MXPA99011154A - Uso de derivados colquinol como agentes dañinos vasculares - Google Patents

Abstract

Los derivados colquinol de la fórmula (I) en donde R1, R2, R3 y R6 son cada uno independientemente H, alquilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo, aralquilo, alcanoilo, PO3H2;x es carbonilo (CO), tiocarbonilo (CS), metileno (CH2) o un grupo CHR4;R4 es OH, O-alquilo o NR8R9;R5 y R7 son cada uno independientemente H, alquilo, halógeno, hidroxi, alcoxi, nitro o amino;R8 es H, opcionalmente alilalquilo sustituido cicloalquilo, alcanoilo, tioalcanoilo, arilo, heteroarilo, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, aminocarbonilo, alquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo, arilaminocarbonilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, aminosulfonilo, alquilaminosulfonilo, dialquilaminosulfonilo o arilaminosulfonilo;y R9 es H, alquilo o cicloalquilo y las sales farmacéuticamente aceptables, solvatos, e hidratos de los mismos que han sido encontrados para serútiles para el tratamiento de enfermedades que involucran angiogénesis. Algunos de estos compuestos son novedosos. Particularmente preferidos son aquellos compuestos en los cuales R6 es PO3H2.

Description

USO D? DERIVADOS COLQU-CNOI- COMO AGENTES PANINOS VASCULARES DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Esta invención se relaciona a agentes dañinos vasculares y particularmente al uso en la preparación de agentes para el tratamiento de neovascularización de un grupo de derivados colquinol, algunos de los cuales son compuestos novedosos . La formación de vasculatura novedosa por angiogénesis es una caracteristica clave patológica de varias enfermedades (J Folkman, New England Journal of Medicine 333, 1757 (1995)) . Por ejemplo, para que un tumor sólido crezca debe desarrollar el suministro de su propia sangre, del cual depende criticamente para la provisión de oxigeno y nutrientes; si este suministro de sangre está mecánicamente cerrado del tumor que sufre muerte necrótica. La neovascularización es también una caracteristica clínica de lesiones de piel en psoriasis, del pannus invasor en el conjunto de pacientes de artritis reumatoide y de placas ateroscleróticas. La neovascularización retinal es patológica en la degeneración macular y en renitopatia diabética. En todas estas enfermedades cambiantes de neovascularización por dañar el endotelio vascular recientemente formado se espera que tenga un efecto terapéutico benéfico. — Los derivados colquinoles por ejemplo el N-acetil-colquinol son conocidos. Los efectos anti-tumorales han sido observados en modelos animales (ver por ejemplo - JNCI (Journal National Cáncer Institute) páginas 379-392 1952, vol. 13) . Sin embargo, el efecto estudiado fue aquel de daño ordinario (hemorragia, ablandamiento y necrosis) y no existe la sugerencia de tratamiento de angiogénesis inapropiada-- por destrucción de neovasculatura. Una búsqueda de Extractos Químicos (desde 1955) basada en la subestructura revela un número de estructuras relacionadas con colquinol. En la magnitud de que cualquiera de estos compuestos han sido estudiados por actividad anticancerosa se debe a que los agentes de tubulina vinculantes pueden ser prevenidos para ser antimitóticos y por lo tanto tener un efecto directo en células tumorales. En el curso del trabajo de la presente invención, el -asunto relevancia de las propiedades vinculantes de tubulina a la posible efectividad como agente anti-vascular se -estudió, pero ninguna posibilidad de predecir fue encontrada. Asi, el docetaxel (Lancet, 344, 1267-1271, 1994), el cual es una gente vinculante de tubulina, no tenia efectos dañinos vasculares aún cuando se administraron Dosis de Máxima Tolerancia. Aún cuando los presentes inventores probaron algunos compuestos estructuralmente relacionados -a la presente invención, la ventana terapéutica (relación de MTD (Dosis de máxima tolerancia) a MED (dosis de minimo efecto) ) se encontró por ser demasiado pequeño para la efectividad clínica potencial. De acuerdo a la presente invención, se proporciona el uso de derivados colquinol para la preparación de composiciones para el tratamiento de enfermedades que implican angiogénesis en las cuales el derivado colquinol tiene la fórmula en la cual Ri/ R2, 3 y R5 son cada una independientemente H, alquilo sustituido opcionalmente, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo, aralquilo, alcanoilo, P03H2; X es carbonilo (CO) , tiocarbonilo (CS) , metileno (CH2) o un grupo CHR4 R4 es OH, O-alquilo o NR8Rq; R5 y R7 son cada uno independientemente H, alquilo, halógeno, hidroxi, alcoxi, nitro o amino; Rß es H, alquilo sustituido opcionalmente, cicl-oalquilo, alcanoilo, tioalcanoilo, arilo, heteroarilo, arilcarbonilo, hetersarilcarbonilo, alcoxicarbonilo, arilo-xicarbonilo, aminocarbonilo, alquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo, arilaminocarbonilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, aminosulfonilo, alquilaminosulfonilo, dial-quilaminosulfonilo o arilaminosulfonilo; y Rg es H, alquilo o cicloalquilo y las sales farmacéuticamente aceptables, solvatos e hidratos del mismo. Se cree, aunque esto no se limita en la invención, que el uso de los compuestos de la invención dañan la vasculatura recientemente formada, por ejemplo, la vasculatura de tumores, asi invirtiendo efectivamente el proceso de angiogénesis como se compara a los agentes conocidos antiangiogénicos los cuales tienden a ser menos efectivos una vez que se forma la vasculatura.

