NL9001137A - METHOD FOR LABELING AMINO GROUPS CONTAINING SUBSTANCES WITH 99MTC AND EQUIPMENT FOR CARRYING OUT THIS METHOD - Google Patents
METHOD FOR LABELING AMINO GROUPS CONTAINING SUBSTANCES WITH 99MTC AND EQUIPMENT FOR CARRYING OUT THIS METHOD Download PDFInfo
- Publication number
- NL9001137A NL9001137A NL9001137A NL9001137A NL9001137A NL 9001137 A NL9001137 A NL 9001137A NL 9001137 A NL9001137 A NL 9001137A NL 9001137 A NL9001137 A NL 9001137A NL 9001137 A NL9001137 A NL 9001137A
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- labeling
- labeled
- ions
- borohydride
- substance
- Prior art date
Links
- 238000002372 labelling Methods 0.000 title claims description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 27
- 239000000126 substance Substances 0.000 title claims description 18
- -1 AMINO GROUPS Chemical group 0.000 title 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 20
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 20
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 15
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 13
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 6
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 claims description 5
- 239000011363 dried mixture Substances 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- IUTCEZPPWBHGIX-UHFFFAOYSA-N tin(2+) Chemical class [Sn+2] IUTCEZPPWBHGIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000009206 nuclear medicine Methods 0.000 description 5
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 3
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 3
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 2
- GKLVYJBZJHMRIY-OUBTZVSYSA-N Technetium-99 Chemical compound [99Tc] GKLVYJBZJHMRIY-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 2
- VEJXYBLYLRPHPK-UHFFFAOYSA-N [Mo].[Tc] Chemical compound [Mo].[Tc] VEJXYBLYLRPHPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 229910000105 potassium hydride Inorganic materials 0.000 description 2
- IWZKICVEHNUQTL-UHFFFAOYSA-M potassium hydrogen phthalate Chemical compound [K+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C([O-])=O IWZKICVEHNUQTL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- LJCNRYVRMXRIQR-OLXYHTOASA-L potassium sodium L-tartrate Chemical compound [Na+].[K+].[O-]C(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O LJCNRYVRMXRIQR-OLXYHTOASA-L 0.000 description 2
- 229940074439 potassium sodium tartrate Drugs 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 235000011006 sodium potassium tartrate Nutrition 0.000 description 2
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000557626 Corvus corax Species 0.000 description 1
- XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N Cyanide Chemical compound N#[C-] XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 229910021626 Tin(II) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 229940106780 human fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000037081 physical activity Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 description 1
- 239000012217 radiopharmaceutical Substances 0.000 description 1
- 229940121896 radiopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000002799 radiopharmaceutical effect Effects 0.000 description 1
- 239000012048 reactive intermediate Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 235000011150 stannous chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910052713 technetium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940056501 technetium 99m Drugs 0.000 description 1
- GKLVYJBZJHMRIY-UHFFFAOYSA-N technetium atom Chemical compound [Tc] GKLVYJBZJHMRIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
- AXZWODMDQAVCJE-UHFFFAOYSA-L tin(II) chloride (anhydrous) Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Sn+2] AXZWODMDQAVCJE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/12—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by a special physical form, e.g. emulsion, microcapsules, liposomes, characterized by a special physical form, e.g. emulsions, dispersions, microcapsules
- A61K51/1203—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by a special physical form, e.g. emulsion, microcapsules, liposomes, characterized by a special physical form, e.g. emulsions, dispersions, microcapsules in a form not provided for by groups A61K51/1206 - A61K51/1296, e.g. cells, cell fragments, viruses, virus capsides, ghosts, red blood cells, viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
- C07B59/00—Introduction of isotopes of elements into organic compounds ; Labelled organic compounds per se
- C07B59/004—Acyclic, carbocyclic or heterocyclic compounds containing elements other than carbon, hydrogen, halogen, oxygen, nitrogen, sulfur, selenium or tellurium
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F13/00—Compounds containing elements of Groups 7 or 17 of the Periodic Table
- C07F13/005—Compounds without a metal-carbon linkage
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2123/00—Preparations for testing in vivo
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Werkwijze voor het labellen van aminogroepen bevattende stoffen met 99mTc alsmede uitrusting voor het uitvoeren van deze werkwijze.Method for labeling amino group-containing substances with 99mTc as well as equipment for carrying out this method.
