NL8401226A - PHARMACEUTICAL PRODUCT WITH ANTI-TUMOR EFFECT; USE OF A PHARMACEUTICAL PRODUCT OR PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS IN ANTI-TUMOR THERAPY. - Google Patents
PHARMACEUTICAL PRODUCT WITH ANTI-TUMOR EFFECT; USE OF A PHARMACEUTICAL PRODUCT OR PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS IN ANTI-TUMOR THERAPY. Download PDFInfo
- Publication number
- NL8401226A NL8401226A NL8401226A NL8401226A NL8401226A NL 8401226 A NL8401226 A NL 8401226A NL 8401226 A NL8401226 A NL 8401226A NL 8401226 A NL8401226 A NL 8401226A NL 8401226 A NL8401226 A NL 8401226A
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- mdp
- endotoxin
- tumor
- pharmaceutical product
- analog
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/14—Peptides containing saccharide radicals; Derivatives thereof, e.g. bleomycin, phleomycin, muramylpeptides or vancomycin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
* ( VO 6239* (VO 6239
Farmaceutisch produkt met antitumorwerking; gebruik van een farmaceutisch produkt of van farmaceutische samenstellingen in een anti-tumortherapie.Pharmaceutical product with anti-tumor effect; use of a pharmaceutical product or of pharmaceutical compositions in anti-tumor therapy.
De uitvinding heeft betrekking op een farmaceutisch produkt met anti-tumorwerking, alsmede op het gebruik van een farmaceutisch produkt of van farmaceutische samenstellingen in een anti-tumor-therapie.The invention relates to a pharmaceutical product with anti-tumor action, as well as to the use of a pharmaceutical product or pharmaceutical compositions in an anti-tumor therapy.
5 Het is bekend dat endotoxinen - toxische stoffen welke inte grale componenten van de celwand van gram-negatieve bacteriën zijn, in hoofdzaak zijn samengesteld uit lipide en polysaccharide en daairom ook wel lipopolysacchariden (LPS) of glycolipiden worden genoemd -* vele typen antitumorwerking bezitten, waaronder inductie van hemorra-10 gische necrose en regressie van tumoren in dieren. Voor klinische toepassing zijn ze vanwege hun hoge toxiciteit echter niet geschikt.It is known that endotoxins - toxic substances which are integral components of the cell wall of gram-negative bacteria, are mainly composed of lipid and polysaccharide and daumom also known as lipopolysaccharides (LPS) or glycolipids - * have many types of anti-tumor activity, including induction of hemorrhagic necrosis and regression of tumors in animals. However, they are not suitable for clinical use due to their high toxicity.
Inmiddels zijn ook gedetoxificeerde endotoxinen, zoals non-toxisch lipid ·Α, verkregen door bijvoorbeeld zure hydrolyse met zoutzuur (Westphal en Lüderitz, Angew. Chem. 66, 407, 1954) of bestraling 15 met 150 kGy ^Co gamma-straling (Füst et al, Infect. Immun. 16, 26-31, 1977), en synthetische, niet-toxische analoga daarvan (Kotani ) et al, Infect. Immun. 41, 758-773, 1983; Kiso et al, Agric. Biol.Detoxified endotoxins, such as non-toxic lipid · Α, have now also been obtained by, for example, acid hydrolysis with hydrochloric acid (Westphal and Lüderitz, Angew. Chem. 66, 407, 1954) or irradiation with 150 kGy ^ Co gamma radiation (Füst et al, Infect Immun, 16, 26-31, 1977), and synthetic, non-toxic analogs thereof (Kotani) et al, Infect. Immun. 41, 758-773, 1983; Kiso et al, Agric. Biol.
Chem. 45, 1523-1525, 1981; Behling et al, J. Immunology 117, 847, 1976; Ponpipom et al, J. Med. Chem. 23, 1184-1188, 1980) beschreven, 20 die zich door een aanzienlijk lagere toxiciteit gunstig onderscheiden van de endotoxinen. Helaas gaat deze afname van de toxiciteit gepaard met een aanzienlijke afname van de antitumorwerking.Chem. 45, 1523-1525, 1981; Behling et al, J. Immunology 117, 847, 1976; Ponpipom et al, J. Med. Chem. 23, 1184-1188, 1980), which are favorably distinguished from the endotoxins by a considerably lower toxicity. Unfortunately, this decrease in toxicity is accompanied by a significant decrease in anti-tumor activity.
Door Ribi et al (Cancer Immunol. Immunother. 7, 43-58, 1979; Cancer Research 41, 2654-2657, 1981; Cancer Immunol. Immunother. 12, t 25 91-96, 1982) is vastgesteld dat gedetoxificeerde endotoxinepreparaten bij intralesionale toediening (d.w.z. toediening in de tumor) een sterke antitumorwerking vertonen bij cavia's met een subcutaan getransplanteerd lijn-10 hepatocellulair carcinoom die door een carcinogeen geïnduceerd is, mits de gedetoxificeerde endotoxinepreparaten gecom- , ·' . 30 bineerd werden met trehalosedimycolaat, muramyldipeptide of een bac-Ribi et al (Cancer Immunol. Immunother. 7, 43-58, 1979; Cancer Research 41, 2654-2657, 1981; Cancer Immunol. Immunother. 12, 25-91-96, 1982) have determined that detoxified endotoxin preparations in intralesional administration (ie administration in the tumor) show a strong anti-tumor effect in guinea pigs with a subcutaneously transplanted line-10 hepatocellular carcinoma induced by a carcinogen, provided that the detoxified endotoxin preparations are combined. Were combined with trehalose dimycolate, muramyl dipeptide or a bac-
* S* S
8401226 -2- teriële peptidefractie, en olie. Tevens werd vastgesteld dat door toevoeging van muramyldipeptide de lethaliteit van endotoxinen dramatisch wordt verhoogd, maar dat de combinatie van muramyldipeptide met gedetoxificeerd endotoxine geen toxiciteitsverschijnselen zoals sterf-5 te en lethargie van de testdieren veroorzaakt.8401226 -2-material peptide fraction, and oil. It was also determined that the addition of muramyl dipeptide dramatically increases the lethality of endotoxins, but that the combination of muramyl dipeptide with detoxified endotoxin does not cause toxicity symptoms such as death and lethargy of the test animals.
De noodzaak van het mede-toedienen van olie en van intrale-sionale applicatie maken echter een direkte overdracht van de door Ribi et al bij cavia's opgedane onderzoeksresultaten naar de geneeskunde onmogelijk.However, the necessity of co-administration of oil and of intralional application precludes direct transfer of the research results to medicine from Ribi et al in guinea pigs.
10 Het door Ribi et al mede toegepaste muramyldipeptide (MDP, chemische naam N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine) is een bekend immuno-adjuvans voor de vorming van specifieke antilichamen tegen oplosbare en deeltjesvormige antigenen (Chedid et al, Progr. Allergy, 25, 63-105, 1978), waarvan o.a. bekend is dat het bij toevoeging van 15 minerale olie, bijvoorbeeld Freund's incomplete adjuvans, een goed adjuvans wordt voor specifieke, door cellen gemedieerde immuunreacties (Chedid et al, J. Reticulo-endothel. Soc., 26, 631-640, 1979). Zelf is MDP niet immunogeen. Ook kan MDP verscheidene niet specifieke effector-mechanismen van het immuunsysteem, waaronder resistentie tegen patho-20 genen en produktie van interleukinen stimuleren (Parant, SpringerThe muramyl dipeptide (MDP, chemical name N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine) co-used by Ribi et al. Is a known immunoadjuvant for the production of specific antibodies against soluble and particulate antigens (Chedid et al, Progr. Allergy, 25, 63-105, 1978), which is known, inter alia, when mineral oil, for example Freund's incomplete adjuvant, is added to become a good adjuvant for specific cell-mediated immune responses (Chedid et al, J. Reticuloendothel Soc., 26, 631-640, 1979). MDP itself is not immunogenic. MDP can also stimulate several non-specific effector mechanisms of the immune system, including resistance to patho-genes and production of interleukins (Parant, Springer
Semin. Immunopathol. 2, 101-118, 1979; Wood et al, Cell. Immunol. 70, 407, 1982). MDP op zich vertoont echter geen significante antitumor-werking.Semin. Immunopathol. 2, 101-118, 1979; Wood et al., Cell. Immunol. 70, 407, 1982). However, MDP in itself does not show significant anti-tumor activity.
