NL1034004C2 - Selective inhibitors of the nuclear factor of activated T cells. - Google Patents
Selective inhibitors of the nuclear factor of activated T cells. Download PDFInfo
- Publication number
- NL1034004C2 NL1034004C2 NL1034004A NL1034004A NL1034004C2 NL 1034004 C2 NL1034004 C2 NL 1034004C2 NL 1034004 A NL1034004 A NL 1034004A NL 1034004 A NL1034004 A NL 1034004A NL 1034004 C2 NL1034004 C2 NL 1034004C2
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- nfat
- peptide
- inca
- inhibitor
- calcineurin
- Prior art date
Links
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 title claims description 5
- 229940124639 Selective inhibitor Drugs 0.000 title 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 35
- 241000976924 Inca Species 0.000 claims description 27
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 27
- 102000004631 Calcineurin Human genes 0.000 claims description 26
- 108010042955 Calcineurin Proteins 0.000 claims description 26
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 24
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims description 20
- -1 aliphatic amino acid Chemical class 0.000 claims description 14
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 14
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 14
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 14
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 9
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims description 7
- 108010040818 VIVIT peptide Proteins 0.000 claims description 7
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims description 7
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 claims description 5
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 5
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims description 5
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 4
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 3
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 3
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 claims description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 claims description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 claims description 3
- 150000003923 2,5-pyrrolediones Chemical class 0.000 claims description 2
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 claims description 2
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 claims description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 claims description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 2
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 claims description 2
- PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N iodoacetamide Chemical compound NC(=O)CI PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 2
- 208000037803 restenosis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims 1
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims 1
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 claims 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 6
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 4
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 3
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N DMF Natural products CC1=CC=C(C)O1 GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010052090 Renilla Luciferases Proteins 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003875 Wang resin Substances 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N ionomycin Chemical compound O1[C@H](C[C@H](O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)/C=C/C[C@@H](C)C[C@@H](C)C(/O)=C/C(=O)[C@@H](C)C[C@@H](C)C[C@@H](CCC(O)=O)C)CC[C@@]1(C)[C@@H]1O[C@](C)([C@@H](C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N 0.000 description 2
- PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N ionomycin Natural products O1C(CC(O)C(C)C(O)C(C)C=CCC(C)CC(C)C(O)=CC(=O)C(C)CC(C)CC(CCC(O)=O)C)CCC1(C)C1OC(C)(C(C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004592 isopropanol Drugs 0.000 description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- PMJWDPGOWBRILU-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-[4-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)phenyl]butanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCC(C=C1)=CC=C1N1C(=O)C=CC1=O PMJWDPGOWBRILU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150059215 AEP1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100079445 Arabidopsis thaliana NCA1 gene Proteins 0.000 description 1
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 description 1
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 1
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 1
- 108090000331 Firefly luciferases Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 241000254158 Lampyridae Species 0.000 description 1
- VCUFZILGIRCDQQ-KRWDZBQOSA-N N-[[(5S)-2-oxo-3-(2-oxo-3H-1,3-benzoxazol-6-yl)-1,3-oxazolidin-5-yl]methyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C1O[C@H](CN1C1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1)CNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F VCUFZILGIRCDQQ-KRWDZBQOSA-N 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 150000001338 aliphatic hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 108010044481 calcineurin phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 229940124589 immunosuppressive drug Drugs 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 150000002611 lead compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000003032 molecular docking Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 1
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N tri(propan-2-yl)silicon Chemical compound CC(C)[Si](C(C)C)C(C)C ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006213 vaginal ring Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
Titel: SELECTIEVE REMMERS VAN DE NUCLEAIRE FACTOR VANTitle: SELECTIVE BRAKES OF THE NUCLEAR FACTOR OF
GEACTIVEERDE T-CELLEN 5ACTIVATED T CELLS 5
Gebied van de UitvindingField of the Invention
De uitvinding heeft betrekking op een concept voor het remmen van de 10 nucleaire factor van geactiveerde T-cellen, veelal aangeduid met de afkorting NFAT (“Nuclear Factor of Activated, T-cells”), en op NFAT remmers. De uitvinding heeft tevens betrekking op farmaceutische samenstellingen omvattende dergelijke remmers, en op de toepassing ervan bij het vervaardigen van geneesmiddelen ter behandeling van ontstekingen en cardiovasculaire 15 aandoeningen.The invention relates to a concept for the inhibition of the nuclear factor of activated T cells, often referred to as NFAT ("Nuclear Factor of Activated, T-cells"), and to NFAT inhibitors. The invention also relates to pharmaceutical compositions comprising such inhibitors, and to their use in the manufacture of medicaments for the treatment of inflammation and cardiovascular disease.
Achtergrond van de Uitvinding 20 De calcineurine/NFAT cascade coördineert inflammatoire reacties in diverse ontstekingscellen en cellen die betrokken zijn bij cardiovasculaire aandoeningen en vormt als zodanig een attractieve kandidaat voor interventie in pathologische immuunresponsen. Zo worden diverse remmers van deze cascade, waaronder klassieke immunosuppresiva als cyclosporine A en FK506, momenteel 25 op grote schaal toegepast in de kliniek ter voorkoming van afstotingsreacties na transplantatie, en ter behandeling van chronische ontstekingsreacties en autoimmuunziekten.Background of the Invention The calcineurin / NFAT cascade coordinates inflammatory responses in various inflammatory cells and cells involved in cardiovascular disease and as such is an attractive candidate for intervention in pathological immune responses. For example, various inhibitors of this cascade, including classical immunosuppressants such as cyclosporin A and FK506, are currently widely used in the clinic to prevent rejection reactions after transplantation, and to treat chronic inflammatory reactions and autoimmune diseases.
