NO864301L - Dna-prober for human regulatorisk enhet av camp-avhengige proteinkinaser. - Google Patents
Dna-prober for human regulatorisk enhet av camp-avhengige proteinkinaser.Info
- Publication number
- NO864301L NO864301L NO864301A NO864301A NO864301L NO 864301 L NO864301 L NO 864301L NO 864301 A NO864301 A NO 864301A NO 864301 A NO864301 A NO 864301A NO 864301 L NO864301 L NO 864301L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- dna
- camp
- protein kinases
- dependent protein
- fragments
- Prior art date
Links
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 title claims abstract description 17
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 title description 2
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 title description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 27
- 102000008130 Cyclic AMP-Dependent Protein Kinases Human genes 0.000 claims abstract description 26
- 108010049894 Cyclic AMP-Dependent Protein Kinases Proteins 0.000 claims abstract description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 claims description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 claims description 2
- 230000007614 genetic variation Effects 0.000 claims 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 abstract description 17
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 abstract description 11
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 abstract description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 4
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 abstract description 4
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 abstract description 3
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 abstract description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 10
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 description 7
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 7
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N Cyclic adenosine monophosphate Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 4
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- IVOMOUWHDPKRLL-UHFFFAOYSA-N UNPD107823 Natural products O1C2COP(O)(=O)OC2C(O)C1N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 IVOMOUWHDPKRLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940095074 cyclic amp Drugs 0.000 description 4
- 108010054576 Deoxyribonuclease EcoRI Proteins 0.000 description 3
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 3
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 3
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- FJWGYAHXMCUOOM-QHOUIDNNSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-2-[(2r,3r,4s,5r,6s)-4,5-dinitrooxy-2-(nitrooxymethyl)-6-[(2r,3r,4s,5r,6s)-4,5,6-trinitrooxy-2-(nitrooxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-3,5-dinitrooxy-6-(nitrooxymethyl)oxan-4-yl] nitrate Chemical compound O([C@@H]1O[C@@H]([C@H]([C@H](O[N+]([O-])=O)[C@H]1O[N+]([O-])=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[N+]([O-])=O)[C@H](O[N+]([O-])=O)[C@@H](CO[N+]([O-])=O)O1)O[N+]([O-])=O)CO[N+](=O)[O-])[C@@H]1[C@@H](CO[N+]([O-])=O)O[C@@H](O[N+]([O-])=O)[C@H](O[N+]([O-])=O)[C@H]1O[N+]([O-])=O FJWGYAHXMCUOOM-QHOUIDNNSA-N 0.000 description 3
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 3
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 3
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 3
- 229940079938 nitrocellulose Drugs 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 108010025076 Holoenzymes Proteins 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N DEAE-cellulose Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)O[C@H]1O[C@@H]1C(CO)OC(O)C(O)C1O GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 101710183280 Topoisomerase Proteins 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 210000001776 amniocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 1
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000011748 cell maturation Effects 0.000 description 1
- 230000009134 cell regulation Effects 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 210000001136 chorion Anatomy 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000013601 cosmid vector Substances 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 108091008053 gene clusters Proteins 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- -1 unlike previously Proteins 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Humane DNA prober (DNA fragmenter) for regulatorisk enhet av cAMP-avhengige protein kinaser er blitt identifisert, isolert og(1). Disse DNA fragmentene kan benyttes til å karakterisere mRNA og DNA for det aktuelle genet i normalt og patologisk materiale ved hjelp av standard metoder innen rekombinant DNA teknologi, slik som RNA blotting (Northern) og DNA. blotting (Southern) (2,3).
Description
DNA prober for human regulatorisk enhet av cAMP-avhengige protein kinaser
Oppfinnelsen angår bruk av isolerte DNA prober for
human regulatorisk enhet av cAMP-avhengige protein kinaser. En spesiell side av oppfinnelsen angår bruk av disse DNA prober til diagnostisering av sykdomstilstander hos mennesker.
