MXPA04012507A

MXPA04012507A - Formulaciones estabilizadas para antoagonistas del receptor alfa-adrenergico y usos de las mismas.

Info

Publication number: MXPA04012507A
Application number: MXPA04012507A
Authority: MX
Inventors: Knowles Julius
Original assignee: Novalar Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2002-06-20
Filing date: 2003-06-20
Publication date: 2005-06-08
Also published as: AU2003247568B2; CA2489526C; JP2010280702A; WO2004000219A3; BR0311965A; EP1539170B1; CA2489526A1; AU2003247568A1; IL165599A; BRPI0311965B1; JP4787977B2; HK1079444A1; WO2004000219A2; EP1539170A2; NO20050300L; JP2005533869A; IL165599A0; EP1539170A4

Abstract

La presente invencion proporciona composiciones y formulaciones liquidas estables que comprenden antagonistas del receptor alfa-adrenergico y el uso de las mismas para incrementar el flujo sanguineo. En una modalidad, las formulaciones liquidas estables de esta invencion son utiles para resvestir los efectos de un agente anestesico, preferentemente un agente anestesico local de larga duracion, administrado en conjunto con un agonista del receptor alfa-adrenergico.

Description

FORMULACIONES ESTABILIZADAS PARA ANTAGONISTAS DEL RECEPTOR ALFA-ADRENERGICO Y USOS DE LAS MISMAS Campo de la Invención La invención es en el campo de la química farmacéutica. La invención se refiere en particular a un método para revertir la anestesia local inducida por un anestésico local y un agonista alfa-adrenérgico, que comprende administrar una baja dosis efectiva de una formulación liquida estabilizada de un antagonista alfa-adrenérgico . Antecedentes de la Invención La anestesia local es ampliamente utilizada por dentistas para proporcionar alivio del dolor a pacientes durante procedimientos dentales. Para proporcionar alivio del dolor, una formulación farmacéutica que contiene un compuesto anestésico local tal como lidocaína es inyectada dentro del tej ido de las encías que rodean el diente o dientes sobre los cuales va a ser realizado el procedimiento dental. Existen formulaciones farmacéuticas anestésicas locales de acción corta y de larga duración. Las formulaciones farmacéuticas anestésicas locales de acción corta contienen lidocaína o un fármaco anestésico local relacionado disuelto en solución salina u otro vehículo para inyección adecuado. Típicamente la anestesia local con Ref . : 160719 anestésicos locales de acción corta dura de aproximadamente 20 a 30 minutos, lo cual no es lo suficientemente prolongado para muchos procedimientos dentales. Para obtener anestesia local de larga duración, los dentistas frecuentemente utilizan lidocaína u otras formulaciones anestésicas locales, las cuales, además del fármaco anestésico- local mismo, contienen bajas concentraciones de epinefrina u otro agonista del receptor adreriérgico tal como levonordefrina. Más del 90% de los procedimientos de anestesia local realizados por los dentistas involucran formulaciones anestésicas locales que contienen agonistas del receptor alfa-adrenérgico . El vasoconstrictor es necesario debido a que los anestésicos locales sin vasoconstrictor son de acción demasiado corta para la mayoría de los procedimientos dentales. La epinefrina agregada estimula los receptores alfa-adrenérgicos sobre los vasos sanguíneos en el tejido inyectado. Esto tiene el efecto de constreñir los vasos sanguíneos en el tejido. La constricción de los vasos sanguíneos provoca que el anestésico local permanezca en el tejido mucho más tiempo, dando como resultado un incremento grande en la duración del efecto anestésico (de 20 minutos para la formulación de acción corta hasta 3-6 horas para la formulación de larga duración) . Un problema mayor con el uso de anestésicos locales que contienen epinefrina es la anestesia del tejido suave (labios, mejillas, lengua) que usualmente dura muchas horas más que la anestesia y la analgesia de la pulpa de los dientes. La anestesia y analgesia de la pulpa de los dientes son los efectos deseados de la anestesia local desde una perspectiva de procedimiento dental, mientras que la anestesia de tejido suave es usualmente un efecto colateral indeseable. La anestesia del tejido suave da como resultado un número de problemas e inconvenientes, tal como una sensación prolongada e inconfortable de entumecimiento en y alrededor de la boca, incapacidad para sonreír, dificultad para comer, beber y tragar, pérdida de productividad al perder horas de trabajo o juntas de trabajo etc. La anestesia persistente del tejido suave puede ser la causa de daños debidos a la mordedura de la lengua o de los labios. Además, la anestesia persistente del tejido suave es una inconveniencia y ésta es percibida como una molestia por muchos pacientes. La anestesia persistente del tejido suave puede conducir a daño especialmente en niños quienes frecuentemente se muerden en el tejido anestesiado por curiosidad. Podría ser por lo tanto deseable tener un fármaco que pudiera ser utilizado a voluntad por los dentistas para revertir rápidamente la anestesia local después de que ésta ya no es necesaria. La Patente de los Estados Unidos No. 4,659,714 describe un método para prolongar la anestesia local mediante la coadministración de un vasoconstrictor, en particular, un vasoconstrictor que actúa sobre los sitios de los receptores alfa-adrenérgicos de las paredes de los vasos sanguíneos.. La patente ? 714 también describe la administración subsecuente de un antagonista del receptor alfa-adrenérgico para provocar reducción del efecto prolongado de la anestesia. Incluido dentro del grupo de los antagonistas de receptores alfa-adrenérgicos descritos en esta patente, está el mesilato de fentolamina. No obstante, los ejemplos hacen referencia a la administración de wfentolamina" . Es mucho más probable que lo que se administrara fuera mesilato de fentolamina ya que el mesilato de fentolamina está aprobado por la FDA (Administración de Fármacos y Alimentos en los Estados Unidos) y es fácilmente soluble en agua. En contraste, la fentolamina no está aprobada por la FDA y es relativamente insoluble en agua. Como se muestra en el Ejemplo 1, Tabla 1 de la patente l714, 0.5-1.5 mg de wfentolamina" fueron administrados a grupos de pacientes quienes fueron pretratados con lignocaína mezclada con epinefrina. Los resultados en la Tabla 1 muestran una reducción en la duración de la anestesia con cantidades cada vez mayores de ufentolamina" . En el Ejemplo 2, se administraron 2 mg de "fentolamina". En el Ejemplo 3, se administraron cuatro inyecciones de 1 mg cada una (4 mg en total) de "fentolamina". En el Ejemplo 4, se administraron cuatro inyecciones de 1 mg cada una (4 mg en total) de "fentolamina" . Las dosis f rmacéuticas de "fentolamina" descritas en la patente '714 (0.5-4 mg) superan las dosis del mesilato de fentolamina que son aprobadas por la FDA para el tratamiento sistémico de la alta presión sanguínea en pacientes con feocromocitoma (dosis total de 5 mg en una solución de 2.5-5 mg/ml) . Ya que esas dosis son normalmente destinadas para el tratamiento sistémico de la alta presión sanguínea, esos altos niveles de dosis pueden provocar efectos colaterales severos cuando son utilizados en gente normal y saludable . El inserto del envase del producto de mesilato de fentolamina, establece la siguiente advertencia de efectos colaterales : "se ha reportado que ocurren infarto del miocardio, espasmo cerebrovascular, y oclusión cerebrovascular después de la administración de fentolamina, usualmente en asociación con episodios de hipotensión marcados" . De este modo, las dosis farmacéuticas mostradas por la patente ?714 para la reversión de la anestesia local pueden provocar efectos colaterales inaceptables, excluyendo el uso de este producto para la reversión de la anestesia en sujetos normales y saludables en un consultorio dental. Se ha descubierto que una reversión de la anestesia local altamente efectiva, puede ser obtenida mediante inyecciones de concentraciones mucho más bajas de mesilato de fentolamina que se describe en la patente * 714. Ver O01/85171. Se ha encontrado que una solución que contiene 0.05 mg/ml de mesilato de fentolamina puede revertir rápidamente el efecto de un anestésico local que contiene un agonista del receptor alfa-adrenérgico. Esta concentración farmacéutica de mesilato de fentolamina es 20 a 100 veces menor que la concentración farmacéutica de mesilato de fentolamina mostrada por la patente 714. La ventaja es que, a tales concentraciones farmacéuticas bajas de mesilato de fentolamina, no serán observados efectos colaterales sistémicos tales como infarto del miocardio y espasmo cerebrovascular . Esto permite el uso seguro y efectivo del mesilato de fentolamina para la reversión de la anestesia local sin provocar amenaza a la vida u otros efectos colaterales no deseables. Por supuesto, en un estudio de eficacia clínica en humanos utilizando una formulación de baja concentración de mesilato de fentolamina, se observó una reversión de la anestesia altamente efectiva sin efectos colaterales. Esto constituye un mejoramiento crucial del método de reversión de anestesia local mostrado por la patente ?714. La presente invención está dirigida al descubrimiento de que las formulaciones de la técnica anterior del mesilato de fentolamina son inestables en agua y no pueden ser almacenadas reconstituidas en agua o en solución salina. Las formulaciones líquidas estables han sido descubiertas, las cuales permiten el almacenamiento prolongado del mesilato de fentolamina. BREVE RESUMEN DE LA INVENCION La presente invención proporciona las composiciones y las formulaciones líquidas estables que comprenden antagonistas del receptor alfa-adrenérgico y el uso de las mismas para incrementar el flujo sanguíneo. En una modalidad, las formulaciones líquidas estables de esta invención son útiles para revertir los efectos de un agente anestésico, preferentemente un agente anestésico local de larga duración administrado en conjunto con un agonista del receptor alfa-adrenérgico . En una modalidad, la invención se refiere a un método para incrementar el flujo sanguíneo en un mamífero, que comprende administrarle al mamífero una formulación líquida estable que comprende un antagonista del receptor alfa-adrenérgico . En una modalidad preferida, la administración de una formulación líquida estable que comprende un antagonista del receptor alfa-adrenérgico, es utilizada para contraatacar una administración previa de un agonista del receptor alfa-adrenérgico. En otra modalidad más, la invención se refiere a un método para proporcionar' anestesia local a un mamífero, que comprende : (a) administrarle al mamífero en necesidad del mismo un agente anestésico en una cantidad efectiva para proporcionar anestesia local, y luego (b) administrar una formulación líquida estable que comprende un antagonista del receptor alfa-adrenérgico a dicho sitio, para reducir el tiempo de la anestesia. En una modalidad preferida, la invención se refiere a un método para proporcionar anestesia local a un mamífero, que comprende : (a) administrarle al mamífero en necesidad del mismo un agente anestésico y un agonista del receptor alfa-adrenérgico al sitio que va a ser anestesiado, en donde el agente anestésico es administrado en una cantidad efectiva para proporcionar anestesia local y el agonista del receptor alfa-adrenérgico es administrado en una cantidad efectiva para constreñir los vasos sanguíneos en el sitio, y prolongar la anestesia local, y luego (b) administrar una formulación líquida estable que comprende un antagonista del receptor alfa-adrenérgico al sitio, para reducir la prolongación. En una modalidad más preferida, la invención se refiere a un método para proporcionar anestesia local a un humano, que comprende: (a) administrarle a un humano en necesidad del mismo, mediante inyección al sitio que va a ser anestesiado, una solución que comprende polocaína y levonordefriña, en donde la polocaína es administrada en una cantidad efectiva para proporcionar anestesia local, y la levonordefriña es administrada en una cantidad efectiva - para . constreñir los vasos sanguíneos en el sitio, y prolongar la anestesia local, con lo cual se produce anestesia local en dicho sitio, (b) llevar a cabo un procedimiento sobre el humano, y luego (c) administrar una formulación líquida que comprende mesilato de fentolamina en el sitio a una concentración de aproximadamente 0.1 mg/ml o menos para reducir la prolongación. La invención también se refiere a un método para aumentar la supervivencia de un inserto tisular, que comprende : (a) administrarle a un mamífero que sufre de un injerto tisular, un agente anestésico, y un agonista del receptor alfa-adrenérgico al sitio del injerto del tejido, en donde el agente anestésico es administrado en una cantidad efectiva para proporcionar anestesia local y el agonista del receptor alfa-adrenérgico es administrado en una cantidad efectiva para constreñir los vasos sanguíneos en el sitio y prolongar la anestesia local, (b) realizar el procedimiento de injerto de tejido, y luego (c) administrar una formulación líquida estable que comprende un antagonista del receptor alfa-adrenérgico a dicho sitio, para reducir la prolongación y aumentar la supervivencia del injerto de tejido. La invención también se refiere un método para reducir la aparición de necrosis dérmica durante un procedimiento dérmico, que comprende: (a) administrarle a un mamífero que sufre de un procedimiento médico, un agente anestésico y un agonista del receptor alfa-adrenérgico al sitio del procedimiento, en donde el agente anestésico es administrado en una cantidad efectiva para proporcionar anestesia local y el agonista del receptor alfa-adrenérgico es administrado en una cantidad efectiva para constreñir los vasos sanguíneos eñ el sitio, y prolongar la anestesia local, y (b) realizar el procedimiento médico, y luego (c) administrar una formulación líquida estable que comprende un antagonista del receptor alfa-adrenérgico al sitio, para reducir la prolongación y reducir la aparición de necrosis dérmica durante el procedimiento. Esta invención también se refiere a un método para tratar un punto de disparo en un mamífero, que comprende: (a) realizar una inyección de punto de disparo en un mamífero que tiene un punto de disparo, opcionalmente con la administración de un agente anestésico; y (b) administrar una formulación líquida estable que comprende un antagonista del receptor alfa-adrenérgico a dicho sitio, para incrementar el flujo sanguíneo al área del punto de disparo y mejorar el tratamiento del punto de disparo. La invención también se refiere a un método para proporcionar un bloqueo anestésico regional a un mamífero, que comprende : (a) administrarle al mamífero en necesidad del mismo, un agente anestésico y un agonista del receptor alfa-adrenérgico en el sitio, para recibir el bloqueo anestésico, en donde el agente anestésico es administrado en una cantidad efectiva para proporcionar anestesia local y el agonista del receptor alfa-adrenérgico es administrado en una cantidad efectiva para constreñir los vasos sanguíneos en el sitio, y prolongar el bloqueo anestésico, y luego (b) administrar una formulación líquida estable que comprende un antagonista del receptor alfa-adrenérgico a dicho sitio, para reducir la prolongación. Esta invención se refiere también a un método para reducir la aparición de alvéolos secos, que comprende: (a) administrarle a un mamífero que sufre de una extracción dental, un agente anestésico y un agonista del receptor alfa-adrenérgico al sitio de la extracción dental, en donde el agente anestésico es administrado en una cantidad efectiva para proporcionar anestesia local, y el agonista del receptor alfa-adrenérgico es administrado en una cantidad efectiva para constreñir los vasos sanguíneos en el sitio, y prolongar la anestesia local, (b) realizar el procedimiento de extracción dental, y luego (c) administrar una formulación liquida estable que comprende un antagonista del receptor alfa-adrenérgico al sitio, para reducir la prolongación y disminuir la aparición del alveolo seco. Esta invención también se refiere a un método para aumentar la supervivencia de un diente dañado o enfermo en un método, que comprende: (a) administrarle a un mamífero que sufre de reparación de un diente dañado o tratamiento de un diente enfermo, un agente anestésico y un agonista del receptor alfa-adrenérgico al sitio del diente, en donde el agente anestésico es admnistrado en una cantidad efectiva para proporcionar anestesia local y el agonista del receptor alfa-adrenérgico es administrado en una cantidad efectiva para constreñir los vasos sanguíneos en el sitio y prolongar la anestesia local, (b) realizar la reparación o el procedimiento de tratamiento, y luego (c) administrar una formulación líquida estable que comprende un antagonista del receptor alfa-adrenérgico al sitio, para reducir la prolongación y aumentar la supervivencia del diente enfermo o dañado. Esta invención también se refiere a un método para el tratamiento de enfermedad periodontal, que comprende administrarle a un mamífero que tiene una enfermedad periodontal, una formulación líquida estable que comprende, un antagonista del receptor alfa-adrenérgico al sitio, para incrementar el flujo sanguíneo gingival y mejorar el tratamiento de la enfermedad periodontal . La invención también se refiere a una formulación líquida estable que comprende un antagonista del receptor alfa-adrenérgico . La formulación puede contener aditivos tales como quelantes de metales y modificadores de la tonicidad, que aumentan la estabilidad del antagonista del receptor alfa-adrenérgico y' permiten almacenamiento del antagonista por periodos prolongados (por ejemplo, más de 12 meses) . La invención también se refiere a una formulación líquida estable que comprende mesilato de fentolamina. La invención también se refiere a un equipo que comprende un medio portador que tiene un confinamiento cerrado en éste, dos o más medios de recipiente, en donde un primer medio de recipiente comprende un agente anestésico y opcionalmente un agonista del receptor alfa-adrenergico y un segundo medio de recipiente que comprende una formulación líquida estable que comprende un antagonista del receptor alfa-adrenérgico . BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS La Figura 1 muestra un perfil de estabilidad en un amplio intervalo de pH del mesilato de fentolamina a 40°C. La Figura 2 muestra un perfil de estabilidad en un intervalo estrecho de pH de mesilato de fentolamxna a 60°C. La Figura 3 muestra el efecto de la administración del mesilato de fentolamina sobre el tiempo, para regresar a la sensación normal en tejidos anestesiados después del bloqueo del nervio alveolar inferior. La Figura 4 muestra un estudio de dosis-respuesta del efecto de la administración del mesilato de fentolamina sobre el tiempo de retorno a la sensación normal en tejidos anestesiados después del bloqueo del nervio alveolar inferior. La Figura 5 muestra un estudio de dosis-respuesta del efecto de la administración del mesilato de fentolamina sobre el tiempo, para regresar a la sensación normal en tejidos anestesiados, después de la infiltración del incisivo lateral . DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION La presente invención se refiere a las composiciones y a las formulaciones líquidas estables que comprenden antagonista del receptor alf -adrenérgico y el uso de las mismas para incrementar el flujo sanguíneo. En una modalidad, la invención se refiere al método para incrementar el flujo sanguíneo en un mamífero, que comprende el administrarle al mamífero una formulación líquida estable que comprende un antagonista del receptor alfa-adrenérgico . En una modalidad de la invención, el flujo sanguíneo incrementado está dentro de un tej ido específico o porción del cuerpo del mamífero al cual ha sido administrada la formulación líquida estable. En otra modalidad más, el flujo sanguíneo administrado es sistémico. Preferentemente, la administración de una formulación líquida estable que comprende un antagonista del receptor alfa-adrenérgico se utiliza para contrarrestar una administración previa de un agonista del receptor alfa-adrenérgico . En otra modalidad más, la invención se refiere a un método para proporcionar anestesia local a un mamífero, que comprende : (a) administrarle al mamífero en necesidad del mismo, un agente anestésico en una cantidad efectiva para proporcionar anestesia local, y luego (b) administrar una formulación líquida estable que comprende un antagonista del receptor alfa-adrenérgico a dicho sitio, para reducir el tiempo de la anestesia. En una modalidad preferida, la invención se refiere a un método para proporcionar anestesia local a un mamífero, que comprende : (a) administrarle al mamífero en necesidad del mismo, un agente anestésico y un agonista del receptor alfa-adrenérgico al sitio que va a ser anestesiado, en donde el agente anestésico es administrado en una cantidad efectiva para proporcionar anestesia local y un agonista del receptor alfa-adrenérgico es administrado en una cantidad efectiva para constreñir los vasos sanguíneos en el sitio, y prolongar la anestesia local, y luego (b) administrar una formulación liquida estable que comprende un antagonista del receptor alfa-adrenérgico al sitio, para reducir la prolongación. El agente anestésico y el agonista del receptor alfa-adrenérgico pueden ser administrados conjuntamente como parte de una composición farmacéutica unitaria o como parte de composiciones farmacéuticas separadas, siempre y cuando el agonista del receptor alfa-adrenérgico actúe para constreñir los vasos sanguíneos en la cercanía de dónde ha sido administrado el agente anestésico, para dar como resultado una prolongación de la anestesia. En una modalidad preferida, el agente anestésico y el agonista del receptor alfa-adrenérgico son administrados conjuntamente en solución. El agente anestésico y el agonista del receptor alfa-adrenérgico pueden ser administrados mediante inyección, mediante infiltración o mediante administración tópica, por ejemplo, como parte de un gel o pasta. En una modalidad preferida, una solución que comprende el agente anestésico y el agonista del receptor alfa-adrenérgico es administrada mediante inyección directamente al sitio que va a ser anestesiado, por ejemplo, antes de un procedimiento dental . Los ejemplos de anestésicos locales que pueden ser utilizados en la práctica de la invención incluyen sin limitación lidocaína, polocaína, lignocaína, xilocaína, novocaína, carbocaína, etidocaína, procaína, prilocaína, bupivacaína, cinchocaína y mepivacaína. Los ejemplos de antagonistas del receptor alfa-adrenérgico que pueden ser utilizados de acuerdo a la invención, incluyen catecolaminas y derivados de catecolamina. Los ejemplos particulares incluyen sin limitación levonordefriña, epinefrina y norepinefriña . Los ejemplos de antagonistas del receptor alfa-adrenérgico que pueden ser utilizados en la práctica de la invención, incluyen sin limitación, fentolamina, clorhidrato de fentolamina, mesilato de fentolamina, tolazolina, yohimbina, rau olscina, doxazosina, labetalol, prazosina, tetrazosina y trimatozosina . El mesilato de fentolamina es aprobado por la FDA para el tratamiento de la hipertensión en pacientes con feocromocitoma, para el tratamiento de la necrosis dérmica y para el desecho después de la extravasación accidental de la norepinef iña, y para el diagnóstico del feocromocitoma (prueba de bloqueo de fentolamina) . El mesilato de fentolamina es administrado como una formulación liofilizada que comprende manitol en frascos que contienen 5 mg de la sustancia medicinal, que puede estar disuelta en solución salina fisiológica o en otro portador farmacéuticamente aceptable. Con el fin de revertir la anestesia local después de un procedimiento médico de acuerdo a la presente invención, el antagonista del receptor alfa-adrenérgico es preferentemente administrado a una baja dosis, por ejemplo a una dosis que no provoca efectos colaterales, por ejemplo en o por debajo de 0.45 mg por dosis para adultos (en o por debajo de aproximadamente 0.0064 mg/kg) o 0.18 mg por dosis para niños, más preferentemente por debajo de aproximadamente 0.25 mg por dosis para adultos (en o por debajo de aproximadamente 0.0036 mg/kg) o 0.1 mg por dosis para niños, más preferentemente, por debajo de aproximadamente 0.1 mg por dosis para adultos (por debajo de aproximadamente 0.0014 mg/kg) o 0.04 mg por dosis para niños, más preferentemente aproximadamente 0.08 mg por dosis para adultos (aproximadamente 0.0011 mg/kg) o aproximadamente 0.032 mg por dosis para niños, de mesilato de fentolamina o un equivalente molar de otro antagonista del receptor alfa-adrenérgico . En una modalidad preferida, el antagonista del receptor alfa-adrenérgico está ' presente a una concentración de aproximadamente 1 mg/ml o menos, preferentemente de aproximadamente 0.001 mg/ml a aproximadamente 0.25 mg/ml, más preferentemente, aproximadamente 0.05 mg/ml hasta aproximadamente 0.1 mg/ml.

