NO850785L - Fremgangsmaate ved diagnostisering in vitro og diagnostisk middel - Google Patents

Fremgangsmaate ved diagnostisering in vitro og diagnostisk middel

Info

Publication number
NO850785L
NO850785L NO850785A NO850785A NO850785L NO 850785 L NO850785 L NO 850785L NO 850785 A NO850785 A NO 850785A NO 850785 A NO850785 A NO 850785A NO 850785 L NO850785 L NO 850785L
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
cells
cell
magnetic
spheres
animals
Prior art date
Application number
NO850785A
Other languages
English (en)
Inventor
Ulf Schroeder
Hans-Olof Sjoegren
Ronald Pero
Daniel G Miller
Original Assignee
Ulf Schroeder
Sjoegren Hans Olof
Ronald Pero
Daniel G Miller
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ulf Schroeder, Sjoegren Hans Olof, Ronald Pero, Daniel G Miller filed Critical Ulf Schroeder
Publication of NO850785L publication Critical patent/NO850785L/no

Links

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54313Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
    • G01N33/54326Magnetic particles
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/02Separating microorganisms from their culture media
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/24Methods of sampling, or inoculating or spreading a sample; Methods of physically isolating an intact microorganisms

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte ved diagnostisering in vitro av sykdomstilstander eller predisponering for sykdommer hos dyr, inkl. mennesker, samt diagnostisk middel for gjennomføring av fremgangsmåten.
Ved å analysere visse parametere i celler fra syke dyr inkl. mennesker, eller fra mennesker eller dyr som er predisponerte for visse sykdommer, kan man diagnostisere sykdommen og endog bestemme hvor alvorlig den er, hvorved en egnet behandling kan igangsettes.
Fra begynnelsen kunne bare visse parametere bestemmes på ikke-levende celler som var isolert fra sitt opprinnelige miljø. Fra disse parametere forsøkte man siden å trekke be-stemte slutninger vedrørende sykdommens art og hvor alvorlig den var, men dette var forbundet med stor usikkerhet. Man kan nemlig ikke med sikkerhet vite at det som gjelder for en død celle også gjelder for den levende cellen i mennesker eller dyr.
Med tilveiebringelsen av senere tids metoder for inkubasjon
av levende celler har man fått nye muligheter for å analysere celleaktiviteter i normalt cellemiljø. For å kunne gjennomføre slike analyser må imidlertid celler av en bestemt type isoleres fra celleblandinger i forskjellige dyrkningsmedier. Celle-sammensetningen kan bestemmes ved hjelp av mikroskopering eller med kompliserte og kostbare instrumenter (f.eks. FACS, dvs. "fluorescéin activated cell sorter". For å analysere forskjellige funksjoner i cellene er det nødvendig først å separere de forskjellige celletypene fra hverandre. Herved unngås reaksjon mellom forskjellige celletyper, dvs. at nærværet av en celletype påvirker funksjonen av andre celletyper .
De hittil kjente separeringsmetodene innbefatter separering
i flere trinn, hvorved ca. 10-20% av cellene går tapt i hvert trinn.
Disse kjente metoder krever ofte anvendelse av kostbar apparatur av typen FACS-cellesorterere og stor manuell laboratoriedyktighet hos personalet for at man skal oppnå reproduserbarhet.
Ved hjelp av. foreliggende oppfinnelse tilveiebringes en ny metode for hurtig og sikker separering av levende celler av en viss type fra en cellekultur eller blod. Metoden krever ingen kostbar apparatur, og kan lett utføres i stor målestokk med stor reproduserbarhet av personalet uten altfor store krav til laboratoriedyktighet.
