NL8000527A - Werkwijze voor het bevorderen van hybridisatie van cellen in vitro en van de produktie en uitscheiding van stoffen, gevormd door dergelijke celhybriden, werkwijze voor het bevorderen van de produktie van monoclonale antilichamen in vitro door toepassing van een hybridomatechniek, alsmede endotheelcellen en/of supernatant van endotheelcellen. - Google Patents
Werkwijze voor het bevorderen van hybridisatie van cellen in vitro en van de produktie en uitscheiding van stoffen, gevormd door dergelijke celhybriden, werkwijze voor het bevorderen van de produktie van monoclonale antilichamen in vitro door toepassing van een hybridomatechniek, alsmede endotheelcellen en/of supernatant van endotheelcellen. Download PDFInfo
- Publication number
- NL8000527A NL8000527A NL8000527A NL8000527A NL8000527A NL 8000527 A NL8000527 A NL 8000527A NL 8000527 A NL8000527 A NL 8000527A NL 8000527 A NL8000527 A NL 8000527A NL 8000527 A NL8000527 A NL 8000527A
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- cells
- vitro
- production
- promoting
- human
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
- C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
- C12N5/16—Animal cells
- C12N5/163—Animal cells one of the fusion partners being a B or a T lymphocyte
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/44—Vessels; Vascular smooth muscle cells; Endothelial cells; Endothelial progenitor cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
- C12N2502/28—Vascular endothelial cells
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/948—Microorganisms using viruses or cell lines
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
- 1 - ΐ ^^3
Ν/29.466-Kp/vdM
Werkwijze voor het bevorderen van hybridisatie van cellen in vitro en van de produktie en uitscheiding van stoffen, gevormd door dergelijke celhybriden, werkwijze voor het bevorderen van de produktie van monoclonale antilichamen in vitro door toepassing van een hybridomatechniek, alsmede endotheelcellen en/of supernatant van endotheelcellen.
De uitvinding heeft betrekking op een werkwijze voor het bevorderen van hybridisatie van cellen in vitro en van de produktie en uitscheiding van stoffen die gevormd worden door dergelijke celhybriden, op een werkwijze voor het 5 bevorderen van de produktie van monoclonale antilichamen in vitro door toepassing van een hybridomatechniek, alsmede op endotheelcellen en/of de supernatant van endotheelcellen.
De inductie van hybriden tussen 2 verschillende cellen blijkt succesvol te zijn bij de in vitro synthese en 10 secretie van diverse celprodukten. Deze techniek blijkt bovendien op grote schaal te worden toegepast bij "gene mapping".
Het is aangetoond (Kohier, G en Milstein, C.: Nature, vol.
256, blz. 495, -1975) dat de hybridomatechniek de produktie van monoclone antilichamen mogelijk maakt, (d.w.z. zuivere 15 antilichamen met één specificiteit, gericht tegen één enkele antigene determinant) in plaats van een mengsel van antilichamen, dus met diverse (ongewenste) specificiteiten, zoals gewoonlijk wordt verkregen door toepassing van conventionele immunisatie in vivo. Bovendien kan door hybridisatie van 20 menselijke cellen de produktie van menselijke monoclone antilichamen worden verkregen.
De techniek van de produktie van monoclone antilichamen omvat in hoofdzaak 3 trappen: 1) fusie van myeloma cellijn cellen en lymfocyten, 25 afkomstig van een dier of mens, dat geïmmuniseerd is met het gewenste antigeen, teneinde hybridoma's te verkrijgen, welke de gewenste antilichamen uitscheiden en welke bovendien in vitro een permanente groei vertonen.
2) Selectie van de gewenste hybridomacloon door 30 kweken van één enkele cel (d.w.z. "limiting dilution").
3) Het doen voortleven, delen en behoud van functie van de geselecteerde monoclone cellijn in vitro gedurende 8000527 - 2 - een langere tijd.