El antagonista del receptor alfa-adrenérgico puede ser administrado mediante inyección dentro del sitio de anestesia, mediante infiltración o mediante administración tópica. En una modalidad preferida, el antagonista del receptor alfa-adrenérgico es administrado al tejido mucosal . En esta modalidad, el antagonista del receptor alfa-adrenérgico puede ser aplicado al sitio en la forma de una oblea impregnada, pella o bola de algodón, con lo cual el antagonista es recogido por el tejido mucosal dando como resultado reducción de la anestesia. En otra modalidad más, el antagonista del receptor alfa-adrenérgico es administrado al sitio de un bloqueo anestésico local para revertir el bloqueo, por ejemplo, mediante inyección de infiltración dentro del sitio. En una modalidad preferida, el antagonista del receptor alfa-adrenérgico es administrado vía una cánula hacia el espacio epidural dé un animal, para revertir la anestesia epidural . Los ejemplos de procedimientos médicos que pueden ser llevados a cabo de acuerdo a la presente invención incluyen, sin limitación, cirugía mayor y menor, procedimientos dentales, cirugía cosmética, injerto de tejidos (por ejemplo injerto de pelo y de hueso) y operación cesárea. En una modalidad, la reversión de la anestesia de acuerdo a la presente invención es llevada a cabo por personal médico entrenado para reducir cualesquiera errores que se realizan, y que puede conducir a la pérdida de extremidades tales como dedos, así como orejas y la punta de la nariz. La hialuronidasa, una enzima que aumenta la difusión de los fármacos dentro de los tejidos, puede ser administrada junto con el antagonista del receptor alfa-adrenérgico . La hialuronidasa y el antagonista del receptor alfa-adrenérgico pueden ser administrados conjuntamente como parte de una composición farmacéutica unitaria, o como parte de composiciones farmacéuticas separadas, siempre y cuando la hialuronidasa y el antagonista del receptor alfa-adrenérgico sean administrados al sitio donde la anestesia va a ser revertida, y están presentes en cantidades efectivas para aumentar la difusión del antagonista del receptor alfa-adrenérgico y para revertir la anestesia, respectivamente. La hialuronidasa es administrada una o más veces dentro del sitio de ' anestesia . En general, aproximadamente 1.5 U hasta aproximadamente 200 U de hialuronidasa se administran en una o más inyecciones. En una modalidad más preferida, se administran aproximadamente 200 U de hialuronidasa mediante inyección dentro del sitio. Aquellos de experiencia ordinaria en la técnica pueden determinar las cantidades óptimas de la hialuronidasa sin más que experimentación rutinaria. Cuando se realizan injertos de pelo, el cirujano frecuentemente inyecta un anestésico y epinefrina para reducir el sangrado, .y- proporcionar una visión clara del sitio. De acuerdo a Bernstein, R. . y Rassman, W.R., Hair Transplant Forum International 10: 39-42 (2000), la utilidad de la epinefrina en los procedimientos de injerto de cabello está limitada por un número de factores que incluyen el telógeno pos -operatorio effluvium cuando se utiliza la epinefrina en sesiones prolongadas de transplante. Además, cuando se agrega adrenalina a un área cuyo suministro sanguíneo está ya comprometido por un gran número de sitios recipientes, el tejido puede no recibir suficiente oxígeno. Aunque no se ha probado, de acuerdo a Bernstein y Rassman es probable que la infiltración de la epinefrina dentro del área recipiente sea un factor contribuyente en el desarrollo de la "necrosis central" que ha sido reportada ocasionalmente durante el transplante de cabello. Además, es posible que la acción vasoconstrictora intensa de la epinefrina pueda contribuir a la supervivencia disminuida del injerto. De este modo, de acuerdo a la presente invención, se puede lograr la supervivencia aumentada del injerto de tejido en un método que comprende: (a) administrarle a un mamífero que sufre de un injerto de tejido, un agente anestésico y un agonista del receptor alfa-adrenérgico al sitio del injerto de tejido, en donde el agente anestésico es administrado en una cantidad efectiva para proporcionar anestesia local y el agonista del receptor alfa-adrenérgico es administrado en una cantidad efectiva para constreñir los vasos sanguíneos en el sitio, y prolongar la anestesia local, (b) realizar el procedimiento de injerto de tejido, y luego (c) administrar la formulación líquida estable que comprende un antagonista del receptor alfa-adrenérgico al sitio para reducir la prolongación y aumentar la supervivencia del injerto de te ido. En una modalidad preferida, el injerto de tejido es un injerto de cabello. En otra modalidad preferida, se administra una baja dosis del antagonista del receptor alfa-adrenérgico al sitio para evitar efectos colaterales no deseados . Tales injertos de cabello incluyen colgajos de cabellos que contienen una pluralidad de células capilares y folículos de células pilosas transplantados, simples. Típicamente, tales injertos de cabellos son obtenidos de un sitio sobre el animal que ha desarrollado activamente cabello. De acuerdo a la presente invención, un antagonista del receptor alfa-adrenérgico es administrado después de un procedimiento de injerto de cabello, para revertir la anestesia local y reducir el efluvio de telógeno post-operatorio (muda del cabello) y la supervivencia del colgajo de piel . En otra modalidad más, la hialuronidasa puede ser administrada al sitio de injerto de tejido para incrementar la supervivencia del injerto. De acuerdo a Pimentel, L.A.S. y Goldenburg, R.C.d.S., Revista de Soociedade Brasileira de Cirugia Plástica 14 (1999) , la administración local de hialuronidasa incrementa la supervivencia del colgajo de piel. De acuerdo a los autores, la hialuronidasa es una enzima que reduce o previene el daño tisular, presumiblemente al provocar la difusión rápida de los fluidos extravasados a distintas áreas, permitiendo de este modo una mejor conversión de nutrientes. La hialuronidasa es en general inyectada una o más veces dentro del sitio del injerto de cabello. Similarmente, la presente invención puede ser utilizada para mejorar la supervivencia de otros tejidos injertados o hueso, en cualquier procedimiento quirúrgico de injerto, donde se utiliza un anestésico local y un agonista del receptor alfa-adrenérgico, para reducir al mínimo el sangrado durante la cirugía, y donde es deseada la reperfusión rápida subsiguiente, con el fin de incrementar la supervivencia del injerto. En una modalidad preferida adicional, el injerto de tejido es un implante dental. De acuerdo a la presente invención, un antagonista del receptor alfa-adrenérgico es administrado después de un procedimiento de implante dental para revertir la anestesia local, e incrementar el flujo sanguíneo al área involucrada y promover la supervivencia del implante . Cuando se utiliza anestesia local para procedimientos médicos un efecto colateral potencial es la necrosis dérmica debida al flujo disminuido de sangre hacia el área anestesiada. La reversión rápida de la anestesia después de que el procedimiento es terminado, podría dar como resultado flujo sanguíneo incrementado, y por lo tanto un suministro incrementado de oxígeno al tejido afectado. De este modo, en una modalidad adicional, se puede disminuir la aparición de necrosis dérmica durante un procedimiento médico en un método que comprende : (a) administrarle a un mamífero que sufre un procedimiento médico, un agente anestésico y un agonista del receptor alfa-adrenérgico al sitio del procedimiento, en donde el agente anestésico es administrado en una cantidad efectiva para proporcionar anestesia local y el agonista del receptor alfa-adrenérgico es administrado en una cantidad efectiva para constreñir los vasos sanguíneos en el sitio, y prolongar la anestesia local, (b) realizar el procedimiento médico, y luego (c) administrar una formulación líquida estable que comprende un antagonista del receptor alfa-adrenérgico al sitio, para reducir la prolongación y reducir la aparición de necrosis dérmica durante el procedimiento. En una modalidad preferida, se administra una. baja dosis del antagonista del receptor alfa-adrenérgico . Un número cada vez mayor de personas están portando y utilizando autoinyectores para emergencias en las cuales es necesario un tratamiento rápido de los síntomas . Por ejemplo, las personas con alergias severas a los piquetes de abejas y similares, frecuentemente llevan un autoinyectador que contiene epinefrina para el uso inmediato, cuando ellos son picados. El uso incrementado de autoinyectores ha conducido a un incremento en el número de piquetes accidentales con aguja con los autoinyectores, particularmente en la punta de los dedos. Tal inyección accidental de la epinefrina conduce a una disminución significativa en el flujo sanguíneo hacia el dedo, dando como resultado necrosis tumoral, y, potencialmente, perdida del dedo. De este modo, en una modalidad adicional de la invención, los piquetes con aguja con un vasoconstrictor, tal como epinefrina, son tratados mediante la administración de una formulación líquida estable que comprende un antagonista del receptor alfa-adrenérgico al sitio del piquete de aguja, para reducir la aparición de necrosis tisular. Los puntos de disparo son puntos discretos, focales, hiperirritables localizados en una banda tensa de músculo esquelético. Alverez, D.J. y Rockwell, P.G., A er.

