MXPA97009880A

MXPA97009880A - Composiciones reguladoras de apetito

Info

Publication number: MXPA97009880A
Application number: MXPA/A/1997/009880A
Authority: MX
Inventors: A Young Andrew; J Rink Timothy; R A Beeley Nigel; S Prickett Katheryn
Original assignee: Beeley Nigel Robert Arnold; Prickett Kathryn S; J Rink Timothy; A Young Andrew
Priority date: 1995-06-07
Filing date: 1997-12-08
Publication date: 1998-10-15

Abstract

Se proveen composiciones y métodos para reducir la digestión de alimento, suprimiendo el apetito y controlando el peso del cuerpo;estas composiciones pueden incluir un agonista de amilina y n agonista de CCK o un péptido híbrido.

Description

COMPOSICIONES REGULADORAS DE APETITO CAMPO DE LA INVENCIÓN El campo de la invención es Ja biología y , rnas particularmente, la biología del con-t rol de la ingesta de alimento, el apetito y la saciedad, y el control del peso del cuerpo. La invención se refiere a composiciones que comprenden un agonista de arn lma y un agonista de colecistoquinina ("CCK"), o diversas composiciones híbridas aquí descritas, y su uso en la supresión de la inges+a de alimento. La invención también se refiere a métodos para controlar la ngesta de alimento, el apetito y la saciedad, y a métodos para controlar el peso del cuerpo.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las publicaciones y otros materiales que incluyen paten+es y solicitudes de patente usados para aclarar la memoria descriptiva, quedan incorporados aquí en su totalidad, mediante referencia. La obesidad se esta volviendo cada vez rnas prevalente en las sociedades desarrolladas. Por1 ejemplo, se estimo que aproximadamente el 30% de los adultos en los Estados Unidos es-taba 20% por encima del peso del cuerpo deseable, una medida aceptada de la obesidad, suficiente para irnpactar un riesgo para la salud ("Harrison's Principies of Internal Medicine «lecirnasegunda edición", McGraw Hill, Inc. (1991), página 41L). En esos individuos, la obesidad puede ser un factor' contribuyente a la incidencia cada vez rnayor de las enfermedades cardiovasculares, la hipertensión, la hipercolesterolemi , Ja diabetes inelJitus del tipo II (también denominada corno diabetes rnellitus no dependiente de insulina), y ciertos cánceres. Kolata, Science 227:1019-1020 (1905). Por ejemplo, la hipertensión, la obesidad y la intolerancia a la glucosa ( tolerancia impedida a la glucosa y diabetes rnell tus del tipo II), es-an asociadas tanto en estudios clínicos co o en estudios epidemiológicos (Chiang y coautores C rcula-ion 39:403-421 (1960); Sirns, Hypertension 4 (Suplemento 3):43-49 (1982); Bray, D s. Mon. 26:1-85 (1979); lest, Epiderniology of Diabetes and As Vascular Lesions, Elsevier/North Holland, Nueva York, paginas 191-284, 351-389 (1978); Medalie y coautores flrch. Tnt. Med. 135:811-817 (1975); Zirnrnet, Diabetolo?ia 22:399-411 (1982); Barrett-Connor, flrn . 3. Epiderniol. 113:276-284 (1981); Darrett y coautores, Tnt. 3. Epide iol. 7:15-24 (1978); Butler y coautores, flrn . 3. Epidern ol. 16:971-980 (1982)) y pueden tener mecanismos patogénicos comunes (Modan y coautores, 3. Cl n. Invest. 75:809-817 (1985)). Frecuentemente se recomienda la reducción de peso corno el primer curso de acción para pacientes que sufren de diabetes rnellitus del tipo II, hiper+ensión, hipercolesterolernia, enfermedades cardiacas de la arteria coronaria, gota y osteoart mtis.

Sin embargo, hay relativamente pocas herramientas terapéuticas que puedan ser empleadas por un medico para obtener la perdida de peso de los pacientes. Los agentes farmacéuticos actualmente en uso son efectivos durante la terapia a corto plazo, pero pueden ser inaceptables para uso a largo plazo, debido al desarrollo posible de tolerancia y a los efectos colaterales posiblemente indeseables. Los agentes que, a dosis relativamente bajas, reducen la ingesta de alimento al reproducir Jas seríales de saciedad del propio cuerpo, serian de rnayor ventaja que los agentes de perdida de peso actualmente disponibles para uso en terapia crónica, que tienen un perfil de efectos colaterales rnas deseable que los actualmente disponibles.

CCK Se informo que se había identificado CCK en 1928, a partir de preparaciones de extractos intestinales, por su capacidad para estimular la contracción de la vesícula. Otras acciones biológicas de CCK habían sido informadas, incluyendo el es-tírnulo de la secreción pancreática, el vaciado gástrico retardado, el estimulo de la rnot lidad intestinal y el estímulo de la secreción de insulina. Véase Lieverse y coautores, flnn. N.Y. flcad. Sci. 713: 268-272 (1994). Las acciones de CCK también se informa que incluyen efectos sobre la función cardiovascular, la función respiratoria, la neurotoxicidad y los ataques, la proliferación de células cancerosas, la analgesia, el sueño, Jos comportamientos sexual y reproductor, la memoria, la ansiedad, y las conductas mediadas por doparnma. Crawley y Corwm, Pept i es 15:731-755 (1994). Otros efectos informados de CCK incluyen el estimulo del desarrollo pancreático, el estimulo de la contracción de la vesícula, la inhibición de la secreción de ácido gástrico, la liberación de polípeptidos pancreáticos y un componente contráctil de la pepstalsia. Ot IOS efectos informados de CCK incluyen la vasodilatación. Ualsh, "Gas ointestinal Hormones" en Physiology of the Gastrointestinal Tract -tercera edición, 1994, Raven Press, Nueva York). Se ha informado que las inyecciones de combinaciones de glucagon, CCK y bo besin potenciaban la inhibición de ingesta de alimentos de prueba de leche condensada en ratas no privadas de alimento, con respecto a las inhibiciones observadas con los compuestos individuales. Hinton y coautores, Bram Res. Bull. 17:615-619 (1986). También se ha informado q?e el glucagon y CCK inhiben smergísti camente la alimentación simulada en ratas. LeSauter y Geary, flm. 3. Phyßiol. 253:R217-225 (1987); Srnith y Gibbs, flnnals N.Y. flcad. Sci. 713:236-241 (1994). También se ha sugerido que el estradiol y CCK tienen un efecto sinergístico sobre la saciedad. Dulawa y coautores, Peptides 15:913-918 (1994); Smith y Gibbs, supra. También se ha propuesto que las señales que surgen del intestino delgado en respuesta a los nutrientes presentes en el, pueden mteractuar sinergisticamente con CCK para reducir la ingesta de alimento. Cox, Behav. Bram Res. 38:35-44 (1990). fldicionalrnente, se ha informado que CCK induce la saciedad en varias especies. Por ejemplo, se ha informado que la depresión de alimentación era provocada por CCK inyectado íntraperitonealrnente en ratas, íntra-artepalmente en cerdos, intravenosamente en gatos y cerdos, en los ventrículos cerebrales en monos, ratas, perroe o ovejas e intravenosamente en humanos obesos y no obesos. Véase Lieverse y coautores, supra. Los estudios de diversos laboratorios han confirmado, según se informa, la especificidad de conducta de las dosis bajas de CCK sobre la inhibición de la alimentación, en comparación con la respuesta para los alimentos, que son los responsables de reforzadores no alimentarios tanto en monos corno en ratas, y al mostrar que CCK desata Ja secuencia de conductas normalmente observadas después de la ingesta de alimento (es decir, la secuencia de saciedad después de córner), fldicionalmente, la comparación del comportamiento o conducta después de CCK con el comportamiento o conducta después de la ingesta de alimento, solo o en combinación con CCK, reveló según se informa similitudes de conducta entre CCK y la ingesta de alimento. Crawley y Corwm, supra. También se informo que CCK en concentraciones en el plasma fisiológico inhibe la ingesta de alimento y aumenta la saciedad tanto en humanos magros como en humanos obesos. Véase Lieverse y coautores, supra.

CCK fue caracterizado en 1966 corno un peptido de 33 aminoácidos. Crawl ey y Corwm, supra. CCK-33 humano tiene la siguiente secuencia de aminoácidos: Lys~flla-Pro-Ser~Gly-flrg--Met-Ser-Tle-Val-Lys-flsn-Leu-Gln~flsn-Leu~flsp-Pro-Ser-H? s-flrg-IJe-Ser~fls?-flrg-fls?-Tyr(S03H)-Met-Gly-Trp-Met~flsp-Phe-NH2 TSEQ.TD N0:1] Se ha identificado variantes moleculares especificas para las especies, de la secuencia de amino cidos de CCK. La secuencia de 33 aminoácidos y un pep ido truncado, su secuencia C-terrninal de 8 aminoácidos (CCK-8) se ha informado que han sido i enti icados en cerdos, ratas, pollos, chinchillas, perros y humanos. Se informó que se encontró una secuencia de 39 aminoácidos en cerdos, perros y conejillos de indias. Se informó que se había encontrado una secuencia de 58 aminoácidos en gatos, perros y humanos. Se informo que las ranas y las tortugas mostraban secuencias de 47 ami oácidos, homologas con CCK y con gastrina. Se ha informado que el intestino humano muy fresco contiene cantidades pequeñas de una molécula todavía mayor, denominada CCK-83. En ratas, se ha informado que se identificó ?n intermediario principal, y se le denom no CCK-22. Walsh. "Gastrointestinal Hormones" en Physiology of the Gastrointestinal Tract (tercera edición, 1994, Raven Press, Nueva York). Se ha informado de un CCK-8 no sulfatado y ?n tetrapeptido (denominado CCK-4 (CCK30-33)) en el cerebro de las ratas. El pentapeptido C-terrninal (denominado CC-4 (CCK 29-33)) conserva la homología estructural de CCK y también la homología con el neuropeptido gastrina. La secuencia octapeptida sulfatada C -terminal, CCK-8, Asp-Tyr(S?3H) -Met-Gly-Tr?-Met-ftsp-Phe-NH2 TSEO ID N0:2], se informa q?e se conserva relativamente a través de las especies. La clonación y el análisis de secuencia de un cflDN que codifica preprocolecistoquimna a partir del carcinoma de la tiroides de las ratas, el cerebro porcino y el intestino porcino, revelaba 345 nucleotidos que codifican un precursor de CCK, que tiene 115 aminoácidos y que contiene todas las secuencias de CCK que previamente se había informado que habían sido aisladas. Crawley y Corwin, s?pra. Se dice que CCK esta distribuida en todo el sistema nervioso central y sus células endocrinas y en los nervios entéricos del intestino delgado superior. Los agonistas de CCK incluyen el propio CCK (denominado también CCK-33), CCK-8 (CCK 26-33), CCK-8 no sulfatado, pentagastpna (CCK-5 o CCK (29-33)) y el tetrapéptido CCK-4 (CCK30-33). En el receptor de CCK pancreático, se informa que CCK-8 desplazaba la uni n con una potencia rnayor de 1000-5000, en comparación con CCK-8 no sulfatada o CCK-4, y se informó que CCK-8 era aproximadamente 1000 veces mas potente que CCK-8 no sulfatada o CCK-4 para estimular la secreción de arnilasa pancreática. Crawley y Corwm, s?pra. En los homogeneizados de corteza cerebral, se dijo que la unión de receptor de CCK era desplazada por CCK-8 no sulfatado y por CCK-4, a concentraciones que eran eq?i olares, de diez veces mayores o de c en veces mayores que CCK-8 sulfatado. Tdern. Se ha informado que los receptores para CCK han sido identificados en una variedad de tejidos, y se ha descrito primariamente dos subtipos: los receptores de tipo Pl y los receptores de tipo B. Los receptores de tipo fl se ha informado que están presentes en tejidos periféricos incluyendo páncreas, vesícula, esfínter pilorico y fibras vagas aferentes, y en áreas discretas del cerebro. El subtipo del receptor del tipo fl (CCKA) se ha informado que es selectivo para el octapeptido sulfatado. El receptor del t po B, del subtipo (CCKB), ha sido identificado en todo el cerebro y el estomago y se informa que no requiere de sulfatación en los 8 aminoácidos. Véase Reidelberger, 3. Nutr. 124 -suplemento 8) J327S-J333S (1994); Crawley y Corwm, su ra. Los agonistas CCKA también incluyen fl-71623 y fl-708874, que fueron desarrollados con base en la estructura de CCKA. Los miembros de otra serie de agonistas de CCKA , que incluyen DMV-180, se informa q?e son activos para estimular la liberación de la arnilasa pancreática e inhibir la alimentación. Crawley y Corwin, supra. Los ejemplos de agonistas CCKA no peptídicos con L-36718 y FPL 15849KF. Crawley y Corwin, supra Morley y coautores, flm. 3. Physiol. 267:R178~R184 (1994). Los agonistas CCKB incluyen CCK-8, CCK-8 no sulfatado, CCK-4 y BC 264 (que es un derivado de CCK resistente a la peptidasa). Crawley y Corwm, supra.