De huidige generatie immunosuppresiva grijpen met name aan op calcineurine activiteit en niet zozeer op NFAT, hetgeen er toe leidt dat ook NFAT 30 onafhankelijk processen beïnvloedt zullen worden. Dit resulteert in een scala aan bijwerkingen, die volgens huidig inzicht niet plaats zouden hebben bij selectieve remming van NFAT.The current generation of immunosuppressive drugs particularly affect calcineurin activity and not so much NFAT, which means that NFAT 30 processes will also be influenced independently. This results in a range of side effects that, according to current insight, would not occur with selective inhibition of NFAT.
Een klasse NFAT remmers betreft de zogenaamde INCA-verbindingen, waarbij de afkorting INCA staat voor de engelse term “Inhibitor of the NFAT-35 Calcineurin Association’, oftewel een remmer van de associatie tussen NFAT en 103 4 0 04 2A class of NFAT inhibitors is the so-called INCA compounds, where the abbreviation INCA stands for the English term “Inhibitor of the NFAT-35 Calcineurin Association”, or an inhibitor of the association between NFAT and 103 4 0 04 2
Calcineurin. Zie bijvoorbeeld Kang,S., Li,H·, Rao,A. & Hogan,P.G. J. Biol. Chem. 280, 37698-37706 (2005) en Roehrl,M.H. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A 101, 7554-7559 (2004).Calcineurin. See, for example, Kang, S., Li, H ·, Rao, A. & Hogan, P.G. J. Biol. Chem. 280, 37698-37706 (2005) and Roehrl, M.H. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A 101, 7554-7559 (2004).
Een andere klasse NFAT remmers zijn “VIVTT’ peptiden en analoga 5 (hierbij staat “VIVIT” voor de aminozuurvolgorde Valine - Isoleucine - Valine -Isoleucine - Threonine). Zie bijvoorbeeld Aramburu.J. et al. Science 285, 2129-2133 (1999), Yu,H. et al. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 26, 1531-1537 (2006), en Huiming Li et al, JMB 2004 1659. Beide klassen NFAT-remmers hebben de eigenschap om de interactie van NFAT met calcineurine te remmen, maar zijn 10 onvoldoende potent om voor therapeutische toepassing in aanmerking te komen. De INCA-verbindingen hebben bovendien de neiging om voor therapeutische toepassing sterk toxisch te zijn.Another class of NFAT inhibitors are "VIVTT" peptides and analogues 5 (where "VIVIT" stands for the amino acid sequence Valine - Isoleucine - Valine - Isoleucine - Threonine). See, for example, Aramburu.J. et al. Science 285, 2129-2133 (1999), Yu, H. et al. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 26, 1531-1537 (2006), and Huiming Li et al., JMB 2004 1659. Both classes of NFAT inhibitors have the property to inhibit the interaction of NFAT with calcineurin, but are not sufficiently potent to qualify for therapeutic use. . In addition, the INCA compounds tend to be highly toxic for therapeutic use.
15 Samenvatting van de UitvindingSummary of the Invention
Met de uitvinding wordt, in een aspect, beoogd om te voorzien in een nieuw concept voor het remmen van NFAT. In een ander aspect beoogt de uitvinding te voorzien in NFAT-remmers die potenter zijn dan de INCA-20 verbindingen en VTVIT analoga, en met minder toxiciteit dan de INCA- verbindingen. Meer in het bijzonder, beoogt de uitvinding, in een verder aspect, te voorzien in NFAT remmers die niet alleen potenter zijn, maar ook selectiever. Ook beoogt de uitvinding te voorzien in NFAT remmers die hun remmende activiteit voor een langere tijdsperiode na toediening behouden.The invention aims, in one aspect, to provide a new concept for inhibiting NFAT. In another aspect, the invention aims to provide NFAT inhibitors that are more potent than the INCA-20 compounds and VTVIT analogs, and with less toxicity than the INCA compounds. More specifically, the invention contemplates, in a further aspect, providing NFAT inhibitors that are not only more potent but also more selective. It is another object of the invention to provide NFAT inhibitors that retain their inhibitory activity for a longer period of time after administration.
25 Teneinde te voorzien in een of meer van deze doelstellingen, is de uitvinding gebaseerd op een nieuw concept, gebaseerd op het inzicht om een tweezijdige verbinding te creëren die in staat is gelijktijdig op twee calcineurin bindingsplaatsen ("docking sites") aan te grijpen. Naar nu verassenderwijs blijkt, laat dit inzicht toe om NFAT remmers te creëren die niet toxisch zijn, en die 30 selectief NFAT remmen met een lage nanomolaire potentie, zonder calcineurin fosfatase activiteit te beïnvloeden.In order to provide one or more of these objects, the invention is based on a new concept based on the insight to create a two-sided connection capable of simultaneously engaging two calcineurin binding sites ("docking sites"). It now appears surprisingly, this insight allows to create NFAT inhibitors that are non-toxic, and which selectively inhibit NFAT with a low nanomolar potency, without influencing calcineurin phosphatase activity.
De uitvinding betreft tevens de toepassing van dergelijke tweezijdige verbindingen als een richtinggevende verbinding ("lead compound") voor de ontwikkeling van geneesmiddelen die het immuunsysteem onderdrukken. De 35 uitvinding betreft ook een toets voor de vaststelling of verbindingen geschikt zijn 3 als selectieve NFAT remmers, waarbij men bepaalt of de verbinding op de twee betrokken calcineurin bindingsplaatsen aangrijpt, en de toepassing van deze toets voor het vinden van geschikte stoffen.The invention also relates to the use of such two-sided compounds as a directional compound ("lead compound") for the development of drugs that suppress the immune system. The invention also relates to a test for determining whether compounds are suitable as selective NFAT inhibitors, wherein it is determined whether the compound engages at the two calcineurin binding sites involved, and the use of this test for finding suitable substances.
