Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarza¬ nia nowego antybiotyku oznaczonego symbolem 6270, stosowanego zwlaszcza jako srodek przyspie¬ szajacy wzrost i zwiekszajacy efektywnosc wyko¬ rzystania pokarmu zwierzat domowych i ptactwa.Wyizolowano szereg drobnoustrojów z róznych próbek gleby poszukujac nowych antybiotyków i badano antybiotyki wytwarzane przez wyizolo¬ wane drobnoustroje. W wyniku tych badan stwier¬ dzono, ze gdy drobnoustrój nalezacy do rodzaju Nocardiopsis, wyizolowany z próbki gleby pobranej w miescie Abashiri, na wyspie Hokkaido w Ja¬ ponii, hoduje sie w odpowiedniej pozywce hodow¬ lanej, to w pozywce tej gromadzi sie antybiotyk wykazujacy wysoka aktywnosc przeciwabkteryjna wobec bakterii Gram-dodatnich. Antybiotyk ten wyizolowano i zbadano jego wlasciwosci fizyko¬ chemiczne i biologiczne, co potwierdzilo, ze jest on nowym antybiotykiem, który nazwano antybioty¬ kiem 6270.Wynalazek opiera sie na tym odkryciu i dotyczy sposobu wytwarzania nowego antybiotyku 6270.Sposób wedlug wynalazku polega na hodowaniu drobnoustroju FERM BP-717 wytwarzajacego no¬ wy antybiotyk, nalezacego do rodzaju Nocardiop¬ sis i nastepnie wyodrebnianiu antybiotyku 6270 z hodowli.Nowy antybiotyk stosuje sie w postaci srodka przeciw kokcydiozie zawierajacy jako substancje czynna antybiotyk 6270. Srodek ten zapobiega i le- 10 15 so czy kokcydioze u domowych zwierzat i drobiu pod¬ czas podawania im skutecznej ilosci tego antybio¬ tyku.Srodek przyspieszajacy wzrost i zwiekszajacy efektywnosc wykorzystywania pokarmu domowych zwierzat i drobiu, zawiera antybiotyk 6270 jako substancje czynna. Srodek ten przyspiesza wzrost domowych zwierzat i drobiu i zwieksza efektyw¬ nosci karmienia podczas podawania skutecznej ilo¬ sci antybiotyku 6270. Skuteczna ilosc antybiotyku 6270, wynosi zwykle 0,5—200 ppm, korzystnie 1—100 ppm.Ponizej przedstawiono szczególowy opis wynalaz¬ ku z uwzglednieniem jego korzystnych aspektów.Na zalaczonym rysunku 1 przedstawiono widmo absorpcyjne^w podczerwieni antybiotyku 6270, wy¬ konane w tabletce z bromku potasowego. Rysunek 2 przedstawia widmo PMR antybiotyku 6270, wyko¬ nane w deuterochloroformie z zastosowaniem czte- rometylosilanu jako wewnetrznego wzorca. Rysu¬ nek 3 przedstawia widmo i^C-NMR antybiotyku 6270, wykonane w deuterochloroformie z zastoso¬ waniem czterometylosilanu jak wewnetrznego wzorca.Drobnoustrojem wykorzystywanym do wytwarza¬ nia antybiotyku 6270 moze byc dowolny drobno¬ ustrój nalezacy do rodzaju Nocardiopsis o ile tyl¬ ko jest zdolny do wytwarzania tego antybiotyku.Korzystnie jednak stosuje sie szczep Nocardiopsis 147 419147 419 ^ sp. 6270 zdeponowany w Fermentation Research ^Jnstitute w Japonii jako FERM BP-717.Sz^ae^Nocardiopsis sp. 6270 stosowany w spo¬ sobie A^otu*^ wynalazku posiada rozgaleziona grzybnie i ^griybcie B. powietrzna rozczlonkowana i tworzaca dlugie laffcuchy zarodników. W hydro¬ lizacie calych komórek wykryto kwas mezadwuami- nopimelinowy oraz galaktoze i ryboze jako sklad¬ niki cukrowe. Nie wykryto natomiast arafbinozy i madurozy, a takze kwasu mykolonowego. Kompo¬ zycja menachinonowa zawiera MK-9 (H6) i (Ha) jako glówne skladniki, a MiK-9 (H4) jako skladnik sladowy. Szerokosc grzybni podstawowej wynosi okolo 0,5 fum. Na podstawie tej charakterystyki szczep 6270 zakwalifikowano jako nalezacy do ro¬ dzaju Nocardiopsis (promieniowce). Szczep Nocar- diopsis sp. 6270 ma nastepujace wlasciwosci mikro¬ biologiczne.I. Charakterystyka morfologiczna. Grzybnia pod¬ stawowa jest dobrze rozwinieta i rozgaleziona, o szerokosci okolo 0,4 \nn. Grzybnia powietrzna jest dobrze rozwinieta w niektórych pozywkach, takich jak agar sacharozowo-azotanowy (rozpusz¬ czalny agar Czapek'a, Difco), agar skrobiowy (ISP-4, agar skrobiowy z solami nieorganicznymi, Difco), agar owsiany (ISP-8), lub agar glukozowo- asparaginowy. Grzybnia powietrzna jest prosta lub zakrzywiona i tworzy w calosci pajeczyne. Dojrzala grzybnia powietrzna ma szerokosc od 0,4 do 0,6 jjtm.Po uplywie 10 dni od rozpoczecia hodowania grzyb¬ nia powietrzna ulega fermentacji i tworzy dlugie lancuchy zarodników, kazdy po co najmniej 10 za¬ rodników. Lancuchy zarodników nie sa spiralne.Powierzchnia zarodników jest gladka, a ksztalt cy¬ lindryczny. Wielkosc okolo 0,4 X 1,2 jim. Nie zaob¬ serwowano zarodni, przetrwalnika i zrosniecia.II. Charakterystyka hodowlana. Testy przepro¬ wadzono metoda opisana przez E. B. Shirlinga i wsp. w International Journal of Systematic Bac- teriology, 16, 313-340 (1966). Dodatkowo stosowano znane pozywki i metody testowania.Barwe oznaczano w swietle standardowej lampy ksenonowej i odnoszono do standardów barw w Color Harmony Manual, wydanie 3, 1958. Po od¬ nalezieniu w tablicy odpowiadajacej barwy poda¬ wano najpierw jej zwykla nazwe, a nastepnie w na¬ wiasach kod tej barwy. Gdy taka sama barwa powtarzala sie podawano tylko kod.Ponizej przedstawiono dane dotyczace, o ile nie wskazano inaczej, hodowli plytkowej na agarze, prowadzonej w ciagu trzech tygodni w tempera¬ turze 28°C. (1) Pozywka sacharozowo-azotanowa (agar roz¬ puszczalnik Czapek^, (Difco) a. Wzrost dobry, barwa bliska szarej (2ba). b. Grzybnia powietrzna proszkowata, biala. c. Brak rozpuszczalnego pigmentu. (2) Pozywka glukozowo-asparaginowa a. Wzrost dobry, barwa jasnobursztynowa (3ic) do bezowej (3ge). b. Grzybnia powietrzna o barwie bliskiej szarej Oba). c. Brak rozpuszczalnego pigmentu. (3) Pozywka glicerynowo-asparaginowa a. Wzrost slaby, (2ba). b. Grzybnia powietrzna malo uformowana. c. Brak rozpuszczalnego pigmentu. (4) Agar skrobiowy a. Wzrost doskonaly, (3ic) do gliniastej (3ca). 5 b. Grzybnia powietrzna proszkowata, biala. c. Brak rozpuszczalnego pigmentu. d. Skrobia nie ulega hydrolizie. (5) Agar tyrozynowy a. Wzrost slaby, (3ge). w b. Brak grzybni powietrznej. c. Brak rozpuszczalnego pigmentu. (6) Agar odzywczy (agar odzywczy Bacto, Difco). a. Wzrost slaby, barwa jasnopszeniczna (2ea). b. Brak grzybni powietrznej. 15 c. Brak rozpuszczalnego pigmentu. (7) Agar drozdzowy z wyciagiem slodowym a. Wzrost doskonaly, popekany, barwa topazo- wa (3ne). b. Grzybnia powietrzna biala.M c. Brak rozpuszczalnego pigmentu. (8) Agar owsiany a. Wzrost dobry, barwa orzechowa (2ca). b. Grzybnia powietrzna 2ba. c. Brak rozpuszczalnego pigmentu.* III. Charakterystyka fizjologiczna (1) Zakres temperatury wzrostu (skosy z agarem skrobiowym, w inkubatorze w gradiencie tempera¬ tury): 6,5—38°C; nie obserwowano wzrostu ponizej 5°C lufo powyzej 39,5°C; optymalna temperatura M 27^38°C. (2) Uplynnianie pozywki glukozowo-peptonowo- -zelatynowej: uplynnia. <3) Hydroliza skrobi: nie hydrolizuje. (4) Koagulacja i peptonizacja zbieranego mleka: » nie koaguluje, a znacznie peptonizuje (37°C). (5) Wytwarzanie melaminy: nie jest wytwarzana na agarze tyrozynowym ISP, pozywce tryptonowej z wyciagiem drozdzowym ISP, oraz pozywce z pep¬ tonem, drozdzami i agarem zelazowym. 