NO176947B

NO176947B - Method of Preparation of a Topical Preparation for Photodynamic Therapy

Info

Publication number: NO176947B
Application number: NO901018A
Authority: NO
Inventors: Mark J Shikowitz
Original assignee: Long Island Jewish Medical Ct
Priority date: 1988-07-06
Filing date: 1990-03-05
Publication date: 1995-03-20
Also published as: NO901018D0; NO176947C; NO901018L

Description

Den foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte for fremstilling av et topisk preparat for fotodynamisk terapi. The present invention relates to a method for producing a topical preparation for photodynamic therapy.

Oppfinnelsen angå området for behandling av human-papillomavirus-sykdom ved bruk av fotodynamisk terapi. Mer spesielt angår den bruk av et topisk hematoporfyrinpreparat som kan absorberes inn i syknede vev for således å muliggjøre applikering av fototerapi på lokaliserte hud-og mukosidvekster. The invention concerned the area of treatment of human papillomavirus disease using photodynamic therapy. More particularly, it concerns the use of a topical hematoporphyrin preparation that can be absorbed into diseased tissues to thus enable the application of phototherapy to localized skin and mucoside growths.

Fotokjemoterapi er en metode som hurtig utvikles for behandling av malignante sykdommer hos mennesker og dyr. Fotodynamisk terapi, PDT, involverer destruering av vev som holder på et fotosensitiviserende middel ved å ekspo-nere vev for lys med egnede bølgelengder, vanligvis i det røde området mellom 625 og 635 nm. Middelet hematoporfyrinderivat, HPD, eller dettes aktive komponent dihema-toporfyrineter, DHE, har vist seg å lokaliseres selektivt i abnormt vev som malignanter og papillomer. Som sådanne kan HPD eller DHE, heretter kalt HPD/DHE, injiseres intra-venøst og tillates å migrere til tumorsetene. Etter-følgende eksponering av setet for lys med egnet bølge-lengde forårsaker destruering av tumoren, mest sannsynlig ved en prosess som omfatter produksjon av ekssitert, meta-stabilt molekylært oksygen og toksiske oksygenradikaler, som deretter fører til oppbryting av cellemembranene ved lipidc' .iisjon og proteinsulfhydryloksydasjon. Photochemotherapy is a method that is rapidly being developed for the treatment of malignant diseases in humans and animals. Photodynamic therapy, PDT, involves the destruction of tissue holding a photosensitizing agent by exposing the tissue to light of appropriate wavelengths, usually in the red range between 625 and 635 nm. The agent hematoporphyrin derivative, HPD, or its active component dihema-toporphyrinets, DHE, has been shown to localize selectively in abnormal tissues such as malignancies and papillomas. As such, HPD or DHE, hereinafter referred to as HPD/DHE, can be injected intravenously and allowed to migrate to the tumor sites. Subsequent exposure of the site to light of a suitable wavelength causes destruction of the tumor, most likely by a process involving the production of excited, meta-stable molecular oxygen and toxic oxygen radicals, which then lead to disruption of the cell membranes by lipid fission. and protein sulfhydryl oxidation.

Selv om fotodynamisk terapi har vært benyttet med hell for behandling av metastatiske brysttumorer, endo-metriske karsinomer, blæretumorer, malignant melanom, Kaposi's sarkom, basalcellekarsinom, kondrosarsom, skvamøs cellekarsinom, prostatakarsinom, laryngial papillom, mykosis fungoides, overflatekreft på trakeobronkialtre og kutan/mukosid papillom, har den fremdeles mangler. Den mest overveiende mangel er det faktum at systemisk injeksjon av fotosensitiserende middel krever at pasienten unn-går lys, spesielt sollys, i perioder på 4-6 uker. Som et resultat har bruken av HPD/DHE vært begrenset til pasi-enter med alvorlig sykdom. Although photodynamic therapy has been used successfully for the treatment of metastatic breast tumors, endometrial carcinomas, bladder tumors, malignant melanoma, Kaposi's sarcoma, basal cell carcinoma, chondrosarcoma, squamous cell carcinoma, prostate carcinoma, laryngeal papilloma, mycosis fungoides, superficial tracheobronchial tree and cutaneous/mucosal carcinoma papilloma, it still has defects. The most predominant shortcoming is the fact that systemic injection of the photosensitizing agent requires the patient to avoid light, especially sunlight, for periods of 4-6 weeks. As a result, the use of HPD/DHE has been limited to patients with severe disease.