Fam. Physician 65. 653-660, 2002. Los puntos de disparo producen dolor local y referido. La punción con aguja, de punto de disparo, ya sea seca o concomitante con inyección de un anestésico local es uno de los tratamientos más efectivos para inactivar el punto de disparo y aliviar los síntomas. La reperfusión del punto de disparo se piensa también que proporciona alivio del dolor. Por lo tanto, es ventajoso aumentar el flujo sanguíneo al punto de disparo durante o después de la inyección. De este modo, de acuerdo a la presente invención, se puede aumentar el efecto benéfico de la inyección del punto de disparo en un método que comprende : (a) realizar una inyección de punto de disparo en un mamífero que tiene un punto de disparo, opcionalmente con la administración de un agente anestésico, y (b) administrar una formulación líquida estable que comprende un antagonista del receptor alfa-adrenérgico en el sitio de punto de disparo, para incrementar el flujo sanguíneo al área del punto de disparo, y mejorar el tratamiento del punto de disparo. Cuando un agente anestésico es inyectado dentro del punto de disparo, un agonista del receptor alfa-adrenérgico puede ser también inyectado en una cantidad efectiva para constreñir los vasos sanguíneos en el sitio, y prolongar la anestesia local. En una modalidad preferida, es administrada una baja dosis del antagonista del receptor alfa-adrenérgico .

En una modalidad adicional, una formulación líquida estable de un antagonista del receptor alfa-adrenérgico _ es administrada después de un bloqueo anestésico regional para revertir el bloqueo. La anestesia epidural es comúnmente administrada para proporcionar un bloqueo anestésico regional en un número de procedimientos médicos, incluyendo el parto, operación cesárea, cirugía a la pelvis y similares. La anestesia epidural prolongada tiene muchos efectos colaterales no deseados, incluyendo parálisis prolongada, incapacidad para orinar voluntariamente, e hipotensión. Típicamente, el anestesiólogo inyecta dentro del espacio epidural un volumen igual de solución salina en un esfuerzo para diluir el anestésico y reducir la anestesia. La presente invención resuelve los problemas de efectos colaterales mediante la provisión de una reversión a demanda de la anestesia sin la necesidad para inyectar grandes volúmenes de solución salina. En esta modalidad, la invención se refiere a un método de proporcionar un bloqueo anestésico regional a un mamífero, que comprende: (a) administrar a un mamífero en necesidad del mismo, un agente anestésico y un agonista del receptor alfa-adrenérgico en el sitio para recibir el bloqueo anestésico, en donde el agente anestésico es administrado en una cantidad efectiva para proporcionar anestesia local y el agonista del receptor alfa-adrenérgico es administrado en una cantidad efectiva para constreñir los vasos sanguíneos en el sitio, y prolongar la anestesia local, y luego (b) administrar una formulación liquida estable de un antagonista del receptor alfa-adrenérgico al sitio, para reducir la prolongación. En una modalidad preferida, se administra una baja dosis del antagonista del receptor alfa-adrenérgico . En otra modalidad preferida, el bloqueo anestésico es la anestesia epidural y el sitio del bloqueo es el espacio epidural. La invención tiene aplicación para la reversión de otros bloqueos, que incluyen también el plexo braquial y los bloqueos femorales . En otra modalidad, es administrada hialuronidasa junto con el antagonista del receptor alfa-adrenérgico para aumentar la difusión del antagonista del receptor alfa-adrenérgico dentro del sitio del bloqueo, por ejemplo, el espacio epidural, y la reversión de la velocidad de la anestesia . Cuando es administrado un anestésico local que comprende un agonista del receptor alfa-adrenérgico para un procedimiento dental, existe una disminución significativa en el flujo sanguíneo gingival y pulpal que puede durar por periodos prolongados de tiempo (más de una hora) . Pogrol , A.J, Oral S rg. Oral Med. Oral Pathol. Oral Radiol. Endod. 85: 197-202, 1998. De este modo, en muchas situaciones dentales en las cuales el flujo sanguíneo es crítico a la salud continúa del diente y/o del tejido circunvecino, es ventajoso revertir el efecto del agonista del receptor alfa-adrenérgico tan pronto como sea posible, después de que el anestésico ya no es necesario. Cuando un diente es extraído, el alvéolo vacío se rellena con sangre y se forma un coágulo. Si el coágulo es prematuramente perdido o degradado, se desarrolla una condición extremadamente dolorosa debido a la exposición del hueso y de las terminales nerviosas . Esta condición es conocida como osteítis alveolar o alvéolo seco. Se ha mostrado que la aparición del alvéolo seco se incrementa cuando el alvéolo está solo parcialmente relleno con sangre después de la extracción. Heasman, P.A. y Jacobs, D.J., Br. J". Oral Maxillofacial Surg. 22: 115-122, 1984. Mediante la reversión de la anestesia local después de que se completa el procedimiento de extracción, el flujo sanguíneo al área alrededor del alvéolo de extracción se incrementará, conduciendo a un relleno aumentado del alvéolo. De este modo, de acuerdo a la presente invención, se puede disminuir la aparición de alvéolo seco en un método que comprende: (a) la administración a un mamífero que sufre la extracción de diente, de un agente anestésico y un agonista del receptor alfa-adrenérgico al sitio de la extracción del diente, en donde el agente anestésico es administrado en una cantidad efectiva para proporcionar anestesia local y el agonista del receptor alfa-adrenérgico es administrado en una cantidad efectiva para constreñir los vasos sanguíneos en el sitio y prolongar la anestesia local, (b) realizar el procedimiento de extracción dental, y luego (c) administrar una formulación líquida estable que comprende un antagonista del receptor alf -adrenérgico a dicho sitio, para reducir la prOlongacion y disminución de la aparición del alvéolo seco. En una modalidad preferida, se administra una baja dosis del antagonista del receptor alfa-adrenérgico . Cuando ocurre el daño traumático a un diente o enfermedad dental, la necrosis del tejido pulpar puede resultar, conduciendo frecuentemente a pérdida del diente. Para sostener la vitalidad de la pulpa, el flujo sanguíneo debe ser mantenido y debe ocurrir la revascularización. Mediante la revascularización de la anestesia local después de la reparación del diente dañado, o se completa el tratamiento de la enfermedad dental, el flujo sanguíneo del área del diente se incrementará, conduciendo a flujo sanguíneo mejorado hacia el tejido necrótico. De este modo, de acuerdo a la presente invención, se puede aumentar la supervivencia de un diente dañado o enfermo en un método que comprende: (a) administrarle a un mamífero que sufre reparación de un diente dañado o tratamiento de un diente enfermo, de un agente anestésico y un agonista del receptor alfa-adrenérgico al sitio del diente, en donde el agente anestésico es administrado en una cantidad efectiva para proporcionar anestesia local y el agonista del receptor alfa-adrenérgico es administrado en una cantidad efectiva para constreñir los vasos sanguíneos en el sitio, y prolongar la anestesia local, (b) la realización de la reparación o procedimiento de tratamiento, y luego (c) administrar una formulación líquida estable que comprende un antagonista del receptor alfa-adrenérgico al sitio para reducir la prolongación y aumentar la supervivencia del diente dañado o enfermo. En una modalidad preferida, se administra una baja dosis del antagonista del receptor alfa-adrenérgico . Como se discute anteriormente, cuando un anestésico local que comprende un agonista del receptor alfa-adrenérgico es administrado para un procedimiento dental, existe una disminución significativa en el flujo sanguíneo gingival y pulpal que puede durar periodos prolongados de tiempo (más de una hora) . Bajo estas circunstancias, los músculos de la mandíbula se vuelven sensibles por estar abiertos por tanto tiempo. Este estado dolorido o sensible es debido a que los músculos de la mandíbula están cansados y acalambrados. El espasmo muscular es acentuado por el uso del agonista.^ El uso de un antagonista alf -adrenérgico provoca reperfusión localizada rápida de la sangre, reduciendo de este modo o eliminando el espacio muscular y el dolor post-operatorio. En esta modalidad, la invención se refiere a un método para reducir o eliminar el espasmo muscular o el dolor postoperatorio, que comprende: (a) administrarle a un mamífero en necesidad del mismo un agente anestésico y un agonista del receptor alfa-adrenérgico en un sitio que va a ser anestesiado, en donde el agente anestésico es administrado en una cantidad efectiva para proporcionar anestesia local y el agonista del receptor alfa-adrenérgico es administrado en una cantidad efectiva para constreñir los vasos sanguíneos en el sitio y prolongar la anestesia local, y luego (b) administrar una formulación líquida estable de un antagonista del receptor alfa-adrenérgico al sitio para reducir o eliminar el espasmo muscular o el dolor post-operatorio en el sitio. Cuando el método es para reducir o eliminar el dolor post-operatorio, puede ser realizado un procedimiento médico (tal como un procedimiento dental) después de (a) y antes de (b) . La invención también proporciona un método para reducir el espasmo muscular en general, tal como el espasmo muscular asociado con el dolor de cabeza. En esta modalidad, un antagonista del receptor alfa-adrenérgico es administrado al sitio del espasmo muscular en una cantidad efectiva para reducir o eliminar el espasmo muscular. Este aspecto de la presente invención tiene aplicación particular al tratamiento de dolores de cabeza de tensión provocados por espasmo muscular. El antagonista del receptor alfa-adrenérgico puede ser administrado de cualquier manera que logre el propósito pretendido, por ejemplo, mediante inyección o aplicación tópica al sitio del espasmo muscular. La enfermedad periodontal es una enfermedad de las encías en la cual las encías están inflamadas y sangrando debido a la presencia de bacterias. El pobre flujo sanguíneo gingival exacerba los problemas periodontales . Los fumadores de tabaco tienen enfermedad periodontal incrementada, debido en parte al hecho de que el fumar disminuye el flujo sanguíneo gingival. Una de las consecuencias de la enfermedad periodontal es la formación de bolsas entre la encía y el diente, donde se pierde la adhesión de la encía al diente. El tratamiento de la enfermedad periodontal frecuentemente involucra irrigación de bolsas periodontales con agua y/o medicinas para limpiar y tratar las encías. Es ventajoso incrementar el flujo sanguíneo gingival para el tratamiento de la enfermedad periodontal. De este modo, de acuerdo a la presente invención, se puede tratar la enfermedad periodontal en un método que comprende administrarle a un mamífero que tiene enfermedad periodontal, una formulación líquida estable que comprende un antagonista del receptor alfa-adrenérgico en el sitio de la enfermedad periodontal, para incrementar el flujo sanguíneo gingival, con lo cual se trata la enfermedad periodontal . El antagonista del receptor alfa-adrenérgico puede ser administrado como parte de un irrigador para las bolsas periodontales . En una modalidad preferida, se administra una baja dosis del antagonista del receptor alfa-adrenérgico. El antagonista del receptor alfa-adrenérgico " puede ser administrado después de la administración de un agente anestésico y un agonista del receptor alfa-adrenérgico al sitio del diente, en donde el agente anestésico es administrado en una cantidad efectiva para proporcionar anestesia local y el agonista del receptor alfa-adrenérgico es administrado en una cantidad efectiva para constreñir los vasos sanguíneos en el sitio y prolongar la anestesia local. El anestésico local puede ser administrado para un procedimiento dental relacionado a la enfermedad periodontal, por ejemplo, incrustación profunda o cirugía de las encías. La invención también se refiere a las formulaciones líquidas estables que comprenden antagonistas del receptor alfa-adrenérgico, particularmente formulaciones de baja dosis. Una "formulación líquida estable" es definida como una en la cual el antagonista del receptor alfa-adrenérgico es solubilizado, y en donde la concentración y la pureza del antagonista del receptor alfa-adrenérgico es de 90% o mayor, preferentemente 95% o mayor, después del almacenamiento a 2-40°C, preferentemente a temperatura de refrigeración (2-8°C) o temperatura ambiente (25°C) por al menos 3 meses, preferentemente al menos 6 meses, más preferentemente al menos 12 meses . Los ejemplos de antagonistas del receptor alfa-adrenérgico pueden ser utilizados en las formulaciones liquidas estables de esta invención, incluyen sin limitación fentolamina, tolazolina, yohimbina, rauwolxcina, doxazosina, labetalol, prazosina, tetrazosina y trimazosina, asi como las sales farmacéuticamente aceptable de cualquiera de los anteriores. En una modalidad preferida, el antagonista del receptor alfa-adrenérgico es una sal de fentolamina. Más preferentemente el antagonista del receptor alfa-adrenérgico se selecciona del clorhidrato de fentolamina o mesilato de fentolamina. Más preferentemente, el antagonista del receptor alfa-adrenérgico es mesilato de fentolamina. Las sales . farmacéuticamente aceptables del antagonista del receptor alfa-adrenérgico utilizadas en las formulaciones líquidas estables de la presente invención incluyen aquellas derivadas de los ácidos y bases orgánicos e inorgánicos farmacéuticamente aceptables. Los ejemplos de sales de ácido adecuadas incluyen acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, bencensulfonato, bisulfato, butirato, citrato, camforato, camforsulfonato, ciclopentanpropionato, digluconato, dodecilsufato, etansulfonato, formiato, fumarato, glucoheptanoato, glicerofosfato, glicolato, hemisulfato, eptanoato, hexanoato, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, 2-hidroxietansulfonato, lactato, maleato, malonato, metansulfonato, mesilato, 2-naftalensulfonato, nicotinato, nitrato, oxalato, palmoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, salicilato, succinato, sulfato, tartrato, tiocianato, tosilato y undecanoato. Otros ácidos, tales como el ácido oxálico, mientras que no son por si mismos farmacéuticamente aceptables, pueden ser empleados en la preparación de sales útiles como intermediarios en la obtención de los compuestos de la invención y sus sales por adición de ácido farmacéuticamente aceptables. Las sales derivadas de las bases apropiadas incluyen sales de metal alcalino (por ejemplo, sodio y potasio) , de metal alcalinotérreo (por ejemplo, de magnesio) , de amonio y N+ (alquil de 1 a 4 átomos de carbono) 4. Esta invención también considera la cuaternización de cualesquiera grupos que contienen nitrógeno básico de los compuestos descritos en la presente. Los productos solubles o dispersables en agua o en aceite pueden ser obtenidos mediante tal cuaternización. La formulación líquida estable de la presente invención puede comprender el antagonista del receptor alfa-adrenérgico a cualquier concentración hasta el límite de su solubilidad. Esto está típicamente en el intervalo de 0.01 mg/ml hasta al menos 10 mg/ml . En una formulación preferida, el antagonista del receptor alfa-adrenérgico es mesilato de fentolamina que está preferentemente presente a una concentración de aproximadamente 0.01 mg/ml hasta aproximadamente 1 mg/ml en la formulación líquida estable, más preferentemente aproximadamente 0.01 mg/ml hasta aproximadamente 0.25 mg/ml, y lo más preferentemente aproximadamente 0.1 mg/ml hasta aproximadamente 0.25 mg/ml. La formulación líquida estable de la invención está preferentemente presente en un recipiente para la administración de dosis simple tal que la dosis total del antagonista, preferentemente el mesilato de fentolamina, en el recipiente está entre aproximadamente 0.02 mg hasta aproximadamente 0.4 mg. Más preferentemente, el recipiente tiene entre aproximadamente 0.18 mg y aproximadamente 0.43 mg de mesilato de fentolamina, aún más preferentemente entre aproximadamente 0.04 mg y aproximadamente 0.43 mg de mesilato de fentolamina. El recipiente preferido para las dosis simples de las formulaciones liquidas estables de esta invención se selecciona de una ampolleta, un cartucho dental estándar (por ejemplo un CA PULE) y se ajusta dentro de una jeringa de anestésico local dental, estándar, o una jeringa prellenada. Se prefiere además que el recipiente mantenga un volumen de las formulaciones líquidas estables de esta invención de entre aproximadamente 1.6 a 1.8 mi . Los cartuchos dentales estándares mantienen hasta aproximadamente 1.8 mi, pero la cantidad de la formulación líquida estable en un cartucho dental de acuerdo a esta invención puede variar ligeramente, dependiendo de la cantidad de espacio superior presente después del relleno del cartucho. Se ha descubierto ahora que las formulaciones líquidas estables que comprenden los antagonistas del receptor alfa-adrenérgico pueden ser preparadas teniendo una vida en anaquel de al menos 12 meses a 25°C. La habilidad para almacenar el antagonista de esta manera, es preferentemente para el uso en un escenario dental u otras situaciones médicas, ya que la formulación es fácilmente disponible y puede ser utilizada directamente. Además del antagonista, las formulaciones de esta invención comprenden un solvente, el cual puede ser acuoso o una combinación de orgánico y acuoso y un quelante de metales . Las formulaciones de esta invención opcionalmente comprenden un amortiguador para mantener el pH, un antioxidante, surfactantes , agentes formadores de complejos y modificadores de la tonicidad. El solvente utilizado en la formulación de esta invención es típicamente agua. En una modalidad alternativa, un solvente tal como, pero no limitado a, glicerol, polipropilenglicol , aceite mineral o polietilenglicol está también presente. El solvente orgánico, si está presente, está preferentemente a una concentración de entre aproximadamente 5 a 40% (v/v) en agua. El solvente preferido es polipropilenglicol. Más preferentemente, el polipropilenglicol está presente a una concentración de aproximadamente 25% (v/v) en agua. Se cree que la presencia de un quelante de metales es necesaria para mantener la estabilidad de la formulación de esta invención. El quelante de metales es preferentemente EDTA. Cuando se emplea EDTA éste está preferentemente presente en la formulación a una concentración de entre aproximadamente 0.5 a 2.5 mg/ml más preferentemente entre aproximadamente 0.5 a 1.0 mg/ml. Otros quelantes de metales, tales como el etilendiaminotriacetato de diamonio, el ácido hidroxietil-etilendiamino-triacético, el ácido dietilentriamino-pentaacético, ácido nitriloacético, y ácido cítrico pueden ser sustituidos por EDTA, preferentemente en un intervalo equivalente de concentraciones molares . El pH de una formulación acuosa no amortiguada de esta invención, está entre aproximadamente 4.0 a 6.0. La estabilidad de las presentes formulaciones no es afectada, de manera adversa a un pH tan bajo como de 2.0. De este modo, de acuerdo a una modalidad, la formulación líquida estable tiene un pH en un intervalo de aproximadamente 2.0 a aproximadamente 6.0, preferentemente en un intervalo de aproximadamente 2.0 a aproximadamente 5.0, más preferentemente en un intervalo de aproximadamente 3.0 a aproximadamente 4.0, más preferentemente aproximadamente 3.5. En una modalidad alternativa, el pH de la formulación está preferentemente entre 3.5 y 4.5, más preferentemente entre 3.8 y 4.2. Con el fin de lograr un pH menor que aquel producido al solubilizar simplemente el antagonista en un solvente en presencia de un quelante de metales, debe ser agregado un ácido. En una modalidad preferida, el ácido es ya sea ácido acético o ácido metansulfónico . Las formulaciones acidificadas son preferentemente amortiguadas con un ion contrario el cual está presente en el intervalo de aproximadamente 1 mM a aproximadamente 100 m; preferentemente aproximadamente 10 mM a aproximadamente 50 mM, lo más preferentemente aproximadamente 10 mM. La elección del ion contrario está basada en el ácido utilizado para disminuir el pH de la formulación. De este modo, cuando se utiliza ácido acético para disminuir el pH, el ion contrario preferido es acetato de sodio. Cuando se utiliza ácido metansulfónico para disminuir el pH y mesilato de fentolamina es el antagonista, el mesilato sirve como un ion contrario apropiado y no se necesita agregar ion contrario adicional . Si el pH de la formulación es demasiado bajo, puede ser agregado hidroxido de sodio para elevar el pH nuevamente al nivel deseado. Los modificadores de la tonicidad opcionales que pueden estar presentes en las formulaciones de esta invención incluyen, pero no están limitados a, cloruro de sodio, d-manitol y dextrosa. Cuando está presente, el modificador de la tonicidad está preferentemente a una concentración de entre aproximadamente 1 a 10% (p/v) . preferentemente el modificador de la tonicidad ' es d-manitol . Más preferentemente, el d-manitol está presente en una concentración de entre aproximadamente 4 a 5% (p/v) . Los antioxidantes opcionales presentes en las formulaciones de esta invención incluyen, pero no están limitados a ácido ascórbico, metabisulfito de sodio, hidroxianisol butilado, e hidroxitolueno butilado. Cuando está presente, se utiliza un antioxidante a concentraciones efectivas para llevar a cabo su función pretendida. Tales concentraciones son bien conocidas por aquellos expertos en la técnica de las formulaciones farmacéuticas (ver Remington's Pharmaceutical Sciences, A. Osol (ed.), 16a Edición, Mack Publishing Co. , Easton, PA (1980)).

