NO973193L

NO973193L - Collagen-based methods and formulations for the treatment of immune system-mediated diseases

Info

Publication number: NO973193L
Application number: NO973193A
Authority: NO
Inventors: Thomas B Neff; George R Martin; Karl A Piez; Taina A Pihlajaniemi; Kari Ilkka Kivirikko
Original assignee: Fibrogen Inc; Academy Of Finland
Priority date: 1995-01-10
Filing date: 1997-07-09
Publication date: 1997-09-09
Also published as: FI972929A0; WO1996021458A1; AU4657096A; CA2210088A1; NO973193D0; MX9705198A; EP0805686A1; HUP9800829A3; FI972929A; JPH10512554A; HUP9800829A2; BR9606753A

Description

Oppfinnelsen er innenfor feltet autoimmune sykdommer og andre immunsystem-formidlede sykdomsbehandlinger som benytter kollagen og/eller derivater derav. The invention is within the field of autoimmune diseases and other immune system-mediated disease treatments that use collagen and/or derivatives thereof.

Selv om immunsystemet er essensielt for bekjempelse av infeksjoner, kan immunresponsen til infeksjonene (fremmede antigener) og immunresponsen til molekyler produsert i legemet (autologe antigener) resultere i tallrike sykdommer, dvs. immunsystem-formidlede sykdommer. Immunsystem-formidlede sykdommer kan være enten B-celle-formidlede (dvs. antistoff-formidlede) eller T-celleformidlede. I tillegg kan immunsystem-formidlede sykdommer være forårsaket av immunkomplekser dannet mellom antistoffer og antigener (enten fremmede eller autologe). Mange immunsystem-formidlede sykdommer involverer en uønsket inflammatorisk respons, f.eks. sykdommer som inkluderer reumatoid artritt, kronisk hepatitt, Crohns sykdom, Although the immune system is essential for fighting infections, the immune response to the infections (foreign antigens) and the immune response to molecules produced in the body (autologous antigens) can result in numerous diseases, i.e. immune system-mediated diseases. Immune system mediated diseases can be either B cell mediated (ie antibody mediated) or T cell mediated. In addition, immune system-mediated diseases can be caused by immune complexes formed between antibodies and antigens (either foreign or autologous). Many immune system-mediated diseases involve an unwanted inflammatory response, e.g. diseases that include rheumatoid arthritis, chronic hepatitis, Crohn's disease,

psoriasis, vaskulitt og lignende.psoriasis, vasculitis and the like.

Eksisterende terapi for immunsystem-formidlede sykdommer, særlig immunsystem-formidlede sykdommer som resulterer i en uønsket inflammatorisk respons, slik som reumatoid artritt er utilstrekkelig. De fleste immunsystemformidlede sykdommer er kroniske tilstander som krever langvarig administrering av medikamenter. Det er således viktig å benytte relative ikke-toksiske medikamenter. Mange forbindelser blir anvendt for behandling av auotimmune sykdommer, f.eks. steroider og ikke-steroidiske anti-inflammatoriske forbindelser, har imidlertid gitt toksiske sideeffekter som blir tydelig etter langtids bruk. Immunosuppressive medikamenter har i tillegg blitt anvendt til å behandle autoimmune responser. Slike immunsuppresive medikamenter, f.eks. cyklosporin A og azatioprin er relativt ikke-spesifikke og har den negative effekten at de svekker hele immunsystemet, og gjør dermed pasienten utsatt for infeksjonsholdige sykdommer. Existing therapies for immune system-mediated diseases, particularly immune system-mediated diseases that result in an unwanted inflammatory response, such as rheumatoid arthritis, are insufficient. Most immune system-mediated diseases are chronic conditions that require long-term administration of drugs. It is therefore important to use relatively non-toxic drugs. Many compounds are used for the treatment of autoimmune diseases, e.g. steroids and non-steroidal anti-inflammatory compounds, however, have produced toxic side effects that become apparent after long-term use. Immunosuppressive drugs have also been used to treat autoimmune responses. Such immunosuppressive drugs, e.g. cyclosporin A and azathioprine are relatively non-specific and have the negative effect of weakening the entire immune system, thereby making the patient susceptible to infectious diseases.

Oral administrering av forbindelsene har vist seg å indusere immuntoleranse med hensyn på den inntatte forbindelsen og forbindelsene som er strukturelt beslektet med den inntatte forbindelsen. Det har vært antydet at fenomenet med oral toleranseinduksjon kan bli tilpasset som en metode forbehandling av autoimmun sykdom. PCT-publikasjon WO 95/10301 beskriver anvendelse av oralt inntatte kolera toksinkonjugater for å minske en forsinket hypersensitiv reaksjon og regulere eksperimentell autoimmun encefalitt i musemodeller. Oral administration of the compounds has been shown to induce immune tolerance with respect to the ingested compound and compounds structurally related to the ingested compound. It has been suggested that the phenomenon of oral tolerance induction may be adapted as a method of pretreatment of autoimmune disease. PCT publication WO 95/10301 describes the use of orally ingested cholera toxin conjugates to reduce a delayed hypersensitivity reaction and control experimental autoimmune encephalitis in mouse models.

I lys av manglene ved eksisterende teknikker for behandling av kronisk immunsystem-formidlede sykdommer, er det av interesse å skaffe tilveie nye fremgangsmåter og sammensetninger for behandling av immunsystem-formidlede sykdommer. Fremgangsmåter som her er beskrevet benytter en eller flere kollagener og/eller kollagenderivater for å redusere eller eliminere en immunrespons som er viktig for patogenese av en gitt immunsystem-formidlet sykdom. Fremgangsmåter og formuleringer som er utformet for å indusere toleranse til antigener involvert i sykdomsprosesser. In light of the shortcomings of existing techniques for the treatment of chronic immune system-mediated diseases, it is of interest to provide new methods and compositions for the treatment of immune system-mediated diseases. Methods described herein utilize one or more collagens and/or collagen derivatives to reduce or eliminate an immune response important to the pathogenesis of a given immune system-mediated disease. Methods and formulations designed to induce tolerance to antigens involved in disease processes.

Foreliggende oppfinnelse skaffer tilveie nye fremgangsmåter og sammensetninger for behandling av immunsystem-formidlede sykdommer, inkludert reumatoid artritt. De aktuelle sammensetningene omfatter en eller flere typer av kollagen eller kollagenderivater. Spesifikke kombinasjoner av kollagen og/eller kollagenderivater kan bli anvendt til å behandle spesifikke immunsystemformidlede sykdommer. Kollagen(er) og/eller kollagen(er) derivater som ble anvendt i de aktuelle sammensetningene kan enten bli oppnådd fra naturlige kilder eller produsert ved rekombinant genenetiske engineeringsteknikker. The present invention provides new methods and compositions for the treatment of immune system-mediated diseases, including rheumatoid arthritis. The relevant compositions comprise one or more types of collagen or collagen derivatives. Specific combinations of collagen and/or collagen derivatives can be used to treat specific immune system mediated diseases. Collagen(s) and/or collagen(s) derivatives used in the subject compositions can either be obtained from natural sources or produced by recombinant genetic engineering techniques.

Et annet trekk ved oppfinnelsen er å skaffe tilveie fremgangsmåter for å behandle immunsystem-formidlede sykdommer ved administrering av en effektiv mengde av de aktuelle kollageninneholdende sammensetningene. Fremgangsmåtene i oppfinnelsen innbefatter administrering av den aktuelle kollagen(er) og/eller kollagenderivat(er) inneholdende sammensetninger i tynntarmen for å indusere immuntoleranse, dvs. oral administrering. Another feature of the invention is to provide methods for treating immune system-mediated diseases by administering an effective amount of the relevant collagen-containing compositions. The methods of the invention include administration of the relevant collagen(s) and/or collagen derivative(s) containing compositions in the small intestine to induce immune tolerance, i.e. oral administration.

Et annet trekk ved oppfinnelsen er å skaffe tilveie de aktuelle kollagen og/eller kollagenderivatinneholdende sammensetningene som blir formulert for administrering til en pasient. Foretrukkede formuleringer i oppfinnelsen er utformet for å frigjøre kollagen(er) og/eller kollagenderivater i tynntarmen for å komme i kontakt med tynntarmlymfoid vev. I en foretrukket utførelsesform av oppfinnelsen blir foreliggende sammensetninger formulert for oral administrering. Another feature of the invention is to provide the appropriate collagen and/or collagen derivative-containing compositions that are formulated for administration to a patient. Preferred formulations of the invention are designed to release collagen(s) and/or collagen derivatives in the small intestine to contact small intestinal lymphoid tissue. In a preferred embodiment of the invention, the present compositions are formulated for oral administration.

Et annet trekk med oppfinnelsen er å skaffe tilveie kollagenderivater som omfatter minst en toleranseinduserende epitope, og fortrinnsvis en flerhet av toleranseinduserende epitoper. Slike kollagenderivater kan omfatte flere forskjellige kollagen-avledede toleranseinduserende epitoper og blir referert til som toleranseepitope polypeptider. Toleranseepitopepolypeptider kan også omfatte aminosyreløste sekvenser avledet fra ikke-kollagenholdige proteiner. Another feature of the invention is to provide collagen derivatives which comprise at least one tolerance-inducing epitope, and preferably a plurality of tolerance-inducing epitopes. Such collagen derivatives may comprise several different collagen-derived tolerance-inducing epitopes and are referred to as tolerance epitope polypeptides. Tolerance epitope polypeptides may also comprise amino acid resolved sequences derived from non-collagenous proteins.

Et annet trekk ved oppfinnelsen er å skaffe tilveie mykosabindende kollagenkonjugater for behandling av immunsystemformidlede sykdommer. Mukosabindende kollagenkonjugater i oppfinnelsen omfatter en eller flere kollagenmolekyler bundet til et mukosabindemolekyl. Tallrike forskjellige kollagen og/eller kollagenderivater kan bli anvendt som kollagenkomponenten av mukosabindende kollagenkonjugater i oppfinnelsen. Flere mukosabindende molekyler kan bli anvendt som mukosabindende molekylkomponent i mukosabindende kollagenkonjugater i oppfinnelsen som er egnet for mukosabindende komponenter som inkluderer mukosabindestrukturer avledet fra bakterielle toksiner, bakterielle fimbria, virale tilknytningsproteiner og plantelektiner. Spesielt foretrukkede mukosabindende komponeter er 8-subenheter av koleratoksin og B-subenheter av E. coli varm labil enterotoksin. Another feature of the invention is to provide mycobinding collagen conjugates for the treatment of immune system mediated diseases. The mucosa-binding collagen conjugates in the invention comprise one or more collagen molecules bound to a mucosa-binding molecule. Numerous different collagen and/or collagen derivatives can be used as the collagen component of mucosa-binding collagen conjugates in the invention. Several mucosa-binding molecules can be used as mucosa-binding molecular component in mucosa-binding collagen conjugates of the invention which are suitable for mucosa-binding components that include mucosa-binding structures derived from bacterial toxins, bacterial fimbria, viral attachment proteins and plant lectins. Particularly preferred mucosa-binding components are 8-subunits of cholera toxin and B-subunits of E. coli warm labile enterotoxin.

Et annet trekk ved oppfinnelsen er å skaffe tilveie fremgangsmåter for å behandle immunsystemformidlede sykdommer for administrering av en effektiv mengde av et mukosabindende kollagenkonjugat. Et annet trekk ved oppfinnelsen er å skaffe tilveie formulering for anvendelse i behandling av immunsystemformidlede sykdommer, der formuleringen omfatter et mukosabindende kollagenkonjugat av oppfinnelsen. Formuleringene er fortrinnsvis tilpasset til oral administrering. Another feature of the invention is to provide methods for treating immune system mediated diseases for the administration of an effective amount of a mucosa binding collagen conjugate. Another feature of the invention is to provide a formulation for use in the treatment of immune system-mediated diseases, where the formulation comprises a mucosa-binding collagen conjugate of the invention. The formulations are preferably adapted for oral administration.

