NO115598B - - Google Patents

Description

Fremgangsmåte til fremstilling av et askorbinsyreholdig bakterisid virksomt stoff.

Den foreliggende oppfinnelse angår en

fremgangsmåte til fremstilling av et bakteriostatisk og bakterisid virksomt stoff,

som er oppbygget fra askorbinsyre og allerede anvendt i små doser kan oppvise store

bakteriside virkninger uten å fremkalle

skadelige bivirkninger i legemet, til for-skjell fra liknende kjente virksomme

stoffer.

Det er i og for seg kjent, at askorbinsyre som vitamin C har gode virkninger på

menneskers og dyrs kropp, og at den anvendt i store mengder er i stand til å ned-sette, til en viss grad, tilbøyeligheten til

inflammasjoner. Men vitamin C er over-ordentlig følsomt og er det av de kjente

vitaminer som lettest ødelegges. Dette gjel-der såvel hva angår de innflytelser som

organismen utøver på askorbinsyren som

også ytre innflytelser, som f. eks. kjemiske

angrep fra surstoff eller innvirkning av

forhøyet temperatur.

Den foreliggende oppfinnelse går ut

fra den erkjennelse, at der er mulig å sta-bilisere askorbinsyren, ikke bare mot ytre

kjemiske eller fysikalske påvirkninger, men

også mot for tidlig avbygning i organismen,

derved at man omsetter den med aminosyrer. Det har overraskende vist seg, at

askorbinsyrens omsetningsprodukter med

aminosyrer ikke er utsatt for så hurtig og

sterk avbygning i legemet som askorbinsyren alene er, og at de på grunn av sin

større bestandighet kan utøve sin virkning

der hvor de brukes av legemet til å hindre

skader eller til å bekjempe sykdommer.

Like litet kunne man forutse det, som er

blitt bevist ved dyreforsøk, at allerede til-føring av små mengder, f. eks. av 0.03 til

mg pr. mus, av disse omsetningsprodukter

av askorbinsyre med aminosyrer ville være tilstrekkelig til å gi terapeutiske virkninger er like store eller endog langt bedre enn de som oppnås med de kjente bakteriside helbredelsesmidler, som f. eks. sulfonami-der eller antibiotika. Det dreier seg altså her om en utpreget potensert virkning, som hverken kan oppnås ved å anvende komponentene samtidig eller etter hverandre,

f. eks. ved å applikere rene blandinger. Som

særlig fordel må imidlertid fremheves at anvendelsen av de i henhold til oppfinnelsen fremstilte 'omsetningsprodukter ikke medfører noen skadelige bivirkninger, som

f. eks. blodbeskadigelser, skader på tarm-floraen, allergiske foreteelser eller derma-tider. *

I henhold til fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen blir de beskrevne virksomme stoffer fremstilt på den måte at askorbinsyre eller dennes derivater eller salter omsettes i et flytende medium med aminosyrer, disses salter eller derivater i disper-sjon og/eller oppløsning, og at reaksjonsproduktet skilles fra reaksjonsblandingen. For å få en hurtig og fullstendig omsetning til meget virksomme produkter fore-trekkes det å arbeide ved forhøyet temperatur, f. eks. ved mellom 30° og 130°, spesielt ved 35—80°. Man kan, som nevnt, føre

reaksjonskomponentene, der som regel er

vannoppløselige, sammen i vandig medium.

Det er dog også mulig å benytte organiske

væsker og å anvende den ene eller den annen komponent i form av findelt disper-sjon. Hvis man f. eks. går ut fra natrium - askorbinat arbeider man hensiktsmessig i alkoholisk suspensjon.

Omsetningsbetingelsene kan velges slik at reaksjonen går i retning av dannelse av et salt, f. eks. av et komplekssalt. Men da imidlertid produkter med en esteraktig binding av komponentene har vist seg over-legne med hensyn til sin virkning, vil man fortrinnsvis arbeide på å oppå en forestring derved at man, i henhold til en fordelaktig utførelsesform av oppfinnelsen, foretar omsetningen-i nærvær av stoffer som befor-drer forestring. Til dette kommer særlig til-setninger av tionylklorid eller borttrifluorid i betraktning.

Atskillelsen av reaksjonsproduktet fra reaksjonsblandingen kan skje ved delvis eller fullstendig bortdampning av oppløs-nings- resp. dispergeringsmidlet, eventuelt med etterfølgende krystallisering, hvorun-der man man kan befordre eller fullsten-diggjøre utskillelsen av det faste reaksjons-produkt spesielt ved tilsetning av organiske væsker, som eter eller petroleter.