Meer in het bijzonder betreft de uitvinding NFAT remmers omvattende 5 een conjugaat van (a) een peptide omvattende de aminozuurvolgorde HPxIylT, waarin H staat voor histidine, P voor proline, I voor isoleucine, T voor threonine, en x en y elk onafhankelijk staan voor een aminozuur, en (b) een INCA-verbinding. Bij voorkeur zijn x en y beide valine, en bij nadere voorkeur voldoet het peptide aan de structuurformule H2N-MAGPHPVTVITGPHEE-COOH, 10 waarin de eenletter afkortingen van de overige betrokken aminozuren staan methionine (M), alanine (A), glycine (G), en glutaminezuur (E).More specifically, the invention relates to NFAT inhibitors comprising a conjugate of (a) a peptide comprising the amino acid sequence HPxIylT, wherein H stands for histidine, P for proline, I for isoleucine, T for threonine, and x and y each independently represent an amino acid, and (b) an INCA compound. Preferably x and y are both valine, and more preferably the peptide complies with the structural formula H2 N-MAGPHPVTVITGPHEE-COOH, in which the one-letter abbreviations of the other amino acids involved are methionine (M), alanine (A), glycine (G) , and glutamic acid (E).
Bij nadere voorkeur is het VTVIT peptide gebonden aan de INCA-verbinding via het proline dat direct verbonden is met het VTVIT gedeelte. Deze verbinding loopt bij voorkeur via een afstandhouder (“spacer”), die bij voorkeur o 15 een lengte heeft van ongeveer 4 tot ongeveer 55 Angstrom, en bij nadere voorkeur van ongeveer 8 tot ongeveer 28 Angstrom.More preferably, the VTVIT peptide is bound to the INCA connection via the proline that is directly connected to the VTVIT portion. This connection preferably runs through a spacer, which preferably has a length of about 4 to about 55 Angstroms, and more preferably from about 8 to about 28 Angstroms.
De conjugaten volgens de uitvinding kunnen worden opgenomen in farmaceutische samenstellingen. Meer in het bijzonder, kunnen de conjugaten volgens de uitvinding gebruikt worden in de vervaardiging van geneesmiddelen 20 ter behandeling van aandoeningen die baat hebben bij remming van NFAT, en meer in het bijzonder remming van de interactie tussen NFAT en calcineurin.The conjugates of the invention can be incorporated into pharmaceutical compositions. More particularly, the conjugates of the invention can be used in the manufacture of medicaments for the treatment of conditions that benefit from inhibition of NFAT, and more particularly inhibition of the interaction between NFAT and calcineurin.
Bij voorkeur worden de conjugaten volgens de uitvinding toegepast in de behandeling van ontstekingen, meer in het bijzonder van chronische ontstekingsreacties en auto-immuunziekten, van afstotingsverschijnselen, meer 25 in het bijzonder na orgaantransplantatie, en in de behandeling van cardiovasculaire aandoeningen, meer in het bijzonder cardiovasculaire hypertrofie, hartfalen, restenose, en bij “vein-graft disease”.The conjugates according to the invention are preferably used in the treatment of inflammations, more in particular of chronic inflammatory reactions and autoimmune diseases, of rejection symptoms, more particularly after organ transplantation, and in the treatment of cardiovascular diseases, more particularly cardiovascular hypertrophy, heart failure, restenosis, and "vein-graft disease".
30 Gedetailleerde Beschrijving van de UitvindingDetailed Description of the Invention
De tweezijdige remmersThe two-sided inhibitors
Zonder dat theorie hierbij als bindend moet worden beschouwd, hebben de uitvinders de overtuiging dat de sleutel tot de effectieve NFAT remming is 35 gelegen in de erkenning dat een cysteine (mogelijk Cys 266) binnen het 4 katalytische domein van calcineurine, dat mogelijk covalent bindt met INCA-verbindingen, aangrenzend is aan de V1VIT bindingsplaats. Het behoort tot de uitvinding dat dit inzicht zich vertaalt in de mogelijkheid verbindingen te creëren die tweezijdig in staat zijn op de genoemde twee verschillende 5 bindingsplaatsen, aan te grijpen.Without the theory being considered binding, the inventors are convinced that the key to effective NFAT inhibition is the recognition that a cysteine (possibly Cys 266) within the 4 catalytic domain of calcineurin, which may covalently bind to INCA connections, adjacent to the V1VIT binding site. It is part of the invention that this insight translates into the possibility of creating connections that are capable of engaging on two sides at the said two different binding sites.
In dit verband betreft de uitvinding een NFAT remmer, omvattende een tweezijdig actieve verbinding, omvattende een zijde die in staat is aan te grijpen op een thiol groep binnen het katalytische domein van calcineurine, en meer in het bijzonder op cysteïne 266 binnen het katalytische domein van calcineurine, 10 en een zijde die in staat is aan te grijpen op de bindingsplaats voor het peptide H2N-MAGPHPVIVITGPHEE-COOH in calcineurine.In this connection, the invention relates to an NFAT inhibitor comprising a bilaterally active compound, comprising a side capable of engaging a thiol group within the catalytic domain of calcineurin, and more particularly cysteine 266 within the catalytic domain of calcineurin, and a side capable of engaging the binding site for the peptide H 2 N-MAGPHPVIVITGPHEE-COOH in calcineurin.
Voor zover dergelijke verbindingen niet op zichzelf al de geschiktheid hebben te dienen voor therapeutische toepassing, zijn deze verbindingen tenminste geschikt als richtinggevende verbindingen ("lead compounds") voor de 15 ontwikkeling van geneesmiddelen die NFAT remmen, en meer in het bijzonder het immuunsysteem onderdrukken.To the extent that such compounds do not in themselves have the potential to serve for therapeutic use, these compounds are at least suitable as guiding compounds for the development of drugs that inhibit NFAT, and more particularly suppress the immune system.
