MXPA98009016A - Metodo para elaborar mosto que tiene filtrabilidad mejorada y/o rendimiento incrementado - Google Patents

Abstract

La presente invención proporciona mostos con rendimiento incrementado y filtrabilidad mejorada asícomo un proceso para preparar el mosto, que comprende los pasos de:(a) preparar mosto a partir de cereales malteados o no malteados, o una mezcla de cereales malteados y no malteados, en la presencia de una mezcla de actividades de enzima, (b) filtrar la malta empastada obtenida asípara obtener el mosto, en donde la mezcla de actividades de enzima se selecciona a partir de una mezcla que comprende al menos actividad de B-glucanasa, y actividad de liberación de a-L-arabinofuranosa o una mezcla que comprende al menos actividad de B-glucanasa, actividad de endoxilanasa, y actividad de liberación de a-arabinofuranosa.

Description

¿X-; MÉTODO PARA ELABORAR MOSTO QUE TIENE FILTRAB I LIDAD MEJORADA Y/0 RENDIMIENTO INCREMENTADO Campo de la invención 5 La presente invención proporciona un proceso para elaborar mosto que tiene filtrabilidad mejorada y/o demuestra un rendimiento incrementado en la elaboración de cerveza. La invención también proporciona métodos para elaborar cerveza, para elaborar vino y alcohol potable a partir del mosto elaborado de acuerdo con la presente invención. La invención también se refiere al uso de enzimas en el mejoramiento de la filtrabilidad y/o del rendimiento del mosto elaborado a partir de' cereales malteados y/o no malteados, asi como composiciones . que comprenden mezclas de actividades de enzima de acuerdo con la invención.

Antecedentes de la invención El uso de enzimas en la elaboración de mosto fer entable se conoce desde hace mucho. Por ejemplo, para la elaboración de cerveza, los granos y/o granos malteados se licúan y sacarifican a fin REF-: 28613 de producir azúcares fermentables . Se pueden mejorar los pasos de licuefacción con el uso de a-amxlasas termoestables como por ejemplo en las Patentes Norteamericanas Nos. 4,285,975 ó No. 5,180,669. También se usan proteasas para incrementar la cantidad de nitrógeno libremente disponible en el mosto para mejorar la fermentación. Después de la filtración de la malta empastada licuada y sacarificada, el mosto obtenido se inocula en cepas especiales de levadura (Saccharomyces sp . ) que convierte los azúcares en etanol y los compuestos de sabor característicos. Sin embargo, a parte del almidón están presentes otros polisacáridos en los granos de cereal. Por ejemplo, los ß-glucanos están presentes (R.J. HENRY J. Sci Food Agrie. (1985) 36, 1243-1253) como se ilustra a continuación para varios cereales: Cereal ß-glucanos trigo 0.5 - - 8.0 cebada 4.0 - - 8.0 centeno 5.0 - - 10.0 arro z 1.0 - - 3.0 avena 5.0 - - 10.0 Estos ß-glucanos consisten de enlaces ß-l,3/ß-l,4 entre porciones de ß-D-glucopiranosa (M.J. EDNEY, B.A. MARCHYLO y A.W. Mac GREGOR J. Inst. Brew (1991) 97, 39-44), los ß-glucanos son altamente viscosos (N. WAGNER y colaboradores Monatschrift für Brauwissenschaft (1988) Heft 10, 384-395) y acarrean problemas de filtración del mosto y cerveza (S. AASTRUP Carlsberg Res. Commun. (1979) 44, 289-304) si no se hidrolizan durante el paso de licuefacción. Esto es la razón por la cual las ß-glucanasas de Bacillus subtilis (R. BORRISS Zeitschr. Für allge . Microbiol. (1981) 21 (1), 7-17), Pencilliu emersonil (A.P. MOLONEY, y colaboradores, Enzym. Microb. Technol (1983) 5, 260-264), Mucor miehei (F. BRANISLAV European Patent 0 504 947 A2 , 1992) o, Trichoderma sp . (S.P. SHOEMAKER y R. D. BROWN Jr Briochim. Biophys. Acta (1978) 523, 133-146) se usan ampliamente a escala industrial, además de la ß-glucanasa presente en la malta; esta última no es suficientemente termoestable para estar arriba durante el proceso esquemático de fabricación de cerveza (M. HRMOVA y G.B. FINCHER Biochem. J. (1993) 289, 453-461) . Los polisacáridos no de almidón también incluyen pentosanos, la estructura de los cuales se ha estudiado ampliamente de manera reciente (H. GRUPPEN y colaboradores Carbohydr. Res. (1992) 233, 45-64; G. ANNISON y colaboradores Carbohydr Polym (1992) 19, 151-159; T. ITO y colaboradores, J. Carbohydr. Chem (1994) 13(3) 491-498) en particular aquellos de cebada y malta (R.J. VIETOR y colaboradores, Carbohydr. Res. (1994) 254, 245-255; R.J. VIETOR y colaboradores, Carbohydr. Polym (1994) 24, 113-118) . La Patente Británica No. 2,150,933 muestra el interés para una pentonasa de Peniccillium emersonii para mejorar la producción y extracción de azúcares fermentables en la fabricación de cerveza. La Patente Norteamericana No. 4,746,517 demuestra la alta eficiencia en el sistema xilanolitico a partir de Disporotrichum di orphosporum para mejorar la filtrabilidad del mosto y la cerveza. El uso de xilanasa B para mejorar la fil trabilidad del mosto también se ha mencionado en WO 94/14965. Esta solicitud se incorpora en la presente por referencia. Las solicitudes que se pueden mencionar en unión con el uso de enzimas en la elaboración de mosto para la fermentación son: W094/21785.

