MXPA06009824A - Terapeuticos basados en rnai para rinitis alergica y asma - Google Patents

Abstract

La presente invención proporciona composiciones que comprenden uno o más agentes de ARNi (por ejemplo, ARNi, ARNh o vectores de ARNi), para el tratamiento de condiciones y enfermedades mediadas por (por ejemplo, hipersensibilidad mediada por IgE), asícomo sistemas para identificar a los agentes de ARNi efectivos para este propósito. Las composiciones son adecuadas para el tratamiento de la rinitis alérgica y/o asma. En ciertas modalidades de la invención, el agente de ARNi se dirige a un transcrito que codifica una proteína seleccionada del grupo que consiste de la cadena FceRI a, la cadena FceRIß, c-kit, Lyn, Syk, ICOS, OX40L, CD40, CD80, CD86, Re1A, Re1B, ligando 4-1BB, TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, CD83, SLAM, cadena común gamma, y COX-2. Además, la invención proporciona composiciones de agentes de suministro/agente de ARNi y métodos de uso. En ciertas modalidades de la invención, las composiciones que comprenden un agente de ARNi se suministran por la vía respiratoria.

Description

TERAPÉUTICOS BASADOS EN RNAI PARA RINITIS ALÉRGICA Y ASMA CAMPO DE LA INVENCIÓN Las enfermedades alérgicas tales como la rinitis alérgica y el asma se cree ampliamente que se provocan al menos en parte por reacciones de hipersensibilidad a sustancias de otra manera externas generalmente inocuas (alérgenos) . La rinitis alérgica y el asma difieren en las ubicaciones primarias en donde tienen lugar las reacciones alérgicas: la mucosa nasal para la rinitis alérgica y el tracto respiratorio inferior para el asma. Aproximadamente el 10% de la población de EU padece de rinitis alérgica. Más pacientes visitan a los doctores para enfermedades alérgicas que para cualquier otro problema médico. Las alergias también son mayor causa de tiempo perdido del trabajo y la escuela, y su impacto en las vidas personales y costos directos e indirectos para el sistema médico y la economía son enormes. Se estima que en los países industrializados, uno de 5 a 10 individuos padece de asma y la incidencia se ha elevado dramáticamente durante las dos décadas pasadas (Umetsu, D., et al., Nature Immunology, 3(8): 715-720, 2002). ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Tanto la rinitis alérgica como el asma involucran la liberación de mediadores farmacológicamente activos de mastocitos y basófilos. Los mediadores provocan la Ref.. 175360 contracción del músculo liso y la permeabilidad vascular aumentada y la vasodilatación que resultan en síntomas alérgicos típicos tales como nariz fluida, y ojos humedecidos. Estos mediadores están también directa o indirectamente involucrados en el desarrollo de síntomas asmáticos tales como la hiperrespuesta de las vías respiratorias, secreción de moco y obstrucción de las vías respiratorias. El asma se caracteriza típicamente por una inflamación tanto aguda como crónica y se ha sugerido que la inflamación aguda es principalmente responsable de una broncoconstricción en episodios mientras que- la inflamación crónica y el remodelado de las paredes de las vías respiratorias contribuyen a la hiperreactividad de las vías respiratorias y a una obstrucción fija del flujo de aire que sucede frecuentemente en los asmáticos crónicos (Bousquet, J., et al., Am. J. Crit. Care Med, 161:1720-1745, 2000). Muchos medicamentos tales como los antihistamínicos, corticosteroides y descongestionantes están disponibles para el alivio temporal de los síntomas de rinitis alérgica. La inmunoterapia de alérgenos puede ser curativa particularmente en niños, pero no es efectiva para alrededor de la mitad de los pacientes tratados y requiere típicamente de un gran número de inyecciones para un término exitoso. También se puede tratar el asma usando una diversidad de agentes que incluyen los broncodilatadores y los corticosteroides. Sin embargo, ninguna de estas terapias es completamente efectiva y muchas de ellas tienen efectos colaterales indeseables. Por lo tanto, permanece la necesidad en el arte para una terapia y profilaxis efectiva para la rinitis alérgica y el asma. BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona agentes terapéuticos novedosos para el tratamiento de una diversidad de enfermedades y condiciones en las cuales IgE, y/o las células que producen IgE, juegan un papel importante. En particular, la invención proporciona terapéuticos novedosos para enfermedades o condiciones asociados con la hipersensibilidad mediada por IgE (también referida como hipersensibilidad de tipo I), por ejemplo, rinitis alérgica y asma y el a inoramiento de sus manifestaciones (por ejemplo, alivios sintomáticos) . Los agentes terapéuticos se basan en ARNi, un fenómeno en el cual el ARN de hebra doble que contiene una porción que es complementaria al ARN objetivo conduce a la inhibición del ARN objetivo cuando está presente en una célula. El mecanismo de ARNi involucra generalmente el desdoblamiento del ARN objetivo o la inhibición de su traducción. Los agentes ARN de la invención inhiben la expresión de transcritos celulares y evitan así la síntesis de proteínas que contribuyen directa o indirectamente a enfermedades mediadas por IgE. La inhibición de la expresión del gen objetivo usando ARNi representa un método terapéutico f ndamentalmente nuevo . Los inventores han seleccionado un conjunto específico de genes objetivo para la inhibición que han identificado como que se involucran probablemente en la patogénesis de enfermedades mediadas por IgE desde entre la multitud de genes que se expresan en células del sistema inmune. ün aspecto de la invención, es el reconocimiento de que al inhibir la expresión de uno o más genes en este conjunto, preferiblemente al nivel de la transcripción de ARN, será de un beneficio importante. Los inventores también han diseñado agentes novedosos de ARNi con base en la secuencia de genes objetivo preferidos. Además, los inventores han descubierto que los agentes de ARNi pueden inhibir efectivamente la expresión de genes en el sistema respiratorio de un sujeto cuando se suministran, ya sea directamente al sistema respiratorio o cuando se suministran intravenosamente. Los inventores han descubierto además que ciertos agentes de suministro notablemente e inesperadamente intensifican la eficacia de los agentes ARNi en modelos animales cuando se usan para suministrar los agentes ya sea directamente al sistema respiratorio o por vía intravenosa. La invención proporciona agentes de ARNi dirigidos a cualquiera de una diversidad de transcritos que codifican moléculas implicadas en el desarrollo, patogénesis y/o sintomatología del asma y/o rinitis alérgica. En diversas modalidades, la invención proporciona composiciones que contiene un ARN de interferencia corta (ARNi) y/o un ARN de horquilla corta (ARNh) dirigido a uno o más transcritos objetivo involucrados ya sea directa o indirectamente en la actividad de los mastocitos o basófilos y/o en la producción de IgE por las células B. En ciertas modalidades de la invención, el ARNi comprende dos hebras de ARN que tienen una región de complementariedad de aproximadamente 19 nucleótidos de longitud pero en un intervalo de longitud entre 17 y 29 nucleótidos y opcionalmente comprende además una o dos colgaduras de hebras sencillas. En ciertas modalidades de la invención, el ARNh comprende una molécula sencilla de ARN que tiene una región de auto-co ple entariedad. La hebra sencilla de ARN forma una estructura de horquilla que comprende un tronco y un rizo y opcionalmente una o más porciones sin aparear en el extremo 5' y/o 3' del ARN. Tales especies de ARN se dice que se auto-hibridizan. Además, la invención proporciona vectores cuya presencia dentro de una célula resultan en la transcripción de uno o más ARN que se auto-hibridizan o hibridizan uno al otro para formar un ARNh ó ARNi que inhiben la expresión de al menos un transcrito objetivo involucrado en la actividad de los mastocitos o basófilos y/o en la producción de IgE por células B. La invención proporciona además composiciones por ejemplo, composiciones farmacéuticas que comprenden los agentes inventivos de ARNi (ARNi, ARNh y/o vectores y métodos de suministro de tales composiciones. Por ejemplo, la invención proporciona un vector que comprende un ácido nucleico ligado operativamente a señales de expresión (por ejemplo un promotor o promotor/potenciador) activo en una célula, de manera que cuando se introduce ' el constructo en la célula, un ARNi o ARNh se produce dentro de la célula hospedera que se dirige a un transcrito objetivo, cuyo transcrito se involucra directa o indirectamente en la actividad de mastocitos o basófilos y/o en la producción de IgE por células B. En general, el vector puede ser un plásmido de ADN o ARN o un vector de virus tal como un retrovirus (por ejemplo, un lentivirus) , adenovirus, virus asociado a adeno, virus de herpes, virus de vacuna etc., cuya presencia dentro de una célula resulta en la transcripción de uno o más ácidos ribonucleicos (ARN) que se auto-hibridizan o hibridizan uno al otro para formar un ARN de horquilla corta (ARNh) o ARN de interferencia corta (ARNi) que inhibe la expresión de al menos un transcrito objetivo en la célula, cuyo transcrito se incluye ya sea directa o indirectamente en la actividad de mastocitos o basófilos y/o en la producción de IgE por células B. En ciertas modalidades de la invención, el vector comprende un segmento de ácido nucleico ligado operativamente a un promotor, de manera que la transcripción resulta en la síntesis de un ARN que comprende regiones de complementarias que se hibridizan para formar un ARNh dirigido al transcrito objetivo. En ciertas modalidades de la invención, el vector comprende un segmento de ácido nucleico flanqueado por dos promotores en una orientación opuesta, en donde los promotores se ligan operativamente al segmento de ácido nucleico, de manera que la transcripción de los promotores resulta en la síntesis de dos ARN complementarios que se hibridizan uno con el otro para formar un ARNi dirigido al transcrito objetivo. La invención proporciona además composiciones que comprenden el vector. Cualquiera de las composiciones de la invención puede comprender además de los ARNi, ARNh, y/o vectores aquí descritos, una o más substancias referidas como agentes de suministro que facilitan el suministro y/o la absorción del ARNi, ARNh o vector. Estas substancias incluyen polímeros catiónicos, transportadores moleculares de péptidos que incluyen peptoides o péptidos ricos en arginina y péptidos ricos en histidina; lípidos catiónicos y neutros, liposomas, ciertos polímeros no catiónicos, carbohidratos y materiales tensoactivos. Los agentes de suministro adecuados se describen en la solicitudes de patentes de Eü copendientes 10/674,159 (publicada como ÜS2004242518) y 10/674,087, publicada como US20055008617) y solicitudes PCT publicadas como WO2004028471 y WO2004029213, todas las cuales se incorporan -en la presente como referencia. Las composiciones se pueden administrar por una diversidad de rutas que incluyen intravenosa, inhalación, intranasal, como un aerosol, intraperitoneal, intramuscular, intradermal, oral, etc. Los métodos de suministro que se dirigen al sistema respiratorio por ejemplo, intranasal, por inhalación etc., son particularmente de interés. La presente invención proporciona además métodos de tratamiento o prevención de enfermedades o condiciones asociadas con la hipersensibilidad mediada por IgE por ejemplo, rinitis alérgica y/o asma, o del suministro del alivio sintomático, al administrar composiciones que contienen uno o más agentes inventivos de ARNi a un sujeto en riesgo de, o que padece de estas condiciones, dentro de una ventana de tiempo adecuada previo a, durante, o después de la exposición a un estímulo de disparo tal como un antígeno. Los ARNi y/o ARNh pueden sintetizarse químicamente, producirse usando transcripción in vitro, producirse intracelularmente etc. Las composiciones se pueden administrar por una diversidad de rutas incluyendo; intravenosa, inhalación, intranasal, como un aerosol, intraperitoneal, intramuscular, intradermal, oral, etc. En ciertas modalidades preferidas de la invención, las composiciones comprenden uno o más ARNi. La presente invención también proporciona un sistema para identificar agentes de ARNi que tienen secuencias que son útiles para el tratamiento o prevención de rinitis alérgica y/o asma y para trastornos mediados por IgE generalmente. Para los propósitos de descripción, se asumirá en la presente que las composiciones de la invención se van a usar para el tratamiento de rinitis alérgica y/o asma. Sin embargo, se señala que su uso no se limita a estas condiciones. Las composiciones de la invención se pueden usar en el tratamiento y/o profilaxis de cualquiera de una diversidad de condiciones en las cuales está implicado el involucramiento de IgE, incluyendo alergias para alimentos, reacciones anafilácticas a picaduras de insectos o alérgenos de alimentos, infecciones por parásitos etc. Además, se pueden usar para una diversidad de otros propósitos en los cuales se desee inhibir la expresión de los genes objetivos por ejemplo, para propósitos de investigación tales como para estudiar los genes mismos, para probar agentes farmacéuticos candidatos etc. La presente invención proporciona además un sistema y reactivos para el análisis y caracterización de la fisiopatología de ' la rinitis alérgica, asma y otras condiciones mediadas por IgE, y del papel de tipos de células diferentes y moléculas en estas condiciones así como para el estudio de diversos procesos biológicos que involucran mastocitos, basófilos, células dendríticas, células T, y células B.

Esta solicitud se refiere a diversas patentes, solicitudes de patente, artículos de revistas y otras publicaciones todos los cuales se incorporan en la presente como referencia. Además, los siguientes trabajos de referencia estándar se incorporan en la presente como referencia: Current Protocols in Molecular Biology, Current Protocols in Immunology, Current Protocols in Protein Science, and Current Protocols in Cell Biology, John Wiley & Sons, N.Y., ediciones de Julio 2002; Sambrook, Russell, and Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, 2001; Goldsby, R.A. et al., Kuby Immunology, 4th ed., W.H. Freeman and Co., New York 2000; Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10th ed. , McGraw-Hill, 2001 and Physician' s Desk Reference, 56th ed. , ISBN: 1563634112 Medical Economics, 2002. A menos que se defina de otra manera, todos los términos técnicos y científicos usados en la presente tienen el mismo significado como se entiende comúnmente por alguien de experiencia ordinaria en la técnica a la cual pertenece esta invención. En donde se dan intervalos, los puntos finales se incluyen en el intervalo. En donde diversas modalidades de la invención se establecen en un lenguaje de grupos de Markush o en alternativos, se entenderá que todos los subconjuntos y miembros individuales de los grupos de Markush y listas también están implícitamente establecidos incluso si no se mencionan explícitamente en la presente. Aunque los métodos y materiales similares o equivalentes a aquellos aquí descritos se pueden usar en la práctica o prueba de la presente invención, se describen a continuación métodos y materiales adecuados. En caso de conflicto, la presente especificación incluyendo definiciones tendrá control. Además, los materiales, métodos y ejemplos son solamente ilustrativos y no se pretende que sean limitativos. Otras características y ventajas de la invención serán evidentes a partir de la siguiente descripción detallada y reivindicaciones . BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La figura 1 muestra la estructura de los ARNi observada en los sistemas de Drosophila . La figura 2 presenta una representación esquemática de las etapas involucradas en la interferencia de ARN en Drosophila . La figura 3 muestra estructuras de una diversidad de agentes ejemplares de ARNi útiles de acuerdo con la presente invención. La figura 4 presenta una representación de una trayectoria inhibidora alternativa (trayectoria de represión traduccional de micro ARN) en la cual la enzima DICER desdobla un sustrato que tiene una no coincidencia de bases en el tronco para generar un- producto inhibidor que se enlaza al 3'UTR de un transcrito objetivo e inhibe la traducción. La figura 5 representa un ejemplo de un constructo que se puede usar para transcribir ambas hebras de un ARNi de la invención. La figura 6 detalla un ejemplo de un constructo que se puede usar para transcribir una molécula sencilla de ARN que hibridiza para formar un ARNh de acuerdo con la presente invención. La figura 7A muestra diagramas esquemáticos de HFceRa-338 y GFP-949 ARNi y sus derivados/precursores de horquilla. La figura 7B muestra, configuraciones en tándem de HFceRa-338H y GFP-949H en dos órdenes diferentes. La figura 7C muestra vectores de expresión en pSLOOP III. Los precursores de horquilla de ARNi (esto es, frecuencias ARNh) se clonan en el vector pSLOOP III solo (parte superior) , en tándem como configuraciones (a la mitad) , o simultáneamente con una secuencia determinación y del promotor independiente (parte inferior) . DEFINICIONES Como se usa en la presente, los términos aproximadamente o alrededor de, en referencia a un número se toman generalmente para incluir números que caigan dentro de un intervalo de 5% en cualquier dirección (mayor que o menor que) del número a menos que se establezca de otra manera o sea evidente de otra manera del contexto. El término complementario se usa en la presente de acuerdo con su significado aceptado en el arte para referirse a la capacidad para un apareamiento preciso entre bases particulares, nucleósidos, nucleótidos o ácidos nucleicos. Por ejemplo, adenina (A) y uridina (U) son complementarias; adenina (A) y timidina (T) son complementarias y guanina (G) y citosina (C) son complementarias. Si un nucleótido en una posición determinada de una primera secuencia de ácido nucleico es complementario a un nucleótido localizado opuesto en una segunda secuencia de ácido nucleicos, los nucleótidos forman una pared con bases complementarias y los ácidos nucleicos son complementarios en esa posición. Alguien experto ordinario en la técnica apreciará que los ácidos nucleicos se alinean en una orientación antiparalelo (esto es, un ácido nucleico está en la orientación 5' hasta 3' mientras que el otro está en la orientación en 3' hasta 5' ) . Un grado de complementariedad de dos ácidos nucleicos o porciones de los mismos se puede evaluar, al determinar el número total de nucleótidos en ambas hebras que forman pares de bases complementarios como' un porcentaje del número total de nucleótidos sobre una ventana de evaluación, cuando los ácidos nucleicos o las dos porciones de los mismos se alinean en una orientación antiparalelo para una complementariedad máxima. Por ejemplo, AAAAAAAA y TTTGTTAT tiene un 75% de complementariedad ya que hay 12 nucleótidos en los pares de base complementarios de un total de 16. Los ácidos nucleicos que tienen al menos 70% de complementariedad sobre una ventana de evaluación se consideran substancialmente complementarios sobre esa ventana. Específicamente, si la ventana de evaluación tiene 15-16 nucleótidos de largo, los ácidos nucleicos substancialmente complementarios pueden tener 0-3 no coincidencias dentro de la ventana si la ventana tiene 17 nucleótidos de longitud, los ácidos nucleicos substancialmente complementarios pueden tener 0-4 no coincidencias dentro de la ventana, si la ventana tiene 18 nucleótidos de longitud, los ácidos nucleicos substancialmente complementarios pueden tener o pueden contener 0-5 no coincidencias dentro de la ventana, si la ventana tiene 19 nucleótidos de longitud, ácidos nucleicos substancialmente complementarios pueden contener 0-6 no coincidencias dentro de la ventana. El número de no coincidencias permisibles se incrementa por un nucleótido para cada nucleótido adicional presente en la ventana. En ciertas - modalidades, las no coincidencias no están en posiciones continuas. En ciertas modalidades, la ventana no contiene una extensión de no coincidencia mayor de dos nucleótidos de longitud. En modalidades preferidas, una ventana de evaluación de 15-19 nucleótidos contiene 0-1 no coincidencia (preferiblemente 0) , y una ventana de evaluación de 20-29 nucleótidos contiene 0-2 no coincidencias (preferiblemente 0-1 más preferiblemente 0) . Gen como se usa en al presente, tiene su significado como se entiende en el arte. En general, se toma un gen para incluir secuencias reguladoras de gen. (por ejemplo, promotores, potenciadores etc.) y/o secuencias del intrón, además de secuencias codificadoras (estructuras de lectura abiertas") . Se apreciará además que las definiciones de gen incluyen referencias a ácidos nucleicos que no codifican proteínas, sino más bien codifican moléculas estructurales o funcionales de ARN. Para el propósito de claridad se señala que como se usa en la solicitud actual, el término gen se refiere generalmente a una porción de un ácido nucleico que codifica una proteína, el término puede abarcar opcionalmente secuencias reguladoras. Esta definición no se pretende que excluya la aplicación del término ?gen" a una expresión no codificadora de proteínas en unidades sino más bien para clarificar que en la mayoría de los casos, el término cuando se usa en este documento se refiere a un ácido nucleico que codifica proteínas. Un producto de genes o producto de expresión es en general, un ARN transcrito de gen o un polipéptidos codificado por un ARN transcrito del gen. El término hibidizar como se usa en la presente, se refiere a la interacción entre dos secuencias complementarias de ácidos nucleicos. La frase se hibridiza bajo condiciones de alta severidad, describe una interacción que es suficientemente estable, que se mantiene bajo condiciones de alta severidad reconocidas en el arte. La guía para efectuar reacciones de hibridación se puede encontrar por ejemplo en Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y., 6.3.1-6.3.6, 1989, y en ediciones más recientes actualizadas a las cuales se incorporan como referencias. Ver también Sambrook, Russell, y Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd ed. , Cold Spring Harbor Laboratory Press Cold Spring Harbor, 2001. Los métodos acuosos y no acuosos se describen en esa referencia y cualquiera se puede usar. Típicamente para secuencias de ácidos nucleicos de más de aproximadamente 50-100 nucleótidos de longitud, se definen diversos niveles de severidad tales como baja severidad (por ejemplo, cloruro de sodio/citrato de sodio 6X (SSC) a alrededor de 45°C, seguido por dos lavados en 0.2X SSC, 0.1% SDS al menos a 50°C (la temperatura de los lavados se puede incrementar hasta 55°C para condiciones de severidad media a baja) ) ; severidad media (por ejemplo, 6X SSC alrededor de 45°C seguido por uno o más lavados en 0.2X SSC, 0.1% SDS a 65 °C; y condiciones de hibridación de muy alta severidad (por ejemplo, fosfato de sodio 0.5M, 0.1% SDS a 65°C, seguido por uno o más lavados en 0.2X SSC,1% SDS a 65°C) . La hibridación bajo condiciones de alta severidad solamente sucede entre secuencias con un grado muy alto de complementariedad. Alguien experto ordinario en la técnica reconocerá que los parámetros para diferentes grados de severidad diferirán generalmente con base en diferentes factores tales como la longitud de la secuencia de hibridación, ya sea que contengan ARN o ADN etc. Por ejemplo, las temperaturas apropiadas para la hibridación de alta, media o baja severidad serán generalmente menores para secuencias más cortas tales como oligonucleótidos que para las secuencias más largas. Identidad se refiere a la extensión a la cual la secuencia de dos o más ácidos nucleicos es la misma. Un grado de identidad entre dos ácidos nucleicos durante una ventana de evaluación puede ser computado por alineación de los ácidos nucleicos en orientación paralela y determinando el porcentaje de posiciones dentro de la ventana de evaluación que son ocupados por el mismo nucleótido en cada hebra, permitiendo la introducción de aberturas en cualquier hebra. Comúnmente un grado de identidad se determina durante una ventada de evaluación de por lo menos 15 nucleótidos de longitud, por ejemplo, 19 nucleótidos. Inapropiado o excesivo, como se usa en la presente en referencia a la expresión de un transcrito o en referencia a la actividad funcional de un polipéptido o célula se refiere a la expresión o actividad que ya sea (i) ocurre en un nivel mayor que el que ocurre normalmente en una célula de tipo silvestre o sujeto saludable bajo condiciones ambientales comunes, comúnmente un nivel, que contribuye o provoca un resultado detectable tal como un síntoma o signo de enfermedad; y/o (ií) ocurre en un patrón temporal o espacial que difiere de aquel que ocurre normalmente en una célula de tipo silvestre o sujeto saludable bajo condiciones ambientales comunes, comúnmente en una forma que contribuye o provoca un resultado detectable tal co o- un síntoma o signo de enfermedad. La expresión o actividad inapropiada o excesiva incluye la expresión o actividad en un tipo de célula que normalmente no exhibe tal expresión o actividad. Si una célula o sujeto exhibe o no expresión inapropiada o excesiva de un transcrito o actividad inapropiada o excesiva de un polipéptido o actividad funcional se puede determinado, por ejemplo, por comparación de la expresión o actividad ya sea con sujetos normales (por ejemplo, tipo silvestre), con controles históricos, con valores previos en ese sujeto, etc. Sin embargo, en ciertas modalidades de la expresión o actividad de la invención se considera inapropiada o excesiva en un sujeto aún si esta cae dentro del rango que se considera normal. Por expresión excesiva o inapropiada asociada con, distinguida por, o que distingue a un transcrito o polipéptido generalmente se quiere decir que la expresión excesiva o inapropiada del transcrito o polipéptido frecuentemente (por ejemplo, en una mayoría de ejemplos), comúnmente, o consecuentemente ocurre en la presencia de la enfermedad o condición. No es necesario que la expresión excesiva o inapropiada invariablemente ocurra en la presencia de la enfermedad o condición, y en efecto, la expresión excesiva o inapropiada puede ocurrir solamente en un subconjunto pequeño (por ejemplo, menor que 5%) de los sujetos que padecen de la enfermedad o condición), En general, la expresión excesiva o inapropiada del transcrito o polipéptido, ya sea directa o indirectamente provoca o contribuye a la enfermedad o condición o un síntoma de estos. Se - observa que si la expresión o actividad es o no es excesiva o inapropiada puede depender del contexto. Por ejemplo, la expresión de un receptor para un ligando puede no tener efecto en la ausencia del ligando mientras que en la presencia del ligando tal expresión puede ser considerada excesiva o inapropiada si resulta en una enfermedad o síntoma. En el contexto terapéutico, las frases asociado con, caracterizado por, o que caracteriza generalmente significan que por lo menos un síntoma de la condición o enfermedad a ser tratado se provoca es exacerbado, o contribuido por el polipéptido transcrito o codificado, tal que una reducción en la expresión del transcrito o polipéptido aliviará, reducirá o será preventivo de una o más características o síntomas de la enfermedad o condición.

Aislado, como se usa en la presente, significa 1) separado de por lo menos algunos de los componentes con los cuales usualmente está asociado en la naturaleza; 2) preparado o purificado por un proceso que involucra la mano del hombre; y/o 3) no ocurre en la naturaleza. Ligado operablemente, como se usa en la presente, se refiere a una relación entre dos secuencias de ácido nucleico en donde la expresión de una de las secuencias de ácido nucleico es controlada, regulada, modulada, etc., por la otra secuencia de ácido nucleico. Por ejemplo, la transcripción de una secuencia de ácido nucleico es dirigida por una secuencia promotora ligada operablemente; el proceso post-transcripcional de un ácido nucleico es dirigido por una secuencia de procesamiento^ ligada operablemente; la traducción de una secuencia de ácido nucleico es dirigida por una secuencia reguladora transcripcional ligada operablemente; el transporte o ubicación de un ácido nucleico o polipéptido se dirige por una secuencia de transporte o ubicación ligada operablemente; y el proceso post-traduccional de un polipéptido se dirige por una secuencia de procesamiento ligada operablemente. Preferiblemente una secuencia de ácido nucleico que está ligada operablemente a una segunda secuencia de ácido nucleico está ligada covalentemente, ya sea directa o indirectamente, a una secuencia tal, aunque ninguna asociación tridimensional sea aceptable. Purificado, como se usa en la presente, significa separar de muchos otros compuestos o entidades. Un compuesto o entidad puede ser purificado parcialmente , purificado sustancialmente, o puro, donde este es puro cuando se remueve de sustancialmente todos los otros compuestos o entidades, esto es, preferiblemente es alrededor de 90%, más preferiblemente por lo menos alrededor de 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o mayor que 99% puro. El término secuencia reguladora se usa en la presente para describir una región de secuencia de ácido nucleico que dirige, mejora, o inhibe la expresión (particularmente transcripción, pero en algunos casos otros eventos tales como empalme u otros procesos) de la o las secuencias con las cuales se liga operablemente. El término incluye señales de expresión tales como promotores, mejoradores, etc., y otros elementos de control transcripcional. En algunas modalidades de la invención, las secuencias reguladoras pueden dirigir expresión constitutiva de una secuencia de nucleótido; en otras modalidades, las secuencias reguladoras pueden dirigir expresión de tejido específico y/o inducible. Por ejemplo, ejemplos sin limitación de promotores de tejido específico apropiados para uso en células de mamíferos incluyen promotores específicos linfoides (ver, por ejemplo, Caíame y colaboradores, Adv. Immunol . 43:235, 1988) tales como promotores de genes de subunidad de receptor de célula T (ver, por ejemplo, Winoto y colaboradores, EMBO J. 8:729, 1989) y genes de inmunoglobulina (ver, por ejemplo, Banerji y colaboradores, Cell 33:729, 1983; Queen y colaboradores, Cell 33:741, 1983); y promotores específicos de neurona (por ejemplo, el promotor de neurofilamento, Byrne y colaboradores, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 86:5473, 1989). También se abarcan promotores regulados en forma de desarrollo, incluyendo, por ejemplo, los promotores hox de murino (Kessel y colaboradores, Science 249:374, 1990) y el promotor a-fetoproteína (Campes y colaboradores, Genes Dev 3:537, 1989) . En algunas modalidades de la invención la secuencia reguladora puede comprender un promotor y/o mejorador que está activo en células epiteliales en los conductos nasales, tracto respiratorio y/o los pulmones. Por ejemplo, se puede usar un promotor para un gen que codifica una proteína de agente tenso activo. Como se usa en la presente, el término agente ARNi abarca moléculas de ARN y vectores (diferentes a las moléculas que ocurren naturalmente no modificadas por la mano del hombre) cuya presencia dentro de una célula resulta en ARNi y lleva a expresión reducida de un transcrito al cual el agente ARNi está dirigido. El término específicamente incluye los vectores ARNi, ARNh, e ARNi. El término se usa sinónimamente con el término "entidad que induce ARNi" como se usa en U.S.S.N. 60/549,070. Como se usa en la presente, un vector ARNi es un vector cuya presencia dentro de una célula resulta en la transcripción de uno o más ARN que autohibridizan o hibridizan a cada uno de los otros para formar un ARNh o ARNi. En varias modalidades de la invención este término abarca plásmidos, por ejemplo, vectores de ADN (cuya secuencia puede comprender elementos de secuencia derivados de un virus), o virus, (diferentes a aquellos virus o plásmidos ' que ocurren naturalmente que no han sido modificados por la mano del hombre) , cuya presencia dentro de una célula resulta en producción de uno o más ARN que autohibridiz'an o hibridizan a cada uno de los otros para formar un ARNh o ARNi. En general, el vector comprende un ácido nucleico ligado operablemente a la o las señales de expresión tal que una o más moléculas de ARN que hibridizan o autohibridizan para formar un ARNi o ARNh se transcriben cuando el vector está presente dentro de una célula. Así el vector comprende una plantilla para síntesis intracelular del ARN o los ARN, o precursores de estos. Para propósitos de mediar el ARNi, la presencia de un genoma viral en una célula (por ejemplo, después de fusión del recubrimiento viral con la membrana de la célula) se considera suficiente para constituir la presencia del virus dentro de la célula. Además, para propósitos de mediar ARNi, un vector se considera para estar presente dentro de una célula si éste se introduce dentro de la célula, o se injerta desde una célula -ancestral, sin considerar si se modifica o procesa subsiguientemente dentro de la célula o dentro de una célula ancestral. Un vector de ARNi se considera para ser dirigido a un transcrito si la presencia del vector dentro de una célula resulta en la producción de uno o más ARN que hibridiza a cada uno de los otros o autohibridiza para formar un ARNi o ARNh que se dirige al transcrito, esto es, si la presencia del vector dentro de una célula resulta en la producción de uno o más ARNi o ARNh dirigidos al transcrito. Un vector de ARNi se puede usar para mediar ARNi en una célula que expresa un transcrito al cual está dirigido, y/o para producir moléculas de ARNi o ARNh en células que ya sea que expresen o no el transcrito. El ARNi o ARNh se puede purificar de células que los producen y pueden ser usados para cualquiera de los propósitos descritos en la presente. El término "vector de ARNi" se usa sinónimamente con el término "vector de inducción de ARNi" como se usa en U.S.S.N. 60/549,070. Un ARN de interferencia , corto (ARNi) comprende una porción del duplo de AR? que es aproximadamente de 15-29 pares base de longitud y opcionalmente además comprende una o dos colgaduras de hebra sencilla, por ejemplo, una colgadura 3' en una o ambas hebras. Por ejemplo, la porción del duplo puede ser de 17-19 nucleótidos de longitud o cualquier otro subrango o valor específico dentro del intervalo entre 15 y 29, por ejemplo, 19, 21-23, 19-23, 24-27, 27-29. Un ARNi se puede formar a partir de dos moléculas de ARN que hibridizan juntas, o alternativamente se puede generar a partir de una molécula de ARN sencilla que incluye una porción de autohibridización, como se describe más adelante. En consecuencia para ciertas modalidades de la invención las terminaciones 5' libres de moléculas de ARNi tienen grupos fosfatos, y/o terminaciones 3' libres tienen grupos hidroxilo mientras que de acuerdo con otras modalidades las terminaciones 5' libres carecen de grupos fosfato y/o las terminaciones 3' libres carecen de grupos hidroxilo. Generalmente se prefiere que las terminaciones 5' libres de moléculas ARNi tengan grupos fosfato y terminaciones 3' libres tengan grupos hidroxilo. La porción del duplo de un ARNi puede contener una o más protuberancias que consisten de uno o más nucleótidos no pares, pero comúnmente no las contienen. La protuberancia puede ser, por ejemplo, (i) una no coincidencia (la cual ocurre cuando dos hebras están alineadas cada una con otra para complementariedad máxima dentro de una ventana de evaluación y dos nucleótidos opuestos cada uno a otro en las hebras alineadas que no son complementarias) , o (ii) un área en la cual una hebra contiene un nucleótido "extra" con respecto a la hebra diferente cuando las dos hebras se alinean para complementariedad máxima dentro de una ventana de evaluación; o (iii) una combinación de las anteriores. Una hebra de un ARNi (la cual puede ser referida como una "hebra antisentido" o "hebra guía") incluye una porción que hibridiza con un transcrito objetivo. En ciertas modalidades preferidas de la invención, la hebra antisentido del ARNi es precisamente complementaria con una región del transcrito objetivo (100% complementaria), significando que el ARNi hibridiza al transcrito objetivo sin una no coincidencia simple u otra protuberancia. En otras modalidades de la invención pueden existir una o más no coincidencias entre el ARNi y la porción objetivo del transcrito objetivo. En ciertas modalidades de la invención en las cuales la complementariedad del 100% no se alcanza, generalmente se prefiere que cualquier no coincidencia o protuberancia se localice o están cerca . de la terminación ARNi. El término ARN de horquilla corto se refiere a una molécula de AR? que comprende por lo menos dos porciones complementarias hibridizadas o capaces de hibridización para formar una estructura de doble hebra (doble) suficientemente larga para mediar el AR?i y por lo menos una porción de hebra sencilla, comúnmente entre aproximadamente 1 y 10 nucleótidos de longitud que forman un rizo. La región doble puede ser de 17-19 nucleótidos de longitud o cualquier otro Durango o valor específico dentro del intervalo entre 15 y 29, por ejemplo, 19, 21-23, 19-23, 24-27, 27-29. La porción del duplo puede, pero no necesariamente, contener una o más protuberancias que consisten de uno o más nucleótidos no pares. Como se describe más adelante, los ARNh se cree que son procesados en los ARNi por la maquinaria del ARNi celular conservada. Así los ARNh son precursores de los ARNi y son, en general, similarmente capaces de inhibir la expresión de un transcrito objetivo. El término sujeto, como se usa en la presente, se refiere a cualquier individuo susceptible para o que sufre de una enfermedad o condición para la cual el IgE es por lo menos en parte un factor provocativo o que contribuye. El término incluye animales, por ejemplo, animales domesticados (tales como gallinas, cerdos, caballos, perros, gatos, etc.), y animales salvajes, primates no humanos, y humanos. Un agente ARNi se considera ser dirigido a un transcrito objetivo para los propósitos descritos en la presente si 1) la estabilidad del transcrito objetivo se reduce en la presencia del agente de ARNi como se compara con su ausencia; y/o 2) la secuencia del agente de ARNi muestra por lo menos alrededor de 90%, más preferiblemente alrededor de 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ó 100% de complementariedad subsiguiente precisa con el transcrito objetivo para un alargamiento de por lo menos alrededor de 15, más preferiblemente por lo menos alrededor de 17, todavía más preferiblemente por lo menos alrededor de 18 ó 19 hasta alrededor de 21-23 nucleótidos; y/o 3) una porción del agente (esto es, una hebra de un ARNi o una de las porciones de auto complementariedad de un ARNh) hibridiza al transcrito objetivo bajo condiciones de severidad para hibridización de moléculas de ARN pequeñas (<50 nucleótidos) in vitro y/o bajo condiciones comúnmente encontradas dentro del citoplasma o núcleo de las células de mamíferos. Un vector de ARNi cuya presencia dentro de una célula resulta en la producción de un ARNi o ARNh que se dirige a un transcrito también se considera que se dirige al transcrito dirigido. Puesto que el efecto de direccionamiento a un transcrito es para reducir o inhibir la expresión del gen que comprende una plantilla para síntesis del transcrito, un agente ARNi dirigido a un transcrito también se considera para dirigir ese gen. Así como se usa en la presente, un agente de ARNi que se dirige a un transcrito se entiende que dirige el gen que proporciona una plantilla para síntesis del transcrito. Como se usa en la presente, tratar generalmente puede incluir uno o más de los siguientes: revisar, aliviar, inhibir el progreso, prevenir o reducir la probabilidad de la enfermedad, trastorno o condición a la cual se aplica el término, o uno o más síntomas o manifestaciones de la enfermedad, trastorno o condición. Prevención se refiere a provocar que no ocurra una enfermedad, trastorno, condición, o síntoma o manifestación de tal, o empeoramiento de la severidad de tal. En general, el término vector se refiere a una molécula de ácido nucleico capaz de mediar la entrada de, por ejemplo, transferencia, transportación, etc., de una segunda molécula de ácido nucleico dentro de una célula. El ácido nucleico transferido generalmente se liga, por ejemplo, insertado dentro, a la molécula de ácido nucleico del vector. Un vector puede incluir secuencias que dirigen replicación autónoma directa, o pueden incluir secuencias suficientes para permitir la integración dentro del ADN de la célula hospedera. .Los vectores útiles incluyen, por ejemplo, plásmidos (comúnmente moléculas de ADN aunque también son conocidos los plásmidos de ARN) , cósmidos, y vectores virales. Como bien se sabe en la técnica, el término vector viral puede referirse ya sea a una molécula de ácido nucleico (por ejemplo, un plásmido) que incluye elementos de ácido nucleico derivados de virus que comúnmente facilitan la transferencia o integración de la molécula de ácido nucleico (ejemplos incluyen vectores retrovirales o lentivirales) o a un virus o partícula viral que media la transferencia de ácido nucleico (ejemplos incluyen retrovirus y lentivirus) .