AMILINA La arnilina es una hormona protemasa, de 37 aminoácidos. La estructura de la arnilina humana es corno sigue: Lys-Cys-flsn-Thr-fll -Thr-Cys-flla-Thr-Gln- Arg~Leu-Ala-Asn-Phe~Leu-Val-H?s~Ser~Ser-flsn-flsn- Phe-Gly- Ala -lie-Leu- Ser- Se r-Thr-flsn~Val-Gly-Ser-flsn-Thr-Tyr-NH2 CSEQ. ID No. 33 Se aislo, purifico y caracterizo químicamente como el componente principal de los depósitos rniloides en las ísletas del páncreas de diabéticos humanos del tipo II (Cooper y coautores, Proc. Nat . flcad. Sci. USA 84:8628-8632 (1987)). La molécula de arnilina tiene dos modificaciones post-translacionales importantes: el extremo C esta anidado y las cisteínas en Las posiciones 2 y 7 están entrelazadas para formar un bucle N- erminal. La secuencia del marco de lectura abierto del gene de arnilma humana muestra la presencia de la señal de división proteolítica del aminoácido dibásico Lys-flrg, antes del codon N-terminal para Lys, y la Gly antes de la señal proteolítica Lys-flrg en la posición CLAIMS-terrninal, una secuencia típica para la arnidación mediante la enzima anudante de proteina PAM (Cooper y coautores, Biochem. Biophys. Acta 1014:247-258 (1989)). La a ilina es el objeto de la solicitud de patente del Remo Unido numero de serie 8709871, presentada el 27 de abril de 1987, y de la correspondiente patente estadounidense No. 5,367,052, expedida el 22 de noviembre de 1994. Un resumen de la estructura de la anuli a, la síntesis, la secreción y la fisiología molecular de la misma, se encuentra en Pittner y coautores, 3. Cell. Biochern. 55S: 19-28 (1994). Tanto la estructura química como la secuencia de genes de arnilma se dice que apoyan la determinaci n de que es una molécula biol gicamente activa o "mensajera". La estructura química es casi 50% idéntica a los peptidos relacionados con el gene calcitomna (CGRP), también proteínas de 37 aminoácidos, q?e son los neurotransrnisores difundidos por muchas acciones biológicas potentes, incluyendo la vasodilatación. La arnilma y los CGRP comparten el puente disulfuro 2cy -7Cys y la amida C-terrninal, ambos elementos esenciales para la plena actividad biológica (Cooper y coautores, Proc. Nati. Acad. Sc . 85:7763-7766 (1988)). La amiJina se sintetiza primariamente en Jas células beta pancreáticas y es secretada en respuesta a estímulos nutrientes, tales corno glucosa y arginina. Los estudios con líneas de tumores en células beta clonadas (Moore y coautores, Biochem. Biophys. Res. Corninun, 179:1-9 (1991)), isletas aisladas (Kanatsuka y coautores, FEBS Lotts. 259:199-201 (1989)) y en páncreas de ratas perfundidos (Ogawa y coautores, 3. Clin. Invest. 85:973-976 (1990)), han demostrado que los impulsos breves, de 10 a 20 minutos, de secretogogos nutrientes, tales corno glucosa y arginina, estimulan la liberación de amilina asi corno de insulina. La proporción molar de arnilina: insulina de Jas proteínas secretadas varia entre las preparaciones desde alrededor de 0.01 a 0.4, pero parece q?e no varia mucho con diferentes estímulos en ninguna preparación. Sin embargo, durante el estímulo prolongado por elevado contenido de glucosa, la proporción de arnilina: insulina puede aumentar progresivamente (Gedulm y coautores, Biochem.

Biophys. Res. Comm?n. 180:782-798 (1991)). Así pues, debido a la expresión genética y a la velocidad de translación son controladas independientemente, no siempre se secreta amilma e insulina en ?na proporci n constante. La inmuno-reactividad parecida a arnil a ha sido medida en la sangre circulante en roedores y humanos, mediante una variedad de radioinrn?noanal sis, todos Jos cuales usan anti suero-antiamil a de conejo y la mayoría de ellos utilizan un procedimiento de extracci n y de concentración para incrementar la sensibilidad al análisis. En Los humanos normales, se ha informado niveles de arnilina en ayunas de L a 10 picornoles y después de ingerir alimento o después de glucosa se ha informado de niveles de 5 a 20 picomoles (por ejemplo, Hartter y coautores, DiabetoJogia 34:52-54 (1991); Sanke y coautores Diabetologia 34:129-132 (1991); Koda y coautores, The Lancet 339:1179-1180 (1992)). En individuos obesos, resistentes a la insulina, los niveles de arnil a después del alimento pueden ser más altos, llegando inclusive hasta alrededor de 50 picornoles. Para comparación, los valores de insulina en ayunas y después de ingerir alimento son de 20 hasta 50 picornoles y de 100 a 300 picornolee, respectivamente, en la gente sana, con niveles quizas tres a cua ro veces mas altos en la gente resistente a la insulina. En la diabetes del tipo I, en donde están destruidas las células beta, Jos niveles de amilina se encuentran a o por debajo del nivel de detección y no se elevan en respuesta a la glucosa (Koda y coautores, supra) En ratones y ratas normales, los niveles de armlina básales han sido informados a 30-100 picomoles, mientras que se ha medido valores hasta de 600 picornoles en algunas cepas de roedores diabéticos, resistentes a la insulina (por ejemplo, Huang y coautores, Hypertension 19:1101-1109 (1991)); Gilí y coautores, Life Sciences 48:703-710 (1991). Se ha descubierto que determinadas acciones de la amilina son similares a las acciones no metabólicas conocidas de CGRP y calcitomna; sin embargo, las acciones rnetabólicas de arnil a descubiertas durante las investigaciones de esta proteina recién identificada, parecen reflejar su papel biológico primario. Por lo menos algunas de estas acciones metabólicas son reproducidas por CGRP, si bien a dosis que son notoriamente vasodilatadoras (véase, por ejemplo, Leighton y coautores, N ture 335:632-635 (1988); Molina y coautores, Diabetes 39:260-265 (1990)). La primera acción descubierta de la amilina fue la reducción de la incorporación de glucosa, estimulada por insulina, en el glicógeno en el músculo esqueletal de ratas (Leughton y coautores, Nature 335:632-635 (1988)); se denominó el músculo "resistente a la insulina". El trabajo subsecuente con el músculo soleus de rata ha indicado que la arnilina reduce la actividad de glicógeno-sintasa, promueve la conversión de glicógeno- fosforilasa desde la forrna inactiva b a la forma activa a, promueve la pérdida neta de glicógeno (en presencia o ausencia de insulina), aumenta los niveles de fosfato de glucosa~6 y aumenta la producción de lactato (véase, por ejemplo, Deerns y coautores Biochem. Biophys. Res. Cornrnun. 181:116-120 (1991); Young y coautores, FEBS Letts. 281:149-152 (1991)). El que la a ilina interfiera con el transporte de glucosa per se es incierto (véase, por ejemplo, Young y coautores, Arn. 3. Physiol . 259:E457-E461 (1990); Zierath y coautores Diabetologia 35:26-31 (1992)). Los estudios de las relaciones de dosis-respuesta de arnilina e insulina muestran que la amilina actúa como un antagonista no competidor o funcional de la insulina en el músculo esqueletal. (Yo?ng y coautores, Am. 3. Physiol. 263 :E274-E281 (1992)). De tal manera, a una concentración efectiva de arnilina ninguna concentración de insulina puede sobreponerse a la acción de la amilina. No hay evidencia de que la amilina interfiera con la unión de insulina a sus receptores, ni la activación subsecuente de la tiroxina-quinasa receptora de insulina (Follett y coautores, Clinical Research 39:39A (1991); Kooprnans y coautores, Diabetoloqia 34:218-224 (1991)). Se cree que la arnilina actúa por medio de receptores presentes en las membranas del plasma. Beaurnortt y coautores, Mol. Phannacol. 44:493-497 (1993). Se ha informado que la amilina funciona en eJ rnuscuJo esqueletal a través de un mecanismo mediado por receptor que promueve la gli cogenólisis, activando la enzima limitadora de velocidad para la descomposición del glic feno, la fosforílasa a (Young y coautores, FEBS Letts. 28J:J49~L51 (1991)), los estudios de amilina y CGRP y el efecto del antagonista 8_37CGRP, sugieren que la arnilma actúa por medio de su propio receptor (Uang y coautores, FEBS Letts. 219:195-198 (1991)), contra la conclusión de otros investigadores de que la arnilina actúa primariamente en los receptores de CGRP (por ejemplo, Chantry y coautores, Biochern. 3. 277:139-143 (1991); Galeazza y coautores, Pept ides 12:585-591 (1991); Zhu y coautores, Biochem. Biophys. Res,. Commun. 177:771-776 (1991)). Los receptores de a ilina y su uso en diversos étodos para discriminar y analizar los compuestos agonistas y antagonistas de amilma, están descritos en la patente estadouni ense No. 5,264,372, expedida el 23 de noviembre de 1993. Las acciones biol gicas de la amilma que se refieren al metabolismo de combustible son discutidas en Young y coautores, 3. Cell. Biochern. 555:12-18 (1994). Aunque la amilina tiene efectos notables sobre el metabolismo combustible hepático m vivo, no hay un consenso general acerca de las acciones de arnil na q?e se ven en los hepatoc os aislados ni en el hígado perfundido. Los datos disponibles no apoyan la dea de (jue la amilana promueva una gl icogenolisa s hepática, es decir, que no actúa como el glucagón (por ejemplo, Stephens y coautores, Diabetes 40:395-400 (1991); Gornez-Foix y coautores, Biochern. 3. 276-607-610 (J991)). Se ha sugendo que La arnilina puede actuar sobre el hígado para promover- la conversión de lactato a glicógeno y para incrementar la cantidad de glucosa capaz de ser liberada por el glucagon (véase Roden y coautores, Diabetologia 35:116-120 (1992)). Asi pues, la amilana podría actuar corno un copartícipe anabólico par'a La insulina en el hígado, en contraste con su acción catabolica en el músculo. El efecto de la amil a sobre las acciones herno inámicas regionales, incluyendo el flujo sanguíneo renal, en ratas conscientes, fue informado recientemente (Gardmer y coautores Diabetes 40:948-951 (1991)). Los autores anotan que la infusión de arnil a en ratas estaba asociada con la vasodilatacion renal rnayor y menor vasoconstricción rnesentépca que la observada con la infusión de a-CGRP humano. Concluyeron que, al promover la hiperemia renal en rnayor grado que a-CGRP, la arnilina de rata podría provocar un estímulo menos notable del sistema reniangiotensor y, de tal manera, menos vasoconstricción mediada por angiotensma II secundaria. Sin embargo, también se noto q?e durante la coinfusión de a-8-3?CGRP humana y arnilma de rata, no se enmascaraba Jas vasoconstricciones renal y rnesentépcas, presumiblemente debido a efectos vasoconstrictores no opuestos de la angiotens a II y que este hallazgo es similar al que se observo durante la coinfusión de a-CGRP humana y of-8_37CGRP humana (idern). Un efecto chocante de la arnilma tn vivo en roedores es el estímulo a una elevación fuerte del lactato en el plasma, seguida por una elevación de la glucosa en el plasma (Young y coautores, FEBS Letts. 281:149-151 (1991)). La evidencia indica que el lactato incrementado provee un substrato para la producción de glucosa y q?e las acciones de amil a pueden ocurrir independientemente de los cambios en la insulina o el glucagon. En los experimentos en "pinzas de glucosa" las infusiones de amilma provocan "resistencia a la insulina", tanto al reducir la disposición de glucosa periférica corno al imitar la supresión limitada por insulina de la producción de glucosa hepática (por ejemplo, Frontom y coautores, Diabetes 40:568-573 (1991); Kooprnans y coautores, Diabetologia 34:218-224 (1991)). En las células grasas, contrariamente a su acción parecida a adrenalina en el músculo, la arnilina no tiene acciones detectables sobre la ingesta de glucosa estimulada por insulina, la incorporación de glucosa en los triglicéridos, la producción de C02 (Cooper y coautores, Proc. Nati. Acad. Sci. 85:7763-7766 (1988)), la lipolisis estimulada por ep efrina ni la inhibición de insulina de la lipólisis (Lupien y Young, Diabetes Nutrition and Metabolisrn - Clinical and Experimental 6:13-18 (1993)). Así pues, la arnilina ejerce efectos específicos hacia el tejido con acción directa sobre el músculo esqueletal, ind recto notado (por medio del suministro de substrato) y quizas efectos directos sobre el hígado, mientras que los adipocitos parecen "ciegos" a la presencia o ausencia de la arnilina. Si se torna en consideración los efectos de la amilina sobre el músculo, el hígado y el tejido adiposo, se había propuesto q?e la arnil a en exceso estaba asociada con la obesidad y q?e se podría tratar la obesidad con agonistas de arnilina. La patente estadounidense No. 5,280,014, expedida el 18 de enero de 1994. Las acciones no rnetabolicas de la amilina incluyen efectos vasodilatadores que pueden ser mediados por interacción con receptores vasculares de CGRP. Bram y coautores, Eur. 3. Pharrnacol. 183:2221 (1990)). También se ha descubierto que la amilma aumenta notablemente la actividad de reniña en el plasma en ratas intactas, cuando se administra subcutáneamente de una manera que evite cualquier alteración en la presión sanguínea. Los métodos para tratar las alteraciones con reniña, con antagonistas de anilma, están descritas en la patente estadounidense No. 5,376,638, expedida el 27 de diciembre de 1994. Se ha demostrado que los agonistas de arnilina pueden reducir el vaciado gástrico (Young y coautores Diabetologia (julio de 1995) en prensa)), acción que se cree contribuye a su capacidad para reducir los niveles de glucosa en el plasma después de los alimentos (Moyses y Kolterrnan, Drugs of the Fut?re (Mayo de 1995)). Los métodos para reducir la rnotiiidad gástraca y hacer rnas lento el vaciado gástrico, q?e comprenden la administraci n de un agonista de amilana (incluyendo la arnilina) son el objeto de la solicitud de patente estadounidense No. de serie 08/118,381, presentada el 7 de septiembre de 1993 y de la solicitud de patente estadounidense No. de serie 08/302,069, presentada el 7 de septiembre de 1994. Se ha Lnformado que l a amilina reduce la ingesta de alimento en ratas y ratones cuando se administra al cerebro. Balasubrarnamarn y coautores Peptides 12:919-924 (1991); Chance y coautores, Braan Res. 539:352-354 (1991)). Un efecto anorétaco de la amilana se ha observado, según se informa, después de inyecci n intraperitoneal (IP) en ratones y ratas. Morley y Flood, Pepti des 12:865-869 (1991); Morley y coautores, Pharmacol. Biochern. Behav. 44:577-580 (1993). También se ha informado que cuando se administra arnalina vía IP en ratas a una dosis de 0.5 ug/ g, disminuye notablemente la ingesta de alimento. Lutz y coautores, Physiology and Behavi or 55:891-895 (1994). Los efectos colaterales dependientes de la dosis, informados, de los agonistas de arn lma inyectados en humanos, incluyen náuseas, vomito, diarrea, catarro e hipotensión postural. Véase, por ejemplo, Moyses y Kolterrnan, su ra.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Los solicitantes han descubierto q?e los agonistas de a il a y los agonistas de CCK, cuando son administrados juntos, tienen un efecto smergístaco sobre la reduccaon de la ingesta de alimento. La presente solicitud describe el uso de un agonista de arnilma conjuntamente con un agonista de CCK para controlar la ingesta de alimento. Por ejemplo, una inyección IP de 1.0 µg/kg de CCK-8 o de 1.0 µg/kg de amilina de rata, no tiene efecto mensurable sobr-e la ingesta de alimento. Pero la administraci n de 0.1 µg/kg de cada peptido provoca una reducción sustancial en La ingesta de alimento, aproximadamente equivalente a la que se observa con 100 µg/kg de cualquiera de loe pept idos solo. En un aspecto, la presente invención está dirigida a métodos y composiciones para reducir la ingesta de alimento, controlar el apetito y controlar el peso del cuerpo en los mamíferos, incluyendo los humanos. El control del peso del cuerpo, que resulta del apetito controlado, puede ocurrir- corno resultado, por ejemplo, de que se esté ingiriendo menos alimento por cada material alimenticio o corno resultado de un tiempo rnas largo que transcurre entre los alimentos. Dichos métodos comprenden la administración de una composición preferida para suprimir la ingesta de alimento. Las composiciones preferidas incluyen una combinación de un agonista de arnilma y un agonista de CCK. Las composiciones preferidas incluyen también una arnilma y un agonista de CCK, que se coadrninistran. En otro aspecto, la presente invención está dirigida a composiciones que comprenden un agonista de amilina y un agonista de CCK, mezclados en una forrna adecuada para administración terapéutica; composiciones q?e con uta les, por ejemplo, en los métodos reivindicados para reducir la ingesta de alimento, controlar el apetito y/o controlar el peso del cuerpo. Mediante agonista de amilana se quiere decir un compuesto que tiene ?na o más de las actividades biológicas conocidas de la amilina, en particular la capacidad para reducá r La ingesta de alimento en un mamífero, y que mcl?ye ?n péptido o su equivalente, q?e tiene ?na secuencia de aminoácidos similar a la de una amilina conocida (tal corno arnil a humana, amilina de rata y amil a de perro) o un agonista de amil na (tal corno calcitomna de salmón o CGRP). El término agonasta de arnilina incluye amilinas tales corno la arnilina humana (h-arnilina) . En general, los agonistas de amilina útiles exhiben una CE50 de < 500 nanornoles/litro en el análisis del músculo soleus. Los agonistas de amilina buenos tienen una CE50 de < 250 nanornoles/litro. Los agonistas de arnilina preferidos tienen una CE50 de < 100 nanornoles/litro, pero mejor aun, menos de alrededor de 1 a 5 nanornoles, menos de una nanornol o menos de 50 picornoles. Los agonistas de arnilina preferidos están descritos aquí y en la solicitud de patente estadounidense de la misma causahabiente que la presente, titulada "Novel Amylm Agonist Peptides and Uses Therefor", presentada el 30 de mayo de 1995 (caso del apoderado No. 213/080) y en la publicación de la solicitud del TCP correspondiente No. WO 93/10146, publicada el 27 de mayo de 1993. Los agonistas de arnilma particularmente preferidos para ser usados en Jos métodos y composiciones reivindicados en la presente incluyen 25 ,28 , 29pro-h-arn?l?na, s-calcitomna y h-amalina. Otros agonistas de arnilma incluyen compuestos que tienen aminoácidos adicionales en el extremo N-terminal que incluyen CPro-NH] arnilina y [Pro, Arg-NH-] arnilina. Por agonista de CCK se quiere decir un compuesto que tiene ?na o mas de las actividades biológicas conocidas de CCK, pero por lo menos Ja capacidad para reducir Ja ingesta de alimento en un mamífero, que incluye un péptido o su equivalente que tiene una secuencia de aminoácidos similar a la de una CCK conocida o una porción de la misma. El término agonista de CCK incluye Jas CCK (tales corno CCK humana). Los agonistas de CCK incluyen aquellos que actúan en los receptores del subtipo A de CCK. Un agonista preferido de CCKA es CCK-8. Por reducir- la ingesta de alimento se quiere decir reducir- la ingesta de alimento comparada con la ingesta de alimento q?e se efectuaría en la ausencia de cualquier tratamiento o tratamiento con placebo. En dichas composiciones, las dosis de cada uno de los agonistas de amilina y agonistas de CCK preferiblemente está en cantidades de entre alrededor de 0.1 µg/kg/dia y alrededor de 10 µg/kg/dia y, rnejor aún, entre 0.1 µg/kg/día y 1 µg/kg/día, en donde dichos agonistas son sustancial o totalmente estructuras de peptidos relacionadas, respectivamente, con amilina, 25,28,29pro-h-am?l?na y calcitonina de salmón; o CCK y CCK-8. En eJ caso del uso de agonistas no peptidicos en dichos métodos, Jas dosis de agonistas no peptídicos son incremen das preferiblemente (o disminui as) por Ja proporción de potencia de 25 ,28,29 Pro~h~arn?l?na (en el caso de los agonistas de amil a) o CCK (en el caso de ios agonistas de CCK) a la potencia de dichos agonistas no peptidicos. En otro aspecto, la presente invenc Lon esta dirigida a métodos para reducir la ingesta de alimento en un mamífero, que comprende administrar al mam Lfero una combinaci n efectiva reductora de la ingesta de alimento de un agonista de arnilma y un agonista de CCK. En otro aspecto, la pr-esente invención está dirigida a métodos para controlar el apetito en un mamífero que comprenden coadininistrar al mamífero cantidades terapéuticamente efectivas de un agonista de arnilma y un agonista de CCK. En otro aspecto, Ja presente invención esta dirigida a métodos para controlar el peso del cuerpo de un sujeto, que comprende administ ar- al sujeto una cantidad efectiva, reductora de la ingesta de alimento, de un agonista de amilina y un agonista de CCK. En las modalidades preferidas de estos métodos, el agonista de arnilina es 5 , 28 ,29pr-o-h-arn?l?na, s-cal citomna o h-arnilma. En otras modalidades preferidas de estos métodos, el agonista de CCK es un agonista de CCKA , de preferencia CCK-8.

