MXPA05013421A - Suministro intra-dermico mejorado de agentes biologicamente activos - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a métodos y dispositivos para suministrar uno o más agentes activos biológicamente, particularmente un agente de diagnostico al compartimiento intradérmico de la piel de un sujeto. La presente invención proporciona un método mejorado de suministro de agentes activos biológicamente en que proporciona, entre otros beneficios, una absorción rápida hacia el sistema linfático local, teniendo como objetivo mejorado un tejido particular, biodisponibilidad mejorada, biodisponibilidad mejorada del tejido, cinética específica mejorada del tejido, deposición mejorada de un volumen pre-seleccionado del agente a ser administrado, y biológica rápida y biológica y farmacocinética rápidas y biológica y farmacocinética rápidas. Esta invención proporciona métodos para el transporte rápido de los agentes a través de la vasculatura linfática accediendo por medio del suministro intradérmico del agente. Los métodos de la invención son particularmenteútiles para el suministro de agentes de diagnóstico.

Description

SUMINISTRO INTRA-DÉRMICO MEJORADO DE AGENTES BIOLÓGICAMENTE ACTIVOS 1.CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a métodos y dispositivos para suministrar uno o más agentes biológicamente activos, en particular, un agente de diagnóstico al compartimiento intradérmico de la piel de un sujeto. La presente invención proporciona un método mejorado para el suministro de agentes biológicamente activos la medida en que este proporciona otros beneficios, la asimilación rápida en las redes linfáticas locales, focalización mejorada a un tejido particular, biodisponibilidad mejorada, biodisponibilidad de tejido mejorada, cinética específica del tejido mejorada, deposición mejorada de un volumen pre-seleccionado del agente a ser administrado, y farmacodinámica y farmacocinética biológicas rápidas . Esta invención proporciona métodos para el transporte rápido de agentes a través de la vasculatura linfática acezada por el suministro intradérmico del agente . Los métodos de la invención son útiles en particular para el suministro de agentes de diagnóstico. 2. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN 2.1 SUMINISTRO DE AGENTES A LA PIEL La importancia de suministrar agentes farmacéuticos eficientemente y con seguridad, tales como agentes de diagnóstico y fármacos se ha reconocido durante mucho tiempo. Las dificultades asociadas con el aseguramiento de la biodisponibilidad adecuada y la absorción reproducible de moléculas grandes, tales como las proteínas que se originan de la industria biotecnológica, se han puesto de relieve recientemente (Cleland et al., Curr. Opin. Biotechnol. 12: 212-219, 2001) . El uso de las agujas convencionales ha proporcionado por largo tiempo una técnica para suministrar agentes farmacológicos a los humanos y animales mediante el suministro a través de la piel. En general, la inyección evita las condiciones desagradables asociadas con el suministro oral, las cuales mitigan comúnmente los efectos deseados de la mayoría de las terapias biológicas . La inyección también puede proporcionar un efecto terapéutico más rápido que el suministro oral . Se han hecho esfuerzos considerables para lograr inyecciones basadas en agujas reproducibles y eficaces en tanto que se proporciona facilidad de uso y reducción de la aprehensión y/o dolor del paciente asociados con las agujas convencionales. Además, ciertos sistemas de suministro transcutáneos eliminan las agujas por completo, y se basan en la simple adsorción hidrofóbica., mediadores químicos o fuerzas de activación externas tales como las corrientes iontoforeticas o electroporación o poración térmica o sonoforesis para traspasar el statum corneum (la capa más externa de la piel) y suministrar los agentes a través de la superficie de la piel. Sin embargo, tales sistemas de suministro en general no atraviesan reproduciblemente las barreras de la piel o suministrar los agentes farmacéuticos a una profundidad dada debajo de la superficie de la piel. En consecuencia, los resultados clínicos pueden ser variables. Por lo tanto, se cree que el cruce del stratum corneum, como por ejemplo con agujas proporciona el método más reproducible de suministro de agentes a través de la superficie de la piel y proporciona control y confiabilidad en la colocación de los agentes administrados. Las técnicas para administrar agentes debajo de la superficie de la piel han involucrado casi exclusivamente inyecciones o infusiones transdermicas, es decir, el suministro de los agentes a través de la piel a un sitio debajo de la piel. Las inyecciones e infusiones transdermicas incluyen las rutas de suministro subcutánea, intramuscular o intravenosa de las cuales, las inyecciones intramusculares (IM) y subcutáneas (SC) han sido las más comúnmente usadas. Anatómicamente, la superficie externa del cuerpo consta de dos capas de tejido principales, una epidermis externa y una dermis subyacente, las cuales juntas constituyen la piel (para un repaso, véase Physiology, Biochemistry, and Molecular Biology of the Skin, Segunda Edición, L. A. Goldsmith, Ed. , Oxford University Press, Nueva York, 1991) . La epidermis se subdivide en cinco capas o estratos con un espesor total de entre 75 y 150 µm. Debajo de la epidermis yace la dermis, la cual contiene dos capas, una porción más externa conocida como la dermis papilar y una capa mas profunda conocida como la dermis reticular. La dermis papilar contiene plexos sanguíneo y linfático microcirculatorios extensos. En contraste, la dermis reticular es relativamente acelular y avascular y consta de un tejido conectivo elástico y colagenoso denso. Debajo de la epidermis y la dermis se encuentra el tejido subcutáneo, también conocido como la hipodermis, la cual se compone del tejido conectivo y el tejido grasos. El tejido muscular yace debajo del tejido subcutáneo. Como se señala arriba, tanto el tejido subcutáneo como el tejido muscular se han usado comúnmente como los sitios para el suministro de agentes farmacéuticos, incluyendo los agentes de diagnóstico. La dermis, sin embargo, rara vez se ha destinado como un sitio para el suministro de agentes, y esto se puede deber, al menos en parte, a la dificultad para colocar con precisión la aguja dentro del compartimiento intradérmico. Además, aun cuando la dermis, en particular, la dermis papilar ha sido conocida por tener un alto grado de vascularidad, no se ha apreciado hasta ahora que uno podría tomar ventaja de este alto grado de vascularidad para obtener un perfil de absorción mejorado para administrar agentes, en comparación con el suministro subcutánea. Una técnica para el suministro debajo de la superficie de la piel y dentro de la región del compartimiento intradérmico se ha usado rutinariamente en la prueba de tuberculina de Mantoux. En este procedimiento, un derivado de proteína purificado se inyecta a la superficie de la piel en un ángulo superficial usando una aguja de calibre 27 o 30 (Flynn et al., Chest 106: 1463-5, 1994). Un grado de incertidumbre en la colocación de la inyección puede, sin embargo, resultar en algunos resultados de prueba negativa falsos. Además, la prueba ha involucrado una inyección localizada para dar como resultado una respuesta en el sitio de la inyección y la técnica de Mantoux no ha llevado al uso de la inyección intradérmica para el suministro sistémico de agentes . Algunos grupos han reportado sobre el suministro sistémico por medio de lo que se ha caracterizado como inyección "intradérmica". En uno de tales reportes, se llevó a cabo un estudio de comparación de la inyección subcutánea y la que se describe como inyección "intradérmica" ( (Autret et al., Therapie 46: 5-8,1991). El agente farmacéutico evaluado fue calcitonina, una proteína con un peso molecular de aproximadamente 3600. Aunque se estableció que el fármaco se inyectó intradérmicamente, las inyecciones usaron una aguja de 4 mm empujada a la base a un ángulo de 60°. Esto hubo resultado en la colocación del injectado o sustancia a inyectar a una profundidad de aproximadamente 3.5 mm y dentro de la porción inferior de la dermis reticular o dentro del tejido subcutáneo en lugar que dentro de la dermis papilar vascularizada. Si de hecho este grupo inyectó dentro de la porción inferior de la dermis reticular en lugar de en el tejido subcutáneo, se esperaría que el agente fuera absorbido lentamente en la dermis relativamente menos vascular o bien se difundiera en la región subcutánea para resultar en lo que sería funcionalmente lo mismo que el suministro y absorción subcutánea. Tal suministro subcutánea actual o funcional explicaría la carencia reportada de diferencia entre el suministro subcutánea y la que se caracterizó como suministro transdérmico, en los tiempos en los cuales se alcanzó la concentración máxima de plasma, las concentraciones en cada tiempo del ensayo y las áreas bajo las curvas. De manera similar, Bressolle et al., administraron ceftazidima sódica en lo que se caracterizó como inyección "intradérmica", usando un aguja de 4 mm (Bressolle et al., J. Pharm. Sci. 82: 1175-1178, 1993). Esto habría resultado en la inyección a una profundidad de 4 mm debajo de la superficie de la piel para producir la inyección subcutánea actual o funcional, aunque se habría anticipado buena absorción subcutánea en este caso puesto que la ceftazidima sódica es hidrofílica y de peso molecular relativamente bajo. Otro grupo reportó lo que se describió como dispositivo de suministro intradérmica de fármacos (Patente Norteamericana No. 5,007,501). Se indicó que la inyección ocurre a una velocidad lenta y se pretende que el sitio de la inyección este en alguna región debajo de la epidermis, es decir, la interfase entre la epidermis y la dermis o el interior de la dermis o el tejido subcutáneo. Esta referencia, sin embargo, no proporciona enseñanzas de lo que sugerirá un suministro selectivo dentro de la dermis y la referencia tampoco sugiere ninguna ventaja farmacocinética que podría resultar de tal suministro selectiva. Por lo tanto, persiste aquí una necesidad permanente en cuanto a métodos y dispositivos para el suministro de agentes farmacológicos, especialmente agentes de diagnóstico. 2.2 ADMINISTRACIÓN DE AGENTES DE DIAGNÓSTICO PARA EL DIAGNÓSTICO DE ENFERMEDADES El cáncer es una de las condiciones crónicas más significativas del siglo 20. La American Cáncer Society' s Cáncer Facts and Figures, 2003, indica que arriba de 1.3 millones de norteamericanos recibirán un diagnóstico de cáncer este año. En EE.UU., el cáncer es el segundo responsable de una de cuatro muertes sólo con relación a la mortalidad por enfermedades del corazón. En el 2002, el Nacional Institutes of Healt estimó costos totales del cáncer que alcanzan la cifra de $171.6 billones de dólares con $61 billones en gastos directos . Se espera que la incidencia del cáncer se incremente ampliamente ya que en envejecimiento de la población de EE.UU. aumentan adicionalmente el impacto de esta condición. Los regímenes de tratamiento actuales de la quimioterapia y la radiación, establecidos en los años 70 y 80, no han cambiado drásticamente. Estos tratamientos tienen utilidad limitada ya que estos son procesos lastimosos, relativamente no específicos tanto en las células normales y cancerígenas . Otra razón para el progreso lento y continuado en el tratamiento del cáncer es que este surge principalmente como resultado de una anomalía en la regulación a nivel molecular y celular. Aunque el entendimiento científico de los procesos regulatorios celulares se está acelerando, los beneficios de este conocimiento dependen críticamente de la detección caracterización tempranos del cáncer y los niveles celular y molecular en la clínica. Muchos esfuerzos se han enfocado en mejorar la detección del cáncer. Un avance reciente al identificar el cáncer y su propagación es el procedimiento de Biopsia y Mapeado de los Nodos Linfáticos Centinela. En general, este procedimiento quirúrgico identifica la red linfática que drena el área en y alrededor de un tumor. Mapear esta red permite al cirujano visualizar el sistema linfático del paciente, ayudando en la detección de crecimientos cancerosos y a determinar la intervención linfática en la enfermedad. El tejido enfermo y los nodos linfáticos involucrados se pueden retirar con mayor eficiencia y exactitud. La colocación y el número de nodos linfáticos involucrados, afecta las decisiones de' tratamiento subsecuentes . Esto es especialmente importante para los pacientes de cáncer de pecho. El procedimiento centinela emplea la administración intradérmica de un trazador etiquetado con radioisótopos y un tinte. El tinte proporciona el mejoramiento visual en tanto que el trazador ayuda a identificar los nodos linfáticos centinelas que drenan primero el tejido del tumor. El tejido y los nodos, una vez retirados, se evalúan rápidamente por un patólogo que está a la espera, quien examina los nodos y hace evaluaciones importante con respecto a la implicación del cáncer. En su mayor parte, la macrometástasis se puede identificar, en tanto que la micrometástasis requiere un examen más extenso después de la cirugía. Juntos, el cirujano y el patólogo deciden cuando tejido adicional, así como cuantos de los nodos linfáticos, deben ser removidos .

Un problema con el procedimiento de Biopsia y Mapeado de los Nodos Centinela es su carencia de sensibilidad y especificidad. La identificación de la invasión del cáncer dentro de los nodos linfáticos se hace por observación macroscópica. La micrometástasis no puede ser detectada durante el procedimiento. Los reactivos usados son no específicos y no ayudan a identificar las células fuera de lo común. La adición de reactivos específicos, mejora en este modo la sensibilidad, dando a los citólogos y al cirujano una señal más específica y sensible que permitirá la identificación de las células fuera de lo común en el tejido. El suministro intradérmico de estos reactivos se ha desarrollado y usado para sustituir el suministro subcutáneo, puesto que el suministro intradérmico elimina la señal de fondo del tejido que rodea los nodos linfáticos. El suministro intradérmico manual actual se emplea para reducir la señal de fondo debida al tinte en los tejidos no linfáticos. A pesar de las ventajas obvias, la habilidad y experiencia necesarias para llevar a cabo de un modo fiable las biopsias de nodos centinela es una barrera significativa para su uso clínico extendido. De manera similar, las enfermedades infecciosas son responsables de morbidez y mortalidad significativas. Por ejemplo, la CDC estima que 42 millones de personas están infectadas con el VIH alrededor del mundo. Los métodos de diagnóstico actuales se basan por lo general en ensayos in vitro para la caracterización de diagnóstico. Sin embargo, la información con respecto al lugar de la enfermedad se pierde por lo tanto. Esta información es de importancia potencial para la escenificación y la selección de la terapia. La presente invención describe un nuevo método para caracterizar una enfermedad, incluyendo las infecciones, usando agentes de detección específicos. 3. BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona un método para administrar uno o más agentes biológicamente activos, preferiblemente un agente de diagnóstico, a la piel de un sujeto, en el cual, el agente biológicamente activo se suministra al compartimiento intradérmico (ID) de la piel del sujeto. La presente invención se basa en parte en el descubrimiento inesperado por los inventores de que cuando tales agentes se administran al compartimiento ID, estos se transportan al sistema linfático rápidamente en comparación con los modos de suministro convencionales, incluyendo el suministro subcutánea y el suministro Mantoux ID, y por lo tanto proporciona los beneficios descritos aquí. Aunque no pretendiendo estar comprometidos por un mecanismo de acción particular, los agentes administrados de acuerdo con los métodos de la invención se transportan in vivo a través del sistema linfático local, se excretan en la circulación de sangre sistémica y dentro de los ambientes de tejidos más profundos. El agente se degrada o se metaboliza después por ejemplo por el hígado, o los ríñones o el bazo. Aunque no pretendiendo estar comprometidos por un mecanismo particular de acción, es la manipulación biomecánica de la matriz extracelular (ECM) a través del suministro preciso de agentes en el compartimiento intradérmico lo que permite la asimilación rápida dentro de las redes linfáticas locales y los nodos linfáticos por medio de los métodos descritos aquí.

La presente invención proporciona un método mejorado para el suministro de agentes biológicamente activos, en la medida en que proporciona entre otros beneficios, la asimilación rápida en las linfáticas locales, tener como objetivo mejorado un tejido particular, es decir, la deposición mejorada del agente administrado en el tejido particular, es decir, el grupo o capa de células que juntas llevan a cabo una función especifica, biodisponibilidad sistémica mejorada, biodisponibilidad mejorada del tejido, deposición mejorada de un volumen preseleccionado del agente a ser administrado, cinética específica del tejido mejorada (es decir, incluye farmacodinámica biológica y farmacocinética biológica mejoradas) biológica y farmacodinámica (PD) , y biológica y farmacocinética (PK) rápidas. Tales beneficios de la invención se mejoran sobre otros métodos para administrar agentes biológicamente activos, los cuales depositan el agente dentro de compartimientos de tejidos más profundos que el compartimiento intradérmico, incluyendo por ejemplo, el compartimiento subcutáneo y el compartimiento intramuscular. Tales beneficios de los métodos de la invención son especialmente útiles para la administración de agentes de diagnóstico. El suministro intradérmico de un agente de diagnóstico de acuerdo con los métodos de la invención deposita el agente de diagnóstico dentro de los compartimientos intradérmicos y linfático, creando así una concentración rápida y biológicamente significativa del agente de diagnóstico en estos compartimientos. Por lo tanto se pueden llevar a cabo diagnósticos rápidos usando menos agente de diagnóstico con las ventajas significativas resumidas aquí.

Los agentes activos administrados intradérmicamente tienen biodisponibilidad mejorada del tejido en un tejido particular, incluyendo pero no limitados a, el tejido de la piel, el tejido linfático (por ejemplo, los nodos linfáticos) , el tejido mucoso, el tejido reproductivo, el tejido cervical, el tejido vaginal, y cualquier parte del cuerpo que consista de tipos diferentes de tejidos que llevan a cabo una función particular, es decir, un órgano, incluyendo pero no limitados a, los pulmones, el bazo, el colon, el timo. En algunas modalidades, el tejido incluye cualquier tejido que interactúa con o es accesible al ambiente, por ejemplo, la piel, el tejido mucoso . La invención abarca cualquier tej ido u órgano con una capa de mucosa. Otros tejidos abarcados por la invención incluyen sin limitación el Sistema Hemolinfoide; el Tejido Linfoide (por ejemplo, el Tejido linfoide asociado con el epitelio y el Tejido linfoide asociado a la Mucosa o MALT (MALT se puede dividir también como el Tejido linfoide organizado asociado a la mucosa (O-MALT) y el tejido linfoide difuso (D-MALT) ) ; el Tejido Linfoide primario (por ejemplo, el timo y la médula ósea) ; El Tejido Linfoide Secundario (por ejemplo, los nodos linfáticos, el bazo, alimentario, respiratorio y Urogenital) . Se apreciará por una persona experimentada en la técnica que el MALT secundario incluye el tejido linfoide asociado al intestino (GALT) ; El Tejido Linfoide Asociado a los bronquios (BALT) , y el sistema genitourinario. El MALT comprende específicamente los nodos linfáticos, el bazo, el tejido asociado con las superficies epiteliales tales como las palatinas y las amígdalas nasofaríngeas, los Parches de Peyer en el intestino delgado y varios nodulos en los sistemas respiratorio y urinogenital, la piel y la conjuntiva del ojo. El O-MALT incluye el anillo perifaríngeo linfoide de las amígdalas (palantina, lingual, nasofaríngeo y de las trompas) , los nodulos esofágicos y el tejido linfático disperso por todo el tracto alimentario desde el duodeno hasta el conducto anal . El suministro de un agente biológicamente activo de acuerdo con los métodos de la invención resulta en la biodisponibilidad mejorada del tejido en comparación a cuando el mismo agente se administra al compartimiento subcutáneo (SC) o cuando el mismo agente se administra por el método de Mantoux intradérmico (ID) . La biodisponibilidad del tejido mejorada de los agentes administrados de acuerdo con los métodos de la invención es particularmente útil cuando se administran los agentes de diagnóstico al compartimiento ID, ya que esto reduce la cantidad de agente de diagnóstico requerida para cada procedimiento de diagnóstico, los cuales pueden ser difíciles y costosos de obtener. La cantidad reducida del agente de diagnóstico reduce además la probabilidad de efectos secundarios asociados con el procedimiento de diagnóstico, por ejemplo, la toxicidad. Los agentes biológicamente activos administrados intradérmicamente tienen biodisponibilidad del tejido mejorada en un tejido particular, en comparación a cuando se administra el mismo agente a un compartimiento de tejido más profundo tales como el compartimiento SC y el compartimiento IM. La biodisponibilidad del tejido mejorada de los agentes administrados de acuerdo con los métodos de la invención se puede determinar usando los métodos y los parámetros conocidos por aquellas personas experimentadas en la técnica, por ejemplo, midiendo la cantidad total del agente acumulado en un tejido particular usando, por ejemplo, los métodos histológicos conocidos por aquellas personas experimentadas en la técnica y descritos aquí. Alternativamente, la biodisponibilidad del tejido mejorada de los agentes se puede evaluar como la cantidad del agente presentado al tejido particular, la cantidad del agente acumulado por masa de volumen de un tejido particular, la cantidad del agente acumulada por unidad de tiempo en una masa o volumen particular de un tejido particular. Los agentes biológicamente activos administrados de acuerdo con los métodos de la invención se depositan en el compartimiento intradérmico y se distribuyen primero con alta biodisponibilidad al tejido linfático local en el sitio del suministro, seguido por un suministro linfático más difundida en la circulación general. En algunas modalidades, los métodos de la presente invención son particularmente efectivos para el diagnóstico de una enfermedad, trastorno, o infección en los tejidos más profundos, por ejemplo, la detección in vivo de un a infección en un órgano o tejido tal como los pulmones, o la infamación de un órgano o tejido tales como la apéndice o las articulaciones .

Los agentes biológicamente activos administrados intradérmicamente, especialmente los agentes de diagnóstico, exhiben efecto inicial y eliminación más rápidos versus el suministro convencional incluyendo el suministro SC y el suministro de Mantoux ID. Los métodos de la invención confieren por lo tanto varias ventajas cuando se administra un agente de diagnóstico al compartimiento ID de la piel de un sujeto. Primero, los métodos descritos aquí reducen los efectos secundarios potenciales y las incomodidades debidos a los procedimientos de diagnóstico. Segundo, estos permiten la prueba rápida y repetida de procedimientos secuenciales en una sola sesión de diagnóstico. Tercero, estos reducen el tiempo requerido en instalaciones médicas o de formación de imágenes costosas. Cuarto, estos facilitan los estudios en tiempo real de la fisiología. Quinto, estos reducen la señal de fondo potencial generada por los reactivos de diagnóstico no enlazados y no eliminados. Sexto, los pacientes experimentan dolor reducido por los métodos de la invención en comparación con el dolor percibido del suministro IV, las inyecciones SC, las inyecciones de Mantoux, o la biopsia quirúrgica. Los agentes biológicamente activos administrados, incluyendo los agentes de diagnóstico de acuerdo con los métodos de la invención se prefieren sobre los modos tradicionales de suministro que incluyen el suministro SC y el suministro de Mantoux ID puesto que se incrementa la cantidad de la dosis preseleccionada del agente depositado en el tejido linfático, cuando se mide, por ejemplo, usando los métodos histopatológicos y otros métodos conocidos por una persona experimentada en la técnica, tales como la Separación de Células Activada por Fluorescencia (FACS) y métodos de formación de imágenes descritos aquí . Como se usa aquí, el suministro al compartimiento intradérmico o administrado intradérmicamente quiere decir el suministro de un agente biológicamente activo dentro de la dermis de tal manera que el agente alcanza fácilmente la dermis papilar abundantemente vascularizada y se absorbe rápidamente dentro de los capilares sanguíneos y/o los vasos linfáticos para quedar biológicamente biodisponible. Tal puede resultar de la colocación del agente en la región superior de la dermis, es decir, la dermis papilar o en la porción superior de la dermis reticular relativamente menos vascular de modo tal que el agente se difunde fácilmente dentro de la dermis papilar. El suministro controlada de un agente biológicamente activo en este compartimiento dérmico debajo de la dermis papilar en la dermis reticular, pero suficientemente arriba de la interfase entre la dermis y el tejido subcutáneo, permitiría una migración eficiente (hacia afuera) del agente (no perturbado) al lecho microcapilar vascular y linfático (en la dermis papilar) , donde este se puede absorber en la circulación vía estos microcapilares sin ser secuestrado durante el transporte por cualquier otro compartimiento del tejido cutáneo. En algunas modalidades, la colocación de un agente predominantemente a una profundidad de al menos aproximadamente 0.3 mm, más preferiblemente de al menos aproximadamente 0.4 mm y más preferiblemente de al menos aproximadamente 0.5 mm a una profundidad de no más de aproximadamente 2.5 mm, más preferiblemente, no más de aproximadamente 2.0 mm y más preferiblemente no más de aproximadamente 1.7 mm, resultará en la absorción rápida del agente . Aunque no pretendiendo estar comprometidos por un mecanismo de acción particular, la colocación del agente biológicamente activo predominantemente a profundidades mayores y/o dentro de la porción inferior de la dermis reticular puede resultar en la absorción menos efectiva del agente por las linfáticas, ya que el agente se absorberá lentamente en la dermis reticular menos vascular o en el compartimiento subcutáneo. Los agentes biológicamente activos, incluyendo los agentes de diagnóstico administrados de acuerdo con los métodos de la presente invención lograrán concentraciones máximas mayores de los agentes y permitirán dosificaciones totales reducidas. Por lo tanto, se puede reducir la dosis, proporcionando un beneficio económico, así como un beneficio fisiológico puesto que las cantidades menores del fármaco o el agente de diagnóstico deben ser eliminadas por el cuerpo. Otro beneficio de la invención es el no cambio en las velocidades de eliminación sistémicas o los mecanismos de eliminación intrínsecos de los agentes biológicamente activos, incluyendo los agentes de diagnóstico. Esto indica que esta ruta de dosificación no tiene cambios en el mecanismo biológico para la eliminación sistémica. Esta es una ventaja desde un punto de vista regulatorio, ya que las vías de degradación y eliminación no necesitan ser investigadas antes de la presentación por la aprobación de la FDA. Esto también es benéfico desde un punto de vista farmacocinético, puesto que esto permite la predicibilidad de los regímenes de dosificación. Algunos agentes pueden ser eliminados del cuerpo más rápidamente si sus mecanismos de eliminación son dependientes de la concentración. Puesto que el suministro ID resulta en Cmax mayores, la velocidad de eliminación puede ser alterada, aunque el mecanismo intrínseco permanezca sin cambios . Los beneficios mejorados asociados con el suministro ID de los agentes biológicamente activos de acuerdo con los métodos de la invención se pueden lograr usando no sólo sistemas de inyección a base de microdispositivos, sino otros sistemas tales como la inyección balística sin agujas o libre de agujas de fluidos o polvos en el compartimiento ID, ionotoforesis mejorada a través de microdispositivos, y deposición directa de fluidos, sólidos, u otras formas de dosificación en la piel. En las modalidades específicas, el suministro del agente biológicamente activo se logra a través de la inserción de una aguja o cánula dentro del compartimiento intradérmico de la piel del sujeto. El suministro intradérmico de los agentes de diagnóstico de acuerdo con la presente invención son particularmente benéficas en el diagnóstico de enfermedades, incluyendo enfermedades crónicas y agudas, las cuales incluyen, pero no se limitan a, linfoma, leucemia, cáncer de pecho, melanoma, cáncer colorectal, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de pulmón, metástasis de cáncer, incluyendo micrometástasis, infecciones virales, por ejemplo, VIH, RSV, trastornos inmunes tales como rechazos, trastornos metabólicos, enfermedades o trastornos del sistema linfático, cualquier enfermedad que afecta los nodos linfáticos, y enfermedades infecciosas. Enfermedades crónicas de acuerdo con la U.S. Nacional Center for Health Statics se refiere a una enfermedad o trastorno el cual subsiste por tres meses o más. Aunque no pretendiendo estar comprometidos por un mecanismo de acción particular, los agentes de diagnóstico administrados de acuerdo con los métodos de la invención se depositan en el compartimiento intradérmico y se asimilan por el sistema linfático, donde su reconocimiento y enlazamiento de células particulares en un tejido particular indica la presencia de células o estados enfermos . La presente invención es útil para procedimientos de diagnóstico incluyendo, pero no limitados a métodos quirúrgicos, biopsias, biopsias guiadas por pantalla o formación de imágenes . La presente invención proporciona métodos mejorados para el diagnóstico y/o detección de una enfermedad, por ejemplo, cáncer, mejorando la sensibilidad, la cantidad de agente depositado, la biodisponibilidad del tejido, efecto inicial y eliminación más rápidos del agente de diagnóstico administrado. La invención proporciona un método para el suministro de la menos un agente de diagnóstico para la detección de una enfermedad, en particular el cáncer, que comprende administrar el agente en el compartimiento ID de la piel de un sujeto a una velocidad, volumen y presión controlados, de modo que el agente se deposita en el compartimiento ID y es asimilado por la vasculatura linfática.

Los métodos de la invención son particularmente mejorados sobre los procedimientos de detección para la detección de un nodo centinela de tumor, por ejemplo, el nodo centinela de tumor de pecho, o un nodo linfático que drena el tumor en un sujeto humano, puesto que más del 75% del volumen pre-seleccionado del agente de diagnóstico se deposita en el compartimiento intradérmico, con relación a cuando el mismo volumen pre-seleccionado se administra al compartimiento intradérmico por medio de los métodos tradicionales de suministro de tales agentes, por ejemplo, el método de Mantoux ID. La presente invención proporciona métodos mejorados para el procedimiento de biopsia de nodo centinela actual y el procedimiento quirúrgico de mapeado mejorando la absorción y la biodisponibilidad de los agentes de diagnóstico al sistema linfático local . La invención proporciona un método para el suministro de al menos un agente de diagnóstico para la detección de un nodo centinela de tumor, por ejemplo, el nodo centinela de tumor de pecho, o un nodo linfático gue drena el tumor en un sujeto humano, que comprende administrar el agente dentro del compartimiento intradérmico de la piel del sujeto humano de modo que el agente se transporta al sistema linfático local. En otras modalidades, la invención proporciona un método para el suministro de al menos un agente de diagnóstico para la detección de un nodo centinela de tumor, por ejemplo, el nodo centinela de tumor de pecho, o un nodo linfático que drena el tumor en un sujeto humano, que comprende administrar el agente en el compartimiento intradérmico de la piel del sujeto humano de modo que el agente tiene una mayor biodisponibilidad del tejido en comparación a cuando el mismo agente se administra por el método ID de Mantoux. En aun otras modalidades específicas, la invención proporciona un método para el suministro de al menos un agente de diagnóstico para la detección de un nodo centinela de tumor, por ejemplo, el nodo centinela de tumor de pecho o un nodo linfático que drena el tumor en un sujeto humano, que comprende administrar el agente en el compartimiento intradérmico de la piel del sujeto humano de modo que el agente tiene un efecto inicial y eliminación más rápidos en comparación a cuando el agente se administra por el método ID de Mantoux. Los métodos de la invención instantánea proporcionan métodos de diagnóstico mejorados que usan agentes específicos (versus agentes no específicos) para evaluar la eficacia terapéutica de un régimen de tratamiento de una enfermedad, por ejemplo, monitoreando los perfiles genéticos celulares al evaluar la regulación y la expresión genética a través del tiempo. Tradicionalmente, el análisis in vitro de los perfiles genéticos celulares se han usado para evaluar la regulación y expresión genéticas a través del tiempo, como una herramienta al evaluar la eficacia terapéutica. Tales métodos in vitro tienen numerosas deficiencias, incluyendo pero no limitadas a, inexactitudes, la remoción de células del cuerpo puede provocar la destrucción de ARN y el ADN alterando por ello el perfil genético en el espécimen, la información sobre el locus morfológico de la lesión genética se pierde potencialmente usando los métodos ex vivo, y la diferenciación celular y la regulación se pueden ver influenciadas por la remoción del ambiente extracelular in vivo. Usando los métodos de la presente invención, el suministro intradérmico de agentes de diagnóstico específicos capaces de asociarse y/o enlazarse a un marcador específico para una enfermedad, hace posible la evaluación de la enfermedad cuando existe en el paciente. Por lo tanto, los métodos enseñados por la presente invención influencian las elecciones de las terapias disponibles para el profesional . Los métodos de la invención son particularmente útiles para los métodos de diagnóstico y terapia integrados . El diagnóstico exacto de una enfermedad es en gran medida una necesidad insatisfecha por ejemplo en oncología, donde pocos agentes de diagnóstico indican cuales elecciones terapéuticas tendrán éxito con alguna seguridad. Los métodos de la invención proporcionan métodos mejorados para el diagnóstico y terapia integrados por el suministro de formulaciones que comprenden uno o más agentes de diagnóstico en combinación con uno o más agentes terapéuticos. La presente invención proporciona métodos para buscar como objetivo los agentes de diagnóstico y agentes terapéuticos para células particulares en un tejido particular. En una modalidad especifica, la invención abarca administrar formulaciones que comprenden uno o más agentes de diagnóstico en combinación con uno o más agentes terapéuticos al compartimiento ID de la piel de un sujeto tal que la acción especifica del agente de diagnóstico activa una acción por ejemplo, el efecto biológico, del agente terapéutico. La combinación de el suministro de diagnóstico buscado como objetivo con el suministro terapéutica buscada como objetivo de acuerdo con los métodos de la invención permite el cuidado mejorado del paciente. Esta modalidad enseña las ventajas de combinar el suministro terapéutica intradérmica con agentes de diagnóstico. La combinación de administrar un agente de diagnóstico y uno terapéutico al compartimiento ID proporciona una herramienta poderosa para mejorar el tratamiento de una enfermedad en un sujeto. 3.1 DEFINICIONES Como se usa aquí, "intradérmico (a) " se refiere al suministro de un agente biológicamente activo dentro de la dermis de tal manera que el agente alcanza fácilmente la dermis papilar abundantemente vascularizada y se absorbe rápidamente en los capilares sanguíneos y/o los vasos linfáticos para volverse sistémicamente biodisponible. Tal puede resultar de la colocación del agente en la región superior de la dermis, es decir, la dermis papilar o en la porción superior de la dermis reticular relativamente menos vascular tal que el agente se difunde fácilmente en la dermis papilar. El suministro controlada de un agente biológicamente activo en este compartimiento dérmico debajo de la dermis papilar en la dermis reticular, pero suficiente arriba de interfase entre la dermis y el tejido subcutáneo, permitiría una migración eficiente (hacia afuera) del agente al lecho microcapilar vascular y linfático (no perturbado) , donde este se puede absorber dentro de la circulación vía estas microcapilaridades sin ser secuestrado durante el transporte por otro compartimiento del tejido cutáneo. En algunas modalidades, la colocación de un agente biológicamente activo, predominantemente a una profundidad de al menos aproximadamente 0.3 mm, más preferiblemente a al menos aproximadamente 0.4 mm y más preferiblemente a al menos aproximadamente 0.5 mm hasta una profundidad de no más de 2.5 mm, más preferiblemente, no más de aproximadamente 2.0 mm y más preferiblemente no más de aproximadamente 1.7 mm resultará en la absorción rápida del agente . Aunque no pretendiendo estar comprometido por un mecanismo de acción particular, la colocación del agente biológicamente activo predominantemente a profundidades mayores y/o dentro de la porción inferior de la dermis reticular o el compartimiento SC lo cual resulta en la absorción menos efectiva por las linfáticas. Como se usa aquí, "suministro intradérmico" significa el suministro de los agentes al compartimiento intradérmico como se describe por Pettis et al., en WO 02/02179 Al (PCT/US01/20782) y la Solicitud Norteamericana con número de serie 09/606, 909; cada una de las cuales se incorpora aquí como referencia en su totalidad. Como se usa aquí "suministro ID de Mantoux" se refiere a la prueba de tuberculina ID de Mantoux donde un agente se inyecta en un ángulo poco profundo a la superficie de la piel, usando una aguja de calibre 27 o 30 y una jeringa estándar (Véase, e. g., Flynn et al., Chest 106: 1463-5, 1994, el cual se incorpora aquí como referencia en su totalidad) . La técnica de Mantoux involucra insertar la aguja dentro de la piel lateralmente, después "mover sinuosamente" la aguja más aun dentro del tejido ID. La técnica se conoce por ser muy difícil de llevar a cabo y requiere entrenamiento especializado. Un grado de imprecisión en la colocación del suministro resulta en un número significativo de resultados de prueba negativos falsos. Además, el método involucra una inyección localizada para provocar una respuesta en el sitio de la inyección y la técnica de Mantoux no ha llevado al uso de la inyección intradérmica para el suministro de los agentes . Cuando se administra el agente por medio de Mantoux ID, la aguja es substancialmente paralela a la superficie de la piel, preferiblemente a un ángulo no mayor que 30° y se describe mejor como entre 10° y 15°. La deposición del injectado o sustancia a inyectarse de Mantoux, cuando se lleva a cabo correctamente, resulta en un patrón elíptico con el inyectado en los tejidos SC e ID. La deposición ID como se describe aquí resulta e? un patrón de deposición redondo del injectado contenido en el tejido ID. Cuando se administra un agente por el método ID de Mantoux, el ángulo de inserción de la aguja es preferiblemente a un ángulo de 15° paralelo a la superficie de la piel. El examen histológico del sitio de la inyección después que un agente ha sido administrado por Mantoux ID resulta en un patrón de deposición de roncha elíptica, y una parte substancial del agente administrado queda depositado en el compartimiento SC de la piel en lugar que el compartimiento ID. El método ID de Mantoux típicamente se usa clínicamente en procedimientos de diagnóstico tales como los procedimientos de biopsia del nodo centinela para la detección de tumores, sin embargo el método es muy difícil de llevar a cabo y requiere entrenamiento especializado y tiene numerosas limitaciones incluyendo los sitios de suministro, complicaciones de inyección e incomodidad del paciente.