Gebleken is, dat bovengenoemde trappen een aantal problemen met zich meebrengen: 1) de fusie verloopt niet altijd op dezelfde wijze 5 en blijkt in feite weinig efficiënt te zijn (d.w.z. het aantal verkregen hybriden is vaak laag).
2) bij "limiting dilution" is de aanwezigheid van "feeder"-cellen vereist; deze hebben vaak een sterk variabele activiteit.
10 3) De hybridoma's, verkregen door fusie van mense lijke cellen met muize-myelomacellen, vertonen vaak een zeer beperkte overleving in vitro.
In het algemeen doen bovengenoemde problemen zich bij alle hybriden tussen verschillende cellen voor.
15 De uitvinding verschaft thans een werkwijze voor het bevorderen van hybridisatie van cellen in vitro en van de produktie en uitscheiding van stoffen gevormd door dergelijke celhybriden, met het kenmerk, dat aan een hybridekweek menselijke endotheelcellen en/of de supernatant van menselijke 20 endotheelcellen worden toegevoegd.
In het bijzonder verschaft thans de uitvinding een werkwijze voor het bevorderen van de produktie van monoclone antilichamen in vitro door toepassing van een hybridomatech-niek, waarbij aan een hybridomakweek menselijke endotheelcel-25 len en/of de supernatant van menselijke endotheelcellen worden toegevoegd. Door toepassing van de werkwijze volgens de uitvinding zijn de bovengenoemde nadelen op doeltreffende wijze opgeheven.
Volgens de onderhavige werkwijze wordt het aantal 30 monoclone antilichamen producerende cellen in vitro significant verhoogd.
Gebaseerd op de veronderstelling, dat succesvolle celfusie (zie voorbeeld II), de-groei van enkele cellen in vitro (zie voorbeeld III) en eveneens het gedurende lange tijd 35 doen voortleven, delen en behoud van functie van hybridoma's (zie voorbeeld IV) vooral afhankelijk zijn van de aanwezigheid van een factor of factoren, geproduceerd door cellen, werd thans getracht een dergelijke factor of dergelijke factoren te identificeren.
8000527 - 3 - -s - “'ί
Verrassenderwijs werd volgens de uitvinding gevonden, dat endotheelcellen en de supernatant van dergelijke endotheelcellen, - endotheelcellen zelf of de supernatant van endotheelcellen na toevoeging 5 aan een hybridomakweek 1) het aantal hybriden na fusie doen toenemen, 2) zorgen voor toename en stabiliteit van het aantal clonen, dat door middel van "limiting dilution" is geïsoleerd en 10 3) het voortleven, delen en behoud van functie van hybridoma's tussen mense-ei>6f muizecellen in vitro significant verlengen.
Hoewel het mechanisme vooralsnog onbekend is, lijkt het duidelijk, dat de activiteit van endotheelcellen 15 plaatsvindt middels een factor of factoren, die geproduceerd worden of vrijkomen tijdens de kweek. Ofschoon de chemie van deze factor of factoren nog niet bekend is, is het onwaarschijnlijk, dat het hier om prostaglandinen gaat (zie voorbeeld V) .
20 Deze factor of factoren, geproduceerd door endo theelcellen, kunnen eveneens bijdragen tot de bevordering van de groei van hybriden tussen andere typen cellen dan myeloma-cellen en lymfocyten (bijv. hepatomacellen en levercellen, fibroblasten en lymfocyten, enz.), alsmede de groei van cellen 25 die anders in vitro moeilijk te kweken zijn, bijv. beenmergcellen. Aangetoond is, dat de endotheelcel-supernatant de groei van diverse clonen van menselijke beenmergcellen in vitro (zie voorbeeld VI) induceert en/of bevordert.
De inductie of bevordering door endotheelcellen 30 van de groei van clonen van menselijke beenmergcellen is beschreven voor granulopoiesis (zie Knudtzon, S. en Mortensen, B.T.: Blood, vol. £6, blz. 937, 1975).
Opgemerkt wordt, dat volgens de uitvinding een hybridomakweek wordt gebruikt, die verkregen is door fusie van 35 myelomacellijncellen en lymfocyten, afkomstig van een dier of mens, dat of die met het gewenste antigeen is geïmmuniseerd.
