MXPA06009031A - Quimio-protectores de semillas y brotes de plantas cruciferas - Google Patents

Abstract

La presente invención estádirigida a composiciones precursoras de quimio-protectores provistas a partir de semillas y brotes de plantas crucíferas y a métodos para su preparación. El tratamiento de extractos acuosos de semillas o brotes de plantas crucíferas con adsorbentes incrementa sustancialmente la relación de ciertos compuestos altamente precursores de quimio-protectores (alquil glucosinolatos, tales como glucorafanina, también llamada sulforafano glucosinolato) a compuestos indeseables tales como indola glucosinolatos (por ejemplo, 4-hidroxiglu-cobrasicina). El método provee un extracto que tiene una relación de glucorafanina a 4-hidroxiglucobrasicina de alrededor de 70 o mayor. El extracto resultante tiene color y olor mejorados y puede ser secado o usado directamente como un aditivo en una variedad de alimentos.

Description

QUIMIO-PROTECTORES DE SEMILLAS Y BROTES DE PLANTAS CRUCIFERAS La presente invención se refiere a compuestos quimio-protectores y métodos para producir compuestos quimio-protectores que pueden ser incorporados en una variedad de productos alimenticios. De manera mas específica, se provee un método de extracción que es efectivo para proveer un extracto que tiene una elevada relación de compuestos quimio-protectores a compuestos menos deseables mientras provee un alto rendimiento de compuestos quimio-protectores. Rendimientos y relaciones acrecentados de compuestos quimio-protectores son provistos por un método de extracción acuoso usado en combinación con adsorbentes . Antecedentes Se conviene generalmente que la dieta juega un gran papel en controlar el riesgo de desarrollar cánceres y que el consumo incrementado de frutas y verduras puede reducir la incidencia de cáncer en los seres humanos . La presencia de ciertos componentes químicos menores en las plantas puede proveer un mecanismo mayor de protección cuando se entregan a células de mamíferos . Las verduras cruciferas contienen precursores fitoquí-micos de quimio-protectores potentes, especialmente glucorafa i a y su producto de conversión asociado sulforafano, que cuando se entregan a células de mamíferos disparan mecanismos de desintoxicación de carcinógenos . En adición a reducir el riesgo de contraer ciertos cánceres, la glucoraf niña, a través de su producto de conversión bio-activo sulforafano, ha mostrado ser efectiva para destruir el organismo responsable de ocasionar la mayoría de las úlceras estomacales y puede proveer enfoques novedosos para reducir el riesgo de desarrollar enfermedades cardiovasculares y oculares . Se están llevando a cabo esfuerzos para lograr la aprobación de ciertas leyendas en etiquetas de productos alimenticios ya sea naturalmente elevados en estos agentes o para alimentos que contienen quimio-protectores de plantas cruciferas. Los productos que contienen aditivos quimio-protectores, aunque sin tales leyendas, ya están en el mercado. Las verduras cruciferas contienen también otros compuestos, tales como indola glucosinolatos, que son problemáticos para mantener una buena salud. No solamente son estos compuestos inductores débiles del sistema de desintoxicación de carcinógenos, sino que también pueden inducir sistemas que pueden bio-activar ciertos pro-carcinógenos . En adición, los productos de desintegración de indola glucosinolatos formados en el estómago durante la digestión pueden actuar en forma similar a la dioxina, una toxina sumamente potente. Por tanto, es ventajoso producir preparaciones que contengan glucoraf niña pero que contengan tan pocos indola glucosinolatos residuales, u otros compuestos adversos, como sea posible.