Oppfinnelsen involverer anvendelse av en eller flere forskjellige kollagener og/eller kollagenderivater for å indusere oral toleranse i en spesifikk populasjon av immunceller for å skaffe tilveie en fremgangsmåte for å behandle immunsystemformidlede sykdommer. Fremgangsmåtene ved anvendelse av forskjellige kollagener og/eller kollagenderivater for å behandle immunsystemformidlede sykdommer og sammensetning for anvendelse av slike fremgangsmåter blir her tilveiebrakt. Fremgangsmåtene i oppfinnelsen involverer oral administrering av et kollagen eller kollagener som man finner i et spesifikt vev for å indusere undertrykking (immunologisk toleranse) av inflammasjon mot vevet (eller vevene) fra hvilken kollagen blir funnet å forekomme i naturen. Korrespondansen mellom en spesifikk kollagentype og dens (f.eks. vevstype) kan man finne i forskjellige referanser, inkludert Fukai et al., Methods of Enzymology, 245:3-28 (1994). Kollagen (og kollagenderivat) inneholdende sammensetninger for anvendelse i slike fremgangsmåter blir også beskrevet. Oppfinnelsen skaffer også tilveie mange forskjellige typer av mukosabindende kollagenkonjugater og fremgangsmåter for deres anvendelse i behandling av immunsystemformidlede sykdommer. The invention involves the use of one or more different collagens and/or collagen derivatives to induce oral tolerance in a specific population of immune cells to provide a method of treating immune system mediated diseases. The methods of using various collagens and/or collagen derivatives to treat immune system mediated diseases and composition for use of such methods are provided herein. The methods of the invention involve oral administration of a collagen or collagens found in a specific tissue to induce suppression (immunological tolerance) of inflammation against the tissue (or tissues) from which the collagen is found to occur naturally. The correspondence between a specific collagen type and its (eg, tissue type) can be found in various references, including Fukai et al., Methods of Enzymology, 245:3-28 (1994). Collagen (and collagen derivative) containing compositions for use in such methods are also described. The invention also provides many different types of mucosa-binding collagen conjugates and methods of their use in the treatment of immune system-mediated diseases.

Et trekk ved oppfinnelsen er å anvende mindre kollagener, dvs. sammenlignbare sjeldne kollagener som man finner naturlig forbundet med hovedkollagenet, til å indusere immuntoleranse for å redusere alvorlighet av en uønsket immunrespons, for dermed å skaffe tilveie basis av en behandling av artritt og beslektede immunsystem-formidlede sykdommer; oppfinnelsen beskriver også anvendelse av hovedkollagenet for å indusere immuntoleranse. Brusk inneholder forskjellige arter av kollagen som skaffer tilveie hovedekstracellulær skjellett for omgivende vev. Data som har blitt funnet antyder at type II kollagen, et hovedkollagen, kan ha kapasitet til å undertrykke inflammasjon i brusk. Foreliggende oppfinnelse er delvis basert på den realisering at mindre kollagen(er) som natulig finnes å forekomme i kombinasjon med hovedkollagen(er) kan være viktig ved indusering av immuntoleranse som er nyttig ved behandling av immunsystemformidlede sykdommer slik som reumatoid artritt. Et trekk ved oppfinnelsen er å anvende mindre kollagener, alene eller i kombinasjon med hovedkollagenet, for å indusere immuntoleranse som resulterer i lindring av sykdomsprosessen i flere immunsystemformidlede sykdommer. A feature of the invention is to use minor collagens, i.e. comparable rare collagens found naturally associated with the main collagen, to induce immune tolerance to reduce the severity of an unwanted immune response, thereby providing the basis of a treatment of arthritis and related immune systems -mediated diseases; the invention also describes the use of the main collagen to induce immune tolerance. Cartilage contains different species of collagen that provide the main extracellular framework for surrounding tissues. Data that have been found suggest that type II collagen, a major collagen, may have the capacity to suppress inflammation in cartilage. The present invention is partly based on the realization that minor collagen(s) which naturally occur in combination with major collagen(s) may be important in inducing immune tolerance which is useful in the treatment of immune system-mediated diseases such as rheumatoid arthritis. A feature of the invention is to use minor collagens, alone or in combination with the main collagen, to induce immune tolerance which results in the alleviation of the disease process in several immune system mediated diseases.

Foreliggende oppfinnelse angir tallrike kollagen og kollagenderivatinneholdende sammensetninger. Forskjellige typer av kollagen er kjent for personer med kunnskap innenfor fagområdet. På det nåværende tidspunkt har nitten forskjellige kollagentyper blitt oppdaget. En detaljert beskrivelse av struktur og biologiske funksjoner til forskjellige typer naturlig forekommende kollagen kan man blant annet finne i Ayad et al., The Extracellular Matrix Facts Book, Academic Press, San Diego, CA; Burgeson, R.E. and Nimmi, "Collagen types: Molecular Structure and Tissue Distribution," Clin. Orthop., 282:250-272 (1992); Kielty, C.M., et al., "The Collagen Family: Structure, Assembly And Organization In The Extracellular Matrix." In Connective Tissue And Its Heritable Disorders, Molecular Genetics, And Medical Aspects, Royce, P.M. and Steinmann, B., Eds., Wiley-Liss, NY, s. 103-147 (1993). The present invention specifies numerous collagen and collagen derivative-containing compositions. Various types of collagen are known to persons skilled in the art. At present, nineteen different collagen types have been discovered. A detailed description of the structure and biological functions of different types of naturally occurring collagen can be found, among other things, in Ayad et al., The Extracellular Matrix Facts Book, Academic Press, San Diego, CA; Burgeson, R.E. and Nimmi, "Collagen types: Molecular Structure and Tissue Distribution," Clin. Orthop., 282:250-272 (1992); Kielty, C.M., et al., "The Collagen Family: Structure, Assembly And Organization In The Extracellular Matrix." In Connective Tissue And Its Heritable Disorders, Molecular Genetics, And Medical Aspects, Royce, P.M. and Steinmann, B., Eds., Wiley-Liss, NY, pp. 103-147 (1993).

Type I kollagen er hovedfibrillar kollagenet i ben og hud. Type I kollagen er et heterotrimerisk molekyl som omfatter to a 1(1) kjeder og en a2(I) kjede. Detaljer for fremstilling av renset type I kollagen kan man blant annet finne i Miller, E.J., og Rhodes, R.K., Methods In Enzymology, 82:33-64 (1982), Academic Press. Type I collagen is the main fibrillar collagen in bone and skin. Type I collagen is a heterotrimeric molecule comprising two α1(1) chains and one α2(I) chain. Details for the preparation of purified type I collagen can be found, inter alia, in Miller, E.J., and Rhodes, R.K., Methods In Enzymology, 82:33-64 (1982), Academic Press.

Type II kollagen er et homotrimer kollagen som omfatter tre identiske al(II) kjeder. Renset type II kollagen kan man bli fremstilt blant andre metoder ved fremgangsmåten som er beskrevet i Miller, E.J., og Rhodes, R.K., Methods In Enzymology, 82:33-64 Type II collagen is a homotrimer collagen comprising three identical Al(II) chains. Purified type II collagen can be prepared, among other methods, by the method described in Miller, E.J., and Rhodes, R.K., Methods In Enzymology, 82:33-64

(1982), Academic Press. (1982), Academic Press.

Type III kollagen er et hovedfibrillært kollagen som man finner i hud og vaskulært vev. Type III kollagen er et homotrimert kollagen som omfatter tre identiske al (III) kjeder. Fremgangsmåte for fremstilling av type III kollagen kan blant annet finne i Byers, et al., Biochemistry, 13:5243-5248 (1974) og Miller, E.J. og Miller, R.K., Methods In Enzymology, 82:33-64 (1982), Academic Press. Type III collagen is a major fibrillar collagen found in skin and vascular tissue. Type III collagen is a homotrimeric collagen comprising three identical Al(III) chains. Methods for producing type III collagen can be found, among others, in Byers, et al., Biochemistry, 13:5243-5248 (1974) and Miller, E.J. and Miller, R.K., Methods In Enzymology, 82:33-64 (1982), Academic Press.

Type IV kollagen finner man i basismembraner i form av et ark i steden for fibriler. Type IV kollagenmolekyler består av tre forskjellige alfakjeder avledet fra seks forskjellige gener, dvs. type IV kollagen omfatter tre av al(IV), a2(IV), a3(IV), a 4(rV), a5(IV) og a6(IV) kjeder. De spesielle formene ble uttrykt på en vev-spesifikk måte. Type IV kollagen kan bli renset ved, blant andre metoder, fremgangsmåten som er beskrevet i Furuto et al., D.K., og Miller, E.J., Methods in Enzymology, 144:41-61 Type IV collagen is found in basement membranes in the form of a sheet instead of fibrils. Type IV collagen molecules consist of three different alpha chains derived from six different genes, i.e. type IV collagen comprises three of a1(IV), a2(IV), a3(IV), a4(rV), a5(IV) and a6( IV) chains. The particular forms were expressed in a tissue-specific manner. Type IV collagen can be purified by, among other methods, the method described in Furuto et al., D.K., and Miller, E.J., Methods in Enzymology, 144:41-61

(1987), Academic Press. (1987), Academic Press.

Type V kollagen er et fibrillært kollagen som man finner i ben, sene, cornea, hud og blodkar. Type V kollagen består av både homotrimere og heterotrimere former. En type av type V kollagen er en heterotrimer av to al (V) kjeder og a2(V). En annen type av type V kollagen er en heterotrimer av al (V). En ytterligere type av type V kollagen er en homotrimer av al (V). Fremgangsmåte for å rense type V kollagen kan man finne, blant annet i Elstrow, S.F., og Weiss, J.B., Collagen Rel. Res., 3:181-193(1983) og Abedin, et al., Biosci. Rep., 2:493-502 (1982). Type V collagen is a fibrillar collagen that is found in bones, tendons, corneas, skin and blood vessels. Type V collagen consists of both homotrimeric and heterotrimeric forms. One type of type V collagen is a heterotrimer of two α1 (V) chains and α2(V). Another type of type V collagen is a heterotrimer of Al(V). A further type of type V collagen is a homotrimer of Al(V). Procedures for purifying type V collagen can be found, among others, in Elstrow, S.F., and Weiss, J.B., Collagen Rel. Res., 3:181-193 (1983) and Abedin, et al., Biosci. Rep., 2:493-502 (1982).

Type VI kollagen har en liten trippel helisk region og stor ikke-kollagenholdig gjenværende del. Type VI kollagen blir funnet i mange bindevev. Type VI kollagen er en heterotrimer som omfater al(VI), a2(VI) og a3(VI) kjeder. Beskrivelser om hvordan man kan rense type IV kollagen kan man finne, blant annet i Wu, et al., Biochem. J., 248:373-381(1987), og Kielty, et. al., J. Cell Sei., 99:797-807. Type VI collagen has a small triple helical region and large non-collagenous remainder. Type VI collagen is found in many connective tissues. Type VI collagen is a heterotrimer comprising α1(VI), α2(VI) and α3(VI) chains. Descriptions of how to purify type IV collagen can be found, among others, in Wu, et al., Biochem. J., 248:373-381 (1987), and Kielty, et al. al., J. Cell Sci., 99:797-807.

Type VII kollagen er et fibrillært kollagen som man finner spesielt i epitelvev. Type VII er et homotrimert molekyl av tre al(VII) kjeder. Beskrivelser på hvordan man kan rense type VII kollagen kan man finne blant annet i Lundstrom, et al., J. Biol. Chem., 261:9042-9048 (1986), og Bentz, et al., Proe. Nati. Acad. Sei. U.S.A., 80:3168-3172 Type VII collagen is a fibrillar collagen that is found especially in epithelial tissue. Type VII is a homotrimeric molecule of three Al(VII) chains. Descriptions of how to purify type VII collagen can be found, among other things, in Lundstrom, et al., J. Biol. Chem., 261:9042-9048 (1986), and Bentz, et al., Proe. Nati. Acad. Pollock. U.S.A., 80:3168-3172

(1983). (1983).

Type VIII kollagen kan man finne i Descements membran i cornea. Type VIII kollagen er en heterotrimer som omfatter to al (VIII) og en a2(VIII) kjede. Fremgangsmåte for rensing av type VIII kollagen kan man blant annet finne i Benya og Badilla, J. Biol. Chem., 261:4160-4169 (1986), og Kappor et al., Biochemistry, 25:3930-3937 (1986). Type VIII collagen can be found in Descement's membrane in the cornea. Type VIII collagen is a heterotrimer comprising two α1(VIII) and one α2(VIII) chain. Procedures for the purification of type VIII collagen can be found, among other things, in Benya and Badilla, J. Biol. Chem., 261:4160-4169 (1986), and Kappor et al., Biochemistry, 25:3930-3937 (1986).