Ciertos de estos compuestos son novedosos. En una modalidad, los compuestos novedosos son aquellos de la fórmula I en los cuales por lo menos uno de Ri, R2, R3, R,-, es P03H2. En una modalidad preferida particular, Re es P03H2. Particularmente preferidos son los compuestos definidos por la fórmula en la que Ri-- R2 Y R3 son cada uno independientemente H, alquilo sustituido opcionalmente, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo, alcanoilo, o P03H2; R6 es P03H2; R4 es H o NR8Rg; R5 y R7 son cada uno independientemente H, alquilo, halógeno, alcoxi, nitro o amino; R8 es H, alquilo sustituido opcionalmente, cicloalquilo, alcanoilo, tioalcanoilo, arilo, heteroarilo, aril-caxbonilo, heteroarilcarbonilo, alcoxicarbonilo, aril-oxicarbonilo, aminocarbonilo, alquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo, arilaminocarbonilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, aminosulfonilo, alquilaminosulfonilo, dialquilaminosulfonilo o arilaminosulfonilo; y Rg es H, alquilo o cicloalquilo, y sus sales farmacéuticamente aceptables, solvatos e hidratos del mismo. En otro aspecto de la invención los compuestos novedosos son de la fórmula en la que Ri, R2 y R3 son cada uno independientemente H, alquilo sustituido opcionalmente, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo, alcanoilo o P03H2; Rs es H, alquilo sustituido opcionalmente, cicldalquilo, alquenilo, alquinilo o P03H2; R4 es H o NR8R9; R5 y R7 son cada uno independientemente H, alquilo, halógeno, nitro o amino; g es H, alquilo sustituido opcionalmente, cicloalquilo, alcanoilo, tioalcanoilo, arilo, heteroarilo, arilcarbonilo, hetexoarilcarbonilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, aminocarbonilo, alquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo, arilaminocarbonilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, aminosulfonilo, alquilaminosulfonilo, dialquilaminosulfonilo o arilaminosulfonilo; y Rq es H, alquilo o cicloalquilo, con la condición de que, cuando Ri, R2 y R3 son todos grupos metilo y R-, es hidrógeno, acetilamino, acetilmetilamino, amino, metilamino o dimetilamino entonces Re no es hidrógeno, metilo o hidroxietilo, o acetoxietilo, _ y las sales farmacéuticamente aceptables, solvatos e hidratos del mismo. Los compuestos preferidos utilizados en la invención y de la invención, son aquellos en los cuales Ri, R2, y R3 son alquilo y aquellos en los cuales R4 es acilamino. Como se utiliza en la presente, el término "alquilo" (incluyendo cualquier estructura de cadena alifática relacionada a alquilo) significa un grupo de cadena lineal o ramificado que contiene de uno a siete, preferiblemente un máximo de cuatro, átomos de carbono tales como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, sec-butilo, t-butilo y pentilo. Los sustituyentes opcionales los cuales pueden estar presentes en los grupos alquilo incluyen uno o más "sustituyentes seleccionados de grupos halógeno, amino, monoalquilamino, dialquilamino, hidroxi, alcoxi, aquiltio, alquilsulfonilo, acilamino, alcoxicarbonilamino, alcanoilo, aciloxi, carboxilo, sulfato o fosfato. Los ejemplos de los grupos alcoxi son metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, butoxi y t-butoxi. El término "halógeno" significa flúor, cloro, bromo o yodo. Un grupo alquenilo es un grupo olefinico que contiene de dos a siete átomos de carbono, por ejemplo metileno, etileno, n-propileno, i-propileno, n-butileno, ± -~ butileno, s-butileno y t-butileno. Un grupo alquinilo es de un grupo de 2-7 átomos de carbono por ejemplo, un grupo etinilo, propinilo o butinilo. El término arilo solo o en combinación significa un grupo fenilo sin sustituir o un grupo fenilo que porta uno o más, de preferencia uno a tres ejemplos sustituidos de los cuales son halógeno, alquilo, haloalquilo, hidroxi, nitro, ciano, amino y alcoxi. Un grupo haloalquilo puede portar uno o más átomos de halógeno con los ejemplos de tales grupos siendo trifluorometilo y diclorometilo. El término heteroarilo es definido en la presente como un grupo mono- o bi-ciclico aromático que contiene uno a cuatro heteroátomos seleccionados de cualquier combinación de átomos N, S u 0 y un máximo de 9 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos heteroarilo incluyen grupos piridilo, pirimidilo, furilo, tienilo, pirrolilo, pirazolilo, indolilo, benzofurilo, benzotienilo, benzotiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, imidazolilo, tri-azolilo, quinolilo e isoquinolilo . El término aralquilo es definido en la presente como un grupo alquilo, como se definió previamente, en el que uno de los átomos de hidrógeno es reemplazado por un grupo arilo o heteroarilo como se define en la presente. Cuando uno o más grupos funcionales en los compuestos de las fórmulas I, II, IIA son suficientemente básicos o acidicos, la formación de sales es posible. La sale-s- adecuadas incluyen sales farmacéuticamente aceptables, por ejemplo, sales de adición de ácido, incluyendo clorhidratos, bromhidratos , fosfatos, sulfatos, sulfatos ácidos, alquilsulfonatos, arilsulfonatos, acetatos, benzoatos, citratos, maleatos, fumaratos, succinatos, lactatos y tartratos, sales derivadas de bases inorgánicas incluyendo sales de metal álcali, tales como sales de sodio o potasio, sales de metal alcalinotérreo, tales como sales de magnesio o calcio, y sales derivadas de aminas orgánicas tales como sales de morfolina, piperidina o dimetilamina.