40 (6) Tolerancja na chlorek sodowy: brak wzrostu przy stezeniu 4% lub wyzszym. {7) Nie rozpuszczana jest ksantyna, hypoksanty- na i adenina.IV. Przyswajanie zródel wegla (podstawowa po- 46 zywka Pridhama i Gottliefoa): przyswajane: D-glukoza, L-arabinowa, D-ksyloza, salicylina; slabo przyswajane: D-fruktoza i sacharoza; nie przyswajane: inozytol, L-ramnoza, rafinoza, 50 D-mannitol.Szczep 6270 zidentyfikowano jako szczep naleza¬ cy do Nocardiopsis Meyer 1976 (promieniowce), gdyz miedzy innymi tworzy dlugie lancuchy zarod¬ ników w grzybni powietrznej, a hydrolizat calych 59 komórek zawiera kwas mezodwuamkiopimelinowy i galaktoze, ale nie zawiera arabinozy i madurozy i takze nie wykrywa sie kwasu mykolonowego.W sposobie wedlug wynalazku, drobnoustrój wy¬ twarzajacy antybiotyk 6270 moze byc hodowany w zgodnie z rutynowymi metodami hodowania zna¬ nych promieniowców.Z przemyslowego punktu widzenia korzystne jest jednak stosowanie hodowli z napowietrzaniem i mieszaniem. Jako pozywke produkcyjna mozna tu 6* stosowac surowce powszechnie stosowane w ho-147 419 6 dowli promieniowców. Mozna wiec stosowac od¬ powiednia kombinacje róznych zródel wegla i azo¬ tu oraz soli organicznych i nieorganicznych a tak¬ ze, w razie potrzeby, srodka przeciwpiennego.Np., jako zródlo wegla mozna stosowac glukoze, skrobie, gliceryne, dekstryne, sacharoze oraz oleje zwierzece i roslinne. Jako zródlo azotu moz¬ na wykorzystywac make sojowa, wyciag namoko- wy, kukurydze, zarodniki pszenicy i amoniak.Ponadto, mozna w razie potrzeby dodawac sole nieorganiczne, takie jak weglan wapniowy, chlo¬ rek sodowy, chlorek potasowy i fosforany. Mozliwe jest tez dodawanie soli organicznych lu-b nieorga¬ nicznych wspomagajacych wzrost drobnoustroju i tym samym ulatwiajacych wytwarzanie antybio¬ tyku 6270. Temperatura, w jakiej prowadzi sie ho¬ dowle wynosi zwykle od 25 do 35°C, korzystnie okolo 30°C. Czas fermentacji zalezy od róznych czynników, na ogól jednak maksymalne wytwa¬ rzanie antybiotyku 6270 zachodzi w czasie od 72 do 148 godziny.Antybiotyk 6270 mozna wyodrebniac z brzeczki i oczyszczac wykorzystujac jego wlasciwosci fizyko¬ chemiczne i stosujac typowe sposoby, takie jak wykorzystanie róznicy rozpuszczalnosci miedzy nim i zanieczyszczeniami, wykorzystanie róznicy w ad¬ sorpcji na zywicach jonowymiennych lub innych materialach adsorbujacych, ekstrakcja rozpuszczal¬ nikami organicznymi nie mieszajacymi sie z woda, albo stosujac kombinacje róznych metod, np. wy¬ tracanie, usuwanie zanieczyszczen, dializa, susze¬ nie i rekrystalizacja.Przykladowo, antybiotyk 6270 obecny w brzeczce fermentacyjnej mozna korzystnie odzyskiwac w nastepujacy sposób. Do brzeczki dodaje sie pomoc filtracyjna, taka jak ziemia okrzemkowa lub Ra- diolite 700, saczy sie i przesacz i komórki ekstra¬ huje sie odpowiednim rozpuszczalnikiem, np. od¬ powiednio octanem etylu i acetonem. Oba ekstrak¬ ty laczy sie, odparowuje rozpuszczalnik i otrzymuje sie antybiotyk 6270 w postaci surowego krystalicz¬ nego osadu, który poddaje sie np. chromatografii.Eluat zateza sie pod zmniejszonym cisnieniem, po¬ zostalosc rozpuszcza sie w odpowiednim rozpusz¬ czalniku, takim jak ootan etylu, i ekstrahuje roz¬ cienczonym kwasem solnym. Warstwe organiczna zateza sie i otrzymuje krystaliczny antybiotyk 6270 w postaci wolnego kwasu.W celu otrzymania soli sodowej powyzsza war¬ stwe organiczna traktowana rozcienczonym kwa¬ sem solnym traktuje sie rozcienczonym roztworem weglanu sodowego, roztwór organiczny zateza sie i otrzymuje sól sodowa antybiotyku 6270. Wolny kwas lub sól sodowa antybiotyku mozna rekrysta- lizowac z odpowiedniego rozpuszczalnika, takiego jak mieszanina n-heksanu i octanu etylu, i otrzy¬ mywac czysty krystaliczny produkt. Otrzymany wolny kwas antybiotyku 6270 ma nastepujace wlasciwosci. (1) Substancja o charakterze kwasu w postaci bezbarwnych iglastych krysztalów. (2) Temperatura topnienia 115—118°C. (3) Analiza elementarna: znaleziono: C — 62,72%, H —9,49%, 0 — 27,78%. [a]^= -11,5° (c = 1,0, 10 15 20 ao 35 40 46 50 55 60 (4) Skrecalnosc wlasciwa metanol. (5) Widmo absorpcyjne w nadfiolecie: nie obser¬ wuje sie pasm absorpcji przy 210 nm lub powyzej w roztworze metanolowym. (6) Widmo absorpcyjne w podczerwieni w tablet¬ kach KBr: 3470, 2980, 2945, 2890, 1735, 1460, 1380, 1315, 1165, 1102, 1075, 987, 980 cm-1. (7) Rozpuszczalnosc: rozpuszczalny w metanolu, etanolu, octanie etylu, chloroformie, eterze etylo¬ wym, acetonie i benzenie; nierozpuszczalny w wo¬ dzie. (8) Reakcje barwne: pozytywna reakcja z wani¬ lina i kwasem siarkowym oraz reakcja Dragen- dorffa, negatywna reakcja ninhydrynowa; barwa w reakcji z parami jodu. (9) Chromatografia cienkowarstwowa na zelu krzemionkowym GF254 (Merck Co.): Uklad rozwijajacy chloroform-metanol 20:1 n-heksan-octan etylu 1:1 benzen-octan etylu 1:1 benzen-aceton 1:1 chloroform-aceton 2:1 n-heksan-octan etylu 1:3 octan etylu (10) Widmo PMR: stwierdzono Wartosc RF 0,49 0,08 0,04 0,53 0,36 0,13 0,22 obecnosc trzech grup metoksylowych przy 3,39(3H) i 3,49(6H) ppm, w widmie wykonanym przy 100 MHz w deutero- chloroformie, z zastosowaniem jako wzorca we- wnetrznego czterometylosdlanu (rysunek 2). (11) Widmo 13C-NMR: widmo przyz 25 MHz w deuterochloroformie z czterometylosilanem jako wzorcem wewnetrznym pokazano na rysunku 3.Zgodnie z otrzymanymi wynikami calkowita ilosc atomów wegla wynosi 44. (12) Widmo przeciwbakteryjne przedstawiono w tablicy 1.Tablica 1 1 Testowany drobnoustrój Bacillus cereus IAM-1729 Bacillus circulans IFO 3329 Bacillus subtilis PCI 219 Micrococcus flavus IFO 32*2 Sarcina lutea NIHJ Staphylococcus aureus FDA209P JC-1 Staphylococcus aureus (opor¬ ny na penicyline, strepto¬ mycyne, chloromfenikol, te- tracykline i kanamycyne) Escherichia coli NIHJ\ JC-2 Escherichia coli (oporny na streptomycyne, kanamycy¬ ne, chloramfenikol i tetra- cykline) Klebsiella pneumoniae PCI 602 Proteus vuslgaris OX-19 Najmniejsze stezenie hamujace (imcg/imli) 1,56 1,56 6,25 1,56 3,13 6,25 6,25 100 100 100 100 Po¬ zyw¬ ka ho- dow- lana a a a a a a a a a a a147 419 Testowany drobnoustrój Pseudomonas aeruginosa IFO-3756 Mycobacterium smegmatis ATCC 607 Mycobacterium avium IFO-3153 Mycobacterium phlei HIHJ Penicilium chrysogenum Q-176 Aspergillus flavus ATCC 9643 Cochliobolus miyabeanus Alternaria mari Candida albicans YU 1200 Saccaromyces cerevisiae szczep 77 1 cd. tablicy 1 Najmniejsze stezenie hamujace (mcg/imil) 1 100 1,56 1,56 3,13 100 100 12,5 50 100 ioo 1 1 Po~ zyw- ka ho¬ dow¬ lana a b b b c c