PL116010B1 - Process for preparing sodium-potassium adenosine-gamma/32p/-triphosphate - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania adenozyno-v[32P] trójfosforanu sodowo-potasowego o wzorze 1, majacego zastosowanie w biochemii do badan enzymatycznych.Znany sposób wytwarzania tego zwiazku, opisany przez Vehrli, Verheyden, Moffat w Journal Ameri¬ can Chemical Society 87, 2265, 1965 r., polega na otrzymywaniu aktywnego amidu adenozynodwu- fosforanu z morfolina, a nastepnie jego kondensacji z 32P ortofosforanem trójbutyloamoniowym, przy czym produkt otrzymuje sie w roztworze wodnym z wydajnoscia 65% w stosunku do fosforanu nieor¬ ganicznego o aktywnosci wlasciwej 2,44 X 1011 roz¬ padów/sekunde/mol.Inny sposób opisany przez Hecht, Kozarich w Bio- chemistry Biophysic Acta 331, 307 — 1973 r., Stany Zjednoczone Ameryki, polega na uaktywnieniu ade- nozynodwufosforanu przy uzyciu l,l'-karbonylo- dwuimidazolu, a nastepnie na kondensacji powsta¬ lego adenozynodwufosforanu — imidazolidu z 32P- -ortofosforanem trójbutyloamoniowym, przy czym produkt otrzymuje sie w roztworze wodnym z wy¬ dajnoscia 60% w stosunku do fosforanu nieorganicz¬ nego o aktywnosci wlasciwej 3,7 X 109 rozpadów/se¬ kunde/mol.Niedogodnoscia znanych sposobów jest to, ze re¬ akcje syntezy sa pracochlonne i dlugotrwale do czterech dni, co powoduje spadek aktywnosci zna¬ czonego izotopem 32P-zwiazku o okresie póltrwania wynoszacym 14,3 dni. 10 15 20 30 Celem wynalazku jest usuniecie niedogodnosci znanych sposobów i otrzymanie zwiazku znaczonego izotopem w sposób prosty i szybki w celu ograni¬ czenia do minimum rozpad izotopu. Istota tego spo¬ sobu polega na tym, ze 32P-ortofosforan potasowy poddaje sie reakcji kondensacji w temperaturze od — 18°C do —20°C z mieszanym bezwodnikiem kwa¬ su adenozynodwufosforowego i kwasu etyloweglo- wego o wzorze 2.Zalete sposobu wedlug wynalazku stanowi pro¬ sty jednodniowy przebieg reakcji syntezy zwiazku znaczonego izotopu WP, kosztem spadku wydajnosci wynoszacej. 40% w stosunku do fosforanu nieorga¬ nicznego z jednoczesnym zwiekszeniem sie aktyw¬ nosci wlasciwej produktu wynoszacej 1,48 X 1013 rozpadów/sekunde/mol.Przedmiot wynalazku jest przedstawiony w przy¬ kladzie wykonania na rysunku przedstawiajacym schemat przebiegu reakcji syntezy.Przyklad I.A. Otrzymywanie bezwodnika mieszanego.Do 86 czesci wagowych adenozynodwufosforanu dwusodowego, wysuszonego przez trzykrotne odpa¬ rowanie z pirydyna, dodaje sie 10 000 czesci objeto¬ sciowych bezwodnego dwumetyloformamidu i po -oziebieniu calosci do .temperatury od —18°C do —20°C dodaje sie 10 czesci objetosciowych chloro- mrówczanu etylowego. W tej temperaturze calosc sie miesza przez 30 minut z pozostawieniem roz- 116 0103 116 010 4 puszczonego w masie reakcyjnej bezwodnika mie¬ szanego.B. Otrzymywanie adenozyno-yp2?] trójfosforanu sodowopotasowego.Do pelnej ilosci otrzymanego