NO850785L - Fremgangsmaate ved diagnostisering in vitro og diagnostisk middel - Google Patents
Fremgangsmaate ved diagnostisering in vitro og diagnostisk middelInfo
- Publication number
- NO850785L NO850785L NO850785A NO850785A NO850785L NO 850785 L NO850785 L NO 850785L NO 850785 A NO850785 A NO 850785A NO 850785 A NO850785 A NO 850785A NO 850785 L NO850785 L NO 850785L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- cells
- cell
- magnetic
- spheres
- animals
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 18
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 66
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 16
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 15
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 11
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 10
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 10
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 9
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 5
- 230000033616 DNA repair Effects 0.000 claims description 4
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 claims description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 claims description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 3
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 claims description 2
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 16
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 8
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 7
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 7
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 7
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 7
- 230000006870 function Effects 0.000 description 7
- 239000000696 magnetic material Substances 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 231100000024 genotoxic Toxicity 0.000 description 6
- 230000001738 genotoxic effect Effects 0.000 description 6
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 5
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 5
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 5
- -1 pullullan Polymers 0.000 description 5
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 4
- 230000005778 DNA damage Effects 0.000 description 4
- 231100000277 DNA damage Toxicity 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N iron(II,III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]O[Fe]=O SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N acrylic acid group Chemical group C(C=C)(=O)O NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 3
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 3
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 230000003228 microsomal effect Effects 0.000 description 3
- 239000002077 nanosphere Substances 0.000 description 3
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N nickel Substances [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 238000012502 risk assessment Methods 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KVNYFPKFSJIPBJ-UHFFFAOYSA-N 1,2-diethylbenzene Chemical compound CCC1=CC=CC=C1CC KVNYFPKFSJIPBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000029483 Acquired immunodeficiency Diseases 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YNQLUTRBYVCPMQ-UHFFFAOYSA-N Ethylbenzene Chemical compound CCC1=CC=CC=C1 YNQLUTRBYVCPMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000034826 Genetic Predisposition to Disease Diseases 0.000 description 2
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 2
- 102000004020 Oxygenases Human genes 0.000 description 2
- 108090000417 Oxygenases Proteins 0.000 description 2
- 102000004005 Prostaglandin-endoperoxide synthases Human genes 0.000 description 2
- 108090000459 Prostaglandin-endoperoxide synthases Proteins 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 2
- 230000003217 anti-cancerogenic effect Effects 0.000 description 2
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 238000007885 magnetic separation Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 150000002924 oxiranes Chemical class 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- ODLMAHJVESYWTB-UHFFFAOYSA-N propylbenzene Chemical compound CCCC1=CC=CC=C1 ODLMAHJVESYWTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 2
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 1,2-Dichloroethane Chemical compound ClCCCl WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CXCHEKCRJQRVNG-UHFFFAOYSA-N 2,2,2-trifluoroethanesulfonyl chloride Chemical group FC(F)(F)CS(Cl)(=O)=O CXCHEKCRJQRVNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009062 ADP Ribose Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108010049290 ADP Ribose Transferases Proteins 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 description 1
- GAWIXWVDTYZWAW-UHFFFAOYSA-N C[CH]O Chemical group C[CH]O GAWIXWVDTYZWAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 108091060290 Chromatid Proteins 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 102000011724 DNA Repair Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108010076525 DNA Repair Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 231100001074 DNA strand break Toxicity 0.000 description 1
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000005486 Epoxide hydrolase Human genes 0.000 description 1
- 108020002908 Epoxide hydrolase Proteins 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 1
- 102000005720 Glutathione transferase Human genes 0.000 description 1
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 1
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 102000003820 Lipoxygenases Human genes 0.000 description 1
- 108090000128 Lipoxygenases Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N Manganese Chemical compound [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 102000004960 NAD(P)H dehydrogenase (quinone) Human genes 0.000 description 1