Som et alternativ til intravenøs injeksjon av fotoreaktive midler har forskjellige forskere forsøkt direkte å injisere HPD/DHE i tumoren. Amano, et al. rapporterer i "Journal of Urology" 139.392 (1988) at høye porfyrinnivåer i HPD-injisert vev og lave porfyrinnivåer i omgivende vev, indikerer at en slik måte kan være et brukbart alternativ i tilfeller der det er enkle lesjoner som er direkte tilgjengelige. As an alternative to intravenous injection of photoreactive agents, various researchers have attempted to directly inject HPD/DHE into the tumor. Amano et al. reports in "Journal of Urology" 139,392 (1988) that high porphyrin levels in HPD-injected tissue and low porphyrin levels in surrounding tissue indicate that such a method may be a viable alternative in cases where there are simple lesions that are directly accessible.

Papillon-sykdommer er imidlertid ofte forbundet med multippelhud/muskosvekst som hyppig er utilgjengelig for injeksjon. Derfor ville et preparat som kunne påføres topisk, eventuelt sågar av pasienten selv før den egnede lysbehandling, i vesentlig grad forbedre brukbarheten av HPD/DHE-terapien. However, Papillon diseases are often associated with multiple skin/muscular growths that are often inaccessible to injection. Therefore, a preparation that could be applied topically, possibly even by the patient himself before the appropriate light treatment, would significantly improve the usability of the HPD/DHE therapy.

McCullough, et al. har i "Journal of Investigative Dermatology", 81, 528 (1983) rapportert utvikling av en topisk lyofilisert hematoporfyrinderivatformulering for behandling av psoriasis og andre kutane sykdommer. Ved bruk av HPD i forbindelse med ason og N-metylpyrrolidon, viste de at eksponering av et behandlet område av marsvin-hud for rødt lys resulterte i signifikant erytem og inhi-bering av epidermal DNA-syntese. McCullough et al. have reported in "Journal of Investigative Dermatology", 81, 528 (1983) the development of a topical lyophilized hematoporphyrin derivative formulation for the treatment of psoriasis and other cutaneous diseases. Using HPD in conjunction with azone and N-methylpyrrolidone, they showed that exposure of a treated area of guinea pig skin to red light resulted in significant erythema and inhibition of epidermal DNA synthesis.

Selv om slike topiske hematoporfyrinformuleringer er brukbare ved behandling av kutane og subkutane sykdommer, er HPD/DHE ikke funnet generelt brukbare for behandling av papillomavirussykdom, pga. den manglende evne til å penetrere vevet tilstrekkelig til å tillate total destruering av veksten. Anvendelse av HPD eller DHE i vandig opp-løsning på papillomavirusinduserte vorter er ikke effek-tive pga. at oppløsningene ikke er i stand til å penetrere lesjonene. Isteden tørker de ut på overflaten. Kombina-sjoner av lyofilisert HPD eller DHE med kommersielt tilgjengelige bærere for topisk applikasjon var også et feil-slag, enten pga. tapet av aktivitet som et resultat av lyofilisering av HPD/DHE, eller fordi HPD/DHE kun partielt er oppløselig og den spesielle porsjon ikke penetrerer papilloma eller vanlig hud. Som et resultat og selv om fotodynamisk terapi som benytter intravenøst HPD-derivat har vist seg brukbar for behandling av laryngiale papillomer, kutane eksperimentelle og naturlig opptredende lesjoner og andre former for tumorer, blir i dag tilgjengelige terapier som fjerning ved bruk av CC^-laser eller kirurgisk eksisjon benyttet oftere når det gjelder tilgjengelige vekster. Although such topical hematoporphyrin formulations are useful in the treatment of cutaneous and subcutaneous diseases, HPD/DHE have not been found to be generally useful for the treatment of papillomavirus disease, due to the inability to penetrate the tissue sufficiently to permit total destruction of the growth. Application of HPD or DHE in aqueous solution to papillomavirus-induced warts is not effective because that the solutions are not able to penetrate the lesions. Instead, they dry out on the surface. Combinations of lyophilized HPD or DHE with commercially available carriers for topical application were also a failure, either because the loss of activity as a result of lyophilization of HPD/DHE, or because HPD/DHE is only partially soluble and the particular portion does not penetrate papilloma or normal skin. As a result, although photodynamic therapy using intravenous HPD derivative has proven useful for the treatment of laryngeal papillomas, cutaneous experimental and naturally occurring lesions, and other forms of tumors, therapies such as CC^ laser ablation are becoming available today. or surgical excision used more often in the case of accessible growths.