Syklisk AMP-avhengige protein kinaser er meget viktige for normal celle-modning og celle-deling. Mange hormoner/kjemiske substanser utfører sine effekter på celle metabolismen og gen ekspresjon ved å regulere intracellulært cyklisk AMP (cAMP), som så regulerer aktiviteten av cAMP-avhengige protein kinaser. Holoenzymet cAMP-avhengig protein kinase er bygget opp av to identiske regulatoriske (R) og katalytiske (C) enheter. Hver regulatorisk enhet binder 2 cAMP. De katalytiske enhetene dissosierer fra holoenzymet ved binding av cAMP til de regulatoriske enhetene. Fri katalytisk enhet fosforylerer serin og threonin på forskjellige.proteiner og medierer dermed den bio-logiske respons på det hormonelle stimulus. Det er videre vist at fri regulatorisk enhet kan ha direkte effekt på regulering av celle funksjoner. Dette kan skje ved at den regulatoriske enheten fungerer som topoisomerase (Constantiriou et al., 1985) eller ved binding til forskjellige cytoplasmatiske proteiner (Lohmann et al., 1984).
To hovedtyper av cAMP-avhengige protein kinaser (kalt Type I og Type II) ble opprinnelig beskrevet og senere funnet å være forskjellige svarende til R-enheten (RI og RII). Videre har man den senere tidkarakterisertsubklasser av RII i rotte (RII51og RII54) (Jahnsen et al., 1985, 1986a, 1986b). RI, RII51og RII54
er vist å representere forskjellige genprodukter (Jahnsen et al., 1985, 1986a, 1986b).
I litteraturen er det blitt rapportert at cAMP-avhengige protein kinaser kan ha en meget sentral rolle i forbindelse med for eksempel sykdommene cystisk fibrose (Frizzell et al., 1986;
Welsh og Liedtke, 1986), kreft (f.eks brystkreft (Cho-Chung, 1985)) og hudsykdommer (f.eks. psoreasis (Brion et al., 1986)). I disse tilfellene er det proteinene tilhørende de cAMP-avhengig protein kinasene som er blitt studert. Metodene som er blitt brukt i denne sammenheng er hovedsakelig DEAE-cellulose kromato-grafi, protein kinase aktivitetsstudier, fotdaffinitetsmerking med (<32p>)azido-cAMP og immunologiske metoder. Sensitiviteten og spesifisiteten ved disse målemetodene har vært av en slik art at det har vært vanskelig/umulig å kunne skille mellom de forskjellige genproduktene for cAMP-avhengige protein kinaser. Med moderne teknikker innen rekombinant DNA teknologi har man blitt i stand til å identifisere og skille ut de forskjellige genene av cAMP-avhengige protein kinaser (Lee et al., 1983; Jahnsen et al., 1985, 1986a, 1986b; Uhler et al., 1986). Disse studiene er blitt gjort henholdsvis på okse, rotte og mus. Ved hjelp av disse genene kan man i motsetning til tidligere undersøke mRNA og DNA for cAMP-avhengige protein kinaser i forskjellige vev under normale og patologiske forhold. Med bakgrunn i at cAMP-avhengige protein kinaser kan spille en meget viktig rolle i forbindelse med de ovenfor nevnte sykdommer hos mennesket vil kloning av humane gener for cAMP-avhengige protein kinaser kunne bli av meget stor betydning med tanke på forståelse og diagnostisering av visse sykdommer.
En hensikt med oppfinnelsen er derfor å isolere humane
gener for cAMP-avhengige protein kinaser.
En annen hensikt med oppfinnelsen er å benytte disse genene til å studere mRNA for cAMP-avhengige protein kinaser i normalt og patologisk materiale.
Nok en hensikt med oppfinnelsen er at man kan bruke de klonede genene for cAMP-avhengige protein kinaser til studere DNA fra mennesker med forskjellige sykdommer med tanke på affeksjon av genene for cAMP-avhengige protein kinaser.
Materiale for slike ovenfor nevnte undersøkelser kan være blod (hvite blodlegemer), amniocytter fra amnionvæsken, chorion villi, tumorvev eller annet vev.
