OA20800A - Phytomédicament à base de l'extrait aqueux des écorces de Greenwayodendron suaveolens pour le traitement des pneumonies infectieuses. - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne l'utilisation de Greenwayodendron suaveolens (Engl. & Diels) Verdc. subsp. suaveolens pour le traitement de la pneumonie. La présente invention concerne également Futilisation pharmaceutique de l'extrait aqueux des écorces de Greenwayodendron suaveolens pour réparer des processus inflammatoires et oxydatifs, et pour traiter la pneumonie induite par Klebsiella pneumoniae. L'élaboration d'un phyto-médicament antipneumonique est obtenue par macération aqueuse à froid des écorces de Greenwayodendron suaveolens, plante pour laquelle il n'existe pas des données ethnobotaniques et ethno-pharmacologiques pour le traitement de la pneumonie. Dans un premier temps, le résidu sec de la plante sélectionnée est testé pour son potentiel anti-Klebsiella pneumoniae, anti-inflammatoire et antioxydant, et pour son innocuité. Par la suite, ce résidu sec, dosé à 500 mg/kg, p.c est administré par voieorale chez les rats wistars pour évaluer concomitamment son activité anti-pneumonique et ses effets indésirables lors du traitement de la pneumonie. Nous n'avons noté aucune présence de Klebsiella pneumoniae dans les poumons des rats wistars après 14 jours de traitement. Nous avons mis en exergue une résorption significative du granulome inflammatoire et des cellules leucocytaires dans le parenchyme pulmonaire des rats wistars traités. Au cours du traitement, nous avons également mis en évidence l'effet antipyrétique du phyto-médicament à base de l'extrait aqueux de Greenwayodendron suaveolens. L'objet de l'invention qu'est le phyto-médicament à base de l'extrait aqueux de Greenwayodendron suaveolens peut se présenter sous trois formes galéniques telles que : comprimés, gélules et sirops ; avec une absorption orale en une ou plusieurs prises journalières. Le phytomédicament peut également être utilisé comme nutraceutique.

Description

L'élaboration d'un phyto-médicament anti-pneumonique est obtenue par macération aqueuse à froid des écorces de Greenwayodendron suaveolens, plante pour laquelle il n'existe pas des données ethnobotaniques et ethnopharmacologiques pour le traitement de la pneumonie. Dans un premier temps, le résidu sec de la plante sélectionnée est testé pour son potentiel anti-Klebsiella pneumoniae, anti-inflammatoire et antioxydant, et pour son innocuité. Par la suite, ce résidu sec, dosé à 500 mg/kg, p.c est administré par voie orale chez les rats wistars pour évaluer concomitamment son activité anti-pneumonique et ses effets indésirables lors du traitement de la pneumonie. Nous n'avons noté aucune présence de Klebsiella pneumoniae dans les poumons des rats wistars après 14 jours de traitement. Nous avons mis en exergue une résorption significative du granulome inflammatoire et des cellules leucocytaires dans le parenchyme pulmonaire des rats wistars traités. Au cours du traitement, nous avons également mis en évidence l'effet antipyrétique du phytomédicament à base de l'extrait aqueux de Greenwayodendron suaveolens.

L'objet de l'invention qu'est le phyto-médicament à base de l'extrait aqueux de Greenwayodendron suaveolens peut se présenter sous trois formes galéniques telles que : comprimés, gélules et sirops ; avec une absorption orale en une ou plusieurs prises journalières. Le phyto-médicament peut également être utilisé comme nutraceutique.

O.A.P.I. - B.P. 887, YAOUNDE (Cameroun)-Tel. (237) 222 20 57 00-Site web: http:/www.oapi.int- Email: oapi@oapi.int

La présente invention concerne l’utilisation de Greenwayodendron suaveolens (Engl. & Diels) Verdc. subsp. suaveolens pour le traitement de la pneumonie. L’invention concerne l’élaboration d’un anti-pneumonique traditionnel amélioré ou d’un nutraceulique, dépourvu de conservateurs et autres adjonctions chimiques, à base l’extrait aqueux des écorces de Greenwayodendron suaveolens permettant de réparer des processus inflammatoires et oxydatifs, et de traiter les pneumonies infectieuses.

L’investigation de l’état de la technique en rapport avec l’objet de l’invention a permis de montrer que la phytothérapie offre de nombreuses plantes aux potentiels antipneumoniques, dont l’innocuité est reconnue pour la plupart, qui sont utilisées dans leur état naturel sous forme de poudre ou extraits.