De ovenfor angitte problemer i forbindelse med den kjente tekniks bruk av fotodynamisk behandling overvinnes ved hjelp av det ifølge den foreliggende oppfinnelse frem-stilte topiske preparat som kan påføres direkte på de tumorøse seter. Den aktive forbindelse av HPD/DHE tran- . sporteres inn i vekstområdet som ved eksponering for rødt lys med en bølgelengde på 625-635 nm, destrueres. The above-mentioned problems in connection with the known technique's use of photodynamic treatment are overcome by means of the topical preparation produced according to the present invention which can be applied directly to the tumorous sites. The active compound of HPD/DHE tran- . is introduced into the growth area which is destroyed by exposure to red light with a wavelength of 625-635 nm.

Oppfinnelsen er basert på den iakttakelse at lys-sensitivitetene som oppstår ved bruk av systemisk fotodynamisk terapi kan allevieres ved bruk av HPD lokalt på setet for tumorøs vekst. Oppfinnelsen er videre basert på den iakttakelse at HPD/DHE som ikke naturlig er i stand til å diffundere inn i epitelmalignansier eller papillomer, kan kombineres i en form som tillater slik diffu-sjon og etterfølgende lysbehandling av setet for å destruere den behandlede vekst uten manglene ved toksisk systemisk fotosensitisering. The invention is based on the observation that the light sensitivities arising from the use of systemic photodynamic therapy can be alleviated by the use of HPD locally at the site of tumorous growth. The invention is further based on the observation that HPD/DHE, which is not naturally able to diffuse into epithelial malignancies or papillomas, can be combined in a form that allows such diffusion and subsequent light treatment of the site to destroy the treated growth without the defects in toxic systemic photosensitization.

Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer en fremgangsmåte for fremstilling av et ikke-lyofilisert preparat for fotodynamisk terapi og omfatter et fotoreaktivt middel dispergert i en bærer som er i stand til dyppenetrering ved applikasjon på pattedyrhud/mukosa. Med "dyppenetrering" menes at bæreren tillater at det fotoreaktive middel penetrerer det syknede vev tilstrekkelig til å tillate vesentlig destruering av den spesielle vekst som behandles. Aksepterbare bærere er de som er velkjente for fagmannen som er i stand til penetrering av huden og er kommersielt tilgjengelige som et antall hydrofile geler eller kremer. The present invention provides a method for the preparation of a non-lyophilized preparation for photodynamic therapy and comprises a photoreactive agent dispersed in a carrier capable of deep penetration when applied to mammalian skin/mucosa. By "deep penetration" is meant that the carrier allows the photoreactive agent to penetrate the diseased tissue sufficiently to permit substantial destruction of the particular growth being treated. Acceptable carriers are those well known to those skilled in the art which are capable of penetrating the skin and are commercially available as a number of hydrophilic gels or creams.

Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen kjennetegnes ved at den omfatter (a) en konsentrering uten lyofilisering av en vandig oppløsning inneholdende 1-7,5 mg/ml av et fotoreaktivt middel i form av hematoporfyrinderivat (HPD), dihematopor-fyrineter eller en blanding derav, til fra 20 til 25% av det opprinnelige volum, og (b) gjenfortynning av middelet i en penetrerende topisk bærer. The method according to the invention is characterized in that it comprises (a) a concentration without lyophilization of an aqueous solution containing 1-7.5 mg/ml of a photoreactive agent in the form of a hematoporphyrin derivative (HPD), dihematoporphyrinets or a mixture thereof, to from 20 to 25% of the original volume, and (b) re-dilution of the agent in a penetrating topical carrier.