A pesar del avance que se ha hecho en esta área, aún existe la necesidad de métodos para preparar mosto con una capacidad de filtrado mejorada, adicional, y/o rendimientos superiores y preparaciones de enzima para el uso en los mismos.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona mostos con rendimiento incrementado y capacidad de filtrado mejorado asi como un proceso para preparar mosto que comprende los pasos de: (a) preparar malta empastada de cereales malteados o no malteados, y una mezcla de cereales malteados o no malteados', en la presencia de una mezcla de actividades de enzima, (b) filtrar la malta empastada obtenida de esta manera para obtener el mosto, en donde la mezcla de actividades de enzima se selecciona a partir de una mezcla que comprende al menos actividad de ß-glucanasa, y una actividad de liberación de a-L-arabinofuranosa o una mezcla que comprende al menos actividad de ß-glucanasa, actividad de liberación de a-L-arabinofuranosa . En forma preferente, de acuerdo con el proceso de la invención, se proporciona actividad de liberación de arabinofuranosa por una enzima seleccionada a partir de a-L-arabinofuranosidasa (EC 3.2.1.55) y (1 > 4)-ß-D-arabinoxilanarabinofuranohidrolasa (AXH) , o una mezcla de estas enzimas. El uso de a-L-arabinofuranosidasa o ( l->4 ) -ß-D-arabinoxilan-arabinofuranohidrolasa (AXH) a partir de la cepa de Aspergillus es aún preferida. De acuerdo con una modalidad se usa a-L-arabinofuranos idasa a partir de Aspergillus niger. De acuerdo con otra modalidad, la invención proporciona un proceso para elaborar cerveza, y/o alcohol potable, y otras bebidas alcohólicas, en donde se fermenta un mosto obtenible de acuerdo con la invención. De acuerdo con una modalidad adicional, la invención contempla el uso de a-L-arabinofuranosidasa B a partir de Aspergillus niger en un proceso para mejorar la capacidad filtrada en el mosto . De acuerdo con otra modalidad, la invención proporciona el uso de a-L-arabinofuranosidasa A en un proceso para incrementar el rendimiento del mosto .