De uitvinding heeft betrekking op een werkwijze voor het labellen van stoffen, die een of meer aminogroepen bevatten met een radio-iso-toop, waarbij de te labellen stof bij aanwezigheid van een reductor wordt verenigd met 99mxcoj|-ionen.The invention relates to a method for labeling substances containing one or more amino groups with a radioisotope, in which the substance to be labeled is combined with 99m xCO3 ions in the presence of a reducing agent.
Onder "radio-isotoop" wordt hierbij een radio-actief deeltje verstaan, dat afkomstig is van het gebruikte radio-aktieve pertech-netaat.The term "radioisotope" is here understood to mean a radioactive particle originating from the radioactive pertech netate used.
De in de nucleaire geneeskunde gebruikte labelling van stoffen met het radionuclide Technetium 99® is bijvoorbeeld bekend uit The Journal of Nuclear Medicine, No. 11 (1970), biz. 1^7, ibid No. 23 (1982), biz. IOII-IOI9 en het boek "Technetium in Chemistry and Nuclear Medicine" geredigeerd door M. Nicolini et al., uitgegeven door Raven Press, N.Y., I98O. Technetium-99m is relatief goedkoop, kan eenvoudig worden verkregen en heeft een korte halfwaardetijd van 6 uur. De foto-energie van de gammastraling is l40 keV en er wordt geen ß-straling uitgezonden. Hierdoor wordt de stralingsbelasting voor de patiënt tot een minimum beperkt.For example, the labeling of substances with the radionuclide Technetium 99® used in nuclear medicine is known from The Journal of Nuclear Medicine, No. 11 (1970), biz. 1 ^ 7, ibid no. 23 (1982), biz. IOII-IOI9 and the book "Technetium in Chemistry and Nuclear Medicine" edited by M. Nicolini et al., Published by Raven Press, N.Y., I98O. Technetium-99m is relatively inexpensive, easy to obtain, and has a short half-life of 6 hours. The photo-energy of the gamma radiation is 140 keV and no ß radiation is emitted. This keeps the radiation burden on the patient to a minimum.
Het labellen met 99mxc Wordt in de biomedische wetenschap gebruikt voor bijvoorbeeld eiwitten zoals monoclonale antilichamen, die bijzonder nuttig zijn voor vele diagnostische en therapeutische toepassingen vanwege hun speciale biologische activiteit en hun specifieke affiniteit voor bepaalde antigene determinanten die in weefsels en in organen in specifieke cellen worden aangetroffen.Labeling with 99mxc Used in biomedical science for proteins such as monoclonal antibodies, for example, which are particularly useful for many diagnostic and therapeutic applications due to their special biological activity and their specific affinity for certain antigenic determinants found in tissues and organs in specific cells found.
De labellingsmethode moet verenigbaar zijn met de biologische en fysische activiteit van het eiwit; de gebruikte chemicaliën moeten bij voorkeur niet-toxisch zijn en de methode moet bij voorkeur eenvoudig uitvoerbaar zijn en zich liefst lenen tot een presentatie als een "instant kit".The labeling method must be compatible with the biological and physical activity of the protein; the chemicals used should preferably be non-toxic and the method should preferably be simple to perform and most preferably lend itself to a presentation as an "instant kit".
In de internationale octrooiaanvrage WO 86/O3OIO wordt een werkwijze beschreven voor het labellen van aminogroepen bevattende verbindingen met 99mTc, waarbij 99mTcOIj-ionen in zuur milieu worden omgezet met een amine of amide, waarbij een reactief intermediair wordt gevormd, dat men vervolgens laat reageren met de te labellen verbinding. Daarbij wordt de eerste reactie bij een betrekkelijk hoge temperatuur, bijvoorbeeld 1^0 C en gedurende een betrekkelijk lange tijd, bijvoorbeeld 4 uur uitgevoerd. Hoewel de labellingsefficiëntie bevredigend is, vormen de betrekkelijk hoge temperatuur en de betrekkelijk lange reactietijd een ernstig nadeel.International patent application WO 86 / O3O10 describes a method for labeling amino group-containing compounds with 99mTc, wherein 99mTcOI ions are reacted in an acid medium with an amine or amide to form a reactive intermediate which is then reacted with the connection to be labeled. In addition, the first reaction is carried out at a relatively high temperature, for example 10 ° C and for a relatively long time, for example 4 hours. Although the labeling efficiency is satisfactory, the relatively high temperature and relatively long reaction time are a serious drawback.