Oppfinnelsen omfatter således en fremgangsmåte ved diagnostisering in vitro av sykdomstilstander eller av predisponering for visse sykdommer hos dyr inkl. mennesker, hvilken fremgangsmåte er kjennetegnet ved at en suspensjon av levedyktige celler fra dyr bringes i kontakt med magnetiske sfærer, hvilke sfærer derved absorberes på celleveggene eller inkorporeres i cellene, og at de således magnetiserte viable cellene separeres fra suspensjonen ved anbringelse av et ytre magnetfelt, hvoretter de viable cellene anvendes for analyse i av celleparametere, slik som DNA-reparerende evne og/eller enzymaktivitet og/eller immunologisk reaktivitet.
Oppfinnelsen omfatter også et diagnostisk middel for diagnotisering in vitro av sykdomstilstander eller predisponering for visse sykdommer hos dyr inkl. mennesker, hvilket middel er kjennetegnet ved at det utgjøres av magnetiske sfærer omfattende magnetiske partikler som er innesluttet i en polymer matrise.
Magnetiske sfærer er fortrinnsvis mikro- eller nanosfærer
eller -partikler hvis middeldiameter ligger i mikro- eller nanometerområdet, og som kan påvirkes av magnetfelt.
Magnetiske materialer som er egnet for anvendelse i nanosfærene, er beskrevet og generelt tilgjengelige, f.eks. Fe■- i .0 4, Ni-NiO, Ni-TiO^, Mn-Zn, ferritt, Ni osv. Fortrinnsvis anvendes magnetitt
(Fe^O^) p.g.a. at det er lett tilgjengelig og ikke oksyderes i vannholdig miljø. |
Det magnetiske materialet innesluttes i et polymermateriale, f.eks. akrylderivater, agarose, proteiner, kopolymerer mellom akryl og agarose, stivelse og cellulose.
Hensiktsmessig anvendes det en karbohydratpolymer som matrise ettersom det fra dette materialet er lett å fremstille sfærer i det ønskede størrelsesintervallet. Eksempler på egnede karbohydratpolymerer er dekstran, pullullan, glykogen, stivelse, cellulose, agarose, algenat, chitosan eller kara-genan. Dekstran, cellulose og agarose foretrekkes ettersom de er biokjemisk velkarakteriserte og inerte i de fleste bio-logiske systemer. Karbohydratpolymeren kan også modifiseres med f.eks. acetyl-, hydroksypropyl-, propionyl-, hydroksyetyl-, hydroksypropanoylgrupper, forskjellige derivater av akryl-syre eller lignende.
Magnetiske sfærer med en middeldiameter i intervallet 50-900 nanometer kan fremstilles f.eks. ved en metode som er beskrevet i svensk patentsøknad nr. 8201972-0. Ved denne metoden opp-løses en karbohydratpolymer i et oppløsningsmiddel med høy dielektrisitetskonstant til en konsentrasjon som normalt ligger i området 0,1-150% (vekt/volum). Anvendbare oppløsnings-midler er bl.a. dimetylformamid, etylenglykol, sulfolan, dimetylsulfoksyd, propylenkarbonat, vann og formamid eller blandinger derav. Det magnetiske materialet suspenderes i den oppløste karbohydratpolymeren. Det magnetiske materialet består f.eks. av magnetitt (Fe204) med en størrelse på 10-20 nm.
En fremgangsmåte for fremstilling av så små magnetittpartikler er kjent, og disse er kommersielt tilgjengelige via Ferrofluid Corporation, USA. Andre anvendbare magnetiske materialer innbefatter partikler eller kolloider med hovedsakelig innhold av aluminium, nikkel, kobolt, kobber, sølv, mangan eller platina.
Den således oppnådde suspensjon av magnetisk materiale i den oppløste karbohydratpolymeren emulgeres deretter i et emulsjonssystem bestående av nevnte magnetsuspensjon og et et emulsjonsmedium bestående av en væske som er ikke-blandbar med nevnte magnetsuspensjon og hvis ytterligere egenskaper er at den medvirker ved dannelsen av små dråper av magnet-suspens jon i emulsjonsmediet.
Som eksempel på anvendbare emulsjonsmedier kan nevnes vegeta-bilske oljer, fortrinnsvis raps eller maisolje. Andre anvendbare hydrofobe emulsjonsmedier innbefatter parafinoljer eller silikonoljer. En annen type av emulsjonsmedium innbefatter organiske oppløsningsmidler hvori det er oppløst en eller flere emulgeringsmidler. Anvendbare slike organiske oppløsnings-midler omfatter bl.a. xylen, toluen, etylbenzen, dietylbenzen, propylbenzen, etylenklorid og andre lignende oppløsningsmidler samt blandinger derav.