La invención también proporciona una preparación de enzima adecuada para el uso en un proceso de elaboración de mosto, la composición que comprende una mezcla de actividad de enzimas seleccionadas a partir de una mezcla que comprende al menos actividad de ß-glucanasa y actividad de liberación de a-arabino furanosa o una mezcla que comprende al menos actividad de ß-glucanasa, actividad de endo-xilanasa y actividad de liberación de a-arabinofuranosa . Preferida de acuerdo con la invención es una preparación de enzimas, en donde la actividad de liberación de arabinofuranos ilo se proporciona por una enzima seleccionada a partir de a-L-arabinofuranosidasa (EC 3.2.1.55) y (l->4)-ß-D-arabinoxilan-arabinofuranohidrolasa (AXH), o un a mezcla de las mismas. Preferido de acuerdo con la invención, es una preparación de enzimas en donde la a-L-arabinofuranosidasa o la (l->4)-ß-D-arabinoxilan-arabinofuranohidrolasa (AXH) se puede obtener a partir de la cepa de Aspergillus.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Ahora se ha encontrado de manera sorprendente que cuando se elabora mosto en la presencia de una mezcla de actividades de enzima que comprende actividad de ß-glucanasa, actividad de a-L-arabino furanos idasa, y en forma preferente endo-ß-1 , 4 -xilanasa, se obtiene una malta empastada licuada y sacarificada, que se puede filtrar de una manera más fácil que la malta .empastada obtenida usando ß-glucanasas solas o mezclas de ß-glucanasas y endoxilanasa. Además, el mosto obtenido a partir de la filtración de la malta empastada muestra un rendimiento superior. El rendimiento a este respecto se refiere a ' la cantidad de azúcares fermentados y al mosto, expresados como un porcentaje de los azúcares presentes en las materias primas. El rendimiento mejorado del mosto independientemente de la malta elegida. Las maltas ejemplificadas en la presente muestran ya buenos rendimientos sin las actividades de enzima de acuerdo con la invención. Se contempla que es bueno tener mejoras dramáticas con maltas de más pobre calidad, con cereales o ho malteados o con preparaciones de cervezas mezcladas.