Como se usa aquí, suministro subcutánea se refiere a la deposición de un agente dentro de la capa subcutánea de la piel de un sujeto a una profundidad mayor que 2.5 mm. Como se usa aquí, "farmacocinética, farmacodinámica y biodisponibilidad" son como se describen por Pettis et al., en WO 02/02179 Al (PCT/US01/20782 que tiene una fecha de prioridad del 29 de junio del 2000) . Como se usa aquí, "farmacocinética mejorada" significa biodisponibilidad aumentada, tiempo de retraso reducido (T?ag) , Tma? reducido, velocidades de absorción más rápidas, efecto inicial más rápido y/o Cmax aumentada para una cantidad dada de agente administrado, en comparación con los métodos de suministro convencionales . Como se usa aquí, "biodisponibilidad" significa la cantidad total de una dosificación dada del agente administrado que alcanza el compartimiento sanguíneo. Esta se mide por lo general como el área bajo la curva en una gráfica de concentración vs . tiempo. Como se usa aquí, "tiempo de retraso" significa el retardo entre el suministro del agente y el tiempo para los niveles de plasma o sangre mensurables o detectables . Tmax es un valor que representa el tiempo para lograr la concentración sanguínea máxima del agente, y Cma? es la concentración sanguínea máxima alcanzada con una dosis y un método de suministro dados . El tiempo para el efecto inicial es una función de T?ag/- Tmax y Cmax, ya que todos estos parámetros influencian el tiempo necesario para lograr una concentración sanguínea (o del tejido buscado como objetivo) necesaria para realizar un efecto biológico. Tmax y Cmax se pueden determinar por la inspección visual de los resultados gráficos y frecuentemente pueden proporcionar la información suficiente para comparar dos métodos de suministro de un agente. Sin embargo, los valores numéricos se pueden determinar con más precisión por análisis cinético usando modelos matemáticos y/o otros medios conocidos por aquellas personas con experiencia en la técnica. Como se usa aquí, el término "partículas" incluye cualquier elemento formado que comprende monómeros, polímeros, lípidos, anfifilos, ácidos grasos, esteroides, proteínas, y otros materiales conocidos por agregarse, auto-ensamblarse o los cuales se pueden procesar en partículas. Las partículas también incluyen las morfologías unilaminar, multilaminar, trayectorias tortuosas, aleatorias y sólidas. Los ejemplos representativos incluyen liposomas, materiales microcristalinos, agentes de contraste MRI particulados, perlas poliméricas (es decir, látex y HEMA) , pero más preferiblemente las partículas huecas, tales como las microburbujas , útiles para la formación de imágenes por ultrasonido . Como se usa aquí, "tejido" se refiere a un grupo o capa de células que juntas forman una función que incluye que pero no se limita a tejido de la piel, tejido linfático (por ejemplo, nodos linfáticos), tejido mucoso, tejido reproductivo, tejido cervical, tejido vaginal y cualquier parte del cuerpo que consista de diferentes tipos de tejidos y que lleva cabo una función particular, es decir, un órgano, incluyendo pero no limitados a pulmones, bazo, colon, timo. Como se usa aquí, tejido incluye cualquier tejido que interactúa con o es accesible al ambiente, por ejemplo, la piel, el tejido mucoso. Como se usa aquí, "biodisponibilidad del tejido" significa la cantidad de un agente que se encuentra disponible biológicamente in vivo en un tejido particular. Estas cantidades se miden comúnmente como las actividades que se pueden relacionar con el enlazamiento, etiquetado, detección, transporte, estabilidad, efecto biológico, u otras propiedades mensurables útiles para el diagnóstico y/o la terapia. Además, se entiende que la definición de "biodisponibilidad del tejido" también incluye la cantidad de un agente disponible para usarse en un tejido particular. "Biodisponibilidad del tejido" incluye la cantidad total del agente acumulada en un tejido particular, la cantidad del agente presentada al tejido particular, la cantidad del agente acumulada por masa/volumen del tejido particular, y la cantidad del agente acumulada por unidad de tiempo en una masa/volumen particular del tejido particular. La biodisponibilidad del tejido incluye la cantidad de un agente que se encuentra disponible in vivo en un tejido particular o una colección de tejidos tales como aquellos que constituyen la vasculatura y/o varios órganos del cuerpo (es decir, una parte del cuerpo que consiste de diferentes tipos de tejidos y que lleva a cabo una función particular. Los ejemplos incluyen el bazo, timo, pulmones, nodos linfáticos, corazón y cerebro) . Como se usa aquí, "suministro convencional" significa cualquier método para administrar algún material que tiene, o se piensa que tiene, cinéticas biológicas y dinámicas biológicas mejoradas similares a, o más lentas que, el suministro subcutánea. El suministro convencional puede incluir los métodos de suministro subcutáneo, iontoforetica, e intradérmica tales como aquellos descritos en US 5,800,420 de Gross . Como se usa aquí, "entidades biológicas" incluyen, pero no se limitan a células, grupos o colecciones de células, bacterias, virus, patógenos, proteínas, placas y agentes parásitos.

Como se usa aquí, "suministro dirigido a un objetivo" significa el uso de el suministro intradérmico a tejidos y/u órganos específicos particulares y/o entidades biológicas no accesados de otra manera o concebidos por ser accesados por los métodos de suministro convencionales. Los tejidos buscados como objetivos incluyen, pero no se limitan a, el compartimiento intradérmico cerca del sitio de suministro y las estructuras linfáticas locales incluyendo las linfáticas iniciales, los vasos, ductos linfáticos y los nodos linfáticos. Los tejidos buscados como objetivos también incluyen pero no se limitan a, el tejido de la piel, el tejido linfático (por ejemplo los nodos linfáticos) , el tejido mucoso, el tejido reproductor, el tejido cervical, el tejido vaginal y cualquier parte de cuerpo que consista de tipos diferentes de tejido y que lleve a cabo una función particular, es decir, un órgano, incluyendo pero no limitados a pulmones, bazo, colon, timo, y cualquier tejido que interactúe con o sea accesible por el ambiente, por ejemplo, la piel, el tejido mucoso. Como se usa aqui, "agente especifico" incluye tales compuestos como proteínas, inmunoglobulinas (por ejemplo, Igs multi-específicos, Igs de cadena simple, fragmentos de Ig, anticuerpos policlonales y sus fragmentos, anticuerpos monoclonales y sus fragmentos) , péptidos (por ejemplo, receptores peptídicos, selectinas) , proteínas de enlace (proteína de enlace a maltosa, proteína de enlace de glucosa-galactosa) , Nucleótidos, Ácidos Nucleicos (por ejemplo, PNAs, ARNs, adaptadores de ARN/ADN modificados) , Receptores (por ejemplo, receptor de Acetilcolina) , Enzimas (por ejemplo, Glucosa Osicasa, VIH Proteasa y transcriptasa invertida) , Carbohidratos (por ejemplo, NCAMs, ácidos Siálicos) , Células (por ejemplo, células sensibles a Insulina y Glucosa) , bacteriófagos (por ejemplo, fagos filamentosos) , virus (por ejemplo, VIH) agentes quimioespecificos (por ejemplo, cyptands, éteres de corona, boronatos) . Como se usa aquí "agentes quimioespecificos" significa moléculas sintetizadas químicamente que se enlazan específicamente a biomoléculas . Los ejemplos de agentes quimioespecificos incluyen, pero no se limitan a PNAs tales como GeneGRIP como se comercializa por Gene Therapy Systems Inc., fotoaptameros como se comercializan por SomaLogic, enlazadores de ácido siálico como se describen por Shinkai, S, et. al., J A. Chem. Soc. 2001, 123. 10239-10244, Wang et al., Current Organic Chemistry 2002, 6, 1285-1317, Striegler, S. Current Organic Chemistry 2003, 7, 81-102, Wang, et . al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 2002, 2175-2177, y ácidos boronicos para la detección de carbohidratos como se describe en US 2002/0143475 (Análisis Colorimétrico y Fluorometrico de Carbohidratos) . Todas las referencias mencionadas arriba se incorporan aquí como referencia en sus totalidades . Como se usa aquí, un "agente no específico" incluye los compuestos tales como tintes, conjugados de tintes, radionucleidos , o elementos formados tales como liposomas, coloides o partículas de látex. Como se usa aquí, "marcador" significa cualquier receptor, molécula u otra entidad química o biológica que se encuentra específicamente en el tej ido que se desea identificar, en particular el tejido afectado por una enfermedad o trastorno (por ejemplo, una metástasis) . Donde se usa un anticuerpo como el trazador, el marcador es un antígeno. Los ejemplos de marcadores antígenos incluyen CD4, CD8, CD90 y otros marcadores antigénicos mencionados aquí, así como aquellos que se conocen en la técnica. Los ejemplos no limitantes de tales marcadores incluyen: proteínas o receptores tales como Her2/neu o el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) para el cáncer de pecho, melastatina para el melanoma, CD22 para el linfoma, y VIH proteasa para la infección del VIH. Los marcadores también pueden ser carbohidratos tales como ácidos siálicos para la metástasis o NCAMs para la enfermedad neuroendocrina o cáncer, las células que son sensibles a la glucosa i la insulina para la diabetes, virus o bacteriófagos para el VIH o enfermedades infecciosas, nucleótidos o ácidos nucleicos tales como aptameros para la detección de por caracterización genética de enfermedades o la detección del nivel molecular de enfermedades. Un ejemplo de tales enfermedades es el linfoma Difuso de Células B Grandes . Como se usa aquí, los términos "trastorno" y "enfermedad" se usan de manera intercambiable para referirse a una condición en un sujeto. Las enfermedades incluyen cualquier interrupción, cesación, o trastorno de las funciones corporales, sistemas u órganos. Las enfermedades pueden incluir cualquier perturbación de . Como se usa aquí, el término "cáncer" se refiere a un neoplasma o tumor que resulta del crecimiento anormal descontrolado de células. Como se usa aquí, el cáncer incluye explícitamente, leucemias y linfomas. El término "cáncer" se refiere a una enfermedad que involucra células que tienen el potencial para extenderse como metástasis a sitios alejados y exhiben rasgos fenotípicos que difieren de los de las células no cancerosas, por ejemplo, la formación de colonias en un substrato tridimensional tales como agar blando o la formación de redes tubulares o matrices similares a redes en una membrana de basamento tridimensional o preparación de matriz extracelular. Las células no cancerígenas no forman colonias en el agar blando y forman distintas estructuras similares a esferas en preparaciones de membrana de basamento tridimensional o matriz extracelular. Las células cancerosas adquieren un conjunto característico de capacidades funcionales durante su desarrollo, aunque a través de varios mecanismos. Tales capacidades incluyen evadir la apoptosis, autosuficiencia en las señales de crecimiento, insensibilidad a las señales de anti-crecimiento, invasión/metástasis de tejidos, potencial explicativo ilimitado, y angiogénesis sostenida. El término "células cancerosas" está hecho para abarcar tanto las células cancerosas pre-malignas y malignas. En algunas modalidades, cáncer se refiere a un tumor benigno, el cual ha permanecido confinado a un sitio. En otras modalidades, cáncer se refiere a un tumor maligno, el cual ha invadido y destruido las estructuras corporales vecinas y se propaga a sitios distantes. En aun otras modalidades, el cáncer se asocia con un antígeno de cáncer específico. Como se usa aquí, los términos "sujeto" y "paciente" se usan de manera intercambiable . Como se usa aquí, un sujeto es preferiblemente un mamífero, tales como un no primate (por ejemplo, vacas, cerdos, caballos, gatos, perros, ratas, etc.) y un primate (por ejemplo, monos y humanos) , más preferiblemente un humano. 4. DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La FIG. 1 NODOS LINFÁTICOS DE RATÓN es un diagrama que representa la localización de los nodos linfáticos de drenaje en el ratón. FIGS. 2A-E SUMINISTRO ID A LAS REDES LINFÁTICAS A. muestra los nodos linfáticos superficiales muy teñidos en el ratón 1 hora después del suministro intradérmico de solución de Azul Evans al 1% por el método de la presente invención. B: Muestra La Inyección Intradérmica (ID) vs la Subcutánea de tinte Azul de Evans en Cerdos Yorkshire . Diagrama de cerdo que muestra la localización de los sitios de inyección.

C. Inyecciones ID y SC. La flecha indica la localización de la inyección SC. D. inyecciones ID y SC post mortem. E. Resección del sitio de inyección ID y SC. Nótese el tráfico del tinte Azul Evans desde el sitio de la inyección ID al nodo inguinal y el depósito del tinte en el sitio de la inyección SC. FIGS. 3A y D. SUMINISTRO ID A LAS REDES LINFÁTICAS A. muestra el porcentaje de células positivas para CD90 y CD4 o CD8 o CD19 en el nodo linfático de drenaje a través del tiempo .

B. muestra gráficas de citometría de flujo de la suspensión de células etiquetadas de los nodos linfáticos de naive, 30 minutos, y 1-hora después de la inyección del anticuerpo anti-CD90-FITC en ratones (n = 2) FIGS. 4A-C. SUMINISTRO ID A LAS REDES LINFÁTICAS A. muestra el teñido fluorescente in vivo del tejido linfático con secciones de anticuerpo inyectadas a 1 hora después de la inyección de anticuerpo FITC bajo magnificación 40 veces. B muestra el teñido H y E de las células a 1 hora después de la inyección de anticuerpo FITC bajo magnificación a 40 veces. C muestra la sobreposición de 4a y 4b. La FIG. 5 PERFIL DE ADMINISTRACIÓN ID muestra la trayectoria del agente biológicamente activo después de ser administrado intradérmicamente, por el método de la presente invención. La FIG. 6 DIAGNÓSTICOS BUSCADOS COMO OBJETIVOS IN VIVO muestra un diagrama de los objetivos potenciales para el suministro en el sistema linfático. La FIG. 7A Y 7B DIAGNÓSTICOS BUSCADOS COMO OBJETIVO POR ID IN VIVO. Muestra perfiles de tiempo comparativos para el suministro ID y SC (SubQ) de anticuerpo etiquetado a los nodos linfáticos de ratones.

A. Método de Suministro. Comparación del suministro ID y SC a los Nodos Linfáticos B. Detección Mejorada de células Linfáticas usando perfil de Tiempo de Suministro ID de células etiquetadas con anticuerpos en los nodos linfáticos de ratones. La FIG. 8 DIAGNÓSTICOS-APLICACIÓN BUSCADOS COMO OBJETIVOS IN VIVO muestra un diagrama de como se puede aplicar el método a un tumor de pecho, y una demostración de etiquetado de células T en el nodo linfático de ratón. La FIG. 9 muestra los resultados de la inyección de 50 ul de EB a través de una aguja 34G, 1.0 mm a una velocidad de 45 uL/min en un cerdo Yorkshire. Las áreas señaladas con un círculo dentro de la dermis reticular, separadas del depósito de la inyección principal, muestran secciones transversales de los vasos linfáticos de drenaje (azul) . Las FIGS. 10 y 11 muestran los resultados de las inyecciones de 100 uL de EB a través de una aguja 34G, 1.0 mm a una velocidad de 45 uL/min en un cerdo de Yorkshire. Las FIGS. 12 y 13 muestran los resultados de la inyección en dos sitios interdérmicamente en el costado de un cerdo Yorkshire con 100 uL de EB a través de una aguja 34G, 1.0 mm a una velocidad de 100 uL/min. La Fig. 14 muestra los resultados de la inyección intradérmicamente en el costado de un cerdo Yorkshire con 100 uL de EB a través de una aguja 34G, 1.5 mm a una velocidad de 100 uL/min. La FIG. 15 muestra un ejemplo de vasos linfáticos (azul) de una inyección de 2 mm. Se puede observar en el área señalada con un círculo tanto una sección transversal como una sección longitudinal . La FIG. 16 muestra un ejemplo de los vasos linfáticos (azul) que transportan el tinte AZUL Evans inyectado transdérmicamente desde el sitio de la inyección a los nodos linfáticos inguinales. El inserto muestra un acercamiento del nodo linfático inguinal resecado. Las FIGS. 17A-C muestran el Número de Perlas Fluorescentes Inyectadas presentes en el Nodo Linfático Inguinal a Través del Tiempo. Comparación de la Inyección Intradérmica y Subcutánea. A. Perlas del tamaño de 50 mm B. Perlas del tamaño de 1 µm. C. Perlas del tamaño de 10 µm. FIGS. 18 A-B PORCENTAJE DE CÉLULAS T CD8 POSITIVAS, EN BAZOS DE RATONES. Las gráficas representan el Porcentaje de Células T CD8 Positivas, en bazos de ratones etiquetadas con el anticuerpo CD90-FITC, a través del tiempo. El anticuerpo CD90-FITC se inyecto ID o bien SC en los ratones y los bazos se monitorearon en cuanto a la señal asociada con las células .

FIG. 19. FORMACIÓN DE IMÁGENES DE LA VASCULATURA SANGUÍNEA ABDOMINAL DE CERDOS DESPUÉS DE LA INYECCIÓN DE 12.5 mg DE INYECCIÓN IV DE ICG. La ubicación del nodo Inguinal Derecho se presenta en el recuadro. Sólo se encuentra iluminada la vasculatura sanguínea y no los nodos linfáticos. La formación de imágenes continuó episódicamente por 30 min después de la inyección sin iluminación de los nodos linfáticos. FIGS. 20A-C. DOSIS POR IV ECONÓMICA E INYECCIÓN ID POR MICROAGUJA. El formación de imágenes de la vasculatura linfática y el nodo inguinal de un cerdo enseguida de la inyección de ICG usando una microaguja 34G, de 1 mm de profundidad. A. Tres inyecciones en el abdomen del cerdo (lado izquierdo) , inyección superior 200 uls de 80 ug/mL ICG, 2 inyecciones inferiores 75 uls de 80ug/mL ICG. B. Formación de imágenes de la vasculatura linfática y el nodo linfático inguinal izquierdo del cerdo inmediatamente después de una inyección superior desde A. C. Formación de imágenes de la vasculatura linfática y los nodos inguinales derechos después de 2 inyecciones separadas de 80 ug/mL ICG en la pierna posterior derecha. Nótese la vasculatura linfática individual de cada inyección que se alimenta por separado en los nodos.

FIGS. 21A-D. DEMOSTRACIÓN DE LA VELOCIDAD DE TRANSPORTE DEL TINTE ICG. El ICG se inyectó usando una microaguja 34G, 1 mm de profundidad. La inyección se llevó a cabo arriba de la cadena mamaria izquierda del cerdo. Se calcula que el recorrido de ICG es de 7 cm/seg para esta inyección. FIG. 22 DISPOSITIVO DE AGUJA. Una ilustración esquemática, en perspectiva de un montaje de aguja diseñado de acuerdo con esta invención. FIG. 23 DISPOSITIVO DE AGUJA. Una ilustración en sección transversal parcial de la modalidad en la FIG. 22. FIG. 24 DISPOSITIVO DE AGUJA. La modalidad de la FIG. 22 conectada a un cuerpo de jeringa para formar un dispositivo de inyección. FIG. 25 TÉCNICA DE INYECCIÓN. Una vista en perspectiva de una técnica para efectuar una inyección ID. FIG. 26 TÉCNICA DE INYECCIÓN ID. Una vista en perspectiva de una segunda técnica para efectuar una inyección ID. FIG. 27 TÉCNICA DE INYECCIÓN ID. Una vista en perspectiva de una tercera técnica para efectuar una inyección ID. FIG. 28 TÉCNICA DE INYECCIÓN ID. Una vista en perspectiva de una cuarta técnica para efectuar una inyección ID.

FIG. 29A Y B SUMINISTRO ID DE UN AGENTE DE FORMACIÓN DE IMÁGENES VERDE CARDIO A. INYECCIONES EN LA PIERNA DERECHA POSTERIOR Y LA CADENA MAMARIA DEL COSTADO IZQUIERDO. Nodos linfáticos inguinales izquierdo y derecho iluminados. B. INYECCIONES EN LA PIERNA POSTERIOR DERECHA Y LA CADENA MAMARIA DEL COSTADO IZQUIERDO. Imagen invertida. Nodos inguinales izquierdo y derecho iluminados. FIG. 30 COMPARACIÓN DEL SUMINISTRO MANTOUX E ID . La foto de la inyección Mantoux muestra claramente el rastro de la aguja (línea azul a través de la dermis que lleva al depósito) . La mayoría del EB se inyectó en el SC. La foto del suministro con una aguja 34 G, 1 mm muestra que la inyección fue completamente dentro de la dermis. El drenaje a la red linfática se puede observar fácilmente (señalado con un círculo) . FIGS. 31A y B. GRÁFICAS DE LA PRESIÓN SOSTENIDA MÁXIMA Y PROMEDIO COMO UNA FUNCIÓN DE LA PROFUNDIDAD DE INSERCIÓN TANTO PARA LAS INYECCIONES ABDOMINALES Y DORSALES EN CERDOS. La presión máxima fue la mayor presión individual registrada durante los primeros 100 segundos de la infusión. La presión sostenida promedio fue el promedio para todos los registros desde 100 a 300 segundos. Las presiones sostenidas máximas y promedios para cada configuración de inyección se promediaron juntas y se graficaron. A. Se gráfica la contrapresión promedio como función de la longitud de la aguja. Todas las infusiones en la región abdominal del animal . B. Se gráfica la contrapresión promedio como función de la longitud de la aguja. Todas las infusiones en la región dorsal del animal . FIG. 33. TEÑIDO IN VIVO. Gráfica que representa el porcentaje de células T y B teñidas, in vivo, en los nodos linfáticos de drenaje de ratones. 5. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN. La presente invención proporciona un método para administrar uno o más agentes biológicamente activos, preferiblemente un agente de diagnóstico, a la piel de un sujeto, en el cual el agente biológicamente activo se administra al compartimiento intradérmico (ID) de la piel del sujeto. La presente invención se basa en parte en el descubrimiento inesperado por los inventores de que cuando tales agentes se administran al compartimiento ID, estos se transportan al sistema linfático local rápidamente en comparación con los modos de suministro convencionales, incluyendo el suministro subcutáneo y el suministro ID de Mantoux, proporciona por lo tanto los beneficios descritos aquí . Aunque no pretendiendo estar comprometidos por un mecanismo de acción particular, los agentes administrados de acuerdo con los métodos de la invención se transportan in vivo a través del sistema linfático local, se excretan a la circulación sanguínea sistémica y hacia los ambientes de tejidos más profundos. El agente se degrada o se metaboliza después, por ejemplo, por el hígado, los ríñones o el bazo.

Aunque no pretendiendo estar comprometido por un mecanismo de acción particular, es la manipulación biomecánica de la matriz extracelular (ECM) a través del suministro precisa de los agentes en el compartimiento intradérmico, lo que permite la adsorción rápida en las linfáticas locales y los nodos linfáticos por el método descrito aquí. La presente invención proporciona un método mejorado para el suministro de agentes biológicamente activos que proporciona entre otros beneficios, la absorción rápida en las linfáticas locales, tener como objetivo mejorado a un tejido particular, es decir, la deposición mejorada del agente administrado en el tejido particular, es decir, el grupo o capa de células que juntas llevan a cabo una función especifica, biodisponibilidad sistémica mejorada, biodisponibilidad mejorada del tejido, deposición mejorada de un volumen pre-seleccionado del agente a ser administrado, biológica rápida y farmacodinámica (PD) de cinética especifica del tejido mejorada y biológica y farmacocinética (PK) rápidas. Tales beneficios de los métodos de la invención son especialmente útiles para la administración de agentes de diagnóstico. El suministro intradérmico de un agente de diagnóstico de acuerdo con los métodos de la invención deposita el agente de diagnóstico dentro de los compartimientos intradérmico y linfático creando así una concentración rápida y biológicamente significativa del agente de diagnóstico en estos compartimientos. El diagnóstico rápido se puede llevar a cabo por lo tanto usando menos agente de diagnóstico con ventajas significativas como se resumen aquí.

Los agentes biológicamente activos administrados intradérmicamente tienen biodisponibilidad del tejido mejorada en un tejido particular, incluyendo pero no limitados al tejido de la piel, el tejido linfático (por ejemplo, los nodos linfáticos, el tejido mucoso, el tejido reproductivo, el tejido cervical, el tejido vaginal y cualquier parte del cuerpo que consista de diferentes tipos de tejidos y que lleve a cabo una función particular, es decir, un órgano, incluyendo pero no limitados a pulmones, bazo, colon, timo. En algunas modalidades, el tejido incluye algún tejido que interactúa con o es accesible por el ambiente, por ejemplo, la piel, el tejido mucoso. Otro tejido abarcado por la invención incluye son limitación el Sistema Hemolinfático; : el Tejido Linfático (por ejemplo, el Tejido linfático asociado al Epitelio y El tejido linfático asociado a la Mucosa o MALT (MALT se puede dividir además como el Tejido linfático organizado asociado a la mucosa (O-MALT) y el tejido linfático difuso (D-MALT); El tejido Linfático primario (por ejemplo, el timo y la médula ósea) , el Tejido Linfático Secundario (por ejemplo, el nodo linfático, bazo, alimentario, respiratorio, y Urogenital) . Será apreciado por una persona experimentada en la técnica que el MALT secundario incluye el tej ido linfático asociada intestino (GALT) , el tejido linfoide asociado al sistema respiratorio. El MALT comprende específicamente los nodos linfáticos, el bazo, el tejido asociado con las superficies epiteliales tales como la palantina y las amígdalas nasofaríngeas, los Parches de Peyer en el intestino delgado y varios nodulos en los sistemas respiratorio y urogenital, la piel y la conjuntiva del ojo. El O-MALT incluye el anillo linfático perifaríngeo de las amígdalas (palantina, lingual, nasofaríngeo y de las trompas) , los nodulos Esofágicos y el tejido linfático similar disperso a través del tracto alimentario desde el duodeno hasta el conducto anal . Los agentes biológicamente activos administrados intradérmicamente tienen biodisponibilidad del tejido mejorada en un tejido particular, en comparación a cuando se administra el mismo agente a un compartimiento de tejido más profundo tales como el compartimiento SC y el compartimiento IM. El suministro de un agente biológicamente activo de acuerdo con los métodos de la invención resulta en biodisponibilidad del tejido mejorada en comparación a cuando se administra el mismo agente al compartimiento subcutáneo (SC) o cuando el mismo agente ser administra por medio del método Mantoux intradérmico (nid) . El suministro de un agente biológicamente activo de acuerdo con los métodos de la invención resulta en biodisponibilidad del tejido mejorada en comparación a cuando se administra el mismo agente a un compartimiento de tejido más profundo, por ejemplo, SC, IM. La biodisponibilidad del tejido mejorada de los agentes administrados de acuerdo con los métodos de la invención es útil en particular cuando se administran agentes de diagnóstico al compartimiento ID, ya que esto reduce la cantidad del agente de diagnóstico requerida para cada procedimiento de diagnóstico, el cual puede ser difícil o costoso de obtener. La cantidad reducida del agente de diagnóstico reduce además la probabilidad de efectos secundarios asociados con el procedimiento de diagnóstico, por ejemplo, la toxicidad. La biodisponibilidad del tejido mejorada de los agentes administrados de acuerdo con los métodos de la invención se puede determinar usando los métodos y los parámetros conocidos por aquellas personas experimentadas en la técnica, por ejemplo, midiendo la cantidad total del agente acumulado en un tejido particular usando, por ejemplo, los métodos histológicos conocidos por aquellas personas experimentadas en la técnica y descritos aquí. Alternativamente, la biodisponibilidad del tejido mejorada de los agentes se puede evaluar como la cantidad del agente presente para el tejido particular, la cantidad del agente acumulado por masa o volumen del tejido particular, la cantidad del agente acumulada por unidad de tiempo en una masa o volumen particular del tejido. Los agentes biológicamente activos administrados de acuerdo con los métodos de la invención se depositan en el compartimiento intradérmico y se distribuyen primero con alta biodisponibilidad al tejido linfático local en el sitio del suministro, seguido por un suministro linfático más extendido en la circulación general. En algunas modalidades, los métodos de la presente invención son particularmente efectivos para el diagnóstico de una enfermedad, trastorno o infección en los tejidos más profundos, por ejemplo, la detección in vivo de una infección en un órgano o tejido tal como los pulmones o la inflamación de un órgano o tej ido tales como el apéndice o las articulaciones .

Los agentes biológicamente activos administrados de acuerdo con los métodos de la invención muestran trasporte y absorción inmediatos en un plazo de al menos 5 minutos, al menos 10 minutos, al menos 15 minutos, preferiblemente no más que 20 minutos después de la inyección al sistema linfático, cuando se monitores visualmente en tiempo real usando los métodos comunes en la técnica (por ejemplo, MRI, Rayos X, Ultrasonido, CT, PET, SPRCT, Óptica (fluorescencia, bioluminiscencia, quimioluminiscencia) , fotoacústicos, RAMAM, y SERS formación de imágenes SERS) o in vitro usando los métodos comunes en la técnica (por ejemplo, examen histológico, citometría de flujo) y aquellos descritos aquí, véase la Sección 6.2. Los agentes administrados de acuerdo con los métodos de la invención se transportan al sistema linfático y se depositan en un tejido particular con velocidades de al menos 10 cm por segundo, preferiblemente al menos 5-10 cm por segundo. Será apreciado por una persona experimentada en la técnica que la velocidad a la cual se transporta el agente al sistema linfático, y se deposita en un tejido particular, depende de varios parámetros que incluyen pero no se limitan al volumen de la inyección, la velocidad de la inyección, las características bioquímicas y físicas del agente, y el sitio de la inyección.

