MXPA06004487A

MXPA06004487A - Preparacion de particulas de lipido

Info

Publication number: MXPA06004487A
Application number: MXPA/A/2006/004487A
Authority: MX
Inventors: Yuanpeng Zhang
Original assignee: Alza Corporation; Yuanpeng Zhang
Priority date: 2003-10-24
Filing date: 2006-04-21
Publication date: 2007-04-20

Abstract

Un método para preparar partículas de lípido comprendeproducir gotículas discretas del lípido formador de vesículas en un solvente, en donde las gotículas tienen un diámetro y un volumen, introducir las gotículas discretas en una solución acuosa para formar partículas de lípido adecuadas para administración in vivo;la gotícula además puede contener cualquiera de uno o más aceites, tensoactivos, ligandos objetivo, marcadores, o agentes terapéuticos o de diagnóstico;las gotículas se pueden generar a través de un sistema seleccionado de un nebulizador, un atomizador, un generador de vaporización por inyector, un expulsor acústico enfocado, y un dispositivo de electroaspersión;este método puede utilizarse para seleccionar o regular el tamaño y/o distribución de tamaño de las partículas de lípido.

Description

PREPARACIÓN DE PARTÍCULAS DE LIP1DO CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere en general a un método económico, simple para preparar partículas de lípido y partículas para distribuir agentes terapéuticos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Se han utilizado muchos tipos de sistemas de micro y nanopartículas como componentes de partículas de lípido para agentes farmacéuticos. Por ejemplo, liposomas, lipoesferas, emulsomas, niosomas, emulsiones, por nombrar los ejemplos más comunes, son particularmente útiles como partículas de lípido para ambos fármacos pobremente solubles en agua o fármacos hidrofóbicos e hidrofílicos. Estas partículas de lípido tienen el potencial de proveer la liberación controlada del "depósito" de un fármaco administrado durante un período extendido, y de reducir los efectos laterales del fármaco, limitando la concentración del fármaco libre en la corriente sanguínea. El más ampliamente utilizado de estos sistemas de micropartículas es el de liposomas, que existe predominantemente en la forma de vesículas unilaminares individuales (SUVs, generalmente de 20-500 nm en diámetro y que consiste de una sola bícapa de fosfolípidos u otra vesícula que forma lípidos), o vesículas multilaminares (MLVs, hasta varias mieras en diámetro y consisten de múltiples bicapas atrapadas como una cebolla una dentro de la otra). Los liposomas proveen el potencial de distribuir fármacos hidrofóbicos de solvato y aceites, así como fármacos atrapados o ácidos nucleicos dentro del interior acuoso. Estas ventajas de la distribución de fármaco de liposoma se aplican a una variedad de rutas do administración, incluyendo intravenosa, intramuscular, y subcutánea, la aplicación al tejido mucoso, o distribución mediante inhalación. Cuando los liposomas se administran a través de distribución intravenosa, los liposomas proveen una ventaja adicional de alterar la distribución del tejido del fármaco. Se presenta un informe de los sistemas de distribución de fármaco de liposoma por Pozans y y otros (Pharm. Revs., 36 (4): 277) y Gregoriadis (Liposomes, Vol. 111 , 1984). Generalmente, el tamaño del liposoma óptimo para uso en administración parenteral es de entre alrededor de 50 nm a 200 nm. Los liposomas en esta escala de tamaño se pueden dimensionar por medio del paso a través de filtros convencionales que tienen una discriminación del tamaño de partícula de aproximadamente 200 nm. Esta escala de tamaño de liposomas favorece la biodistribución en ciertos órganos objetivo, tales como tejido de tumor, hígado, bazo y médula espinal, y da grados de liberación del fármaco más uniformes y predecibles y estabilidad en la corriente sanguínea. Los liposomas cuyos tamaños son menores de alrededor de 300 nm también muestran menos tendencia a aglutinarse durante el almacenamiento, y de esta forma generalmente son más seguros y menos tóxicos en uso parenteral que los liposomas de tamaño más grande. Los liposomas de tamaño uniforme en un tamaño seleccionado que están en la escala de alrededor de 150 nm también son útiles en muchas aplicaciones terapéuticas. Por ejemplo, debido a su tamaño pequeño, los SUVs son útiles en la activación del tejido de tumor o células de hepatocito, debido a su habilidad para penetrar la cubierta interna endotelial de los vasos capilares. Los SUVs también son ventajosos en las formulaciones de liposoma oftálmicas, debido a la mayor claridad óptica de los liposomas más pequeños. Los liposomas típicamente se hacen a través de la mezcla de lípidos que forman vesículas con un regulador de pH acuoso. Típicamente, se obtiene una distribución heterodispersa de liposomas, que tienen un tamaño predominantemente mayor de alrededor de 1 miera (1 ,000 nm). Estas suspensiones heterodispersas iniciales se pueden reducir en tamaño y la distribución del tamaño se reduce a través de un número de métodos conocidos. Los liposomas típicamente se dimensionan a través de extrusión mediante poros progresivamente más pequeños, a través de sonicación u homogenización, a través de diálisis de detergente, o a través de inyección o evaporación del solvente. Otras partículas de lípido también se hacen utilizando procedimientos similares. Por ejemplo, las lipoesferas, emulsiones, niosomas y emulsomas todas se pueden generar utilizando sonícación. En una forma similar, la Patente de E.U.A. No. 4,622, 219 de Haynes describe un método para hacer una formulación anestésica local a través de la sonicación de micro gotículas de metoxiflurano en solución acuosa, y recubriendo las gotículas de metoxiflurano con una monocapa de moléculas de lípido. Sin embargo, este método no da como resultado una lipoesfera, o partícula de lípido liposómica, y no se explica ninguna formulación liposómica. Un método que procesa un tamaño que es adecuado para la producción a gran escala es la homogenización. Aquí, se bombea bajo alta presión una preparación de liposoma heterodispersa inicial a través de un pequeño orificio o tanque de reacción. La suspensión usualmente se hace circular a través del tanque de reacción hasta que se logra un tamaño promedio deseado de las partículas de liposoma. Una limitación de este método es que la distribución del tamaño de partícula es bastante amplio y variable, dependiendo de un número de procesos variables, tales como presión, el número de ciclos de homogenización, y la temperatura interna.

También, el fluido procesado tiende a recoger los contaminantes de metal y aceite de la bomba del homogenizador, y puede además contaminarse con los agentes químicos residuales utilizados para esterilizar los sellos de la bomba. La sonicación, o irradiación ultrasónica, de dispersiones de lípido, es otro método que se utiliza para reducir los tamaños del liposoma mediante cortes, y es especialmente útil para preparar SUVs. La capacidad de procesamiento de este método es completamente limitada, ya que se requiere sonicación a largo plazo de volúmenes relativamente pequeños. También, la sonicación durante la construcción por calor localizado pueden conducir al daño por oxidación de los lípidos, y las sondas sónicas se libran de las partículas de titanio que con bastante tóxicas in vivo. Otro método conocido en la técnica se basa en la extrusión del liposoma a través de membranas de policarbonato de tamaño de poro uniformes (Szoka, F., y otros, (1978) Proc. Nat. Acad. Sci. (USA) 75:4194). Este procedimiento tiene ventajas sobre los métodos de homogenización y sonicación en que están disponibles varios tamaños de poro de membrana para producir liposomas en diferentes escalas de tamaño seleccionadas. Además, la distribución del tamaño de los liposomas se puede reducir, particularmente haciendo circular el material a través del filtro del tamaño seleccionado varias veces. No obstante, el método de extrusión de membrana tiene limitaciones en el procesamiento a gran escala, incluyendo problemas de saturación de membrana, fragilidad de la membrana, y una producción relativamente lenta. Un método adicional para preparar liposomas se describe en la Patente de E.U.A. de propiedad común No. 4,737, 323. Esta patente describe un método para dimensionar liposomas en el cual los liposomas de tamaño heterogéneo se dimensionan a través de extrusión mediante un filtro de cerámica asimétrico. Este método permite grados de producción mayores, y evita los problemas de saturación ya que se puede emplear la extrusión de alta presión y el flujo en dirección inversa. Además, el método se puede limitar cuando se desean SUVs de tamaño uniforme.

Un método alternativo para preparar liposomas se describe en la Patente de E.U.A. de propiedad común No. 5,000,887, que describe un método para formar liposomas que tienen una distribución de tamaño uniforme de alrededor de 300 nm o menor. De acuerdo con el método descrito en esta patente, los lípidos que forman vesículas se disuelven en un solvente miscible en agua, tal como etanol, y se agrega un medio acuoso en una proporción de agua:solvente en donde primero ocurre el ensamble del lípido. La proporción de agua:solvente entonces se eleva, bajo condiciones que mantienen un volumen de la mezcla substancialmente constante, hasta que se forman los liposomas de tamaño uniforme. El tamaño promedio de los liposomas se puede variar selectivamente cambiando la consistencia iónica y la composición del lípido de la mezcla. Sin embargo, en este método, los liposomas formados de lípidos neutrales tienen una distribución de tamaño en la escala de 300 nm. Con el fin de de formar liposomas más pequeños, se deben incorporar lípidos cargados en los liposomas, o se debe llevar a cabo el dimensionamiento posterior de la formación del liposoma. Adicionalmente, la Publicación PCT No. WO 95/01777 describe un proceso para producir liposomas en donde el tamaño del liposoma final se reporta que se va a determinar a través de la proporción final de etanol en la formulación. El método puede dar como resultado una suspensión de liposoma que contiene grandes cantidades de etanol, lo que requerirá la remoción antes de uso en una formulación farmacéutica. Además, este método no demuestra ser ampliamente aplicable a diferentes tipos de lípidos o para producir liposomas que tienen una distribución de tamaño deseada. Los métodos para formar liposomas se revisan con mayor detalle a través de Y. P. Zhang, y otros., Liposomes in Drug Delivery, in Polymeric Biomaterials, 2a. edición, S. Dumitriu, Ed., Marcel Dekker, Inc., New York (2001). Generalmente, estos métodos proveen tamaños heterogéneos, requieren de mucho trabajo o son costosos o requieren de pasos adicionales para remover el solvente residual, detergente o liposomas grandes. En ninguno de los métodos anteriormente mencionados, hay liposomas u otras partículas de lípido con una distribución de tamaño reducida, controlable y simétrica. Similarmente, ninguno de estos métodos es capaz de producir tamaños reducidos y controlables de lipoesferas o emulsomas. Además, los métodos conocidos en la técnica requieren de numerosos pasos adicionales para preparar partículas de lípido de un tamaño y contenido deseado, tales como los pasos de extrusión, diálisis y similares. La invención se refiere a estas deficiencias en la técnica al proporcionar métodos y dispositivos novedosos para preparar partículas de lípido tales como liposomas, lipoesferas, emulsomas, niosomas y emulsiones.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN En un aspecto, la invención comprender la preparación de partículas de lípido que comprende producir partículas discretas de lípidos que forman vesículas en un solvente. Las gotículas se introducen en una solución acuosa para formar partículas de lípido. En una modalidad preferida, las partículas de lípido son adecuadas para una administración in vivo. En diversas modalidades, las partículas de lípido pueden ser liposomas, lipoesferas, emulsomas, emulsiones, niosomas, nanopartículas y/o microparticulas. En una modalidad, el volumen de gotículas está entre alrededor de 10"4 fl y alrededor de 1 ni. En otra modalidad, el volumen de gotículas está entre alrededor de 10"2 fl y alrededor de 10 pl. El lípido puede ser por lo menos uno de fosfatidil colina de diestearoilo, fosfatidil etanolamina de diestearoilo y fosfatidil colina de soya hidrogenada, o cualquier lípido formador de vesícula adecuado. Se apreciará que el lípido puede incluir una combinación de lípidos formadores de vesícula así como una combinación de lípidos formadores de vesícula y no formadores de vesícula. En modalidades adicionales, el solvente puede incluir al menos uno de un lípido catiónico, un lípido aniónico, o un lípido catiónico neutral. En una modalidad, la concentración de lípido en cada gotícula está entre alrededor de 0.1 mg/ml hasta e incluyendo la cantidad de lípido que es soluble en un solvente particular. En una modalidad adicional, la concentración de lípido en cada gotícula es de entre alrededor de 0.1 mg/ml y alrededor de 1 g/ml. En aún otra modalidad, la concentración de lípido en cada gotícula es de entre alrededor de 1 mg/ml y alrededor de 100 mg/ml. En una modalidad adicional, por lo menos un agente terapéutico está incluido en por lo menos uno del solvente o la solución acuosa. En una modalidad, por lo menos un agente terapéutico está incluido en ambos, el solvente y la solución acuosa. En aún otra modalidad, por lo menos un agente terapéutico está incluido en el solvente y por lo menos un segundo agente terapéutico está incluido en la solución acuosa. En una modalidad, el agente terapéutico es un agente quimioterapéutico, un agente anti-cáncer, o un agente antiviral. En una modalidad específica, el agente terapéutico es un antibiótico de antraciclina. Los antibióticos de antraciclina ilustrativos incluyen daunorubicina, doxorubicina, mitoxantrona, y bisantreno. En una modalidad adicional, el solvente puede incluir uno o más lipopolímeros, ligandos de activación, aceites, tensoactivos, marcadores y excipientes farmacéuticos. En una modalidad, el lipopolímero se selecciona de polivinilpirrolidona, polivinilmetiléter, polimetiloxazolina, polietiloxazolina, polihidroxipropiloxazolina, polihidroxipropilmetacrilamida, polimetacrilamida, polidimetilacrilamida, polihidroxipropilmetacrilato, polihidroxietilacrilato, hidroximetilcelulosa, hidroxietilcelulosa, polietileneglicol, y poliaspartamida. En una de las modalidades preferidas, el lipopolímero es polietilen glicol. En aún otra de las modalidades preferidas, el lipopolímero incluye cadenas de polietilen glicol que tienen un peso molecular de entre alrededor de 500 daltons y alrededor de 10,000 daltons. En otra modalidad, por lo menos un ligandos está ligado al extremo alejado de por lo menos una porción de los lipopolímeros. En aún otra modalidad, por lo menos un ligando está ligado al grupo principal polar de por lo menos una porción de los lípidos formadores de vesícula. Se apreciará que por lo menos una porción de ambos, los lipopolímeros y los lípidos formadores de vesícula pueden incluir un ligando ligado. Además se apreciará que los diferentes ligandos se pueden utilizar para ligarse a los lipopolímeros o los lípidos formadores de vesícula. Cuando no se incluyen lípidos formadores de vesícula en el solvente, por lo menos una porción de los lípidos no formadores de vesícula pueden incluir un ligando ligado. En una modalidad, las gotículas se generan a través de un sistema seleccionado del grupo que consiste de un nebulizador, un atomizador, un generador de vaporización por inyector, un expulsor acústico enfocado, y un dispositivo de electroaspersión. Cuando las gotículas se forman a través de un expulsor acústico, las gotículas se pueden formar aplicando radiación acústica enfocada en el punto focal cerca de la superficie de la solución antes de y/o durante la introducción de las gotículas en la solución acuosa. El expulsor puede incluir una pluralidad de expulsores tal como una pluralidad de gotículas se pueden expulsar de uno o más depósitos. En una modalidad adicional, las gotículas discretas se producen como una vaporización y la vaporización de gotículas se dirige en contacto con la solución acuosa.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 ilustra una vista esquemática de un método para preparar partículas de lípido. La Figura 2 ilustra una vista esquemática de una modalidad en donde se acopla un expulsor acústico enfocado a un depósito de lípido en solvente para introducir las gotículas de lípido/solvente en una solución acuosa. La Figura 3 ilustra una vista esquemática de una modalidad en donde las gotículas de lípído/solvente nebulizadas se introducen en una solución acuosa.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN I. Definiciones e Introducción A menos que se indique lo contrario, la presente invención no está limitada a lípidos específicos, técnicas para la generación de gotículas y/o tecnologías para la introducción de gotículas. Se apreciará que los atomizadores, nebulizadores, dispositivos de expulsión acústica enfocados, o similares, como tales pueden variar. También se deberá entender que la terminología utilizada aquí es para el propósito de describir modalidades particulares solamente y no pretende limitar el alcance de la presente invención.