Volgens de uitvinding werd gevonden, dat dit nadeel kan worden opgeheven door een werkwijze als in de aanhef genoemd, die wordt gekenmerkt doordat men als reductor tenminste een boorhydride toepast.According to the invention it has been found that this drawback can be overcome by a method as mentioned in the preamble, which is characterized in that at least a borohydride is used as the reducing agent.
Voorbeelden van boorhydriden, die geschikt zijn voor toepassing bij de werkwijze van de uitvinding, zijn kalium- en natriumboorhydride (NaBH||) en kalium- en natriumboorhydridecyanide (NaBH^CN). De eerstgenoemde stoffen verdienen de voorkeur, omdat daarmee bijzonder hoge waarden van de labellingsefficiëntie kunnen worden verkregen. In principe kunnen echter alle stoffen worden gebruikt, die boorhydride-ionen leveren.Examples of borohydrides suitable for use in the method of the invention are potassium and sodium borohydride (NaBH ||) and potassium and sodium borohydride cyanide (NaBH 2 CN). The former are preferred, because particularly high labeling efficiency values can be obtained. In principle, however, all substances that provide borohydride ions can be used.
De werkwijze volgens de uitvinding is bijzonder efficiënt, indien als reductor tevens Sn2+-ionen (die bijvoorbeeld afkomstig zijn van tin-(II)chloride) aanwezig zijn. Indien Sn2+-ionen worden toegepast, kan de efficiëntie van de labelling aanzienlijk worden verbeterd. Deze is bijvoorbeeld een factor 10-100 maal beter dan zonder de toepassing van Sn2+ -ionen.The process according to the invention is particularly efficient if Sn2 + ions (which originate, for example, from tin (II) chloride) are present as the reducing agent. If Sn2 + ions are used, labeling efficiency can be significantly improved. This is, for example, a factor of 10-100 times better than without the use of Sn2 + ions.
De temperatuur is bij de labellingsreactie volgens de uitvinding niet kritisch. Bij voorkeur wordt dan ook de temperatuur aangehouden van de ruimte, waarin men werkt. In het algemeen zal deze temperatuur 15~ 25°C bedragen.The temperature is not critical in the labeling reaction according to the invention. Preferably, therefore, the temperature of the room in which one works is maintained. In general, this temperature will be 15 ~ 25 ° C.
De voorkeur verdient een uitvoeringsvorm van de werkwijze volgens de uitvinding, waarbij per 0,1 mg van de te labellen stof een hoeveelheid van 0 - 0,5 yg Sn2+-ionen en 0,01 - 1 yg boorhydride wordt gebruikt.An embodiment of the method according to the invention is preferred, in which an amount of 0 - 0.5 µg Sn 2+ ions and 0.01 - 1 µg borohydride is used per 0.1 mg of the substance to be labeled.
Ook de pH van de gekozen oplossingen kan binnen een ruim gebied variëren. In het algemeen verdient het echter de voorkeur, dat - de te labellen stof aanwezig is in een waterig milieu met een pH in het gebied van 3-H, - de te gebruiken 99ni'pC0/J-ionen aanwezig zijn in een oplossing met een pH in het gebied van 4,5~7.5t - de eventueel toe te passen Sn2+-ionen aanwezig zijn in een oplossing met een pH in het gebied van O-7, - de uiteindelijke oplossing van de gelabelde stof een pH in het gebied van 5-10 bezit.The pH of the chosen solutions can also vary within a wide range. In general, however, it is preferable that - the substance to be labeled is present in an aqueous medium with a pH in the range of 3-H, - the 99 niPCO / J ions to be used are present in a solution with a pH in the range of 4.5 ~ 7.5t - any Sn2 + ions to be used are present in a solution with a pH in the range of O-7, - the final solution of the labeled substance has a pH in the range of 5-10.
De labellingsreactie zal in het algemeen in een gebufferde oplossing worden uitgevoerd.The labeling reaction will generally be performed in a buffered solution.
Het de werkwijze volgens de uitvinding kunnen eiwitten worden gelabeld met behoud van functionele eigenschappen. Zo zullen bijvoorbeeld bij antilichamen de immuno-diagnostische eigenschappen, bij enzymen de enzymatische eigenschappen en bijhormonen de hormonale eigenschappen behouden blijven.In the method of the invention, proteins can be labeled while retaining functional properties. For example, with antibodies the immuno-diagnostic properties, with enzymes the enzymatic properties and with hormones the hormonal properties will be preserved.