Samenvattend zijn de volgende eigenschappen van MDP bekend: A. stimulatie van de vorming van specifieke antilichamen (humoraal 25 adjuvans) B. stimulatie van de specifieke cellulaire immuniteit (cellulair adjuvans) C. stimulatie van de niet-specifieke weerstand D. interferon inductie (lymfocvten en/of monocyt/macrofaag factor) 30 E. interleukinen inductie (leukocyt-factoren) F. macrofaag-activatie G. ongewenste effecten, zoals pyrogeniteit (koortsverwekkend vermogen), inductie van tijdelijke leukopenie (tekort aan circulerende witte bloedcellen), inductie van gewrichtsontsteking (arthritis) en ver- 35 hoogde gevoeligheid voor de toxiciteit van endotoxinen.In summary, the following properties of MDP are known: A. stimulation of the formation of specific antibodies (humoral adjuvant) B. stimulation of the specific cellular immunity (cellular adjuvant) C. stimulation of the nonspecific resistance D. interferon induction (lymphocytes and / or monocyte / macrophage factor) E. interleukin induction (leukocyte factors) F. macrophage activation G. undesirable effects, such as pyrogenity (fever inducing potential), induction of transient leukopenia (lack of circulating white blood cells), induction of joint inflammation (arthritis) and increased sensitivity to endotoxin toxicity.
Sommige van deze eigenschappen zijn gekoppeld aan het gebruik van olie.Some of these properties have been linked to the use of oil.
8401226 -3-8401226 -3-
Er zijn verscheidene niet-pyrogene analoga en prodrug vormen van MDP beschreven (Kiso et al, Carbohydrate Research 90, C8-C11, 1981; Lederer, . Prog. Iimmmol. IV, 1194-1211, 1980; Krueger et al, J. Exp. Med. 159, 68-76, 1984; Durette et al. Carbohydrate Research 5 108, 139-147, 1982; Matsumoto et al, Infection and Immunity 39, 1029-1040, 1983; Ogawa et al. Infection and Immunity 35, 612-619, 1982; Saiki et al, Infection and Immunity 39, 137-141, 1983; Chedid et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 73, 2472-2475, 1976; Lederer, J. Med. Chem. 23, 819, 1980; Matsumoto et al, Infection and Immunity 10 32, 748-758, 1981; Tsujimoto et al, Microbiol. Immunol. 23, 933-936, 1979; Durette et al, J. Med. Chem. 25, 1028-1033, 1982; Lefranchier et al, J. Med. Chem. 25, 87-90, 1982; Masihi et al, Infection and Immunity 43, 233-237, 1984; Kusumoto et al, Buil. Chem. Soc. Japan 52, 1665-1671, 1979; Arnon et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77, 6769-15 6772, 1980). De eigenschappen van al deze bekende analoga en prodrug vormen lopen nogal uiteen. Zo is het analogon 6-0-(2-tetradecyl-hexadecanoyl)-N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine, vergeleken met MDP zelf, een sterkere stimulator van de cellulaire immuniteit en zwakkere stimulator van de niet-specifieke weerstand; is het analogon 20 6-0-acetyl-N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine inactief als stimulator van de niet-specifieke weerstand en equivalent met MDP als ct cellulair adjuvans, en is het analogon N -(N-acetylmuramyl-L-alanyl-ε D-isoglutamyl)-N -stearoyllysine een sterkere stimulator van de niet-specifieke weerstand dan MDP.Several nonpyrogenic analogs and prodrug forms of MDP have been described (Kiso et al, Carbohydrate Research 90, C8-C11, 1981; Lederer, Prog. Immmol. IV, 1194-1211, 1980; Krueger et al, J. Exp Med 159, 68-76, 1984, Durette et al. Carbohydrate Research 5 108, 139-147, 1982; Matsumoto et al, Infection and Immunity 39, 1029-1040, 1983; Ogawa et al. Infection and Immunity 35, 612-619, 1982; Saiki et al, Infection and Immunity 39, 137-141, 1983; Chedid et al, Proc Natl Acad Sci USA 73, 2472-2475, 1976; Lederer, J. Med Chem. 23, 819, 1980; Matsumoto et al, Infection and Immunity 10 32, 748-758, 1981; Tsujimoto et al, Microbiol. Immunol. 23, 933-936, 1979; Durette et al, J. Med. Chem. 25, 1028-1033, 1982; Lefranchier et al, J. Med. Chem. 25, 87-90, 1982; Masihi et al, Infection and Immunity 43, 233-237, 1984; Kusumoto et al, Bull. Chem. Soc. Japan 52, 1665-1671, 1979; Arnon et al, Proc Natl Acad Sci USA 77, 6769-15 6772, 1980). The properties of all these known analogs and prodrug forms vary widely. Thus, the analog 6-0- (2-tetradecyl-hexadecanoyl) -N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine, compared to MDP itself, is a stronger stimulator of the cellular immunity and weaker stimulator of the nonspecific resistance; the analog 20 6-O-acetyl-N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine is inactive as a stimulator of the nonspecific resistance and equivalent to MDP as ct cellular adjuvant, and the analog is N - (N-acetylmuramyl- L-alanyl-ε-D-isoglutamyl) -N-stearoyllysine a stronger stimulator of nonspecific resistance than MDP.
25 Thans is verrassenderwijze gevonden, dat de toepassing van een combinatie van gedetoxificeerd endotoxine (of een synthetisch, niet of aanvaardbaar toxisch analogon daarvan) en muramyldipeptide (of een niet of aanvaardbaar pyrogeen analogon of prodrug vorm daarvan) zonder de volgens Ribi et al noodzakelijke olie en trehalose dimycolaat, bij 30 een andere dan intralesionale toediening, in het bijzonder bij intraveneuze, intramusculaire en/of subcutane toediening, leidt tot'een synergistisch effect wat de antitumorwerking betreft, zonder gepaard te gaan met een sterke toename van de toxiciteit.It has now surprisingly been found that the use of a combination of detoxified endotoxin (or a synthetic, unacceptable or acceptable toxic analog thereof) and muramyl dipeptide (or an unacceptable or acceptable pyrogen analog or prodrug form thereof) without the oil necessary according to Ribi et al. and trehalose dimycolate, other than intralesional administration, especially intravenous, intramuscular and / or subcutaneous administration, leads to a synergistic effect in anti-tumor activity, without being accompanied by a marked increase in toxicity.
De uitvinding heeft dan ook betrekking op een farmaceutisch 35 produkt met antitumorwerking, omvattende een of meer farmacologisch aanvaardbare dragers, oplosmiddelen, verdunningsmiddelen en/of hulp- 8401226 -4- stoffen, alsmede (a) ten minste één gedetoxificeerd endotoxine of een synthetisch, niet of aanvaardbaar toxisch analogon daarvan, en (b) mu-ramyldipeptide (MDP), of een niet of aanvaardbaar pyrogeen analogon of prodrug vorm daarvan, in hoeveelheden die enerzijds toxicologisch aan-5 vaardbaar zijn en anderzijds een effectieve antitumorwerking bezitten.The invention therefore relates to a pharmaceutical product with anti-tumor action, comprising one or more pharmacologically acceptable carriers, solvents, diluents and / or auxiliary substances, as well as (a) at least one detoxified endotoxin or a synthetic, not or acceptable toxic analogue thereof, and (b) mu-ramyldipeptide (MDP), or an unacceptable or pyrogenic analogue or prodrug form thereof, in amounts which are toxicologically acceptable on the one hand and have effective anti-tumor activity on the other.
Volgens een uitvoeringsvorm van de uitvinding heeft het farmaceutisch produkt de vorm van ééi) enkele oplossing voor intraveneuze, intramusculaire of subcutane toediening.According to an embodiment of the invention, the pharmaceutical product is in the form of a single solution for intravenous, intramuscular or subcutaneous administration.
Volgens een voorkeursuitvoeringsvorm van de uitvinding heeft 10 het farmaceutisch produkt echter de vorm van een oplossing voor intraveneuze, intramusculaire of subcutane toediening van ten minste één gedetoxificeerd endotoxine of een synthetisch, niet of aanvaardbaar toxisch analogon daarvan, en een afzonderlijke oplossing voor intraveneuze, intramusculaire of subcutane toediening van MDP of een niet of 15 aanvaardbaar pyrogeen analogon of prodrug vorm daarvan. Door afzonderlijke toediening, dat wil zeggen toediening op verschillende plaatsen, kan een al te sterke vorming van antilichamen tegen component (a), welke een gevolg is van de immuno-adjuvanswerking van (b), en daarmee een neutralisatie van de werking bij een volgende injectie of eventuele 20 anafylactische reacties tegen (a), worden vermeden.In a preferred embodiment of the invention, however, the pharmaceutical product is in the form of a solution for intravenous, intramuscular or subcutaneous administration of at least one detoxified endotoxin or a synthetic, not or acceptably toxic analog thereof, and a separate solution for intravenous, intramuscular or subcutaneous administration of MDP or an unacceptable or acceptable pyrogen analog or prodrug form thereof. By separate administration, i.e. administration at different sites, an excessive build-up of antibodies against component (a), which is due to the immunoadjuvant activity of (b), and thus neutralization of the activity at a subsequent injection or any anaphylactic reactions to (a) are avoided.
