zostają następne frakcje. Proces Jest automatyczny i nie wymaga ob3onwaaji i konnroli przebiegu, dlatego mooliwe Jest równoległe obsługa kilku przyrządów. Zużycie rozpuszczalnków jeet bardzo niskie.

Wynnlazek zostanie dodatkowo objaśniony na przykładzie wykonnana.

Przykład I. Analizowano frakcję preparatu farmaceutycznego ^ulenu /olejku rumiankoweegr. Próbkę płynu odparowano do sucha i rozpuszczono pozostałość w octanie etylu, przesączono, wysuszono 1 sporządzono roztwór w octanie etylu o stężeniu 0,5% w/v. Zastosowano cienką warstwę żelu krzemionkowego. Oo spirali z polltłtΓaflroooetyłenu /Teflon/

161 007 o średnicy wewnętrznej 1 mm i długości 3 m zasysano kolejno strzykawkę z serii 5 probówek ze szlifem /fig.l/ 0,4 ml porcje roztwór octanu etylu w chloroformie o stężeniach 90%,

50%, 20%, 10% i 5%. Pod dystrybutor komory do płytek 100 x 200 mm wprowadzono mikropipetę 0,4 ml 5% roztwór octanu etylu i po Jego wchłonięciu przez adsorbent naniesiono 5 ą1 próbki ekstraktu Azulanu. Następnie zastosowano skokowę pięcioetapowę elucję gradientowy przez wprowadzenie wylotu kapilary do otworu w przykrywce komory sandwicz i wytworzenie strzykawkę nadciśnienia w spiral! w celu uzyskania pomęczenia syfonowego między spiralę znajdujęcę się o 4 mm poniżej poziomu dystrybutora, a szczelinę pod dystrybutorem, Elucja przebiegała autommaycznle, a po jej zapoczętkowaniu wyjęto igłę strzykawki z kapilary, aby zapewnić wyrównnnie ciśnienia. Stwierdzono bardzo dobre rozdzielenia składników ekstraktu, znacznie lepsze niż przy elucji rozpuszczalnikami o stałym składzie.

Przykład 11, Do analizy szeregu homotogicznego ftaaanów dialkiowwych zastosowano Jako adsorbent silanioowany żel krzemionkowy i pięć frakcji eluentu ttaaowięce» go wodna roztwory mstanolu o stężeniach 60, 70, 80, 90% w/v oraz czysty ιτΐοηο^ Postępowano jak w przykładzie 1, Uzyskano dobra rozdzielania homologów 1 korzystne rozmieszczenie na chromaaogramie.

Przykład 111, Sposób według przykładu 11 uproszczono przez dozowanie frakcji eluantu mikropipetę wprost do spirali, Uzyskano ten sam wynik co w przykładzie II.

Przykład IV, Uzyskano gradient cięgły w następujęcy sposób, Wylot spiral3 3 nej kapilary zanurzono w naczyńku o pojemności 5 cm , z mieszadłem za^^eraj^^^^a i cm 10C% octanu etylu, Oo naczyńka wprowadzano z mikropipaty chloroform, Jednocześnie zasysajęc rozpuszczalnik z naczyńka do spiralnej kapilary za pomocę strzykawkk, Profl gradientu zależy od objętości poczętkowej octanu etylu, szybkości dozowania chloroformu i szybkości zasysania do spirali, Przy rozwijaniu chrOmatogramu uzyskano i^nn^ analogiczne Jak w przykładzie II i III.

Fig 1

Zakład Wydawnictw UP RP. Nakład 90 egz. Cena 10 000 zł

Claims

Zastrzeżenie patentowe

1· Sposób wytwarzania skokowego gradientu składu eluentu w chromatografii cienkowarstwowej przez wprowadzenie frakcji elementu o rosnącej zawartości składnika modyfikującego pod dystrybutor po wchłonięciu poprzedniej frakcji przez warstwę adsorbentu. znamienny tym, że przeznaczone do elucji gradientowej rozpuuszczaniki, umieszcza się w probówkach, których liczba Jest równa liczbie stopni gradientu, po czym określone porcje tycł rozpuszczalników zasysa się, do spiralnie płasko zwiniętej cienkiej rurki umieszczonej poniżej poziomu dystrybutora o 0,5 - 5 mm, a następnie wylot spirali wprowadza się do warstwy adsorbentu i kolejnymi porcjami rozpuszczalnika kontynuuje się rozwijanie cłromatogramu.
2. Urządzenie do wytwarzania skokowego gradientu składu eluentu w cłromatoggafii cienkowarstwowej, posiadające komorę chrgmmtograficzną z dystrybutorem eluentu oraz zestaw doprowadzający eluent, znamienny tym, że zestaw doprowadzający el^uent stanowi płaska spirala /6/ wykonana z cienkiej rurki z osad^ału której końce zagięte są, korzystnie pod kątem prostym oraz strzykawka /8/ i zestaw probówek /1-5/, których liczba Jest równa liczbie stopni gradientu.