Como será evidente para uno de experiencia ordinaria en la técnica, los vectores virales pueden incluir varios componentes virales además del o los ácidos nucleicos. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN I. Visión general. La presente invención proporciona composiciones que comprenden agentes de ARNi tales como vectores de ARNi, ARNh, y/o ARNi dirigidos para transcritos ya transcritos de uno o más genes involucrados en una enfermedad o condición mediada por IgE, o que codifican productos de expresión importantes para la sobrevivencia, proliferación, y/o por lo menos una actividad biológica de la o las células que están involucradas en la secreción y/o respuesta para IgE. Cualquiera de estos transcritos son objetivos apropiados para inhibición mediada de ARNi de acuerdo con la presente invención. La actividad biológica puede ser cualquier actividad de la célula que incluye, pero no se limita a, sobrevivencia; proliferación; síntesis, secreción, desgranulación (por ejemplo, de un mediador inflamatorio); migración; interacción célula a célula; etc. Las desgranulación mediada por IgE de mastocitos juega un papel importante en ambas, la rinitis alérgica y el asma. La exposición a un alérgeno activa células B para formar IgE que secreta células de plasma. Las moléculas de IgE secretadas enlazan a receptores Fe específicos de IgE en basofilos en la sangre y en mastocitos. Durante la respuesta a exposición subsiguiente al alérgeno, los mastocitos asociados a moléculas IgE enlazan al alérgeno, provocando reticulación del IgE enlazado y el receptor al cual la molécula de IgE se enlaza, lo cual causa la desgranulación del mastocito. La desgranulación involucra la liberación de mediadores tales como histamina que son la causa próxima de los cambios vasculares y del músculo liso que subyacen a los síntomas alérgicos. El enlazamiento de IgE a mastocitos, con desgranulación subsiguiente y liberación de mediadores, también es responsable de muchos de los síntomas de asma. Ver Goldsby, R. , Kubyy Immunology, 4th Ed. , W. H. Freeman, 2000; U etsu, D., y colaboradores, Nature Immunology, 3 (8): 715-720, 2002, para discusión de la patogénesis de alergia y asma mediados por IgE. De acuerdo con ciertas modalidades de la presente invención, los agentes de ARNi se usan para inhibir por lo menos una actividad biológica de mastocitos, o para reducir su número o eliminarlos (por ejemplo, en el tracto respiratorio) y/o para inhibir la producción de IgE por las células B. La actividad biológica puede ser cualquier actividad de la célula que incluye, pero no se limita a, sobrevivencia, proliferación, síntesis, secreción, migración interacción célula a célula, etc. En ciertas modalidades preferidas, la inhibición de la actividad biológica "inactiva" mastocitos, dado que no ejercen un efecto patogénico. La invención proporciona agentes ARNi dirigidos a transcritos que codifican un sinnúmero de proteínas diferentes y métodos de uso de ellos en el tratamiento de enfermedades mediadas por IgE, que incluyen alergia y asma. Ciertas modalidades preferidas de la invención se describen en detalle a continuación. Es notorio que aunque las condiciones mediadas por IgE discutidas en la presente pueden ser referidas como "hipersensibilidad mediada por IgE" o "reacciones de hipersensibilidad", la respuesta del sujeto a IgE necesita no ser aumentadas. En general, los términos se pueden referir a cualquier respuesta inflamatoria indeseable o inapropiada a un alérgeno. En general, un transcrito descrito como un "transcrito X" (por ejemplo, un "transcrito CD40") significa un transcrito que se transcribe del "gen X" (por ejemplo, el gen CD40) , esto es, el gen del cual un ARNm que codifica la proteína CD40 se transcribe en el o los tipos de células apropiadas. Es notorio que aunque un transcrito se puede referir como "que codifica" una proteína particular, la región del transcrito que se dirige por el agente ARNi necesita no consistir completamente o aún en parte de una porción de codificación del transcrito. La región dirigida puede ser, por ejemplo, una región no traducida 5' ó 3' o intrón en varias modalidades de la invención. II. ARNi y Diseño de Agentes ARNi Cualquiera que sea el gen objetivo seleccionado, el diseño de los agentes ARNi tal como ARNi y ARNh de la presente invención preferiblemente seguirán ciertas líneas guía. En general, es deseable dirigir secuencias que son específicas al transcrito cuya inhibición se desea. También, en muchos casos, el agente que se suministra a una célula o sujeto de acuerdo con la presente invención puede someter uno o más pasos de proceso antes de volverse un agente de supresión activo (ver a continuación para mayor discusión) ; en tales casos, aquellos de experiencia ordinaria en la técnica apreciarán que el agente relevante preferiblemente será diseñado para incluir secuencias que pueden ser necesarias para su procesamiento. Los ARN inhibidores pequeños fueron descubiertos primero en estudios del fenómeno de interferencia de ARN (ARNi) en Drosophila , como se describe en WO 01/75164. En particular, se encontró que, en Dorsophila, los ARN de doble hebra se procesarán por una enzima similar a RNasa III llamada DICER (Bernstein y colaboradores, Nature 409: 363, 2001) dentro de dsARN más pequeños comprendidos de dos hebras de 21 nucleótidos (nt) , cada uno de los cuales tiene un grupo de fosfato 5' y un hidroxilo 3' , e incluye una región de 19 nt precisamente complementaria con la otra hebra, así que existe una región de duplo de 19 nt flanqueada por sobrecolgaduras de 3' de 2 nt . La Figura 1 muestra un esquema de ARNi encontrado en Drosophila . La estructura incluye una porción 300 de doble hebra (DS) de 10 nucleótidos, que comprende una hebra sentido 310 y una hebra de antisentido 315. Cada hebra tiene una colgadura 320 de 3' de 2 nt . Estos dsARN pequeños (ARNi) actúan para silenciar la expresión de cualquier gen que incluye una región complementaria a una de las hebras de dsARN, presumiblemente debido a una actividad de helicasa desenrolla los duplos de 19 bp en el ARNi, permitiendo un duplo alternativo para formar desde entre una hebra del ARNi y el transcrito objetivo. Este duplo nuevo luego guía un complejo de endonucleasa, RISC, hacia el ARN objetivo, el cual desdobla ("corta") en una ubicación única, produciendo las terminaciones de ARN no protegidas que se degradan rápidamente mediante maquinaria celular (Figura 2). Como se menciona posteriormente, los mecanismos adicionales de silenciamiento mediado por especies de ARN cortas (microARN) también son conocidos (ver, por ejemplo, Ruvkun, G., Science, 294,797-799, 2001; Zeng, Y., y colaboradores, Molecular Cell, 9, 1-20, 2002) . La discusión de mecanismos y las figuras que los representando se pretende que sugieran ninguna limitación en los mecanismos de acción de la presente invención. Mayor discusión de ARNi se encuentra en Dykxhoorn, D. , y colaboradores, Nature Reviews Molecular Cell Biology, 4: 457-467. El descubrimiento de que los homólogos de la enzima DICER ocurre en diversas especies en el rango desde E. coli hasta humanos (Sharp, Genes Dev. 15; 485,2001; Zamore, Nat. Struct. Biol. 8:746, 2001), aumentó la posibilidad de que un mecanismo similar a ARNi pudiera ser capaz de silenciar la expresión del gen en una variedad de tipos de célula diferentes que incluyen células mamarias, o aún humanas. Desafortunadamente, sin embargo, los dsARN largos (por ejemplo, los dsARN que tienen una región de doble hebra más larga que alrededor de 30 nucleótidos) se sabe que activan la respuesta de interferón en células de mamíferos. Así, mejor que lograr el silenciamiento del gen específico, la introducción de los dsARN largos dentro de células de mamíferos podría esperarse que lleve a supresión no específica mediada de interferón de traducción, que resulta potencialmente en la muerte de la célula. Los dsARN largos por lo tanto no se cree que sean útiles específicamente para inhibición de la expresión de genes particulares en células de mamíferos . Sin embargo, se ha encontrado que los ARNi, cuando se introducen dentro de células de mamíferos, pueden reducir efectivamente la expresión de los genes objetivo. Como se describe en las solicitudes de patente de compendio U. S. S. N. 10/674,159 y 10/674,087, los inventores han demostrado que los ARNí y/o ARNh dirigidos a una variedad de transcritos, que incluyen ambos transcritos endógenos tales como CD8a y también transcritos virales, redujeron grandemente el nivel del transcrito objetivo en células de mamíferos. Los inventores también han demostrado que varios agentes de ARNí pueden inhibir la expresión de transcritos de influenza viral 5 tanto en células de mamíferos como en cultivo de tejido, en embriones de pollo, y en animales intactos (ratones) . Así el tratamiento con los agentes ARNi es una estrategia efectiva para la reducción o inhibición de la expresión de transcritos objetivo. En particular, los inventores han demostrado que la expresión de transcritos objetivo se puede inhibir en las vías respiratorias (por ejemplo, pulmones) de animales de vida intacta usando varios agentes de suministro y métodos para el suministro de los agentes ARNi, estableciendo de esa manera la factibilidad de usar el ARNi para tratar enfermedades y condiciones que afectan las vías respiratorias, tales como el asma. Es notorio que la inhibición efectiva de transcritos objetivos se logró sin el uso de transfección hidrodinámica. Los ARNi y ARNh preferidos para uso de acuerdo con la presente invención incluyen una región de par base (referida como una porción de duplo o región de duplo) entre 15-29 nucleótidos de longitud, por ejemplo, aproximadamente 19 nucleótidos de longitud, y opcionalmente puede tener terminaciones libres o en rizo. Por ejemplo, la Figura 3 . presenta varias estructuras que se pueden utilizar en la presente invención. La Figura 3A muestra la estructura encontrada para ser activa en el sistema de Drosophila descrito a continuación, el cual también representa una especie que es activa en células de mamíferos. La presente invención abarca la administración de un ARNi que tiene la estructura representada en la Figura 3A a células de mamífero con el propósito de tratar o prevenir enfermedades y condiciones mediadas por IgE que incluyen, pero no se limitan a, rinitis alérgica y asma. Sin embargo, no se requiere que el agente administrado tenga esta estructura. Por ejemplo, la composición administrada puede incluir cualquier estructura capaz de ser procesada in vivo a la estructura de la Figura 3A, en tanto que el agente administrado no lleva a eventos negativos tales como inducción de la respuesta de interferón. (Nótese que el término in vivo, se usa en la presente con respecto a la síntesis, procesamiento, o activación de ARNi o ARNh, generalmente se refiere a eventos que ocurren dentro de una célula como opuestos en un sistema libre de célula. En general, la célula se puede mantener en cultivo de tejido o puede ser parte de un organismo intacto) . La invención también puede comprender la administración de agentes que no son procesados precisamente para la estructura representada en la Figura 3A, mientras que la administración de tales agentes reduce los niveles del transcrito objetivo suficientemente como se discutió en la presente. Las Figuras 3B y 3C presentan dos estructuras alternativas para uso como agentes ARNi en la presente invención. Las figuras 3B y 3C representan estructuras adicionales que se pueden usar para mediar la interferencia de ARN. Estas estructuras de horquilla (tronco-rizo) se pueden procesar intracelularmente para producir una estructura ARNi tal como aquella representada en la Figura 3A. La Figura 3B muestra un agente (ARNh) que comprende una molécula de ARN que contiene dos porciones complementarias que hibridizan a uno u otro para formar una región doble representada como tronco 400, un rizo 410, y una colgadura 320. Preferiblemente, el tronco es entre 15-29 nucleótidos de longitud, por ejemplo, aproximadamente 19 nt de longitud, el rizo es alrededor de 1-20, más preferiblemente alrededor de 4-10, y más preferiblemente alrededor de 6-8 nt de longitud y/o la colgadura es alrededor de 1-20, y más preferiblemente alrededor de 2-15 nt de longitud. En ciertas modalidades de la invención el tronco es mínimamente de 19 nucleótidos de longitud y puede ser hasta aproximadamente 29 nucleótidos de longitud. Un experto ordinario en la técnica palpará que los rizos de 4 nucleótidos o mayores son probablemente menos sujetos a limitaciones esféricas que los rizos más cortos y por lo tanto pueden ser preferidos. En algunas modalidades, la colgadura incluye un fosfato 5' o hidroxilo 3' . Como se discute a continuación, un agente que tiene la estructura representada en la Figura 3B fácilmente puede ser generado por transcripción in Vitro o in vivo; en ' varias modalidades preferidas, el extremo del transcrito será incluido en la colgadura, tal que a menudo la colgadura comprenda una pluralidad de residuos U, por ejemplo 1 y 5 residuos U. El rizo puede estar localizado en cualquiera de las terminaciones 5' ó 3' de la porción que es complementaria al transcrito objetivo cuya inhibición se desea (esto es, la porción de antisentido del ARNh) . La Figura 3C muestra un agente que comprende un círculo de ARN que incluye elementos complementarios suficientes para formar un tronco 400 de aproximadamente 19 bp de longitud. Un agente tal puede mostrar estabilidad mejorada comparada con varios agentes de ARNi diferentes descritos en la presente. En los ARNi que se describen a menudo es conveniente referirse a hebras sentido y antisentido del ARNi . En general, la secuencia de la porción de duplo de la hebra de sentido del ARNi es sustancialmente idéntica a la porción de dirección del transcrito objetivo, mientras que la hebra antisentido del ARNi sustancialmente es complementaria al transcrito objetivo en esta región como se discute posteriormente. Aunque los ARNh contienen una molécula de ARN que autohibridiza, se apreciará que la estructura de duplo que resulta puede ser considerada para comprender hebras o porciones sentido y antisentido. Por lo tanto será conveniente en la presente referirse a hebras sentido y antisentido, o porciones sentido y antisentido, de un ARNh, donde la hebra o porción antisentido es aquel segmento de la molécula que forma o es capaz de formar un duplo y es sustancialmente complementario a la porción dirigida del transcrito objetivo, y la hebra o porción sentido es aquel segmento de la molécula que forma o es capaz de formar un duplo y sustancialmente es idéntica en secuencia a la porción dirigida del transcrito objetivo. Para propósitos de descripción, la discusión a continuación se puede referir a ARNi mejor que a ARNi o ARNh. Sin embargo, como será evidente para uno de experiencia ordinaria en la técnica, las enseñanzas relevantes para la hebra sentido y antisentido de un ARNi generalmente son aplicables a las porciones sentido y antisentido de la porción de tronco de un ARNh que corresponde. Así en general, las consideraciones siguientes aplican también al diseño, selección, y suministro de los ARNh inventivos. Será palpable para aquellos de experiencia ordinaria en la técnica que agentes que tienen cualquiera de las estructuras representadas en la Figura 3, o cualquier otra estructura efectiva como se describe en la presente, pueden estar comprendidos completamente de nucleótidos ARN naturales, o pueden en su lugar incluir uno o más nucleótidos análogos. Una amplia variedad de tales análogos son conocidos en la técnica; los más comúnmente empleados en estudios de ácidos nucleótidos terapéuticos son los fosforotioatos (para alguna discusión de consideraciones involucradas cuando se utilizan fosforotioatos, ver, por ejemplo, Agarwal, Biochim. Biophys. Acta 1489:53, 1999). En particular, en ciertas modalidades de la invención puede ser deseable estabilizar la estructura de ARNi, por ejemplo, por inclusión de análogos de nucleótido en una o más de las terminaciones de hebra libres con el propósito de reducir la digestión, por ejemplo, por exonucleasas. La inclusión de desoxinucleótidos, por ejemplo, pirimidinas tales como desoxitimidinas en una o más terminaciones libres puede servir a este propósito. Alternativa o adicionalmente, puede ser deseable incluir uno o más análogos de nucleótido con el propósito de aumentar o reducir la estabilidad del tronco, en particular comparado con cualquier híbrido que será formado por interacción de una hebra del ARNi (o una hebra de la porción de tronco del ARNh) con un transcrito objetivo. De acuerdo con ciertas modalidades de la invención varias modificaciones de nucleótido se usan selectivamente en cualquiera de las hebras sentido o antisentido. Por ejemplo, puede ser preferible utilizar ribonucleótidos no modificados en la hebra antisentido mientras que se emplean ribonucleótidos modificados y/o desoxiribonucleótidos modificados o no modificados en alguna o todas las posiciones en la hebra sentido. De acuerdo con ciertas modalidades de la invención solamente los ribonucleótidos no modificados se usan en la porción de duplo de la hebra antisentido y/o la antisentido del ARNi mientras que las colgaduras de la hebra antisentido y/o sentido pueden incluir ribonucleótidos y/o desoxiribonucleótidos modificados. En particular, de acuerdo con ciertas modalidades de la invención la hebra sentido contiene una modificación que reduce o elimina el silenciamiento de transcritos complementarios a la hebra sentido mientras que no previene el silenciamiento de transcritos complementarios a la hebra antisentido, como se describe en las Solicitud de Patente de EUA 10/674,159 también pendiente. Numerosos análogos de nucleótido y modificaciones de nucleótido se conocen en la técnica, y se ha explorado su efecto en propiedades tales como hibridización y resistencia a la nucleasa. Por ejemplo, varias modificaciones a la ligadura de azúcar de internucléósido y de base, se han introducido dentro de oligonucleótídos en posiciones seleccionadas, y el efecto resultante relativo al oligonucleótido no modificado comparado. Un sinnúmero de modificaciones se han mostrado para alterar uno o más aspectos del oligonucleótido tales como su capacidad para hibridizar un ácido nucleico complementario, su estabilidad, etc. Por ejemplo, 2' -modificaciones útiles incluyen grupos halo, alcoxi y aliloxi. Las patentes de EUA números 6,403,779; 6,399,754; 6,225,460; 6,127,533; 6,031,086; 6,005,087; 5,977,089, y referencias ahí desglosan una amplia variedad de análogos de nucleótido y modificaciones que pueden ser de uso en la práctica de la presente invención. Ver también Crooke, S. (ed. ) "Antisense Drug Technology: Principies, Strategies, and Applications" (lst ed) , Marcel Deldcer; ISBN: 0824705661; lst edition (2001) y referencias allí presentes. Como se apreciará por alguien de experiencia ordinaria en la técnica, los análogos y modificaciones pueden ser evaluados usando, por ejemplo, los ensayos descritos en la presente u otros ensayos apropiados, con el propósito de seleccionar aquellos que reducen efectivamente la expresión de genes virales. En ciertas modalidades de la invención el análogo o modificaciones resultan en un ARNi con una capacidad de absorción aumentada (por ejemplo, capacidad de absorción aumentada a través de una capa de mucosa, absorción incrementada, etc.), estabilidad aumentada en la corriente sanguínea o dentro de células, capacidad incrementada para cruzar membranas de célula, etc. Como se apreciará por uno de experiencia ordinaria en la técnica, los análogos o modificaciones pueden resultar en Tm alterada, lo cual puede resultar en tolerancia incrementada de no coincidencia entre la secuencia ARNi y el objetivo mientras que resulta en supresión efectiva. Además será apreciado por aquellos de experiencia ordinaria en la técnica que los agentes de ARNi efectivos para uso de acuerdo con la presente invención pueden comprender una o más porciones que no es/son nucleótidos o análogos de nucleótido. En general, el ARNi y ARNh inventivo preferiblemente incluirá una región (la "región inhibidora" o "región de duplo") que contiene una hebra (la hebra "guía" o "antisentido") que sustancialmente es complementaria a una porción del transcrito objetivo (porción objetivo), tal que se puede formar un híbrido preciso in vivo entre esta hebra y el transcrito objetivo. En ciertas modalidades preferidas de la invención, la hebra antisentido del ARNi o ARNh es perfectamente complementario (100%) al transcrito objetivo; en otras modalidades, uno o más residuos no complementarios están localizados dentro del duplo formado por la hebra antisentido ARNi o ARNh y el transcrito objetivo. Puede ser preferible evitar los no coincidentes en la porción central de este duplo (ver, por ejemplo, Elbashir y colaboradores, EMBO J. 20:6877,2001, incorporado en la presente por referencia) . En general, la hebra antisentido del ARNi es sustancialmente complementaria a la porción dirigida del transcrito objetivo, mientras que la secuencia de la hebra sentido del ARNi o ARNh es sustancialmente complementaria a la hebra antisentido. Comúnmente, por lo tanto, la hebra sentido contiene una porción que es sustancialmente idéntica a la porción de dirección del transcrito objetivo. Sin embargo, uno de experiencia ordinaria en la técnica apreciará que el porcentaje de complementariedad exhibido por el duplo formado entre la hebra antisentido y la porción objetivo necesita no .ser el mismo que el porcentaje de complementariedad exhibido por el duplo formado entre las hebras sentido y antisentido del ARNi o ARNh (la región inhibidora) . En ciertas modalidades preferidas de la invención, la hebra antisentido ARNi o ARNh hibridiza con una porción objetivo que incluye secuencias exónicas en el transcrito objetivo. La hibridización con las secuencias intrónicas no está excluida, pero generalmente aparenta no ser preferida en células de mamíferos. En ciertas modalidades preferidas de la invención, la hebra antisentido ARNi o ARNh hibridiza exclusivamente con secuencias exónicas. En algunas modalidades de la invención, la hebra antisentido ARNi o ARNh hibridiza con una porción objetivo que incluye solamente secuencias dentro de un exón simple; en otras modalidades la porción objetivo se crea por empalme u otra modificación de un transcrito primario. Una región objetivo que está disponible para hibridización con una hebra ARNi o ARNh, que resulta en empalme y degradación del transcrito, se puede utilizar de acuerdo con la presente invención. No obstante, aquellos de experiencia ordinaria en la técnica apreciarán que, en algunos casos, puede ser deseable seleccionar regiones particulares de transcrito de gen objetivo como objetivos de hibridizacióri ARNi o ARNh. Por ejemplo, puede ser deseable evitar secciones de transcrito de gen objetivo que puedan ser divididas con otros transcritos cuya degradación no es deseada. Las regiones de codificación y las regiones más cercanas a la terminación 3' del transcrito que a la terminación 5' son preferidas en ciertas modalidades de la invención. Las secuencias ARNi y ARNh se pueden seleccionar de acuerdo con una variedad de planteamientos. Como se mencionó anteriormente, los ARNi y ARNh preferiblemente incluyen una región (la "región de duplo") que comprende una hebra antisentido que es sustancialmente complementaria o, preferiblemente completamente complementaria, a una porción del transcrito objetivo (la "porción objetivo"), tal que se pueda formar un híbrido in vivo entre esta hebra y el transcrito objetivo, y una hebra sentido que comprende una porción que es sustancialmente o perfectamente complementaria con la hebra antisentido. La región de duplo, también referida como la "región de núcleo" se entiende que incluye colgaduras de 3' , aunque las colgaduras, si están presentes, también pueden ser complementarias al transcrito objetivo o su complemento (por ejemplo, la colgadura 3' de la hebra ARNi (o ARNh) antisentido puede ser complementaria al transcrito objetivo y la colgadura 3' de la hebra ARNi (o ARNh) sentido puede ser idéntica a los nucleótidos que corresponden en el transcrito objetivo, esto es, aquellos nucleótidos inmediatamente 3' del sitio objetivo) . Mientras que generalmente se prefiere que la hebra antisentido ARNi o ARNh sea perfectamente complementaria a la porción objetivo y que las hebras antisentido ARNi y ARNh son perfectamente complementarias a otra dentro de las porciones que participan en la formación de la región de duplo, menos que la complementariedad perfecta es aceptable y . en ciertas modalidades de la invención es deseable. Las ARNi y ARNh que comprenden una hebra antisentido que es menor que 100% de complementariedad para el transcrito objetivo pueden mediar ARNi. Además, la ARNi y ARNh comprenden hebras antisentido y sentido que son menos que perfectamente complementarias a otra dentro de la región de núcleo también pueden mediar ARNi. Para propósitos de descripción en la presente, se asumirá que la longitud de una región de núcleo ARNi o ARNh será de 19 nucleótidos, y una secuencia de 19 nucleótidos es referida como N19. Sin embargo, la región de núcleo puede estar en el rango en longitud desde 15 hasta 29 nucleótidos. Comúnmente la longitud de cada una de las dos hebras es aproximadamente entre 21 y 25 nucleótidos aunque otras longitudes también son aceptables. Comúnmente las colgaduras, si están presentes, son de 2 nucleótidos de longitud, aunque pueden ser de 1 nucleótido o mayor que 2 nucleótidos. Además, se asume que la región inhibidora ARNi N19 será seleccionada tal que la porción de la hebra antisentido que es complementaria al transcrito objetivo es perfectamente complementaría al transcrito objetivo, a pesar de que como se mencionó anteriormente uno o más no coincidencias puedan ser toleradas. En general es deseable evitar los no coincidentes en la región de duplo si se desea un ARNi que tiene capacidad máxima para reducir expresión del transcrito objetivo vía el camino de inhibición transcripcional (camino de desdoblamiento de transcrito) . Sin embargo, como se describe a continuación, puede ser deseable seleccionar un ARNi o ARNh que exhibe menos que la capacidad máxima para reducir la expresión del transcrito objetivo, o puede ser deseable emplear un ARNi que actúa vía un camino alternativo que involucra represión transnacional. En tales situaciones puede ser deseable incorporar uno o más no coincidentes en la porción de duplo del ARNi o ARNh. En ciertas modalidades de la invención preferiblemente menos que cuatro residuos o alternativamente menos que alrededor de 15% de residuos en la región inhibidora son no correspondidos. En ciertas modalidades de la invención preferiblemente menos que cuatro residuos o alternativamente menos que alrededor de 15% de residuos en la porción de la hebra antisentido que está dentro de la región inhibidora son no correspondidos. En algunos casos la secuencia de ARNi o ARNh se selecciona tal que la hebra antisentido completa (incluyendo la colgadura 3' - si está presente) es perfectamente complementaria al transcrito objetivo. En casos donde la colgadura es UU, TT, o dTdT, ésta requiere que la región objetivo de 19 bp del transcrito dirigido sea precedido por AA (esto es, que los dos nucleótidos inmediatos 5' de la región objetivo sean AA) . Similarmente la secuencia ARNi o ARNh se puede seleccionar tal que la hebra sentido completa (incluyendo la colgadura 3' ) sea preferiblemente idéntica al transcrito objetivo. En casos donde la colgadura es UU, TT, o dTdT, ésta requiere que la región objetivo de 19 bp del transcrito dirigido sea seguido por UU (esto es, que los dos nucleótidos inmediatos 3' de la región objetivo del transcrito objetivo sean UU) . Sin embargo, no es necesario que las colgaduras sean ya sea complementarias o idénticas al transcrito objetivo. Cualquier secuencia deseada (por ejemplo, UU) simplemente puede ser anexada a las terminaciones 3' de las regiones de núcleo de 19 bp antisentido o sentido de un ARNi o ARNh para generar la o las colgaduras 3' . En general, se emplean las colgaduras que contienen una o más pirimidinas usualmente U, T, o dT. Cuando se sintetizan químicamente los ARNi o ARNh puede ser más conveniente usar T mejor que U, mientras que el uso de dT mejor que T puede conferir estabilidad aumentada. Como se indicó anteriormente, la presencia de colgaduras es opcional y, cuando están presentes, necesitan no tener ninguna relación con la misma secuencia objetivo. Por ejemplo, los ARNi y ARNh se pueden seleccionar por (i) identificación de regiones de 23 nt en el transcrito objetivo que consiste de regiones de 19 nt (porciones objetivo) flanqueadas por dos residuos AA en la terminación 5' y dos residuos UU en la terminación 3' y luego (ii) selección de ARNi y ARNh que tienen una hebra antisentido perfectamente complementaria a nucleótidos 1-21 de la región de 23 nt y una hebra sentido perfectamente idéntica a nt 3-23 de la región de 23 nt . Se apreciará que cuando el transcrito objetivo es un mARN, las secuencias ARNi y ARNh se pueden seleccionar con referencia a la secuencia ADNc que corresponde mejor que a la misma secuencia de ARNm, puesto que la hebra sentido del ADNc es idéntico al ARNm excepto que el ADNc contiene T mejor que U. No todos los ARNi y ARNh son igualmente efectivos en reducción o inhibición de expresión de cualquier gen objetivo particular. (Ver, por ejemplo, Holen, T., y colaboradores, Nucleic Acids Res., 30 (8 ): 1757-1766, que reporta variabilidad en la eficacia de diferentes ARNi) , y una variedad de consideraciones se pueden emplear para aumentar la probabilidad de que un ARNi seleccionado pueda ser efectivo. Por ejemplo, puede ser preferible seleccionar porciones objetivo dentro de exones mejor que intrones. En general, las porciones objetivo cercanas a la terminación 3' de un transcrito objetivo pueden' ser referidas a porciones objetivo cercanas a la terminación 5' de un transcrito objetivo. Los ARNi generalmente pueden ser diseñados de acuerdo con principios descritos en la Guía de Aplicación y Referencia Técnica de ARNi, disponible de Dharmacon Research, Inc., Lafayette, CO 80026, un proveedor comercial de reactivos de ARN, o en Dharmacon Technical Bulletin # 003-Revision B, "ARNi Oligonucleotides for RNAi Applications". La Guía de Aplicación y Referencia Técnica de ARNi contiene una variedad de información relevante para parámetros de diseño de ARNi y ARNh, síntesis, etc., y está incorporada en la presente por referencia. Generalmente es preferible seleccionar los ARNi y ARNh con un contenido de GC entre 30% y 60% y para evitar cadenas de tres o más nucleótidos idénticos, por ejemplo, GGG, CCC, etc. Con el propósito de lograr la inhibición específica del transcrito objetivo mientras se evita la inhibición de otros transcritos, es deseable seleccionar secuencias que son únicas o carecen de homología significante a otras secuencias presentes en la célula u organismo al cual el ARNi o el ARNh se suministra, para la posible extensión. Esto se puede lograr mediante búsqueda en bases de datos disponibles públicamente, por ejemplo, Genbank, secuencia de genoma humano de bosquejo, etc.,' para identificar cualquier secuencia que sea homologa a cualquier hebra de una secuencia de ARNi o ARNh propuesto y evitar el uso de ARNi o ARNh para lo cual se encuentra una o más secuencias sustancialmente idénticas. Puede ser preferible seleccionar los ARNi o ARNh que dirigen una porción del transcrito que es idéntico o altamente conservado (por ejemplo, que difiere por 3, más preferiblemente 2, o todavía más preferiblemente 1 nucleótido por 19 nucleótidos, y más preferiblemente idéntico) en los genes de ratón y humano que corresponden. Esto permite la evaluación de un agente ARNi en líneas de célula de ratón y en modelos de ratón de enfermedad y aumentar la probabilidad de que una secuencia identificada como efectiva en la inhibición de un gen objetivo en ratones también demostrará efectividad en la inhibición del gen objetivo que corresponde en humanos. Las tablas 1-26 listan secuencias de porciones objetivo preferidas de transcritos que codifican la cadena FCeR a, la cadena FCeR ß, c-Kit, Lyn, Syk, ICOS, OX40L, CD40, CD80, CD86, RelA, RelB, ligando 4-1BB, TLRl, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, CD83, SLAM, cadena ? común, y COX-2, respectivamente. De acuerdo con ciertas modalidades de la invención, para diseñar un ARNi con base en cualquiera de las secuencias listadas en las tablas, los nucleótidos 1-19 de la secuencia se selecciona como la secuencia de la región de núcleo (duplo) de la hebra sentido ARNi, esto es, la porción que participará en formación de duplo. Una secuencia complementaria de esta secuencia se selecciona para la hebra antisentido. Una colgadura 3' de' dos nt se agrega a ambas hebras sentido y antisentido. En ciertas modalidades de la invención la colgadura es dTdT aunque otras colgaduras se pueden usar, como se describió anteriormente. En ciertas modalidades de la invención la colgadura 3' para la hebra sentido consiste de los dos nucleótidos en el gen inmediato 3' a la secuencia de 19 nucleótidos listada en la tabla, tal que la hebra sentido es idéntica a una porción de 21 nt de la secuencia ADNc (opcionalmente con el reemplazo de T por U) . En ciertas modalidades de la invención la colgadura 3' para la hebra antisentido consiste de los dos nucleótidos en el gen complementario a los dos nucleótidos inmediatos 5' a la hebra sentido de 19 nucleótidos, tal que la hebra antisentido es complementaria a una porción de 21 nt de la secuencia de cADN. Una secuencia complementaria a los nucleótidos 1-21 de cada secuencia se selecciona como la hebra antisentido que corresponde. Por ejemplo, para diseñar un isARN con base en la secuencia de ADNc FCeRa-268 (TTGGTCATTGTGAGTGCCA = SEQ ID NO: 316), la secuencia 5' -UUGGUCAUUGUGAGUGCCA-3' (SEQ ID NO: 1) se selecciona como la región de núcleo de la hebra sentido, y una secuencia complementaria, 5'-UGGCACUCACAAUGACCAA-3' (SEQ ID NO: 317), se selecciona como la región de núcleo de la hebra antisentido. Una colgadura 3' de dos nt que consiste de dTdT se agrega a cada hebra, resultando en las secuencias 5'- UUGGUCAUUGUGAGUGCCAdTdT-3' (SEQ ID NO: 318) (hebra sentido) y 5'-UGGCACUCACAAUGACCAAdTdT-3' (SEQ - ID NO: 319) (hebra antisentido) . La hibridización de las hebras sentido y antisentido resulta en un ARNi que tiene una región de duplo de núcleo de par base 19, con cada hebra que tiene una colgadura de OH 3' de 2 nucleótidos. Las secuencias ARNi sentido y antisentido se pueden obtener similarmente de cada secuencia listada en las tablas. Se apreciará que las regiones de núcleo de 19 nt se pueden usar para diseñar una variedad de moléculas ARNi que tienen diferentes colgaduras de 3' en cualquiera o ambas hebras sentido y antisentido. En general, la invención abarca los ARNi en los cuales la hebra sentido incluye una región de núcleo altamente conservada mientras que las colgaduras 3' pueden variar. La colgadura 3' en la hebra de sentido necesita no corresponder a nucleótidos presentes inmediatos a 3' de la región de núcleo en la secuencia ADNc. La colgadura 3' en la hebra antisentido necesita no ser complementaria a los nucleótidos inmediatos a 5' de la región de núcleo en la secuencia ADNc. De acuerdo con la presente descripción anterior, las secuencias presentadas en las tablas se pueden usar para diseñar una variedad de ARNi que no tienen una estructura que consiste de una región de núcleo de duplo de 19nt con colgaduras 3' idénticas en cada hebra. Por ejemplo, la secuencia de las colgaduras se puede variar, y la presencia de una o ambas colgaduras puede no ser esencial para la inhibición mediada por ARNi efectiva de expresión del gen. Además, aunque la longitud preferida de la porción de duplo de un ARNi puede ser de 19 nucleótidos, pueden ser efectivas porciones de duplos más cortas o más largas. Así los ARNi diseñados de acuerdo con las secuencias presentadas en las tablas pueden incluir solamente un subconjunto de los nucleótidos listados en la hebra sentido. Por lo tanto la invención proporciona los ARNi que tienen hebras sentido con secuencias que incluyen todos o una porción de los 19 nucleótidos en las secuencias listadas en las tablas. Generalmente, la secuencia de la hebra sentido de un ARNi diseñado de acuerdo con una secuencia presentada en las tablas incluirá por lo menos 15 nucleótidos consecutivos, más preferiblemente por lo menos 17 nucleótidos consecutivos, y todavía más preferiblemente 19 nucleótidos consecutivos de la secuencia listada. Generalmente la secuencia de la hebra antisentido de un ARNi diseñado de acuerdo con una secuencia presentada en las tablas incluirá por lo menos 15 nucleótidos consecutivos, más preferiblemente por lo menos 17 nucleótidos consecutivos, y todavía más preferiblemente 19 nucleótidos consecutivos que son perfectamente complementarios a una porción de la secuencia listada. En ciertas modalidades de la invención la secuencia de la hebra sentido de un ARNi diseñado de acuerdo con una secuencia presentada en las tablas incluirá por lo menos 15 nucleótidos consecutivos, más preferiblemente por lo menos 17 nucleótidos consecutivos, y todavía más preferiblemente 19 nucleótidos consecutivos de la secuencia listada, con una diferencia de nucleótido de la secuencia listada. En ciertas modalidades de la invención la secuencia de la hebra antisentido de un ARNi diseñado de acuerdo con una secuencia presentada en las tablas incluirá por lo menos 15 nucleótidos consecutivos, más preferiblemente por lo menos 17 nucleótidos consecutivos, y todavía más preferiblemente 19 nucleótidos consecutivos que son perfectamente complementarios a una porción de la secuencia listada excepto que un nucleótido puede diferir. En ciertas modalidades de la invención la secuencia de la hebra sentido de un ARNi diseñado de acuerdo con una secuencia presentada en las tablas incluirá por lo menos 15 nucleótidos consecutivos, más preferiblemente por lo menos 17 nucleótidos consecutivos, y todavía más preferiblemente 19 nucleótidos consecutivos de la secuencia listada, con hasta dos nucleótidos diferentes de la secuencia listada. En ciertas modalidades de la invención la secuencia de la hebra antisentido de un ARNi diseñado de acuerdo con una secuencia presentada en las tablas incluirá por lo menos 15 nucleótidos consecutivos, más preferiblemente por lo menos 17 hucleótidos consecutivos, y todavía más preferiblemente 19 nucleótidos consecutivos que son perfectamente complementarios a una porción de la secuencia listada excepto que dos nucleótidos pueden diferir. En ciertas modalidades de la invención la secuencia de la hebra sentido de un ARNi diseñado de acuerdo con una secuencia presentada en las tablas incluirá por lo menos 15 nucleótidos consecutivos, más preferiblemente por lo menos 17 nucleótidos consecutivos, y todavía más preferiblemente 19 nucleótidos consecutivos de la secuencia listada con hasta tres nucleótidos diferentes de la secuencia alistada. En ciertas modalidades de la invención la secuencia de la hebra antisentido de un ARNi diseñado de acuerdo con una secuencia presentada en las tablas incluirá por lo menos 15 nucleótidos consecutivos, más preferiblemente por lo menos 17 nucleótidos consecutivos, y todavía más preferiblemente 19 nucleótidos consecutivos que son perfectamente complementarios a una porción de la secuencia listada excepto que tres nucleótidos pueden diferir. En ninguna de estas modalidades, las diferencias pueden ser una inserción eliminación, o sustitución de un nucleótido o, en ciertas modalidades de la invención, más de un nucleótido, con respecto a la secuencia original. La invención proporciona los ARNh que tienen hebras sentido y antisentido como se describió anteriormente para ARNi. Las secuencias de hebras antisentido y sentido ARNi o ARNh que tienen diferencias como se describió anteriormente están consideradas sustancialmente complementarias o sustancialmente idénticas a las secuencias listadas, respectivamente . Alguien de experiencia ordinaria en la técnica apreciará que los ARNi pueden exhibir un rango de temperaturas de fusión (Tm) y temperaturas de disociación (Td) de acuerdo con los principios precedentes. La Tm se define como la temperatura a la cual el 50% de un ácido nucleico y su complemento perfecto están en duplo en solución mientras que la Td, definida como la temperatura a una concentración de sal particular, y la concentración de hebra total en la cual el 50% de un oligonucleótido y su complemento de enlace de filtro perfecto son en duplo, relativos a situaciones en las cuales una molécula se inmoviliza en un filtro. Ejemplos representativos de las Tm aceptables se pueden determinar fácilmente usando métodos bien conocidos en la técnica, ya sea experimentalmente o usando ecuaciones derivadas empírica o teóricamente apropiadas, con base en las secuencias ARNi descritas en los Ejemplos de la presente. Una manera común de determinar el Tm actual es usar una célula de termostato en un . espectrofotómetro. Si la temperatura se gráfica contra la absorbancia, se observará una curva en forma de S con dos mesetas. La absorbancia que se lee a la mitad entre las mesetas corresponde a Tm. La ecuación más simple para Td es la regla de Wallace: Td = 2(A+T) + 4(G+C) Wallace, R. B. ; Shaffer, J. ; Murphy, R. F. ; Bonner, J. ; Hirose, T.; Itakura, K. , Nucleic Acids Res. 6,3543 (1979). La naturaleza de la hebra objetivo inmovilizada proporciona un decrecimiento neto en la Tm observada relativa al valor cuando ambas la objetivo y la sonda están libres en solución. La magnitud de la disminución es aproximadamente de 7-8 °C. Otra ecuación útil para el ADN la cual es válida para secuencias más grandes que 50 nucleótidos de pH 5 hasta 9 dentro de valores apropiados para concentración de cationes monovalentes, es: Tm = 81.5 + 16.6 log M + 41(XG+XC) -500/L -0.62F, donde M es la concentración molar de cationes monovalentes, XG y XC son las fracciones en mol de G y C en la secuencia, L es la longitud de la hebra más corta en el duplo, y F es la concentración molar de formamida (Howley, P. M; Israel, M. F. ; Law, M-F. ; Martin, M. A., J. Biol. Cherm. 254,4876). Ecuaciones similares para ARN son: Tm = 79.8 + 18.5 log M + 58.4(XG+XC) + 11.8 (XG+XC) 2-820/L-O .35F y para híbridos de ADN-ARN: Tm = 79.8 + 18.5 log M + 58.4 (XG+XC) + 11.8 (XG+XC) 2-820/L-0.50F. Estas ecuaciones se derivan de híbridos objetivo inmovilizados. Varios estudios han derivado ecuaciones precisas para Tm usando conjuntos de base termodinámica para interacciones vecinas más cercanas. La ecuación para ADN y ARN es: Tm = (1000?H)/A + ?S + Rln (Ct/4) - 273.15 + 16.6 In [Na+] , donde ?H (Kcal/mol) es la suma de los cambios de entalpia de vecino más cercano para híbridos, A(eu) es una constante que contiene correcciones para la iniciación de la hélice, ?S (eu) es la suma de los cambios de entropía de vecino más cercana, R es la constante de Gas (1.987 cal deg-1 mol-1) y Ct es la concentración molar total de hebras. Si la hebra es auto complementaria, Ct/4 se reemplaza por Ct. Los valores para parámetros termodinámicos están disponibles en la literatura. Para ADN ver Breslauer, y colaboradores, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 83, 3746-3750, 1986. Para ARN:DNA duplos ver Sugimoto, N., y colaboradores, Biochemistry, 34 (35) : 11211-6, 1995. Para ARN ver Freier, S. M., y colaboradores, Proc. Nati. Acad. Sci. 83,9373-9377, 1986. Rychlik, W., y colaboradores, Nucí. Acids Res. 18(21), 6409-6412, 1990. Varios programas de cómputo para el cálculo de Tm son ampliamente disponibles. Ver, por ejemplo, el sitio de Web que tiene URL www.basic.nwu. edu/biotools/oligocalc. html . De acuerdo con ciertas modalidades de la invención, los ARNi preferidos se seleccionan de acuerdo con el criterio de diseño descrito en Semizarov, D. , y colaboradores, Proc. Nati. Acad. Sci., 100 (11) , pp.' 6347-6352. En algunas modalidades de la invención, la hebra antisentido ARNi o ARNh hibridiza a un sitio objetivo que incluye una o más secuencias de 3' UTR o está completamente dentro del 3' UTR. Las modalidades de la invención pueden tolerar un número grande de no coincidentes en el duplo ARNi/plantilla, y particularmente pueden tolerar no coincidentes dentro de la región central del duplo. En efecto, algunos no coincidentes pueden ser deseables como la formación de duplo ARNi/plantilla en el 3' UTR puede inhibir la expresión de una proteína codificada mediante el transcrito de plantilla mediante un mecanismo relacionado pero distinto de la inhibición de ARN clásica. En particular, existe evidencia para sugerir que los ARNi que enlazan al 3' UTR de un transcrito de plantilla pueden reducir la translación del transcrito mejor que disminuir su estabilidad. Por ejemplo, cuando hibridiza con el transcrito objetivo tal como los ARNi frecuentemente incluyen dos extensiones de complementariedad perfecta separados por una región de no coincidencia. Una variedad de estructuras son posibles. Por ejemplo, el ARNi o ARNh, y/o el duplo formado por la hebra antisentido ARNi o ARNh y el transcrito objetivo, puede incluir una o múltiples áreas de menos que complementariedad perfecta (por ejemplo, nucleótidos de no coincidencia, protuberancias, etc.). Comúnmente las extensiones de complementariedad perfecta son por lo menos de 5 nucleótidos de longitud, por ejemplo, 6, 7, o más nucleótidos de longitud, mientras que las regiones de no coincidencia pueden ser, por ejemplo, de 1, 2, 3, ó 4 nucleótidos de longitud. Los ARN de doble hebra cortos que comprenden una hebra antisentido que exhibe menos que complementariedad perfecta a un transcrito objetivo puede silenciar el gen de expresión mediante represión translacional además, o en lugar de, conducir al desdoblamiento del transcrito objetivo. Por ejemplo, como se muestra en la Figura 4, la enzima DICER que genera los ARNi en el sistema de la Drosophila discutido anteriormente y también en una variedad de organismos, se conoce porque también hace posible procesar un sustrato de ARN temporal (ARNt) pequeño dentro de un agente inhibidor que, cuando enlaza dentro del 3' UTR de un transcrito objetivo, bloquea la translación del transcrito (ver Figura 4; Grishok, A., 'y colaboradores, Cell 106, 23-24, 2001; Hutvagner, G., y colaboradores, Science, 293, 834-838, 2001; Ketting, R. , y colaboradores, Genes Dev., 15, 2654-2659. Los ARN de ~22 nucleótidos, generalmente referidas como microARN (mARNi) se han identificado en un sinnúmero de organismos que incluyen mamíferos, sugiriendo que este mecanismo de silenciamiento de gen post trañscripcional puede ser extendido (Lagos-Quintana, M. y colaboradores, Science, 294, 853-858, 2001; Pasquinelli, A., Trends in Genetics, 18(4), 171-173, 2002, y referencias en los dos artículos anteriores) . Los microARN se transcriben como ARN de horquilla precursor de ~70 nt que contienen un rizo de "4-15 nt y, comúnmente, una o más áreas de no coincidencia o protuberancias en el "tronco. Los microARN procesados de tales precursores han demostrado que bloquean la translación de transcritos que contienen sitios objetivo en células de mamíferos (Zeng, Y., y colaboradores, Molecular Cell, 9, 1-20, 2002) aunque también pueden reconocer sus objetivos y dirigir el desdoblamiento de ARN (Hutvagner, G. y Zamore, P. D., Science, 297: 2056-2060, 2002; Zeng, Y., y colaboradores, Mol. Cell 9: 1327-1333, 2002). Ambros, V., y colaboradores, han propuesto un sistema uniforme para anotación de microARN y para distinguir entre los ARNi y mARNi endógenos (Ambros, V., y colaboradores, RNA, 9: 277-279, 2003.) Ver también, Bartel, D. , Cell, 116(2): 281-97, 2004. Las estructuras de horquilla diseñadas para imitar precursores ARNi y/o mARNi se procesan intracelularmente dentro de moléculas capaces de reducir o inhibir la expresión de transcritos objetivos (McManus, M. T., y colaboradores, RNA, 8: 842-850, 2002). Estas estructuras de horquilla, las cuales estuvieron basadas en los ARNi clásicos que consisten de dos hebras de ARN formando una estructura de duplo de complementariedad 100% fueron clasificadas como horquillas clase I o clase II. Las horquillas clase I incorporaron un rizo en la terminación 5' ó 3' de la hebra ARNi antisentido (esto es, la hebra complementaria para el transcrito objetivo cuya inhibición se desea) pero de otra manera fueron idénticas a los ARNi clásicos .- Las de clase II se parecieron a precursores mARNi en que incluyeron una región de duplo de 19 nt y un rizo en cualquiera de las terminaciones 3' ó 5' de la hebra antisentido del duplo además de uno o más no coincidentes de nucleótido en el tronco. Estas moléculas fueron procesadas intracelularmente dentro de estructuras de duplos de ARN pequeños capaces de silenciar la mediación. Ellas aparentaron ejercer sus efectos a través de la degradación del mARN objetivo mejor que a través de la represión transnacional como se pensó que sería el caso para los mARNi que ocurren naturalmente. Los ARNi que tienen estructuras de duplos de complementariedad perfecta pero cuya hebra antisentido formó un duplo de complementariedad menor que perfecta con un objetivo , (esto es, el duplo contenía una protuberancia) , aparentaron silenciar la expresión del gen mediante la inhibición de la translación (Doench, J. , y colaboradores, Genes & Dev., 17:438-442, 2003). Así, es evidente que las moléculas de ARN que contienen estructuras de duplos, una porción de las cuales es sustancialmente o perfectamente complementaria a un transcrito objetivo, mediante el silenciamiento a través de por lo menos dos mecanismos diferentes. Para los propósitos de la presente invención, una porción de cualquier ARN del cual enlaza a un transcrito objetivo y reduce su expresión, ya sea por provocación de degradación, por inhibición de translación, o por otros medios, se considera que es un agente de ARNi y es útil en la práctica de la presente invención. Cualquier composición o método des-crito en la presente puede ser limitado específicamente para ciertas estructuras de ARN. Aquellos de experiencia ordinaria en la técnica apreciarán fácilmente que los agentes de ARNi inventivos pueden ser preparados de acuerdo con cualquier técnica disponible que incluyen, pero no se limitan a síntesis química, desdoblamiento enzimático o químico in vivo o in Vitro, o transcripción de plantilla in vivo o in Vitro. Como se señaló anteriormente, los agentes ARNi inventivos pueden ser suministrados como hebras de ARN simples que incluyen porciones de auto complementariedad (ARNh) , o como dos (o posiblemente más) hebras hibridizadas una a la otra (ARNi) . Por ejemplo, dos hebras de ARN de 21 nt separadas se pueden generar, cada una de las cuales contienen una región de 19 nt de complementariedad con la otra, y las hebras individuales pueden ser hibridizadas juntas para generar una estructura tal como aquella representada en la Figura 3A. Alternativamente, cada hebra puede ser generada por transcripción de un promotor, ya sea in Vitro o in vivo. Por ejemplo, un constructo puede ser proporcionado conteniendo dos regiones transcribibles separadas, cada uno de los cuales genera un transcrito de 21 nt que contiene una región de 19 nt complementaria con la otra. -Alternativamente se puede utilizar un constructo simple que contiene promotores de oposición Pl y P2 y terminadores ti y t2 posicionados de manera que dos transcritos diferentes, cada uno de los cuales es por lo menos parcialmente complementario al otro, se generan como se indica en la Figura 5. En otra modalidad, un agente ARNi inventivo (por ejemplo, un ARNh) se genera como un transcrito simple, por ejemplo por transcripción de una unidad de transcripción simple que comprende regiones de auto complementariedad. La Figura 6 representa una modalidad tal de la presente invención. Como se indicó, se emplea una plantilla que incluye la primera y segunda regiones de complementariedad, y opcionalmente incluye una región de rizo. Se puede utilizar una plantilla tal para transcripción in Vitro o in vivo, con selección apropiada del promotor (y opcionalmente otros elementos reguladores) . La presente invención abarca constructos de gen capaces de servir como plantillas para la transcripción de una o más hebras de ARNi o ARNh. La transcripción in Vitro se puede realizar usando una variedad de sistemas disponibles que incluyen los sistemas de promotor/polimerasa T7, SP6, y T3 (por ejemplo, aquellos disponibles comercialmente de Promega, Clontech, New England Biolabs, etc.) . Como será apreciado por uno de experiencia ordinaria en la técnica, el uso de los promotores T7 ó T3 comúnmente requiere una secuencia ARNi que tiene dos residuos G en la terminación 5' mientras que el uso del promotor SP6 comúnmente requiere una secuencia ARNi que tiene una secuencia GA en su terminación 5' . Los vectores que incluyen el promotor T7, SP6, o T3 son bien conocidos en la técnica y fácilmente pueden ser modificados para dirigir la transcripción de ARNi. Cuando los ARNi se sintetizan in Vitro se les puede permitir hibridizar antes de la transfección o suministro a un sujeto. Se entiende que las composiciones de ARNi inventivas necesitan no consistir completamente de moléculas bicatenarias (hibridizadas) . Por ejemplo, composiciones de ARNi pueden incluir una porción pequeña de ARN de hebra sencilla. Esto puede ocurrir, por ejemplo, como un resultado del equilibrio entre las moléculas hibridizadas y no hibridizadas, debido a las relaciones desiguales de las hebras de ARN sentido y antisentido, debido a la terminación transcripcional antes de la síntesis de ambas porciones de un ARN de auto complementariedad, etc. Generalmente, las composiciones preferidas en por lo menos aproximadamente 80% de ARN de doble hebra, por lo menos aproximadamente 90% de ARN de doble hebra, por lo menos aproximadamente 95% de ARN de doble hebra, o aún por lo menos aproximadamente 99-100% de ARN de doble hebra. Sin embargo, las composiciones de ARNi pueden contener menos que 80% de ARN hibridizado proporcionado que contiene suficiente ARN de doble hebra para ser efectivo. Aquellos de experiencia ordinaria en la técnica apreciarán que, cuando los agentes de ARNi inventivos están para ser generados in vivo, generalmente es preferible que sean producidos vía transcripción de una o más unidades de transcripción. El transcrito primario opcionalmente puede ser procesado (por ejemplo, mediante una o más enzimas celulares) con el propósito de generar el agente final que realiza la inhibición del gen. Además se apreciará que el promotor y/o los elementos reguladores apropiados se pueden seleccionar fácilmente para permitir la expresión de las unidades de transcripción relevantes en células de mamíferos. En algunas modalidades de la invención, puede ser deseable utilizar un promotor regulable; en otras modalidades, puede ser deseada la expresión constitutiva. En ciertas modalidades preferidas de la invención, el promotor utilizado para dirigir la expresión in vivo de una o más unidades de transcripción ARNi o ARNh es un promotor para ARN de polimerasa III (pol III) . La Pol III dirige la síntesis de transcritos pequeños que terminan dentro de una extensión de 4-5 residuos T. Ciertos promotores de Pol II tales como los promotores U6 ó Hl no requieren de elementos reguladores que actúen en cis (diferentes del primer nucleótido transcrito) dentro de la región transcrita y así se prefieren de acuerdo con ciertas modalidades de la invención puesto que permiten fácilmente la selección de secuencias de ARNi deseadas. En el caso de promotores U6 que ocurren naturalmente el primer nucleótido transcrito es guanosina, mientras que en el caso de los promotores Hl que ocurren naturalmente - el primer nucleótido transcrito es adenina. (Ver por ejemplo, Yu, J. , y colaboradores, Proc. Nati. Acad. Sci., 99(9), 6047-6052 (2002); Sui, G. , y colaboradores, Proc. Nati. Acad. Sci., 99(8), 5515-5520 (2002); Paddison, P., y colaboradores, Genes and Dev., 16, 948-958 (2002); Brummelkamp, T., y colaboradores, Science, 296, 550-553 (2002); Miyagashi, M. and Taira, K., Nat.