De uitvinding heeft verder tevens betrekking op een gebruik van het farmaceutisch produkt volgens de uitvinding in een antitumortherapie.The invention further also relates to a use of the pharmaceutical product according to the invention in an anti-tumor therapy.
Meer in het bijzonder heeft de uitvinding betrekking op het gebruik van een farmaceutische samenstelling, welke ten minste één gede-25 toxificeerd endotoxine of een synthetisch, niet of aanvaardbaar toxisch analogon daarvan bevat, in combinatie met het gebruik van een farmaceutische samenstelling, welke MDP of een niet of aanvaardbaar pyrogeen analogon of prodrug vorm daarvan bevat, in een antitumortherapie, waarbij de twee_ samenstellingen gelijktijdig of vrijwel gelijktijdig op 30 verschillende plaatsen worden toegediend in hoeveelheden, die enerzijds toxicologisch aanvaardbaar zijn en anderzijds een effectieve antitumorwerking bezitten.More particularly, the invention relates to the use of a pharmaceutical composition containing at least one de-toxic endotoxin or a synthetic, not or acceptably toxic analog thereof, in combination with the use of a pharmaceutical composition containing MDP or contains an unacceptable or acceptable pyrogenic analog or prodrug form thereof, in an anti-tumor therapy, wherein the two compositions are administered simultaneously or almost simultaneously at 30 different sites in amounts which are toxicologically acceptable on the one hand and have effective anti-tumor activity on the other.
Eij voorkeur zijn de twee bedoelde samenstellingen oplossingen voor intraveneuze, intramusculaire en/of subcutane toediening, in het 35 bijzonder waterige oplossingen. Andere toedieningsroutes, bijvoorbeeld intraperitoneale toediening, zijn echter ook mogelijk.Preferably, the two intended compositions are solutions for intravenous, intramuscular and / or subcutaneous administration, especially aqueous solutions. However, other routes of administration, for example intraperitoneal administration, are also possible.
8401226 -5-8401226 -5-
De uitvinding wordt aan de hand van de onderstaande voorbeelden nader toegelicht.The invention is further illustrated by the examples below.
VOORBEELD IEXAMPLE I
In dit voorbeeld werd het effekt onderzocht van intraveneus 5 (iv) geïnjecteerde waterige oplossingen van MDP in combinatie met een gedetoxificeerd endotoxine preparaat tegen solide subcutane (sc) Meth A fibrosarcoma transplantaten in syngene BALB/c muizen. Ter vergelijking werden ook de effekten van iv injecties van waterige oplossingen van MDP alleen, gedetoxificeerd endotoxine alleen, endo-10 toxine alleen, MDP + endotoxine en van alleen een fysiologische zoutoplossing onderzocht.In this example, the effect of intravenously injected 5 (iv) aqueous solutions of MDP in combination with a detoxified endotoxin preparation against solid subcutaneous (sc) Meth A fibrosarcoma grafts in syngeneic BALB / c mice was investigated. For comparison, the effects of iv injections of aqueous solutions of MDP alone, detoxified endotoxin alone, endo-10 toxin alone, MDP + endotoxin and of only physiological saline were investigated.
Voor de experimenten werden 11 weken oude BALB/c vrouwtjesmuizen gebruikt. Het Meth A sarcoma van BALB/c oorsprong werd verkregen bij het Clinical Research Centre (Harrow, Middlesex, 15 Groot-Brittannië) en door seriegewijze intraperitoneale passage in de ascites-vorm aangehouden.11 week old BALB / c female mice were used for the experiments. The Meth A sarcoma of BALB / c origin was obtained from the Clinical Research Center (Harrow, Middlesex, Great Britain) and maintained in ascites form by serial intraperitoneal passage.
Het MDP werd verkregen bij het Institut Pasteur Production (Marnes-la-Coquette, Frankrijk). Endotoxine (LPSw) van JE. coli 0111:B4 (Difco Laboratories, Detroit, Michigan, USA) werd geprepa-20 reerd volgens de fenol/water extractiemethode (Westphal et al,The MDP was obtained from the Institut Pasteur Production (Marnes-la-Coquette, France). JE endotoxin (LPSw). coli 0111: B4 (Difco Laboratories, Detroit, Michigan, USA) was prepared by the phenol / water extraction method (Westphal et al,
Angew. Chem. 66, 407-417, 1954 en Z. Naturforsch. 76, 148-155, 1952). Gezuiverd toxisch en gedetoxificeerd endotoxine van de heptose-loze (Re) mutant Salmonella typhimurium (Ribi Immuno Chem. Inc., Hamilton, Montana, USA) werden geprepareerd en gezuiverd zoals beschreven door 25 Ribi et al, Cancer Immunol. Immunother. 12, 91-96, 1982, hetgeen in het kort neerkwam op extraheren van endotoxische glycolipiden uit cel-wanden met behulp van fenol/chloroform/petroleumether, fractioneren door middel van preparatieve microparticulaire gelchromatografie en verder zuiveren op Sephadex LH-20. Aldus werden gedisaggregeerde 30 endotoxische glycolipiden verkregen die vrij waren van fosfolipiden en nucleïnezuur en een eiwitgehalte van minder dan 0,3% bezaten. Detoxificatie van het gezuiverde endotoxine werd uitgevoerd door hydrolyse bij 100°C in 0,1 N HC1. Het verkregen preparaat was 1000 keer minder toxisch, gemeten naar de lethaliteit voor kuikenembryo's, 35 was praktisch vrij van KDO (keto-3-deoxyoctonaat) en bezat ongeveer de helft van het fosfaatgehalte van het gezuiverde endotoxine.Angew. Chem. 66, 407-417, 1954 and Z. Naturforsch. 76, 148-155, 1952). Purified toxic and detoxified endotoxin from the heptose-less (Re) mutant Salmonella typhimurium (Ribi Immuno Chem. Inc., Hamilton, Montana, USA) were prepared and purified as described by Ribi et al, Cancer Immunol. Immunother. 12, 91-96, 1982, which briefly amounted to extracting endotoxic glycolipids from cell walls using phenol / chloroform / petroleum ether, fractionating by preparative microparticular gel chromatography and further purification on Sephadex LH-20. Thus, disaggregated endotoxic glycolipids were obtained which were free of phospholipids and nucleic acid and had a protein content of less than 0.3%. Detoxification of the purified endotoxin was performed by hydrolysis at 100 ° C in 0.1 N HCl. The preparation obtained was 1000 times less toxic, measured by chick embryo lethality, was practically free from KDO (keto-3-deoxyoctonate), and had about half the phosphate content of the purified endotoxin.
8401226 -6-8401226 -6-
Het MDP werd opgelost in pyrogeenvrije fysiologische zoutoplossing. De endotoxinen werden opgelost in 0,5% triëthylamine (2 mg endotoxine/0,4 ml) en in fysiologische zoutoplossing verdund. Geïnjecteerd werd een totaal volume van 0,5 ml.The MDP was dissolved in pyrogen-free physiological saline. The endotoxins were dissolved in 0.5% triethylamine (2 mg endotoxin / 0.4 ml) and diluted in physiological saline. A total volume of 0.5 ml was injected.
5 5 De muizen werden subcutaan in het abdomen met 3 x 10 levens krachtige Meth A cellen geïnjecteerd en 9 dagen later, toen de tumor een diameter van ongeveer 7,5 mm had bereikt, behandeld. De necrose werd op de elfde dag gemeten en uitgedrukt in de verhouding van de gemiddelde diameters van het necrotische gebied en de tumor, maal 10 honderd (omvang). Het optreden van donker en licht gekleurde necrose werd afzonderlijk aangegeven. Groeiremming werd genoteerd indien de tumor binnen 2 dagen na de injectie niet groter was geworden. Volledige genezing werd genoteerd indien de tumoren binnen 19 dagen van de behandeling geheel waren verdwenen. De gegevens zijn uitgedrukt als 15 de gemiddelde waarde ± SEM (SEM = standard error of the mean).The mice were injected subcutaneously into the abdomen with 3 x 10 viable Meth A cells and treated 9 days later, when the tumor reached about 7.5 mm in diameter. Necrosis was measured on the eleventh day and expressed in the ratio of the mean diameters of the necrotic area and the tumor, times 10 hundred (size). The occurrence of dark and light-colored necrosis was reported separately. Growth inhibition was noted if the tumor had not increased within 2 days after the injection. Complete healing was noted if the tumors had completely disappeared within 19 days of treatment. The data are expressed as the mean value ± SEM (SEM = standard error of the mean).