De gelabelde eiwitten kunnen niet-toxisch, pyrogeenvrij en steriel worden bereid. Dit is van belang, vooral wanneer het gelabelde eiwit in vivo moet worden gebruikt. In dat geval mag de labelling uiteraard geen nadelige invloed hebben op de biologische eigenschappen van het eiwit.The labeled proteins can be prepared non-toxic, pyrogen-free and sterile. This is important, especially when the labeled protein is to be used in vivo. In that case, the labeling should of course not adversely affect the biological properties of the protein.
Zoals reeds is vermeld verdient natriumboorhydride in het bijzonder de voorkeur bij de in één stap uitgevoerde labellingsmethode volgens de uitvinding. Een hoge inbouw (bijvoorbeeld 95 %) van het label is bereikbaar.As already mentioned, sodium borohydride is particularly preferred in the one-step labeling method of the invention. A high build-in (for example 95%) of the label is achievable.
De werkwijze volgens de uitvinding is speciaal van belang voor het labellen van biologisch aktieve eiwitten in de nucleaire geneeskunde, waarbij radiofarmaca aan patiënten worden toegediend voor diagnostische doeleinden. Op grond van een (soms) tijdsafhankelijk ver-delingspatroon kan een diagnose worden gesteld of een diagnose worden ondersteund.The method according to the invention is of special importance for the labeling of biologically active proteins in nuclear medicine, in which radiopharmaceuticals are administered to patients for diagnostic purposes. Based on a (sometimes) time-dependent distribution pattern, a diagnosis can be made or a diagnosis supported.
Het verdelingspatroon in het lichaam wordt geregistreerd met daartoe geschikte instrumenten, die beelden of scintigrammen weergeven. Het gebruikte 99mTc-label heeft het belangrijke voordeel dat de half-waardetijd relatief kort is, hetgeen een onnodige stralingsbelasting voorkomt.The distribution pattern in the body is registered with appropriate instruments, which display images or scintigrams. The 99mTc label used has the important advantage that the half-life is relatively short, which prevents unnecessary radiation exposure.
De werkwijze volgens de uitvinding kan ook worden gebruikt voor het labellen van andere stoffen dan eiwitten mits deze aminogroepen bevatten. Voorbeelden zijn aminozuren, nucleotiden en aminogroepen bevattende geneesmiddelen, die nuttig kunnen zijn in de nucleaire geneeskunde.The method of the invention can also be used to label substances other than proteins, provided they contain amino groups. Examples are drugs containing amino acids, nucleotides and amino groups, which may be useful in nuclear medicine.
De uitvinding betreft eveneens een uitrusting voor het uitvoeren van de werkwijze volgens de uitvinding, welke tenminste omvat: een houder, die een gevriesdroogd mengsel van boorhydride, een tin(II)-zout en een buffer bevat.The invention also relates to equipment for carrying out the method according to the invention, which at least comprises: a container containing a freeze-dried mixture of borohydride, a tin (II) salt and a buffer.
De uitvinding betreft voorts een gevriesdroogd mengsel van boorhydride, een tin(II)zout en een buffer. Met behulp van dit mengsel c.q. de bovengenoemde uitrusting kan de labelling op eenvoudige en doelmatige wijze worden uitgevoerd.The invention further relates to a freeze-dried mixture of borohydride, a tin (II) salt and a buffer. Labeling can be carried out in a simple and efficient manner with the aid of this mixture or the aforementioned equipment.
De werkwijze volgens de uitvinding wordt nader toegelicht in de volgende voorbeelden, die geen beperking van de omvang van de uitvinding inhouden.The method of the invention is further illustrated in the following examples, which do not limit the scope of the invention.
Voorbeeld IExample I
De reactie van 99“ic met het eiwit vindt plaats als volgt en onder de aangegeven reactieomstandigheden.The reaction of 99% ic with the protein takes place as follows and under the indicated reaction conditions.
eiwit + 99mxcoij + boorhydride + Sn^+ - eiwit gelabeld met 99®xc kamertemperatuur gedurende 15 minutenprotein + 99mxcoij + borohydride + Sn ^ + - protein labeled with 99®xc room temperature for 15 minutes
De reactie wordt uitgevoerd bij kamertemperatuur (15-25eC).The reaction is carried out at room temperature (15-25 ° C).