c c | c c Uwagi: a — pozywka hodowlana z agarem odzywczym, b — agar odzywczy z gliceryna, c — agar ziemniaczano-sacharozowy.Na podstawie powyzszej charakterystyki fizyko¬ chemicznej i biologicznej stwierdzono, ze zwiazek nalezy do ogólnej klasy antybiotyków zwanymi polieterowymi.Na podstawie widma PMR stwierdzono, ze sub¬ stancja posiada w czasteczce trzy grupy metoksy- lowe. Ze znanych antybiotyków posiadajacych trzy grupy metoksylowe w jednej czasteczce mozna wy¬ mienic nastepujace antybiotyki poiieterowe: C20-12 (japonska niebadana publikacja patento¬ wa nr 53919/1983), A-204B (Handbook of Microbiology tom 3, 410? CRC Press), T-42082 (japonska niebadana publikacja patento¬ wa nr 79730/1976), T-40517 (japonska niebadana publikacja patento¬ wa nr 10581/1975, 38295 (japonska niebadana pub¬ likacja patentowa nr 125793/1976), nr 6016 (japon¬ ska niebadana publikacja patentowa nr 84576/1979), X - 14868C (japonska niebadana publikacja patento¬ wa nr 120696/1981), CP-47433 (jajonska niebadania publikacja patentowa nr 154108/1982), 47434 (ja¬ ponska niebadana publikacja patentowa nr 154187/ ,71982 oraz LL-C23O240 (japonska niebadania publi¬ kacja patentowa nr 78598/1983).Antybiotyk 6270 rózni sie jednak od tych zna¬ nych substancji pod wzgledem temperatury topnie¬ nia, skrecalnosci wlasciwej, analizy elementarnej |[ widma absorpcyjnego w podczerwieni, i jest wy- jraznie nowym antybiotykiem.Antybiotyk 6270 wykazuje szczególnie silne dzia¬ lanie przeciwbakteryjne wobec bakterii Gramm-do- jdatnich i jest' uzyteczny jako czynnik przeciwbak- ieryjny.I Ponadto, antybiotyk wykazuje aktywnosc prze- piwkokcydiozowa, roztoczobójcza i przeciwwiruso- wa wolskich stezeniach i jest stosowany jako sro- ' 10 15 25 30 40 45 50 55 dek przeciw kokcydiozie u drobiu domowego, ta¬ kiego jak kurczeta, przepiórki, kaczki, gesi i indy¬ ki, i u domowych zwierzat, takich jak bydlo, swi¬ nie, króliki, bawoly, kozy i owce, jako srodek do leczenia biegunek u zwierzat domowych lub jako srodek zwiekszajacy efektywnosc wykorzystywania pokarmu lub przyspieszajacy wzrost zwierzat ho¬ dowlanych i drobiu.Ponizej przedstawiono testy ilustrujace wlasci¬ wosci antybiotyku wytwarzanego sposobem wed¬ lug wynalazku.Test na aktywnosc przeciwkokcydiozowa Antybiotyk ,6270 zmieszano jednorodnie z mie¬ szanka paszowa dla kurczat (wytwarzana przez Oriental Yeast Co.) i otrzymano mieszanke o usta¬ lonym stezeniu antybiotyku. Mieszanka powyzsza karmiono kurczeta w dowolnych ilosciach poczy¬ najac od dwóch dni po zakazeniu oocytami do kon¬ ca testu (osiem dni po zakazeniu).Jako srodek porównawczy stosowano monensyne, znany srodek przeciw kokcydiozie.Stosowane kurczeta byly zdrowymi kogucikami pochodzacymi od niosek (Shever Starcross) w wie¬ ku 7 dni (9 dni w chwili zakazenia), hodowanymi w warunkach pelnej prewencji przed kokcydioza.Kazda grupa skladala sie z pieciu kurczat.Do zakazenia stosowano oocyty wrazliwego szcze¬ pu Eimeria tenella. Kazdy kurczak byl zakazony do wola dojrzalymi oocytami (3 X 104), doustnie lub za pomoca metalowej sondy.Skutecznosc dzialania srodków okreslano wyli¬ czajac z ponizszego wzoru indeks przeciwkokcydio- zowy (ACI): ACI = (wzgledny przyrost ciezaru + procent przezycia) — (ilosc oocytów + wielkosc choroby); 120 lub mniej: brak efektywnosci przeciwkokcy- diozowej; 160 lub mniej: mala efektywnosc przeciwkokcy¬ diozowa; 160—180: umiarkowana efektywnosc przeciwko¬ kcydiozowa; 180 lub wiecej: wyjatkowo wysoka efektywnosc przeciwkokcydiozowa.Po zakonczeniu testu oznaczano przyrost ciezaTU w kazdej grupie, to znaczy róznice pomiedzy cieza¬ rem po zakonczeniu testu i ciezarem podczas za¬ kazania. Wzgledny przyrost ciezaru obliczano w od¬ niesieniu do ciezaru grupy kontrolnej (100) kar¬ mionej pokarmem nie zawierajacym srodka prze¬ ciw kokcydiozie i nie zakazanej.Ilosc oocytów w jelicie slepym obliczano po uplywie osmiu dni od zakazenia homogenizujac ka¬ nal jelitowy.Indeks oocytów okreslano nastepujaco: Ilosc oocytów znalezionych w kanale jelitowym Indeks oocytowy 80 0,0— 0,1 X108 o 0,1 — 1,0 X108 1 1,0— 5,0X10« 10 5,0 —11,0X10« 20 11,0 X,10* 40 Testowane kurczeta po zakonczeniu testu (8 dni po zakazeniu) poddano sekcji i badano kanal jeli¬ towy golym okiem w celu ustalenia indeksu cno-147 419 10 es CC ?—' o < H» 0) -w O ,Q r2 'cC cC £ W) o £ O O »-. -*j o ••-» co 0) T3 I-H 1 + + + + + + + + + + In- leks ocy- owy u o +» -o vc/1 - .2 cc g CD O o) Cfl 7^ # n 9 u CVN * wego kalu losc krwa »—i .^ co .5 73 • i-H T3 CD C! t3 73 Przy¬ rost iezaru (%) o 1 "? 131 Q 3 ntybiotyk < £« O 1 °~ in~ LO l—1 CO o o o lO o o l—1 co o i-H X cn lO^ csf o o 1 + + + + + + + + o^ irf 05 C0^ co" O tr¬ el co i-H CO^ Tl^ t^ l—1 i-i O CO CN O o o l—1 eo O X o ^1 csf o o 1 1 + + + 1 cp. cef 05 csf l-H O CO CN ©^ C-~ Ol i—i «o CO o o o o co O 1—1 X ^ T-T o o | 1 1 1 1 o^ eo o i-i m CM o c^ co CO «^ csT lO i-H SI o o TJH l—1 o o CN eo O i-H X co ©^ r-~ O O r + + + + + + ^ l-T o i-i o 00 cC (U SU o 2 *¦ o^ o" o O lO o o o o o ©- o o 1 + + + + + + + + + + + t-^ t-" co o ~ §2 o S •N CC CC f£ !i CO t. s m 1 1 1 1 1 °" o" o i-H o cC 1 CC 3 2 co cC 44 o krwaweg M Bra 1 3 cC o tu CU £ CC £ niz 10% '57 Mni + aP 3 f o + + ^ g 1 o co + + + niz 50% a ar + + + +11 147 419 12 roby. Indeks choroby okreslono jak ponizej, a jak© wartosc wielkosci choroby przyjmowano wartosc indeksu pomnozona przez dziesiec. 0, <—) Jelito ma wyglad normalny, jesli znale¬ ziono krwawe plamki wówczas (—) zamienia sie na (+), 1, (+) Jelito ma normalny ksztalt. Zawartosc je¬ lita jest nieco plynna i zóltawa, stwierdza sie lek¬ kie nabrzmienie czesci sluzówki jelita, które jest bialawe. 2, (++) Jelito ma ogólnie normalny ksztalt.Stwierdza sie nabrzmienie na calej powierzchni sluzówki. W zawartosci nie stwierdza sie obecnosci krwi. Sluzówka jest nieco zóltawa i splowiala.Stwierdza sie obecnosc w sluzówce kilku bialych plamek nekrozowych lub plamek krwi. 3, <-F++) Jelito jest wyraznie pomarszczone, zmienione w ksztalcie i troche dluzsze niz odbyt¬ nica. Zawartosc jest zupelnie nienormalna i czesto wypelniona skoagulowana krwia lub bialoszara, podobna do sera, zwyrodniala trescia. Sciana jelita jest wyraznie nabrzmiala i latwo lamie sie i cza¬ sami wystepuja krwawe plamki. Choroba siega podstawy jelita, ale nie odbytnicy. 