Diversas patentes describen el desarrollo de germoplas- raa de plantas cruciferas altamente quimio-protectores con una relación significativamente mejorada de glucorafa iña a indola glucosinolatos (incrementando la relación de alrededor de 0.2 a ~30). Ver, v.gr., las patentes US 6,521,818; 6,242,018; 6,177,122; 5,968,567; 5,968,505; y 5,725,895; sin embargo, desarrollar el germoplasma del laboratorios a pruebas de campo para comercializar requiere de un tiempo considerable, de mas de hasta 5 años, y sin garantía de éxito. Por ende, existe una necesidad de proveer métodos alternativos para producir altos rendimientos de glucorafani a con una elevada relación de glucorafani a a indola glucosinolatos. Compendio La presente invención está dirigida a composiciones precursoras de quimio-protectores provistas a partir de semillas y brotes de plantas cruciferas y métodos para su preparación. El tratamiento de los extractos acuosos de semillas o brotes de plantas cruciferas con adsorbentes incrementa sustancialmente la relación de ciertos compuestos altamente precursores de quimio-protectores (alquil glucosinolatos, tales como glucorafaniña, también conocida como glucosinolato de sulforafano) a compuestos indeseables tales como indola glucosinolatos (por ejemplo, 4-hidroxiglucobrasicina) . El método provee un extracto que tiene una relación de glucorafaniña a 4-hidroxiglucobrasicina de alrededor de 70 o mas. El extracto resultante tiene color y olor mejorados y puede ser secado o usado directamente como un aditivo en una variedad de alimentos. Se provee un método para extraer precursores de quimio- protectores de semillas o brotes de plantas cruciferas. Generalmente, el método incluye formar un extracto acuoso de semillas o brotes de plantas cruciferas. El extracto acuoso es puesto en contacto con un adsorbente. El extracto acuoso es separado del adsorbente para proveer un extracto acrecentado en quimio-protectores. El método es efectivo para proveer un extracto acrecentado en quimio-protectores que tiene una relación de varios alquil glucosinolatos, especialmente glucorafaniña a indola glucosinolatos, específicamente 4-hidroxiglucobrasicina de alrededor de 30 a alrededor de 1,000 o mayor, de preferencia de alrededor de 100 a alrededor de 1,000. Las verduras cruciferas han sido identificadas como una buena fuente de fitoquímicos precursores de quimio-protectores. Se ha encontrado que las semillas y los brotes de plantas cruciferas son una fuente especialmente buena de precursores de quimio-protectores. Las semillas o los brotes de plantas cruciferas que son especialmente útiles incluyen brócoli, col, berza, col rizada, col de tallo de médula, col de mil cabezas, col china, coliflor, col portuguesa, coles de Bruselas, colirrá-bano, col de Jersey, calabaza Savoy, col perforada, rábano, y similares así como sus mezclas. En un aspecto muy importante, se utilizan semillas de plantas cruciferas o semillas y brotes de brócoli . Cuando se usan semillas de plantas cruciferas como material inicial , pueden usarse de manera directa o pueden procesarse antes de la extracción acuosa. En un aspecto, las semillas de plantas cruciferas pueden ser desgrasadas antes de formar un extracto acuoso usando procedimientos conocidos de desengrasamiento. Por ejemplo, West, L., y colaboradores, J. Agrie. Food Chem. 2004, 52, 916-926, que se incorpora en la presente por referencia. En otro aspecto, las semillas de plantas cruciferas pueden ser molidas, pulverizadas o mezcladas físicamente antes de la adición del extracto acuoso o simultáneamente con la adición de un extracto acuoso. La extracción de semillas o brotes puede conducirse con agua o agua conteniendo un solvente orgánico, tal como alcohol etílico. En otro aspecto alternativo, se forma un extracto acuoso de semillas o brotes de plantas cruciferas poniendo en contacto las semillas o brotes de plantas cruciferas con agua teniendo una temperatura de 60 a 110°C por al menos 5 minutos. El extracto acuoso de semillas o brotes es puesto en contacto con un adsorbente . El extracto acuoso puede ser separado de los materiales celulares y estar libre de materiales celulares de semillas y brotes. De manera alternativa, el extracto acuoso con materiales celulares puede ser puesto en contacto directamente con adsorbentes . Los adsorbentes que pueden ser utilizados incluyen carbón activado, sílice, sílice modificado químicamente, arcilla blanqueadora y similares, así