For å emulgere emulsjonen benyttes sonikator eller høytrykks-homogenisator. Den oppnådde emulsjon hvor karbohydratmagnetitt-suspensjonen er emulgert i form av dråper, stabiliseres ved at den overføres til en væske som kan krystallisere karbohydratpolymeren, hvorved det magnetiske materiale innesluttes i polymeren. Anvendbare slike væsker er etanol, metanol og aceton. Fortrinnsvis benyttes aceton. Etter krystallisasjon vaskes nanosfærene ytterligere med aceton. Tørking-kan deretter skje på enkel måte ved rotasjonsinndamping eller lufttørking.
For å lette adsorpsjonen av de magnetiske sfærene på celle-vegger kan det i visse tilfeller være nødvendig å benytte et aktiverende stoff, en såkalt aktivator. Denne kobles først til den magnetiske sfæren og bindes (fortrinnsvis via kovalent binding) deretter til celleveggen. Eksempel på en slik aktivator er tresylklorid.
Vurdering av individuelle risikoer med genotoksisk eksponering er avhengig av isolering av levedyktige cellepopulasjoner fra f.eks. blod, benmarg, hud og maligne eller benigne tumor-vevnader. Man oppnår meget store fordeler med å utføre genotoksiske risikobestemmelser på snevert definerte cellepopulasjoner hvorved effekten av forskyvninger i total-populasjonens sammensetning klart kan skilles fra forskjellig-heter i egenskaper hos en bestemt cellesubpopulasjon.
Den individuelle risikoen for å rammes av visse sykdommer kan reguleres ved hjelp av genetiske faktorer eller miljøfaktorer.
For å uttrykke begge disse faktorer er man avhengig av å kunne foreta kvantitative bestemmelser på viable celler ettersom fysiologiske prosesser kan regulere enten (a) den metaboliske aktivering og nedbrytning av karsinogene/mutagene stoffer, (b) ansamlinger av forløpere, kofaktorer eller endogene kosubstrater, eller
(c) målet på den DNA-skade som har inntruffet.
(1) Genetiske faktorer
Genetisk kontroll av individuelle variasjoner i respons på toksiske miljøeksponeringer er definert som ekogenetikk (Vogel, F., Buselmaier, W., Reichert, W., Kellermann, G., Berg, P. (eds) Human genetic variation in response to medical and environmental agents: Pharmacogenetics and ecogenetics. Human GeneticSuppl. 1:1-192 (1978)). Eksempler på ekogene-tiske faktorer som kan regulere risikoen for genotoksiske eksponeringer, er følgende:
(a) Mikrosomale oksygenaser med blandet funksjon
De fleste karsinogene/mutagene stoffer krever oksydativ meta-bolisme via dannelser av DNA-skadende epoksyder før de blir aktive som karsinocrene/mutaaene stoffer. Således deltar mengdene av enzym og kofaktorer, slik som NADPH, i regulerin-gen av hvor stor DNA-skade som kan induseres. Ettersom mikrosomale enzymer er innesluttet i visse avdelinger i cellen der de er membranbundne, er det av stor betydning å gjennom-føre slike bestemmelser på viable celler for å gjøre individuelle risikovurderinger basert på genetiske mekanismer for predisponering.
(b) Legemid delmetaboliserte enzymer
Når først potensielle DNA-skadende epoksyder er dannet, kan det inaktiveres til ikke-DNA-skadende metabolitter ved epoksydhydrolase og glutationtransferase. Således regulerer mengden av disse enzymer i forhold til hverandre og i forhold til innholdet av mikrosomal.oksygenase med blandet funksjon så vel som kofaktor-konsentrasjoner, slik som glutation,
den intracellulære balanse mellom DNA-skadende mellomprodukter. Som et resultat av dette kan denne intracellulære balansen kontrolleres genetisk, og på ny understrekes betydningen av anvendelse av viable celler for vurdering av den humane risikoen. Andre legemiddelmetaboliserende enzymer som kan være av betydning i dette henseende og hvilke kan påvises i blodceller, er NADPH cytokrom P-450 reduktase, NADH cytokrom C reduktase og DT diaforase.
(c) DNA- reparerende enzymer
