Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania stabilnej frakcji bialek osocza ludzkiego, zawierajacej albuminy oraz alfa i beta-globuliny, do stosowania w lecznictwie. Albuminy sa jednym z glównych skladników wyodrebnianych z osocza. Stosowane sa w lecznictwie w postaci roztwo¬ rów dozylnych m.in. jako srodek uzupelniajacy objetosc krwi, w przypadku duzej jej utraty przez organizm. Wieksze jednak od albumin znaczenie, jako srodek krwiozastepczy, posiada stabilna frakcja bialek osocza, poniewaz zawiera oprócz aluminium inne uzyteczne bialka, co daje lepszy efekt leczniczy. Preparat stabilnej frakcji bialek osocza powinien byc stosowany w tych wszystkich przypadkach, w których sa wskazania do podawania osocza. Podaje sie go równiez wtedy, gdy pelna krew jest nieosiagalna lub wystepuja trudnosci z dobraniem odpowiedniej grupy krwi /British Pharmaceutical Codex, 1973, s. 585 i 590/. Podawanie stabilnej frakcji bialek osocza ludzkiego zamiast osocza lub krwi eliminuje niebezpieczenstwo zakazenia chorego wirusem zól¬ taczki zakaznej typu B /Alexander J. i in., J.Trauma 19, 502, 1979/.Rozdzielenie bialek osocza ludzkiego metoda Cohna i wsp. /Cohn. E.J. i in., J. Am. Chem.Soc, 68,459,1946/ lub w inny sposób umozliwia uzyskanie w skali produkcyjnej poszczególnych bialek w postaci oczyszczonej.Niska wydajnosc sposobów otrzymywania oczyszczonych frakcji bialkowych byla przyczyna rozpoczecia badan zmierzajacych do bardziej ekonomicznego wykorzystania drogiego i deficyto¬ wego surowca, jakim jest osocze ludzkie. W koncu lat 50 rozpoczeto próby przygotowania preparatów do zastosowania w lecznictwie, otrzymywanych z bialek osocza, uzyskiwanych w postaci roztworu odpadowego przy produkcji gamma - globulin metoda Cohna /tzw. plyn II + III/. Brano pod uwage wzgledy lecznicze /obecnosc wielu bialek osocza korzystniejsza niz same albuminy/, jak i ekonomiczne /wyrazny wzrost wydajnosci/. Pierwsze próby przygotowania leczniczego preparatu bezposrednio z plynu II + III zakonczyly sie niepowodzeniem. Otrzymany preparat byl niestabilny /Mulford D,, Mealey E. J., Clin. Invest. 35, 1213, 1956/. W roztworze2 144 /j47 / bialek pojawil sie osad po zakonczeniu ogrzewania przez 10 h w temp. 60°C. Proces ten stosowany zawsze podczas produkcji preparatów albumin i ^stabilnej frakcji bialek osocza. Ma on na celu inaktywacje wirusa zóltaczki zakaznej typu B. ) Z opisu patentowego St. Zjedn. Am. nr 2 958)628, znany jest sposób otrzymywania stabilnej frakcji bialek osocza do stosowania w lecznictwie') Sposób ten jest modyfikacja metody 6 Cohna i polega zasadniczo na skróceniu procesu frakcjonowania przez pominiecie wytracania tzw. frakcji IV-4. Metoda ta, cytowana w pismiennictwiejako ihetoda Hinka,jest stosowana do przygotowania stabilnej frakcji bialek osocza, zawierajacej albuminy oraz alfa i beta-globuliny (Hink J. i in. Vox Sang., 18, 527, 1970; Schwick H., Vox Sang., 23, 8)4; 1972Foster P.,Watt J., „Methods of plasma protein fractionation" 1978. 317, ek. Curling J./, ftiimo, ze powyzszy sposób frakcjonowania nie usuwa calkowicie termolabilnych bialek, takich jak np. immunoglobuliny IgG. Bialko to wystepuje zawsze w preparatach otrzymywanych metoda Hinka / w ilosci do 1%/ i moze byc przyczyna obnizenia stabilnosci preparatu.Z ekonomicznego punktu widzenia bardzo niekorzystny jest fakt, ze do frakcjonowania metoda Hinka musi byc uzywane osocze o bardzo niskiej zawartosci hemoglobiny, gdyz na zadnym etapie frakcjonowania nie dochodzi do usuwania hemoproteidów. Zgodnie z opisem patentowym PRL nr 71 442 surowiec /socze lub surowica/ o duzej