En otras modalidades preferidas de estos métodos, la cantidad de cada uno del agonista de aril na y el agonista de CCK administrada, esta entre 0.1 µg/kg/día y alrededor de 10 µg/kg/día, y de preferencia entre alrededor de 0.1 µg/kg/dia y alrededor- de 1 µg/kg/dia. En otro aspecto, la presente invención está dirigida a péptLdos híbridos que incorporan aspectos de los péptidos agonistas de amilma y los pept idos agonistas de CCK, en donde dichos péptidos híbridos incorporan un peptido agonista de amilina, enlazado covalenternente con un peptido agonista de CCK. Otros compuestos peptidos híbridos, algunos de los cuales emplean enlazadores, y que incorporan diversos aspectos de agonistas de amil na y agonistas de CCK, también están provistos. En una modalidad, los péptidos híbridos se dividen vivo para permitir que cada componente actúe a ndependienternente. En dicho caso, a fin de que los peptLdos híbridos sean dividibles m vivo, por lo menos uno de los heteroatoinos a lo largo de la estructura fundamental del enlazador es oxigeno, lo que provee un enlace éster. En otra modalidad, el híbrido no se divide ín vivo, sino que permanece intacto. Dichos péptidos híbridos poseen actividades biológicas tanto de agonistas de amilina corno de agonista de CCK, en una sola molécula. En dicho caso, se ha descubierto que se desea estabilidad apreciable vivo y, a fin de que los péptidos híbridos no sean dividibles ín vivo, todos los heteroatornos a lo largo de la estructura del enlazador provisto son nitrógeno, lo q?e da lugar a los enlaces amida o urea. En otro aspecto mas, la presente invención esta dirigida a una composición de peptido híbrido que comprende un péptado agonista de arnilina y un péptido agonista de CCK, enlazados covalentemente mediante la siguiente estructura: -R?-R2-R3~R«-Rs-en donde dicho péptido agonista de anilma y el pept ido agonista de CCK están enlazados por intermedio del NH2 del extremo N de cualquiera de los péptidos y/o por medio de una cadena lateral NH2 de cualquiera de los péptidos (a condición de que dicha cadena lateral que contiene ?n NH2 esté presente en dicho péptido); y (a) Ri es C0NH(CH2 )N, C00(CH2)n, o C0(CH2)n, en donde n = 1 a 6: (b) R2 es 0C0(CH2)n (en donde n = 1 a 6), NHC0(CH2)n (en donde n = 1 a 6), OCOCßH. (enlazado en otro, meta o para), C00CßH« (enlazado en orto, meta o para), (sustituido en otro, meta o para), NHCOC6H4 (enlazado en orto, meta o para), NHCOCßH O (sustituido en otro, meta o para), CONHC6H4NH (sustituido en otro, meta o para), O-X (en donde X es cualquier aminoácido enlazado a través de su grupo carboxilo) y NH-X (en donde X es cualquier aminoácido enlazado a través de su grupo carbox1I0) ; (c) R3 es CH2 , CF2 , CO, CS o CNH; (d) R« es O o NH; y (e) Rs es (CH2)nNHC0, (CH2)n0C0, (CH2)nC0, en donde n = 1 a 6. En otro aspecto, la presente invención está dirigida a una composición de péptido híbrido que comprende un péptido agonista de amilina y un péptido agonista de CCK, enlazados covalentemente por medio de la estructura siguiente: -R1-R2-en donde dicho péptido agonista de amilina y el péptido agonista de CCK están enlazados por medio del NH2 del extremo N de cualquier péptido y una cadena lateral NH2 de cualquier péptido (a condición de que dicha cadena que contiene un NH2 esté presente en dicho pépti o) ; y (a) Ri es C0NH(CH2)n, C00(CH2)N O C0(CH2)N; y ib) R2 es (CH2)nNHC0, (CH2)n0C0, (CH2)nC0, en donde n = 1 a 6. Los péptidos híbridos preferidos de esta clase incluyen los péptidos híbridos que incorporan corno péptido agonista de amilina: KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY-NH2 , en donde los residuos de cisteína en las posiciones 2 y 7 están enlazados mediante una ligadura disulfuro; el péptido agonista de amilina: KCNTATCATOKLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY-NH2 , en donde los residuos de cisteína en las posiciones 2 y 7 están enlazados por medio de una ligadura disulfuro; o el péptido agonista de arnilina: CSNLSTCVLGKLSQELHKL0TYPRTNTGSGTP-NH2 en donde los residuos de cisterna en Las posa clones 1 y 7 están enlazados mediante una ligadura disulfuro. Los peptidos híbridos preferidos de esta clase también incluyen los pept idos híbridos que incorporan, corno peptido agonista de CCK: DY(0S03H)MGWMDF-NH2 , DYMGWMDF-NH , MGWMDF-NH2 , GWMDF-NH2 , WMDF-NH2 , KDY( OSO3 H)MGWMDF-NH2 , KDYMGWMDF-NH2 , KMGWMDF-NH2 , KGWMDF-NH2 o KWMDF-NH2. En otro aspecto, La presente invención está dirigida a una composición de péptido híbrido que comprende un péptido agonista de arnilina y un péptido agonista de CCK, covalentemente enlazados mediante la siguiente estructura: -R1-R2-R3--R4-R5-en donde dicho pept ido agonista de arnilma y el peptido agonista de CCK están enlazados a través del grupo acido carboxilico de cadena lateral de cualquiera de los peptidos (a condición de que dicha cadena lateral que contiene un grupo ácido carboxilico esté presente en dicho peptido) a Ri ; y a través de NH2 del extremo N o del NH2 de una cadena lateral de cualquiera de los péptidos (a condición de que dicha cadena lateral que contiene NH2 este presente en dicho pép ido) a R5 ; y (a) Ri es NH(CH2 )n u 0(CH2 )n, en donde n = 1 a 6; (b) R2 es 0C0(CH2 )n (en donde n = 1 a 6) , NHC0(CH2 )n (en donde n = 1 a 6) , OCOCßH.; (enlazado en orto, meta o para) , COOC6H4 (enlazado en orto, meta o para), COOCßH?O (sustituido en orto, meta o para), NHCOCSHA (enlazado en orto, meta o para), (sustituido en orto, meta o para), (sustituido en orto, meta o para), O-X (en donde X es cualquier aminoácido enlazado a través de su grupo carboxilo) y NH-X (en donde X es cualquier aminoácido enlazado a través de su grupo carboxilo) ; (c) R3 es CH2 , CF2 , CO, CS o CNH; (d) R4 es 0 o NH; y (e) R5 es (CH2)nNHC0, (CH2)n0C0, (CH2)nC0, en donde n - l a 6. En otro aspecto mas, la presente invención esta dirigida a una composición de peptido híbrido que comprende un pept do agonista de arnil a y un peptido agonista de CCK enlazados covalentemente mediante la siguiente estructura: -Ri -Ríen donde dicho péptido agonista de amilina y el péptado agonista de CCK están enlazados a través del grupo acido carboxilico de cadena lateral de cualquiera de los pept idos (a condición de que dicha cadena lateral que contiene ?n grupo ácido carboxílico este presente en dicho peptido) a Ri ,- y por medio del NH2 del extremo N o un NH2 de cadena lateral (a condición de que dicha cadena lateral que contiene NH2 esté presente en dicho péptido) de cualquiera de los péptidos, a R2 ; y (a) Ri es NH(CH2 )n ? 0(CH2)n; y (b) R2 es (CH2)nNHC0, (CH2)n0C0, (CH2)nC0, en donde n - 1 a 6. Los peptidos híbridos preferidos de esta clase incluyen los péptidos híbridos que incorporan, como peptido agonista de arnilma: KCNTATCATQRLANELVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY-NH2 , en donde los residuos de cisteana en las posiciones 2 y 7 están enlazados mediante una ligadura disulfuro; o el peptido agonasta de amilina: CSNLSTCVLGKLSOELHKLQTYPRTNTGSGTP-NH2 en donde los residuos de cisteína en las posiciones 1 y 7 están enlazados mediante una ligadura disulfuro. Otros peptidos híbridos preferidos de esta clase incluyen los pépt 1 dos híbridos que incorporan corno péptido agonista de CCK: DY(OS03H)MGWMDF-NH2 , DYMGWMDF-NH2 , MGWMDF-NH2 , GWMDF-NH2, WMDF-NH2 , KDY(0S03H)MGWMDF-NH2 , KDYMGWMDF-NH2 , KMGWMDF-NH2 , KGWMDF-NH2 o KWMDF-NH2. En otro aspecto, la presente invención está d pgLda a una composición de péptido híbrido q?e comprende un péptido agoninsta de arnilma y ?n péptido agonista de CCK, enlazados covalentemente mediante la siguiente estructura: -R1-R2-R3-R4-R5-en donde dicho péptido agonista de amilina y el péptido agonista de CCK están enlazados por medio del NH2 del extremo N el NH2 de cadena lateral (a condición de que dicha cadena lateral que contiene NH2 esté presente en dicho peptido), de cualquiera de los péptidos a Ri ; y por medio de un ácido carbo ilico de cadena lateral de cualquiera de los peptidos (a condición de que dicha cadena lateral que contiene un grupo ácido carboxilico este presente en el péptido) a Rs ; y (a) Ri es C0NH(CH2)N, C00(CH2)n o C0(CH2)n, en donde n = 1 a 6 ; (b) R2 es C0NH(CH2)n (en donde n = 1 a 6), C00(CH2 )n (en donde n = l a 6), C0(CH2)n (en donde n = 1 a 6), 0C0(CH2)n (en donde n = 1 a 6), NHC0(CH2)n (en donde n = 1 a 6), (enlazado en orto, meta o para), COOCsH^ (enlazado en orto, rneta o para), C00CßH«0 (sustituido en orto, meta o para), NHCOCßHü (enlazado en orto, rneta o para), (sustituido en orto, meta o para), CONHC6H4NH (sustituido en orto, eta o para), O-X (en donde X es cualquier aminoácido enlazado a través de su grupo carboxilo) y NH-X (en donde X es c?alquier aminoácido enlazado a través de su grupo carboxilo); (c) R3 es CH2, CF2, CO, CS O CNH; (d) R¿ es 0 o NH; y (e) Rs o. (CH2)nNH o (CH?JnO, en donde n = 1 a 6. En otro aspecto, la presente invención está dirigida a una composición de péptido híbrido que comprende un péptido agonista de amilina y un péptido agonista de CCK enlazados covalenternente mediante la siguiente estructura: -R1-R2-en donde dicho péptido agonista de arnilina y el péptido agonista de CCK están enlazados por medio del NH2 del extremo N o un NH2 de cadena lateral (a condición de que la cadena lateral que contiene NH2 este presente en dicho µepta o), de cualquiera de los pép a os a Ri ; y por medio de un ácido carboxilaco de cadena lateral de cualquiera de los péptidos (a condición de que dicha cadena lateral que contiene un grupo acido carboxilico esté presente en ese péptido) a R2 ; y (a) Ri es C0NH(CHa )n . C00(CH2 )N o C0(CH2)N; y (b) R2 es (CH2 )pNH o (CH2 )n0, en donde n = 1 a 6. Dichos pept idos híbridos preferidos de esta clase incluyen los peptados híbridos que incorporan corno peptido agonista de arnilina: KCNTATC0TQRLANFLVHSSNNFGPTLPPTNVGSNTY-NH2 , en donde los residuos de cisterna en las posiciones 2 y 7 están enlazados mediante una ligadura disulfuro; el péptido agonista de amili a: KCNTATCATQKLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY-NH2 , en donde Los residuos de c steína en Las posiciones 2 y 7 est n enlazados por medio de una ligadura disulfuro; o el peptido agonista de arnilma: CSNL TCVLGKLSOELHKLQTYPRTNTGSGTP-NH2 en donde los residuos de cisterna en las posiciones 1 y 7 están enlazados mediante ?na ligadura disulfuro. Los peptidos híbridos preferidos de esta clase también incluyen los peptidos híbridos que incorporan, corno peptido agonista de CCK: DY(0S03H)MGUMDF-NH2 , DYMGWMDF-NH2 , MGWMDF-NH2, GWMDF-NH2 , WMDF-NH2 , KDY( OSO3 H )MGWMDF-NH2 , KDYMGWMDF-NH2 , KMGWMDF-NH2 , KGWMDF-NH2 o KWMDF-NH2.