I henhold til den foreliggende oppfinnelsen er det oppdaget, isolert ogkarakterisertet humant gen for en regulatorisk enhet av cAMP-avhengige protein kinaser. Dette genet (DNA fragmentene) kan benyttes til å karakterisere mRNA og DNA for det aktuelle genet i normalt og patologisk materiale ved hjelp av standard metoder innen rekombinant DNA teknologi, slik som RNA blotting (Northern) og DNA blotting (Southern).
Detaljert beskrivelse av oppfinnelsen Identifisering, isolering og karakterisering av et humant gen for en regulatorisk enhet av cAMP-avhengige protein kinaser. Til dette arbeidet benyttet vi et humant genomisk bibliotek. Dette genbiblioteket ble gitt til oss fra Dr. Vince Kidd (Depart-ment of Cell Biology and Anatomy, University of Alabama-Birmingham, Birmingham, Alabama 35294, USA. I korte trekk ble genbiblioteket konstruert på følgende måte: DNA ble ekstrahert fra en human fibroblast celle-linje (GM2769) deretter ble DNA partielt fordøyet med restriksjonsenzymet Mbo I, DNA med størrelser mellom 25.000 og 45.000 basepar ble selektert for kloning inn i Bam HI setet på vektoren pCVl07 og transformert inn i bakterien ED8767 (Lau og Kan, 1983). Dette humane cosmid biblioteket ble så undersøkt med tanke på hybridisering til en radioaktiv DNA probe for rotte RII51. Vi benyttet rotte RII51proben som er benevnt RII5I1.5 kb i publikasjonen Jahnsen et al., 1986b. Denne DNA proben ble merket med radioaktiv nukleotid (a-<32p>)dcTP (Amersham PB.1 0207) som beskrevet i Amersham's nick translasjons kit N.5000. DNA proben ble merket til en spesifikk aktivitet av 1-3x10<**>c.p.m./jig DNA. Vi sjekket ("screenet") 500.000 kloner fra det humane genbiblioteket med tanke på hybridisering til den be-skrevne proben. Protokollen for denne cosmid-screeningen (i hovedtrekk som beskrevet av Dillela og Woo, 1985): 25.000 celler/kolonier ble spredd ut på tyve 137 mm i diameter nitro-cellulosefiltere ("master filtere") som var plassert på LB agar plater inneholdende 50 ug/ml ampicillin. Platene ble inkubert ved 37°C inntil koloniene hadde en størrelse på ca 0.2 mm i diameter. Replika filtere ble laget fra hvert master filter ved å presse et ubrukt nitrocellulosefilter ned mot master filteret. Replika
filtere og master filtere ble deretter lagt på LB agar plater inneholdende 50 ug/ml ampicillin og inkubert ved 37°C inntil
koloniene nådde en størrelse på ca 1 mm i diameter. Master filteret/platen ble deretter lagret ved +4°C. Replika filtere ble fjernet fra LB/ampicillin platene og inkubert på LB agar plater i
20 timer inneholdende 250 jig/ml kloramfenikol. Replika filtere
. ble lagt på Whatman 3MM papir. Koloniene/bakteriene ble lysert og DNA fiksert til nitrocellulosefilteret. Dette ble gjort ved hjelp av 15 minutters inkuberinger på Whatman 3MM papir mettet med 0.5 M NaOH/1.5 M NaCl etterfulgt av 1 M Tris (pH 7.5) og til slutt 0.5 M Tris (pH 7.5)/1.5 M NaCl før filterene ble bakt ved 68°C i 3 timer. Prehybridiseringen av filterene ble utført med 6xSSC/
2xDenhardt ved 68°C over natt. Hybridiseringen ble utført ved 68<*>C over natt i 6xSSC/2xDenhardt/1 mM EDTA/0.5% SDS inneholdende 1 million c.p.m DNA probe (RII51, 1.5 kb)/mi. Filterene ble