Como una alternativa al empleo de un antioxidante para aumentar la estabilidad, la formulación líquida estable de esta invención puede ser almacenada en un recipiente tal que está presente un bajo nivel de oxígeno en el espacio superior del recipiente. Preferentemente, el espacio superior tiene menos de 2% de oxígeno. La formulación reducida en oxígeno puede ser preparada mediante la purga del recipiente con un gas inerte, preferentemente nitrógeno. En una modalidad de la invención, la formulación reducida en oxígeno es preparada mediante la inundación de un recipiente vacío con un gas inerte, llenando el recipiente con la formulación líquida estable mientras que se lava a chorro continuamente con el gas inerte, y se sella el recipiente. Ver, por ejemplo, Patente de los Estados Unidos No. 6,274,169. Los agentes opcionales formadores de complejos, tales como a-ciclodextrina o niacinamida pueden también estar presentes en las formulaciones de esta invención. Cuando se emplean agentes formadores de complejos, éstos son utilizados a concentraciones selectivas para llevar a cabo su función pretendida. Tales concentraciones son bien conocidas por aquellos expertos en la técnica de las formulaciones farmacéuticas (ver Remington' s Pharmaceutical Sciences, A. Osol (ed.), 16a Edición, ack Publishing Co. , Easton, PA (1980) ) .

En una modalidad preferida, la formulación comprende un- quelante de metales (0.1 mg/ml a 10 mj/ml) j , un modificador de la tonicidad . (1% a 10%) . Lo más preferentemente, la formulación comprende EDTA. disódico como un quelante de metales y d- manitol como un modificador de la tonicidad. En una modalidad preferida , la formulación líquida estable se selecciona de las formulaciones descritas más adelante : El término "aproximadamente" incluye el número indicado ±10% . De este modo "aproximadamente 0 . 5" significa 0 . 45 a 0 . 55 .

En una modalidad adicional de la invención, la formulación estable puede ser preparada como una formulación semi-sólida, por ejemplo como un gel o pasta. Un gel o pasta puede ser un sistema de una sola fase o de dos fases. Los sistemas de dos fases pueden ser elaborados a partir de bentonita. Los sistemas de una sola fase pueden ser elaborados a partir de macromoléculas sintéticas (por ejemplo, carbómero, metilcelulosa, carboximetilcelulosa, alcoholes polivinilicos) o a partir de gomas naturales (por ejemplo, tragacanto, alginato de sodio, gelatina). Ver Remington' s Pharmaceutical Sciences, A. Osol (ed.), 16a Edición, Mack Publishing Co., Easton, PA (1980)). Las formulaciones de gel típicas incluyen polietilenglicol con o sin glicerina, poloxámero (15-50%) con o sin glicerina, hidroxipropilcelulosa (alrededor del 4%) con un polietilenglicol de alto peso molecular, carbonato de propileno con hectorato de estearalconio o cloruro de estearalconio, o dióxido de silicio coloidal (2-10%) . Una formulación típica en pasta es APHTHASOL, que comprende alcohol bencílico, gelatina, monoestearato de glicerol, aceite mineral, pectina, petrolato, y carboximetilcelulosa de sodio . Todas las formulaciones pueden contener un agente antimicrobiano (por ejemplo, alcohol bencílico, EDTA, metil-y propilparabeno) . Las formulaciones para el uso oral y dental pueden también contener agentes saborizantes, tales como goma de mascar o sabor cereza y endulzantes tales como xilitol o sucrosa. Ver, por ejemplo, las Patentes de los Estados Unidos Nos. 6,447,755, 6,355,001, 6,331,291, 6,312,669, 6,159,446, 5 , 908 , 612 y 5 , 670 , 138. La invención se refiere a un equipo que comprende un portador que comprende un medio portador tal como una caja que tiene en un confinamiento cerrado en ésta dos o más medios recipientes tales como cartuchos dentales o CARPULEs, frascos, tubos, frascos y similares. Un primer medio de recipiente comprende un agente anestésico y opcionalmente un agonista del receptor alfa-adrenérgico y un segundo medio de recipiente comprende una formulación líquida estable que comprende una baja dosis de un antagonista del receptor alfa-adrenérgico. Alternativamente, el agonista del receptor alfa-adrenérgico puede estar presente en un medio de recipiente separado. Un medio de recipiente adicional puede comprender hialuronidasa . Alternativamente, la hialuronidasa está en el mismo medio de recipiente que el antagonista del receptor alfa-adrenérgico . En una modalidad preferida, el agente anestésico, el agonista del receptor alfa-adrenérgico, el antagonista del receptor alfa-adrenérgico y, opcionalmente, la hialuronidasa están presentes en cartuchos dentales de 1.8 mi (CARPULES) que se ajustan dentro de una jeringa de anestésico local dental, estándar. Tales cartuchos son disponibles comercialmente de una variedad de proveedores, por ejemplo Henry Schein, Port Washington, N.Y. En esta modalidad, un cartucho que contiene el anestésico local y el agonista del receptor alfa-adrenérgico se coloca dentro de la jeringa, y la mezcla se inyecta. El cartucho puede ser luego removido y se inserta un segundo cartucho que contiene el antagonista del receptor alfa-adrenérgico . y, opcionalmente, la hialuronidasa . En una modalidad adicional, el equipo comprende un primer medio de recipiente que comprende un agente anestésico y opcionalmente un agonista del receptor alfa-adrenérgico y un segundo medio de recipiente que comprende una formulación liquida estable que comprende mesilato de fentolamina. El mesilato de fentolamina puede estar presente a cualquier concentración hasta el límite de solubilidad del fármaco. El agente anestésico, el vasoconstrictor y, opcionalmente, la hialuronidasa pueden estar presentes en solución, preferentemente, una solución estéril, que contiene opcionalmente sales y amortiguadores, o como parte de un gel o pasta para la administración tópica. Ver Patente de los Estados Unidos No. 4,938,970 y ver Remington's Pharmaceutical Sciences, A. Osol (ed.), 16a Edición, Mack Publishing Co. , Easton, PA (1980) . Los mamíferos que pueden ser tratados de acuerdo a la presente invención incluyen todos los mamíferos que pueden experimentar los efectos benéficos de la presente invención.