In dit verband heeft de uitvinding ook betrekking op een toets ("assay") voor de vaststelling of verbindingen geschikt zijn als selectieve NFAT remmers, waarbij men bepaalt of de verbinding op de twee betrokken calcineurin 20 bindingsplaatsen aangrijpt. Deze toets kan bijvoorbeeld worden uitgevoerd als een combinatie van in de vakwereld bekende toetsen voor elk van beide bindingen.In this connection the invention also relates to a test ("assay") for determining whether compounds are suitable as selective NFAT inhibitors, wherein it is determined whether the compound engages at the two calcineurin binding sites involved. This test can be carried out, for example, as a combination of tests known in the art for each of the two bonds.
De uitvinding heeft ook betrekking op verbindingen gevonden met deze toets.The invention also relates to compounds found with this test.
25 Dergelijke tweezijdige verbindingen die volgens de uitvinding op zichzelf reeds geschikt zijn als therapeuticum, en die de voorkeur genieten, zijn conjugaten omvattende tenminste de volgende nader te bespreken structuurgedeeltes; een VIVIT peptide, optioneel een afstandhouder (“spacer") en een reactieve eenheid van het INCA-type (kortweg INCA-groep).Such double-sided compounds which according to the invention are themselves suitable as therapeutic agents, and which are preferred, are conjugates comprising at least the following structural parts to be discussed; a VIVIT peptide, optionally a spacer ("spacer") and a reactive unit of the INCA type (INCA group for short).
3030
Het VIVIT peptideThe VIVIT peptide
Het VIVIT peptide, en analoga daarvan, zijn typisch peptiden van 7 tot 16 aminozuren, die in elk geval het heptapeptide-gedeelte HPxIylT omvatten, waarin x en y elk afzonderlijk staan voor een aminozuur. Op basis van huidig 35 inzicht is dit het voor de NFAT/calcineurine interactie wezenlijke domein van het 5 “VIVIT” peptide. Bij voorkeur omvat het VIVIT peptide daadwerkelijk een VTVTT sequentie, d.w.z. in bovengenoemd heptapeptide staan x en y dan voor valine.The VIVIT peptide, and analogs thereof, are typically peptides of 7 to 16 amino acids, which in each case comprise the heptapeptide portion HPxIylT, wherein x and y each stand for an amino acid. Based on current insight, this is the domain of the "VIVIT" peptide that is essential for the NFAT / calcineurin interaction. Preferably, the VIVIT peptide actually comprises a VTVTT sequence, i.e. in the above-mentioned heptapeptide, x and y then represent valine.
Het VIVIT peptide kan beperkt zijn tot bovengenoemd heptapeptide, maar kan aan een of beide bindingszijden hiervan ook een of meer verdere 5 aminozuren bevatten. Bij voorkeur maakt het heptapeptide deel uit van een peptide met 8 tot 20 aminozuren. Voor x en y verdient het de voorkeur om in hoofdzaak alifatische aminozuren te kiezen, zoals Alanine, Valine, Isoleucine, Leucine, of een aminozuurvariant of mimeticum met een alifatische zijgroep.The VIVIT peptide may be limited to the above-mentioned heptapeptide, but may also contain one or more further 5 amino acids on one or both of its binding sides. Preferably, the heptapeptide is part of a peptide with 8 to 20 amino acids. For x and y, it is preferable to choose substantially aliphatic amino acids, such as Alanine, Valine, Isoleucine, Leucine, or an amino acid variant or mimetic with an aliphatic side group.
Bij nadere voorkeur voldoet het peptide aan de structuurformule H2N-10 MAGPHPVIVITGPHEE-COOH.More preferably, the peptide satisfies the structural formula H 2 N-10 MAGPHPVIVITGPHEE-COOH.
Het VIVIT peptide kan in plaats van alleen traditionele aminozuurresten, in de peptide ruggegraat ook peptido mimetica omvatten. Deze hebben dan bij voorkeur dezelfde zijgroepen als de genoemde aminozuren, ongeacht de aard van de ruggegraat. Ook kunnen D-peptiden of retro-inverso peptiden worden 15 toegepast, (waarbij voor het retroinverso peptide de INCA groep aan de C- terminale kant geconjugeert dient te worden omwille van de correcte ruimtelijke oriëntatie)Instead of just traditional amino acid residues, the VIVIT peptide can also include peptido mimetics in the peptide backbone. These then preferably have the same side groups as the mentioned amino acids, regardless of the nature of the spine. D-peptides or retro-inverso peptides can also be used, (wherein for the retroinverso peptide the INCA group on the C-terminal side must be conjugated for the correct spatial orientation)
De conjugatie met de INCA-groep is bij voorkeur via een aminozuur, meer in het bijzonder proline, direct verbonden met het VIVIT gedeelte van het 20 peptide.The conjugation with the INCA group is preferably directly linked to the VIVIT portion of the peptide via an amino acid, more particularly proline.
De AfstandhouderThe Spacer
De afstandhouder is een binding, of een in wezen farmacologisch inactieve, flexibele groep of keten.The spacer is a bond, or an essentially pharmacologically inactive, flexible group or chain.
25 Bij voorkeur is de afstandhouder een in wezen farmacologisch inactieve, flexibele groep omvattende een keten van 4 tot 40 atomen die als ruggegraat kan worden gezien.Preferably, the spacer is an essentially pharmacologically inactive, flexible group comprising a chain of 4 to 40 atoms that can be seen as a backbone.
De term “in wezen farmacologisch inactief’ betekent dat de afstandhouder geen atomen of groepen omvat die op zichzelf farmacologische activiteit vertonen 30 bij de dosering waarbij de conjugaten volgens de uitvinding worden gebruikt.The term "essentially pharmacologically inactive" means that the spacer does not include atoms or groups that in themselves exhibit pharmacological activity at the dosage at which the conjugates of the invention are used.
Hierdoor zal de afstandhouder, bij therapeutische toepassing van de conjugaten, geen aanleiding geven tot waarneembare farmacologische bijwerkingen.As a result, the spacer, when therapeutic use of the conjugates, will not give rise to observable pharmacological side effects.