La fabricación del mosto se puede realizar de manera convencional, que comprende la licuefacción y sacarificación de material de cereal, solamente con la ayuda de a-amilasas y proteasas, para obtener una malta empastada, licuaficada y sacarificada . Los materiales de inicio son cereales, ya sea las llamadas materias primas o materias no malteadas, o alteadas, o mezclas de los mismos (preparación de cerveza mezclada) . Por ejemplo, se pueden usar cereales tal como la cebada, trigo, maiz, sorbo, avena y arroz, ya sea malteadas o no malteadas, o mezclados. En forma preferente, el método de acuerdo con la invención se usa en 100 % de la preparación de cerveza de malta. En el caso de los cereales no malteados, el paso de licuefacción comprende usualmente la molienda del material no malteado del cereal para obtener una harina de un tamaño de partícula adecuado, la hidratación desde aproximadamente 1 hasta aproximadamente 4, en forma preferente 3 partes de agua, y opcionalmente, dependiendo de la endoproteasa usada, desde aproximadamente 50 hasta aproximadamente 300 ppra de calcio, en forma preferente 200 ppm de Ca2+ . Las enzimas de Bacillus stearothermophilus parecen ser menos dependientes del calcio. En consecuencia, no se requiere la complementación de Ca2+ en ese caso. El tamaño de partícula ~de los cereales molidos no deben exceder aproximadamente 3 mm, no más de 3.5 % debe exceder 1.3 mm; no más de 1.5 % debe ser más pequeño de 0.25 mm . Las enzimas que se pueden usar además son celulasas, ß-glucanasas, y otras enzimas degradantes de la pared celular de las plantas. El medio de licuefacción se ajusta usualmente a un pH de entre aproximadamente 5 y 8, en forma preferente entre aproximadamente 6 y 7, usando, por ejemplo, hidróxido de calcio. Es importante adicionar a-amilasa, en forma preferente una a-amilasa termoestable al medio de licuefacción asi como una endoproteasa en una dosis suficiente para licuar al menos parcialmente el almidón del cereal, y para degradar al menos parcialmente la proteina. Las dosis adecuadas de a-amilasa son desde aproximadamente 0.5 hasta aproximadamente 2.0, en forma preferente 1-1.5 kg por tonelada, cuando se usan B.A. T.S. Las dosis adecuadas de proteasas, en el caso de proteasa de cerveceros 2000, más. de 0.5 kg/Ton de granos (kg/T), en forma preferente más de 1 kg/T. En el caso de Panstimasa 400 más de 2 kg/T, en forma preferente más de 5, en forma más preferente más de 10 kg/T se deben usar. En el proceso de licuefacción se llevan a cabo un número de pasos a temperatura elevada; después de adicionar a-amilasa y proteasa, la mezcla se mantiene a una temperatura entre aproximadamente 40°C y 65°C, en forma más preferente desde aproximadamente 45 y 55°C, en forma más preferente 50°C, hasta que se obtiene una licuefacción suficiente. El tiempo necesario depende del cereal o mezclas de cereales usados, pero usualmente es desde aproximadamente 30 minutos hasta 2 horas es satisfactorio. Subsecuentemente, la temperatura se eleva gradualmente, la proporción que no es critica, hasta aproximadamente 90-95°C y se deja a esa temperatura durante aproximadamente 30 minutos hasta aproximadamente 1 hora. Luego, la mezcla se enfria a una temperatura a la cual toma lugar la sacarificación; usualmente aproximadamente 50°C y hasta aproximadamente 70°C, en forma preferente entre aproximadamente 55°C y 65°C, en forma más preferente aproximadamente 60°C. Temperaturas ligeramente superiores de 70°C deben ser posibles, dependiendo de la termoes tabilidad de las enzimas usadas en el paso de sacarificación. Cuando se alcanza la temperatura preferida se- adicionan las enzimas de sacarificación, tal como fermex de cerveceros (a-amilasa) o Nonamyl (ß-amilasa recombinante) en cantidades que varian usuario entre aproximadamente 400 g/T hasta aproximadamente 1 kg/T para fermex de cerveceros. También se usan frecuentemente glucoamilasas . La sacarificación, toma desde aproximadamente 30 minutos hasta aproximadamente 2 horas, después de lo cual la temperatura se eleva a aproximadamente 75°C hasta aproximadamente 80°C, inter alia para inactivar las enzimas y microorganismos no deseados, y se mantiene a la temperatura elevada preferida durante aproximadamente 10 minutos; el periodo que no es critico . La malta empastada obtenida asi se filtra subsecuentemente usando equipo bien conocido en la técnica; un embudo con papel filtro Schleicher & Schuell trabaja satisfactoriamente. Después de la filtración, el mosto se fermenta por una levadura adecuada, bajo condiciones que dependen de la cepa usada, y el propósito final; además, se contempla la fabricación de cerveza, producción de alcohol como combustible o como bebida alcohólica, por la presente invención. Las cepas adecuadas y condiciones adecuadas son bien conocidas para aquellos expertos en la técnica. Otras enzimas en la preparación de mosto que se usan convencionalmente son ß-glucanasas. La ß-glucanasa es preferentemente termoestable de manera suficiente para ser activa durante el primer paso de un diagrama normal de fabricación de cerveza (típicamente varios minutos a 50°C y pH 5.6) . Las varias enzimas microbianas pueden satisfacer este requerimiento, por ejemplo, ß-glucanasa de Penicillium emersonii, Trichoderma, longibrachiatum, Bacillus amylolquefaciens . - Se pueden obtener resultados excelentes con ß-glucanasa a partir de Bacillus amyloliquefaciens comercialmente disponible de Gist-Brocades bajo la marca comercial Filtrasas L ( + ) , que tiene una actividad de 600 BGR/g. En forma preferente, se obtiene ß-glucanasa de una cepa recombinante de Bacillus amyloliquefaciens .

Usualmente se pueden usar también proteasas, tal como la Proteasa de cerveceros y similares. Las endo-xilanosas que se pueden usar se han descrito en la sección de los antecedentes. Las especificaciones de patentes mencionadas en la presente se incorporan en la presente por referencia.