Tales mamíferos incluyen sin limitación humanos y mamíferos veterinarios tales como ganado, cerdos, ovejas, caballos, perros y gatos. Cuando .se aplica a niños y animales veterinarios, la reversión pronta de la anestesia inhibe al niño o al animal para que no rompa las suturas frescas . Los siguientes ejemplos son ilustrativos, pero no limitantes, del método y composiciones de la presente invención. Otras modificaciones adecuadas y adaptaciones de la variedad de condiciones y parámetros normalmente encontrados en terapia clínica y que son obvias para aquellos expertos en la técnica, están dentro del espíritu y alcance de la invención. EJEMPLOS EJEMPLO 1 Razón y Propósito del Estudio La anestesia local es ampliamente utilizada por los dentistas para efectuar la anestesia durante procedimientos dentales. Los anestésicos locales frecuentemente contienen agonistas del receptor alfa-adrenérgico para provocar vasconstricción, con lo cual se prolonga la anestesia. El vasoconstrictor es necesario debido a que los anestésicos locales sin vasoconstrictor son de acción demasiado corta para la mayoría de los procedimientos dentales. Por otra parte, en muchos casos el efecto prolongado del anestésico local dura mucho más de lo requerido para muchos procedimientos dentales. Podría ser deseable tener un fármaco que pudiera ser utilizado a voluntad para revertir voluntariamente la' anestesia local después de que ésta ya . no es necesaria. La anestesia local persistente puede ser la causa de daños debidos a mordeduras de la lengua o de los labios. La anestesia local persistente puede también dar como resultado pérdida de la productividad debido a ausencias de horas de trabajo. Al final, la anestesia local persistente es una inconveniencia y es percibida como una molestia por muchos pacientes. El propósito del presente estudio puede determinar si el mesilato de fentolamina, un agonista del receptor alfa-adrenérgico inyectable, el cual está aprobado por la EDA (Administración de Fármacos y Alimentos de los Estados Unidos) para el tratamiento sistémico de la hipertensión en pacientes con feocromocitoma, revierte rápidamente la anestesia local prolongada cuando se inyecta localmente a una concentración muy baja. La concentración del mesilato de fentolamina elegida para el presente estudio fue tan baja que podría esperarse que carezca de efectos colaterales sistémicos tales como episodios severos de hipotensión que han sido descritos con las altas dosis de fármaco sistémicas que están aprobadas por la FDA para el tratamiento de la hipertensión en pacientes con feocromocitoma . Diseño del Estudio El presente estudio con sujetos humanos fue diseñado para determinar si la inyección de una solución salina fisiológica que contenía una concentración extremadamente baja de mesilato de fentolamina es o no capaz de acelerar la reversión de los efectos de un agente anestésico local previamente inyectado, que contiene un agonista del receptor alfa-adrenérgico. Una inyección del vehículo con solución salina fisiológica (sin mesilato de fentolamina) sirvió como el control. Con el fin de comparar los efectos del mesilato de fentolamina al vehículo en el mismo paciente, se realizaron inyecciones bilaterales de anestesia local dentro de la boca del mismo paciente. Esto fue seguido por la inyección del mesilato de fentolamina que contenía el agente local de reversión del anestésico (LARA por sus siglas en ingles) en un lado de la cavidad oral, y la inyección de la solución con vehículo salino (control) en el lado opuesto de la cavidad oral. El tiempo para revertir el efecto anestésico sobre ambos lados fue luego registrado para determinar si existe una diferencia entre los dos lados. Fármacos El anestésico local utilizado fue polocaína al 2% (clorhidrato de mepivacaína) con levonordefriña (1:20,000 = 0.05 mg/ml) (inyección de levonordefriña, USP) (Astra EUA, Inc., Westborough, MA 01581). La levonordefriña es una amina simpatomimética con un perfil farmacológico similar a aquel de la epinefrina, pero con una menor potencia. El agente local de reversión de la anestesia local (LARA) fue preparado como sigue : Un frasco estándar que contenía 5 mg de mesilato de fentolamina liofilizado para inyección, USP (Bedford Laboratories, Bedford, OH 44146) fue reconstituido con 1 mi de solución salina fisiológica utilizando una jeringa estéril desechable de 3 mi y una aguja hipodérmica desec able estéril. Después de la disolución del polvo liofilizado, se retiraron 0.5 mi de la solución de mesilato de fentolamina y se inyectaron dentro de un frasco de 50 mi de solución salina fisiológica para inyección (USP) por medio de una jeringa estéril desechable de 3 mi y una aguja hipodérmica estéril desechable. El LARA resultante consistió de este modo de 0.05 mg/ml de mesilato de fentolamina en solución salina fisiológica . Métodos Tres sujetos humanos, masculinos, saludables, de edades de 34 a 50 años, se ofrecieron voluntariamente para inyectárseles un anestésico local inyectado en la boca bilateralmente bajo el labio en un sitio fácilmente repetible. El tiempo exacto de cada inyección fue registrado. La posición elegida estuvo por arriba (apical) de la prominencia de la raíz de los dientes caninos superiores . Este es un sitio común seleccionado para entumecer los caninos, los incisivos laterales y el labio superior. El volumen del anestésico local inyectado fue de 1.7 + 0.1 mi sobre cada lado de la boca. Veinte minutos después de que se inyectó el anestésico local, cada sujeto fue re-inyectado por 1.6 mi de LARA sobre un lado, y 1.6 mi de solución salina fisiológica sobre el lado opuesto. Se utilizó una aguja de tamaño diferente para el anestésico y LARA o la solución salina. Se utilizó una aguja más larga (3.17 cm (1.25 pulgada)) para el anestésico local, dando como resultado que más solución fuera depositada alrededor de los nervios infraorbitales . LARA o solución salina se inyectaron con una aguja más corta (12.7 mm (media pulgada)) dando como resultado que menos LARA entrara en contacto con el agente anestésico alrededor de los nervios infraorbitales . Después de que todos los sujetos recibieron el agente anestésico seguido por LARA o solución salina, se les pidió a los sujetos que probaran la intensidad del entumecimiento sobre ambos lados en los siguientes sitios en la boca y cara: dientes, nariz, labio superior y gingiva. El entumecimiento de los dientes fue probado mediante mordedura o masticadura. El entumecimiento de los labios fue probado con el toque del dedo o la lengua, y el entumecimiento de la nariz fue probado con el toque del dedo. El entumecimiento de la gingiva fue probado con el extremo romo de una torunda de algodón de madera . Prueba Ciega Dos de los sujetos (E y M) fueron probados en ciego con respecto al lado de la boca donde se inyectaron LARA o vehículo con solución salina, por ejemplo, a los sujetos no se les informó cuál lado recibió y cuál lado recibió ?e???µ?? salino. El tercer sujeto · (H) fue el PI del estudio y se inyectó a sí mismo. Como consecuencia, el sujeto H no fue ciego con respecto con respecto al lado en el cual se inyectaron LARA o solución salina. Resultados En los tres sujetos, existió una aceleración dramática de la reversión de la anestesia local sobre el lado que había sido inyectado con LARA en comparación al lado que había sido inyectado con solución salina. No se notaron efectos colaterales de ningún tipo en ninguno" de los tres sujetos. En general, la sensibilidad a los dientes regresó primeramente. La Tabla 1 muestra los tiempos en los cuales desapareció el entumecimiento y reaparecieron las sensaciones en los tres sujetos en los diversos sitios sobre ambos lados de la boca y cara. En las primeras etapas de recuperación los sujetos reportaron que fue algo difícil determinar cuál lado del labio se estaba recuperando primero. En las últimas etapas de recuperación, no obstante, las diferencias entre los dos lados del labio fueron profundas y dramáticas . En las otras partes de la boca y cara, se reportó que las diferencias laterales eran pronunciadas incluso en las etapas muy tempranas de la recuperación. La dificultad para detectar diferencias laterales en los labios entre los dos lados tempranamente en el proceso de recuperación se piensa que es debido al siguiente hecho. Las -ramas labiales del nervio infraorbital se entrecruzan en la linea intermedia, dando como resultado un intercambio de la inervación (y la sensación resultante) en la linea intermedia del labio superior. TABLA 1 Sujeto E - LARA en el lado derecho (RHS) , Vehículo sobre LHS Sujeto M - LARA en LHS, Vehículo sobre RHS Sitio de la anestesia Tiempo de Tiempo de recuperación RHS recuperación LHS (Minutos) (Minutos) Dientes 32 121 Nariz 40 163 Gingiva 45 102 Labio 36 178 Todas las sensaciones 58 229 Sujeto H - LARA en RHS, Vehículo sobre LHS Conclusión LARA tuvo un efecto profundamente más rápido al eliminar el entumecimiento asociado con la anestesia local que utilizando solución fisiológica. La cantidad total de mesilato de fentolamina contenido en la solución de LARA administrada fue de 0.08 mg (1.6 mi de una solución 0.05 mg/ml) . Esta dosis total de mesilato de fentolamina es aproximadamente 62 veces menor que la dosis de 5 mg aprobada por la FDA para el tratamiento sistémico de la hipertensión en pacientes con feocromocitoma (1 mi de una solución de 5 mg/ml) y la cual puede provocar episodios severos de hipotensión en pacientes normales. A dosis eficaces extremadamente bajas que se encuentra son efectivas en el presente estudio, cualesquiera efectos colaterales sistémicos, tales como aquellos que pueden ocurrir con la alta dosis aprobada por la FDA, es probable que estén ausentes. Por supuesto, en el presente estudio, no se notaron efectos colaterales de ningún tipo durante o después de la administración de 0.05 mg/ml de mesilato de fentolamina. EJEMPLO 2 Razón y propósito del estudio Como se discute en el Ejemplo 1, es deseable revertir rápidamente la anestesia local después de que ésta ya no es necesaria, por ejemplo después de la terminación de un procedimiento dental. Los resultados en el Ejemplo 1 indican que la administración de una baja dosis de un antagonista del receptor alfa-adrenérgico, tal como mesilato de fentolamina puede revertir la anestesia debido a la administración de un anestésico local que comprende un agonista del receptor alfa-adrenérgico . Podría ser conveniente para tener una formulación líquida estable de una baja dosis del antagonista del receptor alfa-adrenérgico que pudiera ser almacenada refrigerada o a temperatura ambiente y que pudiera ser utilizada directamente para la administración. Desafortunadamente, las formulaciones de mesilato de fentolamina de la técnica anterior son inestables en agua y en solución salina. El propósito del presente estudio fue determinar si una formulación líquida estable que comprenda mesilato de fentolamina pudiera ser desarrollado, la cual pudiera proporcionar una vida en anaquel de al menos 12 meses a 2-8°C ó 25°G.

Diseño del estudio El desarrollo de la formulación de mesilato . de fentolamina fue conducido en un procedimiento en hileras para definir la composición óptima para el fármaco. En cada hilera, uno de los parámetros de formulación críticos relacionados a la estabilidad fue evaluado y se seleccionó la condición óptima. Los parámetros incluyeron pH, especie amortiguadora, concentración de amortiguador y aditivos incluyendo antioxidantes, quelantes de metales, surfactantes y agentes formuladores de complejo. En cada hilera, se realizó un estudio de estabilidad acelerada por temperatura a 40°C ó 60°C con el fin de definir la condición preferida para el parámetro. Una vez que las formulaciones utilizadas fueron identificadas, se realizaron estudios de estabilidad en tiempo real (2-8°C ó 25°C) -y acelerada (40°C, 60°C y 80°) . Métodos El mesilato de fentolamina (99%, Producto Número: 36, 165-8) fue adquirido de Aldrich Chemical Company (Milwaukee, WI) . Este material fue utilizado para la mayoría de los estudios. El mesilato de fentolamina estándar de referencia (Lote I) fue adquirido de la Pharmacopoeia de los Estados Unidos (USP) para el uso en estudio de estabilidad acelerada y en tiempo real. Después de la recepción, el mesilato de fentolamina fue almacenado a temperatura ambiente de acuerdo a los Certificados de Análisis.