vasket ved lav stringens (3x1 time ved 68°C i 2xSSC/0.5% SDS) for å øke mulighetene for at rotte proben skulle kunne detektere til-svarende humane gen. Filterene ble tørket på Whatman 3MM ved romtemperatur og eksponert for film. Resultatet av denne screeningen var 4 potensielt positive kloner. En av disse 4 klonene ble isolert ogkarakterisertnærmere. Den aktuelle klonen ble renset, isolert ogkarakterisert vedhjelp av standard prosedyrer i rekombinant DNA teknologi (Maniatis et al., 1982). Restrik-sjonsenzymfordøyninger ble utført på den isolerte klonen, påfulgt av separasjon på henholdsvis 0.6 og 1.0% agarose gel, genererte fragmenter farget med etidium bromid før gelen ble lagt til transfer for deretter å utføre en DNA blotting (Southern) med rotte RII511.5 kb som merket DNA probe. Resultatet av dette viste at restriksjonsenzymene Hine II og Barn HI genererte hver to fragmenter fra den isolerte humane klonen som begge hybridiserte (bandt seg) til DNA proben fra rotte (RII51, 1.5 kb). Størrelsen på disse fragmentene var 4000*100 og 2300±100 basepar for de to Hine II fragmentene og 2800*100 og 2300*100 basepar for de to Barn HI fragmentene. Disse 4 fragmentene ble ved hjelp av kjente teknikker innen rekombinant DNA teknologi (Maniatis et al., 1982) klonet inn i vektoren/plasmidet pUC18, og bakterien HB101 ble transformert med disse nye konstruksjonene. HB101 bakterier inneholdende de respektive fragmentene ble grodd opp og plasmidene isolert. Disse 4 plasmidene ble nå undersøkt med tanke på forskjellige restriksjonsseter. Dette ble gjort ved at hver av de
4 klonene ble fordøyet med følgende restriksjonsenzymer: Acc I, Bara HI, Bgl II, Eco RI, Hine II, Hind III, Kpn I, Pst I, Pvu II, Sma I og Xba I. Dette ga følgende resultat for hver av de 4 fragmentene: Hine II (4.0 kb fragmentet), fordøyet med restriksjonsenzymet:
Acc I ga fragmentene 2. 8 og 1 .2 kb
Bam HI ga fragmentene 2. 9, 0.95 og 0.15 kb
Bgl II ga fragmentene 1.65, 1.1, 0. 55, 0. 5 og 0.2 kb
Pst I ga fragmentene 2. 7 og 1.3 kb
Sma I ga fragmentene 2. 35 og 1.65 kb
Eco RI, Hind III, Kpn I, Pvu II og Xba I kuttet ikke dette Hine II fragmentet på 4.0 kb.
Hine II (2.3 kb fragmentet), fordøyet med restriksjonsenzymet:
Acc I ga fragmentene 1. 5, 0.6 og 0.2 kb
Bam HI ga fragmentene 1. 45 og 0.85 kb
Pst I ga fragmentene 1. 95, 0.2 og 0.15
Xba I ga fragmentene 1. 6, 0.45 og 0.25
Bgl II, Eco RI, Hind III, Kpn I, Pvu II og Sma I kuttet ikke dette Hine II fragmentet på 2.3 kb.
Bam HI (2.8 kb fragmentet), fordøyet med restriksjonsenzymet:
Acc I ga fragmentene 1 . 75 Og 1.05 kb
Bgl II ga fragmentene 1.4, 0. 6, 0. 5 og 0.3 kb
Pst I ga fragmentene 1. 55 og 1.25 kb
Sma I ga fragmentene 1.5 og 1. 3 kb
Eco RI, Hine II, Hind III, Kpn I, Pvu II, og Xba I kuttet ikke dette Bam HI fragmentet på 2.8 kb.
Bam HI (2.3 kb fragmentet), fordøyet med restriksjonsenzymet:
Bgl II ga fragmentene 1. 5 og 0.8 kb
Hine II ga fragmentene 1. 3 og 1.0 kb
Pst I ga fragmentene 1.1, 1. 05 og 0.15 kb
Pvu II ga fragmentene 1. 4 og 0.9 kb
Acc I, Eco RI, Hind III, Kpn I, Sma I og Xba I kuttet ikke dette Bam HI fragmentet på 2.3 kb.