También se deberá observar que como se utiliza aquí las formas singulares "un, una", "y" y "el, la" incluyen referentes a menos que el contexto claramente dicte lo contrario. De esta forma, por ejemplo, se apreciará que la referencia a "un solvente" incluye dos o más solventes; la referencia a "un agente farmacéutico" ¡ncluye dos o más agentes farmacéuticos, etc. Cuando se proporciona una escala de valores, se deberá entender que cada valor que interviene, hasta la décima parte de la unidad del límite inferior entre el límite superior e inferior, se abarca dentro de la ¡nvención, a menos que el contexto claramente dicte lo contrario. Los límites superior e inferior de estas escalas más pequeñas se pueden incluir independientemente en las escalas más pequeñas, y también se abarcan dentro de la ¡nvención, sujetos a cualquier límite específicamente excluido en la escala definida. Cuando la escala definida incluye uno o ambos límites, las escalas que excluyen cualquiera o ambos de aquellos límites incluidos también se ¡ncluyen en la invención. El término "estructura lipídica" o "partícula de lípido" se utiliza aquí para referirse a la estructura o partículas formadas por lípidos en una solución acuosa como se ejemplifica mediante los liposomas, lipoesferas, emulsomas, niosomas, emulsiones y similares. El término "agente terapéutico" como se utiliza aquí se refiere en general a un agente farmacéutico, terapéutico, o de diagnóstico para la administración a un animal, incluyendo un ser humano. Como se utiliza aquí, los términos "agente terapéutico", "compuesto" y "fármaco" se utilizan de manera intercambiable. El término "substancia hidrofóbica" como se utiliza aquí se refiere generalmente a una substancia que tiene solubilidad en agua por debajo de alrededor de 0.1 mg/ml. Una substancia hidrofóbica no es necesariamente un fármaco, o aún un compuesto en sí, y puede incluir mezclas de substancias, extractos de productos naturales, nanomateriales (por ejemplo, fulerenos, nanotubos de carbono, y nanopartículas de oro), productos industriales, y similares. El término "lípidos antipáticos" se refiere a lípidos que tienen ambas regiones, hidrofóbicas e hidrofílicas, e incluyen lípidos formadores de liposomas así como moléculas tensioactivas tales como Iisolípidos que tienen solamente una cadena de hidrocarburo como se ejemplifica a través de lisofosfatidilcolina. "Lípidos formadores de vesícula" se refieren a lípidos antipáticos que tienen porciones hidrofóbicas y de grupo principal polar, y que se pueden formar espontáneamente dentro de las vesículas de bicapas en agua, como se ejemplifica medíante los fosfolípidos, o se incorporan establemente en bicapas de lípido, con la porción hidrofóbica en contacto con el interior, la región hidrofóbica de la membrana bicapa, y la porción del grupo principal polar orientada hacia el exterior, la superficie polar de la membrana. Los lípidos formadores de vesícula de este tipo típicamente ¡ncluyen una o dos cadenas de hidrocarburo de acilo hidrofóbico o un grupo esteroide, y pueden contener un grupo químicamente activo, tal como un grupo amina, ácido, éster, aldehido o alcohol, en el grupo principal polar. Incluidos en esta clase están los fosfolípidos, tales como fosfatidil colina (PC), fosfatidil etanolamina (PE), ácido fosfatídico (PA), fosfatidil inositol (Pl), y esfingomielina (SM), en donde las dos cadenas de hidrocarburos están típicamente son de alrededor de 14-22 átomos de carbono en longitud, y tienen grados variables de no saturación. También se incluyen dentro del alcance del término "lípidos formadores de vesícula" los glicolípidos, tales como cerebrósidas y gangliósidas. Como se utiliza aquí, el término "distribución de tamaño" o "distribución de tamaño de partícula" se refiere al porcentaje relativo por el número de cada una de las fracciones de diferente tamaño de las partículas de lípido. Para propósitos de la invención, no se hace distinción entre los términos "nebulizador" y "atomizador" y estos términos se utilizan de manera intercambiable. Como se utiliza aquí, el término "diagnóstico" incluye pruebas de diagnóstico para aplicaciones in vivo, in vitro o ex vivo en pacientes seres humanos y no seres humanos, así como aplicaciones formadoras de imágenes en medicina u otros campos. Abreviaturas: PEG: polietilen glicol; mPEG: polietilen glicol terminado con metoxi; mPEG2000-DSPE: polietilen glicol terminado con metoxi conjugado con fosfatidiletanolamina; Chol: colesterol; PC: fosfatidilcolina; PHPC: fosfatidilcolina parcialmente hidrogenada: PHEPC: fosfatidilcolina de huevo parcialmente hidrogenada; PHSPC: fosfatidilcolina de soya parcialmente hidrogenada; DSPE: fosfatidiletanolamina de diestearoilo; POPC: fosfatidilcolina oleosa de palmitoilo; HSPC: fosfatidilcolina de soya hidrogenada.

II. Partículas de Lípido En un aspecto, la invención incluye un método para formar partículas de lípido que tienen una distribución de tamaño uniforme y/o seleccionado. Las partículas de lípido son las estructuras o partículas formadas por la introducción de lípidos en una solución acuosa. Las partículas de lípido que se pueden formar utilizando los métodos descritos aquí ¡ncluyen liposomas; lipoesferas; emulsomas; emulsiones; niosomas; y nanopartículas y micropartículas. Las formulaciones de las partículas de lípido pueden incluir una amplia variedad de lípidos antipáticos, aceites, tensoactivos, marcadores, ligandos de activación, lipopolímeros, solventes y similares. Estos componentes se explican más adelante. Como se explicó anteriormente, las partículas de lípido encuentran uso particularmente en formulaciones para la distribución de agentes terapéuticos o distribución de fármacos. La distribución de fármacos utilizando partículas de lípido es particularmente útil para incrementar la biodisponibilidad, disminuir la toxicidad, proveer capacidades tales como activación, proporcionar o mejorar la cautela para evadir las defensas naturales del cuerpo como se ejemplifica a través de la aplicación mediante el sistema endotelial reticular (RES), mejorar la infiltración de tejido o celular, proveer una liberación controlada del fármaco, o funciones combinadas de cualquiera de las anteriores. Los liposomas son vesículas compuestas de una o más bicapas de lípido concéntricas que contienen un volumen acuoso atrapado. La bicapa se compone de dos monocapas de lípido que tienen una región "de cola" hidrofóbica, en y una región "de cabeza" hidrofílica, en donde las regiones hidrofóbicas se orientan hacia el centro de la bicapa y las regiones hidrofílicas se orientan hacia la fase acuosa interna o externa Los liposomas generalmente están agrupados por tamaño y/o si son unilaminares o multilaminares (MLVs). Las vesículas unilaminares pequeñas (SUVs) son de generalmente 20-500 nm en diámetro. Generalmente los liposomas más grandes forman MLVs, mientras que los liposomas más pequeños son unilaminares, sin embargo, se apreciará que los liposomas más grandes pueden ser unilaminares y los liposomas más pequeños pueden ser multilaminares. En una modalidad preferida, los liposomas son SUVs o MLVs. Las lipoesferas son generalmente estructuras esféricas o casi esféricas formadas por una sola capa molecular de moléculas de lípidos organizadas alrededor de un núcleo oleoso o una gotícula de aceite. Las lípoesferas proporcionan un ambiente hidrofóbico para que las substancias hidrofóbicas sean secuestradas lejos del contacto con la fase acuosa. Las emulsomas consisten de un núcleo hidrofóbico, tal como aceite, rodeado por una o más bicapas de lípido. Esta construcción permite la creación de partículas estables, muy pequeñas. Las niosomas son estructuras similares a los liposomas, en donde las niosomas incluyen moléculas tensioactivas, además de o en lugar de las moléculas de lípido. Las emulsiones son versiones macroscópicas de lipoesferas y emulsomas, con un núcleo interno de ya sea aceite en agua o agua en aceite. Específicamente, las emulsiones son una mezcla de lípidos y por lo menos un líquido acuoso en el cual los lípidos están presentes como gotículas de tamaño microscópico o ultramicroscópico en todo el líquido. Las gotículas de lípidos se pueden formar en una bicapa que rodea un núcleo acuoso como en liposomas o en una capa de lípido individual que rodea un núcleo oleoso como para las lipoesferas. El tamaño de las partículas de lípido puede estar en una amplia escala de tamaño, tienen un diámetro de alrededor de 20 nm a alrededor de 100 nm. En modalidades preferidas, las partículas de lípido tienen un diámetro de aproximadamente 80 nm a aproximadamente 200 nm. Se apreciará que el tamaño de la partícula de lípido se puede seleccionar de acuerdo con la ruta de distribución. Para distribución intravenosa, las partículas de lípido tienen un tamaño de aproximadamente 80 nm a aproximadamente 200 nm, preferiblemente de 100 nm aproximadamente175 nm, más preferiblemente de alrededor de 90 nm a alrededor de 150 nm. Para la distribución mediante inhalación, las partículas de lípido generalmente están aerolizadas o nebulizadas en donde el tamaño de partícula es de alrededor de 1 µm a alrededor de 7 µm. Para una rápida absorción del fármaco a través de las membranas alveolares, las partículas de lípido generalmente tienen un tamaño de alrededor de 10 nm a alrededor de 100 nm. Para la distribución subcutánea, las partículas de lípido tienen un tamaño de aproximadamente 100 nm a aproximadamente 250 nm.