Thans wordt de uitvinding toegelicht aan de hand van de volgende voorbeelden.
8000527 f* *- - 4 -
VOORBEELD I
Kweken van menselijke endotheelcellen en produktie van menselijke endotheelkweek-supernatant, aangeduid als "HECS" (Human Endothelial Culture line Supernatant).
5 De menselijke endotheelcellen werden geïsoleerd en gekweekt volgens de methode, die eerst is beschreven door Joffe, E.A. en medew., J. Clin. Invest. 52_, blz. 2745-2756 (1973).
Hiertoe werden menselijke navelstrengvenae gewas-10 sen met 0,1 M fosfaatbuffer (pH 7,4) met 0,9 % NaCl. Daarna werd het vat gevuld met fosfaatbuffer, waarin opgelost trypsine (0,5 g/1) en EDTA (0,2 g/1). Na 15 min. incubatie bij 37°C werd het incubatiemedium verwijderd, waarna de vaatwand wederom met de buffer werd gevuld. Na lichte traumatisatie van 15 de vaatwand werd de bufferoplossing opgevangen en toegevoegd aan de eerste effluent. Aan deze celsuspensie werd 5 ml groei-medium (GM) toegevoegd.
Dit medium bevatte: - 35 % RPMI 1640 Hepes 20 - 35 % Medium 199 met Hanks' zoutoplossing - 30 % menselijk serum, dat een mengsel was van de sera van 18 normale donors.
Na centrifugeren (5 min. 200 g) werd een kleine witte pellet verkregen, die vervolgens opnieuw werd gesuspen-25 deerd in 10 ml van het boven beschreven groeimedium. De aldus verkregen cellen werden overgebracht in weefselkweekflesjes.
Na 5-6 dagen waren de flessen volgegroeid met één cel-dikke laag. Vervolgens werd geïncubeerd met gebufferde trypsine in EDTA gedurende 3-5 min. De losgemaakte cellen werden volgens 30 de boven beschreven procedure gewassen en opnieuw overgebracht in de weefselkweekflesjes, waarbij het cellenaantal per fles met een factor 4 tot 5 werd verlaagd. De gekweekte cellen waren endotheelcellen en wel op grond van de volgende criteria: 35 1) de cellen vertoonden een groei, die afhankelijk is van de dichtheid, 2) door toepassing van immunofluorescentie werd de aanwezigheid van factor VIII verwant antigeen en fibronectine 8000527 A β - 5 - aangetoond, 3) met behulp van een electronenmicroscoop werd de aanwezigheid van Weibel Palade lichamen aangetoond.
Bij het kweken van endotheelcellen werd het groei-5 medium twee keer per week ververst. Het medium, dat gedurende 2-4 dagen zich boven de samenvloeiende cellen bevond, werd opgevangen en gebruikt.
Alternatief: wanneer endotheelcellen samenvloeiend zijn, kunnen ze ververst worden met kweekmedium met foetaal 10 kalfserum (FCS) erin, teneinde de aanwezigheid van menselijk serum in de supernatant te voorkomen.
VOORBEELD II
Toename van het fusierendement met behulp van humane endotheelkweek-supernatant "HECS".
15 Myelomacellen van muizen werden gefuseerd met ge ïmmuniseerde miltcellen van muizen of met menselijke lymfocy-ten, in aanwezigheid van polyethyleenglycol, overeenkomstig de methode van Galfre, G. en medew., Nature, vol. 266, blz. 550 (1977) of volgens Kennet, R.H. en medew., in: Current Topics 20 in Microbiology and Immunology, vol. _81^, blz. 77 (1978); de gefuseerde cellen werden gewassen en overgebracht in een weefselkweekschaal met 96 kweekvaatjes, waarin HECS of als controle een normaal medium aanwezig was. Na 10-20 dagen werden kolonies van hybrideclonen waarneembaar.