- 108020000284 NAD(P)H dehydrogenase (quinone) Proteins 0.000 description 1
- 102000006746 NADH Dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108010086428 NADH Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- ACFIXJIJDZMPPO-NNYOXOHSSA-N NADPH Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 ACFIXJIJDZMPPO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- 108010045510 NADPH-Ferrihemoprotein Reductase Proteins 0.000 description 1
- 102100023897 NADPH-cytochrome P450 reductase Human genes 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000237502 Ostreidae Species 0.000 description 1
- 208000032236 Predisposition to disease Diseases 0.000 description 1
- 235000019484 Rapeseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 1
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 125000000218 acetic acid group Chemical group C(C)(=O)* 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 239000000679 carrageenan Substances 0.000 description 1
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 description 1
- 229940113118 carrageenan Drugs 0.000 description 1
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000009134 cell regulation Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004756 chromatid Anatomy 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 230000002559 cytogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 239000001064 degrader Substances 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 1
- 239000011554 ferrofluid Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008303 genetic mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000007614 genetic variation Effects 0.000 description 1
- 230000008794 genotoxic response Effects 0.000 description 1
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- NAQMVNRVTILPCV-UHFFFAOYSA-N hexane-1,6-diamine Chemical compound NCCCCCCN NAQMVNRVTILPCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000008611 intercellular interaction Effects 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011572 manganese Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 230000036438 mutation frequency Effects 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 230000004783 oxidative metabolism Effects 0.000 description 1
- 235000020636 oyster Nutrition 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000003617 peroxidasic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002974 pharmacogenomic effect Effects 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002861 polymer material Substances 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 125000001501 propionyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- RUOJZAUFBMNUDX-UHFFFAOYSA-N propylene carbonate Chemical compound CC1COC(=O)O1 RUOJZAUFBMNUDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 229920002545 silicone oil Polymers 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- HXJUTPCZVOIRIF-UHFFFAOYSA-N sulfolane Chemical compound O=S1(=O)CCCC1 HXJUTPCZVOIRIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
- UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L zinc;1-(5-cyanopyridin-2-yl)-3-[(1s,2s)-2-(6-fluoro-2-hydroxy-3-propanoylphenyl)cyclopropyl]urea;diacetate Chemical compound [Zn+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CCC(=O)C1=CC=C(F)C([C@H]2[C@H](C2)NC(=O)NC=2N=CC(=CC=2)C#N)=C1O UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L 0.000 description 1
- 229910000859 α-Fe Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/54326—Magnetic particles
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/02—Separating microorganisms from their culture media
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/24—Methods of sampling, or inoculating or spreading a sample; Methods of physically isolating an intact microorganisms
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Pathology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Hematology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte ved diagnostisering in vitro av sykdomstilstander eller predisponering for sykdommer hos dyr, inkl. mennesker, samt diagnostisk middel for gjennomføring av fremgangsmåten.
Ved å analysere visse parametere i celler fra syke dyr inkl. mennesker, eller fra mennesker eller dyr som er predisponerte for visse sykdommer, kan man diagnostisere sykdommen og endog bestemme hvor alvorlig den er, hvorved en egnet behandling kan igangsettes.
Fra begynnelsen kunne bare visse parametere bestemmes på ikke-levende celler som var isolert fra sitt opprinnelige miljø. Fra disse parametere forsøkte man siden å trekke be-stemte slutninger vedrørende sykdommens art og hvor alvorlig den var, men dette var forbundet med stor usikkerhet. Man kan nemlig ikke med sikkerhet vite at det som gjelder for en død celle også gjelder for den levende cellen i mennesker eller dyr.
Med tilveiebringelsen av senere tids metoder for inkubasjon
av levende celler har man fått nye muligheter for å analysere celleaktiviteter i normalt cellemiljø. For å kunne gjennomføre slike analyser må imidlertid celler av en bestemt type isoleres fra celleblandinger i forskjellige dyrkningsmedier. Celle-sammensetningen kan bestemmes ved hjelp av mikroskopering eller med kompliserte og kostbare instrumenter (f.eks. FACS, dvs. "fluorescéin activated cell sorter". For å analysere forskjellige funksjoner i cellene er det nødvendig først å separere de forskjellige celletypene fra hverandre. Herved unngås reaksjon mellom forskjellige celletyper, dvs. at nærværet av en celletype påvirker funksjonen av andre celletyper .
De hittil kjente separeringsmetodene innbefatter separering
i flere trinn, hvorved ca. 10-20% av cellene går tapt i hvert trinn.
Disse kjente metoder krever ofte anvendelse av kostbar apparatur av typen FACS-cellesorterere og stor manuell laboratoriedyktighet hos personalet for at man skal oppnå reproduserbarhet.