A. Lípidos Los lípidos incluidos en las formulaciones de lípido de la presente invención son generalmente lípidos formadores de vesículas. Los lípidos formadores de vesículas son preferiblemente aquellos que tienen dos cadenas de hidrocarburos, típicamente cadenas de acilo, y un grupo principal polar. Se incluyen en esta clase los fosfolípidos, tales como fosfatidilcolina(PC), PE, ácido fosfatídico (PA), fosfatidilinositol (Pl), y esfingomielina (SM), en donde las dos cadenas de hidrocarburos son típicamente de entre alrededor de 14-22 átomos de carbono en longitud, y tiene grados variables de no saturación. También se incluyen en esta clase los glicolípidos, tales como cerebrósidas y gangliósidas. Un lípido formador de vesícula preferido es un fosfolípido. Otro lípido formador de vesícula que se pueden emplear ¡ncluye colesterol, derivados de colesterol, tal como sulfato de colesterol y hemisuccinato de colesterol, y esteróles relacionados. Más generalmente, el término "lípido formador de vesícula" pretende incluir cualquier lípido antipático que tiene porciones hidrofóbicas y de grupo principal polar, y el cual (a) por sí mismo puede formar espontáneamente vesículas bicapa en un medio acuoso, como se ejemplifica a través de los fosfolípidos, o (b) se incorpora establemente en una bicapa de lípido en combinación con fosfolípidos, con su porción hidrofóbica en contacto con el interior, la región hidrofóbica de la membrana bicapa y su porción del grupo principal polar orientada hacia el exterior, la superficie polar de la membrana. En algunas instancias, puede ser deseable incluir lípidos que tienen cadenas de hidrocarburo ramificadas. Las mezclas de lípidos, tales como fosfatidilcolina de huevo o soya, que tiene una composición de cadena de acilo variable, se pueden utilizar en su estado parcialmente hidrogenado o estado natural. En el Ejemplo 1 , se utilizó la fosfatidilcolina de soya parcialmente hidrogenada (PHSPC). En una modalidad preferida, el lípido formador de vesícula se selecciona de uno o más de fosfatidil colina de diestearoilo (DSPC), fosfatidil etanolamina de diestearoilo (DSPE), y fosfatidil colina de soya hidrogenada (HSPC). En otras modalidades, las partículas de lípido además pueden incluir lípidos catiónicos neutrales como se describe en la Publicación de Patente de E.U.A. de propiedad común No. 20030031704A1, así como lípidos catiónicos tales como bromuros de dialquil dimetil amonio (por ejemplo, bromuro de dimetildioctacilamonio (DDAB)) y 1,2-dioleil-3-trimetilamon¡o-propano de dialquil trimetilamonio (DOTAP). Se explican otros numerosos ejemplos de lípidos catiónicos en la revisión de Y. P. Zhang, y otros (Liposomes in Drug Delivery, in Polymeric Bíomaterials, 2a. edición, S. Dumitriu, Ed., Marcel Dekker, Inc., New York (2001 )). Los lípidos aniónicos incluyen, sin limitación, la fosfatidilserina comúnmente utilizada, fosfatidilinositol y ácido fosfatídico, así como gangliósidas tales como GM1 , y similares. Los lípidos de la ¡nvención se pueden preparar utilizando métodos sintéticos estándares. Los lípidos de la invención además están comercialmente disponibles (Avanti Polar Lipids, Inc., Birmingham, AL). Se apreciará que las partículas de lípido pueden incluir uno o más tipos diferentes de lípidos. En una modalidad, las partículas de lípido pueden incluir dos o más tipos diferentes de lípidos antipáticos y uno o más lípidos no antipáticos. En una modalidad que incluye dos o más tipos diferentes de lípidos, los lípidos se mezclan de tal forma que las partículas de lípido se pueden preparar utilizando una amplia variedad de lípidos presentes en varias fracciones de moles. Por ejemplo, los liposomas son comúnmente preparados de mezcla de PE, PC y colesterol, así como lipopolímeros, explicados más adelante.

B. Agentes Terapéuticos Una modalidad preferida de los vehículos para distribución de la presente son como una partícula de lípido para la distribución de agentes terapéuticos o de diagnóstico a pacientes seres humanos. Se incluyen los agentes farmacéuticos, terapéuticos o de diagnóstico para la administración a un ser humano o un animal, aunque se pueden contemplar fácilmente otros usos. También se incluyen profármacos que se pueden convertir después de la administración en una forma activa. Los agentes terapéuticos que se pueden utilizar en las formulaciones de la presente incluyen fármacos hidrofílicos (es decir, que tienen solubilidad en agua a temperatura ambiente (25°C) de mas de 0.01% (es decir, 0.1 mg/ml)) y fármacos hidrofóbicos (es decir, que tienen una solubilidad en agua a temperatura ambiente(25°C) de menos de 0.01%). Los agentes terapéuticos típicamente están atrapados en la capa del lípido de la partícula del lípido. Por "atrapado" significa un agente que terapéutico está atrapado en el compartimiento central del liposoma y/o los espacios de la capa del lípido, está asociado con la superficie del lípido externa, o está tanto atrapado internamente como externamente asociado con las partículas de lípido. El agente terapéutico puede ser hidrofílica, hidrofóbico o antipático. Las moléculas hidrofílicas típicamente están atrapadas dentro del compartimiento acuoso de la partícula de lípido para liposomas o niosomas, en asociación con la superficie de liposomas, niosomas, o emulsomas, o en el espacio intrabicapa acuoso de los liposomas. Las moléculas hidrofóbicas típicamente están localizadas en la capa del lípido, o en el núcleo de aceite, cuando está presente. Las moléculas antipáticas por lo general se localizan en la interfase de lípido/acuosa. En algunas instancias, las substancias hidrofílicas en la solución acuosa se pueden asociar con la superficie de la partícula de lípido, tal como a través de la atracción hidrofóbica o electroestática. Por ejemplo, los compuestos polianiónicos se asociarán con cargas de superficie catiónicas, o los compuestos policatiónicos se asociarán con las cargas de la superficie aniónica de las partículas de lípido, u otros compuestos interactuarán favorablemente con la capa interfacial mediante los grupos principales presentes en la interfase entre las fases de lípido y acuosa. Los fármacos hidrofóbicos ilustrativos incluyen, sin limitación, esteroides, briostatina-1 , cefalomanina, cisplatina, plicamicina, resveratrol, camptotecinas tales como topotecan, e ¡rinotecan; anestésicos locales tales como lidocaina o bupivicaina, antibióticos de antraciclina tales como daunorubicina, doxorubicina e idarubicina; epipodofilotoxinas tales como etoposida y teniposida; taxanos tales como paclitaxel y docetaxel; agentes antifúngicos, incluyendo, pero no limitándose a, los agentes antifúngicos de polieno tales como anfotericinas, partricinas, nistatina; y análogos y derivados de todos los anteriores. Como se definió anteriormente, los agentes terapéuticos pueden ser un profármaco. Los profármacos incluyen, sin limitación, fluoropirimidina y análogos de citidina, tales como gemcitabina, capecitabina, 5-fluorocitosina, 5'-deoxi-5-fluorouridina; etoposidas activadas tales como el derivado de etoposida carbamato de 3,4-dihidroxifenilo, VP-16, ProVP-161 y 11; ciclofosfamida, irinotecan, mitomicina C, AQ4N, ganglicovir, cinasa de timidina simple de Herpes, dinitrobenzamida, CMDA o ZP2767P con carboxipeptidasas de aeruginosa de Pseudomonas, G (2) ácido indol-3-acético activado a través de peroxidasas de rábano picante, profármacos de camptotecina, tales como glucuronida de 9-aminocamptotecina, y el portador de polímero soluble enlazado a camptotecina (MAG-camptotecina; CB1954 activada por nitroreductasa de E. coli; y tributirina. En algunas modalidades, el agente terapéutico incluye ácidos nucleicos (por ejemplo, ADN, ARN, , ribozimas, ARN antisentido, ARNsi, vectores, genes, fragmentos genómicos, ácidos nucleicos que comprenden nucleótidos modificados o enlaces modificados), que pueden estar atrapados sobre la formación de liposomas o asociados con una partícula de lípido que lleva una carga de superficie positiva, tal como provista a través de la inclusión de tensoactivocatiónicos o lípidos catiónicos en la formulación. En otras modalidades, el agente terapéutico es un fármaco citotóxico. En aún otra modalidad, el agente terapéutico es una vacuna. En otra modalidad, los péptidos, sacáridos, u otros antígenos, están covalentemente ligados a los lípidos o lipopolímeros, explicado más adelante, de las partículas de lípido. Dichas partículas de lípido son efectivas como auxiliares para mejorar las respuestas inmunogénicas a los antígenos expuestos en la superficie de las partículas de lípido. Un experto en la técnica apreciará que las partículas de lípido y los métodos para prepararlas descritos aquí no están restringidos a agentes farmacéuticos. De esta forma las partículas de lípido descritas aquí son útiles en formulaciones para horticultura, tales como fertilizantes, pesticidas, reguladores o inhibidores del crecimiento de plantas u hongos; biotecnología, tales como agentes para la transfección del gen, vectores y marcadores (por ejemplo, fluoróforos, radio rastreadores, colorantes, enzimas); en medicina para aplicaciones tales como terapéuticos, diagnósticos y formadores de imágenes; en nanotecnología tales como para manejar y distribuir nanotubos o nanoesferas, fulerenos, puntos cuánticos, etc.; para aplicaciones industriales tales como la fabricación de películas delgadas o polimerización dentro de las emulsiones; en cosméticos y cosmecéuticos, tales como la formulación de aceites y esencias, o agentes para el cuidado de la piel; como nutricéuticos para formular vitaminas y extractos de plantas u hongos, y similares.

O Lipopolímeros En una modalidad, las partículas de lípido incluyen al menos un lipopolímero, un lípido derivatizado con un polímero, preferiblemente el lípido formador de vesícula derivatizado con un polímero hidrofílico. La preparación de los lípidos formadores de vesículas derivatizados con polímeros hidrofílicos se ha descrito, por ejemplo, en la Patente de E.U.A. No. 5,213, 804. En una modalidad, entre 1-20 por ciento de moles del lípido formador de vesículas en la capa del lípido se derivatizan con un polímero hidrofílico. Los polímeros hidrofílicos ilustrativos ¡ncluyen polietileneglicol, polivinilpirrolidona, polivinilmetiléter, polimetiloxazolina, polietiloxazolina, polihidroxipropiloxazolina, polihidroxipropil-metacrilamida, polimetacrilamida, polidimetil-acrilamida, polihidroxipropilmetacrilato, polihidroxietilacrilato, hidroximetilcelulosa, hidroxietilcelulosa, polietilenglicol, poliaspartamida, copolímeros polietilenóxido-óxido de polipropileno, copolímeros de los polímeros anteriormente mencionados, y mezclas de los mismos. Las propiedades y reacciones con muchos de estos polímeros se describen en las Patentes de E.U.A. Nos. 5,395,619 y 5,631 , 018. Otros polímeros que pueden ser adecuados incluyen ácido poliláctico, ácido poliglicólico, y copolímeros de los mismos, así como celulosas derivatizadas tales como hidroximetilcelulosa o hidroxietilcelulosa. Adicionalmente, los copolímeros de bloque o copolímeros aleatorios de estos polímeros, particularmente incluyendo segmentos PEG, pueden ser adecuados, como se describe en las Patentes de E.U.A. Nos. 5,395,619 y 5,631 , 018. Los métodos para preparar lípidos derivatizados con polímeros hidrofílicos, tales como PEG, son bien conocidos, por ejemplo, como se describe en la Patente de E.U.A. de propiedad común No. 5,013, 556. Una cadena de polímero hidrofílico preferido es polietilenglicol (PEG), preferiblemente una cadena PEG que tiene un peso molecular entre 500-15,000 daltons, más preferiblemente entre 1 ,000 y 5,000 daltons. Los análogos cubiertos con metoxi o etoxi de PEG también son polímeros hidrofílicos preferidos, comercialmente disponibles en una variedad de tamaños de polímeros, por ejemplo, 120-20,000 daltons. Los polímeros hidrofílicas adicionales incluyen polisacáridos, tales como aquellos descritos en la Publicación de Solicitud de Patente de E.U.A. No. 2003/0133972 para Danthi. Dichos polisacáridos incluyen, pero no se limitan a, dextranos, glucanos, mananos, glicógeno, celulosa, almidón, así como otros homo- y heteropolímeros, y similares. Como se ha descrito, por ejemplo en la Patente de E.U.A. No. 5,213, 804, incluyendo dicho lípido derivatizado en una formulación de lípido forma una capa de superficie de cadenas de polímero hidrofílico alrededor de la partícula de lípido. Para los liposomas, la capa de superficie de cadenas de polímero hidrofílico ha demostrado ser efectiva para aumentar la vida útil de la circulación de la sangre in vivo de los liposomas cuando se compara con los liposomas que carecen de dicha capa. Adicionalmente, cuando se incluye dicho lípido derivatizado se ofrece una mayor flexibilidad en la modulación de las interacciones de la superficie liposómica con células objetivo (confiriendo capacidades de cautela) y con el RES (Miller y otros., (1998) Biochemistry, 37:12875-12883). Las ceramidas sintéticas substituidas con PEG se han utilizado como componentes no cargados de liposomas estéricamente cargados (Webb y otros., (1998) Biochim. Biophys. Acta, 1372: 272-282); sin embargo, estas moléculas son complejas y costosas para prepararse, y generalmente no se empacan dentro de la bicapa de fosfolípido así como glicerolfosfolípidos de diacilo. Los lipopolímeros incluyendo un enlace neutral en lugar del enlace de fosfato cargado de fosfolípidos PEG también se pueden utilizar, como se describe en la Patente de E.U.A. de propiedad común No. 6,586,001.