Konsentreringen av den vandige oppløsning ledsages fortrinnsvis av en langsom fordamping under konstant mild omrøring og konstant avkjøling. Det er mest foretrukket at agiteringen av den vandige oppløsning i det langsomme for-dampingstrinn og gjenfortynningstrinnet gjennomføres slik at den konstante milde agitering resulterer i en virvelbevegelse i oppløsningen. Med "virvelbevegelse" menes en slik bevegelse i oppløsningen at det dannes en depresjon i sentrum av oppløsningsmassen. The concentration of the aqueous solution is preferably accompanied by a slow evaporation under constant gentle stirring and constant cooling. It is most preferred that the agitation of the aqueous solution in the slow evaporation step and the re-dilution step is carried out so that the constant gentle agitation results in a swirling movement in the solution. By "vortex movement" is meant such a movement in the solution that a depression is formed in the center of the solution mass.

HPD/DHE er generelt tilgjengelig i form av en 2,5 mg/ml vandig oppløsning. Således blir i den mest foretrukne utførelsesform denne oppløsning av HPD/DHE langsomt fordampet under undertrykk med konstant avkjøling og virveldannelse inntil volumet er 20-25% av det opprinnelige. Den bringes deretter tilbake til sitt opprinnelige volum ved fortynning med en egnet topisk bærer. Det resulterende topiske preparat kan lagres ved å anbringe dette i en mørk container med avkjøling. Deretter kan det påføres på området av pattedyrhud eller mukosa som skal behandles. HPD/DHE-preparatet kan påføres direkte eller ved hjelp av en kutan bandasje eller en pute. HPD/DHE is generally available as a 2.5 mg/ml aqueous solution. Thus, in the most preferred embodiment, this solution of HPD/DHE is slowly evaporated under reduced pressure with constant cooling and vortexing until the volume is 20-25% of the original. It is then brought back to its original volume by dilution with a suitable topical carrier. The resulting topical preparation can be stored by placing it in a dark, refrigerated container. It can then be applied to the area of mammalian skin or mucosa to be treated. The HPD/DHE preparation can be applied directly or with the help of a cutaneous bandage or a pad.

Området bestråles deretter på i og for seg kjent måte ved bruk av lys i det røde spektrum, fortrinnsvis med en bølgelengde fra 625-635 nm. Lysbehandlingen forårsaker destruering av det syknede areal. Den ovenfor angitte behandling er foretrukket for bruk ved behandling av papillomavirussykdom. Imidlertid kan den benyttes for å be-handle et vidt spektrum lesjoner, tumorer osv. The area is then irradiated in a manner known per se using light in the red spectrum, preferably with a wavelength from 625-635 nm. The light treatment causes destruction of the diseased area. The treatment indicated above is preferred for use in the treatment of papillomavirus disease. However, it can be used to treat a wide range of lesions, tumors etc.

Egnede topiske bærere som er i stand til dyppenetrering ved applikasjon på pattedyrhud/mukosa, omfatter et antall velkjente topiske geler, hydrofile salver eller kremer som er kommersielt tilgjengelige som baser for inn-arbeiding av forskjellige aktive bestanddeler i ekstem-poranøse tildannede formuleringer. Slike bærere inkluderer karakteristisk én eller flere av alkohol, propylenglykol, høyere etylenglykolpolymerer som polyetylenglykol, poly-sorbat 20, -40 eller -80, polyoksyetylenlauryleter, glyserin, urea, natriumlaurylsulfat, vokser, gummier o.l. De fleste kommersielt tilgjengelige bærere som er egnet for bruk ifølge oppfinnelsen, har et høyt alkoholinnhold, dvs. minst 25 vekt% alkohol. Suitable topical carriers capable of deep penetration upon application to mammalian skin/mucosa include a number of well-known topical gels, hydrophilic ointments or creams which are commercially available as bases for the incorporation of various active ingredients into extemporaneous prepared formulations. Such carriers typically include one or more of alcohol, propylene glycol, higher ethylene glycol polymers such as polyethylene glycol, polysorbate 20, -40 or -80, polyoxyethylene lauryl ether, glycerin, urea, sodium lauryl sulfate, waxes, gums, and the like. Most commercially available carriers suitable for use according to the invention have a high alcohol content, i.e. at least 25% alcohol by weight.