ilosci hemoglobiny frakcjonowano alkoho¬ lem etylowym lub stezonym roztworem soli. Otrzymany w ten sposób osad albumin oraz alfa i beta - globulin, zawierajacy niestabilne globuliny i hemoproteidy poddawano dalszemu oczyszczaniu.Po rozpuszczeniu osadu w wodzie dodawano nadtlenku wodoru do koncowego stezenia 0,01-0,1% w temperaturze nie wyzszej niz 70°C i po 2 - 10 h utrzymywania roztworu w powyzszej temperatu¬ rze, odwirowano osad zdenaturowanych termolabilnych globulin i hemoproteidów. Z nadsaczu wytracono w znany sposób stabilna frakcje bialek, zawierajaca albuminy oraz alfa i beta - globuliny. Odwirowany osad sluzyl do przygotowania leczniczych preparatów stabilnej frakcji bialek osocza.Znany proces technologiczny posiada jednak szereg wad. Jest trudny do realizacji w skali produkcyjnej, gdyz wprowadzenie etapu ogrzewania roztworu bialek do schematu frakcjonowania w ujemnych temperaturach wg Cohna pociaga za soba koniecznosc zainstalowania nowych urza¬ dzen w dodatkowych pomieszczeniach. Zas zastosowanie drastycznych warunków, takich jak utrzymywanie roztworu bialek w temperaturze 70°C przez kilka godzin w obecnosci nadtlenku wodoru, moze spowodowac uszkodzenie natywnej struktury czasteczek bialka, a takze doprowa¬ dzic do ich chemicznej modyfikacji. Dozylne podawanie preparatów zawierajacych zmodyfiko¬ wane bialka stwarza mozliwosc immunizacji biorcy i wystapienie reakcji ubocznych po powtórnym podaniu.Celem wynalazku jest wyeliminowanie wad wystepujacych w znanych sposobach wytwarzania stabilnej frakcji bialek osocza ludzkiego do stosowania w lecznictwie.Surowcem wyjsciowym do otrzymywania stabilnej frakcji bialek jest osocze ludzkie o niskiej zawartosci hemoglobiny lub zawierajace hemoglobine do stezenia 20 mg/100 cm3, z którego po usunieciu fibrynogenu i gamma-globulin otrzymuje sie roztwór zawierajacy stabilna frakcje bialek oraz niestabilne globuliny i hemoproteidy.Istota wynalazkujest dobranie odpowiednich warunków wytracania i usuwania niestabilnych globulin oraz hemoproteidów, a nastepnie wytracania stabilnej frakcji bialek osocza, zawierajacej albuminy oraz stabilne alfa i beta-globuliny.Sposób wedlug wynalazku polega na tym ze z osocza ludzkiego zanieczyszczonego hemoglo¬ bina do stezenia 20 mg/100 cm3 usuwa sie fibrynogen i gamma - globuliny w znany sposób alkoholem w ujemnych temperaturach. Do otrzymanego roztworu zawierajacego albuminy, alfa i beta - globuliny oraz hemoproteidy i niestabilne globuliny dodaje sie alkohol etylowy do uzyskania stezenia 35-40% oraz doprowadza sie pH do 5,9-6,8 w temperaturze od -4°C do -7°C, zas wytracone hemoproteidy i niestabilne globuliny usuwa sie przez wirowanie. Odpowiednio dobrane stezenie alkoholu etylowego i stezenie jonów wodorowych oraz temperatura zapobiegaja wytraceniu sie albumin oraz stabilnych alfa i beta-globulin. Po odwirowaniu niestabilnych globulin i hemoprotei¬ dów, stabilna frakcje bialek osocza wytraca sie z nadsaczu przez zmiane stezenia jonów wodoro¬ wych do pH 4,6-4,9 w temperaturze od -6°C do -7°C i odwirowuje. Otrzymany osad rozpuszcza sie w wodzie, usuwa alkohol i w znany sposób przygotowuje preparat leczniczy.Metoda wedlug wynalazku umozliwia podczas frakcjonowania usuniecie hemoproteidów znajdujacych sie w surowcu. Miara stezenia hemoproteidów w preparatach krwiopochodnych jest144647 3 absorbancja 1% roztworu przy 403 nm i wedlug zalecen Swiatowej Organizacji Zdrowia nie moze ona przekraczac wartosci 0,25.0 wyzszosci metody wedlug wynalazku swiadczy mozliwosc uzyska¬ nia z surowca zawierajacego hemoglobine, stabilnej frakcji bialek o absorbancji