Biotech., 20,497-500 (2002); Paul, C, y colaboradores, Nat. Biotech., 20,505-508 (2002); Tuschl, T., y colaboradores, Nat. Biotech., 20,446-448 (2002). Así en ciertas modalidades de la invención, por ejemplo, donde la transcripción se conduce por un promotor U6, el nucleótido 5' de las secuencias ARNh es G. En ciertas modalidades diferentes de la invención, por ejemplo, donde la transcripción se conduce por un promotor Hl, el nucleótido 5' puede ser A. De acuerdo con ciertas modalidades de la invención los promotores para ARN de polimerasa II (Pol II) también se pueden usar como se describe, por ejemplo, en Xia, H., y colaboradores, Nat. Biotechnol., 20, pp. 1006-1010, 2002. Como se describe en el contenido, se pueden emplear los constructos en los cuales una secuencia de horquilla es yuxtapuesta dentro de la proximidad cercana a un sitio inicial de transcripción y seguido por un cásete de poli A, que resulta en colgaduras mínimas o ninguna en la horquilla transcrita. En ciertas modalidades de la invención se pueden usar los promotores de Pol II específicos de tejido, específicos de célula, o inducibles, proporcionados los requerimientos anteriores son satisfechos. Por ejemplo, puede ser deseable usar promotores específicos de mastocitos, específicos de células T, o específicos de células B. Ciertos genes objetivo descritos en la presente comprenden tales promotores, y otros son conocidos en la técnica. Se apreciará que la expresión in vivo de constructos tales como aquellos representados en las Figura 7 y 8 deseablemente puede ser realizada por introducción de los constructos dentro de un vector y la introducción del vector dentro de las células de mamífero, por ejemplo, en un sujeto. Cualquiera de una variedad de vectores se puede seleccionar, a pesar de que en ciertas modalidades puede ser deseable seleccionar un vector que puede suministrar el o los coñstructos a una o más células en las vías respiratorias. Se puede usar cualquier vector viral o no viral (por ejemplo, plásmidos) . La presente invención abarca vectores que contienen unidades de transcripción ARNi y/o ARNh, además de células que contienen tales vectores o diseñados de otra manera para contener las unidades de transcripción expresable capaz de servir como plantillas para la transcripción de una o más hebras de ARNi o ARNh. En ciertas modalidades preferidas de la presente invención, los vectores inventivos son plásmidos o vectores de terapia génica apropiados para el suministro de un constructo que expresa ARNi o ARNh a células de mamíferos. Los vectores pueden ser administrados a un sujeto antes o después de exposición a un estímulo sospechoso de provocar una exacerbación de síntomas asmáticos o alérgicos, para profilaxis o tratamiento para estas condiciones. Los vectores de ARNi de la invención pueden ser suministrados en una composición que comprende cualquiera de una variedad de agentes de suministro como se describen adicionalmente a continuación. Por lo tanto, la invención proporciona una variedad de vectores virales y no virales cuya presencia dentro de una célula resulta en la transcripción de uno o más ARN que autohibridizan o hibridizan uno al otro para formar un ARNh o ARNi que inhibe la expresión de por lo menos un transcrito que codifica una proteína entre aquellas mencionadas anteriormente en la célula. En ciertas modalidades de la invención dos hebras de ARNi complementarias separadas se transcriben usando un vector sencillo que contiene dos promotores, cada uno de los cuales dirige la transcripción de una hebra ARNi sencilla, esto es, se liga operablemente a una plantilla para el ARNi de manera que ocurra la transcripción. Los dos promotores pueden estar en la misma orientación, en cuyo caso cada uno se liga operablemente a una plantilla para una de las hebras de ARNi. Alternativamente, los promotores pueden estar en orientación opuesta flanqueando una plantilla sencilla de manera que la transcripción de los promotores resulta en la síntesis de dos hebras de ARN complementarias. En otras modalidades de la invención se emplea un vector que contiene un promotor que conduce la transcripción de una molécula de ARN sencilla que comprende dos regiones complementarias (por ejemplo, un ARNh). En ciertas modalidades de la invención se usa un vector que contiene promotores múltiples, cada uno de los cuales conduce la transcripción de una molécula de ARN sencilla que comprende dos regiones complementarias. Alternativamente, diferentes ARNh múltiples se pueden transcribir, ya sea desde un promotor sencillo o desde promotores múltiples. Son posibles una variedad de configuraciones. Por ejemplo, un promotor sencillo puede dirigir la síntesis de un transcrito de ARN sencillo que contiene regiones auto complementarias múltiples, cada uno de los cuales puede hibridizar para generar una pluralidad de estructuras de tronco-rizo. Estas estructuras pueden ser desdobladas in vivo, por ejemplo, mediante DICER, para generar los ARNh diferentes múltiples. Se apreciará que los transcritos preferiblemente contienen una señal de terminación en la Terminal 3' del transcrito pero no entre las unidades de ARNh individuales. También se apreciará que los ARN sencillos de los cuales los ARNi múltiples pueden ser generados sin necesitar ser producidos in vivo pero en su lugar pueden ser sintetizados químicamente o producidos usando transcripción in Vitro y proporcionada exógenamente . En otra modalidad de la invención, el vector incluye promotores múltiples, cada uno de los cuales dirige la síntesis de una molécula de ARN auto complementaria que hibridiza para formar un ARNh. Los ARNh múltiples pueden todos dirigirse al mismo transcrito, o pueden dirigirse a diferentes transcritos. Cualquier combinación de transcritos puede ser dirigida. Ver, por ejemplo, la Figura 7B. En general, de acuerdo con ciertas modalidades de la invención los ARNi y/o los ARNh expresados en la célula comprenden una región de par base (duplo) de 15-29 nucleótidos de longitud, por ejemplo, aproximadamente 19 nucleótidos de longitud. Aquellos de experiencia ordinaria en la técnica apreciará además que la expresión in vivo de los ARNi o ARNh de conformidad con la presente invención puede permitir la producción de células que producen el ARNi o ARNh durante períodos de tiempo prolongados (por ejemplo, más que unos pocos días, preferiblemente por lo menos varias semanas a meses, más preferiblemente por lo menos un año o más, posiblemente un período de vida) . Los vectores virales preferidos para uso en las composiciones para proporcionar expresión intracelular de los ARNi y ARNh incluyen, por ejemplo, vectores retrovirales y vectores lentivirales . Ver, por ejemplo, Kobinger, G. P., y colaboradores, Nat Biotechnol 19(3): 225-30, 2001, que describe un vector basado en un vector de VIH pseudotipo de proteína de cubierta de Filovirus, el cual - transluce efectivamente el epitelio de paso de aire intacto desde la superficie apical. Ver también Lois, C, y colaboradores, Science, 295: 868-872, Feb. 1, 2002, que describe el vector lentiviral FUGW; Somia, N., y colaboradores, J. Virol. 74(9): 4420-4424, 2000; Miyoshi, H., y colaboradores, Science 283: 682-686, 1999; y la Patente de EUA No. 6,013,516. En ciertas modalidades de la invención el vector es un vector lentiviral cuya presencia dentro de una célula resulta en la transcripción de uno o más ARN que se autohibridizan o se hibridizan uno a otro para formar un ARNh o ARNi que inhibe la expresión de por lo menos un transcrito en la célula. Para propósitos de descripción se asumirá que el vector es un vector lentiviral. Los vectores lentivirales apropiados se describen, por ejemplo, en Rubinson, D., y colaboradores, Nature Genetics, Vol. 33, pp. 401-406, 2003. Sin embargo, se entenderá que otros vectores retrovirales o lentivirales también se pueden usar. De acuerdo con varias modalidades de la invención el vector lentiviral puede ser cualquier plasmado de transferencia lentiviral o una partícula lentiviral, por ejemplo, un lentivirus capaz de infectar células. En ciertas modalidades de la invención el vector lentiviral comprende un segmento de ácido nucleico ligado operablemente a un promotor, de manera que la transcripción resulta en síntesis de un ARN que comprende regiones complementarias que hibridizan para formar un ARNh dirigido al transcrito objetivo. De acuerdo con ciertas modalidades de la invenció el ARNh comprende una región de par base de aproximadamente 19 nucleótidos de longitud. De acuerdo con ciertas modalidades de la invención el ARN puede comprender más de 2 regiones complementarias, de manera que la autohibridización resulta en regiones de pares base múltiples, separadas por rizos o regiones de hebra sencilla. Las regiones de pares base pueden tener secuencias idénticas o diferentes y así pueden ser dirigidas a la misma o a diferentes regiones de un transcrito sencillo o a transcritos diferentes.

En ciertas modalidades de la invención el vector lentiviral comprende un segmento de ácido nucleico flanqueado por dos promotores en orientación opuesta, en donde los promotores están ligados operablemente al segmento de ácido nucleico, de manera que la transcripción de los promotores resulta en la síntesis de dos ARN complementarios que hibridizan uno con el otro para formar un ARNi dirigido al transcrito objetivo. De acuerdo con ciertas modalidades de la invención el ARNi comprende una región de- base par de aproximadamente 19 nucleótidos de longitud. En ciertas modalidades de la invención el vector lentiviral comprende por lo menos dos promotores y por lo menos dos segmentos de ácido nucleico, en donde cada promotor está ligado operablemente a un segmento de ácido nucleico, de manera que la transcripción de los promotores resulta en la síntesis de dos ARN complementarios que hibridizan con cada uno para formar un ARNi dirigido al transcrito objetivo. Como se mencionó anteriormente, los vectores lentivirales pueden ser plásmidos de transferencia lentiviral o partículas lentivirales infecciosas (por ejemplo, un lentivirus o lentiviruos de pseudotipo) . Ver por ejemplo, la Patente de EUA No. 6,013,516 y referencias 113-117 para mayor discusión de los plásmidos de transferencia lentiviral, partículas lentivirales, y sistemas de expresión lentivirales. Como es bien conocido en la técnica, los lentivirus tienen un genoma de ARN. Por lo tanto, cuando el vector lentiviral es una partícula lentiviral, por ejemplo, un lentivirus infeccioso, el genoma viral debe someterse a transcripción inversa y segunda síntesis de hebra para producir ADN que comprende una plantilla para la transcripción de ARN. Además, cuando se hace referencia en la presente a elementos tales como promotores, elementos reguladores, etc., se debe entender que las secuencias de estos elementos están presentes en forma de ARN en las partículas lentivirales de la invención y están presentes en la forma de ADN en los plásmidos de transferencia lentiviral de la invención. Además, cuando una plantilla para síntesis de un ARN se "proporciona por" el ARN presente en una partícula lentiviral, se entiende que el ARN debe someterse a transcripción inversa y segunda síntesis de hebra para producir ADN que puede servir como plantilla para la síntesis de ARN (transcripción) . Los vectores que proporcionan plantillas para síntesis de ARNi o ARNh se considera que proporcionan el ARNi o ARNh cuando se introducen dentro de las células en las cuales ocurre la síntesis. Los ARNi o ARNh inventivos se pueden introducir dentro de células mediante cualquier método disponible. Por ejemplo, los ARNi, ARNh, o vectores que los codifican pueden ser introducidos dentro de células vía transformación convencional o técnicas de transfección. Como se usa en la presente, los términos "transformación" y "transfección" se pretende que se refieran a una variedad de técnicas reconocidas en la técnica para introducción de ácido nucleico externo (por ejemplo, ADN o ARN) dentro de una célula, incluyendo coprecipitación de fosfato de calcio o cloruro de calcio, transfección mediada de dextrano DEAE, lipofección, etc. La inyección o electroporación también se puede usar. Como se describe a continuación, un aspecto de la invención incluye el uso de una variedad de agentes de suministro para introducción de ARNi, ARNh, y o vectores (ya sea vectores de ADN o vectores virales) que comprenden una plantilla para síntesis de un ARNi o ARNh dentro de células que incluyen, pero no se limitan a, polímeros catiónicos; varios transportadores moleculares de péptido que incluyen péptidos ricos en arginina, péptidos ricos en histidina, y lípidos catiónicos y neutrales; varios polímeros no catiónicos; liposomas; carbohidratos; y materiales tensoactivos. La invención también abarca el uso de agentes de suministro que han sido modificados en cualquiera de una variedad de formas, por ejemplo, por adición de una porción de mejoramiento de suministro al agente de suministro, como se describe más a continuación . La presente invención abarca cualquier célula manipulada para contener un agente ARNi inventiva. Preferiblemente, la célula es una célula mamífera, particularmente humana. En algunas modalidades de la invención, las células no son células humanas dentro de un organismo no humano. Por ejemplo, la presente invención abarca animales no humanos transgénicos diseñados para contener o expresar agente de ARNi inventivos. Tales animales son útiles para estudio de la función y/o actividad de los agentes ARNi inventivos, y/o del mecanismo involucrado en la producción de IgE, hipersensibilidad mediada de IgE, desgranulación de mastocitos o basófilos, etc. Como se usa en lá presente, un "animal -transgénico" es un animal no humano, preferiblemente un mamífero, más preferiblemente un roedor tal como una rata o ratón, en el cual una o más de las células del animal incluye un transgen. Otros ejemplos de animales transgénicos incluyen primates no humanos, ovejas, perros, vacas, cabras, pollos, anfibios, y similares. Un transgen es ADN exógeno o un rearreglo, por ejemplo, una eliminación de ADN cromosomal endógeno, el cual preferiblemente está integrado dentro u ocurre en el genoma de las células de una animal transgénico. Un transgen puede servir como una plantilla y dirigir la expresión de un agente de ARNi en uno o más tipos de célula o tejidos del animal transgénico. De acuerdo con ciertas modalidades de la invención el animal transgénico es de una variedad usada como un animal modelo (por ejemplo, roedores, ovejas, o primates no humanos) para evaluación de terapéuticos potenciales para enfermedades mediadas por IgE y condiciones tales como rinitis alérgica y asma. III. Agentes de ARNi para Inhibir o Inactivar Mastocitos y Métodos de Uso. (A) Agentes ARNi Dirigidos a Transcritos que Codifican Subunidades FceRI. Los mastocitos enlazan a IgE a través del receptor IgE de alta afinidad, FceRI (ver, por ejemplo, Goldsby, R., y colaboradores, Kuby Imfnunology, 4th Ed. , W. H. Freeman, 2000, y referencias en ellas, para discusión de mastocitos, el mecanismo molecular de desgranulación de mastocitos mediado por IgE, y el papel de los mastocitos en las condiciones mediadas por IgE) . El FceRI consiste de cadenas a, ß, y ?. Aunque la cadena ? se expresa por células T y otros tipos de células, las cadenas a, y ß primariamente se expresan por mastocitos y basófilos en ambos ratones y humanos. De acuerdo con una modalidad de la invención, la expresión FceRI se inhibe por suministro de un agente ARNi (por ejemplo, un vector ARNi, ARNh, o ARNi) dirigido a un transcrito que codifica la cadena o la cadena ß de FceRI. Tal inhibición efectivamente desarma los mastocitos puesto que sin este receptor las células no pueden enlazar IgE y por lo tanto no pueden ser activadas para el alérgeno. En ciertas modalidades de la invención los agentes de ARNi dirigidos a transcritos que codifican las cadenas de FceRI a y ß se suministran individualmente o en combinación. La invención proporciona agentes de ARNi, por ejemplo, vectores ARNi, ARNh, e ARNi (por ejemplo, plásmidos, vectores de virus, vectores de terapia de gen) , dirigidos a transcritos que codifican cadenas a y ß de FceRI y composiciones (por ejemplo, composiciones farmacéuticas) que comprenden uno o más de los agentes ARNi inventivos. La invención proporciona un método de inhibición de la expresión de la cadena a de FceRI que comprende: administración a una célula u organismo de un agente ARNi dirigido a un transcrito que codifica la cadena a de FceRI.