Da askorbinsyren etter omsetning med aminosyre har øket stabilitet like over for ytre og organiske innflytelser er det fordelaktig å foreta omsetningen under utelukkelse av surstoff, f. eks. ved å utføre reaksjonen i en kvelstof f atmosfære eller ved å lede kvelstof f gjennom den flytende reak-sjonsblanding.

Som annen reaksjonskomponent vil man frem for alt velge aminosyrer der som eggehvitebyggestener tilhører kroppen og derfor kan ansees som spesielt kroppsvenn-lige. På denne måte kan man naturligvis også forbinde ønskede bivirkninger, med hensyn til aminosyrehusholdningen, med den bakteriostatiske eller bakteriside an-vendelse av det virksomme stoff.

Hva disse sistnevnte virkninger angår viser særlig aminosyrer som har en eller flere svovelholdige grupper i molekylet seg fordelaktige. Muligens kan disses utmer-kede egenhet, som særlig viser seg ved aminosyrer som inneholder sulfhydrylgrupper, føres tilbake til at svovelinnholdet hindrer eller iallfall forsinker den avbygning som fremkalles av fermentet askor-binase.

Blant de for fremgangsmåten i henhold til oppfinnelsen på tale kommende aminosyrer kan som eksempler nevnes gly-kokoll, alanin, glutaminsyre og fortrinnsvis metionin, acetylmetionin, etionin, cystin, frem for alt cystein, samt glutation eller homocystein. Selvfølgelig kan man også gå ut fra blandinger av disse eller andre aminosyrer. Som allerede nevnt kan man til reaksjonen anvende syrene som sådanne eller også form av deres derivater eller salter.. Det har dog vist seg, at for mange aminosyrers vedkommende forløper reaksjonen glattest hvis de først omdannes til syreklorid og deretter, eventuelt i nærvær av halogenavspaltende midler som f. eks. natriumkarbonat eller pyridin, omsettes med askorbinsyre eller natriumaskorbinat.

I stedet for askorbinsyre kan man også som nevnt, anvende dennes salter, eller derivater i hvilke minst endiolgruppen er til stede.

Forholdet mellom aminosyrekompo-nenten og askorbinsyrekomponenten kan variere -innenfor visse grenser. Det kan brukes i ekvimolekylære mengder, men holder dem fortrinnsvis innenfor mol-forhold mellom 2 : 1 og 1 : 2.

Eksempel 1:

3,52 deler vannfri askorbinsyre og 3,15 deler vannfritt cysteinhydroklorid løses i varme opp i 40 deler absolutt alkohol under en kvelstof f atmosfære. Etter avkjøling til romtemperatur tilsettes 0,2 deler nydestillert tionylklorid. Deretter får blan-dingen stå i 24 timer. Under nedsatt trykk inndamper man til et volum av ca. 25 deler hvoretter man feller ved hjelp av 250 deler tørket eter. Utfellingen er først oljeaktig men stivner etter noen tids forløp til en krystallinsk masse. Utfellingen filtreres fra og tørkes. Utbyttet er nesten kvantita-tivt.

Eksempel 2:

3,52 deler askorbinsyre og 3,15 deler vannfritt cysteinhydroklorid løses varmt opp i 40 deler absolutt alkohol. Etter av-kjøling innledes det ca. 0,3 deler bortrifluorid. Den videre opparbeidelse skjer som i eksempel 1.

Eksempel 3:

1 del vannfritt cysteinhydroklorid og 8 deler vannfri askorbinsyre blir i en kvelstoffatmosfære overhelt med 25 deler aceton, og det tilsettes 0,1 deler tionylklorid. Deretter får det hele stå 48 timer i mørkt rom ved romtemperatur. Derpå filtrerer man og utfellingen vaskes med litt aceton, mens filtratet felles med 150 deler absolutt eter. Etter 24 timers forløp er utfellingen blitt krystallinsk. Oppløsningsmidlet suges fra og utfellingen vaskes med litt eter.

Eksempel 4:

3,15 deler vannfritt cysteinhydroklorid. og 4 deler natriumaskorbinat tilsettes i en

kvelstoffatmosfære 500 deler absolutt alkohol, og opphetes i 20 minutter ved 37°. Det

ikke oppløste filtreres fra, filtratet får stå natten over i et kjøleskap, og blir den føl-gende dag inndampet i vakuum til 75 deler. Den dannede utfelning filtreres fra og filtratet tilsettes 200 deler eter. Etter kort henstand blir den dannede utfelning filtrert fra og tørket.