Un grupo útil de compuestos incluyen aquellos en los cuales Ri, R2 y R3 son cada uno alquilo. Otro grupo útil de compuestos incluye aquellos en los cuales Ri, R2 y R3 son cada uno alquilo y R5 y R7 son cada uno hidrógeno. Un subconjunto particularmente útil de este grupo incluye compuestos en los cuales Ri, R2 y R3 son cada uno metilo y R6 es hidrógeno, alquilo o P03H2. Los compuestos particularmente útiles de acuerdo a la invención incluyen: N-acetilcolquinol-O-fosfato y sus sales, solvatos e hidratos . Los compuestos de las fórmulas I, II o IIA pueden ser preparados a partir de un número de procesos como se describen generalmente en lo siguiente, y más especificamente en los Ejemplos a continuación. En los siguientes procesos, la descripción de los símbolos Rl r R2, R3, R4, R5, R? y R7 cuando se usan en las formulas representadas son para ser entendidos para representar aquellos grupos descritos anteriormente en relación a las fórmulas I, II o IIA a menos que -se indiquen de otra manera. En los esquemas descritos a continuación, puede ser necesario emplear grupos protectores los cuales son entonces removidos durante las etapas finales de la síntesis. El uso apropiado de tales grupos protectores y procesos para su remoción serán fácilmente aparentes por aquellos expertos en la técnica.

Asi, de acuerdo a un aspecto adicional de la invención, los compuestos de las fórmulas II o IIA en los cuales R5, R6 y R7 son cada uno hidrógeno, pueden ser preparados por tratamiento de un compuesto de la fórmula (2) con peróxido ácido alcalino. La reacción puede ser convenientemente realizada en solución de hidróxido de sodio acuoso en ausencia o presencia de un co-solvente tal como un alcohol, por ejemplo, etanol, a temperatura en el rango de por ejemplo 0-100°C, preferiblemente a cerca de 60°C. (2) II or HA Intermediarios de la fórmula (2) pueden prepararse por hidrólisis acida de compuesto de la fórmula (3); La reacción es convenientemente llevada a cabo en un ácido acuoso tal como ácido clorhídrico a una temperatura elevada, por ejemplo a, o cerca de 100°C. (3) (2) Los compuestos de la fórmula (3) son ya sea conocidos o pueden prepararse a partir de colquicina por procedimientos convencionales . Los compuestos de las fórmulas I, II o IIA pueden también prepararse a partir de otros compuestos de las fórmulas X, II o IIA, por modificación química. Ejemplos de tales modificaciones químicas que pueden aplicarse son alquilación estándar, arilación, heteroarilación, acilación, tioacilación, sulfonilación, sulfación, fosforilación, halogenación aromática y reacciones de acoplamiento. Estas reacciones pueden utilizarse y agregarse a nuevos sustituyentes o para modificar sustituyentes existentes. Alternativamente, los sustituyentes existentes en compuestos de las fórmulas I, II o IIA pueden ser modificados mediante, por ejemplo oxidación, reducción, eliminación, hidrólisis, u otras reacciones de división para producir otros compuestos de fórmulas I, II o IIA.

Asi, por ejemplo un compuesto de las fórmulas II o IIA que contienen un grupo amino pueden ser acilados en el grupo amino por tratamiento con, por ejemplo, un haluro acilo o anhídrido en presencia de una base, por ejemplo una base amina terciaria tal como trietilamina, en por ejemplo, un solvente tal como un solvente hidrocarburo, por ejemplo, diclorometano a una temperatura en el rango de por ejemplo -30°C a 120°C, convenientemente a, o cerca de la temperatura ambiente . En otro ejemplo general de un proceso- de interconversión un grupo amino en un compuesto de las fórmulas II o IIA puede ser sulfonilado a través del tratamiento con, por ejemplo, un cloruro de alquilo o arilsulfonilo, o un alquilo o anhídrido arilsulfónico en presencia de una base, por ejemplo, una base de amina terciaria tal como trietilamina, en por ejemplo un solvente tal como un solvente hidrocarburo, por ejemplo, diclorometano a una temperatura en el rango de por ejemplo -30°C a 120°C, convenientemente a, o cerca de la temperatura ambiente. t En un ejemplo general adicional un compuesto de las fórmulas II o IIA que contiene un grupo hidroxi puede ser convertido en el éster dihidrogenosfosfato correspondiente a través del tratamiento con, por ejemplo di-ter-butil dietilfosforamidita en presencia de un catalizador adecuado, por ejemplo, tetrazol. En un solvente tal como un solvente éter por ejemplo tetrahidrofurano a una temperatura en el-rango de -40 a 40°C, convenientemente a, o cerca de la temperatura ambiente, seguido por el tratamiento con un agente oxidante por ejemplo ácido 3-cloroperoxibenzoico a una temperatura en el rango de -78°C a 40°C, preferiblemente -40 a 10°C. El triéster de fosfato intermediario resultante es tratado con un ácido, por ejemplo ácido trifluoroacético en un solvente tal como un solvente clorado, por ejemplo, diclorometano a una temperatura en el rango de -30 a 40°C, convenientemente a, o cerca de 0°C para dar el compuesto de la fórmula (2) que contiene un éster dihidrogenfosfato. En un ejemplo general adicional un compuesto de fórmula (2) que contiene una amida puede ser hidrolizado a través del tratamiento con por ejemplo un ácido tal como ácido clorhídrico en un solvente tal como un alcohol, por ejemplo metanol a una temperatura elevada, convenientemente a la temperatura de reflujo. En otro ejemplo general, un grupo O-alquilo puede ser dividido al