Det finnes eksempler på at individer kan lide av mangel på evne til reparere DNA-skader. Mangler av denne type kan lede til en genetisk predisposisjon for kreft. Ettersom det hittil ikke har vært mulig å rense eventuelle DNA-reparerende enzymer fra humane kilder, og ettersom det foreligger en sterk gjen-sidig avhengighet mellom de forskjellige DNA-reparerende enzymatiske aktivitetene, (dvs. aktivitetene til endo-nuklease, eksonuklease, polymerase og ligase) har analyse- metoden hittil blitt gjennomført mer indirekte. Ikke-planlagt DNA-syntese (UDS = Unscheduled DNA synthesis), DNA-strengavbrudd, fjerning av karsinogene stoffer, ADP-ribosyl-transferaseaktivitet, mutasjonsfrekvensanalyser, mikro-kjerneproduksjon, kromosomdefekter,øøsterkromatidutbytter og andre cytogeniske parametre er avhengig av nukleotide-for-løpere og de enzymer som produserer eller nedbryter dem, nukleotide poolubalanser og kofaktorer slik som Mg og NAD<+>.
Alle disse analysemetodene krever dyrking av viable celler, og noen er avhengig av celledeling. Videre er cellulær regulering av den DNA-reparerende enzymatiske aktiviteten via nukleotidpoolbegrensninger av betydning ved vurdering av den genotoksiske risikoen, og denne type av regulerende faktor kan også analyseres ved dyrking av viable celler.
(2) Miljøfaktorer
Det er nå vel dokumentert at mennesker som yrkesmessig ekspo-neres for et antall forskjellige kjemikalier, utvikler kreft og andre sykdommer. Flere forskjellige tester har blitt utviklet for å vurdere risikofylte miljøeksponeringer. Også
her krever nesten alle disse fremgangsmåter isolering og dyrking av viable celler. Fremgangsmåtene .for vurdering av den individuelle genotoksiske risikoen som er nevnt ovenfor,
har tidligere blitt utviklet med cellesystemer fra dyre-modeller, og data har blitt ekstrapolert til mennesker. Herav følger at avhengigheten av analysemetoder for beregning av risikoen for karsinogene/mutagene stoffers innvirkning på
viable cellepopulasjoner også gjelder for andre pattedyr slik som rotter, mus, hamstere, aper osv.
(a) Yrkesmessige og industrielle eksponeringer
Den vanligste metoden for bedømmelse av om et kjemikalium
er skadelig for helsen, er å eksponere celler in vitro for
testkjemikaliet og vurdere den individuelle genotoksiske responsen. Dette kan man ikke gjøre uten å dyrke viable celler i nærvær av testkjemikaliet. Risikoen in vivo vurderes ofte på lignende måte, men sammenligning mellom in vitro-responser gjøres for individer som ikke er eksponerte in vivo for testkjemikaliet.
(b) Ernæringseffekter
Peroksydative prosesser i cellen kan produsere syreradikaler som skader DNA, og de kan aktivere karsinogene/mutagene midler for DNA-bindende mellomprodukter gjennom ko-
oksydative mekanismer. Den DNA-skade som induseres på disse måter, påvirkes hurtig av tilstedeværelser av antikarsinogene stoffer i den intracellulære kjemikaliepoolen. Antikarsinogene stoffer er ofte radikal-nedbrytere slik som vitamin E, 3-karoten, glutation, askorbinsyre eller urinsyre, og nivåene av disse stoffene i cellene kontrolleres delvis gjennom diett. For å analysere den individuelle risikoen er det således viktig å gjennomføre analysemetoder på viable celler der innflytelsen fra slike faktorer kan betraktes. Lipidnæringstilførsel er også av betydning i denne sammenheng. Menbranfluiditet, lipoksygenase og cyklooksygenase (prostaglandinsyntetase) reguleres enten gjennom fosfolipidbundet eller fri arakidon-syre. Forholdet mellom mettede og umettede ekstracellulære fettsyrer kan i sin tur justere den intracellulære fettsyre-poolen. En anriket intracellulær pool av umettede fettsyrer skulle øke tilfellene for syreradikaldannelse og for ko-oksydativ aktivering av karsinogene/mutagene stoffer. Igjen bør egnede risikovurderinger bare gjennomføres på viable målceller der disse regulatorer av den genotoksiske risikoen kan vurderes.
Videre har det ved analyse av DNA-reparasjonsevne hos viable celler vist seg at:
a) personer med høyt blodtrykk
b) eldre mennesker