Ved hjelp av. foreliggende oppfinnelse tilveiebringes en ny metode for hurtig og sikker separering av levende celler av en viss type fra en cellekultur eller blod. Metoden krever ingen kostbar apparatur, og kan lett utføres i stor målestokk med stor reproduserbarhet av personalet uten altfor store krav til laboratoriedyktighet.
Oppfinnelsen omfatter således en fremgangsmåte ved diagnostisering in vitro av sykdomstilstander eller av predisponering for visse sykdommer hos dyr inkl. mennesker, hvilken fremgangsmåte er kjennetegnet ved at en suspensjon av levedyktige celler fra dyr bringes i kontakt med magnetiske sfærer, hvilke sfærer derved absorberes på celleveggene eller inkorporeres i cellene, og at de således magnetiserte viable cellene separeres fra suspensjonen ved anbringelse av et ytre magnetfelt, hvoretter de viable cellene anvendes for analyse i av celleparametere, slik som DNA-reparerende evne og/eller enzymaktivitet og/eller immunologisk reaktivitet.
Oppfinnelsen omfatter også et diagnostisk middel for diagnotisering in vitro av sykdomstilstander eller predisponering for visse sykdommer hos dyr inkl. mennesker, hvilket middel er kjennetegnet ved at det utgjøres av magnetiske sfærer omfattende magnetiske partikler som er innesluttet i en polymer matrise.
Magnetiske sfærer er fortrinnsvis mikro- eller nanosfærer
eller -partikler hvis middeldiameter ligger i mikro- eller nanometerområdet, og som kan påvirkes av magnetfelt.
Magnetiske materialer som er egnet for anvendelse i nanosfærene, er beskrevet og generelt tilgjengelige, f.eks. Fe■- i .0 4, Ni-NiO, Ni-TiO^, Mn-Zn, ferritt, Ni osv. Fortrinnsvis anvendes magnetitt
(Fe^O^) p.g.a. at det er lett tilgjengelig og ikke oksyderes i vannholdig miljø. |
Det magnetiske materialet innesluttes i et polymermateriale, f.eks. akrylderivater, agarose, proteiner, kopolymerer mellom akryl og agarose, stivelse og cellulose.
Hensiktsmessig anvendes det en karbohydratpolymer som matrise ettersom det fra dette materialet er lett å fremstille sfærer i det ønskede størrelsesintervallet. Eksempler på egnede karbohydratpolymerer er dekstran, pullullan, glykogen, stivelse, cellulose, agarose, algenat, chitosan eller kara-genan. Dekstran, cellulose og agarose foretrekkes ettersom de er biokjemisk velkarakteriserte og inerte i de fleste bio-logiske systemer. Karbohydratpolymeren kan også modifiseres med f.eks. acetyl-, hydroksypropyl-, propionyl-, hydroksyetyl-, hydroksypropanoylgrupper, forskjellige derivater av akryl-syre eller lignende.
Magnetiske sfærer med en middeldiameter i intervallet 50-900 nanometer kan fremstilles f.eks. ved en metode som er beskrevet i svensk patentsøknad nr. 8201972-0. Ved denne metoden opp-løses en karbohydratpolymer i et oppløsningsmiddel med høy dielektrisitetskonstant til en konsentrasjon som normalt ligger i området 0,1-150% (vekt/volum). Anvendbare oppløsnings-midler er bl.a. dimetylformamid, etylenglykol, sulfolan, dimetylsulfoksyd, propylenkarbonat, vann og formamid eller blandinger derav. Det magnetiske materialet suspenderes i den oppløste karbohydratpolymeren. Det magnetiske materialet består f.eks. av magnetitt (Fe204) med en størrelse på 10-20 nm.
En fremgangsmåte for fremstilling av så små magnetittpartikler er kjent, og disse er kommersielt tilgjengelige via Ferrofluid Corporation, USA. Andre anvendbare magnetiske materialer innbefatter partikler eller kolloider med hovedsakelig innhold av aluminium, nikkel, kobolt, kobber, sølv, mangan eller platina.
Den således oppnådde suspensjon av magnetisk materiale i den oppløste karbohydratpolymeren emulgeres deretter i et emulsjonssystem bestående av nevnte magnetsuspensjon og et et emulsjonsmedium bestående av en væske som er ikke-blandbar med nevnte magnetsuspensjon og hvis ytterligere egenskaper er at den medvirker ved dannelsen av små dråper av magnet-suspens jon i emulsjonsmediet.