Størrelsen på de ovenfor nevnte DNA fragmentene er angitt i kilobaser (kb, 1 kb = 1000 basepar). Størrelsesangivelsene må antas å kunne ha en feilmargin på ± 100 basepar. Fragmentene som er understreket hybridiserte til rotte RII511.5 kb DNA probe vurdert ved DNA blotting teknikk (Southern). Restriksjonskart av Hine II (4.0 kb) og Bam HI (2.8 kb) fragmentene er vist i Fig. 1. Bokstaven A angir et område hvor DNA sekvensering er utført og som viste 78-82% homologi på nukleotidnivå med den publiserte DNA sekvensen for rotte RII51(Jahnsen et al., 1986b). DNA sekvens-data for en del av område A er angitt i Fig. 2. DNA sekven-seringen ble utført ved hjelp av metoden Sanger dideoxy DNA sekvensering (Sanger et al., 1977). Fig. 1 er et restriksjonskart over en del av det humane genet for en regulatorisk enhet av cAMP-avhengig protein kinase. Fig. 2 gir DNA sekvenseringsdata for en del av human form av regulatorisk enhet av cAMP-avhengig protein kinase (nukleotidsekvensen er gitt i linje a). Denne nukleotidsekvensen er tatt fra en del av området kalt A i figur 1. Nukleotidsevensen til rotte RII51er gitt i linje b, og svarer til nukleotidsekvensen fra nukleotid 935 til 1027 (Jahnsen et aL, 1986b).
Bibliografi
Brion, D.E., Raynaud, F., Plet, A., Laurent, P., Leduc, B., og Anderson, W.: Deficiency of cyclic AMP-dependent protein kinases in human psoreasis. Proe. Nati. Acad. Sei. USA 83, 5272-5276, 1 986.
Cho-Chung, Y.S.: Reverse transformation studies provide clues for treating malignancies. Genetic Engineering News 5, 32, 1985.
Constantinou, A.I., Squinto, S.P., og Jungmann, R.A.: The phosphoform of the regulatory subunit RII of cyclic AMP-dependent protein kinase possesses intrinsic topoisomerase activity. Cell 42, 429-437, 1985.
Dillela, A.G., og Woo, S.L.C.: Cosmid cloning of genomic DNA. Focus 7(2) , 1 -5, 1 985.
Frizzell, R.A., Rechkemmer, G., og Shoemaker, R.L.: Altered regulation of airway epithelial cell chloride channels in ctstic fibrosis. Science 233, 558-560, 1986.
Jahnsen, T., Lohmann, S.M., Walter, U., Hedin, L., og Richards, J.S.: Purification and characterization of hormone-regulated isoforms of the regulatory subunit of type II cAMP-dependent protein kinase from rat ovaries. J. Biol. Chem. 260, 15980-15987, 1985.
Jahnsen, T., Hedin, L., Lohmann, S.M., Walter, U., og Richards, J.S.: The neural type II regulatory subunit of cAMP-dependent protein kinase is present and regulated by hormones in the rat ovary. J. Biol. Chem. 261, 6637-6639, 1986a.
Jahnsen, T., Hedin, L., Kidd, V.J., Beattie, W.G., Lohmann, S.M., Walter, U., Durica, J., Schulz, T.Z., Schiltz, E., Browner, M., Goldman, D., Ratoosh, S.L., og Richards, J.S.: Molecular cloning, cDNA structure and regulation of the regulatory subunit (R-II51) of type II cAMP-dependent protein kinase from rat granulosa cells. J. Biol. Chem. 261, 12352-12361, 1986b.
Lau, Y.-F., og Kan, Y.W.: Versatile cosmid vectors for the isolation, expression, and rescue of gene sequences: Studies with the a-globin gene cluster. Proe. Nati. Acad. Sei. USA 80, 5225-5229, 1983.
Lee, D.C., Carmichael, D.F., Krebs, E.G., og McKnight, G.S.: Isolation of a cDNA clone for the type I regulatory subunit of bovine cAMP-dependent protein kinase. Proe. Nati. Acad. Sei. USA 80, 3608-3612, 1983.
Lohmann, S.M., DeCamilli, P., Einig, I., og Walter, U.: High-affinity binding of the regulatory subunit (Rn) of cAMP-dependent protein kinase to microtuble-associated and other cellular proteins. Proe. Nati. Acad. Sei. USA 81, 6723-6727, 1984.