L’investigation de l’état de la technique en rapport avec l’objet de l’invention a également permis d’identifier les études antérieures ci-après :

Les travaux antérieurs menés sur les feuilles de Greenwayodendron suaveolens ont montré des effets analgésiques chez les souris albinos.

(Timothy O., Sobotie S.E. (2019). Analgésie activities and phytochemistry of aqueous leaf extract of Greenwayodendron suaveolens (Engl, and Diels) Verdc).

Les extraits des fruits de G. suaveolens ont été élaborés et se sont révélés être nontoxiques et actifs contre Staphylococcus aureus, Bac il lus subi il is. Pseudomonas aeruginosa. Escherichia coli, Aspergillus niger et Candida albicans.

(MacDonald I., Oghale O., Nosa O.O., Osaigbovo O. (2017). Phytochemistry, Antimicrobial and Toxicological Studies of Greenwayodendron suaveolens Seed Extracts).

Les triterpènes (polycarpol et dihydropolycarpol) et les alcaloïdes (polyalthénol et Nacétylpolyveolîne) isolés de G. suaveolens ont montré à divers degrés une activité antiprotozoaires avec la sélectivité la plus élevée, observée pour la N-acétyl-polyveoline contre P. falciparum Kl.

(Musuyu M.D., Fruth B., Lami N. J., Tuenter E., Foubert K., Cos P., Mae s L., Cimanga K., Exarchou V., Apers S. (2016). In vitro antiprotozoal activity and cytotoxicity of extracts and isolated constituents from Greenwayodendron suaveolens).

Un nouvel indolosesquiterpène antibactérien « le suaveolindole », a été isolé de G. suaveolens et a révélé une activité in vitro significative contre B. subtilis (ATCC 43223), S. aureus (ATTC 6538P) et S. aureus résistant à la méthicîllîne (ATTC 33591), avec des valeurs de CMI de 4,8 - 8 pg/mL, respectivement.

(Hye-Dong Y., Peadar A.C., Lu Z., Eliane G., Caroline T.W., Chris M.L., Matt G.G., Mark O’Neil-J., Gary R.E., Jin-Feng H. (2005). Suaveolindole, a New Mass-Limited Antibacterial Indolosesquiterpene from Greenwayodendron suaveolens Obtaîned via High-Throughput Natural Products Chemistry Methods).

L’analyse des documents ethnobotaniques et ethno-pharmacologiques à visée antipneumonique chez les rats wistar de Greenwayodendron suaveolens dans cette invention, résultat de l’état de la technique n’a fait l’objet d’aucun travail scientifique, contrairement à l’objet de la présente invention.

L’objet de l’invention a utilisé les écorces de G. suaveolens qui ont été découpées, séchées et pulvérisées. Elles ont été macérées dans de l’eau distillée à des proportions de 1/6 (1 part de poudre pour 6 parts d’eau distillée) pendant 3 jours avec des agitations journalières. Ensuite, le macérât a été filtré avec un papier filtre Whatman N°L Le filtrat obtenu a subi une rota-évaporation sous pression réduite (BUCHI Rotavopor R-100 associée à un Interface de commande 1-300 et à une pompe à vide V-300), et un extrait sec a été récupéré avec un rendement de 16,65 %.

Un criblage phytochimique de l’extrait sec a été réalisé par le biais des techniques col or î métriques et complexométriques décrites par Harborne. Evans et Sofowara. Ces techniques consistent à mettre en évidence la présence des métabolites secondaires bioactifs de l’extrait sec obtenu par macération aqueuse de G. suaveolens. Le macérât aqueux des écorces de G. suaveolens présente une composition phyto-chimique riche en métabolites secondaires bioactifs tels les alcaloïdes, les phénols, les polyphénols, les flavonoïdes, les tanins catéchiques, les triterpènes, les stéroïdes et les anthocyanines, connus généralement pour leurs effets antibactériens, anti-inflammatoires et antioxydants.

L’activité anô-Klebsiellapneumoniae de l’extrait aqueux des écorces de G. suaveolens a été évaluée par les techniques décrites par le CLSL Ces essais consistent à la fois à mettre en évidence la susceptibilité d’une souche de K. pneumoniae ATCC 43816 résistant à FAzithromycine exposée aux disques de papier Whatman N°1 imprégnés de l’extrait aqueux des écorces de G. suaveolens (15 mg/mL) et à déterminer les paramètres d’inhibition de la souche testée en comparaison à l'antibiotique de référence « Levofloxacine ». Les résultats de l’essai in vitro montrent que l’extrait aqueux des écorces de G. suaveolens possède une activité anX\-Klebsiella pneumoniae avec un diamètre de zone d’inhibition de 12,48 mm pour K. pneumoniae (ATCC 43816) résistant à FAzithromycine. Les paramètres d’inhibition de l’extrait aqueux montrent une concentration minimale inhibitrice (CMI) de 234,375 pg/mL et une concentration minimale bactéricide (CMB) de 234,375 pg/mL pour la souche de K. pneumoniae (ATCC 43816) résistant à TAzithromycine.