4, <+ + + +) Znaczne deformacje i pomarszczenia jelita. Ksztalt jelita przypomina kielbaske i nie jest ono dluzsze od odbytnicy. Choroba siega pra¬ wie do XU lub lU odbytnicy.Grupy 1 do 3 karmiono pokarmem zawierajacym okreslona ilosc antybiotyku 6270, poczawszy od dwóch dni przed zakazeniem oocytami. Grupe 4 karmiono pokarmem zawierajacym antybiotyk mo- nensyne jako zwiazek porównawczy. Grupa 5 jest zakazona, ale nie traktowana antybiotykiem grupa kontrolna zakazona oocytami i karmiona podsta- 10 15 20 25 30 35 wowa karma nie zawierajaca srodka przeciwkokcy- diozowego. Grupa 6 jest nde zakazona i nie trakto¬ wana grupa kontrolna.Z przedstawionych powyzej danych wynika w sposób oczywisty, ze antybiotyk 6270 wykazuje aktywnosc przeciwkokcydiozowa.Test na efektywnosc wykorzystywania pokarmu przez swinie.W tescie stosowano prosieta rasy Land, które karmiono nastepujacym pokarmem podstawowym. (a) W ciagu czterech tygodni od rozpoczecia testu 60% ziarn (kukurydza, pszenica, jeczmien), 15% wytloków sojowych, 15% pokarmu pochodzenia zwierzecego (mleko zbierane w proszku, maczka rybna) i 10% innych skladników (enzymy, weglan wapniowy, fosforan potasowy, chlorek sodowy, itp.).Cb) Od 4 do 12 tygodni 78% ziarna (kukurydza, sorgo, pszenica), 13% wy¬ tloków sojowych, 5% maczki rybnej i 4% innych skladników (weglan wapniowy, fosforan wapniowy, chlorek sodowy, itp).Pietnasci mlodych, 35-dniowych swin podzielono na trzy grupy, po piec sztuk w kazdej, tak by sredni ciezar w grupach byl praktycznie równy.Do pokarmu podstawowego dodano antybiotyk 6270 w dawkach odpowiednio 0, 12,5 i 25 ppm. Trzy girupy swin karmiono odpowiednim pokarmem w ciagu 12 tygodni, po czym obliczono ciezar ciala i zuzycie pokarmu.Ponadto, notowano calkowita ilosc dni, podczas których swinie cierpialy na biegunke w okresie czterech tygodni od rozpoczecia testu. Wyniki przedstawiono w tablicy 3.Tablica 3 1 Gru¬ pa 1 2 3 Ilosc antybio¬ tyku 6270 dodawa¬ nego do pokarmu (pprci) 12,5 25 0 Sredni ciezar na poczatku testu 8,20 8,18 8,23 Sredni przyrost ciezaru podczas testu (fcg) 45,82 48,30 43^73 Srednia ilosc pokarmu spozytego podczas testu (kg) 106,9 110,1 107,4 Indeks wyko¬ rzysta¬ nia pokar¬ mu* 2,333 2,280 2,456 Poprawa indeksu wyko¬ rzysta¬ nia pokar¬ mu** (%) 5,0 7,2 Calkowita ilosc dni l biegunka w kazdej grupie (calkowita ilosc dni trwania testu w kazdej grupie) 1 13/140 5/140 48/140 1 * Indeks wykorzystania pokarmu = Sredniailosc pokarmu spozytego podczas testu Sredni przyrost ciezaru podczas testu ** Poprawa indeksu Indeks wykorzystania pokarmu z dodatkiem wykorzystania antybiotyku 6270 pokarmu (% = ) 1 — Indeks wykorzystania pokarmu bez antybiotyku X 100147 419 13 Indeks wykorzystania pokarmu ulegl poprawie o 5 do 8% podczas podawania pokarmu zawieraja¬ cego antybiotyk 6270, a ciezar wzrósl o 5 do 11%.Ponadto obserwowano znaczne zmniejszenie wyste¬ powania u swin biegunki.Efektywnosc wykorzystania pokarmu u przezu¬ wajacych W tescie stosowano bukaty rasy Holstein, które karmiono koncentratem paszowym o nastepujacym skladzie: 10 71,5% ziarna (kukurydza, sorgo, jeczmien), 11,5% sieczki i otrab (bialko kukurydziane, otreby pszen¬ ne, papka z otrab ryzowych i oleju), 5,5% wytloków z roslin oleistych (wytloki sojowe, makuchy lniane) li 14 zaszczepiono 100 litrów pozywki hodowlanej o po¬ danym powyzej skladzie i hodowano w tempera¬ turze 30°C w ciagu 96 godzin, podczas mieszania i napowietrzania w fermentorze o pojemnosci 200 litrów. Napowietrzano 100 litrami powietrza na minute i mieszano przy 250 obrotach/minute.Nastepnie dodano pomocniczy srodek filtracyjny (Radiolite 700) i brzeczke saczona w celu oddziele¬ nia komórek. Przesacz ekstrahowano 40 litrami octanu etylu, a komórki 30 litrami acetonu. Eks¬ trakt acetonowy z komórek zatezwno pod zmniej¬ szonym cisnieniem w celu usuniecia acetonu i eks¬ trahowano 20 litrami octanu etylu. Ekstrakt po¬ wyzszy polaczono z ekstraktem z przesaczu i po¬ laczone roztwory zatezono pod zmniejszonym cis- Gru¬ pa 1 2 3 Ilosc antybiotyku 6270 dodanego do pokarmu (ppm) 7,5 15 0 Sredni ciezar iid poczatku testu (kg) 320 318 323 Tablica 4 Sredni przyrost ciezaru podczas testu (kg) 308 310 281 Srednia ilosc kon¬ centratu paszowego spozytego podczas testu (kg) 2310 23eo 2320 Indeks wy¬ korzystania koncentratu paszowego 7,500 7,613 8,256 Poprawa indeksu wy¬ korzystania koncentratu paszowego % 9,2 7,8 — * Indeks wykorzystania Srednia ilosc pokarmu spozytego podczas testu koncentratu paszowego = Sredni przyrost ciezaru podczas testu ** Poprawa indeksu wykorzystania koncentratu paszowego (%) (1 — Indeks wykorzystania pokarmu z dodatkiem antybiotyku 6270 Indeks wykorzystania pokarmu bez antybiotyku ) X 100 i 11,5% innych skladników (maka z lucerny, mela¬ sa, fosforan wapniowy, chlorek sodowy).Pietnascie sztuk kastrowanych, 8-miesiecznych bukatów podzielono na trzy grupy, po piec sztuk kazda tak, by sredni ciezar grup byl praktycznie równy. Do podstawowego koncentratu paszowego dodano odpowiednio 0, 7,5 i 15 ppm antybiotyku 6270 i trzy grupy bukatów karmiono nim odpo¬ wiednio. Ponadto, jako surowa pasze podawano po 1 kg surowej trawy ryzowej na kazdego bukata.Wyniki przedstawiono w tablicy 4.Indeks wykorzystania koncentratu paszowego ulegl poprawie o 7 do 10% podczas podawania po¬ karmu zawierajacego antybiotyk 6270. W tym sa¬ mym czasie ciezar wzrósl o 9 do 11%.Ponizszy przyklad ilustruje przedmiot wynalazku.Przyklad. Jeden litr pozywki hodowlanej o wartosci pH 6,0 zawierajacej 6,0% glukozy, 2,0% maki sojowe], 1,0% drozdzy tprulowych i 0,5% weg¬ lanu wapniowego zaszczepiono szczepem FERM BP-717 Nocardiopsis sp. 6270 i hodowano w ciagu 48 godzin w temperaturze 30°C. Powyzsza hodowle 50 55 nieniem. Pozostalosc adsorbowano na kolumnie z 750 g zelu krzemionkowego (nazwa firmowa Wsko gel C-200) zaladowywanego z chloroformem. Przez kolumne przepuszczono mieszanine 100:1 chlorofor¬ mu i metanolu. Frakcje aktywna zatezono pod' zmniejszonym cisnieniem do sucha i otrzymano oleista pozostalosc, która nastepnie rozpuszczono w malej ilosci acetonu i roztwór naniesiono na kolumne z zelem Sephadex LH-20 zaladowanym w acetonie i eluowano acetonem.Aktywna funkcje zatezono i otrzymano krysta¬ liczny surowy krystaliczny antybiotyk 6270, który rozpuszczono w octanie etylu i roztwór wstrza¬ sano z rozcienczonym kwasem solnym. Warstwe octanowa zatezono pod zmniejszonym cisnieniem i otrzymany krystaliczny osad rekrystalizowano z mieszaniny n-heksanu i octanu etylu. Otrzymano 23,4 g antybiotyku 6270 w postaci wolnego kwasu stanowiacego bezbarwny krystaliczny osad w ksztalcie igiel. Tak uzyskany wolny kwas antybio¬ tyku 6270 posiada omówione uprzednio wlasciwosci fizykochemiczne i biologiczne.147 419 15 Zastrzezenie patentowe Sposób wytwarzania nowego antybiotyku 6270 przyspieszajacego wzrost i zwiekszajacego efektyw¬ nosc wykorzystania pokarmu zwierzat domo¬ wych i ptactwa, stanowiacego substancje o charak¬ terze kwasu w postaci bezbarwnych iglastych kry¬ sztalów o temperaturze topnienia 115—118°C, skre- calnosci wlasciwej [a]£°= -11,5° (c = 1,0, meta¬ nol), widmie absorpcyjnym w podczerwieni w tab¬ letkach KBr: 3470, 2980, 2945, 2890, 1735, 1460, 1380, 16 10 1315, 1165, 1102, 1075, 987, 980 cm"1 oraz widmie PMR wykazujacym obecnosc trzech grup metoksy- lowych przy 3,39 (3H) i 3,49 (6H) ppm w widmie wykonanym przez 100 MHz w deuterochloroformie, z zastosowaniem czterometylosilanu jako wzorca wewnetrznego, oraz jego soli, znamienny tym, ze hoduje sie wytwarzajacy antybiotyk 6270 drobno¬ ustrój FERM BP-717 nalezacy do rodzaju Nocar- diopsis i z produktu hodowli wyodrebnia sie anty¬ biotyk 6270. 