El método analítico de Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC por sus sigla en inglés) por _ el mesilato de fentolamina es un método de elución isocrático que utiliza fosfato diácido de potasio 20 mM en una fase móvil de metanol al 45% a una velocidad de flujo de 1 ml/minuto y una columna Synergi Max RP. El fármaco es monitorizado a una longitud de onda de detección de 232 nm. 1. Preparación de las Muestras de Solución de Prueba de Mesilato de Fentolamina para la Evaluación de la Estabilidad Una cantidad apropiada de mesilato de fentolamina fue pesada (precisa a 0.1 mg) y se agregó a un vehículo acuoso que contenía la cantidad seleccionada de amortiguador y/o aditivo hasta una concentración de 0.1 mg/ml. En esta concentración el mesilato de fentolamina es libremente soluble a todos los valores de pH estudiados. Frascos de vidrio herméticamente sellados que contenían las soluciones de prueba fueron colocados en un horno a 40°C a 60°C. Todas las muestras fueron almacenadas en la oscuridad. Las alícuotas fueron removidas a los puntos de tiempo designados para el análisis de HPLC y la medición del pH. Todas las muestras fueron analizadas sin dilución. 2. Preparación de las Soluciones Estándares del Mesilato de Fentolamina para Análisis de HPLC Soluciones de reserva estándares fueron preparadas al pesar de manera precisa la cantidad apropiada (definida en los estudios individuales) de la sustancia farmacéutica mesilato de fentolamina (Aldrich Chemical Company) dentro de un matraz volumétrico, y aforando el matraz hasta el volumen con las soluciones especificadas en cada procedimiento experimental individual . Todas las soluciones estándares fueron almacenadas congeladas a -20°C y descongeladas a temperatura ambiente después del uso. 3. Medición del pH En conjunto con el análisis de HPLC, se midió el pH. La medición fue realizada utilizando las mismas muestras que se utilizaron para el análisis de HPLC. El potenciómetro fue calibrado utilizando amortiguadores estándares de pH 4.00 y 7.00 antes de cada medición. Resultados La formulación de mesilato de fentolamina fue desarrollada mediante el estudio de la estabilidad de acuerdo a los siguientes parámetros (hileras) . 1. Perfil de Estabilidad de pH de Amplio Intervalo Este estudio fue conducido para definir · el intervalo de pH (2-3 unidades) en el cual el mesilato de fentolamina pudiera ser más estable. Las soluciones de mesilato de fentolamina a una concentración de 0.1 mg/ml fueron preparadas a pH 2, 3, 4, 6, 7 y 8 en fosfato de sodio 50 mM y a pH 4, 5 y 6 en acetato de sodio 50 m . Los amor iguadores de fosfato fueron preparados mediante la adición de 3.40 mi de ácido fosfórico a agua desionizada (DI) , ajustando el pH con hidróxido de sodio 2N, y aforando el volumen a 1 L en un matraz volumétrico. Los amortiguadores de acetato fueron preparados mediante la adición de 2.95 mi de ácido acético al agua, ajustado el valor del pH con hidróxido de sodio 2N, y aforando el volumen a 1 L en un matraz volumétrico. Las muestras son analizadas mediante HPLC para la concentración de fentolamina y la pureza a un punto de tiempo inicial y después de dos a cinco días de almacenamiento a 40°C. Las mediciones fueron realizadas para el pH después de que las muestras habían sido analizadas por HPLC. En todos los estudios de estabilidad, los frascos de suero de vidrio con tapones de caucho y sellos abisagrados se utilizaron para el almacenamiento de las muestras para reducir al mínimo la pérdida de fluido. Los pesos de las muestras fueron medidos al comienzo del experimento antes del muestreo para el análisis, y después del resellado de los frascos para monitorizar cualquier pérdida de peso debida al calentamiento. No se observó pérdida de peso significativo. En cada pH la concentración fue dividida entre la concentración inicial correspondiente (día 0) para obtener la recuperación- porcentual. La recuperación porcentual fue trazada gráficamente contra el tiempo para el cálculo de la cinética de velocidad de primer orden. La pendiente de cada línea de pH fue calculada como la constante de velocidad y trazada gráficamente contra el pH para obtener un perfil de estabilidad al pH de amplio intervalo. Se observó un incremento significativo en la velocidad de degradación a pH por arriba de 7 (Fig. 1) . A valores de pH por debajo de 7, el perfil parece menos característico, sugiriendo la necesidad para un perfil de pH de intervalo estrecho, para determinar de manera precisa un intervalo de pH estrecho en el cual el fármaco es más estable. Las muestras preparadas en amortiguadores de acetato parecieron ser más estables que sus contrapartes de fosfato . 2. Perfil de Estabilidad al pH de Intervalo Estrecho Después de definir el intervalo de pH preferido para el mesilato de fentolamina, este estudio fue conducido para definir el intervalo de pH más favorable (dentro de una unidad de pH) . Soluciones de mesilato de fentolamina a concentración de 0.1 mg/ml fueron preparadas a pH 2 , 2.5, 3 , 3.5 ó 4 en fosfato de sodio 50 mM. Los amortiguadores de fosfato fueron preparados como se describió previamente. Las muestras fueron analizadas mediante HPLC para la concentración de la fentolamina y la pureza a un punto , de tiempo inicial y después de 2, 7 y 14 días de almacenamiento a 60°C. La medición del pH de la muestra fue realizada después del análisis de HPLC. Con el fin de definir de manera precisa el pH más favorable, fue necesaria una condición estresante más fuerte para generar un mayor grado de degradación en la región de pH menor. Para este estudio, la condición de incubación fue cambiada de 40°C a 60°C. La TABLA II proporciona la concentración y pureza de la fentolamina recuperada en cada punto de tiempo. Ya que el grado de degradación después de catorce (14) días fue todavía menor del veinte porciento (20%) en la mayoría de las muestras, la cinética de velocidad de orden cero fue utilizada para las curvas de degradación (concentración versus tiempo) . La constante velocidad calculada fue trazada gráficamente contra el pH para proporcionar el perfil de estabilidad al pH de intervalo estrecho . Se demostró que la fentolamina fue la más estable a pH 3.5 (Fig. 2). Un intervalo estrecho de los valores de pH más preferibles podría ser de este modo definido como pH 3.0 a 4.0 (pH 3.5 + 0.5).

TABLA. II . Un Estudio de Perfil de estabilidad a pH de Intervalo Estrecho 3. Efecto del Anión Amortiguador sobre la Estabilidad Habiendo definido el intervalo de pH óptimo (pH 3 a 4) a partir de los dos estudios previos, el propósito de este estudio fue seleccionar la especie amortiguadora más adecuada para amortiguar la solución de mesilato de fentolamina al valor de pH óptimo. Una comparación de varios amortiguadores aniónicos inyectables se realizó con base en la estabilidad relativa del mesilato de fentolamina bajo condiciones de estabilidad acelerada en esos amortiguadores. Los amortiguadores de prueba incluyeron fosfato de sodio 50 mM, acetato de sodio 50 mM, lactato de sodio 50 mM, citrato de sodio 50 mM, y amortiguadores de succinato de sodio 50_mM a pH 3. Las soluciones de mesilato de fentolamina a 0.1 mg/ml preparadas en estos amortiguadores fueron incubadas a 60 °C para acelerar la velocidad de degradación del mesilato de fentolamina . Los amortiguadores de fosfato y acetato fueron preparados como se describió anteriormente. El amortiguador de citrato fue preparado mediante la adición de 9.60 g de ácido cítrico al agua, ajustando el pH con hidróxido de sodio 2N a pH 3 , y aforando el volumen a 1 L en un matraz volumétrico. El amortiguador de lactato fue preparado mediante la adición de 2.25 g de ácido láctico al agua, ajustando el pH con hidróxido de sodio 2N hasta pH 3, y aforando el volumen a 1 L en un matraz volumétrico. El amortiguador de succinato fue preparado mediante la adición de 2.95 g de ácido succínico al agua, ajustando el pH con hidróxido de sodio 2N hasta pH 3 , y aforando el volumen a 1 L en un matraz volumétrico. Las muestras fueron analizadas mediante HPLC para la concentración de fentolamina y la pureza a un punto de tiempo inicial y después de 2, 7 y 14 días de almacenamiento a 60°C. Las mediciones del pH de la muestra fueron realizadas después del análisis de HPLC. La TABLA III proporciona la concentración y pureza de la fentolamina recuperada en cada punto de tiempo. El acetato de sodio pareció ser el amortiguador superior.. . Un rango de preferencia de amortiguador basado en la cantidad de fentolamina recuperada al final del estudio puede ser generado como: acetato de sodio > sin amortiguador (agua con pH ajustado a pH 3) > fosfato de sodio > lactato de sodio > succinato de sodio > citrato de sodio. El efecto fuerte de la especie amortiguadora sobre la estabilidad de la fentolamina, sugirió que la degradación de la fentolamina es catalizada por especies aniónicas con la velocidad de degradación correlacionada con la carga negativa sobre el anión. ün anión multivalente tal como el citrato debe ser evitado. El acetato de sodio fue seleccionado para el estudio posterior. TABLA III. Efecto del Tipo de Amortiguador Aniónico sobre la Estabilidad de la Fentolamina (toda la sal de sodio) a pH 3.0 Amortiguador Concentración de Fentolamina (µ?/ta?) Dia 0 Dia 2 Dia 7 Dia 14 Fosfato 96 93 91 84 Acetato 96 95 94 89 Lactato 97 94 91 83 Citrato 93 87 73 62 Succinato 96 88 74 64 Amortiguador Pureza de Fentolamina (% de área ._r_.,- pico) Día 0 Dia 2 Dia 7 Día 14 Fosfato 99 97 95 91 Acetato 100 98 97 96 Lactato 99 98 94 89 Citrato 97 91 77 69 Succinato 99 92 78 74 4. Efecto de la Concentración del Amortiguador sobre la Estabilidad Después de que fue establecida la especie amortiguadora más adecuada (acetato de sodio) , este estudio fue conducido para determinar la concentración óptima del amortiguador basado en la estabilidad de la sustancia farmacéutica mesilato de fentolamina y la estabilidad del pH (falta de desviación) de la solución durante el almacenamiento . Se prepararon soluciones de mesilato de fentolamina (0.1 mg/ml) en amortiguador de acetato de sodio a concentraciones de 0, 5, 10 y 50 m a pH 3.5. Las muestras fueron incubadas a 60°C con la prueba programada realizada en el día 0, 2, 7 y 14. Se prepararon diversas concentraciones del amortiguador mediante la dilución del amortiguador 50 mM con agua, y reexaminando el valor de pH para determinar si el pH 3.5 estaba constante. Las mediciones de pH fueron realizadas después del análisis de HPLC de las muestras . La concentración y pureza de la fentolamina recuperada de las soluciones preparadas a 0, 5, 10 y 50 mM de acetato de sodio se proporcionan en la TABLA IV. La velocidad de degradación de la fentolamina a 5, 10 y 50 mM de acetato de sodio pareció ser compatible y fue un mejoramiento sobre el control no amortiguado (0 mM) . Una desviación de pH hacia arriba fue observada en todas las muestras, en el intervalo de 0.1 a 1.7 unidades de pH . El valor de pH fue el más estable en el amortiguador de 50 mM . Mientras que una desviación de pH más allá del intervalo de pH más estable (pH 3.0 a 4.0) podría ser indeseable, un amortiguador excesivamente fuerte podría también ser indeseable debido a que una solución acida fuertemente amortiguada puede provocar irritación o dolor a la piel en el sitio de la inyección. De este modo, se consideró que la concentración de 10 mM era la concentración amortiguadora preferida para la formulación.

TABLA IV. Efecto de la Concentración del Amortiguador sobre la Estabilidad del Mesilato de Fentolamina en Acetato de Sodio a pH 3.5 . Efecto de los Aditivos sobre la Estabilidad Después de definir el pH óptimo, la especie amortiguadora de pH, y la concentración del amortiguador de pH para una solución de mesilato de fentolamina, se probaron diferentes aditivos para su potencial para mejorar la estabilidad de la fentolamina y para la selección, del modificador de la tonicidad más compatible. Los aditivos en este estudio son seleccionados de cinco grupos de excipientes inyectables a saber, modificadores de la tonicidad (cloruro de sodio y d-manitol), quelantes de metales (EDTA) , antioxidantes (metabisulf ito de sodio) , agentes formadores de complejos (a-ciclodextrina y niacinamida) y solventes (glicerol y polipropilenglicol ) . Es requerido un modificador de la tonicidad para ajustar la solución de mesilato de fentolamina a isotónica. El quelante de metales y el antioxidante fueron seleccionados con base en la hipótesis de que la oxidación de la fentolamina puede ocurrir como es sugerido por su estructura molecular. Los agentes formadores de complejos fueron aplicados con la esperanza de que una posible formación de un complejo de inclusión (por la a- ciclodextrina) , o un complejo de acumulación (por niacinamida) con fentolamina podría modificar la velocidad de degradación hidrolitica de la sustancia medicinal . Fueron agregados solventes para reducir la constante dieléctrica del vehículo y fueron destinados para retardar la velocidad de degradación debida a la polaridad del solvente.

Aditivos sólidos (EDTA disódico, metabisulfito de sodio, niacinamida, a- ciclodextrina , manitol, y cloruro de sodio) fueron agregados directamente a la solución de 0.1 mg/ml de mesilato de fentolamina en amortiguador de acetato 50 mM pH 3.5. El valor del pH de las soluciones fue reajustado a pH 3.5, como se requiriera. Las soluciones de glicerol al 25% (25 g en 100 mi de volumen total con agua) y polipropilenglicol al 25% (25 g en 100 mi de volumen total con agua) tuvieron su fuerza amortiguadora ajustada por la adición de ácido acético, seguido por la adición de hidroxido de sodio 2N para el ajuste del pH a 3.5, seguido por la adición del fármaco a 0.1 mg/ml. Todas las muestras fueron colocadas en frascos de suero de vidrio de 10 mi, tapados con tapones de caucho con un recubrimiento inerte (Daikyo Flurotec por WEST Pharmaceutical) , y sellados con tapas de ajuste a presión después del muestreo. Los frascos fueron colocados a 60°C y después los pesos fueron registrados . El muestreo ocurrió al punto de tiempo inicial y a los días 2, 7 y 14. Los frascos fueron pesados, muestreados, sellados, pesados nuevamente y reemplazados bajo la condición de almacenamiento seleccionada hasta la prueba en el punto de tiempo subsiguiente. Los registros indican ninguna pérdida significativa de peso durante el almacenamiento.

La Tabla V lista la concentración y pureza de la fentolamina recuperada en -cada punto de tiempo y la constante de velocidad de orden cero. Con base en la constante de velocidad y el valor de pureza, se consideraron el metabisulfito de sodio, cloruro de sodio, glicerol, polipropilenglicol y niacinamida indeseables, ya que éstos tuvieron impacto negativo sobre la recuperación de la fentolamina en comparación al control no aditivo. El impacto de la a-ciclodextrina pareció ser despreciable con base en el valor de pureza y quizás ligeramente positivo con base en el valor de la constante de velocidad. A una concentración de 5%, no obstante, su uso en la formulación fue determinado como no justificado debido a la toxicidad potencial. Se encontró que el d-manitol y EDTA disódico mejoraban la -estabilidad con base en la constante de velocidad o no mostraban impacto negativo con base en los valores de pureza. Ambos son seleccionados para la inclusión en la formulación, el EDTA disódico como estabilizador, d-manitol como un modificador de la tonicidad.

Tabla V. Efecto de los Aditivos sobre la Estabilidad del Mesilato de Fentolamina en Acetato de Sodio 10 mM, pH 3.5 6. Prueba y Ajuste de Tonicidad Fueron preparadas muestras con 2, 3 ó 4% p/v de d-manitol con EDTA disódico a 0.5 mg/ml y 0.1 mg/ml de mesilato de fentolamina ya sea en 10 ó 50 mM de amortiguador de acetato. Se utilizó un osmómetro de presión de vapor (Westcore Modelo 5500) para medir la osmolaridad de las soluciones, así como un control de la Solución Salina Normal (0.9% de cloruro de sodio, USP) . La tonicidad de las soluciones de fentolamina fueron representadas por osmolaridad. La osmolaridad medida fue trazada gráficamente contra la concentración de d-manitol . Se obtuvo una relación lineal entre la osmolaridad y la concentración del d-manitol. La concentración del d-manitol requerida para alcanzar la misma osmolaridad que la Solución Salina Normal, fue calculada para la solución amortiguada con acetato de sodio 10 ó 50 mM. La Tabla VI lista los valores de osmolaridad para las soluciones que incluyen Solución Salina Normal (cloruro de sodio al 0.9%), que a la osmolaridad medida de 292 mmol/kg, es considerada isotónica para el fluido corporal. La concentración de d-manitol requerida para proporcionar la isotonicidad, fue calculada como de 4.4% p/v y 5.0% p/v para las soluciones amortiguadas con acetato 50 mM y 10 mM, respectivamente .