c) etenoksydeksponerte personer
d) styreneksponerte personer
e) personer som har en genetisk disposisjon for colonkreft
f) personer som har eller har hatt colonkreft
alle har oppvist en dårligere evne til å kunne reparere sitt
DNA etter at cellene i løpet av kort tid har blitt eksponert for et karsinogent stoff.
På samme måte har det vist seg at aktiviteten for et annet enzym (ATP-ribose-transferase) i celler fra pasienter med leukemi har direkte sammenheng med sykdommens malignitetsgrad. Med andre ord kan man med denne analyse direkte avgjøre om pasienten vil kunne helbredes eller ikke.
Ytterligere et område der muligheten til å foreta en analyse på viable celler er av stor betydning, er ved analyse av immunologisk reaktivitet. Funksjonen til forskjellige typer av hvite blodlegemer forverres ofte av at sammensetningen til de testede cellepopulasjonene varierer, av at funksjons-testene er sterkt avhengig av celleantallet, av at forskjellige celletyper påvirker hverandre, dvs. at tilstedeværelsen av en viss celletype påvirker funksjonen til andre
.celletyper. Eksempler på denne tillemping er følgende.
1: Tilstedeværelsen av T-suppressorlymfocytter kan gjøre det umulig å påvise en eventuell eksisterende T-helper-aktivitet respektivt T-cytotoksisitetsaktivitet. Omvendt kan måling av T-suppressorfunskjonen umuliggjøres av samtidig tilstedeværelse av varierende mengde effektorceller.
2: Analyse av cytotoksisk effekt av cytolytiske T-celler kan bli umulig dersom NK-celler samtidig finnes til stede. Omvendt kan NK-cellers aktivitet sikrere bedømmes dersom
T-lymfocytter ikke samtidig er til stede.
Samtidig separering av flere cellesubpopulasjoner muliggjør analyse av celle-celleinteraksjon, f.eks. inhibering av forskjellige T- og B-cellefunksjoner av tilmålt tilblanding av T-suppresorceller. Et annet eksempel er kontrollert tilblanding av monocytter av en viss type til lymfocytter for korrekt bedømmelse av lymfocyttenes reaktivitet, f.eks. proliferativt T-cellesvar på eksponering for antigen som ikke finner sted i fravær av monocytter.
Disse typer av analyse er spesielt vesentlige hos kraft-pasienter, hos pasienter som mottar organtransplantat, hos pasienter med autoimmune sykdommer, samt hos individer med ervervede immundefekter (AIDS) eller medfødte sådanne.
Tilsvarende analyse av inflammatoriske celler som finnes i tumorvevnad, er analog med ovenstående analyse, men komplise-res av samtidig tilstedeværelse av et stort antall tumorceller med varierende egenskaper. Disse tumorceller må i første rekke separeres fra de inflammatoriske cellene, hvilket kan skje gjennom tilgang til monoklonale antistoffer rettet mot forskjellige tumormarkører. Det er også av betydning å kunne studere rensede tumorcellesuspensjoner, m.a.o. forskjellige celleparametere. Analoge forhold gjelder også vev med pågående autoimmunprosess der inflammatoriske celler må adskilles fra fibroblaster og endotel og epiteliale vevceller.
Oppfinnelsen belyses nærmere i nedenstående eksempel.
E ksempel
60 mg tresylaktiverte magnetiske sfærer anvendes for kobling
av 1 mg protein A, hvoretter magnetsfærene stabiliseres med 1,6-diaminoheksan og etylendiamin. Til disse protein A-sfærer
adsorberes deretter antihumant IgG. ' Etter grundig vasking av ikke-bundet ligand inkuberes disse magnetsfærer med 53 millioner mononukleære humane celler fra perifert blod i 4 ml PBS i en time ved +4°C.
Etter magnetisk separering oppnås 8 millioner celler som er adsorbert og separert fra celleblandingen.
På disse "magnetiske celler" ble det deretter utført en bestemmelse av DNA-reparasjonsevne (UDS) ifølge standardi-sert teknikk med følgende resultater.
4 millioner celler pr. kultur.
Denne verdi på UDS kan anses isom helt normal, hvilket viser at den magnetiske separeringen og det faktum at cellene er dekket av magnetiske partikler, ikke påvirker analyse-resultatene .