En otro aspecto, la presente invención esta dirigida a una composición de péptido híbrido que comprende un péptido agonista de arnil a y un pépta do agonista de CCK enlazados covalenternente mediante la siguiente estructura: -R?-R2-R3-R4 -Rs " en donde dicho péptido agonista de armlina y el peptido agonista de CCK están enlazados a través de los grupos ácido carboxilico de cadena lateral de ambos peptidos (a condición de que dicha cadena lateral que contiene el grupo ácido carboxilico este presente en dichos peptidos) a Ri ; y (a) Ri es MH(CH2)n u 0(CH2)n, en donde n - 1 a 6; (b) R2 es 0C0(CH2)n (en donde n = 1 a 6), NHC0(CH2)n (en donde n = 1 a 6), (enlazado en orto, meta o para), COOC6H4 (enlazado en orto, meta o para), COOCßKiO (sustituido en orto, meta o para), NHCOCßH* (enlazado en orto, rneta o para), CONHC6H4 (sustituido en orto, meta o para), (sustituido en orto, meta o para), CONHCßHiNH (sustituido en orto, rneta o para), O-X (en donde X es cualquier aminoácido enlazado a través de su grupo carboxilo) y NH-X (en donde X es cualquier aminoácido enlazado a través de su grupo carboxilo); (c) R3 es CH2, CF2, CO, CS o CNH; (d) R4 es 0 o NH; y (e) Rs es (CH2)nNHC0 o (CH2)nO, en donde n - 1 a 6. En otro aspecto, la presente invencaon está dirigida a una composición de péptido híbrido que comprende un peptido agonista de amil a y un péptido agonista de CCK, enlazados covalentemente mediante la siguiente estructura: -R1-R2-en donde dicho peptido agomsta de amilma y el péptido agonista de CCK están enlazados por medio de grupos ácido carboxilico de cadena lateral de ambos péptidos (a condición de que una cadena lateral que contiene dicho grupo acido carboxílico este presente en esos peptidos); y (a) Ri es NH(CH2)n u 0(CH2)n; y (b) R2 es (CH2)n o (CH2)nO, en donde n = 1 a 6. Los peptidos híbridos preferidos de esta clase incluyen los pept idos híbridos que incorporan, corno el peptido agonista de arnilina: KCNTflTCATQRLANELVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY-NH2 , en donde los residuos de cisterna en las posiciones 2 y 7 están enlazados mediante una ligadura di ul uro; o CSNLSTCVLGKLSQELHKLQTYPRTNTGSGTP-NH2 en donde los residuos de cisteína en las posiciones 1 y 7 están enlazados mediante una ligadura disulfuro. Otros pept dos híbridos preferidos de esta clase incluyen los péptidos híbridos q?e incorporan corno péptido agonista de CCK: DY(0S03H)MGWMDF~NH2 , DYMGWMDF-NH2 , MGWMDF-NH2 , GWMDF-NH , WMDF-NH2. En ?na modalidad, los péptidos híbridos son dividibles in vivo y por lo menos un heteroatomo a lo lar-go de la estructura fundamental del enlazador del peptido híbrido es oxígeno.

En otro aspecto, los peptidos híbridos son estables in vivo y todos los heteroatomos a lo largo de la estructura fundamental del enlazador del peptido híbrido son nitrógeno. También están incluidas dentro del alcance de la presente invención las moléculas híbridas que contienen un enlazador, que son producidas utilizando otros métodos de conjugación, tales como mediante la adición de Michael de ?n grupo tiol apropiado a un enlazador de mono o bisrnaleirnida apropiado. Es provisto el grupo tiol mediante la inserción de cisterna en la secuencia de un agonista de arnalma o un agonista de CCK, o la formación de un derivado de cualesquiera de los residuos lis a en un agonista de a ilma o en un agonista de CCK, con el reactivo de Traut (2- irninotiolano) . Un ejemplo de bisrnaleirnidas son el 1 ,6-b?s-rnale?m?dohexano obtenible en el comercio. Otras posibilidades para la explotación de los residuos de lis a para la conjugación, son el uso de cloruro de cloroacetiio, la animación bis-reductora con glioxal y cianoborohidr?ro de sodio, La glucuronidación seguida por división con peryodato del diol vecinal esperado y arn acion reductora del aldehido resultante. Dicha metodología ha sado usado, por ejemplo, en la química de los inrnunoanálisis enlazados con enzima y la conjugación de haptenos a proteínas portadoras. En otro aspecto, la presente invención está dirigida a péptidos híbridos que incorporan aspectos de los péptidos agonistas de amil na y los péptidos agonistas de CCK, y dichos pept idos híbridos no emplean un enlazador. Asi pues, en un aspecto, la presente i vención está dirigida a una composición de peptido híbrido que comprende una molécula de ia siguiente estructura: R1-C-R2-C-R3-R4-R5 en donde: (a) Ri es un extremo N libre o un extremo N arnidado con acetarnida, propionarnida, butiramida, 1sobut irarnida o ísocaproramida; o una lisma (L) arnidada con acetarnida, propionarnida, but 1 ram nía, 1 sobut 1 ramida o isocaprorami a; (b) R2 es una secuencia de aminoácidos seleccionada de: NTAT, GTAT, NTVT, NMAT, SNLST, ASLST y GNLST; (c) R3 es una secuencia de aminoácidos seleccionada de: ATORLANFLVH y VLGKLSQELHK; (d) R« es una secuencia de aminoácidos seleccionada de: SSNNFGPTLPP y LQTYPR; y (e) R5 es una secuencia de amino cidos seJeccaonada de: DYMGUMDF-NH2, TNTGWMDF-NH2 , TNVGWMDF-NH2 , TNTGWLDF-NH2 , TNVGWLDF-NH2 , TMTGSNDF-NH2 , TNVGSNDF-NH2 , TNTGSNDY-NH2 y TNVGSNDY-NH2. Los peptidos híbridos del tipo no enlazador, preferidos, de esta clase, incluyen los siguientes: KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPDYMGWMDF- NH2 ; CSNLSTCVLGKLSQELHKLOTYPRDYMGWMDF- NH ; KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNTGUMDF-NH2 ; CSNLSTCVLGKLSOELHKLOTYPRTNTGWMDF-NH2 ; KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNTGWLDF-NH2 ; CSNLSTCVLGKLSOELHKLQTYPRTNTGWLDF-NH2 ; KCNTATCATORLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNDF-NH ; CSNLSTCVLGKLSOELHKLOTYPRTNVGSNDF-NH2 ; KCNTATCATQRLflNFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNDY-NH2 ; y CSNLSTCVLGKLSOELHKLOTYPRTNVGSNDY-NH2. También están dentro del alcance de La invención los compuestos en los cuales los agonistas de arnilina, agonistas de CCK y peptidos híbridos están modificados sustituyendo algunos aminoácidos por otros que tengan propiedades similares, que den por- resultado la retención de la actividad biológica. Las sustituciones típicas son: leucina por rnetionina o viceversa, valina por isoleucina o viceversa, glutamina por asparag a o viceversa, fenilalanina por tirosina o viceversa, arginina por lisina o viceversa, ácido aspártico por ácido glutámico o viceversa, el intercambio de trionina, serina y alanina, el intercam io de histidina, triptofano, el intercambio de histidina, triptofano, ácido femlalaninico y tirosina. fldenas, otras sustituciones que implican aminoácidos no naturales están incluidos dentro del alcance de la invención, tales como t-ieuc a o penicilamina y sus derivados por valina o isoleucina; fenilalamina p sustituida por fenalalanina o tirosina; acido arnino isobutírico por alanina, serina treonina o val a. Los derivados biológicamente activos de los compuestos anteriormente descritos también están incluidos dentro del alcance de esta invención, en donde se puede invertir la estereoquímica de los aminoácidos inda vi duales de (L)/S a (D)/R en uno o rnás sitios específicos. También están incluidos dentro del alcance de esta invención los compuestos en los cuales los agonistas de arnilina o los agonistas de CCK están modificados mediante glicosilación de los residuos Asn, Ser y/o Thr. También están incluidos dentro del alcance de la presente invención los compuestos biológicamente activos q?e están descritos anteriormente, que contienen menos naturaleza peptidica. Dichos rnirnéticos de péptido pueden incluir, por ejemplo, una o más de las siguientes sustituciones para las uniones de amida -C0-NH-: desipéptidos (-C0-0-), iminometilenos (-CH2-NH-), trans-alquenos (-CH=CH-), ß-enaminonitrilos (-C(=CH-CN)~NH- ) , tioamidas (-CS-NH-), tiornetilenos (-S-CH2- o -CH2-S-), rnetilenos (-CH2-CH2-) y retro-amidas (-NH-C0-). Las composiciones híbridas de la presente invención son útiles, por ejemplo, en los métodos reivindicados para reducir la ingesta de alimentos, controlar el apetito y controlar el peso del cuerpo. Las dosis de las composiciones de péptido híbrido variarán dependiendo de la composición; y de preferencia en cantidades de entre alrededor de 0.1 µg/kg/día a alrededor de 1 µg/kg/día, de preferencia de 0.1 µg/kg/día a 10 µg/kg/día y, rn?y preferiblemente, de 0.1 µg/kg/día a alrededor de 1 µg/kg/d a.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Se describir adicionalmente la invención con referencia al dibujo anexo, en donde: La figura 1 muestra la respuesta a la dosis para la supresión de apetito en ratones, de arnil a de rata (triángulos claros), CCK-8 (círculos claros) y arnilma de rata rnas CCK-8 (cuadrados claros). La arnil a de rata (1.0 µg/kg) y CCK- 8 (1.0 µg/kg) solos y en combinación, suprimieron la ingesta de alimento en ratones a los 30 minutos. La amilina de rata mas CCK-8 suprimió la ingesta de alimento en 72.3 t 7.5% (P menor que 0.0006). La a ilma de rata sola suprimió la ingesta de alimento en -10.5 ± 10.3%. CCK solo suprimió la ingesta de alimento en 10.6 ± 16.9%.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN LOS AGONISTAS DE AMILINA Se puede usar la nomenclatura de los diversos agonistas de arnilina para indicar tanto el peptido en que se basa la secuencia, corno las modificaciones hechas en cualquier secuencia de amilina del peptido básico, tal como amilina humana. Un aminoácido precedido por un número exponencial indica que el aminoácido nombrado reemplaza al aminoácido 30 normalmente presente en la posición de ananoacido indicada por el exponente, en la secuencia de aminoácidos básica. Por ejernplo, "I8qr-g25> 2ß ro-h -arn lma" se refiere a un pept do que se basa en la secuencia de "h-arnil a" o "arnil a humana" que tiene las siguientes susti uciones: Arg que reemplaza His en el residuo 18, Pro que reemplaza Ala en el residuo 25 y Pro que reemplaza Ser en el residuo 28. El término "des-1Lys-h-arnilina" se refiere a un péptido que se basa en la secuencia de amilina humana, con el primer aminoácido N-terpunal omitido. La actividad corno agentes agonistas de apulina, puede ser indicada por- la actividad en el análisis de unión al receptor- del análisis en el músculo soleus descrito más adelante. La actividad de agonista de amilina de los compuestos también se puede determinar por la capacidad para inducir hiperlacternia y/o hiperglicemia en mamíferos, para reducir- los niveles de glucosa en el plasma después de los alimentos, para vaciado gástrico lento o para reduci Ja ingesta de alimento, tal co o se describe aquí. Se describe en la presente los agonistas de arnilina preferí dos. Los compuestos agonistas de arnilina p refera dos, des-iLys-h-arnilina, 28pro-h~arn?lana, 25,28, 2 pro-h-ama lina, i8ñrg25»28 ro-h-arn?l na y des-iLysißflrg25 , 28pro-.h~am?l?na muestran todos actividad de arnilma vivo en animales de prueba tratados, provocando una hiperlacternia notable seguida por hiperglicernia. Además de tener las actividades características de la a lina, ciertos compuestos preferidos también se ha encontrado que poseen caractens+a cas de solubilidad y estabilidad mas deseables cuando se comparan con la amilana humana. Esos compuestos preferidos incluyen: pro26 val ß , 2 p o-h-arnil a , 25,28,29 pro-h-am?l?na ( también denominada en la presente corno "flC-0137") y I8flt-g25, 28pro-h-amilina. Los métodos y las composiciones de la presente invención emplean un agonista de amilana, que incluye una arnilina o un análogo de agonista de amilina, por ejemplo, los análogos de agonista de receptor de arilina, tales corno i8firg25,28pro-h-arn?l?na, des~i|_ysi8p|rg25,28pro- h-arnil a, i8Rrg25,28,2 pro-h-arn?l na, des-iLysi8ñrg25,28,29pro- h-arnil a, 25,28, 29pro-h-arn?l?na, des~iLys25 ,28,29p o-h-arn? lina y 25pro 6val25, 28pr0-h-am?lina. Los ejemplos de otros análogos de agonista de arnilina adecuados incluyen: 23Le?2Spro26val28,29pro~h-arn?lana; 23|_eu25pro26Val28pro-h-arn?l?na; des -1 Lys23 Leu25 pro26 val28 pro- h~arn? lina ; i8qrg23 eu25pro 6Val28Pro-h-arn?l?na; iß R 923Leu25, 28,29 Pro-h-arnilina ; i8ßrg23Leu25,28pro-h-arn?l?na; i? He 3|_eu2S, 28,29 P?~o-h-arn?l?na; i7i?e25,28,29pro-h-arn?l?na; des-1 Lys17 Ile23|_eu25, 28,2 ro-h-arn?l?na; i7iie 8flr-g23Leu-h-arn?l?na; i7t?ei8flrg23Leu26val2 pro-h-am?l?na; i7llei8firg23Leu25pro26Val28.29pro»h-arnilina; i3thr2iHis23Leu26Ala28Leu29pro3iAs?-h~ rnilina; i3thr2 His23L.eu2ßAla29pro3iAsp-h~arnilina; des~iLysi thr2iHis 3Le?26Ala2 pro3iñsp-h-arni.l.ina; i3thri80rg2iHis23Le?26Ala29pro3iAsp-h-arnilina; i3th-i8Rrg2iHis23Leu 8,29pro3i sp- h-arni lina; y i3thr-i8firg2iHis23Leu25pro26Ala28.29pro3i s?-h-arnili a. Otros agonistas de amilina adicionales que incluyen los análogos de agonista de arnilina están descritos en la solicitud de patente estadounidense de la misma causahabiente que la presente, titulada "Novel flmylin flgonist Peptides and Uses Therefor", presentada el 30 de mayo de 1995 (caso No. 213/080), y que corresponde a la solicitud del TCP, número de publicación WO 93/10146, publicada el 27 de mayo de 1.993, cuya descripción queda incorporada aqui mediante esta referencia. Otros agonistas de arnilina incluyen las calcitoninas y sus modificaciones. El término "calcitonina" es usado de una manera bien conocida por los expertos en la materia (véase, flzria, Calcitonins--Physiological and Phar acological flspects, páginas 1-31, Springer-Verlag, 1.989). Por ejemplo, se quiere decir que el término incluye péptidos similares a un péptido de 32 aminoácidos, aislado de la glándula tiroides porcina. Se sintetiza la hormona y se secreta mediante células C para foliculares de la glándula tiroides en mamíferos. Las calcitoninas de varios vertebrados s?brnaní feros han sido secuenciadas. En estas especies s?bmamí feras, se almacena la calcitomna en las células localizadas en el cuerpo ultirnobranquial , que esta separado de la glándula tiroides. Las calcitonanas de pez (por ejemplo, de salmón y de anguila), y la calcitonina de pollo, intimamente relacionada, algunas veces son denominadas calcitomnas ?ltimobranq?iales, debido a su localizacion en los cuerpos ultirnobranq?iales. El término significa también que incluye péptidos o sus equivalentes que tienen secuencias de aminoácidos similares a las de las calcitomnas conocidas, y que tienen una o rnás de las actividades biológicas conocidas, pero por lo menos la capacidad para reducir La ingesta de alimento en mamíferos. Dichos péptidos incluyen aquellos que están denominados como equivalentes funcionales o fragmentos de calc omna funcionales, y sus variantes conservadoras. Tal como se señaló en la patente estadounidense No. ,321,008, se encontró que las calcitoninas ?ltirnobranquiales tenían una afinidad muy elevada en el análisis de receptor discutido más adelante, y que dicha afinidad es similar a la de la propia arnil a. La calciton a de rata y la calciton a humana tienen afinidades muy bajas con los receptores de amilma. Las demás calcitoninas son útiles como agonistas de arnil a en esta invención.