nie przekraczajacej 0,25 /Tab.1/. Zastosowanie metody wg wynalazku umozliwia szersze wykorzystanie surowca niz metoda Hinka, w której nie dochodzi do usuwania hemoproteidów w czasie frakcjonowania.Poniewaz osocze ludzkie jest cennym surowcem, ma to równiez istotne znaczenie ekonomiczne.Stabilna frakcja bialek osocza ludzkiego otrzymana wg wynalazku charakteryzuje sie wyzsza czystoscia, niz preparaty otrzymane metoda Hinkti. /Tab.2/. Wydajnosc metody wedlug wyna¬ lazku wynosi od 24 do 26 g/l osocza.Tabela 1 Wplyw zastosowanej metody frakcjonowania na poziom hemoproteidów w roztworze stabilnej frakcji bialek.Metoda otrzymywania stabilnej frakcji bialek Metoda Hinka Metoda Hinka Metoda wedlug wynalazku Metoda wedlug wynalazku 1% A403 nm Roztwór uzyskany po usunieciu fibrynogenu i gamma-globulin 0,41 0,23 0,24 0,30 Roztwór sta¬ bilnej frak¬ cji bialek 0,46 0,26 0,18 0,12 Tabela2 Wplyw zastowanej metody frakcjonowania do otrzymywania stabilnej frakcji bialek na zawartosc immunoglobulin IgG i IgA w preparatach.Metoda Metoda Hinka Metoda wedlug wynalaz¬ ku Numer preparatu 1 2 1 2 Stezenie bialka (g/100 cm3) 4,07 4,30 4,08 3,75 Zawartosc IgG (g/100 cm3) (%) 0,033 0,8 0,034 0,8 nie wykryto nie wykryto Zawartosc IgA (g/100 cm3) (%) 0,007 0,16 0,015 0,35 nie wykryto nie wykryto P r z y k l a d I. Wytracanie fibrynogenu i frakcji gamma - globulin: 400 cm3 osocza o pH 6,73 doprowadzono do pH 7,28 i stezenia alkoholu etylowego 8%, dodajac przy stalym mieszaniu 1,6 cm 1 molowego roztworu NaOH i 36 cm3 96% alkoholu etylowego. Calosc pozostawiono w temperaturze -2°C na 1 godzine. Nastepnie odwirowano wytracony osad, a do nadsaczu /420 cm3/ dodano 66,4 cm alkoholu etylowego i doprowadzono pH do 6,86 dodajac 0,5 cm3 buforu zawierajacego jony octanowe. Mieszanine pozostawiono w temp. -5°C przez 18 godzin. Wytracony osad usunieto przez wirowanie w temp. -6°C. Otrzymano 446 cm3 roztworu zawierajacego albu¬ miny, alfa i beta-globuliny oraz hemoproteidy i niestabilne globuliny.Wytracanie niestabilnych globulin i hemoproteidów: Roztwór uzyskany po odwirowaniu osadu gamma - globulin doprowadzono do pH 6,0 dodajac 1 cm3 buforu zawierajacego jony octanowe. Nastepnie zwiekszono stezenie alkoholu etylowego w roztworze do 40%, dodajac w temp. -5°C 160 cm3 96% alkoholu etylowego. Mieszanine pozostawiono w temperaturze -5°C przez 18 godzin. Wytracony osad niestabilnych globulin oraz hemoproteidów odwirowano wtemp. -6°C, uzyskujac 546 cm3 roztworu.4 144 647 Wytracanie stabilnej frakcji bialek: Klarowny nadsaóz doprowadzono do pH 4,85 dodajac 5 cm buforu zawierajacego jony octanowe. Mieszanine pozostawiono w temp. -6°C przez 7 godzin.Po tym czasie odwirowano osad stabilnej frakcji bialek w temp. -6°C. Uzyskany osad /67g/ zawieszono w 134 cm3 wody destylowanej z lodem i dializowano. Po dializie i przesaczeniu przez wklad filtracyjny HP/EKS roztwór poddano suszeniu ze stanu zamrozenia. Otrzymano 10,5 g liofilizowanej stabilnej frakcji bialek /tj. 26,3 g/l osocza/. Liofolizowane bialka rozpuszczano w apirogennej ijalowej wodzie destylowanej. Nastepnie do roztworu dodano 1 molowy NaOH w celu uzyskania pH 6,7-7,3, a zawartosc jonów sodu doprowadzono do stezenia 0,13-0,16 mola/l przez dodanie odpowiedniej ilosci chlorku sodowego. Otrzymano roztwór o stezeniu bialka 4,4%. Po dodaniu kaprylanu sodowego w ilosci 0,16 milimola/g bialka, roztwór stabilnej frakcji bialek wyjalowiono na drodze saczenia, rozlano do butelek plazmowych i poddano ogrzewaniu przez 10 godzin w temperaturze 60°C.Przyklad II. Wytracanie fibrynogenu i frakcji gamma-globulin: 195 1 osocza