To egnede bærere som er spesielt foretrukne er dimetylsulfoksyd (DMSO) og "Pharmasolve", en kommersielt tilgjengelig bærer fra Young Pharmaceutical Inc., og inneholdende 54 vekt% SD-alkohol, mens resten er propylenglykol, renset vann, polyoksyetylenlauryleter og dioktylnatriumsulfosuksinat. Two suitable carriers which are particularly preferred are dimethyl sulfoxide (DMSO) and "Pharmasolve", a commercially available carrier from Young Pharmaceutical Inc., and containing 54% by weight of SD alcohol, the remainder being propylene glycol, purified water, polyoxyethylene lauryl ether and dioctyl sodium sulfosuccinate.

Andre egnede bærere som er kommersielt tilgjengelige er hydrofile salver tilgjengelig fra et antall leveran-dører. Hydrofile salver inneholder generelt 25% hvit petrolatum, 25% stearylalkohol, 12% propylenglykol og 1% natriumlaurylsulfat med metyl- og propylparabener. Andre kommersielt tilgjengelige produkter som kan benyttes ifølge oppfinnelsen er lotioner som Neutrogena Vehicle/N™, Neutrogena Vehickle/N Mild™, E-solve™ Other suitable carriers that are commercially available are hydrophilic ointments available from a number of suppliers. Hydrophilic ointments generally contain 25% white petrolatum, 25% stearyl alcohol, 12% propylene glycol and 1% sodium lauryl sulfate with methyl and propyl parabens. Other commercially available products that can be used according to the invention are lotions such as Neutrogena Vehicle/N™, Neutrogena Vehicle/N Mild™, E-solve™

(Syosset), Aquaphor™ (Beiersdorf), Unibase™ (Parke-Davis), Polysorb Anhydrous™ (Fougera), Azone™ (Nelson Research) alene eller i forskjellige alkoholholdige opp-løsninger, Velvachol™, Dermovan™ og Nutraderm™, Heb Cream Base™ (Barnes-Hind), Eucerin™ (Beiersdorf) og blandinger derav. De ovenfornevnte produkter er kun gitt som eksempler og listen er ikke uttømmende. Mange varia-sjoner av de ovenfor angitte sammen med andre egnede topiske bærere, tilbyr seg selv for fagmannen i lys av den foregående beskrivelse. (Syosset), Aquaphor™ (Beiersdorf), Unibase™ (Parke-Davis), Polysorb Anhydrous™ (Fougera), Azone™ (Nelson Research) alone or in various alcoholic solutions, Velvachol™, Dermovan™ and Nutraderm™, Heb Cream Base™ (Barnes-Hind), Eucerin™ (Beiersdorf) and mixtures thereof. The above-mentioned products are only given as examples and the list is not exhaustive. Many variations of those indicated above, together with other suitable topical carriers, offer themselves to the person skilled in the art in light of the preceding description.

De følgende eksempler er rettet mot utførelsesformer av oppfinnelsen og gis kun for illustrerende formål. The following examples are directed to embodiments of the invention and are given for illustrative purposes only.

Eksempel 1 Example 1

Fremstilling av topisk DHE-preparat. Preparation of topical DHE preparation.

En vandig 2,5 mg/ml oppløsning av DHE ble delt i 2 cm^ mengder og anbrakt i separate rør. Denne DHE ble av-kjølt til 10°C +. 5°C, og det ble lagt på et undertrykk på 20-35 mm Hg. Oppløsningen ble langsomt fordampet under konstant avkjøling til 10°C +, 5°C under virveldannelse (Evapotec, A Haake Buchler, NJ) inntil det var nådd et sluttvolum på ca. 20% av det opprinnelige. Det konsen-trerte DHE ble fortynnet igjen til det opprinnelige volum i Pharmasolve i et isbad under konstant virveldannelse. Oppløsningen ble deretter anbrakt i en mørk beholder og holdt avkjølt. An aqueous 2.5 mg/ml solution of DHE was divided into 2 cm 3 aliquots and placed in separate tubes. This DHE was cooled to +10°C. 5°C, and a negative pressure of 20-35 mm Hg was applied. The solution was slowly evaporated under constant cooling to 10°C + 5°C under vortexing (Evapotec, A Haake Buchler, NJ) until a final volume of approx. 20% of the original. The concentrated DHE was diluted again to the original volume in Pharmasolve in an ice bath under constant vortexing. The solution was then placed in a dark container and kept refrigerated.