36003200) 240o\ 1800 1600 1400 1200 ICOO 80C &0D 4 CC 2800 2000 crrr' FIG FIG 2 8 I 7 Y^W A ^ VjUu' "^t 3 2 10 %(nor) \^h^m^ WW \JK 180 160 140 \20 100 80 60 40 20 O(ppm) Zakl. Graf. Radom —1044/89 70 egz. A4 Cena 1500 zl PLThe subject of the invention is a method of producing a new antibiotic marked with the symbol 6270, used in particular as an agent for accelerating growth and increasing the efficiency of food consumption of domestic animals and birds. A number of microorganisms from various soil samples were isolated in search of new antibiotics and the antibiotics produced by isolation were tested. important microorganisms. As a result of these studies, it was found that when a microorganism belonging to the genus Nocardiopsis, isolated from a soil sample taken in the city of Abashiri, on the island of Hokkaido in Japan, is grown in an appropriate culture medium, the antibiotic showing high antimicrobial activity against gram-positive bacteria. This antibiotic was isolated and its physicochemical and biological properties were tested, which confirmed that it is a new antibiotic, which was called antibiotic 6270. The invention is based on this finding and relates to a method of producing a new antibiotic 6270. FERM BP-717 produces a new antibiotic, belonging to the genus Nocardiopsis and then isolates the antibiotic 6270 from the culture. The new antibiotic is used in the form of an anti-coccidiosis agent containing antibiotic 6270 as an active substance. coccidiosis in domestic animals and poultry while administering them an effective amount of this antibiotic. A growth enhancing agent that enhances the efficiency of food consumption of domestic animals and poultry contains antibiotic 6270 as an active ingredient. This agent accelerates the growth of domestic animals and poultry and increases the feed efficiency when administering an effective amount of the antibiotic 6270. The effective amount of the antibiotic 6270 is usually 0.5-200 ppm, preferably 1-100 ppm. The following is a detailed description of the invention. Including its preferred aspects. Figure 1 shows the infrared absorption spectrum of antibiotic 6270, made on a potassium bromide tablet. Figure 2 shows the CSF spectrum of antibiotic 6270 in deuterochloroform using tetramethylsilane as an internal standard. Figure 3 shows the C-NMR spectrum of antibiotic 6270 made in deuterochloroform using tetramethylsilane as an internal standard. The microorganism used to make antibiotic 6270 may be any microorganism belonging to the genus Nocardiopsis as long as it is present. capable of producing this antibiotic. Preferably, however, the strain Nocardiopsis 147 419 147 419 sp. 6270 is deposited with the Fermentation Research Institute in Japan as FERM BP-717.Sz ^ ae ^ Nocardiopsis sp. 6270 used in the process of A ^ otu * The invention has a branched mycelium and airborne cavity that is fragmented and forms long spore chains. In whole cell hydrolysis, mesadiamine pimelic acid was detected, as well as galactose and ribose as sugar components. However, arafbinosis and madurosis as well as mycolonic acid were not detected. The menaquinone composition contains MK-9 (H6) and (Ha) as its principal ingredients and MiK-9 (H4) as the trace ingredient. The width of the basal mycelium is approximately 0.5 µm. On the basis of these characteristics, strain 6270 was classified as belonging to the genus Nocardiopsis (actinomycetes). The strain Nocardiopsis sp. 6270 has the following microbiological properties. Morphological characteristics. The basal mycelium is well developed and branched, about 0.4 µm wide. Air mycelium is well developed in some nutrients, such as sucrose nitrate agar (Czapek soluble agar, Difco), starch agar (ISP-4, inorganic salt starch agar, Difco), oat agar (ISP-8). , or glucose aspartate agar. The aerial mycelium is straight or curved and is entirely cobwebs. Mature aerial mycelium has a width of 0.4 to 0.6 µm. After 10 days from the beginning of cultivation, the aerial mycelium is fermented and forms long spore chains of at least 10 spores each. The spore chains are not helical. The surface of the spores is smooth and the shape is cylindrical. Size about 0.4 X 1.2 µm. No sporangia, spore, and union were observed. II. Breeding characteristics. The tests were carried out according to the method described by E. B. Shirling et al. In the International Journal of Systematic Bacteriology, 16, 313-340 (1966). In addition, known media and test methods were used. The color was determined under the light of a standard xenon lamp and referred to the color standards in the Color Harmony Manual, 3rd edition, 1958. When a color is found in the table, its common name is given first, and then ¬ Yours, this color code. When the same color was repeated, only the code was given. Below are data on, unless otherwise indicated, agar plate cultivation for three weeks at 28 ° C. (1) Sucrose nitrate agar (Cap agar solvent, (Difco) a. Growth good, close to gray (2ba). B. Air powder mycelium, white. C. No soluble pigment. (2) Glucose Aspartic a. Growth good, light amber (3ic) to meringue (3ge). b. Near-gray air mycelium Oba). c. No soluble pigment. (3) Glycerine-asparagine nutrient a. Growth poor, (2ba). b. Poorly formed aerial mycelium. c. No soluble pigment. (4) Starch agar a. Growth excellent, (3ic) to loamy (3ca). 5 b. Powder air mycelium, white. c. No soluble pigment. d. Starch is not hydrolyzed. (5) Tyrosine agar a. Growth weak, (3ge). in b. No aerial mycelium. c. No soluble pigment. (6) Nutrient agar (Bacto, Difco nutrient agar). a. Growth poor, light wheaten color (2ea). b. No aerial mycelium. 15 c. No soluble pigment. (7) Yeast agar with malt extract a. Excellent growth, cracked, topaz color (3ne). b. Aerial white mycelium. M c. No soluble pigment. (8) Oat Agar a. Growth good, nut color (2ca). b. Aerial mycelium 2ba. c. No soluble pigment. * III. Physiological Characteristics (1) Growth Temperature Range (starch agar slants in a temperature gradient incubator): 6.5-38 ° C; no increase was observed below 5 ° C or above 39.5 ° C; optimum temperature M 27 ^ 38 ° C. (2) Liquefaction of the glucose-peptone-gelatin medium: it flows. <3) Starch hydrolysis: does not hydrolyze. (4) Coagulation and peptonization of the collected milk: »does not coagulate, but strongly peptonizes (37 ° C). (5) Melamine production: Not produced on ISP tyrosine agar, ISP tryptone medium with yeast extract, and peptone, yeast and iron agar medium. 