Som eksempel på anvendbare emulsjonsmedier kan nevnes vegeta-bilske oljer, fortrinnsvis raps eller maisolje. Andre anvendbare hydrofobe emulsjonsmedier innbefatter parafinoljer eller silikonoljer. En annen type av emulsjonsmedium innbefatter organiske oppløsningsmidler hvori det er oppløst en eller flere emulgeringsmidler. Anvendbare slike organiske oppløsnings-midler omfatter bl.a. xylen, toluen, etylbenzen, dietylbenzen, propylbenzen, etylenklorid og andre lignende oppløsningsmidler samt blandinger derav.
For å emulgere emulsjonen benyttes sonikator eller høytrykks-homogenisator. Den oppnådde emulsjon hvor karbohydratmagnetitt-suspensjonen er emulgert i form av dråper, stabiliseres ved at den overføres til en væske som kan krystallisere karbohydratpolymeren, hvorved det magnetiske materiale innesluttes i polymeren. Anvendbare slike væsker er etanol, metanol og aceton. Fortrinnsvis benyttes aceton. Etter krystallisasjon vaskes nanosfærene ytterligere med aceton. Tørking-kan deretter skje på enkel måte ved rotasjonsinndamping eller lufttørking.
For å lette adsorpsjonen av de magnetiske sfærene på celle-vegger kan det i visse tilfeller være nødvendig å benytte et aktiverende stoff, en såkalt aktivator. Denne kobles først til den magnetiske sfæren og bindes (fortrinnsvis via kovalent binding) deretter til celleveggen. Eksempel på en slik aktivator er tresylklorid.
Vurdering av individuelle risikoer med genotoksisk eksponering er avhengig av isolering av levedyktige cellepopulasjoner fra f.eks. blod, benmarg, hud og maligne eller benigne tumor-vevnader. Man oppnår meget store fordeler med å utføre genotoksiske risikobestemmelser på snevert definerte cellepopulasjoner hvorved effekten av forskyvninger i total-populasjonens sammensetning klart kan skilles fra forskjellig-heter i egenskaper hos en bestemt cellesubpopulasjon.
Den individuelle risikoen for å rammes av visse sykdommer kan reguleres ved hjelp av genetiske faktorer eller miljøfaktorer.
For å uttrykke begge disse faktorer er man avhengig av å kunne foreta kvantitative bestemmelser på viable celler ettersom fysiologiske prosesser kan regulere enten (a) den metaboliske aktivering og nedbrytning av karsinogene/mutagene stoffer, (b) ansamlinger av forløpere, kofaktorer eller endogene kosubstrater, eller
(c) målet på den DNA-skade som har inntruffet.
(1) Genetiske faktorer
Genetisk kontroll av individuelle variasjoner i respons på toksiske miljøeksponeringer er definert som ekogenetikk (Vogel, F., Buselmaier, W., Reichert, W., Kellermann, G., Berg, P. (eds) Human genetic variation in response to medical and environmental agents: Pharmacogenetics and ecogenetics. Human GeneticSuppl. 1:1-192 (1978)). Eksempler på ekogene-tiske faktorer som kan regulere risikoen for genotoksiske eksponeringer, er følgende:
(a) Mikrosomale oksygenaser med blandet funksjon
De fleste karsinogene/mutagene stoffer krever oksydativ meta-bolisme via dannelser av DNA-skadende epoksyder før de blir aktive som karsinocrene/mutaaene stoffer. Således deltar mengdene av enzym og kofaktorer, slik som NADPH, i regulerin-gen av hvor stor DNA-skade som kan induseres. Ettersom mikrosomale enzymer er innesluttet i visse avdelinger i cellen der de er membranbundne, er det av stor betydning å gjennom-føre slike bestemmelser på viable celler for å gjøre individuelle risikovurderinger basert på genetiske mekanismer for predisponering.
(b) Legemid delmetaboliserte enzymer
Når først potensielle DNA-skadende epoksyder er dannet, kan det inaktiveres til ikke-DNA-skadende metabolitter ved epoksydhydrolase og glutationtransferase. Således regulerer mengden av disse enzymer i forhold til hverandre og i forhold til innholdet av mikrosomal.oksygenase med blandet funksjon så vel som kofaktor-konsentrasjoner, slik som glutation,
den intracellulære balanse mellom DNA-skadende mellomprodukter. Som et resultat av dette kan denne intracellulære balansen kontrolleres genetisk, og på ny understrekes betydningen av anvendelse av viable celler for vurdering av den humane risikoen. Andre legemiddelmetaboliserende enzymer som kan være av betydning i dette henseende og hvilke kan påvises i blodceller, er NADPH cytokrom P-450 reduktase, NADH cytokrom C reduktase og DT diaforase.