En particular, la invención proporciona un método de inhibición de expresión de la cadena a de FceRI que comprende (i) administración a una célula u organismo de un ARNi o ARNh • dirigido a un transcrito que codifica la cadena a de FceRI o (ii) administración a una célula u organismo de un ácido nucleico que comprende una plantilla para transcripción de una o más moléculas de ARN que hibridizan o autohibridizan para formar un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito que codifica la cadena a de FceRI. La invención además proporciona un método de inhibición de expresión de la cadena ß de FceRI que comprende administración a una célula u organismo de un agente ARNi dirigido a un transcrito que codifica la cadena ß de FceRI. En particular, la invención proporciona un método de inhibición de expresión de la cadena ß de FceRI que comprende (i) administración a una célula u organismo de un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito que codifica la cadena ß de FceRI o (ii) administración a una célula u organismo de un ácido nucleico que comprende una plantilla para transcripción de una o más moléculas de ARN que hibridizan o autohibridizan para formar un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito que codifica la cadena ß de FceRI. Los métodos son útiles para la prevención y tratamiento de enfermedades o condiciones caracterizadas por hipersensibilidad mediada por IgE. Secuencias de algunas porciones dirigidas apropiadas de los transcritos que codifican las cadenas a y ß de FceRI se listan en las Tablas 1 (cadena a) y 2 (cadena ß) . La hebra sentido de ciertos ARNi inventivos preferidos comprende una porción que tiene una secuencia listada en la Tabla 1 o Tabla 2. Ciertos ARNi preferidos comprenden una hebra antisentido que comprende una porción que es 100% complementaria a una porción objetivo listada en la Tabla 1 o Tabla 2. Los ARNi que tienen una primera porción cuya secuencia comprende una porción que es 100% complementaria a una secuencia listada en la Tabla 1 ó 2 y una segunda porción cuya secuencia comprende el complemento que forma el tronco de esa secuencia (separado de la primera porción mediante una secuencia no relacionada que forma un rizo) fácilmente puede ser diseñada como se describió en otra parte en la presente. (B) Agentes de ARNi Dirigidos a Transcritos que Codifican c-Kit . El desarrollo de mastocitos y la supervivencia requiere de la expresión del receptor de superficie celular c-Kit (ver, por ejemplo, Ashman, L. K. , Int J Biochem Cell Biol. 1999 Oct; 31 (10) : 1037-51, para una discusión del c-Kit y su papel en el sistema hematopoyético) . De conformidad con una modalidad de la invención, la expresión c-Kit se inhibe al administrar los ARNi objetivo a transcritos que codifican c-Kit. La invención proporciona agentes de ARNi, por ejemplo, ARNh, vectores de ARNh, y ARNi (por ejemplo, plásmidos, vectores de virus, vectores de terapia de genes), dirigidos a un transcrito que codifica el c-Kit y composiciones (por ejemplo, composiciones farmacéuticas (que comprenden uno o más de los agentes de ARNi. La invención proporciona además métodos para inhibir la expresión de c-Kit que comprende administrar a una célula u organismo un agente de ARNi dirigido a un transcrito que codifica c-Kit. En particular, la invención proporciona un método para inhibir la expresión de c-Kit al administrar a una célula u organismo un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito que codifica c-Kit o (ii) administrar a una célula u organimso un ácido nucleico que comprende una plantilla para la transcripción de una o más moléculas de ARN que hibridizan o auto-hibridizan para formar un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito que codifica c-Kit. Los métodos son útiles para la prevención y tratamiento de enfermedades o condiciones caracterizadas por la hipersensibilidad mediada por IgE. Las secuencias de algunas porciones objetivo apropiadas del transcrito que codifica c-Kit se enlistan en la Tabla 3. la hebra sentido de ciertos ARNi inventivos preferidos comprende una porción que tiene la secuencia enlistada en la - Tabla 3. Ciertos ARNi preferidos comprenden una hebra antisentido que comprende una porción que es 100% complementaria a la porción objetivo enlistada en la Tabla 3. Los ARNh tienen una primera porción cuya secuencia comprende la porción que es 100% complementaria a la secuencia enlistada en la Tabla 3 y una segunda porción cuya secuencia comprende el complemento que forma el tronco del cual la secuencia (separada de la primera porción por una secuencia no relacionada que forma un rizo) puede fácilmente diseñarse como se describe en cualquier lugar en la presente. (C) Agentes ARNi Dirigidos a Transcritos que Codifican Lyn o Syk Como se menciona arriba, la reticulación de FceRI en mastocitos activa las trayectorias de señalización intracelular, que por último resulta en la desgranulación. Dos de las moléculas de señalización importantes son las proteínas tirosina cinasas Lyn y Syk. Los estudios muestran que los ratones deficientes en Lyn y Syk son deficientes en al función de mastocitos (ver, por ejemplo, Costello, P, et al., Oncogene, 13(12) :2595, 1996; Zhang, S., et al., Mol. Cell. Biol., 22(23): 8144-8154, 2002). Los inventores han reconocido que inhibir la expresión de Lyn o Syk al nivel de transcripción o traducción usando ARNi es un método poderoso para controlar la función de célula madre y de esta manera reducir el papel de las mastocitos en la enfermedad. De conformidad con una modalidad de la invención, la expresión Lyn y/o Syk se inhibe al administrar uno o más agentes ARNi dirigidos a transcritos que codifican estas proteínas. La invención proporciona agentes ARNi, tales como ARNi, ARNh, o vectores ARNi dirigidos a transcritos Lyn o Syk, composiciones (por ejemplo, composiciones farmacéuticas) que comprende los agentes ARNi inventivos y vectores (incluyendo plásmidos, vectores de virus, y vectores de terapia de genes) para producir ARNi o ARNh inventivos ya sea como hebras de ARN sentido y antisentido individuales (ARNi) o como una hebra ARNi auto-complementaria, sencilla (ARNh) . La invención proporciona además métodos para inhibir la expresión de Lyn que comprende administrar a una célula u organismo un agente ARNi objetivo a un transcrito que codifica Lyn. En particular, la invención proporciona un método para inhibir la expresión de Lyn que comprende administrar a una célula u organismo un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito que codifica Lyn a una célula u organimso o (ii) administrar a una célula u organismo el ácido nucleico que comprende una transcripción de plantilla de una o más moléculas de ARN que hibridizan o auto-hibridizan para formar una ARNi o ARNh dirigido a un transcrito que codifica Lyn. Los métodos son útiles para la prevención y tratamiento de enefermedades y condiciones caracterizadas por la hipersensibilidad mediada por IgE. Las secuencias de algunas porciones objetivo apropiadas del transcrito que codifica Lyn se enlistan en la Tabla 4. La hebra sentido de ciertos ARN inventivos preferidos comprende una porción que tiene la secuencia enlistada en la Tabla 4. Ciertos ARNi preferidos comprende una hebra antisentido- que comprende una porción que es 100% complementaria a la porción objetivo enlistada en la Tabla 4. Los ARNh tienen una primera porción cuya secuencia comprende la porción que es 100% complementaria a la secuencia enlistada en la Tabla 4 y la segunda porción cuya secuencia comprende el complemento que forma el tronco de tal secuencia (separado de la primera porción por una secuencia no relacionada que forma un rizo) puede fácilmente designarse como se describe en cualquier lugar en la presente. La invención proporciona además métodos para inhibir la expresión de Syk que comprende adminsitrar a una célula u organismo un agente ARNi dirigido a un transcrito que codifica Syk. En particular, la invención proporciona un 17 método para inhibir la expresión de Syk que comprende (i) administrar a una célula u organismo un ARNi o ARNh, dirigido a un transcrito que codifica Syk o (ii) administrar a una célula u organismo un ácido nucleico que comprende una plantilla para la transcripción de una o más moléculas de ARN que hibridizan o auto-hibridizan para formar un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito que codifica Syk. Los métodos son útiles para la prevención y tratamiento de enfermedades o condiciones caracterizadas por la hipersensibilidad mediada por IgE. Las secuencias de algunas porciones objetivo apropaidas del transcrito que codifica Syk se enlistan en la Tabla 5. la hebra sentido de ciertos ARNi inventivos comprenden una proción que tiene una secuencia enlistada en la Tabla 5. Ciertos ARNi preferidos comprenden una hebra antisentido que comprende una porción que es 100% complementaria a la porción objetivo enlistada en la Tabla 5. Ciertos ARNi preferidos comprenden una hebra antisentido que comprende una porción que es 100% complementaria con la porción objetivo enlistada en la Tabla 5. Los ARNh que tienen una primera porción cuya secuencia comprende una porción que es 100% complementaria a una secuencia enlistada en la Tabla 5 y una segunda porción cuya secuencia comprende el complemento que forma el tronco de tal secuencia (separado de la primera porción por una secuencia no relacionada que forma un rizo) puede designarse fácilmente como se describe en cualquier parte en la presente . IV. Agentes ARNi para Inhibir la Producción IgE y Métodos de Uso de los Mismos Como se menciona arriba, el IgE de suero juega un papel principal en la rinitis alérgica y asma mediada por las mastocitos. La respuesta al anticuerpo de célula B, que lleva a la secreción de IgE, generalmente requiere ayuda de la célula T. La activación de célula T involucra típicamente la presentación de alérgeno para células T por células que presentan el antígeno (APC) , que incluye células dendríticas (DC) , macrófagos, y células B. Las células dendríticas residen normalmente debajo del epitelio en varios sitios dentro del cuerpo (por ejemplo, piel y mucosa) . Cuando estas células encuentran alérgenos, llamada ICOS (que se establece para "coestimulador inducible") , en células dendríticas puede jugar un papel principal en la inducción de células T que promueven que las células B produzcan IgE (ver, por ejemplo, Tafuri, A, et al., Nature, 409:105-9, 2001; Gonzalo, J. A., et al., Nat I munol . , 2 (7) : 597-604, 2001). De esta manera ' en ausencia de la expresión de ICOS la estimulación del alérgeno no lleva a la secreción de IgE por células B. De conformidad con una modalidad de la invención, la expresión ICOS se inhibe al administrar agentes ARNi tales como ARNi o ARNh o vectores ARNi, dirigidos a ICOS que codifican transcritos.

En consecuencia, la invención proporciona agentes ARNi dirigidos a transcritos ICOS, composiciones (por ejemplo, composiciones farmacéuticas) que comprenden los agentes ARNi inventivos, y vectores (por ejemplo, plásmidos, vectores de virus, vectores de terapia de genes) para producir los ARNi y/o ARNh ya sea como hebras de ARN sentido y antisentido individuales (ARNi) o como una molécula de ARN auto- complementaria, sencilla (ARNh) . La invención proporciona un método para inhibir la expresión de ICOS que comprende administrar a una célula u organismo un agente ARNi dirigido a un transcrito que codifica ICOS. En particular, la invención proporciona un método para inhibir la expresión de ICOS que comprende (i) administrar a una célula u organismo un agente ARNi, tal como un ARNi o ARNh, dirigido a un transcrito que codifica ICOS o (ii) administrar a una célula u organismo un vector ARNi que comprende un ácido nucleico que comprende una plantilla para transcripción de una o más moléculas de ARN que hibridizan o auto-hibridizan para formar un ARNi o ARNh dirigido" a un transcrito que codifica ICOS. Los métodos son útiles para la prevención y tratamiento de enfermedades o condiciones caracterizadas por hipersensibilidad mediada por IgE. Las secuencias de algunas porciones objetivo apropiadas de transcritos que codifican ICOS se enlistan en la Tabla 6. La hebra sentido de ciertos ARNi inventivos preferidos comprende una porción que tiene una secuencia enlistada en la Tabla 6. Ciertos ARNi preferidos comprenden una hebra antisentido que comprende una porción que es 100% complementaria con la porción objetivo enlistada en la Tabla 6. Los ARNh que tienen una primera porción cuya secuencia comprende una porción que es 100% complementaria a una secuencia enlistada en la Tabla 6 y una segunda porción cuya secuencia comprende el complemento que forma el tronco de tal secuencia (separado de la primera porción por una secuencia no relacionada que forma un rizo) puede designarse fácilmente como se describe en cualquier parte en la presente. V. Inhibición de ARNi de Genes en Células Dendríticas y Macrófagos La respuesta al anticuerpo de células B que lleva a secreción de IgE generalmente requiere ayuda de células T, típicamente de células auxiliares de tipo 2 T (Th2) . Aunque no se desea apegarse por ninguna teoría, es posible que las células Th2 de memoria específica de alérgeno se involucren en ' la estimulación de la respuesta al anticuerpo de célula B siguiendo su propia activación. La activación de células Th2 típicamente requiere la presentación de alérgeno a estas células por APC. Entre estas, las células dendríticas son particularmente importantes. Cuando los antígenos contadores DC se sumergen y igran en ellos para drenar los ganglios linfáticos, donde se presentan fragmentos de péptido de alérgenos a células T. Dependiendo del estado de activación y expresión de varios genes, las células dendríticas pueden ya sea activar o inactivar las céluls T que reconocen los alérgenos presentes en DC (como complejos péptido-MHC) . Ver Banchereau, J. and Steinman, R., Nature, 392:245-252, 1998, para uan revisión de los DC y sus funciones. La presente invención abarca el reconocimiento que al alterar la interacción entre células T y células que presentan el antígeno (por ejemplo, células dendríticas y macrófagos) usando ARNi proporciona un enfoque para inactivar, y/o eliminar complemetamenté o parcialmente células T que se involucran en la rinitis alérgica y el asma, por ello alcanzando un efecto terapéutico. La invención proporciona agentes ARNi, por ejemplo, ARNi, ARNh, y vectores ARNi dirigidos a transcritos que codifican una variedad de proteínas que juegan un papel en la presentación de antígeno y activación de célula T por APC. Estas proteínas y agentes ARNi se describe en detalle adicional a continuación. (A) Agentes ARNi Dirigidos a Transcritos que Codifican la Cadena a FceRI Como se menciona arriba, FceRI, que consiste de cadenas r ßí Y r es el receptor de alta afinidad para IgE. Además de las mastocitos, DC de los pacientes con rinitis atópica y asma también expresan el receptor, en contraste con la situación típica en individuos que no padecen de estas condiciones. (Ver, por ejemplo, Novak, N. , et al., J Clin. Invest., 111 (7):1047, 2003, y referencias en la presente). El receptor FceRI expresado por DC es una forma trimérica que carece de cadena ß. Aunque no se desea enlazarse por ninguna teoría, FceRI en DC puede funcionar como una molécula enfocada al antígeno para absorción eficiente, procesamiento, y presentación a células T. Debido a que la cadena a enlaza IgE, de conformidad con los agentes ARNi de la invención dirigidos a transcritos que codifican la cadena a se usan para inhibir la expresión FceRI por DC y/o macrófagos. Los agentes ARNi dirigidos a transcritos que codifican FceRl se discuten a continuación. (B) Agentes ARNi Dirigidos a Transcritos que Codifican Ligando OX40 (OX40L) El OX40 y OX40L son un par de ligandos del receptor importante para co-estimulación de célula T, esto es, estimulación de células T por otras células (Gramaglia, I., et al.) J I unol., 161 (12) : 6510-7, 1998). OX40 se expresa en células T activadas, mientras que OX40L se expresa en DC, células B, células microgliales, y células endoteliales. En un modelo de ratón de asma alérgica, OX40L está fuertemente implicado en la respuesta Th2 en la inflamación alérgica (Hoshino, A., et al., Eur. J. Immunol . , 33(4): 861-9, 2003).

De conformidad con la invención los agentes ARNi dirigidos a transcritos que codifican OX40L se usa para inhibir la expresión OX40L por DC y/o macrófago, interfiriendo por ello con la respuesta de célula Th2 a estos APC. De conformidad con la invención, la respuesta Th2 reducida, que resulta de inhibir la síntesis de OX40L, lleva a la producción reducida de IgE, reduciendo de esta manera la desgranulación de mastocitos y resultando en un efecto terapéutico. La invención proporciona agentes ARNi, por ejemplo, ARNi, ARNh, y vectores ARNi dirigidos a transcritos que codifican OX40L, composiciones (por ejemplo, composiciones farmacéuticas) que comprenden los agentes ARNi inventivos, y vectores (incluyendo plásmidos y vectores de terapia de genes) para producir los agentes ARNi ya sea hebras de ARN sentido y antisentido individuales (ARNi) o como una molécula de ARN auto-complementaria, sencilla (ARNh) . La invención proporciona un método para inhibir la expresión de 0X OL que comprende adminsitrar un agente ARNi dirigido a un transcrito que codifica OX40L. En particular, la invención proporciona métodos para inhibir la expresión de OX40L que comprende (i) administrar a una célula u organismo un agente ARNi, tal como un ARNi o ARNh, dirigido a un transcrito que codifica 0X4OL o (ii) administrar a una célula u organismo un vector ARNi que comprende un ácido nucleico que comprende una plantilla para transcripción de una o más moléculas de ARN que hibridizan o auto-hibridizan para formar un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito que codifica OX40L. Los métodos son útiles para la prevención y tratamiento de enfermedades o condiciones caracterizadas por hipersensibilidad mediada por IgE. Las secuencias de algunas porciones objetivo apropiadas de transcritos que codifican OX40L se enlistan en la Tabla 7. La hebra sentido de ciertos ARNi inventivos preferidos comprende una porción que tiene una secuencia enlistada en la Tabla 7. Ciertos ARNi preferidos comprenden una hebra antisentido que comprende una porción que es 100% complementaria con la porción objetivo enlistada en la Tabla 7. Los ARNh que tienen una primera porción cuya secuencia comprende una porción que es 100% complementaria a una secuencia enlistada en la Tabla 7 y una segunda porción cuya secuencia comprende el complemento que forma el tronco de tal secuencia (separado de la primera porción por una secuencia no relacionada que forma un rizo) puede designarse fácilmente como se describe en cualquier parte en la presente. (C) Agentes ARNi Dirigidos a CD40 La expresión CD40 se induce durante la activación de APC. La interacción de CD40 con CD40L (CD 154) en células T activadas juega un papel altamente importante en la respuesta de célula T. (ver Curr Opin Hematol 2003 Jul; 10(4): 272-8, 2003 para una revisión en CD40 y su papel de inmunidad y tolerancia) . La carencia de expresión de CD40 por APC es suficiente para la inducción de tolerancia (por ejemplo, carencia de o reducción importante en la respuesta al antígeno en un sujeto con relación a lá respuesta usual o previa) . De conformidad con la invención uno o más agentes ARNi dirigidos a transcritos CD40 se usa para inhibir la expresión CD40 por DC y/o macrófagos, interfiriendo por ello con la respuesta de la célula Th2 a estos APC. La respuesta Th2 reducida lleva - a una producción reducida de IgE, reduciendo de esta manera la desgranulación de mastocitos y resultando en un efecto terapéutico. La invención proporciona agentes ARNi, incluyendo ARNi, ARNh, y vectores ARNi dirigidos a transcritos que codifican CD40, composiciones farmacéuticas que comprende los ARNi, ARNh, y vectores inventivos (incluyendo plásmidos, vectores de virus, y vectores de terapia de genes) para producir los ARNi como hebras de ARN sentido y antisentido individuales o producir ARNh como una molécula de ARN auto-complementaria, sencilla. La invención proporciona un método para inhibir la expresión de CD40 que comprende administrar a una célula u organismo un agente ARNi dirigido a un transcrito que codifica CD40. En particular, la invención proporciona métodos para inhibir la expresión de CD40 que comprende (i) administrar a una célula u organismo un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito que codifica CD40 o (ii) administrar a una célula u organismo un ácido nucleico que comprende una plantilla para transcripción de una o más moléculas de ARN que hibridizan o auto-hibridizan para formar un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito CD40. Los métodos son útiles para la prevención y tratamiento de enfermedades o condiciones caracterizadas por hipersensibilidad mediada por IgE. Las secuencias de algunas porciones objetivo apropiadas de los genes que codifican CD40 se enlistan en la Tabla 8. La hebra sentido de ciertos ARNi inventivos preferidos comprende una porción que tiene una secuencia enlistada en la Tabla 8. Ciertos ARNi preferidos comprenden una hebra antisentido que comprende una porción que es 100% complementaria con la porción objetivo enlistada en la Tabla- 8. Los ARNh que tienen una primera porción cuya secuencia comprende una porción que es 100% complementaria a una secuencia enlistada en la Tabla 8 y una segunda porción cuya secuencia comprende el complemento que forma el tronco de tal secuencia (separado de la primera porción por una secuencia no relacionada que forma un rizo) pueden designarse fácilmente como se describe .en cualquier parte en la presente. (D) Agentes ARNi Dirigidos a CD80 y CD86 Las CD80 y CD86 son moléculas co-estimuladoras que juegan un papel extremadamente importante en la activación de células T. Estas interactúan con CD28 y CTLA4 expresadas en células T. De conformidad con la invención, los agentes ARNi dirigidos 'a transcritos que codifican CD80 ó CD86 se usan para inhibir la expresión de CD80 y/o CD86 por DC y/o macrófago, interfiriendo por ello con respuestas a la célula Th2 para estos APC. La respuesta Th2 reducida lleva a una producción reducida de IgE, reduciendo de esta manera la desgranulación de mastocitos y resultando en un efecto terapéutico. La invención proporciona agentes ARNi, por ejemplo, ARNi, ARNh, y vectores ARNi dirigidos a transcritos que codifican CD80 ó CD86, composiciones (por ejemplo, composiciones farmacéuticas) que comprende los agentes ARNi inventivos, y vectores (incluyendo plásmidos, vectores de virus, vectores de terapia de genes) para producir agentes ARNi ya sea como hebras de ARN sentido y antisentido individuales (ARNi) o como una molécula de ARN auto-complementaria, sencilla (ARNh) . La invención proporciona además métodos para inhibir la expresión de CD80 que comprenden administrar a una célula u organismo y agente ARNi dirigido a CD80. En particular, la invención proporciona un método para inhibir la expresión de CD80 que comprende (i) administrar a una célula u organismo un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito que codifica CD80 o (ii) administrar a una célula u organismo un ácido nucleico que comprende una plantilla para transcripción de una o más moléculas de ARN que hibridizan o auto-hibridizan para formar un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito que codifica CD80. Los métodos son útiles para la prevención y tratamiento de enfermedades o condiciones caracterizadas por hipersensibilidad mediada por IgE. La invención proporciona adicionalmente métodos para inhibir la expresión de CD86 que comprende administrar a una célula u organismo un agente ARNi dirigido a CD86. En particular, la invención proporciona un método para inhibir la expresión de CD86 que comprende (i) administrar a una célula u organismo un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito que codifica CD86 o (ii) administrar a una célula u organismo un ácido nucleico que comprende una plantilla para transcripción de una o más moléculas de ARN que hibridizan o auto-hibridizan para formar un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito que codifica CD86. Los métodos son útiles para la prevención y tratamiento de enfermedades o condiciones caracterizadas por hipersensibilidad mediada por IgE. De conformidad con ciertas modalidades de la invención, los agentes ARNi dirigidos a CD80 y CD86 se administran ya sea individualmente o en combinación. Las secuencias de algunas porciones objetivo apropiadas de transcritos que codifican CD80 o CD86 se enlistan en las Tablas 9 y 10. La hebra sentido de ciertos ARNi inventivos preferidos comprende una porción que tiene una secuencia enlistada en la Tabla 9 o Tabla 10. Ciertos ARNi preferidos comprenden una hebra antisentido que comprende una porción que es 100% complementaria con la porción objetivo enlistada en la Tabla 9 o Tabla 10. Los ARNh que tienen una primera porción cuya secuencia comprende una porción que es 100% complementaria a una secuencia enlistada en la Tabla 9 ó 10 y una segunda porción cuya secuencia comprende el complemento que forma el tronco de tal secuencia (separado de la primera porción por una secuencia no relacionada que forma un rizo) puede designarse fácilmente como se describe en cualquier parte en la presente. (E) Agentes ARNi Dirigidos a Miembros de la Familia Reí La familia NF-?B de factores de transcripción se induce en DC y macrófagos activados (Granelli-Piperno, A., et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 92 (24):10944, 1995). NF-?B consiste de cinco miembros de familia: p50, p52, RelA (p65) , c-Rel, y RelB. El heterodímero RelB/p50 se asocia con la función APC incrementada y la sobreregulación de CD40. La deficiencia de RelB en DC puede suprimir la respuesta autoinmune. (Valero, R. et al., J Immunol . , 169 (1) : 185-92, 2002.) De conformidad con la invención, los ARNi dirigidos a transcritos que codifican RelB se usan para inhibir la expresión RelB por DC y/o macrófago, interfiriendo por ello con la respuesta de la célula Th2 a estos APC. La respuesta Th2 reducida lleva a una producción reducida de IgE, reduciendo de esta manera la desgranulación de mastocitos y resultando en un efecto terapéutico. La invención proporciona agentes ARNi, incluyendo ARNi, ARNh, y vectores ARNi dirigidos a transcritos que codifican RelA o RelB, composiciones, por ejemplo, composiciones farmacéuticas, que comprende los agentes ARNi inventivos, y vectores (incluyendo plásmidos, vectores de virus, y vectores de terapia de genes) para producirlos ya sea como hebras de ARN sentido y antisentido individuales (ARNi) o como una molécula de ARN auto-complementaria, sencilla (ARNh) . La invención proporciona adicionalmente métodos para inhibir la expresión de RelB que comprenden (i) administrar a una célula u organismo un agente ARNi (por ejemplo, un ARNi o ARNh) dirigido a un transcrito que codifica RelA o RelB o (ii) administrar a una célula u organismo un ácido nucleico que comprende una plantilla para transcripción de una o más moléculas de ARN que hibridizan o auto-hibridizan para formar un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito que codifica RelA o RelB. Los métodos son útiles para la prevención y tratamiento de enfermedades o condiciones caracterizadas por hipersensibilidad mediada por IgE. Las secuencias de algunas porciones objetivo apropiadas de los genes que codifican RelA o RelB se enlistan en la Tablas 11 y 12. La hebra sentido de ciertos ARNi inventivos preferidos comprende una porción que tiene una secuencia enlistada en la Tabla 11 o Tabla 12. Ciertos ARNi preferidos comprenden una hebra antisentido que comprende una porción que es 100% complementaria con la porción objetivo enlistada en la Tabla 11 o Tabla 12. Los ARNh que tienen una primera porción cuya secuencia comprende una porción que es 100% complementaria a una secuencia enlistada en la Tabla 11 6-12 y una segunda porción cuya secuencia comprende el complemento que forma el tronco de tal secuencia (separado de la primera porción por una secuencia no relacionada que forma un rizo) pueden designarse fácilmente como se describe en cualquier parte én la presente. ' (F) Agentes ARNi Dirigidos a Ligando 4-1 BB 4-1BB y el ligando 4-1BB son otro par receptor-ligando de coestimulación de células T. 4-1BB se expresa en células T activadas, mientras que el ligando 4-1BB se expresa en DC durante el encuentro con patógenos. (Ver, Croft, M., Cytokine Growth Factor Rev. 2003 Jun-Aug; 14 (3-4) : 265-73, 2003 y referencias en la presente para una revisión del papel de 4-1BB y otras moléculas coestimuladoras . Ver también Kwon, B., et al., Trends I munol . , 23 (8 ): 378-80, 2002.) De conformidad con la invención, los agentes ARNi dirigidos a transcritos que codifican el ligando 4-1BB se usan para inhibir la expresión del ligando 4-1BB por DC y/o macrófago, interfiriendo por ello con la respuesta de la célula Th2 a estos APC. La respuesta Th2 reducida lleva a una producción reducida de IgE, reduciendo de esta manera la desgranulación de mastocitos y resultando en un efecto terapéutico. La invención proporciona agentes ARNi, such as ARNi, ARNh, y vectores ARNi dirigidos a transcritos que codifican el ligando 4-1BB, composiciones, por ejemplo, composiciones farmacéuticas que comprende los agentes ARNi inventivos, y vectores (incluyendo plásmidos, vectores de virus, vectores de terapia de genes) para producirlos ya sea como hebras de ARN sentido y antisentido individuales (ARNi) o como una molécula de ARN auto-complementaria, sencilla (ARNh) . La invención proporciona adicionalmente métodos para inhibir la expresión del ligando 4-1BB que comprenden (i) administrar a una célula u organismo un agente ARNi (por ejemplo, un ARNi o ARNh) dirigido a un transcrito que codifica el ligando 4-1BB o (ii) administrar a una célula u organismo un ácido nucleico que comprende una plantilla para transcripción de una o más moléculas de ARN que hibridizan o auto-hibridizan para formar ' un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito que codifica el ligando 4-1BB. Los métodos son útiles para la prevención y tratamiento de enfermedades o condiciones caracterizadas por hipersensibilidad mediada por IgE. Las secuencias de algunas porciones objetivo apropiadas de los genes que codifican el ligando 4-1BB se enlistan en la Tabla 13. La hebra sentido de ciertos ARNi inventivos preferidos comprende una porción que tiene una secuencia enlistada en la Tabla 13. Ciertos ARNi preferidos comprenden una hebra antisentido que comprende una porción que es 100% complementaria con la porción objetivo enlistada en la Tabla 13. Los ARNh que tienen una primera porción cuya secuencia comprende una porción que es 100% complementaria a una secuencia enlistada en la Tabla 13 y una segunda porción cuya secuencia comprende el complemento que forma el tronco de tal secuencia (separado de la primera porción por una secuencia no relacionada que forma un rizo) puede designarse fácilmente como se describe en cualquier parte en la presente. (G) Agentes ARNi dirigidos a Receptores Tipo Toll Los receptores tipo Toll son receptores de reconocimiento de patrón que juegan un papel en el inicio de la respuesta inmune. Ver Dabbagh K, and Lewis DB., Curr Opin Infect Dis,. 16 (3) : 199-204, 2003, y Lien, E., Ann Allergy. Asthma Immunol . , 88(6):543-7, 2002, y referencias en la presente, para revisiones. De conformidad con la invención, los agentes ARNi dirigidos a transcritos que codifican receptores tipo Toll se usan para inhibir la expresión de estos receptores por DC y/o macrófago, interfiriendo por ello con la respuesta de la célula Th2 a estos APC. La respuesta Th2 reducida lleva a una producción reducida de IgE, reduciendo de esta manera la desgranulación de mastocitos y resultando en un efecto terapéutico. La invención proporciona agentes ARNi, tales como ARNi y ARNh, dirigidos a transcritos que codifican receptores tipo Toll, composiciones, por ejemplo, composiciones farmacéuticas, "que comprende los agentes ARNi, y vectores (incluyendo plásmidos, vectores de virus, vectores de terapia de genes) para producirlos ya sea como hebras de ARN sentido y antisentido individuales (ARNi) o como una molécula de ARN auto-complementaria, sencilla (ARNh) . La invención proporciona adicionalmente métodos para inhibir la expresión de un receptor tipo Toll que comprenden (i) administrar a una célula u organismo un agente ARNi tal como un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito que codifica un receptor tipo Toll o (ii) administrar a una célula u organismo un ácido nucleico que comprende una plantilla para transcripción de una o más moléculas de ARN que hibridizan o auto-hibridizan para formar un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito gue codifica un receptor tipo Toll. Los métodos son útiles para la prevención y tratamiento de enfermedades o condiciones caracterizadas por hipersensibilidad mediada por IgE. Las secuencias de algunas porciones objetivo apropiadas de los genes que codifican las cadenas FceRI a y ß se enlistan en la Tablas 14-22. La hebra sentido de ciertos ARNi inventivos preferidos comprende una porción que tiene una secuencia enlistada en la Tablas 14-22. Ciertos ARNi preferidos comprenden una hebra antisentido que comprende una porción que es 100% complementaria con la porción objetivo enlistada en la Tabla 14-22. Los ARNh que tienen una primera porción cuya secuencia comprende una porción que es 100% complementaria a una secuencia enlistada en la Tablas 14-22 y una segunda porción cuya secuencia comprende el complemento que forma el tronco de tal secuencia (separado de la primera porción por una secuencia no relacionada que forma un rizo) puede designarse fácilmente como se describe en cualquier parte en la presente. La invención también abarca el uso de los agentes ARNi inventivos para el tratamiento de varias -otras condiciones en las cuales la actividad de las trayectorias involucradas en la activación de receptores tipo Toll se presenta. Tales condiciones incluyen sepsis, choque, y lesiones relacionadas con quemaduras. Se ha mostrado que los ratones que expresan ya sea una forma mutante de o no del receptor 4 tipo Toll (TLR4) , un elemento crítico del receptor de endotoxina de mamíferos, son resistentes a la disfunción contráctil del miocardio posterior a quemadura (Thomas JA, et al., Am J Physiol Heart Circ Physio., 283 (4) :H1645-55, 2002). Ver Cristofaro P y Opal SM, Expert Opin Ther Targets, 7 (5): 603-12, 2003, y referencias en la presente para una revisión que discute el papel de los receptores tipo Toll en choque séptico. La invención proporciona un método para tratar sepsis, choque, o una lesión relacionada con quemadura que comprende las etapas de: .(i) proporcionar un sujeto que necesita de un tratamiento para sepsis, choque, o una lesión relacionada con quemadura; y (ii) administrar al sujeto una composición que comprende un agente ARNi dirigido a un receptor tipo Toll. En ciertas modalidades de la invención el receptor tipo Toll es TLR4. En ciertas modalidades de la invención la lesión relacionada con quemadura es lesión al miocardio, por ejemplo, lesión de isquemia/reperfusión, apoptosis de miocito cardiaco, etc. Los agentes ARNi inventivos pueden administrarse usando cualesquiera de los métodos descritos en la presente y/o usando un catéter, por ejemplo, para administración directa al corazón. (H) Agentes ARNi Dirigidos a CD83 CD83 se sobreregula fuertemente con moléculas coestimuladoras tales como CD80 y CD86 durante la maduración DC. Ver Lechmann M. , et al., Trends Immunol . 23(6):273-5, 2002 para una revisión de CD80 y sus funciones. La proliferación de células T mediada por DC se inhibe completamente por una CD83 soluble (Lechmann M. , et al., J Exp Med., 194 (12) : 1813-21, 2001). De conformidad con la invención, los agentes ARNi dirigidos a transcritos que codifican CD83 se usan para inhibir la expresión de CD83 por DC, interfiriendo por ello con la respuesta de la célula Th2 a estos APC. La respuesta Th2 reducida lleva a una producción reducida de IgE, reduciendo de esta manera la desgranulación de mastocitos y resultando en un efecto terapéutico. La invención proporciona agentes ARNi, tales como ARNi, ARNh, y vectores ARNi dirigidos a transcritos que codifican CD83, composiciones, por ejemplo, composiciones farmacéuticas, que comprende los agentes ARNi inventivos, y vectores (incluyendo plásmidos, vectores de virus, vectores de terapia de genes) para producirlos ya sea como hebras de ARN sentido y antisentido individuales (ARNi) o como una molécula de ARN auto-complementaria, sencilla (ARNh) . La invención proporciona adicionalmente métodos para inhibir la expresión de CD83 que comprenden (i) administrar a una célula u organismo un agente ARNi tal como un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito que codifica CD83 o (ii) administrar a una célula u organismo un ácido nucleico que comprende una plantilla para transcripción de una o más moléculas de ARN que hibridizan o auto-hibridizan para formar un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito que codifica CD83. En ciertas modalidades de la invención un agente ARNi dirigido a transcritos que codifican CD83 se administra junto con un agente ARNi dirigido a transcritos que codifican CD80 y/o CD86. Las secuencias de algunas porciones objetivo apropiadas de transcritos que codifican CD83 se enlistan en la Tabla 23. La hebra sentido de ciertos ARNi inventivos preferidos comprende una porción que tiene una secuencia enlistada en la Tabla 23. Ciertos ARNi preferidos comprenden una hebra antisentido que comprende una porción que es 100% complementaria con la porción objetivo enlistada en la Tabla 23. Los ARNh que tienen una primera porción cuya secuencia comprende una porción que es 100% complementaria a una secuencia enlistada en la Tabla 23 y una segunda porción cuya secuencia comprende el complemento que forma el tronco de tal secuencia (separado de la primera porción por una secuencia no relacionada que forma un rizo) pueden designarse fácilmente como se describe en cualquier parte en la presente. (I) Agentes ARNi Dirigidos a SLAM La molécula de activación de linfocitos de señalización (SLAM) se expresa en DC activada y aumenta directamente la producción de citoquinas inflamatorias por células T. Ver Veillette A. and Latour S., Curr Opin Immunol . , 15 (3) : 277-85, 2003, para una revisión de SLAM y su papel en el sistema inmune. De conformidad con la invención, los ARNi dirigidos a transcritos que codifican SLAM se usan para inhibir la expresión de SLAM por DC y/o macrófagos, interfiriendo por ello con la respuesta de la célula Th2 a estos APC. La respuesta Th2 reducida lleva a una producción reducida de IgE, reduciendo de esta manera la desgranulación de mastocitos y resultando en un efecto terapéutico. La invención proporciona agentes ARNi, incluyendo ARNi, ARNh, y vectores ARNi dirigidos a transcritos que codifican SLAM, composiciones, por ejemplo, composiciones farmacéuticas, que comprenden los agentes ARNi inventivos, y vectores (incluyendo plásmidos, vectores de virus, y vectores de terapia de genes) para producirlos ya sea como hebras de ARN sentido y antisentido individuales (ARNi) o como una hebra de ARNi auto-complementaria,- sencilla (ARNh) . La invención proporciona adicionalmente métodos para inhibir la expresión de SLAM que comprenden (i) administrar a una célula u organismo un agente ARNi tal como un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito que codifica SLAM o (ii) administrar a una célula u organismo un ácido nucleico que comprende una plantilla para transcripción de una o más moléculas de ARN que hibridizan o auto-hibridizan para formar un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito que codifica SLAM. Las secuencias de algunas porciones objetivo apropiadas de transcritos que codifican SLAM se enlistan en la Tabla 24. La hebra sentido de ciertos ARNi inventivos preferidos comprende una porción que tiene una secuencia enlistada en la Tabla 24. Ciertos ARNi preferidos comprenden una hebra antisentido que comprende una porción que es 100% complementaria con la porción objetivo enlistada en la Tabla 24. Los ARNh que tienen una primera porción cuya secuencia comprende una porción que es 100% complementaria a una secuencia enlistada en la Tabla 24 y una segunda porción cuya secuencia comprende el complemento que forma el tronco de tal secuencia (separado de la primera porción por una secuencia no relacionada que forma un rizo) pueden designarse fácilmente como se describe en cualquier parte en la presente. (J) Agentes ARNi Dirigidos a Cadena ? Común La activación de DC resulta en la inducción de IL-2R, IL-4R, IL-7R, y IL-15R. La expresión de estos receptores puede ser importante para la supervivencia y función de DC. Estos receptores todos comprenden una cadena ? común. De conformidad con la invención, la inhibición de la expresión de estos receptores se alcanza simultánemente al administrar ARNi dirigidos a la cadena ? común (?c) , interfiriendo por ello con la supervivencia y función de DC. La respuesta Th2 reducida lleva a una producción reducida de IgE, reduciendo de esta manera la desgranulación de mastocitos y resultando en un efecto terapéutico. La invención proporciona agentes ARNi, incluyendo ARNi, ARNh, y vectores ARNi dirigidos a transcritos que codifican la cadena ? común, composiciones, por ejemplo, composiciones farmacéuticas, que comprende los agentes ARNi inventivos, y vectores (incluyendo plásmidos, vectores de virus, vectores de terapia de genes) para producir los agentes ARNi ya sea como hebras de ARN sentido y antisentido individuales (ARNi) o como una molécula de ARN auto-complementaria, sencilla (ARNh) . La invención proporciona adicionalmente métodos para inhibir la expresión de la cadena ? común que comprenden (i) administrar a una célula u organismo un agente ARNi tal como un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito que codifica la cadena ? común o (ii) administrar a una célula u organismo un ácido nucleico que comprende una plantilla para transcripción de una o más moléculas de ARN que hibridizan o auto- hibridizan para formar un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito que codifica la cadena ? común. Las secuencias de algunas porciones objetivo apropiadas de los genes que codifican la cadena ? común se enlistan en la Tabla 25. La hebra sentido de ciertos ARNi inventivos preferidos comprende una porción que tiene una secuencia enlistada en la Tabla 25. Ciertos ARNi preferidos comprenden una hebra antisentido que comprende una porción que es 100% complementaria con la porción objetivo enlistada en la Tabla 25. Los ARNh que tienen una primera porción cuya secuencia comprende una porción que es 100% complementaria a una secuencia enlistada en la Tabla 25 y una segunda porción cuya secuencia comprende el complemento que forma el tronco de tal secuencia (separado de la primera porción por una secuencia no relacionada que forma un rizo) pueden designarse fácilmente como se describe en cualquier parte en la presente . (K) Agentes ARNi Dirigidos- a Ciclooxigenasa-2 La ciclooxigenasa-2, también conocida como prostaglandina H sintasa (PGHS) , es la enzima que limita la relación para la conversión de ácido araquidónico a prostanoides. La inducción y regulación de COX-2 pueden ser elementos clave en el proceso patofisiológico de una número de trastornos inflamatorios y pueden jugar un papel importante en la patogénesis del asma. Los ratones deficientes en COX-2 se piensa que exhiben respuestas de pulmón alérgicas reducidas. COX-2 se induce en DC activado. De conformidad con la invención un agente ARNi dirigido a transcritos que codifican COX-2 se usa para inhibir la expresión de COX-2 por DC y/o macrófagos, interfiriendo por ello con la respuesta de la célula Th2 a estos APC. La respuesta Th2 reducida lleva a una producción reducida de IgE, reduciendo de esta manera la desgranulación de mastocitos y resultando en un efecto terapéutico. La invención proporciona agentes ARNi, incluyendo ARNi, ARNh, y vectores ARNi dirigidos a transcritos que' codifican COX-2, composiciones, por ejemplo, composiciones farmacéuticas, que comprenden los agentes ARNi inventivos, y vectores (incluyendo plásmidos, vectores de virus, y vectores de terapia de genes) para producir los agentes ARNi ya sea como hebras de ARN sentido y antisentido individuales (ARNi) o como una molécula de ARN auto-complementaria, sencilla (ARNh) . La invención proporciona adicionalmente métodos para inhibir la expresión de la cadena y común que comprenden (i) administrar a una célula u organismo un agente ARNi tal como un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito que codifica COX-2 o (ii) administrar a una célula u organismo un ácido nucleico que comprende" una plantilla para transcripción de una o más moléculas de ARN que hibridizan o auto-hibridizan para formar un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito que codifica COX-2. Las secuencias de algunas porciones objetivo apropiadas de transcritos que codifican COX-2 se enlistan en la Tabla 26. La hebra sentido de ciertos ARNi inventivos preferidos comprende una porción que tiene una secuencia enlistada en la Tabla 26. Ciertos ARNi preferidos comprenden una hebra antisentido que comprende una porción que es 100% complementaria con la porción objetivo enlistada en la Tabla 26. Los ARNh que tienen una primera porción cuya secuencia comprende una porción que es 100% complementaria a una secuencia enlistada en la Tabla 26 y una segunda porción cuya secuencia comprende el complemento que forma el tronco de tal secuencia (separado de la primera porción por una secuencia no relacionada que forma un rizo) pueden designarse fácilmente como se describe en cualquier parte en la presente. VI. Secuencias Las tablas 1-26 enlistan las secuencias de porciones objetivo preferidas de transcritos que codifican la cadena FCeR a, cadena FCeR ß, c-Kit, Lyn, Syk, ICOS, OX40L, CD40, CD80, CD86, RelA, RelB, ligando 4-1BB, TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7 , TLR8 , TLR9, CD83, SLAM, cadena ? común, y COX-2, respectivamente. Los ARNi y ARNh preferidos comprenden una hebra antisentido que comprende una porción que es substancialmente o 100% complementaria a una secuencia enlistada en la Tablas 1-26. Las secuencias de las hebras sentido de ciertos ARNi y ARNh preferidos comprenden una porción que es idéntica a una secuencia enlistada en las Tablas 1-26. Las secuencias de hebra sentido se enlistan en dirección 5' a 3' de conformidad con la secuencia presente en el genoma (secuencias genómicas que contienen T en vez de U) . Cada tabla contiene secuencias apropiadas para inhibir la expresión del gen humano y secuencias apropiadas para inhibir la expresión de los correspondientes genes de ratón. En muchos casos, las secuencias son las mismas o muy similares. La letra "H" que precede al nombre de la secuencia indica que se direciona para el gen humano, mientras que las otras secuencias se direccionan al gen de ratón. Por ejemplo, FCeRa-268 significa una secuencia que se extiende desde la posición 268 hasta la posición 286 en el ARNm de ratón que codifica FCeRa, incluyendo ambas posiciones 268 y 286. HFCeRa-338 significa una secuencia que se extiende desde la posición 338 hasta la posición 356 en el gen humano, incluyendo ambos nucleótidos 338 y 356. Las tablas incluyen los números de acceso al Genbank de los ARNm de humano y ratón.