bezwodnika w tem¬ peraturze —20°C dodaje sie 5,3 czesci wagowych ortofosforanu potasowego o aktywnosci 3,7 X 1012 rozpadów/sekunde/mol. Calosc sie miesza przez dal¬ sze 30 minut w temperaturze od —18°C do —20°C i doprowadza do temperatury 10—20°C przez usu¬ niecie lazni chlodzacej. Otrzymuje sie, rozpuszczo¬ ny w masie reakcyjnej, adenozyno-yp2?] trójfosfo¬ ran sodowo-potasowy obok dwutlenku wegla i eta- nolanu potasowego.C. Oczyszczanie adenozyno-yf^P] trójfosforanu sodowo-potasowego.Z masy reakcyjnej odparowuje sie dwumetylo- formamid, natomiast pozostalosc rozpuszcza sie w 1000 czesciach objetosciowych wody i calosc w celu oczyszczenia przepuszcza sie przez kolumne wypelniona wymieniaczem jonowym. Produkt wy¬ mywa sie z kolumny octanem trójetyloamoniowym o stezeniu molowym 1,4.Adenozyno-y[32P] trójfosforan sodowo-potasowy w postaci roztworu wodnego otrzymuje sie z wydaj¬ noscia 40% w stosunku do ortofosforanu potasowego 10 15 20 25 o aktywnosci wlasciwej 1,48 X 1013 rozpadów/sekun¬ de/mol.Przyklad II.Otrzymywanie bezwodnika mieszanego oraz ade- nozyno-v[32P] trójfosforanu sodowo-potasowego od¬ bywa sie wedlug przykladu I. Natomiast oczyszcza¬ nie gotowego produktu odbywa sie przez odparo¬ wanie masy reakcyjnej do suchej pozostalosci, któ¬ ra nastepnie rozpuszcza sie w 1000 czesciach objeto¬ sciowych wody i roztwór ten przepuszcza sie przez kolumne wypelniona wymieniaczem jonowym. Po tym kolumne przemywa sie roztworami chlorku amonowego i kwasu solnego oraz wpda.Wydajnosc procesu zwieksza sie o 3% w stosunku do wyniku uzyskanego w przykladzie I, przy czym produkt otrzymuje sie równiez w postaci roztworu wodnego.Zastrzezenia patentowe Sposób wytwarzania adenozyno-y[32P] trójfosfora¬ nu sodowo-potasowego o wzorze 1, znamienny tym, ze ^P-ortofosforan potasowy poddaje sie reakcji kondensacji w temperaturze od — 18°C do —20°C z mieszanym bezwodnikiem kwasu adenozynodwu- fosforowego i kwasu etyloweglowegQ o wzorze 2 przedstawionym na rysunku.W pN OK -O-P-O-^-i Ni °\ CH2-0-P-0-P-0 M« « O O + OH OH.O ^rQc--rnv.+ M*GI OH ON wiór Z OK «i ¦/0\ch2-o-p-o-p-o--^k OH OHm OK II d -p-0-p-0-- 1 1 i 0 0 0 002+OsHsOK OH OH wzór 4 g - Tteita atftijitw ZGK, Druk. im. K. Miarki w Mikolowie, zam. 8385/1100/82, 100 egz.Cena zl 100,— PL

Claims (1)

1. Zastrzezenia patentowe Sposób wytwarzania adenozyno-y[32P] trójfosfora¬ nu sodowo-potasowego o wzorze 1, znamienny tym, ze ^P-ortofosforan potasowy poddaje sie reakcji kondensacji w temperaturze od — 18°C do —20°C z mieszanym bezwodnikiem kwasu adenozynodwu- fosforowego i kwasu etyloweglowegQ o wzorze 2 przedstawionym na rysunku. W pN OK -O-P-O-^-i Ni °\ CH2-0-P-0-P-0 M« « O O + OH OH.O ^rQc--rnv. + M*GI OH ON wiór Z OK «i ¦/0\ch2-o-p-o-p-o--^k OH OHm OK II d -p-0-p-0-- 1 1 i 0 0 0 002+OsHsOK OH OH wzór 4 g - Tteita atftijitw ZGK, Druk. im. K. Miarki w Mikolowie, zam. 8385/1100/82, 100 egz. Cena zl 100,— PL