Tabla VI . Osmolaridad de Mesilato de Fentolamina a 0.1 mg/ml con EDTA disódico a 0.5 mg/ml en amortiguador de acetato de sodio 10 ó 50 mM, pH 3.5 7. Prueba De Estabilidad Acelerada y Tiempo Real Después de la terminación de los estudios como se describió anteriormente, una formulación final de mesilato de fentolamina (identificada como formulación número 1) fue definida como una solución de mesilato de fentolamina a 0.1 mg/ml que contenia 0.5 mg/ml de EDTA disódico, 5% p/v de d-manitol en un amortiguador de acetato de sodio 10 mM, pH 3.5. Se identificaron otras cuatro formulaciones (números 2, 3, 4, y 5) como se listan más adelante. Las formulaciones números 2-5 fueron también incluidas en este estudio para las comparaciones de estabilidad a largo plazo con base en los datos de estabilidad en tiempo real. La estabilidad en tiempo real es un perfil de estabilidad generado a la temperatura de almacenamiento preferida, por ejemplo 25 °C ó 2-8 °C. Los datos de estabilidad generados a temperaturas elevadas, por ejemplo, 40, 60 y 80°C pudieron ser utilizados para generar una gráfica de Arrehenius con el fin de predecir la vida en anaquel a largo plazo a una menor temperatura, como fuera necesario. Una vida en anaquel aceptable para una formulación de solución de mesilato de fentolamina es definida como 90-95% de recuperación de la reivindicación etiquetada del mesilato de fentolamina después del almacenamiento a 25 °C ó 2-8 °C por uno a dos años. Formulación Mesilato de EDTA d- Acetato PH Fentolamina disódico manitol de sodio 1 0.1 mg/ml 0.5 mg/ml 5% 10 mM 3.5 2 0.1 mg/ml 0.5 mg/ml 5% 10 mM 4.0 3 0.1 mg/ml 0.5 mg/ml 4.4% 50 mM 3.5 4 0.1 mg/ml 0.5 mg/ml 0% 50 mM 3.5 5 0.1 mg/ml 0 mg/ml 4.4% 50 mM 3.5 Se prepararon formulaciones asépticamente en una campana de flujo laminar. Las soluciones fueron esterilizadas mediante la filtración a través de un filtro estéril de 0.2 micrómetros después del ajuste final del pH. Todas las formulaciones fueron estérilmente llenadas , en frascos en una campana de flujo laminar con una pipeta automática de repetición para transferir 1.5 mi de la solución filtrada a frascos de vidrio ámbar de 2 mi . Antes del llenado, los frascos fueron esterilizados y despirogenizados mediante el horneo aproximadamente a 250°C por aproximadamente dieciséis horas . Los frascos llenos fueron sellados con tapones esterilizados en autoclave (tapón de caucho de butilo gris de acabado de 13 mm) y fueron luego tapados y pesados antes de la colocación en los hornos de estabilidad. Todos los frascos fueron almacenados en la oscuridad en una posición vertical. Frascos por triplicado para el análisis de HPLC en cada punto de tiempo fueron preparados y se programó una inyección simple de HPLC para cada frasco. Las mediciones de pH fueron para ser realizadas después del análisis de HPLC de una muestra. Los frascos de la formulación número uno fueron colocados a -20°C; 2.8°C, 25°C, 40°C, 60°C y 75-82°C. Las formulaciones 2, 3, 4 y 5 fueron colocadas a 25°C. Los puntos de tiempo pretendidos para el muestreo y el análisis fueron hasta 48 semanas para las muestras a 25°C, con programas de muestreo truncados para las muestras a 40°C, 60°C, y 75-82°C. Durante la recolección de los datos de la segunda semana que la solución estándar congelada parecía menos estable que las muestras de prueba almacenadas en el estado ¦= líquido. Se realizó una decisión para cambiar el estándar de ensayo de la solución congelada al estándar de mesilato de fentolamina sólido, de la USP. El estándar de referencia de la USP fue pesado en cada uno de diez (10) matraces volumétricos y almacenado para el uso futuro. En cada punto de tiempo, una de las alícuotas estándares fue utilizada para elaborar una solución estándar mediante la adición de amortiguador de acetato 50 mM, pH 3.5 al volumen determinado. La Tabla VII ilustra los valores de la' recuperación porcentual de la concentración de fentolamina a la semana 1, 2, 3, 4, 8, 12, 24, 36 y 48. Para el tiempo 0, los valores de la semana 1 y la semana 2, los valores de concentración de fentolamina fueron determinados mediante el uso de una solución estándar congelada, preparada separadamente. Esta solución estándar congelada fue posteriormente cambiada al estándar de fentolamina sólida USP para las muestras de la semana 3, y más tarde debido a una inestabilidad aparente observada en la solución estándar congelada. Debido a este cambio del estándar, se observó una caída abrupta de 1 a 2% en la concentración de fentolamina para las muestras almacenadas a 40°C o por debajo. Cuando se utiliza un estándar estable, una variación típica de dos por ciento en la concentración es considerada normal en el análisis de HPLC, de este modo no. es significativa una reducción observada en la recuperación porcentual menor de dos por ciento. Los datos en la Tabla VII indican que, a la semana 3, la reducción total observada en la concentración fue de 4.0, 3.7, 3.8 y 4.7% para las muestras almacenadas a -20°C, 2-8°C, 25°C y 40°C, respectivamente. El desplazamiento hacia abajo en la concentración entre la semana 2 y la semana 3 debido al cambio del estándar pudo explicar más de 50% de la reducción total observada en la concentración. Por lo tanto, la pérdida de concentración en las primeras 3 semanas es aproximadamente 2% a lo más a 40°C o por debajo. Una diferencia de 2% en la concentración pudo estar muy por dentro de la variación del método de HPLC. De la semana tres a la semana ocho, no pareció existir pérdida de la concentración de la fentolamina en todas las muestras almacenadas a 40°C o menor. Los datos de la concentración de la fentolamina para el punto de tiempo de la semana 48 muestran una degradación de 4.6% y 3.2% para las muestras almacenadas a -20°C y 2-8°C, respectivamente. Las muestras almacenadas a 25°C mostraron una degradación del 6%, mientras que las muestras almacenadas a 40°C mostraron una degradación de 19.9%. Las muestras almacenadas a 80°C fueron completamente degradadas en el punto de tiempo de la semana 12 , y las muestras almacenadas a 60°C fueron consumidas después de 24 semanas . Los valores de recuperación de la concentración fueron bien apoyados por los valores de pureza (Tabla VIII) . Después de 8 semanas, la pérdida de pureza fue menor de dos por ciento para todas las muestras almacenadas a 40°C o menos. Los datos de pureza no reflejan de manera precisa la pureza de la muestra, ya que parece que la mayor parte del material degradado eluye en el volumen vacío de la columna y no es cuantificado . El pH (Tabla IX) de todas las muestras no cambió significativamente (< 0.2 unidades de pH) con la excepción de las muestras almacenadas a 60°C y 80°C. Un desplazamiento superior del pH de aproximadamente 0.5 unidades de pH fue observado en las muestras almacenadas a 80°C en la semana 8. El estudio de estabilidad para las formulaciones 2-5 fue únicamente conducido a 25°C. Los datos de concentración a la semana 48 para las formulaciones 2, 3 y 4 muestran una degradación del 5.3%, 6.1% y 4.8%, respectivamente, similar a aquella observada para la formulación 1. La formulación 5 mostró una degradación de 19.0%. La diferencia principal entre la formulación 5 y las otras cuatro formulaciones es que la formulación 5 no contiene EDTA disódico.