Eksempel 2 Example 2

Absorbsjon av HPD/DHE topisk preparat. Absorption of HPD/DHE topical preparation.

Kaninrygger ble barbert og flere arealer som målte 4 cm i diameter ble streket opp. Et område ble alltid beholdt som kontrollområde. Et område fikk DHE-Pharmasolve som var fremstilt som beskrevet i eksempel 1, et andre fikk DHE/DMSO fremstilt på samme måte som angitt i eksempel 1, men ved å benytte DMSO isteden for Pharmasolve, et tredje område fikk Pharmasolve alene og et fjerde fikk DMSO alene. Hvert område ble bestrålt med 630 nm lys av en Argon pumpe farvelaser ved 9 Joules. Etter dette ble hvert område observert. Det ble ikke observert noen endring i områdene med normal hud og vanlig oppløsningsmiddel, altså DMSO eller Pharmasolve, mens områdene behandlet med DHE-Pharmasolve eller DHE/DMSO forandret farve til et mørkere brunt. Forsøk på å vaske disse områder med sepe og vann eller alkohol var mislykket med henblikk på å endre farven. Etter 48 timer viste områdene som var behandlet med DHE-preparatene og bestrålt med lys en signifikant hyperemireaksjon. Dette fortsatte de neste 48 timer og ble borte en uke etter behandling. Dette viste absorbsjon og reaksjon på kutant nivå av det topiske middel. Rabbit backs were shaved and several areas measuring 4 cm in diameter were drawn up. An area was always kept as a control area. One area received DHE-Pharmasolve which was prepared as described in Example 1, a second received DHE/DMSO prepared in the same way as stated in Example 1, but using DMSO instead of Pharmasolve, a third area received Pharmasolve alone and a fourth received DMSO alone. Each area was irradiated with 630 nm light from an Argon pump dye laser at 9 Joules. After this, each area was observed. No change was observed in the areas with normal skin and the usual solvent, i.e. DMSO or Pharmasolve, while the areas treated with DHE-Pharmasolve or DHE/DMSO changed color to a darker brown. Attempts to wash these areas with soap and water or alcohol to change the color were unsuccessful. After 48 hours, the areas treated with the DHE preparations and irradiated with light showed a significant hyperemic reaction. This continued for the next 48 hours and disappeared a week after treatment. This showed absorption and reaction at the cutaneous level of the topical agent.

Eksempel 3 Example 3

Absorbsjon av DHE topisk preparat. Absorption of DHE topical preparation.

Et andre forsøk ble gjennomført ved bruk av seks områder på ryggen av en kanin. DHE topiske preparater ble fremstilt i henhold til den metode som er gitt i eksempel 1. Områdene ble behandlet som følger: A second experiment was carried out using six areas on the back of a rabbit. DHE topical preparations were prepared according to the method given in Example 1. The areas were treated as follows:

A - DMSO-DHE + lys A - DMSO-DHE + light

B - DMSO-DHE - ikke lys B - DMSO-DHE - no light

C - DMSO alene + lys C - DMSO alone + light

D - Pharmasolve-DHE + lys D - Pharmasolve-DHE + light

E - Pharmasolve-DHE - ikke lys E - Pharmasolve-DHE - not light

F - Pharmasolve alene + lys F - Pharmasolve alone + light

Hver oppløsning ble tillatt absorbering i 3 timer og behandlet med 630 nm rødt lys som beskrevet under eksempel 2. Områdene A og D ble umiddelbart mørkere brune. Ingen endring skjedde i områdene B, C, E og F. Etter 48 timer var det signifikant hyperemi i områdene A dg D og ingen reaksjon i områdene som ikke fikk rødt lys eller der opp-løsningsmiddel alene ble benyttet. Each solution was allowed to absorb for 3 hours and treated with 630 nm red light as described under Example 2. Areas A and D immediately darkened brown. No change occurred in areas B, C, E and F. After 48 hours there was significant hyperemia in areas A and D and no reaction in the areas that did not receive red light or where solvent alone was used.

Eksempel 4 Example 4

Behandling av papillomer. Treatment of papillomas.

