Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania nowych aminowych pochodnych 6-/p- chlorofenylo/-4,5-dihydro-2H-pirydazyn-3-onu o wzorze ogólnym przedstawionym na rysunku, w którym Am oznacza grupe pirolidynowa, piperydynowa, N-metylopiperazynowa lub N-//3- hydroksyetylo/piperazynowa, natomiast R oznacza atom wodoru lub grupe fenylowa.Zwiazki wytworzone sposobem wedlug wynalazku wykazuja aktywnosc biologiczna.Wedlug wynalazku sposób wytwarzania nowych aminowych pochodnych 6-/p-chlorofeny- lo/-4,5-dihydro-2H -pirydazyn-3-onu o wzorze ogólnym przedstawionym na rysunku, w którym Am oznacza grupe pirolidynowa, piperydynowa, N-metylopiperazynowa lub N-//?-hydroksyety- loApiperazynowa, natomiast R oznacza atom wodoru lub grupe fenylowa, polega na reakcji kondensacji chlorowodorków kwasów /J-aminometylo-/?-/p-chlorobenzoilo/ -propionowych z wodzianem hydrazyny lub fenylohydrazyna, w obecnosci etanolu lub bez uyzcia rozpuszczalnika w temperaturze 353-373 K.Z badan farmakologicznych wynika, ze aminowe pochodne 6-/p-chydrofenylo/-4,5-dihydro- 2H -pirydazyn-3-onu posiadaja aktywnosc antymitotyczna, cytostatyczna oraz immunosupre- syjna. Do oceny aktywnosci preparatów wykorzystano nowy uklad screeningowy- test transformacji blastycznej limfocytów ludzkich prowadzony metoda izotopowa. Badane preparaty wprowadzono w trzech róznych stezeniach molarnych (10~3, 10~4, 10~5M) równoczesnie z mitogenem- fitohemaglutymina (PHA). Preparatem odniesienia byla mitomycyna C. Na podsta¬ wie otrzymanych wyników stwierdzono, ze chlorowodorki 5-aminometylopochodnyeh 6-/p- chlorofenylo/-4,5-dihydro-2H -pirydazyn-3-onu dzialaja dwufazowo. Preparaty te w stezeniach 10"3M/1 wyraznie tlumia inkorporacje 14C — tymidyny do jadra limfocytów. Natomiast w steze¬ niach 10^-10~5M/1 stymuluja wbudowywanie 14C — tymidyny. Chlorowodorki 2-fenylo-5- aminometylo-6-/p-chlorofenylo/ -4,5-dihydro-2H-pirydazyn-3-onu wywieraja natomiast dziala¬ nie jednoznacznie hamujace. Zwiazki te wyraznie hamuja wbudowywanie 14C — tymidyny juz w stezeniu 10"4M/1.Przedmiot wynalazku jest przedstawiony w szesciu przykladach wykonania.2 134609 Przyklad I. Do 3,46g (0,01 mola) chlorowodorku kwasu /3-piperydynometylo-/?-/p- chlorobenzoilo/ -propionowego dodaje sie 3,5ml 80% wodzianu hydrazyny i ogrzewa sie na wrzacej lazni wodnej w ciagu 4,5-5,0 godzin. Po zakonczeniu reakcji mieszanine ochladza sie, dodaje niewielka ilosc wody i pozostawia sie przez noc. Po tym czasie odsacza sie krystaliczny produkt, przemywa woda i suszy na powietrzu. Otrzymuje sie 2,9 g 5-piperydynometylo-6-/p- chlorofenylo/ -4,5-dihydro-2H-pirydazyn-3-onu, z wydajnoscia okolo 95% wydajnosci teorety¬ cznej. Produkt ten po krystalizacji z metanolu, topi sie w temperaturze 429-431 K. Nastepnie preparat ten rozpuszcza sie w niewielkiej ilosci metanolu, dodaje sie 10% roztwór kwasu solnego do pH 1-2 i pozostawia do krystalizacji. Po 24 godzinach odsacza sie krystaliczny produkt. Otrzymuje sie 2,6g chlorowodorku 5-piperydynometylo-6-/p-chlorofenylo/ -4,5-dihydro-2H-pirydazyn-3- onu, z wydajnoscia 80% wydajnosci teoretycznej. Zwiazek ten po