En algunas modalidades, los agentes biológicamente activos, incluyendo los agentes de diagnóstico administrados de acuerdo con los métodos de la invención, reconocen y se enlazan específicamente a las células en un tejido particular en el cual se depositan. En otras modalidades, los agentes biológicamente activos administrados de acuerdo con los métodos de la invención, se administran al compartimiento ID de modo que la cantidad de la dosis pre-seleccionada del agente depositado en el tejido objetivo, se incrementa en al menos 0.1% en comparación a cuando el agente se administra fuera del espacio intradérmico, por ejemplo, el compartimiento subcutáneo (SC) , el compartimiento intramuscular (IM) . La invención contempla que la cantidad de dosis pre-seleccionada del agente depositado en el tejido objetivo, se incrementa en al menos 100%, al menos 150%, al menos 200%, al menos 200%, al menos 250%, preferiblemente en al menos 350%, o 3.5x hasta 1750%, la cantidad alcanzada cuando el agente se administra por las rutas fuera del compartimiento intradérmico, por ejemplo, SC, IM y así administrado a un compartimiento de tejido más profundo. La invención abarca los métodos para administrar los agentes biológicamente activos al compartimiento ID de modo que la cantidad de la dosis pre-seleccionada del agente depositado en el tejido objetivo se incrementa en las cantidades especificadas aquí, en comparación a cuando el agente se administra fuera del espacio intradérmico, por ejemplo, el compartimiento subcutáneo (SC) , el compartimiento intramuscular (IM) , tal que el incremento en la cantidad se detecta tan pronto como 3 minutos después de la inyección, o tan pronto como 3 horas después de la inyección. Preferiblemente, el aumento en la deposición del agente en el tejido particular puede persistir por al menos 21 días, al menos 27 días. En algunas modalidades, la concentración del agente biológicamente activo depositado en un tejido particular después de el suministro ID es de aproximadamente 5 nanogramos del agente por 50 microgramos del tejido particular; 10 picogramos del agente por 50 microgramos del tejido particular; 29 nanogramos del agente por 50 microgramos del tejido particular; 10 picogramos del agente por 50 microgramos del tejido particular a aproximadamente 29 nanogramos del agente por 50 microgramos del tejido particular; 10 picogramos del agente por 50 microgramos del tejido particular a aproximadamente 150 nanogramos del agente por 50 microgramos del tejido particular. En otras modalidades, la concentración del agente biológicamente activo, por ejemplo, un agente de diagnóstico, depositado en un tejido particular después del suministro ID es de aproximadamente 10 pg a aproximadamente 15 ug del agente por 50 microgramos del tejido particular, o aproximadamente 1 cg a aproximadamente 30 ng del agente por 50 microgramos del tejido particular. A diferencia del suministro subcutáneo, los métodos intradérmicos, como se describen aquí, mejoran la cinética biológica, la dinámica biológica, y la biodisponibilidad del tejido de los agentes biológicamente activos suministrados, incluyendo los agentes de diagnóstico y terapéuticos. El suministro intradérmico de agentes biológicamente activos de acuerdo con los métodos de la invención son absorbidos por el sistema linfático y depositados en un tejido particular sin la necesidad de "dar masaje" al sitio de la inyección, lo cual es diferente a otros modos convencionales de suministro, incluyendo el suministro subcutáneo. Los agentes biológicamente activos suministrados al compartimiento subcutáneo no logran la deposición en un tejido objetivo y/o el transporte linfático a menos que se de masaje al sitio de la inyección para inducir tal transporte del agente suministrado. Aunque no pretendiendo estar comprometidos por un mecanismo de acción particular, los métodos de suministro, tales como la inyección intravenosa, se basan en la diseminación del agente de interés desde la circulación general al tejido objetivo. La diseminación del agente biológicamente activo al tejido depende de muchas variables y la biodisponibilidad encontrada en la circulación general no es siempre óptima para un tejido objetivo dado. Los métodos intravenosos y subcutáneos para el suministro de un agente son limitantes, en especial cuando el tejido objetivo está en el sistema linfático. Además, el suministro intradérmico, como se describe por la presente invención, ofrece un mecanismo de transporte alternativo en el cual un agente específico se presenta al compartimiento intradérmico y fluye a la circulación general vía el sistema linfático y las capilaridades del área. Aunque otros han descrito el suministro intradérmico a la vasculatura linfática, ninguno ha identificado las condiciones específicas o los dispositivos para el acceso seguro de estos tejidos. Aunque no pretendiendo estar comprometidos por un mecanismo de acción particular, suministrar agentes biológicamente activos (como líquidos o suspensiones) dentro de compartimiento intradérmico, de acuerdo con los métodos de la invención, resulta en presión intersticial aumentada la cual a su vez, abre la vasculatura linfática permitiendo altas velocidades de flujo sostenido hasta que se termina el flujo del fluido. Los inventores han encontrado que este transporte linfático ocurre sorprendentemente rápido, permitiendo el acceso inmediato a la vasculatura linfática y la circulación general . Los métodos de la invención resultan en la absorción de los agentes en el sistema linfático en lugar de la asimilación capilar, resultando así en los beneficios descritos aquí, incluyendo pero no limitados, a la velocidad y actividad de búsqueda de objetivo mejoradas. Los agentes biológicamente activos administrados de acuerdo con los métodos de la invención se depositan en el compartimiento intradérmico y se distribuyen primero con alta biodisponibilidad al tejido linfático local al sitio de la administración, seguido por un suministro linfático más extendido en la circulación general. En algunas modalidades, los métodos de la presente invención son efectivos en particular para el diagnóstico de una enfermedad, trastorno o infección en tej idos más profundos . En algunas modalidades, la invención abarca el suministro intradérmico buscado como objetivo de un agente biológicamente activo a una entidad biológica, incluyendo pero no limitadas a células, un grupo o colección e células, bacterias (por ejemplo, Escherichia coli , Klebsiella, peneumoniae, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecials, Candida albicans, Proteus vulgaris, Staphylococcus viridians, y Pseudomonas aeuriginosa) , un patógeno (por ejemplo, papovavirus B-linfotrópico (LPV) , Bordatella pertussis; el virus de la Enfermedad de Boma (BDV) ; coronavirus Bovino; virus de Coriomeningitis, Virus del Dengue; el virus a, E. coli; Ebola; Ecovirus I; Ecovirus II (EV) ; Endotoxinas (LPS) ; bacterias Entéricas; virus Huérfano Entérico; Enterovirus; virus de leucemia Felina, virus de la enfermedad de Pies y boca; virus de la leucemia de simio Gibón (GALV) ; bacterias Gram negativas; Heliobacter pylori; virus de Hepatitis B (HBV) ; Virus de Herpes Simples; VIH-1; citomegalovirus Humano; coronovirus Humano; Influenza A, B y C; Lengionella; Leishmania mexicana; Listeria monocytogenes; Virus de Sarampión; Meningococo; Morbilivirus; virus de hepatitis de ratón; virus de Leucemia de Murino; virus de herpes gamma de Murino; retrovirus de Murino; coronavirus de Murino, virus de hepatitis de ratón; Micobacterium avium-M; Neisseria gonorrhoeae; virus de la enfermedad de Ne castle; Parvovirus B19; Plasmodium falciparum; virus de Pox; Pseudomonas; Ratovirus; Salmonella typhiurium; Shigella; estreptococos; virus linfotrópico de células T 1; virus Vaccinia; una placa, y un agente parásito. Una vez que se suministra un agente a una entidad biológica de acuerdo con los métodos de la invención, alguna detección, los métodos de formación de imágenes conocidos por una persona experimentada en la técnica y descritos aquí se pueden usar para detectar y simbolizar la entidad. Los métodos de la invención abarcan los métodos para suministrar un agente biológicamente activo donde el agente se enlaza específicamente a una entidad biológica. El buscar como objetivo directamente el compartimiento intradérmico como se enseña por la invención, proporciona un inicio más rápido de los efectos de los agente biológicamente activo, incluyendo los agentes de diagnóstico, y mayor biodisponibilidad incluyendo, la biodisponibilidad del tejido, con relación a otros modos de suministro de tales agentes, incluyendo el suministro de Mantoux ID. Los inventores han encontrado que los agentes suministrados de acuerdo con los métodos de la invención pueden ser absorbidos rápidamente y se distribuyen sistémicamente vía el suministro ID controlado que accede selectivamente las microcapilaridades vasculares y linfáticos, de tal manera que los agentes pueden ejercer sus efectos biológicos más rápidamente que el suministro SC y el suministro ID de Mantoux. Adicionalmente, los inventores han descubierto que suministrar un agente en el compartimiento ID saca partido de la microcirculación dérmica y la interacción entre las presiones hidrostática y osmótica, en la matriz extracelular dérmica, y los vasos linfáticos. Es en el intersticio dérmico que los sistemas sanguíneo y linfático interactúan con la piel. Como la sangre viaja a los capilares más pequeños, el fluido del plasma y las proteínas son obligados a salir al compartimiento intersticial. La fuerza osmótica y la biomecánica resultan en la perfusión del fluido a través del intersticio y hacia las linfáticas iniciales locales. Las redes linfáticas son permeables a las macromoléculas y por lo tanto actúan al mantener las presiones osmótica e hidrostática dentro del compartimiento de tejido. La velocidad de flujo típica de las redes linfáticas es de 10-100 veces menor que la velocidad de flujo de la sangre. El sistema linfático consiste de 5 conductos principales. Estos incluyen las capilaridades linfáticas y los vasos colectores, encontrados en la dermis, los nodos linfáticos, troncos, y ductos . La linfa se forma cuando el fluido intersticial se mueve dentro de los capilares linfáticos. Esta entonces se drena a los vasos colectores . Los vasos pasan al menos a través de uno, pero usualmente varios grupos de nodos linfáticos. Los vasos que abandonan los nodos se descargan en los troncos más grandes, los cuales a su vez llevan a los ductos. Los ductos regresan la linfa de vuelta al flujo sanguíneo, completando el circuito (Swartz, M. A. 2001, Adv. Drug Del. Rev. 50: 3-20). El flujo del sistema linfático es unidireccional con los capilares linfáticos como el conducto de recolección de fluidos inicial . En el intersticio el papel Priscila de los capilares linfáticos es mantener la presión hidrostática y osmótica en el tejido. Esto se logra a través de la interacción de los filamentos de anclaje capilares y la matriz extracelular (ECM) . Cuando el fluido llena el intersticio, la presión del tejido aumenta y coloca tensión sobre el ECM, esencialmente estirando el tejido, y los filamentos de anclaje, manteniendo las redes linfáticas en su lugar, los cuales son jalados con el ECM. Este movimiento jala la abertura capilar linfática permitiendo que el fluido fluya rápidamente desde el tejido para restablecer las presiones hidrostática y osmótica apropiadas. Por lo tanto, la integridad mecánica del ECM juega un papel importante en la función linfática. La degradación extensiva o crónica del ECM eventualmente vuelve a los vasos linfáticos no responsivos a los cambios en el intersticio y provoca disfunción (Swartz et al., 1999, JBiomech. 32 (12): 1297-307). Aunque no pretendiendo estar comprometidos por un mecanismo de acción particular, es la manipulación biomecánica del ECM a través del suministro preciso de los agentes en el intersticio lo que permite la absorción rápida en las linfáticas locales y los nodos linfáticos por el método descrito aquí. En tanto que la tensión del tejido contribuye en gran parte a la absorción del fluido, los factores adicionales contribuyen también. Estos incluyen la concentración, el tamaño, la carga y el peso molecular del agente farmacéutico a ser administrado y el la interacción entre estas características y el ambiente del tejido intradérmico circundante (Charman et al., 1992 Lymphatic Transport of Drugs, Boca Ratón: CRC Press Inc.) . La manipulación de estos factores es dependiente del acceso exacto y reproducible al intersticio. Aun cuando se ha sabido que la dermis, en particular la dermis papilar tiene un alto grado de vascularidad, no se ha apreciado hasta ahora que uno podría sacar partido del alto grado de vascularidad así como la interacción entre la ECM y la vasculatura linfática para obtener un perfil de absorción mejorado para los agentes administrados, en comparación con las rutas alternativas de administración intradérmica Los agentes biológicos suministrados intradérmicamente, especialmente los agentes de diagnóstico, exhiben efecto inicial y eliminación más rápidos versus el suministro convencional incluyendo el suministro SC y el suministro ID de Mantoux. Estas propiedades confieren varias ventajas cuando se suministra un agente de diagnóstico al compartimiento ID de la piel de un sujeto. Primero, esto reduce los afectos secundaros y la incomodidad debida a los procedimientos de diagnóstico. Segundo, esto permite las pruebas rápida y repetida de los procedimientos secuenciales en una sola sesión de diagnóstico. Tercero, reduce el tiempo requerido en instalaciones médicas o de formación de imágenes costosas. Cuarto, facilita los estudios en tiempo real de la fisiología. Quinto, reduce la señal de fondo potencial generada por los reactivos de diagnóstico no enlazados y no eliminados. Sexto, los pacientes experimentan dolor reducido frente a la administración IV, la inyección SC o la biopsia quirúrgica. Los agentes biológicamente activos suministrados, incluyendo los agentes de diagnóstico, de acuerdo con los métodos de la invención se prefieren sobre los modos de suministro tradicionales, incluyendo el suministro SC y el suministro ID de Mantoux puesto que se reduce la cantidad de la dosis preseleccionada del agente depositada en el tejido linfático, cuando se mide por ejemplo usando los métodos histopatológicos u otros métodos conocidos por una persona experimentada en la técnica, tales como citometría de flujo (FACS) o formación de imágenes. Como se usa aquí, el suministro al compartimiento intradérmico o suministrado intradérmicamente tiene la intención de significar la administración de un agente biológicamente activo dentro de la dermis en tal manera que el agente alcanza fácilmente la dermis papilar abundantemente vascularizada y se absorbe rápidamente en los capilares sanguíneos y/o los vasos linfáticos para volverse sistémicamente biodisponible. Tal puede resultar de la colocación del agente en la región superior de la dermis, es decir, la dermis papilar o en la porción superior de la dermis reticular relativamente menos vascular, tal que el agente se difunde fácilmente en la dermis capilar. El suministro controlado de un agente biológicamente activo en este compartimiento dérmico abajo de la dermis capilar en la dermis reticular, pero suficientemente arriba de la interfase entre la dermis y el tejido subcutáneo, permitiría una migración eficiente (hacia afuera) del agente al (no perturbado) lecho microcapilar vascular y linfático (en la dermis papilar) , donde se puede absorber en la circulación sistémica vía estos microcapilares sin ser secuestrado durante el transporte por cualquier otro compartimiento del tejido cutáneo. En algunas modalidades, la colocación de un agente biológicamente activo predominantemente a una profundidad de al menos aproximadamente 0.3 mm, mas preferiblemente, al menos aproximadamente 0 , 4 mm y más preferiblemente al menos aproximadamente 0.5 mm hasta una profundidad de no más que aproximadamente 2.5 mm, más preferiblemente, no más que aproximadamente 2.0 mm y más preferiblemente no más que aproximadamente 1.7 mm resultará en la absorción rápida del agente. Aunque no pretendiendo estar comprometidos por un mecanismo de acción particular, la colocación del agente biológicamente activo predominantemente a profundidades mayores y/o dentro de la porción inferior de la dermis reticular puede resultar en la absorción menos efectiva del agente por las linfáticas ya que el agente será absorbido lentamente en la dermis reticular menos vascular o en la región subcutánea. Los agentes biológicamente activos, incluyendo los agentes de diagnóstico, suministrados de acuerdo con los métodos de la invención, alcanzaran concentraciones máximas mayores de los agentes. Los inventores han descubierto que los agentes administrados al compartimiento ID se absorben más rápidamente, con la administración de bolo que resulta en concentraciones iniciales mayores. Por lo tanto, la dosis se puede reducir, proporcionando un beneficio económico, así como un beneficio fisiológico puesto que se han de eliminar cantidades menores del fármaco o el agente de diagnóstico por el cuerpo . De acuerdo con la invención, la administración intradérmica (ID) directa se puede lograr usando, por ejemplo, inyección a base de microagujas y sistemas de infusión o cualquier otro medio conocido por aquellas personas experimentadas en la técnica para buscar como objetivo el compartimiento intradérmico con exactitud. Los dispositivos particulares incluyen aquellos descritos en WO 01/02178, publicada el 10 de enero del 2002; y WO 02/02179, publicada el de enero del 2002, la Patente Norteamericana No. 6,494,865, publicada el 17 de diciembre del 2002, y la Patente Norteamericana No. 6,569,143 publicada el 27 de mayo del 2003, todas de las cuales se incorporan aquí como referencia en su totalidad, así como aquellos ejemplificados en las FIGS. 22-24. La metodología basada en micro cánulas y microagujas y los dispositivos también se describen en la Solicitud Norteamericana Con Número de Serie 09/606,909, presentada el 29 de junio del 2000, la cual se incorpora aquí como referencia en su totalidad. Las cánulas de acero estándar también se usan para el suministro intradérmico usando dispositivos y métodos como se describen en la solicitud norteamericana Serie No. 417,671 presentada en 14 de octubre de 1999, la cual se incorpora aquí como referencia en su totalidad. Estos métodos y dispositivos incluyen el suministro de agentes a través de una "microcánula" de calibre delgado (30G o más delgada) con una profundidad de penetración limita (típicamente que varía desde 10 µm, a 2 mm) , como se define por la longitud total de la cánula o la longitud total de la cánula que se expone más allá de una característica de cubo limitante de la profundidad. El sujeto del suministro intradérmico de la presente invención es un mamífero, preferiblemente un humano, los agentes biológicamente activos suministrados de acuerdo con los métodos de la invención (con o sin un reactivo trazador) se pueden suministrar dentro del compartimiento intradérmico por medio de una aguja o cánula, usualmente desde aproximadamente 300 µm a aproximadamente 5 mm de longitud. Preferiblemente, la aguja o cánula es de aproximadamente 300 µm a aproximadamente 1 mm de largo, con la desembocadura insertada dentro de la piel del sujeto a una profundidad de 1 mm a 3 mm. Preferiblemente, se usa una aguja o cánula de calibre pequeño, entre calibre 30 y 36, preferiblemente calibre 31-34. La desembocadura de la aguja o cánula se inserta preferiblemente a una profundidad de 0.3 mm (300 um) a 1.5 mm. Los parámetros farmacocinéticos mejorados usando los métodos de la invención se pueden lograr usando no sólo los sistemas de inyección basados en microdispositivos, sino otros sistemas de suministro tales como inyección balística de fluidos o polvos sin agujas o libre de agujas, dentro del compartimiento ID, iontoforesis mejorada a través de microdispositivos, y la deposición directa de fluidos, sólidos u otras formas de dosificación dentro de la piel . En las modalidades específicas, la administración del agente biológicamente activo se logra a través de la inserción de una aguja o cánula dentro del compartimiento intradérmico de la piel del sujeto. El suministro intradérmico de agentes de diagnóstico de acuerdo con la presente invención son particularmente benéficos en el diagnóstico de las enfermedades que incluyen las enfermedades crónicas y agudas las cuales incluyen, pero no se limitan a linfoma, melanoma, leucemia, cáncer de pecho, cáncer colorectal, metástasis de cáncer, enfermedades del sistema linfático, cualquier enfermedad que afecta los nodos linfáticos, por ejemplo, las enfermedades de las axilas, politeal, de la lengua, y virales, por ejemplo, VIH, trastornos inmunes tales como rechazos, trastornos metabólicos, y enfermedades infecciosas. Aunque no pretendiendo estar comprometidos por un mecanismo de acción particular, los agentes de diagnóstico suministrados de acuerdo con los métodos de la invención son absorbidos por el compartimiento intradérmico y suministrados al sistema linfático donde su reconocimiento y enlace indican la presencia de células o estados enfermos . La presente invención es útil para procedimientos de diagnóstico incluyendo, pero no limitados a métodos quirúrgicos, biopsias de detección y guiadas por imágenes, no invasivas. La presente invención proporciona métodos mejorados para la detección y/o el diagnóstico del cáncer, mejorando la sensibilidad, la cantidad de agente depositado, la biodisponibilidad del tejido, efecto inicial y eliminación más rápidos del agente de diagnóstico suministrado. Adicionalmente, los métodos de la invención se mejoran en particular sobre los procedimientos convencionales para detección del cáncer, para la detección de un tumor, por ejemplo, tumor de pecho en un sujeto humano, puesto que más del 75% del volumen pre-seleccionado del agente se deposita dentro del compartimiento intradérmico, con relación a cuando se suministra el mismo volumen pre-seleccionado al compartimiento intradérmico por medio de los métodos tradicionales de suministro de tal agente, por ejemplo, el método ID de Mantoux. La presente invención proporciona métodos mejorados para el procedimiento actual de biopsia del nodo centinela y el procedimiento de mapeado quirúrgico, mejorando la absorción y la biodisponibilidad de los agentes de diagnóstico al sistema linfático local . La invención proporciona un método para la administración de al menos un agente de diagnóstico para la administración de al menos un agente de diagnóstico para la detección de un nodo linfático centinela de un tumor, por ejemplo, el nodo linfático centinela de tumor de pecho, o un nodo linfático que drena el tumor en un sujeto humano, que comprende suministrar el agente dentro del compartimiento intradérmico de la piel del sujeto humano de modo que el agente se transporta al sistema linfático local. En otras modalidades, la invención proporciona un método para la administración de al menos un agente de diagnóstico para la detección de un nodo linfático centinela de tumor o un nodo linfático que drena el tumor en un sujeto humano, que comprende administrar el agente dentro del compartimiento intradérmico de la piel del sujeto humano de modo que el agente tiene una mayor biodisponibilidad del tejido en comparación a cuando el mismo agente se suministra por el método ID de Mantoux. En aun otras modalidades específicas, la invención proporciona un método para la administración de al menos un agente de diagnóstico para la detección de un nodo linfático centinela de tumor, por ejemplo, un nodo linfático centinela de tumor de pecho o un nodo linfático que drena el tumor en un sujeto humano, que comprende administrar el agente dentro del compartimiento intradérmico de la piel del sujeto humano de modo que el agente tiene un efecto inicial y eliminación más rápidas en comparación a cuando el mismo agente se suministra por el método ID de Mantoux. Los métodos de la invención actual proporcionan métodos de diagnóstico mejorados usando agentes específicos (frente a agentes no específicos) para evaluar la eficacia terapéutica de un régimen de tratamiento de una enfermedad, por ejemplo, monitoreando los perfiles genéticos celulares al evaluar la regulación y la expresión genéticas a través del tiempo. Tradicionalmente, el análisis in vitro de los perfiles genéticos celulares se ha usado para evaluar la regulación y la expresión genéticas a través del tiempo, como una herramienta al evaluar la eficacia terapéutica. Tales métodos in vitro tienen numerosas deficiencias incluyendo, pero no limitadas a inexactitudes, la remoción de las células del cuerpo puede provocar la destrucción del ARN y el ADN alterando por ello el perfil genético en el espécimen; la información sobre el emplazamiento morfológico de la lesión genética se pierde potencialmente usando los métodos ex vivo; y la diferenciación y la regulación celulares pueden ser influenciadas por la remoción del ambiente extracelular in vivo. Usando los métodos de la presente invención, la administración intradérmica de agentes de diagnóstico específicos capaces de asociación y/o enlazamiento a un marcador específico para una enfermedad, hace posible la evaluación de la enfermedad como existe en el paciente. Por lo tanto, los métodos enseñados por la presente invención influencian las elecciones de terapia disponibles para el profesional . Los métodos de la invención son particularmente útiles en la identificación del metabolismo celular deteriorado de una enfermedad o trastorno, usando por ejemplo, las tecnologías genómica y proteómica. En una modalidad especifica, los métodos de la invención proporcionan métodos mejorados para la prognosis del cáncer, en particular el linfoma de células B Difuso (DLBCL) . Los agentes específicos capaces de distinguir entre el DLBCL con y sin vías proliferativas activas se pueden suministrar al compartimiento ID y se les permite transportarse a través del sistema linfático. El enlazamiento de un agente indicará una buena o pobre prognosis y por lo tanto la efectividad mejorada de la terapia. En otras modalidades específicas, los métodos de la invención proporcionan métodos mejorados para el diagnóstico de las enfermedades asociadas con la señalización deteriorada en la vía NFkb por la administración de un agente específico al compartimiento ID, permitiendo que el agente se transporte a las células particulares, donde se enlaza consecuentemente. La señal del enlazamiento se puede visualizar in vivo. El enlazamiento del agente indica la presencia de un deterioro en la vía y permitirá la evaluación de la efectividad de la terapia y el síntoma inicial de la resistencia al fármaco potencial cuando la terapia progresa. Los métodos de la invención son particularmente útiles para los métodos de diagnóstico y terapia integrados, preferiblemente que incluyen requerir el diagnóstico y monitoreo complementarios y/o concurrentes. El diagnóstico exacto de una enfermedad es una necesidad insatisfecha en gran parte, por ejemplo, en oncología, donde unos pocos agentes de diagnóstico indican cuales elecciones terapéuticas tendrán éxito con alguna seguridad. Los métodos de la invención proporciona el suministro de agentes los cuales reconocen específicamente las células, por ejemplo, células cancerosas, en un tejido particular. Tales agentes incluyen sin limitación anticuerpos, preferiblemente los anticuerpos monoclonales terapéuticos descritos aquí. En una modalidad especifica, la invención abarca el suministro de Herceptina, un anticuerpo monoclonal especifico para el cáncer de pecho Her2/neu positivo, al compartimiento ID de la piel de un sujeto, para el diagnóstico y la terapia mejorados. Los métodos de la invención proporcionan el diagnóstico mejorado de los sujetos de cáncer sobre los métodos de diagnóstico tradicionales de las células cancerosas Her2/neu positivas, los cuales identifican la población que se beneficiará más de este tratamiento terapéutico en tanto que se eliminan otros que no. Actualmente, tales pruebas de diagnóstico in vitro que identifican la población que se beneficiará más de un tratamiento terapéutico producen resultados "ambiguos" o poco claros. Usando los métodos de la presente invención, se puede mejorar la identificación de células Her2/neu positivas. Por lo tanto, en la administración intradérmica in vivo de Herceptina o un ácido nucleico que identifica el ARNm codificante para Her2/neu, hace posible la habilidad para identificar aquellos individuos adecuados para el diagnóstico y monitoreo integrados . Usando los métodos de esta invención las células se dejan intactas proporcionando una oportunidad mayor para la identificación positiva. Los métodos de la invención instantánea proporcionan método mejorados para adaptar las terapias de una enfermedad, trastorno o infección usando los métodos de diagnóstico de integración de la invención. Los métodos de la invención son aplicables para regímenes de tratamiento actuales adaptados y no adaptados . Los métodos de la invención permiten un monitoreo continuo de un régimen de tratamiento en un sujeto. En tanto que las terapias adaptadas del futuro requerirán el diagnóstico integrado, los regímenes de tratamiento no adaptados actuales, también se podrían beneficiar del diagnóstico adaptado de la presente invención. Por ejemplo, aquellos sujetos diagnosticados con linfoma de células B difuso grande típicamente experimentan la terapia CHOP. Monitorear la efectividad del este régimen de fármacos combinados se restringe a los cambios clínicos y formación de imágenes no específico, intermitente y biopsias de tejido. La habilidad para monitorear continuamente la efectividad del tratamiento permitiría la identificación más temprana de la resistencia al fármaco y la metástasis. Esto se podría lograr con la administración de reactivos de diagnóstico intradérmicos específicos en el cóctel terapéutico o en combinación con las terapias existentes . Los métodos de la invención proporcionan la administración de formulación que comprenden uno o más agentes de diagnóstico en combinación con uno o más agentes terapéuticos. La presente invención proporciona métodos para buscar como objetivos de los agentes de diagnóstico y agentes terapéuticos las células de interés. En una modalidad especifica, la invención abarca administrar un agente de diagnóstico combinado con un agente terapéutico al compartimiento ID de la piel de un sujeto, tal que una acción especifica del agente de diagnóstico activa una acción del agente terapéutico. La combinación de la administración de diagnóstico buscada como objetivo con el suministro terapéutico buscado como objetivo de acuerdo con los métodos de la invención, hace posible el cuidado mejorado del paciente. Esta modalidad enseña las ventajas de combinar el suministro terapéutico intradérmico con los agentes de diagnóstico. La combinación de administrar un diagnóstico y un agente terapéutico al compartimiento ID, proporciona una herramienta poderosa para mejorar el tratamiento de una enfermedad en un sujeto. En aun otras modalidades, la invención permite el uso de agentes específicos, por ejemplo, agentes de diagnóstico, para enlazar y/o detectar un evento celular o estado enfermo in vivo. Como resultado, la invención proporciona métodos de detección para identificar un agente específico necesario para enlazarse a las células de interés. En algunas modalidades, la invención proporciona métodos para la detección in vivo de bibliotecas combinatorias, tanto biológicas y químicas, para identificar los agentes adecuados (por ejemplo, el objetivo o la porción de diagnóstico o el objetivo o la porción terapéutica) en la biblioteca para el propósito puesto a prueba. La habilidad para detectar agentes in vivo usando los métodos de la presente invención permite la identificación de estados celulares y enfermas únicos . En una modalidad específica, la invención proporciona usar un modelo animal de interés, donde las bibliotecas de agentes se pueden inyectar intradérmicamente y sus efectos se monitorean a través del tiempo, los efectos que se pueden monitorear incluyen por ejemplo, el alivio de los síntomas o el enlazamiento a un tejido y/o células de interés. En una modalidad especifica preferida, un modelo animal de tumor, por ejemplo, un modelo de linfoma de ratón se podría usar para detectar los agentes biológicamente activos suministrados intradérmicamente que se transportan a los nodos linfáticos.

Esto permitiría la detección de los estados de células cancerosas in vivo y posiblemente a identificar los activadores activos para la metástasis y los objetivos potenciales para los agentes terapéuticos y de diagnóstico. Estos resultados se utilizarían después para desarrollar nuevos diagnósticos para humanos y otras especies. 5.1 COMPOSICIONES DE LA INVENCIÓN La invención abarca composiciones que comprende uno o agentes biológicamente activos en formas de solución, formas particuladas de los mismos y mecías de los mismos. Las composiciones para usarse en los métodos de la invención se pueden obtener de cualquier especie o se generan por una tecnología de ADN recombinante conocida por una persona experimentada en la técnica. Las composiciones que comprenden uno o más agentes biológicamente activos pueden ser de diferentes especies animales incluyendo, pero no limitadas a, cerdos, bovinos, ovinos, equinos, etc. El estado químico de tales agentes se pueden modificar por la tecnología de ADN recombinante estándar, para producir los agentes de diferentes fórmulas químicas en diferentes estados de asociación. El agente biológicamente activo usando en los métodos de la invención abarca cualquier molécula que se enlaza específicamente o bien no específicamente a una molécula in vivo y es capaz de producir un efecto biológico in vivo. Los agentes biológicamente activos pueden ser moléculas de formación natural o bien aquellos derivados usando los procesos sintéticos o los procesos recombinantes, usando los métodos comunes conocidos por aquellas personas experimentadas en la técnica. Los agentes biológicamente activos de la invención pueden reconocer específicamente o no específicamente una porción de reconocimiento en una célula particular en un tejido particular. Frecuentemente, estos agentes específicos contienen propiedades estructurales o funcionales en común con las entidades biológicas conocidas . Estos agentes biológicamente activos pueden ser moléculas de reconocimiento de formación natural o bien aquellas derivadas usando un proceso sintético o proceso recombinante, usando los métodos comunes conocidos por aquellas personas experimentadas en la técnica. En otras modalidades, el agente biológicamente activo es de naturaleza biomimética, que comprende motifs de formación natural en tanto que incorpora grupos funcionales adicionales o modificados para el transporte, selección de objetivos, enlazamiento mejorado, estabilidad o detección. Los ejemplos de agentes biológicamente activos que se pueden usar en los métodos de la presente invención incluyen sin limitación, inmunoglobulinas (por ejemplo, Igs multiespecíficas, Igs de cadena simple, fragmentos de Ig) , Proteínas, Péptidos (por ejemplo, receptores peptídicos, PNAs, Selectinas, proteínas de enlace (proteína de enlace a lactosa, proteína de enlace a glucosa)), Nucleótidos, Ácidos Nucleicos (por ejemplo, PNAS, ARNs, aptameros de ARN/ADN modificados) , receptores (por ejemplo, receptor de Acetilcolina) , Enzimas (por ejemplo, Glucosa Oxidasa, VIH Proteasa y transcriptasa invertida) , Carbohidratos (por ejemplo, NCAMs, ácidos Siálicos) , Células (por ejemplo, células sensibles a la Insulina y la Glucosa) , bacteriófagos (por ejemplo, fagos filamentosos) , virus (por ejemplo, VIH) , agentes quimioespecificos (por ejemplo, Cyptands, éteres de Corona, Boronatos) . Los agentes biológicamente activos particularmente preferidos que se pueden usar en la presente invención son anticuerpos terapéuticos que se pueden usar en diagnósticamente, los cuales incluyen pero no se limitan a HERCEPTIN® (Trastuzumab) (Genentech, CA) el cual es un anticuerpo monoclonal anti-HER2 humanizado para el tratamiento de los pacientes con cáncer de pecho metastático; REOPRO® (abciximab) (Centocor) el cual en un receptor anti-glicoproteina Ilb/lIIa en las plaquetas para la prevención de la formación de coágulos; ZENAPAX® (daclizumab) (Roche Pharmaceuticals, Suiza) el cual es un anticuerpo monoclonal anti-CD25 humanizado, inmunosupresor para la prevención del rechazo agudo de aloinjertos renales; PANOREX™ el cual es un anticuerpo del antígeno IgG2a de la superficie celular anti- 17-IA de murino (Glaxo Wellcome/Centocor) ; BEC2 el cual es un anticuerpo anti-idiotipo (epitope GD3) IgG de murino (ImClone System) ; IMC-C225 el cual es un anticuerpo anti EGFR IgG quimérico (ImClone System) ; VITAXIN™ el cual es un anticuerpo de integrina anti-aVß3 humanizado (Applied Molecular Evolution/Medlmmune) : Campath 1H/LDP-03 el cual es un anticuerpo de IgG anti CD52 humanizado (Leukosite) ; Smart M195 el cual es un anticuerpo de IgG anti-CD33 humanizado (Protein Design Lab./Kanebo) ; RITUXAN™ el cual es un anticuerpo de IgGl anti-CD20 quimérico (IDEC Pharm/Genentech, Roche/Zettyaku) ; LYMPHOCIDE™ el cual es un anticuerpo de IgG anti-CD22 humanizaco (Immunomedics) ; ICM3 es un anticuerpo anti-ICAM3 humanizado (ICOS Pharm.); IDEC-114 es un anticuerpo anti-CD80 primatizado (IDEC Pharm/Mitsubishi) ; ZEVALIN™ es un anticuerpo anti-CD20 de murino radioetiquetado (IDEC/Schering AG) ; IDEC-131 es un anticuerpo anti-CD40L humanizado (IDEC/Eisai) ; IDEC-151 es un anticuerpo anti-CD4 primarizado (IDEC) ; IDEC-152 es un anticuerpo anti-CD23 primatizado (IDEC/Seikagaku) ; SMART anti-CD3 es un anti-CD3 IgG humanizado (Protein Design Lab) ; 5G1.1 es un anticuerpo anti-complemento factor 5 humanizado (C5) (Alexion Pharm) ; D2E7 es un anticuerpo anti-TNF-a humanizado (CAT/BASF) ; CDP870 es un fragmento Fab anti-TNF- humanizado (Celltech) ; IDEC-151 es un anticuerpo anti-CD4 IgGl primatizado (IDEC Phar (SmithKline Beecham) ; MDX-CD4 es un anticuerpo anti-CD4 IgG humano (Medarex/Eisai (Genmab) ; CDP571 es un anticuerpo anti-TNF-a IgG4 humanizado (Celltech) ; LDP-02 es un anticuerpo anti-o¡4ß7 humanizado (LeukoSite (Genentech) ; OrthoClone OKT4A es un anticuerpo anti-CD4 IgG humanizado (Ortho Biotech) ; ANTOVA™ es un anticuerpo anti-CD40L IgG humanizado (Biogen) ; ANTEGREN™ es un anticuerpo anti-VLA-4 IgG humanizado (Elan) ; y CAT-152 es un anticuerpo anti-TGF-ß2 humano (Cambridge Ab Tech) . Otros ejemplos de anticuerpos que se puedne usar de acuerdo con la presente invención se encuentran listados en la Tabla 1 de abajo. Tabla 1. Anticuerpos monoclonales para la Terapia del Cáncer que se pueden usar de acuerdo con la invención.