Tabla 1 - Porciones Objetivo FceRa y Secuencias de Hebra Sentido del Agente ARNi Secuencias de ratón (No . de acceso al Genbank : NM_010184 . 1 ) FeeRa-26S UUGGUCAUUGUGAGUG€CA (SEQ ID NO: 1) FceRa-290 CÁAGACAGUGGAAAAUACA {SEQ ID O: 2) FceR -310 ÁUGUCAGAAGCAAGGAUUG (SEQ ID NO: 3) FceR -413 UCCUUXJGACAUCAGAUGCC (SEQ ID,NO: 4) FCsRa-456 GCAAGGUGAUCUACUACAG (SEQ ID NO; 5) FceRa-673 GAÜUCUGUUUGCUGUGGAC (SBQ ID O; 6) FceRa-738 GAGAtJUCAGÁÁGACUGGAA (SEQ ID NO; 7) FcsRa-914 CAGGAAUUGCATJAÁÁ.UGCU (SEQ ID NO; 8) Secuencias Humanas : (No . de aceso al Genbank : NM 002001 . 1 ) HFceRa-338 GAAUAUUGUGÁAUGCCÁAA (SEQIDNO; 9} HFceRo 360 GAAGACAGUGGAGAAUACA (SEQIDNO: 10) HFceRo 380 AUGUCAGCACCAACAAGUU (SEQIDNO: 11) HFceRa-487 UCUUCCUCAGGUGCCA0GG (SEQ IDNO; 12) HFceRa-515 CUGGGAUGUGUACAAGGUG (SEQ IDNO; 13) HFceR -743 GAUUCÜGUUUGCUGUGGÁC (SEQIDNO: 14) HFcsRa 818 AACCÁGGAAAGGCüUCAGA (SEQIDNO: 15) BFceRa-974 CGUCUOUGCUCÁAGGAUUU (SEQIDNO: 16) Tabla 2 - Porciones Objetivo FceRß y Secuencias de Hebra Sentido del Agente ARNi Secuencias de ratón (No. de acceso al Genbank: J05019.1) FceRß-206 GAUAUGCCUUUGUUÜUGGA (SEQ IDNO: 17) FeeRß-677 ÜUÁCAGUGAGUUGGAAGAC (SEQ IDNO: 18) Secuencias humanas (No. de acceso al Genbank: NM 000139.2) HFceRß-310 GAUAUGCCÜUUGUUUUGGA (SEQ ID NO: 19) HFcsRß-784 UÜÁCAGUGAGUUGGAAGAC (SEQ ID NO; 20) Tabla 3 - Porciones Objetivo c-Kit y Secuencias de Hebra Sentido del Agente ARNi Secuencias de ratón (No . de acceso al Genbank: Y00864 . 1 ) c-lüt-356 GUUUGTXUAGAGAUCCUGCC (SEQ ID NO: 21) c-Kit-SS5 GAUUCUGGAGUGUUCÁUGU (SEQ ID NO: 22) o-Kit-924 GGAUCAGCÁAAUGUCACAA (SEQ ID NO: 23) c-Kit-1267 CAAAÁCCAGÁAAUCCUGAC (SEQ ID NO: 24) o-K -1517 CAACGÁUGl?GGGCAÁGAGU (SEQ ID NO: 25) C-KÍ 704 CGAGGAGAUAAAUGGAAÁC (SEQ ID NO: 26) c-Kit-1746 GAACÜÜCCUUAUGAUCACA (SEQ ID NO; 27) o-Kit-1767 UGGGAGUUUCCCÁGÁAACA (SEQ ID NO: 28) a-Kít-2020 CCCUGGUCAUUACAGAAUA (SEQ ID NO: 29) c-?üt-2041 GUUQCÜAUGGUGAUCUUUU (SEQ ID NO: 30) c-I it-2366 ÜCCUCGCCUCCÁAGAAUUG (SEQ ID NO: 31) c-ICit-23SS UUCACAGAGACUUGGCAGC (SEQ ID NO: 32) c- it-2430 CGGAUCACAAAGAUUUGCG (SEQ ©NO: 33) c-Kit-2457 CUAGCCAGAGACAUCAGGA (SEQ ID NO: 34) c-Iüt-2517 GÜGÁÁGÜGGAUGGCACCAG (SEQ ID NO: 35) c-Iüt-2574 GUCÜGGÜCCUÁUGGGAUUU (SEQ ID NO: 36) c-Kit-2669 ÜCAAGGAAGGCUÜCCGGAU (SEQ ID NO: 37) c-JOt-2727 UCAUGÁAGACUUGCUGGGA (SEQ ID NO; 38) c-Kit-4518 UÜCAGGUAUGUUGCCÜÜÜA (SEQ ID NO: 39) o lt-5075 ACUGUUGÁCAG?uCUGAÁG (SEQ ID NO; 40) Secuencias humanas (No. de acceso al Genbank: X06182.1) Hc-kit-346 GUWGUUAGAGAUCCUGCC (SEQID NO: 41) Hc-kit-812 GGUGACUUCAAUUAUGAAC (SEQ ID NO: 42) Hc-kit-869 GAUUCUGGAGUGUUCAUGU (SEQ ID NO: 43) Hc-kit-908 GGAUCAGCAAAUGUCACAA (SEQ ID NO: 44) Hc-kit-1251 CAAAACCAGAAAUCCUGAC (SEQ ID NO: 45) Hc-kit-1501 UACAACGAUGUGGGCAAGA (SEQ ID NO: 46) Hc-kit-1700 GAGGAGAUAAAUGGAAACA (SEQ ID NO: 47) Hc-kit-1742 CAACUUCCUUAUGAUCACA (SEQ ID NO: 48) Hc-kit-1763 AAUGGGAGUUUCCCAGAAA (SEQ ID NO: 49) Hc-kit-2016 CCCUGGUCAUUACAGAAUA (SEQ ID NO: 50) Hc-kit-2037 UUGUUGCUAUGGUGAUCUU (SEQ ID NO: 51) Hc-kit-2365 UUCCUCGCCUCCAAGAAUU (SEQ ID NO: 52) Hc-kit-2387 UUCACAGAGACUUGGCAGC (SEQ ID NO: 53) Hc-kit-2429 CGGAUCACAAAGAUUUGUG (SEQ ID NO: 54) Hc-kit-2456 CUAGCCAGAGACAUCAAGA (SEQ ID NO: 55) Hc-kit-2516 UGUGAAGUGGAUGGCACCU (SEQ ID NO: 56) Hc-kit-2573 GUCUGGUCCUAUGGGAUUU (SEQ ID NO: 57) Hc-kit-2668 AUCAAGGAAGGCUUCCGGA (SEQ ID N?\- 58) Hc-kit-2726 UAAUGAAGACUUGCUGGGA (SEQ ID NO: 59) Hc-kit-4512 GAUUCAGGUAUGUUGCCÜU (SEQ ID NO: 60) Hc-kit-5061 UGUUGACAGUUCUGAAGAA (SEQ ID NO: 61) Tabla 4 - Porciones Objetivo Lyn y Secuencias de Hebra Sentido del Agente ARNi Secuencias de ratón (No. de acceso al Genbank: M57696.1) Lyn-140 GAAGACUCAACCAGUACGU (SEQ ID NO: 62) Lyn-172 CUAUUUAUGUGAGAGAUCC (SEQ ID NO: 63) Lyn-196 GUCCAAUAAACAGCAAAGG (SEQ ID NO: 64) Lyn-259 AAGAUCCAGAGGAACAAGG (SEQ ID NO: 65) Lyn-626 GCACUACAAAAUUAGAAGU (SEQ ID NO: 66) Lyn-777 CAGAAGCCAUGGGAUAAAG (SEQ ID NO: 67) Lyn-864 GUCUGGAUGGGUUACUAUA (SEQ ID NO: 68) Lyn-954 GCCAACCUCAUGAAGACCU (SEQ ID NO: 69) Lyn-1058 UAGUUUGCUGGAUUUCCUC (SEQ ID NO: 70) Lyn-1154 UACAUCGAGCGGAAGAACU (SEQ ID NO: 71) Lyn-1271 GUACACAGCAAGGGAAGGU (SEQ ID NO: 72) Lyn-1388 GAUUGUCACCUAUGGGAAG (SEQ ID NO: 73) Lyn-1408 UUCCCUACCCAGGGAGAAC (SEQ ID NO: 74) Lyn-1477 UGGAGAACUGCCCAGAUGA (SEQ ID NO: 75) Secuencias humanas (No. de acceso al Genbank: M16038.1) HLyn-352 GAAGACUCAACCAGUACGU (SEQ ID NO: 76) HLyn-38 CUAUUUAUGUGAGAGAUCC (SEQ ID NO: 77) HLyn-408 UCCAAÜAAACAGCAAAGGC (SEQ ID NO: 78) HLyn-470 AAGAUCCAGAGGAACAAGG (SEQ ID NO: 79) HLyn-838 GCACUACAAAAUUAGAAGU (SEQ ID NO: 80) HLyn-989 CAGAAGCCAUGGGAUAAAG (SEQ ID NO: 81) HLyn-1076 GUCUGGAUGGGUUACUAUA (SEQ ID NO: 82) HLyn-1166 AAGCCAACCUCAUGAAGAC (SEQ ID NO: 83) HLyn-1270 CAGUUUGCUGGAUUUCCUG (SEQ ID NO: 84) HLyn-1366 UACAUCGAGCGGAAGAACU (SEQ ID NO: 85) HLyn-1483 GUACACAGCAAGGGAAGGU (SEQ ID NO: 86) HLyn-1600 AAUUGUCACCUAUGGGAAA ( SEQ ID NO : 87 ) HLyn-1620 AAUUCCCUACCCAGGGAGA ( SEQ ID NO : 88 ) HLyn-1689 UGGAGAACUGCCCAGAUGA ( SEQ ID NO : 89 ) Tabla 5 - Porciones Objetivo Syk y Secuencias de Hebra Sentido del Agente ARNi Secuencias de ratón (No . de acceso al Genbank : U25685 ) Syfc-172 AGGÁAGOCACÁCCÁCÜÁCA (SEQ IDNO; 90) Syk-307 AAGAAGCCCUUCAACCGGC (SEQ IDNO: 91) Syk-373 AACCUCAUCAGGGAAUÁUG (SEQ IDNO: 92) Sj -1009 AUGGÁCACAGAGOUGUÁCG (SEQIDNO:93) Sy -1169 UGÁAAÁCCGUGGCUGUGAA (SEQIDNO: 94) Syk~1450 UUÜGUGCACAGAGADCUGG (SEQIDNO: 95) Syk-1537 CUGCGUGCUGAUGAAAACU (SEQIDNO: 96) Syk-1606 GAÁUGCÁUCAACUACUACA (SEQIDNO: 97) Secuencias humanas (No. de acceso al Genbank: L28824) HSyfc-322 AGGAAGGCACACCÁCUACA (SEQ IDNO; 98) HSyk-457 AÁGAAGCCCUUCAACCGGC (SEQ IDNO: 99) HSyk-523 AACCUCAUCAGGGAAUAUG (SEQ ?DNO: 100) HSyk-1174 AUGGACACAGAGGUGUACG (SEQ IDNO; 101) HSyk-1334 UGAAAÁCCGUGGCUGUG?A (SEQ IDNO; 102) HSyk-1615 IIUUGUGCACAGAG?ÜCUGG (SEQ IDNO: 103) HSyk-1702 CUGCGUGCUGAUGAAAACU (SEQIDNO: 104) HSyfc-1771 GAÁUGCAUCA CUACUÁCA (SEQIDNO: 105) Tabla 6 - Porciones Objetivo ICOS y Secuencias de Hebra Sentido del Agente ARNi Secuencias de ratón (No. de acceso al Genbank: NM017480.1) ICOS-96 UAACAGGAGAAAUCAAUGG (SEQ ID NO: 1Ó7) ICOS-578 AGUGAAUACAUGUUCAUGG (SEQ ID NO: 108) IGOS-765 ÁUUCÜGCUGGUGUUUUGUU (SEQ ID NO: 109) ICOS-Í665 UAUUUAGCCÜGAAAGCUGC (SEQ ID NO: 110) Secuencias humanas (No. de acceso al Genbank: NM_012092.1) HICOS-76 UAACAGGAGAAÁUCAAUGG (SEQ ID NO: lll) HICOS-555 GGUGAAUACAUGUUCAUGA (SEQ ID NO: 112) HICOS-735 CUUCUGCUGGUGUUUUGUU (SEQ ID NO: 113) fflCOS-1668 CAUUUAGCCUGAAAGCUGC (SEQ ID NO: 114) Tabla 7 - Porciones Objetivo 0X4 OL y Secuencias de Hebra Sentido del Agente ARNi Secuencias de ratón (No. de acceso al Genbank: U12763.1) OX40L-175 GAUGAGAAUCUGGAAAACG {SEQ ID NO: U5) OX40L-2?I AAGUGGAAGAAGACGCUAA (SEQID O; 116) OX40L-1279 CüüCCÜUCAAAGAACUACC (SEQIDNO; 117) OX40L-1336 UGCAAAGAAAACCAGGAGA (SEQ ID NO: 118) Secuencias de humano (No. de acceso Genbank: X79929.1) HOX40L-188 AAGAUUCGAGAGGAACAAG (SEQ ID NO: 119) HOX40L-302 GUAUCCUCGAAUUCAAAGU (SEQ ID NO: 120) HOX40L-668 UGGUGAAUUCUGUGUCCUU (SEQ ID NO: 121) HOX40L-943 UACUAGGCACCUUUGUGAG (SEQ ID NO: 122) Tabla 8 Porciones de direccionamiento CD40 y secuencias de hebra sentido ARNi Secuencias de ratón (No. de acceso Genbank:M83312.1) CD40-299 AGAAUCAGACACUGUCUGU (SEQ ID NO: 123) CD40-1242 AACAGGUAGUGGAAUGAUG (SEQ ID NO: 124) CD40-1287 AUUCCAAGGCAGGUAAGAU (SEQ ID NO: 125) CD40-1403 UUGUCAUUUGACCUCCAUG (SEQ ID NO: 126) CD40-1422 UGUGCUCUGUGGUAAUGUA (SEQ ID NO: 127) CD40-1452 CACAUGUGCACAUAUCCUA (SEQ ID NO: 128) Secuencias de humano (No. de acceso Genbank: Z15017. 1) HCD40-148 GCUGUGUAUCUÜCAUAGAA' (SEQ ID NO: 129) HCD40-223 ACGAUACAGAGAUGCAACA (SEQ ID NO: 130) HCD40-635 UACUCAGAGCUGCAAAUAC (SEQ ID NO: 131) HCD40-707 UUGAAUUGCAACCAGGUGC (SEQ ID NO: 132) HCD40-734 UUGUCAAUGUGACUGAUCC (SEQ ID NO: 133) Tabla 9 Porciones de direccionamiento CD80 y Secuencias de hebra sentido del agente ARNi . Secuencias de ratón (No. de acceso Genbank:XM 148237.1) CD80-145 CUACAUCUCUGUUUCUCGA (SEQ ID NO: 134) CD80-233 CAAAGCAUCUGAAGCUAUG (SEQ ID NO: 135) CD80-1358 CUUGAUGACUGAAGUGGAA (SEQ ID NO: 136) CD80-148 GCAACUUGAUAUGUCAUGU (SEQ ID NO: 137) Secuencias de humano (No. de acceso Genbank: NM_005191. ) HCD80-257 UCUUCUACGUGAGCAAUUG (SEQ ID NO: 138) HCD80-411 CAAGUGUCCAUACCUCAAU (SEQIDNO: 139) HCD80-472 UCAGGUGUUAUCCACGUGA (SEQ ID NO: 140) HCD80-767 UGGCUGAAGUGACGUUAUC (SEQ ID NO: 141) HCD80-1201 AGGAAUGAGAGAUUGAGAA (SEQ ID NO: 142) HCD80-1271 AAGAUCUGAAGGUAGCCUC (SEQ ID NO: 143) HCD80-1482 AUGUUUCCAUUCUGCCAUC (SEQIDNO: 144) Tabla 10 Porciones de direccionamiento CD86 y Secuencias de hebra sentido del agente ARNi Secuencias de ratón (No. de acceso Genbank: NM_019388.1) CD86-194 AGUAUUUUGGCAGGACCAG (SEQ ID NO: 145) CD86-488 CAUAAAUUUGACCUGCACG (SEQ ID NO: 146) CD86-594 CAAGAUAAUGUCACAGAAC (SEQ ID NO: 147) Secuencias de humano (No. de acceso Genbank:NM_006889.1) HCD86-291 AGUAUUUUGGCAGGACCAG (SEQ ID NO: 148) HCD86-585 CAUAAAUUUGACCUGCUCA (SEQ ID NO: 149) HCD86-697 CAAGAUAAUGUCACAGAAC (SEQ ID NO: 150) Tabla 11 - Porciones de direccionamiento RelA y Secuencias de hebra sentido del agente ARNi Secuencias de ratón (No. de acceso Genbank:BC003818) RelA-255 AGCACAGAUACCACCAAGA (SEQ ID NO: 151) RelA-282 ACCAUCAAGAUCAAUGGCU (SEQ ID NO: 152) RelA-672 AACACUGCCGAGCUCAAGA (SEQ ID NO: 153) RelA-682 AGCÜCAAGAUCUGCCGAGU (SEQ ID NO: 154) RelA-1707 AUUGCGGACAUGGACUUCU (SEQ ID NO: 155) RelA-1735 UGAGUCAGAUCAGCUCCUA (SEQ ID NO: 156) Secuencias de humano (No. de acceso Genbank: BC011603) HRelA-214 AGCACAGAUACCACCAAGA (SEQ ID NO: 157) HRelA-241 ACCAUCAAGAUCAAUGGCU (SEQ ID NO: 158) HRelA-631 AACACUGCCGAGCUCAAGA (SEQ ID NO: 159) HRelA-641 AGCUCAAGAUCUGCCGAGU (SEQ ID NO: 160) HRelA-1181 AUUGCGGACAUGGACUUCU (SEQ ID NO: 161) HRelA-1209 UGAGUCAGAUCAGCUCCUA (SEQ ID NO: 162) Tabla 12 Porciones de direccionamiento de RelB y Secuencias de hebra sentido del agente ARNi Secuencias de ratón (No. de acceso Genbank:BC019765) RelB-794 UUUAACAACCUGGGCAUCC (SEQ ID NO: 163) RelB-840 CUGCCAUUGAGCGGAAGAU (SEQ ID NO: 164) RelB-1583 CUCCUGGACGAUGGCUUUG (SEQ ID NO: 165) RelB-1788 UUGUGGGCAGCAACAUGUU (SEQ ID NO: 166) Secuencias de humano (No. de acceso Genbank: BC028013) HRelB-747 UUUAACAACCUGGGCAUCC (SEQ ID NO: 167) HRelB-793 CUGCCAUUGAGCGGAAGAU (SEQ ID NO: 168) HRelB-1533 CUCCUGGACGAUGGCUUUG (SEQ ID NO: 169) HRelB-1738 UUGUGGGCAGCAACAUGUU (SEQ ID NO: 170) Tabla 13 Porciones de direccionamiento 4-1BBL y Secuencias de hebra sentido del agente ARNi Secuencias de ratón (No. de acceso Genbank:Ll5435. ) 4-1BBL-309 UAGUCGCUUUGGUUUUGCU (SEQ ID NO: 171) 4-1BBL-418 AGAGAAUAAUGCAGACCAG (SEQ ID NO: 172) 4-1BBL-987 UAUCCUUCUUGUGACUCCU (SEQ ID NO: 173) 4-1BBL-1016 UCCUCAAGCUGCUAUGUUU (SEQ ID NO: 174) Secuencias de humano (No. de acceso Genbank:U03398.1) H4-1BBL-298 AAUGUUCUGCUGAUCGAUG (SEQ ID NO: 175) H4-1BBL-374 UGAGCUACAAAGAGGACAC (SEQ ID NO: 176) H4-1BBL-1019 AGGAUCCUGAGUUUGUGAA (SEQ ID NO: 177) H4-1BBL-1207 CUGUAAUGUGCCAGCAUUG (SEQ ID NO: 178) H4-1BBL-1240 GGCUAUAGAAACAUCUAGA (SEQ ID NO: 179) H4-1BBL-1283 UAUGGUAAUACGUGAGGAA (SEQ ID NO: 180) Tabla 14 Porciones de direccionamiento TLRl y Secuencias de hebra sentido del agente ARNi Secuencias de ratón (No. de acceso Genbank:AY009154.1) TLR1-468 UUUGGAUUUGUCCCACAAU (SEQ ID NO: 181) TLR1-1698 GGAUUUCUUCCAGAGCUGU (SEQIDNO: 182) TLR1-2246 GUUACAAGUCCAUCUUUGU (SEQ ID NO: 183) Secuencias de humano (No. de acceso Genbank: NM 003263.) HTLR1-565 CUUGGAUUUGUCCCACAAC (SEQIDNO: 184 ) HTLR1-1795 UGAUUUCUUCCAGAGCUGC (SEQ ID NO: 185) HTLR1-2343 GUUACAAGUCCAUCUUUGU (SEQ ID NO: 186) Tabla 15 Porciones de direccionamiento TLR2 y Secuencias de hebra sentido del agente ARNi Secuencias de ratón (No. de acceso Genbank:AF216289.1) TLR2-477 GAAAAGCCUUGACCUGUCU (SEQ ID NO: 187) TLR2-2460 CGAACUGGACUUCUCCCAC (SEQIDNO: 188) Secuencias de humano (No. de acceso Genbank: M003264. ) HTLR2-312 AAAAAGCCUUGACCUGUCC (SEQ ID NO: 189) HTLR2-2295 UGAACUGGACUUCUCCCAU (SEQ ID NO: 190) Tabla 16 Porciones de direccionamiento TLR3 y secuencias de hebra sentido del agente ARNi Secuencias de ratón (No. de acceso Genbank:NMl26166. ) TLR3-1178 GAAGUGGACAAAUCUCACC (SEQ ID NO: 191) TLR3-1711 GCCAGGAAUGGAGAGGUCU (SEQ ID NO: 192) LR3-1876 CUCUUCGUAACUUGACCAU (SEQ ID NO: 193) TLR3-1904 AAGCAACAACAACAUAGCC (SEQ ID NO: 194) TLR3-2046 CUGUCUCACCUCCACAUCU (SEQ ID NO: 195) TLR3-2309 CUGCACGUGUGAAAGUAUU (SEQ ID NO: 196) TLR3-2848 GAAGAUUCAAGGUACAUCA (SEQ ID NO: 197) Secuencias de humano (No. de acceso Genbank: NM 003265.) HTLR3-914 AAAGUGGACAAAUCUCACU (SEQ ID NO: 198) HTLR3-1447 GCCAGGAAUGGAGAGGUCU (SEQ ID NO: 199) HTLR3-1612 CUCUUCGUAACUUGACCAU (SEQ ID NO: 200) HTLR3-1640 AAGCAACAACAACAUAGCC (SEQ ID NO: 201) HTLR3-1782 CUGUCUCACCUCCACAUCC (SEQ ID NO: 202) HTLR3-2045 UUGCACGUGUGAAAGUAUU (SEQ ID NO: 203) HTLR3-2584 AAAGAUUCAAGGUACAUCA (SEQ ID NO: 204) HTLR3-2682 AACCAUGCACUCUGUUUGC (SEQ ID NO: 205) Tabla 17 Porciones de direccionamiento TLR4 y Secuencias de hebra sentido del agente ARNi Secuencias de ratón (No. de acceso Genbank:NM_021297.1) TLR4-266 UGGAUUUAUCCAGGUGUGA (SEQ ID NO: 206) TLR4-410 UGGUGGCUGUGGAGACAAA (SEQ ID NO: 207) TLR4-2138 ACUACAGAGACUUUAUUCC (SEQ ID NO: 208) TLR4-2169 UUGCUGCCAACAUCAUCCA (SEQ ID NO: 209) Secuencias de humano (No. de acceso Genbank: U88880.1) HTLR4-412 UGGAUUUAUCCAGGUGUGA (SEQ ID NO: 210) HTLR4-556 UGGUGGCUGUGGAGACAAA (SEQ ID NO: 211) HTLR4-2287 ACUACAGAGACUUUAUUCC (SEQ ID NO: 212) HTLR4-2317 UUGCUGCCAACAUCAUCCA (SEQ ID NO: 213) Tabla 18 Porciones de direccionamiento TLR5 y Secuencias de hebra sentido del agente ARNi. Secuencias de ratón (No. de acceso Genbank:NM016928.1) TLR5-1160 CAGCUUCAACUAUAUCAGU (SEQ ID NO: 214) TLR5-3130 CUUUGCUCAAACACCUGGA (SEQ ID NO: 215) Secuencias de humano (No. de acceso Genbank:NM003268.3) HTLR5-800 GAGCUUCAACUAUAUCAGG (SEQ ID NO: 216) HTLR5-2770 CUUUGCUCAAACACCUGGA (SEQ ID NO: 217) Tabla 19 Porciones de direccionamiento TLR6 y Secuencias de hebra sentido del agente ARNi . Secuencias de ratón (No. de acceso Genban :NM_011604.1) TLR6-550 UUGCUCACUUGCAUCUAAG (SEQ ID NO: 218) Secuencias de humano (No. de acceso Genbank:NM_006068.2) Tabla 20 Porciones de direccionamiento TLR7 y Secuencias de hebra sentido del agente ARNi . Secuencias de ratón (No. de acceso Genbank:NM__133211.2) Secuencias de humano (No. de acceso Genbank:NM_016562.2) Tabla 21 Porciones de direccionamiento TLR8 y Secuencias de hebra sentido del agente ARNi . Secuencias de ratón (No. de acceso Genbank:NM_133212.1) TLR8-2589 ACUGGGAUGUUUGGUUUAU (SEQ ID NO: 240) . TLR8-2821 UAACCUCAUGCAGAGCAUA (SEQ ID NO: 241) TLR8-2921 UUGCAGAGGCUAAUGGAUG (SEQ ID NO: 242) TLR8-2939" GAGAACAUGGAUGUGAUUA (SEQ ID NO: 243) Secuencias de humano (No. de acceso Genbank:NM016610.2) HTLR8-2763 ACUGGGAUGUUUGGUUUAU (SEQ ID NO: 244) HTLR8-2995 CAACCUCAUGCAGAGCAUC (SEQ ID NO: 245) HTLR8-3095 UUGCAGAGGCUAAUGGAUG (SEQ ID NO: 246) HTLR8-3113 GAGAACAUGGAUGUGAUUA (SEQ'lD NO:247) Tabla 22 Porciones de direccionamiento TLR9 y Secuencias de hebra sentido del agente ARNi . Secuencias de ratón (No. de acceso Genbank:AF314224.1) TLR9-1103 AACCUGUCCUUCAAUUACC (SEQ ID NO: 248) TLR9-1200 ACGGCAUCUUCUUCCGCUC (SEQ ID NO: 249) TLR9-1283 AUGAACUUCAUCAACCAGG (SEQ ID NO: 250) TLR9-2156 AAGGCCCUGACCAAUGGCA (SEQ ID NO: 251) Secuencias de humano (No. de acceso Genbank:NM017442.2) HTLR9-1652 AACCUGUCCUUCAAUUACC (SEQ ID NO: 252) HTLR9-1749 ACGGCAUCUUCUUCCGCUC (SEQ ID NO: 253) HTLR9-1832 AUGAACUUCAUCAACCAGG (SEQ ID NO: 254) HTL.R9-2702 AAGGCCCUGACCAAUGGCA (SEQ ID NO: 255) Tabla 23 Porciones de direccionamiento FceRa y Secuencias de hebra sentido del agente ARNi Secuencias de ratón (No. de acceso Genbank:AJ245551.1) CD83-454 GACACUCAUCAUUUUCACC (SEQ ID NO: 256) CD83-841 GCUAUCUGGUCAACCUCGU (SEQ ID NO: 257) CD83-881 AAGCUAUGGUGAGAUGCAG (SEQ ID NO: 258) CD83-955 CUGAGGACAGCUGUCCUCU (SEQ ID NO: 259) CD83-1071 CAGUGGGAAAUAUUUAGCA (SEQ ID NO: 260) CD83-1251 CAUGUACUUGUCAAAGAAG (SEQ ID NO: 261) Secuencias de humano (No. de acceso Genbank:NM004233.2) HCD83-779 AACACUCAUCAUUUUCACU (SEQ ID NO: 262) HCD83-1176 GCUAUCUGGUCAACCUCCU (SEQ ID NO: 263) HCD83-1217 AAGCUAUGGUGAGAUGCAG (SEQ ID NO: 264) HCD83-1290 CÜGAGGACAGCUGUCCUCU (SEQ ID NO: 265) HCD83-1406 CAGUGGGAAAUAUUUAGCA (SEQ ID NO: 266) HCD83-1584 UAUGUACUUGUCAAAGAAG (SEQ ID NO: 267) Tabla 24 Porciones de direccionamiento SLAM y Secuencias de hebra sentido del agente ARNi Secuencias de ratón (No. de acceso Genbank: NM__013730.1) SLAM-100 UUUCUCUCCCUGGCUUUUG (SEQ ID NO: 268) SLAM-123 GAGCUACGGAACAGGUGGA (SEQ ID NO: 269) Secuencias de humano (No. de acceso Genbank:AY040554.1) SLAM-40 ÜUUCUCUCCCUGGCUUUUG (SEQ ID NO: 270) HSLAM-63 AAGCUACGGAACAGGUGGG (SEQ ID NO: 271) Tabla 25 Porciones de direccionamiento de la cadena ? común y Secuencias de hebra sentido del agente ARNi Secuencias de ratón (No. de acceso Genbank: NM_013563.1) IL-2Ry-209 GAGUACAUGAAUUGCACUU (SEQ ID NO: 272) IL-2Ry-501 UGAGUGAAUCCCAGCUAGA (SEQ ID NO: 273) IL-2Ry-933 CCUGGAGUGGUGUGUCUAA (SEQ ID NO: 274) IL-2Ry-972 AGCCAGACUACAGUGAACG (SEQ ID NO: 275) Secuencias de humano (No. de acceso Genbank :NM_000206.1) HIL-2Ry-216 GAGUACAUGAAUUGCACUU (SEQ ID NO: 276) HIL-2Ry-508 UGAGUGAAUCCCAGCUAGA (SEQ. ID NO: 277) H?L-2Ry-940 CCUGGAGUGGUGUGUCUAA (SEQ ID NO: 278) HIL-2Ry-979 AGCCAGACUACAGUGAACG (SEQIDNO: 279) Tabla 26 Porciones de direccionamiento FceRa y Secuencias de hebra sentido del agente ARNi Secuencias de ratón (No. de acceso Genbank:M94967.1) COX2-175 CAGCAAAUCCUUGCUGUUC (SEQIDNO : 280 ) COX2-232 GAUUUGACCAGUAUAAGUG (SEQIDNO : 281) COX2-337 CAAACACAGUGCACUACAU (SEQIDNO : 282 ) COX2-448 AUUUGAUUGACAGUCCACC (SEQIDNO : 283 ) COX2-489 UACAAAAGCUGGGAAGCCU (SEQ ID NO: 284) COX2-681 UUCUUUGCCCAGCACUUCA (SEQIDNO : 285) COX2-714 AAGACAG?UCAUAAGCGAG (SEQ ID NO: 286) COX2-809 UAAACUGCGCCUUUUCAAG (SEQ ID NO: 287) COX2-818 CCUUUUCAAGGAUGGAAAA (SEQ ID NO: 288) COX2-896 AGAGAUGAUCUACCCUCCU (SEQ ID NO: 289) COX2-954 GUCUUUGGUCUGGUGCCUG (SEQ ID NO: 290) COX2-973 GUCUGAUGAUGUAUGCCAC (SEQ ID NO: 291) COX2-1433 CUCCAUUGACCAGAGCAGA (SEQ ID NO: 292) COX2-1452 GAGAUGAAAUACCAGUCUC (SEQ ID NO: 293) COX2-1473 AAUGAGUACCGCAAACGCU (SEQ ID NO: 294) COX2-1516 UUGAAGAACUUACAGGAGA (SEQ ID NO: 295) COX2-1657 UUGGAGCACCAUUCUCCUU (SEQ ID NO: 296) COX2-1764 ACUGCCUCAAUUCAGUCUC (SEQ ID NO: 297) Secuencias de humano (No. de acceso Genbank:M90100.1 ] HCOX2-147 CAGCAAAUCCUUGCUGUUC (SEQ ID NO: 298) HCOX2-204 GAUUUGACCAGUAUAAGUG (SEQ ID NO: 299) HCOX2-309 CAAACACAGUGCACUACAU (SEQ ID NO: 300) HCOX2-420 AUUUGAUUGACAGUCCACC (SEQ ID NO: 301) HCOX2-461 UACAAAAGCUGGGAAGCCU (SEQ ID NO: 302) HCOX2-653 UUCUUUGCCCAGCACUUCA (SEQ ID NO: 303) HCOX2-686 AAGACAGAUCAUAAGCGAG (SEQ ID NO: 304) HCOX2-781 UAAACUGCGCCUUUUCAAG (SEQ ID NO: 305) HCOX2-790 CCUUUUCAAGGAUGGAAAA (SEQ ID NO: 306) HCOX2-868 AGAGAUGAUCUACCCUCCU (SEQ ID NO: 307) HCOX2-926 GUCUUUGGUCUGGUGCCUG (SEQ ID NO: 308) HCOX2-945 GUCUGAUGAUGUAUGCCAC (SEQ ID NO: 309) HCOX2-1405 UUCCAUUGACCAGAGCAGG (SEQ ID NO: 310) HCOX2-1424 CAGAUGAAAUACCAGUCUU (SEQ ID NO: 311) HCOX2-1445 AAUGAGUACCGCAAACGCU (SEQ ID NO: 312) HCOX2-1488 UUGAAGAACUUACAGGAGA (SEQ ID NO: 313) HCOX2-1629 UUGGAGCACCAUUCUCCUU (SEQ ID NO: 314) HCOX2-1736 ACUGCCUCAAUUCAGUCUC (SEQ ID NO:315).