El enlace neutral típicamente se selecciona de un carbamato, un éster, una amida, un carbonato, una urea, una amina, y un éter. Los enlaces hidrolizables o por el contrario divisibles, tales como disulfuros, hidrazonas, péptidos, carbonatos, y esteres, son preferidos en aplicaciones en donde se desea remover las cadenas de PEG después de un tiempo de circulación dado in vivo. Un enlace liberable preferido es un enlace de ditiobencilo, descrito en la Publicación de Patente de E.U.A. co-pendiente No. 20030031704A1. Esta características puede ser útil en la liberación del fármaco o para facilitar la aplicación en células después de que el liposoma ha logrado su objetivo (Martin y otros., Patente de E.U.A. No. 5,891 ,468, y Publicación PCT No. WO 98/18813 (1998)) o en la anulación temporal de un ligando objetivo, explicado más adelante.

D. Ligandos Objetivo Las partículas de lípido opcionalmente pueden incluir grupos de superficie, tales como anticuerpos o fragmentos de anticuerpo, moléculas productoras pequeñas para interactuar con receptores de superficie de célula, antígenos, y otros compuestos similares, para lograr las propiedades de enlace objetivo para poblaciones de células específicas. Dichos ligandos se pueden incluir en las partículas de lípido mediante la inclusión de un lípido derivatizado con la molécula objetivo, o a través de la inclusión de un lípido que tiene un grupo químico principal polar que se puede derivatizar con la molécula objetivo. Alternativamente, una porción objetivo se pueden insertar dentro de las partículas de lípido después de la formación a través de la incubación de las partículas de lípido con un conjugado de ligando-polímero-lípido. Los lípidos se pueden derivatizar con el ligandos objetivo enlazando covalentemente el ligando con el extremo distante libre de una cadena de polímero hidrofílico, que cual está enlazado en su extremo próximo con el lípido formador de vesícula, e incorporando el ligando objetivo dentro de los liposomas (Zalipsky, S., (1997) Bioconjugate Chem., 8 (2):111-118). Alternativamente, el ligando objetivo se puede derivatizar a un lípido (por ejemplo, fosfatidiletanolamina) directamente o a través de un grupo de enlace, por lo tanto permaneciendo oculto hasta la remoción de las cadenas de polímero hidrofílico. Por supuesto, un experto en la técnica apreciará que puede ser deseable algunas veces incorporar el ligando objetivo dentro de la partícula de lípido sin la presencia del lipopolímero. Existe una amplia variedad de técnicas para enlazar un polímero hidrofílico seleccionado a un lípido seleccionado y activar el extremo no enlazado, libre del polímero para la reacción con un ligando seleccionado, y en particular, el polietilenglicol de polímero hidrofílico (PEG) ha sido ampliamente estudiado (Zalipsky, S., (1997) Bioconjugate Chem., 8(2):111-118; Alien, T. M., y otros, (1995) Biochemicia et Biophysica Acta 1237: 99-108; Zalipsky, S., (1993) Bioconjugate Chem., 4(4): 296- 299; Zalipsky, S., y otros., (1994) FEBS Lett. 353:71-74; Zalipsky, S., y otros., (1995) Bioconjugate Chemistry, 705-708; Zalipsky, S., in STEALTHLIPOSOMES (D. Lasic y F.

Martin, Eds.) Capítulo 9, CRC Press, Boca Ratón, FL (1995)). Como se describe además en la sección del método siguiente, los ligandos objetivo pueden estar presentes en un solvente incluyendo los lípidos. Alternativamente, el ligando objetivo se puede agregar al liposoma u otra partícula de lípido después de la formación de la partícula de lípido, especialmente para ligandos objetivo que pueden dañarse a través de la exposición al solvente (Zalipsky, S., (1997) Bioconjugate Chem., 8 (2):111-118).

E. Aceites Como se indicó anteriormente, las partículas de lípido se pueden formar para tener un núcleo interno de aceite. Particularmente, el aceite constituye el componente de hidrocarburo de lipoesferas, emulsomas y emulsiones. Los aceites adecuados para uso en las partículas de lípido incluyen, sin limitación, triglicéridos, tales como trioleina, trilinoleina, tricaprina, trinervonina, trinonadecanoina, trimiristina, trinonanoina, diglicéridos, tales como, 1 ,3-diestearina, 1 ,3- dipalmitina, monoglicéridos, tales como monooleina, y ácido grasos, tales como ácido esteárico, ácido oleico, o ácido araquidónico, de origen animal o de plana; aceites sintéticos; aceites semisintéticos; o hidrocarburos. Los aceites también pueden incluir aceites de silicio, tales como los que se describen en la Patente de E.U.A. No. 5,688,897 de Malick. Los ejemplos de aceites de silicio incluyen polimetioldifenil siloxano, tales como GE Silicona SF 1154 (General Electric, Waterford, NY) o fluorosiliconas PS 181 y PS 182. En una modalidad, el aceite por sí mismo puede ser un agente terapéutico o de diagnóstico. Se apreciará que la proporción de aceites y lípidos generalmente es mayor para lipoesferas, emulsomas y emulsiones. Generalmente, un cuarto o más de la formulación total puede ser aceite de estas partículas de lípido. Para lipoesferas, generalmente hasta 2/3 de la formulación total pueden ser aceite, y para emulsomas generalmente alrededor de 1/3 de la formulación total puede ser aceite.

F. Tensoactivos En una modalidad, un tensoactivo puede incluirse en las partículas de lípido descritas aquí. Los tensoactivos ¡ncluyen tensoactivos ¡ónicos (que poseen por lo menos una porción ionizada) y tensoactivos no iónicos (que no tienen grupos ionizados). Los tensoactivos iónicos incluyen, sin limitación, tensoactivos aniónicos, tales como ácidos grasos y sales de ácidos grasos (por ejemplo, lauril sulfato de sodio); ácidos de esterol y sales de los mismos (por ejemplo, colato y desoxicolato); tensoactivos catiónicos, tales como bromuros de tri-metil alquilo, y etil amonio (por ejemplo, bromuro de cetil trietil amonio (CTAB y C16TAB); tensoactivos anfotéricos, tales como lisolípidos (por ejemplo, lisofosfatidilcolina o fosfatidiletanolamina), y CHAPS; detergentes zwiteriónicos, tales como el gen zwiteriónico 3-14. En otra modalidad, los tensoactivos no iónicos se incluyen en las partículas de lípido. Los tensoactivos no iónicos son particularmente útiles en la generación de niosomas, emulsomas y emulsiones. Los tensoactivos no iónicos incluyen, sin limitación, alcoholes grasos, es decir, alcoholes que tienen la fórmula estructural CH3(CH2)nC(H)OH (por ejemplo, en donde n es por lo menos 6), tales como los alcoholes laurílico, cetílico y estearílico; azúcares grasos, tales como octil glucosida y digitonina; Lubroles, tal como Lubrol® PX; Tritones, tal como TRITÓN® X-100; Nonidentes, tal como Nonident P-40; esteres de acido graso de sorbitán (tales como aquellos vendidos para el nombre comercial de SPAN®), esteres de ácido graso de sorbitán de polioxietileno (tales como aquellos vendidos bajo el nombre comercial de TWEEN®), esteres de ácido graso de polioxietileno (tales como aquellos vendidos para el nombre comercial de MYRJ®), esteres esferoidales de polioxietileno, esteres de ácido graso de sorbitán de polioxipropileno, esteres de ácido graso de polioxipropileno, esteres de ácido esferoidal de polioxipropileno, éteres de polioxietileno (tales como aquellos vendidos bajo el nombre comercial de BRIJ®), éteres de poliglicol (tales como aquellos vendidos bajo el nombre comercial de TERGITOL®), y similares. Los tensoactivos no iónicos preferidos para uso como tensoactívos aquí son éteres de poliglicol, triolato de sorbitán de polioxietileno, monopalmitato de sorbitán, polisorbato 80, 4-lauril éter de polioxietileno, propilen glicol, y mezcla de los mismos. Los tensoactivos aniónicos que se pueden utilizar como el agente de solubillzación ¡ncluyen sulfonatos, carboxilatos y sulfatos de alquilo cadena larga, así como sulfonatos de alquil arilo, y similares. Los tensoactivos aniónicos preferidos son dodecil sulfato de sodio, sulfosuccinato sódico de dialquilo (por ejemplo, bis-(2-etilhexil)-sulfosuccinato) de sodio, 7-etil-2-metil-4-dodecil sulfato de sodio y dodecilbencen sulfonato de sodio. Los tensoactivos catiónicos que se pueden utilizar para solubilizar el agente activo son generalmente aminas de cadena larga y sales de amonio cuaternario, por ejemplo, bromuro de deciltrimetilamonio, bromuro de dodeciltrimetilamonio, bromuro de tetradeciltrimetilamonio, cloruro de tetradeciltrimetilamonio, y similares. Los tensoactivos anfotéricos son generalmente, aunque no necesariamente, compuestos que incluyen un grupo carboxilato o fosfato como el anión y una porción de amino o de amonio cuaternario como el catión. Estos ¡ncluyen, por ejemplo, varios polipéptidos, proteínas, alquil betainas, y fosfolípidos naturales tales como lisolecitinas y lisocefalinas. En una modalidad preferida el tensoactivo está presente en la escala de aproximadamente 1 a 50 por ciento en moles con relación a la cantidad de lípido en las partículas, y más preferiblemente en la escala de aproximadamente 1 a 25 por ciento en moles. La cantidad máxima de tensoactivo depende de la composición del tensoactivo y del lípido, y preferiblemente el tensoactivo no está presente en una cantidad que desestabiliza la estructura de la partícula de lípido. Un experto apreciará que el tensoactivo puede estar presente a fracciones de moles más altas o más bajas para los propósitos deseados. Cuando las partículas de lípido descritas aquí se van a utilizar en la administración de agentes farmacéuticos, los tensoactivos deberán seleccionarse de acuerdo con la aceptabilidad farmacéutica. Por ejemplo, en la construcción de un niosoma para la administración sistémica de un agente farmacéutico a un paciente ser humano, un tensoactivo no iónico tal como TWEEN 80 sería apropiado. Se apreciará que un experto en la técnica toma en cuenta los requerimientos de la formulación para pacientes seres humanos y animales, y entiende que los tensoactivos que son apropiados pueden variar dependiendo del uso.

G. Marcadores Los marcadores también se pueden incluir en las partículas de lípido de la invención. Los marcadores acuosos, tales como colorantes, rastreadores radioactivos, y similares, preferiblemente están presentes en la solución acuosa durante la formación de las partículas de lípido, explicadas más adelante.