Compañía Producto Enfermedad Objetivo Abgenix ABX-EGF Cáncer Receptor de EGF AltaRex OvaRex Cáncer ovárico Antígeno tumoral Cal 25 BravaRex Metastático antígeno tumoral MUC1 Antisoma Teragina cáncer ovárico Antígeno de PEM Pemtumomabitrio 90) Terex cáncer de pecho Antígeno PEM Boehringer bivatuzumab cáncer de cabeza y CD44 Ingelheim cuello Centocor/J&J Panorex Cáncer 17-1A colorectal ReoPro PCTA gpmb/ma ReoPro MI Agudo gpmb/ma ReoPro Ataque Isquémico gpmb/ma Compañía Producto Enfermedad Objetivo Corixa Bexocar NHL CD20 CRC MAb, 105AD7 idiotipico Cáncer colorectal gp72 Technology vacuna Crucell Anti-EpCAM cáncer Ep-CAM Cytoclonal MAb, cáncer de pulmón cáncer de pulmón de NA células no pequeñas Genentech Herceptina cáncer de pecho HER-2 metastático Herceptina cáncer de pecho en HER-2 estado temprano Rituxan NHL de bajo grado o CD20 folicular reincidente/reacio Rituxan NHL intermedio y de CD20 alto grado MAb-VEGF NSCLC, metastático VEGF Cáncer colorectal, MAb-VEGF metastático VEGF Degeneración AMD Fab macular relacionada CD 18 con la edad E-26 (IgE de 2aa gen.) asma alérgico y IgE rinitis IDEC Zevalin (Rituxan + Bajo grado de NHL CD20 Itrio-90) de células B, CD20 positivo folicular reincidente o reacio y NHL reacio al Rituximab ImClone Cetuximáb + innotecan carcinoma colorectal receptor de EGF reacio Cetuximáb + cisplatina y cáncer de cabeza y receptor de EGF radiación cuello recién diagnosticado o recurrente Cetuximab + gemcitabina carcinoma receptor de EGF pancreático recién diagnosticado, metastático Cetuximab + cisplatina + cáncer de cabeza y receptor de EGF 5 FU de Taxol cuello recurrente o metastático Cetuximab + carboplatina carcinoma de pulmón receptor de EGF + paclitaxel no de células pequeñas recién diagnosticado Compañía Producto Enfermedad Objetivo Cetuximab + cisplatina cáncer de cabeza y receptor de EGF cuello (enfermedad regional, local, incurable, extensiva y metástasis distante) Cetuximab + radiación carcinoma de cabeza receptor de EGF y cuello localmente avanzado BEC2 + Bacilo Calmette carcinoma de pulmón gangliósido GD3 Guerin de células pequeñas mimético BEC2+ Bacilo Calmette melanoma gangliósido GD3 Guerin mimético IMC-1C11 cáncer colorectal receptor de VEGF con metástasis de hígado ImmonoGen nuC242-DMl cáncer colorectal, nuC242 gástrico y pancreático ImmunoMedics LymphoCide linfoma no de CD22 Hodgkms LymphoCide Y-90 linfoma no de CD22 Hodgláns CEA-Cide tumores sólidos CEA metastáticos CEA-Cide Y-90 tumores sólidos CEA metastáticos CEA-Scan (arcitumomab cáncer colorectal CEA etiquetado con Tc-99m) (radioimagen) CEA-Scan (arcitumomab cáncer de pecho CEA etiquetado con Tc-99m) (radioimagen) CEA-Scan (arcitumomab cáncer de pulmón CEA etiquetado con Tc-99m) (radioimagen) CEA-Scan (arcitumomab tumores CEA etiquetado con Tc-99m) intraoperativos (radio imagen) LeukoScan (sulesomab infecciones del tejido CEA etiquetado con Tc-99m) suave (radioimagen) LymphoScan (etiquetado con linfomas CD22 Tc-99m) (radioimagen) AFP-Sacn (etiquetado con cánceres de células 7 AFP Tc-99m) gem del hígado (radioimagen) Intracel HurnanRAD-HN (+ itrio-90) cáncer de cabeza y NA cuello Compañía Producto Enfermedad Objetivo HumanSPECT formación de NA imágenes colorectal Medarex MDX-101 (CTLA-4) Cáncer de próstata y CTLA-4 otros cánceres MDX-210 (sobreexpresión de Cáncer de próstata HER-2 her-2) MDX-210/MAK Cáncer HER2 Medlmmune Vitamina Cáncer avß3 Merck KGaA MAb 425 Varios cánceres receptor de EGF IS-IL-2 Varios cánceres Ep-CAM Millenníum Campatb (alemtuzumab) leucemia linfocítica CD52 crónica NeoRx CD20-estreptavidina (+ linfoma no de CD20 biotin-itrio 90) Hodgkins Avidicina (albúmina + cáncer NA NRLU13) Peregrine Oncolim (+yodo-131) linfoma no de HLA-DR 10 beta Hodgkins Cotara (+ yodo-131) glioma maligno que proteínas asociadas no se puede resectar al ADN Pharmacia C215 (+ enterotoxina del cáncer pancreático NA Corporation estafilococo) MAb, cáncer de pulmón/riñón cáncer de pulmón y NA riñon nacolomab tafenatox cáncer de colon y NA (C424 + enterotoxina del pancreático estafilococo) Protein Design Nuvion malignidades de las CD3 Labs células T SMART M195 AML CD33 SMART 1D10 NHL antígeno HLA-DR Titán CEAVac cáncer CEA colorectal, avanzado TriGem melanoma GD2-gangliósido metastático avanzado y cáncer de pulmón de células pequeñas TriAb cáncer de pecho MUC-1 metastático Trilex CEAVac cáncer CEA colorectal, avanzado TriGem melanoma gangliósido GD2 metastático y cáncer de pulmón de células pequeñas Compañía Producto Enfermedad Objetivo TriAb cáncer de pecho MUC-1 metastático Viventia NovoMAb-G2 linfoma no de NA Biotech radioetiquetado Hodgkins Monopharm C carcmoma antígeno SK-1 colorectal y pancreático GlioMAb-H (+ toxina glioma, NA gelonina) melanoma y neuroblastoma Xoma Rituxan NHL de bajo grado o CD20 folicular reincidente/reacio Rituxan NHL intermedio y de CD20 alto grado ING-1 adenocarcinoma Ep-CAM En una modalidad específica, la invención abarca composiciones que comprenden agentes biológicamente activos que comprende uno o más agentes de diagnóstico. En otra modalidad específica, la invención abarca composiciones que comprenden los agentes biológicamente activos las cuales comprenden al menos un agente de diagnóstico y al menos un agente terapéutico. En una modalidad, agente biológicamente activo comprende un marcador que identifica el tipo de células de una enfermedad o trastorno particular (por ejemplo, un cáncer) , junto con un agente terapéutico, por ejemplo, un agente capaz de asesinar las células enfermas. Por ejemplo, un marcador que identifica un tipo de células indeseables se puede conjugar con una toxina capas de desactivar o asesinar las células buscadas como objetivos. Los agentes terapéuticos que se pueden usar en las composiciones de la invención incluyen, pero no se limitan a agentes quimioterapéuticos, agentes terapéuticos de radiación, agentes terapéuticos hormonales, agentes inmunoterapéuticos, agentes inmunomodulatorios, agentes antiinflamatorios, antibióticos, agentes antivirales, y agentes citotóxicos. Los ejemplos no limitantes de agentes antiinflamatorios incluyen los fármacos antiinflamatorios no esferoidales (NSAIDs) , fármacos antiinflamatorios esferoidales, beta-agonistas, agentes anticolinérgicos, y metil xantinas. Los ejemplos de NSAIDs incluyen, pero no se limitan a, aspirina, ibuprofeno, celecoxib (CELEBREX™) , diclofenaco (VOLTAREN™) , etodolac (LODINE™) , fenoprofeno (NALFON™) , indometacina (INDOCIN™) , cetoralaco (TORADOL™) , oxaprozina (DAYPRO™) , nabumentona (RELAFEN™) , sulindaco (CLINORIL™) , tolmentina (TOLECTIN™) , rofecoxib (VIOXX™) , naproxeno (ALEVE™, NAPROSYN™) , cetoprofeno (ACTRON™) y nabumetona (RELAFEN™) . Tales NSAIDs funcionan inhibiendo una enzima ciclooxigenaaza (por ejemplo, COX-1 y/o COX-2) . Los ejemplos de fármacos esferoidales antiinflamatorios incluyen, pero no se limitan a, glucocorticoides, dexametasona (DECADRON™) , cortisona, hidrocortisona, prednisona (DELTASONE™) , prednisolona, triamcinolona, azulfidina, y eicosanoides tales como prostaglandinas, tromboxanos, y leucotrienos . Los ejemplos de agentes inmunorregulatorios incluyen, pero no se limitan a metotrexato, ENBREL, REMICADE™, leflunomida, ciclofosfamida, ciclosporina A, y antibióticos macrólidos (por ejemplo, FK506 (tacrolimus) ) , metilprednisolona (MP) , corticosteroides, esteroides, micofenolato de mofetilo, rapamicina (sirolimus) , mizoribina, desoxispergualina, brequinar, malononitriloamindas (por ejemplo, leflunamida) , moduladores del receptor de células T, y moduladores del receptor de citocina, cortocosteroides, agonistas de citocina, antagonistas de citocina, e inhibidores de citocina. Los ejemplos de antibióticos incluyen, pero no se limitan a, macrolida (por ejemplo, tobramicina (Tobi (D) ) , una cefalosporina (por ejemplo, cefalexina (Keflex®) , cefradina (Velosef®) , cefuroxima (Ceftin®) ) , cefprozil (Cefzil®) , cefaclor (Ceclor®) , cefixima (Suprax®) o cefradroxil (Duricef®) , una claritromicina (por ejemplo, claritromicina (Biaxina®) ) , una eritromicina (por ejemplo, eritromicina (EMycin®) , una penicilina (por ejemplo, penicilina V (V-Cilin K®) o Pen Vee K®) ) o una quinolona (por ejemplo, ofloxacina (Floxin®, ciprofloxacina (Cipro®) o norfloxacina (Noroxin®) ) , antibióticos de aminoglicosido (por ejemplo, apreamicina, arbecacina, bambermicinas, butirosina, dibecacina, neomicina, undecilenato, netilmicina, paromomicina, ribostamicina, sisomicina, y espectinomicina) , antibióticos de amfenicol (por ejemplo, azidamfenicol, cloramfenicol, florfenicol, y tiamfenicol) , antibióticos de ansamicina (por ejemplo, rifamida y rifampina) , carbacefems (por ejemplo, loracarbef) , carbapenems (por ejemplo, biapenem e imipenem) , cefalosporinas (por ejemplo, cefaclor, cefadroxil, cefamándolo, cefatrizina, cefazedona, cefozopran, cefpimizol, cefpiramida, y cefpiroma) , cefamicinas (por ejemplo, cefbuperazona, cefinetazol, y cefininox) , monobactamas (por ejemplo, aztreonam, carumonam, y tigemonam) , oxacefemas (por ejemplo, flomoxef, y moxalactama) , penicilinas (por ejemplo, amdinocilina, amdinocilin pivoxilo, amoxicilina, bacampicilina, ácido bencilpenicilinico, bencilpenicilin sodio, epicilina, fenbenicilina, floxacilina, penamcilina, yodohidrato de penetamato, peniclilin o-benetamina, penicilina 0, penicilina V, penicilina V benzatina, penicilina V hidrabamina, penimepiciclina, y fencihicilin potasio) , lincosamida (por ejemplo, clindamicina y lincomicina) , amfomicina, bacitracina, capreomicina, colistina, enduracidina, enviomicina, tetraciclinas (por ejemplo, apiciclina, clortetraciclina, clomociclina, y demeclociclina) , 2, 4-diaminopirimidinas (por ejemplo, brodimoprim) , nitrofuranos (por ejemplo, furaltadona, y cloruro de furazolio) , quinolonas y análogos de las mismas (por ejemplo, cinoxacina "clinafloxacina, flumequina, y grepagloxacina) , sulfonamidas (por ejemplo, acetil sulfametoxipirazina, bencilsulfamida, noprilsulfamina, ftalilsulfacetamida, sulfacrisoyoduro, y sulfacitina) sulfotas (por ejemplo, diatilmosulfona, glucosulfona sodio, y solasulfona) , cicloserina, mupirocina, cloramfenicoles, eritromicina, penicilina, estreptomicina, vancomicina, trimetoprimsulfametoxasoles, y tuberina. Los ejemplos de agentes antivirales incluyen, pero no se limitan a, inhibidores de proteasa, inhibidores de transcriptasa inversa de nucleósidos, inhibidores de transcriptasa inversa no nucleósidos y análogos de nucleósidos, zidovudina, aciclovir, gangciclovir, vidarabina, idoxuridina, trifluridina, y ribavirina, así como foscarnet, amantadina, rimantadina, saquinavir, indinavir, amprenavir, lopinavir, ritonavir, las alfa-interferonas; adefovir, clevadina, entecavir, y pleconaril . Otros agentes terapéuticos los cuales se pueden usar con la presente invención incluyen pero no se limitan a Alfa-1 anti-tripsina, agentes Anti-Angiogénesis, Antisentido, butorfanol , Calcitonina y análogos, Ceredasa, inhibidores de COX-II, agentes dermatológicos, dihidroergotamina, agonistas y antagonistas de Dopamina, Enqueftalinas y otros péptidos opioides, Factores de crecimiento epidérmico, Eritropoietina y análogos, Hormona folículo estimulante, G-CSF, Glucagona, GM-CSF, granisetron, hormona de crecimiento y análogos (incluyendo hormona de liberación de la hormona de crecimiento) , antagonistas de la Hormona de crecimiento, Hirundina y análogos de Hirundina tales como Hirulog, supresores de IgE, Insulina, insulinotropina y análogos, Factores de crecimiento similares a insulina, Interferonas , hiterleucinas, Hormona luteinizante, Hormona de liberación de la hormona luteinizante y análogos, Heparinas, Heparinas de bajo peso molecular, y otros glicoaminoglicanos naturales, modificados o sintéticos, M-CSF, metoclopramida, Midazolam, Anticuerpos monoclonales, Anticuerpos pegilados, Proteínas pegiladas o cualquier proteína modificada con polímeros hidrofílicos o hidrofóbicos o grupos funcionales adicionales, Proteínas de fusión, fragmentos de anticuerpos de cadena simple o los mismos con una combinación de proteínas enlazadas, macromoléculas, o grupos funcionales adicionales de los mismos, Analgésicos narcóticos, nicotina, agentes antiinflamatorios no esferoidales, Oligosacáridos, ondansetron, hormona paratiroides y análogos, Antagonistas de la hormona paratiroides, Antagonistas de prostaglandina, Prostaglandinas, Receptores solubles recombinantes, escopolamina, agonistas y antagonistas de serotonina, Sildenafil, Terbutalina, Trombolíticos, activadores de plasminógenos de tejido, TNF, y antagonistas de TNF, vacunas, con o sin portadores/adyuvantes, incluyendo antígenos profilácticos y terapéuticos (incluyendo pero no limitados a, proteína de subunidad, péptidos y polisacáridos, conjugados de polisacáridos, toxoides, vacunas basadas en la genética, células completas, desactivadas, reclasificadas, vivas atenuadas, vectores virales y bacterianos) en conexión con, adicciones, artritis, cólera, adicción a la cocaína, difteria, tétanos, HIB, enfermedad de Lime, meningococo, sarampión, paperas, rubéola, varicela, fiebre amarilla, Virus sinticial respiratorio, encefalitis japonesa transmitida por garrapatas, neumococo, estreptococo, tifoidea, influenza, hepatitis, incluyendo las hepatitis A, B, C y E, otitis, media, rabia, polio, VIH, parainfluenza, rotavirus, Virus de Epstein Barr, CMV, clamidina, hemofilus no tipificable, moraxella catarrhalis, virus de papiloma humano, tuberculosis incluyendo BCG, gonorrea, asma, aterosclerosis malaria, E-coli, Enfermedad de Alzheimer, H. piloro, salmonera, diabetes, cáncer, herpes simples, papiloma humano y las otras substancias que incluyen todas las terapéuticas principales tales como los agentes para el resfriado común, agentes anti-adicción, antialérgicos, antieméticos, antiobesidad, antiosteoporeteicos, antiinfectivos, analgésicos, anestésicos, anoréxicos, antiartríticos, agentes antiasmáticos, anticonvulsi os, antidepresivos, agentes antidiabéticos, antihistaminas, agentes antiinflamatorios, preparaciones antimigraña, preparaciones para la enfermedad antimovimiento, antinauseas, antineoplasticos, fármacos antiparkinsonismo, antipruriticos, antisicóticos, antipiréticos, anticolinérgicos, antagonistas de benzodiazepina, vasodilatadores, incluyendo agentes estimulantes del hueso, periféricos y cerebrales, coronarios, generales, estimulantes del sistema nervioso central, hormonas, hipnóticos, inmunosupresores, relajantes musculares, parasimpaticolíticos, parasimpatomiméticos, prostaglandinas, proteínas, péptidos, polipéptidos, y otras macromoléculas, sicoestimulantes, sedantes, e hipofunción sexual y tranquilizantes. Un agente biológicamente activo, por ejemplo, un agente de diagnóstico, se puede conjugar con una porción terapéutica tal como una cititoxina (por ejemplo, un agente citostatico o citocida) , un agente terapéutico o un elemento radioactivo (por ejemplo, emisores alfa, emisores beta, etc.). Las citotoxinas o agentes citotóxicos incluyen cualquier agente que es perjudicial para las células. Los ejemplos incluyen paclitaxol, citocalasina B, gramicidina D, bromuro de etidio, emetina, mitomicina, etoposida, tenoposida, vincristina, vinblastina, colquicina, daunorubicina, dihidroxi antracin diona, mitoxantrona, mitramicina, actinomicina D, l.deshidrotestosterona, glucocorticoides, procaína, tetracaina, lidocaina, propranolol y puromicina, y análogos o homólogos de los mismos. Los agentes terapéuticos incluyen, pero no se limitan a antimetabolitos (por ejemplo, metotrexato, 6-mercaptopurina, 6-tioguanina, citarabina, 5-fluorouracil decarbazina) , agentes alquilantes (por ejemplo, mecloretamina, tioepa clorambucilo, melfalan, carmustina (BSNU) y lomustina (CCNU) , ciclotosfamida, busulfan, dibromomannitol, estreptozotocina, mitomicina C, y cisdiclorodiamina platino (II) (DDP) cisplatina), antraciclinas (por ejemplo, daunorubicina (anteriormente daunomicina) y doxorubicina) , antibióticos (por ejemplo, dactinomicina (anteriormente actinomicina) , belomicina, mitramicina, y antramicina (AMC) ) , y agentes antimicóticos (por ejemplo, vincristina y vinblastina) , perdnisona y adriomicina. Además, un agente biológicamente activo se puede conjugar con porciones terapéuticas tales como materiales radiactivos o quelantes macrocíclicos para conjugar iones radiometálicos (véase arriba, para los ejemplos de materiales radioactivos) . En ciertas modalidades, el quelante macrocíclico es ácido 1,4, 7, 10-tetraazaciclododecan-N,N' ,N" ,N"-tetraacético (DOTA) el cual se puede enlazar al anticuerpo vía una molécula enlazadora. Tales moléculas enlazadoras se conocen comúnmente en la técnica y se describen en Denardo et al., 1998, Clin Cáncer Res. 4: 2483-90; Peterson et al., 1999, Bioconjug Chem. 10: 553; and Zimmerman et al., 1999, Nucí. Med. Biol. 26: 943-50 cada uno se incorpora aquí como referencia en su totalidad. Las técnicas para conjugar tales porciones terapéuticas a los agentes biológicamente activos, por ejemplo, los anticuerpos, son bien conocidas; véase por ejemplo, Arnon et al ., "Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cáncer Therapy" , en Monoclonal Antibodies And Cáncer Therapy, Reisfeld et al. (eds.), 1985, pp. 243-56, Alan R. Liss, Inc.); Hellstrom et al . , "Antibodies For Drug Delivery" , en Controlled Drug Delivery (2da Ed.), Robinson et al. (eds.), 1987, pp. 623-53, Marcel Dekker, Inc.); Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cáncer Therapy: A Review", en Monoclonal Antibodies ' 84 : Biological And Clinical Applications, Pinchera et al. (eds.), 1985, pp. 475-506); "Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cáncer Therapy" , en Monoclonal Antibodies For Cáncer Detection And Therapy, Baldwin et al. (eds.), 1985, pp. 303-16, Academic Press; y Thorpe et al., Immunol. Rev., 62: 119-58,1982. En algunas modalidades, las composiciones de la invención comprenden una cantidad efectiva de un agente biológicamente activo y uno o más aditivos diferentes. Los aditivos que se pueden usar en las composiciones de la invención incluyen, por ejemplo, agentes de humectación, agentes emulgentes, o agentes de amortiguación de pH. Las composiciones de la invención pueden contener uno o más excipientes diferentes tales como sacáridos y polioles. Los ejemplos adicionales de portadores, diluyentes y otros excipientes farmacéuticamente aceptables, se proporcionan en Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Pub. Co. N. J. edición actual , todos de los cuales se incorporan aquí como referencia en su totalidad. La invención abarca las composiciones en las cuales el agente biológicamente activo se encuentra en forma particulada, es decir, no se disuelve completamente en la solución. En algunas modalidades, al menos el 30%, al menos el 50%, al menos el 75% del agente biológicamente activo se encuentra en forma particulada. Aunque no pretendiendo estar comprometidos por un modo de acción particular, las composiciones de la invención en las cuales un agente biológicamente activo se encuentra en forma particulada, tienen al menos un agente el cual facilita la precipitación del agente . Los agentes de precipitación que se pueden emplear en las composiciones de la invención pueden ser proteínicos, por ejemplo, protamina, un polímero catiónico, o no proteínicas, por ejemplo, zinc, u otros metales o polímeros. En algunas modalidades, un agente trazador se puede administrar concurrentemente con el agente biológicamente activo para facilitar el rastreo o examinación del agente biológicamente activo. El agente de rastreo puede incluir, pero no se limita a, tintes visibles, tintes fluorescentes, radioisótopos, microburbujas, o marcadores de giro magnético. Tales agentes de rastreo se pueden observar fácilmente por medio de las técnicas convencionales . La detección de los agentes etiquetados o los agentes de rastreo se puede lograr usando los métodos ex vivo o in vivo, invasivos o no invasivos, conocidos en la técnica. La forma del agente biológicamente activo a ser suministrado o administrado incluye soluciones de los mismos en diluyentes o solventes, emulsiones, suspensiones, geles farmacéuticamente aceptables, tales como micro y nanopartículas ya sea suspendidas o dispersadas, así como formación in situ de vehículos de las mismas. Las composiciones de la invención pueden estar en cualquier forma adecuada para el suministro intradérmico. En una modalidad, la composición intradérmica de la invención se encuentra en forma de un medio inyectable, fluido, es decir, una composición de baja viscosidad que se puede inyectar en una jeringa o pluma. El medio inyectable fluido puede ser un líquido, alternativamente, el medio inyectable fluido es un líquido en el cual se suspende el material particulados, tal que el medio retiene sus fluidez para ser inyectable y suministrado por una jeringa, por ejemplo, se puede administrar en una jeringa. La invención abarca las formulaciones que comprenden al menos un agente biológicamente activo, en donde la concentración del agente es entre aproximadamente 20 ug/mL a 100 mg/mL. En una modalidad especifica, la concentración del agente es aproximadamente 10 mg/mL. En otra modalidad especifica, la concentración del agente es de aproximadamente 100 mg/mL. En algunas modalidades, la cantidad del agente suministrado de acuerdo con los métodos de la invención es entre aproximadamente 5 y 10 ug. La invención también incluye composiciones que comprende reactivos particulados para el diagnóstico y/o uso terapéutico y los métodos para suministrar los mismos, las partículas de forma y características superficiales definidas se pueden suspender en medios líquidos y se suministran, por ejemplo, a través de microagujas, al compartimiento intradérmico, por ejemplo, en general menos de 5 mm abajo de la epidermis y preferiblemente entre 1 y 3 mm debajo de la epidermis. Estas partículas se transportan entonces a través de la vasculatura linfática a los nodos linfáticos. La velocidad de migración de las partículas depende del tamaño y la carga superficial. Como se usa aquí, el término "partículas" incluye cualquier elemento que comprende monómeros, polímeros, lípidos, anfifilos, ácidos grasos, esteroides, proteínas, y otros materiales conocidos por agregarse, autoensamblarse o los cuales se pueden procesar en partículas. Las partículas también incluyen morfologías unilaminares, multilaminares, trayectorias tortuosas aleatorias y sólidos, incluyendo pero no limitadas a liposomas, materiales microcristalinos, agentes de contraste MR1 particulados, perlas poliméricas (es decir, látex y HEMA) , pero más preferiblemente, partículas huecas, tales como microburbujas, las cuales son particularmente útiles para el formación de imágenes por ultrasonido. En una modalidad preferida, la invención abarca las partículas que comprenden uno o más agentes biológicamente activos, incluyendo, los agentes terapéuticos y de diagnóstico los cuales pueden resultar en la disolución no invasiva, selectiva del sitio, de dichas partículas, para suministrar el agente. En una modalidad especifica, la invención abarca las composiciones que comprenden un agente de contraste de ultrasonido (por ejemplo, microburbujas) que comprenden un agente terapéutico y/o de diagnóstico, por ejemplo, doxorubicina . Aunque no pretendiendo estar comprometidos por un mecanismo de acción particular, una vez introducidas las partículas son transportadas activamente o pasivamente al área y los nodos linfáticos de drenaje regionales. Ya que las partículas se mueven a estos tejidos una sonda de ultrasonido detecta su presencia y, a la frecuencia apropiada, rompe las partículas abiertas; sus contenidos se difunden entonces a los tejidos cercanos haciendo posible una alta concentración local del agente sólo en el lugar enfermo sin necesidad del suministro sistémico. Adicionalmente, las partículas pueden comprender además, un agente de diagnóstico, de modo que la dispersión del agente se limita al tejido inmediato para su análisis adicional . Las ventajas de tales sistemas de suministro de partículas incluyen, pero no se limitan a, (1) búsqueda mejorada como objetivo del tejido del sistema linfático vía la administración ID buscada como objetivo. Usando tales sistemas de administración, la respuesta a la enfermedad ocurre en el tejido linfático y el acceso directo a este proceso puede ofrecer mayor efectividad de las capacidades terapéuticas y de diagnóstico mejorado; (2) resulta en una terapéutica y diagnóstico mejorados. El suministro local de terapias al tejido de mayor interés ofrece la posibilidad de resultados clínicos mejorados debido a perfiles de PK y PD alterados. Con el suministro local de acuerdo con los métodos de la invención, se puede usar menos agente que el suministro sistémico tradicional, para lograr los resultados clínicos o de diagnóstico deseados con la reducción asociada en los afectos secundarios . Los métodos de la invención resultan en una sensibilidad y velocidad aumentada en cuanto a la evaluación de diagnóstico debido al suministro local de una alta concentración del agente . Las partículas como se describe aquí, se suministran intradérmicamente y pueden ser, no especificas, sin enlace a tejidos o específicas del tejido y/o de enlace a células (es decir, las partículas se pueden enlazar a una entidad biológica particular o pueden tener una molécula de selección de metas enlazada a la misma) , y se pueden asociar con porciones terapéuticas o de diagnóstico por medio de varios métodos. Las partículas por si mismas pueden ser el agente terapéutico o de diagnóstico o estas pueden encapsular, atrapar, o enlazar al agente terapéutico o de diagnóstico. La invención abarca todas las clases de fármacos y agentes de diagnóstico. Los agentes terapéuticos o de diagnóstico usados en los métodos y las composiciones de la invención pueden o no ser buscados como objetivos por células o tejidos. En algunas modalidades específicas, las partículas comprenden uno o más agentes de diagnóstico. Aunque no pretendiendo estar comprometidos por un particular, las partículas proporcionan la amplificación de señales necesarias para el diagnóstico de eventos raros, usando los métodos de formación de imágenes conocidos en la técnica y discutidos aquí .

En algunas modalidades, los reactivos en partículas pueden comprender además los agentes terapéuticos los cuales son transportados con las partículas al sistema linfático, y suministrados a las velocidades determinadas por la composición de las partículas. En algunas modalidades específicas, las partículas comprenden los agentes terapéuticos en una combinación con uno o más agentes de diagnóstico. Aunque no pretendiendo estar comprometido por un mecanismo de acción particular, las partículas hacen posible la liberación prolongada buscada tenida como objetivo, de los agentes a los tejidos particulares y/o órganos en lugar de la liberación a la circulación general . En consecuencia se reduce la toxicidad y se maximizan el efecto terapéutico. En las modalidades particularmente preferidas, las composiciones usadas en los métodos de la invención comprenden nanopartículas . Una modalidad preferida de este aspecto de la invención se refiere a una composición que comprende microburbujas no específicas, pequeñas y un método para suministrar la composición a un tejido particular usando los métodos intradérmicos, por ejemplo, el tejido linfático, o un órgano particular. Aunque no pretendiendo estar comprometido por un mecanismo de acción particular, las microburbujas son transportadas rápidamente a través de la circulación linfática y pueden ser detectadas usando por ejemplo, formación de imágenes con ultrasonido. La invención proporciona por lo tanto métodos mejorados para detectar metástasis de cáncer, por ejemplo, a los nodos linfáticos centinela, y/o métodos mejorados para evaluar el linfodema, por ejemplo, una morbosidad común asociada con la disección extensiva de los nodos linfáticos de las axilas. Los métodos de la invención se mejoran sobre los diagnósticos de cáncer convencionales tales como aquellos descritos por ejemplo en Creager, A. J. ; Geisinger, K. R. ,- Shiver, S. A.; Perier, N. D.; Shen, P.; Shaw, J. ; Young, P. R. ; Levine, E. A. "Intraoperative Evaluation of Sentinel Lymph Nodes for Metastatic Breast Carcinoma by Imprint Cytology" Mod Pathol 2002, 15 (11), 1140-1146. En otras modalidades específicas, la invención abarca la detección de la hipoxia por medio de la administración intradérmica de partículas sensibles al oxígeno. Las composiciones intradérmicas de la presente invención se pueden preparar como formas de dosificación unitarias. Una dosificación unitaria por frasco contiene 0.1 a 0.5 mL de la composición. En algunas modalidades, una forma de dosificación unitaria de las composiciones intradérmicas de la invención puede contener 50 µL a 100 µL, 50 µL a 200 µL, o 50 µL a 500 µL de la composición. Si es necesario, estas preparaciones se pueden ajustar a una concentración deseada agregando un diluyente estéril a cada frasco. Las composiciones administradas de acuerdo con los métodos de la invención no se administran en volúmenes por lo cual el espacio intradérmico podría quedar sobrecargado, llevando al fraccionamiento a uno y más de otros componentes, tales como el compartimiento SC. 5.2 USOS DE DIAGNÓSTICO La presente invención proporciona métodos mejorados para el diagnóstico y/o la detección de una enfermedad, trastorno o infección, mejorando la sensibilidad, la cantidad del agente depositado, la biodisponibilidad del tejido, efecto inicial y eliminación más rápidos del agente biológicamente activo suministrado, por ejemplo, el agente de diagnóstico. Los agentes biológicamente activos, en particular los agentes de diagnóstico descritos aquí se pueden usar para propósitos de diagnóstico, o monitoreo de enfermedades, trastornos o infecciones . La invención proporciona un método para la administración de al menos un agente de diagnóstico para la detección de una enfermedad, en particular el cáncer, que comprende suministrar el agente dentro del compartimiento ID de la piel de un sujeto, a una velocidad, volumen y presión controlados, de tal modo que el agente se deposita en el compartimiento ID y es absorbido por la vasculatura linfática.