De resultaten zijn in onderstaande tabellen A en B samengevat .The results are summarized in Tables A and B below.
8401226 -7-8401226 -7-
TABEL ATABLE A
Antitumoractiviteit van 12. coli endotoxine en/of MDP.Anti-tumor activity of 12. coli endotoxin and / or MDP.
, , ... frequentie (%) behandeling necrose ___ _ _van_,, ... frequency (%) necrosis treatment ___ _ _van_
Endotoxine MDP aantal frequentie (%) omvang* groei- volledige 13. coli 0111:B4 dosis -— inhibi- dosis (yg) (yg) muizen licht donker tie genezing 25 0 10 30 70 57 ± 5 80 30 10 100 10 0 100 75 ± 4 100 90 10 30 20 0 100 68 ± 2 100 80 10 10 5 0 100 66 ± 3 100 100 10. 3 5 0 100 57 ± 3 100 80 10 0 20 50 35 46 ± 3 65 15 3 30 10 0 100 61 ± 4 100 60 3 10 10 0 90 66 ± 2 100 60 3 0 14 50 7 49 ± 3 43 7 1 30 5 0 100 63 ± 5 100 80 1 0 5 40 0 36 ± 1 0 0 0,3 30 5 20 80 56 ± 7 100 60 0 100 10 0 0 30 20 0 30 15 0 0 77 0 10 4 0 0 25 25 0 3 5 0 0 0 0 0 0 20 0 0 5 0Endotoxin MDP number frequency (%) size * growth- full 13. coli 0111: B4 dose - inhibi dose (yg) (yg) mice light dark tie healing 25 0 10 30 70 57 ± 5 80 30 10 100 10 0 100 75 ± 4 100 90 10 30 20 0 100 68 ± 2 100 80 10 10 5 0 100 66 ± 3 100 100 10. 3 5 0 100 57 ± 3 100 80 10 0 20 50 35 46 ± 3 65 15 3 30 10 0 100 61 ± 4 100 60 3 10 10 0 90 66 ± 2 100 60 3 0 14 50 7 49 ± 3 43 7 1 30 5 0 100 63 ± 5 100 80 1 0 5 40 0 36 ± 1 0 0 0.3 30 5 20 80 56 ± 7 100 60 0 100 10 0 0 30 20 0 30 15 0 0 77 0 10 4 0 0 25 25 0 3 5 0 0 0 0 0 0 20 0 0 5 0
♦gemiddelde ± SEM♦ mean ± SEM
8401226 -8-8401226 -8-
TABEL BTABLE B
Antitumoractiviteit van toxisch en gedetoxificeerd endotoxine van typhimurium Re alleen of met MDP.Anti-tumor activity of toxic and detoxified typhimurium Re endotoxin alone or with MDP.
behandeling necrose frequentie (%) --_ n _ _van_ endotoxine dosis MDP frequentie omvang groei- volledige £>. typhimurium dosis (%)__ inhi-treatment necrosis frequency (%) --_ n _ _ of_ endotoxin dose MDP frequency size growth- complete £>. typhimurium dose (%) __ inhi-
Re (yg) (yg) licht donker bitie genezing gedetoxificeerd 50 05 20 0 31 0 0 " 25 0 10 60 0 36 ± 6 10 0 " 10 30 10 10 90 61 ± 3 80 70 " 10 0 10 10 0 47 40 10 toxisch 10 30 51 20 80 73 ± 4 100 80 " 10 0 10 50 50 57 ± 5 90 40 fysiologische zoutoplossing 0 30 1000 0 0 " 0 0 10 0 0 0 0 8401226 van de tisn behandelde muizen stierven er vijf binnen 24 uur -9-Re (yg) (yg) light dark transition healing detoxified 50 05 20 0 31 0 0 "25 0 10 60 0 36 ± 6 10 0" 10 30 10 10 90 61 ± 3 80 70 "10 0 10 10 0 47 40 10 toxic 10 30 51 20 80 73 ± 4 100 80 "10 0 10 50 50 57 ± 5 90 40 physiological saline 0 30 1000 0 0" 0 0 10 0 0 0 0 8401226 of the tisn treated mice, five died within 24 hours - 9-
Verder werd ook de toxiciteit van i.v. geïnjecteerd toxisch en gedetoxificeerd typhimurium Re endotoxine, alleen of gemengd met uiteenlopende MDP doses, bepaald. De resultaten worden getoond in de bijgaande figuur. Groepen van 5 muizen kregen laboratorium-5 voedsel en water ad libitum en werden in een omgeving van constante temperatuur (18QC) en vochtigheidsgraad gehouden. De verandering van het lichaamsgewicht, gemeten 24 uur (open bolletjes) respectievelijk 48 uur-(zwarte bolletjes) na de injectie, werden proportioneel uitgedrukt ten opzichte van de individuele gewichten, zoals die onmiddellijk 10 voorafgaand aan.de injectie waren en weergegeven als gemiddelde ± SEMFurthermore, the toxicity of i.v. injected toxic and detoxified typhimurium Re endotoxin, alone or mixed with various MDP doses, determined. The results are shown in the accompanying figure. Groups of 5 mice were given laboratory-5 food and water ad libitum and kept in a constant temperature (18QC) and humidity environment. The changes in body weight, measured 24 hours (open spheres) and 48 hours (black spheres) after the injection, respectively, were expressed proportionally to the individual weights, as they were immediately prior to the injection, and expressed as mean ± SEM
(verticale balken). De cijfers tussen haakjes duiden op het totale aantal dode muizen na 24 en 48 uur. Diarree en lethargie werden na 5 uur beoordeeld.(vertical bars). The figures in brackets indicate the total number of dead mice at 24 and 48 hours. Diarrhea and lethargy were assessed after 5 hours.
De gegeven cijfers duiden op het aantal muizen met deze symptomen.The numbers given indicate the number of mice with these symptoms.
De aanduiding nd betekent: niet bepaald.The indication nd means: not determined.
15 Bij de experimenten, waarvan de resultaten in tabel A worden getoond, bleek dat injectie van 25 yg J3. coli endotoxine in BALB/c muizen met 9 dagen oude Meth A tumoren in 100% van de gevallen een sterke tumor necrose, gevolgd door groeiremming van de meeste tumoren en volledige genezing bij 30% van dé muizen veroorzaakte. Lagere 20 doses waren in alle opzichten minder actief. MDP alleen veroorzaakte in uiteenlopende doses geen tumor necrose, doch induceerde enige regressie. Toevoeging van 3-100 yg MDP aan 10 yg 12. coli endotoxine leidde tot een aanzienlijke versterking van alle gemeten parameters van de antitumoractiviteit van het endotoxine. Met uitzondering van 25 de necroseomvang kon geen duidelijk verband tussen dosis en effekt worden waargenomen. Verlaging van de endotoxine dosis bij een constante MDP dosis van 30 yg leidde niet tot een duidelijke afname van de antitumoractiviteit.The experiments, the results of which are shown in Table A, showed that injection of 25 µg of J3. coli endotoxin in BALB / c mice with 9 day old Meth A tumors in 100% of cases a strong tumor necrosis, followed by growth inhibition of most tumors and complete healing in 30% of mice. Lower doses were less active in all respects. MDP alone did not cause tumor necrosis at various doses, but induced some regression. Addition of 3-100 µg MDP to 10 µg 12. coli endotoxin significantly enhanced all measured parameters of the endotoxin anti-tumor activity. With the exception of necrosis size, no clear relationship between dose and effect could be observed. Reduction of the endotoxin dose at a constant MDP dose of 30 µg did not significantly decrease anti-tumor activity.
Bij de experimenten, waarvan de resultaten in tabel B en de 30 figuur worden getoond, bleek dat gedetoxificeerd Sh typhimurium Re endotoxine in uiteenlopende doses een zeer geringe necrose veroorzaakte en de groei van de tumor nauwelijks beïnvloedde. Het toxische endotoxine vertoonde reeds in een dosis van 10 yg een aanzienlijke activiteit, maar de toevoeging van MDP was vaak lethaal.In the experiments, the results of which are shown in Table B and the figure, it was found that detoxified Sh typhimurium Re endotoxin at various doses caused very little necrosis and hardly affected tumor growth. The toxic endotoxin already showed considerable activity at a dose of 10 µg, but the addition of MDP was often lethal.