Eksempel 5:

Til 3,1 deler finpulverisert, vannfritt cysteinhydroklorid blir det ved 20° i løpet av 10 min. dråpevis tilsatt 6—8 deler meget rent, nydestillert tionylklorid. Deretter oppvarmer man til 37° på vannbad. I løpet av 25—30 minutter er gassutviklingen som oppstår avsluttet. For å fullstendiggjøre reaksjonen ryster man i 3—4 timer, og det erholdte produkt vaskes med tørr petroleter. Restene av petroleter fjernes i vakuum, og 1,5 deler av det således erholdte produkt tilsettes 2 deler natriumaskorbinat, som først er blitt fint suspendert i 250 deler absolutt alkohol. Reaksjonsblandingen om-røres i 1 time 40—45° under en kvelstoffatmosfære. Neste dag fradekanteres ut-felningen, og alkoholen avdestilleres i vakuum ved 25—30°. Når oppløsningen begynner å bli uklar feller man med tørr eter, og det fraskilte felningsprodukt om-krystalliseres fra absolutt alkohol.

Eksempel 6:

3,15 deler cysteinhydroklorid løses opp i 3,2 deler vann og tilsettes en oppløsning av 3,96 deler natriumaskorbinat som er løst opp i 4,8 deler vann. Deretter tilsettes 200 deler absolutt alkohol og man inndamper ved ca. 40° i et av en vannstrålepumpe frembragt vakuum til 20 deler oppløsning. Resten tilsettes 100 deler tørr eter. Det hele stilles i isskap og den neste dag frafiltreres den dannede utfelning. Denne vaskes med litt eter, pulveriseres og tørkes.

Eksempel 7:

3,96 deler pulverisert og tørket natriumaskorbinat blandes med 3,15 deler pulverisert og tørket cysteinhydroklorid og 150 deler tørket kloroform, og opphetes 5 timer med tilbakeløpskjøling. Deretter blir kloroformen avdestillert, tilslutt under nedsatt trykk. Resten pulveriseres og tørkes.

Eksempel 8:

3,22 g omhyggelig tørket cysteinhydroklorid løses under omrøring opp i 400 ml absolutt etylalkohol. Ved en temperatur av

40° tilsetter man en suspensjon av 3,96 g natriumaskorbinat i 100 ml absolutt etylalkohol, rører om 2y2 time ved 40° C i en kvelstoffatmosfære, og lar det hele stå natten over ved romtemperatur. Deretter frafiltrerer man en utfelning på 1,7 g, som overveiende består av natriumklorid. Filtratet inndampes ved svakt vakuum og en temperatur av ikke over 40° under innled-ning av kvelstoff til et volum av ca. 130 ml, hvorved oppløsningen begynner å bli uklar, hvoretter det tilsettes 260 ml tørr eter og man lar det hele stå 10 timer i kjøleskap. Den derved dannede hvite utfelning veier ca. 1,6 g, er lett oppløselig i vann og litet oppløselig i de fleste organiske oppløsnings-midler. Ved analyttisk undersøkelse finner man et litet, vanskelig fraskillbart innhold av natriumklorid, og som hovedprodukt en forbindelse av to utgangskomponenter askorbinsyre og cystein. Det i henhold til oppfinnelsen utvundne stoffs ultrafiolett-spektrum har et skarpt maksimum ved 245 mj.i.

Eksempel 9:

1,49 g finpulverisert metionin tilsettes 200 ml absolutt etylalkohol og bringes i oppløsning ved tilsetning av ytterligere, i alt 0,36 g klorvannstoff inneholdende 20 ml etylalkohol under rystning og svak opp-varming. Den ennå ca. 40° varme oppløs-ning tilsettes en suspensjon av 1,98 g natriumaskorbinat i 20 ml absolutt alkohol, og etter at det i beholderen værende surstoff er blitt fortrengt ved tilføring av tørt, rent kvelstoff, ryster man det hele i 40 min. ved en temperatur av 40° C. Etter avkjø-ling frafiltreres det uoppløste, filtratet inndampes i svakt vakuum til 75 ml, hvoretter man tilsetter 250 ml tørr eter og lar det hele stå 48 timer i kjøleskap. Det har da skilt seg ut 0,7 g fine, skålformede farge-løse krystaller, som ved opphetning til over 200° brunes lett, men ennå ikke er smeltet ved 260° C. Den erholdte forbindelses innhold av kvelstoff er 4,5 pst. og av svovel 10,3 pst.