Papillomer ble indusert med bomullshaler kaninpapil-lomavirus (CRPV) på ryggen av en Dutch beltet kanin. To ble benyttet som kontroller, og to områder av vanlig hud virket som positive kontroller. To papillomer ble behandlet med DHE/DMSO fremstilt i henhold til eksempel 1 og de andre to fikk DHE-Pharmasolve, også fremstilt i henhold til eksempel 1. Lys fra en 630 nm laser ble administrert på en papillom med DHE-DMSO og en med DHE-Pharmasolve. De andre to forble i mørke på samme måte som kontrollene. Papillomas were induced with cotton-tailed rabbit papillomavirus (CRPV) on the back of a Dutch belted rabbit. Two were used as controls, and two areas of normal skin acted as positive controls. Two papillomas were treated with DHE/DMSO prepared according to Example 1 and the other two received DHE-Pharmasolve, also prepared according to Example 1. Light from a 630 nm laser was administered to one papilloma with DHE-DMSO and one with DHE - Pharmasolve. The other two remained in the dark as were the controls.

Etter 3 uker ble total regresjon observert for papillomet behandlet med DHE-Pharmasolve og eksponert for 630 nm lys, og partiell regresjon ble observert med det rødlyseksponerte papillom som var behandlet med DHE-DMSO. De to papillomer som var behandlet med et DHE-preparat, men som ikke ble belyst, viste ingen endring. De ube-handlede papillomkontrollhudområder viste den ventede erytem. After 3 weeks, total regression was observed for the papilloma treated with DHE-Pharmasolve and exposed to 630 nm light, and partial regression was observed with the red light-exposed papilloma treated with DHE-DMSO. The two papillomas that were treated with a DHE preparation, but which were not illuminated, showed no change. The untreated papilloma control skin areas showed the expected erythema.

Sammenlignende eksempler A oa B Comparative examples A and B

Et topisk preparat av lyofilisert hematoporfyrinderivat, HPD, ble preparert, og virkningen på CRPV induserte papillomer på ryggene av Dutch beitede kaniner ble bedømt som beskrevet nedenfor. A topical preparation of lyophilized hematoporphyrin derivative, HPD, was prepared and the effect on CRPV induced papillomas on the backs of Dutch pastured rabbits was evaluated as described below.

En vandig 2,5 mg/ml oppløsning av DHE ble oppdelt i like 1 ml andeler i 15 prøverør og deretter lyofilisert til et tørt pulver ved kontrollert fordamping i en "Speed Vac Concentrator" (Savant, Inc.) i 45 minutter. An aqueous 2.5 mg/ml solution of DHE was divided into equal 1 ml portions in 15 test tubes and then lyophilized to a dry powder by controlled evaporation in a "Speed Vac Concentrator" (Savant, Inc.) for 45 minutes.

I sammenligningseksempel A ble det lyofiliserte DHE-pulver så kombinert og fortynnet igjen til sitt opprinnelige volum på 15 ml i DMSO under konstant virveldannelse. Den gjenfortynnede DHE-oppløsning inneholde uoppløst partikkelformet materiale av moderat størrelse. På tross av anvendelse av konstant virveldannende omrøring i 45 minutter, ble disse partikler ikke gjenoppløst. In Comparative Example A, the lyophilized DHE powder was then combined and diluted back to its original volume of 15 ml in DMSO under constant vortexing. The reconstituted DHE solution contains undissolved particulate matter of moderate size. Despite the application of constant vortexing agitation for 45 minutes, these particles did not redissolve.

I sammenligningseksempel B ble frisk 2,5 mg/ml DHE-oppløsning delt i like ml deler i 15 prøverør og deretter lyofilisert til et tørt pulver ved kontrollert fordamping, som angitt ovenfor, i 45 minutter. Dette lyofiliserte DHE-pulver ble kombinert og gjenfortynnet til sitt opprinnelige volum på 15 ml i Pharmasolve under konstant virveldannende omrøring. In Comparative Example B, fresh 2.5 mg/ml DHE solution was divided into equal ml portions in 15 test tubes and then lyophilized to a dry powder by controlled evaporation, as indicated above, for 45 minutes. This lyophilized DHE powder was combined and re-diluted to its original volume of 15 ml in Pharmasolve under constant vortexing.