35 Combinatie van het gedetoxificeerde endotoxine preparaat met MDP35 Combination of the detoxified endotoxin preparation with MDP
leidde daarentegen tot een zeer sterke antitumoractiviteit, terwijl 8401226 -10- geen van de onderzochte combinaties lethaliteit of diarree veroorzaakte en lethargie slechts bij hogere MDP doses werd waargenomen.on the other hand, led to very strong anti-tumor activity, while 8401226-10- none of the combinations tested caused lethality or diarrhea and lethargy was only observed at higher MDP doses.
Het gewichtsverlies nam met toenemende doses van beide componenten toe, maar kwam nooit boven 10%. Het lichaamsgewicht was na 48 uur 5 steeds hoger dan na 24 uur, hetgeen op herstel lijkt te wijzen.Weight loss increased with increasing doses of both components, but never exceeded 10%. Body weight was always higher after 48 hours than after 24 hours, which seems to indicate recovery.
Zoals in de figuur wordt duidelijk gemaakt, veroorzaakten alle doses van toxisch endotoxine, al dan niet gecombineerd met MDP, lethargie en diarree, hoewel MDP verrassenderwijze enige bescherming tegen diarree bleek te bieden. Het gewichtsverlies was groot, soms meer dan 15%, en 10 na 48 uur groter dan na 24 uur. Hogere MDP doses leidden tot een kleiner gewichtsverlies, hetgeen zou kunnen duiden op vloeistofopho-ping in de weefsels als gevolg van shock. Bij hogere doseringen werd lethaliteit waargenomen. De LD^ waarde van toxisch endotoxine alleen is meer dan 160 yg per muis, van een combinatie met 30 yg respec-15 tievelijk 100 yg MDP echter 28,3 yg respectievelijk 24,6 yg (berekend volgens de door Nowotny, Basic Exercises in Immunochemistry, blz. 303-304, 1979, Springer Verlag, Berlijn, gemodificeerde Spearman-Karber methode).As shown in the figure, all doses of toxic endotoxin, whether or not combined with MDP, caused lethargy and diarrhea, although surprisingly MDP was found to provide some protection against diarrhea. Weight loss was great, sometimes more than 15%, and greater after 48 hours than after 24 hours. Higher MDP doses resulted in less weight loss, which could indicate fluid accumulation in the tissues due to shock. Lethality was observed at higher doses. The LD 1 value of toxic endotoxin alone is more than 160 yg per mouse, from a combination of 30 yg and 100 yg MDP, respectively, but 28.3 yg and 24.6 yg, respectively (calculated according to the data provided by Nowotny, Basic Exercises in Immunochemistry pp. 303-304, 1979, Springer Verlag, Berlin, modified Spearman-Karber method).
VOORBEELD IIEXAMPLE II
20 In dit voorbeeld werd het effekt onderzocht van het tijdstip en de wijze van toediening van het gedetoxificeerde endotoxine en het MDP. Voor de dierproeven werden dezelfde soort muizen en tumoren gebruikt als in het voorgaande voorbeeld.In this example, the effect of the time and mode of administration of the detoxified endotoxin and the MDP was examined. The same kind of mice and tumors as in the previous example were used for the animal experiments.
Behalve endotoxine van JE. coli 0111:B4 werden ook endotoxine 25 (LPSw) van E. coli 089 en een door bestraling (150 kGy bestraling 60 met Co gammastraling) gedetoxificeerd preparaat van hetzelfde endotoxine gebruikt, beide verkregen bij prof. dr. L. Bertók van het "Frédéric Joliot-Curie" National Research Institute for Radiobiology and Radiohygiene, Boedapest, Hongarije. De detoxificatie procedure 30 is beschreven door Füst et al, Infect. Immun. 16, 26-31, 1977; het ge- p detoxificeerde preparaat is in de handel onder het merk Tolerin .Except endotoxin from JE. coli 0111: B4 also endotoxin 25 (LPSw) of E. coli 089 and a preparation of the same endotoxin detoxified by radiation (150 kGy irradiation 60 with Co gamma radiation), both obtained from Prof. L. Bertók of the "Frédéric Joliot-Curie "National Research Institute for Radiobiology and Radiohygiene, Budapest, Hungary. The detoxification procedure 30 is described by Füst et al, Infect. Immun. 16, 26-31, 1977; the p detoxified preparation is commercially available under the trademark Tolerin.
De LDj.q waarden van deze twee preparaten in CFY-random vrouwtjesratten waren respectievelijk 2 mg/kg en 21 mg/kg. Tenzij anders aangegeven werden de preparaten iv geïnjecteerd in 0,5 ml pyrogeenvrije fysio-35 logische zoutoplossing.The LDj.q values of these two preparations in female CFY-random rats were 2 mg / kg and 21 mg / kg, respectively. Unless otherwise indicated, preparations were injected iv into 0.5 ml of pyrogen-free physiological saline.
8401226 5 -11-8401226 5 -11-
De muizen werden op dag 0 subcutaan met 3 x 10 levenskrachtige Meth A cellen in het abdomen geïnjecteerd. De behandeling werd begonnen op dag 9 (toen de tumor een diameter van ongeveer 7,5 mm had), tenzij anders is aangegeven. De omvang van licht en donker ge-5 kleurde necrose werd op dag 11 gemeten en uitgedrukt in de verhouding van de gemiddelde diameters van het necrotische gebied en de tumor, maal honderd. De diameters werden met een schuifmaat gemeten. Groei-inhibitie werd genoteerd indien de tumor binnen twee dagen na de behandeling niet groter was geworden. Volledige genezing werd genoteerd 10 indien de tumoren binnen 19 dagen na de behandeling volledig waren verdwenea De gegevens zijn uitgedrukt als de gemiddelde waarde ± SEM. Significantie- analyse geschiedde met Student's t-test. P-waarden boven 0,05 werden niet-significant geacht.The mice were injected subcutaneously with 3 x 10 viable Meth A cells into the abdomen on day 0. Treatment was started on day 9 (when the tumor was approximately 7.5 mm in diameter) unless otherwise indicated. The magnitude of light and dark colored necrosis was measured on day 11 and expressed in the ratio of the mean diameters of the necrotic area and the tumor, times one hundred. The diameters were measured with a caliper. Growth inhibition was noted if the tumor had not grown within two days of treatment. Complete healing was noted if the tumors had completely disappeared within 19 days of treatment a The data are expressed as the mean value ± SEM. Significance analysis was performed with Student's t-test. P values above 0.05 were considered to be insignificant.
De resultaten zijn in onderstaande tabellen C-F samengevat.The results are summarized in Tables C-F below.
TABEL CTABLE C
Effekt van variatie van het tijdstip van MDP toediening op de Antitumoractiviteit van endotoxine (E. coli 0111:B4) 1 2 behandeling necrose frequentie (%)van frequentie . ......Effect of variation of time of MDP administration on the anti-tumor activity of endotoxin (E. coli 0111: B4) 1 2 treatment necrosis frequency (%) of frequency. ......
I omvang groei- volledige -^- inhi-3 4 licht donker bitie genezingI magnitude growth - complete - ^ - inhi-3 4 light dark recovery healing
Endotoxine (dag 9) 60 30 50 ± 3 60 20 MDP (dag 9) 10 0 43 10 10 MDP (dag 9)/endotoxine (dag 9) 0 100 66 ± 3^ 90 60 MDP (dag 7)/endotoxine (dag 9) 50 30 41 ± 3 20 10 MDP (dag 8)/endotoxine (dag 9) 80 0 49 ± 4 80 30Endotoxin (Day 9) 60 30 50 ± 3 60 20 MDP (Day 9) 10 0 43 10 10 MDP (Day 9) / Endotoxin (Day 9) 0 100 66 ± 3 ^ 90 60 MDP (Day 7) / Endotoxin (Day 9) 50 30 41 ± 3 20 10 MDP (Day 8) / endotoxin (Day 9) 80 0 49 ± 4 80 30
Endotoxine (dag 9)/MDP (dag 10) 70 30 44 ± 3 50 0 fysiologische zoutoplossing 00 00 (dag 9)Endotoxin (day 9) / MDP (day 10) 70 30 44 ± 3 50 0 physiological saline 00 00 (day 9)
Groepen van 10 BALB/c muizen met 9 dagen oude Meth A transplantaten werden i.v. geïnjecteerd met 3 yg endotoxine (LPSw van _E. coli 0111:B4)in fysiologische zoutoplossing. MDP (30 yg) in fysiologische zoutoplossing 2 werd i.v. geïnjecteerd vóór, samen met of na endotoxine.- Necrose werd gemeten op dag 11. De omvang wordt gegeven als de gemiddelde waarde±SEM. 3Groups of 10 BALB / c mice with 9 day old Meth A grafts were injected i.v. injected with 3 µg of endotoxin (LPSw of _E. coli 0111: B4) in physiological saline. MDP (30 µg) in physiological saline 2 was injected i.v. injected before, together with or after endotoxin. - Necrosis was measured on day 11. The magnitude is given as the mean value ± SEM. 3
Geen toename van de tumorgrootte binnen 2 dagen na de injectie.- 8401226 -12- .(vervolg tabel C) 4No increase in tumor size within 2 days after injection.- 8401226 -12-. (Continued Table C) 4
Volledige verdwijning van de tumor binnen 19 dagen van de behande-5 ling.- p < 0,05 vergeleken met alle andere behandelingen.Complete tumor disappearance within 19 days of treatment. P <0.05 compared to all other treatments.