H. Administración Las partículas de lípido de la invención se pueden administrar al paciente a través de una variedad de diferentes medios dependiendo de la aplicación prevista. Como reconocerá un experto en la técnica, la administración de las partículas de lípido se puede llevar a cabo en varias formas, por ejemplo, a través de administración tópica, incluyendo, pero no limitándose a, dérmica, ocular y rectal; transdérmica, a través de medios pasivos o activos, por ejemplo, utilizando un parche, un portador, o iontoforesis; a través de la mucosa, por ejemplo sublingual, bucal, rectal, vaginal o transuretral; oral, por ejemplo, gástrica o duodenal; inyección parenteral en una cavidad o vaso del cuerpo, por ejemplo, intraperitoneal, intravenosa, intralinfática, intratumoral, intramuscular, ¡ntraarticular; a través de inhalación, por ejemplo, inhalación pulmonar o nasal, utilizando por ejemplo, un nebulizador. Preferiblemente, las partículas de lípido se administran parenteralmente o intratumoralmente. Cuando se desea la administración sistémica, las partículas de Iípido deberán tener un tamaño lo suficientemente pequeño para circular dentro de la red capilar sin ocluir ningún vaso. Preferiblemente, dichas partículas de lípido están entre alrededor de 20 nm y 500 nm de diámetro, más preferiblemente de 80-200 nm. Para la administración a tejidos intersticiales, la partícula de lípido deberá ser lo suficientemente pequeña para penetrar los tejidos endoteliales (por ejemplo, tener diámetros menores de alrededor de 100 nm). lll. Método para Formar Partículas de Lípido En un aspecto, la ¡nvención provee un método para preparar partículas de lípido, incluyendo liposomas, lipoesferas, emulsomas, niosomas, emulsiones, y similares, que comprender introducir una gotícula discreta que comprende el lípido formador de vesículas en un solvente en una solución acuosa. Las partículas de lípido explicadas aquí más adelante son liposomas, sin embargo, se apreciará que la explicación se aplica a otras partículas de lípido. Sin estar limitado por teoría, se cree que el tamaño de los liposomas y otras partículas de lípido formadas es principalmente controlado por el tamaño de las gotículas y la cantidad de lípido en cada gotícula, así como por el solvente, el tensoactivo y el aceite, si está presente, la concentración del lípido en el solvente, las condiciones acuosas, la velocidad de la generación de la gotícula, y la velocidad en la que el solvente se dispersa en la solución acuosa. Además se cree que la distribución del tamaño de los liposomas u otras partículas de lípido principalmente se controla por la distribución de las gotículas. Por ejemplo, las gotículas que son similares en tamaño, la concentración del lípido, etc., producirán una distribución de tamaño substancialmente uniforme o similar para los liposomas. Una ventaja de los métodos descritos aquí es que la necesidad de pasos para dimensionamiento adicionales o diálisis se minimizan o se obvian, dando con resultado ahorros en tiempo y costo en la fabricación. En una modalidad preferida, los liposomas se pueden utilizar para aplicación in vivo sin ningún procesamiento adicional tal como dimensionamiento. Los métodos descritos aquí también se pueden utilizar en conjunción con extrusión, sonicación, u otros métodos de la técnica anterior para formar partículas de lípido. La Figura 1 describe una modalidad del sistema para formar partículas de lípido 16 utilizando un sistema para la generación de gotículas 10. Como se ve en la Figura 1, las partículas de lípido 16 se forman a través de la introducción de una gotícula 12 de una solución que comprende lípidos en un solvente del sistema para la generación de gotículas 10 en un recipiente de recolección 14 que contiene una solución acuosa 20. Los lípidos formadores de vesículas descritos anteriormente se disuelven en un solvente adecuado. Los solventes que se pueden utilizar en los métodos presentes incluyen cualquier solvente en donde los lípidos son suficientemente solubles para lograr una concentración mínima de alrededor de 1 mM. La concentración de lípido en el solvente es de alrededor de 0.1 mg/ml para la cantidad máxima del lípido soluble en el solvente. Se apreciará que este límite superior se determina a través de la solubilidad del lípido en el solvente. En una modalidad preferida, la concentración de lípido en el solvente es de entre alrededor de 0.1 mg/ml y alrededor de 1 g/ml. preferiblemente, la concentración de lípido en el solvente está entre alrededor de 1 mg/ml y alrededor de 100 mg/ml. En la introducción de las gotículas de solvente y lípido en el depósito acuoso 14, el solvente preferido se disipa en la fase acuosa de volumen o se evapora, permitiendo que los lípidos y otros componentes se asocien para formar la partículas de lípido en la fase acuosa. El solvente puede ser miscible en agua o no miscible en agua, dependiendo de las características particulares de la formulación de lípido, los requerimientos de solubilidad del agente terapéutico, y la partícula de lípido deseada. Los solventes orgánicos adecuados incluyen, sin limitación, hidrocarburos, incluyendo alcanos alifáticos tales como hexano, heptano, octano, etc., alcanos cíclicos tales como ciciohexano, T hidrocarburos aromáticos tales como benceno, eumeno, pseduocumeno, cimeno, estireno, tolueno, xilenos, tetrahidronaftaleno y mesitileno; hidrocaburos halogenados tales como tetracloruro de carbono, cloroformo, bromoformo, cloroformo de metilo, clorobenceno, o-diclorobenceno, cloroetano, 1,1 -dicloroetano, diclorometano, tetracloroetanos, epiclorohidrina, tricloroetileno y tetracloroetileno; éteres que incluyen éteres de alquilo tales como éter dietílico, éter diisopropílico, éter diisobutílico, dimetoximetano, o éteres cíclicos tales como 1 ,4-dioxano, 1 ,3-dioxolano, furano, tetrahidropirano y tetrahidrofurano; aldehidos tales como formiato de metilo, formiato de etilo, y furfural; cetonas tales como acetona, diisobutil acetona, ciciohexanona, metil etil cetona, N-metil-2-pirrolidona e ¡soforona; amidas tales como dimetilformamida y dimetilacetamida; alcoholes tales como etanol, isopropanol, alcohol t-butílico, ciciohexanol, glicerol, etilen glicol y propilen glicol; aminas, incluyendo aminas cíclicas tales como piridina, piperidina, 2-metilpiridina, morfolina, etc., y aminas mono-, di- y tri-substituidas tales como trimetilamina, dimetilamina, metilamina, trietilamina, dietilamina, etilamina, n-butilarnina, t-butilamina, trietanolamina, dietanolamina y etanolamina, e hidrocarburos substituidos con amina tales como etilenodiamina, dietilenodiamina; ácidos carboxílicos tales como ácido acético, ácido trifluoroacético, y ácido fórmico; esteres tales como acetato de etilo, acetato de isopentilo, propilacetato, etc.; lactamas tales como caprolactama; nitrilos tales como acetonitrilo, propan nitrilo, y adiponitrilo; nitratos orgánicos tales como nitrobenceno, nitroetano y nitrometano; sulfuros tales como disulfuro de carbono; y sulfóxidos tal como sulfóxido de dimetilo. Los solventes preferidos incluyen alcoholes tal como etanol, éteres tal como éter dietílico, DMSO, e hidrocarburos halogenados tales como cloroformo y cloruro de metileno. El solvente además puede comprender por lo menos un lipopolímero, uno o más agentes terapéuticos, un lípido derivatizado con un ligando objetivo, un esterol, un lípido catiónico, un lípido aniónico, un tensoactivo, un aceite, uno o más marcadores, y similares. Se apreciará que algunos de estos componentes se pueden agregar a la solución acuosa después de que se forman los liposomas, tales como el lipopolímero, el agente terapéutico y/o lípido derivatizado con un ligando objetivo. Se apreciará que el solvente, la solución acuosa, o ambos pueden incluir el agente terapéutico o de diagnóstico o un excipiente. Cuando el aceite está presente como un componente de la partícula de lípido, preferiblemente está presente en la gotícula antes de la introducción de la gotícula en la solución acuosa. Las gotículas 12 se general de la solución de lípido/solvente a través de cualquier medio adecuado. Los sistemas ilustrativos para generar las gotículas ¡ncluyen un nebulizador, un atomizador, un generador de vaporización de inyector, un expulsor acústico enfocado, un dispositivo de electroaspersión, o similar, mientras el dispositivo o método para generar las gotículas provea gotículas que tienen un tamaño en la escala deseada para preparar las partículas de lípido descritas aquí. Preferiblemente, los dispositivos y métodos para generar gotículas proveen gotículas a una velocidad suficiente para preparar la partícula de lípido en una forma en tiempo y costo efectiva. La generación de las gotículas con un generador acústico enfocado y un nebulizador se discuten más adelante. Estas gotículas entonces se introducen en el solvente acuoso 20 para formar las partículas de lípido 16. La solución acuosa sirve como el receptáculo para las gotículas que comprenden el lípido formador de vesículas en el solvente, junto con otros componentes adecuados, como se explicó anteriormente. Después de la introducción de las gotículas, las partículas de lípido se forman mediante difusión o evaporación del solvente (y en algunas instancias, el tensoactivo) fuera de la gotícula y dentro de la fase acuosa, dejando los lípidos, aceites y tensoactivos, etc., que formen estructuras de acuerdo con la composición de la gotícula. Se apreciará que la temperatura, los electrolitos y la concentración de electrolito, la presión y similares todos se pueden ajustar para afectar las estructuras formadas. Generalmente, la solución acuosa deberá mantenerse a una temperatura por arriba de la transición de fase principal de los lípidos que se están introduciendo en la fase acuosa. La fase acuosa generalmente comprende agua, con solutos opcionales según se desee. Los solutos opcionales pueden incluir, sin limitación, electrolitos, proteínas, péptidos, azúcares, agentes caotrópicos, agentes de quelatación, antioxidantes (por ejemplo, ácido ascórbico, ascorbato de sodio, vitamina E); ácido; o reguladores de pH neutrales o básicos (por ejemplo, fosfatos mono- o di-básicos); bacteriostatos, y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión, solubilizadores, agentes de adelgazamiento, estabilizadores, excipientes farmacéuticos, y conservadores (por ejemplo, alquil paraben, alcohol bencílico); tensoactivos iónicos o no iónicos, como se explicó anteriormente, polisorbatos, co-solventes; polialcoholes tales como, es decir, glicerol, manitol y xilitol. La solución acuosa también puede estar pre-equilibrada con una concentración submicelar de lípidos anfifílicos (por ejemplo, una concentración de lípidos de alrededor de 1 µM) o tensioactivo, según se desee. La solución acuosa puede contener cualquier soluto o solvente que se desee atrapar o asociar con las superficies hidrofílicas o el interior hidrofóbico de las partículas de lípido. De esta forma la solución acuosa además puede contener por lo menos un agente terapéutico que va a estar atrapado. Por "atrapado" significa que el agente terapéutico está atrapado en el compartimiento central de la partícula de lípido y/o los espacios bicapa del lípido, que está asociado con la superficie de partícula de lípido externa, o está tanto atrapado internamente y externamente asociado con las partículas de lípido. El agente terapéutico puede ser hidrofílica, hidrofóbico, o anfipático. Las moléculas hidrofílicas típicamente están localizadas en ya sea el núcleo bicapa interno o externo de los liposomas, están atrapadas dentro del núcleo de aceite, o están asociadas con el grupo principal no polar del lípido. Las moléculas antipáticas por lo general se localizan en la interfase lípida/acuosa. En otra modalidad, la solución acuosa puede incluir solutos que se asocian con la superficie de las partículas de lípido, incluyendo ácidos nucleicos u otros polímeros. Para formulaciones farmacéuticas, típicamente la solución acuosa contiene solutos que convierten la formulación isotónica con la sangre del receptor previsto. Típicamente las formulaciones farmacéuticas pueden contener uno o más electrolitos farmacéuticamente aceptables tales como NaCI, KCl, MgS04, y CaCI2; azúcares que incluyen glucosa y sacarosa; y/o crioprotectores tales como glicerol, trehalosa, y manitosa. Adicionalmente, la solución acuosa puede incluir marcadores acuosos tales como colorantes, rastreadores radioactivos, y fluoróforos solubles en agua, tal como carboxifluoresceina. Para los liposomas, una porción de la solución acuosa se encapsula dentro de los liposomas que forman el núcleo acuoso del liposoma. Un experto en la técnica apreciará que el pH puede ajustarse para un rendimiento óptimo de los lípidos, aceites y tensoactivos particulares, etc., presentes en las gotículas, que dependerá del uso previsto de la formulación. Típicamente, el pH en la solución acuosa estará en la escala de alrededor de 3 a alrededor de 8 para la mayor parte de los propósitos en medicina, horticultura, biotecnología, y cosméticos y cosmocéuticos. Sin embargo, se puede utilizar cualquier pH para formar las partículas de lípido, mientras los componentes sean estables a ese pH. El pH puede ajustarse a un pH más neutral, básico o ácido después de la formulación de la partícula de lípido. Para la distribución del fármaco sistémica, generalmente se desea un pH fisiológicamente aceptable, típicamente un pH de alrededor de 7.4. Las partículas de lípido también se pueden formar en una solución acuosa a un pH alto o bajo, y el pH se puede ajustar a la escala deseada después. Para la carga remota de agentes, el vehículo de la distribución farmacéutica o por el contrario liposómico se puede preparar en una solución acuosa que contiene sulfato de amonio, y después transferirse a una solución acuosa que tiene una concentración más baja de sulfato de amonio (por ejemplo, utilizando diálisis o cromatografía), proporcionar un gradiente de pH que conduce la encapsulación de un último fármaco agregado. La carga remota ha sido descrita con detalle en la Patente de E.U.A. No. 5,192,549 de Barenholz, y en la Patente de E.U.A. No. 6,465, 008 de Slater (particularmente el Ejemplo 1 ). Los componentes y la concentración de los lípidos, el tamaño de la gotícula y las contribuciones del solvente se pueden variar para determinar efecto final en el tamaño de partícula de lípido. Además, el grado de formación de las gotículas, el método para introducir las gotículas en la solución acuosa, el efecto de agitar o no agita la solución acuosa, la temperatura de la solución acuosa, las concentraciones de electrolito, etc., todas se pueden investigar utilizando experimentos de rutina. De esta forma, para un tamaño de gotícula dado, el efecto de la presencia de lípidos aniónicos o catiónicos o tensoactivos da como resultado un liposoma más pequeño con relación al tamaño obtenido en la ausencia de estos componentes se puede investigar y optimizar. Similarmente, el solvente se puede variar para investigar el papel de la capacidad de combinarse del solvente en agua y la velocidad de difusión del solvente en la fase acuosa sobre el tamaño y las características del liposomas. Un experto en la técnica será capaz de emplear experimentos de rutian para optimizar el liposoma u otra partícula de lípido obtenida para un uso previsto. La solución acuosa se puede agitar u por el contrario mezclar como las gotículas se introducen utilizando cualquier método conocido tal como, por ejemplo, una barra de agitación 18.