alcohol correspondiente (OH) a través de reacción con tribromuro de boro en un solvente tal como un solvente clorado, por ejemplo, diclorometano a una baja temperatura, por ejemplo alrededor de -78°C. En un ejemplo general adicional, los compuestos de las fórmulas II o IIA pueden ser alquilados por reacción con un agente de alquilación adecuado tal como un haluro de alquilo, toluensulfonato de alquilo, un mentansulfonato de alquilo o un triflato de alquilo. La reacción de alquilación puede llevarse a cabo en presencia de una base, por ejemplo una base inorgánica tal como un carbono, por ejemplo, carbonato de cesio o potasio, un hidruro tal como hidruro de sodio o un alcóxido tal como un t-butóxido de potasio en un solvente adecuado tal como un solvente aprótico, por ejemplo, dimetilformamida o un solvente éter tal como tetrahidrofurano a temperatura de alrededor de -10 a 80°C. La preparación de un compuesto de las fórmulas II o IIA co o un enantiómero sencillo o, cuando es apropiado, el diastereoisómero puede ser efectuado por síntesis a partir de un material inicial enantioméricamente puro o un intermediario o por resolución del producto final en una forma convencional. Las sales de adición de ácido de los compuestos de las Fórmulas II o IIA se preparan en una forma convencional al tratar una solución o suspensión de la base libre II o IIA con aproximadamente un equivalente de un ácido farmacéuticamente aceptable. Las sales de los compuestos de las fórmulas I, II o IIA derivadas de bases inorgánicas u orgánicas se preparan en una forma convencional al tratar una solución o suspensión del ácido libre I, II o IIA con aproximadamente un equivalente de una base farmacéuticamente aceptable orgánica o inorgánica. Alternativamente, ambas sales de adición de ácido y sales derivadas de bases pueden ser preparadas por tratamiento del compuesto paterno con la resirfa de intercambio de ion apropiada en una forma estándar. La concentración convencional y técnicas de recristalización son empleadas en las sales de aislamiento. Los compuestos de acuerdo a la invención son capaces de destruir el tumor de vasculatura y la vasculatura que ha sido formada recientemente en tanto que no afecta la salida normal, la vasculatura madura. La capacidad de los compuestos para actuar en esta forma puede ser determinada por las pruebas descritas en los Ejemplos a continuación. Los compuestos de acuerdo a la invención son asi de uso particular en la profilaxis y tratamiento de cáncer implicando tumores sólidos y en la profilaxis y tratamiento de -enfermedades donde ocurre angiogénesis inapropiada tal como retinopatia diabética, psoriasis, artritis reumatoide, aterosclerosis y degeneración macular. Los compuestos de la invención pueden ser administrados como una sola terapia o en combinación con otros tratamientos. Para el tratamiento de tumores sólidos, los compuestos de la invención pueden ser administrados en combinación con radioterapia o en combinación con otras sustancias antitumorales, por ejemplo, aquellas seleccionadas a partir de inhibidores mitóticos, por ejemplo, vinblástina, paclitaxel y docetaxel; agentes de alquilación, por ejemplo, cisplatina, carboplatina y ciclofosfamida, antimetabolitos, por ejemplo 5-fluorouracilo, citosina arbinosida e hidroxiurea; agentes intercalantes por ejemplo adriamicina y bleomicina; enzimas, por ejemplo, aspariginasa; inhibidores de topoisomerasa, por ejemplo, etoposida, topotecan e irimotecan; inhibidores de la sintasa timidilato por ejemplo, raltitrexed; modificadores de respuesta biológica por ejemplo interferón; anticuerpos por ejemplo edrecolomab; y antihormonales por ejemplo tamoxifen. Tal tratamiento de combinación puede involucrar aplicación simultánea o secuencial de componentes individuales del tratamiento. Para la profilaxis y tratamiento de enfermedades, los compuestos de acuerdo a la invención pueden ser administrados como composiciones farmacéuticas seleccionadas con respecto a la ruta pretendida de administración y práctica farmacéutica estándar. Tales composiciones farmacéuticas pueden tomar una forma adecuada para administración oral, bucal, nasal, tópica, rectal o parenteral y pueden ser preparadas en una manera convencional utilizando excipientes convencionales. Por ejemplo, por administración oral las composiciones farmacéuticas pueden tomar la forma de tabletas o cápsulas. Por administración nasal o administración por inhalación los compuestos pueden ser convenientemente suministrados como un polvo o en solución. La administración tópica puede ser como un ungüento o crema y la administración rectal puede ser como un supositorio. Para inyección parenteral (incluyendo intravenosa, subcutánea, intramuscular, intravascular o infusión) la composición puede tomar la forma de, por ejemplo, una solución estéril, suspensión o emulsión. La dosis de un compuesto de la invención requieren " para la profilaxis o tratamiento de una condición particular variará dependiendo del compuesto elegido, la ruta de administración, la forma y severidad de la condición y tanto como el compuesto a ser administrado solo o en combinación con otro f-á-rmaco. Asi, la dosis precisa será determinada por la administración fisica, pero en general dosis diaria pueden estar en el rango de 0.001 a 100 mg/kg, de preferencia 0.1 a 50 mg/kg. ACTIVIDAD BIOLÓGICA Las siguientes pruebas fueron utilizadas