NO117626B

NO117626B -

Info

Publication number: NO117626B
Application number: NO16911467A
Authority: NO
Inventors: H Herzog; H Frey
Original assignee: Dynamit Nobel Ag
Priority date: 1966-07-23
Filing date: 1967-07-20
Publication date: 1969-09-01
Also published as: NL6710138A; GB1170695A; DE1571218A1; BE701725A

Description

Fremgangsmåte til konservering av poliomyelittvaksine. Procedure for preservation of poliomyelitis vaccine.

Som bekjent er poliomyelitt en virus-sykdom som kan være dødelig eller ha vidt-gående forkrøplende virkninger. På grunn As you know, poliomyelitis is a viral disease that can be fatal or have far-reaching crippling effects. Due

av sykdommens natur ligger den eneste ra-sjonelle behandling av de problemer den from the nature of the disease lies the only rational treatment of those problems

forårsaker i profylaksen, dvs. i bestrebelser causing in the prophylaxis, i.e. in endeavours

for å finne midler til å forhidre sykdom-men. Det er nylig utviklet en poliomyelittvaksine bestående av drept men antigen to find means to prevent disease-but. A poliomyelitis vaccine consisting of killed but antigen has recently been developed

poliomyelittvirus av typene 1, 2 og 3, og poliomyelitis virus types 1, 2 and 3, and

med denne vaksine er det utført grundige with this vaccine it has been carried out thoroughly

kliniske forsøk. Denne poliomyelittvaksine clinical trials. This polio vaccine

er som mange andre vaksiner et vandig is, like many other vaccines, a watery one

preparat som gis ved injeksjon. På grunn preparation given by injection. Due

herav er det av essensiell betydning at vaksinen er steril, dvs. fri fra forurensende of this, it is of essential importance that the vaccine is sterile, i.e. free from contaminants

bakterier, mugg og fungi ikke bare under bacteria, mold and fungi not only under

vaksinens fremstilling og emballering, men the vaccine's manufacture and packaging, but

også når vaksinen gis. Det er kanskje i det also when the vaccine is given. Maybe it's in it

minste teoretisk mulig å fremstille og em-ballere vaksine under aseptiske betingelser, minimum theoretically possible to produce and package vaccine under aseptic conditions,

men slike vaksiner kan allikevel være forurenset på den tid de brukes, særlig når but such vaccines may still be contaminated at the time they are used, especially when

emballasjen er det som i handelen i almin-nelighet betegnes med en flerdose-embal-lasje. Dessuten er fremstilling av vaksine the packaging is what is commonly referred to in the trade as multi-dose packaging. Also, the production of vaccine

under fullstendig aseptiske betingelser pro-hibitiv fra synspunktet omkostninger og er under completely aseptic conditions prohibitive from the point of view of costs and is

helt upraktisk. completely impractical.

Ved et forsøk på å sikre at poliomyelittvaksinen er fri fra forurensende bakterier, mugg og fungi og forblir fri fra disse organismer, er det blitt foreslått som kon-serverende middel å tilsette en kvikksølv-forbindelse, særlig timerosal som har formelen: In an attempt to ensure that the poliomyelitis vaccine is free from contaminating bacteria, molds and fungi and remains free from these organisms, it has been proposed as a preservative to add a mercury compound, particularly thimerosal which has the formula:

Denne forholdsregel har skaffet en løsning på problemet forurensning, men dem har reist et annet og muligens ennu alvorligere problem, idet timerosalet forårsaker at poliomyelittvaksinen taper sitt potensial. På grunn av dette forhold må poliomyelittvaksinepreparater som inneholder timerosal som konserveringsmiddel brukes kort etter at de er fremstillet. Dette er selvfølgelig i høy grad ufordelaktig fordi det er vanskelig og kostbart å fremstille vaksinen og på grunn av de nevnte forhold må produksjonen begrenses til det behov som ventes å foreligge innen kort tid. På grunn av dette og fordi fremstillingen av vaksinen krever flere måneder, er det prak-tisk å fremstille tilstrekkelig vaksine til å møte behov i tilfelle av uventet nødstil-stand. Det er defor et presserende behov for et poliomyelittvaksinepreparat som ikke bare med sikkerhet er fritt for forurensende bakterier, fungi og muggsopper på den tid det brukes, men også bibeholder sitt potensial, dvs. sin antigene virkning, i et betydelig tidsrom under normale lagringsbetingelser. This precaution has provided a solution to the problem of contamination, but it has raised another and possibly even more serious problem, as the thimerosal causes the poliomyelitis vaccine to lose its potency. Because of this condition, poliomyelitis vaccine preparations containing thimerosal as a preservative must be used shortly after they are prepared. This is of course highly disadvantageous because it is difficult and expensive to produce the vaccine and due to the aforementioned conditions, production must be limited to the need that is expected to exist within a short time. Because of this and because the production of the vaccine requires several months, it is practical to produce sufficient vaccine to meet needs in the event of an unexpected emergency. There is therefore an urgent need for a poliomyelitis vaccine preparation that is not only reliably free from contaminating bacteria, fungi and molds at the time it is used, but also retains its potential, i.e. its antigenic effect, for a considerable period of time under normal storage conditions.