CUADRO 1 Péptido Unión al receptor Músculo soleus (CIso, nM) (CEso, nM) Amilana humana 0.05 1.6 Calcitomna de pollo 0.03 0.7 Calcito ina de salmón 0.07 0.4 Calciton a de anguila 0.09 0.4 1.7-Asn-Calc?ton? a de 0.05 0.3 anguila LOS AGONISTAS DE CCK La CCK y diversos agonistas de CCK son conocidos en la técnica. Los agonistas de CCK incluyen las CCK as corno las variantes de especie de Ja secuencia de aminoácidos de CCK, por ejemplo, se informa que la secuencia de 33 aminoácidos adentafLcada por primera vez en humanos y su terminal C de 8 aminoácidos, han sido dernost r-ados en cerdos, ratos, pollos, chinchillas, perros y humanos. Otras variantes de especies incluyen una secuencia de 39 aminoácidos que se encontró en cerdos, perros y conejillos de indias; y una secuencia de 58 aminoácidos que se encontró en gatos, perros y humanos; y un homologo de secuencia de 47 aminoácidos tanto de CCK corno de gastpna. La gastrina también es ?n agonista íe CCK. La secuencia de octapep ido sulfatado del terminal C, Asp-Tyr(S03-H) -Met-Gly-Trp~Met.-Asp-Phe-NH2 es conservada r-eLatívarnente a través de las especies, y puede ser la secuencia mínima para la activa dad biológica en la periferia de los roedores. Asi pues, los agonistas de CCK incluyen la propia CCK-33 humana, CCK-8 sulfatada (CCK26-33), CCK-8 no sulfatada, pentagast rma (CCK-5 o CCKÍ29-33)), y el tet rapeptido CCK-4 (CCK30-33). El subtipo receptor de tipo A (CCKA), se ha informado que es selectivo para el octapéptido sulfatado. Se ha identificado el subtipo CCKB del receptor del tipo B en todo el cerebro y en el estomago y se ha informado que no requiere de la sulfatación ni de los 8 aminoácidos. Los agonistas de CCKA también incluyen A-71623 y A-708874, que fueron desarrollados con base en la estructura de CCK-4. Los miembros de otra serie de agonistas CCKA, que incluyen JMV-180, se informa que son activos para estimular la liberación de la amilasa pancreática e inhibir la alimentación. Los ejemplos de agonistas CCKA no peptidicos son L-364718 y FPL 15849KF (Hpa( O3H) -Nle-Gly-Trp-Nle-MeAs?-Phe-NH2 ) . Los agonistas CCKB incluyen CCK-8, CCK-8 no sulfatado, CCK-4 y BC 264 (que es un derivado de CCK resistente a la pept idasa. Se conoce en la técnica diversos métodos de discriminación vivo e vitro para los agonistas de CCK. Los ejemplos incluyen los análisis ín vivo que implican la contracción de la vesícula de perros o de conejillos de indias, después de una anyeccaón intravenosa rápida del compuestos que se va a probar para la actividad parecida a CCK, y la medición de los análisis ín vitro utilizando tiras de vesícula. Véase Ualsh, "Gastrointestinal Hormones" en Physiology of the Gastrointestinal Tract (tercera edición, 1994; Raven Press, Nueva York) .

LOS ANÁLISIS Se puede evaluar la actividad de los agonistas de amilina utilizando ciertos análisis biológicos aqui descritos. El análisis de unión al receptor puede identificar tanto los agonistas de amilina candidatos corno los antagonistas y puede ser usado para evaluar la unión, mientras que análisis en el músculo soleus distingue agonistas y antagonistas de amilina. Preferiblemente, los compuestos agonistas de arnilina exhiben CE50 en el análisis de unión al receptor de amilina como se describió arriba, pero rnejor aún, como se hace notar, del orden de menos de 1 a 5 nanornoles, de preferencia menos de alrededor de 1 nanomol y, rnejor aún todavía, menos de 50 picomoles. En el análisis del músculo soleus, estos compuestos preferiblemente muestran valores de CE50 del orden de menos de alrededor de 1 a 10 rnicrornolar. El análisis de unión al receptor de amilina está descrito en la patente estadounidense No. 5,264,372, expedida el 23 de noviembre de 1993, cuya descripción queda incorporada aquí como referencia. El análisis de unión al receptor es un análisis de competencia q?e mide la capacidad de los compuestos para unirse específicamente a receptores de amilina unidos a la membrana. Una fuente preferida de las preparaciones de membrana usadas en el análisis es el antecerebr-o basal q?e comprende membranas de las regiones acurnbente del núcleo y circundan es. Los compuestos que están siendo analizados compiten para unirse a esas preparaciones receptoras con apulina de rata Hunter 1251 Bolton. Las curvas de competencia, en donde se gráfica Ja cantidad unida (B) como una función del logaritmo de la concentración del ligando, son analizadas mediante computadora, usando análisis de regresión no lineal a una ecuación logística de cuatro par metros (programa Inplot; GraphPAD Software, San Diego, California) o el programa ALLFIT de DeLean y coautores (ALLFIT, Versión 2.7 (NIH, Bethesda, Maryland 20892)). Munson, P y Rodbard, D., Anal, Biochem. 107:220-239 (1980). Los análisis de la actividad biológica de los agonistas de arnilina, q?e incluye preparaciones de análogo de agonistas de amilina en el músculo sole?s se llevan a cabo utilizando los métodos preva amenté descritos (Young y coautores, Arn. 3. Physiol. 263:E274-281 (1992)). En resumen, se determina la actividad agonista de arnil a midiendo la anhibición de la síntesis de glicógeno estimulada por- ansul a en el músculo soleus. La actividad antagonista de arnilma se determina midiendo la reanudación de la síntesis de glicógeno estimulada con insulina, en presencia de 100 nanornoles de anilina de rata y un antagonista de arnilina. Las concentraciones de péptido disueltas en los reguladoree libres de portador se determina mediante análisis de aminoácido cuantitativo, según se describe en la presente. La capacidad de los compuestos para actuar como agonistas en este análisis se determina leyendo los valor-es CE50. Se determina los errores de norma ajustando las curvas eigmoidales de respuesta a la dosis, utilizando una ecuación logística de cuatro parámetros (De Lean, A., Munson, P.J., Guardabasso, V. y Rodbard, D. (1988), ALLFIT, Versión 2.7, National Institute of Child Health and Human Development, N.I.H, Bethesda, Maryland, 1 disco flexible). Se ha caracterizado muchos agonistas de amilma utilizando estos análisis biológicos. Por ejemplo, se encontró que los compuestos 18Arg2S ,28pro-h~am?l na, des1 Lys!8Arg25 , 28 pro- h-amilina , *ß Arg25 , 28 , 29 pro-h- arnil a, des1Lys18A?-g25,28,2 pro~h~a ?l?na, 25, 28,29 Pro-h-arnil a, des1Lys25,28,29pro-h-arn?l na y 25 ro26 V l25 ,28pro-h-arn?l?na competían todos con la amilana en el análisis de unión al receptor. Estos compuestos tienen actividad antagonista despreciable cuando se miden mediante el análisis del músculo soleus, y se mostró que actuaban corno agonistas de arnilina.