o pH 6,80 doprowadzono do pH 7,0 i stezenia alkoholu etylowego 8%, dodajac przy stalym mieszaniu 595 cm3 1 molowego roztworu NaOH i 18 1 94,7% alkoholu etylowego. Po dodaniu NaOH i alkoholu etylowego mieszanine pozostawiono w temperaturze -2°C przez 1 godzine. Nastepnie odwirowano wytracony osad, a do nadsaczu /215 1/ dodano 34,41 94,7% alkoholu etylowego i doprowadzono pH do 6,86 dodajac 325 ml buforu zawierajacego jony octanowe. Mieszanine pozostawiono na 15 godzin w temperaturze -5°C i nastepnie usunieto wytracony osad przez wirowanie.Wytracanie niestabilnych globulin i hemoproteidów: 250 1 supernatantu uzyskanego po odwirowaniu osadów fibrynogenu i gamma-globulin doprowadzono do pH 6,1 dodajac 540 ml buforu zawierajacego jony octanowe. Nastepnie dodano przy stalym mieszaniu 89,6 1 96% alkoholu etylowego. Temperatura mieszaniny wynosila -6°C. Mieszanine pozostawiono w tej temperaturze przez 16 godzin. Nastepnie usunieto osad przez wirowanie. Do nadsaczu dodano 2 kg ziemi okrzemkowej i przesaczono przez wklady klarujace HP 7. Otrzymano 310 1 klarownego roztworu.Wytracanie stabilnej frakcji bialek: Klarowny przesacz doprowadzono do pH 4,83 dodajac 3,35 1 buforu zawierajacego jony octanowe. Mieszanine pozostawiono w temperaturze -5°C przez 16 godzin i nastepnie odwirowano w powyzszej temperaturze. Uzyskany z odwirowania osad /18,37 kg/ zawieszono w 36,75 1 wody destylowanej o temperaturze 0°C. Roztwór stabilnej frakcji bialek dializowano przez 20 godzin do wody destylowanej. Po dializie i przesaczeniu przez wklady klarujace HP 7 roztwór poddano suszeniu ze stanu zamrozenia. Otrzymano 4,73 kg liofilizowanej, stabilnej frakcji bialek / tj. 24,3 g/l osocza/.W celu przygotowania leczniczego preparatu stabilnej frakcji liofilizowane bialka rozpu¬ szczono w apirogennej i jalowej wodzie destylowanej i dodano 1 molowego NaOH do uzyskania pH 6,9, chlorku sodowego w ilosci potrzebnej do uzyskania stezenia jonów sodu 0,15 mola/l oraz kaprylanu sodowego /0,16 milimola/g bialka/. Otrzymany roztwór albumin oraz alfa i beta- globulin /nie zawierajacy hemoproteidów i niestabilnych globulin/ przesaczono przez filtr jalo- wiacy, a nastepnie ogrzewano przez 10 godzin w temperaturze 60°C.Zastrzezenie patentowe Sposób otrzymywania stabilnej frakcji bialek osocza ludzkiego z osocza o niskiej zawartosci hemoglobiny lub zawierajacego hemoglobine do stezenia 20 mg/100 cm , polegajacy na usunieciu fibrynogenu i gamma globulin, a nastepnie wytraceniu i oddzieleniu niestabilnych globulin i hemoproteidów w dobranych warunkach stezenia jonów wodorowych, stezenia alkoholu etylo¬ wego i temperatury, a nastepnie wytraceniu stabilnej frakcji bialek osocza przez zmiane stezenia jonów wodorowych, znamienny tym, ze z roztworu zawierajacego stabilna frakcje bialek, niesta¬ bilne globuliny i hemoproteidy wytraca sie niestabilne globuliny i hemoproteidy przez dodanie alkoholu etylowego do uzyskania stezenia od 35 do 40% i doprowadzenia do pH 5,9 - 6,8 w temperaturze od -4°C do-7°C i osad usuwa przez wirowanie, a stabilna frakcje bialek wytraca sie w temperaturze od -5°C do-TCprzez zmiane pH na 4,6 - 4,9 i odwirowuje sie, a z osadu przygotowuje sie preparat leczniczy.Pracownia Poligraficzna UP PRL. Naklad 100 egz Cena 400 zl PLThe subject of the invention is a method of obtaining a stable fraction of human plasma proteins, containing albumin and alpha and beta-globulins, for use in medicine. Albumin is one of the main constituents isolated from plasma. They are used in medicine in the form of intravenous solutions, including as a supplement to the blood volume