VII. Métodos para la identificación, comprobación, y selección de agentes de ARNi que reducen o eliminan la hipersensitividad mediada por IgE. Las técnicas y reactivos descritos en la presente pueden aplicarse fácilmente al diseño de nuevos agentes de ARNi adicionales, dirigidos a otros genes o regiones del gen. Estos agentes pueden probarse para su actividad al inhibir las respuestas mediadas por Ig-E, enfermedades y condiciones discutidas en la presente. En varias modalidades de la invención, los agentes ARNi tales como ARNi o ARNh son probados primero introduciendo agentes ARNi candidatos en las células (por ejemplo, mediante la administración exógena o introduciendo en la célula un vector o constructo que dirijan la síntesis endógena del ARNi o ARNh) . La capacidad de un agente candidato ARNi para reducir el nivel de transcripción de direccionamiento se valora entonces, midiendo la cantidad de transcripción de direccionamiento usando por ejemplo, técnicas Northern blot, ensayos de protección de nucleasa, PCR de transcripción inversa (RT) , PCR en tiempo real RT, análisis de microconfiguración, etc., La capacidad de un agente candidato ARNi para inhibir la producción de un polipéptido codificado mediante la transcripción de direccionamiento (ya sea a nivel transcripcional o post- transcripcional) puede medirse usando una variedad de metodologías basadas en un anticuerpo, pero que no se limitan a, técnicas Western blot, inmunoensayos, citometría de flujo, microconfiguraciones de proteínas, etc. En general, puede usarse cualquier método para medir la cantidad de la transcripción de direccionamiento o un polipéptido codificado por la transcripción de direccionamiento. En general, ciertos inhibidores preferidos reducen el nivel de la transcripción de direccionamiento en al menos alrededor de 2 pliegues, preferiblemente por lo menos alrededor de 4 pliegues, más preferiblemente por lo menos alrededor de 8 pliegues, por lo menos alrededor de 16 pliegues, por lo menos alrededor de 64 pliegues o incluso un grado aun mayor en relación al nivel que estaría presente en la ausencia del inhibidor (por ejemplo, en una célula control comparable que falta el inhibidor) . La invención proporciona varios métodos adicionales para identificar agentes tales como ARNi tales como ARNi y ARNh y probar su eficacia. Por ejemplo, los agentes ARNi inventivos pueden probarse para evaluar su efecto in vitro en la respuesta celular tales como la desgranulación de mastocitos en respuesta a diversos estímulos tales como la respuesta de células IgE, Th2 (por ejemplo, proliferación, descarga de citoquinas tales como IL-3, IL-4, IL-5, 11-6, IL-10, e IL-13) en respuesta a la estimulación mediante DC, macrófagos, células B, o células microgliales, etc. Los métodos para realizar tales ensayos son bien conocidos en el arte. En general, para cualquiera de los ensayos anteriores, las células que se han suministrado a los agentes de ARNi inventivos (células de prueba) pueden compararse con células similares o comparables que no han recibido la composición inventiva (células control) . Así, la invención proporciona un método para identificar a un agente ARNi que comprende una secuencia adecuada para el tratamiento de una condición caracterizada por hipersensibilidad mediada por IgE o actividad de mastocitos inapropiada o excesiva que comprende: (i) suministrar un agente candidato ARNi a los mastocitos ya sea previo a, al mismo tiempo como, o después de la exposición a un estímulo apropiado; (ii) evaluar la producción o secreción de un mediador; (iii) comparar la cantidad del mediador producida o secretada en presencia del agente ARNi con la cantidad producida o secretada en ausencia del agente ARNi; y (iv) identificar un agente ARNi que comprende una secuencia adecuada si la cantidad del mediador producida o secretada en presencia del agente ARNi es menor que la cantidad del mediador producida o secretada en ausencia del agente ARNi. El agente ARNi puede ser un ARNi, ARNh, o vector de ARNi en varias modalidades de la invención. Ver el ejemplo 2 que describe la prueba de la capacidad de un ARNi candidato para inhibir la desgranulación de los mastocitos. Los agentes ARNi inventivos pueden ser administrados a sujetos, por ejemplo, roedores, primates no humanos y células tales como células de mastocitos, células Th2, DC, células B, etc., pueden cosecharse a partir del sujeto. La capacidad de agentes ARNi inventivos para inhibir la expresión de la transcripción de direccionamiento y/o su proteína codificada se mide como arriba. Como se mencionó arriba, ciertos agentes ARNi se dirigen a la transcripción que codifica a las proteínas que contribuyen a y/o son necesarias para la supervivencia de los mastocitos y/o proliferación (por ejemplo, el kit C) . El efecto de los agentes ARNi inventivos en el número de los mastocitos puede también medirse, dónde una disminución en el número de mastocitos seguido de la administración de un agente ARNi inventivo es una indicación de su eficacia. La invención proporciona un método para identificar a un agente ARNi que comprende una secuencia adecuada para el tratamiento de una condición caracterizada por la hipersensibilidad mediada por IgE o actividad de células auxiliadoras Th2 excesiva o inapropiada: (i) suministrar el agente ARNi candidato a un cultivo que comprende células T y APC; (ii) evaluar la proliferación de células T y/o evaluar la producción o secreción de una citoquina característica de las células Th2; (iii) comparar la magnitud de la proliferación de células T o la producción o secreción de la citoquina en presencia del agente ARNi con la magnitud de la proliferación de células T o la producción o secreción de la citoquina en ausencia del agente ARNi; y (iv) identificar un agente ARNi que comprende una secuencia adecuada si la magnitud de la proliferación de células T o la producción o secreción de la cítoquina en presencia del agente ARNi es menor que la magnitud de la proliferación de la células T o la producción o secreción de la citoquina en ausencia del agente ARNi . (Las pruebas pueden incluir un control en el que el agente ARNi está ausente pero que también puede hacer uso de información previa con respecto a la cantidad de mediador producido o secretado en ausencia de inhibición o la cantidad de proliferación de células T o producción de citoquinas o liberación en ausencia de inhibición.) Estos ensayos pueden usarse para probar agentes ARNi que dirigen cualquier transcripción y no se limita a agentes que dirigen las transcripciones descritas en la presente. Ciertos agentes ARNi inventivos se dirigen a las transcripciones que codifican proteínas que contribuyen o son necesarias para la producción de IgE. Puede medirse el efecto del agente ARNi inventivo en la producción de IgE mediante células B en el cultivo celular o en los niveles de IgE en un sujeto. Una disminución en el nivel de IgE seguido de la administración de un agente ARNi inventivo, o una respuesta IgE reducida seguido de la administración de un antígeno en presencia del agente ARNi contra la respuesta IgE esperada en ausencia del agente ARNi es una indicación de la eficacia del agente ARNi. La invención proporciona un método para identificar a un agente ARNi que comprende una secuencia adecuada para el tratamiento de una condición caracterizada por la hipersensibilidad mediada por IgE que comprende: (i) suministrar un agente ARNi candidato a un cultivo que comprende las células B; (ii) evaluar la producción o secreción de IgE; (iii) comparar la cantidad de IgE producida o secretada en presencia del agente ARNi con la cantidad producida o secretada en ausencia del agente de ARNi; y (iv) identificar un agente ARNi que comprende una secuencia adecuada si la cantidad de IgE producida o secretada en presencia del agente ARNi es menor que la cantidad de IgE producida o secretada en ausencia del agente ARNi. La invención proporciona además otro método para identificar un agente ARNi gue comprende una secuencia adecuada para el tratamiento de una condición caracterizada por hipersensibilidad mediada por IgE que comprende: (i) suministrar un agente ARNi candidato a un sujeto; (ii) obtener un valor para ún indicador de hipersensibilidad mediada por IgE seleccionada del grupo que consiste del: nivel del suero de IgE, proliferación de células T, producción de una citoquina característica de las células Th2, inflamación de las vías respiratorias, reactividad de las vías respiratorias, remodelación de la pared de las vías respiratorias, y la función pulmonar; (iii) comparar el valor obtenido en presencia * del agente ARNi con el valor obtenido en ausencia del agente ARNi; y (iv) identificar un agente ARNi que comprende una secuencia adecuada si el valor obtenido en presencia del agente ARNi es menor que el valor obtenido en ausencia del agente ARNi. Se observa que si la eficacia de un agente ARNi cuya porción del duplo comprende una secuencia particular que resulta en un ARNi que se establece usando un tipo de agente de ARNi (por ejemplo, un vector ARNi) , la secuencia, en general, también será útil en el contexto de otros tipos de agentes de ARNi, por ejemplo, ARNi o ARNh. Así, por ejemplo, si un vector ARNi como un vector lentiviral reduce los síntomas de asma o rinitis alérgica en un modelo animal de tal condición, entonces, un ARNi o ARNh que tienen la misma porción del duplo para la cual el vector ARNi proporciona una plantilla, en general, también son útiles para reducir los síntomas del asma o rinitis alérgica. Por consiguiente, los métodos anteriores se describen en términos de identificar a un agente ARNi que comprende una secuencia adecuada (es decir, la secuencia de la porción del duplo) en lugar de términos para identificar al propio agente ARNi eficaz. Sin embargo, se entenderá que la identificación de un agente ARNi que comprende una secuencia adecuada esencialmente resulta en la identificación del propio agente de ARNi y también de agentes ARNi que tienen una porción del duplo con la misma secuencia. Agentes ARNi inhibidores potenciales pueden probarse usando cualquier variedad de modelos animales que se han desarrollado para la alergia y/o asma, por ejemplo, roedor, oveja, o modelos de primates no humanos. Ver Isenberg-Feig, H., et al . , "Animal models of allergic asthma" Curr Allergy Astma Rep. , 3(1): 70-8, 2003, y referencias de las mismas, mediante ejemplos de modelos animales adecuados son útiles para probar los terapéuticos de la presente invención. Ver también Wegner CD, Gundel RG, Abraham WM, et al., J. Allergy Clin Immunol, 91: 917-29, 1993; Te elkovski, J., et al., Thorax, Volumen 53 (10): 849-856, 1998. Muchos de tales modelos se basan en la sensibilización mediante la administración sistémica de antígenos de proteína tales como ovalbúmina y pruebas inmunogénicas de inhalación subsecuentes seguido por la evaluación de varias respuestas. Estas incluyen los indicadores tales como el nivel de suero IgE específico para el antígeno, la proliferación de células T específicas de antígeno, la inflamación de las vías respiratorias (por -ejemplo, acumulación de células inflamatorias tales como linfocitos, neutrófilos y eosofínilos en las vías respiratorias) , reactividad de las vías respiratorias (por ejemplo, en respuesta a la prueba inmunogénica de metacolina) , remodelación de la pared de las vías respiratorias (por ejemplo, espesor de las vías respiratorias) , y la función pulmonar. Los agentes ARNi dirigidos al TLR, por ejemplo, TLR4, puede- probarse en cualquiera de una variedad de modelos animales para la sepsis, choque o lesión relacionada con quemaduras. Las composiciones que comprenden ARNi candidatos, constructos ARNh o vectores capaces de dirigir la síntesis de tales ARNi o ARNh dentro de una célula hospedera (es decir, que comprende plantillas para la transcripción del ARNi o ARNh, enlazados operablemente a las señales de expresión apropiadas) , o células diseñadas genéticamente o manipuladas para contener agentes ARNi candidatos que pueden ser administrados a un sujeto animal o humano previo a, . simultáneamente con, o siguiendo una exposición a un antígeno o en ausencia de una exposición conocida. Se valora la capacidad de la composición para prevenir o reducir la hipersensibilidad mediada por IgE y/o retrasar o prevenir la apariencia de síntomas relacionados con las condiciones y enfermedades asociadas con tal hipersensibilidad (por ejemplo, rinitis alérgica y asma) y/o disminuir su severidad en relación a los sujetos expuestos comparablemente que no han recibido el inhibidor potencial. Como se describe arriba, se han diseñado una variedad de agentes ARNi dirigidos a una variedad de proteínas importantes en las respuestas mediadas por IgE. La disponibilidad de unos pocos agentes inhibitorios potentes facilitará su uso óptimo en las combinaciones. Por ejemplo, los agentes ARNi dirigidos a las diferentes transcripciones pueden "tener un efecto sinérgico, es decir, un efecto mayor que la suma de los efectos individuales, por ejemplo, inhibiendo las múltiples trayectorias que conducen a' la producción de IgE y/o respuesta a IgE o inhibiendo las trayectorias en múltiples tipos celulares involucrados en las respuestas mediadas por IgE. Así, los agentes ARNi pueden probarse en combinaciones de dos o más para encontrar las combinaciones más eficaces. Por otra parte, con objeto de evitar efectos secundarios no deseados, puede ser deseable utilizar agentes ARNi que produzcan una inhibición menor de expresión de su transcripción de direccionamiento. Por lo tanto, la invención abarca el ensayo sistemático de agentes ARNi dirigidos a las transcripciones descritas arriba, solas o en combinación. De acuerdo a una metodología, los ARNi o ARNh no sobretraslapadas cuyas secuencias abarcan la transcripción entera que se sintetiza y prueba in vitro en células o líneas celulares como se describe arriba y/o in - vivo en modelos animales tales como un ratón alérgico. Además, las potencias de ARNi o ARNh pueden ser comparadas titulando la cantidad de ARN usada para la transfección. Por ejemplo, las diferentes cantidades de ARN inventivas (tales como 0.025, 0.05, 0.1, y 0.25 nmol) , ya sea individualmente o en combinaciones, puede ser transfectadas o electroporadas en las células de mastocitos, y desgranulación (descarga de mediadores tales como la histamina, prostaglandinas, el ácido araquidónico, etc.) en la respuesta a los estímulos que pueden medirse (ver el Ejemplo 2 par detalles) . La capacidad de agentes ARNi inventivos para reducir o eliminar la respuesta de Th2 •también puede medirse ya sea in vitro, por ejemplo, en un cultivo mixto de células T y DCs, o in vivo. Puede evaluarse la eficacia de los agentes ARNi también usando un modelo murino con inflamación de las vías respiratorias alérgica. También pueden administrarse cantidades que varían de agentes ARNi a ratones sensibilizados. La respuesta a las pruebas inmunogénicas de antígenos en estos ratones puede evaluarse en una variedad de formas, que incluyen medir la expresión de citoquinas inflamatoria (por ejemplo, .MIP-1 a, MIP-1 ß, IL-4, IL-5, IL-13, etc. ), midiendo los números de eosinófilos y neutrófilos en los pulmones, y realizando las pruebas de función pulmonares (ver el ejemplo 3 para detalles) . Los resultados de tales experimentos ayudarán a determinar no solo las potencias relativas de cada agente de ARNi sino también la cantidad mínima necesaria para la máxima inhibición. El último es útil para determinar cuánto de cada uno debe usarse en las combinaciones.

VIII. Composiciones de ARNi que comprenden agentes de suministro Los inventores han reconocido que la terapia de ARNi eficaz en general, que incluye la prevención y terapia de condiciones y enfermedades asociadas con las reacciones mediadas con IgE, será reforzada mediante la introducción eficaz de agentes de ARNi tales como ARNi, ARNh, y vectores de ARNi en las células. De acuerdo a ciertas modalidades de la invención, se administran agentes de ARNi a las células en las vías respiratorias o a células que alinean otras superficies de la mucosa. En general, los agentes de ARNi pueden suministrarse en cualquier sitio en o en el cuerpo, que incluyen pero no se limitan a, sitios en donde la desgranulación de las células de mastocitos o interacción celular entre APC y células B que producen IgE puede ocurrir, o en cualquier lugar en el que las células de mastocitos, basofilos, APC, células B que producen IgE y/o células Th2 puede ocurrir. Por lo tanto, la invención proporciona composiciones que comprenden cualquiera de una variedad de agentes de suministro no virales para el suministro mejorado de ARNi, ARNh, y/o vectores ARNi a las células en los organismos intactos, por ejemplo, mamíferos. Como se usa en la presente, el concepto de "suministro" incluye el transporte de un ARNi, ARNh, o vector ARNi de su sitio de entrada en el cuerpo al lugar de las células en las que funciona, - además de la captación celular del ARNi, ARNh, o vector y cualquier etapa subsiguiente involucrada en la elaboración de ARNi o ARNh disponible a la maquinaria ARNi intracelular (por ejemplo, liberación o descarga de ARNi o ARNh de endosomas) . Por lo tanto, la invención abarca composiciones que comprenden (i) un agente de ARNi tal como un ARNi o ARNh dirigido a cualquiera de las transcripciones discutidas arriba, y/o un vector de ARNi cuya presencia dentro de una célula resulta en la producción de un agente de ARNi tal como un ARNi o ARNh que se dirigen a cualquiera de las transcripciones discutidas arriba; y (ii) cualquiera de una variedad de agentes de suministro que incluyen pero no se limitan a, polímeros catiónicos, polímeros catiónicos modificados, transportadores moleculares del péptido (que incluyen arginina o péptidos ricos en histidina) , hidratos de carbono, lípidos (que incluyen lípidos catiónicos, lípidos neutros y combinaciones de los mismos) , liposomas, lipopoliplexos, polímeros no catiónicos, tensoactivos adecuados para la introducción en el pulmón, o mezclas de cualquiera de los' anteriores, etc., Ciertos agentes de suministro incorporan una porción que incrementa el suministro o incrementa el suministro selectivo del agente ARNi o vector a las células que se desea para inhibir la transcripción. En ciertas modalidades de la invención, el agente de suministro es biodegradable. Ciertos agentes de suministro adecuados para usarse en la presente invención se describen abajo y en la solicitud de patente U.S. copendiente 10/674,087, titulada "Compositions and Methods for Delivery of Short Interfering RNA and Short Hairpin RNA to Mammals". Los agentes de suministro pueden usarse en combinación. Los sistemas basados en polímeros catiónicos se han investigado como portadores para la transfección del ADN (Han, S., O.., et al . , Mol . Therapy 2:302-317,2000). Se piensa que la capacidad de los polímeros catiónicos para promover la captación intracelular de ADN surge parcialmente de su capacidad para enlazar al ADN y Condensar moléculas de ADN de plásmidos grandes en complejos de ADN/polímero más pequeños para una endocitosis más eficaz. Los complejos de polímero de ADN/catiónico actúan también como bioadhesivos debido a su interacción electrostática con residuos de ácido siálico cargados negativamente de las glicoproteínas de la superficie celular (Soane, R. , J. , et al . , Int . J. Phram . 178: 55-65,1999). Además, algunos polímeros, tales como la polilisina modificada por el grupo imidazol (PLL) , promueve aparentemente la ruptura de la membrana endosomal y por consiguiente la descarga de ADN en el citosol (Putnam, D., et al., Proc . Nati . Acad. Sci . USA 98:1200-1205, 2000). La invención proporciona por lo tanto, composiciones que comprenden al menos un agente ARNi y un polímero catiónico y métodos para inhibir la expresión del gen de direccionamiento administrando tales composiciones . El agente de ARNi se dirige a una transcripción que codifica a una proteína o péptido cuya inhibición resulta en una disminución en la hipersensibilidad mediada por IgE, por ejemplo, una transcripción que codifica a una proteína o péptido cuya inhibición resulta en cualquiera de lo siguiente: (1) una disminución en la producción de IgE mediante las células B; (2) una disminución en el número de células de mastocitos; (3) una disminución en la activación de las células de mastocitos; (4) una disminución en el número de células Th2, por ejemplo, una disminución en el número de células Th2 específico de alérgeno, en donde el alérgeno es uno que provoca la hipersensibilidad en un sujeto; (5) una disminución en la activación de células Th2, por ejemplo, una disminución en la activación de células Th2 específicas de alérgeno en donde el alérgeno es uno que provoca la hipersensibilidad en un sujeto. De acuerdo a ciertas modalidades de la invención, la administración del agente de ARNi resulta en una expresión disminuida de una proteína seleccionada del grupo que consiste de: la cadena FCeRIa, la cadena FCeRI ß, el kit c, Lyn, Syk, ICOS, OX40L, CD40, CD80, CD86, RelA, RelB, ligando 4-1BB, TLRl, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8 , TLR9, CD83, SLAM, la cadena ? común y COX-2. De acuerdo a ciertas modalidades de la invención, la expresión se inhibe en DC y/o macrófagos. De acuerdo a ciertas modalidades de la invención, el agente de ARNi se dirige a una transcripción que codifica a una de las proteínas anteriores, resultando en una disminución en la expresión de la proteína. Sin embargo, de acuerdo a otras modalidades de la invención, el agente de ARNi se dirige a algunas otras transcripciones cuyo producto codificado es necesario para, o contribuye a, la expresión o actividad de cualquiera de las proteínas arriba expresadas. Tales productos incluyen, por ejemplo, los factores de transcripción o factores que procesan el ARN involucrados en la transcripción o proceso de una transcripción que codifica a una de las proteínas anteriores. Los agentes de ARNi inventivos pueden administrarse individualmente o en combinación con entre si y/o en combinación con otras terapias para el tratamiento de enfermedades o condiciones asociadas con la hipersensibilidad mediada por IgE. La invención proporciona una variedad de agentes ARNi como se describe arriba y composiciones que los comprenden.. En particular, la invención proporciona métodos para tratar y/o prevenir condiciones y enfermedades asociadas con la hipersensibilidad mediada por IgE que comprende administrar una composición que comprende (i) agentes ARNi que dirige una transcripción que codifica a una proteína seleccionada del grupo que consiste de: la cadena FCeRI a, la cadena FCeRIß, kit c, Lyn, Syk, ICOS, OX40L, CD40, CD80, CD86, RelA, RelB, ligando 4-1BB, TLRl, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7 , TLR8, TLR9, CD83, SLAM, cadena ? común y COX-2 y (ii) polímero catiónico. La invención proporciona una variedad de tales agentes ARNi y composiciones que los comprenden. En general, un polímero catiónico es un polímero que se cobra positivamente alrededor de un pH fisiológico, por ejemplo, un pH que va desde alrededor de 7.0 a 7.6, preferiblemente alrededor de 7.2 a 7.6, más preferiblemente alrededor de 7.4. Tales polímeros catiónicos incluyen, pero no se limitan a, PLL modificado del grupo imidazol (Putnam, et al.), polietileneimina (PEÍ) (Boussif, O., et al., Proc . Nati . Acad. Sci . EE. UU. 92:7297-7301, 1995), polivinilpirrolidona (PVP) (Astafieva, et al., FEBSLett. 389: 278-280, 1996), y quitosan (Davis, S.,S., Pharm . Sci . Technol . Today 2:450-457,1999; Roy, K., et al., Nat . Med. 5: 387-391,1999) . Se apreciará que ciertos polímeros comprenden grupos amina primarios, grupos imina, grupos guanidina, y/o grupos imidazol. Los polímeros catiónicos preferidos tienen toxicidad relativamente baja y eficiencia de transfección de ADN alta. Los polímeros catiónicos preferidos tienen toxicidad relativamente baja y eficiencia de transfección de ADN alta. Los polímeros catiónicos adecuados también incluyen copolímeros que comprenden subunidades de cualquiera de los polímeros anteriores, por ejemplo, copolímeros de lisina-histidina, etc., El porcentaje de varias subunidades no necesitan ser iguales en los copolímeros pero pueden seleccionarse, por ejemplo, para optimizar tales propiedades como la capacidad para formar complejos con los ácidos nucleicos mientras se minimiza la citotoxicidad. Además, las subunidades no necesitan alternar en una forma regular. Se describen ensayos apropiados para evaluar varios polímeros con respecto a las propiedades deseables en los Ejemplos. Los polímeros catiónicos preferidos también incluyen los polímeros tales como los anteriores, incorporando además cualquiera de varias modificaciones. Las modificaciones apropiadas incluyen, pero no se limita a, la modificación con acetilo, succinilo, acilo o grupos imidazol. En general, ciertas modificaciones preferidas producen una reducción en la carga positiva del polímero catiónico. Ciertas modificaciones preferidas convierten una amina primario en una amina secundaria. Los métodos por modificar los polímeros catiónicos para incorporar tales grupos adicionales son bien conocidos en el arte. (Ver por ejemplo, la referencia 32). Por ejemplo, el grupo amino e de varios residuos puede sustituirse, por ejemplo, mediante la conjugación con un grupo de modificación deseado después de la síntesis del polímero. En general, es deseable seleccionar un % de sustitución suficiente para lograr una reducción apropiada en citotoxicidad en relación con el polímero no sustituido mientras no provoque mayor reducción en la capacidad del polímero para mejorar el suministro del agente ARNi. Por consiguiente, en ciertas modalidades de la invención se sustituyen entre 25% y 75% de los residuos en el polímero. En ciertas modalidades de la invención, se sustituyen aproximadamente 50% de los residuos en el polímero. Se nota que efectos similares pueden lograrse formando inicialmente copolímeros de subunidades monoméricas seleccionadas apropiadamente, es decir, algunas subunidades que ya incorporan una modificación deseada. Aun cuando no se desee apegarse a ninguna teoría, se cree que los polímeros catiónicos tales como PEÍ compacto o ADN condensado en partículas cargadas positivamente capaces de interactuar con los proteoglicanos aniónicos en la superficie celular y las células que ingresan mediante endocitosis. Tales polímeros pueden poseer la propiedad de actuar tales como "esponja de protones" que amortiguan el pH endosomal y protege al ADN de la degradación. El ingreso de protones continuo induce también la ruptura y el abultamiento osmótico endosomal, que proporciona un mecanismo de escape para las partículas de ADN en el citoplasma. (Ver por ejemplo, las referencias 85-87; U. S. S. N. 6,013, 240; W09602655 para información adicional en PEÍ y otros polímeros catiónicos útiles en la práctica de la invención) De acuerdo a ciertas modalidades de la invención, se usa el reactivo PEÍ disponible comercialmente conocido como jetPEI™ (Qbiogene, Carlsbad, CA) , una forma lineal de PEÍ (U. S. S. N. 6,013, 240) . Los inventores han demostrado que las composiciones que comprenden PEÍ, PLL, o PLA y un ARNi que dirige un ARN del virus de la influenza inhibe la producción del virus de la influenza significativamente en los ratones cuando se administra intravenosamente ya sea antes o después de la infección del virus de influenza. La inhibición depende de la dosis y exhibe efectos adictivos cuando se usaron dos ARNi dirigidos a diferentes ARN del virus de la influenza. Así el ARNi cuando se combina con un polímero catiónico tal como PEÍ, PLL, o PLA, es capaz de alcanzar el pulmón, ingresar células e inhibir efectivamente el ciclo de replicación viral. Estos resultados sugieren que composiciones similares que contienen ARNi dirigidas contra otras transcripciones expresaran en el pulmón se suministrarán eficazmente a las células en el pulmón e inhibirán la expresión de sus genes dirigidos . Una variedad de polímeros catiónicos adicionales también pueden usarse. Se han desarrollado colecciones grandes de nuevos polímeros catiónicos y oligómeros de diacrilato y monómeros de amina y se han- probado en el transfección del ADN. Estos polímeros se refieren en la presente como polímeros (PAE) poli (amino éster ß) . Por ejemplo, se ha descrito una colección de 140 polímeros de 7 monómeros de diacrilato y 20 monómeros de amina (Lynn, D., M. , al del et . , J. Am . Chem . Soc . 123: 8155-8156,2001) y grandes colecciones pueden producirse usando una metodología similar o idéntica. De los 140 miembros de esta colección, se encontraron 70 suficientemente solubles al agua (2 mg/ml, 25 mM de solución amortiguadora de acetato, pH = 5.0) . Cincuenta y seis de los 70 polímeros solubles en agua interactúan con el ADN como se muestra mediante el cambio de movilidad electroforética. De manera más importante, dos de los 56 polímeros mediaron la transfección del ADN en las células COS-7. Las eficiencias de transfección de los nuevos polímeros fueron de 4-8 veces más altas que PEÍ e igual o mejor que la Lipofectamina 2000. Por lo tanto, la invención proporciona composiciones que comprenden al menos una molécula ARNi y un polímero catiónico, en donde el polímero catiónico es un poli (amino éster ß) , y métodos para inhibir la expresión del gen de direccionamiento administrando tales composiciones. Los estudios han demostrado que los factores de transcripción, que incluyen la proteína VIH Tat (27,28), proteína VP22 del virus simple del herpes (29) , y la proteína de antennapedia de Drosophila (30) , puede penetrar la membrana del plasma de la superficie celular. Los segmentos del péptido responsable de la "penetración de la membrana consiste de 11-34 residuos de aminoácidos y están altamente enriquecidos con arginina, referida como péptidos ricos en arginina (ARPs) . Cuando se enlazan covalentemente con polipéptidos mucho más grandes, los ARPs son capaces de transportar el polipéptido fusionado a través de la membrana del plasma (31-33) . Semejantemente, cuando los oligonucleotidos se enlazan covalentemente a ARPs, se absorben más rápidamente a las células (34,35). Estudios recientes han demostrado que un polímero de ocho argininas es suficiente para este transporte de transmembrana (36) . Debido a que los polímeros catiónicos, los ARPs y poliarginina (PLA) también se cargan positivamente y probablemente debido a que son capaces de enlazar ARNi, sugiriendo que probablemente no es necesario enlazarse covalentemente ARNi a ARPs o PLAs . La invención proporciona por lo tanto, composiciones que comprenden al menos un agente ARNi y un. péptido rico en arginina y métodos de inhibir la expresión del gen designada mediante la- "administración de tales composiciones. En particular, la invención proporciona ' métodos para tratar y/o prevenir condiciones o desordenes asociados con hipersensibilidad mediada por IgE que comprende administrar una composición que comprende (i) un agente ARNi que dirige una transcripción que codifica a cualquier proteína o péptido cuya inhibición resulta en una disminución en la hipersensibilidad mediada por IgE; y (ii) un péptido rico en arginina. De acuerdo a ciertas modalidades de la invención, la administración del agente ARNi se dirige a una transcripción que codifica una proteína seleccionada del grupo que consiste de: la cadena FCeRIa, la cadena FCeRIß, kit c, Lyn, Syk, ICOS, OX40L, CD40, CD80, CD86, RelA, RelB, ligando 4-1BB, TLRl, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, CD83, SLAM, cadena ? común y COX-2. De acuerdo a ciertas modalidades de la invención, la expresión se inhibe en DC y/o macrófagos. Los péptidos ricos en arginina incluyen, pero no se limita a, aquellos descritos en las referencias 46-51 y variaciones de las mismas, evidentes para un experto en el arte. Los péptidos ricos en arginina incluyen poliarginina (es decir, un péptido que sólo consiste de residuos de arginina) . Generalmente, los péptidos ricos en arginina preferidos son menores que alrededor de 50 aminoácidos en longitud. De acuerdo a ciertas modalidades de la invención, el péptido rico en arginina es un péptido que tiene longitud entre alrededor de 7 y 34 aminoácidos. De acuerdo a ciertas modalidades de la invención, un péptido es rico en arginina si incluye al menos 20%, o al menos 30%, o al menos 40%, o al menos 50%, o al menos 60% o al menos 70%, o al menos 80%, o al menos 90% de arginina. De acuerdo a ciertas modalidades de la invención, el péptido rico en arginina incluye entre 6 y 20 residuos de arginina (es decir, péptido rico en arginina incluye 6 argininas o incluye 7 argininas, o incluye 8 argininas, etc., ) . De acuerdo a ciertas modalidades de la invención, el péptido rico en arginina (poliarginina) consiste de entre 6 y 20 residuos de arginina (es decir, péptidos ricos en arginina incluye 6 argininas o incluye 7 argininas, o incluye 8 argininas, etc.). De acuerdo a ciertas modalidades de la invención, el ARNi y los • péptidos ricos en arginina se enlazan covalentemente, considerando que en otras modalidades de la invención, el agente ARNi y el péptido rico en arginina se mezclan al mismo tiempo pero no se enlazan covalentemente entre sí. Una variedad de otros agentes de suministro pueden usarse en varias modalidades de la invención. Por ejemplo, como se describe con mayor detalle en la solicitud de patente U.S. SER No. 10/674,087, tensoactivos adecuados para la introducción en el pulmón, suministro de agentes que incorporan porciones que mejoran el suministro tales como anticuerpos o ligandos que enlazan a las moléculas presentes en la superficie de células de direccionamiento, o pueden usarse también cualquiera de una variedad de polímeros y matrices de polímero distintas de los polímeros catiónicos descritos arriba. Tales polímeros incluyen una variedad de polímeros no catiónicos, es decir, polímeros que no tienen carga positiva en el pH fisiológico. Tales polímeros pueden tener ciertas ventajas, por ejemplo, citotoxicidad reducida y, en algunos casos, aprobación de FDA. Se han demostrado una variedad de polímeros adecuados para mejorar el fármaco y suministro del gen en otros contextos. Tales polímeros incluyen por ejemplo, poli (lacturo) (PLA), poli (glicolido) (PLG) , y poli (DL-lacturo-co-glicolido) (PLGA) que pueden formularse en las nanopartículas para el suministro de agentes de ARNi inventivos. También pueden usarse copolímeros y combinaciones de los anteriores. En ciertas modalidades de la invención, un polímero catiónico se usa para condensar el ARNi, ARNh, o vector, y el complejo condensado se protege por PLGA u otro polímero no catiónico. Otros polímeros que pueden usarse incluyen polímeros no condensados tales como alcohol de polivinilo, o bromuro de poli (N-etil-4- vinilpiridino, que puede formar complejos con Pluronic 85. Otros polímeros de uso en la invención incluyen combinaciones entre los polímeros catiónicos y no catiónicos. Por ejemplo, pueden usarse poli (L-lisina) injertado con poli (ácido láctico-co- glicólico) (PLGA) y otras combinaciones que incluyen PLA, PLG, o PLGA y cualquiera de los polímeros catiónicos o polímeros catiónicos modificados tales como aquellos discutidos arriba. IX. Aplicaciones terapéuticas Las composiciones que contienen a los agentes de ARNi inventivos de la presente " invención pueden usarse para prevenir o tratar cualquier enfermedad o condición mediada por IgE, por ejemplo, cualquier enfermedad o condición asociada con la hipersensibilidad mediada por IgE que incluye pero no se limita a, rinitis alérgica y asma. Preferiblemente, la cantidad del agente de ARNi es suficiente reducir o prevenir uno o más síntomas de hipersensibilidad mediada por IgE. Por consiguiente, la invención proporciona un método para tratar o prevenir una enfermedad o condición caracterizada por la hipersensibilidad mediada por IgE, el método que comprende las etapas de: (i) proporcionar a un sujeto con riesgo de o padecer de una enfermedad o condición caracterizada por hipersensibilidad mediada por IgE; y (ii) administrar al sujeto una composición que comprende un agente ARNi dirigido a una transcripción que codifica a una proteína seleccionada del "grupo que consiste de la cadena FCeRIa, la cadena FCeRIß, kit c, Lyn, Syk, ICOS, OX40L, CD40, CD80, CD86, RelA, RelB, ligando 4-1BB, TLRl, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, CD83, SLAM, cadena ? común, y COX-2. La invención proporciona un método para tratar o prevenir una enfermedad o condición caracterizada por una actividad de mastocitos excesiva o inapropiada o hipersensibilidad mediada por IgE que comprenden las etapas de: proporcionar a un sujeto con riesgo de o padecer de una enfermedad o condición caracterizada por una actividad de mastocitos excesiva o inapropiada; y administrar al sujeto un agente ARNi que reduce la actividad de los mastocitos o la supervivencia de los mastocitos. Además, la invención proporciona un método para tratar o prevenir una enfermedad o condición caracterizada mediante las respuestas de células auxiliadoras Th2 inapropiadas o excesivas o hipersensibilidad mediada por IgE que comprenden las etapas de: proporcionar a un sujeto con riesgo de o que padece de una enfermedad o condición caracterizada por respuestas de células auxiliadoras Th2 inapropiadas o excesivas; y administrar al sujeto una composición que comprende un agente ARNi que reduce o elimina la respuesta de la célula Th2. Las composiciones inventivas que contienen un agente ARNi pueden contener una sola especie, dirigida a un sitio simple en una transcripción de direccionamiento simple, o alternativamente puede contener una pluralidad de especies diferentes, dirigidas a uno o más sitios en una o más transcripciones dirigidas.