De afstandhouder kan zowel stijve elementen omvatten, als gedeeltelijk of geheel uit een flexibele keten bestaan. De keten kan een alifatische 35 koolwaterstof zijn, recht of vertakt, en al dan niet een of meer cyclo-alifatische of 6 aromatische groepen omvattend. De spacer kan hetero-atomen zoals zuurstof, stikstof, zwavel omvatten.The spacer may comprise rigid elements as well as consist partially or entirely of a flexible chain. The chain may be an aliphatic hydrocarbon, straight or branched, and may or may not include one or more cycloaliphatic or 6 aromatic groups. The spacer can include hetero atoms such as oxygen, nitrogen, and sulfur.
Hoewel de afstandhouder bij voorkeur in wezen farmacologisch inactief is, kan volgens de uitvinding een structuuronderdeel van de afstandhouder direct of 5 indirect bijdragen aan de calcineurin binding van het conjugaat. Zonder aan deze theorie gebonden te zijn, is het mogelijk dat een dergelijke bijdrage uitgaat van een aromatische groep, meer in het bijzonder een fenyl groep, in de afstandhouder, met name aan de zijde van de INCA-groep.Although the spacer is preferably essentially pharmacologically inactive, according to the invention, a structural member of the spacer may contribute directly or indirectly to the calcineurin binding of the conjugate. Without being bound by this theory, it is possible that such a contribution is made by an aromatic group, more particularly a phenyl group, in the spacer, in particular on the side of the INCA group.
Voor een, naar huidig inzicht, optimale werking van zowel het INCA-10 gedeelte als het VIVIT-gedeelte van het conjugaat, heeft de afstandhouder bij voorkeur een lengte tussen van ongeveer 4 tot ongeveer 55 Angstrom, bij nadere voorkeur van ongeveer 8 tot ongeveer 28 Angstrom, en bij nog nadere voorkeur o rond 11 tot 15 Angstrom. Een dergelijke spacerlengte wordt geschikt gerealiseerd door bij voorbeeld een fenylbutyl structuur zoals in onderstaande 15 formule weergegeven.For, at present insight, optimal functioning of both the INCA-10 portion and the VIVIT portion of the conjugate, the spacer preferably has a length between about 4 to about 55 Angstroms, more preferably from about 8 to about 28 Angstrom, and even more preferably o around 11 to 15 Angstrom. Such a spacer length is suitably realized by, for example, a phenylbutyl structure as represented in the formula below.
f......o.........f ...... o .........
Afitandhoudar |ΓAfitandhoudar | Γ
OHOH
Structuren die als afstandhouder de voorkeur verdienen zijn, bijvoorbeeld fenyl-butyl, bij voorkeur 4-fenyl butyl, of cycohexyl-butyl, bij voorkeur 4-20 cyclohexyl butyl. Het kost de doorsnee vakman geen onoverkomelijke moeite om andere geschikte afstandhouders, bij voorkeur met vergelijkbare lengte, te verschaffen.Preferred structures as spacers are, for example, phenyl-butyl, preferably 4-phenyl butyl, or cycohexyl-butyl, preferably 4-20 cyclohexyl butyl. It will not be incurable for the average person skilled in the art to provide other suitable spacers, preferably of comparable length.
77
De INCA-groepThe INCA group
Het zal de vakman duidelijk zijn dat als INCA-groep een structuur gekozen wordt die de eigenschap heeft om in de calcineurin/NFAT cascade de associatie of interactie tussen calcineurin en NFAT te remmen, maar niet door 5 interactie met het VTVIT bindingsdomein.It will be apparent to those skilled in the art that as INCA group a structure is chosen which has the property to inhibit the association or interaction between calcineurin and NFAT in the calcineurin / NFAT cascade, but not through interaction with the VTVIT binding domain.
De INCA-groep kan een breed scala aan structuren omvatten, die met elkaar gemeen hebben dat de verbinding in staat is om een covalente binding aan te gaan met een thiol groep in calcineurin, meer in het bijzonder de thiol groep van Cys266 van calcineurin, volgens huidig inzicht het aangrijpingspunt 10 voor INCA-verbindingen. Voorbeelden van INCA-verbindingen zijn bekend.The INCA group may comprise a wide range of structures that have in common that the compound is capable of covalent bonding with a thiol group in calcineurin, more particularly the thiol group of Cys266 of calcineurin, according to current insight the reference point 10 for INCA connections. Examples of INCA compounds are known.
Veelal grijpen dergelijke verbindingen aan via een maleimide groep, maar ook andere groepen zoals iodoaceetamide en derivaten van maleimide zijn geschikt.Such compounds often engage via a maleimide group, but other groups such as iodoacetamide and derivatives of maleimide are also suitable.
INCA-groepen die de voorkeur verdienen zijn bijvoorbeeld gegeven door de INCA-verbindingen beschreven in Kang,S., Li,H., Rao,A. & Hogan,P.G. J. Biol. 15 Chem. 280, 37698-37706 (2005).Preferred INCA groups are given, for example, by the INCA compounds described in Kang, S., Li, H., Rao, A. & Hogan, P.G. J. Biol. Chem. 280, 37698-37706 (2005).
|NCA1 o vO INCA2 °„jQ| NCA1 o vO INCA2 ° jQ
O. JLO. JL
TT o «INCA12 _>> Τ'TT o «INCA12 _ >> Τ '
Ftv 20Ftv 20
De uitvinding is uitdrukkelijk niet beperkt tot deze voorbeelden.The invention is expressly not limited to these examples.
De conjugaten volgens de uitvinding kunnen vervaardig worden op, voor de vervaardiging van peptide conjugaten, op zihzelf bekende wijze. Optioneel na 25 in een voorstep geschikt te zijn gemaakt voor conjugatie, laat men het polypeptide reageren met de INCA verbinding, gekoppeld aan de afstandhouder. Algemene synthetische methoden voor de vervaardiging van bioconjugaten zijn 8 beschreven in "Bioconjugate Techniques" door Greg T. Hermanson, 1996, Academic Press.The conjugates of the invention can be prepared in a manner known per se for the manufacture of peptide conjugates. Optionally after being made suitable for conjugation in a lead, the polypeptide is reacted with the INCA compound coupled to the spacer. General synthetic methods for the manufacture of bioconjugates are described in "Bioconjugate Techniques" by Greg T. Hermanson, 1996, Academic Press.