in case of a large loss by the body. However, more important than albumin as a blood substitutes is a stable fraction of plasma proteins, because it contains, apart from aluminum, other useful proteins, which gives a better therapeutic effect. The preparation of a stable fraction of plasma proteins should be used in all cases where there are indications for plasma administration. It is also administered when whole blood is unavailable or there are difficulties in selecting the appropriate blood group / British Pharmaceutical Codex, 1973, pp. 585 and 590 /. The administration of a stable fraction of human plasma proteins instead of plasma or blood eliminates the risk of infection with the B-type jaundice virus (Alexander J. et al., J. Trauma 19, 502, 1979). Separation of human plasma proteins by Cohn et al. / Cohn . E.J. et al., J. Am. Chem.Soc, 68, 459, 1946 / or in another way makes it possible to obtain individual proteins in a purified form on the production scale. The low efficiency of the methods of obtaining purified protein fractions was the reason for the commencement of research aimed at more economical use of the expensive and scarce resource, which is human plasma . At the end of the 1950s, attempts were made to prepare preparations for use in medicine, obtained from plasma proteins, obtained in the form of a waste solution in the production of gamma-globulin by the Cohn method / the so-called liquid II + III /. Therapeutic reasons were taken into account (the presence of many plasma proteins is more favorable than the albumin themselves) and economic (a significant increase in efficiency). The first attempts to prepare a therapeutic preparation directly from II + III fluid were unsuccessful. The resulting formulation was unstable (Mulford D. Mealey E. J., Clin. Invest. 35, 1213, 1956 /. A precipitate appeared in the solution of 144/47 / proteins after the end of heating for 10 h at 60 ° C. This process has always been used in the production of albumin and stable plasma proteins. Its purpose is to inactivate the jaundice virus of type B.) US Am. No. 2 958) 628, there is a known method of obtaining a stable fraction of plasma proteins for use in medicine ') This method is a modification of Cohn's method 6 and consists essentially in shortening the fractionation process by omitting the precipitation of the so-called fraction IV-4. This method, quoted in the journal as ihetoda Hink, is used to prepare a stable plasma protein fraction containing albumin and alpha and beta globulin (Hink J. et al. Vox Sang., 18, 527, 1970; Schwick H., Vox Sang. , 23, 8) 4; 1972 Foster P., Watt J., "Methods of plasma protein fractionation" 1978. 317, ek. Curling J. /, ftiimo, that the above fractionation method does not completely remove thermolabile proteins, such as e.g. IgG immunoglobulins. This protein is always present in preparations obtained with the Hink method (up to 1%) and may reduce the stability of the preparation.From the economic point of view, it is very unfavorable that the Hink method must use plasma with a very low hemoglobin content, because no fractionation takes place at any stage. According to the PRL patent No. 71 442, the raw material (serum or serum) with a large amount of hemoglobin was fractionated with ethyl alcohol or concentrated salt solution. The obtained albumin sediment and alpha and beta-globulin containing unstable globulins and hemoproteins After dissolving the precipitate in water, hydrogen peroxide was added to a final concentration of 0.01-0.1% at the temperature At a temperature not