(c) DNA- reparerende enzymer
Det finnes eksempler på at individer kan lide av mangel på evne til reparere DNA-skader. Mangler av denne type kan lede til en genetisk predisposisjon for kreft. Ettersom det hittil ikke har vært mulig å rense eventuelle DNA-reparerende enzymer fra humane kilder, og ettersom det foreligger en sterk gjen-sidig avhengighet mellom de forskjellige DNA-reparerende enzymatiske aktivitetene, (dvs. aktivitetene til endo-nuklease, eksonuklease, polymerase og ligase) har analyse- metoden hittil blitt gjennomført mer indirekte. Ikke-planlagt DNA-syntese (UDS = Unscheduled DNA synthesis), DNA-strengavbrudd, fjerning av karsinogene stoffer, ADP-ribosyl-transferaseaktivitet, mutasjonsfrekvensanalyser, mikro-kjerneproduksjon, kromosomdefekter,øøsterkromatidutbytter og andre cytogeniske parametre er avhengig av nukleotide-for-løpere og de enzymer som produserer eller nedbryter dem, nukleotide poolubalanser og kofaktorer slik som Mg og NAD<+>.
Alle disse analysemetodene krever dyrking av viable celler, og noen er avhengig av celledeling. Videre er cellulær regulering av den DNA-reparerende enzymatiske aktiviteten via nukleotidpoolbegrensninger av betydning ved vurdering av den genotoksiske risikoen, og denne type av regulerende faktor kan også analyseres ved dyrking av viable celler.
(2) Miljøfaktorer
Det er nå vel dokumentert at mennesker som yrkesmessig ekspo-neres for et antall forskjellige kjemikalier, utvikler kreft og andre sykdommer. Flere forskjellige tester har blitt utviklet for å vurdere risikofylte miljøeksponeringer. Også
her krever nesten alle disse fremgangsmåter isolering og dyrking av viable celler. Fremgangsmåtene .for vurdering av den individuelle genotoksiske risikoen som er nevnt ovenfor,
har tidligere blitt utviklet med cellesystemer fra dyre-modeller, og data har blitt ekstrapolert til mennesker. Herav følger at avhengigheten av analysemetoder for beregning av risikoen for karsinogene/mutagene stoffers innvirkning på
viable cellepopulasjoner også gjelder for andre pattedyr slik som rotter, mus, hamstere, aper osv.
(a) Yrkesmessige og industrielle eksponeringer
Den vanligste metoden for bedømmelse av om et kjemikalium
er skadelig for helsen, er å eksponere celler in vitro for
testkjemikaliet og vurdere den individuelle genotoksiske responsen. Dette kan man ikke gjøre uten å dyrke viable celler i nærvær av testkjemikaliet. Risikoen in vivo vurderes ofte på lignende måte, men sammenligning mellom in vitro-responser gjøres for individer som ikke er eksponerte in vivo for testkjemikaliet.
(b) Ernæringseffekter
Peroksydative prosesser i cellen kan produsere syreradikaler som skader DNA, og de kan aktivere karsinogene/mutagene midler for DNA-bindende mellomprodukter gjennom ko-
oksydative mekanismer. Den DNA-skade som induseres på disse måter, påvirkes hurtig av tilstedeværelser av antikarsinogene stoffer i den intracellulære kjemikaliepoolen. Antikarsinogene stoffer er ofte radikal-nedbrytere slik som vitamin E, 3-karoten, glutation, askorbinsyre eller urinsyre, og nivåene av disse stoffene i cellene kontrolleres delvis gjennom diett. For å analysere den individuelle risikoen er det således viktig å gjennomføre analysemetoder på viable celler der innflytelsen fra slike faktorer kan betraktes. Lipidnæringstilførsel er også av betydning i denne sammenheng. Menbranfluiditet, lipoksygenase og cyklooksygenase (prostaglandinsyntetase) reguleres enten gjennom fosfolipidbundet eller fri arakidon-syre. Forholdet mellom mettede og umettede ekstracellulære fettsyrer kan i sin tur justere den intracellulære fettsyre-poolen. En anriket intracellulær pool av umettede fettsyrer skulle øke tilfellene for syreradikaldannelse og for ko-oksydativ aktivering av karsinogene/mutagene stoffer. Igjen bør egnede risikovurderinger bare gjennomføres på viable målceller der disse regulatorer av den genotoksiske risikoen kan vurderes.