En algunas modalidades de la invención, será deseable utilizar composiciones que contienen colecciones de diferentes agentes ARNi dirigidos a diferentes transcripciones. Por ejemplo, puede ser deseable usar una variedad de agentes ARNi dirigidos a las transcripciones expresadas en los distintos tipos de células, por ejemplo, DC, macrófagos, células B, células Th2. Alternadamente, puede ser deseable inhibir varias transcripciones distintas en un solo tipo celular. Ambas de estas estrategias pueden proporcionar un beneficio terapéutico mientras se permite un nivel reducido de inhibición de cualquier transcripción simple relativa al grado de inhibición que se necesitaría para lograr un efecto terapéutico equivalente si sólo una sola transcripción fuera inhibida. De acuerdo a ciertas modalidades de la invención, las composiciones inventivas pueden contener más de un agente ARNi dirigido a una sola transcripción. Para dar un ejemplo, puede ser deseable incluir al menos un ARNi o ARNh dirigido a las regiones de codificación de una transcripción de direccionamiento y por lo menos un ARNi o ARNh dirigido a la 3' de UTR. Esta estrategia puede proporcionar una seguridad extra en la que los productos codificados por ela transcripción relevante no se generará debido a que por lo menos un ARNi o ARNh en la composición pueden dirigirse a la transcripción para degradarse mientras que por lo menos otro inhibe la traducción de cualquier transcripción que evite la degradación. La invención abarca "cócteles terapéuticos" que incluyen pero no se limitan a metodologías en las que múltiples ARNi o ARNh se administran y metodologías en las que un vector simple dirige la síntesis de ARNi o ARNh que inhiben múltiples objetivos de ARN que puede procesarse para producir una pluralidad de ARNi o ARNh. Será a menudo deseable combinar la administración de agentes ARNi inventivos con uno o más de otros agentes terapéuticos para inhibir, reducir o prevenir uno o más síntomas o características de hipersensibilidad mediada por IgE. En ciertas modalidades preferidas de la invención, los agentes ARNi inventivos se combinan con uno o más de otros agentes que incluyen por ejemplo, antihistaminas, que incluyen antagonistas del receptor Hl tales como fexofenadina, loratadina, cetirizina, etc., corticosteroides tales como prednisona, beclametasona, triamcinolona, fluticasona, etc., bronquiodilatadores que incluyen agonistas ß-adrenérgicos tales como epinefrina, análogos de epinefrina, e isoproterenol y agonistas adrenérgicos ß2 selectivos tales como albuterol, metaproteronol, salmeterol, etc., cromolin de sodio, nedocromil o compuestos relacionados; metilxantinas tales como teofilina o compuestos relacionados, etc. Se nota que la lista anterior pretende ser representativa más que inclusiva. Ver por ejemplo, Goodman and Gilman ' s Pharmacological Basis of Therapeutics, referenciada arriba para una información adicional y otros agentes adecuados. En las distintas modalidades de la invención, los términos "combinados con" o "en combinación con" puede significar ya sea que el agente ARNi este presente en la misma mezcla como los otros agentes o que el régimen de tratamiento para un individuo incluya ambos de uno o más agentes ARNi y los otros agentes, no suministrados necesariamente en la misma mezcla o al mismo tiempo. De acuerdo a ciertas modalidades de la invención, el agente se aprueba por la U.S. Food and Drug Administration para el tratamiento de una condición asociada con la hipersensibilidad mediada por IgE tal como el asma o la rinitis alérgica. En algunas modalidades de la invención, puede ser deseable dirigir la administración de las composiciones inventivas a células particulares y/o tipos de células, por ejemplo, células de mastocitos, DC, macrófagos, células Th2. En algunas modalidades de la invención, puede ser deseable dirigir la administración de las composiciones inventivas a regiones particulares del cuerpo, por ejemplo, las vías respiratorias superiores y/o inferiores, etc. En otras modalidades de la invención será deseable tener disponible una amplia gama de opciones. Como se nota arriba, los protocolos terapéuticos inventivos notados pueden involucrar la administración de una cantidad eficaz de un agente ARNi previo a, simultáneamente con, o después de la exposición a . un alérgeno al cual el sujeto es extremadamente sensible. Por ejemplo, los individuos pueden recibir un ARNi previo a una exposición anticipada ' o pueden tratarse substancialmente contemporáneamente con una exposición sospechosa o conocida (por ejemplo, dentro de segundos, minutos, u horas) . Por supuesto, los individuos pueden recibir el tratamiento inventivo en cualquier momento en una base rutinaria o en curso . Los protocolos de la terapia de genes pueden involucrar administrar una cantidad eficaz de un vector de terapia génica que comprende una plantilla para la transcripción de un ARNi inhibitorio o ARNh, enlazados operablemente a las señales de expresión apropiadas, a un sujeto. Otra metodología que puede usarse alternativamente o en combinación con el previo es aislar una población de células, por ejemplo, células madre o células del sistema inmunológico de un sujeto, expandiendo opcionalmente las células en el cultivo del tejido, y administrar tal vector de la terapia génica a las células in vitro . Las células pueden devolverse entonces al sujeto. Opcionalmente, las células que expresan ARNi o ARNh pueden seleccionarse in vitro antes de introducirlos al sujeto. En algunas modalidades de la invención, una población de células que pueden ser células de una línea celular o de un individuo que no es el sujeto, puede usarse. Los métodos para aislar las células madre, células del sistema inmunológico, etc., de un sujeto y regresarlos al sujeto son bien conocidos en el arte. Tales métodos se usan por ejemplo, para el trasplante de la médula ósea, trasplante de células madre sanguíneas periféricas, etc., en pacientes que experimentan una quimioterapia. Aun en otra metodología, puede usarse una terapia de genes oral. Por ejemplo, la US 6,248,720 describe los métodos y composiciones con que los genes bajo el control de promotores se contienen de forma protectora en las micropartículas y se suministran a las células en forma operativa, logrando un suministro del gen no invasivo. Siguiendo la administración oral de las micropartículas, los genes se absorben en las células epiteliales, dentro de las que se incluyen las células epiteliales intestinales absorbidas en el intestino asociado al tejido linfoide e incluso transportado a las células remotas del epitelio mucoso. Como se describe en la presente, las micropartículas pueden suministrar los genes en sitios remotos del epitelio mucoso, es decir, pueden cruzar la barrera e ingresar a una circulación general, transfiriendo así las células a otros lugares . La presente invención incluye el uso de composiciones inventivas para el tratamiento de especies no humanas, pero no se limita a, perros, gatos, bovinos, ovinos, cerdos y caballos . En las modalidades preferidas, las composiciones de terapia génica y los métodos de la invención no abarcan las reivindicaciones a los seres humanos o- células que forman parte de un ser humano. X. Formulaciones farmacéuticas Las composiciones inventivas pueden formularse a partir del suministro mediante _ cualquier ruta disponible que incluye, pero que no se limita a, parenteral (por ejemplo, intravenosa) , intramuscular, intradermal, hipodérmica, oral, nasal, bronquial, oftálmica, transdermal (tópica) , transmucosa, vías rectales, y vaginales. Las vías preferidas de suministro incluyen parenteral, transmucosal, nasal, bronquial y oral. Las composiciones farmacéuticas inventivas incluyen un ARNi o ARNh o vector que resultará en la producción de un ARNi o ARNh después del suministro, en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable. Como se usa en la presente, el lenguaje "portador farmacéuticamente aceptable" incluye solventes, medios de dispersión, revestimientos, agentes antifúngicos y antibacteriales, agentes que retrasan la absorción e isotónicos, y similares, compatibles con la administración farmacéutica. Los compuestos activos suplementarios también pueden incorporarse en las composiciones. Una composición farmacéutica se formula para ser compatible con su vía intencional de administración. Las soluciones o suspensiones usadas para la aplicación parenteral, intradermal, o aplicación hipodérmica pueden incluir los componentes siguientes: un diluyente estéril tal como agua para inyección, solución salina, aceites fijos, glicoles de polietileno, glicerina, propilenglicol u otros solventes sintéticos; agentes antibacterianos tales como alcohol bencílico o parabenos de metilo; antioxidantes tales como ácido ascórbico o bisulfito de sodio; agentes quelantes tales como ácido etilendiaminotetraacético; soluciones amortiguadoras tales como acetatos, citratos o fosfatos y agentes para el ajuste de la tonicidad tales como cloruro de sodio o dextrosa. El pH puede ajustarse con ácidos o bases, tales como el ácido clorhídrico o hidróxido de sodio. La preparación parenteral puede adjuntarse en ampolletas, jeringas desechables o frascos de dosis múltiples hechas de vidrio o plástico. Las composiciones farmacéuticas adecuadas para uso inyectable incluyen típicamente soluciones acuosas estériles (donde son solubles al agua) o dispersiones y polvos estériles para la preparación extemporánea de soluciones inyectables o dispersión. Para la administración intravenosa, los portadores adecuados incluyen solución salina fisiológica, agua bacteriostática, Cremophor EL™ (BASF, Parsippany, NJ) o solución salina amortiguada con fosfato (PBS) . En todos los casos, la composición debe ser estéril y debe fluir hasta una magnitud en la que se pueda inyectar. Las formulaciones farmacéuticas preferidas son estables bajo las condiciones de fabricación y almacenamiento y deben conservarse contra la acción contaminante de microorganismos tales como las bacterias y los hongos. En general, el portador pertinente puede ser un solvente o medio de dispersión que contiene por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol y glicol de polietilenos líquidos y similares) , y las mezclas adecuadas de los mismos. La propia fluidez puede mantenerse, por ejemplo, mediante el uso de una capa tal como la lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partículas requerido en el caso de una dispersión y mediante el uso de tensoactivos. La prevención de la acción de microorganismos puede lograrse mediante varios agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido ascórbico, timerosal y similares. En muchos casos, será preferible ajustar la isotonicidad, por ejemplo, incluyendo agentes tales como por ejemplo, azúcares, polialcoholes tales como el manitol, sorbitol, y cloruro de sodio en la composición. La absorción prolongada de las composiciones inyectables puede producirse al incluir en la composición, un agente que retrase la absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina. Las soluciones inyectables estériles pueden prepararse incorporando el compuesto activo en la cantidad requerida en un solvente apropiado con uno o una combinación de ingredientes enumeradas arriba, como se requieran, seguido por una esterilización filtrada. Generalmente, las dispersiones son preparadas incorporando el compuesto activo en un vehículo estéril que contiene un medio de dispersión básica y los otros ingredientes requeridos de aquellos enumerados anteriormente. En el caso de polvos estériles para la - preparación de soluciones inyectables estériles, los métodos preferidos de preparación son el de secado al vacío y deshidratación por congelación que produce un polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente deseado adicional de- una solución previamente filtrada estéril de la misma. Las composiciones orales generalmente incluyen un diluyente inerte o un portador comestible. Para los propósitos de la administración terapéutica oral, el compuesto activo puede incorporarse con excipientes y usarse en la forma de tabletas, grageas o cápsulas, por ejemplo, cápsulas de gelatina. Las composiciones orales pueden prepararse también usando un portador fluido para usarse como un enjuague. Los agentes de enlace farmacéuticamente compatibles, y/o materiales adyuvantes pueden ser incluidos como parte de la composición. Las tabletas, pildoras, cápsulas, pastillas y similares pueden contener cualquiera de los siguientes ingredientes, o compuestos de una naturaleza similar: un aglutinante tal como la celulosa microcristalina, goma de tragacanto o gelatina; un excipiente tal como el almidón o la lactosa, un agente desintegrante tal como el ácido algínico, Primogel, o almidón de maíz; un lubricante tal como estearato magnésico o Sterotes; un agente mejorador de flujo tal como dióxido de silicio coloidal; un agente edulcorante tal como sacarosa o sacarina; o un agente de condimentación tal como la menta, salicilato de metilo o un saborizante de naranja. Las formulaciones para el suministro pueden incorporar ventajosamente agentes para mejorar la estabilidad dentro del tracto gastrointestinal y/o para mejorar la absorción. Para la administración por inhalación, los agentes ARNi inventivos se suministran preferiblemente en la forma de un rocío en aerosol a partir de un recipiente a presión o dispensador que contienen un propulsor adecuado, por ejemplo, un gas tal como anhídrido carbónico, o un nebulizador. La presente invención contempla particularmente el suministro de composiciones inventivas que usan un rocío nasal, inhalador, u otro suministro directo a las vías respiratorias superior y/o inferior. Además, de acuerdo a ciertas modalidades de la invención, los portadores de la invención facilitan la captación de ácido nucleico por las células en las vías respiratorias que se incluyen en la composición farmacéutica. (Ver, por ejemplo, S.-O. Han, R., 1. Mahato, Y., K. Cantado, S. W. Kim, "Development of biomaterials for gene therapy". Molecular Therapy 2:302317,2000.) De acuerdo a ciertas modalidades de la invención, las composiciones ARNi o composiciones ARNi/portador se formulan como partículas porosas grandes para la administración en aerosol como se describe con mayor detalle en el ejemplo 3. La administración sistémica también puede ser mediante medios transmucosales o transdermales . Para la administración transdermal o transmucosal, en la formulación se usan penetradores apropiados destinados a la barrera a ser penetrada. Tales penetradores son generalmente conocidos en el arte, e incluyen, por ejemplo, para la administración transmucosal, detergentes, sales de la bilis y derivados del ácido fusídico. La administración transmucosal puede lograrse a través del uso de rocíos nasales o supositorios. Para la administración transdermal, los compuestos activos se formulan en los ungüentos, pomadas, geles, o cremas como generalmente se conocen en el arte. Los compuestos también pueden prepararse en la forma de supositorios (por ejemplo, con las bases del supositorio convencionales tales como las mantecas de cacao y otros glicéridos) o enemas de retención para el suministro rectal.

En una modalidad, los compuestos activos se preparan con portadores que protegerán al compuesto contra la eliminación rápida del cuerpo, tal como una formulación de liberación controlada que incluye injertos y sistemas de suministro micro encapsulados. Pueden usarse los polímeros biocompatibles biodegradables tales como el acetato vinilo de etileno, polianhídridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres y el ácido poliláctico. Los métodos para la preparación de tales formulaciones serán aparentes por aquellos expertos en el arte. Los materiales también pueden obtenerse comercialmente de Alza Corporation y de Nova Pharmaceuticals, Inc. Las suspensiones liposomales (que incluyen liposomas dirigidas a células infectadas con anticuerpos monoclonales de antígenos virales) también pueden usarse como portadores farmacéuticamente aceptables. Estos pueden prepararse de acuerdo a métodos conocidos por aquellos expertos en el arte, por ejemplo, como se describe en la Patente U.S. No. 4,522,811. Es ventajoso formular composiciones orales o parenterales en forma unitaria de dosificación para una fácil administración y uniformidad en la dosificación. La forma unitaria de dosificación como se refiere en la presente a unidades físicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias para el sujeto a ser tratado; cada unidad contiene una cantidad predeterminada del compuesto activo calculado para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el portador farmacéutico requerido. La toxicidad y eficacia terapéuticas de tales compuestos pueden determinarse mediante los procedimientos farmacéuticos estándar en los cultivos celulares o en animales experimentales, por ejemplo, para determinar el LD50 (la dosis letal al 50% de la población) y el ED50 (la dosis terapéuticamente eficaz en 50% de la población) . La proporción de dosis entre los efectos tóxico y terapéutico es el índice terapéutico y puede expresarse como la proporción LD50/ED50. Se prefieren los compuestos que exhiben índices terapéuticos altos. Aún cuando pueden usarse los compuestos que exhiben efectos secundarios tóxicos, debe tenerse cuidado para diseñar un sistema de suministro que dirija tales compuestos al sitio del tejido afectado para minimizar el daño potencial de las células infectadas y, así, reducir los efectos secundarios. Los datos obtenidos de los ensayos del cultivo celular y los estudios animales pueden usarse en la formulación de un rango de dosificación para usarse en humanos. La dosificación de tales compuestos yace preferiblemente dentro de un rango de concentraciones circulantes que incluyen el ED50 con poca o nula toxicidad. La dosificación puede variar dentro de este rango dependiendo de la forma de dosificación empleada y la ruta de administración utilizada. Para cualquier compuesto usado en el método de la invención, la dosis terapéuticamente eficaz puede estimarse inicialmente a partir de los ensayos del cultivo de la célula. Una dosis puede formularse en modelos de animal para lograr un rango de concentración de plasma circulante que incluye el IC50 (es decir, la concentración del compuesto de prueba que logra una inhibición medio-máxima de síntomas) determinado en el cultivo de la célula. Tal información puede usarse para determinar con mayor precisión las dosis más útiles en los humanos. Los niveles en el plasma pueden medirse por ejemplo, con la ayuda de una cromatografía líquida de alta resolución.

Una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición farmacéutica se encuentra típicamente en rangos de alrededor de 0.001 hasta 30 mg/kg de peso corporal, preferiblemente alrededor de 0.01 a 25 mg/kg de peso corporal, más preferiblemente alrededor de 0.1 a 20 mg/kg de peso corporal e incluso más preferiblemente alrededor de 1 a 10 mg/kg, de 2 a 9 mg/kg, de 3 a 8 mg/kg, de 4 a 7 mg/kg, o de 5 a 6 mg/kg de peso corporal. La composición farmacéutica puede administrarse en varios intervalos y sobre distintos períodos de tiempo como se requiera, por ejemplo, una vez por semana, alrededor de 1 a 10 semanas, alrededor de 2 a 8 semanas, alrededor de 3 a 7 semanas, alrededor de 4, 5, 0 6 semanas, etc. El experto en el arte apreciará que ciertos factores pueden influir en la dosificación y tiempo requerido para tratar eficazmente a un sujeto, que incluye pero no se limita a la severidad de la enfermedad o desorden, los tratamientos previos, la salud general y/o . edad del sujeto, y otras enfermedades presentes. Generalmente, el tratamiento de un sujeto con un agente. ARNi como se describe en la presente, puede incluir un solo tratamiento o, en muchos casos, puede incluir una serie de tratamientos. Las dosis ejemplares incluyen miligramos o cantidades de microgramos del ARNi inventivo por kilogramo del sujeto o peso de la muestra (por ejemplo, alrededor de 1 microgramo por kilogramo, alrededor de 500 miligramos por kilogramo, alrededor de 100 microgramos por kilogramo, alrededor de 5 miligramos por kilogramo, alrededor de 1 microgramo por kilogramo, alrededor de 50 microgramos por kilogramo.) Se entiende además que las dosis apropiadas de un agente de ARNi dependen de su potencia y pueden moldearse opcionalmente al destinatario particular, por ejemplo, a través de la administración de dosis crecientes hasta lograr una respuesta deseada presintonizada. Se entiende que el nivel de la dosis específica para cualquier sujeto animal particular puede depender de una variedad de factores que incluyen la actividad del compuesto específico empleada, la edad, el peso corporal, salud general, género y dieta del sujeto, el tiempo de administración, la ruta de administración, la proporción de excreción y cualquier combinación del fármaco, grado de expresión o actividad a ser modulada. Como se menciona arriba, la presente invención incluye el uso de composiciones inventivas para el tratamiento de animales no humanos. Por consiguiente, las dosis y métodos de administración pueden seleccionarse de acuerdo con los principios conocidos de la farmacología veterinaria y la medicina. Una guía puede encontrarse en por ejemplo, Adams, R. , (ed) , Veterinary Pharmacology and Therapeutics, 8 edición, Iowa State University Press; ISBN: 0813817439; 2001.

Los plásmidos o vectores de terapia génica pueden suministrarse a un sujeto mediante por ejemplo, inyección intravenosa, administración local, o mediante una inyección estereotáctica (ver por ejemplo, Chen et al . (1994) Proc . Nati . Acad. Sci . USA. 91:3054-3057). En ciertas modalidades de la invención, los plásmidos o vectores de terapia génica pueden suministrarse oralmente o inhalatoriamente y pueden encapsularse o por el contrario, manipularse para protegerlos de la degradación, reforzar la absorción en los tejidos o células, etc., Por lo tanto, note que los plásmidos pueden usarse como vectores de terapia de gen, y el término "vector de terapia de gen" puede abarcar a los plásmidos. Sin embargo, en general, el término "vector de terapia del gen" se usa frecuentemente para referirse a vectores que son capaces de proporcionar una expresión más sostenida de un agente terapéutico que se proporciona típicamente cuando un vector de ADN desnudo se introduce en las células de mamíferos, por ejemplo, mediante la replicación con células y/o provocando la integración de una secuencia de ácidos nucleicos en el genoma celular. La preparación farmacéutica del plásmido o vector de terapia génica puede incluir el vector de terapia génica en un diluyente aceptable, o puede comprender una matriz de liberación sostenida en la que el vehículo de suministro de genes se incrusta. Alternativamente, cuando el vector de suministro del gen completo puede producirse intacto a partir de células recombinantes, por ejemplo, los vectores retrovirales o lentivirales, la preparación farmacéutica puede incluir una o más células que producen el sistema de suministro del gen. Las composiciones farmacéuticas inventivas pueden ser incluidas en un recipiente, paquete o dispensador junto con las instrucciones para su administración.

Ejemplos Ejemplo 1 : Diseño de ARNi - Las secuencias listadas en las Tablas 1-26 se seleccionaron como objetivos y como hebras sentido. Para cada secuencia, una secuencia perfectamente complementaria a la secuencia listada se escogió como la correspondiente hebra antisentido. Una colgadura de dos nt en 3' que consiste de dTdT se agregó a cada hebra. Por ejemplo, para diseñar un ARNi basado en una secuencia de ADNc FCsRa-268 (TTGGTCATTGTGAGTGCCA = SEQ ID NO: 316), la secuencia 5'-UUGGUCAUUGUGAGUGCCA-3 ' (SEQ ID NO: 1) se selecciona como la región de núcleo de la hebra sentido, y una secuencia complementaria, 5'- UGGCACUCACAAUGACCAA-3 ' (SEQ ID NO: 317), se selecciona como la región de núcleo de la hebra antisentido. Una colgadura de dos nt en 3' que consiste de dTdT se agrega a cada hebra, lo que resulta en las secuencias 5'-UUGGUCAUUGUGAGUGCCAdTdT-3' (SEQ ID NO: 318) (hebra sentido) y 5 ' -UGGCACUCACAAUGACCAAdTdT-3 ' (SEQ ID NO: 319) (hebra antisentido) . La hibridización de las hebras sentido y antisentido resulta en un ARNi que tiene una región dúplex de núcleo de 19 pares de bases, con cada hebra que tiene una colgadura de 2 nucleótidos 3 'OH.

Ejemplo 2 : Efecto de los ARNi Inventivos en las respuestas de Mastocitos inducidas por Antigenos Este ejemplo describe un experimento para determinar el efecto de administración de composiciones inventivas de ARNi sobre la liberación de diversos mediadores de la inflamación or basófilos y mastocitos en respuesta al antígeno. Reactivos. A menos que se establezca de otra manera, los reactivos se obtienen de las fuentes descitas en Moriya, K. , et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 94: 12539-12544,1997. Células, cultivo de células y preparación de células. RBL-2H3 es una línea celular de leucemia basofílica que posee receptores de alta afinidad de IgE. Estas células se pueden activar para secretar histamina y otros mediadores por agregación de estos receptores o con ionóforos de calcio Barsumian EL, et al., Eur. J Immunol . 11: 317-323,1981. Se han usado ampliamente para estudiar FcERI y las trayectorias bioquímicas para secreción en mastocitos. Las células RBL-2H3 (línea CRL-2256) se obtienen de la American Type Culture Collection (Manassas, VA, http://www.atcc.org) y se mantienen en cultivo como se describen en Moriya, K. , et al. Las células RBL-2H3 se incuban durante la noche con un IgE específico de DNP y myo-inositol radioetiquetado, ácido araquidónico, y 5-hidroxitriptainina como se describen en Moriya, et al. Las células se estimulan con antígeno (DNP-BSA, 10 ng/ml) o los agentes estimuladores de la secreción A23187 y forbol 12-miristato 13-acetato (100 nm y 20 M, respectivamente) por 15 min. a 37 grados C. Mastocitos peritoneales de rata se obtienen como se describen en Holgate, S. T., et al., J. Immunol . , 124: 2093-2099, 1980. Las células se estimulan por incubación con DNP-BSA (0.3 pg/ml) por 15 min. a 37 grados C. Los mastocitos humanos cultivados se obtienen por el método descrito en Saito, et al., Int. Arch. Allergy Immunol . , 107: 63-65,1995. Las células se mantienen en cultivo como se describen en Moriya, et al. Para la sensibilización, los mastocitos humanos se incuban durante la noche con IgE humana y ácido araquidónico radioetiquetado y luego se estimulan con IgE anti-humano como se describe (Moriya, et al'. ) . ARNi . Los ARNi se diseñan como se describen anteriormente. Además de conformarse con los criterios de selección descritos en la Descripción Detallada con respecto al contenido de GC y la exclusión de las cadenas de nucleótidos idénticos consecutivos, los ARNi se diseñaron generalmente de acuerdo con los principios descritos en el Boletín Técnico # 003-Revisión B, "RNAsi Oligonucleotides for RNAi Applications", Dharmacon Research, Inc.:, Lafayette, CO 80026, un proveedor comercial de reactivos de ARN. Boletines Técnicos #003. Los ARNi seleccionados corresponden a las porciones de la secuencia que son idénticas en especies múltiples, por ejemplo, humanos y uno o más roedores (por ejemplo, ratón, rata) con objeto de facilitar la eficacia de prueba en líneas celulares de roedores y modelos animales. Todos los ARNi se sintetizaron por Dharmacon Research (Lafayette, CO) usando una química de protección de 2'ACE.

Las hebras de ARNi se desprotegen de acuerdo con las instrucciones del fabricante, se mezclan en relaciones equimolares y combinadas en sus pares de bases al calentar hasta 95 °C y reducir lentamente la temperatura por 1 °C cada 30 s hasta 35°C y 1 °C cada min hasta 5°C. Administración de ARNi . Las composiciones de ARNi que comprenden los ARNi dirigidos a la cadena de FCeRIa, la cadena FCeRIß, c-Kit, Lyn, Syk, ICOS, OX40L, CD40, CD80, CD86, RelA, RelB, ligando 4-1BB, TLRl, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8 , TLR9, CD83, SLAM, cadena común gamma, y COX-2, ya sea solos o en combinación se introducen dentro de células RBL-2H3, mastocitos peritoneales de rata, y mastocitos humanos al usar una metodología de transfección de liposomas como se describe en Li, L., et al., J bol Chem., 278 (7) : 4725-4729, 2003. Alternativamente, las células se electroporan con los ARNi como se describen en U. S. S. N. 60/446,377. Medición de la liberación del mediador. La acumulación de los fosfatos de inositol etiquetados totales y ácido araquidónico y 5-HT se determina como se describen en Cunha-Melho, J. R., et al., J Immunol, 143: 2617-2625, 1989, y Collado-Escobar, et al., J Immunol . , 144: 3449-3457, 1990. La liberación de histamina se determina por inmunoensayo de enzimas. Las mediciones de liberación de péptido leucotrienos, prostaglandinas, y TNFa se efectúan al usar inmunoensayos de enzimas como se describen en Moriya, et al. Una reducción en la liberación de uno o más de estos mediadores en células tratadas con un ARNi inventivo relativo al nivel de la liberación en células no tratadas con el ARNi indica que el ARNi es efectivo en inhibir respuestas de mastocitos y en la reducción de respuestas mediadas por IgE y signos y síntomas de enfermedades o condiciones asociadas con hipersensibilidad mediada por IgE. Métodos similares se pueden usar para probar vectores de ARNh o ARNi. Los vectores de ARNi, ARNhs, o ARNí se pueden administrar en combinación con cualquiera de los agentes de suministro antes descritos.

Ejemplo 3.-Efecto de los ARNi inventivos en un Modelo Murino . Este ejemplo describe la evaluación del efecto de administración de ciertos de los ARNi inventivos en diversas respuestas inflamatorias en el pulmón en un modelo murino típico de inflamación alérgica de las vías respiratorias e hiperrespuesta (Poynter, M., et al., Am. J Path. 160 (4): 1325-1334,2002) Ratones hembra BALB/c de seis semanas de edad se adquirieron de Jackson Laboratories (Bar Harbor, ME) y se alojan y mantienen bajo condiciones estándar. Los ratones se dividieron en varios grupos, a cada uno de los cuales se le da una composición de ARNi de acuerdo a un protocolo diferente como se describe a continuación. Los ratones en cada grupo se administran con OVA (20 µg, grado V ovalbúmina, Sigma, St. Louis, MO) con Alum (2.25 mg, Imject Alum, Pierce, Rockford, IL) por medio de inyección intraperitoneal en los días 0 y 14 y se les aplica la prueba inmunogénica con OVA en aerosol en los días 21, 22, y 23, como se describió previamente (Cieslewicz, G. , et al., A Clin. Invest., 104: 301-308, 1999; Takeda, T. , et al., J Exp. Med., 186: 449-- 454,1997). Se les aplica la eutanasia a los ratones por una dosis letal de pentobarbital por medio de inyección intraperitoneal . Las composiciones de ARNi que comprenden los ARNi dirigidos a la cadena FCeRIa, la cadena FCeRIß, c-Kit, Lyn, Syk, ICOS, OX40L, CD4Ó, CD80, CD86, RelA, RelB, ligando 4-1BB, TLRl, TLR2, TLR3, TLR4 , TLR5, TLR6, TLR7 , TLR8 , TLR9, CD83, SLAM, cadena común gamma, y COX-2 ya sea solos o en combinación se administran a grupos separados de ratones a una variedad de tiempos diferentes con relación a la prueba inmunogénica con antígeno. Por ejemplo, a algunos grupos se les administran composiciones de ARNi semanas, días, u horas previo a la prueba inmunogénica con antígeno. Algunos grupos se administran composiciones de ARNi en' los días 21, 22, y/o 23. Algunos grupos se administran composiciones de ARNi después de la prueba inmunogénica con antígeno. A determinados grupos se les da una dosis sencilla de ARNi por cualquiera de una variedad de vías diferentes (por inhalación, intravenosa, etc.) mientras que a otros se les da una serie de tratamientos separados por diversos intervalos de tiempo. Se usa un intervalo de dosis. La comparación de la eficacia de estos diversos esquemas de tratamiento permite la selección del régimen óptimo. En general, los ARNi se pueden suministrar al usar cualquier vía disponible incluyendo oral o intravenosa. Sin embargo, debido a que la rinitis alérgica y el asma involucran respuestas por células en los conductos nasales, vías respiratorias superiores, y el pulmón, un enfoque es en los métodos que suministren los ARNi dentro de las células en el tracto respiratorio. Se han usado muchos métodos diferentes para suministrar fármacos de moléculas pequeñas, proteínas y complejos de ADN/polímero dentro de las vías respiratorias superiores y/o pulmones de ratones, incluyendo instilación, aerosol (tanto líquido como en polvo seco) inhalación, administración intratraqueal, e inyección intravenosa. Por instilación, los ratones usualmente se anestesian ligeramente y se mantienen verticalmente levantados. Los terapéuticos (esto es, los ARNi o complejos de ARNi/polímero como se describen a continuación) en un volumen pequeño (por ejemplo, 30-50 µl) se aplican lentamente en una fosa nasal en donde se inhala el fluido (Densmore, C. L., et al., Mol. Therapy 1: 180-188, 1999). Los animales se mantienen en la posición vertical por un periodo corto de tiempo para permitir que el fluido instilado alcance los pulmones (Arppe, J. , et al., Intl. J Pharm. 161: 205- 214,1998). La instilación es efectiva para suministrar terapéuticos a ambas las vías respiratorias superiores y los pulmones y se pueden repetir múltiples veces en el mismo ratón. Por aerosol, líquido y polvo seco se aplican usualmente de manera diferente. Los aerosoles líquidos se producen por un nebulizador dentro de una jaula de plástico ~ sellada, en donde se colocan los ratones (Densmore, et al.). Debido a que los aerosoles se inhalan cuando respiran los animales, el método puede ser ineficiente e impreciso. Los aerosoles de polvo seco se administran usualmente por ventilación forzada en ratones anestesiados. Este método puede ser muy efectivo con tal de que las partículas en aerosol sean grandes y porosas (ver a continuación) (Edwards, D. A., et al., Science 276: 1868-1871, 1997). Para administración intratraqueal, una solución que contiene terapéuticos se inyecta por medio de un tubo dentro de los pulmones de ratones anestesiados (Griesenbach, U., et al., Gene Ther. 5: 181-188, 1998). Aunque es bastante eficiente para el suministro a los pulmones, olvida las vías respiratorias superiores. La inyección intravenosa de una cantidad pequeña de ADN (~1 µg) en complejos con proteína y polietilenimina ha demostrado transfectar células endoteliales y células en tejidos intersticiales del pulmón (Orson, F. M. , et al . , Gene Therapy 9: 463-471,2002) . La inflamación de las vías respiratorias se evalúa al efectuar un lavado bronquioalveolar (BAL, por sus siglas en inglés) 48 horas después de la prueba inmunogénica con antígeno, y determinar el número de células inflamatorias presentes en el "lavado. Brevemente, BAL se recolecta inmediatamente en la eutanasia por instilación y recuperación de 800 µl de 0.9% NaCl. Células totales en BAL se cuentan y 2 x 104 células se centrifugan sobre portaobjetos de vidrio a 800 rpm. Los giros celulares se tiñen al usar el kit Hema32.

(Biochemical Sciences, Inc., Swedesboro, NJ) , y conteos de células diferenciales se efectúan sobre 500 células. El número de macrófagos, eosinófilos, neutrófilos, y linfocitos en BAL de ratones tratados con los diferentes ARNi y de acuerdo a los diversos protocolos de tratamiento se comparan ambos entre grupos diferentes y con controles que reciben ya sea ningún ARNi (solamente vehículo) o un ARNi no relacionado. En algunos animales, más gue efectuar el BAL, se retiran los pulmones, lavados con PBS, fijados en 10% de formalina, y teñidos con H&E. Los conteos celulares se efectúan visualmente. Un número inferior de macrófagos, eosinófilos, neutrófilos, y/o linfocitos en BAL o en secciones del pulmón de ratones que se tratan con un ARNi inventivo, relativo al número en ratones que no se tratan, indica que el ARNí es efectivo. Una acumulación menor de moco y la presencia de bajas células cuboidales en ratones que se tratan con un ARNi inventivo, más que la acumulación intracitoplásmica abundante de moco y la presencia de células epiteliales de columna hiperplásticas como se observan en ratones que no reciben ARNi o un ARNi no relacionado indica que el ARNi es efectivo en reducir las respuestas mediadas por IgE y signos y síntomas de enfermedades o condiciones asociadas con hipersensibilidad mediada por IgE. Las respuestas más crónicas se evalúan al usar un modelo murino mejorado de inflamación asmática crónica descrito en Temelkovski, et al., antes referenciado, y Foster, P. S., et al., Lab Invest., 82 (4): 455-462, 2002, en el cual los ratones sensibilizados se someten a una prueba inmunogénica por inhalación crónica con bajos niveles de OVA. En algunos grupos de ratones sujetos a este tratamiento de protocolo con ARNi, se efectúa a intervalos durante el periodo de prueba inmunogénica de inhalación crónica mientras que en los otros grupos el tratamiento con los ARNi solamente se efectúa previo a o hasta varios días después de la prueba inicial inmunogénica con antígeno. Los indicadores de inflamación crónica tales como fibrosis subepitelial, hipertrofia del epitelio de la tráquea, e hiperplasia/metaplasia de células de moco en las vías respiratorias pulmonares se evalúan como se describen en Foster, et al. Un grado menor de fibrosis subepitelial, hipertrofia del epitelio de la tráquea, ' e hiperplasia/metaplasia de células de moco en las vías respiratorias pulmonares en ratones tratados con un ARNi inventivo con relación al nivel observado en ratones que no reciben ARNi o un ARNi no relacionado indica que el ARNi es efectivo en reducir respuestas mediadas por IgE y signos y síntomas de enfermedades o condiciones asociadas con hipersensibilidad mediada por IgE. IgE specífico del suero para OVA se mide al usar técnicas estándar. Un nivel inferior de IgE en suero específico de OVA en ratones que se tratan con un ARNi inventivo con relación al nivel de IgE en suero específico de OVA en ratones que no reciben ARNi o un ARNi no relacionado, indica que el ARNi es efectivo en reducir las respuestas mediadas por IgE y signos y síntomas de enfermedades o condiciones asociadas con hipersensibilidad mediada por IgE. La función pulmonar se evalúa como sigue. Se anestesian los ratones con pentobarbital . Los ratones con traqueotomía de cada grupo se ventilan mecánicamente para la evaluación de la función pulmonar como se describen en Irvin, C. G., et al., Am. J Physiol., 272: L1053-1058, 1997. Presión, flujo y volumen se usan para calcular la resistencia pulmonar después de la prueba inmunogénica con dosis inhladas de metacolina en aerosol como se describió previamente (Takeda, et al.) . Un valor inferior para resistencia pulmonar en ratones que se tratan con un ARNi inventivo relativo a la resistencia pulmonar en ratones que no se tratan, indica que el ARNi es efectivo en reducir respuestas mediadas por IgE y signos y síntomas de enfermedades o condiciones asociadas con hipersensibilidad mediada por IgE. Alternativamente, la respuesta de las vías respiratorias se evalúa al medir la obstrucción del flujo de aire inducida por metacolina en ratones despiertos colocados en un pletismógrafo de cuerpo entero como se describe en Hansen, G., et al., J Clin. Invest., 103: 175-183,1999. Métodos similares se pueden usar para probar los ARNhs o vectores de ARNi. Los ARNi, ARNhs, o vectores de ARNi se pueden administrar en combinación con cualquiera de los agentes de suministro antes descritos.