para demostrar la actividad y selectividad de los compuestos de acuerdo a la invención. Actividad contra vasculatura tumoral medida por trazo radioactivo El siguiente experimento demostró la capacidad de los —compuestos para dañar selectivamente la vasculatura tumoral . Los tumores CaNT subcutáneos fueron iniciados por inyección 0.05 ml de una suspensión de célula tumoral cruda, aproximadamente células 10 , bajo la piel sobre el dorso trasero del ratón de 12-16 semanas de edad. Los animales fueron seleccionados por tratamiento después de aproximadamente 3-4 semanas, cuando sus tumores alcanzaron un diámetro de medio geométrico 5.5-6.5 mm. Los compuestos se disolvieron en una solución salina estéril y se inyectaron intraperitonealmente en un volumen de 0.1 ml por 10 g de peso corporal. La perfusión tumoral se midió 6 horas después de la administración intraperitoneal en tumor, riñon, hígado, músculo liso, intestino y cerebro por la técnxca de extracción 86RbCI (Sapirstein, Amer J Physiol, 193, 161-168, 1958) . La radioactividad del tejido se midió 1 minuto después en inyección intravenosa de 86RbCI utilizada para calcular el flujo de sangre relativa como una proporción de rendimiento cardiaco (Hill and Denekamp, Brit J Radiol, 55, 905-913, 1982) . Cinco animales se utilizaron en grupos de control y tratados. Lo resultados fueron expresados como un porcentaje de flujo sanguíneo en los tejidos correspondientes en el vehículo de animales tratados . Actividad contra vasculatura tumoral medida por tinte fluorescente . El siguiente experimento además demostró la capacidad de los compuesto de dañar la vasculatura tumoral. El volumen de vasculatura tumoral funcional en tumores productivos CaNT de ratón fue medida utilizando el tinte fluorescente Hoechst 33342 de acuerdo al método de Smith et al (Brit J Cáncer 57, 247-253, 1988) . Cinco animales se usaron en grupos de control y tratados. El tinte fluorescente se disolvió en solución salina a 6.25 mg/ml y se inyectó intravenosamente a 10 mg/kg durante 6 horas después del _ tratamiento por fármaco intraperitoneal. Un minuto después, los animales se sacrificaron y los tumores se extirparon y se congelaron; las secciones de 10 µm se cortaron a 3 diferentes niveles y se observaron bajo iluminación UV utilizando un microscopio Olympus equipado con epifluorescencia . Los vasos sanguíneos se identificaron por sus contornos y el volumen vascular se cuantificó utilizando un punto de sistema de rayado basado en el descrito por Chalkley. (J Nati Cáncer Inst . 4, 47-53, 1943) . Todos los estimados se basaron en conteos un mínimo de 100 campos de secciones cortadas a los 3 diferentes niveles. Los compuestos de la invención redujeron el volumen tumoral vascular funcional por más de 20% en dosis de 50 mg/kg o más bajas. Los siguientes ejemplos no limitantes ilustran la invención. En los ejemplos todos los 1Hnmr fueron corridas a 300 TYIHz a menos que de otra forma se especifiquen. La cromatografía en columna fue transformada en gel de sílice. Todas las temperaturas son en 0°C. Las abreviaturas siguientes se utilizaron: THF - tetrahidrofurano: DMSO dimetilsulfóxido; MCPBA - ácido 3-cloroperoxibenzoico .

EJEMPLO 1 N-acetilcolguiñol-0-fosfato Una solución de N-acetilcolquinol (260 mg, 0.76 mmoles) en THF anhidro (2 ml ) bajo una atmósfera de nitrógeno se trató con di-t-butil dietilfosforamidita (189 mg, 0.75 mmoles) y 1- (H) -tetrazol (0.14 g, 1.99 mmoles) y la solución se agitó a 20° durante 0.5 horas. La solución se enfrío a -40° y una solución de MPCBA al 85% (202 mg, 0.99 mmoles) en diclorometano anhidro (2 ml) tal como una relación que la temperatura restante bajo -10°. La solución se permitió calentar a temperatura ambiente, éter dietílico (30 ml) se agregó y la solución resultante se lavó sucesivamente con 10% de metabilsulfito de sodio acuoso (dos porciones de 25 ml ) , bicarbonato de sodio acuoso al 5% (dos porciones de 25 --ml), ácido cítrico acuoso al 5% (30 ml ) , bicarbonato de sodio acuoso al 5% y salmuera. La solución orgánica se concentró bajo~presión reducida y el residuo se sometió a cromatografía en columna para producir una espuma blanca (170 mg) conteniendo N-acetilcolquinol-O-di-t-butilfosfato el cual se residisolvió en diclorometano (5 ml), se enfrío a 0° y se trató con ácido trifluoroacético (0.5 ml) . La solución se permitió calentar a temperatura ambiente y agitar 1 hora antes siendo concentrada bajo presión reducida y triturada con éter para dar el compuesto del título (110 mg) como un sólido blanco, p.f. 233-235°. dH (d6-DMSO) 8.38(d, ÍH, J=8Hz) , 7.27(d, lH,J=7Hz), 7.12(d, ÍH, J=8Hz) , 7.10(s,lH), 6.77 (s, ÍH) , 4.48 (m, ÍH), 3.81 (s, 3H) , 3.76 (s, 3H) , 3.49 (s, 3H) , 2.5 (señal parcialmente oscurecida por pico DMSO), 1.9-2.2 (m, 2H) , 1.86 (s, 3 H) . La actividad del compuesto de fosfato se midió a través de ensayo de trazo radioactivo descrito anteriormente: el compuesto de este Ejemplo dio una disminución del 65a en tumor de flujo sanguíneo a una dosis de 125 mg/kg con la reducción no significante en flujo sanguíneo en piel, músculo, hígado, riñon, intestino o corazón-. El compuesto de fosfato se comparó con el N-acetilcolquinol padre para la dosis de tolerancia máxima (MTD) (ninguna muerte en tres animales) , dosis efectiva mínima (MED) medición por la técnica de tinte fluorescente ya descrita y la ventana terapéutica (MTD/MED) .