Videre har det ved analyse av DNA-reparasjonsevne hos viable celler vist seg at:
a) personer med høyt blodtrykk
b) eldre mennesker
c) etenoksydeksponerte personer
d) styreneksponerte personer
e) personer som har en genetisk disposisjon for colonkreft
f) personer som har eller har hatt colonkreft
alle har oppvist en dårligere evne til å kunne reparere sitt
DNA etter at cellene i løpet av kort tid har blitt eksponert for et karsinogent stoff.
På samme måte har det vist seg at aktiviteten for et annet enzym (ATP-ribose-transferase) i celler fra pasienter med leukemi har direkte sammenheng med sykdommens malignitetsgrad. Med andre ord kan man med denne analyse direkte avgjøre om pasienten vil kunne helbredes eller ikke.
Ytterligere et område der muligheten til å foreta en analyse på viable celler er av stor betydning, er ved analyse av immunologisk reaktivitet. Funksjonen til forskjellige typer av hvite blodlegemer forverres ofte av at sammensetningen til de testede cellepopulasjonene varierer, av at funksjons-testene er sterkt avhengig av celleantallet, av at forskjellige celletyper påvirker hverandre, dvs. at tilstedeværelsen av en viss celletype påvirker funksjonen til andre
.celletyper. Eksempler på denne tillemping er følgende.
1: Tilstedeværelsen av T-suppressorlymfocytter kan gjøre det umulig å påvise en eventuell eksisterende T-helper-aktivitet respektivt T-cytotoksisitetsaktivitet. Omvendt kan måling av T-suppressorfunskjonen umuliggjøres av samtidig tilstedeværelse av varierende mengde effektorceller.
2: Analyse av cytotoksisk effekt av cytolytiske T-celler kan bli umulig dersom NK-celler samtidig finnes til stede. Omvendt kan NK-cellers aktivitet sikrere bedømmes dersom
T-lymfocytter ikke samtidig er til stede.
Samtidig separering av flere cellesubpopulasjoner muliggjør analyse av celle-celleinteraksjon, f.eks. inhibering av forskjellige T- og B-cellefunksjoner av tilmålt tilblanding av T-suppresorceller. Et annet eksempel er kontrollert tilblanding av monocytter av en viss type til lymfocytter for korrekt bedømmelse av lymfocyttenes reaktivitet, f.eks. proliferativt T-cellesvar på eksponering for antigen som ikke finner sted i fravær av monocytter.
Disse typer av analyse er spesielt vesentlige hos kraft-pasienter, hos pasienter som mottar organtransplantat, hos pasienter med autoimmune sykdommer, samt hos individer med ervervede immundefekter (AIDS) eller medfødte sådanne.
Tilsvarende analyse av inflammatoriske celler som finnes i tumorvevnad, er analog med ovenstående analyse, men komplise-res av samtidig tilstedeværelse av et stort antall tumorceller med varierende egenskaper. Disse tumorceller må i første rekke separeres fra de inflammatoriske cellene, hvilket kan skje gjennom tilgang til monoklonale antistoffer rettet mot forskjellige tumormarkører. Det er også av betydning å kunne studere rensede tumorcellesuspensjoner, m.a.o. forskjellige celleparametere. Analoge forhold gjelder også vev med pågående autoimmunprosess der inflammatoriske celler må adskilles fra fibroblaster og endotel og epiteliale vevceller.
Oppfinnelsen belyses nærmere i nedenstående eksempel.
E ksempel
60 mg tresylaktiverte magnetiske sfærer anvendes for kobling
av 1 mg protein A, hvoretter magnetsfærene stabiliseres med 1,6-diaminoheksan og etylendiamin. Til disse protein A-sfærer
adsorberes deretter antihumant IgG. ' Etter grundig vasking av ikke-bundet ligand inkuberes disse magnetsfærer med 53 millioner mononukleære humane celler fra perifert blod i 4 ml PBS i en time ved +4°C.