como sus mezclas. En un aspecto sumamente importante, el adsorbente es carbón activado. Generalmente, se mezcla alrededor de 1 a alrededor de 20% por peso de adsorbente con el extracto acuoso. En un aspecto sumamente importante, se mezcla alrededor de 8 a alrededor de 12% por peso de adsorbente con el extracto acuoso. En otro aspecto, el extracto acuoso de semillas o brotes es añadido a una columna que contiene materiales adsorben-tes. En este aspecto, el procesamiento en columna es efectivo para proveer un extracto que tiene una relación de alquil glucosinolatos, especialmente glucorafaniña a indola glucosinolatos, específicamente 4-hidroxiglucobrasicina, de alrededor de 30 a alrededor de 1,000 o mayor, de preferencia de alrededor de 100 a alrededor de 1,000. En otro aspecto, se proveen productos alimenticios que incluyen los quimio-protectores o el extracto acrecentado en precursores de quimio-protectores. El extracto puede ser incorporado de manera directa a productos alimenticios o secado, enfriado, congelado o secado por congelamiento y luego incorporado en los productos alimenticios. El producto alimenticio en el cual puede incorporarse el extracto incluye complementos alimenticios, bebidas, batidos, artículos horneados, tés, sopas, cereales, pildoras, tabletas, ensaladas, emparedados, granólas, aderezos para ensaladas, salsas, café, quesos, yogurts, barras de energía y similares, así como sus mezclas. En este aspecto, el producto alimenticio puede contener una cantidad de extracto efectiva para proveer al producto alimenticio con 0.003 a 0.05% por peso de glucorafaniña. Breve Descripción de la Figura La figura 1 provee una descripción general de métodos para extraer compuestos quimio-protectores de semillas o brotes de plantas cruciferas. Descripción Detallada Como se muestra en la figura 1, las semillas y/o los brotes de plantas cruciferas pueden ser procesados en varias maneras diferentes. Puede formarse un extracto acuoso de las semillas o los brotes y luego mezclarse con adsorbentes o aplicarse a una columna que contiene adsorbentes. De manera alternativa, las semillas o los brotes pueden ser mezclados de manera directa con un extracto acuoso y adsorbentes . Las semillas o los brotes pueden ser extraídos con mezcla física, homogeneización, o pulverización usando métodos conocidos. Como se usa en la presente, "quimio-protectores" y "compuestos quimio-protectores" se refieren a agentes de origen vegetal que son efectivos para reducir la susceptibilidad de los mamíferos a los efectos tóxicos y neoplásicos de los carcinógenos. "Precursores" de quimio-protectores se refiere a agentes que dan lugar a quimio-protectores por medios enzimáticos y/o químicos. Talalay, P., y colaboradores, J. Nutr . 2001, 131 (suplemento 11), 30275-30335. Ejemplos de tales precursores de quimio-protectores incluyen alquil glucosinolatos, tales como glucorafa i a . Como se usa en la presente, "extracto acuoso" significa un extracto preparado con 100% de agua o hasta 25% de adición de un solvente orgánico, tal como alcohol etílico. Otros métodos que pueden ser usados para concentrar selectivamente quimio-protectores y precursores de quimio-protectores incluyen: cromatografía preparativa en líquido, ultra-filtración en membrana, precipitación selectiva, electrofo-resis preparativa y técnicas de distribución contra-corriente preparativa. Troyer, J. , y colaboradores, J. Chromatogr. A 2001, 919, 299-304; West, L., y colaboradores, J. Chromatogr. A 2002, 966, 227-232; Fahey, J. , y colaboradores, J. Chromatogr. A 2003, 966, 85-93; y Iori, R. , solicitud de patente B098A 000425 1998. En otra alternativa, para purificar adicionalmente extractos con base en el peso molecular, el extracto acrecentado en precursores de quimio-protectores puede ser ultra-filtrado a través de filtros de > 500 MWCO (corte de peso molecular) . Semillas y Brotes de Plantas Cruciferas Las semillas y los brotes de plantas cruciferas son materiales iniciales útiles. La relación de glucorafaniña a indola glucosinolatos es naturalmente mas elevada en semillas (promedio de ~4, con un rango de 0.4 a 11) que en tejido vegetativo. Las semillas y los brotes son preferidos como -inmaterial inicial pues tienen cantidades superiores de glucorafa- nina en comparación con plantas maduras. Las semillas y los brotes son mas fáciles de procesar y menos costosos que las plantas maduras. Los brotes adecuados como fuentes de quimio-protectores