MTD MED Ventana mg/kg mg/kg terapéutica peso peso (MTD/MED) corporal corporal N-acetil colquinol 125 30 7 4 N-acetil colquinol-O-fosfato 750 -. 50 15 Aunque el fosfato tenía un MED ligeramente alto, la "ventana" es significativamente mayor. Esto fue inesperado. El fosfato también dio mayor solubilidad. Por comparación, las "ventanas terapéuticas" para colquicina (la estructura más cercana a los presentes compuestos y docetaxel (un fármaco vinculante de tubulina, marcada como "Taxotere" la cual tiene una actividad dañina vascular) y estos datos se presentaron en la siguiente tabla: Tabla- 1 - Ventana terapéutica de otros agentes vinculantes de tubulina (por técnica de tinte fluorescente) . Compuesto MED (mg/kg MTD (mg/kg MTD/MED peso corporal) peso corporal) Docetaxel >30 (Sin efecto a 30) 30 " <1 Col-quicina 2.5 5 2 EJEMPLO 2 N-etilcolquinol Una solución de N-acetilcolquinol (500 mg, 1.4 mmoles) en THF (15 ml) se agregó en gotas sobre 15 minutos a una suspensión de hidruro de litio-aluminio (106 mg, 2.74 mmoles) en THF (10 ml ) con enfriamiento en un baño con hielo.

La mezcla se calentó a reflujo durante 15 horas, permitiendo enfriar y se trató con hidruro de litio-aluminio adicional (53 mg, 1.4 mmoles) antes de calentar a reflujo durante 3 horas adicionales. La mezcla se enfrío (baño de hielo) y agua (10 ml) se agregó en gotas antes de la extracción con tres porciones de acetato de etilo. Los extractos combinados secos (MgS04), se concentraron bajo presión reducida para una goma verde, en la cual, en trituración con éter, dieron el compuesto del titulo como un sólido ligeramente verde, p.f. 185°C (descomposición m/e 343 (M+) , Análisis calculado para C20H2aNO4 H20: 66.46; H, 7.53; N, 3.88. Encontrado: C, 66,50; H, 7.17, N, 3.79. EJEMPLO 3 N-benciloxicarbonilcolquinol Una solución de colquinol (625 mg, 1.98 mmoles) en piridina seca (10 ml) se trataron a gotas con bencilcloroformiato (0.566 ml, 3.97 mmoles) y la mezcla se agitó 16 horas. El solvente se eliminó bajo presión reducida, agregando" agua y la mezcla resultante se extrajo con tres porciones de cloroformo. Los extractos combinados, secos (MgS04) , se concentraron bajo presión reducida a una goma café oscura la cual se sometió a la cromatografía en columna en gel de sílice, eluyendo con 50% de acetato de etilo/éter de petróleo. La goma anaranjada resultante se cristalizó a partir de éter/éter de petróleo para dar el compuesto del título (346 mg) como un sólido amarillo pálido, p.f. 79-81°C, m/e 449 (M+) . Análisis Cale, para C2sH27N06 0.33H20; C, 68.57; H, 6.07; N, 3.08. Encontrado: C, 68.71; H, 6.18; N, 2.91. EJEMPLO 4 N- (fenilcarbamoil) colquinol Una solución de colquinol (400 mg, 1.27 mmoles) en piridina seca (10 ml) se trataron en gotas con isocianato de fenilo (0.151 ml, 1.39 mmoles) y la mezcla se agitó durante 18 horas antes de calentar a reflujo durante 2 horas. El solvente se eliminó bajo presión reducida, agregando agua y la mezcla resultante se extrajo con tres porciones de cloroformo. Los extractos combinados, secos (MgS04) , se concentraron bajo presión reducida a una goma café oscura la cual se sometió a cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con 35% de acetato de etilo/éter de petróleo. La goma resultante se cristalizó a partir de éter/éter de petróleo para dar el compuesto del titulo (261 mg) como un sólido anaranjado pálido, p.f. 145-146°C. m/e 434 (M+) . EJEMPLO 5 _ N-Mesilcolquinol Una solución de N, O-dimesilcolquinol (234 mg, 0.5 mmoles) en metanol (8 ml) se trató con hidróxido de sodio (40 mg, 1 mmoles) y la mezcla se calentó a reflujo durante 3 horas . El solvente se eliminó bajo presión reducida y se agregó agua (5 ml) . La solución se volvió neutral por adición de 1 M de ácido clorhídrico y se extrajo con tres porciones de diclorometano. Los extractos combinados, secos (MgSO/j) , se concentraron bajo presión reducida para dar el compuesto del titulo (123 mg) como un sólido rosa, p.f. 234-236°C, m/e 393 (M+) . El N, O-dimesilcolquinol utilizado como un material inicial fue preparado como sigue: Una solución de colquinol (50Q mg, 1.6 mmoles) en piridina seca (15 ml) se trataron con cloruro de mesilo (0.135 ml, 1.7 mmoles) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente 36 horas. Una porción adicional de cloruro de mesilo (0.135 ml, 1.7 mmoles) se agregó y se agitó 16 horas continuas. El solvente se eliminó bajo presión reducida y se agregó agua (5 