Eksempel 10:

På den måte som beskrives av S. Levine i I. Am. Chem. Soc, 76, 1382 (1954) blir det av metion og fosforpentaklorid i tetraklor-kullstoff fremstilt metionin-syreklorid-hydroklorid. 1,92 av denne sterkt hygro-skopiske forbindelse utslemmes, under utelukkelse av fuktighet i 100 ml tørr eter, hvoretter man tilsetter en suspensjon av 1,98 g natriumaskorbinat i 100 ml eter, og går videre frem på den i eksempel 1 og 2

beskrevne måte. Etter rensning får man

i vann oppløselige, fargeløse prismer hvis

innhold av svovel på 9,1 pst. og kvelstoff

på 4,2 pst. vil svare til en bruttoformel av

CioHisOtNS . HC1.

Med de i henhold til de foran stående

eksempler angitte produkter ble det fore-tatt en større rekke av sammenliknende

forsøk utført på dyr. Til disse forsøk ble

det anvendt meget virulente, fra mennesker

stammende kulturer av de følgende bak-teriearter, etter at disse — for å øke viru-lensen — dessuten var blitt benyttet gjennom fem forutgående dyreforsøk.

Pneumococcus, streptococcus haemo-lyticus, staphylococcus pyogenes (haemo-lyticus og bacterium coli haemolyticum.

Det dreier seg delvis om staftylcoccus,

Oxfordstamme, og om streptococcus haemo-lyticus Aronson. Mus (kontrolldyr og for-søksdyr) ble infisert intraperitonalt med

disse bakterier, hver gang med 3 tilførsler.

Forsøksdyrene fikk; etter forskjellige tids-avsnitt (opp til 4y2 time etter infeksjonen)

bare en tilføring av behandlingsmediet, og

da etterhvert som tiden gikk stigende fra

0,5 til 5 mg i 0,3 ml fysiologisk koksaltopp-løsning. De ubehandlede kontrolldyr døde,

mens de som var behandlet med produkter

i henhold til oppfinnelsen alle overlevet

uten å ha lidd noen erkjennbar skade.

Claims (9)

1. Fremgangsmåte til fremstilling av et askorbinsyreholdig bakteriostatisk til bakterisid virksomt stoff, karakterisert ved at askorbinsyre, dennes derivater eller dens salter omsettes med, spesielt legemsegne aminosyrer, disses derivater eller salter, fortrinnsvis i oppløsning, og at reaksjonsproduktet isoleres i fast form fra reaksjonsblandingen, eventuelt under tilsetning av organiske felningsmidler, som f. eks. eter.

2. Fremgangsmåte ifølge påstand 1, karakterisert ved at omsetningen foretas ved forhøyet temperatur, f. eks. mellom 30 og 130°, fortrinnsvis ved mellom 35 og 80°.

3. Fremgangsmåte ifølge påstand 1 eller 2, karakterisert ved at omsetningen foretas under forestring av komponentene, fortrinnsvis i nærvær av stoffer der, som syrer, tionylklorid eller bortrifluorid, be-fordrer esterdannelsen.

4. Fremgangsmåte ifølge påstand 1—3, karakterisert ved at omsetningen foretas ved praktisk talt utelukkelse av surstoff, f. eks. under tørt kvelstoff.

5. Fremgangsmåte ifølge påstand 1—4, karakterisert ved at det benyttes svovelholdige aminosyrer, fortrinnsvis slike som inneholder sulfhydrylgrupper.

6. Fremgangsmåte ifølge påstand 1—5, karakterisert ved at det som aminosyre anvendes cystein eller derivater derav.

7. Fremgangsmåte ifølge påstand 1—5, karakterisert ved at aminosyrene anvendes i form av deres syreklorider, eventuelt i nærvær av halogenavspaltende midler som f. eks. natriumkarbonat eller pyridin.

8. Fremgangsmåte ifølge påstand 1—7, karakterisert ved at de nevnte komponen-ter askorbinsyre og aminosyre omsettes i mol-forhold mellom 2:1 og 1:2.

9. Fremgangsmåte ifølge påstand 1—8, karakterisert ved at blandinger av aminosyrer omsettes med askorbinsyre.