TABEL DTABLE D
’Antitumoractiviteit van MDP en endotoxine (E. coli 0111:B4), gelijktijdig langs verschillende routes geïnjecteerd.Anti-tumor activity of MDP and endotoxin (E. coli 0111: B4), injected simultaneously through several routes.
1 2 behandeling necrose frequentie (%) --- van_ . , . _ ...... omvang groei- volledige voetzool ï.v. frequentie (%) . , .1 2 treatment necrosis frequency (%) --- of_. ,. _ ...... size growth- full foot sole ï.v. frequency (%). ,.
--- inhi-_ 4 __licht donker_bitje3 gene*ing fysiologische endotoxine 90 0 41 ± 5 40 30 zoutoplossing MDP fysiologische 00 00 zoutoplos sing MDP endotoxine 10 90 62 ± 4^ 70 50 endotoxine fysiologische 00 00 zoutoplossing endotoxine MDP 0 100 59 ± 4^ 70 20 fysiologische fysiologische 10 0 00 zoutoplossing zoutoplossing--- inhi-_ 4 __ light dark_bitje3 gene * ing physiological endotoxin 90 0 41 ± 5 40 30 saline MDP physiological 00 00 saline MDP endotoxin 10 90 62 ± 4 ^ 70 50 endotoxin physiological 00 00 saline endotoxin MDP 0 100 59 ± 4 ^ 70 20 physiological physiological 10 0 00 saline saline
Groepen van 10 BALB/c muizen met 9 dagen oude s.c. Meth A tumoren op het abdomen werden gelijktijdig met 3 yg endotoxine en 30 yg MDP s.c.Groups of 10 BALB / c mice with 9 day old s.c. Meth A tumors on the abdomen were co-administered with 3 µg endotoxin and 30 µg MDP s.c.
2 in de voetzool resp. i.v. of omgekeerd geïnjecteerd.- Necrose werd gemeten op dag 11. De omvang wordt gegeven als de gemiddelde 3 waarde ± SEM.- Geen toename van de tumorgrootte binnen 2 dagen na 4 de injectie.- Volledige verdwijning van de tumor binnen 19 dagen vain de behandeling.- ^ p < 0,05 vergeleken met de overeenkomstige behandeling zonder MDP.2 in the sole of the foot resp. i.v. or injected in reverse.- Necrosis was measured on day 11. Size is given as the mean 3 value ± SEM.- No increase in tumor size within 2 days after the 4th injection.- Complete disappearance of the tumor within 19 days of treatment .- ^ p <0.05 compared to the corresponding treatment without MDP.
8401226 -13-8401226 -13-
TABEL ETABLE E
tumoractiviteit van E. coli 0111:B4 endotoxine en MDP bij s.c. injectie op verschillende plaatsen.tumor activity of E. coli 0111: B4 endotoxin and MDP at s.c. injection in different places.
1 2 behandeling necrose frequentie (%) van linker rechter frequentie omvang groei- volledige voetzool voetzool _' ' inhi-^ ^ licht donker bitie genezing endotoxine fysiologische 00 00.1 2 treatment necrosis frequency (%) from left right frequency size growth full foot sole foot sole inhigh light dark end healing endotoxin physiological 00 00.
zoutoplossing endotoxine MDP 80 0 42 ± 4 40 60 -------«saline endotoxin MDP 80 0 42 ± 4 40 60 ------- «
Groepen van 5 BALB/c muizen met 9 dagen oude Meth A transplantaten werden s.c. met 3 yg endotoxine (LPSw van 13. coli 0111:B4), en 30 yg MDP of fysiologische zoutoplossing in respectievelijk de linker en 2 de rechter voetzool geïnjecteerd.- Gemeten op dag 11. De omvang 3 wordt uitgedrukt als gemiddelde waarde ± SEM.- Geen toename van de 4 tumorgrootte binnen 2 dagen na de injectie.- Volledige verdwijning van de tumor binnen 19 dagen van de behandeling.Groups of 5 BALB / c mice with 9 day old Meth A grafts were injected s.c. with 3 µg of endotoxin (LPSw of 13. coli 0111: B4), and 30 µg of MDP or saline injected into the left and 2nd sole of the foot, respectively. Measured on day 11. The magnitude 3 is expressed as mean value ± SEM. - No increase in the 4 tumor size within 2 days after the injection. - Complete disappearance of the tumor within 19 days of treatment.
8401226 -14-8401226 -14-
____________________I____________________I
Φ Φ ft Ρ Ό cn o p c 00 O ld O Q) -^r poop θ' σ ιΰ ρ ρ φ •η ·η c ns φ θ' λ Η - Ό ·Ρ Ρ φ Ρ ο c ον οοοοοοο ο (β-ΡΟΦ υ Ιτηφ oicNin ft ο ε Ό ^ γη c φ c Β _ Ο Φ Ρ Φ Ρ *« η * > O' ft α 2 W <Ν φ ^ C Φ Τ3 2 φ cic Π η χ ό φ ο Φ ΐ! φ ο ρ > ο C m ·Η Ρ φ Ό •η a 4-ΐ ο φ φ χ ά ι -η οοοοοοο ο Ό-ρεσ ο £ ·ρ ρ ^rfoo^no ¢0(0^Φ Φ ft Ρ Ό cn opc 00 O ld OQ) - ^ r poop θ 'σ ιΰ ρ ρ φ • η · η c ns φ θ' λ Η - Ό · Ρ Ρ φ Ρ ο c ον οοοοοοοο ο (β-ΡΟΦ υ Ιτηφ oicNin ft ο ε Ό ^ γη c φ c Β _ Ο Φ Ρ Φ Ρ * «η *> O 'ft α 2 W <Ν φ ^ C Φ Τ3 2 φ cic Π η χ ό φ ο Φ ΐ! φ ο ρ> ο C m · Η Ρ φ Ό • η a 4-ΐ ο φ φ χ ά ι -η οοοοοοο ο Ό-ρεσ ο £ · ρ ρ ^ rfoo ^ no ¢ 0 (0 ^
Ρ £ φ ·Ρ t-i φ φ CΡ £ φ · Ρ t-i φ φ C.