krystalizacji z mieszaniny izopropanol-woda topi sie w temperaturze 471-472 K.Przyklad II. Do 4,16g (0,01 mola) hydratu dichlorowodorku kwasu /3-[/4'-metylo-l- piperazynylo/ metylo]-j3-/p-chlorobenzoilo/-propionowego dodaje sie 4,2 ml 80% wodzianu hyd¬ razyny i ogrzewa sie na wrzacej lazni wodnej w ciagu 6,5-7,0 godzin. Po zakonczonej reakcji mieszanine ochladza sie, dodaje sie niewielka ilosc wody i pozostawia przez noc. Po tym czasie odsacza sie krystaliczny produkt. Otrzymuje sie 2,60g 5-[/4'-metylo-l-piperazynylo/ metylo]- -6-/p-chlorofenylo/-4,5-dihydro-2H-pirydazyn-3-onu, z wydajnoscia okolo 80% wydajnosci teo¬ retycznej. Produkt ten po krystalizacji z izopropanolu topi sie w temperaturze 441-443 K.Nastepnie preparat ten rozpuszcza sie w niewielkiej ilosci metanolu, dodaje sie 10% roztwór kwasu solnego do pH 1-2 i pozostawia sie do krystalizacji. Otrzymuje sie 2,67 g dichlorowodorku 5-[/4'-metylo-1-piperazynylo/ metylo]-6-/p-chlorofenylo/4,5-dihydro-2H-pirydazyn-3-onu, z wydajnoscia 80% wydajnosci teoretycznej. Zwiazek ten po krystalizacji z mieszaniny izopropanol- woda topi sie w temperaturze 490-492 K.Przyklad III. Do 4,28g (0,01 mola) dichlorowodorku kwasu /?-[4'-//?-hydroksyetylo/ -1'- piperazynylometylo]-/}- /p-chlorobenzoilo/-propionowego dodaje sie 4,3 ml 80% wodzianu hyd¬ razyny i ogrzewa sie na wrzacej lazni wodnej w ciagu 7,0-7,5 godzin. Po zakonczonej rekacji mieszanine ochladza sie. Otrzymany olej przemywa sie kilkakrotnie woda od nadmiaru hydrazyny, a nastepnie rozpuszcza sie w niewielkiej ilosci metanolu, dodaje sie 10% roztwór kwasu solnego do pH 1-2 i pozostawia sie do krystalizacji. Otrzymuje sie 3,4 g dichlorowodorku 5-[4'-//3- hydroksyetylo/ -l'-piperazynylometylo]-6-/p-chlorofenylo/ -4,5-dihydro-2H-pirydazyn-3-onu z wydajnoscia 80% wydajnosci teoretycznej. Zwiazek ten po krystalizacji z metanolu topi sie w temperaturze 493-495 K.Przyklad IV. Do 3,32g (0,01 mola) chlorowodorku kwasu /J-pirolidynometylo-/3- /p- chlorobenzoiloApropionowego dodaje sie 1,08 g (0,01 mola) fenylohydrazyny w lOml etanolu.Mieszanine ogrzewa sie na wrzacej lazni wodnej w ciagu 8 godzin. Po zakonczonej reakcji z mieszaniny reakcyjnej oddestylowuje sie rozpuszczalnik pod zmniejszonym cisnieniem. Otrzy¬ many olej po pewnym czasie zestala sie na krystaliczna mase. Po rozpuszczeniu w goracym acetonie i ochlodzeniu otrzymuje sie 2,4g chlorowodorku 2-fenylo-5-pirolidynometylo-6-/p-chlorofenylo/- -4,5-dihydro-2H-pirydazyn-3-onu z wydajnoscia 60% wydajnosci teoretycznej. Zwiazek ten po krystalizacji z izopropanolu topi sie w temperaturze 470-471 K.PrzykladV. Do 4,16g (0,01 mola) hydratu dichlorowodorku kwasu /}-[/4'-metylo-l'- piperazynylo/ -metylo]-/3-/p-chlorobenzoilo/-propionowego dodaje sie 1,08 g (0,01 mola) fenylo¬ hydrazyny w 10 ml etanolu. Mieszanine ogrzewa sie do lagodnego wrzenia w ciagu 30 minut. Z ochlodzonego roztworu poreakcyjnego odsacza sie krystaliczny produkt. Otrzymuje sie 3,8 g hydratu dichlorowodorku 2-fenylo-5-[/4'-metylo-r-piperazynylo/ -metylo]-6-/p-chlorofenylo/ - 4,5-dihydro-2H-pirydazyn-3-onu z wydajnoscia okolo 80% wydajnosci teoretycznej. Zwiazek ten po krystalizacji z metanolu topi sie w temperaturze 496-498 K.Przyklad VI. Do 4,28g (0,01 mola) dichlorowodorku kwasu /?