40 (6) Sodium chloride tolerance: no increase at 4% or greater. (7) Xanthine, hypoxanthine and adenine are not dissolved. IV. Absorption of carbon sources (basic nutrient for Pridham and Gottliefoa): assimilated: D-glucose, L-arabinic, D-xylose, salicillin; poorly assimilated: D-fructose and sucrose; not assimilated: inositol, L-rhamnose, raffinose, 50 D-mannitol. Strain 6270 was identified as a strain belonging to Nocardiopsis Meyer 1976 (actinomycetes), as it forms long spore chains in the aerial mycelium, and the hydrolyzate of whole 59 cells contains mesodivamkiopimelic acid and galactose, but no arabinose and madurose, and also no mycolonic acid is detected. In the method of the invention, the antibiotic-producing microorganism 6270 can be grown according to routine cultivation methods for known actinomycetes. From an industrial point of view, it is advantageous. however, there is the use of aeration and agitation culture. As a production medium, 6 * raw materials commonly used in ho-147 419 6 actinomycetes can be used. So you can use a suitable combination of different sources of carbon and nitrogen, and organic and inorganic salts and, if desired, an antifoam, e.g. glucose, starches, glycerin, dextrin, sucrose and oils can be used as the carbon source. animal and vegetable. Soybean flour, steep extract, corn, wheat spores and ammonia may be used as the nitrogen source. In addition, inorganic salts such as calcium carbonate, sodium chloride, potassium chloride and phosphates may be added if desired. It is also possible to add organic or inorganic salts to promote the growth of the microorganism and thus facilitate the production of the antibiotic 6270. The cultivation temperature is usually from 25 to 35 ° C, preferably around 30 ° C. The fermentation time depends on various factors, but in general, maximum production of the antibiotic 6270 occurs within 72 to 148 hours. Antibiotic 6270 can be isolated from the wort and purified using its physicochemical properties and using conventional methods such as using the solubility difference between and impurities, exploiting the difference in adsorption on ion exchange resins or other adsorbent materials, extraction with water-immiscible organic solvents, or using a combination of different methods, e.g., precipitation, contamination removal, dialysis, drying and Recrystallization. For example, antibiotic 6270 present in the fermentation broth can be advantageously recovered in the following manner. A filter aid such as diatomaceous earth or Radiolite 700 is added to the wort, filtered and filtered, and the cells are extracted with a suitable solvent, for example ethyl acetate and acetone, respectively. The two extracts are combined, the solvent evaporated to give the antibiotic 6270 in the form of a crude crystalline precipitate which is subjected to e.g. chromatography. The eluate is concentrated under reduced pressure and the residue dissolved in a suitable solvent such as nitrate ethyl acetate and extracted with dilute hydrochloric acid. The organic layer is concentrated to give the crystalline antibiotic 6270 as free acid. To obtain the sodium salt, the above organic layer treated with dilute hydrochloric acid is treated with a dilute solution of sodium carbonate, the organic solution is concentrated to give the sodium salt of the antibiotic 6270. Free acid or the sodium salt of the antibiotic may be recrystallized from a suitable solvent, such as a mixture of n-hexane and ethyl acetate, to give a pure crystalline product. The resulting free acid of the antibiotic 6270 has the following properties. (1) Substance with the nature of an acid in the form of colorless acicular crystals. (2) Melting point 115-118 ° C. (3) Elemental analysis: found: C - 62.72%, H - 9.49%, 0 - 27.78%. [a] R = -11.5 ° (c = 1.0, 10 15 20 ao 35 40 46 50 55 60 (4) Specific conductivity of methanol. (5) Ultraviolet absorption spectrum: no absorption bands are observed at 210 nm or more in methanol solution. (6) Infrared absorption spectrum for KBr pellets: 3470, 2980, 2945, 2890, 1735, 1460, 1380, 1315, 1165, 1102, 1075, 987, 980 cm-1. (7) Solubility: soluble in methanol, ethanol, ethyl acetate, chloroform, ethyl ether, acetone and benzene; insoluble in water. (8) Color reactions: positive reaction with vanilla and sulfuric acid and Dragen reaction. dorff, negative ninhydrin reaction; color reaction with iodine vapor. (9) Silica gel thin-layer chromatography GF254 (Merck Co.): Development system chloroform-methanol 20: 1 n-hexane-ethyl acetate 1: 1 benzene-ethyl acetate 1 : 1 benzene-acetone 1: 1 chloroform-acetone 2: 1 n-hexane-ethyl acetate 1: 3 ethyl acetate (10) CSF spectrum: found RF value 0.49 0.08 0.04 0.53 0.36 0 , 13 0.22 the presence of three groups methoxy at 3.39 (3H) and 3.49 (6H) ppm, in a spectrum taken at 100 MHz in deuterochloroform, using internal tetramethylsilate as standard (figure 2). (11) 13C-NMR spectrum: the spectrum at 25 MHz in deuterochloroform with tetramethylsilane as internal standard is shown in Figure 3. According to the obtained results the total number of carbon atoms is 44. (12) The antimicrobial spectrum is presented in Table 1. Table 1 1 Test organism Bacillus cereus IAM-1729 Bacillus circulans IFO 3329 Bacillus subtilis PCI 219 Micrococcus flavus IFO 32 * 2 Sarcina lutea NIHJ Staphylococcus aureus FDA209P JC-1 Staphylococcus aureus (penicillin resistant, streptomycenicine, chlorophyllchlorinicine and canamycinicine coli NIHJ \ JC-2 Escherichia coli (resistant to streptomycin, kanamycin, chloramphenicol and tetracycline) Klebsiella pneumoniae PCI 602 Proteus vuslgaris OX-19 Least inhibitory concentration (imcg / imli) 1.56 1.56 6.25 1 , 56 3.13 6.25 6.25 100 100 100 100 Cultured medium aaaaaaaaaa a147 419 Test organism Pseudomonas aeruginosa IFO-3756 Mycobacterium smegmatis ATCC 607 Mycobacterium avium IFO-3153 My cobacterium phlei HIHJ Penicilium chrysogenum Q-176 Aspergillus flavus ATCC 9643 Cochliobolus miyabeanus Alternaria mari Candida albicans YU 1200 Saccaromyces cerevisiae strain 77 1 cd. Table 1 Lowest inhibitory concentration (mcg / imil) 1 100 1.56 1.56 3.13 100 100 12.5 50 100 100% 1 1 Culture medium a b b b c c c c | cc Notes: a - nutrient agar culture medium, b - nutrient glycerin agar, c - sucrose-potato agar. Based on the above physicochemical and