A. Generación de Gotículas Como se explicó anteriormente, uno o más lípidos formadores de vesículas, y opcionalmente aceites y/o tensoactivos, se disuelven en un solvente miscible en agua, un solvente no miscible en agua, o mezclas de los mismos. Las gotículas del tamaño requerido y/o la concentración del lípido se pueden producir utilizando cualquier dispositivo o método apropiado, tal como utilizando nebulización, atomización, expulsión acústica enfocada, electroaspersión, generación de vaporización por inyector, y similares. Las gotículas tienen un diámetro de entre aproximadamente 0.01 mieras y aproximadamente 100 mieras, aunque no existe un límite inferior para el tamaño de la gotícula que se puede utilizar. Se apreciará que el límite inferior del tamaño de la gotícula depende de las capacidades del sistema de generación. En una modalidad preferida, las gotículas tiene una distribución de tamaño estrecha. Preferiblemente, las gotículas tienen un diámetro de menos de aproximadamente 10 mieras, más preferiblemente, menos de aproximadamente 5 mieras. En una modalidad preferida, las gotículas tienen un diámetro de entre aproximadamente 0.1 mieras y aproximadamente 5 mieras. Como se manifestó anteriormente, el tamaño de los liposomas formados a través del método principalmente se controla a través del tamaño de las gotículas y la concentración del lípido en la gotícula. Se apreciará que estos parámetros pueden estar relacionados. Por ejemplo, una gotícula que tiene un diámetro de 5 mieras contiene un volumen de alrededor de 67 fl (femtolitros), y por lo tanto contiene aproximadamente 4 x 107 moléculas de lípido. Una gotícula que tiene un diámetro de 0.1 mieras tiene un volumen de 5 x 10"4 fl y de esta forma contiene aproximadamente de esta forma contiene alrededor de 300 moléculas de lípido. Se apreciará que al elegir una cierta concentración de lípido en el solvente (y opcionalmente aceites y tensoactivos y similares), se puede hacer una gotícula que tiene un número predeterminado de moléculas que pueden introducirse en la solución acuosa como una concentración local discretas de lípido en agua, por lo tanto se proporciona control sobre el tamaño y composición de las partículas de lípido producidas a un nivel molecular. Dependiendo de la naturaleza de los lípidos (y otros componentes) presentes, el solvente, la presencia del tensoactivo, en la solución acuosa o el solvente, la temperatura y las condiciones de sal en la solución acuosa, los tamaños de gotículas se pueden seleccionar para optimizar la partícula de lípido producida. En una modalidad preferida, cada gotícula no es de más de aproximadamente 1 microlitro en volumen. Preferiblemente, el volumen de la gotícula está entre aproximadamente 10-4 fl y aproximadamente 1 ni, y aún más preferiblemente, el volumen de la gotícula está entre aproximadamente 10-2 fl y aproximadamente 10 pl, aunque no hay un límite inferior en el tamaño de la gotícula que pueda ser utilizado. Los métodos de impresión por inyección de tinta tales como los descritos en la Patente de E.U.A. Nos. 4,697,195 de Quate, 4,751 ,529 y 4,751 , 530 de Elrod, y 6,596, 239 de Williams han demostrado que son capaces de generar gotículas de tamaño picolitro con una distribución de tamaño extremadamente ajustada. Se apreciará que las gotículas de la presente ¡nvención se pueden formar utilizando métodos similares. De acuerdo con la patente 6,596,239, el tamaño de cada gotícula se pueden controlar a través de la modulación de la frecuencia, voltaje y duración de la fuente de energía utilizada para excitar al emisor acústico, generalmente un transductor piezoeléctrico. Los tamaños de las gotículas se reportan como siendo por lo menos de 1 miera en tamaño. Los tamaños de las partículas de lípido producidas, así como los tamaños de las gotículas introducidas en la solución acuosa, se pueden determinar utilizando métodos conocidos en la técnica. Una lista no limitante de métodos para determinar los tamaños de las partículas de lípido y gotículas incluyen: microscopia de electrón (fractura congelada, transmisión EM de teñido negativa, y exploración EM); analizador de partículas de submicrón (por ejemplo, Malvern Láser, Cascade Impactor, Coulter); fraccionamiento de flujo de campo (FFF); fraccionamiento hidrodinámico capilar (CHDF); difractometría láser; y analizador doppler de fase (PDA).

B. Expulsión Acústica Enfocada En otra modalidad, mostrada en la Figura 2, las gotículas 26 se forman a través de un expulsor acústico enfocado 22, como se describe en la Publicación de E.U.A. No. 20030012892A1. Brevemente, el dispositivo incluye un expulsor acústico comprendido de un generador de radiación acústico para generar la radiación acústica. La radiación acústica se enfoca en un punto focal dentro del depósito que contiene el solvente y el lípido disuelto 23 cerca de la superficie de fluido 25. Un expulsor 24 se adapta para generar y enfocar la radiación acústica para expulsar una gotícula 26 de fluido de la superficie de fluido 25 dentro de un recipiente recolector 28 que contiene una solución acuosa 34. Como se describe en el Ejemplo 8, los lípidos se disuelven en un solvente, preferiblemente un solvente alcanólico tal como etanol, DMSO, éter o un hidrocarburo halogenado, a una concentración de lípido deseada. La solución de lípido/solvente también puede contener fármacos, ligandos objetivo, lipopolímeros, y similares. Para generar las gotículas de solvente/lípido, se puede utilizar un arreglo de lentes acústico como se describe en la Patente de E.U.A. No.4,751 , 530. Como se indica anteriormente, las gotículas se introducen en un recipiente de colección 28 que contiene una solución acuosa 34 para formar las partículas de lípido 30. Alternativamente, el sistema de generación acústico enfocado 22 produce una vaporización que se puede hacer burbujear a través de la solución acuosa utilizando un gas portador, no mostrado. Por ejemplo, se puede hacer pasar un flujo de hidrógeno pasando los expulsores y el nitrógeno conteniendo gotículas expulsadas se pueden hacer burbujear a través de la solución acuosa. La solución acuosa (opcionalmente conteniendo reguladores de pH, electrolitos, agente terapéuticos, y similares) que se van a utilizar para recolectar las gotículas de solvente/lípido preferiblemente se mantiene a una temperatura por arriba de la temperatura de transición de fase principal del lípido utilizado. Se apreciará que la temperatura puede variarse de acuerdo con la composición y el producto final deseado, especialmente para partículas de lípido diferentes de liposomas. Cuando las gotículas se introducen en la solución acuosa, las gotículas se absorben en la fase acuosa una vez que se hace contacto con la superficie acuosa, y el solvente se difunde en la fase acuosa de volumen. Las moléculas de lípido de la gotícula formar los liposomas u otras partículas de lípido, dependiendo de los componentes presentes en las gotículas. Después de la introducción de la gotícula en la fase acuosa, el solvente se esparce fuera de la gotícula en la fase acuosa y los lípidos se vuelven a formar en la bicapa o monocapas que forman las partículas de lípido en la fase acuosa. Cuando está presente aceite en la solución de lípido, la gotícula de aceite permanece en el núcleo de la gotícula, y las cadenas de acilo de los lípidos espontáneamente forman una capa de superficie alrededor del núcleo de aceite. Los lípidos en exceso adicionales se pueden formar en la bicapa concéntrica alrededor del núcleo de la gotícula de aceite central. Cuando el tensoactivo no iónico está presente, se forman los niosomas. Dependiendo de la proporción de aceite, lípido y tensoactivo presente, se forman los liposomas, lipoesferas, niosomoas, emulsomas o emulsiones. Se apreciará que el depósito acuoso puede estar en comunicación de fluido con el depósito del solvente/lípido para permitir la captura directa de las gotículas mediante la solución acuosa. Los depósitos pueden estar en comunicación de fluido utilizando cualesquiera medios adecuados incluyendo tuberías conectando los depósitos. En esta modalidad, las gotículas generalmente se introducen en la solución acuosa a través del burbujeo de las gotículas a través de la solución acuosa utilizando un gas portador inerte tal como nitrógeno. En esta modalidad, se pueden prevenir dichas pérdidas que ocurren cuando se expulsan las gotículas en el aire u otra fase de gas antes de transportar las gotículas en la solución acuosa. Sin embargo, se apreciará que generalmente es indeseable que el solvente acuoso sea introducido en el depósito que contiene la solución de lípido/solvente.

La expulsión acústica enfocada permite la expulsión de gotículas de 0.01 picolitros a 20 picolitros en volumen (las gotículas que tienen diámetros tan pequeños como 27 mieras), en donde las gotículas se pueden producir a una velocidad de por lo menos 1,000, 000 de gotículas por minuto (Patente de E.U.A. No. 6,416, 164 de Stearns). En otras modalidades, los acústicos enfocados se han utilizado para generar gotículas que tienen un diámetro de 5 a 10 mieras (Publicación de Patente No. 20020077369). La energía acústica enfocada generalmente se utiliza para generar gotículas líquidas cuyo diámetro está en el orden de la longitud de onda de la onda acústica en volumen que se propaga en la solución del solvente. Esta longitud de onda se puede determinar dividiendo la velocidad del sonido de la propagación de la onda en volumen en el solvente por la frecuencia de la onda acústica de volumen. De esta forma al incrementar la frecuencia, el tamaño de la gotícula se puede reducir. Una frecuencia de manejo RF que excede 300 MHz típicamente da como resultado la generación de gotículas más pequeñas de 5 mieras en diámetro. En otra modalidad, la generación de la onda capilar se utiliza para generar las gotículas como se describe en la Patente de E.U.A. No. 6,622, 720. Cuando se generan gotículas orientadas de onda capilar, el montículo principal no recibe suficiente energía para expulsar las gotículas. Más bien, mientras el montículo principal disminuye en tamaño, el líquido en exceso se absorbe a través de las crestas o montículos laterales de onda capita circundantes. Estas crestas de onda expulsan una vaporización que corresponda a las 26 gotículas. Con el fin de generar las gotículas de acción capilar en lugar de gotículas expulsadas individuales, enfocadas, cada transductor expulsor genera anchos de pulso más cortos a una energía pico más alta, típicamente en el orden de 5 microsegundos o menos en una energía pico de aproximadamente un vatio o más alta por expulsor. La acción capilar se puede utilizar para crear gotículas más pequeñas a frecuencias más bajas. El diámetro de las gotículas generadas capilares es similar en magnitud a la longitud de onda de las ondas capilares. El tamaño del liposoma se puede medir a través de un analizador de partícula de submicra (por ejemplo, Coulter N4MD). La frecuencia del generador de energía acústica se puede ajustar para producir gotículas en la escala de 0.001 fl a 50 pl para lograr el tamaño de liposoma deseado. Para inyección parenteral, el tamaño promedio final deberá estar en la escala de 80-200 nm. Si el tamaño del liposoma final es mayor que el deseado para un tamaño de partícula de gotícula particular, la concentración de lípido puede reducirse apropiadamente. En otra modalidad, se pueden proveer una pluralidad de expulsores y depósitos conteniendo la solución de lípidos, no mostrada. Un arreglo de expulsores acústicos enfocados se pueden colocar por debajo de una placa de microtitulación para la expulsión de las microgotículas de lípido en el solvente directamente por arriba o debajo de la fase acuosa. Debido al pequeño tamaño de las aberturas de los depósitos de las placas de microtitulación, no existe ninguna mezcla entre la fase acuosa y la fase de solvente. Alternativamente, se pueden utilizar un solvente menos miscible (o más o menos denso) para prevenir la mezcla de las fases acuosa y de solvente antes de la introducción de las gotículas en la solución acuosa. Las microgotículas se expulsan utilizando la expulsión acústica enfocada directamente en la fase acuosa, la cual preferiblemente se está agitando o por el contrario agitando utilizando medios de mezclado 32 para permitir la rápida mezcla de las gotículas expulsadas en la solución acuosa. Alternativamente, como se explicó anteriormente, las vaporizaciones de solvente/lípido se pueden dirigir en la solución acuosa utilizando un gas portador o utilizando trayectorias de gotículas expulsadas. Además, cada expulsor se puede activar a una alta frecuencia para producir gotículas a una rápida velocidad.