La procédure d’évaluation du pouvoir anti-inflammatoire de l’extrait aqueux de G. suaveolens consiste à déterminer les taux d’inhibition de la dénaturation des protéines (BSA), de l’activité des enzymes protéolytiques et de l’hémolyse des membranes plasmiques des érythrocytes. L’activité anti-inflammatoire de l’extrait aqueux des écorces de G. suaveolens, nous permet de noter des taux d’inhibition de 85,96 %, 77,62 % et 85,69 % respectivement pour l’inhibition de la dénaturation des protéines, de l’activité des enzymes protéolytiques et de l’hémolyse des membranes plasmiques des érythrocytes, avec respectivement des concentrations inhibitrices 50 (CI50) de 97,50 pg/mL, 62,33 pg/mL et 11,80 pg/mL. Les résultats obtenus montrent que l’extrait aqueux des écorces de G. suaveolens possède une activité anti-inflammatoire avec une action sur trois mécanismes de l’inflammation.

Les taux des antioxydants et des flavonoïdes. principaux composés chimiques responsables des effets anti-inflammatoire et antioxydant, ont été évalués par spectrophotométrie en mesurant respectivement l’absorbance de l’acide gallîque et de la quercétine dans le macérât aqueux étudié. Par la suite, les pouvoirs antîradicalaires et réducteurs dudit extrait ont été évalués par les méthodes de dosage des radicaux DPPH et A BTS, et la réduction du FRAP. Plus le macérât aqueux est riche en antioxydants et en flavonoïdes totaux, plus ta densité optique du macérât est importante. Le spectrophotomètre, a préalablement été étalonné sur les longueurs d’ondes d’absorption de l’acide gallîque (760 nm), de la quercétine (510 nm), des radicaux DPPH (517 nm), ABTS (743 nm) et FRAP (593 nm). Les résultats montrent que l’extrait aqueux de G. suaveolens est riche en antioxydants totaux (185,02 ± 1,53 mg équivalent d’acide gallique/g d’extrait sec) et en flavonoïdes totaux (561.40 ± 4.48 mg équivalent de quercétine/g d’extrait sec). Les résultats du pouvoir antiradicalaire montrent que la meilleure activité antiradicalaire de l'extrait aqueux est liée au radical ABTS (0,0004) par rapport au DPPH (0,0012). La réduction du FRAP par l’extrait aqueux a montré que la capacité chélatrice du fer ferreux en fer ferrique est de 564,41 mg équivalent d’acide gallique/g d’extrait sec. En conclusion, l’extrait aqueux de G. suaveolens a également un effet antioxydant.

Les animaux ont été randomisés en six (06) groupes de 6 animaux chacun, à savoir : témoin normal (A), non traité (B) et traités (C, D, E et F). Tous les groupes d’animaux, à l’exception du groupe (A) ont été quotidiennement infectés pendant 15 jours avec 50 pL d’inoculum (1,5 x 10⁶ UFC/mL) de K. pneumoniae ATCC 43816 résistant à rAzithromycine utilisant la méthode d’instillation intranasale. Les animaux du groupe (A) ont été administrés avec une solution saline normale (NaCl ; 0,9 %). Les animaux du groupe (B) n’ont reçu aucun traitement. Les animaux du groupe (C) ont reçu une solution de Levofloxacine administrée à la dose de 100 mg/kg, p.c. Tandis que, les animaux des groupes (D, E et F) ont été administrés avec le macérât aqueux de G. suaveolens aux doses de 125, 250 et 500 mg/kg, p.c. Tous les traitements ont été administrés par voie orale pendant 14 jours.