Foreliggende oppfinnelse angår en fremgangsmåte til konservering av poliomyelittvaksine og ved hjelp av denne fremgangsmåte skaffes der et poliomyelittvaksinepreparat som med sikkerhet forblir fritt fra forurensende bakterier, muggsopper- og fungi i et betydelig tindsrom under normale lagringsbetingelser og ved prepa-ratets bruk av leger. Videre bibeholder det preparat som fremstilles ved hjelp av fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen sin antigene virkning i et betydelig tidsrom under normale lagringsbetingelser. The present invention relates to a method for preserving poliomyelitis vaccine and by means of this method, a poliomyelitis vaccine preparation is obtained which reliably remains free from contaminating bacteria, molds and fungi for a considerable period of time under normal storage conditions and when the preparation is used by doctors. Furthermore, the preparation produced using the method according to the invention retains its antigenic effect for a considerable period of time under normal storage conditions.

Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen er karakterisert ved at man til en vandig oppløsning inneholdende minst én type drept, men antigent poliomyelittvirus tilsetter benzetonklorid i en mengde som er tilstrekkelig til at man får en oppløsning inneholdende benzetonklorid i en konsentrasjon i området fra 1 : 20 000 til 1 : 50 000, fortrinnsvis 1 : 40 000, uttrykt i gram pr. ml. The method according to the invention is characterized in that to an aqueous solution containing at least one type of killed but antigenic poliomyelitis virus, benzethone chloride is added in an amount that is sufficient to obtain a solution containing benzethone chloride in a concentration in the range from 1:20,000 to 1: 50,000, preferably 1:40,000, expressed in grams per ml.

Den vandige oppløsning som behandles således kan altså inneholde drept og antigent poliomyelittvirus av én av typene 1, 2 og 3, av to av disse typer eller inneholde alle tre typer. The aqueous solution treated in this way can therefore contain killed and antigenic poliomyelitis virus of one of types 1, 2 and 3, of two of these types or contain all three types.

Benzetonkloridet innføres fortrinnsvis i vaksinen ved langsomt å tilsette en for-tynnet vandig oppløsning av denne forbindelse til den vandige «drepte» poliomyelittvaksine under effektiv omrøring. I kjemisk henseende er benzetonklorid kjent som benzyldimetyl [2-(-<p-l,l,3,3,-tetrametyl-butylf enoksy>etoksy) -etyl] ammonium-klorid-monohydrat og har formelen The benzethone chloride is preferably introduced into the vaccine by slowly adding a dilute aqueous solution of this compound to the aqueous "killed" poliomyelitis vaccine with effective stirring. In chemical terms, benzethone chloride is known as benzyldimethyl [2-(-<p-l,l,3,3,-tetramethyl-butylphenoxy>ethoxy)-ethyl] ammonium chloride monohydrate and has the formula

De foretrukne produkter er de som inneholder benzetonkloridet i en konsentrasjon i området fra 1 : 20 000 til 1 : 40 000. The preferred products are those containing the benzethone chloride in a concentration in the range from 1:20,000 to 1:40,000.