Los métodos de la invención abarcan la administración de una cantidad preferiblemente no tóxica, diagnósticamente efectiva de un agente a un mamífero, tal que el agente es capaz de formar imágenes y detectable con resolución suficiente a través de los métodos descritos aquí y conocidos por una persona experimentada en la técnica, por ejemplo, ultrasonido o formación de imágenes de resonancia magnética para permitir la visualización de la arquitectura intranodal . Preferiblemente, los agentes administrados de acuerdo con los métodos de la invención se depositan en un tejido particular, por ejemplo, en los nodos linfáticos; y el agente se puede detectar por imágenes en el sujeto. El agente puede ser detectado por imágenes dentro de un plazo de aproximadamente 2 semanas de dicha administración, dentro de un plazo de aproximadamente 1 mes de dicha administración, dentro de un plazo de aproximadamente 2 meses de dicha administración, o dentro de un plazo de aproximadamente 3 meses de dicha administración. En algunas modalidades, la invención proporciona un método para la detección o el diagnóstico de una enfermedad, trastorno o infección, que comprende (a) suministrar uno o más agentes de diagnóstico al compartimiento ID de la piel del sujeto; (b) ensayar la expresión de un gen específico conocido por tener expresión o niveles aberrantes que resultan en la enfermedad, trastorno o infección en un sujeto, usando uno o más agentes que se enlazan específicamente a las células que expresan el gen específico; y (b) comparar el nivel de la expresión del gen con un nivel de control, por ejemplo, los niveles en muestreas de tejido normales, por lo cual un aumento en el nivel ensayado en comparación con el nivel de control, es indicativo de la enfermedad, trastorno o infección. Un aspecto de la invención es la detección y el diagnóstico de una enfermedad, trastorno, o infección en un humano. En una modalidad, el diagnóstico comprende: (a) administrar a un sujeto una cantidad efectiva de un agente biológicamente activo etiquetado, suministrando el agente al compartimiento ID de la piel del sujeto, de modo que el agente se enlaza específicamente a las células que residen en el tejido buscado como objetivo; (b) esperar por un intervalo de tiempo enseguida de la administración del agente para permitir que el agente etiquetado se concentre preferiblemente en los sitios en el sujeto donde ocurre el enlace específico al tejido objetivo (y para que el agente etiquetado sea eliminado al nivel del entorno) ; (c) determinar el nivel de fondo, y (d) detectar el agente etiquetado en el sujeto, tal que la detección del agente etiquetado arriba del nivel del fondo indica que el sujeto tiene la enfermedad, trastorno o la infección. De acuerdo con esta modalidad, el agente se etiqueta con una porción de formación de imágenes la cual es detectable usando un sistema de formación de imágenes conocido por una persona con experiencia en la técnica. El nivel de fondo se puede determinar por varios métodos incluyendo, comparar la cantidad del agente etiquetado detectada con un valor estándar determinado previamente para un sistema particular. La presente invención proporciona métodos mejorados para el procedimiento actual de biopsia del nodo centinela y el procedimiento de mapeado quirúrgico mejorando la absorción y la biodisponibilidad de los agentes de diagnóstico al sistema linfático local . La invención proporciona un método para la administración de al menos un agente de diagnóstico para la detección de un tumor, por ejemplo, un tumor de pecho, o un nodo linfático que drena el tumor en un sujeto humano, que comprende administrar el agente dentro del compartimiento ID de la piel del sujeto humano de modo que el agente se transporta al sistema linfático local. En otras modalidades, la invención proporciona un método para la administración de al menos un agente de diagnóstico para la detección de un tumor, o un nodo linfático que drena el tumor, en un sujeto humano, que comprende suministrar el agente dentro del compartimiento intradérmico de la piel del sujeto humano, de modo que el agente tienen una mayor biodisponibilidad del tejido en comparación a cuando el mismo agente se suministra por el método ID de Mantoux. En aun otras modalidades específicas, la invención proporciona un método para la administración de al menos un agente de diagnóstico para la detección de un tumor, por ejemplo, un tumor de pecho, o un nodo linfático que drena el tumor en un sujeto humano, que comprende suministrar el agente dentro del compartimiento intradérmico de la piel del sujeto humano de modo que el agente tiene un efecto inicial y eliminación más rápidos en comparación a cuando el mismo agente se suministra por el método ID de Mantoux. Los métodos de la invención se mejoran en particular sobre los procedimientos convencionales de detección del cáncer, para la detección de un tumor, por ejemplo, un tumor de pecho o un nodo linfático que drena el tumor en un sujeto humano, puesto que más del 75% del volumen pre-seleccionado del agente de diagnóstico se deposita dentro del compartimiento intradérmico, con relación a cuando el mismo volumen pre-seleccionado se suministra al compartimiento intradérmico por los métodos tradicionales para suministrar tales agentes, por ejemplo, el método ID de Mantoux. En una modalidad especifica, la invención abarca un método de diagnóstico para el cáncer, que comprende los siguientes : el anticuerpo específico para un tipo de células particular, es decir, cáncer de pecho, etiquetado con un tinte que es detectable por la exposición a una fuente de luz especifica, se inyecta intradérmicamente dentro y alrededor del tejido de interés. El cirujano que usa una fuente de luz única (portátil o incorporada en otro instrumento (por ejemplo, anteojos diseñados especialmente)) sigue la trayectoria del anticuerpo etiquetado en los nodos linfáticos, buscando la metástasis y la propagación del cáncer. En las modalidades alternativas, la etiqueta es radiactiva o magnética con una fuente externa apropiada para rastrear la etiqueta, y en algunos casos, puede ser una que no es capaz de ser detectada hasta que el agente específico se enlaza a su objetivo) . Los agentes de diagnóstico de la invención so particularmente útiles para el pronóstico del cáncer puesto que la concentración de oxígeno cercana a los tumores frecuentemente indica susceptibilidad a las terapias por radiación (véase, por ejemplo, Lo et al., 1995, Biochemistry 20, 11, 727-11730) y las terapias foto dinámicas (Véase, por ejemplo, Mcllroy et al., 1998, J Photochem Photobiol, 43,47-55). En una modalidad, la presente invención proporciona un método particularmente útil para el diagnóstico de la metástasis del cáncer. En el método de diagnóstico, un agente biológicamente activo se suministra intradérmicamente a una ubicación sospechosa de tener un tumor, y el agente biológicamente activo se transporta al sistema linfático local de modo que se identifica el sistema linfático que incluye los nodos linfáticos que drenan la ubicación. La microexaminación se lleva a cabo después sobre los nodos linfáticos identificados para determinar si las células cancerosas han migrado a los nodos linfáticos, es decir, que ha ocurrido la metástasis. El transporte posterior más allá del tejido linfático proporciona un modo único para el suministro rápido de los agentes biológicamente activos y la biodisponibilidad del tejido mejorada. Por ejemplo, ProstaScintTM (Cytogen) es un anticuerpo monoclonal etiquetado con 11:LIn usado para clasificar el cáncer de próstata; los anticuerpos monoclonales anti CD-15 etiquetados con 99TC se han usado para la identificación altamente sensible y especifica de la apendicitis ambigua (Kipper, S. L. et. al. Journal of Nuclear Medicine 2000 41 (3) , 449-455) . La invención abarca la administración de Cytogen al compartimiento ID de la piel del sujeto para proporcionar una aplicación de diagnóstico mejorada del cáncer de próstata. La invención abarca un método para la administración de al menos un agente de diagnóstico para la detección de un tumor o un nodo linfático que drena el tumor, a un sujeto humano, que comprende administrar el agente dentro del compartimiento intradérmico de la piel del sujeto humano de modo que el agente se transporta al sistema linfático local. Preferiblemente, los agentes de diagnóstico suministrados de acuerdo con los métodos de la invención tienen una mayor biodisponibilidad del tejido, efecto inicial y eliminación más rápidos en comparación a cuando el mismo agente se suministra por el método ID de Mantoux. Más preferiblemente la cantidad de la dosis pre-seleccionada del agente depositado en el tejido linfático se incrementa en al menos 100%, al menos 150%, al menos 200%, al menos 250%, al menos 300%, al menos 350% en comparación a cuando el mismo agente se suministra por el método ID de Mantoux. En aun otras modalidades preferidas, la cantidad de la dosis pre-seleccionada del agente depositado en el tejido linfático se incrementa en al menos el 100%, al menos 150%, al menos 200%, al menos 250%, al menos 300%, al menos 350% en comparación a cuando el mismo agente se suministra en un compartimiento de tejido más profundo, por ejemplo, el compartimiento SC, el compartimiento IM. En una modalidad preferida, la invención proporciona un método mejorado para el diagnóstico de la metástasis de células de tumores, que comprende: suministrar un agente biológicamente activo que se transporta in vivo al sistema linfático, rastrear el agente biológicamente activo para determinar el sistema linfático que drena la ubicación, y micro examinar el sistema linfático en cuanto a la metástasis. Un objetivo de la invención es proporcionar un método para suministrar un agente biológicamente activo, por ejemplo, un agente de diagnóstico, a un sujeto, que comprende administrar un agente biológicamente activo dentro de un compartimiento intradérmico de la piel del sujeto, en donde el agente biológicamente activo se asocia específicamente con o se enlaza con un marcador de una enfermedad o trastorno. Preferiblemente, el agente biológicamente activo demuestra cinética biológica o dinámica biológica o biodisponibilidad del tejido mejoradas en comparación a los métodos convencionales de suministro. La presente invención proporciona un método para diagnosticar una enfermedad, trastorno, o infección que tiene un marcador específico, administrando in agente biológicamente activo para dicha enfermedad o trastorno usando los métodos descritos aquí, rastrear el agente biológicamente activo y determinar si ocurre algún enlazamiento especifico, tal enlazamiento que indica la probabilidad de dicha enfermedad o trastorno. Los agentes biológicamente activos de la invención se pueden usar diagnósticamente para, monitorear el desarrollo o la progresión de una enfermedad, trastorno o infección, como parte de un procedimiento de evaluación clínica para, por ejemplo, determinar la eficacia de un régimen de tratamiento dado. Los métodos de la presente invención proporcionan métodos de pronóstico mejorados usando agentes específicos (frente a agentes no específicos) para evaluar la eficacia terapéutica de un régimen de tratamiento de una enfermedad, por ejemplo, monitoreando los perfiles genéticos celulares al evaluar la regulación y expresión genéticas a través del tiempo. Tradicionalmente, el análisis in vitro de los perfiles genéticos celulares para evaluar la regulación y la expresión genéticas a través del tiempo se ha usado como una herramienta al evaluar la eficacia terapéutica. Tales métodos in vitro tienen numerosas deficiencias incluyendo, pero no limitadas a, inexactitudes, la remoción de las células del cuerpo puede provocar la destrucción de ARN y el ADN alterando por ello el perfil genético en el espécimen, la información sobre el emplazamiento morfológico se la lesión se pierde potencialmente usando los métodos ex vivo, y la diferenciación y la regulación celular se pueden ver influenciadas por la remoción del ambiente extracelular in vivo. Usando los métodos de la presente invención, la administración intradérmica de los agentes de diagnóstico específicos capaces de asociarse o enlazarse a un marcador específico para una enfermedad, permite la evaluación^ de la enfermedad como existe en el paciente. Por lo tanto, los métodos enseñados por la presente invención influencias las elecciones de terapia disponibles para el profesional . Los métodos de la invención son particularmente útiles para los métodos de diagnóstico y terapia integrados. El diagnóstico exacto de una enfermedad es una necesidad insatisfecha en gran medida, por ejemplo, en oncología, donde pocos agentes de diagnóstico indican cuales elecciones terapéuticas tendrán éxito con alguna seguridad. Los métodos de la invención proporcionan métodos mejorados para el diagnóstico y terapia integrados por la administración de formulaciones que comprenden uno o más agentes de diagnóstico en combinación con uno o más agentes terapéuticos. La presente invención proporciona métodos para tener como objetivos los agentes de diagnóstico y los agentes terapéuticos para las células particulares en un tejido particular. En una modalidad especifica, la invención abarca administrar las formulaciones que comprenden uno o más agentes de diagnóstico en combinación con uno o más agentes terapéuticos, dentro del compartimiento ID de la piel de un sujeto, tal que una acción especifica del agente de diagnóstico activa una acción, por ejemplo, el efecto biológico, del agente terapéutico. La combinación del suministro de diagnóstico tenido como objetivo con el suministro terapéutico tenido como objetivo de acuerdo con los métodos de la invención, hace posible el cuidado mejorado del paciente. Esta modalidad enseña las ventajas de combinar el suministro terapéutico intradérmico con los agentes de diagnóstico. La combinación de suministrar un agente de diagnóstico y uno terapéutico al compartimiento intradérmico proporciona una herramienta poderosa para mejorar el tratamiento de una enfermedad en un sujeto. En algunas modalidades, la invención abarca la administración repetida de uno o más agentes específicos etiquetados (por ejemplo, un anticuerpo) intradérmica en el área de interés, antes del proceso de detección externa (es decir, mamografía y otros sistemas de formación de imágenes) . Cada agente específico se monitorea después durante el procedimiento . Los agentes específicos pueden ser parte de un equipo de diagnóstico con una jeringa (s) pre-llenada (s) o dispositivo (s) de suministro. En una modalidad, el monitoreo de una enfermedad, trastorno, o infección, se lleva a cabo repitiendo el método para diagnosticar la enfermedad, trastorno, o infección, por ejemplo, un mes después del diagnóstico inicial, seis meses después del diagnóstico inicial o aun un año después del diagnóstico inicial . La presente invención también proporciona un método para suministrar el agente biológicamente activo a un sujeto, en el cual el agente biológicamente activo se administra al compartimiento intradérmico del sujeto y se transporta in vivo al sistema linfático local. Así, el agente biológicamente activo alcanza el sistema linfático local antes que este sea excretado, degradado o metabolizado por, por ejemplo, el hígado, los riñones, o el bazo. En algunas modalidades, el agente biológicamente activo comprende una inmunoglobulina, una proteína o péptido, un nucleótido, polinucleótido o ácido nucleico, un ligando para un receptor neuronal, una enzima, un carbohidrato, un agente terapéutico celular, un agente quimioespecífico, o una combinación de los mismos. Además, un agente de rastreo se puede administrar concurrentemente con el agente biológicamente activo, o el agente biológicamente activo en si puede estar etiquetado de modo que este puede ser rastreado in vivo. El rastreo y la examinación del agente de rastreo o el agente biológicamente activo auto-etiquetado, se pueden conducir por citometría de flujo ex vivo, métodos histológicos, u otras técnicas ex vivo conocidas en la técnica, o usando in vivo SPECT, PET, MRI, fluorescencia, luminiscencia, bioluminiscencia, formación de imágenes óptico, formación de imágenes fotoacústicas, RAMAN, y SERS u otras técnicas de formación de imágenes in vivo conocidas en la técnica.

Para los agentes que se administran por inyección, los límites de la profundidad del tejido tenido como objetivo se controlan inter alia por la profundidad a la cual se inserta la aguja o cánula, la altura expuesta (altura vertical) de la desembocadura, el volumen administrado, y la velocidad de administración. Los parámetros adecuados se pueden determinar por las personas con experiencia en la técnica sin experimentación excesiva. La invención abarca administrar uno o más agente de diagnóstico empleando métodos quirúrgicos y no quirúrgicos. Para los agentes adecuados, se usa el formación de imágenes vía un monitor externo (es decir, MRI, PET, Exploración CAT, o mamografía) fuera del sitio quirúrgico. Los métodos no quirúrgicos se pueden usar para las enfermedades los cuales incluyen, pero no se limitan formación de imágenes y detección de cáncer de pecho, linfoma, cáncer colorectal y de próstata, detección temprana de células raras indicativas de un estado enfermo, enfermedades crónicas tales como artritis reumatoide, y patógenos transportados en la sangre tales como el VIH. La detección se puede facilitar acoplando el agente biológicamente activo a una sustancia detectable. Los ejemplos de substancias detectables incluyen varias enzima, grupos protésicos, materiales fluorescentes, materiales luminiscentes, materiales bioluminiscentes materiales radiactivos, metales que emiten positrones, tintes visibles, tintes fluorescentes, radioisótopos, etiquetas de giro magnético, e iones metálicos paramagnéticos no radioactivos.

La sustancia detectable se puede acoplar o conjugar ya sea directamente al agente biológicamente activo o indirectamente, a través de un intermediario (tales como, por ejemplo, un enlazador conocido en la técnica) usando las técnicas conocidas en la técnica. Véase, por ejemplo, la Patente Norteamericana No. 4,741,900 en cuanto a los iones metálicos los cuales se pueden conjugar con los anticuerpos para usarse como diagnóstico de acuerdo con la presente invención, tales diagnóstico y detección se pueden lograr acoplando el agente biológicamente activo a substancias detectables incluyendo, pero no limitadas a, varias enzimas, las enzimas que incluyen, pero no se limitan a, peroxidasa de rábano, fosfatasa alcalina, beta-galactosidasa, o actilcolinesterasa; complejos de grupos protésicos tales como, pero no limitados a, estreptavidina/biotina y avidina/biotina; materiales fluorescentes tales como, pero no limitados a umbeliferona, fluoresceína, fluorescein isotiocianato, rhodamina, diclorotriazinilamin fluoresceína, cloruro de dansilo o ficoeritrina; materiales fluorescentes tales como, pero no limitados a, luminol; materiales bioluminiscentes tales como, pero no limitados a, luciferasa, luciferina, y aequorina; materiales radiactivos tales como, pero no limitados a, bismuto (213Bi) , carbono (14C) , cromo (51Cr) , cobalto (57Co) , flúor (18F) , gadolinio (153Gd, 159Gd) , galio (68Ga, 67Ga) , germanio (68Ge) , holmio (166Ho) , indio (115In, 113In, 112In, X11ln) , yodo (131I, 125I, 121I), lantano (149La) , lutenio (X77Lu) , manganeso (54Mn) , molibdeno (99Mo) , paladio (103Pd) , fósforo (32P) , praseodimio (142Pr) , prometió (149Pm) , renio (186Re, 188Re) , rodio (105Rh) , rutenio (97Ru) , samario (153Sm) , escandio (47Sc) , selenio (75Se) , estroncio (85Sr) , azufre (35S) , tecnecio (99Tc) , talio (201Ti) , estaño (113Sn, 1X7Sn) , tritio (3H) , xenón (133Xe) , iterbio (169Yb, 175Yb) , itrio (90Y) , zinc (65Zn) ; metales que emiten positrones usando varias tomografías de emisión de positrones, y iones metálicos paramagnético no radioactivos. La invención abarca cualquier método de detección conocido en la técnica ejemplificado aquí incluyendo pero no limitados a ex vivo o in vivo, invasivos o no invasivos. La detección de los agentes etiquetados y los agentes biológicamente activos de acuerdo con los métodos de la invención se puede hacer usando métodos ópticos (por ejemplo, espectroscopia por fluorescencia de resolución temporal y de por vida, luminiscencia, o bioluminiscencia, quimioluminiscencia) ; citometría de flujo, fluorescencia en la región infrarroja, examinación histológica, ultrasonografía, espectroscopia fotoacústica, espectroscopia de Raman, y espectroscopia de Raman superficial mejorada. En las modalidades preferidas, la examinación y rastreo de la localización del agente biológicamente activo es a modo de formación de imágenes in vivo. Cualquier método adecuado de formación de imágenes in vivo conocido en la técnica, incluyendo, por ejemplo, SPECT, formación de imágenes óptico, formación de imágenes fotoacústicas, RAMAN y SERS CAT, PET se pueden usar en los métodos de la invención. Se entenderá en la técnica que la talla del sujeto y el sistema de formación de imágenes usado determinarán la cantidad de porción de formación de imágenes necesaria para producir las imágenes de diagnostico. En el caso de una porción de radioisótopo, para un sujeto humano, la cantidad de radiactividad inyectada variará normalmente desde aproximadamente 5 a 20 milicuries de 99mTc. El anticuerpo etiquetado se acumulará entonces potencialmente en la ubicación de las células las cuales contienen la proteína especifica. El formación de imágenes de tumores in vivo se describe en S. W. Burchiel et al., "Immunopharmacokinetics of Radiolabeled Antibodies and Their Fragments." (Capítulo 13 en Tumor Imaging: The Radiochemical Detection of Cáncer, S. W. Burchiel y B. A. Rhodes, eds., Masson Publishing Inc. (1982); el cual se incorpora aquí como referencia en su totalidad) . Dependiendo de varias variables, incluyendo el tipo de etiqueta usada y el modo de administración, el intervalo de tiempo que sigue a la administración para permitir que la molécula etiquetada se concentre preferencialmente en los sitios en el sujeto y para que las molécula no enlazadas se eliminen al nivel de fondo es de 6 a 48 horas o 6 a 24 horas o 6 a 12 horas. En otra modalidad, el intervalo de tiempo que sigue a la administración es de 5 a 20 días o 5 a 10 días. La presencia de la molécula etiquetada se puede detectar en el sujeto usando los métodos conocidos en la técnica para la exploración in vivo. Estos métodos dependen del tipo de etiqueta usada. Los técnicos experimentados serán capaces de determinar el método apropiado para detectar una etiqueta particular. Los métodos y dispositivos que se utilizan en los métodos de diagnóstico de la invención incluyen, pero no se limitan a tomografía computarizada (CT) , exploración de cuerpo completo tales como la tomografía por emisión de positrones (PET) , formación de imágenes de resonancia magnética nuclear (MRI) , tomografía computarizada por emisión de fotón único (SPECT) , Rayos X, formación de imágenes ópticas (espectrofotométrico) y sonografía. En una modalidad especifica, el agente biológicamente activo se etiqueta con un radioisótopo y se detecta en el paciente usando un instrumento quirúrgico sensible a la radiación (Thurston et al., Patente Norteamericana No. ,441,050). En otra modalidad, el agente biológicamente activo se etiqueta con un compuesto fluorescente y se detecta en el paciente usando un instrumento de exploración sensible a la fluorescencia. En otra modalidad, el agente biológicamente activo se etiqueta con un metal que emite positrones y se detecta en el paciente usando tomografía por emisión de positrones. En aun otra modalidad, el agente biológicamente activo se etiqueta con una etiqueta paramagnética y se detecta en un paciente usando imágenes por resonancia magnética (MRI) . La invención abarca agentes de formación de imágenes in vivo administrados de acuerdo con los métodos de la invención. Tales agentes se pueden detectar usando la modalidad de formación de imágenes apropiada. Las modalidades de formación de imágenes incluyen, pero no se limitan a ultrasonido, MRI, CT, PET, SPECT, Fluorescencia, Quimioluminicente, bioluminiscente, Rayos X, y formación de imágenes Fotoacústicas, los agentes biológicamente activos y otros agentes descritos aquí, por ejemplo, agentes de rastreo, agentes de formación de imágenes . Una vez que se suministra un agente biológicamente activo a un sujeto, el sujeto puede ser representado apropiadamente lo cual puede ser durante la inyección, inmediatamente después de la inyección, y/o en momentos designados después de la inyección. Las imágenes obtenidas pueden ser de manera continua (tiempo real) , o episódica. Las imágenes se pueden usar para localizar las estructuras, es decir, los nodos linfáticos, las características arquitectónicas incluyendo las obstrucciones, la velocidad de flujo del agente, e identificar eventos raros. La presente invención abarca administrar agentes de contraste adecuados para la formación de imágenes por una o más técnicas de formación de imágenes . Cualquier agente de contraste conocido en la técnica se contempla dentro de los métodos y las composiciones de la invención. En algunas modalidades, los agentes de contraste forman particulados y se adaptan para ser absorbidos preferencialmente por el sistema linfático tras la administración. Estos agentes de contraste pueden ser materiales radioopacos, agentes de formación de imágenes por MRI , agentes de formación de imágenes por ultrasonido, y cualquier otro agente de contraste adecuado para aparato que forma imágenes de un cuerpo animal . Los agentes de contraste para usarse en los métodos de la invención son preferiblemente no tóxicos y/o radioactivos . Existen dos clases principales de agentes de contraste, paramagnéticos y superparamagnéticos, cada una de las cuales se contempla dentro de los métodos de la invención. Los agentes paramagnéticos tienen giros electrónicos desparejados que facilitan la relajación de los núcleos, usualmente los protones de agua, que se les aproximan arcanamente (a un 1 nm) . Estos agentes reducen tanto TI como T2, son efectivos en concentraciones uM, y de pueden incorporar en quelatos con perfiles de biodistribución y toxicidad favorables. El producto patentado por Schering, GdDTPA (ácido gadolinio dietilentriaminopentaacético) , es un ejemplo sobresaliente de varios de tales agentes disponibles comercialmente. En algunas modalidades, los agentes de contraste se incorporan en macromoléculas para evitar la absorción por la circulación sistémíca. La combinación con albúmina, otras moléculas biológicas de tamaño apropiado, látex, dextran, poliuestireno u otros polímeros naturales o sintéticos no tóxicos, o la encapsulación en liposomas, se puede lograr usando los métodos conocidos por aquellas personas experimentadas en la técnica. La invención abarca además agentes de contraste no específicos, incluyendo, pero no limitados a: agentes e contraste de MRI (por ejemplo, gadolinio, partículas paramagnéticas, partículas super-paramagnéticas) , agentes de contraste de ultrasonido (por ejemplo, microburbujas) , agentes de contraste de CT (por ejemplo, radioetiquetas) , agentes de contraste de rayos X (por ejemplo, Yodo) , agentes de contraste de PET (por ejemplo, cualquier emisor de 2 fotones, F19, Fluoro-desoxi-glucosa) , agentes de contraste Fotoacústicos (por ejemplo, tintes, varias moléculas absorbedoras de luz), Agentes de contraste ópticos (por ejemplo, Fluorescentes: CY5, squarainas, tintes cercanos al infrarrojo, es decir verde de indocianina, fluors de lantánido (por ejemplo, Europio, Turbio) . En un ejemplo particular, el agente de contraste de ultrasonido de microburbujas se administra como se describe aquí. Una sonda de ultrasonido se posiciona en el sitio de la inyección o bien en un sitio de nodo linfático regional. Aunque no pretendiendo estar comprometidos por un mecanismo de acción particular, el agente de contraste se suministra a los compartimientos intradérmicos y viaja inmediatamente a través de los vasos linfáticos al nodo linfático. La sonda de ultrasonido detecta el agente de contraste cuando este pasa debajo de la sonda. Se puede obtener tanto la velocidad de flujo de diagnóstico y la información arquitectónica, incluyendo las obstrucciones. En esta modalidad, las imágenes se pueden obtener continuamente (en tiempo real) o en una manera episódica. En las modalidades específicas, la invención abarca un método para diagnosticar una enfermedad que afecta los nodos linfáticos, el cual se mejora sobre los métodos de linfografía tradicionales conocidos en la técnica. Los métodos de la invención abarcan usar formación de imágenes por ultrasonido o resonancia magnética. Los métodos de la invención abarcan administrar a un mamífero un agente de contraste no radioactivo, de cantidad no toxica, diagnósticamente efectivo, de modo tal que el agente es capaz de formar imágenes con resolución suficiente a través de ultrasonido o resonancia magnética para localizar en los nodos linfáticos; y formar imágenes de los nodos linfáticos del mamífero en los cuales se ha localizado dicho agente de contraste con formación de imágenes por resonancia magnética o ultrasonido dentro de un plazo de aproximadamente 2 semanas de dicha administración, dentro de un plazo de aproximadamente 1 mes de dicha administración, dentro de un plazo de aproximadamente 2 meses de dicha administración, o dentro de un plazo de aproximadamente 3 meses de dicha administración. En algunas modalidades, las imágenes de resonancia magnética comprenden además un paso adicional para asegurarse de formar la pre-imagen del sujeto antes de la inyección del agente, por ejemplo, el agente de contraste. En algunas modalidades, se obtienen varias imágenes después de la inyección a través del tiempo y se comparan con la pre-imagen. La invención abarca los métodos para la detección y localización de los nodos linfáticos, así como la información concerniente a otros tejidos, órganos y entidades biológicas usando los métodos descritos aquí y conocidos por aquellas personas experimentadas en la técnica, por ejemplo, formación de imágenes por CT, PET, SPECT, Óptico (por ejemplo, Fluorescente, Quimioluminiscente) y por Rayos X. 5.2.1 ENFERMEDADES Los métodos de la invención se pueden usar para el diagnóstico mejorado de cánceres y los trastornos relacionados incluyendo pero no limitados a los siguientes : Leucemias incluyendo pero no limitadas a leucemia aguda, leucemia linfocítica aguda, leucemias mielociticas agudas tales como mieloblástica, promielocítica, mielomonocítica, monocítica, eritroleucemia leucemias y síndrome mielodisplástico, leucemias crónicas tales como pero no limitadas a, leucemia mielocítica crónica (granulocítica) , leucemia linfocítica crónica, leucemia por trocoleucitos; policitemia vera; linfomas tales como pero no limitadas a la enfermedad de Hodgkin, la enfermedad no de Hodgkin; mielomas múltiples tales como pero no limitadas a mieloma múltiple quiescente, mieloma no secretorio, mieloma osteoesclerótico, leucemia de células plasmáticas, plasmacitoma solitaria, y plasmacitoma extramedular; macroglobulinemia de Waldenstrom; gamopatía monoclonal de significancia indeterminada; gamopatía monoclonal benigna; enfermedad de cadena pesada; sarcomas de tejido óseo y conectivo tales como pero no limitados a sarcoma óseo, osterosarcoma, condrosarcoma, sarcoma de Swing, tumor de células gigantes maligno, fibrosarcoma de hueso, condroma, sarcoma de la membrana del hueso, sarcomas de tejidos suaves, angiosarcoma (hemangiosarcoma) , fibrosarcoma, sarcoma de Kaposi, leiomiosarcoma, liposarcoma, linfagiosarcoma, neurilemona, rabhdomiosarcoma, sarcoma sinovial; tumores cerebrales incluyendo pero no limitados a, glioma, astrocitoma, glioma del tronco cerebral, ependimoma, oligodendroglioma, tumor no glial, neurinoma acústico, craniofaringioma, meduloblastoma, meningioma, pineocitoma, pineoblastoma, linfoma primario de cerebro; cáncer de pecho incluyendo, pero no limitados a, adenocarcinoma, carcinoma lobular (de células pequeñas) , carcinoma intraductal, cáncer de pecho medular, cáncer de pecho mucoso, cáncer de pecho tubular, cáncer de pecho papilar, enfermedad de Pager, y cáncer de pecho inflamatorio; cáncer suprarrenal, incluyendo pero no limitados a, feocromocitoma y carcinoma adrenocortical; cáncer de la tiroides tales como pero no limitados a cáncer de tiroides papilar y folicular, cáncer de tiroides medular y cáncer de tiroides anaplástico; cáncer pancreático, incluyendo pero no limitados a, insulinota, gastrónoma, glucagonoma, vipoma, tumor secretor de somatostatina, y carcinoide o tumor de células de islotes; cánceres pituitarios incluyendo pero no limitados a, enfermedad de Cushing, tumor secretor de prolactina, acromegalia, y diabetes insípida; cánceres de los ojos incluyendo pero no limitados a, melanoma ocular tales como melanoma del iris, y melanoma del cuerpo ciliar, y retinoblastoma; cánceres vaginales, incluyendo pero no limitados a, carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma, y melanoma; cáncer de la vulva, incluyendo pero no limitado a, carcinoma de células escamosas, melanoma, adenocarcinoma, carcinoma de células básales, sarcoma, y enfermedad de Paget: cánceres cervicales incluyendo pero no limitados a, carcinoma de células escamosas, y adenocarcinoma; cánceres uterinos incluyendo pero no limitados a, carcinoma del endometrio, y sarcoma uterino; cánceres ováricos incluyendo, pero no limitados a, carcinoma del epitelio ovárico, tumor de línea limítrofe, tumor de células germinales, y tumor del estroma; cánceres esofágicos incluyendo pero no limitados a cáncer escamoso, adenocarcinoma, carcinoma quístico adenoide, carcinoma mucoepidermoide, carcinoma adenoescuamosa, sarcoma, melanoma, plasmacitoma, carcinoma verrugoso, y carcinoma de células en granos de avena (de células pequeñas) ; cánceres del estomago, incluyendo pero no limitados a, adenocarcinoma, linfoma, liposarcoma, fibrosarcoma y carcinosarcoma fungoso (polipote) , ulcerativo, de propagación superficial, de propagación difusa, maligno; cánceres de colon; cánceres rectales; cánceres del hígado, incluyendo pero no limitados a carcinoma hepatocelular y hepatoblastoma, cánceres de la vesícula biliar incluyendo pero no limitados a adenocarcinoma; colangiocarcinomas incluyendo pero no limitados a, papilar, nodular, y difuso; cánceres de pulmón incluyendo pero no limitados a, cáncer de pulmón de células no pequeñas, carcinoma de células escamosas (carcinoma epidermoide) , adenocarcinoma, carcinoma de células grandes y cáncer de pulmón de células pequeñas; cánceres de los testículos incluyendo pero no limitados a tumor germinal, seminoma, anaplástico, clásico (típico) , espermatocitico, no seminoma, carcinoma embrionario, carcinoma teratoma, coriocarcinoma (tumor del saco vitelino) , cánceres de próstata incluyendo pero no limitados a, adenocarcinoma, leiomiosarcoma, y rhabdomiosarcoma; cánceres del pene; cánceres orales incluyendo pero no limitados a carcinoma de células escamosas; cánceres básales; cánceres de las glándulas salivales incluyendo pero no limitados a adenocarcinoma, carcinoma epidermoide, y carcinoma adenoidquístico; cánceres de la faringe incluyendo pero no limitados a, cáncer de las células escamosas, y verrugosas; cánceres de piel incluyendo pero no limitados a, carcinoma de células básales, carcinoma de células escamosas y melanoma, melanoma de propagación superficial, melanoma nodular, melanoma maligno de lentigo, melanoma lentiginoso de los miembros; cánceres de riñon incluyendo pero no limitados a, cáncer de células renales, adenocarcinoma, hipernefroma, fibrosarcoma, cáncer de células transitorias (renal pelvis y/o útero) ; tumor de Wilms; cánceres de la vejiga incluyendo pero no limitados a, carcinoma de células transitorias, cáncer de células escamosas, adenocarcinoma, carcinosarcoma. Además, los cánceres incluyen mixosarcoma, sarcoma osteogénico, endoteliosarcoma, linfangioendoteliosarcoma, mesotelioma, sinovioma, hemanglioblastoma, carcinoma epitelial, cistadenocarcinoma, carcinoma broncogénico, carcinoma de glándulas sudoríparas, carcinoma de glándulas sebáceas, carcinoma papilar y adenocarcinomas papilares (para un repaso de tales trastornos, véase Fishman et al., 1985, Medicine, 2da Ed., J. B. Lippincott Co., Philadelphia y Murphy et al., 1997, Informed Decisions: The Complete Book of Cáncer Diagnosis, Treatment, and Recovery, Viking Penguin, Penguin Books EE.UU.., Inc., Estados Unidos de América). Por consiguiente, los métodos y agentes de la invención también son útiles en el diagnóstico de una variedad de cánceres u otras enfermedades proliferativas anormales, incluyendo (pero no limitadas a) las siguientes: carcinomas, incluyendo los de vejiga, pecho, colon, riñon, hígado, pulmón, ováricos, del páncreas, estomago, cerviz, tiroides y piel; incluyendo carcinoma de células escamosas; tumores hematopoyeticos de linaje linfático, incluyendo leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, linfoma de células B, linfoma de células T, linfoma de Berketts; tumores hematopoyeticos de linaje mieloide, incluyendo leucemias mielogenas agudas y crónicas y leucemia promielocitica; tumores de origen mesenquimal, incluyendo fibrosarcomas y rhabdomiosarcomas ; otros tumores, incluyendo melanomas, seminomas, tetratocarcinomas, neublastomas, y gliomas; tumores del sistema nervioso central y periférico, incluyendo astrocitoma, neuroblastoma, glioma, y schwannomas; tumores de origen mesenquimal, incluyendo fibrosarcomas, rhabdomiosarcoma, y osteosarcoma; y otros tumores, incluyendo melanomas, xenoderma pigmentoso, ceratoacantoma, seminoma, cáncer folicular de tiroides y teratocarcinoma. Se contempla también que los cánceres provocados por aberraciones en la apoptosis también serían tratados por los métodos y las composiciones de la invención. Tales cánceres pueden incluir pero no se limitan a linfomas foliculares, carcinomas con mutaciones de p53, tumores dependientes de hormonas, de pecho, próstata y ovarios, y lesiones precancerosas tales como poliposis adenomatosa familiar, y síndromes mielodisplasticos. En las modalidades específicas, los cambios malignos o disproliferativos (tales como metaplasmas y displasias) , o los trastornos hiperproliferativos, son diagnosticados más efectivamente por los métodos y las composiciones de la invención en los ovarios, la vejiga, pechos, colon, pulmones, piel, páncreas, o el útero. En potras modalidades específicas, el sarcoma, melanoma o la leucemia se diagnostican más efectivamente por los métodos y las composiciones de la invención. Los cánceres asociados con los antígenos cancerígenos se pueden diagnosticar más efectivamente por la administración de los agentes de la invención, por ejemplo, pero no a modo de limitación, los cánceres asociados con el siguiente antígeno cancerígeno se pueden diagnosticas más efectivamente por los métodos y las composiciones de la invención, antígeno pan-carcinoma KS 1/4 (Pérez y Walker, 1990, J. Immunol . 142: 32-37; Bumal, 1988, Hybridoma 7 (4): 407-415), antígeno del carcinoma ovárico (CA125) (Yu et al., 1991, Cáncer Res. 51 (2): 48-475), fosfato de ácido prostético (Tailor et al., 1990, Nucí. Acids Res. 18 (1): 4928), antígeno específico de la próstata Henttu y Vihko, 1989, Biochem. Biopsy. Res. Comm. 10 (2): 903-910; Israeli et al., 1993, Cáncer Res. 53: 227-230), antígeno p97 asociado al melanoma (Estin et al., 1989, J. Nati. Cáncer Instit . 81 (6): 445-44), antígeno gp75 del melanoma (Vijayasardahl et al., 1990, J. Exp. Med. 171 (4): 1375-1380) , antígeno de melanoma de alto peso molecular (HMW-MAA) (Natali et al., 1987, Cáncer 59: 55-3; Mittelman et al., 1990, J. Clin. Invest. 86: 2136-2144)), antígeno de la membrana específico de la próstata, antígeno carcinoembriónico (CEA) (Foon et al., 1994, Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. 13: 294) , antígeno de mucina epitelial polimórfico, antígeno de glóbulos de grasa de la leche, Antígenos asociados a tumores colorectales tales como CEA, TAG-72 (Yokata et al., 1992, Cáncer Res. 52: 3402-3408), C017-1A (Ragnhammar et al., 1993, Int. J. Cáncer 53: 751- 758); GICA 19-9 (Herlyn et al., 1982, J. Clin. Immunol. 2: 135), CTA-1 y LEA, antígeno 38.13 de linfoma de Burkitt, CD19 (Ghetie et al., 1994, Blood 83: 1329-1336), antígeno CD20 de linfoma B humano (Reff et al., 1994, Blood 83: 435-445), CD33 (Sgouros et al., 1993, J. Nucí. Med. 34: 422-430), antígenos específicos del melanoma tales como gangliósido GD2 (Saleh et al., 1993, J. Immunol . , 151,3390-3398), gangliósido GD3 (Shitara et al., 1993, Cáncer Immunol . Immunotlier. 36: 373-380), gangliósido GM2 (Livingston et al., 1994, J Clin. Oncol. 12: 1036-1044), gangliósido GM3 (Hoon et al., 1993, Cáncer Res. 53: 5244-5250), antígeno del tipo de transplante específico del tumor de de la superficie celular (TSTA) tales como los antígenos inducidos viralmente incluyendo los virus del tumor de ADN de antígeno T y los antígenos envolvetes de los virus del tumor de ARN, alfa-fetoproteina del antígeno oncofetal tal como CEA o colon, antígeno oncofetal de tumor de vejiga (Hellstrom et al., 1985, Cáncer. Res. 45: 2210-2188), antígenos de diferenciación tales como el antígenos L6, L20 de carcinoma de pulmón humano Hellstrom et al., 1986, Cáncer Res. 46: 3917-3923), antígenos de fibrosarcoma, antígeno Gp37 de células T de leucemia humana Bhattacharya-Chatterjee et al., 1988, J of Himen. 141: 1398-1403) , neoglicoproteina, esfingolípidos, antígeno de cáncer de pecho tal como EGFR (Receptor del factor de crecimiento epidérmico) , antígeno HER2 (p 185HER2) , mucina epitelial polimórfica (PEM) (Hilkens et al., 1992, Trends in Bio. Chem. Sci. 17: 359), antígeno APO-1 de linfocitos humanos malignos (Bernhard et al., 1989, Science 245: 301-304), antígeno de diferenciación (Feizi, 1985, Nature 314: 53-57) tales como el antígeno I encontrado en los eritrocitos y el endodermo primario, I (Ma) encontrado en los adenocarcinomas gástricos, M18 y M39 encontrados en el epitelio del pecho, SSEA-1 encontrado en las células mieloides, VEP8, VEP9, Myl, VIM-D5, y D_56~22 encontrados en el cáncer colorectal, TRA-1-85 (grupo sanguíneo H) , C_.4 encontrados en el adenocarcinoma colónico, F3 encontrado en el adenocarcinoma de pulmón, Ah6 encontrado en el cáncer gástrico, hapteno Y, Le? encontrado en las células de carcinoma embrionario, TL5 (grupo sanguíneo A) , receptor de EGF encontrado en las células A43, serie E_ (grupo sanguíneo B) encontrado en el cáncer pancreático, FC10.2 encontrada en las células de carcinoma embrionario, adenocarcinoma gástrico, CO-514 (grupo sanguíneo Lea) encontrado en el adenocarcinoma, NS-10 encontrado en los adenocarcinomas, CO-43 (grupo sanguíneo Leb) , G49, receptor de GEF, (grupo sanguíneo Aleb/Ley) encontrado en el adenocarcinoma colónico, 19.9 encontrado en el cáncer de colon, mucinas de cáncer gástrico, T5A7 encontrado en las células mieloides, R24 encontrado en el melanoma, 4.2, Gr>3, Dl.l, OFA-1, G_._2, OFA-2, GD2, Ml:22:25:8 encontrados en las células de carcinoma embrionario y SSEA-3, SSEA-4, encontrado en los embriones en la etapa de 4-8 células. En otras modalidades, el antígeno es un péptido derivado del receptor de células T del linfoma de células T cutáneo (Véase Edelson, 1998, The Cáncer Journal 4_: 62) . Los agentes biológicamente activos, en particular los agentes de diagnóstico descritos aquí se pueden usar para propósitos de diagnóstico para detectar, diagnosticar, o monitorear infecciones (por ejemplo, linfangitis, neumonía, eslinfadenitis, estreptococo, RSV) , enfermedades infecciosas que se pueden detectar, o monitorear por los agentes de la invención, son provocados por agentes infecciosos que incluyen pero no se limitan a virus, bacterias, hongos, protozoarios, y virus . Las enfermedades virales que se pueden detectar, diagnosticas, o monitorear usando los agentes de la invención en conjunción con los métodos de la presente invención incluyen, pero no se limitan a, aquellas provocadas por hepatitis tipo A. hepatitis tipo B, hepatitis tipo C, influenza, varicela, adenovirus, herpes simples tipo 1 (HSV-1) , herpes simplex tipo II (HSV-II) , peste bovina, rinovirus, ecovirus, rotavirus, virus sincitial respiratorio, virus de papiloma, virus de papova, citomegalovirus, equinovirus, arbovirus, huntavirus, virus de coxsackie, virus de paperas, virus de sarampión, virus de rubéola, virus de polio, virus de viruela, virus de Epstein Barr, virus de inmunodeficiencia humana del tipo I (VIH-1) , virus de inmunodeficiencia humana tipo II (VIH-II) y los agentes de enfermedades virales tales como meningitis viral, encefalitis, dengue o viruela. Las enfermedades bacterianas que se pueden detectar, diagnosticar o monitorear usando los agentes de la invención en conjunción con los métodos de la presente invención, que son provocadas por bacterias incluyen, pero no se limitan a, mycobacteria ricketsia, micoplasma, neisseria, S. pneumonía, Borrelia burgdorferi (enfermedad de Lyme) , Bacillus antracis (ántrax) , tétanos, estreptococo, estafilococo, mycobacterium, tétanos, pertissus, cólera, plaga, difteria, clamidia, S aureus y legionela. Las enfermedades protozóaricas que se pueden detectar, diagnosticar, o monitorear usando los agentes de la invención en conjunción con los métodos de la presente invención, que son provocadas por protozoarios incluyen, pero no se limitan a, leishmania, kokzidioa, tripanosoma, o malaria. Las enfermedades parasíticas que se pueden detectar, diagnosticar o monitorear usando los agentes de la invención en conjunción con los métodos de la invención, que son provocadas por parásitos incluyen, pero no se limitan a, chlamydia y ricketsia. 5.3 SUMINISTRO INTRADÉRMICO DE AGENTES BIOLÓGICAMENTE ACTIVOS La invención abarca los métodos para el suministro intradérmico de agentes biológicamente activos, en particular los agentes de diagnóstico, descritos y ejemplificados aquí, al compartimiento intradérmico de la piel de un sujeto, preferiblemente tratando específicamente el compartimiento intradérmico, en particular la vasculatura dérmica, sin pasar completamente a través de la misma. Una vez que se preparan los agentes biológicamente activos, en particular los agentes de diagnóstico para usarse en los métodos de la invención, el agente se transfiere típicamente a un dispositivo de inyección para el suministro intradérmico, por ejemplo, una jeringa o pluma. Los agentes biológicamente activos en partículas los agentes de diagnóstico, pueden estar e una preparación comercial, tal como un frasco o cartucho, diseñados específicamente para la inyección intradérmica. Los agentes biológicamente activos, en particular los agentes de diagnóstico de la invención se administran usando cualquiera de los dispositivos y métodos intradérmicos conocidos en la técnica o descritos en WO 01/02178, publicada el 10 de enero del 2002; y WO 02/02179, publicada el 10 de enero del 2002, la Patente Norteamericana No. 6,494,865, publicada el 17 de diciembre del 2002 y la Patente Norteamericana No. 6,569,143 publicada el 27 de mayo del 2003 todas las cuales se incorporan aquí como referencia en su totalidad. El método actual por medio del cual la administración intradérmica de los agentes biológicamente activos, en particular los agentes de diagnóstico se destina específicamente al compartimiento intradérmico, no es crítico siempre y cuando este penetre en la piel de un sujeto a la profundidad tenida como objetivo deseada dentro del compartimiento intradérmico, sin pasar a través del mismo. En la mayoría de los casos, el dispositivo penetrará la piel a una profundidad de aproximadamente 0.5-2 mm. La invención abarca las agujas de inyección, catéteres o microagujas de inyección convencionales de todos los tipos, empleadas individualmente o en arreglos de agujas múltiples. Los medios de acceso dérmico pueden comprender dispositivos sin agujas, incluyendo dispositivos de inyección balísticos. Los términos "aguja" y agujas" como se usa aquí, están hechos para abarcar todas las tales estructuras similares a gujas con algún corte al sesgo o aun sin un punto. El término microagujas como se usa aquí, se destina para abarcar las estructuras de calibre 30 y más pequeñas, típicamente de aproximadamente calibre 31-50 cuando tales estructuras son de naturaleza cilindrica. Las estructuras no cilindricas abarcadas por el término microagujas serían por lo tanto de diestro comparable e incluyen las formas piramidal, rectangular, octagonal, de cuña, y otras formas geométricas. Estas también pueden tener un corte sesgado, combinación de cortes segados o pueden carecer de un punto, los métodos de la invención también incluyen los dispositivos de inyección de fluidos balísticos, los dispositivos de suministro por chorro de polvo, los dispositivos de suministro asistidos por piezoeléctrica, electromotriz, electromagnética, los dispositivos de suministro asistidos por gas, de los cuales penetran directamente la piel para proporcionar el acceso para el suministro o suministran directamente los agentes a la ubicación tenida como objetivo dentro del compartimiento dérmico . Preferiblemente, sin embargo, el dispositivo tiene medios estructurales para controlar la penetración de la piel a la profundidad deseada dentro del compartimiento intradérmico. Esto se logra más típicamente por medio de un área ensanchada o cubo asociado con el eje del medio de acceso dérmico que puede tomar la forma de una estructura de apoyo o plataforma a la cual se conectan las agujas. La longitud de las microagujas y el medio de acceso dérmico varían fácilmente durante el proceso de fabricación u se producen rutinariamente de menos que 2 mm de longitud. Las microagujas también son muy agudas y de un calibre muy pequeño, para reducir adicionalmente el dolor u otras sensaciones durante la inyección o infusión. Estas se pueden usar en la invención como microagujas de lumen individual o varias microagujas se pueden ensamblar o se fabrican en arreglos lineales o arreglos de dos dimensiones para aumentar la velocidad de administración de la cantidad de agente suministrado en un periodo de tiempo dado. La aguja puede expeler su agente desde el extremo, el lado o ambos. Las microagujas se pueden incorporar en una variedad de dispositivos tales como agarraderas, y alojamientos que también pueden servir para limitar la profundidad de la penetración. Los medios de acceso dérmico de la invención también pueden incorporar reservorios para contener el agente antes del suministro o bombas o cualquier otro medio para suministrar el fármaco u otro agente a presión. Alternativamente, el dispositivo que aloja el medio de acceso dérmico se puede conectar externamente a tales componentes adicionales.