Maniatis, T., Fritsch, E.F., og Sambrook, J.: Molecular Cloning. A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory, 1982.
Sanger, F., Nicklen, S., og Coulson, A.R.: DNA sequencing with chain terminating inhibitors. Proe. Nati. Acad. Sei. USA 74, 5463-5467, 1977.
Uhler, M.D., Carmichael, D.F., Lee, D.C., Chrivia, J.C., Krebs, E.G., og McKnight, G.S.: Isolation of cDNA clones coding for the catalytic subunit of mouse cAMP-dependent protein kinase. Proe. Nati. Acad. Sei. USA 83, 1300-1304, 1986.
Welsh, M.J., og Liedtke, CM.: Chloride and potassium channels in cystic fibrosis airway epithelia. Nature 322, 467-470, 1986.
Claims (4)
1 . DNA fragmenter for humant gen av regulatorisk enhet av cAMP-avhengige protein kinaser karakterisert ved de egenskapene som er beskrevet i denne patentbeskrivelsen.
2. DNA fragmenter som angitt i krav 1, karakterisert ved at de kan benyttes til å måle mRNA for regulatoriske enheter av cAMP-avhengige protein kinaser, særlig i forbindelse med diagnostikk.
3. DNA fragmenter som angitt i krav 1 , karakterisert ved at de kan benyttes til å detektere genetiske variasjoner i genene til de cAMP-avhengige protein kinasene, særlig i forbindelse med sykdomstilstander som for eksempel cystisk fibrose, cancer, hudsykdommer og Alzheimer <1> s sykdom.
4. Fremgangsmåte til diagnostisering av sykdomstilstander hos mennesker, karakterisert ved at der som probe anvendes et DNA-fragment som angitt i krav 1.
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NO864301A NO864301L (no) | 1986-10-28 | 1986-10-28 | Dna-prober for human regulatorisk enhet av camp-avhengige proteinkinaser. |
| PCT/NO1987/000069 WO1988003164A1 (en) | 1986-10-28 | 1987-10-27 | COMPLENTARY DNA PROBES FOR HUMAN REGULATORY SUBUNITS (RIalpha AND RIIbeta) OF cAMP-DEPENDENT PROTEIN KINASES |
| US07/216,715 US5097026A (en) | 1986-10-28 | 1987-10-27 | DNA for human regulatory subunits (RIα and RIIβ) of camp-dependent protein kinases |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NO864301A NO864301L (no) | 1986-10-28 | 1986-10-28 | Dna-prober for human regulatorisk enhet av camp-avhengige proteinkinaser. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO864301D0 NO864301D0 (no) | 1986-10-28 |
| NO864301L true NO864301L (no) | 1988-04-29 |
Family
ID=19889334
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO864301A NO864301L (no) | 1986-10-28 | 1986-10-28 | Dna-prober for human regulatorisk enhet av camp-avhengige proteinkinaser. |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5097026A (no) |
| NO (1) | NO864301L (no) |
| WO (1) | WO1988003164A1 (no) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5271941A (en) * | 1990-11-02 | 1993-12-21 | Cho Chung Yoon S | Antisense oligonucleotides of human regulatory subunit RI.sub.α of cAMP-dependent protein kinases |
| WO1994028116A1 (en) | 1993-05-21 | 1994-12-08 | Zeneca Limited | Nucleic acid encoding amp-activated protein kinase |
| US20030083281A1 (en) * | 2001-07-25 | 2003-05-01 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense modulation of PKA regulatory subunit RII beta expression |
| JP2007508014A (ja) | 2003-10-10 | 2007-04-05 | プロメガ コーポレイション | ルシフェラーゼバイオセンサー |
| WO2005060996A2 (en) * | 2003-12-23 | 2005-07-07 | Lauras As | Method of altering the pka type i signalling pathway |
| CA2648263A1 (en) | 2006-04-03 | 2007-10-25 | Promega Corporation | Permuted and nonpermuted luciferase biosensors |
| US9045730B2 (en) * | 2008-05-19 | 2015-06-02 | Promega Corporation | Luciferase biosensors for cAMP |
| US9290794B2 (en) | 2010-05-11 | 2016-03-22 | Promega Corporation | Mutant protease biosensors with enhanced detection characteristics |