De uitvinding heeft tevens betrekking op de toepassing van de boven beschreven tweezijdige verbindingen bij de behandeling van aandoeningen die 5 baat hebben bij remming van NFAT, en meer in het bijzonder remming van de interactie tussen NFAT en calcineurin.The invention also relates to the use of the two-sided compounds described above in the treatment of disorders which benefit from inhibition of NFAT, and more particularly inhibition of the interaction between NFAT and calcineurin.
Meer in het bijzonderheeft de uitvinding betrekking op behandelingsmethodes van ontstekingen en cardiovasculaire aandoeningen waarbij men aan een patient die dit nodig heeft, een werkzame dosering van een 10 tweezijdige NFAT remmer als hiervoor beschreven toedient. Althans, de uitvinding heeft betrekking op de toepassing van tweezijdige NFAT remmers zoals in het voorgaande beschreven, bij het vervaardigen van geneesmiddelen ten behoeve van een dergelijke behandelingsmethode.More particularly, the invention relates to methods of treatment of inflammation and cardiovascular disorders in which an effective dosage of a two-sided NFAT inhibitor as described above is administered to a patient in need thereof. At least, the invention relates to the use of double-sided NFAT inhibitors as described above in the manufacture of medicines for such a treatment method.
De dosering van de NFAT remmers volgens de uitvinding zal bepaald 15 kunnen worden op in het veld bekende wijzen om werkzame doseringen vast te stellen, en zal bij voorkeur liggen tussen 0.0001 en 1 mg per kg lichaamsgewicht, bij nadere voorkeur 0.001-0.1 mg per kg lichaamsgewicht.The dosage of the NFAT inhibitors according to the invention can be determined in ways known in the art to determine effective doses, and will preferably be between 0.0001 and 1 mg per kg of body weight, more preferably 0.001-0.1 mg per kg body weight.
Voor toepassing als geneesmiddel, kunnen de hiervoor beschreven tweezijdige NFAT remmers op gebruikelijke wijze worden gebracht in een vorm 20 die geschikt is voor toediening als geneesmiddel. Farmaceutische toedieningsroutes, zoals oraal, mucosaal, intraveneus, transdermaal, subcutaan, rectaal, nasaal, pulmonaal, intravaginaal, et cetera, zijn bekend en behoeven geen nadere toelichting. Voor dergelijke toedieningsroutes zijn doseervormen bekend, zoals tabletten, capsules, injectiepreparaten, zetpillen, implantaten, 25 pleisters, zalven en oliën, verstuivers, vaginale ringen, et cetera, welke in het kader van deze uitvinding eveneens geen nadere toelichting behoeven. In dergelijke doseervormen, zijn in het algemeen gebruikelijke niet-werkzame toeslagstoffen opgenomen zoals dragermaterialen, verdunners, vulmiddelen, smeermiddelen, glijmiddelen, disintegratiemiddelen, plakmiddelen, 30 stabilisatoren, anti-oxidanten, anti-verkleuringsmiddelen, et cetera. Om geschikte farmaceutische samenstellingen te vervaardigen staan de vakman vele handboeken ten dienst, bijvoorbeeld Gennaro et al, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed., Mack Publishing Company, 1990.For use as a medicine, the double-sided NFAT inhibitors described above can be brought in a conventional manner in a form suitable for administration as a medicine. Pharmaceutical routes of administration, such as oral, mucosal, intravenous, transdermal, subcutaneous, rectal, nasal, pulmonary, intravaginal, etc., are known and require no further explanation. Dosage forms are known for such routes of administration, such as tablets, capsules, injection preparations, suppositories, implants, patches, ointments and oils, sprayers, vaginal rings, etc., which also require no further explanation within the scope of this invention. Such dosage forms generally include conventional inactive additives such as carrier materials, thinners, fillers, lubricants, lubricants, disintegrants, adhesives, stabilizers, antioxidants, anti-discolorants, etc. To prepare suitable pharmaceutical compositions, many skilled manners are available to those skilled in the art, e.g., Gennaro et al., Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed., Mack Publishing Company, 1990.
De uitvinding wordt hierna toegelicht aan de hand van de volgende, de 35 uitvindinding niet beperkende voorbeelden en figuren.The invention is explained below with reference to the following examples and figures, which are not restrictive of the invention.
99
Figuurbeschrijving 5 Figuur 1 toont een diagram waarin een standaard luciferase activiteitsbepaling (verticale as) is uitgezet tegen een aantal conjugaten (horizontale as).Figure description Figure 1 shows a diagram in which a standard luciferase activity determination (vertical axis) is plotted against a number of conjugates (horizontal axis).