La endo-ß-l-4-xilanasa (preferentemente la isoenzima endo-1 (R.A. FOURNIER Biotechnology y Bioeng (1985) XXVII, 539-546) y la a-L-arabino-furanosidasa (preferentemente la isoenzima A. (F.J.M. KORMELINK y colaboradores, Carbohydr. Res (1993) 24, 345-353)) se pueden obtener a partir de cepas tipo silvestre, mutadas o recombinantes de Aspergillus niger. En lo que respecta a las actividades de hibridación de a-L-arabinosa, se pueden contemplar varias enzimas. Se ha mostrado que AXH conduce a mayor capacidad de filtrado. Dos a-L-arabinosidasas a partir de Aspergillus niger parecen conducir a proporciones a velocidades de filtración significativamente superiores. En cuanto al modo de acción de AXH, la a-L-arabinosidasa A y B difieren por completo, se puede esperar, que una mezcla de tres actividades de liberación de arabinosa pueda producir velocidades de filtración aún mejores. " Usando el proceso de acuerdo con la invención, se pueden obtener velocidades de filtración sustancialmente mejoradas de la malta empastada, licuada y sacarificada. Esto conlleva ventajas en términos de procesos más rápidos, menores obturaciones de los filtros, y mayores volúmenes de mosto. También, el rendimiento mejorado conduce a un proceso de fabricación de cerveza más económico. El mosto de acuerdo con la invención se puede usar en la fabricación de cerveza, o en la elaboración de alcohol potable o biocombus tibie , o en un proceso para elaborar bebidas alcohólicas. La práctica de la invención y las ventajas asociadas se ilustran en mayor detalle en los siguientes ejemplos no limitativos.

Parte Experimental 1 /ß-glucanasa En los ejemplos, se usó ß-glucanasa a partir de Bacillus amyloliquefaciens comercialmente disponible de Gist-Brocades bajo el nombre comercial Fxltrase L (+), que tiene una actividad de 600 BGR/g. 2/Endo-ß-l, 4-xi lanasa Se obtuvo la endo-xilanasa a partir de un cultivo puro de Aspergillus niger en un tanque y medio estéril. El medio de cultivo contiene fuentes de carbono y nitrógeno apropiadas tal como sales y minerales. La fermentación se lleva a cabo a una temperatura constante entre 30-40°C y el pH se mantiene dentro 4del intervalo de 3-5. La actividad de la enzima se mide por la hidrólisis de xilano a partir de espeltas de avena dispersadas (35 g/1) en amortiguador de glicina 1 M, pH 2.75, la viscosidad de esta solución se determina al usar un viscosimetro capilar (tipo Ubbellhode) a 47°C. El tiempo dt necesario para que el menisco superior de liquido caiga por abajo entre los dos puntos de referencia se mide dentro del tiempo T. La inclinación del plano T contra 1/dt produce una constante cinética aparente. Una unidad Lyx es la cantidad de enzima necesaria para alcanzar un valor de 1 min-1 para esa contante cinética. 3 /a-L-arabino furanosidasa Isoenzima A ó isoenzima B (F.J.M. KORMELINK y colaboradores Carbohydr. Res. (1993) 24, 345-353) o Arabinoxilanhidrolasa (F.J.M. KORMELINK y colaboradores, Appl. Microbiol, Biotechnol. (1991) 35, 753-758) se ha obtenido a partir de un cultivo de cepas de Aspergillus niger o Aspergillus nidulans recombinantes. Las secuencias de aminoácidos, sus ADN de codificación, asi como la producción recombinante de arabinofuranosidasa A y B se describe en detalle en la Solicitud de Patente Europea 0 506 190 Al, publicada el 30 de Septiembre de 1992, particularmente en los ejemplos y figuras y el listado de secuencia, partes pertinentes que se incorporan en la presente por referencia. La actividad de las isoenzimas A y B se mide por la hidrólisis de p-nitro fenil-a-L-arabinofuranosido . Una unidad ARF es la unidad de enzima necesaria para generar uh µmol de p-nitrpfenol por minuto bajo las condiciones de la prueba descrita en (Z. GUNATA y ^colaboradores J. Agrie. Food Chem (1989) 38, 772) .