para cáncer son generalmente brotes de plantas cruciferas (de la familia Brassicaceae) . De preferencia, los brotes son Brassica olerácea ssp. seleccionadas del grupo de variedades que consiste en acephala (col, calabaza silvestre, col rizada), medullosa (col de tallo de médula) , ramose (col de mil cabezas) , algoglabra (col china) , botrytis (coliflor, brócoli e? brotes) , costata (col portuguesa) , gemmifera (coles de Bruselas) , gogylodes (colirrába-no) , itálica (brócoli) , palmifolia (col de Jersey) , sabauda (calabaza Savoy) , sabellica (berza) , y selensia (col perforada) , entre otras. Se conocen numerosos métodos para el cultivo de brotes, como se ejemplifican por las patentes US 3,733,745; 3,643,376; 3,945,148; 4,130,964; 4,292,769; y 4,086,725, que se incorporan todas en la presente por referencia. Los brotes pueden ser preparados en equipos comerciales para desarrollo de brotes, aportando agua (rocío 6 veces/día) y luz (10 horas/día) durante un periodo de 5 días . Cultivares de brócoli particularmente útiles para usarse en el método reivindicado con Saga, DeCicco, Everest, Emerald City, Packman, Corvet, Dandy, Early, Emperor, Mariner, Green Comet, Green Valiant, Arcadia, Calabrese Caravel , Chace- llor, Citation, Cruiser, Early Purple Sprouting Red Arrow, Eureka, Excelsior, Galleon, Ginga, Goliath, Green Duke, Green- blet, Italian Sprouting, Late Purple Sprouting, Late Winter Sprouting, White Star, Legend, Leprechaun, Marathón, Mariner, Minaret (Romanesco) , Paragon, .Patriot, Premium Crop, Rapi e (Spring Raab) , Rosalind, Salade (Fall Raab) , Samurai, Shogun, Springer, Sultán, Taikó, Trixie, San Miguel, Arcadia, Gypsy, Everest, Patrón, Southern Comet, Green Comet, Destiny, Climax y Pírate. Sin embargo, son adecuados muchos otros cultivares de brócoli . Adsorbentes Las semillas o los brotes de plantas cruciferas o extractos acuosos de semillas o brotes de plantas cruciferas pueden ser mezclados de manera directa con adsorbentes en un modo por lotes, modo semi-continuo o modo continuo (v.gr., usando una columna de adsorbente) . Como se usa en la presente, "adsorbentes" se refiere a compuestos que son efectivos para adsorber de manera preferencial indola glucosinolatos sobre alquil glucosinolatos . Adsorbentes útiles incluyen carbón activado, incluyendo Norit A y Darco granular 12-20 de malla. Adsorbentes adicionales que muestran cierta efectividad incluyen sílice, sílice modificado químicamente (el llamado C-18 cargado) , y arcilla blanqueadora • (usada de manera rutinaria en el procesamiento de aceites vegetales) . Los adsorbentes que se encuentran ser inefectivos incluyen alúmina (neutra, acida y básica) y tierra de Fuller (montmorilonita) . Procesamiento de Extractos Los extractos acrecentados en precursores de quimio-protectores de semillas de plantas cruciferas pueden ser incorporados en una variedad de alimentos. El extracto puede ser secado, enfriado, congelado o secado por congelamiento usando métodos conocidos. De manera alternativa, los extractos pueden ser procesados adicionalmente, por ejemplo con procesamiento o diálisis en membranas para remover compuestos de alto peso molecular, tales como proteínas y polisacáridos . Ejemplos Ejemplo 1: procesamiento por lotes de semillas de brócoli Se trató una muestra de 30 mi de extracto acuoso de 1 g de semilla de brócoli desgrasada, pulverizada (variedad Gypsy) con 100 mg de carbón activado (Darco G-60) , 12-20 de malla, por ebullición por 1 minuto en 30 mi de agua, seguido por filtración para remover el adsorbente gastado y proveer un extracto acuoso . La relación inicial de glucorafanina/4-hidroxiglucobrasicina de -11 en la semilla inicial fue incrementada a -70 en el material tratado. La pérdida de glucorafaniña fue de -4%, como se determina por cromatografía de líquidos de alto desempeño (HPLC) , West, L., y colaboradores, J . Chromatogr . A 2002, 966, 227-232. Ejemplo 2: procesamiento en columna de semillas de brócoli Una muestra de 30 g de extracto acuoso de 1 g de semilla de brócoli desgrasada, pulverizada (variedad Gypsy) fue pasada hacia abajo en una columna conteniendo 1,000 mg de negro de carbón grafitado. La relación inicial de glucorafanina/4- hidroxiglucobrasicina de -11 en la semilla inicial fue incrementada a > 1,000. La pérdida de glucorafaniña fue de -13%, según se determinó por HPLC. Ejemplo 3: procesamiento de semillas de brócoli con agua hirviente Una porción de 100 mg de carbón activado (Darco G-60) fue mezclada con 1 g de semilla de brócoli desgrasada, pulverízada (variedad Gypsy) y extraída en agua hirviente, seguida por centrifugación para remover materiales en partículas. La relación inicial de glucorafanina/4-hidroxiglucobrasicina de -11 fue incrementada a -30. La pérdida de glucorafani a fue de -2%, según se determinó mediante HPLC. Ejemplo 4: procesamiento de semillas de brócoli por ultra-filtración Una porción de 200 g de semilla de brócoli (variedad Premium Crop) pulverizada y desgrasada (lípidos capaces de extraerse con hexano) fue añadida a 2 1 de agua hirviente. Después de 5 minutos a la temperatura del agua hirviente, la mezcla fue filtrada para remover el material residual de planta y el extracto acuoso fue tratado con 20 g de carbón activado (Darco G-60) por ebullición por -1 minuto, seguida por centrifugación y filtración para remover el adsorbente gastado. El extracto aclarado fue ultra-filtrado usando una membrana de 3,000 MWCO mientras se retenía el ultra-filtrado . Después de secado, se analizó el polvo de color bronce claro mediante HPLC y se encontró que contenía mas de 30% por peso de glucorafani a y una relación de glucorafanina/4-hidroxiglucobrasicina de mas de 1,000. Ejemplo 5: procesamiento de brotes de brócoli con mezcla física y ultra- filtración Una muestra de 500 g de brotes frescos, enteros de brócoli (brotes a partir de la variedad Premium Crop) , de -5 días de edad, fue añadida a 2 1 de agua hirviente. Después de 10 minutos a la temperatura del agua hirviente, la mezcla fue transferida a una batidora operando a alta velocidad para romper los tejidos de la planta con el fin de liberar glucorafaniña de manera adicional . Después de filtración para remover el material residual de la planta, el extracto acuoso fue tratado con 20 g de carbón activado (Darco G-60) por ebullición por -1 minuto, seguida por centrifugación y filtración para remover el adsorbente gastado. El extracto aclarado fue ultra-filtrado usando una membrana de 3,000 MWCO mientras se retenía el ultra-filtrado. Después de secado, el polvo de color blanco fue analizado por HPLC y se encontró contener mas de 10% por peso de glucorafani a y una relación de glucorafanina/4-hidroxiglucobrasicina de mas de 1,000.

Claims (32)

1. REIVINDICACIONES 1. Un método para extraer precursores de quimio-protectores, que comprende: formar un acuoso extracto de semillas o brotes de plantas cruciferas; poner en contacto el extracto acuoso con un adsorbente;
2. Y separar el adsorbente del extracto acuoso para proveer un extracto acrecentado en precursores de quimio-protectores, el método siendo efectivo para proveer un extracto acrecentado en precursores de quimio-protectores teniendo una relación de alquil glucosinolatos a indola glucosinolatos de al menos alrededor de 30. 2. El método de la reivindicación 1, donde los alquil glucosinolatos con glucorafaniña .
3. 3. El método de la reivindicación 1, donde los indola glucosinolatos son 4-hidroxiglucobrasicina .
4. 4. El método de la reivindicación 1, donde la relación del número de alquil glucosinolatos a indola glucosinolatos es de alrededor de 30 a alrededor de 1,000.
5. 5. El método de la reivindicación 1, donde la relación de alquil glucosinolatos a indola glucosinolatos es de alrededor de 1,000 o mayo .
6. 6. El método de la reivindicación 1, donde las semillas o brotes de plantas cruciferas son seleccionados del grupo que consiste en brócoli, col, berza, col rizada, col de tallo de médula, col de mil cabezas, col china, coliflor, col portuguesa, coles de Bruselas, colirrábano, col de Jersey, calabaza Savoy, col perforada, rábano, y sus mezclas.
7. 7. El método de la reivindicación 5, donde las semillas o brotes de plantas cruciferas son brócoli.
8. 8. El método de la reivindicación 1, donde las semillas de plantas cruciferas son desgrasadas antes de formar un extracto acuoso.
9. 9. El método de la reivindicación 1, donde el extracto acuoso de semillas o brotes de plantas cruciferas es formado poniendo en contacto las semillas o brotes de plantas cruciferas con agua a una temperatura de alrededor de 60 a 110 °C por al menos alrededor de 5 minutos .
10. 10. El método de la reivindicación 1, donde el adsorbente es seleccionado del grupo que consiste en carbón activado, sílice, sílice modificado químicamente, arcilla blanqueadora, y sus mezclas.
11. 11. El método de la reivindicación 10, donde el adsorbente es carbón activado.