Type IX kollagen er et fibrilassosiert kollagen som man finner i brusk og vitrøse legemer. Type IX kollagen er et heterotrimert molekyl som omfatter al(IX), a2(IX) og a3(IX) kjeder. Prosedyre for rensing av type IX kollagen kan man blant annet finne i Duance, et al., Biochem. J., 221:885-889 (1984), Ayad et al., Biochem. J., 262:753-761 Type IX collagen is a fibril-associated collagen found in cartilage and vitreous bodies. Type IX collagen is a heterotrimeric molecule comprising α1(IX), α2(IX) and α3(IX) chains. Procedure for purification of type IX collagen can be found, among other things, in Duance, et al., Biochem. J., 221:885-889 (1984), Ayad et al., Biochem. J., 262:753-761

(1989), Grant et al., The Control of Tissue Damage, Glauert, A.M., Ed., El Sevier, Amsterdam, s. 3-28 (1988). (1989), Grant et al., The Control of Tissue Damage, Glauert, A.M., Ed., El Sevier, Amsterdam, pp. 3-28 (1988).

Type X kollagen er en homotrimerforbindelse av XI(x) kjeden. Type X kollagen har blitt isolert fra blant andre vev, hypertrofisk brusk som man finner i vekstplater. Type X collagen is a homotrimeric compound of the XI(x) chain. Type X collagen has been isolated from, among other tissues, hypertrophic cartilage found in growth plates.

Type XI kollagen kan man finne i bruskholdig vev forbundet med type II og type IX kollagener, så vel som andre lokaliteter i legemet. Type XI kollagen er et heterotrimert molekyl som omfatter al(XI), a2(XI) og a3(XI) kjeder. Fremgangsmåter for rensing av type XI kollagen kan man blant annet finne i Grant et al., In The Control of Tissue Damage, Glauert, A. M, Ed., El Savier, Amsterdam, s. 3-28 (1988). Type XI collagen can be found in cartilaginous tissue associated with type II and type IX collagens, as well as other locations in the body. Type XI collagen is a heterotrimeric molecule comprising α1(XI), α2(XI) and α3(XI) chains. Methods for purification of type XI collagen can be found, among other things, in Grant et al., In The Control of Tissue Damage, Glauert, A. M, Ed., El Savier, Amsterdam, pp. 3-28 (1988).

Type XII kollagen er et fibrilt assosiert kollagen som primært finner assosiert med type I kollagen. Type XII kollagen er et homotrimert molekyl som omfatter tre al (XII) kjeder. Fremgangsmåte for rensing av type XII kollagen og varianter av disse kan blant annet finne i Dublet et al., J. Biol. Chem., 264:13150-13156 (1989), Lundstrum et al., J. Biol. Chem., 267:20087-20092 (1992), Watt et al., J. Biol. Chem., 267:20093-20099 Type XII collagen is a fibril-associated collagen that is primarily found associated with type I collagen. Type XII collagen is a homotrimeric molecule comprising three Al (XII) chains. Procedures for the purification of type XII collagen and variants thereof can be found, among other things, in Dublet et al., J. Biol. Chem., 264:13150-13156 (1989), Lundstrum et al., J. Biol. Chem., 267:20087-20092 (1992), Watt et al., J. Biol. Chem., 267:20093-20099

(1992). (1992).

Type XIII er et ikke-fibrillært kollagen som man blant annet kan finne i hud, tarm, ben, brusk og stripet muskel. En detaljert beskrivelse av type XIII kollagen kan man blant annet finne i Juvonen, et al., J. Biol. Chem., 267:24700-24707 (1992). Type XIII is a non-fibrillar collagen that can be found, among other things, in skin, intestines, bones, cartilage and striated muscle. A detailed description of type XIII collagen can be found, among other things, in Juvonen, et al., J. Biol. Chem., 267:24700-24707 (1992).

Type XIV er et fibrilassosiert kollagen. Type XIV kollagen er et homotrimert molekyl som omfatter tre al(XIV) kjeder. Fremgangsmåte for isolering av type XIV kollagen kan blant annet finne i Aubert-Foucher, et al., J. Biol. Chem., 266:19759-19764 (1992) og Watt, et al., J. Biol. Chem., 267:20093-20099 (1992). Type XIV is a fibril-associated collagen. Type XIV collagen is a homotrimeric molecule comprising three Al(XIV) chains. Procedures for isolating type XIV collagen can be found, among other things, in Aubert-Foucher, et al., J. Biol. Chem., 266:19759-19764 (1992) and Watt, et al., J. Biol. Chem., 267:20093-20099 (1992).

Type XV kollagen er homolog i struktur til type XVIII kollagen. Informasjon om struktur og isolering av type XV kollagen kan man blant annet finne i Myers et al., Proe. Type XV collagen is homologous in structure to type XVIII collagen. Information on the structure and isolation of type XV collagen can be found, among other things, in Myers et al., Proe.

Nati. Aca. Sei., USA, 89: 10144-10148 (1992), Huebner et al., Genomics, 14: 220-224 Nati. Approx. Sei., USA, 89: 10144-10148 (1992), Huebner et al., Genomics, 14: 220-224

(1992), Kivirikko et al., J. Biol. Chem., 269:4773-4779 (1994), og Muragaki, J. Biol. Chem., 264:4042-4046 (1994). (1992), Kivirikko et al., J. Biol. Chem., 269:4773-4779 (1994), and Muragaki, J. Biol. Chem., 264:4042-4046 (1994).

Type XVII kollagen er et fibrilassosiert kollagen som man finner i hud, lungefibroblast, keratinocytter og andre steder. Informasjon vedrørende struktur av type XVI kollagen og genet som kode for type XVI kan man blant annet finne i Pan et al., Proe. Nati. Acad. Sei., U.S.A., 1989:6565-6569 (1992), og Yamaguchi et al., J. Biochem. 112:856-863 Type XVII collagen is a fibril-associated collagen that is found in skin, lung fibroblasts, keratinocytes and elsewhere. Information regarding the structure of type XVI collagen and the gene that codes for type XVI can be found, among other things, in Pan et al., Proe. Nati. Acad. Sei., U.S.A., 1989:6565-6569 (1992), and Yamaguchi et al., J. Biochem. 112:856-863

(1992). (1992).

Type XVIII kollagen er homolog i struktur med type XV kollagen og kan bli isolert fra lever. Beskrivelse av struktur og isolering av type XVIII kollagen kan man blant annet finne i Rehn et al., Proe. Nati. Acad. Sei USA, 91:4234-4238 (1994), Oh et al., Proe. Nati. Acad. Sei USA, 91:4229-4233 (1994), Rehn et al., J. Biol. Chem., 269:13924-139335 (1994), og Oh et al., Genomics, 19:994-999 (1994). Type XVIII collagen is homologous in structure to type XV collagen and can be isolated from liver. Description of the structure and isolation of type XVIII collagen can be found, among other things, in Rehn et al., Proe. Nati. Acad. Sei USA, 91:4234-4238 (1994), Oh et al., Proe. Nati. Acad. Sei USA, 91:4229-4233 (1994), Rehn et al., J. Biol. Chem., 269:13924-139335 (1994), and Oh et al., Genomics, 19:994-999 (1994).

De ovenfor nevnte kollagentypene kan også bli oppnådd ved rekombinant ekspressjonsteknikker, slik det generelt har blitt beskrevet i US-patent nr. 5.405.757, PCT-publisert patentsøknader WO 93/07889 og WO 94/16570 og beslektede patenter og søknader. The above-mentioned collagen types can also be obtained by recombinant expression techniques, as has been generally described in US Patent No. 5,405,757, PCT Published Patent Applications WO 93/07889 and WO 94/16570 and related patents and applications.

Et annet trekk ved oppfinnelsen er å skaffe tilveie mukosabindende kollagenkonjugater. De aktuelle mukosabindende kollagenkonjugatene omfatter en kollagenkomponent og en mukosabindende komponent. De to komponentene kan være bundet direkte til hverandre eller kan være bundet til hverandre gjennom en eller flere mellomliggende bindingsmolekyler. Mukosabindende kollagenkonjugater kan bli anvendt til å behandle tallrike immunsystem-formidlede sykdommer. Behandlingen blir gjennomført ved indusering av immun tolerans til en eller flere epitoper på kollagenkomponenten av mukosabindende kollagenkonjugater. Another feature of the invention is to provide mucosa-binding collagen conjugates. The topical mucosa-binding collagen conjugates comprise a collagen component and a mucosa-binding component. The two components can be bound directly to each other or can be bound to each other through one or more intermediate binding molecules. Mucobinding collagen conjugates can be used to treat numerous immune system-mediated diseases. The treatment is carried out by inducing immune tolerance to one or more epitopes on the collagen component of mucosa-binding collagen conjugates.

Kollagenkomponenten i foreliggende mukosabindende kollagenkonjugater kan omfatte en eller flere kollagen eller kollagenderivatmolekyler. Kollagenmolekylene av kollagenkomponentene av mukosabindende kollagenkonjugater kan være like eller forskjellige fra hverandre. Kollagen/kollagenderivatmolekylene av kollagenkomponenten kan være bundet til hverandre, enten direkte eller gjennom bindende mellomprodukter. Alternativt blir kollagen/kollagenderivatene av kollagenkomponentene ikke nødvendigvis bundet til hverandre, men kan bundet direkte til mukosabindende komponent av foreliggende mukosabindende kollagenkonjugater. The collagen component in the present mucosa-binding collagen conjugates may comprise one or more collagen or collagen derivative molecules. The collagen molecules of the collagen components of mucosa-binding collagen conjugates may be the same or different from each other. The collagen/collagen derivative molecules of the collagen component can be bound to each other, either directly or through binding intermediates. Alternatively, the collagen/collagen derivatives of the collagen components are not necessarily bound to each other, but can be bound directly to the mucosa-binding component of the present mucosa-binding collagen conjugates.

Mukosabindende komponent omfatter en eller flere molekyler som har evne til spesifikk binding til mukosaceller hos en pasient for behandling. Tallrike forskjellige molekyler kan tjene som mukosabindende komponent. Disse mukosabindende molekylene kan være avledet fra mukosabindende strukturer av bakterielle toksiner, bakterielle fimbrier, virale festeproteiner og plantelektiner. Anvendelse av mukosabindende strukturer fra bakterielle toksiner er foretrukket. Spesielt foretrukket er B-subenhetene av koleratoksin og B-subenheten av varme-labil entertoksin fra E. coli. B-subenhetene av koleratoksin og B-subenhetene av varme-labil entrotoksin fra E. coli har den egenskap at de spesifikt binder til gangliosid GM, i mukosale celler. Når toksinene blir anvendt som mukosabindende strukturer, blir toksinene fortrinnsvis modifisert for i betydelig grad å fjerne de ødeleggende cytotoksiske egenskapene ved toksin. Inaktivering av cytotoksiske egenskaper kan bli gjennomført på et antall måter som er velkjent innenfor fagområdet, som f.eks. innbefatter denaturering, mutering og lignende. Andre molekyler som spesifikt binder til gangliosid GM\kan bli anvendt som den mukosabindende komponenten av mukosabindende kollagenkonjugater i oppfinnelsen. Mukosabindende molekyler kan bli kovalent bundet til hverandre, enten direkte eller indirekte, ved hjelp av et mellomliggende bindingsmolekyl(er). Alternativt kan mukosabindende molekyler som danner mukosabindende komponent assosieres med hverandre ved hjelp av intermolekylære tiltrekningskrafter. B-subenhetene av koleratoksin danner f.eks. en 5-molekyl "ring" struktur med muligheter for tilkopling. Eksempler på egnede toksinmolekyler innbefatter subenhetene S2, S3, S4 og/eller S5 av Bordatella pertussis toksin, difteritoksin, difteritoksin B-fragment, shigatoksin, shiga-lignende toksiner, shiga toksin B-subenhet, shiga-lignende toksin B-subenhet, koleratoksin, E. coli varme-labilt toksin. Eksempler på egnede bakterielle fimbre innbefatter E. coli K88, K99, 987P, F41, CF A/I, CFA/II, (CS1, CS2 og/eller CS3), CF A/IV (CS4, CS5 og/eller CS6), P fimbria, Vibrio kolera toksin co-regulert pili (TCP), mukus sensitiv hemagglatin (MSHA), fukose-sensitiv hemagglatinin (FSITH), B. pertussis filamentholdig hemagglutinin og lignende. Eksempler på velegnede virale tilknytningsproteiner innbefatter influensa hemagglutinin, Sendai Virus hemagglatin. Eksempler på egnede lektin innbefatter både plantelektiner og animalske lektiner, oppløselig laktose-bindende lektiner, selektin, kollekting, heliks pomatin hemagglutinin, koncanavalin A, hvete-spire aggutinin, fytohemagglutinin, aurin ricin. Immunoglobuliner som er spesifikke for mukosale celleantigener kan også bli anvendt som mukosal bindingskomponenter. Mucobinding component comprises one or more molecules that have the ability to specifically bind to mucosal cells in a patient for treatment. Numerous different molecules can serve as the mucosa-binding component. These mucobinding molecules can be derived from the mucobinding structures of bacterial toxins, bacterial fimbriae, viral attachment proteins and plant lectins. Use of mucosa-binding structures from bacterial toxins is preferred. Particularly preferred are the B-subunits of cholera toxin and the B-subunit of heat-labile entertoxin from E. coli. The B-subunits of cholera toxin and the B-subunits of heat-labile enterotoxin from E. coli have the property that they bind specifically to ganglioside GM, in mucosal cells. When the toxins are used as mucosa binding structures, the toxins are preferably modified to substantially remove the destructive cytotoxic properties of the toxin. Inactivation of cytotoxic properties can be carried out in a number of ways which are well known in the art, such as e.g. includes denaturation, mutation and the like. Other molecules that specifically bind to ganglioside GM can be used as the mucosa-binding component of mucosa-binding collagen conjugates in the invention. Mucobinding molecules can be covalently bound to each other, either directly or indirectly, by means of an intermediate binding molecule(s). Alternatively, mucobinding molecules forming the mucobinding component can be associated with each other by means of intermolecular forces of attraction. The B subunits of cholera toxin form e.g. a 5-molecule "ring" structure with possibilities for connection. Examples of suitable toxin molecules include subunits S2, S3, S4 and/or S5 of Bordatella pertussis toxin, diphtheria toxin, diphtheria toxin B fragment, shiga toxin, shiga-like toxins, shiga toxin B subunit, shiga-like toxin B subunit, cholera toxin, E. coli heat-labile toxin. Examples of suitable bacterial fimbriae include E. coli K88, K99, 987P, F41, CF A/I, CFA/II, (CS1, CS2 and/or CS3), CF A/IV (CS4, CS5 and/or CS6), P fimbria, Vibrio cholera toxin co-regulated pili (TCP), mucus sensitive hemagglutinin (MSHA), fucose-sensitive hemagglutinin (FSITH), B. pertussis filamentous hemagglutinin and the like. Examples of suitable viral attachment proteins include influenza hemagglutinin, Sendai Virus hemagglutinin. Examples of suitable lectins include both plant lectins and animal lectins, soluble lactose-binding lectins, selectin, collectin, helix pomatin hemagglutinin, concanavalin A, wheat germ aggutinin, phytohemagglutinin, aurin ricin. Immunoglobulins specific for mucosal cell antigens can also be used as mucosal binding components.