25 De tabellen A en B tonen de inductie van een gro ter aantal hybriden, als gevolg van de aanwezigheid van HECS.
TABEL A
muis-myelomacellen x muis-lymfocyten 30 fusie 1 fusie 2
-HECS +HECS -HECS . +HECS
totaal aantal kweken a) 96 48 96 48 aantal kweken met b) groeiende hybriden 28 38 2 3 1 8000527 % = | x 100 29 % 79 % 2 % 6 % cl - 6 -
TABEL B
muis-myelomacellen x menselijke lymfocyten fusie 1 fusie 2 fusie 3 fusie 4
-HECS + HECS -HECS; +HECS . -HECS : + HECS -HECS +HECS
5 a) 96 48 96 48 96 96 48 48 b) 0 36 15 17 1 6 1 5 % 0 75 % 16% 35% 1% 6% 2% 10%
Uit de gegevens volgt, dat "factor" telkens een hoger aantal hybriden induceert, zowel bij muis-muis- als bij 10 mens-muishybriden.
VOORBEELD III
Toename van het rendement, waarmee clonen worden gevormd door "limiting dilution", wanneer endotheelcellen of HECS . : worden toegevoegd.
15 Voor de groei van een hybridomacel zijn "feeder"- cellen nodig. Hybridomacellen, verkregen na fusie, werden verzameld in afzonderlijke kweken van een weefselkweekschaal bij 3 verschillende celconcentraties (5 hybridoma's/kweek; 1 hybridoma/kweek; en 0,5 hybridoma/kweek), in aanwezigheid van 20 verschillende "feeder"-cellen. Tabel C toont de gunstige invloed van menselijke endotheelcellen, vergeleken met andere cellen, die gewoonlijk als "feeder"-cellen worden gebruikt.
TABEL C
aantal hybridoma's/kweken 25 "feeder"-cellen 5_1_0,5 medium alleen 0/36 0/36 0/24 miltcellen van muizen 24/36 7/36 3/24 menselijke fibroblasten 13/36 6/36 5/24 menselijke endotheelcellen 36/36 24/36 13/24 30 De resultaten zijn uitgedrukt als aantal groeiende clonen/aantal kweken.
Uit deze gegevens blijkt, dat endotheelcellen als "feeder"-cellen het hoogste rendement geven bij de groei van hybridomaclonen. Tabel D laat zien, dat de "feeder"-cellen 35 vervangen kunnen worden door factor(en), geproduceerd in de supernatant van endotheelcellen HECS. Controle factor is het medium, dat gebruikt werd voor het kweken van de endothee1ce1len.
8000527 - 7 - ft r?
TABEL D
aantal hybridoma's/kweken factoren 5_1_0,5 medium alleen 0/36 0/36 0/24 5 1/100 controle factor 0/36 0/36 0/24 1/20 controle factor 0/36 0/36 0/24 1/5 controle factor 0/36 0/36 0/24 1/100 HECS 2/36 0/36 0/24 1/20 HECS 23/36 15/36 7/24 10 1/5 HECS 30/36 17/36 9/24
De resultaten zijn uitgedrukt als het aantal groeiende clonen/ aantal kweken.
Uit tabel D blijkt duidelijk, dat HECS. . de "feeder"-cellen kan vervangen en dat de factor nog actief is 15 bij een verdunning van 1/20.
VOORBEELD IV
Verlengde overleving en stabiliteit van mensenmui zenhybridoma's in aanwezigheid van menselijke endotheel-cellen. Mensen-muizenhybridoma's zijn in de regel zeer onsta-20 biel. Zij verliezen snel het vermogen om menselijke immuno-globulinen te vormen en ze sterven. In dit voorbeeld werden de beste omstandigheden onderzocht voor het verlengen van hun levensduur, waarbij ze in een kweek van twee verschillende "feeder"-cellen, te weten miltcellen (deze cellen worden het 25 meeste gebruikt als "feeder"-cellen) en menselijke endotheel-cellen werden bewaard.