Det lyofiliserte DHE-pulver var noe mer oppløselig i Pharmasolve enn i DMSO, men uoppløst partikkelformet materiale med liten til middels størrelse var fremdeles tilstede på tross av den virveldannende omrøring i ca. 45 minutter. Gjentatte forsøk ble så gjennomført på CRPV induserte lesjoner og vanlig hud. The lyophilized DHE powder was somewhat more soluble in Pharmasolve than in DMSO, but undissolved small- to medium-sized particulate material was still present despite vortexing for approx. 45 minutes. Repeated experiments were then carried out on CRPV induced lesions and normal skin.

Ryggene til kaniner ble barbert og flere områder med 4 cm i diameter ble streket opp. The backs of rabbits were shaved and several areas 4 cm in diameter were drawn up.

Et område ble alltid beholdt som kontrollområde. Den lyofiliserte DHE-DMSO ble påført ved hjelp av en skum-applikator på et andre område og den lyofiliserte DHE/ Pharmasolve på samme måte på et tredje område. Et fjerde område mottok Pharmasolve alene og et femte DMSO alene. An area was always kept as a control area. The lyophilized DHE-DMSO was applied by means of a foam applicator to a second area and the lyophilized DHE/Pharmasolve in the same way to a third area. A fourth area received Pharmasolve alone and a fifth DMSO alone.

Den partikkelformige andel av lyofilisert DHE/DMSO og den lyofiliserte DHE/Pharmasolve-oppløsning penetrerte ikke papillomene eller den vanlige hud og kunne lett tørkes vekk etter tørking. Hvert område ble bestrålt med 630 nm lys fra en Argon pumpe farvelaser ved 9 Joules. Ingen klinisk eller terapeutisk virkning ble bemerket på noen av prøveområdene. The particulate portion of lyophilized DHE/DMSO and the lyophilized DHE/Pharmasolve solution did not penetrate the papillomas or normal skin and could be easily wiped away after drying. Each area was irradiated with 630 nm light from an Argon pump dye laser at 9 Joules. No clinical or therapeutic effect was noted in any of the test areas.

Disse forsøk viser klart effektiviteten av topisk applikasjon av ikke-lyofilisert DHE (HPD) i et egnet oppløsningsmiddel når det fremstilles som angitt ifølge oppfinnelsen for behandling av papillomavirusindusert sykdom. I hvert tilfelle der effektiviteten for preparatet ble påvist, viste den omgivende vanlige hud ingen skade-lige bivirkninger selv etter 3 måneders oppfølging. These experiments clearly demonstrate the effectiveness of topical application of non-lyophilized DHE (HPD) in a suitable solvent when prepared as indicated in accordance with the invention for the treatment of papillomavirus-induced disease. In each case where the effectiveness of the preparation was demonstrated, the surrounding normal skin showed no harmful side effects even after 3 months of follow-up.

Claims

1. Process for the production of a topical preparation for photodynamic therapy, characterized in that it comprises (a) a concentration without lyophilization of an aqueous solution containing 1-7.5 mg/ml of a photoreactive agent in the form of hematoporphyrin derivative (HPD), dihematopor phyrinet or a mixture thereof to from 20 to 25% of its original volume, and (b) re-diluting the agent in a penetrating topical carrier.

2. Method in accordance with claim 1, characterized in that the agent is placed in a vacuum of from 20 to 35 mm Hg at a temperature of 5 to 15°C during the concentration.

3. Method according to claim 1 or 2, characterized in that it further comprises gentle and constant agitation of the mixture of the agent and the carrier during the concentration.

4. Method in accordance with one of the preceding claims, characterized in that it further comprises gentle and constant stirring of the mixture of the agent and the carrier during the re-dilution step.

5. Method according to one of the preceding claims, characterized in that the carrier is a hydrophilic gel or a cream.

6. Method in accordance with one of the preceding claims, characterized in that the carrier comprises approx. 50% by weight SD alcohol while the rest is one or more of propylene glycol, purified water, polyoxyethylene lauryl ether, dioctyl sodium sulfosuccinate etc.

7. Method in accordance with one of the preceding claims, characterized in that the carrier is dimethylsulfoxide.

8. Method in accordance with one of the preceding claims, characterized in that it further comprises vortexing the aqueous solution in vacuum with constant cooling.

9. Method in accordance with claim 8, characterized in that the resulting concentrate is placed in an ice bath before re-dilution.

10. Method in accordance with one of the preceding claims, characterized in that the resulting concentrate is re-diluted to its original volume.