Voorbeeld 1 10Example 1 10
Synthese van conjugatenSynthesis of conjugates
Een kernsequentie FmocHN-His(Trt)-Pro-Val-Ile-Val-Ile-Thr(tBu)-Wang-hars wordt handmatig gesynthetiseerd met behulp van standaard Fmoc chemie. 15 Voorbeladen Fmoc-Thr(tBu)-Wang hars (belading 0.6 mmol/g, Novabiochem) wordt ontschermd en gekoppeld met andere aminozuren in aanwezigheid van HOBt(l-hydroxybenzotriazool)/TBTU2-(lH-benzotriazol- 1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium tetrafluoroboraat)/Dipea (respectievelijk 4, 4, and 8 eq.). Na koppeling wordt de hars gewassen met DMF, iso-propanol, methanol en DCM, en 20 vervolgens gedroogd. De N-terminale Fmoc groep van sequentie 2 wordt verwijderd door middel van 20% piperidine in DMF. Na wassen met NMP, wordt 3-MBA-OSu toegevoegd (4eq, voor de synthese van MCV2) of SMPB (4eq, voor de synthese van MCVl) samen met DIPEA (8eq), en de reactie wordt gevolgd door middel van de Kaiser test totdat een negatief signaal wordt verkregen. De hars 25 wordt gewassen met DMF, iso-propanol, methanol and DCM en gedroogd. Na verwijdering van het oplosmiddel, worden de INCA conjugaten afgesplitst van de hars door middel van een mengsel van trifluoroazijnzuur, triisopropylsilaan, en water (95:2.5:2.5, v/v/v). De ruwe peptides worden gezuiverd op een preparatieve Cis RP-HPLC kolom (Alltech). De gezuiverde peptides worden gekarakteriseerd 30 door middel van LC-MS en worden tenminste 70% zuiver bevonden. Ieder monster wordt opgelost in watervrij dimethyl sulfoxide (DMSO) en bewaard bij -20°C.A core sequence FmocHN-His (Trt) -Pro-Val-Ile-Val-Ile-Thr (tBu) -Wang resin is synthesized manually using standard Fmoc chemistry. Preloaded Fmoc-Thr (tBu) -Wang resin (loading 0.6 mmol / g, Novabiochem) is deprotected and coupled with other amino acids in the presence of HOBt (1-hydroxybenzotriazole) / TBTU2- (1H-benzotriazol-1-yl) -1 1,3,3-tetramethyluronium tetrafluoroborate) / Dipea (4, 4, and 8 eq., Respectively). After coupling, the resin is washed with DMF, iso-propanol, methanol and DCM, and then dried. The N-terminal Fmoc group of sequence 2 is removed by 20% piperidine in DMF. After washing with NMP, 3-MBA-OSu is added (4eq, for the synthesis of MCV2) or SMPB (4eq, for the synthesis of MCV1) together with DIPEA (8eq), and the reaction is monitored by the Kaiser test until a negative signal is obtained. The resin is washed with DMF, iso-propanol, methanol and DCM and dried. After removal of the solvent, the INCA conjugates are cleaved from the resin by means of a mixture of trifluoroacetic acid, triisopropylsilane, and water (95: 2.5: 2.5, v / v / v). The crude peptides are purified on a preparative C 18 RP-HPLC column (Alltech). The purified peptides are characterized by LC-MS and are found to be at least 70% pure. Each sample is dissolved in anhydrous dimethyl sulfoxide (DMSO) and stored at -20 ° C.
1010
Peptides en resultatenPeptides and results
Naam_Peptide_NFAT remming_ L-Hl_HPVTVIT_++_ D-Hl_HPVTVIT_+_ RD-H 1_TTVIVPH_++_ L-MCV1 MPB-HPVTVIT_+++++___ D-MCV1 MPB-HPVTVIT_niet bepaald_ RD-MCV1 MPB-TTVIVPH_niet bepaald_ RD-MCV11_TTVTVK-MPB_niet bepaald_ RD-MCV12_TIVIVPK-MPB_niet bepaald_ RD-MCV13_TIVTVPK-MBA_niet bepaald_ 5 BepalingName_Peptide_NFAT inhibition_ L-Hl_HPVTVIT _ ++ _ D-Hl_HPVTVIT _ + _ RD-H 1_TTVIVPH _ ++ _ L-MCV1 MPB-HPVTVIT _ +++++ ___ D-MCV1 MPB-HPVTVIT_net determined_ RD-MCV1 MPB-TTVIVP-RTVVTV-RTVTTV_TV_TV-RTVT MPB_net determined_ RD-MCV12_TIVIVPK-MPB_net determined_ RD-MCV13_TIVTVPK-MBA_net determined_ 5 Determination
Zie Figuur 1. RAW 264.7 macrofagen die tijdelijk zijn getransfecteerd met twee plasmides die het gen bevatten voor vuurvliegjes luciferase onder controle van een NFAT activiteit gevoelige promoter (pNFAT-luc) respectievelijk voor een 10 inerte referentie luciferase (Renilla luciferase; pRL-TK), worden gedurende 12 uur gestimuleerd met PMA (200 nmol/L) en ionomycine (500 nmol/L) for 12 h, in aanwezigheid of afwezigheid van FK506, HPVTVIT, volledig -D-HPVTV1T of retro-inverso-volledig-D-HPVTVIT (D-TTVTVPH) bij de aangegeven concentrations. Cell lysaten worden geprepareerden getoetst op tweezijdige 15 luciferase activiteit. Vuurvliegjes-luciferase activiteit wordt genormalizeerd voor renilla luciferase activiteit. De getoonde waarden vertegenwoordigen gemiddelde ±SD van een drievoudig experiment (* P<0.05, ** P<0.01 ten opzichte van PMA/ionomycine gestimuleerde cellen). Alle D-HPVTVIT conjugaten remmen selectief en potent de calcineurine gemedieerde NFAT activiteit.See Figure 1. RAW 264.7 macrophages temporarily transfected with two plasmids containing the firefly luciferase gene under control of an NFAT activity sensitive promoter (pNFAT-luc) and an inert reference luciferase (Renilla luciferase; pRL-TK), respectively are stimulated for 12 hours with PMA (200 nmol / L) and ionomycin (500 nmol / L) for 12 h, in the presence or absence of FK506, HPVTVIT, fully -D-HPVTV1T or retro-inverso-full-D-HPVTVIT ( D-TTVTVPH) at the indicated concentrations. Cell lysates are assayed for prepared bilateral luciferase activity. Fireflies luciferase activity is normalized for renilla luciferase activity. The values shown represent mean ± SD of a triple experiment (* P <0.05, ** P <0.01 relative to PMA / ionomycin stimulated cells). All D-HPVTVIT conjugates selectively inhibit and calcineurin mediated NFAT activity.