De overleving van de cellen en het vermogen om menselijke immunoglobulinen(Ig) te vormen werden iedere week via microscopische analyse en ELISA-techniek bepaald.
30 Tabel E toont het vermogen om de levensduur van menselijke hybridoma's te verlengen en toont voorts de stabiliteit bij het produceren van menselijk Ig door menselijke endotheelcellen. 1 8000527 - 8 -
TABEL E
"Feeder" cellen endotheelcellen miltcellen levende Ig produce- levende Ig produce- cloon/ rende cloon/ cloon/ rende cloon/ totaal totaal totaal totaal 5 kweken kweken kweken kweken weken na de verschijning van clonen van hybriden 10 3 12/12 11/12 12/12 11/12 4 12/12 niet gedaan 6/12 niet gedaan 5 12/12 11/12 0/12 2/12 6 12/12 11/12 0/12 0/12 7 12/12 4/12 0/12 0/12 15 8 12/12 4/12 0/12 0/12
Uit deze gegevens volgt, dat de endotheelcellen de levensduur verlengen en de stabiliteit in Ig~produktie van mensèlijke hybridoma's gunstig beïnvloeden.
VOORBEELD V
_ O
20 Endotheelcel-supernatant bevat + 2 x 10 M PGE2.
Onderzocht werd of de activiteit van endotheelcel-supernatant op de groei van hybridomacellen te danken is aan de aanwezigheid van prostaglandinen. Aangezien bekend is, dat prostaglan-E
dinen~zeer onstabiel zijn wanneer ze gedurende een uur bij 25 37°C en een pH hoger dan 9 worden bewaard, werd de endotheelcel-supernatant gedurende 2 uur bij 37°C en verschillende pH's geïncubeerd. Daarna werd de pH van de endotheelcel-supernatant teruggebracht op zijn oorspronkelijke waarde (pH 7,2), waarna de supernatant werd getest voor het bevorderen van de groei· 30 van de hybridoma's bij "limiting dilution" kweken.
Tabel F toont de stabiliteit van de endotheelcel-supernatant bij verschillende pH's. 1 8000527 - 9 -
TABEL F
aantal hybridoma's/kweek "feeder"-cellen 5_1_0/5 medium alleen 5/36 2/36 1/24 5 1/5 HECS +4°C pH 7/2 2h 32/36 21/36 11/24 1/5 HECS 37°C pH 7,2 2h 33/36 23/36 10/24 1/5 HECS 37°C pH 5,5 2h 34/36 15/36 12/24 1/5 HECS . 37°C pH 9/1 2h 36/36 19/36 4/24
De resultaten zijn uitgedrukt als aantal groeiende 10 clonen/totaal aantal kweken.
Uit deze gegevens blijkt, dat een hoge pH geen nadelige invloed heeft op de activiteit van de endotheelcel-supernatant, zodat het onwaarschijnlijk is, dat de activiteit van de supernatant alleen te danken zou zijn aan prostaglan-15 dinen.
VOORBEELD VI
Toename van menselijke beenmergkolonie-vormende cellen (CFU-C) onder invloed van menselijke endotheelcel-supernatant.
20 Menselijke beenmergcellen werden verkregen uit ge zonde donors, waarna de cellen in vitro werden gekweekt onder toepassing van de methode van G. Wagemaker en medew., Experimental Hematology Today, uitg. S.J. Baum en G.D. Ledney, Springer Verlag, New York, blz. 103 (1977).
25 Na 12 dagen werd de groei van de kolonies via de microscoop bepaald. De menselijke endotheel-supernatant werd getest op het vermogen om het aantal kolonies te doen toenemen. De hierbij verkregen resultaten zijn in tabel G vermeld.
TABEL G
30 proef 1 proef 2 1 x 105 1 x 105 2 x 105 beenmergcellen/ml_beenmergcellen per ml - HECS 28 0 22 + 12,5 % HECS 44 37 91 35 + 25 S HECS. 51 64 79
De resultaten zijn uitgedrukt als aantallen kolonies ( 40 cellen/kolonie) per 100.000 beenmergcellen.