Le macérât aqueux administré par voie orale à ia dose de 500 mg/kg, p.c. exerce un effet anti-pneumonique (arAi-Klebsiella pneumoniae, anti-inflammatoire et antioxydant). Nous n’avons noté aucune présence de Klebsiella pneumoniae dans les poumons des rats wistars à la dose de 500 mg/kg, p.c après 14 jours de traitement en comparaison à la Levofloxacine (2,71 x 10⁴ UFC/mL). Le macérât aqueux à ia dose de 500 mg/kg, p.c. a également mis en exergue une diminution significative des cellules leucocytaires (Ncl) dans le parenchyme pulmonaire des rats wîstar traités lors de l'examen histopathologique (Coloration May-Grünwald-Giemsa ; X 100). Cette diminution montre que les processus inflammatoires et oxydatifs qui se sont développés au cours de T infection à K. pneumoniae ont été résorbés à la dose de 500 mg/kg, p.c. Les températures des différents groupes d'animaux traités à l'extrait aqueux des écorces de G. suaveolens montrent une diminution significative de la température des rats infectés par K. pneumoniae. Le statut hémaîologique des rats infectés par Klebsiella pneumoniae et traités à la dose de 500 mg/kg, p.c. de l’extrait aqueux de G. suaveolens montre également une régularisation totale du taux des marqueurs hématologiques (Globules blancs, Globules rouges, Hémoglobine, Plaquettes sanguines, Lymphocytes, Granulocytes et Monocytes) similaires aux valeurs du témoin normal.

Le potentiel thérapeutique des biomolécules de Greenwayodendron suaveolens dans le traitement des maladies respiratoires n’a jamais été étudié. Selon les résultats que nous avons obtenus, la synergie des métabolites secondaires de G. suaveolens favorise l’effet pharmacologique dans le traitement de la pneumonie induite par Klebsiella pneumonie.

Le suivi toxicologique aigu in vivo du macérât aqueux de G. suaveolens à la dose limite de 5000 mg/kg, p.c. en administration unique n’a montré aucun effet toxique. Nous n’avons noté aucune anomalie sur les paramètres étudiés (le poids relatif des organes vitaux de l’animal, le comportement général de l’animal et les paramètres biochimiques) à cette dose en comparaison au témoin normal, à l’exception de l’alcaline phosphatase, qui a montré une augmentation de son activité par rapport à la normale.

Le suivi toxicologique subaigu in vivo du macérât aqueux de G. suaveolens aux doses de 125, 250 et 500 mg/kg, p.c. administrées pendant 14 jours et réalisé en simultané avec 5 l’évaluation du potentiel anti-pneumonique, n’a montré aucun effet indésirable sur les paramètres étudiés à savoir : le poids et le comportement généra! de l’animal, les paramètres hématologiques, et histopathologiques avec l’extrait aqueux de G. suaveolens aux doses testées. Toutefois, nous avons observé de légères anomalies à savoir des micro-altérations des sacs alvéolaires, principalement dues à la physiopathologie du germe « Klebsiella 10 pneumonia».

Les résultats obtenus du contrôle toxicologique oral aigu et subaigu in vivo du macérât aqueux de G. suaveolens montrent que la dose 500 mg/kg, p.c. peut être définitivement sélectionnée pour le traitement de la pneumonie.

Suite à ces résultats, nous avons opté pour l'élaboration d’un phyto-médicament anti15 pneumonique dosé à 500 mg/kg, p.c. et qui peut être présenté sous forme de comprimés, gélules et sirops avec une absorption orale en une ou plusieurs prises journalières.

Claims (26)

1, L’utilisation de Greenwayodendron suaveolens (Engl. & Diels) Verdc. subsp. suaveolens (Annonaceae) pour le traitement des maladies respiratoires.

2. L’utilisation selon la revendication 1, des écorces de Greenwayodendron suaveolens pour le traitement de la pneumonie.

3. L’utilisation selon les revendications 1 et 2, caractérisée en ce que les écorces de Greenwayodendron suaveolens ont été découpées, séchées et pulvérisées.

4. Le produit selon les revendications 1 à 3, caractérisé en ce que le macérât aqueux est constitué de la poudre de Greenwayodendron suaveolens.

5. Le produit selon la revendication 4, caractérisé en ce que l’extraction des principes actifs a été réalisée par macération aqueuse à froid avec des agitations séquentielles journalières pendant 3 jours.

6. Le produit selon les revendications 1 à 5, caractérisé en ce que le résidu sec est récupéré avec un rendement de 16.65 %.

7. Le produit selon la revendication 6, caractérisé en ce que le résidu sec est constitué des alcaloïdes, des phénols, des polyphénols, des flavonoïdes, des tanins catéchiques, des triterpènes, des stéroïdes et des anthocyanines.

8. Le résidu sec, selon la revendication 7, est mis en solution à une concentration de 15 mg/mL et possède un potentiel antibactérien sur une souche de K. pneumoniae ATCC 43816 résistante à rAzithromycine avec un diamètre de zone d’inhibition de 12,48 mm, et des concentrations minimales inhibitrices et concentrations minimales bactéricides de 234,375 pg/mL.