-[4'-//3-hydroksyetylo/-1'- piperazynylometylo]-j8- /p-chlorobenzoilo-/-propionowego dodaje sie 1,08 g (0,01 mola) fenylo¬ hydrazyny w 10 ml etanolu. Mieszanine ogrzewa sie do lagodnego wrzenia w ciagu 40 minut. Z ochlodzonego roztworu poreakcyjnego odsacza sie krystaliczny produkt i otrzymuje sie 3,75 g134609 3 dichlorowodorku 2-fenylo-5-[4'-//?-hydroksyetylo/ -l-piperazynylometylo]-6-/p-chlorofenylo/ - 4,5-dihydro-2H pirydazyn-3-onu z wydajnoscia okolo 75% wydajnosci teoretycznej. Zwiazek ten po krystalizacji z mieszaniny izopropanol-woda topi sie w temperaturze 484-486 K.Zastrzezenie patentowe Sposób wytwarzania nowych aminowych pochodnych 6-/p-chlorofenylo/ -4,5-dihydro-2H- pirydazyn-3-onu o wzorze ogólnym przedstawionym na rysunku, w którym Am oznacza grupe pirolidynowa, piperydynowa, N-metylopiperazynowa lub N-//?-hydroksyetylo/-piperazynowa, natomiast R oznacza atom wodoru lub grupe fenylowa, znamienny tym, ze chlorowodorki kwasów /3-aminometylo-/?- /p-chlorobenzoilo/-propionowych poddaje sie reakcji kondensacji z wodzia- nem hydrazyny lub fenylohydrazyna, w obecnosci rozpuszczalnikóworganicznych, najkorzystniej w etanolu lub bez uzycia rozpuszczalników, w temperaturze 353-373 K.134 609 O X • £ < i Lr Q 1 o o II iz—o: —z: X o X o ^1 X o 1 0 1 X o 1 ^Zk f 1 "U 1 0 1 ^ i x CD O i * K i E « < * cu N "O O) Pracownia Poligraficzna UP PRL. Naklad 100 egz.Cena 100 zl PLThe subject of the invention is a process for the preparation of new amine 6- (p-chlorophenyl) -4,5-dihydro-2H-pyridazin-3-one derivatives of the general formula shown in the figure, in which Am represents a pyrrolidine, piperidine, N-methylpiperazine or N group. - // 3-hydroxyethyl / piperazine, and R is a hydrogen atom or a phenyl group. The compounds prepared according to the invention show biological activity. According to the invention, the method for the preparation of new amine 6- (p-chlorophenyl) -4,5-dihydro derivatives 2H-pyridazin-3-one of the general formula shown in the figure, where Am is a pyrrolidine, piperidine, N-methylpiperazine or N - //? - hydroxyethylApiperazine group, and R is a hydrogen atom or a phenyl group, consists of a condensation reaction hydrochlorides of / J-aminomethyl - /? - / p-chlorobenzoyl / -propionic acids with hydrazine hydrate or phenylhydrazine, in the presence of ethanol or without the use of a solvent at a temperature of 353-373 KZ, pharmacological studies show that The new 6- (p-chydrophenyl) -4,5-dihydro-2H-pyridazin-3-one derivatives have antimitotic, cytostatic and immunosuppressive activity. To assess the activity of the preparations, a new screening system was used - the blast transformation test of human lymphocytes carried out by the isotope method. The tested preparations were introduced at three different molar concentrations (10-3, 10-4, 10-5M) simultaneously with the mitogen-phytohaemagglutimine (PHA). The reference preparation was mitomycin C. On the basis of the obtained results, it was found that the hydrochlorides of 5-aminomethyl derivatives of 6- (p-chlorophenyl) -4,5-dihydro-2H-pyridazin-3-one act in two phases. These preparations at the concentrations of 10-3M / 1 clearly suppress the incorporation of 14C-thymidine into the lymphocyte nucleus. At the concentrations of 10-10-5M / 1, they stimulate the incorporation of 14C-thymidine. 