Det er i og for seg kjent at benzetonklorid er et virksomt middel mot mikro-organismer, og det er alminnelig kjent at denne forbindelse har den egenskap at den utfeller og denaturerer proteiner. Antigenet i poliomyelittvaksiner er av proteinnatur. Det er derfor meget overraskende at benzetonklorid ikke innvirker ufordelaktig på slike vaksiners potensial, men derimot forårsaker at deres potensial bibeholdes sam-tidig som de forhindrer at vaksinene infi-seres med skadelige organismer. It is known per se that benzethone chloride is an effective agent against micro-organisms, and it is common knowledge that this compound has the property that it precipitates and denatures proteins. The antigen in poliomyelitis vaccines is of a protein nature. It is therefore very surprising that benzethone chloride does not adversely affect the potential of such vaccines, but instead causes their potential to be maintained at the same time as they prevent the vaccines from being infected with harmful organisms.

De vandige «drepte» poliomyelittvaksiner som brukes i fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen kan inneholde en hvilken som helst av eller alle de forskjellige typer poliomyelittvirus. De foretrukne vaksiner er de som inneholder poliomyelittvirus av typene 1, 2 og 3. Særlig egnede vaksiner er de hvis proteininnhold er relativt lavt, fortrinnsvis de vaksiner som inneholder min-dre enn omkring 18—20 gamma pr. ml protein-nitrogen. Slike vaksiner kan fremstilles på mange forskjellige måter. Således kan f. eks. macerert nyrevev fra aper behandles med trypsin for å finne overflødig vev, hvorpå man lar de gjenværende celler formere seg, poder mediet med poliomyelittvirus, inkuberer blandingen, oppsamler væsken og inaktiverer de levende virus ved behandling med formaldehyd, bestråling med ultrafiolette stråler eller på andre passende måter. Om ønskes kan vaksiner som er fremstillet under sløyfning av trypsinbe-handlingstrinnet også brukes, men i slike tilfelle kan vaksinens proteininnhold være overdrevent høyt og bør bestemmes før vaksinens bruk. Ved fremstilling av blandede vaksiner, dvs. vaksiner inneholdende flere enn en type poliomyelittvirus er det vanlig å blande de oppsamlede væsker inneholdende de forskjellige virustyper etter inaktiveringstrinnet, men dette kan også om ønskes gjøres før inaktiveringen. Når man bruker vaksiner som er inaktivert med formaldehyd fåes ifølge oppfinnelsen de beste resultater ved å bruke vaksiner som ikke er tilsatt natriumbisulfit for å redu-sere formaldehydinnholdet. The aqueous "killed" poliomyelitis vaccines used in the method according to the invention may contain any or all of the different types of poliomyelitis virus. The preferred vaccines are those containing poliomyelitis virus of types 1, 2 and 3. Particularly suitable vaccines are those whose protein content is relatively low, preferably those containing less than about 18-20 gamma per ml protein-nitrogen. Such vaccines can be produced in many different ways. Thus, e.g. macerated kidney tissue from monkeys is treated with trypsin to remove excess tissue, after which the remaining cells are allowed to proliferate, the medium is inoculated with poliomyelitis virus, the mixture is incubated, the fluid is collected, and the live viruses are inactivated by treatment with formaldehyde, irradiation with ultraviolet rays, or by other appropriate means ways. If desired, vaccines prepared by skipping the trypsin treatment step can also be used, but in such cases the protein content of the vaccine may be excessively high and should be determined prior to use of the vaccine. When producing mixed vaccines, i.e. vaccines containing more than one type of poliomyelitis virus, it is common to mix the collected liquids containing the different virus types after the inactivation step, but this can also be done before inactivation if desired. When using vaccines that have been inactivated with formaldehyde, according to the invention, the best results are obtained by using vaccines that have not had sodium bisulphite added to reduce the formaldehyde content.

I det følgende beskrives som eksempler noen utførelsesformer for oppfinnelsen. In the following, some embodiments of the invention are described as examples.