exceeding 70 ° C., and after keeping the solution at the above temperature for 2 to 10 hours, the pellet of denatured thermolabile globulins and hemoproteins was centrifuged. Stable protein fractions containing albumin and alpha and beta globulins were precipitated from the supernatant in a known manner. The centrifuged sediment was used to prepare therapeutic preparations of a stable fraction of plasma proteins. The known technological process, however, has a number of disadvantages. It is difficult to implement on a production scale, as the introduction of the heating step of the protein solution into Cohn's sub-zero temperature fractionation scheme entails the need to install new equipment in additional rooms. However, the application of drastic conditions, such as keeping the protein solution at 70 ° C for several hours in the presence of hydrogen peroxide, may damage the native structure of the protein molecules and may also lead to their chemical modification. Intravenous administration of preparations containing modified proteins makes it possible to immunize the recipient and the occurrence of side reactions after repeated administration. The aim of the invention is to eliminate the drawbacks of known methods of producing a stable fraction of human plasma proteins for use in therapy. The starting material for the production of a stable fraction of proteins is human plasma. with a low content of hemoglobin or containing hemoglobin up to a concentration of 20 mg / 100 cm3, from which, after the removal of fibrinogen and gamma-globulin, a solution is obtained containing a stable fraction of proteins and unstable globulins and hemoproteins. The essence of the invention is the selection of appropriate conditions for the precipitation and removal of unstable globulins and hemoproteins, and then the precipitation of a stable fraction of plasma proteins containing albumin and stable alpha and beta-globulins. The method according to the invention consists in removing the fibrin from the human plasma contaminated with hemoglobin to a concentration of 20 mg / 100 cm3. en and gamma - globulins in the known way with alcohol at subzero temperatures. Ethyl alcohol is added to the obtained solution containing albumin, alpha and beta-globulins, as well as hemoproteins and unstable globulins to obtain a concentration of 35-40% and the pH is adjusted to 5.9-6.8 at a temperature of -4 ° C to -7 ° C, and the lost hemoproteins and unstable globulins are removed by centrifugation. Properly selected concentration of ethyl alcohol and the concentration of hydrogen ions as well as the temperature prevent the loss of albumin and stable alpha and beta-globulins. After centrifugation of unstable globulins and hemoproteins, the stable fraction of plasma proteins is precipitated from the supernatant by changing the concentration of hydrogen ions to pH 4.6-4.9 at -6 ° C to -7 ° C and centrifuged. The precipitate obtained is dissolved in water, the alcohol is removed and a medicinal preparation is prepared in a known manner. The method according to the invention makes it possible to remove hemoproteins from the raw material during fractionation. The measure of the concentration of hemoproteins in blood products is 144647 3 the absorbance of a 1% solution at 403 nm and according to the recommendations of the World Health Organization it cannot exceed the value of 0.25.0 of the method according to the invention, it proves the possibility of obtaining a stable fraction of proteins with an absorbance not exceeding the absorbance of the raw material containing hemoglobin. 