biological characteristics, it was found that the compound belongs to the general class of antibiotics called polyethers. Based on the CSF spectrum the substance was found to have three methoxy groups in the molecule. Of the known antibiotics having three methoxy groups in one molecule, the following polyether antibiotics can be mentioned: C20-12 (Japanese Unexamined Patent Publication No. 53919/1983), A-204B (Handbook of Microbiology Vol. 3, 410 - CRC Press), T-42082 (Japanese Unexamined Patent Publication No. 79730/1976), T-40517 (Japanese Unexamined Patent Publication No. 10581/1975, 38295 (Japanese Unexamined Patent Publication No. 125793/1976), No. 6016 (Japanese Patent Publication No. Unexamined Patent Publication No. 84576/1979), X - 14868C (Japanese Unexamined Patent Publication No. 120696/1981), CP-47433 (Unexamined Egg Patent Publication No. 154108/1982), 47434 (Japanese Unexamined Patent Publication No. 154187 /, 71982 and LL-C23O240 (Japanese Non-Research Patent Publication No. 78598/1983). The antibiotic 6270, however, differs from these known substances in terms of melting point, inherent precision, elemental analysis of the infrared absorption spectrum, and there is visibly new antibiotic. Antibiotic 6270 has a particularly strong antimicrobial activity against Gram-positive bacteria and is useful as an antimicrobial agent. In addition, the antibiotic exhibits hypercoccidial, acaricidal and antiviral activity in wolic concentrations and is used as S-10 15 25 30 40 45 50 55 against coccidiosis in domestic poultry such as chickens, quails, ducks, geese and turkeys, and in domestic animals such as cattle, pigs, rabbits, buffalos , goats and sheep, as a preparation for the treatment of diarrhea in domestic animals or as a means of increasing the efficiency of food consumption or accelerating the growth of breeding animals and poultry. Tests illustrating the properties of the antibiotic produced according to the invention are presented below. Test for anticoccidial activity Antibiotic , 6270 was homogeneously mixed with the chicken feed mix (manufactured by Oriental Yeast Co.) to give a mix of the prescribed concentration of the antibiotic. The above mixture was fed to chickens in arbitrary amounts starting from two days after inoculation with oocytes until the end of the test (eight days after inoculation). Monensin, a known anti-coccidial agent, was used as a comparative agent. The chickens used were healthy cockerels derived from laying hens (Shever Starcross). ) at the age of 7 days (9 days at the time of infection), reared under conditions of complete prevention against coccidiosis. Each group consisted of five chickens. For infection, oocytes of a sensitive strain of Eimeria tenella were used. Each chicken was infected into the goiter with mature oocytes (3 X 104), orally or with a metal probe. The effectiveness of the agents was determined by the anticoccidial index (ACI) calculation from the formula below: ACI = (relative weight gain + percent survival) - (number of oocytes + size of disease); 120 or less: no anti-coccidial efficacy; 160 or less: low anti-coccidial efficacy; 160-180: moderate anticcidiosis efficacy; 180 or more: Extremely high anti-coccidiosis efficacy. After the test was completed, the increase in weight of each group was determined, ie the difference between the weight at the end of the test and the weight at the order. The relative weight gain was calculated on the basis of the weight of the control group (100) fed with a non-coccidial and non-prohibited food. The number of oocytes in the caecum was calculated eight days after infection by homogenizing the intestinal caucus. was determined as follows: Number of oocytes found in the intestinal canal Oocyte index 80 0.0-0.1 X108 0.1-1.0 X108 1 1.0-5.0X10 «10 5.0-11.0X10« 20 11, 0 X, 10 * 40 Tested chickens after the end of the test (8 days after inoculation) were dissected and the intestinal canal was examined with the naked eye in order to determine the index Cno-147 419 10 es CC? - 'o , Q r2 'cC cC £ W) O £ O »-. - * jo •• - »co 0) T3 IH 1 + + + + + + + + + + Coding index uo +» -o vc / 1 - .2 cc g CD O o) Cfl 7 ^ # n 9 u CVN * stool blood count »—i. ^ co .5 73 • iH T3 CD C! t3 73 Increase in heat (%) by 1 "? 131 Q 3 ntybiotic <£ o 1 ° in ~ LO l — 1 CO ooo 10 ool — 1 what o iH X cn 10 ^ csf oo 1 + + + + + + + + o ^ irf 05 C0 ^ co "O three-el co iH CO ^ Tl ^ t ^ 1 - 1 ii O CO CN O ool - 1 eo OX o ^ 1 csf o 1 1 + + + 1 cp. cef 05 csf l-H O CO CN © ^ C- ~ Ol i — i «o CO o o o o what O 1—1 X ^ T-T o o | 1 1 1 1 o ^ eo o ii m CM oc ^ co CO «^ csT 10 iH SI oo TJH l — 1 oo CN eo O iH X co © ^ r- ~ OO r + + + + + + ^ lT o ii o 00 cC (U SU o 2 * ¦ o ^ o "o O lO ooooo © - oo 1 + + + + + + + + + + + t- ^ t-" what o ~ §2 o S • N CC CC f £! i CO t. sm 1 1 1 1 1 ° "o" o iH o cC 1 CC 3 2 every cC 44 o bloody M Bra 1 3 cC o tu CU £ CC £ than 10% '57 Mni + aP 3 fo + + ^ g 1 o at + + + than 50% a ar + + + +11 147 419 12. Disease index was determined as below, and as the value of disease size the index value multiplied by ten was taken. 0, <-) The intestine is normal, if blood spots are found then (-) turns to (+), 1, (+). The intestine is of a normal shape. The intestine content is somewhat liquid and yellowish, and there is a slight swelling of the mucosa of the intestine, which is whitish. 2, (++) The bowel is generally normal in shape, and there is a swelling of the entire mucosa. No blood is found in the contents. The mucosa is slightly yellowish and faded, and there are several white necrosis or blood spots in the mucosa. 3, <-F ++) The intestine is clearly wrinkled, altered in shape and slightly longer than the rectum. The contents are completely abnormal and often filled with coagulated blood or white-gray, cheese-like, degenerated content. The intestinal wall is visibly swollen and breaks easily and sometimes there are bloody spots. The disease is at the base of the gut but not at the rectum. 