Eksempel. 1: Example. 1:

Celler for dyrkning av poliomyelittvirus fremstilles ved Dulbeccos's metode Cells for cultivation of poliomyelitis virus are prepared by Dulbecco's method

(Jornal of Experimental Medicine, 99, side (Journal of Experimental Medicine, 99, p

167 (1954)). Denne metode består i korthet i at man først lager en suspensjon av epi-telceller fra apenyrer (Se Dulbecco, Proe. Nat. Acad. Sei., 38, side 747 (1952)) ved å behandle macerert nyrevev fra friske Cyno-malgus eller Rhesus aper med trypsin for å fjerne overflødig materiale og frigjøre de enkelte celler. Man lar disse celler formere seg på en passende glassoverflate i et hvil-ket som helst av forskjellige medier for vevkultur. Den plate av dyrkede nyreceller som erholdes på denne måte podes så med 167 (1954)). Briefly, this method consists in first making a suspension of epithelial cells from monkey kidneys (See Dulbecco, Proe. Nat. Acad. Sei., 38, page 747 (1952)) by treating macerated kidney tissue from healthy Cyno-malgus or Rhesus monkeys with trypsin to remove excess material and release the individual cells. These cells are allowed to multiply on a suitable glass surface in any of the different media for tissue culture. The plate of cultured kidney cells obtained in this way is then inoculated with

en kultur av typen 1 (Mahoney strain) poliomyelittvirus og blandingen inkuberes ved a culture of type 1 (Mahoney strain) poliomyelitis virus and the mixture is incubated at

36—37° C inntil cellenes ødeleggelse er fullstendig og store mengder nytt virus er fri-gjort. Væsken inneholdende dette virus oppsamles og føres gjennom en søyle av ultrafin glassfritte. Filtratet inneholdende den levende poliomyelittvirus av typen 1 undersøkes på virusinnhold, bakteriesteri-litet og stammens renhet. 36-37° C until the destruction of the cells is complete and large amounts of new virus are released. The liquid containing this virus is collected and passed through a column of ultra-fine glass frit. The filtrate containing the live poliomyelitis virus of type 1 is examined for virus content, bacterial sterility and purity of the strain.

Et filtrat inneholdende poliomyelittvirus av type 2 (MEF-1 stamme) fremstilles ved hjelp av den ovenfor beskrevne metode for fremstilling av filtratet inneholdende poliomyelittvirus av type 1. Et filtrat inneholdende lavere poliomyelittvirus av type 3 (Saukett-stamme) fremstilles også ved hjelp av samme metode. A filtrate containing poliomyelitis virus of type 2 (MEF-1 strain) is prepared using the method described above for the preparation of the filtrate containing poliomyelitis virus of type 1. A filtrate containing lower poliomyelitis virus of type 3 (Saukett strain) is also prepared using the same method method.

De levende virus som er tilstede i de forskjellige filtrater inaktiveres ved tilset-ning av formaldehyd og inkubering av de resulterende adskilte blandinger i overens-stemmelse med den metode som er angitt i detaljer i «Amendment 2» til Minimum Requirements of Poliomyelitis Vaccine of-fentliggjort 20. mai 1954 av United States Departement of Health, Education and Walfare. Det tilsettes ikke natriumbisulfit for å nøytralisere overskuddet av formaldehyd. Omtrentlig like mengder av drepte poliomyelittvirusvaksiner av typene 1, 2 og 3 blandes og den resulterende blandede vaksine oppdeles i like store porsjoner som brukes ved fremstillingen av produktene ifølge oppfinnelsen. En porsjon bibeholdes i uforandret tilstand til bruk som kontroll-prøve. The live viruses present in the various filtrates are inactivated by the addition of formaldehyde and incubation of the resulting separated mixtures in accordance with the method detailed in "Amendment 2" to the Minimum Requirements of Poliomyelitis Vaccine of published May 20, 1954 by the United States Department of Health, Education and Welfare. No sodium bisulphite is added to neutralize the excess of formaldehyde. Approximately equal amounts of killed poliomyelitis virus vaccines of types 1, 2 and 3 are mixed and the resulting mixed vaccine is divided into equal portions used in the manufacture of the products of the invention. A portion is retained in an unchanged state for use as a control sample.

0,75 ml av en 1 %'s benzetonkloridopp-løsning tilsettes langsomt under moderat men effektiv omrøring til 150 ml kold vandig drept poliomyelittvaksine fremstillet som ovenfor angitt. Det resulterende pro-dukt fylles på ampuller i passende mengder til bruk ved immunisering. Dette poliomyelittvaksinepreparat som inneholder benzetonklorid i en konsentrasjon på 1 : 20 000 bibeholder sitt potensial under normale lagringsbetingelser (kjøleskaptemperatur) i minst 8 mndr. Preparatet forblir også fritt for forurensende bakterier, muggsopper og fungi under normale bruks- og lagringsbetingelser. 0.75 ml of a 1% benzethone chloride solution is added slowly with moderate but effective stirring to 150 ml of cold aqueous killed poliomyelitis vaccine prepared as above. The resulting product is filled into ampoules in suitable quantities for use in immunization. This poliomyelitis vaccine preparation, which contains benzethone chloride in a concentration of 1:20,000, maintains its potency under normal storage conditions (refrigerator temperature) for at least 8 months. The preparation also remains free of contaminating bacteria, molds and fungi under normal conditions of use and storage.