9. Le résidu sec, selon la revendication 7, est mis en solution à une concentration de 1,5 mg/mL.

10. Le résidu sec selon la revendication 9. caractérisé en ce que la solution du résidu sec possède des capacités à inhiber la dénaturation des protéines fonctionnelles, à bloquer l’activité des enzymes protéolytiques et à inhiber l’hémolyse des membranes plasmiques des érythrocytes avec des concentrations inhibitrices 50 (CI50) respectives de 97,50 pg/mL, 62,33 pg/mL et 11,80 pg/mL.

11. Le résidu sec selon la revendication 9, caractérisé en ce que sa solution aqueuse concentré à 1,5 mg/mL possède des taux d’antioxydants totaux et de flavonoïdes totaux de l’ordre de 185,02 ± 1,53 mg/g et 561.40 ± 4.48 mg/g d’extrait sec respectivement.

12. Le résidu sec selon la revendication 11, caractérisé en ce que sa solution aqueuse concentré à 1,5 mg/mL a la capacité de piéger les radicaux DPPH' et ABTS⁺' avec des pouvoirs antiradical ai res respectifs de l’ordre de 0,0004 et 0,0012.

13. Le produit selon la revendication 11, caractérisé en ce que la solution aqueuse du résidu sec concentré à 1,5 mg/mL a un pouvoir réducteur du fer ferrique avec une capacité chélatrice du fer ferreux en fer ferrique est de l’ordre de 564,41 mg/g.

14. Le produit selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le résidu sec de G. suaveolens est récupéré dans une solution de NaCl (0,9 %) pour les tests pharmaco-toxicologiques.

15. L’utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la pneumonie a été induite chez les rats wistars par inoculation pendant 15 jours de 50 pL d’inoculum (1,5 χ 10⁶ UFC/mL) de K. pneumoniae ATCC 43816 résistant à FAzithromycine.

16. L’utilisation selon la revendication 15, caractérisée en ce que la pneumonie développée par les rats wistar est justifiée par l’élévation anormale de la température corporelle de l’animal, la présence de Klebsiella pneumoniae dans les poumons, et par la présence du granulome inflammatoire et le taux anormalement élevé des cellules leucocytaires dans le parenchyme pulmonaire des rats wistar infectés.

17. L’utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le produit est administré pendant 14 jours pour le traitement de la pneumonie par voie orale à une dose journalière de 500 mg/kg, p.c.

18. Le produit selon les revendications 15,16 et 17, caractérisé en ce que le résidu sec à la dose de 500 mg/kg, p.c. possède un effet anti-pneumonique avec des propriétés antipyrétique (par la diminution significative de la température corporelle des rats infectés par K. pneumoniae), anti-Klebsiella pneumoniae (par l’inhibition de la croissance de Klebsiella pneumoniae dans les poumons), anti-inflammatoire et antioxydant (par la résorption du granulome inflammatoire et des cellules leucocytaires dans le parenchyme pulmonaire des rats wistars infectés).

19. Le phyto-médicament selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le produit à la dose de 500 mg/kg, p.c. résorbe toutes les anomalies générées au cours de la physiopathologie de la pneumonie.

20. Le phyto-médicament selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le contrôle toxicologique de celui-ci à la dose 5000 mg/kg, p.c. a été réalisé et montre que son seuil toxique est supérieur à 5000 mg/kg, p.c.

21. Le phyto-médicament selon i’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le contrôle toxicologique quotidien du phyto-médicament à la dose de traitement et pendant 14 jours a été réalisé pour déterminer les effets indésirables de celui-ci.

22. Le phyto-médicament selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le phyto-médicament ne présente aucun effet indésirable à la dose 500 mg/kg, p.c. sur les paramètres étudiés.

23. Le phyto-médicament selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la dose 500 mg/kg, p.c. peut être utilisée pour le traitement de la pneumonie.

24. Le phyto-médicament selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la dose 500 mg/kg, p.c. peut être utilisée comme nutraceutique.

25. Le phyto-médicament selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l’objet de l’invention dosé à 500 mg/kg, p.c. chez l’animal ; théoriquement, peut être utilisé chez l’homme de 60 kg à une dose journalière admissible (DJA) de l'ordre de 8,1 mg/kg, p.c. ou 486,22 mg par jour.

26. Le phyto-médicament selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l’objet de l’invention peut être formulé sous trois formes pharmaceutiques telles que : comprimés, gélules et sirops et dont Γadministration peut se faire en une ou plusieurs prises.