Etter magnetisk separering oppnås 8 millioner celler som er adsorbert og separert fra celleblandingen.
På disse "magnetiske celler" ble det deretter utført en bestemmelse av DNA-reparasjonsevne (UDS) ifølge standardi-sert teknikk med følgende resultater.
4 millioner celler pr. kultur.
Denne verdi på UDS kan anses isom helt normal, hvilket viser at den magnetiske separeringen og det faktum at cellene er dekket av magnetiske partikler, ikke påvirker analyse-resultatene .
Claims (2)
1. Fremgangsmåte ved diagnostisering in vitro av sykdomstilstander eller av predisponering for visse sykdommer hos dyr, inkl. mennesker, karakterisert ved at en suspensjon av viable celler fra dyr bringes i kontakt med magnetiske sfærer, hvilke sfærer derved adsorberes på celleveggene eller inkorporeres i cellene, og ved at de således magnetiserte viable celler separeres fra suspensjonen ved anbringelse av et ytre magnetfelt, hvoretter dé -viable cellene anvendes for analyse av celleparametere, slik som DNA-reparasjonsevne og/eller enzymaktivitet og/eller immunologisk reaktivitet.
2. Diagnostisk middel for anvendelse ved diagnostisering in vitro av sykdomstilstander eller predisponering for visse sykdommer hos dyr, inkl. mennesker, karakterisert ved at det utgjøres av magnetiske sfærer omfattende magnetiske partikler innesluttet i en polymer matrise.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SE8401125A SE8401125L (sv) | 1984-03-01 | 1984-03-01 | Sett vid diagnostisering in vitro och diagnostiskt medel |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO850785L true NO850785L (no) | 1985-09-02 |
Family
ID=20354951
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO850785A NO850785L (no) | 1984-03-01 | 1985-02-27 | Fremgangsmaate ved diagnostisering in vitro og diagnostisk middel |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0162819A1 (no) |
JP (1) | JPS60210766A (no) |
AU (1) | AU3916985A (no) |
DK (1) | DK75885A (no) |
FI (1) | FI850644L (no) |
NO (1) | NO850785L (no) |
NZ (1) | NZ211230A (no) |
SE (1) | SE8401125L (no) |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0230768B1 (en) * | 1985-12-20 | 1992-03-18 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Particle separation method |
US5076950A (en) * | 1985-12-20 | 1991-12-31 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Magnetic composition for particle separation |
US6013531A (en) * | 1987-10-26 | 2000-01-11 | Dade International Inc. | Method to use fluorescent magnetic polymer particles as markers in an immunoassay |
US5087570A (en) * | 1988-05-10 | 1992-02-11 | Weissman Irving L | Homogeneous mammalian hematopoietic stem cell composition |
US5523231A (en) * | 1990-02-13 | 1996-06-04 | Amersham International Plc | Method to isolate macromolecules using magnetically attractable beads which do not specifically bind the macromolecules |
GB9003253D0 (en) * | 1990-02-13 | 1990-04-11 | Amersham Int Plc | Precipitating polymers |
FR2695939B1 (fr) * | 1992-09-24 | 1995-03-03 | Prolabo Sa | Cellules transformées, humaines, animales ou végétales encapsulant dans leurs cytoplasmes au moins une particule de latex. |
WO2004111264A1 (en) * | 2003-06-13 | 2004-12-23 | University Technologies International Inc. | Bacterial biofilm assay employing magnetic beads |
WO2007070381A2 (en) | 2005-12-09 | 2007-06-21 | Promega Corporation | Nucleic acid purification with a binding matrix |
ES2319018B1 (es) * | 2006-12-27 | 2010-02-10 | Universidad De Zaragoza | Metodo para separacion y deteccion de protozoarios. |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3970518A (en) * | 1975-07-01 | 1976-07-20 | General Electric Company | Magnetic separation of biological particles |
US4230685A (en) * | 1979-02-28 | 1980-10-28 | Northwestern University | Method of magnetic separation of cells and the like, and microspheres for use therein |
SE456164B (sv) * | 1980-08-20 | 1988-09-12 | Kjell Nilsson | Forfarande for immobilisering, odling och efterfoljande frigoring av animala celler samt mikroberare av gelatin med absorberade animala celler |