0.25 / Table 1/. The use of the method according to the invention enables a wider use of the raw material than the Hink method, which does not remove hemoproteins during fractionation. As human plasma is a valuable raw material, it is also of significant economic importance. Stable fraction of human plasma proteins obtained according to the invention is characterized by higher purity, than preparations obtained by the Hinkti method. /Tab.2/. The efficiency of the method according to the invention ranges from 24 to 26 g / l of plasma. Table 1 The effect of the applied fractionation method on the level of hemoproteins in a solution of a stable protein fraction. The method of obtaining a stable protein fraction. Hink's method Hink's method. The method of the invention. The method of the invention 1% A403 nm. Solution obtained after removal of fibrinogen and gamma-globulin 0.41 0.23 0.24 0.30 Solution of the stable fraction of proteins 0.46 0.26 0.18 0.12 Table 2 Effect of the applied method of fractionation to obtain a stable fraction The protein content of the IgG and IgA immunoglobulins in the preparations. Method Hink's method Method according to the invention Preparation number 1 2 1 2 Protein concentration (g / 100 cm3) 4.07 4.30 4.08 3.75 IgG content (g / 100 cm3) (%) 0.033 0.8 0.034 0.8 not detected not detected IgA content (g / 100 cm3) (%) 0.007 0.16 0.015 0.35 not detected not detected Example I. Precipitation of fibrinogen and gamma fractions - globulins: 400 cm3 of plasma with a pH of 6.73, adjusted to a pH of 7.28 and an ethanol concentration 8%, adding 1.6 cm3 of 1 M NaOH solution and 36 cm3 of 96% ethanol while stirring constantly. The whole was left at -2 ° C for 1 hour. Subsequently, the precipitate was centrifuged, and 66.4 cm of ethyl alcohol was added to the supernatant (420 cm3) and the pH was adjusted to 6.86 by adding 0.5 cm3 of the buffer containing acetate ions. The mixture was left at -5 ° C for 18 hours. The precipitate was removed by centrifugation at -6 ° C. 446 cm3 of a solution containing albumin, alpha and beta-globulins, as well as hemoproteins and unstable globulins were obtained. Recovery of unstable globulins and hemoproteins: The solution obtained after centrifuging the gamma-globulin sediment was adjusted to pH 6.0 by adding 1 cm3 of a buffer containing acetate ions. Then, the concentration of ethyl alcohol in the solution was increased to 40% by adding 160 cm3 of 96% ethyl alcohol at -5 ° C. The mixture was left at -5 ° C for 18 hours. The precipitated sediment of unstable globulins and hemoproteins was centrifuged at -6 ° C, yielding 546 cm3 of solution.4 144 647 Calculation of the stable protein fraction: The clear supernatant was adjusted to pH 4.85 by adding 5 cm3 of the acetate-ion buffer. The mixture was left at -6 ° C for 7 hours. After this time, the sediment of the stable protein fraction was centrifuged at -6 ° C. The obtained pellet (67 g) was suspended in 134 cm 3 of ice-distilled water and dialyzed. After dialysis and filtration through an HP / EKS filter cartridge, the solution was freeze-dried. 