De volgende variabelen werden onderzocht en, voor zover van toepassing, geoptimaliseerd voor in het bijzonder een humaan immuun-globulinepreparaat: 1. de zuurgraad waarbij de reactie wordt uitgevoerd, 2. de concentraties van het boorhydride en Sn^+, 3· de eiwitconcentratie, 4. de reactietijd, 5. de reactietemperatuur.The following variables were investigated and optimized, where appropriate, for a human immune globulin preparation in particular: 1. the acidity at which the reaction is carried out, 2. the concentrations of the borohydride and Sn ^ +, 3. the protein concentration, 4. the reaction time; 5. the reaction temperature.
Het 99mXcOij -ion is steeds "carrier-free” of in "tracer"hoeveelheden aanwezig en is geen belangrijke reactieparameter.The 99mXcOij ion is always present "carrier-free" or in "tracer" amounts and is not an important reaction parameter.
Goede resultaten, waarbij meer dan 95 % van het toegevoegde 99“xc teruggevonden wordt als label gebonden aan het eiwit, kunnen worden verkregen wanneer het reactiemengsel bestaat uit - 0,1-1 mg eiwit in 0,1-0,5 ml 0,15 M NaCl - 0,2-1 pg Sn^+ toegevoegd als een oplossing in een buffer, bestaande uit kalium-waterstofftalaat (40 mM) en kaliumnatriumtartraat (10 mM) met pH=5,6. De concentratie van Sn^+ in de buffer is bij voorkeur 1 mg/ml. Bij voorkeur wordt SnCl2.2H20 gebruikt, - 0,5~1 pg NaBH/|, toegevoegd als oplossing van 1 mg/ml in 0,05 N NaOH, - 100 pl 99mXcO/poplossing, zoals verkregen uit een molybdeen-technetium generator (een zogenaamde "Cow").Good results, with more than 95% of the added 99 “xc recovered as a label bound to the protein, can be obtained when the reaction mixture consists of - 0.1-1 mg protein in 0.1-0.5 ml 0, 15 M NaCl - 0.2-1 µg Sn ^ + added as a solution in a buffer consisting of potassium hydrogen phthalate (40 mM) and potassium sodium tartrate (10 mM) with pH = 5.6. The concentration of Sn 2+ in the buffer is preferably 1 mg / ml. Preferably, SnCl2.2H20 is used, - 0.5 ~ 1 µg NaBH / |, added as a solution of 1 mg / ml in 0.05 N NaOH, - 100 µl 99mXcO / pop solution, as obtained from a molybdenum technetium generator ( a so-called "Cow").
De labelingsefficiëntie van de gevolgde methode werd bepaald door middel van gelfiltratie op een 10 cm lange kolom van Sephadex G50 met 0,15 M NaCl als eluens (het gelabelde eiwit elueert op het dode volume); via precipitatie met trichloorazijnzuur, waarbij het gelabelde eiwit neerslaat; via autoradiografie na elektroforese, waarbij een eerste globale indruk wordt verkregen; via HPLC-analyse en (speciaal voor humaan immuunglobuline) via ionenwisselingschromatografie op DEAE-Sephadex A25.The labeling efficiency of the method followed was determined by gel filtration on a 10 cm column of Sephadex G50 with 0.15 M NaCl as eluent (the labeled protein elutes to dead volume); via precipitation with trichloroacetic acid, where the labeled protein precipitates; via autoradiography after electrophoresis, whereby a first global impression is obtained; via HPLC analysis and (especially for human immunoglobulin) via ion exchange chromatography on DEAE-Sephadex A25.
Onderstaande tabel geeft de labellingsefficiëntie, zoals die voor diverse eiwitpreparaten werden verkregen onder condities die optimaal waren gebleken voor een humaan immuunglobulinepreparaat.The table below lists the labeling efficiency, as obtained for various protein preparations under conditions that had been found to be optimal for a human immunoglobulin preparation.