SE8201972L (sv) * | 1982-03-29 | 1983-09-30 | Gambro Lundia Ab | Magnetiskt paverkbara kristalliserade kolhydrat sferer eller partiklar att anvendas tillsammans med bioadsorberande material |
-
1984
- 1984-03-01 SE SE8401125A patent/SE8401125L/ not_active Application Discontinuation
-
1985
- 1985-02-06 EP EP85850042A patent/EP0162819A1/en not_active Withdrawn
- 1985-02-15 FI FI850644A patent/FI850644L/fi not_active Application Discontinuation
- 1985-02-19 DK DK75885A patent/DK75885A/da not_active Application Discontinuation
- 1985-02-26 AU AU39169/85A patent/AU3916985A/en not_active Abandoned
- 1985-02-26 NZ NZ21123085A patent/NZ211230A/xx unknown
- 1985-02-27 NO NO850785A patent/NO850785L/no unknown
- 1985-02-28 JP JP4028585A patent/JPS60210766A/ja active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP0162819A1 (en) | 1985-11-27 |
SE8401125L (sv) | 1985-09-02 |
FI850644L (fi) | 1985-09-02 |
NZ211230A (en) | 1988-11-29 |
AU3916985A (en) | 1985-09-05 |
DK75885A (da) | 1985-09-02 |
SE8401125D0 (sv) | 1984-03-01 |
DK75885D0 (da) | 1985-02-19 |
FI850644A0 (fi) | 1985-02-15 |
JPS60210766A (ja) | 1985-10-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Arrigucci et al. | FISH-Flow, a protocol for the concurrent detection of mRNA and protein in single cells using fluorescence in situ hybridization and flow cytometry | |
Forehand et al. | Lipopolysaccharide priming of human neutrophils for an enhanced respiratory burst. Role of intracellular free calcium. | |
EP1725873B1 (en) | Pharmacodynamic assays using flow cytometry. | |
US5225332A (en) | Process for manipulation of non-aqueous surrounded microdroplets | |
Novikoff et al. | Mitochondrial localization of oxidative enzymes: staining results with two tetrazolium salts | |
JP4151986B2 (ja) | リンパ球機能の測定方法 | |
Sewell et al. | Determination of intracellular cytokines by flow-cytometry following whole-blood culture | |
Bao et al. | Recent advances in electric analysis of cells in microfluidic systems | |
WO1989010566A1 (en) | Process for forming and using microdroplets | |
NO850785L (no) | Fremgangsmaate ved diagnostisering in vitro og diagnostisk middel | |
KR20230061565A (ko) | 세포 레비테이션 및 모니터링을 위한 시스템 및 방법 | |
Chittur et al. | Shear stress effects on human T cell function | |
Barteneva et al. | Mitochondrial staining allows robust elimination of apoptotic and damaged cells during cell sorting | |
Bonavida et al. | The single-cell assay in cell-mediated cytotoxicity | |
Donaubauer et al. | Analysis of the immune status from peripheral whole blood with a single-tube multicolor flow cytometry assay | |
Linnemann et al. | Bio-impedance measurement allows displaying the early stages of neutrophil extracellular traps | |
Dimitrova et al. | Comparison of two methods for the diagnosis of chronic granulomatous disease-neutrophil oxidative burst measured by the nitroblue tetrazolium slide test versus the dihydrorhodamine 123 flow cytometric assay | |
Perez et al. | Multiparameter analysis of intracellular phosphoepitopes in immunophenotyped cell populations by flow cytometry | |
Bilitewski | Determination of immunomodulatory effects: focus on functional analysis of phagocytes as representatives of the innate immune system | |
Hedley et al. | Cytometry of intracellular signaling: from laboratory bench to clinical application | |
DE69032663T2 (de) | Enzymtest und testsatz zur messung zellulärer aktivierung | |
Erfle et al. | Lysosomal enzyme release from human neutrophils adherent to foreign material surfaces: Enhanced release of elastase activity | |
Girasole et al. | Correlating nanoscale motion and ATP production in healthy and favism erythrocytes: a real-time nanomotion sensor study | |
Zhang et al. | In situ genetically targeted chemical assembly of polymers on living neuronal membranes | |
Oleksiivna et al. | ALLERGIC REACTIONS AS A SELECTIVE RESPONSE OF THE HUMAN IMMUNE SYSTEM TO THE INFLUENCE OF CHEMICALS |