Ο ή] O Ρ ·η φ CΟ ή] O Ρ · η φ C
'O^PC C C Ο Φ c σ ·η φ η +J c Φ φ φ c 0> C ·Ρ Η -Ρ Φ Λ (β φ σ φ S a c ο ρ S LD ιη ·Η ΓΟ ο ρ σ ιρ rn co ιη ττ σ . οι ε ο c > οι ι 3 c φ +ι +ι +ι +ι +ι +ι . ο · ρ'O ^ PC CC Ο Φ c σ η φ η + J c Φ φ φ c 0> C · Ρ Η -Ρ Φ Λ (β φ σ φ S ac ο ρ S LD ιη · ΓΟ ο ρ σ ιρ rn co ιη ττ σ. οι ε ο c> οι ι 3 c φ + ι + ι + ι + ι + ι + ι. ο · ρ
> ·Ρ Γ-Η S> · Ρ Γ-Η S
C ε co νο ο ο co ·~ι a Η Φ Φ ο •d' co ιη m ο cow'd Φ Ρ ft *σ Ο +ι c (¾ c cn ρ ο <d ρ •Ρ Φ _ φ Ν Φ > 2 Ρ 0) rfS Ρ % Ό Φ Ο ft. φ ρ Ρ Ο Ρ Η Ρ X ΟΟΟΟΟΟΟ Ο C Ο id C Φ O Ο Λ1 C *-< Ο Ο Cd Ο φ 01 id ·Ρ ΌC ε co νο ο ο co · ~ ι a Η Φ Φ ο • d 'co ιη m ο cow'd Φ Ρ ft * σ Ο + ι c (¾ c cn ρ ο <d ρ • Ρ Φ _ φ Ν Φ > 2 Ρ 0) rfS Ρ% Ό Φ Ο ft. φ ρ Ρ Ο Ρ Η Ρ X ΟΟΟΟΟΟΟ Ο C Ο id C Φ O Ο Λ1 C * - <Ο Ο Cd Ο φ 01 id Ρ Ό
.Η Φ .S Ο -Η «Η Ρ -Ρ s C C.Η Φ .S Ο -Η «Η Ρ -Ρ s C C
s~-/ C η Ό (d Ο το Ο Ό ρ Ρ ο Φ ·ρ Νs ~ - / C η Ό (d Ο το Ο Ό ρ Ρ ο Φ · ρ Ν
Ρ m C Η Ό ESΡ m C Η Ό ES
φ 2 (ΰ ο ή ό σφ 2 (ΰ ο ή ό σ
Φ & 4J ι—I ·Η Φ Ρ CΦ & 4J ι — I · Η Φ Ρ C
ϋ ^ Ρ ΟΟΟΟΟΟΟ Ο ft 0) Τ3 Φ ·Ρ Η r OO'd'CMt" ΙΟ >1 Ό > Ρ Ρ ηΐ ·Ρ C Ρ -Ρ Φ •ρ ^ rP id ε Φ Όϋ ^ Ρ ΟΟΟΟΟΟΟ Ο ft 0) Τ3 Φ · Ρ Η r OO'd'CMt "ΙΟ> 1 Ό> Ρ Ρ ηΐ · Ρ C Ρ -Ρ Φ • ρ ^ rP id ε Φ Ό
X Ρ -Ρ Φ Ο CX Ρ -Ρ Φ Ο C
ο ρ ε θ' ·ρ <d Ρ Ό Ρ Φ < W φ φ φ Ό C ΙΟΟΟΙΤΙΟΟΟΟ - Ό Η Ρο ρ ε θ '· ρ <d Ρ Ό Ρ Φ <W φ φ φ Ό C ΙΟΟΟΙΤΙΟΟΟΟ - Ό Η Ρ
(1) τΗ νΗ *Η 1 *—< ^ Ο pH(1) τΗ νΗ * Η 1 * - <^ Ο pH
σ ρ μ ο φ _ Φ C Η > Ό σ 2 ·ρ <d π· c ρ ρ * φ ft C I φ pp λ το ο φ · ε (dg ft 3 g > φσ ρ μ ο φ _ Φ C Η> Ό σ 2 ρ <d πc ρ ρ * φ ft C I φ pp λ το ο φ · ε (dg ft 3 g> φ
Ρ S Q ΙΙ + ΙΙ++Ι ο φ ·Ρ CQ S Q ΙΙ + ΙΙ ++ Ι ο φ Ρ C
ρ 2 σ σ ρ φ w c ρ- φ ο Μ φ φ σ φ φ ρ ε σ ο τι γρ ο φ η ρ c φ οφ «η ω σσσσσσ ό ή-ρο Ό-Ρ σ ·Ρ 3 3 3 3 3 3 Ρ ρ Ρ pcoi' οφοφφ c <ο ·ρ ο ιηοοιοοο ε s ό >ρ 2 σ σ ρ φ wc ρ- φ ο Μ φ φ σ φ φ ρ ε σ ο τι γρ ο φ η ρ c φ οφ «η ω σσσσσσσ ό ή-ρο Ό-Ρ σ · Ρ 3 3 3 3 3 3 Co ρ Ρ pcoi 'οφοφφ c <ο · ρ ο ιηοοιοοο ε s ό>
(dC rp Q Ν Η rt Μ Η Η +J(dC rp Q Ν Η rt Μ Η Η + J
>·Ρφ φ Ό Ο (d m , ·9 ό ε O' c c ο ρ g c c (d X Ο id c φ > e ο φ ο ρ φ σ φ σ φ s ε φ ρ _ φ ρ c ρ c Νφοσν pc ρ οοου·ρυ·ρ ·ρ σ ιβ Φ ·ρ Φ 00 CD CD 01 0] 01 01 ρ φ Ό ft Ρ, · C Ο Ο Ο ·Ρ 01 ·Ρ 01 - ε ρ ο 0¾ >·ρ σ ο σ ο ocNLTi εο . χ c c c -ρ ·ρ ·ρ ο ή ο ρ ο> Ρφ φ Ό Ο (dm, 9 ό ε O 'cc ο ρ gcc (d X Ο id c φ> e ο φ ο ρ φ σ φ σ φ s ε φ ρ _ φ ρ c ρ c Νφοσν pc ρ οοου · ρυ · ρ · ρ σ ιβ Φ · ρ Φ 00 CD CD 01 0] 01 01 ρ φ Ό ft Ρ, C Ο Ο Ο · Ρ 01 · Ρ 01 - ε ρ ο 0¾> · ρ σ ο σ ο ocNLTi εο. χ ccc -ρ · ρ · ρ ο ή ο ρ ο
ft 3 'Ρ Ο ·Ρ·Ρ*ΡγΡτΡγΡγΡ£1|γΡΡι ν c '-I C Ift 3 'Ρ Ο · Ρ · Ρ * ΡγΡτΡγΡγΡ £ 1 | γΡΡι ν c' -I C I
pc ρ ΡΡΡΟΟΟΟΟΟΟ CQ φ >-ι φ · ^ j J ο ΦΦΦϋΟϋ-ρρ-ρρ ρ φ c σpc ρ ΡΡΡΟΟΟΟΟΟΟ CQ φ> -ι φ · ^ j J ο ΦΦΦϋΟϋ-ρρ-ρρ ρ φ c σ
(Β Π Φ 13 Η Η Η 013013 CHftCC(Β Π Φ 13 Η Η Η 013013 CHftCC
ft C Η C ΟΟΟ·, ·, ·, >ι Ο >ι Ο (QrPid-P-Pft C Η C ΟΟΟ ·, ·,>, ι Ο> ι Ο (QrPid-P-P
<1 a ρ Μ Ei Εη Η Η| Η| Β| Ρ Ν Ρ Ν *η (d Ό Ρ Η Εη 03 8401226<1 a ρ Μ Ei Εη Η Η | Η | Β | Ρ Ν Ρ Ν * η (d Ό Ρ Η Εη 03 8401226
Aa
« -15-«-15-
Bij de experimenten bleek dat louter i.v. toediening van een suboptimale dosis van 3 yg E. coli 0111:B4 endotoxine aan Meth A dragende muizen leidde tot een hoog percentage van overwegend licht gekleurde necrose, gevolgd door groeiremming van de tumor in 60% 5 van de muizen en volledige genezing in 20% van de muizen. MDP alleen veroorzaakte slechts incidentele necrose en regressie. Gemengde toediening leidde tot 100% donker gekleurde en significant uitgebreidere necrose en een hoog percentage volledige regressie (60%), bij vergelijking met behandelingen met elk van beide componenten alleen.The experiments showed that only i.v. administration of a suboptimal dose of 3 µg E. coli 0111: B4 endotoxin to Meth A-bearing mice resulted in a high percentage of predominantly light-colored necrosis, followed by tumor growth inhibition in 60% 5 of the mice and complete cure in 20% of the mice. MDP alone caused only incidental necrosis and regression. Mixed administration resulted in 100% dark colored and significantly more extensive necrosis and a high rate of complete regression (60%) when compared to treatments with either component alone.
10 Toediening van MDP één of twee dagen vóér of één dag na endotoxine leidde niet tot een versterking van de anti-tumoractiviteiten van endotoxine.Administration of MDP one or two days before or one day after endotoxin did not enhance endotoxin anti-tumor activities.
Gelijktijdige toediening van endotoxine en MDP langs i.v. respectievelijk s.c. route veroorzaakte een vergelijkbare anti-tumor-15 werking als gecombineerde i.v. toediening. Langs de s.c. route geïnjecteerd endotoxine miste elke anti-tumoractiviteit. Wanneer tegelijkertijd echter MDP i.v. werd geïnjecteerd, werd een even sterke necrose en tumor groeiremming bereikt als in het geval van een combinatiebehandeling langs de omgekeerde route, maar deze werd minder 20 vaak gevolgd door regressie. Simultane injectie van endotoxine en MDP langs s.c. route in respectievelijk het linker en het rechter voetkussen veroorzaakte zowel necrose als een hoog percentage regressie, terwijl opnieuw endotoxine alleen onwerkzaam was.Co-administration of endotoxin and MDP by IV. respectively s.c. route caused a similar anti-tumor 15 activity as combined i.v. administration. Along the s.c. route injected endotoxin lacked any anti-tumor activity. However, when MDP i.v. was injected, an equally strong necrosis and tumor growth inhibition was achieved as in the case of a combination treatment by the reverse route, but was less often followed by regression. Simultaneous injection of endotoxin and MDP along s.c. route in the left and right foot pads, respectively, caused both necrosis and a high rate of regression, while again endotoxin alone was ineffective.