4, <++++) Significant deformities and wrinkles of the intestine. The shape of the intestine resembles a sausage and it is not longer than the rectum. The disease extends to almost XU or IU of the rectum. Groups 1 to 3 were fed food containing a predetermined amount of antibiotic 6270 starting two days prior to infection with oocytes. Group 4 was fed food containing the antibiotic monensyne as a reference. Group 5 is an infected but non antibiotic treated control group infected with oocytes and fed a basic diet not containing an anti-coccidial agent. Group 6 is also an infected and untreated control group. From the above data it is evident that Antibiotic 6270 has anticoccidial activity. Pig Food Use Efficiency Test. Land piglets were fed the following staple food. (a) Within four weeks of starting the test, 60% grains (corn, wheat, barley), 15% soybean marc, 15% animal food (skim milk powder, fish flour) and 10% other ingredients (enzymes, calcium carbonate , potassium phosphate, sodium chloride, etc.). Cb) From 4 to 12 weeks 78% grains (corn, sorghum, wheat), 13% soybean extract, 5% fish flour and 4% other ingredients (calcium carbonate, phosphate calcium chloride, sodium chloride, etc.). The fatties of the young 35-day-old pigs were divided into three groups, five each, so that the average weight in the groups was practically equal. Antibiotic 6270 was added to the main food at doses of 0, 12.5, respectively and 25 ppm. Three groups of pigs were fed the corresponding food over a 12-week period, body weight and food consumption were then calculated, and the total number of days on which the pigs suffered from diarrhea during the four weeks from the start of the test was recorded. The results are shown in Table 3. Table 3 1 Group 1 2 3 Amount of antibiotic 6270 added to the food (pprci) 12.5 25 0 Average weight at the beginning of the test 8.20 8.18 8.23 Average weight gain during the test (fcg) 45.82 48.30 43 ^ 73 Average amount of food consumed during the test (kg) 106.9 110.1 107.4 Food utilization index * 2.333 2.280 2.456 Index improvement used Food consumption ** (%) 5.0 7.2 Total days l diarrhea in each group (total number of test days in each group) 1 13/140 5/140 48/140 1 * Food consumption index = Average food consumption during the test Average weight gain during the test ** Index improvement Food conversion index with the addition of antibiotic use 6270 food (% =) 1 - Food conversion index without antibiotic X 100 147 419 13 Food conversion index improved by 5 to 8% during administration food containing the antibiotic 6270, and the weight increased by 5 to 11%. diarrhea in pigs. Efficiency in use of food in winemakers The test used Holstein beech trees fed with concentrate of the following composition: 10 71.5% grain (maize, sorghum, barley), 11.5% chaff and otter (corn protein, wheat bran, rice bran and oil), 5.5% oilseed pomace (soybean pomace, linseed cake) and 14 inoculated with 100 liters of culture medium of the above composition and cultivated at temperature 30 ° C for 96 hours, while agitating and aerating in a 200 liter fermenter. 100 liters of air was aerated per minute and mixed at 250 rpm. Filter aid (Radiolite 700) was then added and the broth was filtered to separate the cells. The filtrate was extracted with 40 liters of ethyl acetate, and the cells with 30 liters of acetone. The acetone extract from the cells was carried out under reduced pressure to remove the acetone, and was extracted with 20 liters of ethyl acetate. The above extract was combined with the filtrate extract and the combined solutions were concentrated under reduced cis. Group 1 2 3 Amount of antibiotic 6270 added to the diet (ppm) 7.5 15 0 Average test weight (kg) 320 318 323 Table 4 Average weight gain during the test (kg) 308 310 281 Average amount of concentrated feed consumed during the test (kg) 2310 23e 2320 Concentrate feed utilization index 7,500 7,613 8,256 Concentrate feed utilization index improvement% 9,2 7, 8 - * Utilization index Average amount of food consumed during the concentrate feed test = Average weight gain during the test ** Improvement in concentrate feed utilization index (%) (1 - Antibiotic feed index 6270 Antibiotic feed index no) X 100 and 11, 5% of other ingredients (alfalfa flour, melasma, calcium phosphate, sodium chloride). Fifteen castrated 8-month-old beech trees were divided into three groups, five each so that the average weight of the groups is practically equal. 0, 7.5, and 15 ppm of antibiotic 6270 were added to the stock concentrate, respectively, and three groups of beech trees were fed accordingly. In addition, 1 kg of raw rice grass was fed for each beech as a raw feed. The results are shown in Table 4. The concentrate feed utilization index improved by 7 to 10% when fed with the food containing the antibiotic 6270. At the same time the weight increased. by 9 to 11%. The following example illustrates the subject matter of the invention. One liter of culture medium with a pH value of 6.0 containing 6.0% glucose, 2.0% soybean flour, 1.0% trout yeast and 0.5% calcium carbonate was inoculated with the strain FERM BP-717 Nocardiopsis sp. and grown for 48 hours at 30 ° C. The above farms 50 55. The residue was adsorbed on a 750 g silica gel column (brand name Wsko gel C-200) loaded with chloroform. A 100: 1 mixture of chloroform and methanol was passed through the column. The active fraction was concentrated to dryness under reduced pressure to give an oily residue which was then dissolved in a small amount of acetone and the solution was applied to a column of Sephadex LH-20 gel loaded with acetone and eluted with acetone. The active function was concentrated to give a crystalline crude crystalline antibiotic. 6270 which was dissolved in ethyl acetate and the solution was shaken with dilute hydrochloric acid. The acetate layer was concentrated under reduced pressure and the resulting crystalline solid was recrystallized from a mixture of n-hexane and ethyl acetate. 23.4 g of the antibiotic 6270 free acid was obtained in the form of a colorless, needle-shaped crystalline precipitate. The free acid of the antibiotic 6270 thus obtained has the physicochemical and biological properties discussed above. 147 419 15 Patent claim A method of producing a new antibiotic 6270 which accelerates the growth and increases the efficiency of the use of food of domestic animals and birds, which are substances having an acidic character. the form of colorless coniferous crystals with a melting point of 115-118 ° C, specificity [a] ≤ ° = -11.5 ° (c = 1.0, methanol), infrared absorption spectrum in tablets KBr: 3470, 2980, 2945, 2890, 1735, 1460, 1380, 16 10 1315, 1165, 1102, 1075, 987, 980 cm -1 and a PMR spectrum showing the presence of three methoxy groups at 3.39 (3H) and 3.49 (6H) ppm in a spectrum taken at 100 MHz in deuterochloroform, using tetramethylsilane as an internal standard and its salts, characterized in that the antibiotic 6270-producing microorganism FERM BP-717 belonging to the genus Nocardiopsis and breeding product wyo tardium is antibiotic 6270. 36003200) 240o \ 1800 1600 1400 1200 ICOO 80C & 0D 4 CC 2800 2000 crrr 'FIG FIG 2 8 I 7 Y ^ WA ^ VjUu' "^ t 3 2 10% (nor) \ ^ h ^ m ^ WW \ JK 180 160 140 \ 20 100 80 60 40 20 O (ppm) Zakl. Graph. Radom —1044/89 70 copies A4 Price PLN 1500 PL