Tabla VII . Datos de Concentración de Estabilidad en Tiempo Real y Acelerada para las Formulaciones de Fentolamina i ltm lenoact Tiempo Semana Semana Semana Semana Semana Semana Semana Semana Semana 0 1 2 3 4 8 12 24 36 48 •o ti ? c Conc. Conc. Conc. Conc. Conc. Conc. Conc. Conc. Conc. Conc. e o Prom. Prom. Prom. Prom. Prom. Prom. Prom. Prom. t-. Prom. Prom. < (µ&???) ( &???) ( ^p??) ( ^p??) (pg/ml) ( g/ml) (µ&???) (Mg/ml) -20°C 100.0 100.4 97.9 98.2 99.3 98.2 96.8 98.3 97.2 1 2-8°C 100.1 101.0 98.2 98.6 100.0 98.3 97.4 99.2 98.6 1 25°C 101.9 100.9 100.3 98.1 98.2 98.7 96.8 96.8 97.3 95.8 1 40°C 100.2 99.8 97.2 97.4 97.2 94.8 88.8 88.2 81.6 1 60°C 100.4 98.3 94.4 94.3 90.7 82.3 69.5 1 80°C 91.2 76.9 58.7 54.4 4.2 0.6 2 25°C 100.2 99.6 98.7 96.7 97.2 98.1 95.7 94.8 96.6 94.9 3 25°C 102.2 102.2 101.9 98.2 99.2 99.2 97.9 96.9 95.8 96.0 4 25°C 102.4 102.0 101.7 95.5 99.0 99.5 98.1 97.4 95.7 97.5 25°C 101.9 99.3 96.2 94.0 94.9 93.2 89.8 89.0 85.0 82.5 Tabla VIII . Datos de la Pureza de Estabilidad en Tiempo lu rm¡ Real v Acelerada para las Formulaciones da Fentolamina l Amacenarme Tiempo Semana Semana Semana Semana Semana Semana Semana Semana Semana 0 1 2 3 4 8 12 24 36 48 c c •o ? Pureza Pureza Pureza Pureza Pureza Pureza Pureza Pureza Pureza Pureza m (% de (% de (% de (% de (% de (% de (% de (% de (% de (% de o Área Área Área Área Área Área Área Área Área Área Pico) Pico) Pico) Pico) Pico) Pico) Pico) Pico) Pico) Pico) 1 -20°C 99.1 99.3 99.3 99.4 99.9 98.0 98.8 98.8 98.5 1 2-8°C 99.4 99.2 99.2 99.4 99.2 98.3 98.6 98.7 97.8 1 25°C 99.3 99.2 99.3 99.2 99.0 99.0 98.0 98.4 98.3 97.7 1 40°C 99.1 99.0 98.8 98.8 98.2 96.8 93.4 94.1 90.6 1 60°C 99.5 97.8 97.5 97.4 95.6 93.2 86.8 80°C 94.9 89.5 82.4 79.7 21.6 4.4 2 25°C 99.2 99.1 99.1 99.1 99.1 99.0 97.9 98.1 98.1 97.4 3 25°C 99.1 99.0 99.1 98.8 99.1 99.1 96.9 98.3 97.4 97.6 4 25°C 98.7 98.5 98.7 99.0 98.7 98.4 96.7 97.7 97.2 96.6 25°C 99.4 99.2 99.2 99.1 99.2 98.8 96.5 97.0 95.2 92.4 Tabla IX. Datos de pH de Estabilidad en Tiempo Real y Acelerada para las Formulaciones de Fentolamina Conclusión Los datos a la semana 48 muestran que las formulaciones de mesilato de fentolamina 1-4 son relativamente estables a las temperaturas de almacenamiento de 25 °C o menores. Los datos muestran que la formulación 1 almacenada a 2-8 °C debe permanecer en la especificación (por ejemplo, una pérdida menor al 10% en la concentración y en la pureza) por más de 180 semanas, pero tiene una vida en anaquel predicha, con base en el limite de confianza menor de 95%, de 108 semanas. Los datos muestran que la formulación 1 almacenada a 25 °C debe permanecer en la especificación por las 108 semanas, pero tiene una vida de anaquel predicha, con base en . el límite de confianza menor de 95%, de 69 semanas. Los datos muestran que la formulación 2 almacenada a 25°C debe permanecer en la especificación por 103 semanas, pero tiene una vida en anaquel predicha, basada en el limite de confianza menor de 95%, de 63 semanas. Los datos muestran que la formulación 3 almacenada a 25°C debe permanecer en la especificación por 88 semanas, pero tiene una vida en anaquel predicha, basada en el límite de confianza menor de 95%, de 61 semanas . Los datos muestran que la formulación 4 almacenada a 25°C debe permanecer en la especificación por 115 semanas, pero tiene una vida en anaquel predicha, basada en el límite de confianza menor de 95%, de 60 semanas. La degradación rápida de la formulación 5 confirma que la presencia del EDTA disódico es esencial para la formulación estable de fentolamina. EJEMPLO 3 El objetivo de este examen de prueba de principio fue evaluar la factibilidad de revertir la anestesia del tejido suave por el bloqueo farmacológico de los efectos de la epinefrina. Veinte voluntarios adultos saludables fueron administrados con un bloqueo del nervio alveolar inferior utilizando un cartucho de 1.8 mi de lidocaína al 2% con epinefrina a 1:100,000. Sesenta minutos después, diez sujetos recibieron una inyección de mesilato de fentolamina para inyección, USP (0.2 mg en 1.8 mi), reconstituido y diluido con cloruro de sodio al 0.9% para inyección, USP,, y otros 10 sujetos recibieron una inyección de solución salina en el mismo sitio que la inyección de anestesia local. Los sujetos autoevaluaron el retorno de la sensación normal en su labio, barbilla, lengua, nariz y dientes mediante palpaciones a intervalos de 5 minutos comenzando 5 minutos antes de la inyección del fármaco de estudio y continuando por aproximadamente 4 a 5 horas . Para evitar respuestas desviadas, se les dijo a los sujetos que no podían abandonar la clínica por 8 horas después de la última inyección. Las respuestas para los tejidos fueron categorizadas como (1) entumecimiento (sin sensaciones) , (2) sensación de piquetes y agujas, o (3) sensación normal. Las respuestas para los dientes fueron (1) entumecimiento (sin sensación) o (2) sensación normal . La seguridad fue evaluada a través de los reportes de eventos adversos, la medición de los signos vitales y electrocardiogramas de dos guías, antes, durante y después de las inyecciones del anestésico y del fármaco de estudio, y a través de las evaluaciones de dolor utilizando escalas analógicas visuales. El mesilato de fentolamina redujo significativamente (p<0.01) la duración de la anestesia en cada tejido. Los tiempos promedio de la inyección del fármaco de estudio hasta el retorno de la sensación completamente normal se describen en la Figura 3. Los efectos adversos fueron pocos y no se notaron diferencias entre los grupos con agente activo y placebo. No existieron anormalidades en el electrocardiograma. EJEMPLO 4 Los objetivos de este estudio fueron evaluar la seguridad y la eficacia de un intervalo de dosis de fentolamina en la reversión de anestesia local después de un bloqueo del nervio mandibular. Cuatro grupos de diez sujetos voluntarios adultos saludables fueron administrados con un bloqueo del nervio alveolar inferior utilizando un cartucho de 1.8 mi de lidocaína al 2% con epinefrina 1:100,000. Sesenta minutos después, cada grupo recibió una inyección de mesilato de fentolamina para inyección, USP (0.02 mg, 0.06 mg, ó 0.4 mg en 1.8 mi), reconstituido y diluido con cloruro de sodio al 0.9% para inyección, USP, o placebo salino en el mismo sitio que la inyección del anestésico local. Los sujetos palparon su labio inferior, barbilla, lengua, y dientes, cada cinco minutos por las siguientes cinco horas después de las inyecciones. El mesilato de fentolamina, a todas las dosis probadas, redujo significativamente (p<0.05) la duración de la anestesia en cada tejido medido. Los tiempos promedio a partir de la inyección del fármaco de estudio hasta el retorno a la sensación completamente normal, se describen en la Figura 4. Los eventos adversos fueron pocos y no se notaron diferencias entre los grupos con agente activo, y placebo. No existieron anormalidades en el electrocardiograma. EJEMPLO 5 Los objetivos de este estudio fueron evaluar la seguridad y eficacia de un intervalo de dosis de fentolamina en la reversión de la anestesia local después de una infiltración maxilar. Cuatro grupos de ocho sujetos adultos saludables voluntarios fueron administrados con una infiltración del incisivo lateral utilizando un cartucho de 1.8 mi de lidocaína al 2% con epinefrina 1:100,000. Cuarenta minutos después, cada grupo recibió una inyección de mesilato de fentolamina para inyección, USP (0.02 mg, 0.08 mg, ó 0.4 mg en 1.8 mi), reconstituido y diluido con cloruro de sodio al 0.9% para inyección, USP, o el placebo salino en el mismo sitio que la inyección de anestésico local. Los sujetos palparon su labio superior, nariz y dientes cada cinco minutos por las siguientes cinco horas después de las inyecciones. El mesilato de fentolamina, a todas las dosis probadas, redujo significativamente (p<0.01) la duración de la anestesia en cada tejido medido. Los tiempos promedio a partir de la inyección del fármaco de estudio hasta el retorno a la sensación completamente normal, son descritos en la Figura 5. Los eventos adversos fueron pocos y no se notaron diferencias entre los grupos con agente activo, y placebo. No existieron anormalidades en el electrocardiograma . Habiendo descrito completamente ahora esta invención, podrá ser comprendido por aquellos de experiencia ordinaria en la técnica que la misma puede ser realizada dentro de un intervalo amplio y equivalente de condiciones, formulaciones y otros parámetros sin afectar el alcance de la invención o cualquier modalidad de la misma. Todas las patentes, solicitudes de patente y publicaciones citadas en la presente son completamente incorporadas por referencia en la presente en su totalidad. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, .se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Una formulación líquida estable caracterizada porque comprende una baja dosis de un antagonista del receptor alfa-adrenérgico, un solvente acuoso y un quelante de metales, en donde la formulación tiene un pH de entre aproximadamente 2.0 y 6.0.
2. La formulación líquida estable de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el antagonista del receptor alfa-adrenérgico está presente en una concentración de entre aproximadamente 0.01 mg/ml a 10 mg/ml.
3. La formulación líquida estable de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, caracterizada porque el antagonista del receptor alfa-adrenérgico se selecciona de fentolamina, clorhidrato de fentolamina, mesilato de fentolamina, tolazolina, yohimbina, rauwolscina, doxazosina, labetalol, prazosina, tetrazosina o trimazosina o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de los anteriores.
4. La formulación líquida estable de conformidad con la reivindicación 3, caracterizada porque el antagonista del receptor alfa-adrenérgico es mesilato de fentolamina.
5. Una formulación líquida estable que comprende mesilato de fentolamina, un solvente acuoso y un quelante de metales, caracterizada porque la formulación tiene un pH de entre aproximadamente 2.0 y 6.0.
6. La formulación líquida estable de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada porque el mesilato de fentolamina está presente a una concentración de entre aproximadamente 0.01 mg/ml a 10 mg/ml.
7. La formulación líquida estable de conformidad con la reivindicación 4 ó 6, caracterizada porque el mesilato de fentolamina está presente a una concentración de entre aproximadamente 0.01 mg/1 y 1 mg/ml.
8. La formulación líquida estable de conformidad con la reivindicación 7, caracterizada porque el mesilato de fentolamina está presente en una concentración de entre aproximadamente 0.01 mg/ml a 0.25 mg/ml.
9. La formulación líquida estable de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada porque el mesilato de fentolamina está presente en una concentración entre aproximadamente 0.1 mg/ml y 0.25 mg/ml.
10. La formulación líquida estable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizada porque el solvente es agua.
11. La formulación líquida estable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizada porque el solvente es una combinación de agua y un solvente orgánico.
12. La formulación líquida estable de conformidad con la reivindicación 11, caracterizada porque el solvente orgánico se selecciona de glicerol, polipropilenglicol , aceite mineral o polietilenglicol .
13. la formulación líquida estable de conformidad con la reivindicación 12, caracterizada porque el solvente orgánico es polipropilenglicol presente en una concentración de entre aproximadamente 5 a 40% (v/v) .
14. La formulación líquida estable de conformidad con la reivindicación 13, caracterizada porque el polipropilenglicol está presente a una concentración de aproximadamente 25% (v/v) .
15. La formulación líquida estable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, caracterizada porque el quelante de metales se selecciona de etilendiaminotriacetato de díamonio, ácido hidroxietil-etilendiaminotriacético, ácido dietilentriaminopentaacético, ácido nitriloacético, ácido cítrico o EDTA.
16. la formulación líquida estable de conformidad con la reivindicación 15, caracterizada porque el quelante de metales es EDTA, en donde el EDTA está presente a una concentración de entre aproximadamente 0.5 y 2.5 mg/ml .
17. La formulación líquida estable de conformidad con la reivindicación 16, caracterizada porque EDTA está presente a una concentración de entre aproximadamente 0.5 y 1.0 mg/ml .
18. La formulación líquida estable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, caracterizada porque el pH de la formulación está entre aproximadamente 3.5 y 4.5.
19. La formulación liquida estable de conformidad con la reivindicación 18, caracterizada porque el pH de la formulación está entre aproximadamente 3.8 y 4.2.
20. La formulación liquida estable de conformidad con la reivindicación 18 ó 19, caracterizada porque el pH es logrado con un amortiguador de acetato 10 a 50 mM, o con ácido metansulfónico .
21. La formulación líquida estable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20, caracterizada adicionalmente porque comprende un modificador de la tonicidad.
22. La formulación líquida estable de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque el modificador de la tonicidad se selecciona de cloruro de sodio, d-manitol o dextrosa.
23. La formulación líquida estable de conformidad con la reivindicación 22, caracterizada porque el modificador de la tonicidad es d-manitol presente a una concentración de entre 1 y 10% (p/v) .
24. La formulación líquida estable de conformidad con la reivindicación 23, caracterizada porque el d-manitol está presente a una concentración de entre aproximadamente 4 y 5% (p/v) .
25. La formulación liquida estable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 24, caracterizada además porque comprende un antioxidante y una cantidad suficiente para prevenir la oxidación del antagonista del receptor alfa-adrenérgico .
26. La formulación líquida estable de conformidad con la reivindicación 25, caracterizada porque el antioxidante se selecciona del ácido ascórbico, metabisulfito de sodio, hidroxianisol butilado, e hidroxitolueno butilado.
27. La formulación líquida estable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 26, caracterizada porque comprende además un agente formador de complejos.
28. La formulación líquida estable de conformidad con la reivindicación 27, caracterizada porque el agente formador de complejos es seleccionado de -ciclodextrina o niacinamida.
29. Una formulación líquida estable, caracterizada porque se selecciona de : a. mesilato de fentolamina 0.222 mg EDTA Na2 0.5 mg d-manitol 50 mg acetato de sodio 1.36 mg ácido acético c.b.p. pH 3.8 a 4.2 agua para inyección c . b .p . a 1.0 ml b. mesilato de fentolamina 0.222 mg EDTA Na2 1.0 mg d-manitol 50 mg acetato de sodio 1.36 mg ácido acético c.b.p. pH 3.8 a 4 .2 agua para inyección c.b.p. a 1.0 ml c . mesilato de fentolamina 0.222 mg EDTA Na2 0.5 mg d-manitol 50 mg agua para inyección c.b.p. a 1.0 ml d. mesilato de fentolamina 0.222 mg EDTA Na2 1.0 mg d-manitol 50 mg agua para inyección c.b.p. a 1.0 ml e . mesilato de fentolamina 0.222 mg EDTA Na2 0.5 mg d-manitol 50 mg ácido metansulfónico c.b.p. pH 3.5 a 4 .5 agua para inyección c.b.p. a 1.0 ml f . mesilato de fentolamina 0.222 mg EDTA Na2 1.0 mg d-manitol 50 mg ácido metansulfónico c.b.p. pH 3.5 a 4 .5 agua para inyección c.b.p. a 1.0 mi g- mesilato de fentolamina 0.222 mg EDTA Na2 0.5 mg d-manitol 50 mg PPG 259.5 mg agua para inyección c.b.p. a 1. 0 mi h. mesilato de fentolamina 0.1 mg EDTA Na2 0.5 mg d-manitol 50 mg acetato de sodio 1.36 mg ácido acético c.b.p. pH 3 .5 agua para inyección c.b.p. a 1. 0 mi i . mesilato de fentolamina 0.1 mg EDTA Na2 0.5 mg d-manitol 50 mg acetato de sodio 1.36 mg ácido acético c.b.p. pH 4 .0 agua para inyección c.b.p. a 1. 0 mi j ¦ mesilato de fentolamina 0.1 mg EDTA Na2 0.5 mg d-manitol 44 mg acetato de sodio 1. 6 mg ácido acético c.b.p. pH 3 .5 agua para inyección c.b.p. a 1. 0 mi k. mesilato de fentolamina 0.1 mg EDTA Na2 0.5 mg acetato de sodio 6.80 mg ácido acético c.b.p. pH 3.5 agua para inyección c.b.p. a 1.0 mi o 1. mesilato de fentolamina 0.235 mg EDTA Na2 0.5 mg d-manitol 50 mg acetato de sodio 1.36 mg ácido acético c.b.p. pH 3.8 a 4.2 agua para inyección c.b.p. a 1.0 mi
30. Un recipiente caracterizado porque comprende una forma de dosis simple de una formulación líquida estable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 29.
31. El recipiente de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque el recipiente tiene un espacio superior y el espacio superior comprende menos de 2% de oxígeno.
32. El recipiente de conformidad con la reivindicación 30 ó 31, caracterizado porque se selecciona de una ampolleta, un cartucho dental o una jeringa estéril pre-1leñada .
33. El recipiente de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque la formulación líquida estable está presente en un volumen de entre aproximadamente 1.6 y 1.8 mi.
34. Un método para la preparación de una forma de dosis simple de una formulación líquida estable _ de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 29, caracterizado el método porque comprende los pasos de: inundar un recipiente vacío con un gas inerte; rellenar el recipiente con la formulación líquida estable mientras que se inunda continuamente con el gas inerte; y se sella el recipiente.
35. El método de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado porque el recipiente tiene un espacio superior y el espacio superior en el recipiente lleno comprende menos de 2% de oxígeno.
36. El método de conformidad con la reivindicación 34 ó 35, caracterizado porque el recipiente se selecciona de una ampolleta, un cartucho dental o una jeringa pre-llenada.
37. El método de conformidad con la reivindicación 36, caracterizado porque el recipiente es llenado con un volumen de la formulación líquida estable de entre aproximadamente 1.6 y 1.8 mi.
38. El uso de una formulación líquida estable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 29, para la producción de un medicamento para incrementar el flujo sanguíneo en un mamífero.
39. El uso de conformidad con la reivindicación 38, en donde el medicamento es utilizado para contrarrestar una administración previa a un mamífero de un agonista del receptor alfa-adrenérgico.
40. El uso de conformidad con la reivindicación 38, en donde el medicamento es utilizado para revertir la anestesia provocada por la administración previa de un anestésico.
41. El uso de conformidad con la reivindicación 40, en donde el anestésico fue administrado con un agonista del receptor alfa-adrenérgico ya sea como una forma de dosis simple o como una forma de dosis separada.
42. El uso de conformidad con la reivindicación 38, en donde el medicamento es utilizado para aumentar la supervivencia del injerto de tejido, reducir la necrosis dérmica, disminuir el alvéolo seco en un mamífero que sufre de extracción de dientes, reducir el dolor post-operatorio, reducir los espasmos musculares, aumentar la supervivencia de un diente dañado o enfermo, tratar un punto de disparo, reducir la prolongación de un bloqueo anestésico regional o tratar la enfermedad periodontal.
43. El uso de conformidad con la reivindicación 42, en donde el medicamento es utilizado para aumentar la supervivencia del injerto de tejido, y en donde el medicamento es utilizado en conjunto con hialuronidasa, en donde la hialuronidasa es administrada después del injerto de tejido.
44. El uso de conformidad con la reivindicación 42 ó 43, en donde el injerto de tejido se selecciona de un injerto de cabello, un implante dental o un colgajo de cabello.
45. El uso de conformidad con la reivindicación 38, 40 ó 41, en donde el medicamento es utilizado para reducir la prolongación de un bloqueo anestésico y está diseñado para la administración al espacio epidural del mamífero.
46. El uso de conformidad con la reivindicación 42, en donde el medicamento es utilizado para tratar una enfermedad periodontal y está diseñado para la administración como un irrigador para una bolsa periodontal.
47. El uso de conformidad con la reivindicación 40 ó 41, en donde el medicamento es utilizado para revertir la prolongación de la anestesia local administrada como parte de un procedimiento dental .
48. Un equipo, caracterizado porque comprende un medio portador que tiene en confinamiento estrecho en éste dos o más medios de recipiente, en donde un primer medio de recipiente contiene un agente anestésico y opcionalmente un agonista del receptor alfa-adrenérgico y un segundo medio de recipiente que contiene la formulación líquida estable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 29.
49. El equipo de conformidad con la reivindicación 48, caracterizado porque el segundo medio de recipiente es un recipiente de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 30 a 33.