Den separate kollagenforbindelsen og mukosabindende komponenten av mukosabindende komponenter kan bli bundet til hverandre på tallrike måter. De to komponentene kan bli koplet sammen ved hjelp av kjemisk tverrbindingsmidler slik som N-suksinimidyl (3-(2-pyridyl-ditio)propionat, dimetyl-3,3'-ditiobispropionimidat, 2-iminotiolan, N-suksinimidyl-(4-azidofenyl)-l,3-ditioprionat, etyl-4-azidofenyl-l, 4-ditiobutyrimidat, dietylmalonimidat, 2-iminotiolan, N,N'-p-fenylendimaleimid, og lignende. Alternativt kan mukosabindende kollagenkonjugater fra oppfinnelsen være enkle polypeptider som er fusjonsproteiner dannet mellom kollagenkomponenten og mukosabindende molekylkomponent. Disse fusjonsproteinene kan bli produsert ved konvensjonelle in vitro genetiske engineeringsteknikker. Ytterligere trekk ved oppfinnelsen er å skaffe tilveie polynukleotidsekvenser som kode for mukosabindende kollagenkonjugatfusjonsproteiner. Et ytterligere trekk ved oppfinnelsen er å skaffe tilveie vertsceller for rekombinant produksjon av mukosabindende kollagenkonjugatfusjonsproteiner. The separate collagen compound and mucobinding component of mucobinding components can be bonded to each other in numerous ways. The two components can be linked together by chemical cross-linking agents such as N-succinimidyl (3-(2-pyridyl-dithio)propionate, dimethyl-3,3'-dithiobispropionimidate, 2-iminothiolan, N-succinimidyl-(4-azidophenyl )-1,3-dithioprionate, ethyl-4-azidophenyl-1,4-dithiobutyrimidate, diethylmalonimidate, 2-iminothiolan, N,N'-p-phenylenedimaleimide, and the like Alternatively, mucosa-binding collagen conjugates of the invention can be simple polypeptides which are fusion proteins formed between the collagen component and mucosa-binding molecular component. These fusion proteins can be produced by conventional in vitro genetic engineering techniques. Further features of the invention are to provide polynucleotide sequences that code for mucosa-binding collagen conjugate fusion proteins. A further feature of the invention is to provide host cells for the recombinant production of mucosa-binding collagen conjugate fusion proteins .

Mukosabindende molekylkomponenter kan bli oppnådd ved rensing fra deres naturlige forekommende organismekilder. Alternativt kan mukosabindende molekylkomponenter bli produsert ved rekombinante DNA teknikker. Metoder for rensing av mukosabindende molekyler, eller alternativt rekombinant produsering av slike molekyler som er egnet for anvendelse i oppfinnelsen er velkjent for personer med kunnskap innenfor fagområdet. Rekombinant produksjon av kolera toksin B-subenhet har f.eks. blitt beskrevet i Sanchez og Holmgren, Proe. Nati. Acad. Sei. (USA), 86:481-485 (1989) og produksjon av B-subenheten av e. coli varmelabil enterotoksin har blitt beskrevet i Hirst et al., Proe. Nati. Acad. Sei. (USA), 81:7752-7756 (1984). Mucobinding molecular components can be obtained by purification from their naturally occurring organismal sources. Alternatively, mucosa-binding molecular components can be produced by recombinant DNA techniques. Methods for the purification of mucosa-binding molecules, or alternatively the recombinant production of such molecules which are suitable for use in the invention, are well known to persons with knowledge in the field. Recombinant production of cholera toxin B subunit has e.g. been described in Sanchez and Holmgren, Proe. Nati. Acad. Pollock. (USA), 86:481-485 (1989) and production of the B subunit of E. coli heat labile enterotoxin has been described in Hirst et al., Proe. Nati. Acad. Pollock. (USA), 81:7752-7756 (1984).

Sammensetningene i oppfinnelsen innbefatter en eller flere rensede kollagener og/eller kollagenderivater. De aktuelle sammensetningene omfatter spesifikke kombinasjoner av kollagener og/eller kollagen(er) derivater som blir skaffet tilveie. Tabell 1 har en liste av kollagentyper (angitt ved arabiske tall i steden for romertall) som kan bli anvendt til å behandle spesifikke sykdommer. Hver av kollagentypene som er opplistet som er nyttig for behandling av en spesifikk sykdom, enten alene eller i en sammensetning som kombinerer en eller flere kollagenmolekyler som er egnet for behandling av den interessante sykdommen. Med referanse til tabell 1 kan man f.eks. se at reumatoid artritt kan bli behandlet ved sammensetninger som omfatter type I kollagen, type II kollagen, type III kollagen, type V kollagen, type VI kollagen, type IX kollagen, type X kollagen, type XI kollagen, type XII kollagen, type XIV kollagen, eller en hvilken som helst kombinasjon av disse som omfatter to eller flere av kollagenet som er angitt som egnet for behandling av en spesifikk sykdomstilstand. Ved således å referere til tabell 1 kan man se at oppfinnelsen tilveiebringer sammensetninger for behandling av reumatoid artritt som omfatter minst en forbindelse valgt fra gruppen bestående av type I kollagen, type II kollagen, type III kollagen, type V kollagen, type VI kollagen, type IX kollagen, type X kollagen, type XI kollagen, type XII kollagen, type IV kollagen. Kollagenderivater som tilsvarer en gitt kollagentype kan også bli anvendt i tillegg til eller i steden for en spesifikk kollagentype som er angitt i sammensetningene i tabell 1. En sammensetning for behandling av reumatoid artritt, som angitt i tabell 1, kan således f.eks. omfatte type II kollagen, et type kollagen II derivat, mange forskjellige type II kollagenderivater, eller en blanding av type II kollagen og type II kollagenderivater. The compositions in the invention include one or more purified collagens and/or collagen derivatives. The relevant compositions include specific combinations of collagens and/or collagen(s) derivatives that are provided. Table 1 has a list of collagen types (indicated by Arabic numerals instead of Roman numerals) that can be used to treat specific diseases. Each of the collagen types listed is useful for the treatment of a specific disease, either alone or in a composition combining one or more collagen molecules suitable for the treatment of the disease of interest. With reference to table 1, one can e.g. see that rheumatoid arthritis can be treated by compositions comprising type I collagen, type II collagen, type III collagen, type V collagen, type VI collagen, type IX collagen, type X collagen, type XI collagen, type XII collagen, type XIV collagen , or any combination thereof comprising two or more of the collagens indicated as suitable for the treatment of a specific disease state. By thus referring to Table 1, it can be seen that the invention provides compositions for the treatment of rheumatoid arthritis which comprise at least one compound selected from the group consisting of type I collagen, type II collagen, type III collagen, type V collagen, type VI collagen, type IX collagen, type X collagen, type XI collagen, type XII collagen, type IV collagen. Collagen derivatives corresponding to a given collagen type can also be used in addition to or instead of a specific collagen type which is indicated in the compositions in table 1. A composition for the treatment of rheumatoid arthritis, as indicated in table 1, can thus e.g. include type II collagen, a type II collagen derivative, many different type II collagen derivatives, or a mixture of type II collagen and type II collagen derivatives.

I en foretrukket utførelsesform av oppfinnelsen for behandling av reumatoid artritt, omfatter de aktuelle sammensetningene type IX kollagen og/eller type IX kollagenderivater derav, enten med eller uten type II kollagen og derivater av type II kollagen. I annen utførelsesform tilveiebringer oppfinnelsen sammensetninger som omfatter type XI kollagen og/eller derivater derav, enten med eller uten type II kollagen og/eller derivater derav. I en annen foretrukket utførelsesform av oppfinnelsen for behandling av reumatoid artritt, består oppfinnelsen av sammensetninger som omfatter type IX kollagen og/eller derivater derav, og type XI kollagen, enten med eller uten type II kollagen og/eller derivater derav. I en annen foretrukket utførelsesform av oppfinnelsen for behandling av reumatoid artritt omfatter de aktuelle sammensetningene type II kollagenderivater. Tilsvarende til kollagen og kollagenderivatinneholdende sammensetninger i oppfinnelsen, kan mukosabindende kollagenkonjugater i oppfinnelsen bli tilpasset for behandling av spesifikke immunsystem-formidlede sykdommer. Mukosabindende kollagenkonjugater kan bli tilpasset ved valg av kollagenkomponent av mukosabindende kollagenkonjugat i henhold til informasjon i tabell 1. In a preferred embodiment of the invention for the treatment of rheumatoid arthritis, the relevant compositions comprise type IX collagen and/or type IX collagen derivatives thereof, either with or without type II collagen and derivatives of type II collagen. In another embodiment, the invention provides compositions comprising type XI collagen and/or derivatives thereof, either with or without type II collagen and/or derivatives thereof. In another preferred embodiment of the invention for the treatment of rheumatoid arthritis, the invention consists of compositions comprising type IX collagen and/or derivatives thereof, and type XI collagen, either with or without type II collagen and/or derivatives thereof. In another preferred embodiment of the invention for the treatment of rheumatoid arthritis, the relevant compositions comprise type II collagen derivatives. Similar to collagen and collagen derivative-containing compositions in the invention, mucosa-binding collagen conjugates in the invention can be adapted for the treatment of specific immune system-mediated diseases. Mucobinding collagen conjugates can be customized by choosing the collagen component of the mucosa binding collagen conjugate according to information in Table 1.