LA PREPARACIÓN DE LOS COMPUESTOS Preferiblemente los agonistas pept dos de arnalina, los agonistas peptados de CCK y los péptidos híbridos son sintetizados utilizando la metodología de síntesis en faee sólida , cornun y corriente , que se basa en la química Frnoc y en la res a de Rink ( es deci r, l a res a de 4-rnet ílbenzhidrílamína) , que permiten la generación directa de una amida C-terrnmal al final de la síntesis. Todos los pépt dos parecidos a colecistoquinma son sintetizados ya sea por un método de síntesis de fase sólida común y corra ente, utilizando la química Frnoc, corno la resma Rink, que permite la generación directa de una amida C-terrnmal al final de la síntesis, o mediante química de solución común y corriente. De preferencia, se lleva a cabo dichos métodos uta 1 izando un smtetizador de péptido automático o semiautomático. Típicamente se acopla un aminoácido protega o con a-N-carbarnoílo y un amanoacido a una Cctdena de péptido creciente en una resina, a la temperatura ambiente, en un solvente inerte tal como dimetilforrnamida, N-rnetilpirrolidmona o cloruro de rnetileno en presencia de agentes acopladores tales como dica clohexilcarbodurnida y 1-h?drox?benzotraazol en presencia de una base tal corno diisopropiletilama na. Se elimina el grupo protector a-N- carbarnoilo del péptido- resina resultante, utilizando un reactivo tal corno ácido trifLuoroacético o pipepdma, y se repite la reacción de acoplamiento con el siguiente aminoácido N-protegido deseado, que se va a añadir a la cadena de péptido. Los grupos N-protectores adecuados son bien conocidos en la técnica, prefiriéndose en la presente ter-but loxicarbonilo (tBoc) y fl?orenilrnetoxicarbonilo (Fmoc). Los solventes, los derivados de aminoácido y la resina 4-rnet?ibenzh?dr?lamma que van a ser usados en un smtetizador de péptidos, son adquiridos de Applied Biosystems Inc. (Foster City, California). Los aminoácidos protegidos de la cadena lateral son adquiridos de Applied Biosysterns Inc. e incluyen los siguientes: Boc--Arg(Mts) , Frnoc~Arg)Prnc) , Boc-Thr(Bzl), Frnoc-Thr(t-Bu) , Boc-Ser(Bzl ) , Frnoc-Ser(t -Bu) , Boc-Tyr(Br-Z), Frnoc-Tyr( t-Bu) , Boc-Lys(Cl-Z) , Frnoc-Lys( Boc) , Boc-Glu(Bzl), Frnoc-Glu(t-B?) , Fnoc-H?s(Trt) , Frnoc-Asn(Trt) y Frnoc-Gln(Trt). Boc-H?s(BOM) de adquieren de Applied Biosysterns Inc. o de Bachern Inc. (Torrance, California). El anisol, el sulfuro de metilo, el fenol, el etanodatiol y el tioanisol se obtienen son obtenidos de Aldrich Chenacal Company (Milwaukee, Wl ) . Air Products and Chemicals (Allentown, Pensilvania) s?rnanastra el HF. El éter etílico, el ácido acético y el rnetanol son adquiridos de Fisher- Scientific (Pittsburgh, Pensil vama) . Se lleva a cabo la síntesis de péptido en fase sólida con un smtetizador de peptido automático (modelo 430A, Applied Biosysterns Inc., Foster City, California) usando el sistema NMP/HOBt (opción 1) y la química Tboc o Fmoc (véase el manual del usuario de Applied Biosysterns para el sintetizador de péptidos ABI 430A, versión 1.3B, 1 de julio de 1988, sección 6, páginas 49-70; Applied Biosystems Inc., Foster City, California) con coronación. Las resinas Boc-peptido son divididas con HF (-5°C a 0°C, 1 hora). Se extrae el péptido de la res a alternando agua y ácido acético, y se liofiliza los filtrados. Se divide lae resmas Fmoc-péptido con métodos comunes y corrientes (Introd?ction to Cleavage Technigues, Applied Biosysterns Inc., 1990, páginas 6-12). También se ensambla los péptidos utilizando un sinteti zador Advanced Chern Tech (modelo MPS 350, Louisville, Kentucky) . Se purifica los péptidos mediante RP-HPLC (preparatoria y analítica), utilizando un sistema Waters Delta Prep 3000. Se usa una columna de preparación C4, C8 o C18 (10 mieras, 2.2 x 25 cm; Vydac, Hesperia, California), para aislar los peptidos, y se determino la pureza utilizando una columna analítica C4, C8 o C18 (5 mieras, 0.46 x 25 crn, Vydac). Se suministra solventes (A-0.1% de TFA/agua y B=0.1% de TFA/CH3CN) a la columna analítica a un caudal de 1.0 rnl/minuto y a la columna de preparación a 15 rnl/minuto. Se llevo a cabo los análisis de aminoácidos en el sistema Waters Pico Tag y se procesó utilizando el programa Máxima. Se hidrolizó los peptidos mediante hidrólisis con acido en fase de vapor (115°C, 20-24 horas). Se formo derivados de los hidrolizados y se analizó mediante métodos comunes y corrientes (Cohén, S.A., Meys, M. , y Tarrm, T.L. (1989), The Pico Tag Method: A Manual of Advanced Techniques for flrn no Acid analysis, páginas 11-52, Millipore Corporation, Milford, MA). Se llevó a cabo el análisis mediante bombardeo con átomo rápido se llevo a cabo mediante M-Scan, Incorporated (West Chester, Pensilvania) . Se llevó a cabo la calibración de masa utilizando yoduro de cesa o o yoduro de cesio/glicerol. Se puede llevar a cabo el análisis de desionización por desabsorción de plasma utilizando la detección de tiempo de vuelo en el espectrómetro de masa Applied Biosystems Bio-Ion 20.

Los compuestos peptidos útiles en la invención pueden ser preparados también utilizando técnicas de ADN recornbinante, mediante el uso de métodos conocidos en J a técnica. Véase, por ejemplo, Sambrook y coautores, Molecular Cloning: A Laboratory Manual , segunda edición, Cold Spring Harbor (1989) En la preparación de los peptidos híbridos enlazados mediante un enlazador, típicamente una ligadura N-ter-rninal de los dos péptidos, se procede de la siguiente manera: se deja el agonista de arnil a en la resina en su forma totalmente protegida. Sm embargo, se lleva a cabo en la resma la formación del puente disulfuro. Se retira el grupo Frnoc N-termmal y se de a que reaccione con el enlazador bi funcional apropiadamente activado, el cual, a su vez, puede ser obtenible en el comercio o se prepara mediante métodos comunes y comentes de síntesis orgánica. Por ejemplo, los métodos para la preparación de los enlazadores bi uncionales están descritos en Weber y coautor-es, Bioconj. Chem. 1:431-437 (1990); Araño y coautores, Bioconj. Chern. 2:71-76 (1991); Quadp y coautores en "Cáncer Unagmg with Radiolabel led Antibodies" (Goldenberg, editores, 1990), páginas 201-213; King y coautores, Cáncer Research 54:6176-6185 (1994). La activación típica es la formación de un ester de N-hidroxisuccir mida con N-hidroxieuccmirnida y diciclohexi lcarbodurnida. El otro extremo del enlazador bi funcional esta desprotegido, de ser- necesario, y se activa corno antes y luego se deja que reaccione con un análogo de agonista de CCK, con el N-terrninal libre, totalmente protegido. La desproteccion de la cadena lateral y la eliminación de la res a se obtiene bajo condiciones comunes y corrientes. Se purifica todos los bispeptidos enlazados transversalmente mediante HPLC con C18 , en fase inversa, eluyendo típicamente con un gradiente de acetonitnlo/TFA acuosa, y luego con liofilización. Se caracteriza todos los bispéptidos enlazados transversalmente mediante espectrometría de masa por electroaspersión y se determinó la pureza mediante HPLC con C!8 en fase inversa. El enlaza iento por medio de las cadenas laterales y otras permutaciones se obtiene en gran medida mediante el procedimiento anterior excepto que se protege las cadenas laterales básicas de tal manera que se pueda revelar selectivamente y carboxilar y las cadenas laterales son protegidas de tal manera que puedan ser reveladas y activadas selectivamente. Los grupos protectores para ambas opciones son bien conocidos en la técnica. Un ejemplo de grupo protector- para la cadena lateral básica es el grupo NVOC químicamente estable pero fotoqua nucamente lábil. Un ejemplo de ?n grupo protector para una cadena lateral acida es el ester cloroetílico que puede ser diva dido después con zinc/ácido acético. Los compuestos a los que se hace referencia arriba forman sales con diversos ácidos y diversas bases tanto inorgánicos co o orgánicos. Dichas sales incluyen las sales preparadas con ácidos inorgánicos y orgánicos, por ejemplo, HCl, HBr, H2SO4, H3P0«, ácido trifluoroacético, ácido acético, acido fórmico, acido rnetans?J fónico, ácido toluens?lfomco, ácido rnaleico, ácido fumarico y acido al canforsulfónico. Las sales preparadas con las bases incluyen las sales de amonio, las sales de metal alcalino, por ejemplo, las sales de sodio y de potasio, y las sales de metal aJcaJ mo-terreo, por ejernpJo, las sales de calcio y de magnesio. Se prefiere las sales acetato, clorhidrato y t ifluoroacetato. Se puede formar- las sales por medios convencionales, tal como haciendo reaccionar el ácido libre o las formas básicas del producto con uno o rnás equivalentes de la base o en ácido apropiados en un solvente o medio en el cual sea insoluble la sal, o en un solvente tal co o agua, que luego se elimina aJ vacío o mediante secado por congelación o i tercambiando los iones de una sal existente con otro ion, en una resina de intercambio de iones adecuada.

LAS FORMULACIONES Las composiciones útiles en la invención pueden ser-provistas convenientemente en la forma de formulaciones adecuadas par-a administración parenteral (incluyendo intramuscular y subcutánea) o nasal o transdérrmca, o se pueden encaps?lar adecuadamente o se pueden preparar de otra manera mediante métodos conocidos en la técnica para administración oral. En algunos casos, sera conveniente proveer un agonista de amilma y un agonista de CCK en una sola composición o solución para su administración conjunta. En otros casos, puede ser más ventajoso administrar un agonista de CCK separadamente de un agonista de amilina. Se puede determinar mejor el formato de administración adecuado por quien sea un médico práctico, para cada paciente individual. Los portadores adecuados, farmacéuticamente adecuados, y su formulación, están descritos en los tratados de formulación comunes y corrientes, por ejemplo, Remington's Pharrnace?tical Sciences por E.W. Martin. Véase también Wang, Y.J. y Hanson, M.A. "Parenteral Forrnulations of Proteins and Peptides: Stability and Stabilizers", Journal of" Parenteral Science and Technology, Technical Report No. 10, supp. 42:2S (1988). Los compuestos útiles en la invención pueden ser provistos corno composiciones para inyección parenteral o infusión. De preferencia están disueltos en un portador- acuoso, por ejemplo, en una solución reguladora isotónica a un pH aproximado de 4.3 a 7.4. Se puede esterilizar estas composiciones mediante técnicas de esterilización convencionales, o se puede filtrar en forma estéril. Las composiciones pueden contener sustancias auxiliares, farmacéuticamente aceptables, según se requiera para estabilizar la formulación, tales como agentes reguladores de pH. Los reguladores útiles incluyen, por ejemplo, los reguladores de acetato de sodio/ácido acético. Se puede usar ?na forma de preparación de liberación lenta, de reposición o "depósito", de manera que se suministre cantidades terapéuticamente efectivas de la preparación en la circulación sanguínea, durante muchas horas o días, después de la inyección o suministro t ransderrnico. Se puede alcanzar- la Lsotonicidad deseada utilizando clorur-o de sodio u otros agentes farmacéu icamente aceptables, tales corno dextrosa, acido bórico, tar rato de sodio, propilenglicol, pola oles (tales como anitol y orbitol) u otros solutos morganicos u orgánicos. Se prefiere el cloruro de sodio particular-mente par-a reguladores que contienen iones sodio. Si se desea, se puede espesar las soluciones de las composiciones anteriores con un agente espesador, tal corno metiicel?losa. Se prepara composiciones útiles en la composición mezclando los ingredientes siguiendo procedimientos generalmente aceptados. Por ejemplo, se puede mezclar los componentes seleccionados en un mezclador u otro dispositivo normal para producir una mezcla concentr-ada, la cual puede ser-ajustada a continuación a la concentración y viscosidad finales, mediante la adición de agua o de un agente espesador, y posiblemente ?n regulador para controlar- el pH o un soluto adicional para controlar la tonicidad.

LAS DOSIS Para uso por el medico, las composiciones se proveerán en forma de unidades de dosis que contienen una cantidad de un compuesto de la invención (con o sm otro agente supresor de la alimentación) que serán efectivas en una o múltiples dosis para controlar el apetito al nivel seleccionado. Las cantidades terapéu icamente efectivas de un agonista de anilma y un agonista de CCK, o un pépti o híbrido, para ser usado en la supresión de la ingesta de alimentos y en condiciones en las cuales la ingesta de alimentos se reduce benéficamente, son aquellas que reducirán en la medida deseada la ingesta de alimentos. Dichas dosis de cada uno del agonista de amilina y el agonista de CCK están entre aproximadamente 0.1 µg/kg/dia y aproximadamente 10 µg/kg/día, de preferencia entre alrededor- de 0.1 µg/kg/día y alrededor de 1 µg/kg/día por agomsta, administrados en una sola dosis o en dosis múltiples. Dichas dosificaciones de pept dos híbridos están entre alr-ededor de 0.1 µg/kg/día y alrededor de 1 mg/kg/día, de preferencia entre alrededor de 0.1 µg/kg/día y alrededor de 10 µg/kg/día y, mejor aun, entre alrededor de 0.1 µg/kg/dia y 1 µg/kg/día. En general, en la supresión del apetito, se puede administrar los compuestos de esta mvencion a pacientes que necesiten de dicho tratamiento en escalas de dosis similares a las dadas anteriormente; sin embargo, más frecuentemente se administra los compuestos, por ejemplo, una, dos o tres veces al día. Corno se reconocerá por los expertos en el campo, una cantidad efectiva de agente terapéutico variará con muchos factores, que incluyen la edad y el peso del paciente, la condición física del paciente y otros factores. Los compuestos oralmente activos pueden ser ingeridos oralmente; sin embargo, las dosis deben incrementarse de cinco a diez veces, o se debe incrementar- (o disminuir) en la proporción descrita con anteriora dad. Tal corno se anoto anteriormente, ?na ventaja de la sinergia entre el agonista de arnilma y el agonista de CCK, descubierta por los inventores, es que permite dosis suficientemente bajas a las que puede administrarse los peptidos, peptidos modificados o preparaciones de péptido encaps?ladas, que tienen biodisponibila dad baja (es decir, alrededor- de 10 a 20%), por ejemplo, mediante métodos nasales, t ransdérrnicos u orales, en cantidades tales que se obtengan niveles sistemicos suficientes para producir el control de la ingesta de alimento. El siguiente ejemplo es ilustrativo, pero no limita los métodos ni las composiciones de la presente invenci n. Se pueden modificar otros compuestos adecuados o pueden ser adoptados para uso, y ser apropiados y estar dentro del espiptu y alcance de la invención.