Ejemplo 4 : Evaluación de Agentes de Suministro que Facilitan la Absorción celular de Agentes de ARNi . Este ejemplo describe la prueba de una variedad de agentes de suministro por su capacidad para potenciar la absorción celular de agentes de ARNi. Polímeros catiónicos. La capacidad de los polímeros catiónicos para promover la intraabsorción celular del ADN se cree que resulta parcilamente de su capacidad para enlazar al ADN y condensar moléculas grandes de ADN de plásmido en complejos más pequeños de ADN/polímero para una endocitosis más eficiente. Los duplos de ARNi tienen solamente aproximadamente 21 nucleótidos de longitud, lo que sugiere que probablemente no se pueden condensar mucho más. Sin embargo, la capacidad de los polímeros catiónicos para enlazar a ARNi negativamente cargados e interactuar con la superficie celular negativamente cargada, puede facilitar la intraabsorción celular de los ARNi. Así, la capacidad de polímeros catiónicos conocidos en la transfección de ARNi incluyen, pero no se limitan a, PLL modificado con un grupo de imidazol (17), polietilenimina (PEÍ) (22), Polivinilpirrolidona (PVP) (23), y quitosán (24,25), se investigarán . Además, polímeros catiónicos y oligómeros novedosos desarrolados en el laboratorio de Robert Langer se investigarán. Se han desarrollado estrategias efcientes para sintetizar y probar colcecciones grandes de polímeros catiónicos y oligómeros novedosos a partir de diacrilato y monómeros de amina en la transfección de ADN por Langer y colaboradores. Estos polímeros se refieren en la presente como polímeros de poli (p-amino éster) (PAE) . En su primer estudio de "prueba de principio", sintetizaron una colección de 140 polímeros a partir de 7 monómeros de diacrilato y 20 monómeros de amina (19) . De los 140 miembros, 70 se encontraron suficientemente solubles en agua (2 mg/ml, solución amortiguadora de acetato 25 mM, pH = 5.0). Cincuenta y seis de los 70 polímeros solubles en agua interactuaron con el ADN como se muestra por el - giro de movilidad electroforática. De manera más importante, encontraron que dos de los 56 polímeros mediaron la transfección de ADN en células COS-7. Las eficiencias de transfección de los polímeros novedosos fueron 4-8 veces mayores que PEÍ e iguales o mejores que la Lipofectamine 2000. Desde el estudio incial, el grupo de Langer group ha construido y seleccionado una colección de 2,400 polímeros catiónicos, y obtenido otros 40 o más polímeros que promueven la , transfección eficiente del ADN (D. Anderson y R. Langer, comunicación personal) . Debido a que las variaciones estructurales pudieran tener un impacto importante en el enlace del ADN y las eficacias de la transfección (18), es - preferible probar muchos polímeros por su capacidad para promover intraabsorción celular de ARNi. Adicionalmente, es posible que en la transición hacia un sistema in vivo, se excluirán probablemente determinados polímeros como resultado de estudios de su desempeño in vivo, absorción, distribución, . metabolismo, y excreción (ADME) . Así, es importante la prueba in vivo. Juntos, al menos aproximadamente 50 polímeros catiónicos se probarán en la transfección de experimentos con ARNi. La mayoría de ellos serán PAE y PLL modificado con un grupo imidazol como se describen anteriormente. PEÍ, PVP, y quitosán se comprarán de fuentes comerciales. Para seleccionar estos polímeros rápida y eficientemente, la colección de polímeros PAE que transfectan exitosamente las células ya se ha movido en solución dentro de una placa de 96 pozos. El almacenamiento de los polímeros en este formato estándar de 96 pozos permite el desarrollo directo de una selección semi-automatizada, al usar un robot micropipeteador estéril Labcyte EDR 384S/96S. La cantidad de polímero se titulará (usando una cantidad predeterminada de ARNi) para definir relaciones adecuadas de polímero y ARNi y las condiciones de suministro más eficientes. Dependiendo del ' ensayo específico, la selección semi-automatizada será ligeramente diferente como se describe a continuación. Caracterización de los complejos de ARNi/polímero. Para que los diversos polímeros catiónicos faciliten la intraabsorción celular de ARNi, deben poder formar complejos con ARNi. Esta cuestión se examinará por un ensayo de giro de movilidad electroforático (EMSA) siguiendo un protocolo similar a aquel descrito en (19) . Brevemente, los ARNi dirigidos a los transcritos que codifican cualquiera de las proteínas arriba discutidas (la cadena FCeRIa, la cadena FCeRlß, c-Kit, Lyn, Syk, ICOS, OX40L, CD40, CD80, CD86, RelA, RelB, ligando 4-1BB, TLRl, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, CD83, SLAM, cadena común gamma, y COX-2) se mezclarán con cada uno de los aproximadamente 50 o polímeros en relaciones de 1:0.1, 1:0.3, 1:0.9, 1:2.7, 1:8.1, y 1:24.3 (ARNi/polímero, p/p) en placas de 96 pozos usando un robot micropipeteador. Las mezclas se cargarán en una placa de un gel de agarosa al 4% capaz de ensayar hasta 500 muestras al usar un pipeteador multicanal. Los patrones de migración de ARNi se visulizarán por tinción con bromuro de etidio. Si la movilidad de un ARNi se reduce en la presencia de un polímero, el ARNi forma complejos con ese polímero. Con base en las relaciones de ARNi a polímero, puede ser posible identificar la relación de neutralización. Se espera que los diversos polímeros catiónicos formarán complejos con ARNi debido a que han demostrado formar complejos con ADN. Aquellos polímeros que no se enlazan al ARNi serán menos preferidos y un examen adicional se enfocará ' en esos polímeros que no se enlazan al ARNi. La citotoxicidad del ' PLL modificado por el grupo imidazol, PEÍ, PVP, quitosán, y algunos polímeros PAE, se ha medido sola o en complejos con ADN en líneas celulares. Debido a que los cambios en la citotoxicidad dependen de las moléculas enlazadas, la citotoxicidad de los diversos polímeros en complejos con ARNi se medirá en una variedad de células, por ejemplo, líneas celulares epiteliales, líneas de mastocitos, líneas celulares T, líneas celulares DC. Las líneas celulares adecuadas incluyen, por ejemplo, células MDCK. Brevemente, los ARNi se mezclarán con cantidades diferentes de polímeros como anteriormente, al usar el robot micropipeteador estéril Labcyte. Los complejos se aplicarán a las células epiteliales en placas de 96 pozos por 4 hrs. Luego, el medio que contiene polímero se reemplazará con medio de crecimiento normal. 24 hrs después, la actividad metabólica de las células se medirá en un formato de 96 pozos al usar el ensayo MTT (26) . Se espera que la citotoxicidad de los complejos de ARNi/polímero será similar a aquella de los complejos de ADN/polímero . Aquellos polímeros que exterminen 90% o más células a la cantidad más baja usada serán menos preferidos, y el foco de la investigación adicional serán polímeros que no exterminen más del 90% de las células en la cantidad más baja utilizada. Absorción de ARNi por células cultivadas. Una vez que los complejos de ARNi/polímero se han caracterizado, su capacidad para promover absorción celular de ARNi se probará, partiendo de células cultivadas usando dos diferentes sistemas de ensayo. En el primer método, se mide el efecto de un ARNi específico de GFP, referido en la presente como GFP-949 (sentido: 5'- GGCUACGUCCAGGAGCGCAUU-3 ' (SEQ ID NO: 320); antisentido: 5'- UGCGCUCCUGGACGUAGCCUU-3 ' (SEQ ID NO: 321) sobre la expresión de GFP en células que expresan GFP, debido a que una disminución en la expresión de GFP se cuantifica fácilmente al medir la intensidad fluorescente. Brevemente, GFP-949/polímero a las mismas relaciones como anteriormente se aplicará a las células en placas de 96 pozos. Una variedad de diferentes tipos de células se puede usar. Por conveniencia, se puede usar una línea celular bien caracterizada tal como las células MDCK. Otras células adecuadas incluyen líneas de mastocitos, líneas celulares dendríticas, etc. Como controles negativos, se usarán ya sea ningún ARNi o un ARNi no relacionado en secuencia a cualquiera de los ARNi de prueba. Como un control positivo, GFP-949 se introducirá en las células por electroporación. Treinta y seis horas después, las células se usarán en placas de 96 pozos y se mide la intensidad fluorescente de los Usados por un lector de placas fluorescentes. Las capacidades de los diversos polímeros para promover absorción celular de ARNi se indicará por la disminición global en la intensidad de GFP. Alternativamente, las células se analizarán para la expresión de GFP al usar un citómetro de flujo que está equipado para manejar muestras en un formato de 96 pozos. Las capacidades de los diversos polímeros para promover la absorción celular de ARNi se indicará por el porcentaje de células con intesidad reducida de GFP y el grado de disminución de la intensidad de GFP. Los resultados de estos ensayos también darán luz sobre la relación óptima de ARNi :polímero para la transfección más eficiente. En el segundo método la inhibición de la actividad de los mastocitos se medirá directamente. Como se describen anteriormente, ARNi/polímero (por ejemplo, los ARNi dirigidos a la cadena FCeRIa, la cadena FCeRIß, c-Kit, Lyn, Syk, etc.) a diversas relaciones se aplicarán a los mastocitos en placas de 96 pozos. Como un control positivo, ARNi se introducirá en los mastocitos por transfección o electroporación. Como controles negativos, se usarán un ARNi no relacionado tal como GFP-949 o ningún AR i. Si la liberación de mediadores es substancialmente menor en los cultivos de msatocitos que se tratan con ARNi/polímero que aquellos que no se tratan, se concluirá que el polímero promueve la transfección de AR i. Al comparar la liberación del mediador en cultivos en los cuales el ARNi se introduce por transfección o electroporación, se estimará la eficiencia de transfección relativa de los ARNi y las composiciones de ARNi/polímero . . Los polímeros catiónicos más efectivos de las dos selecciones iniciales se verificarán en el ensayo de infección con virus en placas de 96 pozos al titular tanto el ARNi como los polímeros. Con base en los resultados obtenidos, la capacidad de diversos de los polímeros más efectivos en las relaciones más efectivas de ARNi :polímero se analizarán además en células MDCK y/o mastocitos en placas de 24 pozos y placas de 6 pozos. Diversos de los polímeros más efectivos se seleccionarán para estudios adicionales en ratones como se describen en Ejemplo 5. Otros agentes de suministro. Como polímeros catiónicos alternativos para la promoción eficiente de intraabsorción celular de ARNi en células cultivadas, los péptidos ricos en arginina se investigarán en experimentos de transfección de ARNi. Debido a que los ARP se piensa que penetran directamente la membrana del plasma al intercatuar con los fosfolípidos cargados negativamente (33) , mientras que los polímeros catiónicos más actualmente usados se piensan para promover la absorción celular de ADN por endocitosis, la eficicaia de los ARP en promover la intraabsorción celular de ARNi se investigarán. Como los polímeros catiónicos, los ARPs y la poliarginina (PLA) también se cargan positivamente y probablemente pueden enlazar a ARNi, lo que sugiere que es probable que no sea necesario que se liguen de manera covalente el ARNi a ARPs o PLAs . Por lo tanto, los ARP o PLA se tratarán similarmente a los otros polímeros catiónicos. La capacidad del ARP de Tat y la longitud diferente de los PLA (disponibles de Sigma) para promover absorción celular de ARNi se determinará como se describen anteriormente.

Ejemplo 5: Prueba de los ARNi y Composiciones de ARNi/ Portador en ratones La capacidad de los polímeros identificados para promover la absorción de ARNi por células en el tracto respiratorio en ratones se evalúa como se describe en U.S.S.N. 10/674,159, y las eficacias de las composiciones de ARNi/portador (composiciones de ARNi/polímero, composiciones de ARNi/ polímero catiónico, composiciones de ARNi/péptido rico en arginina, etc. ) en la prevención y tratamiento de signos y síntomas alérgicos y asmáticos en ratones se examina como se describen en Ejemplo 3. La demostración de la inhibición de ARNi de tales signos y/o síntomas en ratones proporcionará evidencia de su uso potencial en humanos para evitar o tratar la rinitis alérgica y/o asma, por ejemplo, por administración intranasal o pulmonar de los ARN-i . Métodos similares se pueden usar para probar vectores de ARNhs o ARNi. Los vectores de ARNi, ARNhs, o ARNi se pueden administrar en combinación con cualquiera de los agentes de suministro antes descritos.

Ejemplo 6: Efecto de los ARNhs Inventivos Transcritos de los vectores de ADN La terapia efectiva de ARNi depende de la capacidad para suministrar una cantidad suficiente de ARNi dentro de las células .adecuadas in vivo. Como una alternativa a las metodologías antes descritas1, se pueden usar los vectores de ADN a partir de los cuales los precursores de ARNi se pueden transcribir y procesar dentro de ARNi efectivos. Se ha demostrado previamente que los agentes de ARNi transcritos de un vector de ADN pueden inhibir la expresión de CD8a al mismo grado como el ARNi sintético introducido dentro de las mismas células. Específicamente, se encuentra que uno de cinco de los ARNi diseñados para dirigirse al gen CD8a, referidos como CD8-61, inhiben CD8 pero no la expresión de CD4 en una línea celular de ratón CD8+CD4+ T (12) . Al probar diversos derivados de horquilla del ARNi CD8-61, encontramos que CD8-61F tuvo una actividad inhibidora similar como el CD8-61 (44) . CD8-61F se construyó dentro de pSLOOP III, un vector de ADN en el cual la transcripción se impulsa por el _ promotor Hl de ARN, lo que resulta en el plásmido pSLOOP III-CD8-61F. El promotor Hl de ARN es compacto (45) y se transcribe por la polimerasa III (pol III) . El promotor Pol III se usó debido a que normalmente transcribe el ARN pequeño y se ha usado para generar el silenciamiento del tipo ARNi previamente (46) . Para probar el vector de ADN, se usaron células HeLa que habían sido transfectadas con un vector de expresión de CD8a. La transfección transitoria del plásmido pSLOOP III-CD8-61F en las células HeLa que expresan CD8a resultaron en una reducción de la expresión de CD8a al mismo grado que las células HeLa que se transfectaron con el ARNi CD8-61 sintético. En contraste, la transfección de un vector menos promotor no redujo significativamente la expresión de CD8a. Estos resultados muestran que una horquilla de ARN puede transcribirse desde un vector de ADN y luego procesarse en ARNi para el silenciamiento de ARN. Se puede usar una metodología similar para diseñar vectores de ADN que expresen precursores de ARNi específicos para los transcritos aquí descritos, por ejemplo, transcritos que codifican la cadena de FCeRIa, la cadena FCeRIß, c-Kit, Lyn, Syk, ICOS, OX40L, CD40, CD80, CD86, RelA, RelB, ligando 4- 1BB, TLRl, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7 , TLR8 , TLR9, CD83, SLAM, cadena común gamma, y COX-2. Estudios de ARNi generados de ARNh transcritos de vectores de ADN en células cultivadas y modelos animales. Para expresar los precursores de ARNi desde un vector de ADN, se identfiicarán derivados de horquilla de ARNi (específicos para un transcrito objetivo) que se pueden procesar en dúplex de ARNi. Por ejemplo, la Figura 7A muestra diagramas esquemáticos de HFceRa-338 y GFP-949 ARNi y sus derivados/precursores de horquilla. Derivados/precursores de horquilla similares se pueden construir para cualquiera de los ARNi inventivos aquí descritos. (Observar que un ARNh se puede referir como un "derivado" del ARNi correspondiente debido a que el diseño de un ARNh se pueden basar en, esto es, derivado de, que un ARNi, esto es, un ARNi con una porción dúplex igual o substancialmente idéntica. Sin embargo, dentro de la célula un ARNh sirve como un "precursor" del correspondiente ARNi, esto es, la horquilla se procesa para generar el correspondiente ARNi. Así como será evidente para alguien experto ordinario en la técnica, los términos se pueden usar de manera intercambiable o alternativamente, dependiendo del contexto.) La Figura 7B muestra configuraciones de tándem en horquilla de HFceRa-338 y GFP-949H en dos órdenes diferentes. Configuraciones similares en tándem de horquilla se pueden construir para cualquiera de los ARNi inventivos aquí descritos, esto es, cualquiera de los dos ARNi inventivos se pueden incorporar en una configuración de tándem de horquilla sencilla. La Figura 7C muestra vectores de expresión de pSLOOP III. Los derivados/precursores .de horquilla de ARNi se clonan solos en el vector pSLOOP III (parte superior) , : en configuraciones en tándem (en medio) , o simultáneamente con un promotor independiente y secuencia de terminación (inferior) . Además, se producirán los vectores a partir de los cuales dos o más precursores de ARNi se pueden transcribir. La misma metodología general descrita en la solicitud de patente de E.U.A. 10/674,159 se empleará, excepto que más que probar derivados de horquilla de ARNi por su capacidad para inhibir la producción del virus de la influenza, derivados de horquilla de ARNi se probarán por su capacidad para inhibir la respuesta de mastocitos (por ejemplo, liberación del mediador), respuesta a células T, producción de IgE, y/o signos y síntomas de hipersensibilidad mediada por IgE en ratones u otros modelos animales.

Equivalentes Aquellos expertos en la técnica reconocerán, o podrán determinar al usar no más que la experimentación de rutina, muchos equivalentes para las modalidades de la invención aquí descritas. El alcance de la presente invención no se pretende que se limite a la Descripción anterior, sino más bien como se establece en las reivindicaciones anexas.

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Claims (81)

1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones 1. Un agente de ARNi dirigido a un transcrito objetivo, caracterizado porgue codifica una proteínas involucrada en el desarrollo patogénesis, o síntomas de una enfermedad o condición mediada por IgE.
2. 2. El agente de ARNi de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la enfermedad es rinitis alérgica o asma.
3. 3. El agente de ARNi de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porgue el transcrito codifica una proteína seleccionada del grupo que consiste de: cadena FCeR a, cadena FCeR ß, c-Kit, Lyn, Syk, ICOS, 0X OL, CD40, CD80, CD86, RelA, RelB, ligando 4-1BB, TLRl, TLR2 , TLR3 , TLR4, TLR5, TLR.6 , TLR7 , TLR8 , TLR9 , CD83, SLAM, cadena común gamma, y COX-2.
4. 4. El agente de ARNi de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el agente de ARNi es un vector de ARNi .
5. 5. El agente de ARNi de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el agente de ARNi es un ARNi o ARNh.
6. 6. El agente de ARNi de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque el ARNi o ARNh comprende una porción dúplex de al menos 15 nucleótidos de largo.
7. 7. El agente de ARNi de . conformidad con la -5 reivindicación 5, caracterizado porque el ARNi o ARNh comprende una porción dúplex de aproximadamente 19 nucleótidos de largo.
8. 8. El agente de ARNi de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque el ARNi o ARNh 0 comprende una hebra antisentido que comprende una porción cuya secuencia es susbtancialmente complementaria a una secuencia listada en las Tablas 1-26 sobre al menos 15 nucleótidos continuos.
9. 9. El agente de ARNi de conformidad con la 5 reivindicación 5, caracterizado porque el ARNi o ARNh comprende una hebra antisentido que comprende una porción cuya secuencia es 100% complementaria a una secuencia listada en las Tablas 1-26 sobre al menos 15 nucleótidos continuos.
10. 10. El agente de ARNi de conformidad con la 0 reivindicación 5, caracterizado porque el ARNi o ARNh comprende una hebra sentido que comprende una porción cuya secuencia es substancialmente idéntica a una secuencia listada en cualquiera de SEQ ID NOs: 1-315 sobre al menos 15 nucleótidos continuos. 5
11. 11. El agente de ARNi de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque el ARNi o ARNh comprende una hebra sentido que comprende una porción cuya secuencia es 100% idéntica a una secuencia listada en cualquiera de SEQ ID NOs: 1-315 sobre al menos 15 nucleótidos continuos.
12. 12. Una composición caracterizada porque comprende el agente de ARNi de conformidad con la reivindicación 1, formulada para suministro en aerosol.
13. 13. Una composición caracterizada porque comprende el agente de ARNi de conformidad con la reivindicación 1, formulada como polvo seco.
14. 14. Un método de tratamiento o prevención de una enfermedad o condición mediada por IgE caracterizado porque comprende las etapas de: (a) suministrar a un sujeto en riesgo de o que padece de una condición mediada por IgE; y (b) administrar el agente de ARNi de conformidad con la reivindicación 1, al sujeto.
15. 15. El método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque la condición mediada por IgE es rinitis alérgica o asma.
16. 16. El método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el transcrito codifica una proteína seleccionada del grupo que consiste de: cadena FCeR a, cadena FCeR ß, c-Kit, Lyn, Syk, ICOS, OX40L, CD40, CD80, CD86, RelA, RelB, ligando 4-1BB, TLRl, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, CD83, SLAM, cadena común gamma, y COX-2.
17. 17. El método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque la composición se administra directamente al sistema respiratorio de un sujeto por suministro por inhalación.
18. 18. Una composición caracterizada porque comprende el agente de ARNi de conformidad con la reivindicación 1, que comprende además un portador farmacéuticamente aceptable.
19. 19. Una composición caracterizada porque comprende el agente de ARNi de conformidad con la reivindicación 1, que comprende además un agente de suministro.
20. 20. Un método para el tratamiento de sepsis, choque, o una lesión relacionada con quemaduras caracterizado porque comprende las etapas de: (i) suministrar a un sujeto que necesita del tratamiento para sepsis, choque, o una lesión relacionada con quemaduras; y (ii) administrar al sujeto una composición que comprende un agente de ARNi dirigido al receptor de tipo Toll .
21. 21. Una composición caracterizada porque comprende: un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito objetivo, o un ácido nucleico que comprende una plantilla para la transcripción de una o más moléculas de ARN que se hibridizan o auto-hibridizan para formar un ARNi o ARNh dirgido a un transcrito objetivo, en donde el transcrito objetivo codifica una proteína seleccionada del grupo que consiste de: cadena FCeR a, cadena FCeR ß, c-Kit, Lyn, Syk, ICOS, 0X4OL, CD40, CD80, CD86, RelA, RelB, ligando 4-1BB, TLRl, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, CD83, SLAM, cadena común gamma, y COX-2.
22. 22. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: la proteína es la cadena FCeR a.
23. 23. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: la proteína es la cadena FCeR ß.
24. 24. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: la proteína es c-Kit.
25. 25. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: la proteína es Lyn.
26. 26. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: la proteína es Syk.
27. 27. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: la proteína es ICOS.
28. 28. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: la proteína es OX40L.
29. 29. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: la proteína es CD40.
30. 30. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: la proteína es CD80.
31. 31. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: la proteína es CD86.
32. 32. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: la proteína es RelA.
33. 33. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: la proteína es RelB.
34. 34. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: la proteína es ligando 4-1BB.
35. 35. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: la proteína es TLRl .
36. 36. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: la proteína es TLR2.
37. 37. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: la proteína es TLR3.
38. 38. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: la proteína es TLR4.
39. 39. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: la proteína es TLR5.
40. 40. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: la proteína es TLR6.
41. 41. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: la proteína es TLR7.
42. 42. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: la proteína es TLR8.
43. 43. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: la proteína es TLR .
44. 44. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: la proteína es CD83.
45. 45. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: la proteína es SLAM.
46. 46. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: la proteína es cadena común gamma.
47. 47. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: la proteína es COX-2.
48. 48. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: el ARNi o ARNh comprende una porción dúplex al menos de 15 nucleótidos de largo.
49. 49. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: el ARNi o ARNh comprende una porción dúplex de aproximadamente 19 nucleótidos de largo.
50. 50. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: el ARNi o ARNh comprende una porción dúplex al menos 15 nucleótidos de largo y al menos una colgadura de hebra sencilla en 3 prima.
51. 51. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: el ARNh comprende una hebra sencilla de ARN con una región auto-complementaria que puede formar una estructura dúplex.
52. 52. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: el ARNi comprende dos hebras complementarias de ARN que pueden formar una estructura dúplex.
53. 53. La composición de conformidad con la reivindicación 51, caracterizada porque la estructura dúplex es de al menos 15 nucleótidos de longitud.
54. 54. La composición de conformidad con la reivindicación 52, caracterizada porque la estructura dúplex es de al menos 15 nucleótidos de longitud.
55. 55. La composición de conformidad con la reivindicación 51, caracterizada porque la estructura dúplex es de aproximadamente 19 nucleótidos de longitud.
56. 56. La composición de conformidad con la reivindicación 52, caracterizada porque la estructura dúplex es de aproximadamente 19 nucleótidos de longitud.
57. 57. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: el ARNi o ARNh comprende una porción que es perfectamente complementaria a una región del transcrito objetivo, en donde la porción tiene al menos 15 nucleótidos de longitud.
58. 58. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: el ARNi o ARNh comprende una porción que es perfectamente complementaria a una porción del transcrito objetivo, con la excepción de cómo máximo un nucleótido, en donde la porción tiene al menos 15 nucleótidos de longitud.
59. 59. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: el ARNi o ARNh comprende una porción que es perfectamente complementaria a una porción del transcrito objetivo con la excepción de como máximo dos nucleótidos, en donde la porción tiene al menos 15 nucleótidos de longitud.
60. 60. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: el ARNi o ARNh tiene una región dúplex de núcleo cuya secuencia de hebra sentido consiste de al menos 15 nucleótidos consecutivos como se establece en cualesquiera de las secuencias presentadas en SEQ ID NO: 1 hasta 315, o en donde la secuencia de la hebra sentido de la región dúplex de núcleo consiste de al menos 15 nucleótidos consecutivos como se establece en cualquiera de las secuencias presentadas en SEQ ID NO:l hasta 315 con la condición de que ya sea uno o dos nucleótidos entre los 15 nucleótidos consecutivos pueden diferir de esa secuencia.
61. 61. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque: el ARNi o ARNh tiene una región dúplex de núcleo cuya secuencia de hebra sentido consiste de al menos 17 nucleótidos consecutivos como se establece en cualquiera de las secuencias presentadas en SEQ ID NOS : 1 hasta 315, o en donde la secuencia de la hebra sentido de la .región dúplex de núcleo consiste de al menos 15 nucleótidos consecutivos como se establece en cualquiera de las secuencias presentadas en SEQ ID N0S:1 hasta 315.
62. 62. Un análogo del ARNi o ARNh de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque el análogo difiere 5 del ARNi o ARNh en que contiene al menos una modificación.
63. 63. El análogo de conformidad con la reivindicación 62, caracterizado porque: la modificación resulta en una estabilidad creciente del ARNi o ARNh, potencia la absorción del ARNi o ARNh, potencia - 10 la entrada celular del ARNi o ARNh, o cualquier combinación de los anteriores.
64. 64. El análogo de conformidad con la reivindicación 62, caracterizado porque: la modificación modifica una base, un azúcar, o una "15 ligadura entre nucleósidos.
65. 65. El análogo de conformidad con la reivindicación 62, caracterizado porque: la modificación no es una modificación en 2' del nucleótido . 20
66. 66. El análogo de conformidad con la reivindicación 62, caracterizado porque: la modificación es una modificación en 2' del nucleótido .
67. 67. Un análogo del ARNi o ARNh de conformidad con la 25 reivindicación 21, caracterizado porque: el análogo difiere del ARNi o ARNh en que al menos un ribonucleótido se reemplaza por un desoxiribonucleótido.
68. 68. Una célula, caracterizada porque comprende la composición de conformidad con la reivindicación 21.
69. 69. La célula de conformidad con la reivindicación 68, caracterizada porque la célula comprende un ácido nucleico que comprende una plantilla para la transcripción de uno o más ARN que se hibridizan o auto-hibridizan para formar el ARNi o ARNh.
70. 70. Un animal transgénico, caracterizado porque comprende la composición de conformidad con la reivindicación 21.
71. 71. El animal transgénico de conformidad con la reivindicación 70, caracterizado porque el animal transgénico comprende un ácido nucleico que comprende una plantilla para la transcripción de uno o más ARN que se hibridizan o autohibridizan para formar el ARNi o ARNh.
72. 72. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende : la composición de conformidad con la reivindicación 21; y un portador farmacéuticamente aceptable.
73. 73. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 72, caracterizada porque: la composición se formula como un aerosol.
74. 74. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 72, caracterizada porque: la composición se formula como un rocío nasal.
75. 75. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 72, caracterizada porque: la composición comprende una pluralidad de ARNi or ARNhs diferentes dirigidos al mismo transcrito.
76. 76. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 72, caracterizada porque: la composición comprende una pluralidad de ARNi o ARNhs dirgidos a los diferentes transcritos.
77. 77. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 72, caracterizada porque: la composición comprende además un agente aprobado por la Administración de Fármacos y Alimentos para el tratamiento de rinitis alérgica o asma.
78. 78. Un método de tratamiento o prevención de una enfermedad o condición que se distingue por la hipersensibilidad mediada por IgE, el método caracterizado porque comprende las etapas de: suministrar a un sujeto en riesgo de o que padece de una enfermedad o condición distinguida por hipersensibilidad mediada por IgE; y administrar la composición de conformidad con la reivindicación 72 al sujeto.
79. 79. El método de conformidad con la reivindicación 78, caracterizado porque la enfermedad o condición es rinitis alérgica.
80. 80. El método de conformidad con la reivindicación 78, caracterizado porque la enfermedad o condición es asma.
81. 81. El método de conformidad con la reivindicación 78, caracterizado porque la composición se administra como un aerosol . 8-2. El método de conformidad con la reivindicación 78, caracterizado porque la composición se administra como un rocío nasal. 83. Un método para el tratamiento de la sepsis, choque, o una lesión relacionada con quemaduras, caracterizado porque comprende las etapas de: (i) suministrar a un sujeto que necesita del tratamiento para sepsis, choque, o una lesión relacionada con quemaduras; y (ii) administrar al sujeto una composición comprende un agente de ARNi dirigido a un receptor tipo Toll. 84. El método de conformidad con la reivindicación 83, caracterizado porque el receptor tipo Toll es TLR4. 85. El método de conformidad con la reivindicación 83, caracterizado porque la lesión relacionada con quemaduras es lesión al miocardio. 86. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque la composición comprende un ácido nucleico que comprende una plantilla para la transcripción de uno o más ARN que hibridizan o auto-hibridizan para formar un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito que codifica una proteína seleccionada del grupo que consiste de: cadena FCeRI a, cadena FCeRI ß, c-Kit, Lyn, Syk, ICOS, OX40L, CD40, CD80, CD86, RelA, RelB, ligando 4-1BB, TLRl, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7 , TLR8 , TLR9, CD83, SLAM, cadena común gamma, y COX-2. 87. La composición de conformidad con la reivindicación 86, caracterizada porgue: el ácido nucleico comprende un promotor para la polimerasa III de ARN. 88. La composición de conformidad con la reivindicación 86, caracterizada porque: el promotor es un promotor U6 o Hl . 89. La composición de conformidad con la reivindicación 86, caracterizada porque el ácido nucleico comprende una secuencia que sirve como una plantilla para la transcripción de una horquilla de ARN, en donde la secuencia está yuxtapuesta dentro de una proximidad cercana al sitio de inicio de la transcripción y seguida por un cásete polyA, lo que resulta en colgaduras mínimas o ninguna colgadura en la horquilla transcrita. 90. Un vector caracterizado porque comprende el ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 86. 91. El vector de conformidad con la reivindicación 90, caracterizado porque: el vector es un vector adecuado para aplicaciones de terapia génica. 92. El vector de conformidad con la reivindicación 91, caracterizado porque: el vector se selecciona del grupo que consiste de vectores retrovirales, vectores lentivirales, vectores de adenovirus, y vectores del virus asociado con adeno. 93. Una célula caracterizada porque comprende el vector de conformidad con la reivindicación 90. 94. Un método de tratamiento o prevención de una enfermedad o condición distinguida por hipersensibilidad mediada por IgE, caracterizado porque comprende las etapas de: suministrar a un sujeto en riesgo de o que padece de una enfermedad o condición distinguida hipersensibilidad mediada por IgE; y administrar la composición de conformidad con la reivindicación 86 al sujeto. 95. El método de conformidad con la reivindicación 94, caracterizado porque la enfermedad o condición es rinitis alérgica o asma. 96. El método de conformidad con la reivindicación 91, caracterizado porque la composición se administra como un aerosol . 97. El método de conformidad con la reivindicación 91, caracterizado porque la composición se administra como un rocío nasal. 98. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque comprende además un polímero catiónico. 99. La composición de conformidad con la reivindicación 98, caracterizada porque el polímero catiónico se selecciona del grupo que consiste de PLL modificado por un grupo imidazol, polietilenimina, polivinilpirrolidona, y quitosán. 100. La composición de conformidad con la reivindicación 98, caracterizada porque el polímero catiónico se selecciona del grupo que consiste de polímeros de poli (ß-amino éster) . 101. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque comprende además un péptido rico en arginina o péptido rico en histidina. 102. La composición de conformidad con la reivindicación 101, caracterizada porque el péptido rico en arginina es poliarginina que contiene al menos 5 residuos de arginina. 103. La composición de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque comprende además un tensoactivo adecuado para la introducción al pulmón. 104. Un método para inhibir la expresión de un transcrito objetivo caracterizado porque comprende administrar la composición de conformidad con la reivindicación 21 a una célula u organismo que expresa el transcrito, en donde el ARNi o ARNh es dirigido al transcrito objetivo. 105. Un método de tratamiento o prevención de una enfermedad o condición distinguida por hipersensibilidad mediada por IgE, caracterizado porque comprende las etapas de: suministrar a un sujeto en riesgo de o que padece de una enfermedad o condición mediada por IgE; y administrar al sujeto un ARNi o ARNh dirigido a un ' transcrito objetivo, o un ácido nucleico que comprende una plantilla para la transcripción de una o más moléculas de ARN que se hibridizan o auto-hibridizan para formar un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito objetivo, en donde la inhibición del transcrito objetivo directa o indirectamente inhibe la producción o secreción de IgE, reduce la proliferación o supervivencia de células B secretoras de IgE, o cualquier combinación de los anteriores. 106. El método de conformidad con la reivindicación 105, caracterizado porque el ARNi o ARNh es dirigido a un transcrito que codifica una proteína seleccionada del grupo que consiste de: cadena FCeRI a, la cadena FCeRI ß, c-Kit, Lyn, Syk, ICOS, OX40L, CD40, CD80, CD86, RelA, RelB, ligando 4-1BB, TLRl, TLR2, TLR3, TLR4 , TLR5, TLR6, TLR7 , TLR8 , TLR9, CD83, SLAM, cadena común gamma, y COX-2. 107. Un método de tratamiento o prevención de una enfermedad o condición que se distingue por la actividad inadecuada o excesiva de mastocitos o hipersensibilidad mediada por IgE, caracterizado porque comprende las etapas de : suministrar a un sujeto en riesgo de o que padece de una enfermedad o condición distinguida por la actividad inadecuada o excesiva de mastocitos; y administrar al sujeto un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito objetivo, o un ácido nucleico que comprende una plantilla para la transcripción de una o más moléculas de ARN que se hibridizan o auto-hibridizan para formar un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito objetivo, en donde la inhibición del transcrito objetivo reduce la actividad de los mastocitos o supervivencia de los mastocitos. 108. El método de conformidad con la reivindicación 107, caracterizado porque el ARNi o ARNh es dirigido a un transcrito que codifica una proteína seleccionada del grupo que consiste de: la cadena FCeRI a, la cadena FCeRI ß, c-Kit, Lyn, y Syk. 109. Un método de tratamiento o prevención de una enfermedad o condición que se distingue por respuestas inadecuadas o excesivas a las células de ayuda Th2 o hipersensibilidad mediada por IgE, caracterizado porque comprende las etapas de: suministrar a un sujeto en riesgo de o que padece de una enfermedad o condición que se distingue por respuestas inadecuadas o excesivas a las células de ayuda Th2; y administrar al sujeto un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito objetivo, o un ácido nucleico que comprende una plantilla para la transcripción de una o más moléculas de ARN que se hibridizan o auto-hibridizan para formar un ARNi o ARNh dirigido a un transcrito objetivo, en donde la inhibición del transcrito objetivo reduce o elimina la respuesta de células Th2. 110. El método de conformidad con la reivindicación 109, caracterizado porque el ARNi o ARNh es dirigido a un transcrito que codifica una proteína seleccionada del grupo que consiste de: cadena FCeRI a, la cadena FCeRI ß, c-Kit, Lyn, Syk, ICOS, OX40L, CD40, CD80, CD86, RelA, RelB, ligando 4-1BB, TLRl, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, CD83, SLAM, cadena común gamma, y COX-2. 111. Un método de identificación de un agente de ARNi cuando comprende una secuencia adecuada para el tratamiento de una condición que se distingue por hipersensibilidad mediada por IgE o actividad inadecuada o excesiva de mastocitos caracterizado porque comprende: (i) suministrar un agente de ARNi candidato a mastocitos ya sea previo a, , al mismo tiempo que, o después de la exposición a un estímulo adecuado; (ii) evaluar la producción o secreción de un mediador; (iii) comparar la cantidad del mediador producido o secretado en la presencia del agente de ARNi con la cantidad producida o secretada en ausencia del agente de ARNi; e (iv) indetificar un agente de ARNi cuando comprende una secuencia adecuada si la cantidad del mediador producida o secretada én la presencia del agente de ARNi es menor que la cantidad del mediador producida o secretada en la ausencia del agente de ARNi . 112. Un método de identificación de un agente de ARNi que comprende una secuencia adecuada para el tratamiento de una condición que se distingue por hipersensibilidad mediada por IgE o actividad inadecuada o excesiva de células Th2 de ayuda caracterizado porque comprende: (i) suministrar el agente candidato de ARNi a un cultivo gue comprende células T y APC; (ii) evaluar la proliferación de células T y/o evaluar la producción o secreción de una citoquina característica de las células Th2; (iii) comparar el grado de proliferación de las células T o la producción o secreción de la citoquina en la presencia del agente de ARNi con el grado de proliferación de las células T o la producción o secreción de la citoquina en ausencia del ARNi; e (iv) identificar un agente de ARNi cuando comprende una secuencia adecuada si el grado de proliferación de las células T o la producción o secreción de la citoquina en la presencia del agente de ARNi es menor que el grado de proliferación de células T o la producción o secreción de la citoquina en ausencia del agente de ARNi. 113. Un método de identificación de un agente de ARNi cuando comprende una secuencia adecuada para el tratamiento de una condición que se distingue por hipersensibilidad mediada por IgE caracterizado porque comprende: (i) suministrar un agente de ARNi candidato a un cultivo que comprende células B; -" (ii) evaluar la producción o secreción de IgE; (iii) comparar la cantidad de IgE producida o secretada en la presencia del ARNi con la cantidad producida o secretada en ausencia del agente de ARNi; e (iv) identificar un agente de ARNi cuando comprende una secuencia adecuada si la cantidad de IgE producida o secretada en la presencia del agente de ARNi es menor que la cantidad del IgE producida o secretada en ausencia del agente de ARNi. 114. El método de conformidad con la reivindicación 113, caracterizado porque la IgE es específica de antígenos. 115. Un método de identificación de un agente de ARNi cuando comprende una secuencia adecuada para el tratamiento de una condición que se distingue por hipersensibilidad mediada por IgE caracterizado porque comprende: (i) suministrar un agente de ARNi candidato a un sujeto; (ii) obtener un valor para un indicador de hipersensibilidad mediada por IgE seleccionado del grupo que consiste de: el nivel de IgE en suero, proliferación de las células T, producción de una citoquina característica de las células Th2, inflamación de las vías respiratorias, reactividad de las vías respiratorias, remodelación de la pared de las vías respiratorias, y función pulmonar; (iii) comparar el valor obtenido en la presencia del agente de ARNi con el valor obtenido en ausencia del agente de ARNi; (iv)' identificar un agente dé ARNi cuando comprende una secuencia adecuada si el valor obtenido en la presencia del ARNi es menor que el valor obtenido en ausencia del agente de ARNi. 116. El método de conformidad con la reivindicación 115, caracterizado porque la IgE en suero es específica de antígeno o las células T son específicas de antígeno.