Los métodos intradérmicos de administración comprenden los sistemas de inyección e infusión a base de microagujas o cualquier otro medio para tratar específicamente con exactitud el compartimiento intradérmico. Los métodos intradérmicos de administración abarcan no sólo los medios de inyección a base de microdispositivos, sino otros métodos de suministro tales como la inyección balística sin agujas o libre de agujas, de polvos o fluidos dentro del compartimiento intradérmico, ionotoforesis mejorada a través de microdispositivos, y la deposición directa de fluidos, sólidos u otras formas de dosificación dentro de la piel . La invención proporciona un método para un método mejorado para suministrar agentes biológicamente activos, en particular agentes de diagnóstico dentro del compartimiento intradérmico de la piel de un sujeto, que comprende los pasos de proporcionar un dispositivo de suministro, por ejemplo, tales como aquellos ejemplificados en las FIGS. 22-24, incluyendo una cánula de aguja que tiene una punta de aguja adelante y la cánula que está en comunicación de fluido con un agente contenido en el dispositivo de suministro y que incluye una porción limitadora que rodea la cánula de aguja y la porción limitadora que incluye una superficie de acoplamiento con la piel, con la punta de la cánula de la guja que se extiende desde la porción limitadora más allá de la superficie de acoplamiento de la piel una distancia igual a aproximadamente 0.5 mm a aproximadamente 3.0 mm y la cánula de la aguja que tiene un ángulo de orientación fijo con relación a un plano de la superficie de acoplamiento de la piel de la porción limitadora, insertar la punta de la aguja dentro de la piel de un animal y acoplar la superficie de la piel con la superficie de acoplamiento de la piel de la porción limitadora, tal que la superficie de acoplamiento de la piel de la porción limitadora, limita la penetración de la punta de la cánula de la aguja dentro de la capa de la dermis de la piel del animal, y expeler el agente desde el dispositivo de suministro a través de la punta de la cánula de la aguja dentro de la piel del animal . En otras modalidades preferidas, la invención abarca seleccionar un sitio de inyección sobre la piel del sujeto, limpiar el sitio de la inyección sobre la piel del sujeto antes de expeler los agentes biológicamente activos, en particular los agentes de diagnóstico desde el dispositivo de suministro dentro de la piel del sujeto. Además, el método comprende llenar el dispositivo de suministro con los agentes biológicamente activos, en particular los agentes de diagnóstico de la invención. Además, el método comprende presionar la superficie de acoplamiento de la piel de la porción limitadora contra la piel del sujeto y aplicar presión, estirado por ello la piel del sujeto y retirar la cánula de la aguja de la piel después de inyectar el agente. Aun más, el paso de insertar la punta delantera dentro de la piel se define adicionalmente por insertar la punta delantera dentro de la piel a una profundidad de aproximadamente 1.0 mm a aproximadamente 2.0 mm, y más preferiblemente dentro de la piel a una profundidad de 1.5 mm + 0.2 a 0.3 mm. Las FIGS. 25-28 ejemplifican las modalidades específicas de los métodos intradérmicos de la invención. En una modalidad preferida, el método de insertar la punta delantera dentro de la piel del animal se define además por insertar la punta delantera dentro de la piel a un ángulo que es perpendicular de manera general con la piel, en un intervalo de aproximadamente quince grados, con el ángulo más preferiblemente que tiene en general noventa grados con la piel, en un intervalo de aproximadamente cinco grados o el ángulo de orientación fijo con relación a la superficie de acoplamiento de la piel se define además por ser perpendicular de manera general. En la modalidad preferida, la porción limitadora rodea la cánula de la aguja que tiene una superficie de acoplamiento de la piel, plana en general. También, el dispositivo de administración comprende una jeringa que tiene un barril y un émbolo recibido dentro del barril y el émbolo que se puede presionar para expeler el agente desde el dispositivo de suministro a través de la punta delantera de la cánula de la aguja, por ejemplo, véase las FIGS. 22-24. En una modalidad preferida, expeler los agentes biológicamente activos, en particular los agentes de diagnóstico, desde el dispositivo de suministro se define además por asir la aguja hipodérmica con una primera mano y presionar el émbolo con el dedo índice de una segunda mano y expeler el agente desde el dispositivo de suministro aferrando la aguja hipodérmica con una primera mano y presionar el émbolo sobre la aguja hipodérmica con un dedo pulgar de una segunda mano, con el paso de insertar la punta delantera dentro de la piel del animal definido además por presionar la piel del animal con el limitador. Además, el método puede comprender además el paso de conectar un montaje de aguja a una punta del barril de la jeringa con el montaje de aguja que incluye la cánula de la aguja y el limitador, y puede comprender el paso de exponer la punta del barril antes de conectar el montaje de aguja a la misma, removiendo una tapa de la punta del barril. Alternativamente, el paso de insertar la punta delantera de la aguja dentro de la piel del sujeto se puede definir además por aferrar simultáneamente la aguja hipodérmica con una primera mano y presionar el limitador contra la piel del animal estirando por ello la piel del animal, y expeler el agente presionando el émbolo con un dedo índice de la primera mano o expele el agente presionando el émbolo con un dedo pulgar de la primera mano. El método comprende además retirar la punta delantera de la cánula de la aguja desde la piel del sujeto después que el agente ha sido inyectado dentro de la piel del sujeto. Aun más, el método abarca insertar la punta delantera dentro de la piel, preferiblemente a una profundidad de aproximadamente 1.0 mm a aproximadamente 2.0 mm, y más preferiblemente a una profundidad de 1,5 mm + 0.2 a 0.3 mm. Preferiblemente, antes de insertar la cánula 24 de la aguja (véase las FIGS. 22-24), se selecciona y se limpia un sitio de inyección sobre la piel del sujeto. Después de seleccionar y limpiar el sitio, el extremo 40 delantero de la cánula 24 de la aguja se inserta dentro de la piel del sujeto a un ángulo de 90 grados en general hasta que la superficie 42 de acoplamiento de la piel hace contacto con la piel . La superficie 42 de acoplamiento de la piel evita que la cánula 24 de la aguja pase a través de la capa dérmica de la piel e inyecte el agente dentro de la capa subcutánea. En tanto que la cánula 24 de la aguja se inserta dentro de la piel, el agente se inyecta intradérmicamente. El agente puede ser pre-llenado dentro de la jeringa 60, ya sea substancialmente antes y se almacena ahí justo antes de practicar la inyección.

Varias variaciones del método para llevar a cabo la inyección se pueden utilizar dependiendo de las preferencias individuales y el tipo de la jeringa. En cualquier caso, la penetración de la cánula 24 de la aguja es más preferiblemente no más que aproximadamente 1.5 mm puesto que la superficie 42 de acoplamiento de la piel previene la penetración más allá. También, durante la administración de una inyección intradérmica, el extremo 40 delantero de la cánula 42 de la aguja se inserta en la capa dérmica de la piel lo cual resulta en una cantidad razonable de contrapresión durante la inyección de los agentes biológicamente activos, en particular los agentes de diagnóstico de la invención, para alcanzar esta presión con una cantidad mínima de fuerza que tiene que ser aplicada por el usuario a la biela 66 del émbolo de la jeringa, se prefiere un barril 60 de jeringa con un diámetro interno menor, tal como 4.65 mm (0.183") . El método de esta invención también comprende seleccionar una jeringa para la inyección, que tenga un diámetro interno de la anchura suficiente para generar una fuerza suficiente para superar la contrapresión de la capa dérmica cuando los agentes biológicamente activos, en partículas los agentes de diagnóstico se expelen desde la jeringa para practicar la inyección.

Además, puesto que las inyecciones intradérmicas típicamente se llevan a cabo con volúmenes pequeños de los agentes biológicamente activos, en particular los agentes de diagnóstico a ser inyectados, es decir, en el orden de no más que 0.5 L, y preferiblemente alrededor de 0.1 mL, se prefiere un barril 60 de jeringa con un diámetro interno pequeño para minimizar el compartimiento muerto el cual resultaría en agente desperdiciado, capturado entre el tope 70 y el hombro de la jeringa después que se completa la inyección. También, a causa de los volúmenes pequeños de agentes, por ejemplo, en el orden de 0.1 mL, se prefiere un barril de jeringa con un diámetro interno pequeño, para minimizar el compartimiento de cabeza de aire entre el nivel del agente y el tope 70 durante el proceso de insertar el tope. Además, el diámetro interno pequeño mejora la habilidad para inspeccionar y visualizar el volumen de los agentes dentro del barril de la jeringa. Como se muestra en la FIG. 25, la jeringa 60 puede ser aferrada con una primera mano 112 y el émbolo 66 se presiona con el dedo índice 114 de una segunda mano 116. Alternativamente, el émbolo 66 se puede presionar por el dedo pulgar 118 de la segunda mano 116 en tanto que la jeringa 60 se sujeta con la primera mano. En cada una de estas variaciones, la piel del sujeto se presiona, y se estura por la superficie 42 de acoplamiento de la piel sobre el limitador 26. La piel no es contactada ni por la primera mano 112 ni por la segunda mano 116. Una variación adicional ha probado ser efectiva para administrar la inyección intradérmica de la presente invención. Esta variación incluye sujetar la jeringa 60 con la misma mano que se usa para oprimir el émbolo 66. L a jeringa 60 se sujeta con la primera mano 112 en tanto que el émbolo se presiona simultáneamente con el dedo pulgar 120 de la primera mano 112. Esta variación incluye estirar la piel con la segunda mano 114 en tanto que se esta aplicando la inyección. Alternativamente, como se muestra en la FIG. 26, la sujeción se invierte y el émbolo se presiona con el dedo índice 122 de la primera mano 112 en tanto que la piel está siendo esturada por la segunda mano 116. Los métodos de la invención resultan en farmacocinética mejorada de los agentes administrados. Por "farmacocinética mejorada" se quiere decir que se logra una mejora del perfil farmacocinético cuando se mide, por ejemplo, por los parámetros farmacocinéticos estándar tales como el tiempo para la concentración máxima de plasma (Tmax) , la magnitud de la concentración máxima de plasma (Cmax) o el tiempo para producir una concentración mínima detectable de la sangre o el plasma (T?ag) . Por perfil de absorción, se quiere decir que la se mejora la absorción o ges mayor cuando se mide por tales parámetros farmacocinéticos. La medición de los parámetros farmacocinéticos y la determinación de las concentraciones mínimamente efectivas se llevan a cabo rutinariamente en la técnica. Los valores obtenidos se consideran ser mejorados en comparación con las rutas de administración estándares, tales como, por ejemplo, la administración subcutánea o la administración intramuscular. En tales comparaciones, es preferible, aunque no necesariamente esencial, que la administración dentro de la capa intradérmica y la administración dentro del sitio de referencia tal como la administración subcutánea, involucren los mismos niveles de dosificación, es decir, la misma cantidad y concentración del agente así como el mismo vehículo portador y la misma velocidad de administración en términos de cantidad y volumen por unidad de tiempo. Por lo tanto, por ejemplo, la administración de un agente dado dentro de la dermis a una concentración tal como 100 µg/mL y velocidad de 100 µL por minuto durante un periodo de 5 minutos, sería comparado preferiblemente con la administración del mismo agente dentro del compartimiento subcutáneo a la misma concentración de 100 µg/mL y velocidad de 100 µl por minuto durante un periodo de 5 minutos .

Los beneficios PK y PD mencionados arriba se materializan mejor por la orientación directa de los lechos capilares dérmicos. Esto se logra, por ejemplo, usando sistemas de microagujas de menos que 250 micrones de diámetro externo, y menos que 2mm de longitud expuesta. Tales sistemas se pueden construir de varios materiales usando los métodos conocidos, incluyendo acero, silicio, cerámica, y otros metales, plásticos, polímeros azucares, materiales biológicos y/o biodegradables, y/o combinaciones de los mismos. Se ha descubierto que ciertas características de los métodos de administración intradérmica proporcionan PK/PD clínicamente útiles y exactitud de dosificación. Por ejemplo, se ha descubierto que la colocación de la desembocadura de la aguja dentro de la piel afecta significativamente los parámetros PK/PD. La desembocadura de una aguja de calibre convencional o estándar con un corte en sesgo tiene una altura expuesta relativamente alta (la elevación vertical de la desembocadura) . Aunque la punta de la aguja se coloque a la profundidad deseada dentro del compartimiento intradérmico, la gran altura expuesta de la desembocadura de la aguja provoca que el agente sea depositado a una profundidad mucho más superficial, más cercana a la superficie de la piel. Como resultado el agente tiende a difundirse fuera de la piel debido a la contrapresión ejercida por la piel en si y a la presión acumulada por la acumulación del fluido de la inyección o infusión y se filtra a las regiones de menor presión de la piel, tales como el tejido subcutáneo. Es decir, a una mayor profundidad una desembocadura de aguja con una mayor altura expuesta, provocará un sellado fijo eficientemente donde una desembocadura con la misma altura expuesta no sellará eficientemente cuando se coloca a una profundidad más superficial dentro del compartimiento intradérmico. Típicamente, la altura expuesta de la desembocadura de la aguja será desde 0 a aproximadamente 1 mm. Una desembocadura de la aguja con una altura expuesta de 0 mm no tiene corte en sesgo y se encuentra en la punta de la aguja. En esta caso, la profundidad de la aguja es la misma que la profundidad de penetración de la aguja. Una desembocadura dé aguja que se forma ya sea por un corte en sesgo o bien por una abertura a traes del costado de la aguja, tiene una altura expuesta mensurable. Se entiende que una aguja individual puede tener más de una abertura o desembocaduras adecuadas para suministrar los agentes al compartimiento intradérmico. Se ha encontrado también que controlando la presión de inyección o infusión, se puede superar la contrapresión alta ejercida durante la administración ID. Colocando una presión constante directamente sobre la interfase del líquido, se pude lograr una velocidad de suministro más constante, lo cual puede optimizar la absorción y se obtiene farmacocinética mejorada. La velocidad y el volumen de suministro se pueden controlar para prevenir la formación de ronchas en el sito del suministro y para prevenir que la contrapresión empuje los medios de acceso dérmico fuera de la piel y/o a la región subcutánea. Las velocidades y los volúmenes de suministro apropiados para obtener estos efectos se pueden determinar experimentalmente usando sólo las habilidades ordinarias. La separación aumentada entre varias agujas permite una distribución más amplia del fluido e incrementa las velocidades de suministro o mayores volúmenes de los fluidos.

Los métodos de administración útiles para llevar a cabo la invención incluyen tanto el bolo y el suministro por infusión de los agentes biológicamente activos a sujetos humanos o animales . Una dosis de bolo es una dosis única suministrada en una sola unidad de volumen durante un periodo de tiempo relativamente corto, típicamente menos de 10 minutos. La administración por infusión comprende administrar un fluido a una velocidad seleccionada que puede ser constante o variable, durante un periodo de tiempo relativamente más prolongado, típicamente mayor que aproximadamente 10 minutos. Para suministrar un agente, los medios de acceso dérmico se colocan junto a la piel de un sujeto, proporcionando acceso focalizado directo dentro del compartimiento intradérmico y el agente o los agentes se suministran o se administran dentro del compartimiento intradérmico donde estos actúan localmente o son absorbidos por el flujo sanguíneo y son distribuidos sistémicamente . Los medios de acceso dérmico se pueden conectar a un reservorio que contiene el agente o los agentes a ser administrados. El suministro desde el reservorio dentro del compartimiento intradérmico puede ocurrir ya sea pasivamente, sin la aplicación de una presión externa o otros medios de impulso al agente o agentes a ser administrados, y/o activamente, con la aplicación de presión u otros medios de impulso. Los ejemplos de medios de generación de presión preferidos incluyen bombas, jeringas, plumas, membranas elastoméricas, presión por gas, bombeo piezoeléctrico, electromotriz, electromagnético u somático, o muelles o arandelas de Belleville, o combinaciones de los mismos. Si se desea, la velocidad de suministro del agente se puede controlar de manera variable por los medios de generación de presión. En algunas modalidades, la invención abarca los métodos para controlar la farmacocinética de los agentes biológicamente activos administrados, combinando las ventajas de suministrarlos a dos o más compartimientos o profundidades dentro de la piel . En particular, la invención proporciona un método para suministrar un agente biológicamente activo, en particular un agente de diagnóstico como se describe aquí a los compartimiento SC e ID poco profundos para lograr un perfil de pK híbrido que tiene una porción similar a la lograda por el suministro ID y otra porción similar a la lograda por el suministro SC. Esto proporciona niveles de inicio máximos, rápidos y altos del agente biológicamente activo, en particular un agente de diagnóstico así como un nivel circulante prolongado del agente . Tales métodos se describen en la Solicitud de EE.UU. con número de serie 10/429,973, presentada el 6 de mayo del 2003, la cual se incorpora aquí como referencia en su totalidad. En algunas modalidades, el agente biológicamente activo, en particular un agente de diagnóstico se suministra a un sitio, o sitios que incluyen dos o más compartimiento. En algunas modalidades, el agente biológicamente activo, en particular un agente de diagnóstico se suministra a varios sitios que incluye cada uno, uno o más compartimientos. Los métodos de la invención abarcan el suministro controlado del agente biológicamente activo, en particular un agente de diagnóstico, usando los algoritmos que tienen los componentes lógicos que incluyen modelos fisiológicos, modelos a base de reglas o métodos de media móvil, modelos farmacocinéticos de terapia, algoritmos de procesamiento de señales de monitoreo, modelos predictivos de control, o combinaciones de los mismos . Los métodos de la invención abarcan un método para las combinaciones de la administración SC menos poco profunda e ID para lograr resultados de PK mejorada. Estos resultados no se pueden lograr usando solamente uno u otro compartimientos de suministro. La deposición en varios sitios vía la configuración apropiada del dispositivo y/o del método de dosificación, puede obtener resultados beneficios únicos. El principio técnico subyacente es que el resultado PK del suministro por microaguja es específico para la profundidad de la deposición y la formación de patrones del fluido administrado, tal que la deposición se puede controlar mecánicamente vía el diseño y la ingeniería del dispositivo o por medio de técnicas tales como la sobrecarga de fluido del compartimiento ID. Además, la invención incluye las agujas (micro o de cualquier otra manera) para la inyección SC que tienen una longitud menos que 5 mm de longitud. La administración SC poco profunda a una profundidad de aproximadamente 3 mm da PK casi idéntica a la SC profunda usando las técnicas tradicionales . La utilidad del suministro SC poco profundo sólo para dar perfiles más controlados nunca se ha explotado. De hecho, previamente se ha considerado que las profundidades menores que 5 mm no están dentro del compartimiento SC. El suministro mezclado ya sea por el sísenlo del dispositivo o la técnica resulta en formación de perfiles cinéticos bifásicos o mezclados. Las pequeñas diferencias en la longitud 30 del dispositivo (Imm vs . 2 mm vs . 3 mm) agente de diagnóstico diferencias dramáticas en los resultados de PK. Los perfiles similares a SC se pueden obtener con longitudes de agujas que frecuentemente se asume que localizan el extremo de la aguja dentro del compartimiento ID. El suministro SC poco profundo es más consistente y uniforme en los resultados de PK que el suministro SC estándar. Los límite de la profundidad del tejido tenido como objetivo se controlan inter alia por la profundidad a la cual se inserta la desembocadura de la aguja o la cánula, la altura expuesta (elevación vertical) de la desembocadura. El volumen administrado, y la velocidad de administración. Los parámetros adecuados se pueden determinar por las personas expertas en la técnica sin experimentación excesiva. La invención abarca administrar las composiciones de la invención intradérmicamente como se describe aquí, en combinación con otras rutas de suministro, incluyendo, por ejemplo, la interfase subcutánea-intradérmica, administración intranasal (IN) , administración parenteral (es decir, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa y subcutánea), epidural, y mucosal (por ejemplo, las rutas intranasal y oral) . Las composiciones se pueden administrar por cualquier ruta conveniente, por ejemplo, por infusión o inyección de bolo, por absorción a través de los revestimientos epitelial o mucocutanea (por ejemplo, la mucosa oral, la mucosa recital e intestinal, etc.) y se pueden administrar junto con otros agentes biológicamente activos. La administración puede ser sistémica o local. Además, se puede emplear la administración pulmonar, por ejemplo, mediante el uso de un inhalador o nebulizador, y la formulación con un agente aerosolizante . Véase, por ejemplo, las Patentes Norteamericanas Nos. 6,019,968; 5,985,320; 5,985,309; 5,934,272; 5,874,064; 5,855,913; 5,290,540; y 4,880,078; y Las Publicaciones PCT NOS. WO 92/19244; WO 97/32572; WO 97/44013; WO 98/31346; y WO 99/66903, cada una de las cuales e incorpora aquí como referencia en su totalidad. 5.3.1 DISPOSITIVOS PARA EL SUMINISTRO INTRADÉRMICO los agentes biológicamente activos, incluyendo los agentes de diagnóstico de la invención se administran usando alguno de los dispositivos y los métodos conocidos en la técnica o descritos en WO 01/02178, publicada el 10 de enero del 2002; y WO 02/02179, publicada el 10 de enero del 2002, la Patente Norteamericana No. 6,494,865, publicada el 17 de diciembre del 2002 y la Patente Norteamericana No. 6,569,143 publicada el 27 de mayo del 2003, todas de las cuales se incorporan aquí como referencia en su totalidad. Preferiblemente los dispositivos para la administración intradérmica de acuerdo con los métodos de la invención tienen medios estructurales para controlar la penetración de la piel a la profundidad deseada dentro del espacio intradérmico. Esto se logra más típicamente por medio de un área ensanchada o cubo asociado con el eje del medio de acceso dérmico que puede tomar la forma de una estructura de apoyo o plataforma a la cual se conectan las agujas. La longitud de las microagujas como los medios de acceso dérmico se varían fácilmente durante el proceso de fabricación y se producen rutinariamente con menos de 2 mm de longitud. Las microagujas también son muy agudas y de un calibre muy pequeño, para reducir adicionalmente el dolor y otras sensaciones durante la inyección o la infusión. Estas se pueden usar en la invención como microagujas de limen individual o varias microagujas se pueden ensamblar o se fabrican en arreglos lineales o arreglos bidimensionales para incrementar la velocidad de suministro o la cantidad de la sustancia suministrada en un periodo de tiempo dado. La aguja puede expulsar su sustancia desde el extremo, el costado o ambos. Las microagujas se pueden incorporar en una variedad de dispositivos tales como sujetadores y alojamientos que pueden servir también para limitar la profundidad de penetración. El medio de acceso dérmico de la invención también incorpora reservorios para contener la sustancia antes del suministro o bombas u otros medios para suministrar el fármaco u otras substancias a presión. Alternativamente, el dispositivo que aloja el medio de acceso dérmico se puede conectar externamente a tales componentes adicionales. Los métodos intradérmicos de administración comprenden sistemas de inyección e infusión a base de microagujas o cualquier otro medio para tener como objetivo con exactitud el espacio intradérmico. Los métodos intradérmicos de administración abarcan no sólo los medios de inyección a base de agujas, sino otros métodos de suministro tales como la inyección balística sin agujas o libre de agujas, de fluidos p polvos dentro del espacio intradérmico, iontoforesis mejorada a través de microdispositivos, y deposición directa de fluidos, sólidos, u otras formas de dosificación dentro de la piel . En algunas modalidades, la presente invención proporciona un dispositivo de suministro que incluye un montaje de aguja para usarse al aplicar inyecciones intradérmicas. El montaje de aguja tiene un adaptador que se puede conectar a recipientes que se pueden prellenar tales como jeringas y los similares. El montaje de aguja es soportado por el adaptador y tiene un cuerpo hueco con un extremo delantero que se extiende lejos del adaptador. Un limitador rodea la aguja y se extiende lejos del adaptador hacia el extremo delantero de la aguja. El limitador tiene una superficie de acoplamiento de la piel que se adapta para ser recibido contra la piel de un animal tal como un humano. El extremo delantero de la aguja se extiende lejos de la superficie de acoplamiento de la piel una distancia seleccionada tal que el limitador limita la cantidad o la profundidad a la que la aguja es capaz de penetrar a través de la piel de un animal . En una modalidad especifica, el montaje de aguja hipodérmica para usarse en los métodos de la invención comprende los elementos necesarios para llevar a cabo la presente invención dirigida a un método mejorado para suministrar los agentes biológicamente activos, incluyendo los agentes de diagnóstico dentro de la piel de un sujeto, preferiblemente la piel de un sujeto humano, que comprende los paso de proporcionar un dispositivo de suministro que incluye una cánula de aguja que tiene una punta delantera de la aguja y la cánula de agua que se encuentra en comunicación de fluido con el agente contenido en el dispositivo de suministro y que incluye una porción limitadora que rodea la cánula de aguja y la porción limitadora que incluye una superficie de acoplamiento de la piel, con la punta de la aguja de la cánula de aguja que se extiende desde la porción limitadora más allá de la superficie de acoplamiento de la piel una distancia igual a aproximadamente 0.5 mm a aproximadamente 3.0 mm y la cánula de la aguja que tiene un ángulo fijo de orientación con relación a un plano de la superficie de acoplamiento de la piel de la porción limitadora, insertar la punta de la aguja dentro de un animal y acoplar la superficie de la piel con la superficie de acoplamiento de la piel de la porción limitadora, tal que la superficie de acoplamiento de la piel de la porción limitadora, limita la penetración de la punta de la cánula de la aguja dentro de la capa de la dermis de la piel del animal y expeler la sustancia desde el dispositivo de suministro de fármacos a través de la punta de la cánula de la aguja dentro de la piel del animal. En una modalidad especifica, la invención abarca un dispositivo de suministro de fármacos como se describe en la FIG. 22 - FIG. 24 que ilustran un ejemplo de un dispositivo de suministro de fármacos el cual se puede usar para practicar los métodos de la presente invención, para efectuar inyecciones intradérmicas ilustradas en las FIGS. 25-28. El dispositivo 10 ilustrado en las FIGS. 22-24 incluye un montaje 20 de aguja el cual se puede conectar a un barril 60 de jeringa. Otras formas de dispositivos de suministro se pueden usar, incluyendo plumas de los tipos descritos en la Patente Norteamericana No. 5,279,586, la Solicitud de la Patente Norteamericana Serie No. 09/027,607 y la Solicitud PCT No. WO 00/09135, la descripción de la cual se incorpora por este medio como referencia en su totalidad. El montaje 20 de aguja incluye un dado que soporta una cánula 24 de la aguja. El limitador 26 recibe al menos una porción del dado 22 de modo que el limitador 26 rodea de forma general a la cánula 24 de la aguja, como se observa mejor en la FIG. 22. Un extremo 30 del dado 22 es capaz de ser asegurado a un receptor 32 de una jeringa. Una variedad de tipos de jeringas para contener la sustancia a ser suministrada intradérmicamente de acuerdo con la presente invención, se pueden usar con un montaje de aguja diseñado, con los varios ejemplos que se dan abajo. El extremo opuesto del dado 22 incluye preferiblemente las extensiones 34, que son recibidas de manera encajable contra las superficies 36 colindantes dentro del limitador 26. Una pluralidad de nervaduras 38 se proporciona preferiblemente en el limitador 26 para proporcionar integridad estructural y para facilitar el manejo del montaje 20 de aguja.