EJEMPLO 1 Se obtuvo ratones machos NIH/Swiss Webster (Hsd:NIHS), de 8 a 10 semanas de edad, de Harían Sprague Dawley, Madison, Wisconsin. Se expuso los animales a 12:12 horas del ciclo de luz-oscuridad, con apagado de luces a las 18:00 y con temperaturas entre 22 y 25°C. Se dejó a su disposición agua y alimento (Teklan 7002, Harían Teklad, Madison, Wisconsm) ad libitum, excepto corno se indica más 5 ? adelante. Se adapto Los animales al ambiente del vivario durante al menos una semana antes de llevar a cabo los experimen os. Se sintetizo arnilma de rata (AC128) mediante la síntesis en fase solida con Frnoc. Se obtuvo el octapep ido de colecistoqumina 26-33 (CCK-8) de Península Laboratories (BeJrnont, California). Se disolvió los peptidos en agua estéril para obtener soluciones maestras de 1 rng/ml. Se formo soluciones adicionales con salina estéril justo antes de lae i yecciones traperitoneales. Se alojo individualmen e los animales y se les privó de alimento durante 18 a 20 horas antes de los experimentos. Se de ó acceso ad libitum al agua antes y durante los experimentos. Inmediatamente después de la inyección int rape itoneal de arnilma de rata o CCK-8 o salina, todos los animales recibieron una pella de alimento previamente pesada. La ingesta de alimento de cada animal se midió pesando la pella de alimento a Los 30 minutos después de la inyección y de proveer- el alimento. Como se muestra en la figura 1, la arnilma de rata (AC128) (1.0 µg/kg) y CCK-8 (1.0 µg/kg) solos, y en combinación, suprimieron la ingesta de alimento en los ratones a los 30 minutos. La amilina de rata mas CCK-8 suprimió la ingesta de alimento en 72.3 t 7.5% (P menor que 0.0006). La arnilina de rata sola suprimió la ingesta de alimento en -10.5 ± 10.3% (no significativo). CCK-8 solo suprimió la ingesta de alimento en 10.6 ± 16.9% (no significativo). La r-espuesta a la dosis para la supresión de apetito en r-atones, de la arnilma de rata (AC128 ) (circuios rellenos), CCK-8 (circuios claros) y arnilma de rata mas CCK (cuadrados rellenos) ta tnen esta mostrada en la figura l. Asi pues, la amilana de rata rnas CCK -8 tuvo un efecto einergista co y dependiendo de la dosis, suprimi la ingesta de alimento en ratones después de 30 minutos hasta en 93% (a 100 µg), con una DEso de 0.28 µg/kg i 0.65 unidades logar tmicas. Fstos experimentos indican que la combinación de un agonista de amil a y un agonista tio CCK, a dosis que eran aproximadamente de 100 a 3 veces menores que la DEso para los peptidos respectivos en r-atones, y a dosis que son aproximadamente iguales a 10 veces menor-es que las dosis mínimamente efectivas de dichos péptidoe, dadas individualmente, pueden proveer la regulación efectiva de la ingesta de alimento.

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Una composición caracterizada porque comprende un agonista de arnilina y un agonista de CCK, mezclados en una forrna adecuada para administración terapéutica.

2.- Una composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada además por-que el agonista de arnilina es 2S,28,2 pro~h-arnilina.

3.- Una composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada además porque dicho agonista de amilina ee e-calcitonina.

4.- Una cornpoeición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada adernáe porque el agonista de amilina es h-arnilina.

5.- Una composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada además porque el agonista de CCK es un agonista CCKA -

6.- Una composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada además porque el agonista de CCK es CCK-8.

7.- Un método para reducir la ingesta de alimento en un mamífero, caracterizada por-que comprende administrar al mamífero una combinación efectiva, reductora de la ingesta de alimento, de un agonista de amilina y un agonista de CCK.

8.- Un método para el control del apetito en un mamífero, caracterizado porque comprende coadrnimst rar al mamífero cantidades terapéuticamente efectivas de un agonista de arnilma y un agonista de CCK.

9.- Un mé odo para el control del peso del cuerpo de un sujeto, caracterizado porque comprende coadmm strar al sujeto una combinación efectiva, reductora de la ingesta de alimento, de un agonista de amilina y un agonista de CCK.

10. - Un método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7, 8 o 9, caracterizado además porque el agonista de arnilina es h-arnilma.

11.- Un método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7, 8 o 9, caracterizado ademas por-que el agonista de arnilma es s~calc?ton? na.

12.- Un método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7, 8 o 9, caracterizado ademas porque el agonista de arnilina es 25,28,2 ro~h-arn?l?na.

13.- Un método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7, 8 o 9, caracterizado ademas porque el agonista de CCK es un agonista CCKA .

14.- Un método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7, 8 o 9, caracterizado además porque el agonista de CCKA es CCK-8.

15.- Un método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7, 8 o 9, caracterizado además porque el agonista de anilma y el agonista de CCK son administrados cada uno en una cantidad de aproximadamente 0.1 µg/kg/dia y alrededor- de 10 µg/kg/dia.

16.- Un método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7, 8 o 9, caracterizado ademas porque el agonista de amilana y el agonista de CCK son administrados cada uno en una cantidad de entre 0.1 µg/kg/dia y alrededor de 1 µg/kg/dia.

17.- Una composici n de péptido híbrido, caracterizada porque comprende un pept ido agonista de arnilina y un péptido agonista de CCK, enlazados covalentemente mediante la siguiente estructura: -R?~R2~R3 -R« -Rs -en donde dicho péptido agonista de amil a y el pép+ido agonista de CCK están enlazados por medio del NH2 del extremo N de cualquiera de los pept dos y/o por medio de NH2 de cadena later-al de cualquaera de los péptidos (a condición de que dicha cadena lateral que contiene un NH2 este presente en dicho pept do); y (a) Ri es C0NH(CH2)N, C00(CH2)n, o C0(CH2)n, en donde n - 1 a 6; (b) R2 es 0CO(CH2)n (en donde n = 1 a 6), NHC0(CH2)n (en donde n = 1 a 6), OCOC6H4 (enlazado en otro, rneta o para), COOCßHü (enlazado en orto, meta o para), COOC6H4O (sustituido en otro, rneta o para), NHCOCßH* (enlazado en orto, rneta o para), (sustituido en otro, rneta o para), CONHC6H4NH (sustituido en otro, rneta o para), O-X (en donde X es cualquier aminoácido enlazado a través de su grupo carboxilo) , y NH-X (en donde X es cualquier aminoácido enlazado a través de su grupo car-box Lio); (C) 3 es CH2 , CF2 , CO, CS o CNH; (d) R4 es 0 o NH ; y (e) Rs es (CH2)nNHC0, (CH2)n0C0, (CH2)nC0, en donde n -- 1 a 6.

18.- Una composición de peptido híbrido, caracterizada porque comprende un pept ido agonista de arnilina y un péptido agonista de CCK, enlazados covalenternente mediante la siguiente estructura: -R1-R2-en donde el péptido agonista de anil na y el r>e?t?do agonista de CCK están enlazados por medio del NH2 del extremo N de cualquiera de los peptidos y un NH2 de cadena lateral de cualquiera de los peptidos (a condición de que una cadena que contiene un NH2 esté presente en dicho péptido); y (a) Ri es C0NH(CH2)n, C00(CH2)N O C0(CH2)N; y (b) R es (CH2)nNHC0, (CH2)n0C0, (CH2)nC0, en donde n = 1 a 6.

19.- Un pept do híbrido de conformidad con la reivindicación 17 o la reivindicación 18, caracterizado ademas por-que el pept ido agonista de arnilina tiene la siguiente secuencia: KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY-NH2 , y en donde los residuos de cisterna en las posiciones 2 y 7 est n enlazados mediante una ligadura di sulfuro.

20.- Un peptido híbrido de conformidad con la reivindicación 17 o la reivindicaci n 18, caracteri ado ademas porque el péptido agonista de amilma tiene la siguiente secuencia: KCNTATCATQKLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY-NH2 , y en donde los residuos de cisterna en las posiciones 2 y 7 están enlazados por medio de una ligadura disulfuro.

21.- Un peptido híbrido de conformidad con la reivindicación 17 o la reivindicación 18, caracterizado además porque el pépt do agonista de arnilina tiene la siguiente secuencia: CSNLSTCVLGKLS0ELHKL0TYPRTNTGSGTP-NH2 en donde los residuos de cisterna en las posiciones 1 y 7 están enlazados mediante una ligadura disulfuro.

22.- Un pép i o híbrido de conformidad con la reivindicación 17 o la reivindicación 18, caracterizado además porque el péptido agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: DY(OSO3H) GWMDF-NH2

23.- Un peptido híbrido de conformidad con la reivindicación 17 o la reivindicación 18, caracterizado ademas por-que el pept do agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: DYMGWMDF-NH2

24.- Un péptido híbrido de conformidad con la reivindicación 17 o la reivindicación 18, caracterizado además porque ei peptido agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: MGWMDF~NH2

25.- Un péptido híbrido de conformidad con la reivindicación 17 o la reivindicación 18, caracterizado además porque el peptido agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: GWMDF-NH2

26.- Un péptido híbrido de conformidad con la reivindicación 17 o la reivindicaci n 18, caracterizado además porque el peptido agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: WMDF-NH2

27.- Un péptido híbrido de conformidad con la reivindicación 17 o la reivindicación 18, caracterizado ademas porque el peptido agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: KDY( OSO3H ) MGWMDF-NH2

28.- Un pep ido híbrido de conformidad con la reivindicación 17 o la reivindicación 18, caracterizado además por-que el peptido agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: KDYMGWMDF-NH2

29.- Un pépt do híbrido de conformidad con la reivindicación 17 o la reivindicación 18, caracterizado además porque el péptido agonista de CCK tiene l a siguiente secuencia: KMGWMDF-NH2

30.- Un péptido híbrido de conformidad con la reivindicación 17 o la reivindicación 18, caracterizado además porque el pept do agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: KGWMDF-NH2

31.- Un péptido híbrido de conformidad con la reivindicación 17 o la reivindicación 18, caracter zado además porque el péptido agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: KWMDF--NH2

32.- Una composición de péptido híbrido caracterizada porque comprende un péptido agonista de arnilma y un peptido agonista de CCK, enlazados covalenternente mediante la siguiente estr-uctura: -R1-R2-R3-R4--R5-en donde el pept do agonista de amilana y el peptido agonista de CCK están enlazados por medio del grupo ácido carboxilico de cadena lateral de cualquiera de los peptidos (a condición de que dicha cadena lateral que contiene un grupo acido carboxilico esté presente en dicho peptido) a Ri ; y por medio de NH2 del extremo N o un NH2 de una cadena lateral de cualquiera de los peptidos (a condición de que dicha cadena later-al que contiene NH2 esté pr'esente en dicho pépt do) a R5 ; y (a) Ri es H(CH2)n u 0(CH2)n, en donde n = 1 a 6; (b) R2 es 0C0(CH2)n (en donde n - l a 6), NHC0(CH2)n (en donde n = 1 a 6), OCOC6H4 (enlazado en orto, meta o para), COOCßt (enlazado en orto, meta o para), (sustituido en orto, rneta o para), NHCOCßH* (enlazado en orto, rneta o para), (sustituido en orto, meta o para), (sustituido en orto, meta o para), O-X (en donde X es cualquier amino cido enlazado por medio de su grupo carboxilo) y NH-X (en donde X ee cualquier aminoácido enlazado por medio de su grupo carboxilo); (c) R3 es CH2, CF2, CO, CS o CNH; (d) R4 es 0 o NH; y(e) R5 es (CH2)nNHC0, (CH2)n0C0, (CH2)nC0, en donde n = l a 6.

33.- Una composición de péptido híbrido, caracterizada porque comprende un péptido agonista de arnilina y un peptido agonista de CCK, enlazados covalentemente mediante la siguiente estructura: -Rl-R2-en donde dicho péptido agomsta de arnilma y el peptido agonista de CCK est n enlazados por medio del grupo ácido carboxilico de cadena lateral de cualquiera de los peptidos (a condición de que dicha cadena lateral que contiene un grupo acido carboxílico esté presente en dicho péptido) a Ri ; y por rnedao del NH2 del extremo N o un NH2 de cadena lateral (a condición de que dicha cadena lateral que contiene NH2 esté presente en dicho pep ido) de cualquiera de los péptidos, a R2 ; y (a) Ri es NH(CH2 )n u 0(CH2 )n ; V (b) R2 es (CH2)nNHC0, (CH2)n0C0, (CH2)nC0, en donde n = 1 a 6.

34.- Un pépt do híbrido de conforma dad con la reivindicación 32 o la reivindicación 33, caracterizado ademas porque el péptido agonista de arnilina tiene la siguiente secuencia: KCNTATCATORLANELVHSSNIMFGPILPPTNVGSNTY-NH2 , y en donde los residuos de cisterna en las posiciones 2 y 7 están enlazados mediante una ligadura disuJfuro.

35.- Un peptido híbrido de conformidad con la reivindicación 32 o la reivindicación 33, caracter zado ademas por-que el peptido agonista de arnilma tiene la siguiente secuencia: CSN TCVLGKLSOELHKLQTYPRTNTGSGTP-NH2 en donde loe residuos de cisterna en las posi dones 1 y 7 están enlazados mediante una ligadura disulfuro.