Zowel ratte- als humaan fibrinogeen bleek dezelfde "radio-clottability" te hebben voor en na 4 uur incubatie in plasma. Deze was in alle gevallen >90 %, hetgeen er op duidt dat geen dissociatie van het label optreedt en dat labelling géén negatieve invloed heeft op de stolbaarheid van fibrinogeen.Both rat and human fibrinogen were shown to have the same "radio clottability" before and after 4 hours of incubation in plasma. In all cases it was> 90%, which indicates that no dissociation of the label occurs and that labeling does not have a negative influence on the coagibility of fibrinogen.
Ook het label van LDL bleek niet uit te wisselen met andere serum eiwitten wanneer gelabeld LDL werd geïncubeerd in serum.Also, the LDL label was found not to exchange with other serum proteins when labeled LDL was incubated in serum.
Via standaard in vivo en in vitro technieken kon worden aangetoond, dat de immunologische en biochemische eigenschappen van de gebruikte eiwitten niet werden aangetast.Standard in vivo and in vitro techniques demonstrated that the immunological and biochemical properties of the proteins used were not affected.
Voorbeeld IIExample II
In elk van een serie kleine glazen ampullen wordt het volgende mengsel van stoffen, betrokken bij de labellingsmethode, gevriesdroogd: ~ 0,2-1 yg Sn2+: SnCl2.2H20 opgelost tot een concentratie van 1 mg Sn2+ per ml buffer bestaande uit kaliumwaterstofftalaat (40 mM) en kalium-natriumtartraat (10 mM) pH 5,6, - 0,5~1 yg NaBHjj als oplossing van 1 mg/ml in 0,05 N NaOH.In each of a series of small glass ampoules, the following mixture of substances involved in the labeling method is freeze-dried: ~ 0.2-1 yg Sn2 +: SnCl2.2H20 dissolved to a concentration of 1 mg Sn2 + per ml buffer consisting of potassium hydrogen phthalate (40 mM) and potassium sodium tartrate (10 mM) pH 5.6, 0.5 ~ 1 yg NaBHjj as a solution of 1 mg / ml in 0.05 N NaOH.
Aan het gevriesdroogde mengsel wordt toegevoegd: 0,1-1 mg eiwit in 0,1-0,5 ml 0,15 M NaCl en 100 yl 99mxco^ uit een molybdeen-technetium generator.To the lyophilized mixture is added: 0.1-1 mg of protein in 0.1-0.5 ml of 0.15 M NaCl and 100 µl of 99m xCO 2 from a molybdenum technetium generator.
Na 15 minuten reactie bij kamertemperatuur is de labelling compleet en de resultaten zijn volledig vergelijkbaar met uit voorbeeld I.After 15 minutes of reaction at room temperature, the labeling is complete and the results are completely comparable with from example I.
Het gevriesdroogde mengsel van Sn2+, NaBHjj en buffer blijkt enige maanden bij 37 C houdbaar, mits de ampullen luchtdicht worden afgesloten onder stikstof. De houdbaarheid blijkt uit het feit, dat wanneer de labelling wordt uitgevoerd met gevriesdroogd materiaal, dat gedurende enige maanden is bewaard bij 37 °C. de labellingsefficiëntie even hoog is als met vers bereid reactiemengsel.The freeze-dried mixture of Sn2 +, NaBHjj and buffer appears to be stable for several months at 37 ° C, provided that the ampoules are sealed airtight under nitrogen. The shelf life is evidenced by the fact that when the labeling is carried out with lyophilized material, it has been stored at 37 ° C for several months. the labeling efficiency is as high as with freshly prepared reaction mixture.