ml) . La solución se extrajo con tres porciones de cloroformo y los extractos combinados, secos (MgS04) bajo presión reducida para dar una goma café la cual se sometió a cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo para dar N, O-dimesilcolquinol (292 mg) como un sólido anaranjado ligero. EJEMPLO 6 N-Dimetilsulfomaoilcolquinol Una solución de colquinol (50 mg, 0.16 mmoles) en acetonitrilo seco (3 ml) y trietilamina (0.22 ml, 0.16 mmoles) se trataron con cloruro de dimetilsulfamoilo y la mezcla se agitó durante 30 minutos antes de calentar a reflujo durante 15 horas. El solvente se eliminó bajo presión reducida agregando agua y la mezcla resultante se extrajo con tres porciones de cloroformo. Los extractos combinados, secos (Na2S04) , " se concentraron bajo presión reducida a una goma café oscura la cual se sometió a cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo para dar el compuesto del título (46 mg) como una goma anaranjada pálida la cual se solidificó, p.f. 82-85°C m/e 422 (M+) . EJEMPLO 7 N-Acetil-O-metoxicarbonilmetilcolquinol Una solución de N-acetilcolquinol (500 mg, 1.4 mmoles) en DMF seco (5 ml) a 0°C se trató con metilbromoacetato (322 mg, 2.1 mmoles) e hidruro de sodio (84 mg de una suspensión en aceite al 60%, 2.1 mmoles) y la mezcla se agitó durante 30 minutos. Se agregó agua (50 ml ) y la mezcla se extrajo con cuatro porciones de acetato de etilo. Los extractos combinados se lavaron sucesivamente con cuatro porciones de agua y dos porciones de solución de cloruro de sodio acuoso saturado, seco (MgS04) , y el solvente se eliminó bajo presión reducida para dar el compuesto del título (280 mg) como un sólido blanco, p.f. 82-83°C. m/e 429 2 (M+) . Análisis calculado para C23H27N07 0.33H20; C, 63.45; H, 6.40; N, 3.22. Encontrado: C, 63.53; H, 6.29; N, 3.17. EJEMPLO 8 N-acetil-O-carboximetilcolquinol Una solución de N-acetil-O-metoxicarbonil-metilcolquinol (140 mg, 0.33 mmoles) en acetonitrilo (5 ml) se trataron con solución de hidróxido de potasio -acuoso (1.0 M, 5 mi y la mezcla se calentó a 80°C durante 30 minutos. La mezcla enfriada se ajustó a un pH3 por adición de ácido clorhídrico 2M y se extrajo con cuatro porciones de acetato de etilo. Los extractos combinados se lavaron con dos porciones de solución de cloruro de sodio acuoso saturado, seco (MgS04) y se concentraron bajo presión reducida. La adición de acetona (2 ml) y hexano (1 ml) produjo el compuesto del título (58 mg) como un sólido blanco p.f. 220-221°C. m/e 415.3 (M+) . Análisis calculado para C_2H-5N07 0.33H2O: C, 62.71, H, 6.14; N, 3.32. Encontrado: C, 62.63; H, 6.02; N, 3.26. EJEMPLO 9 N-Acetil-O-ciclopentilcolquinol Una solución de N-acetilcolquinol (200 mg, 0.56 mmoles) en DMF seco (2 ml) a 0°C se trataron con "hidruro de sodio (33 mg de una suspensión en aceite al 60%, 0.84 mmoles) seguida por bromuro de ciclopentilo (125 mg, 0.84 mmoles) y la mezcla se agitó 1 hora. Una porción adicional de hidruro de sodio (17 mg de una suspensión en aceite al 60%, 0.42 mmoles) y de bromuro de ciclopentilo (63 mg, 0.42 mmoles) y la mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Se agregó agua (10 ml) y la mezcla se extrajo con cuatro porciones de acetato de etilo. Los extractos combinados se lavaron con dos porciones de solución de cloruro de sodio acuoso saturado, seco (MgS04) y se concentraron bajo presión reducida. El compuesto del titulo (160 mg) se obtuvo como un sólido blanco. p.f. 89-94°C. m/e 425.3 (M+). Análisis calculado para C25H3?N05 : C, 70.54; H, 7.35, N, 3.29. Encontrado: C, 70.55; H, 7.35; N, 3.25. EJEMPLO 10 N-acetil-10-nitrocolquinol Una solución de N-acetilcolquinol (100 mg, 0.27 mmoles) en ácido glacial acético (20 ml ) se trataron lentamente con 20 ml de una solución de ácido nítrico concentrada (0.34 ml) en ácido acético (100 ml ) manteniendo la temperatura a aproximadamente 12°C. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas, se agregó una solución adicional de 1 ml de ácido nítrico/ácido acético y se agitó continuamente durante 2 horas. La mezcla se vertió en hielo y se extrajo con tres porciones de acetato de etilo. Lo-s extractos combinados se lavaron con dos porciones de solución de cloruro de sodio acuoso saturado, seco (MgS04) y se concentraron bajo presión reducida. La purificación- en gel de silice eluyó con acetato de etilo para dar el compuesto del título (50 mg) como un sólido amarillo pálido p.f. 117-8°C. m/e 401.9 (M+) Análisis calculado para C20H22N2O7 0.33HO; C, 58.82; H, 5.56; N, 6.86. Encontrado C, 58.87; H, 5.66; N, 6.55. EJEMPLO 11 La actividad contra la vasculatura tumoral se midió por la técnica de tinte fluorescente descrita anteriormente por los compuestos de los Ejemplos 1-10 administrada a 50 mg/kg y N-acetilcolquinol. Compuesto del Disminución en % de volumen Ej emplo vascular 1 38 43 4 37 5 38 6 30 7 12 49 9 59 10 28 N-acetilcolquinol 78