Bestemmelse av potensialet i kontroll-prøven og i vaksinepreparatet ifølge oppfinnelsen er angitt i den følgende tabell 1. Potensialet ble bestemt ved hjelp av den serumnøytralisasjonsmetode som er beskrevet av Salk, Younger and Ward, American Journal of Hygiene, 60, side 214, (1954). Resultatene er uttrykt som geometrisk middelverdi (mean titre). Kort beskrevet om-fatter denne metode podning av aper med tre doser på 1 cm<3> med vedkommende vaksine med mellomrom på en uke, uttagning av blod fra dyrene ved slutten av behand-lingsperioden, fremstilling av serum av det oppsamlede blod og bestemmelse av det antall antilegemer som er tilstede i serumet. Denne bestemmelse utføres ved i serier å fortynne serumet med saltoppløsning og å blande de fortynnede like store porsjoner med en standardisert oppløsning som inneholder et kjent antall infiserende enheter av vedkommende type av poliomyelittvirus. Når man f. eks. undersøker på type 1 potensial bruker man en standardisert oppløs-ning ineholdende et kjent antall enheter poliomyelittvirus av type 1. Ved bestemmelse av type 2 eller type 3 potensial bruker man en standardisert oppløsning av infiserende virus av type 2 eller type 3. Ti-treringens endepunkt er den fortynning ved hvilken serumet inneholder tilstrekke-lige antilegemer til nøyaktig å nøytralisere, dvs. forbinde seg med og overføre i ikke infiserende tilstand det kjente antall infiserende enheter av virus i den standardiserte oppløsning. Flere aper brukes ved be-stemmelsen av potensialet i hver enkelt type poliomyelittvirus. De således erholdte resultater overføres i en form som er be-kvem for sammenligning og statiske be-dømmelse ved å ta log på basis av 2 av endepunktsfortynningen for serumet fra hver ape, ta middeltallet av de således erholdte tall og derpå å ta antilog av dette middeltall. Dene antilog kalles den geometriske middelverdi (mean titre) for vaksinene og er selvfølgelig forskjellig for hver virustype som er tilstede i vaksinen. Da den geometriske middelverdi er avhengig av potensialet av den standardiserte oppløs-ning av infiserende poliomyelittvirus som er brukt ved bestemmelsene er det nødven-dig å spesifisere antallet infiserende enheter av poliomyelittvirus som er tilstede i den standardiserte oppløsning for å gjengi den riktige betydning av den geometriske middelverdi. Metoden til beregning av den geometriske middelverdi er angitt i detaljer i «Amendment nr. 2» Minimum Requirements of Poliomyelitis Vaccine som det er referert til i det foregående. Determination of the potency in the control sample and in the vaccine preparation according to the invention is indicated in the following table 1. The potency was determined by means of the serum neutralization method described by Salk, Younger and Ward, American Journal of Hygiene, 60, page 214, (1954 ). The results are expressed as geometric mean value (mean titre). Briefly described, this method includes inoculating monkeys with three doses of 1 cm<3> with the relevant vaccine at intervals of one week, taking blood from the animals at the end of the treatment period, producing serum from the collected blood and determining the number of antibodies present in the serum. This determination is carried out by serially diluting the serum with saline solution and mixing the diluted equal portions with a standardized solution containing a known number of infectious units of the relevant type of poliomyelitis virus. When you e.g. when examining type 1 potential, a standardized solution containing a known number of units of poliomyelitis virus of type 1 is used. When determining type 2 or type 3 potential, a standardized solution of infectious virus of type 2 or type 3 is used. The end point of the titration is the dilution at which the serum contains sufficient antibodies to exactly neutralize, i.e. associate with and transfer in a non-infectious state, the known number of infecting units of virus in the standardized solution. Several monkeys are used in the determination of the potential of each individual type of poliomyelitis virus. The results thus obtained are transferred in a form that is convenient for comparison and static assessment by taking the log on the basis of 2 of the endpoint dilution for the serum from each monkey, taking the mean of the numbers thus obtained and then taking the antilog of this mean number. The antilog is called the geometric mean value (mean titre) for the vaccines and is of course different for each virus type present in the vaccine. As the geometric mean value is dependent on the potential of the standardized solution of infectious poliomyelitis virus used in the determinations, it is necessary to specify the number of infectious units of poliomyelitis virus present in the standardized solution in order to reproduce the correct meaning of the geometric mean value. The method for calculating the geometric mean value is set out in detail in "Amendment no. 2" Minimum Requirements of Poliomyelitis Vaccine which is referred to above.