Rensede kollagener for anvendlese i fremgangsmåtene og sammensetningene i foreliggende oppfinnelse kan bli isolert fra animalsk eller humant vev; anvendelse av humane kollagener i de foreliggende sammensetningene og fremgangsmåtene blir foretrukket når subjektet som skal bli behandlet er et menneske. I tillegg til å oppnå kollagener for anvendelse i de aktuelle sammensetningene og fremgangsmåtene fra naturlige kilder, kan kollagenet for anvendelse i fremgangsmåter og sammensetninger bli produsert ved rekombinant DNA teknologi. En beskrivelse av hvordan man kan produsere type II ved rekombinant DNA teknologi teknikk kan bli funnet blant annet i PCT-publiserte patentsøknader WO 93/07889 og WO94/16570, som her er innbefattet med referanse. De rekombinante produksjonsteknikkene som er beskrevet i disse PCT-publikasjonene kan raskt bli tilpasset til å produsere mange forskjellige typer kollagen, human eller på annen måte ved rekombinant DNA-teknikker. Humane kollagener produsert ved rekombinant DNA-teknologi blir fortrinnsvis anvendt i sammensetningene i oppfinnelsen. Rekombinant DNA-teknologi unngår etiske og økonomiske problemer og er forbundet med å oppnå tilstrekkelige mengder av humant vev. Purified collagens for use in the methods and compositions of the present invention can be isolated from animal or human tissue; the use of human collagens in the present compositions and methods is preferred when the subject to be treated is a human. In addition to obtaining collagens for use in the relevant compositions and methods from natural sources, the collagen for use in methods and compositions can be produced by recombinant DNA technology. A description of how to produce type II by recombinant DNA technology can be found, among other things, in PCT-published patent applications WO 93/07889 and WO94/16570, which are incorporated herein by reference. The recombinant production techniques described in these PCT publications can be quickly adapted to produce many different types of collagen, human or otherwise, by recombinant DNA techniques. Human collagens produced by recombinant DNA technology are preferably used in the compositions of the invention. Recombinant DNA technology avoids ethical and financial problems associated with obtaining sufficient amounts of human tissue.

I tillegg til å benytte kollagen oppnådd direkte fra naturlige kilder, kan fremgangsmåten og sammensetningene i oppfinnelsen omfatte mange forskjellige typer av kollagenderivater. Kollagenderivatene kan variere fra naturlig forekommende kollagener i flere aspekter. Kollagenderivatene kan være ikke-glykosylerte eller glykosylerte og forskjellig fra naturlig-forekommende kollagener. Ønsket glykoserings-mønstre kan bli produsert ved en lang rekke metoder, inkludert direkte kjemisk modifikasjon og enzymatisk katalysert glykosylering og deglykosyleringsreaksjoner. Ønskede glykosyleirngsmønstre kan også bli produsert ved hemming eller utelatelse av en enzymer som er nødvendig for fremstilling av naturlig forekommende glykosyleirngsmønstre som man finner på kollagener. Kollagenderivater har et glykosileirngsmønster som adskiller seg fra et tilsvarende naturlig-forekommende kollagen, men er ellers essensielt det samme i struktur (med unntagelse for at mengden av prolin og/eller lysinresidier som har blitt hydroksylert) blir her referert til som "variabelt glykosylerte kollagener". Kollagenderivater innbefatter også forskjellige fragmenter av naturlig-forekommende kollagener. Slike kollagenderivater innbefatter også forskjellige fragmenter av naturlig forekommende kollagener. Slike kollagenfragmenter kan bli produsert blant andre metoder, kjemisk eller enzymatisk kløyving av en eller flere peptidbånd. Kollagenderivatet kan også innholde en eller flere aminosyreresidier som er forskjellig sammenlignet med tilsvarende aminosyreresidie-posisjoner i naturlig-forekommende kollagen. Kollagenderivater som inneholder slike aminosyresubstitusjoner kan bli produsert ved tallrike metoder inkludert genetisk engineeringsteknikker og ved in vitro peptidsyntese. Ytterligere kollagenderivater kan bli produsert ved å variere mengden av hydroksylysiner og/eller hydroksyproliner som er tilstede i et gitt molekyl, ved den varierte ekspressjon av lysinhydroksylaser, og/eller prolinhydroksylaser, der hydroksylasegener (rekombinant eller på annen måte) og blir uttrykt i en vertscelle for ekspressjon av rekombinant kollagen, eller derivater derav. Kollagenderivater for anvendelse i sammensetningen og fremgangsmåten i oppfinnelsen har evne til å redusere uønsket immunreaksjon i immunsystem-formidlet sykdom som er aktuell når den blir administrert til en pasient enten alene eller som deler av en sammensetning i oppfinnelsen, inkludert sammensetninger som omfatter tallrike kollagen og/eller kollagenderivater. Kollagenderivater som er egnet for anvendelse i disse fremgangsmåtene og sammensetninger av oppfinnelsen for behandling av reumatoid artritt kan bli bestemt ved å benytte in vitro tester av T-celler fra reumatoid artritt pasienter, der testene kan bestemme om et gitt kollagenderivat kan stimulere suppressor T-celler, indusere klonal anergi, eller inkludere andre former av immuntoleranse. Fremgangsmåte for å måle antigentolereanseinduksjon er velkjent for personer med kunnskap innenfor fagområdet og kan f.eks. bli funnet i Paul, W. E., forfatter, Fundamental Immunology, 2nd Ed., Raven Press: New York (1994). Kollagenderivater for anvendelse i behanding av andre immunsystem-formidlede forstyrrelser kan bli bestemt til egnet anvendelse i behandling av en gitt immunsystem-formidlet sykdom ved in vitro tester på immunsystemcelle isolert fra pasienter som lider av den aktuelle sykdommen. In addition to using collagen obtained directly from natural sources, the method and compositions in the invention can include many different types of collagen derivatives. The collagen derivatives may differ from naturally occurring collagens in several aspects. The collagen derivatives can be non-glycosylated or glycosylated and different from naturally-occurring collagens. Desired glycosylation patterns can be produced by a wide variety of methods, including direct chemical modification and enzymatically catalyzed glycosylation and deglycosylation reactions. Desired glycosylation patterns can also be produced by inhibiting or omitting an enzyme that is necessary for the production of naturally occurring glycosylation patterns found on collagens. Collagen derivatives have a glycosylation pattern that differs from a corresponding naturally-occurring collagen, but are otherwise essentially the same in structure (with the exception that the amount of proline and/or lysine residues that have been hydroxylated) are referred to herein as "variably glycosylated collagens". . Collagen derivatives also include various fragments of naturally occurring collagens. Such collagen derivatives also include various fragments of naturally occurring collagens. Such collagen fragments can be produced by, among other methods, chemical or enzymatic cleavage of one or more peptide bands. The collagen derivative may also contain one or more amino acid residues which are different compared to corresponding amino acid residue positions in naturally occurring collagen. Collagen derivatives containing such amino acid substitutions can be produced by numerous methods including genetic engineering techniques and by in vitro peptide synthesis. Additional collagen derivatives can be produced by varying the amount of hydroxylysines and/or hydroxyprolines present in a given molecule, by the varied expression of lysine hydroxylases, and/or proline hydroxylases, where hydroxylase genes (recombinant or otherwise) and are expressed in a host cell for expression of recombinant collagen, or derivatives thereof. Collagen derivatives for use in the composition and method of the invention have the ability to reduce unwanted immune reaction in immune system-mediated disease that is relevant when administered to a patient either alone or as parts of a composition of the invention, including compositions comprising numerous collagen and/ or collagen derivatives. Collagen derivatives suitable for use in these methods and compositions of the invention for the treatment of rheumatoid arthritis can be determined by using in vitro tests of T cells from rheumatoid arthritis patients, where the tests can determine whether a given collagen derivative can stimulate suppressor T cells , induce clonal anergy, or include other forms of immune tolerance. Procedures for measuring antigen tolerance induction are well known to persons with knowledge in the field and can e.g. be found in Paul, W. E., author, Fundamental Immunology, 2nd Ed., Raven Press: New York (1994). Collagen derivatives for use in the treatment of other immune system-mediated disorders can be determined for suitable use in the treatment of a given immune system-mediated disease by in vitro tests on immune system cells isolated from patients suffering from the disease in question.

Et kollagenmolekyl, kollagenderivat eller mukosabindende kollagenderivat som er egnet for anvendelse i fremgangsmåten i oppfinnelsen omfatter minst en toleranseinduserende epitode. Begrepet "toleranseinduserende epitope" slik det her blir anvendt refererer til epitoper på kollagen som har den egenskapen å indusere immuntoleranse med hensyn på en patogen immunrespons i en immunsystem-formidlet sykdom, uavhengig av andre deler av kollagenmolekylet som "den toleranse-induserende epitopen" var avledet fra. Individuelle kollagenmolekyler kan omfatte en eller flere toleranseinduserende epitoper. Toleranse-induserende epitope eller epitoper på et gitt kollagenmolekyl kan i tillegg variere i overensstemmelse med den spesifikke immunsystem-medierte sykdommen som skal bli behandlet med kollagenet. A collagen molecule, collagen derivative or mucosa-binding collagen derivative which is suitable for use in the method of the invention comprises at least one tolerance-inducing epitode. The term "tolerance-inducing epitope" as used herein refers to epitopes on collagen that have the property of inducing immune tolerance with respect to a pathogenic immune response in an immune system-mediated disease, independent of other parts of the collagen molecule that the "tolerance-inducing epitope" was derived from. Individual collagen molecules may comprise one or more tolerance-inducing epitopes. In addition, the tolerance-inducing epitope or epitopes on a given collagen molecule may vary according to the specific immune system-mediated disease to be treated with the collagen.

Oppfinnelsen skaffer også tilveie kollagenderivater som består av aminosyreresidiesekvenser som omfatter en eller flere kollagentoleranse-induserende epitoper; slike nye polypeptider blir referert til her som "toleranseepitopepolypeptider". Toleranseepitopepolypeptider kan omfatte tallrike identiske toleranse-induserende epitoper. Toleranseepitopepolypeptider i oppfinnelsen kan også omfatte en eller flere ikke-identiske toleranse-induserende epitoper avledet fra samme eller forskjellig kollagenmolekyler. Utførelsesformer av foreliggende toleranseepitopepolypeptider innbefatter polypeptider hvori de forskjellige epitopene er arrangert i et regulert gjentagende mønster og polypeptidene hvori de forskjellige toleranse-induserende epitopene er arrangert tilfeldig. Toleranseepitopepolypeptider omfatter mange toleranse-induserende epitoper; mens toleranseepitopepolypeptidene kan i virkeligheten være av en hvilken som helst størrelse, vil en person med kunnskap innenfor fagområdet vurdere at visse tekniske problemer fremkommer ved syntetisering og anvendelse av meget store polypeptider, f.eks. oppløselighet, stabilitet, etc. Toleranseepitopepolypeptidene i oppfinnelsen omfatter fortrinnsvis 500 toleranseinduserende epitoper, mer å foretrekke i området fra 250 toleranse-induserende epitoper og ytterligere å foretrekke i området fra 50 til 100 toleranse-induserende epitoper. Toleranseinduserende epitoper kan være glykosylerte elelr ikke-glykosylerte, avhengig av om karbohydratmatriksen blir betraktet å være en del av en toleranse-induserende epitope. Toleranseepitopepolypeptider kan bli fremstilt ved konvensjonelle genetiske engineeringsteknikker slik som de som f.eks. er beskrevet i Goeddel Gene Expression Technology, Methods in Enzymology Volume 185, Academic Press (1991). Toleranseepitopepolypeptider kan omfatte en eller flere ikke-kollagene avledede aminosyreresidiesekvenser, hvorved kollagenavledede toleranse-induserende epitoperegion på toleranseepitopepolypeptidet tjener som en bærer for ikke-kollagen avlede aminosyresekvens slik at immuntoleransen også kan bli indusert mot ikke-kollagen avledede aminosyreresidiesekvens. Med andre ord er noen utførelsesformer av foreliggende toleranseepitopepolypeptider polypeptider som virker som "bærere" for indusering av immuntoleranse mot ikke-kollagenproteiner som kan bli involvert i patogenese av immunsystemformidlede sykdommer. Foreliggende oppfinnelse skaffer f.eks. tilveie toleranseepitopepolypeptider som omfatter regioner av myelinbasisk protein som har blitt vist å være viktig i utvikling av patogenimmunrespons i multippel sclerose og multippel toleranseinduserende epitoper. Polynukleotidsekvensen som kode for toleranseepitopepolypeptider kan bli fremstilt blant andre metoder, ved in vitro polynukleotidsyntese og manipulasjon av de tidligere-isolerte kollagen-kodende polynukleotidene. The invention also provides collagen derivatives consisting of amino acid residue sequences comprising one or more collagen tolerance-inducing epitopes; such novel polypeptides are referred to herein as "tolerance epitope polypeptides". Tolerance epitope polypeptides may comprise numerous identical tolerance-inducing epitopes. Tolerance epitope polypeptides in the invention may also comprise one or more non-identical tolerance-inducing epitopes derived from the same or different collagen molecules. Embodiments of the present tolerance epitope polypeptides include polypeptides in which the various epitopes are arranged in a regulated repeating pattern and the polypeptides in which the various tolerance-inducing epitopes are arranged randomly. Tolerance epitope polypeptides comprise many tolerance-inducing epitopes; while the tolerance epitope polypeptides may in fact be of any size, a person skilled in the art will appreciate that certain technical problems arise when synthesizing and using very large polypeptides, e.g. solubility, stability, etc. The tolerance epitope polypeptides in the invention preferably comprise 500 tolerance-inducing epitopes, more preferably in the range from 250 tolerance-inducing epitopes and further preferred in the range from 50 to 100 tolerance-inducing epitopes. Tolerance-inducing epitopes can be glycosylated or non-glycosylated, depending on whether the carbohydrate matrix is considered to be part of a tolerance-inducing epitope. Tolerance epitope polypeptides can be produced by conventional genetic engineering techniques such as those used e.g. is described in Goeddel Gene Expression Technology, Methods in Enzymology Volume 185, Academic Press (1991). Tolerance epitope polypeptides may comprise one or more non-collagen-derived amino acid residue sequences, whereby the collagen-derived tolerance-inducing epitope region on the tolerance epitope polypeptide serves as a carrier for the non-collagen-derived amino acid sequence so that the immune tolerance can also be induced against non-collagen-derived amino acid residue sequences. In other words, some embodiments of the present tolerance epitope polypeptides are polypeptides that act as "carriers" for inducing immune tolerance against non-collagen proteins that may be involved in the pathogenesis of immune system-mediated diseases. The present invention provides e.g. provide tolerance epitope polypeptides comprising regions of myelin basic protein that have been shown to be important in the development of pathogen immune responses in multiple sclerosis and multiple tolerance-inducing epitopes. The polynucleotide sequence encoding tolerance epitope polypeptides can be prepared, among other methods, by in vitro polynucleotide synthesis and manipulation of the previously isolated collagen-encoding polynucleotides.