Ejemplo 1 Se preparó mosto a partir de malta molida de acuerdo con las especificaciones normales para la filtración de lauter tun. La malta se molió con el molino EBC MIAG de acuerdo con las especificaciones normales, es decir, produciendo una diferencia en el extracto fino (1 mm) a grueso (2.5 mm) en el intervalo de 1.5-2 %. Una parte de la malta se hidrata con 3 partes de agua o solución acuosa de la enzima a 50°C. la temperatura se mantiene durante 20 minutos; luego se aumenta hasta 63°C (l°C/min) se mantiene a su temperatura durante 30 minutos. El medio luego se calienta a 72°C (l°C/min) y se mantiene a esta temperatura durante 20 minutos. Finalmente se calienta a 76°C y se mantiene a esta temperatura durante 5 minutos. Se usa agua para compensar la evaporación de agua. La malta empastada se vierte en un embudo que contiene el papel filtro de , Schleicher y Schuell. El volumen del mosto filtrado se mide después de 15 minutos. Se determina el peso específico al .final de la filtración. Este valor permite calcular el extracto de rendimiento. Primera Serie (malta Británica) . Se han llevado a cabo 5 preparaciones de cerveza con diferentes enzimas como se muestra en la Tabla 1: Preparación de Unidades enzimáticas/ kg de malta Cerveza No . BGR LYX ARF-A AXH ARF-B 1 0 0 0 0 0 2 90 1200 0 0 0 3 90 1200 1500 0 0 4 90 1200 - 0 1500 5 90 1200 0 1500 0 En preparación de cerveza No. 3, ARF es de la isoenzima A a-L-arabinofuranosidasa En la preparación de cerveza No. 4, ARF es de la isoenzima B a-L-arabino furanosidasa En la preparación de cerveza No. 5, se usa la arabinoxilanhidrolasa AXH (F.J.M. KORMELINK y colaboradores Appl. Microbiol, Biotechnol (1991) 35, 7353-758) al usar las porciones de arabinosa de arabinoxilanos . La dosis fue de 0.15 mg de AXH pura por kg de malta (AXH no es activo en p-ni trofenil-a-L-arabinofuranosido , por lo tanto, la AXH no tiene actividad ARF) . Los resultados se muestran en la Tabla 2: Preparación de Volumen filtrado Rendimiento (%) Cerveza No . después de 15 minutos 1 62 3.04 2 3.69 3 102 3.64 4 106 3.24 5 100 3.44 Segunda serie (malta francesa) Las mismas preparaciones de cerveza como se describen en la primera serie se han producido a partir de una malta francesa. Los resultados se presentan en la Tabla 3: Preparación de Volumen filtrado Rendimiento (% Cerveza No . después de 15 minutos 1 54 82.35 2 82 82.50 3 88 83.71 4 91 82.60 5 88 82.50 A parir de estas 2 series, la combinación ß-glucanasa + endoxilanasa + a-L-arabinofuranosidasa-isoenzima B se desempeña mejor para mejorar la filtración del mosto, mientras que la misma combinación en la cual la isoenzima A de a-L-arabino furanosidasa reemplaza a la isoenzima B de ß-L-arabinofuranosidasa se desempeña mejor para mejorar el rendimiento, la filtración que se mejora altamente en comparación con el blanco (preparación de cerveza 1 ) .

Ej em lo 2 Se producen mostos de la misma manera como en el Ejemplo 1, siempre con el mismo lote de malta pero variando la composición de la mezcla de enzimas. Se llevan a cabo 12 preparaciones de cerveza de acuerdo con el diseño experimental a fin de mantener el papel de cada componente de la mezcla con respecto a la producción y mejoramiento de la filtración. En todos los ensayos, la a-L-arabinofuranosidasa fue la isoenzima A de la A. niger .

Todas las corridas se realizadas se presentan en la Tabla 4.

Preparación de Unidades enzimáticas/kg de malta cerve za No . BGR LYX ARF (isoenzima A) 1 30 300 300 2 90 300 300 3 30 1200 300 4 90 1200 300 5 30 300 1500 6 90 300 1500 7 30 1200 1500 90 1200 1500 9 60 750 900 10 60 750 900 11 60 750 900 12 0 0 0 Los resultados se muestran en la Tabla 5 Preparación de Volumen filtrado Rendimiento (%) Cerveza No . después de 15 minutos 1 115 80.16 2 100 80.21 3 116 80.01 4 110 80.81 5 116 80.11 6 128 80.26 7 122 80.01 142 80.56 9 116 80.06 10 120 80.11 11 117 80.11 12 89 80.01 A partir de las preparaciones de cerveza No. 9-10-11 se pueden determinar las -desviaciones estándar . 2.1 ml para volumen filtrado después de 15 minutos . 0.03 % para el rendimiento. A partir de las preparaciones de cerveza No. 1 a 8, el efecto de cada componente justo como aquellas de las interacciones entre los componentes se puede determinar: Causa Efecto en Filtrabilidad Rendimiento BGR + 2.75 + 0.39 LYX + 7.75 + 0.16 ARF + 16.75 + 0.06 BGT*LYX + 4.25 + 0.29 BGR*ARF + 13.25 + 0.04 LYX*ARF + 2.75 + 0.06 Se pueden considerar solo las figuras en negritas como significantes (> 95 %), la a-L-arabinofuranos idasa A y en combinación con la ß-glucanasa conlleva el efecto más fuerte en la mejora de filtración, mientras que la ß-glucanasa, endoxilasa sola y en combinaciones contribuyen significantemente para mejora del rendimiento.