| EP3508570B1 (en) | 2010-05-11 | 2020-07-22 | Promega Corporation | Mutant protease biosensors with enhanced detection characteristics |
-
1986
- 1986-10-28 NO NO864301A patent/NO864301L/no unknown
-
1987
- 1987-10-27 US US07/216,715 patent/US5097026A/en not_active Expired - Fee Related
- 1987-10-27 WO PCT/NO1987/000069 patent/WO1988003164A1/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1988003164A1 (en) | 1988-05-05 |
| US5097026A (en) | 1992-03-17 |
| NO864301D0 (no) | 1986-10-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Tsai-Pflugfelder et al. | Cloning and sequencing of cDNA encoding human DNA topoisomerase II and localization of the gene to chromosome region 17q21-22. | |
| Friend et al. | Deletions of a DNA sequence in retinoblastomas and mesenchymal tumors: organization of the sequence and its encoded protein. | |
| Yang et al. | A protein kinase substrate identified by the two-hybrid system | |
| Zalcman et al. | RhoGDI-3 is a new GDP dissociation inhibitor (GDI): identification of a non-cytosolic GDI protein interacting with the small GTP-binding proteins RhoB and RhoG | |
| Bellacosa et al. | Molecular alterations of the AKT2 oncogene in ovarian and breast carcinomas | |
| Chomyn et al. | URF6, last unidentified reading frame of human mtDNA, codes for an NADH dehydrogenase subunit | |
| Feinstein et al. | p53 in chronic myelogenous leukemia in acute phase. | |
| Darlington et al. | Human serum albumin phenotype activation in mouse hepatoma-human leukocyte cell hybrids | |
| Hsiao et al. | Oncogene-induced transformation of C3H 10T1/2 cells is enhanced by tumor promoters | |
| Hildebrand et al. | Assignment of the human 2, 3, 7, 8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin-inducible cytochrome P 1-450 gene to chromosome 15 | |
| van der Spek et al. | Cloning, Comparative Mapping, and RNA Expression of the Mouse Homologues of theSaccharomyces cerevisiaeNucleotide Excision Repair GeneRAD23 | |
| Hirschhorn et al. | Somatic mosaicism for a newly identified splice-site mutation in a patient with adenosine deaminase-deficient immunodeficiency and spontaneous clinical recovery. | |
| Stayton et al. | Cloning and characterization of a new human Xq13 gene, encoding a putative helicase | |
| NO864301L (no) | Dna-prober for human regulatorisk enhet av camp-avhengige proteinkinaser. | |
| Jeffreys et al. | Localisation of the G γ-, A γ-, δ-and β-globin genes on the short arm of human chromosome 11 | |
| Rowley | Abnormalities of chromosome no. 1: Significance in malignant transformation | |
| Sakimura et al. | Molecular cloning and the nudeotide sequence of cDNA to mRNA for Don-nearonal enolase (αα enolase) of rat brain and liver | |
| Gerbitz et al. | Mitochondrial myopathies: divergences of genetic deletions, biochemical defects and the clinical syndromes | |
| Mohandas et al. | Assignment of the human gene for galactose-1-phosphate uridyltransferase to chromosome 9: studies with Chinese hamster-human somatic cell hybrids. | |
| Rodriguez et al. | Analysis of chromosome 12 aneuploidy in interphase cells from human male germ cell tumors by fluorescence in situ hybridization | |
| Cohen et al. | Human malic enzyme: high-frequency polymorphism of the mitochondrial form | |
| Jones et al. | Regional mapping of the gene for human lysosomal acid phosphatase (ACP 2) using a hybrid clone panel containing segments of human chromosome 11 | |
| Holt et al. | Mitochondrial DNA polymorphism in mitochondrial myopathy | |
| JPH012572A (ja) | Ｄｎａおよび形質転換体 | |
| Wang et al. | Analysis of EGF receptor amplicons reveals amplification of multiple expressed sequences |