For å bestemme stabiliteten ved lagring av de antigene egenskaper hos vaksinepreparatet ifølge oppfinnelsen ble preparatet oppvarmet til 37° C i 1 uke og deretter lagret ved 4° C i 8 uker. Potensialet av hver virustype ble derpå bestemt som beskrevet ovenfor. Da oppvarmning i 1 uke til 37° C gir samme virkning på en vaksines potensial som lagring i 6 mndr. ved 4° C var altså de betingelser vaksinepreparatet ble prøvet under ekvivalente med 8 måneders lagring ved 4° C. Kontrollprøven ble lagret ved 4° C i 9 uker hvorpå hver virusstam-mes potensial ble bestemt som ovenfor beskrevet. To determine the storage stability of the antigenic properties of the vaccine preparation according to the invention, the preparation was heated to 37° C for 1 week and then stored at 4° C for 8 weeks. The potency of each virus type was then determined as described above. Since heating for 1 week to 37° C has the same effect on a vaccine's potential as storage for 6 months. at 4° C, the conditions under which the vaccine preparation was tested were equivalent to 8 months' storage at 4° C. The control sample was stored at 4° C for 9 weeks, after which the potential of each virus strain was determined as described above.

Som det vil fremgå av de foran anførte resultater bibeholdt vaksinepreparatet iføl-ge oppfinnelsen sitt potensial med hensyn til alle tre typer virus under betingelser som var ekvivalente med lagring ved 4° C i 8 mndr. I motsetning hertil taper vaksiner som er tilsatt tiomerosal som konserveringsmiddel fullstendig sitt potensial med hensyn til alle tre virustyper under samme lagringsbetingelser. Dette vises ved føl-gende prøver: En vaksine som er inaktivert med formaldehyd og som inneholder poliomyelittvirus av typene 1, 2 og 3 fremstilles som ovenfor beskrevet og deles opp i like store porsjoner. 1 porsjon holdes tilbake som kontrollprøve og til en annen porsjon tilsettes det tilstrekkelig tiomerosal til å bringe tiomerosalkonsentrasjonen på 1 : 100 000. Kontrollprøven og prøven inneholdende tiomerosalet oppvarmes til 37° C i 1 time, lagres ved 4° C i en uke, hvorpå potensialet av hver virustype bestemmes ved hjelp av den ovenfor beskrevne metode. De betingelser under hvilke disse prøver ble oppvarmet og lagret er ekvivalente med en lagring ved 4° C i omkring 6 mndr. Resultatene av potensialbestemmelsene er angitt i følgende tabell 2. As will be apparent from the above results, the vaccine preparation according to the invention retained its potential with respect to all three types of virus under conditions equivalent to storage at 4° C for 8 months. In contrast, vaccines to which thimerosal has been added as a preservative completely lose their potency against all three virus types under the same storage conditions. This is demonstrated by the following tests: A vaccine that is inactivated with formaldehyde and that contains poliomyelitis virus of types 1, 2 and 3 is prepared as described above and divided into equal parts portions. 1 portion is retained as a control sample and to another portion sufficient thimerosal is added to bring the thimerosal concentration to 1:100,000. The control sample and the sample containing the thimerosal are heated to 37° C for 1 hour, stored at 4° C for a week, after which the potential of each virus type is determined using the method described above. The conditions under which these samples were heated and stored are equivalent to storage at 4° C for around 6 months. The results of the potential determinations are shown in the following table 2.