10.5 g of the freeze-dried stable protein fraction were obtained / i.e. 26.3 g / l of plasma /. The lyophilized proteins were dissolved in pyrogen-free and sterile distilled water. Then, 1 mol of NaOH was added to the solution to adjust the pH to 6.7-7.3, and the sodium ion content was adjusted to 0.13-0.16 mol / L by adding the appropriate amount of sodium chloride. A solution with a protein concentration of 4.4% was obtained. After adding sodium caprylate 0.16 mmol / g of protein, the solution of the stable protein fraction was lined up by filtering, poured into plasma bottles and heated for 10 hours at 60 ° C. Example II. Precipitation of fibrinogen and gamma-globulin fractions: 195 1 of plasma with a pH of 6.80 was adjusted to pH 7.0 and an ethyl alcohol concentration of 8%, adding 595 cm3 of 1 molar NaOH solution and 18 L of 94.7% ethyl alcohol under constant stirring. After adding NaOH and ethyl alcohol, the mixture was left at -2 ° C for 1 hour. Then the precipitate was centrifuged, and 34.41 of 94.7% ethyl alcohol was added to the supernatant (215 L) and the pH was adjusted to 6.86 by adding 325 ml of a buffer containing acetate ions. The mixture was left for 15 hours at -5 ° C and then the precipitate was removed by centrifugation. Recovery of unstable globulins and hemoproteins: 250 1 of the supernatant obtained after centrifugation of fibrinogen and gamma-globulin sediments was adjusted to pH 6.1 by adding 540 ml of a buffer containing acetate ions . Then 89.6 L of 96% ethyl alcohol was added with constant stirring. The temperature of the mixture was -6 ° C. The mixture was left at this temperature for 16 hours. The pellet was then removed by centrifugation. 2 kg of diatomaceous earth was added to the supernatant and filtered through HP 7 clarifiers. 310 L of clear solution was obtained. Recovery of stable protein fraction: The clear slurry was adjusted to pH 4.83 by adding 3.35 L of acetate-ion buffer. The mixture was left at -5 ° C for 16 hours and then centrifuged at the above temperature. The pellet (18.37 kg) obtained from centrifugation was suspended in 36.75 l of distilled water at 0 ° C. The solution of the stable protein fraction was dialyzed for 20 hours into distilled water. After dialysis and filtration through HP 7 clarifiers, the solution was freeze-dried. 4.73 kg of the lyophilized, stable fraction of proteins (i.e. 24.3 g / l of plasma) were obtained. For the preparation of a therapeutic preparation of the stable fraction, the lyophilized proteins were dissolved in pyrogen-free and sterile distilled water and 1 mol of NaOH was added until the pH was 6. 9, sodium chloride in an amount necessary to obtain the concentration of sodium ions 0.15 mol / l and sodium caprylate (0.16 mmol / g of protein). The obtained solution of albumin and alpha and beta-globulin / containing no haemoproteins and unstable globulins / filtered through a sterile filter, and then heated for 10 hours at a temperature of 60 ° C. Patent disclaimer Method of obtaining a stable fraction of human plasma proteins from plasma with a low content hemoglobin or containing hemoglobin up to a concentration of 20 mg / 100 cm, consisting in the removal of fibrinogen and gamma globulins, and then the removal and separation of unstable globulins and hemoproteins in selected conditions of hydrogen ion concentration, ethanol concentration and temperature, and then loss of a stable protein fraction plasma by changing the concentration of hydrogen ions, characterized in that unstable globulins and hemoproteins are eliminated from a solution containing a stable fraction of proteins, unstable globulins and hemoproteins by adding ethyl alcohol to a concentration of 35 to 40% and adjusting to pH 5.9 - 6.8 at -4 ° C to -7 ° C and precipitate it is removed by centrifugation, and the stable protein fractions are precipitated at a temperature from -5 ° C to-TC by changing the pH to 4.6 - 4.9 and centrifuged, and a medicinal preparation is prepared from the sediment. Mintage 100 copies Price PLN 400 PL