C. Nebulización y Atomización En otra modalidad, como se muestra en la Figura 3, las gotículas 43 se forman a través de un nebulizador o atomizador 44. Los nebulizadores y atomizadores pueden producir gotículas de tamaños variables, incluyendo gotículas en la escala de submicras a cientos de mieras en diámetro, típicamente en la escala de 1 a 10 mieras en diámetro. Para propósitos del presente método, se generan gotículas tienen diámetros en la escala de 0.01 mieras a alrededor de 100 mieras, y más preferiblemente de alrededor de 0.1 mieras a alrededor de 10 mieras. Los nebulizadores son generalmente de dos tipos: nebulizadores de pequeño volumen por inyección (o neumático) , y nebulizadores ultrasónicos. Los nebulizadores por inyección se basan en el principio del inyector, mientras que los nebulizadores ultrasónicos utilizan el efecto piezoeléctrico contrario para convertir la corriente alterna en energía acústica de alta frecuencia. En una modalidad, un nebulizador de aire comprimido 44 (por ejemplo, AeroEclipse, Pari L.C., el Parijet, Whisper Jet, Microneb®, Sidestream®, Acorn II®, Cirrus y Mist®) generan gotículas 43 como una vaporización destruyendo una corriente líquida con rápido movimiento de aire suministrado por un tubería 48 de una bomba de aire 50. Las gotículas que se producen a través de este método típicamente tienen un diámetro de alrededor de 2-5 µm. En otra modalidad, se utiliza un nebulizador ultrasónico que utiliza un transductor piezoeléctrico para transformar la corriente eléctrica en oscilaciones mecánicas para producir gotículas en aerosol de la solución de lípido/solvente. Estas gotículas tienen un diámetro en la escala de tamaño de 1 a alrededor de 5 mieras. Se apreciará que cualquier nebulizador ultrasónico adecuado se puede utilizar como se ejemplifica por Aeroneb Nebulizer (Aerogen, Inc., Mountain View, CA), MicroNeb lll, Pari Plus y Pari Star (para generar gotículas menores de 5 mieras, Pari, Starnberg, Alemania), Ventstream, Omron U1 , boquilla UMIST, boquilla de aerógrafo, AeroEclipse, el nebulizador de aspersión sónica como se describe por Huang, y otros, (1999) Anal. Sci. 15:265 (gotículas de 1 miera), nebulizador ultrasónico Skylark (3-8 mieras, Taiwan), nebulizador médico desechable (Raindrop; Puritan Bennett, Lenexa, KS, que tiene un diámetro de 3.2 mieras (+/-1. 9) según determinado por un impactador de cascada Andersen). Las gotículas de un tamaño deseado se pueden producir a través de la selección de un nebulizador, de inyección o ultrasónico, que produce gotículas en la escala deseada. Además está dentro de la habilidad de un experto en la técnica modificar el nebulizador para ajustar el diámetro de las gotículas producidas. En una modalidad, se utiliza una placa de impactador de gotícula para remover las gotículas por arriba de un diámetro dado producidas por cualquier nebulizador, atomizador, u otra fuente de gotículas particular, si las gotículas producidas por arriba de un tamaño deseado de umbral, y el material puede reciclarse. Además, las gotículas se pueden producir teniendo una escala de tamaño deseada a través del uso de un nebulizador y además seleccionando un tamaño de boquilla apropiado. Se apreciará que se puede utilizar una pluralidad de boquillas para mejorar el grado de la producción de las gotículas. Además se apreciará que una placa impactadora de gotículas se pueden emplear para remover gotículas por arriba de un diámetro dado, si las gotículas se producen por arriba de un tamaño deseado de umbral. La nebulización de la solución de solvente/lípido 46 da como resultado un rocío fino o vapor de gotículas 43. La vaporización de lípido/solvente nebulizada 43 se dirige hacia la solución acuosa 36 utilizando mecanismos adecuados, tales como tubería 42. En otra modalidad, la vaporización de lípido/solvente nebulizada 43 se hace burbujear 38 a través de la solución 36 para capturar las gotículas, como se muestra en la figura 3.

La acción de burbujeo puede proveer agitación a la solución acuosa también, lo cual aunque no es necesario para la formación de las partículas de lípído, puede incrementar la efectividad del mezclado y la velocidad así como mejorar la capacidad de reproducción del proceso. En otra modalidad, la solución acuosa se puede agitar utilizando un dispositivo de agitación convencional 52 y una barra agitadora 54. La solución acuosa (conteniendo reguladores de pH, electrolitos, y similares) se puede utilizar para recolectar las gotículas de solvente/lípido preferiblemente se mantiene a una temperatura por arriba de la temperatura de transición de la fase principal de los lípidos que se van a incluir en la partícula de lípido. Las gotículas se pueden introducir a través de cualquier método conocido en un recipiente que está especialmente diseñado para una exposición máxima del área de superficie de líquido corriendo la solución a través de una matriz de tipo panal (similar al diseño de un radiador de automóvil) hecha de hojas de acero inoxidable. La corriente de las vaporizaciones de solvente/lípido se dirigen hacia el recipiente acuoso y las gotículas se absorben una vez que chocan con la superficie acuosa. Las moléculas de lípido contenidas en la gotícula del solvente formarán liposomas u otras partículas de lípido en la solución acuosa de acuerdo con los componentes presentes y las condiciones acuosas. El tamaño del liposoma o de la partícula de lípido se pueden medir a través de un analizador de partícula de submicra. El solvente, la composición del lípido, la temperatura y la solución acuosa se pueden variar para determinar el efecto de estos parámetros, utilizando los experimentos de rutina. Los nebulizadores que producen gotículas en diferentes escalas se pueden probar hasta que se logra el tamaño del liposoma o de la partícula de lípido deseado. Por ejemplo, para inyección parenteral, el tamaño promedio final deberá estar en la escala de 80-200 nm. Si el tamaño de partícula de lípido final es mayor que el deseado, la concentración de lípido se pueden reducir apropiadamente. Como se describe en el Ejemplo 1 , los liposomas que tienen un tamaño adecuado para inyección intravenosa (diámetro de 166 + 6 nm) se formaron a través de la nebulización de una solución de etanol/POPC e introduciendo las gotículas en agua DI. Como se describe en el Ejemplo 2, la modificación de los parámetros del solvente y lípido (utilizando éter como el solvente y teniendo una concentración de lípido de 20 mg/ml de POPC), los liposomas formados tuvieron un diámetro de 1160 ± 140 nm. De esta forma, la modificación de la concentración del lípido y/o el uso de otros solventes se pueden utilizar para modular y activar el tamaño del liposoma. Como se explica en los Ejemplos 3 y 4, los liposomas se formaron de gotículas generadas a través de nebulización. A través de estos métodos, se formaron los liposomas que tienen un diámetro de 166 y 223 nm . Por consiguiente, los liposomas de alrededor de 100-150 nm y de alrededor de 200-250 nm se formaron a través de la modulación de la concentración del lípido. El volumen atrapado de los liposomas en los experimentos fue de 15.5 ml/mmoles de lípido y 11.4 ml/mmoles de lípido, respectivamente. Estos valores para volumen atrapado son mayores que para liposomas preparados utilizando más métodos de la técnica anterior, sugiriendo una disminución en la cantidad de liposomas multilaminares presentes o una disminución en la heterogeneidad del tamaño. El volumen atrapado para liposomas moldeados es típicamente de 1-2 ml/mmoles de lípido, para liposomas preparados utilizando inyección de etanol o éter, los volúmenes atrapados están en la escala de 5-10 ml/mmoles, y para liposomas sonicados, los volúmenes atrapados están en la escala de 0.2 a 0.5 m/mmoles (Zhang, y otros., Liposomes in Drug Delivery, in Polymeric Biomaterials, 2a. edición, S. Dumitriu, Ed. , Marcel Dekker, Inc., New York (2001 )).

Como se describe en el Ejemplo 2, la preparación de los liposomas utilizando gotículas generadas a través de nebulización se comparó con inyección directa de la solución de éter/POPC en una solución acuosa. Los liposomas que tienen un diámetro promedio de 1160 ± 140 nm según medidos a través de un medidor de partículas de submicras se formaron a través del método de generación de gotículas. En contraste, cuando la solución de éter/Iípido se inyecta lentamente directamente en agua desionizada, no se formaron liposomas. De esta forma, la formación de partículas de lípido utilizando el método de generación de gotículas puede proseguir bajo condiciones que de otra forma no serían adaptables para la formación de partículas de lípido. Se apreciará que las tecnologías adicionales están disponibles para producir gotículas adecuadas para uso en los métodos de la presente y formulaciones tales como la frecuencia vibratoria como se describe en el Ejemplo 7. Las tecnologías de electroaspersión (y nanoaspersión) se pueden utilizar para generar gotículas de tamaño adecuado. La electroaspersión convencional produce tamaños de gotículas de menos de 10 mieras, y a voltajes más altos, se pueden producir aún gotículas más pequeñas. La electroaspersión convencional produce tamaños de gotículas que tienen un pico de 0.43 mieras, o de alrededor de 0.04 fl (Patente de E.U.A. No. 6,511 , 718). Un experto en la técnica reconocerá que el solvente residual puede permanecer presente en la partícula de lípido una vez formado. El solvente en exceso presente se puede remover si se desea, por ejemplo,, a través de diálisis o diafiltración para solventes miscibles en agua tales como etanol y DMSO, y a través de evaporación al vacío para solventes no miscibles en agua tales como éter y cloroformo. Sin embargo, la remoción del solvente puede no ser necesaria, dependiendo de la cantidad de solvente residual y la aceptabilidad del solvente residual en la formulación. Un experto en la técnica apreciará que la proporción de lípidos y opcionalmente aceites y tensoactivos en la preparación tiene un efecto en la forma de la partícula de lípido preparada, y determinar si se preparó una Ilpoesfera, emulsión, liposoma, niosoma o emulsoma. Igualmente, la temperatura y las condiciones acuosas, tales como el pH y la fuerza iónica también pueden tener un efecto sobre las partículas de lípido y liposomas preparados utilizando los métodos descritos aquí, y un experto en la técnica puede investigar los efectos del solvente variable, el contenido de lípido, la concentración de lípido, la temperatura y las condiciones acuosas utilizando no más de un experimento de rutina. Como se describe en los Ejemplos 5 y 6, la modificación de la concentración del lípido y la inclusión de trioleno, un aceite, da como resultado la formación de lipoesferas o emulsomas, respectivamente. En otro aspecto, el método se puede utilizar para preparar partículas de lípido que tienen un diámetro o distribución de tamaño predeterminado. Similar a lo anterior, las gotículas de solvente/lípido se generan y se introducen en una solución acuosa para formar las partículas de lípido. Adicionalmente, las gotículas que tienen una composición de solvente/lípido diferente (tales como un lípido o solvente diferente, o concentración de solvente/lípido diferente) se general y se introducen en una solución acuosa para formar partículas de lípido. Las partículas de lípido formadas de dos soluciones de solvente/lípido se pueden comparar con base en los factores tales como diámetro, volumen, etc. En esta forma, se pueden determinar las condiciones para la preparación de partículas de lípido que tienen propiedades deseadas. Se apreciará que se puede emplear una técnica similar para investigar otros factores que afectan las partículas de lípido tal como el tamaño de las partículas (diámetro y/o volumen) de las gotículas generadas. Se entenderá que ya que la ¡nvención ha sido descrita en conjunción con las modalidades específicas preferidas de la misma, la descripción anterior así como los ejemplos que siguen pretenden ilustrar y no limitar el alcance de la invención. La práctica de la presente invención empleará, a menos que se indique otra cosa, técnicas convencionales de química orgánica, química de polímero, bioquímica y similares, que están dentro del alcance de la invención. Otros aspectos, ventajas y modificaciones dentro del alcance de la invención serán aparentes para aquellos con experiencia en la técnica a la cual pertenece la invención. Dichas técnicas se explican completamente en la literatura. Todas las patentes, solicitudes de patente y publicaciones mencionadas aquí, tanto anteriores como posteriores, se incorporan aquí por referencia.

IV. Ejemplos Los siguientes ejemplos ilustran pero de ninguna forma pretenden limitar la invención. En los siguientes ejemplos, se hacen esfuerzos para mejorar ía exactitud con respecto a los números utilizados (por ejemplo, cantidades, temperatura, etc.) pero se deberán tomar en cuenta algunos errores y desviaciones experimentales. A menos que se indique otra cosa, la temperatura está en grados centígrados (°C) y la presión está a o cerca de la presión atmosférica. Todos los solventes se compraron de grado HPLC, y todos los procesos fueron rutinariamente conducidos bajo atmósfera estándar a menos que se indique otra cosa. A menos que se indique otra cosa, los reactivos utilizados se obtuvieron de las siguientes fuentes: fosfolípidos de Avanti Polar Lípidos, Inc. (Birmingham, AL); solvents orgánicos, de Aldrich Chemical Co. (Milwaukee, Wl); y gases, de Matheson (Seacaucus, NJ). Los tamaños de las partículas se midieron utilizando un micromedidor de submicras Coulter (Modelo N4MD).

EJEMPLO 1 Preparación de Liposomas Utilizando Gotículas Generadas a Través de un Nebulizador Se disolvieron 0.57 g de POPC (NOF Corp) en etanol (USP de alcohol etílico absoluto, lote 99F15QA, AAPER Alcohol and Chem. Co. ) en un matraz graduado de 5 ml. La concentración de lípido final fue de 110 mg/ml. Se cargaron dos mililitros de solución de POPC:etanol en un nebulizador PARÍ LC STAR (Pari Respiratory, Starnberg, Alemania, modelo 22F51) para generar gotículas de la solución de POPC:etanol. El flujo de aire para la generación del aerosol se generó utilizando un sistema de aerosol portátil DURA-NEO 3000 (Pari Respiratory) acoplado a la parte inferior del nebulizador a través de tubería. Las gotículas nebulizadas se introdujeron en un vaso de laboratorio de vidrio de 100 ml conteniendo 45 ml de agua desionizada (DI) a través de tubería flexible de tamaño 18, con 0.5 cm de diámetro conectadas a la salida del nebulizador con agitación continua. Cuando se activó la bomba de aire, la vaporización de etanol burbujeó a través del agua. El agua lentamente se volvió transparente, indicando que se estaban formando los liposomas. El tamaño del liposoma se determinó como siendo de 166 ± 6 nm (n=3) según medido por un medidor de partícula de submicra Coulter.