20 103400420 1034004
Claims (14)
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NL1034004A NL1034004C2 (en) | 2007-06-19 | 2007-06-19 | Selective inhibitors of the nuclear factor of activated T cells. |
| PCT/NL2008/050402 WO2008156363A1 (en) | 2007-06-19 | 2008-06-19 | Selective inhibitors of the nuclear factor of activated t-cells |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NL1034004A NL1034004C2 (en) | 2007-06-19 | 2007-06-19 | Selective inhibitors of the nuclear factor of activated T cells. |
| NL1034004 | 2007-06-19 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NL1034004C2 true NL1034004C2 (en) | 2008-12-22 |
Family
ID=39018142
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NL1034004A NL1034004C2 (en) | 2007-06-19 | 2007-06-19 | Selective inhibitors of the nuclear factor of activated T cells. |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| NL (1) | NL1034004C2 (en) |
| WO (1) | WO2008156363A1 (en) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ITRM20120350A1 (en) | 2012-07-19 | 2014-01-20 | Univ Degli Studi Milano | NANOCOSTRUTTI WITH PHARMACOLOGICAL ACTIVITY. |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20040002117A1 (en) * | 1998-02-12 | 2004-01-01 | Hogan Patrick G. | Specific inhibitors of NFAT activation by calcineurin and their use in treating immune-related diseases |
-
2007
- 2007-06-19 NL NL1034004A patent/NL1034004C2/en not_active IP Right Cessation
-
2008
- 2008-06-19 WO PCT/NL2008/050402 patent/WO2008156363A1/en active Application Filing
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20040002117A1 (en) * | 1998-02-12 | 2004-01-01 | Hogan Patrick G. | Specific inhibitors of NFAT activation by calcineurin and their use in treating immune-related diseases |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| ARAMBURU J ET AL: "Affinity-driven peptide selection of an NFAT inhibitor more selective than cyclosporin A.", SCIENCE (NEW YORK, N.Y.) 24 SEP 1999, vol. 285, no. 5436, 24 September 1999 (1999-09-24), pages 2129 - 2133, XP002468744, ISSN: 0036-8075 * |
| KANG SUNGHYUN ET AL: "Inhibition of the calcineurin-NFAT interaction by small organic molecules reflects binding at an allosteric site.", THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY 11 NOV 2005, vol. 280, no. 45, 11 November 2005 (2005-11-11), pages 37698 - 37706, XP002468745, ISSN: 0021-9258 * |
| LI H ET AL: "Structural Delineation of the Calcineurin-NFAT Interaction and its Parallels to PP1 Targeting Interactions", JOURNAL OF MOLECULAR BIOLOGY, LONDON, GB, vol. 342, no. 5, 1 October 2004 (2004-10-01), pages 1659 - 1674, XP004566317, ISSN: 0022-2836 * |
| ROEHRL MICHAEL H A ET AL: "Selective inhibition of calcineurin-NFAT signaling by blocking protein-protein interaction with small organic molecules", PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA, vol. 101, no. 20, 18 May 2004 (2004-05-18), pages 7554 - 7559, XP002468743, ISSN: 0027-8424 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2008156363A1 (en) | 2008-12-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6250034B2 (en) | Double acylated GLP-1 derivative | |
| EP2418213B1 (en) | Neuromedin u derivative | |
| JP2021006549A (en) | Multiligand-drug conjugates and uses thereof | |
| EA029025B1 (en) | Analogs of glucagon exhibiting gip receptor activity | |
| CN101855240A (en) | Improved derivatives of amylin | |
| ES2544573T3 (en) | High-affinity dimeric inhibitors of PSD-95 and its use for the treatment of ischemic brain damage and pain | |
| US20110257086A1 (en) | Methods for synthesis and uses of inhibitors of ghrelin o-acyltransferase as potential therapeutic agents for obesity and diabetes | |
| EP3184541A1 (en) | Stapled peptide inhibitors of nemo as potential anti-inflammatory and anti-cancer drugs | |
| Mezö et al. | Synthesis of Gonadotropin-Releasing Hormone III Analogs. Structure− Antitumor Activity Relationships | |
| NL1034004C2 (en) | Selective inhibitors of the nuclear factor of activated T cells. | |
| EP0973799B1 (en) | Cytomodulating lipophilic peptides for modulating immune system activity and inhibiting inflammation | |
| US10745443B2 (en) | Vasopressin-2 receptor agonists | |
| Niida et al. | Antiobesity and emetic effects of a short-length peptide YY analog and its PEGylated and alkylated derivatives | |
| Yurko et al. | Conjugation of amiodarone to a novel cardiomyocyte cell penetrating peptide for potential targeted delivery to the heart | |
| KR102017973B1 (en) | Anti-Hepatitis B Virus X Protein Polypeptide Pharmaceuticals | |
| KR20230137987A (en) | Long-acting amylin receptor agonists and uses thereof | |
| US20210000912A1 (en) | Compositions And Methods For Prophylaxis Or Treatment Of Pain | |
| US20150025016A1 (en) | Peptides that inhibit the interaction between asf1 and histones, and use thereof | |
| US20210371478A1 (en) | Generation of brain and spinal cord neurons, cardiac myocytes, and hepatocytes using reg peptides, peptidomimetics, small molecules and stimulatory antibodies to reg receptor | |
| KR20230054285A (en) | Mitochondria-specific peptides capable of intracellular delivery at nanomolar concentration and uses thereof | |
| US8076453B2 (en) | Kinin B1 receptor peptide agonists and uses thereof | |
| CA3213068A1 (en) | Compositions and articles comprising an adnf polypeptide | |
| US20210299264A1 (en) | Cell-penetrating peptides | |
| KR101019246B1 (en) | A pharmaceutical composition comprising a retro-inverso isomer peptide | |
| WO2022170108A1 (en) | Peptidomimetic macrocycles and uses thereof in prevention of radiation injury |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| V1 | Lapsed because of non-payment of the annual fee |
Effective date: 20110101 |