Claims (2)

1. Fremgangsmåte ved diagnostisering in vitro av sykdomstilstander eller av predisponering for visse sykdommer hos dyr, inkl. mennesker, karakterisert ved at en suspensjon av viable celler fra dyr bringes i kontakt med magnetiske sfærer, hvilke sfærer derved adsorberes på celleveggene eller inkorporeres i cellene, og ved at de således magnetiserte viable celler separeres fra suspensjonen ved anbringelse av et ytre magnetfelt, hvoretter dé -viable cellene anvendes for analyse av celleparametere, slik som DNA-reparasjonsevne og/eller enzymaktivitet og/eller immunologisk reaktivitet.
2. Diagnostisk middel for anvendelse ved diagnostisering in vitro av sykdomstilstander eller predisponering for visse sykdommer hos dyr, inkl. mennesker, karakterisert ved at det utgjøres av magnetiske sfærer omfattende magnetiske partikler innesluttet i en polymer matrise.
NO850785A 1984-03-01 1985-02-27 Fremgangsmaate ved diagnostisering in vitro og diagnostisk middel NO850785L (no)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE8401125A SE8401125L (sv) 1984-03-01 1984-03-01 Sett vid diagnostisering in vitro och diagnostiskt medel

Publications (1)

Publication Number Publication Date
NO850785L true NO850785L (no) 1985-09-02

Family

ID=20354951

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO850785A NO850785L (no) 1984-03-01 1985-02-27 Fremgangsmaate ved diagnostisering in vitro og diagnostisk middel

Country Status (8)

Country Link
EP (1) EP0162819A1 (no)
JP (1) JPS60210766A (no)
AU (1) AU3916985A (no)
DK (1) DK75885A (no)
FI (1) FI850644L (no)
NO (1) NO850785L (no)
NZ (1) NZ211230A (no)
SE (1) SE8401125L (no)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0230768B1 (en) * 1985-12-20 1992-03-18 Syntex (U.S.A.) Inc. Particle separation method
US5076950A (en) * 1985-12-20 1991-12-31 Syntex (U.S.A.) Inc. Magnetic composition for particle separation
US6013531A (en) * 1987-10-26 2000-01-11 Dade International Inc. Method to use fluorescent magnetic polymer particles as markers in an immunoassay
US5087570A (en) * 1988-05-10 1992-02-11 Weissman Irving L Homogeneous mammalian hematopoietic stem cell composition
US5523231A (en) * 1990-02-13 1996-06-04 Amersham International Plc Method to isolate macromolecules using magnetically attractable beads which do not specifically bind the macromolecules
GB9003253D0 (en) * 1990-02-13 1990-04-11 Amersham Int Plc Precipitating polymers
FR2695939B1 (fr) * 1992-09-24 1995-03-03 Prolabo Sa Cellules transformées, humaines, animales ou végétales encapsulant dans leurs cytoplasmes au moins une particule de latex.
WO2004111264A1 (en) * 2003-06-13 2004-12-23 University Technologies International Inc. Bacterial biofilm assay employing magnetic beads
WO2007070381A2 (en) 2005-12-09 2007-06-21 Promega Corporation Nucleic acid purification with a binding matrix
ES2319018B1 (es) * 2006-12-27 2010-02-10 Universidad De Zaragoza Metodo para separacion y deteccion de protozoarios.