Claims (12)

1. REIVINDICACIONES 1. El uso de derivados de colquinol para la preparación de composiciones para el tratamiento de enfermedades que implican angiogénesis en la cual el derivado colquinol tiene la fórmula en donde Ri. 2, R3 y R5 son cada una independientemente H, alquilo sustituido opcionalmente, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo, aralquilo, alcanoilo, P03H2; X es carbonilo (CO) , tiocarbonilo (CS) , metileno
2. (CH2) o un grupo CHR4 R4 es OH, O-alquilo o NR8R9; R5 y R7 son cada uno independientemente H, alquilo, halógeno, hidroxi, alcoxi, nitro o amino; R8 es H, alquilo sustituido opcionalmente, cicloalquilo, alcanoilo, tioalcanoilo, arilo, heteroarilo, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, aminocarbonilo, alquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo, arilaminocarbonilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, aminosulfonilo, alquilaminosulfonilo, dialquilaminosulfonilo o arilaminosulfonilo; y Rg es H, alquilo o cicloalquilo y las sales farmácéuticamente aceptables, solvatos e hidratos del mismo. 2. El uso de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque por lo menos uno de Ri, R2, R3 y R,. es P03H2.
3. 3. El uso de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque R6 es P03H2.
4. 4. El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque Ri, R2 y R3 son alquilo .
5. 5. El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque R4 es acilamino.
6. 6. El uso de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R6 es P03H, Rí r R2 y R3 son alquilo y R4 es acilamino.
7. 7. Los compuestos de la fórmula I, caracterizados porque por lo menos uno de Ri, R2, R3 y Rß es P03H2
8. 8. El compuesto de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque R$ es P03H2-
9. 9. El compuesto de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque Ri, R2 y R^ son alquilo y R4 es acilamino.
10. 10. El compuesto de conformidad con la reivindicación 7, de la fórmula: caracterizado porque Ri, R2 Y R3 son cada uno independientemente H, alquilo sustituido opcionalmente, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo, alcanoilo, o P03H2; R6 es P03H2; R4 es H o NR8R9; R5 y R7 son cada uno independientemente H, alquilo, halógeno, alcoxi, nitro o amino; R8 es H, alquilo sustituido opcionalmente, cicl-oalquilo, alcanoilo, tioalcanoilo, arilo, heteroarilo, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, aminocarbonilo, alquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo, arilaminocarbonilo, alquilsulfonilo, 4 arilsulfonilo, aminosulfonilo, alquilaminosulfonilo, dialquilaminosulfonilo o arilaminosulfonilo; y Rg es H, alquilo o cicloalquilo, y sus sales farmacéuticamente aceptables, solvatos e hidratos del mismo.
11. 11. Un compuesto de la fórmula: caracterizado porque Ri, R2 y R3 son cada uno independientemente H, alquilo sustituido opcionalmente, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo, alcanoilo o P03H2; R6 es H, alquilo sustituido opcionalmente, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo o P03H2; R4 es H o NR8R9; R5 y R7 son cada uno independientemente H, alquilo, halógeno, alcoxi, nitro o amino; R8 es H, alquilo sustituido opcionalmente, cicioalquilo, alcanoilo, tioalcanoilo, arilo, heteroarilo, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, aminocarbonilo, alquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo, arilaminocarbonilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, aminosulfonilo, alquilaminosulfonilo, dialquilaminosulfonilo o arilaminosulfonilo; y Rg es H, alquilo o cicloalquilo, con la_ condición de que, cuando Ri, R2 y R3 son todos grupos metilo y R es hidrógeno, acetilamino, acetilmetilamino, amino, metilamino o dimetilamino entonces Re no es hidrógeno, metilo o hidroxietilo, o acetoxietilo, y sus sales farmacéuticamente aceptables, solvatos e hidratos del mismo.
12. 12. El compuesto de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque Ri, R2 y R- son alquilo y R4 es acilamino.