Diseñando apropiadamente el tamaño de los componentes, se puede controlar estrechamente una distancia "d" entre un extremo delantero o punta 40 de la aguja 24 y la superficie 42 de acoplamiento de la piel en el limitador 26. La distancia "d" preferiblemente está en el rango desde aproximadamente 0.5 mm a aproximadamente 3.0 mm, y más preferiblemente alrededor de 1.5 mm + 0.2 mm a 0.3 mm. Cuando el extremo 40 delantero de la cánula 24 de la aguja se extiende más allá de la superficie 42 de acoplamiento de la piel a una distancia dentro de ese rango, se asegura una inyección intradérmica porque la aguja es incapaz de penetrar más allá de la capa de la dermis típica de un animal. Típicamente, la capa externa de la piel, la epidermis, tiene un espesor de entre 50-200 micrones, y la dermis, la capa interna y más gruesa de la piel, tiene un espesor de entre 1.5-3.5 mm. Debajo de la capa de la dermis se encuentra el tejido subcutáneo (también conocidos algunas veces como la capa de la hipodermis) y el tejido muscular, en ese orden. Como se puede observar mejor en la FIG. 22, el limitador 26 incluye una abertura 44 a través de la cual sobresale el extremo 40 delantero de la cánula 24 de la aguja. La relación dimensional entre la abertura 44 y el extremo 40 delantero se puede controlar dependiendo de los requerimientos de una situación particular. En la modalidad ilustrada, la superficie 42 de acoplamiento de la piel es plana o llana de manera general y continua, para proporcionar una colocación estable del montaje 20 de aguja contra la piel de un animal. Aunque no se ilustra específicamente, puede ser ventajoso tener la superficie 42 de acoplamiento de la piel plana en general, que incluye porciones elevadas en forma de nervaduras o bien porciones hendidas en forma de ranuras, para mejorar la estabilidad o facilitar la conexión de una protección de la aguja a la punta 40 de la aguja. Adicionalmente, las nervaduras 38 a lo largo de los costados del limitador 26 se pueden extender más allá del plano de la superficie 42 de acoplamiento de la piel . Sin importar la forma o el contorno de la superficie 42 de acoplamiento de la piel, la modalidad preferida incluye un área superficial suficientemente plana o llana en general que hace contacto con la piel para facilitar la estabilización del inyector con relación a la piel del sujeto. En el arreglo más preferido, la superficie 42 de acoplamiento de la piel facilita el mantenimiento del inyector en una orientación perpendicular de manera general con relación a la superficie de la piel y facilita la aplicación de la presión contra la piel durante la inyección. Por lo tanto, en la modalidad preferida, el limitador tiene las dimensiones o diestro externo de al menos 5 mm. Las dimensiones principales dependerán de la aplicación y las limitaciones de empacado, pero un diámetro conveniente es menos que 15 mm o más preferiblemente 11-12 mm. Es importante notar que aunque las FIGS. 22 y 23 ilustran un montaje de dos piezas, el dado 22 se fabrica separado del limitador 26, un dispositivo para usarse en conexión con la invención no se limita a tal arreglo. Construir el dado y el limitador integralmente a partir de una sola pieza de material plástico es una alternativa al ejemplo mostrado en las FIGS. 22 y 23. Adicionalmente, es posible asegurar adhesivamente o de otra manera el dado 22 al limitador 26 en la posición ilustrada en la FIG. 24 de modo que el montaje 20 de aguja se vuelve una sola pieza unitaria por el montaje. Tener un dado 22 y el limitador 26 proporciona la ventaja de hacer una aguja intradérmica de fabricación práctica. El tamaño preferido de la aguja es una aguja hipodérmica de calibre pequeño, conocido comúnmente como aguja de Calibre 30 o de Calibre 31. Tener tal aguja de diámetro pequeño presente un reto para hacer una aguja lo suficientemente corta para prevenir la penetración indebida más allá de la capa de la dermis de un animal. El limitador 26 y el dado 22 facilitan la utilización de una aguja 24 que tiene una longitud total que es mucho más grande que la longitud efectiva de la aguja, la cual penetra el tejido del individuo durante una inyección. Con un montaje de aguja diseñado de acuerdo con esto, se mejora la fabricación puesto que las agujas de mayor longitud se pueden manejar durante los procesos de fabricación y montaje en tanto que aun se obtienen las ventajas de tener una aguja corta para los propósitos de completar una inyección intradérmica. La FIG. 24 ilustra el montaje 20 de aguja asegurado a un recipiente de fármaco tal como una jeringa 60 para formar el dispositivo 10. Un cuerpo 62 cilindrico de la jeringa de manera general se puede fabricar de plástico o vidrio como se conoce en la técnica. El cuerpo 62 de la jeringa proporciona un reservorio 64 para contener la sustancia a ser administrada durante una inyección, una biela 66 del émbolo tiene un reborde 68 de activación manual en un extremo con un tope 70 en un extremo opuesto, como se conoce en la técnica. El movimiento manual de la biela 66 del émbolo a través del reservorio 64 fuerza a la sustancia dentro del reservorio 64 a ser expulsada fuera del extremo 40 de la aguja según se desee. El dado 22 se puede asegurar al cuerpo 62 de la jeringa en una variedad de maneras conocidas. En un ejemplo, un accesorio de interferencia se proporciona entre el interior del dado 22 y el exterior de la porción 72 del orificio de salida del cuerpo 62 de la jeringa. En otro ejemplo, se proporciona un arreglo de adaptador Luer para asegurar el dado 22 en el extremo 22 de la jeringa 60. Como se puede apreciar de la FIG. 6, tal montaje de aguja diseñado es fácilmente adaptable a una amplia variedad de estilos de jeringas convencionales. Esta invención proporciona un inyector de aguja intradérmico que es adaptable para ser usado con una amplia variedad de tipos de agujas. Por lo tanto, esta invención proporciona la ventaja significativa de facilitar la fabricación y el montaje de las agujas intradérmicas a una escala de producción en masa en una manera económica. Antes de insertar la cánula 24 de la aguja, se selecciona y se limpia un sitio de inyección sobre la piel del animal. Después de seleccionar y limpiar el sitio, el extremo 40 delantero de la cánula 24 de la aguja se inserta dentro de la piel del animal a un ángulo de 90 grados de manera general, hasta que la superficie 42 de acoplamiento de la piel hace contacto con la piel . La superficie 42 de acoplamiento de la piel evita que la cánula 42 de la aguja pase a través de la capa de la dermis de la piel e inyecte la sustancia dentro de la capa subcutánea. En tanto que la cánula 42 de la aguja se inserta dentro de la piel, la substancia se inyecta intradérmicamente. La sustancia se puede rellenar dentro de la jeringa 60, ya sea substancialmente antes y se almacena ahí justo antes de practicar la inyección. Se pueden utilizar varias variaciones el método para llevar a cabo la inyección, dependiendo de las preferencias individuales y el tipo de jeringa. En cualquier caso, la penetración de la cánula 42 de la aguja preferiblemente no es más que aproximadamente 1.5 mm puesto que la superficie 42 de acoplamiento de la piel evita cualquier penetración más allá. También, durante la administración de una inyección intradérmica, el extremo 40 delantero de la cánula 42 de la aguja se introduce en la capa de la dermis de la piel, lo cual resulta en una cantidad razonable de contra presión durante la inyección de la sustancia. Esta contrapresión podría ser del orden de 5.3428 kg/cm2 (76 psi). Para alcanzar esta presión con una cantidad de fuerza mínima que debe ser aplicada por el usuario sobre la biela 66 del émbolo de la jeringa, se prefiere un barril 60 de jeringa con un diámetro interno pequeño, tal como 4.65 mm (0.183") o menos. El método de esta invención incluye por lo tanto seleccionar una jeringa para la inyección que tenga un diámetro interno de la anchura suficiente para generar una fuerza suficiente para superar la contra presión de la capa de la dermis cuando se expele la sustancia desde la jeringa para practicar la inyección.

Además, como las inyecciones intradérmicas típicamente se llevan a cabo con volúmenes pequeños de la sustancia a ser inyectada, es decir, en el orden de no más que 0.5 mL, y preferiblemente de 0.1 mL, se prefiere un barril 60 de jeringa con un diámetro interno pequeño, para minimizar el espacio muerto, el cual podría resultar en sustancia desperdiciada capturada entre el tope 70 y el hombro de la jeringa después que se complete la inyección. También, a causa de los volúmenes pequeños de la substancia, en el orden de 0.1 mL, se prefiere un barril de la jeringa con un diámetro interno pequeño, para minimizar el espacio de cabeza de aire entre el nivel de la sustancia y el tope 70 durante el proceso de insertar el tope. Además, el diámetro interno pequeño mejora la habilidad para inspeccionar y visualizar el volumen de la sustancia dentro del barril de la jeringa. Como se muestra en las FIGS. 22-24 la jeringa 60 puede ser sujetada con una primera mano 112 y el émbolo se presiona con el dedo índice 114 de una segunda mano 116. Alternativamente como se muestra en las FIGS. 8-10 el émbolo 66 se puede presionar por el dedo pulgar 118 de la segunda mano 116 en tanto que la jeringa 60 se sujeta por la primera mano. En cada una de estas variaciones, la piel del animal se presiona y se estira por la superficie 42 de acoplamiento de la piel sobre el limitador 26. La piel no es contactada ni por la primera mano 112 ni por la segunda mano 116.

Una variación adicional ha probado ser efectiva para administrar la inyección intradérmica de la presente invención. Esta variación incluye sujetar la jeringa 60 con la misma mano que la que se usa para presionar el émbolo 66 . La FIG. 22 muestra la jeringa 60 que es sujeta con la primera mano 112 en tanto que el émbolo se presiona simultáneamente con el dedo pulgar 120 de la primera mano. Esta variación incluye estirar la piel con la segunda mano 114 en tanto que la inyección se esta practicando. Alternativamente, como se muestra en la FIG. 22, la sujeción se invierte y el émbolo se presiona por el dedo índice 122 de la primera mano 112 en tanto que la piel se está estirando por la segunda mano 116. Sin embargo, se cree que este estiramiento manual de la piel es innecesario y sólo representa una variación fuera de hábito para usar la técnica estándar. En cada una de las variaciones descritas arriba, la cánula 24 de la aguja se inserta solamente aproximadamente 1.5 mm dentro de la piel del animal . Después de la administrar la inyección, la cánula 24 de la aguja se retira de la piel y la jeringa 60 y el montaje 20 de aguja se desechan de una manera apropiada. Cada una de las variaciones se utilizó en pruebas clínicas para determinar la efectividad tanto del montaje 20 de aguja y el presente método para administrar la inyección intradérmica . 6. EJEMPLOS Los siguientes ejemplos son ilustrativos, y no se deben visualizar como limitantes del ámbito de la presente invención. Las variaciones razonables, tales como aquellas que se les ocurrirán a los técnicos razonables, se pueden hacer aquí sin apartase del ámbito de la presente invención. 6.1 TINCIÓN Y RASTREO DEL TINTE IN VIVO. MATERIALES Y MÉTODOS Se condujeron la tinción de células in vivo y todos los siguientes experimentos bajo el protocolo aprobado por la IACUC. Ratones Balb/c (Charles River Laboratories, Raleigh, NC) , de 6-8 • semanas de edad, se anestesiaron (IsoFlurane, Abbott Laboratories, Chicago, IL) y se inyectaron intradérmicamente con solución de tinte Azul de Evans al 1% usando una jeringa estándar con aguja de calibre 34. Los ratones se diseccionaron una hora después de la inyección y se observó la localización del tinte. El ratón, como el humano, tiene varios grupos principales de nodos linfáticos de drenaje fácilmente identificados. RESULTADOS. La FIG. 1 ilustra los nodos inguinales que se tuvieron como objetivos por la inyección. La FIG. 2 muestra que los nodos linfáticos inguinales fueron altamente teñidos con el tinte. El tinte restante en el sitio de la inyección no se había transportado aun al nodo linfático. Por lo tanto, una hora después de la inyección, fue aparente que el tinte se había transportado al nodo linfático, según se evidencia por la tinción oscura. 6.2 TINCIÓN Y RASTREO DEL TINTE IN VIVO: COMPARACIÓN DEL SUMINISTRO SC E ID (EJEMPLO ÍA) MATERIALES Y MÉTODOS. La tinción de células in vivo y los siguientes experimentos se condujeron bajo un protocolo aprobado por la IACUC. Un cerdo de Yorkshire (Charles River Laboratories, Raleigh, NC) , de 20-25 kg, se anestesió y se inyectó con solución de tinte Azul de Evans al 1% (1) intradérmicamente (nid) y perpendicular a la piel, usando una jeringa estándar con una aguja calibre 34 de 1 mm de longitud o (2) subcutáneamente, a un ángulo de aproximadamente 30 grados, usando una jeringa estándar con una aguja de calibre 25/14 mm (media pulgada) (profundidad aproximada de 7 mm) . Las inyecciones se colocaron en el costado dorsal izquierdo del cerdo abajo del diafragma y próximas unas a otras, como se indica en la FIG. 2B. La observación visual hecha durante la inyección ID señaló el transporte inmediato del tinte desde el sitio de la inyección moviéndose hacia el nodo linfático de drenaje regional, el nodo inguinal. Este transporte era visible a través de la piel y fue extremadamente rápido, atravesando los tejidos a velocidades de hasta 10 cm por segundo. La observación visual del tinte inyectado subcutáneamente no indicó trasporte aparente del tinte . El cerdo se eutanizó y se diseccionó 10 minutos después de la inyección y se observó la ubicación del tinte. RESULTADOS. Como se evidencia en la FIG. 2C a 2D, el tinte inyectado ID se mueve rápidamente a través de la vasculatura linfática al nodo inguinal en tanto que el tinte inyectado subcutáneamente permanece en el sitio de la inyección y no se transportó al nodo inguinal. Por lo tanto, fue aparente que la inyección ID fue superior a la subcutánea en cuanto a la administración rápida buscada como objetivo de los agentes al sistema linfático. 6.3 TINCIÓN DEL ANTICUERPO Y CITOMETRÍA DE FLUJO (EJEMPLO 2) MATERIALES Y MÉTODOS. El modelo emplea un anticuerpo anti-CD90 (marcador de células T) de rata etiquetado. El CD90 fue el marcador presente en las células linfocíticas T. este reactivo ofrece la oportunidad de etiquetar específicamente, in vivo, las células residentes en los nodos linfáticos. El anticuerpo se introdujo vía una sola inyección intradérmica de bolo usando un aparato de aguja de 1 mm 34G/catéter en el área dorsal . Se monitoreo el trafico del anticuerpo a los nodos linfáticos inguinales a través del tiempo, por citometría de flujo y examinación histológica de las secciones de tejido relevantes (véase el Ejemplo 3) . Ratones Balb/c anestesiados, 6-8 semanas de edad, como se describe arriba, se inyectaron con un anticuerpo monoclonal anti-CD90 (marcador de células T) (clon 30-H12, Pharmingen, BD Biosciences, San José, CA, específico para timocitos, linfocitos T y algunas células dendríticas) a 1 ug/gramo de ratón como una sola inyección intradérmica de bolo, usando un aparato intradérmico 34G (configuración de aguja/catéter) en un volumen total de 50 µl (20-25 µLs/lado inferior del dorso del ratón afeitado) . En el momento apropiado después de la inyección, los ratones se sacrificaron y los nodos linfáticos inguinales y otros tejidos apropiados (el bazo, el timo, los ríñones) se removieron y se prepararon para el análisis de citometría de flujo o el examen histológico (Ejemplo 3) . La cantidad del anticuerpo podría ser tan baja como 5ug/ratón. Para el análisis de citometría de flujo, el tejido se colocó en platos de petri conteniendo 10 mL de amortiguador RPMI frío (RPMI 1640, 5% FBS, 1% Pen/Strep, 0.5% ß-mercaptoetanol, Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA) para los nodos linfáticos, el timo y los ríñones. Los bazos se colocaron en 10 mL de amortiguador de lisis de célula sanguíneas rojas, frío (Sigma St . Louis, MO) , 1.0 mM KHC03) . Se prepararon suspensiones celulares individuales machacando el tejido a través de un tamiz de malla de 200 µ (VWR Scientific Products, West Chester, PA) bajo condiciones estériles . Los conteos de células se tomaron usando una dilución 1:20 de la solución celular resultante. Las células se centrifugaron a 1500 rpm por 15 minutos a 4°C. El sobrenadante se aspiró y las células se lavaron con 5 mis de amortiguador RPMI y se centrifugaron como antes. El sobrenadante se aspiró y las células se resuspendieron en amortiguador de tinción de Pharmingen (Pharmingen, BD Biosciences, San José, CA) a 2-4 x 108 células/mL para el teñido del flujo. Aproximadamente 1 x 107 células, 25 µL de las células suspendidas, se agregó a una placa de 96 pozos. El cóctel de teñido, 25 µL, se agregó a las células en el pozo y se mezcló por pipeteado. El cóctel consiste de los siguientes anticuerpos etiquetados cada uno a 0.01 mg/ml en amortiguador de tinción de Pharmingen, CY5PE-MAC1 (Caltag Laboratories, Burlingame, CA) , CY5PE-GR1, APC- CD19, PE-CD4, APC-Cy7-CD8 (Pharmingen, BD Biosciences, San José, CA) . Las células/mezcla de tinción se incubó por 1 hora a 4°C en la oscuridad. Los pozos se lavaron con 150uls de amortiguador FacsFlow (Pharmingen) y se centrifugaron a 1500 rpm por 5 minutos a 4°C. El sobrenadante se aspiró y se repitió el lavado. Las células lavadas se resuspendieron en 1 mL de amortiguador FacsFlow frío y se mantuvieron en la oscuridad hasta ser analizadas por citometría de flujo usando un FACS Vantage SE. El análisis de las células se regula para los granulocitos y los macrófagos. Los nodos linfáticos se removieron y las células se tiñeron in vitro para el análisis usando los marcadores de células T CD4 y CD8 junto con CD19 para la identificación de las células B. el anticuerpo inyectado contenía la región Fc y se anticipo el enlazamiento al receptor Fc en las células B. RESULTADOS. Los resultados mostrados en las FIGS. 3A y 3B se obtuvieron vía la citometría de flujo e indican el transporte rápido, en tan poco como 15 minutos, del anticuerpo desde el compartimiento intradérmico al nodo linfático, con el enlazamiento subsecuente a las moléculas de CD90 en las células T y la absorción por las células B a través del receptor Fc . FITC + células se observaron a frecuencias arriba del 20% hasta por 2 horas. El porcentaje de células que se enlazan al anticuerpo etiquetado fluctúa a través del tiempo ya que las células T circulantes fluyen dentro y después fuera del hondo linfático- las células etiquetadas con el anticuerpo no se muestran en el bazo hasta 6-10 horas después de la inyección. Los intentos a la administración cutánea del anticuerpo etiquetado se enfrentan con resultados confusos ya que el tejido que rodea los nodos linfáticos contenía alta señal de fondo del anticuerpo y fue indistinguible de la señal específica del nodo. Las observaciones generales de los datos indican mayor absorción y señalización con la administración intradérmica en comparación con la administración subcutánea. 6.4 EXAMINACIÓN HISTOLÓGICA (EJEMPLO 3) MATERIALES Y MÉTODOS. Secciones de tejidos de los nodos linfáticos de drenaje como se obtuvieron en el ejemplo 2 en cada punto de tiempo se examinaron por examinación histológica. El tejido recolectado se preparó como secciones congeladas en medio OCT (Triangle Biomedical Sciences, Durham, NC) . Las muestras se congelan instantáneamente en hielo seco/2 -metilbutano y después se almacenaron a -80°C hasta el seccionamiento. El tejido se seccionó serialmente a una profundidad de 12 micrones y se adhirió a platinas de vidrio revestidas con poli-L-lisina (Sigma) . Las secciones de tejido adheridas se tiñeron con hemolisina (sigma) y eosina Y (Sigma) y se montaron en solución VectaMount (Vector Laboratories, Burlingame, CA) y se secaron. La examinación microscópica se condujo usando un microscopio confocal Nikon Eclipse TE300. RESULTADOS. Las secciones se tiñeron con hematoxilina y eosina (H&E) y después se examinaron microscópicamente. Las FIGS. 4A-4C muestran el tejido del nodo linfático de un ratón una hora después de la inyección del anticuerpo anti-CD90 etiquetado fluorescentemente. Como se evidenció ahí, el anticuerpo fluorescente inyectado se enlaza in vivo (FIG. 4A) a las células en el tejido, indicando que este tuvo actividad biológica y señalización activas. El modelo de ratón mostró la administración focalizada de los reactivos de diagnóstico al sistema linfático. 6.5 ADMINISTRACIÓN DE TINTE A VARIAS PROFUNDIDADES, VOLÚMENES Y VELOCIDADES EN LA PIEL (EJEMPLOS 4-9) . MATERIALES y METIDOS. Los siguientes experimentos se condujeron bajo un protocolo aprobado por la IACUC. Cerdos de Yorkshire (Charles River Laboratories, Raleigh, NC) , de aproximadamente 20-25 kg, se anestesiaron (Rompun 4 mg/kg, Xilazina 2 mg/kg, y Cetamina 2 mg/kg y se mantuvieron en isoflurano al 2%) y se inyectaron intradérmicamente con solución de tinte Azul de Evans al 1% a varios volúmenes y profundidades de penetración de la aguja, usando una jeringa estándar y una aguja de calibre 34. el volumen inyectado y la velocidad se controlaron manualmente o con una bomba programable de Hardvard Apparatus PhD 200. La piel en el sitio de la inyección, incluyendo el material inyectado y el tejido circundante, se cortó inmediatamente después de la inyección, el tejido se congeló instantáneamente en hielo seco/2-metilbutano y después se almacenó a -80°C hasta el seccionamiento. El tejido congelado se cortó longitudinalmente a través del punto de inserción de la aguja y se examinó inmediatamente por microscopia y se fotografió. Las examinaciones microscópicas se condujeron usando una mira telescópica de disección SMZ-U de Nikon con un montaje de cámara de 35 mm FX-35PX de Nikon. Alternativamente, después de la inyección, los cerdos fueron eutanizados y el tejido resectado y fotografiado. 6.5.1 ADMINISTRACIÓN ID DE 50 uL CON UNA AGUJA DE 1.0 mm 34G A UNA VELOCIDAD DE 45uL/min (EJEMPLO 4) Un cerdo de Yorkshire anestesiado se inyectó intradérmicamente en el costado con µL de EB a traes de una aguja de 1.0 mm, 34G a una velocidad de 45 µL/min. Se removió por incisión una sección de 2 cm2 alrededor del sitio de la inyección y se proceso como se describe arriba. Los resultados se muestran en la FIG. 9. Las áreas señaladas con círculos dentro de la dermis reticular, separadas del depósito principal de la inyección, muestran las secciones transversales de los vasos linfáticos de drenaje (azul) 6.5.2 ADMINISTRACIÓN ID DE 100 µl CON UNA AGUJA DE 1.0 il, 34G A UNA VELOCIDAD DE 45 µL/min (EJEMPLO 5) Un cerdo de Yorkshire anestesiado se inyectó intradérmicamente en el costado con 100 pared circunferencial de EB a través de una aguja de 1.0 mm, 34G a una velocidad de 45 pL/min. Los sitios de la piel se removieron por incisión, se congelaron instantáneamente en metil butano y se cortaron en sección transversal a través del punto de inserción de la aguja. Los resultados se muestran en las FIGS. 10 y 11. En la FIG. 10 el área azul señalada con un círculo dentro de la dermis reticular a la derecha del longitudinal del vaso linfático de drenaje. En contraste, un capilar subpapilar se muestra dentro del mismo círculo (punto rojo) . En la FIG. 11, los vasos linfáticos (puntos azules) se pueden observar en al menos cinco áreas distintas alrededor del depósito de la inyección. 6.5.3 ADMINISTRACIÓN ID DE lOOµl CON UNA AGUJA DE 1.0 min, 34G, A UNA VELOCIDAD DE lOOµL/min (EJEMPLO 6) . Un cerdo de Yorkshire anestesiado se inyectó intradérmicamente en dos sitios en el costado con 100 µL de EB a través de una aguja de 1.0 mm, 34G a una velocidad de 100 µL/min. Se permitió que los depósitos permanecieron en la piel por 5 minutos antes de la escisión. Los resultados se muestran en las FIGs. 12 y 13. En la FIG. 12, los vasos linfáticos (azul) son claramente visibles a través de la piel del cerdo, llevando lejos del punto de la inyección (bajo la gaza blanca), hacía el nodo linfático de drenaje. En la FIG. 13, el corte quirúrgico confirma la trayectoria de drenaje observada previamente en las muestras de tejido retiradas por escisión y en la FIG. 12. 6.6 ADMINISTRACIÓN ID DE 100 uL CON UNA AGUJA DE 1.5 mm, 34G A UNA VELOCIDAD DE 100 uL/min (EJEMPLO 7) Un cerdo de Yorkshire anestesiado de inyectó intradérmicamente en el costado con lOOµL de EB a través de una aguja de 1.5 mm, 34G a una velocidad de 100 µL/min. Una sección de 2 cm2 alrededor del sitio de la inyección se retiró por incisión inmediatamente enseguida de la inyección, se congeló instantáneamente en metil butano y se cortó en sección transversal a través del punto de inserción de la aguja. Como se puede observar en la FIG. 14, el EB pasa a través de la cánula y comienza a generar presión en el compartimiento intradérmico. Cuando se desarrolla suficiente presión, la vasculatura linfática se abre y se sostiene el transporte rápido de EB hasta que cesa el suministro de EB. La FIG. 14 muestra un ejemplo de los vasos linfáticos visibles de una inyección a 1.5 mm (señalados con un círculo) . 6.7 ADMINISTRACIÓN ID DE 50uL CON UNA AGUJA DE 2 , 34G A UNA VELOCIDAD DE 45uL/min (EJEMPLO 8) Un cerdo de Yorkshire anestesiado se inyectó intradérmicamente en el costado con 50 uL de EB a través de una aguja de 2 mm, 34G a una velocidad de 45 µL/min. Una sección de 2 cm2 alrededor del sitio de la inyección se retiró por incisión inmediatamente enseguida de la inyección, se congeló instantáneamente en metil butano y se cortó en sección transversal a través del punto de inserción de la aguja. Los resultados se muestran en la FIG. 15. 6.8 ADMINISTRACIÓN ID DE 200 uL CON UNA AGUJA/CATÉTER DE 1 mm, 34G (EJEMPLO 9) Un cerdo de Yorkshire anestesiado se inyecto manualmente, intradérmicamente arriba de la pezuña derecha con 200 uls de EB, a través de una aguja/catéter de 1 mm, 34G. En segundos, el tinte viajó desde el sitio de la inyección al nodo linfático inguinal de drenaje; la velocidad del viaje podría ser visualizada a través de la piel y se aproxima a 20 cm/segundo. Veinte minuetos después de la inyección el tejido se resectó del sitio de la inyección a los nodos linfáticos inguinales de drenaje, demostrando el transporte de larga distancia a través de la vasculatura linfática a los tejidos profundos. Los resultados se muestran en la FIG. 16. 6.9 SUMINISTRO DE PERLAS A LA PIEL (EJEMPLO 10): ID V. SC El siguiente ejemplo describe las ventajas del suministro intradérmico en comparación con el suministro subcutáneo de los agentes para el suministro focalizado al sistema linfático local . MATERIALES Y MÉTODOS. La inyección de partículas in vivo y los siguientes experimentos se condujeron bajo un protocolo aprobado por la IACUC. Ratones Balb/c (Charles River Laboratories, Raleigh, NC) , de 6-8 semanas de edad, 16-20 g, se anestesiaron (IsoFlurane, Abbott Laboratories, Chicago, IL) y se inyectaron (1) estilo Mantoux con perlas etiquetadas fluorescentemente (Spherotech Inc., Libertyville, IL) de 50 nm, 100 nm, 1 µm o 10 µm de tamaño, como una sola inyección intradérmica dorsal de bolo usando un aparato intradérmico de 1 mm de longitud, 34G (configuración de aguja/catéter) o (2) con una inyección subcutánea de bolo dorsal usando una aparato de aguja de media pulgada 3OG/jeringa en un volumen total de 60 µls (30 µls/lado inferior del dorso del ratón afeitado) . El número de perlas administrado varió de tamaño en tamaño, sin embargo, todos los ratones dentro de cada grupo de perlas recibieron el mismo número de perlas. En el momento apropiado después de la inyección los ratones se sacrificaron y los nodos linfáticos inguinales se removieron y se prepararon para el análisis de citometría de flujo. Para el análisis de citometría de flujo, el tejido se colocó en platos de petri conteniendo 10 mL de H20 estéril fría, para facilitar la lisis de las células. Se prepararon suspensiones de células individuales machacando el tejido a través de un tamiz de malla de 200 µ (VWR Scientific Products, West Chester, PA) bajo condiciones estériles creando una suspensión de células/cuentas. La suspensión de células/perlas se centrifugó a 1500 rpm por 5 min a 4°C. El sobrenadante se aspiró y la pelotilla se resuspendió en amortiguador FacsFlow de Pharmingen (Pharmingen, BD Biosciences, San José, CA) y se mantuvieron en hielo en la oscuridad hasta ser analizados por la citometría de flujo usando un FACS Vantage SE. El análisis se clasifican para la señal de fluorescencia y el número de cuentas presentes en la muestra contabilizada. RESULTADOS. Los resultados como se muestran en la FIG. 17 demuestran suministro mejorado de cuentas al nodo linfático vía el suministro intradérmico sobre la inyección subcutánea para todos los tamaños de cuentas evaluados . 6.10 COMPARACIÓN DEL SUMINISTRO ID VS SC DE REACTIVOS ESPECÍFICOS AL TEJIDO DEL BAZO Incluido aquí se encuentra un ejemplo adicional de los beneficios del suministro intradérmico (ID) focalizado. Este ejemplo muestra la mejora/mejoramiento del suministro ID de reactivos focalizados al bazo en comparación con el suministro subcutáneo. MATERIALES Y MÉTODOS Cuidado de los animales : El siguiente experimento se condujo bajo un protocolo aprobado por la IACUC. Ratones Balb/c (Charles River Laboratories, Raleigh, NC) , de 6-8 semanas de edad, de 16-20 g, se anestesiaron (acepromozina, xilazina, cetamina) y se inyectaron intradérmicamente (ID) (Mantoux modificado) usando una jeringa estándar y una aguja de 1 mm, calibre 34/catéter o subcutáneamente (SC) usando una jeringa convencional y una aguja de calibre 27.