2-phenyl-5-aminomethyl-6- / hydrochlorides On the other hand, p-chlorophenyl (-4,5-dihydro-2H-pyridazin-3-one) exerts a clear inhibitory effect. These compounds clearly inhibit the incorporation of 14C-thymidine already at the concentration of 10 "4M / 1. The subject of the invention is presented in six examples. Workmanship 2 134609 Example I. To 3.46 g (0.01 mol) of (3-piperidinomethyl - / α - (p-chlorobenzoyl) -propionic acid hydrochloride, 3.5 ml of 80% hydrazine hydrate are added and heated in a boiling water bath. within 4.5-5.0 hours. After the reaction is complete, the mixture is cooled, a small amount of water added and left to stand overnight. After this time, the crystalline product is filtered off, washed with water and dried in air. 2.9 g of 5-piperidinomethyl-6- (p-chlorophenyl) -4,5-dihydro-2H-pyridazin-3-one are obtained with a yield of about 95% theoretical. This product, after crystallization from methanol, melts at a temperature of 429-431 K. Then this preparation is dissolved in a little methanol, 10% hydrochloric acid solution is added to pH 1-2 and left to crystallize. After 24 hours, the crystalline product is filtered off. There are obtained 2.6 g of 5-piperidinomethyl-6- (p-chlorophenyl) -4,5-dihydro-2H-pyridazin-3-one hydrochloride with a yield of 80% of theory. This compound, after crystallization from isopropanol-water mixture, melts at 471-472 K. Example II. To 4.16 g (0.01 mol) of (3 - [(4'-methyl-1-piperazinyl) methyl] -3- (p-chlorobenzoyl) -propionic acid dihydrochloride hydrate 4.2 ml of 80% hydrate hydrate are added times and heated in a boiling water bath in 6.5-7.0 hours. After the reaction is complete, the mixture is cooled, a little water is added and left to stand overnight. After this time, the crystalline product is filtered off. 2.60 g of 5 - [(4'-methyl-1-piperazinyl) methyl] - -6- (p-chlorophenyl) -4,5-dihydro-2H-pyridazin-3-one are obtained with a yield of about 80% theoretical. This product, after crystallization from isopropanol, melts at 441-443 K. Then this preparation is dissolved in a small amount of methanol, 10% hydrochloric acid solution is added to pH 1-2 and allowed to crystallize. 2.67 g of 5 - [(4'-methyl-1-piperazinyl) methyl] -6- (p-chlorophenyl) 4,5-dihydro-2H-pyridazin-3-one dihydrochloride are obtained with the yield of 80% of theory. . This compound, after crystallization from isopropanol-water mixture, melts at 490-492 K. Example III. To 4.28 g (0.01 mol) of (α - [4 '- // α - hydroxyethyl) -1'-piperazinylmethyl] - /} - (p-chlorobenzoyl) -propionic acid dihydrochloride 4.3 ml of 80% hydrate hydrate and heated in a boiling water bath for 7.0-7.5 hours. After the reaction is over, the mixture is cooled down. The oil obtained is washed several times with water from excess hydrazine, and then dissolved in a small amount of methanol, 10% hydrochloric acid solution is added to pH 1-2 and allowed to crystallize. 