Tabel F laat zien dat een dosis van 25 yg E_. coli 089 endo-25 toxine een redelijke mate van necrose en 20% regressies opriep. TolerinR was in dezelfde dosis minder actief. Hoewel kleinere hoeveelheden (10 Ug) van beide stoffen een geringere activiteit bezaten, werd de antitumoractiviteit door toevoeging van MDP aan deze lage doses van endotoxine preparaten versterkt tot een hogere waarde dan bij toe-30 diening van 25 yg van elk endotoxinepreparaat alleen werd waargenomen.Table F shows a dose of 25 µg E_. coli 089 endo-25 toxin elicited a reasonable degree of necrosis and 20% regressions. TolerinR was less active at the same dose. Although smaller amounts (10 Ug) of both substances had less activity, the anti-tumor activity by adding MDP to these low doses of endotoxin preparations was enhanced to a higher value than was observed when administering 25 µg of each endotoxin preparation alone.
84012268401226
Claims (6)
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NL8401226A NL8401226A (en) | 1984-04-16 | 1984-04-16 | PHARMACEUTICAL PRODUCT WITH ANTI-TUMOR EFFECT; USE OF A PHARMACEUTICAL PRODUCT OR PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS IN ANTI-TUMOR THERAPY. |
| AU41581/85A AU4158185A (en) | 1984-04-16 | 1985-04-16 | A pharmaceutical product having an anti-tumor activity; the use of a pharmaceutical product or of pharmaceutical compositions in an anti-tumor therapy |
| PCT/NL1985/000016 WO1985004808A1 (en) | 1984-04-16 | 1985-04-16 | A pharmaceutical product having an anti-tumor activity; the use of a pharmaceutica product or of pharmaceutical compositions in an anti-tumor therapy |
| EP85901606A EP0179792A1 (en) | 1984-04-16 | 1985-04-16 | A pharmaceutical product having an anti-tumor activity; the use of a pharmaceutica product or of pharmaceutical compositions in an anti-tumor therapy |
| JP60501602A JPS61502123A (en) | 1984-04-16 | 1985-04-16 | Pharmaceutical products with antitumor activity; use of pharmaceutical products or pharmaceutical compositions for antitumor therapy |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NL8401226A NL8401226A (en) | 1984-04-16 | 1984-04-16 | PHARMACEUTICAL PRODUCT WITH ANTI-TUMOR EFFECT; USE OF A PHARMACEUTICAL PRODUCT OR PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS IN ANTI-TUMOR THERAPY. |
| NL8401226 | 1984-04-16 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NL8401226A true NL8401226A (en) | 1985-11-18 |
Family
ID=19843818
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NL8401226A NL8401226A (en) | 1984-04-16 | 1984-04-16 | PHARMACEUTICAL PRODUCT WITH ANTI-TUMOR EFFECT; USE OF A PHARMACEUTICAL PRODUCT OR PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS IN ANTI-TUMOR THERAPY. |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0179792A1 (en) |
| JP (1) | JPS61502123A (en) |
| AU (1) | AU4158185A (en) |
| NL (1) | NL8401226A (en) |
| WO (1) | WO1985004808A1 (en) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0331756B1 (en) * | 1987-09-02 | 1993-05-26 | Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. | Agents for prophylaxis and treatment of thrombopenia |
| AU7352498A (en) * | 1997-04-11 | 1998-11-11 | Kaluzhin, Oleg Vitalievich | Immunomodulator and pharmaceutical compositions with antitumor properties, and afood additive |
| HUP0300421A2 (en) | 2000-03-31 | 2003-06-28 | Purdue Research Foundation | Method of treatment using ligand-immunogen conjugates |
| WO2003028634A2 (en) * | 2001-09-28 | 2003-04-10 | Purdue Research Foundation | Method of treatment using ligand-immunogen conjugates |
| US8168164B2 (en) | 2006-02-03 | 2012-05-01 | Purdue Research Foundation | Targeted conjugates and radiation |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4435386A (en) * | 1982-05-26 | 1984-03-06 | Ribi Immunochem Research, Inc. | Refined detoxified endotoxin product |
| US4436728A (en) * | 1982-05-26 | 1984-03-13 | Ribi Immunochem Research, Inc. | Refined detoxified endotoxin product |
-
1984
- 1984-04-16 NL NL8401226A patent/NL8401226A/en not_active Application Discontinuation
-
1985
- 1985-04-16 JP JP60501602A patent/JPS61502123A/en active Pending
- 1985-04-16 AU AU41581/85A patent/AU4158185A/en not_active Abandoned
- 1985-04-16 WO PCT/NL1985/000016 patent/WO1985004808A1/en not_active Application Discontinuation
- 1985-04-16 EP EP85901606A patent/EP0179792A1/en active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS61502123A (en) | 1986-09-25 |
| AU4158185A (en) | 1985-11-15 |
| EP0179792A1 (en) | 1986-05-07 |
| WO1985004808A1 (en) | 1985-11-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Vetvicka et al. | Orally administered marine (1→ 3)-β-d-glucan Phycarine stimulates both humoral and cellular immunity | |
| US4877611A (en) | Vaccine containing tumor antigens and adjuvants | |
| Tanaka et al. | Augmentation of antitumor resistance by a strain of unicellular green algae, Chlorella vulgaris | |
| EP1765391B1 (en) | Bacterial compositions for the treatment of cancer | |
| RU2153332C2 (en) | Method of sensitization of cancer cells to lysis mediated by killer-cells | |
| JP3628689B2 (en) | Muramyl compounds for the treatment of septic shock | |
| ITO et al. | Effects of a blended Chinese medicine, xiao-chai-hu-tang, on Lewis lung carcinoma growth and inhibition of lung metastasis, with special reference to macrophage activation | |
| Rush et al. | Immunomodulation in horses | |
| Bloksma et al. | Endotoxin-induced antitumor activity in the mouse is highly potentiated by muramyl dipeptide | |
| NL8401226A (en) | PHARMACEUTICAL PRODUCT WITH ANTI-TUMOR EFFECT; USE OF A PHARMACEUTICAL PRODUCT OR PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS IN ANTI-TUMOR THERAPY. | |
| Nishioka et al. | Tuftsin: an immunomodulating peptide hormone and its clinical potential as a natural biological response modifier | |
| Fidler et al. | Species variability for toxicity of free and liposome-encapsulated muramyl peptides administered intravenously | |
| Inamura et al. | Activation of tumoricidal properties in macrophages and inhibition of experimentally-induced murine metastases by a new synthetic acyltripeptide, FK-565 | |
| Steele et al. | Reovirus type 3 chemoimmunotherapy of murine lymphoma is abrogated by cyclosporine | |
| Baker et al. | Immunotherapy of Human Cancer1 | |
| EP3218003B1 (en) | Attenuated or inactivated pathogenic escherichia coli for treating urogenital cancer | |
| Butler et al. | Combined immunostimulation in the prevention of tumor take in mice using endotoxins, their derivatives, and other immune adjuvants | |
| Bloksma et al. | Muramyl dipeptide is a powerful potentiator of the antitumor action of various tumor-necrotizing agents | |
| SONE et al. | In vitro cytotoxicity to various human tumor cell lines of a tumor cytotoxic factor (s) produced by human alveolar macrophages | |
| Rothstein et al. | Relationship of tumour necrosis factor and endotoxin to macrophage cytotoxicity, haemorrhagic necrosis and lethal shock | |
| EP0644773B1 (en) | Anti-aids immunomodulator complex | |
| Berendt et al. | Tumor inhibition in mice by lipopolysaccharide-induced peritoneal cells and an induced soluble factor | |
| US6806253B2 (en) | Immunodulatory complex and use thereof in helicobacter diseases | |
| KATAOKA et al. | Immunotherapeutic potential in guinea-pig tumor model of deoxyribonucleic acid from Mycobacterium bovis BCG complexed with poly-L-lysine and carboxymethylcellulose | |
| Nitta et al. | Water-soluble adjuvant obtained from Bacterionema matruchotii |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A1B | A search report has been drawn up | ||
| BV | The patent application has lapsed |