Ej emplo 3 En esta serie, se usa la misma combinación de enzimas 60 BGR/kg de malta + 750 LYX/kg de malta + 900 ARF/kg de malta pero se preparó diferente malta con y sin esta combinación de enzimas. Se produce mosto de acuerdo con el mismo procedimiento como en el Ejemplo 1. Los resultados se presentan en la Tabla 5: Origen de la Volumen filtrado Rendimiento (%) malta después de 15 minutos Sin Con Sin Con enzima enzima enzima enzima EUA ( 1 ) 131 171 79.75 79.77 EUA (2) 114 164 83.74 83.97 RU 117 167 81.08 83.21 Canadá (1) 106 153 81.42 81.52 Canadá ( 2 ) 99 137 81.30 81.86 Francia 89 118 80.18 80.09 De esta manera, la mezcla de actividades de enzima es eficiente para la mejora de filtración, cualquiera que sea la malta mezclada. El rendimiento es bajo pero es principalmente debido a que las maltas usadas son ya de muy alta calidad.

Ejemplo 4 Se usó trigo como adjunto crudo en varias preparaciones de cerveza. Este cereal contiene una alta cantidad de pentosanos . Esto es una razón para probar la combinación de enzima mencionada anteriormente en una preparación de cerveza mezclada. Se produjeron mostos de acuerdo con el mismo procedimiento como en el Ejemplo 1, pero 20 % de una malta se reemplazó por 20 % del trigo. La Tabla 6 describe todas las corridas realizadas : Preparación de Unidades enzimáticas/kg de malta Cerveza No . BGR LYX ARF 1 0 0 0 2 90 0 0 3 0 120 0 4 0 120 300 5 0 120 1500 6 90 120 1500 Los resultados se dan en la Tabla 7 Preparación de Volumen filtrado Rendimiento ( Cerveza No . después de 15 minutos 1 66 1.01 2 89 1.52 3 62 0.81 4 69 ¡0.91 5 80 :0.91 6 99 ¡1.52 Estos resultados confirman el interés para la combinación descrita en la invención en el caso de preparaciones de cervezas que comprenden adjuntos de trigo .

Ejemplo 5 En este ejemplo, se preparó mosto a partir de granos de cebada crudos, variedad PLAISANT. Los granos de cebada se molieron con el molino EBC MIAG a fin de hacer una harina de cebada tipo filtro prensa. Se adicionaron 57 g de harina de cebada en 300 ml de agua o solución acuosa de enzimas a 50°C. Esta temperatura se mantiene durante 1 hora; luego se calienta a 63°C (l°C/min) se mantiene a su temperatura durante 30 minutos. El medio luego se calienta hasta 90°C (l°C/min) y se mantiene a su temperatura durante 20 minutos. El agua se adiciona para compensar la evaporación de agua. La malta empastada luego se vierte en un embudo que contiene papel filtro de Schleicher y Schuell. Se llevaron a cabo 6 preparaciones de cerveza con diferentes enzimas como se muestra en la Tabla 8 (ARF cuando se menciona es Ara A) . (*) de acuerdo con la invención (**) comercialmente disponible de Gis t-brocades bajo la marca comercial Filtrase11 NL (***) comercialmente disponible de Gist-brocades bajo la marca comercial Filtrase11 Br (****) comercialmente disponible de Gis t-brocades bajo la marca comercial NatugrainR Los resultados se presentan en la Tabla 9 Estos resultados muestran que la combinación descrita en la invención es al menos tan buena o aún mejor en el desempeño que las preparaciones existentes en el caso de nuevas preparaciones de cerveza que comprenden 100 % de cebada no malteada.