Eksempel 2: En vaksine som er inaktivert med for- der benzetonklorid i en konsentrasjon på maldehyd og som inneholder poliomyelitt- 1 : 40 000 utgjør et vaksinepreparat ifølge virus av typene 1, 2 og 3 fremstilles som be- oppfinnelsen. Example 2: A vaccine which is inactivated with forder benzethone chloride in a concentration of malaldehyde and which contains poliomyelitis 1:40,000 constitutes a vaccine preparation according to viruses of types 1, 2 and 3 is prepared as the invention.

skrevet i eksempel 1 og deles op i like For å bestemme stabiliteten av dette store porsjoner. En porsjon holdes tilbake vaksinepreparats antigene egenskaper ble i uforandret tilstand til bruk som kontroll- preparatet lagret ved 4° C i 4 uker. Hver prøve. virustypes potensial ble derpå bestemt som written in example 1 and divided into equal To determine the stability of this large portions. A portion of the vaccine preparation's antigenic properties was kept unchanged for use as the control preparation stored at 4° C for 4 weeks. Each sample. The potential of the virus type was then determined as

En annen porsjon av vaksinen over- ovenfor beskrevet. Kontrollprøven ble på føres til et vaksinepreparat ifølge oppfin- samme tid lagret ved 4° C i 4 uker hvorpå nelsen ved dråpevis og i et tidsrom på om- potensialet av hver virustype i denne prøve kring 2 minutter å tilsette pr. liter vaksine ble bestemt som beskrevet ovenfor. Resul-5 ml. av en 1 : 200 oppløsning av benzeton- tåtet av disse potensialbestemmelser er an-klorid, koldt og under effektiv omrøring, gitt i tabell 3. Another portion of the vaccine described above. The control sample was added to a vaccine preparation according to the invention at the same time stored at 4° C for 4 weeks, after which the nelsen by dropwise and for a period of time on the potential of each virus type in this sample around 2 minutes to add per liters of vaccine was determined as described above. Resul-5 ml. of a 1 : 200 solution of benzetonate of these potential determinations is an chloride, cold and under efficient stirring, given in table 3.

Den resulterende oppløsning som innehol- The resulting solution containing

Til sammenligning er resultatene av bestemmelser av potensialet i en annen kontrollprøve og et annet vaksinepreparat ifølge oppfinnelsen angitt i følgende tabell 4. Vaksinepreparatet er her fremstillet ved hjelp av den foran beskrevne fremgangsmåte fra en vaksine forskjellig fra den i foregående forsøk anvendte og som er inaktivert med formaldehyd og inneholder poliomyelittvirus av typene 1, 2 og 3. For comparison, the results of determinations of the potential in another control sample and another vaccine preparation according to the invention are given in the following table 4. The vaccine preparation is here produced using the method described above from a vaccine different from the one used in the previous experiment and which is inactivated with formaldehyde and contains poliomyelitis virus types 1, 2 and 3.

Som det vil sees av de i tabellene 3 og 4 angitte resultater bibeholder vaksinepre-paratene ifølge oppfinnelsen, inneholdende benzetonklorid i en konsentrasjon på 1 : 40 000, sitt potensial med hensyn til alle tre virustyper etter lagring ved 4° C i 4 uker. Kontrollprøvene bibeholdt sitt potensial under samme lagringsbetingelser men var tilbøyelig til å bli forurenset med mugg-sopp og fungi. Som det også fremgår av tabellene er det ikke noen bemerkelses-verdig forskjell mellom potensialet av vak-sineproduktene inneholdende benzetonklorid og kontrollprøvenes potensial. As will be seen from the results given in Tables 3 and 4, the vaccine preparations according to the invention, containing benzethone chloride in a concentration of 1:40,000, retain their potential with regard to all three virus types after storage at 4° C for 4 weeks. The control samples retained their potential under the same storage conditions but were prone to contamination with molds and fungi. As also appears from the tables, there is no notable difference between the potential of the vaccine products containing benzethone chloride and the potential of the control samples.

Claims

Method for preserving poliomyelitis vaccine, characterized in that sufficient benzethone chloride is added to an aqueous solution containing at least one type of killed but antigenic poliomyelitis virus to obtain a solution containing benzethone chloride in a concentration in the range from 1:20,000 to 1:50,000, preferably 1:40,000.