Toleranseepitopepolypeptider kan bli utformet for behandling av spesifikke immunsystem-formidlede sykdommer i overensstemmelse med informasjon som er gitt i tabell 1. Toleranseepitopepolypeptider kan omfatte toleranse-induserende epitoper avledet fra kollagen eller kollagen som man finner i et spesifikt vev for å indusere undertrykking (immunologisk toleranse) av inflammasjon mot vev (eller vev) fra hvilken kollagen blir funnet å forekomme i naturen. Toleranseepitopepolypeptider som således f.eks. omfatter toleranse-induserende epitoper av type II, type IX og type XI kollagen kan bli anvendt i steden for (eller i tillegg til) en blanding av type II, type IX og type XI kollagener. Tolerance epitope polypeptides may be designed for the treatment of specific immune system-mediated diseases in accordance with information provided in Table 1. Tolerance epitope polypeptides may comprise tolerance-inducing epitopes derived from collagen or collagen found in a specific tissue to induce suppression (immunological tolerance). of inflammation against the tissue (or tissues) from which collagen is found to occur in nature. Tolerance epitope polypeptides which thus e.g. comprising tolerance-inducing epitopes of type II, type IX and type XI collagen may be used instead of (or in addition to) a mixture of type II, type IX and type XI collagens.

Toleranse-induserende epitoper for en gitt kollagen og en gitt immunsystem-formidlet sykdom kan raskt bli bestemt av en person med kunnskap innenfor immunologiområdet. Visse underpopulasjoner av lymfocytter i en person som lider av (eller sannsynligvis utvikler) en spesifikk immunsystem-formidlet sykdom har reseptorer som har evne til Tolerance-inducing epitopes for a given collagen and a given immune system-mediated disease can be quickly determined by a person skilled in the field of immunology. Certain subpopulations of lymphocytes in a person suffering from (or likely to develop) a specific immune system-mediated disease have receptors that have the ability to

binding av toleranseinduserende muligheter. Der antatte toleranse-induserende epitoper i kan bli oppnådd ved å lage systematiske delesjoner i et interessant kollagenmolekyl. binding of tolerance-inducing possibilities. Where putative tolerance-inducing epitopes in can be obtained by making systematic deletions in an interesting collagen molecule.

Et annet trekk ved oppfinnelsen er å skaffe tilveie fremgangsmåter for å behandle immunsystem-formidlede sykdommer. Begrepene "behandling" eller "behandling" slik Another feature of the invention is to provide methods for treating immune system-mediated diseases. The terms "treatment" or "processing" such

det her blir anvendt med referanse til en sykdom refererer til både profylakse og tilwhat is used here with reference to a disease refers to both prophylaxis and to

i lindring av symptomene som allerede er tilstede hos et individ. Det vil bemerkes av en person med kunnskap innenfor fagområdet at en behandling ikke trenger å være fullstendig effektiv ved forhindring av igangssetting av en sykdom eller ved redusering av symptomene som er forbundet med sykdommen. Enhver reduksjon av alvorlighet av in alleviating the symptoms already present in an individual. It will be noted by one skilled in the art that a treatment need not be completely effective in preventing the initiation of a disease or in reducing the symptoms associated with the disease. Any reduction in severity of

symptomene, forsinket igangsetting av symptomene, eller forsinket utvikling avthe symptoms, delayed onset of symptoms, or delayed development of

) alvorligheten ved symptomene er ønskelig hos en pasient. Personer med risiko for å ) the severity of the symptoms is desirable in a patient. People at risk of

utvikle en gitt immunsystem-formidlet sykdom kan bli behandlet profylaktisk basert på en hvilken som helst av tallrike faktorer som antyder mulig igangsetting av en immunsystem-formidlet sykdom, f.eks. familiehistorie, genetiske markører, tidlige symptomer og lignende. developing a given immune system-mediated disease may be treated prophylactically based on any of numerous factors that suggest possible initiation of an immune system-mediated disease, e.g. family history, genetic markers, early symptoms and the like.

Immunsystem-formidlede sykdomer som kan bli behandlet ved foreliggende fremgangsmåte innbefatter, men er ikke begrenset til, sykdommer som er opplistet i tabell 1. De aktuelle metodene ifølge oppfinnelsen omfatter trinnene med å administrere effektiv mengde av en sammensetning i oppfinnelsen, f.eks. kollagener, kollagenderivater, eller mukosabindende kollagenkonjugater. Foretrukkede sammensetninger for anvendelse ved behandling av spesifikke immunsystem-formidlede sykdommer blir angitt i tabell 1, som beskrevet i foregående avsnitt. I en foretrukket utførelsesform av fremgangsmåten, omfatter sammensetningen som ble administrert til subjektet variable glykosylerte kollagener eller mukosabindende kollagenkonjugater, der kollagenkomponenten omfatter variable glykosilerte kollagenmolekyler. Sammensetningen som ble administrert i foreliggende fremgangsmåter blir administrert slik at de aktive komponentene, dvs. kollagener og/eller kollagenderivater, kommer i kontakt med lymfoid vev i tarmkanalen, f.eks. Peyer's lapper eller andre tilsvarende steder, slik at immuntoleransen blir indusert. Slik administrering kan bli gjennomført ved hjelp av mange mulige metoder, ved anvendelse av formuleringer som omfatter de aktuelle sammensetningene som blir utformet for oral administrering, dvs. de aktive komponentene blir ikke ødelagt eller inaktivert i munn, mage eller andre deler av fordøyelsessystemet før det kommer i kontakt med passende tarmlymfoidvev. Behandlingsmetodene i oppfinnelsen kan også omfatte trinnene med å administrere ytterligere farmasøytiske forbindelser for behandling av immunsystem-formidlede sykdommer, slik som anti-inflammatoriske midler og lignende. Immune system-mediated diseases that can be treated by the present method include, but are not limited to, diseases listed in Table 1. The relevant methods of the invention comprise the steps of administering an effective amount of a composition of the invention, e.g. collagens, collagen derivatives, or mucosa-binding collagen conjugates. Preferred compositions for use in the treatment of specific immune system mediated diseases are set forth in Table 1, as described in the preceding section. In a preferred embodiment of the method, the composition administered to the subject comprises variable glycosylated collagens or mucosa-binding collagen conjugates, wherein the collagen component comprises variable glycosylated collagen molecules. The composition administered in the present methods is administered so that the active components, i.e. collagens and/or collagen derivatives, come into contact with lymphoid tissue in the intestinal tract, e.g. Peyer's patches or other similar sites, so that immune tolerance is induced. Such administration can be carried out by means of many possible methods, using formulations that include the relevant compositions designed for oral administration, i.e. the active components are not destroyed or inactivated in the mouth, stomach or other parts of the digestive system before in contact with appropriate intestinal lymphoid tissue. The treatment methods of the invention may also include the steps of administering additional pharmaceutical compounds for the treatment of immune system-mediated diseases, such as anti-inflammatory agents and the like.

Doseringen der foreliggende sammensetning blir administrert kan variere innenfor et vidt område og vil avhenge av forskjellige faktorer slik som f.eks. alvorlighet av betennelsen, alder på pasienten, etc., og må bli justert individuelt. Som et mulig område for mengde av kollagen(er) og/eller kollagen(er) derivater som kan bli administrert pr. dag kan være i området fra ca. 0,001 mg til ca. 200 mg. Mengden av kollagen og/eller kollagenderivater som blir administrert er fortrinnsvis lav, for dermed å begunstige induksjon av immuntoleransen ved undertrykking i steden for klonal anergi. De farmasøytiske sammensetningene som inneholder kollagen(er) og/eller kollagen(er) derivater kan hensiktsmessig bli formulert slik at de skaffer tilveie doser innenfor disse områdene enten som enkle doseringsenheter eller som multippeldoseirngsenheter. The dosage at which the present composition is administered can vary within a wide range and will depend on various factors such as e.g. severity of the inflammation, age of the patient, etc., and must be adjusted individually. As a possible range for the amount of collagen(s) and/or collagen(s) derivatives that can be administered per day can be in the range from approx. 0.001 mg to approx. 200 mg. The amount of collagen and/or collagen derivatives administered is preferably low, thereby favoring the induction of immune tolerance by suppression rather than clonal anergy. The pharmaceutical compositions containing collagen(s) and/or collagen(s) derivatives can conveniently be formulated so that they provide doses within these ranges either as single dosage units or as multiple dosage units.

Optimal dosering av toleranse for indusering av sammensetninger for anvendelse i fremgangsmåtene i oppfinnelsen vil variere i overensstemmelse med et antall faktorer. Begrepene "dosering" og "dose" slik det her blir anvendt, kan, dersom annet ikke er angitt, referere ikke bare til en enkel administrering av sammensetningen men kan også bli anvend til å referere til totalmengde av en gitt farmasøytisk sammensetning administrert over en utvalgt tidsperiode og involverer mange individuelle administreringer. Faktorer som påvirker optimal dosering innbefatter valg av kollagenmolekyl eller molekyler (og/eller kollagenderivater) administrert til pasienten, spesifikke mukosabindende molekyler som blir valgt, alder på pasienten, alvorligheten ved sykdommen, andre sykdommer som kan være tilstede i pasienten, inerte komponenter i formuleringen, hjelpestoffer og lignende. Det kan være en betydelig variasjon i området av dosering som er effektiv i behandling av en gitt immunforstyrrelse. Forskjellige doseringer av samme farmasøytiske sammensetning kan produsere ønsket toleranseeffekt ved hjelp av forskjellige mekanismer. Selv om gjennomføring av oppfinnelsen ikke er avhengig av en spesiell gjennomføirngsteori, vil en person med kunnskap innenfor fagområdet bedre forstå oppfinnelsen og skaffe tilveie ytterligere utførelsesformer ved å anta at det kan være to primære mekanismer ved hvilken oral toleranse blir formidlet. Oral toleranse kan bli formidlet ved aktiv cellulær undertrykking hvori regulatoriske T-celler som undertrykker aktivering og proliferasjon av lymfocytter som er spesifikke for toleriserte antigen. Andre mekanismer for oral toleranseinduksjon er klonal anergi hvori T-lymfocytter som har en egnet reseptor blir gjort ikke-responsiv. Generelt blir aktive undertrykkingstoleranser begunstiget med "lave" doser av et toleranseantigen og klonal anergi blir begunstiget med tilsvarende "høye" doser av samme toleranseantigen. En oversikt over prinsipper og teknikker for oral toleranseinduksjon kan man finne i Weiner et al., Annual Review of Immunology: 1994, 809-835, Annual Reviews. Optimal dosage of tolerance inducing compositions for use in the methods of the invention will vary in accordance with a number of factors. The terms "dosage" and "dose" as used herein may, unless otherwise indicated, refer not only to a single administration of the composition but may also be used to refer to the total amount of a given pharmaceutical composition administered over a selected period of time and involves many individual administrations. Factors affecting optimal dosage include the choice of collagen molecule or molecules (and/or collagen derivatives) administered to the patient, specific mucosa binding molecules selected, age of the patient, severity of the disease, other diseases that may be present in the patient, inert components of the formulation, excipients and the like. There can be considerable variation in the range of dosage that is effective in treating a given immune disorder. Different dosages of the same pharmaceutical composition can produce the desired tolerance effect by means of different mechanisms. Although implementation of the invention is not dependent on a particular theory of implementation, a person skilled in the art will better understand the invention and provide additional embodiments by assuming that there may be two primary mechanisms by which oral tolerance is mediated. Oral tolerance may be mediated by active cellular suppression in which regulatory T cells suppress the activation and proliferation of lymphocytes specific for the tolerized antigen. Other mechanisms of oral tolerance induction are clonal anergy in which T lymphocytes that have a suitable receptor are rendered unresponsive. In general, active suppression tolerances are favored with "low" doses of a tolerance antigen and clonal anergy is favored with corresponding "high" doses of the same tolerance antigen. An overview of principles and techniques for oral tolerance induction can be found in Weiner et al., Annual Review of Immunology: 1994, 809-835, Annual Reviews.