3.4 g of 5- [4 '- // 3-hydroxyethyl) -1'-piperazinylmethyl] -6- (p-chlorophenyl) -4,5-dihydro-2H-pyridazin-3-one dihydrochloride are obtained, yield 80 % of theoretical yield. This compound, after crystallization from methanol, melts at the temperature of 493-495 K. Example IV. To 3.32 g (0.01 mol) of (J-pyrrolidinomethyl-) 3- (p-chlorobenzoylApropionic acid) hydrochloride, 1.08 g (0.01 mol) of phenylhydrazine in 10 ml of ethanol are added. The mixture is heated on a boiling water bath during 8 hours. After completion of the reaction, the solvent was distilled off from the reaction mixture under reduced pressure. The oil obtained after some time solidified into a crystalline mass. After dissolving in hot acetone and cooling, 2.4 g of 2-phenyl-5-pyrrolidinomethyl-6- (p-chlorophenyl) -4,5-dihydro-2H-pyridazin-3-one hydrochloride are obtained in a yield of 60% of theory. This compound, after crystallization from isopropanol, melts at a temperature of 470-471 K. Example V. To 4.16 g (0.01 mol) of i} - [(4'-methyl-1'-piperazinyl) -methyl] - (3- (p-chlorobenzoyl) -propionic acid dihydrochloride) hydrate 1.08 g (0 0.1 mole) of phenylhydrazine in 10 ml of ethanol. The mixture is heated to a gentle reflux within 30 minutes. The crystalline product is filtered off from the cooled post-reaction solution. 3.8 g of 2-phenyl-5 - [(4'-methyl-1-piperazinyl) -methyl] -6- (p-chlorophenyl) - 4,5-dihydro-2H-pyridazin-3-one dihydrochloride hydrate are obtained. with a yield of about 80% of the theoretical amount. This compound melts at 496-498 K after crystallization from methanol. Example VI. 1.08 g of (0 0.1 mole) of phenylhydrazine in 10 ml of ethanol. The mixture is heated to a gentle reflux within 40 minutes. The crystalline product is filtered off from the cooled reaction solution and 3.75 g of 2-phenyl-5- [4 '- // α-hydroxyethyl (-1-piperazinylmethyl] -6- (p-chlorophenyl) -4.5 dihydrochloride are obtained. -dihydro-2H pyridazin-3-one with a yield of about 75% of theory. This compound, after crystallization from isopropanol-water mixture, melts at the temperature of 484-486 K. Patent claim Method for the preparation of new amine derivatives of 6- (p-chlorophenyl) -4,5-dihydro-2H-pyridazin-3-one of the general formula in the figure, where Am is a pyrrolidine, piperidine, N-methylpiperazine or N - // α-hydroxyethyl / -piperazine group, and R is a hydrogen atom or a phenyl group, characterized by the hydrochlorides of acids / 3-aminomethyl - /? - / p-chlorobenzoyl / -propionics are subjected to a condensation reaction with hydrazine hydrate or phenylhydrazine in the presence of organic solvents, most preferably in ethanol or without the use of solvents, at a temperature of 353-373 K.134 609 OX • £ <and Lr Q 1 oo II iz — o: —z: X o X o ^ 1 X o 1 0 1 X o 1 ^ Zk f 1 "U 1 0 1 ^ ix CD O i * K i E« <* cu N "OO) Pracownia Poligraficzna UP PRL. Mintage 100 copies Price PLN 100 PL