12. 12. El método de la reivindicación 1, donde se mezcla alrededor de 1 a alrededor de 20% por peso de adsorbente con el extracto acuoso.
13. 13. El método de la reivindicación 12, donde se mezcla alrededor de 8 a alrededor de 12% por peso de adsorbente con el extracto acuoso .
14. 14. El método de la reivindicación 1, donde el extracto acuoso es añadido a una columna que contiene adsorbente .
15. 15. Un extracto acrecentado en precursores de quimio-protectores que contiene semillas o brotes de plantas cruciferas, formado por un proceso que comprende : formar un extracto acuoso de semillas o brotes de plantas cruciferas; poner en contacto el extracto acuoso con un adsorbente,-y separar el adsorbente del extracto acuoso para proveer el extracto acrecentado en precursores de quimio-protectores; el método siendo efectivo para proveer una relación numérica de alquil glucosinolatos a indola glucosinolatos de al menos alrededor de 30 en el extracto acrecentado en precursores de quimio-protectores.
16. 16. El método de la reivindicación 15, donde los alquil glucosinolatos son glucorafa iña .
17. 17. El método de la reivindicación 15, donde los indola glucosinolatos son 4-hidroxiglucobrasicina.
18. 18. El método de la reivindicación 15, donde la relación de alquil glucosinolatos a indola glucosinolatos es de alrededor de 30 a alrededor de 1,000.
19. 19. El método de la reivindicación 15, donde la relación de alquil glucosinolatos a indola glucosinolatos es de alrededor de 1,000 o mayor.
20. 20. El extracto acrecentado en precursores de quimio-protectores de la reivindicación 15, donde las semillas o brotes de plantas cruciferas son seleccionados del grupo que consiste en brócoli, col, berza, col rizada, col de tallo de médula, col de mil cabezas, col china, coliflor, col portuguesa, coles de Bruselas, colirrábano, col de Jersey, calabaza Savoy, col perforada, rábano, y sus mezclas.
21. 21. El extracto acrecentado en precursores de quimio-protectores de la reivindicación 20, donde las semillas o brotes de plantas cruciferas son brócoli.
22. 22. El extracto acrecentado en precursores de quimio-protectores de la reivindicación 20, donde las semillas de plantas cruciferas son desgrasadas antes de formar un extracto acuoso.
23. 23. El extracto acrecentado en precursores de quimio-protectores de la reivindicación 15, donde el extracto acuoso de semillas o brotes de plantas cruciferas es formado poniendo en contacto semillas o brotes de plantas cruciferas con agua a una temperatura de alrededor de 60 a alrededor de 110 °C por al menos alrededor de 5 minutos .
24. 24. El extracto acrecentado en precursores de quimio-protectores de la reivindicación 15, donde el adsorbente es seleccionado del grupo que consiste en carbón activado, sílice, sílice modificado químicamente, arcilla blanqueadora, y sus mezclas .
25. 25. El extracto acrecentado en precursores de quimio- protectores de la reivindicación 24, donde el adsorbente es carbón activado.
26. 26. El extracto acrecentado en precursores de quimio-protectores de la reivindicación 15, donde se mezcla alrededor de 1 a alrededor de 20% por peso de adsorbente con el extracto acuoso .
27. 27. El extracto acrecentado en precursores de quimio-protectores de la reivindicación 25, donde se mezcla alrededor de 8 a alrededor de 12% por peso de adsorbente con el extracto acuoso .
28. 28. El extracto acrecentado en precursores de quimio-protectores de la reivindicación 15, donde el extracto acuoso es añadido a una columna que contiene adsorbente.
29. 29. El extracto acrecentado en precursores de quimio-protectores de la reivindicación 15, donde el extracto acuoso es secado, enfriado, congelado o secado por congelamiento.
30. 30. El extracto acrecentado en precursores de quimio-protectores de la reivindicación 15, donde el extracto acuoso es ultra-filtrado a través de al menos una membrana de 5,000 MWCO.
31. 31. Un producto alimenticio, que comprende una cantidad efectiva del extracto de la reivindicación 1.
32. 32. El producto alimenticio de la reivindicación 31, donde el producto alimenticio es seleccionado del grupo que consiste en suplementos alimenticios, bebidas, batidos, artículos horneados, tés, sopas, cereales, pildoras, tabletas, ensaladas, emparedados, granólas, aderezos para ensalada, salsas, café, quesos, yogurts, barras de energía y sus mezclas.