Foreliggende sammensetning kan bli formulert som farmasøytiske sammensetninger slik at de er tilpasset visse typer av administrering til mukosale overflater, f.eks. oral, topisk og inhalering. Den foretrukkede formen på formuleringe for oral administrering er i en form der kollagen og/eller kollagenderivater i sammensetningen kommer i kontakt med tynntarmlymfoid vev, f.eks. Peyer's lapper. Sammensetninger i oppfinnelsen kan bli administrert topisk, oralt, intranasalt, ved injeksjon eller ved inhalering i form av farmasøytiske sammensetninger som omfatter kollagen(er) og/eller kollagen(er) derivater i form av den originale forbindelsen eller eventuelt i form av et farmasøytisk akseptabelt salt der, assosiert med en farmasøytisk akseptabel bærer som kan være et faststoff, semi-faststoff eller flytende fortynningsmiddel eller en fordøyelig kapsel, og slike preparater omfatter et ytterligere trekk ved oppfinnelsen. Kollagen(er) og/eller kollagen(er) derivater og mukosabindende kollagenkonjugater kan også bli anvendt med bærermaterialet. Som eksempler på farmasøytiske preparater kan nevnes tabletter, dråper slik som nesedråper, preparater for topisk påføring slik som salver, geleer, kremer og suspensjoner, aerosoler for inhalering, nesespray, liposomer, etc. Vanligvis vil kollagen(er) og/eller kollagen(er) derivater omfatte mellom 0,05 og 99%, eller 0,1 og 99 vekt-% av preparatet, f.eks. mellom 0,5 og 20% for preparater som er beregnet for injeksjon og mellom 0,1 og 50% for preparater som er beregnet for oral administrering. The present composition can be formulated as pharmaceutical compositions so that they are adapted to certain types of administration to mucosal surfaces, e.g. oral, topical and inhalation. The preferred form of formulation for oral administration is in a form where collagen and/or collagen derivatives in the composition contact small intestinal lymphoid tissue, e.g. Peyer's patches. Compositions in the invention can be administered topically, orally, intranasally, by injection or by inhalation in the form of pharmaceutical compositions comprising collagen(s) and/or collagen(s) derivatives in the form of the original compound or optionally in the form of a pharmaceutically acceptable salt therein, associated with a pharmaceutically acceptable carrier which may be a solid, semi-solid or liquid diluent or a digestible capsule, and such preparations comprise a further feature of the invention. Collagen(s) and/or collagen(s) derivatives and mucosa-binding collagen conjugates can also be used with the carrier material. Examples of pharmaceutical preparations include tablets, drops such as nasal drops, preparations for topical application such as ointments, gels, creams and suspensions, aerosols for inhalation, nasal sprays, liposomes, etc. Generally, collagen(s) and/or collagen(s) ) derivatives comprise between 0.05 and 99%, or 0.1 and 99% by weight of the preparation, e.g. between 0.5 and 20% for preparations intended for injection and between 0.1 and 50% for preparations intended for oral administration.

For å produsere farmasøytiske preparater i denne form av doseringsenheten for oral påføring som inneholder en forbindelse i oppfinnelsen kan den aktive ingrediensen bli blandet med et faststoff, en pulverformet bærer, f.eks. laktose, sakkarose, sorbitol, mannitol, en stiver slik som potetstivelse, maisstivelse, amylopectin, laminariapulver eller sitrusmassepulver, et cellulosederivat eller gelatin og kan også innbefatte smøremidler slik som magnesium eller kalsiumstearat eller en Carbowax eller andre polytetylenglykolvokser og blir presset sammen for å danne tabletter elelr kjerner for drageer. Dersom drageer er nødvendig kan kjernene f.eks. bli belagt med konsentrerte sukkeroppløsninger som kan inneholde gummiarabik, talk og/eller titandioksid, eller alternativt med et filmdannende middel oppløst i enkle flyktige organiske oppløsningsmidler eller blandinger av organiske oppløsningsmidler. Fargestoffer kan bli tilsatt disse beleggene, f.eks. for å skille mellom forskjellig innhold av aktiv substans. For preparering av myke gelatinkapsler som består av gelatin, og f.eks. glyserol som et mykningsmiddel, eller en tilsvarende lukket kapsel, kan den aktive substansen bli blandet med en Carbowax eller en egnet olje som f.eks. sesamolje, olivenolje, eller arakisolje. Harde gelatinkapsler kan inneholde granulater av den aktive substansen med faststoff, pulverholdige bærere slik som laktose, sakkarose, sorbitol, mannitol, stivelser (f.eks.) potetstivelse, maisstivelse eller amylopektin), cellulosederivater eller gelatin, og kan også innbefatte mgnesiumstearat eller stearinsyre som smøremidler. To produce pharmaceutical preparations in this form of the dosage unit for oral administration containing a compound of the invention, the active ingredient can be mixed with a solid, a powdered carrier, e.g. lactose, sucrose, sorbitol, mannitol, a stiffener such as potato starch, corn starch, amylopectin, laminaria powder or citrus pulp powder, a cellulose derivative or gelatin and may also include lubricants such as magnesium or calcium stearate or a Carbowax or other polyethylene glycol waxes and are compressed to form tablets Elelr cores for dragons. If dragees are necessary, the cores can e.g. be coated with concentrated sugar solutions which may contain gum arabic, talc and/or titanium dioxide, or alternatively with a film-forming agent dissolved in simple volatile organic solvents or mixtures of organic solvents. Dyes can be added to these coatings, e.g. to distinguish between different contents of active substance. For the preparation of soft gelatin capsules consisting of gelatin, and e.g. glycerol as a softening agent, or a similar closed capsule, the active substance can be mixed with a Carbowax or a suitable oil such as e.g. sesame oil, olive oil, or araki oil. Hard gelatin capsules may contain granules of the active substance with a solid, powdered carriers such as lactose, sucrose, sorbitol, mannitol, starches (eg potato starch, corn starch or amylopectin), cellulose derivatives or gelatin, and may also include magnesium stearate or stearic acid as lubricants.

Sammensetningen i oppfinnelsen kan også bli formulert for å skaffe tilveie en vedvarende frigjøring. Ved å anvende flere lag av aktiv medikament, separert med langsomt oppløsende belegg kan man oppnå vedvarende frigjøring. En annen måte å fremstille tabletter med vedvarende frigjøring er å dele dosen av aktiv medikament i granuler med belegg av forskjellig tykkelse og presse granulene til tabletter sammen med bæresubstansen. Kollagen(er) og/eller kollagen(er) derivater og mukosabindende kollagenkonjugater kan også bli inkorporert i langsomt oppløsende tabelleter som blir laget, f.eks. av fett og vokssubstanser eller jevnt fordelt i en tablett av en uoppløselig substans slik som en fysiologisk inert plastsubstans. The composition of the invention may also be formulated to provide a sustained release. By using several layers of active drug, separated by slowly dissolving coatings, sustained release can be achieved. Another way of producing sustained-release tablets is to divide the dose of active drug into granules with coatings of different thickness and press the granules into tablets together with the carrier substance. Collagen(s) and/or collagen(s) derivatives and mucosa-binding collagen conjugates can also be incorporated into slowly dissolving tablets that are made, e.g. of fat and wax substances or evenly distributed in a tablet of an insoluble substance such as a physiologically inert plastic substance.

For å oppnå doseringsenheter av orale preparater -- tabletter, kapsler, etc. -- som er utformet for å hindre frigjøring av og mulig dekomponering av den aktive substansen i magesyren, kan tablettene, drageer etc. bli enterisk belagt, dvs. tilveiebrakt med et lag av magesyre-resistent enterisk film eller belegg som har slike egenskaper at det ikke ble oppløst i de sure pH-verdiene i magesyre. Den aktive substansen vil således ikke bli frigjort inntil preparatet når tynntarmen. Som eksempel på slike kjente enteriske belegg kan nevnes celluloseacetatftalat, hydroksypropyl-metylcelluloseftalater slik som de som selges under varemerket HP 55 og HP 50, og Edragit L og Eudragit S. In order to obtain dosage units of oral preparations -- tablets, capsules, etc. -- which are designed to prevent the release and possible decomposition of the active substance in the stomach acid, the tablets, dragees, etc. can be enteric coated, i.e. provided with a layer of stomach acid-resistant enteric film or coating which has such properties that it did not dissolve in the acidic pH values of stomach acid. The active substance will thus not be released until the preparation reaches the small intestine. As examples of such known enteric coatings, cellulose acetate phthalate, hydroxypropyl methylcellulose phthalates such as those sold under the brand names HP 55 and HP 50, and Edragit L and Eudragit S can be mentioned.

Flytende preparater for oral anvendelse kan være i form av eliksirer, siruper eller suspensjoner, f.eks. oppløsninger som inneholder fra ca. 0,1 til 20 vekt-% aktiv substans, sukker og en blanding av etanol, vann glyserol, propylenglyserol og eventuelt aroma, sakkarin og/eller karboksymetylcellulose som et dispergeringsmiddel. Liquid preparations for oral use can be in the form of elixirs, syrups or suspensions, e.g. solutions containing from approx. 0.1 to 20% by weight of active substance, sugar and a mixture of ethanol, water glycerol, propylene glycerol and optionally aroma, saccharin and/or carboxymethyl cellulose as a dispersant.

Begrepet "renset" slik det her ble anvendt med referanse til kollagener betegner at de angitte molekylene er tilstede under vesentlig fravær av en andre biologiske makromolekyler, f.eks. polynukleotider, proteiner og lignende. Begrepet "renset" slik det her ble anvendt betyr fortrinnsvis minst 95 vekt-%, mer å foretrekke minst 99,8 vekt-% av de angitte biologiske makromolekylene som er tilstede (men vann, buffere, og andre mindre molekyler, særlig molekyler som har en molekylvekt som er mindre enn 1000 dalton kan være tilstede). Begrepet "isolert" slik det her blir brukt refererer til proteinmolekyl separert ikke bare fra andre proteiner som er tilstede i den naturlige proteinkilden, men også fra andre proteiner, og fortrinnsvis refererer til et protein som man finner i nærvær av (dersom noe) bare et oppløsningsmiddel, buffer eller ion eller annen komponent som normalt er tilstede i en oppløsning av samme. Begrepene "isolert" og renset" omfatter ikke proteiner som er tilstede i deres naturlige kilde. The term "purified" as used herein with reference to collagens denotes that the indicated molecules are present in the substantial absence of other biological macromolecules, e.g. polynucleotides, proteins and the like. The term "purified" as used herein preferably means at least 95% by weight, more preferably at least 99.8% by weight of the specified biological macromolecules present (but water, buffers, and other smaller molecules, especially molecules that have a molecular weight less than 1000 daltons may be present). The term "isolated" as used herein refers to protein molecule separated not only from other proteins present in the natural protein source, but also from other proteins, and preferably refers to a protein found in the presence of (if any) only a solvent, buffer or ion or other component normally present in a solution thereof. The terms "isolated" and "purified" do not include proteins present in their natural source.

6. EKSEMPEL6. EXAMPLE

De følgende eksempler blir anvendt med det formål å illustrere foreliggende oppfinnelse og må ikke betraktes som begrensende på rekkevidden av oppfinnelsen. The following examples are used for the purpose of illustrating the present invention and must not be considered as limiting the scope of the invention.