Uit de gegevens blijkt, dat de endotheelcel-super-natant het aantal beenmergkolonies doet toenemen, zowel bij 8000527 -?>· y - 10 - toepassing van 100.000 cellen per kweek als bij toepassing van 200.000 cellen per kweek 5 8000527
Claims (6)
1. Werkwijze voor het bevorderen van hybridisatie van cellen in vitro en van de produktie en uitscheiding van stoffen, gevormd door dergelijke celhybriden, met het kenmerk, dat aan een hybridekweek endotheelcellen en/of 5 de supernatant van endotheelcellen worden toegevoegd.
2. Werkwijze voor het bevorderen van de produktie van monoclonale antilichamen in vitro door toepassing van een hybridomatechniek, met het kenmerk, dat aan een hybridomakweek endotheelcellen en/of de supernatant van 10 endotheelcellen worden toegevoegd.
3. Werkwijze volgens conclusie 1 of 2, met het kenmerk, dat menselijke endotheelcellen worden toegevoegd.
4. Werkwijze volgens conclusie 1 of 2, met .15 het kenmerk, dat de supernatant van menselijke endotheelcellen wordt toegevoegd. «
5. Werkwijze volgens conclusie 2,met het kenmerk , dat als hybridomakweek de door fusie van myeloma cellijn cellen en lymfocyten, afkomstig van dier of 20 mens, dat of die met het gewenste antigeen is geïmmuniseerd, verkregen kweek wordt gebruikt.
6. Endotheelcellen en/of supernatant van endotheelcellen, ten gebruike voor het bevorderen van de hybridisatie van cellen in vitro en van de produktie en uitscheiding 25 van stoffen, gevormd door dergelijke celhybriden, alsmede voor het bevorderen van de produktie van monoclone antilichamen in vitro. 8000527
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
NL8000527A NL8000527A (nl) | 1980-01-29 | 1980-01-29 | Werkwijze voor het bevorderen van hybridisatie van cellen in vitro en van de produktie en uitscheiding van stoffen, gevormd door dergelijke celhybriden, werkwijze voor het bevorderen van de produktie van monoclonale antilichamen in vitro door toepassing van een hybridomatechniek, alsmede endotheelcellen en/of supernatant van endotheelcellen. |
US06/229,272 US4404279A (en) | 1980-01-29 | 1981-01-28 | Method of culturing hybridomas |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
NL8000527 | 1980-01-29 | ||
NL8000527A NL8000527A (nl) | 1980-01-29 | 1980-01-29 | Werkwijze voor het bevorderen van hybridisatie van cellen in vitro en van de produktie en uitscheiding van stoffen, gevormd door dergelijke celhybriden, werkwijze voor het bevorderen van de produktie van monoclonale antilichamen in vitro door toepassing van een hybridomatechniek, alsmede endotheelcellen en/of supernatant van endotheelcellen. |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NL8000527A true NL8000527A (nl) | 1981-08-17 |
Family
ID=19834752
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NL8000527A NL8000527A (nl) | 1980-01-29 | 1980-01-29 | Werkwijze voor het bevorderen van hybridisatie van cellen in vitro en van de produktie en uitscheiding van stoffen, gevormd door dergelijke celhybriden, werkwijze voor het bevorderen van de produktie van monoclonale antilichamen in vitro door toepassing van een hybridomatechniek, alsmede endotheelcellen en/of supernatant van endotheelcellen. |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4404279A (nl) |
NL (1) | NL8000527A (nl) |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5308835A (en) * | 1984-07-09 | 1994-05-03 | Praxis Biologics, Inc. | Production of the E. coli LT-B enterotoxin subunit |
US4808700A (en) * | 1984-07-09 | 1989-02-28 | Praxis Biologics, Inc. | Immunogenic conjugates of non-toxic E. coli LT-B enterotoxin subunit and capsular polymers |
CA1340372C (en) * | 1984-07-09 | 1999-02-02 | John D. Clements | Production of e. coli lt-b enterotoxin subunit |