Inyecciones del anticuerpo fluorescente. Ratones Balb/c, de 6-8 semanas de edad, se inyectaron, como se describe arriba, con 20 ugs en total, de un anticuerpo monoclonal anti-CD90 (marcador de células T) etiquetado con citocianato de fluoresceína (FITC) (clon 30-H12 Pharmingen, BD Biosciences, San José, CA, , específico para timocitos, linfocitos T y algunas células dendríticas) como una sola inyección de bolo en un volumen total de 50 µls (20-25 µls/lado inferior del dorso del ratón afeitado) . En el momento apropiado después de la inyección los ratones se sacrificaron, y se retiró el bazo y se preparó para el análisis de citometría de flujo. Citometría de Flujo: Para el análisis de citometría de flujo, el tejido se colocó en platos de petri conteniendo 10 mL de amortiguador de lisis de células rojas frío (NH4C1 0.16M (Sigma, St . Louis, MO) , KHC03 10 mM. Se prepararon suspensiones de células individuales machacando el tejido a través de un tamiz de malla de 200µ (VWR Scientific Products, West Chester, PA) bajo condiciones estériles. Los conteos de células se tomaron usando una dilución 1:20 de la solución de células resultante. Las células se centrifugaron a 1500 rpm por 15 minutos a 4°C. El sobrenadante se aspiró y las células se lavaron una vez con amortiguador Smls RPMI y se centrifugaron como antes. El sobrenadante se aspiró y las células se resuspendieron en amortiguador de tinción Pharmingen (Pharmingen, BD Biosciences, San José, CA) a 2-4 x 108 células/mL para el teñido por flujo. Aproximadamente 1 x 107 células, 25 µls de las células resuspendidas, se agregaron a un pozo de una placa de 96 pozos. El cóctel de teñido 25µls, se agregó a las células en el pozo y se mezcló por pipeteado. El cóctel consistió de una combinación de los siguientes anticuerpos etiquetados según sea apropiado, cada uno a 0.01 mg/mL en amortiguador de tinción Pharmingen CY5PE-MAC1 (Caltag Laboratories, Burlingame, CA) , CY5PE- GR1, APC-CD19, PE-CD4, APC-Cy7-CD8 (Pharmingen, BD Biosciences, San José, CA) . Las células/mezcla de teñido se incubaron por 1 hora a 4°C en la oscuridad. Los pozos se lavaron con 150 uls de amortiguador FacsFlow (Pharmingen) y se centrifugaron a 1500 rpm por 5 minutos a 4°C El sobrenadante se aspiró y se repitió el lavado. Las células lavadas se resuspendieron en 1 mL de amortiguador FacsFlow frío y se mantuvieron en hielo en la oscuridad hasta ser analizadas por citometría de flujo usando un FACS Vantage SE. El análisis de las células se clasificaron para los granulocitos y los macrófagos. RESULTADOS. La FIG. 18 muestra el enlazamiento del anticuerpo CD-90-FITC inyectado a las células T a través del tiempo, después de la inyección, en el bazo de los ratones. La aparición inicial del anticuerpo en el bazo es 1 hora después de la inyección. Esta señal retardada se puede atribuir a la fuerte anestesia utilizada en el experimento. Sin embargo, el porcentaje de células etiquetadas con el anticuerpo inyectado fue consistentemente mayor en los ratones inyectados ID que en los ratones inyectados SC, indicando no sólo el acceso al bazo vía la inyección ID sino también mayor biodisponibilidad del tejido. 6.11 SUMINISTRO DE AGENTE DE FORMACIÓN DE IMÁGENES CARDIO VERDE (VERDE DE INDOCIANINA "ICG") Incluido aquí se encuentra un ejemplo adicional del uso del suministro intradérmico (ID) para el suministro de Cardiogreen (verde de indocianina ("ICG"), un agente de formación de imágenes in vivo aprobado para el uso clínico. Este ejemplo muestra la utilidad del suministro focalizado como se describe en la patente mencionada arriba. Este ejemplo complementa los ejemplos previos que muestran el suministro de Azul de Evans a cerdos y muestra el suministro de un tinte cercano al infrarrojo (NIR) , la velocidad del flujo linfático y economía de la dosis. MATERIALES Y MÉTODOS Cuidado de los animales : Todos los experimentos se condujeron bajo un protocolo aprobado por la IACUC. Cerdos de Yorkshire (Charles River Laboratories, Raleigh, NC) , de 20-25 kg, se anestesiaron (mezcla de telazol/xilazina, cetamina (35, 17.5, 17.5 mg/kg, respectivamente, seguido por inhalación continua de isoflurano) y se inyectaron intradérmicamente (ángulo de 90°) usando una aguja de 1 mm, 34G/catéter y una jeringa estándar. Las inyecciones IV se llevaron a cabo usando una aguja de media pulgada, 27G, y se administraron a través de un catéter venoso. Todos los cerdos recuperados se entubaron y se hidrataron a los largo del procedimiento. Inyecciones del Tinte : Los cerdos de Yorkshire se inyectaron ID como se describe arriba, con 200uls de 250 ug/mL de verde de indocianina (ICG) en agua estéril (Fluka Chemical Corp., Milwaukee, WI) . Los sitios de las inyecciones incluyeron la pierna posterior derecha y la primera y la segunda tetas de la cadena mamaria izquierda. Inyecciones adicionales de 200 µls y 75 µls se llevaron a cabo a 80 ug/mL de verde de indocianina para determinar las velocidades del flujo linfático. Las inyecciones intravenosas se llevaron a cabo como se describe arriba con 5 mis de 2.5 mg/mL de ICG. Adquisición de las Imágenes: Las imágenes cercanas al infrarrojo se obtuvieron usando una lámpara de tungsteno (Dolan-Jenner, Lawrence, MA) equipada con un filtro de excitación de 750 nm (Omega Optical, Brattleboro, VT) , una cámara CCD (Kowa Co., cámara modelo b/w Hi-Res de ExVision Supercircuits CCTV) equipada con un filtro de emisión de paso largo a 790 nm (Omega Optical) y una videograbadora mini-DV ZR-20 de Canon. Las imágenes se adquirieron desde el inicio de la inyección hasta 40 minutos después de la inyección. Las imágenes se procesaron usando el programa de edición Adobe Premier V6.01. La velocidad de la infusión a través de los vasos linfáticos se determinó de la longitud de la película. RESULTADOS . Como se evidenció ahí, las imágenes muestran que se logró la focalización exacta de la vasculatura linfática (FIG. 19-21 y 29A y B) . Los vasos linfáticos y los nodos linfáticos se visualizaron fácilmente. La velocidad a través de los vasos linfáticos es afectada por el volumen inyectado, la velocidad de la infusión y las características del material infundido. A una concentración de 80ug/mL de ICG, se determinó que la velocidad a través de los vasos linfáticos es de 5-10 cm/seg. Además, se observaron los efectos de la economía de la dosis (FIG. 20 y 21). Una inyección IV de 12.5 microgramos de ICG, en tanto que ilumina la vasculatura circulatoria, no ilumina los vasos linfáticos o cualquiera de los nodos linfáticos. Una inyección ID de 100 veces menos ICG, 6 y 16 ugs, ilumina la vasculatura linfática y el nodo linfático inguinal de drenaje. Estos resultados son indicativos de la sensibilidad mejorada del suministro ID de los agentes de formación de imágenes y en si indican que se puede usar una cantidad reducida del agente para lograr el resultad deseado cuando se usan las técnicas de formación de imágenes avanzadas . 6.12 COMPARACIÓN DE LAS INYECCIONES ID Y MANTOUX Incluido aquí se encuentra un ejemplo adicional de los beneficios del suministro intradérmico (ID) focalizado. Este ejemplo muestra la mejora/mejoría del suministro focalizado sobre la práctica actual de la inyección de Mantoux. MATERIALES Y MÉTODO. El siguiente experimento se condujo bajo un protocolo aprobado por la IACUC. Cerdos de Yorkshire (Charles River Laboratories, Raleigh, NC) , de aproximadamente -25 kg se anestesiaron (Rompun 4 mg/kg, Xilazina 2 mg/kg y Cetamina 2 mg/kg y se mantuvieron en isoflurano al 2%) y se inyectaron intradérmicamente con solución de tinte Azul de Evans (EB) al 1% usando una aguja de Imm, 34G o bien una inyección de Mantoux estándar usando una aguja de 27G. el volumen y la velocidad de inyección se controló manualmente o con una bomba programable de Hardvard Apparatus PhD 2000. La piel en el sitio de la inyección, incluyendo el material inyectado y el tejido circundante, se retiro por incisión inmediatamente después de la inyección. El tejido se congela instantáneamente en hielo seco/2-metilbutano y después se almacenó a -80 °C hasta el seccionamiento. El tejido congelado se cortó longitudinalmente a través del punto de inserción de la aguja y se examinó inmediatamente, microscópicamente y se fotografió. Las examinaciones microscópicas se condujeron usando una mira telescópica de disección Nikon SMZ-U con un montaje de cámara de 35 mm Nikon FX-35PX. Tres cerdos de Yorkshire anestesiado se inyectaron intradérmicamente en el costado con 25uL de EB a través de una aguja de 1.0 mm, 34G a una velocidad de 45 ul/min o bien como una inyección de Mantoux estándar con una guja de 27G. Una sección de 2 cm2 alrededor del sitio de inyección se retiró por incisión y se proceso como se describe arriba. Cada inyección se llevó a cabo un total de tres veces. Se tomaron mediciones del ancho, altura y profundidad total del depósito dentro de la piel y se corrió una prueba t (Varianzas desiguales Asumiendo dos Muestras) sobre los datos. RESULTADOS. La inyección promedio con la aguja de lmm, 34G ID tuvo una anchura significativamente menor (p=0.05) que la inyección de Mantoux. Se espera mayor anchura dentro del compartimiento SC debido a la menor densidad del tejido. Las inyecciones en el área tienden a propagarse lateralmente justo debajo de la dermis enseguida de la inyección. No hubo diferencia significativa (p=0.45) entre las alturas totales de las inyecciones . La profundidad dentro de la muestra de tejido, sin embargo, mostró una diferencia significativa (p=0.03) . La menor profundidad promedio de la aguja de 1 mm fue de 1.2 mm menos profunda que la inyección de Mantoux.

Los resultados demuestran las diferencias significativas entre las inyecciones de Mantoux y la intradérmica 34G (véase la FIG. 30) , las agujas 34G de 1 mm suministraron los compuestos a profundidades poco hondas y más repetidamente dentro del compartimiento intradérmico que las que se pueden lograr a través de los métodos de Mantoux estándar. 6.13 DIFERENCIAS EN LA PRESIÓN DE INFUSIÓN COMO UNA FUNCIÓN DE LA PROFUNDIDAD DE INSERCIÓN DE LA AGUJA Y EL AMBIENTE DEL TEJIDO. Este ejemplo demuestra las diferencias observadas con el suministro ID como una función de la presión de infusión, la profundidad de inserción de el aguja y el ambiente del tejido. MATERIALES Y MÉTODOS Cuidado de los animales : Todos los experimentos se condujeron bajo un protocolo aprobado por la IACUC. Cerdos de Yorkshire (Charles River Laboratories, Raleigh, NC) , de 20-25 kg, se anestesiaron (mezcla de telazol/xilazina/cetamina (35, 17.5, 17.5 mg/kg respectivamente) y se mantuvieron en isoflurano al 2%) y se inyectaron intradérmicamente (ángulo de 90°) usando una aguja/catéter a profundidad limitada de 1.0, 1.5, 2.0 0 3.0 mm, 34G y una jeringa Hamilton de 500 µL. El catéter contenía un medidor de presión WPI para medir la presión de inyección. El volumen y la velocidad de la inyección se controlaron con una bomba programable de Hardvard Apparatus PhD 2000. Todos los cerdos recuperados se entubaron y se hidrataron a través del procedimiento. Un cerdo anestesiado se inyectó, como se describe arriba, con 100 uls de solución salina/inyección a una velocidad de 100 uls/hora. Las inyecciones se llevaron a cabo tanto dorsalmente y centralmente. Varias inyecciones (4) con cada configuración de aguja se condujeron y las mediciones de presión se registraron continuamente a durante toda la inyección. RESULTADOS: Las FIGS. 21A y B representan las presiones sostenidas máxima y promedio registradas como una función de la profundidad de la aguja. Como se muestra en la FIG. 31, la presión de suministro durante la infusión intradérmica depende de la profundidad de penetración cuando se controla por la longitud de la aguja. La infusiones usando agujas de 1 y 1.5 mm tienen la presión más alta en tanto que las agujas de 2 y 3 mm registraron presiones menores. Se observó que las inyecciones de mayor presión estuvieron acompañadas por formación de ampollas típica (inchamiento y decoloración de la piel) en tanto que las inyecciones de menor presión tuvieron ampollas reducidas o ausentes . Un factor de contribución principal para estas diferencias de presión es la deposición del fluido en el tej ido intradérmico frente al tej ido subcutáneo. Cuando la profundidad de la aguja se aproxima y después alcanza el tejido subcutáneo, la presión de infusión se reduce. Se observó que la piel en la región dorsal proporciona más resistencia a la infusión que la región ventral; sin embargo, la tendencia en ambas regiones fue la misma con resistencia decreciente con la profundidad creciente de la aguja. La Tabla 1 muestra un resumen de la contrapresión durante la infusión intradérmica in vivo usando varias longitudes de agujas de 34ga. Tabla 1. Contrapresión durante la infusión intradérmica in vivo usando varias longitudes de agujas de 34ga presión (mmHg) ventral dorsal profundidad (mm) sostenida ventral máx. sostenida dorsal máx 1 367 1014 1997 2783 1.5 321 552 2 202 • 440 1372 1575 3 103 329 315 336 6.14 SUMINISTRO DEL COCTEL DE ANTICUERPOS AL SISTEMA LINFÁTICO Este ejemplo muestra el suministro ID de un cóctel de anticuerpos monoclonales y su enlazamiento a las células objetivos en los nodos linfáticos de drenaje. También, las secciones de los métodos se escriben para explicar ya sea la inyección de anticuerpos monoclonales individuales de CD90- FITC, ya en la patente, o el cóctel como se suministra ahí.

MATERIALES Y MÉTODOS Cuidado de los animales . Todos los experimentos se condujeron bajo un protocolo aprobado por la IACUC. Ratones Balb/c (Charles River Laboratories, Raleigh, NC) de 6-8 semanas de edad, de 16-20 g, se anestesiaron (Isoflurano, Abbott Laboratories, Chicago, IL) y se inyectaron intradérmicamente (Mantoux modificado) usando una jeringa estándar y una jeringa/catéter de Imm calibre 34 (34G) . Inyecciones de anticuerpos fluorescentes. Los ratones Balb/c anestesiados, de 6-8 semanas de edad, se inyectaron, como se describe arriba, con 20ugs en total de un anticuerpo monoclonal anti-CD90 (marcador de células T) de rata etiquetado con isotiocianato de fluoresceína (FITC) (clon 30-H12 Pharmingen, BD Biosciences, San José, CA, específico para timocitos, linfocitos T y algunas células dendríticas) o una combinación de FITC-rata anti-CD90 y anti-CD19 de rata etiquetado con Ficoeritrina (PE) (marcador de células B, clon ID3 Pharmingen, BD Biosciences, San José, CA, específico para linfocitos B en todos los estados de desarrollo) , el cóctel de anticuerpos monoclonales (10:8 ug total, respectivamente) como una sola inyección intradérmica de bolo usando un aparato intradérmico 34G (configuración de aguja/catéter) en un volumen total de 50 µls (20-25 µls/lado inferior del dorso del ratón afeitado) . En el momento apropiado después de la inyección, los ratones se sacrificaron, y los nodos linfáticos inguinales superficiales y otros tejidos (bazo, timo, riñon) se removieron y se prepararon para el análisis de citometría de flujo o la examinación histológica. Citometría de Flujo: Para el análisis de citometría de flujo, el tejido se colocó en platos de petri conteniendo 10 mL de amortiguador RPMI frío (RPMI 1640, 5% FBS, 1% Pen/Strep, 0.5% ß-mercaptoetanol . Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA) para los nodos linfáticos, el timo y los ríñones. Los bazos se colocaron en 10 mL de amortiguador de lisis de células sanguíneas rojas (NH4C1 0.16 mM (Sigma, St. Louis, MO) , KHC03 lOmM) . Se prepararon suspensiones de células individuales machacando el tejido a través de un tamiz de malla de 200µ (VWR Scientific Products, West Chester, PA) bajo condiciones estériles. Los conteos de células se tomaron usando una dilución 1:20 de la solución de células resultante. Las células se centrifugaron a 1500 rpm por 15 minutos a 4°C. El sobrenadante se aspiró y las células se lavaron una vez con 5mls de amortiguador RPMI y se centrifugaron como antes. El sobrenadante se aspiró y las células se resuspendieron en amortiguador de tinción Pharmingen, BD Biosciences, San José, CA) a 2-4 x 108 celulas/ml para el teñido por flujo. Aproximadamente 1 x 107 células, 25µls de las células supendidas se agregaron a un pozo de una placa de 96 pozos. El cóctel de tinción, 25 uls se agregó a las células en el pozo y se mezclo por pipeteado. El cóctel consiste de una combinación de los siguientes anticuerpos etiquetados, según sea apropiado, cada uno a 0.01 mg/mL en amortiguador de tinción de Pharmingen, CY5PE-MAC1 (Caltag Laboratories, Burlingame, CA) , CY5PE-GR1, APC-CD19 (para CD90 sólo los ratones inyectados y los controles), PE-CD4, APC-Cy7-CD8 (Pharmingen, BD Biosciences, San José, CA) . Los ratones sin afectación se tiñeron con los anticuerpos etiquetados de arriba así como FITC-CD90. Las células/mezcla de tinción se incubaron por 1 hora a 4°C en la oscuridad. Los pozos se lavaron con 150 uls de amortiguador FacsFlow (Pharmingen) y se centrifugaron a 1500 rpm por 5 minutos a 4°C. El sobrenadante se aspiró y se repitió el lavado. Las células lavadas se resuspendieron en 1 mL de amortiguador FacsFlow frío y se mantuvieron en hielo en la oscuridad hasta ser analizadas por citometría de flujo usando un FACS Vantage SE. El análisis de células se clasificaron para los granulocitos y los macrófagos . RESULTADOS: La FIG. 32 demuestra el etiquetado in vivo tanto de las células T y B en los nodos linfáticos de drenaje de los ratones . Los controles de teñido in vivo indican que las poblaciones de células T y B disponibles fueron del 80 y el 9 por ciento respectivamente. Las condiciones evaluadas ahí no tiñen todas las células disponibles en el nodo linfático, las concentraciones de anticuerpos no se optimizaron, pero se observó el teñido específico in vivo con un cóctel de anticuerpos monoclonales .

Claims (61)

1. REIVINDICACIONES 1. Un método para la administración de al menos un agente biológicamente activo a un sujeto humano, caracterizado porque comprende suministrar el agente al compartimiento intradérmico de la piel del sujeto humano de modo que el agente tenga una mayor biodisponibilidad del tejido en un tejido particular, en comparación a cuando el mismo agente se suministra a un compartimiento de tejido más profundo.
2. 2. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque el compartimiento de tej ido más profundo es el compartimiento subcutáneo.
3. 3. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque el compartimiento de tejido más profundo es el compartimiento intramuscular.
4. 4. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque aproximadamente 10 pg a aproximadamente 30 ng del agente se acumulan por 50 ug del tejido particular.
5. 5. el método de la reivindicación 1, caracterizado porque aproximadamente 10 pg a aproximadamente 15 ug del agente se acumulan por 50 ug del tejido particular.
6. 6. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque aproximadamente 1 cg a aproximadamente 30 ng del agente se acumulan en 50 ug del tejido particular,
7. 7. un método para la administración de al menos un agente de diagnóstico a un sujeto humano, caracterizado porque comprende suministrar el agente de diagnóstico dentro del compartimiento intradérmico de la piel del sujeto humano, de modo que el agente de diagnóstico tiene un efecto inicial más rápido en comparación a cuando el mismo agente se suministra al compartimiento subcutáneo.
8. 8. Un método para la administración de al menos un agente de diagnóstico a un tejido particular de un sujeto humano, caracterizado porque comprende suministrar el agente de diagnóstico dentro del compartimiento intradérmico de la piel del sujeto humano de modo que la cantidad de la dosis pre-seleccionada del agente de diagnóstico depositada en el tejido particular, se incrementa en comparación a cuando el mismo agente se suministra al compartimento subcutáneo.
9. 9. Un método para la administración de al menos un agente de diagnóstico a un sujeto humano, caracterizado porque comprende suministrar el agente dentro del compartimiento intradérmico de la piel del sujeto humano, de modo que el agente tiene una mayor biodisponibilidad del tejido en comparación a cuando el mismo agente se suministra por el método de Mantoux.
10. 10. Un método para la administración de al menos un agente de diagnóstico a un sujeto humano, caracterizado porque, comprende suministrar el agente dentro del compartimiento intradérmico de la piel del sujeto humano, de modo que el agente tienen un efecto inicial más rápido en comparación a cuando el mismo agente se suministra por el método ID de Mantoux.
11. 11. Un método para la administración de al menos un agente de diagnóstico a un sujeto humano, caracterizado porque comprende suministrar el agente dentro del compartimiento intradérmico de la piel del sujeto humano, de modo que la cantidad de la dosis pre-seleccionada del agente depositado en un tej ido particular se incremente en comparación a cuando el mismo agente se suministra por el método ID de Mantoux.
12. 12. Un método para la administración de al menos un agente biológicamente activo a un sujeto humano, caracterizado porque comprende suministrar el agente dentro del compartimiento intradérmico de la piel del sujeto humano, de modo que el agente se deposita en un tejido particular, en donde el agente reconoce específicamente las células las cuales residen en el tejido particular.
13. 13. Un método para la administración de una formulación, caracterizado porque comprende suministrar la formulación dentro del compartimiento intradérmico de la piel del sujeto humano, de modo que la formulación se deposita en un tejido particular, en donde la formulación comprende un primer agente de selección de metas y un segundo agente, de modo que el primer agente de selección de metas reconoce específicamente las células las cuales residen en el tejido particular.
14. 14. Un método para la administración de al menos un agente de diagnóstico para la detección de un tumor de pecho, a un sujeto humano, caracterizado porque comprende suministrar el agente dentro del compartimiento intradérmico de la piel del sujeto humano a una velocidad, volumen y presión controlados, de modo que el agente se deposita en el compartimiento intradérmico de la piel del sujeto.
15. 15. Un método para la administración de al menos un agente de diagnóstico para la detección de un tumor de pecho, a un sujeto humano, caracterizado porque comprende suministrar el agente dentro del compartimiento intradérmico de la piel del sujeto humano, de modo que 75% del volumen preseleccionado se deposita dentro del compartimiento intradérmico, con relación a cuando el mismo volumen preseleccionado se suministra al compartimiento intradérmico por el método ID de Mantoux tradicional .
16. 16. Un método para la administración de al menos un agente de diagnóstico para la detección de un tumor de pecho, a un sujeto humano, caracterizado porque comprende suministrar el agente dentro del compartimiento intradérmico de la piel del sujeto humano, de modo que el agente se transporta al sistema linfático local.
17. 17. Un método para la administración de al menos un agente de diagnóstico para la detección de un tumor de pecho, a un sujeto humano, caracterizado porque comprende suministrar el agente dentro del compartimiento intradérmico de la piel del sujeto humano, de modo que el agente tiene una mayor biodisponibilidad del tejido en comparación a cuando el mismo agente se suministra por el método ID de Mantoux.
18. 18. Un método para la administración de al menos un agente de diagnóstico para la detección de un tumor de pecho, a un sujeto humano, caracterizado porque comprende suministrar el agente dentro del compartimiento intradérmico de la piel del sujeto humano, de modo que el agente tiene un efecto inicial más rápido en comparación a cuando el mismo agente se suministra por el método ID de Mantoux.
19. 19. Un método para la administración de al menos un agente de diagnóstico para la detección de un tumor de pecho, a un sujeto humano, caracterizado porque comprende, suministrar el agente dentro del compartimiento intradérmico de la piel del sujeto humano, de modo que la cantidad de la dosis pre-seleccionada del agente depositado en el tejido linfático se incrementa en al menos 300% en comparación a cuando el mismo agente se suministra por el método ID de Mantou .
20. 20. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1, 7, 8, 9, y 10, caracterizado porque el tejido particular se selecciona del grupo que consiste del tejido linfático, el tejido mucoso, los nodos linfáticos, el tejido de la piel, el tejido reproductor, el tejido cervical, el tejido vaginal, los pulmones, el bazo, colon, timo, médula ósea, tejido hemolinfoide, y tejido linfoide.
21. 21. El método de la reivindicación 20, caracterizado porque el tejido linfoide se selecciona a partir del grupo que consiste del tejido linfoide asociado al epitelio, el tejido linfoide asociado a la mucosa, el tejido linfoide primario, y el tejido linfoide secundario.
22. 22. Un método para la administración de al menos un agente de diagnóstico, a un sujeto humano, caracterizado porque comprende suministrar el agente a un volumen preseleccionado dentro del compartimiento intradérmico de la piel del sujeto humano, de modo que más del 75% del volumen pre-seleccionado se deposita dentro del compartimiento intradérmico, con relación a cuando el mismo volumen preseleccionado se suministra al compartimiento intradérmico por el método ID de Mantoux tradicional .
23. 23. Un método para la administración de al menos un agente de diagnóstico a un sujeto humano que comprende suministrar el agente dentro del compartimiento intradérmico de la piel del sujeto humano a través de una aguja que tiene una longitud suficiente para penetrar el compartimiento intradérmico y una desembocadura a una profundidad dentro del compartimiento intradérmico, de modo que el agente se deposita dentro del compartimiento intradérmico, caracterizado porque la aguja no se inserta a un ángulo de 15 grados, de modo que en el sitio de la deposición no hay formación de roncha elíptica.
24. 24. Un método para la administración de al menos un agente de diagnóstico a un tejido particular de un sujeto humano, que comprende suministrar el agente dentro de un compartimiento intradérmico de la piel del sujeto humano, caracterizado porque, el agente se deposita en el tejido particular y se enlaza específicamente a un marcador de una enfermedad en el tejido particular.
25. 25. El método de la reivindicación 24, caracterizado porque el agente tiene una mayor biodisponibilidad del tejido a comparación de cuando el mismo agente se suministra al compartimiento subcutáneo.
26. 26. El método de la reivindicación 24, caracterizado porque el agente tienen una mayor biodisponibilidad del tejido a comparación de cuando el mismo agente se suministra por el método ID de Mantoux.
27. 27. El método de la reivindicación 24, caracterizado porque la enfermedad es un cáncer, una enfermedad inmune, una enfermedad infecciosa, una enfermedad del sistema linfático, o una enfermedad metabólica.
28. 28. El método de la reivindicación 24, caracterizado porque el cáncer se selecciona a partir del grupo que consiste de linfoma, leucemia, cáncer de pecho, y cáncer colorectal.
29. 29. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1, 7, 8, 9 y 10, caracterizado porque el agente se administra por medio de una aguja o una cánula.
30. 30. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1, 7, 8, 9 y 10, caracterizado porque la desembocadura de la aguja o la cánula se inserta a una profundidad de aproximadamente 300 um a aproximadamente 3 mm.
31. 31. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1, 7, 8, 9 y 10, caracterizado porque la aguja o la cánula es de calibre 30-36.
32. 32. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1, 7, 8, 9 o 10, caracterizado porque la aguja o cánula es de calibre 31-34.
33. 33. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1, 7, 8, 9 y 10, caracterizado porque el agente biológicamente activo se selecciona a partir del grupo que consiste de un péptido, un polipéptido, una proteína, un nucleótido, un polinucleótido, un ácido nucleico, un ligando para un receptor, una enzima, un carbohidrato, un agente terapéutico, un agente quimioespecífico, anticuerpos, anticuerpos monoclonales, anticuerpos policlonales y un fragmento de anticuerpo .
34. 34. el método de la reivindicación 33, caracterizado porque, el agente quimioespecífico se selecciona a partir del grupo que consiste de un PNA, un fotoaptámero, un enlazador de ácido siálico, un ácido diboronico y un ácido boronico.
35. 35. El método de la reivindicación 24, caracterizado porque el tejido particular se encuentra en o rodea las células tumorales en el tejido particular.
36. 36. El método de la reivindicación 24, caracterizado porque comprende además administrar concurrentemente un agente de rastreo.
37. 37. El método de la reivindicación 26, caracterizado porque el agente de rastreo se examina in vivo y en tiempo real.
38. 38. El método de la reivindicación 26, caracterizado porque el agente de rastreo se examina en el sujeto ex vivo.
39. 39. El método de la reivindicación 36, caracterizado porque el agente de rastreo se examina por citometría de flujo.
40. 40. El método de la reivindicación 36, caracterizado porque el agente de rastreo se examina por examinación histológica.
41. 41. Un método para el diagnóstico de una enfermedad que tiene un marcador específico, en un sujeto humano, caracterizado porque, comprende: (a) administrar un agente de diagnóstico dentro de un compartimiento intradérmico de la piel de un sujeto humano, en donde el agente se deposita en un tejido particular que comprende el marcador; (b) rastrear el agente; (c) formar una imagen del agente; y (d) determinar si ocurre algún enlazamiento específico de dicho agente, en donde la presencia del enlazamiento específico indica una probabilidad de dicha enfermedad.
42. 42. El método de la reivindicación 41, caracterizado porque se forma una imagen del gente in vitro.
43. 43. El método de la reivindicación 41, caracterizado porque se forma una imagen del agente in vivo.
44. 44. El método de la reivindicación 41, caracterizado porque la enfermedad se selecciona a partir del grupo que consiste de un cáncer, una enfermedad inmune, una enfermedad infecciosa, una enfermedad del sistema linfático, o una enfermedad metabólica.
45. 45. El método de la reivindicación 41, caracterizado porque además dicha formación de imágenes se lleva a cabo por ultrasonido, MRI , CT, PET, SPECT, rayos X, fluorescencia, quimioluminiscencia, bioluminiscencia, métodos fotoacústicos u ópticos .
46. 46. El método de la reivindicación 41, caracterizado porque la formación de imágenes se obtiene en tiempo real.
47. 47. El método de la reivindicación 41, caracterizado porque la formación de imágenes se obtiene episódicamente. .
48. 48. El método de la reivindicación 41, caracterizado porque comprende además administrar un agente de contraste.
49. 49. El método de la reivindicación 41, caracterizado porque el agente de contraste se selecciona a partir del grupo que consiste de materiales radioopacos, agentes de formación de imágenes por MRI, agentes de formación de imágenes por ultrasonido, y agentes de formación de imágenes ópticas, de modo que el agente es adecuado para el método de formación de imágenes.
50. 50. Un método para la administración de una formulación caracterizado porque comprende al menos un agente de diagnóstico, a un sujeto humano, que comprende administrar la formulación dentro del compartimiento intradérmico de la piel del sujeto humano a una velocidad, volumen y presión controlados, de modo que la formulación se deposita en el compartimiento intradérmico de la piel del sujeto.
51. 51. El método de la reivindicación 50, caracterizado porque la formulación comprende particular, y en donde las partículas tienen un diámetro de aproximadamente 20 micrones a aproximadamente 1 nm.
52. 52. El método de la reivindicación 50, caracterizado porque las partículas se seleccionan a partir del grupo que consiste de liposomas, perlas poliméricas, reactivos de contraste de MRI particulados, partículas huecas, microburbujas, y perlas microcristalinas .
53. 53. El método de la reivindicación 50, caracterizado porque la formulación comprende nanopartículas, y en donde las nanopartículas tienen un diámetro de aproximadamente 1 nm a aproximadamente 20 micrones.
54. 54. El método de la reivindicación 50, caracterizado porque la concentración de al menos un agente de diagnóstico es de aproximadamente 10 mg/mL.
55. 55. El método de la reivindicación 50, caracterizado porque la concentración del al menos un agente de diagnóstico es de aproximadamente 100 mg/mL.
56. 56. El método de la reivindicación 50, caracterizado porque la concentración del al menos un agente de diagnóstico es entre aproximadamente 20 ug/ml y 100 mg/mL.
57. 57. El método de la reivindicación 50, caracterizado porque la cantidad del al menos un agente de diagnóstico suministrado es entre aproximadamente 5 y 10 ug.
58. 58. El método de la reivindicación 50, caracterizado porque la formulación comprende al menos una molécula adicional seleccionada a partir del grupo que consiste de un agente de diagnóstico, un rastreador, un excipiente, un aditivo, un agente quimioespecifico, y un marcador.
59. 59. Un método para la administración de al menos un agente biológicamente activo a un sujeto humano, caracterizado porque comprende suministrar el agente dentro del compartimiento intradérmico de la piel del sujeto humano, de modo que el agente se enlaza específicamente a una entidad biológica.
60. 60. El método de la reivindicación 59, caracterizado porque el agente biológicamente activo es un agente de diagnóstico.
61. 61. El método de la reivindicación 59, caracterizado porque la entidad biológica se selecciona a partir del grupo que consiste de células, grupos o colecciones de células, bacterias, virus, patógenos, una proteína, una placa, y un agente parásito.