EJEMPLO 2 Preparación de Liposomas Utilizando Solvente de Éter y Generación de Gotículas con un Nebulizador Se disolvió POPC en éter anhidro a una concentración final de 20 mg/ml. Se nebulizaron diez mililitros de solución de éter con incrementos de 2 ml en 50 ml de agua DI como se describe en el Ejemplo 1. El agua desionizada se mantuvo a 40°C con agitación continua. Después de que se activó la bomba de aire para iniciar la nebulización, la solución de agua rápidamente se hizo transparente, indicando que se estaban formando los liposomas. El diámetro promedio del liposoma se determinó como siendo de 1160 ± 140 nm según medido por un medidor de partícula de submicra Coulter. Como una composición, se inyectaron lentamente 0.5 ml de la solución de éter/lípido en 5 ml de agua desionizada a 40°C. Se formó un gel rechoncho, denso en la parte superior de la solución, y ninguna formación de liposoma fue aparente.

EJEMPLO 3 Efectividad de la Encapsulación de Liposomas Formados con Nebulización Se disolvieron 490 mg de POPC en 25 ml de etanol a una concentración de lípido final de 9.6 mg/ml. La solución de lípido/etanol se hizo nebulosa utilizando un dispositivo como se describe en el Ejemplo 1 en 30 ml de agua DI conteniendo 0.6 mg/ml de fluoresceína de dextrano, un colorante fluorescente (10,000 MW, Sondas Moleculares, -D-1821 , lote 9A) en un cilindro de volumen adaptado de 50 ml a temperatura ambiente. El cilindro se utilizó para aumentar la exposición del agua a las vaporizaciones de lípido/etanol. Se nebulizaron 10 ml de la solución de lípido/etanol y se introdujeron en el cilindro. Después de la nebulización, el volumen total en el cilindro fue de alrededor de 35 ml. La concentración final del lípido en la suspensión acuosa se determinó como siendo de 3.35 mg/ml según ensayado a través del contenido de fósforo. De esta forma, la efectividad de la captura del lípido nebulizado a través de la solución acuosa fue de cerca del 60%. El diámetro del liposoma fue de 166 + 4 nm según medido por un medidor de partícula de submicras Coulter. Con el fin de determinar la efectividad de la encapsulación del colorante mediante los liposomas, el colorante no atrapado se separó de los liposomas a través de diafiltración (cartucho: A/G Tech Corp., UFP-100-E- MM01A, 100,000 NMWC, 1 mm, 16 cm2). La medición de la intensidad fluorescente de las . muestra de pre- y post-diafíltración indicaron una efectividad de encapsulación de 6.6%. Dada la concentración del lípido de 4.26 mM, el volumen de liposomas atrapados se calculó como siendo de 15.5 ml/mmoles.

EJEMPLO 4 Encapsulación de un Colorante Fluorescente en Liposomas Generados con Nebulización Se disolvieron 650 mg de POPC en 25 ml de etanol a una concentración de lípido final de 26 mg/ml. La solución de lípido/etanol se hizo nebulosa utilizando un dispositivo como se describe en el Ejemplo 1. Las gotículas nebulizadas se introdujeron en 30 ml de agua DI conteniendo 6.4 mg/ml de HPTS, un colorante fluorescente (Molecular Probes Inc. H348 lote: 0181-2) en un cilindro de 50 ml adaptado a temperatura ambiente. En este experimento, el tubo que introduce las gotículas se comprimió para reducir el flujo de gas, el cual puede haber afectado la distribución de gotículas y/o el tamaño de las gotículas en la solución acuosa. Se nebulizó un total de 3.5 ml de solución de lípido-etanol y se introdujo en agua DI. Después de la nebulización y la introducción, el volumen total en el cilindro fue de alrededor de 32 ml. La concentración de lípido final en la suspensión acuosa se determinó como siendo de 0.64 ± 0.16 mg/ml (0.81 ± 0.2 mM, n=3) según ensayado a través del contenido de fósforo. Esto se traduce a un valor de 24% para la efectividad de captura de las gotículas hechas nebulosas a través del agua. El diámetro del liposoma se determinó como siendo de 223 ± 6 nm (n=3) según medido por un medidor de partícula de submicras Coulter. Con el fin de determinar la efectividad de la encapsulación del colorante, el colorante no atrapado se separó del colorante atrapado en el liposoma haciendo pasar 200 microlitros de la suspensión de lípido a través de una columna Sephadex G50 (Pharmacia) (30 cm de largo x 0.5 cm de diámetro) y los liposomas se extrajeron con solventes con salina (0.9% de NaCI). Se recolectaron un total de 40 fracciones (25 gotas/fracción). Las fracciones 4-8 conteniendo los liposomas se agruparon a un volumen total de 3.15 ml; y las fracciones 24-35 conteniendo el colorante no atrapado dieron un total de 7.5 ml en volumen. La medición de la intensidad de la fluorescencia de las dos fracciones agrupadas indicaron una efectividad de detección de 0.92%. La recuperación de la columna G50 fue de 100% (actual 104%). Dada la concentración de lípido de 0.81 ± 0.2 mM, el volumen detectado se calculó como siendo de 11.42. 9 ml/mmoles.

EJEMPLO 5 Preparación de Lipoesferas Se disolvieron 100 mg de POPC y 200 mg de trioleno en 25 ml de DMSO/etanol (1 :1 v/v). La solución de lípido/solvente se hizo nebulosa utilizando un dispositivo como se describe en el Ejemplo 1 y se introdujo en 30 ml de agua DI contenida en un cilindro de 50 ml adaptado a temperatura ambiente. Se hicieron nebulosos un total de 4.0 ml de solución de lípido y se introdujeron en agua para formar lipoesferas. Las concentraciones del lípido y trioleno se determinaron a través de HPLC, y el diámetro se las lipoesferas se midió utilizando un medidor de submicras Coulter N4MD.

EJEMPLO 6 Preparación de Emulsomas Se disolvieron 200 mg de POPC y 100 mg de trioleno en 25 ml de DMSO/etanol (1 :1 v/v). La solución de lípido/solvente se hizo nebulosa y se introdujo en 30 ml de agua DI contenida en un cilindro de 50 ml adaptado a temperatura ambiente. Se hicieron nebulosos un total de 4.0 ml de solución de lípido y se introdujeron en agua para formar emulsomas. Las concentraciones de lípido y trioleno se determinaron a través de HPLC, y el diámetro de las partículas se midió utilizando un medidor de submicras Coulter N4MD.

EJEMPLO 7 Preparación de Liposomas Utilizando Gotículas Generadas a Través de Frecuencia Vibratoria Se disolvieron diez gramos de HSPC/Colesteroi/mPEG2000- DSPE (55:40:5) en 100 ml de etanol a una concentración de lípido final de 0.1 g/ml. Las gotículas se generaron como una vaporización de solvente/lípido a través de frecuencia vibratoria utilizando un dispositivo similar a aquel descrito en la Patente de E.U.A. No. 6,405, 934 de Hess. Brevemente, el dispositivo utiliza medios de vibración para aplicar una vibración de frecuencia a la solución de solvente/lípido mientras genera el rocío de gotículas de líquido. El rocío de gotícula de líquido después se expulsa a través de una salida. El tamaño de la gotícula es inversamente proporcionar a la frecuencia de excitación según una frecuencia y presión particular. La corriente de la vaporización de solvente/lípído se dirige hacia un recipiente que contiene la solución acuosa. Las gotículas se absorben una vez que se contacta la superficie acuosa y los liposomas se forman en la solución acuosa.. La solución acuosa se mantiene a una temperatura por arriba de la temperatura de transición de la fase principal (60-65°C). El tamaño del liposoma según medido por un analizador de partícula de submicra tal como un medidor de submicras Coulter N4MD. La frecuencia de la vibración se ajustó para producir gotículas en la escala de 50 fl a 5 pl hasta que se logró el tamaño de liposoma deseado, preferiblemente liposomas que tienen un diámetro de 50-200 nm.

EJEMPLO 8 Preparación de Liposomas Utilizando Gotículas Generadas a Través de Acústicos Enfocados Se disolvieron diez gramos de HSPC/Colesterol/mPEG2000-DSPE (55:40:5) en 100 ml de etanol a una concentración final de lípido de 0.1 g/ml. Las gotículas se generaron como una vaporización de solvente/lípido a través del expulsor acústico enfocado utilizando un dispositivo descrito en la figura 2. Brevemente, el dispositivo genera radiación acústica utilizando una fuente de energía adecuada tal como una fuente de energía RF. El expulsor enfoca la radiación acústica en un punto focal cerca del dispositivo. El rocío de las gotículas se introduce en un depósito que contiene una solución acuosa tal como agua DI. Las gotículas se absorben una vez que se contacta la superficie acuosa y los liposomas se forman en la solución acuosa. El tamaño del liposoma se midió a través de un analizador de partícula de submicra tal como un medidor de submicra Coulter N4MD. La frecuencia de la radiación se ajustó para producir liposomas que tienen un diámetro en la escala de 50-200 nm.

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1. Un método para preparar partículas de lípido, que comprende: producir gotículas discretas del lípido formador de vesículas en un solvente, dichas gotículas tienen un diámetro y un volumen; introducir dichas gotículas en una solución acuosa; y formar las partículas de lípido adecuadas para la administración in vivo.

2. El método de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque dicha partícula de lípido es un liposoma.

3. El método de conformidad con la reivindicación 1 o 2, caracterizado además porque el lípido se selecciona del grupo que consiste de fosfatidil colina de diestearoilo, fosfatidil etanolamina de diestearoilo, y fosfatidil colina de soya hidrogenada.

4. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones previas, caracterizado además porque comprende: incluir un agente terapéutico en al menos uno del solvente o la solución acuosa.

5. El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado además porque dicho agente terapéutico es un antibiótico de antraciclina.

6. El método de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado además porque dicho antibiótico de antraciclina se selecciona del grupo que consiste de daunorubicina, doxorubicina, mitoxantrona, y bisantreno.

7. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones previas, caracterizado además porque comprende: incluir un lipopolímero en dicha gotícula.

8. El método de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado además porque dicho lipopolímero se selecciona del grupo que consiste de polivinilpirrolidona, polivinilmetiléter, polimetiloxazolina, polietiloxazolina, polihidroxipropiloxazolina, polihidroxipropilmetacrilamida, polimetacrilamida, polidimetilacrilamida, polihidroxipropilmetacrilato, polihidroxietilacrilato, hidroximetilcelulosa, hidroxietilcelulosa, polietileneglicol, y poliaspartamida.

9. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado además porque dicho lipopolímero son cadenas de polietilen glicol que tienen un peso molecular de entre aproximadamente 500 Daltons y aproximadamente 10,000 Daltons.

10. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9, caracterizado además porque comprende un ligando enlazado al extremo distal de al menos una porción de dichos lipopolímeros.

11. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones previas, caracterizado además porque comprende un o ligando enlazado al grupo principal polar de al menos una porción del lípido formador de vesículas.

12. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones previas, caracterizado además porque la concentración del lípido en cada gotícula es de entre alrededor de 0.1 mg/ml y alrededor de 1 g/ml.

13. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, caracterizado además porque la concentración del lípido en cada gotícula es de entre aproximadamente 1 mg/ml y aproximadamente! 00 mg/ml.

14. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones previas, caracterizado además porque el volumen de la gotícula es de entre aproximadamente 10"4 fl y aproximadamentel ni.

15. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, caracterizado además porque el volumen de la gotícula está entre aproximadamente 10"2 fl y aproximadamente 10 pl.

16. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones previas, caracterizado además porque comprende: incluir al menos uno de un lípido catiónico, un lípido aniónico, un tensoactivo, un marcador, un aceite, o un excipiente farmacéutico en dicho solvente.

17. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones previas, caracterizado además porque comprende: aplicar una radiación acústica enfocada sen un punto focal cerca de la superficie de la solución antes de y/o durante dicha introducción.

18. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones previas, caracterizado además porque dicho dispositivo comprende una pluralidad de gotículas que pueden ser expulsadas de una pluralidad de depósitos de solvente que contienen dichos lípidos y solvente.

19. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones previas, caracterizado además porque dichas gotículas discretas se producen como una vaporización en contacto con la solución acuosa.

20. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado además porque la vaporización de las gotículas se genera a través de un sistema seleccionado del grupo que consiste de un nebulizador, un atomizador, un generador de vaporización por inyección, un expulsor acústico enfocado, y un dispositivo de electroaspersión.