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3970518A (en) * 1975-07-01 1976-07-20 General Electric Company Magnetic separation of biological particles
US4230685A (en) * 1979-02-28 1980-10-28 Northwestern University Method of magnetic separation of cells and the like, and microspheres for use therein
SE456164B (sv) * 1980-08-20 1988-09-12 Kjell Nilsson Forfarande for immobilisering, odling och efterfoljande frigoring av animala celler samt mikroberare av gelatin med absorberade animala celler
SE8201972L (sv) * 1982-03-29 1983-09-30 Gambro Lundia Ab Magnetiskt paverkbara kristalliserade kolhydrat sferer eller partiklar att anvendas tillsammans med bioadsorberande material

Also Published As

Publication number Publication date
EP0162819A1 (en) 1985-11-27
SE8401125L (sv) 1985-09-02
FI850644L (fi) 1985-09-02
NZ211230A (en) 1988-11-29
AU3916985A (en) 1985-09-05
DK75885A (da) 1985-09-02
SE8401125D0 (sv) 1984-03-01
DK75885D0 (da) 1985-02-19
FI850644A0 (fi) 1985-02-15
JPS60210766A (ja) 1985-10-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Arrigucci et al. FISH-Flow, a protocol for the concurrent detection of mRNA and protein in single cells using fluorescence in situ hybridization and flow cytometry
Forehand et al. Lipopolysaccharide priming of human neutrophils for an enhanced respiratory burst. Role of intracellular free calcium.
EP1725873B1 (en) Pharmacodynamic assays using flow cytometry.
US5225332A (en) Process for manipulation of non-aqueous surrounded microdroplets
Novikoff et al. Mitochondrial localization of oxidative enzymes: staining results with two tetrazolium salts
JP4151986B2 (ja) リンパ球機能の測定方法
Sewell et al. Determination of intracellular cytokines by flow-cytometry following whole-blood culture
Bao et al. Recent advances in electric analysis of cells in microfluidic systems
WO1989010566A1 (en) Process for forming and using microdroplets
NO850785L (no) Fremgangsmaate ved diagnostisering in vitro og diagnostisk middel
KR20230061565A (ko) 세포 레비테이션 및 모니터링을 위한 시스템 및 방법
Chittur et al. Shear stress effects on human T cell function
Barteneva et al. Mitochondrial staining allows robust elimination of apoptotic and damaged cells during cell sorting
Bonavida et al. The single-cell assay in cell-mediated cytotoxicity
Donaubauer et al. Analysis of the immune status from peripheral whole blood with a single-tube multicolor flow cytometry assay
Linnemann et al. Bio-impedance measurement allows displaying the early stages of neutrophil extracellular traps
Dimitrova et al. Comparison of two methods for the diagnosis of chronic granulomatous disease-neutrophil oxidative burst measured by the nitroblue tetrazolium slide test versus the dihydrorhodamine 123 flow cytometric assay
Perez et al. Multiparameter analysis of intracellular phosphoepitopes in immunophenotyped cell populations by flow cytometry
Bilitewski Determination of immunomodulatory effects: focus on functional analysis of phagocytes as representatives of the innate immune system
Hedley et al. Cytometry of intracellular signaling: from laboratory bench to clinical application
DE69032663T2 (de) Enzymtest und testsatz zur messung zellulärer aktivierung
Erfle et al. Lysosomal enzyme release from human neutrophils adherent to foreign material surfaces: Enhanced release of elastase activity
Girasole et al. Correlating nanoscale motion and ATP production in healthy and favism erythrocytes: a real-time nanomotion sensor study
Zhang et al. In situ genetically targeted chemical assembly of polymers on living neuronal membranes
Oleksiivna et al. ALLERGIC REACTIONS AS A SELECTIVE RESPONSE OF THE HUMAN IMMUNE SYSTEM TO THE INFLUENCE OF CHEMICALS