6.1. In vivo dyrestudie vedrørende utvikling av antistoffer til6.1. In vivo animal study regarding the development of antibodies to

kollagen etter immunisering med kollagencollagen after immunization with collagen

Grupper av 10 DBA/1 mus ble immunisert med enten human type II kollagen (CU), pattedyrcelle avledet rekombinant type II kollagen (rCII+), eller insektcelle avledet rekombinant type II kollagen (rCII-). I hvert tilfelle ble kollagenet oppløst i 0,01M eddiksyre og deretter emulgert i 1 til 1 forhold med komplett Freud's adjuvent forut for immunisering. Hver mus mottok 100 ug protein subkutant i halen. De to gruppene mottok to doser av 100 ug rCII+ eller rCII-, for dermed å motta totalt 200 ug av rCII+ eller rCII-. I hvert tilfelle ble 200 ug total dose administrert, første 100 ug dosen av protein ble administrert som beskrevet over. Den andre 100 ug dosen av protein ble emulgert i ufullstendig Freuds adjuvent og administrert tre uker etter administrering av første dose. Groups of 10 DBA/1 mice were immunized with either human type II collagen (CU), mammalian cell derived recombinant type II collagen (rCII+), or insect cell derived recombinant type II collagen (rCII-). In each case, the collagen was dissolved in 0.01M acetic acid and then emulsified in a 1 to 1 ratio with complete Freud's adjuvant prior to immunization. Each mouse received 100 µg of protein subcutaneously in the tail. The two groups received two doses of 100 µg of rCII+ or rCII-, thus receiving a total of 200 µg of rCII+ or rCII-. In each case 200 µg total dose was administered, the first 100 µg dose of protein was administered as described above. The second 100 µg dose of protein was emulsified in incomplete Freud's adjuvant and administered three weeks after administration of the first dose.

Forekomst av artritt ble målt og rapportert, som angitt i tabell 2 ved seks uker (etter immunisering). Incidence of arthritis was measured and reported, as indicated in Table 2 at six weeks (post immunization).

Slik det er tydelig fra data som angitt i tabell 2, representerer antistoffene gjennomsnittsnivåer/grupper (uttrykt i enheter) mot nati v human type II kollagensera samlet fire uker etter immunisering. As is evident from the data set forth in Table 2, the antibodies represent mean levels/groups (expressed in units) against native v human type II collagen sera collected four weeks after immunization.

6.2. In vivo dyrestudie vedrørende utvikling av antistoffer til6.2. In vivo animal study regarding the development of antibodies to

kollagen etter intravenøs administrering av kollagencollagen after intravenous administration of collagen

Ovalalbumin, human type II kollagen (CU), pattedyrcelle avledet rekombinant type II kollagen (rCII+), eller insektcelle avledet rekombinant type II kollagen (rCII-) ble administrert intravenøst til grupper av 10 DBA/1 mus. Kollagenet (CU, rCII+ og rCII-) ble oppløst i 0,001M eddiksyre og dialysert mot PBS forut for administrering. Enten 33 ug eller 33 ug av protein ble administrert daglig i 3 dager slik at totalt enten 100 ug eller 1000 ug protein ble administrert til hver testmus. Fire dager etter administrering av siste dose ble musene deretter immunisert med CU. Forekomst av artritt ved seks (6) uker immunisering er angitt i tabell 3. Ovalbumin, human type II collagen (CU), mammalian cell derived recombinant type II collagen (rCII+), or insect cell derived recombinant type II collagen (rCII-) were administered intravenously to groups of 10 DBA/1 mice. The collagen (CU, rCII+ and rCII-) was dissolved in 0.001M acetic acid and dialyzed against PBS prior to administration. Either 33 µg or 33 µg of protein was administered daily for 3 days so that a total of either 100 µg or 1000 µg of protein was administered to each test mouse. Four days after administration of the last dose, the mice were then immunized with CU. Incidence of arthritis at six (6) weeks of immunization is shown in table 3.

Antistoffene representerer gjennomsnittlig nivåer/gruppe (uttrykt i enheter) mot nativ human type II kollagen ved å anvende sera samlet fire uker (4) etter immunisering. Statistikkene er rapportert ved å anvende Students T test. The antibodies represent mean levels/group (expressed in units) against native human type II collagen using sera pooled four weeks (4) after immunization. The statistics are reported using Student's T test.

6.3. In vivo dyrestudie vedrørende utvikling av antistoffer til6.3. In vivo animal study regarding the development of antibodies to

kollagen etter oral administrering av kollagencollagen after oral administration of collagen

Grupper av 10 til tolv DBA/1 mus ble oralt administrert enten ovalbumin, human type II kollagen (CU), pattedyrcelle avledet rekombinant type II kollagen (rCII+), eller Groups of 10 to twelve DBA/1 mice were orally administered either ovalbumin, human type II collagen (CU), mammalian cell derived recombinant type II collagen (rCII+), or

insektcelle avledet rekombinant type II kollagen (rCII-). Kollagenet ble oppløst i 0,01M eddiksyre og administrert fire (4) ganger pr. uke i to uker i totalt åtte doser. Enten 10 ug eller 1000 ug ble administrert daglig slik at mus mottok totalt enten 80 ug eller 800 ug insect cell derived recombinant type II collagen (rCII-). The collagen was dissolved in 0.01M acetic acid and administered four (4) times per day. week for two weeks in a total of eight doses. Either 10 µg or 1000 µg was administered daily so that mice received a total of either 80 µg or 800 µg

protein. Tre (3) dager etter opptagelse av siste dose ble musene deretter immunisert med OI. Tabell 4 gir forekomst av artritt ved fem uker immunisering. protein. Three (3) days after taking the last dose, the mice were then immunized with OI. Table 4 gives the incidence of arthritis at five weeks of immunization.

Den rapporterte statistiske variansen ble beregnet ved å anvende en Fisher's eksakttest. Antistoffer representerer gjennomsnittlige nivåer pr. gruppe (uttrykt i enheter) mot nativ human II kollagen ved å anvende sera samlet i fire uker etter immunisering og statistikk ble rapportert ved å anvende Studenfs T test. The reported statistical variance was calculated using a Fisher's exact test. Antibodies represent average levels per group (expressed in units) against native human II collagen using sera collected for four weeks after immunization and statistics were reported using Studenf's T test.

6.4. Human plateaggregeringsstudie6.4. Human platelet aggregation study

Type III rekombinant kollagen og human typer I og III kollagen ble testet i blodprøver fra fire donorer og undersøkt ved å anvende rutineplateaggregeringsanalyse. Alle kollagentyper viste plateaggregeirngsaktivitet. Mer spesifikt er prosentdelen av aggregering av 10 ug rekombinant type III kollagen ekvivalent med prosent aggregering av enten 0,3 ug type III eller 0,6 ug av type I kollagen. Type III recombinant collagen and human types I and III collagen were tested in blood samples from four donors and examined using routine platelet aggregation assay. All collagen types showed platelet aggregation activity. More specifically, the percent aggregation of 10 µg of recombinant type III collagen is equivalent to the percent aggregation of either 0.3 µg of type III or 0.6 µg of type I collagen.

Alle patenter, patentsøknader og publikasjoner som er sitert er innbefattet med referanse. All patents, patent applications and publications cited are incorporated by reference.

Den foregående beskrivelsen betraktes å være tilstrekkelig til å muliggjøre at en person med kunnskap innenfor fagområdet kan gjennomføre oppfinnelsen. Forskjellige modifikasjoner av det ovenfor beskrevne som gjøres for å utføre oppfinnelsen er åpenbar for personer med kunnskap innenfor fagområdene for immunologi, biokjemi og beslektede felter og har til hensikt å være innenfor rekkevidden av følgende krav. The preceding description is considered to be sufficient to enable a person with knowledge within the subject area to carry out the invention. Various modifications of the above described which are made to carry out the invention will be obvious to those skilled in the art of immunology, biochemistry and related fields and are intended to be within the scope of the following claims.

Claims

1. Compound for the treatment of an autoimmune disease, characterized in that the compound comprises a collagen molecular component bound to a mucosa-binding molecular component.

2. Compound according to claim 1, characterized in that the collagen molecule is selected from the group consisting of type II collagen, type IX collagen and type XI collagen.

3. Compound according to claim 2, characterized in that the collagen molecule is a type II collagen derivative.

4. Compound according to claim 3, characterized in that the collagen derivative is variably glycosylated.

5. Compound according to claim 1, characterized in that the mucosa-binding molecule is selected from the group of mucosa-binding molecules derived from mucosa-binding structures of bacterial toxins, bacterial fimbriae, viral attachment proteins, and plant lectins.

6. Compound according to claim 5, characterized in that mucosa-binding protein can bind to ganglioside GM^ .

7. Compound according to claim 5, characterized in that the binding fragment is the 13 subunit of cholera toxin or heat-labile enterotoxin of E. coli.

8. Method for treating an immune system-mediated disease, characterized in that the method comprises the step of administering an effective amount of a compound according to claim 1.

9. Method according to claim 8, characterized in that the collagen molecule is selected from the group consisting of type II collagen, type IX collagen and type XI collagen.

10. Method according to claim 9, characterized in that the collagen molecule is a type II collagen derivative.

11. Method according to claim 10, characterized in that the collagen derivative is variably glycosylated.

12. Method according to claim 8, characterized in that the mucobinding molecule is selected from the group of mucobinding molecules derived from mucobinding structures of bacterial toxins, bacterial fimbriae, viral attachment proteins and plant lectins.

13. Compound according to claim 12, characterized in that mucosa-binding protein can bind to ganglioside GMi.

14. Compound according to claim 12, characterized in that the binding fragment is the B subunit of cholera toxin or heat-labile enterotoxin of E. coli.

1. Compound for the treatment of an autoimmune disease, characterized in that the compound comprises a recombinant human collagen molecular component bound to a mucosa-binding molecular component.

6. Compound according to claim 5, characterized in that mucosa-binding protein can bind to ganglioside GM\.

13. Compound according to claim 12, characterized in that mucosa-binding protein can bind to ganglioside GM^ .

14. Compound according to claim 12, characterized in that the binding fragment is the 13 subunit of cholera toxin or heat-labile enterotoxin of E. coli.

1. Mucobinding collagen conjugate, characterized in that it comprises at least one purified collagen molecule and/or collagen derivative molecular component bound to a mucosa binding molecular component, said mucosa binding collagen conjugate and/or collagen molecule, and/or collagen derivative molecule comprises respectively at least one tolerance-inducing epitope.

2. Conjugate according to claim 1, characterized by the fact that the mucosa-binding conjugate and/or collagen molecule and/or collagen derivative molecule is of human origin and is produced by recombinant technology.

3. Conjugate according to claim 1 or 2, characterized in that the collagen molecule and/or the collagen derivative molecule is variably glycosylated.

4. Conjugate according to any one of claims 1 to 3, characterized in that the mucobinding molecule is selected from the group of mucobinding molecules derived from mucobinding structures of bacterial toxins, bacterial fimbriae, viral attachment proteins, and plant lectins.

5. Conjugate according to claim 4, characterized in that the binding fragment is the B subunit of cholera toxin or heat-labile enterotoxin of E. coli.

6. Conjugate according to claim 4 or 5, characterized in that mucosa-binding protein can bind to ganglioside GM].

7. Pharmaceutical composition, characterized in that component (A) comprises (a) at least one purified collagen molecule and/or collagen derivative molecule or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or (b) a mucosa-binding collagen conjugate according to any one of claims 1 to 6, and component ( B) consisting of a pharmaceutically acceptable carrier.

8. Pharmaceutical composition according to claim 7, characterized by the fact that the mucosa-binding conjugate and/or collagen molecule and/or collagen derivative molecule is of human origin and is produced by recombinant technology.

9. Pharmaceutical composition according to claim 7 or 8, characterized in that component (A) is present in an amount between approx. 0.05 and 99% by weight of the composition.

10. Pharmaceutical composition according to any one of claims 7 to 9, or a conjugate according to any one of claims 1 to 6, characterized in that the collagen molecule is at least one collagen selected from the group consisting of type I to type XVIII as defined in the description.

11. Pharmaceutical composition or conjugate according to claim 10, characterized in that the collagen molecule is selected from the group consisting of type II collagen, type IX collagen and type XI collagen.

12. Pharmaceutical composition according to any one of claims 7 to 11, or a conjugate according to any one of claims 1 to 6, characterized in that the collagen molecule and/or the collagen derivative molecule is variably glycosylated.

13. Pharmaceutical composition according to any one of claims 7 to 12, characterized in that it can be used for the treatment of an immune system-mediated disease.

14. Pharmaceutical composition according to claim 13, characterized in that the disease is rheumatoid arthritis.

15. Pharmaceutical composition according to any one of claims 7 to 14, characterized in that it is suitable to be administered in the range between approx. 0.001 mg and approx. 200 mg per day.

16. A method of treating an immune system mediated disease, characterized by administering to a patient an effective amount of a pharmaceutical composition according to any one of claims 7 to 15.