36.- Un peptido híbrido de conformidad con la reivindicación 32 o la reivindicación 33, caracterizado además porque el peptido agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: DY ( 0S03H )MGWMDF-NH2

37.- Un péptido híbrido de conformidad con la reivindicación 32 o la reivindicación 33, caracteri ado además porque el péptido agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: ÜYMGWMDF-NH2

38.- Un péptido híbrido de conformidad con la reivindicación 32 o la reivindicación 33, caracterizado ademas porque el peptido agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: MGWMDF-NH2

39.- Un pépt do híbrido de conformidad con la reivi ndicacion 32 o la reivindicación 33, caracterizado además por-que el péptido agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: GWMDF-NH2

40.- Un péptido híbrido de conformidad con la reivindicación 32 o la reivmda cacion 33, caracterizado además porque el peptido agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: UMDF-NH2

41.- Un pépfado híbrido de conformidad con la reivandicacion 32 o la reivindicación 33, caracterizado además porque el péptido agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: KDY (OSO3H ) GWMDF-NH2

42.- Un peptido híbrido de conformidad con la reivindicación 32 o la reivindicación 33, caracterizado además porque el pépt do agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: KDYMGWMDF-NH2

43.- Un péptido híbrido de conformidad con la reivindicación 32 o la reivindicación 33, caracterizado ademas porque el péptido agonasta de CCK tiene la siguiente secuencia: KMGWMDF-NH2

44.- Un péptido híbrido de conformidad con la reivindicación 32 o la reivindicación 33, caract.erizado además por-que el peptido agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: KGWMDF-NH2

45.- Un péptido híbrido de conformidad con la reivindicación 32 o la reivindicación 33, caracterizado además por-que el péptido agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: KWMDF-NH2

46.- Una composición de péptido híbrido, caracterizada por-que comprende un péptido agonista de arnilina y un péptido agonista de CCK, enlazados covalentemente mediante la siguiente estructura: -R1-R2-R3-R4-R5-en donde dicho péptido agonista de amilma y el péptido agonista de CCK están enlazados por medio del NH2 del extremo N o un NH2 de cadena lateral (a condición de que dicha cadena lateral que contiene NH2 esté presente en dicho péptido), de cualquier-a de los péptidos a Ri ; y por medio de un ácido carboxilico de cadena lateral de cualquiera de los péptidos (a condición de que dicha cadena lateral que contenga un grupo ácido carboxilico esté presente en el peptido) a Rs ; y(a) Ri es C0NH(CH2)N, C00(CH2)n o C0(CH2)n, en donde n = 1 a B; (b) Rj es C0NH(CH2)n (en donde n = 1 a 6), C00(CH2)n (en donde n = J a 6), C0(CH2)n (en donde n = 1 a 6), 0C0(CH2)n (en donde n = 1 a 6), NHC0(CH2)n (en donde n = 1 a 6), OCOCßH* (enlazado en orto, meta o para), COOCßH (enlazado en orto, meta o para), COOC6H4O (sustituido en orto, rneta o para), NHCOCßHi (enlazado en orto, rneta o para), NHCOCßHüO (sustituido en orto, meta o par-a), (sustituido en orto, rneta o para), O-X (en donde X es cualquier aminoácido enlazado por medio de su grupo carboxilo) y NH-X (en donde X es cualquier aminoácido enlazado por medio de su grupo carboxilo); (c) R3 es CH2 , CF2 , CO, CS o CNH; (d) R« es 0 o NH; y (e) Re es (CH2)n H o (CH2)n0, en donde n = l a 6.

47.- Una composición de peptido híbrido, caracterizada porque comprende ?n péptido agonista de armlina y ?n pépti o agonista de CCK, enlazados covalenternente mediante la siguiente estructura: -R1-R2-en donde dicho péptido agonista de arnilma y dicho peptido agonista de CCK están enlazados por medio del NH2 del extremo N o un NH2 de cadena lateral (a condición de que la cadena lateral que contiene NH2 esté presente en dicho péptido), de cualquiera de los peptidos a Ri ; y por medio de un ácido carboxilico de cadena lateral de cualquiera de los péptidos (a condición de que dicha cadena lateral que contiene un grupo ácido carboxílico esté presente en ese póptido) a R2 ; y (a) Ri es CONH(CH2)n, C00(CH2)N o C0(CH2)N," V ( b) R2 es (CH2)nNH o (CH2)nO, en donde n - 1 a fi.

48.- Un péptado híbrido de conformidad con la reiv ndicación 46 o la reivi dicación 47, caracterizado además porque el pept ido agonista de arnilma tiene la siguiente secuencia: KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY-NH , en donde los residuos de cisterna en las posiciones 2 y 7 están enlazados mediante una ligadura disulfuro.

49.- Un péptido hibpdo de conformidad con la reivindicación 46 o la reivindica ión 47, caracterizado ademas porque el peptido agonista de amilina tiene la siguiente secuencia: KCNTATCATQKLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY-NH2 , en donde los residuos de cisterna en las posiciones 2 y 7 están enlazados por medio de una ligadura disulfuro.

50.- Un peptido híbrido de conformidad con la reivindicación 46 o la reivi dicación 47, caracterizado ademas porque el peptido agonista de arnili a tiene la siguiente secuencia: CSNLSTCVLGKLSOELHKLOTYPRTNTGSGTP-NH2 en donde los residuos de cisterna en las posiciones 1 y 7 están enlazados mediante una ligadura disulfuro.

51.- Un peptido híbrido de conformidad con la reivindicación 46 o la reivindicación 47, caracterizado además porque el péptido agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: DY (0S03H )MGWMDF-NH2

52.- Un peptido híbrido de conformidad con la reivindicación 46 o la reivindicación 47, caracterizado ademas porque el péptido agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: DYMGWMDF-NH2

53.- Un péptido híbrido de conformidad con la reivindicación 46 o la reivindicación 47, caracterizado ademas por-que el peptido agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: MGWMDF -NH2

54.- Un peptido híbrido de conformidad con la reivindicación 46 o la reivindicación 47, caracterizado ademas por-que el peptido agonasta de CCK tiene la siguiente secuencia: GWMDF-NH2

55.- Un péptido híbrido de conformidad con la reivindicación 46 o la reiv da cacaón 47, caracterizado además porque el peptido agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: UMDF-NH2

56.- Un péptido híbrido de conformidad con la reivindicación 46 o la reivindicación 47, caracterizado además porque el péptido agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: KDY(OSO3H)MGUMDF-NH2

57.- Un peptido híbrido de conformidad con la reivandicacion 46 o la reivindicación 47, caracterizado además porque el péptido agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: KDYMGWMDF-NH2

58.- Un péptido híbrido de conformidad con la reivmdicacaón 46 o la rea vindicación 47, caracte izado además por-que el péptido agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: KMGWMDF-NH2

59.- Un pept ido híbrido de conformidad con la reivindicación 46 o la reivindicación 47, caracterizado además porque el peptido agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: KGWMDF-NH2

60.- Un péptido híbrido de conformidad con la reivindicación 46 o la reivindicación 47, caracterizado además por-que el péptido agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: KWMDF-NH2

61.- Una composición de pepti o híbrido, caracterizada porque comprende un péptido agonista de arnilina y un péptido agonista de CCK, enlazados covalenternente mediante la siguiente estructura: ~R?-R2-R3-R«-R5~ en donde dicho peptido agonista de amilina y el pept.ido agonista de CCK están enlazados por medio de los grupos ácido carboxilico de cadena lateral de ambos péptidos (a condición de que dicha cadena lateral que contenga el grupo ácido carboxil co este presente en dichos peptidos) a Ri ; y (a) Ri es NH(CH2)n u 0(CH2)n, en donde n = 1 a 6; (b) R2 es 0C0(CH2)n (en donde n = 1 a 6), NHC0(CH2 )n (en donde n = 1 a 6), OCOCßH-i (enlazado en orto, meta o para), COOC6H4 (enlazado en orto, meta o para), COOCsHiO (sustituido en orto, rneta o para), NHCOCeH* (enlazado en orto, meta o para), CONHCßH*; (sustituido en orto, meta o para), (sustituido en orto, rneta o para), CONHCsH^NH (sustituido en orto, meta o para), O-X (en donde X es cualquier arnanoácado enlazado por medio de su grupo carboxilo) y NH-X (en donde X es cualquier- aminoácido enlazado por medio de su grupo carboxilo) ; (c) R3 es CH2 , CF2 , CO, CS o CNH; (d) R« es 0 O NH; y (e) R5 es (CH2)nNHC0 o (CH2)n0, en donde n - 1 a 6.

62.- Una composición de péptido híbrido, caracterizada porque comprende un peptido agonista de arnilina y un peptido agonista de CCK, enlazados covalentemente mediante la siguiente estructura: -R1-R2-en donde dicho péptido agonista de arnilma y el peptido agonista de CCK están enlazados por medio de grupos ácido carboxilico de cadena lateral de ambos peptados (a condición de que una cadena lateral que contiene dicho grupo acido carboxilico este presente en esos péptidos); y (a) Ri es NH(CH2)n ? 0(CH2)n; y (bi R2 e (CH2)n o (CH2)n0, en donde n = 1 a 6.

63.- Un peptido híbrido de conformidad con la reivindicación 61 o la reivindicación 62, caracterizado además porque dicho peptido agonista de arnilma tiene la siguiente secuencia: KCNTATCATQRLANELVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY-NH2 , en donde los residuos de cisteína en las posiciones 2 y 7 están enlazados mediante una ligadura disulfuro.

64.- Un pept do híbrido de conformidad con la reivindicación 61 o la reivindicaci n 62, caracteri ado además porque dicho pept ido agonista de arnil a tiene la siguiente secuencia: CSNLSTCVLGKLSOELHKLOTYPRTNTGSGTP-NH2 en donde los residuos de cisterna en las posiciones 1 y 7 están enlazados mediante una ligadura disul furo.

65.- Un peptido híbrido de conformidad con la reivindicación 61 o la reivindicación 62, carac eri ado además porque dicho pep ido agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: DY(OSO3H)MGWMDF-NH2

66.- Un peptLdo híbrido de conformidad con la reivindicación 61 o la reivindicación 62, caracterizado ademas por-que el péptido agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: DYMGWMDF-NH2

67.- Un peptido híbrido de conformidad con la reivindicación 61 o la reivindicación 62, caracterizado ademas porque el péptido agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: MGWMDF -NH2

68.- Un péptido híbrido de conformidad con la reivindicación 61 o la reivindicación 62, caracterizado además porque el péptido agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: GWMDF-NH2

69.- Un peptido híbrido de conformidad con la reivindicación 61 o la reivindicación 62, caracterizado ademas porque el peptido agonista de CCK tiene la siguiente secuencia: WMDF-NH2

70.- Un péptido híbrido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 17, 32,» 33, 46, 47, 61 o 62, en donde por lo menos un heteroátomo a lo lar-go de la estructura fundamental del enlazador es oxigeno.

71.- Un péptido híbrido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 17, 32, 33, 46, 47, 61 o 62, en donde odos los heteroátomos a lo largo de la estructura fundamental del enlazador son nitrógeno.

72.- Una composición de péptido híbrido, caracterizada porque comprende una molécula de la siguiente estructura: Rl -C-R2 -C-R3 ~R -Rd en donde: (a) Ri es un extremo N libre o un extremo N arnidado con acetarnida, propionarnida, b?tiramida, isobutirarnida o i socaprorarnida; o una lieina (L) amidada con acetarnida, propionamida, butirarnida, isobutiramida o isocaprorarnida; (b) R2 es una secuencia de aminoácidos seleccionada de: NTAT, GTAT, NTVT, NMAT, SNLST, ASLST y GNL?T; (c) R3 es una secuencia de aminoácidos seleccionada de: ATQRLANFLVH y VLGKLSQELHK; (d) R4 es una secuencia de aminoácidos seleccionada de: SSNNFGPILPP y LQTYPR; y (e) R 5 es una secuencia de aminoácidos seleccionada de: DYMGWMDF-NH2 , TNTGWMDF-NH2 , TNVGWMDF-NH2 , TNTGWLDF-NH2 , TNVGWLDF-NH2 , TNTGSNDF-NH2 , TNVGSNDF-NH2 , TNTGSNDY-NH2 y TNVGSNDY-NH2.

73.- Una composición, caracterizada porque comprende la siguiente secuencia de aminoácidos: KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPDYMGUMDF-NH2.

74.- Una composición, caracterizada porque comprende la siguiente secuencia de aminoácidos: CSNLSTCVLGKLSOELHKLOTYPRDYMGWMDF-NH2.

75.- Una composición, caracterizada porque comprende la siguiente secuencia de aminoácidos: KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNTGWMDF~NH2.

76.- Una composición, caracterizada porque comprende la siguiente secuencia de aminoácidos: CSNLSTCVLGKLSOELHKLOTYPRTNTGWMDF-NH2.

77.- Una composición, caracterizada porque comprende la siguiente secuencia de aminoácidos: KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNTGWLDF-NH2.

78.- Una composición, caracterizada porque comprende la siguiente secuencia de aminoácidos: CSNL?TCVLGKLSOELHKLOTYPRTNTGWLDF-NH2.

79.- Una composición, caracterizada porque comprende la siguiente secuencia de aminoácidos: KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNDF-NH2.

80.- Una composición, caracterizada porque comprende la siguiente secuencia de aminoácidos: C?NLSTCVLGKLS0ELHKL0TYPRTNVGSNDF-NH2.

81.- Una composición, caracterizada porque comprende la siguiente secuencia de aminoácidos: KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNDY-NH2.

82.- Una composición, caracterizada porque comprende la siguiente secuencia de aminoácidos: C?NLSTCVLGKLSOELHKLOTYPRTNVGSNDY-NH2.

83.- Un método para suprimir la ingesta de alimento en un mamífero, caracterizado porque comprende administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente efectiva de cualquiera de las reivindicaciones 1-6, 17, 18, 32, 33, 46, 47, 61, 63 o 72.

84.- Un método para controlar el apetito en un mamífero, caracterizado porque comprende administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente efectiva de cualquiera de las reivindicaciones 1-6, 17, 18, 32, 33, 46, 47, 61, 63 o 72.

85.- Un método para controlar el peso del cuerpo en un mamífero, caracterizado porque comprende administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente efectiva de cualquiera de las reivindicaciones 1-6, 17, 18, 32, 33, 46, 47, 61, 63 o 72.