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la presente invención, es el que resulta claro a partir de la presente descripción de la invención.

Habiéndose descrito la invención como antecede se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes:

Claims (11)

REIVINDICACIONES

1. Un proceso para preparar mosto, caracterizado porque comprende los pasos de: (a) preparar malta empastada a partir de cereales malteados o no malteados, una mezcla de cereales malteados o no malteados, en la presencia de una mezcla de actividades de enzima, (b) filtrar la malta emplastada para obtener el mosto, en donde la mezcla de actividades de enzima se selecciona a partir de una mezcla que contiene al menos actividad de ß-glucanasa, y actividad de liberación de a-arabino furanosa una vez que comprende al menos actividad de ß-glucanasa, actividad de endo-xilanasa y actividad de liberación de a-arabinofuranosa .

2. Un proceso de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la actividad de liberación de arabinofuranosa se proporciona por una enzima seleccionada a partir de a-L-arabinofuranosidasa (EC 3.2.1.55) y (l->4)-ß-D-arabinoxilan-arabinofuranohidrolasa (AXH), o una mezcla de estas enzimas.

3. Un proceso de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la a-L-arabinofuranosidasa o la ( l->4 ) -ß-D-arabinoxilan-arabinofusanohidrolasa (AXH) se puede obtener a partir de una cepa de Aspergillus.

4. Un proceso de conformidad con la reivindicación 3, caracte izado porque la a-L-arabinofusanosidasa es una a-L-arabinofuranosidasa A a partir de Aspergillus niger.

5. Un proceso de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque la a-L-arabinofuranosidasa es a-L-arabinofuranosidasa B de Aspergillus niger.

6. Un proceso para elaborar cerveza y/o alcohol potable, en donde se fermenta un mosto obtenible de acuerdo con cualquiera de - las reivindicaciones de 1 a 5.

7. El uso de a-L-arabinofuranssidasa B a partir de Aspergillus niger en un proceso para mejorar la capacidad de filtrado del mosto.

8. El uso de a-L-arabinofuranosidasa A en un proceso para incrementar el rendimiento del mosto .

9. Una preparación de enzimas adecuada para el uso en un proceso para elaboración de mosto, la composición está caracterizada porque comprende una mezcla de actividad de enzima seleccionadas a partir de una mezcla que comprende al menos actividad de ß-glucanasa, y actividad de liberación de a-arabinofuranosa, o una mezcla que comprende al menos actividad de ß-glucanasa, actividad de endo-xilanasa y actividad de liberación de a-arabinofuranosa .

10. Una preparación de enzimas de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque la actividad de liberación de arabinofuranosilo se proporciona por una enzima seleccionada a partir de a-L-arabinofuranosidasa (EC 3.2.1.55) y ( 1 ->4 ) -ß-D-arabinoxi lanarabino furanohidrolasa (AXH) , o una mezcla de las mismas .

11. Una preparación de enzima de conformidad con la reivindicación 10, caracterizada porque la a-L-arabinofuranosidasa o la (l->4)-ß-D-arabinoxilan de arabino furanohidrolasa (AXH) se puede obtener a partir de una cepa de Aspergillus . *-, 36 RESUMEN DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona mostos con rendimiento incrementado y filtrabilidad 5 mejorada así como un proceso para preparar el mosto, que comprende los pasos de: (a) preparar mosto partir de cereales malteados o no malteados, o una mezcla de cereales malteados y no malteados, en la presencia de una 10 mezcla de actividades de enzima, (b) filtrar la malta empastada obtenida así para obtener el mosto, en donde la mezcla de actividades de enzima se selecciona a partir de una mezcla que comprende al menos actividad de ß- 15 glucanasa, y actividad de liberación de a-L- arabinofuranosa o una mezcla que comprende al menos actividad de ß-glucanasa, actividad de endoxilanasa, y actividad de liberación de a- arabino furanosa .