Claims (10)
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NL9001137A NL9001137A (en) | 1990-05-15 | 1990-05-15 | METHOD FOR LABELING AMINO GROUPS CONTAINING SUBSTANCES WITH 99MTC AND EQUIPMENT FOR CARRYING OUT THIS METHOD |
| AU79901/91A AU7990191A (en) | 1990-05-15 | 1991-05-15 | Method for labelling substances containing amino groups, including cells such as blood cells, with 99mtc and kit for carrying out this method |
| PCT/NL1991/000080 WO1991017999A1 (en) | 1990-05-15 | 1991-05-15 | METHOD FOR LABELLING SUBSTANCES CONTAINING AMINO GROUPS, INCLUDING CELLS SUCH AS BLOOD CELLS, WITH 99mTc AND KIT FOR CARRYING OUT THIS METHOD |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NL9001137 | 1990-05-15 | ||
| NL9001137A NL9001137A (en) | 1990-05-15 | 1990-05-15 | METHOD FOR LABELING AMINO GROUPS CONTAINING SUBSTANCES WITH 99MTC AND EQUIPMENT FOR CARRYING OUT THIS METHOD |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NL9001137A true NL9001137A (en) | 1991-12-02 |
Family
ID=19857100
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NL9001137A NL9001137A (en) | 1990-05-15 | 1990-05-15 | METHOD FOR LABELING AMINO GROUPS CONTAINING SUBSTANCES WITH 99MTC AND EQUIPMENT FOR CARRYING OUT THIS METHOD |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| AU (1) | AU7990191A (en) |
| NL (1) | NL9001137A (en) |
| WO (1) | WO1991017999A1 (en) |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4424200A (en) * | 1979-05-14 | 1984-01-03 | Nuc Med Inc. | Method for radiolabeling proteins with technetium-99m |
| US4917878A (en) * | 1988-05-02 | 1990-04-17 | Thomas Jefferson University | Novel use of a radiolabelled antibody against stage specific embryonic antigen for the detection of occult abscesses in mammals |
-
1990
- 1990-05-15 NL NL9001137A patent/NL9001137A/en not_active Application Discontinuation
-
1991
- 1991-05-15 AU AU79901/91A patent/AU7990191A/en not_active Abandoned
- 1991-05-15 WO PCT/NL1991/000080 patent/WO1991017999A1/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1991017999A1 (en) | 1991-11-28 |
| AU7990191A (en) | 1991-12-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Kühn | Light-dependent phosphorylation of rhodopsin in living frogs | |
| Meares et al. | Covalent attachment of metal chelates to proteins: the stability in vivo and in vitro of the conjugate of albumin with a chelate of 111indium. | |
| AU597208B2 (en) | Method of radioactively labelling diagnostic and therapeutic agents containing a chelating group | |
| EP0237150B1 (en) | Improved radionuclide antibody coupling | |
| Ebenhan et al. | Peptide synthesis, characterization and 68Ga-radiolabeling of NOTA-conjugated ubiquicidin fragments for prospective infection imaging with PET/CT | |
| RU2260217C2 (en) | Method for production of the actinium-225 and its daughter elements | |
| JPH0791317B2 (en) | Carrier-Metal ion labeling of molecules | |
| JPH08325297A (en) | Antibody-radioactive nuclide complex and discovering and localizing method for tumor using the same | |
| JPH0881395A (en) | Diagnostic auxiliary | |
| Zhang et al. | Radiolabeling in biology | |
| SU968036A1 (en) | Method for preparing marked protein | |
| US20030228255A1 (en) | Method for the preparation of technetium or rhenium complex for radiopharmaceuticals | |
| Kobes et al. | 2-Keto-4-hydroxyglutarate aldolase of bovine liver. Schiff-base formation with 2-keto-4-hydroxyglutarate, pyruvate, and glyoxylate | |
| US4298591A (en) | Instantaneous radioiodination of rose bengal at room temperature and a cold kit therefor | |
| NL9001137A (en) | METHOD FOR LABELING AMINO GROUPS CONTAINING SUBSTANCES WITH 99MTC AND EQUIPMENT FOR CARRYING OUT THIS METHOD | |
| EP0169232A1 (en) | Composition for technetium-99m labelling of proteinaceous material. | |
| Chu et al. | Isolation and characterization of 5'-S-methyl-5'-thioadenosine from Escherichia coli | |
| Eckelman et al. | Iodinated bleomycin: an unsatisfactory radiopharmaceutical for tumor localization | |
| US3939258A (en) | Process for the manufacture of human transferrin labelled with indium 113m | |
| Saha et al. | Radiopharmaceuticals and general methods of radiolabeling | |
| WO1992011039A1 (en) | Derivatized tris-catechol chelating agents | |
| CA2450231C (en) | System and method for the large scale labeling of compounds with radiohalogens | |
| US4617184A (en) | 99m Tc-1,2-dihydroxy-1,2-bis(dihydroxyphosphinyl)ethane complex for skeleton scanning | |
| US4845039A (en) | Method of labeling amine-containing compounds with a metal | |
| UĞUR | CHEMISTRY, PRODUCTION AND APPLICATION RELATIONSHIP OF GALYUM-68 USED IN NUCLEAR MEDICAL IMAGING |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A1B | A search report has been drawn up | ||
| BV | The patent application has lapsed |