US4845197A (en) * | 1985-09-09 | 1989-07-04 | Agri-Diagnostics Associates | Monoclonal antibodies and methods for fungal pathogen detection |
CA1307486C (en) * | 1987-10-29 | 1992-09-15 | Michael T. Largen | Hybridoma production |
SE8801537D0 (sv) * | 1988-04-26 | 1988-04-26 | Ellco Food Ab | Cellodlingsmedium samt forfarande for dess framstellning |
US5665583A (en) | 1988-08-12 | 1997-09-09 | Arch Dev Corp | Methods and materials relating to IMPDH and GMP production |
EP3044092B1 (en) * | 2013-09-11 | 2018-10-17 | Silicis Technologies Inc. | Trailer for autonomous vehicle |
-
1980
- 1980-01-29 NL NL8000527A patent/NL8000527A/nl not_active Application Discontinuation
-
1981
- 1981-01-28 US US06/229,272 patent/US4404279A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US4404279A (en) | 1983-09-13 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4472500A (en) | Rat myeloma cell lines | |
BAZIN | Production of rat monoclonal antibodies with the LOU rat non secreting IR983F myeloma cell line | |
US4350683A (en) | Antibody production from hybrid cell line | |
Nakahara et al. | Bone and cartilage formation in diffusion chambers by subcultured cells derived from the periosteum | |
Astaldi et al. | Human endothelial culture supernatant (HECS): a growth factor for hybridomas. | |
US5001065A (en) | Human cell line and triomas, antibodies, and transformants derived therefrom | |
Chiba et al. | Establishment and characterization of a simian virus 40‐immortalized osteoblastic cell line from normal human bone | |
EP0136353A1 (fr) | Milieu de culture de cellules animales sans serum et procedes de culture primaire et d'obtention de lignees cellulaires utilisant ce milieu. | |
NL8000527A (nl) | Werkwijze voor het bevorderen van hybridisatie van cellen in vitro en van de produktie en uitscheiding van stoffen, gevormd door dergelijke celhybriden, werkwijze voor het bevorderen van de produktie van monoclonale antilichamen in vitro door toepassing van een hybridomatechniek, alsmede endotheelcellen en/of supernatant van endotheelcellen. | |
Absher et al. | Characterization of vascular smooth muscle cell phenotype in long-term culture | |
US5114847A (en) | Process for the production of permanently culturable animal and human cell lines and the use thereof | |
JP2003506077A5 (nl) | ||
US8173425B2 (en) | Fusion partner cells | |
DE3786673T2 (de) | Verfahren zur entfernung unerwünschter zellen aus menschlichen lymphozytenpopulationen, anwendung des verfahrens zur herstellung monoklonaler antikörper und dafür geeigneter kit. | |
CA1213227A (en) | Human nonsecretory plasmacytoid cell line | |
US5354666A (en) | Mammalian cell line expressing basement membrane proteins | |
Stoker | Junctional competence in clones of mammary epithelial cells, and modulation by conditioned medium | |
JPH0233357B2 (nl) | ||
Kessler et al. | Stability of a murine hybridoma is dependent on the clonal line and culture media | |
JPH0787799B2 (ja) | モノクローナル抗体生産増強法 | |
Fauth et al. | Establishment of renal cell lines derived from S2 segments of the proximal tubule | |
Katsuda et al. | Enhanced synthesis of type IV collagen in cultured arterial smooth muscle cells associated with phenotypic modulation by dimethyl sulfoxide | |
KR880002318B1 (ko) | 무혈청 배지 | |
NL8401779A (nl) | Cellen; supernatant van cellen; werkwijze voor het bevorderen van in vitro celhybridisatie, klonering en/of produktie van monoklonale antilichamen. | |
Ufimtseva et al. | Mink-mouse interspecific hybridomas |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A1B | A search report has been drawn up | ||
A85 | Still pending on 85-01-01 | ||
BC | A request for examination has been filed | ||
BV | The patent application has lapsed |