MXPA04004079A - Amidas hidroxi sustituidas para tratamiento de enfermedad de alzheimer. - Google Patents

Amidas hidroxi sustituidas para tratamiento de enfermedad de alzheimer.

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Abstract

La presente invencion es un metodo para tratar la enfermedad de Alzheimer, y otras enfermedades, y/o inhibir la enzima beta-secretasa, y/o inhibir la deposicion del peptido beta A en un mamifero, por el uso de compuestos conocidos de la Formula (I),(Ver formula I)en donde A, R, J, y n son como se define en la presente.

Description

AMIDAS HIDROXI SUSTITUIDAS PARA TRATAMIENTO DE ENFERMEDAD DE ALZHEIMER Campo de la Invención La presente invención se refiere al tratamiento de la enfermedad de Alzheimer y otras enfermedades similares, y más específicamente al uso de compuestos que inhiben la beta- secretasa, una enzima que desdobla a la proteína precursora amiloide para producir el péptido beta A, el principal componente de las placas amiloides encontradas en el cerebro de los enfermos de Alzheimer, en tales métodos.
Antecedentes de la Invención La enfermedad del Alzheimer (AD por sus siglas en inglés) es una enfermedad degenerativa progresiva del cerebro, asociada principalmente con el envejecimiento. La presentación clínica de AD se caracteriza por la pérdida de memoria, cognición, razonamiento, juicio y orientación. A medida que la enfermedad se desarrolla, las capacidades motoras, sensoriales y lingüísticas también son afectadas hasta que se presenta un deterioro global eje las funciones cognitivas múltiples. Estas pérdidas cognitivas se presentan gradualmente, pero típicamente conducen a un deterioro severo y a la muerte eventual en un periodo de cuatro a doce años. La enfermedad de Alzheimer se caracteriza por dos REF . : 155792 principales observaciones patológicas en el cerebro: marañas neurofibrilares y placas beta amiloides (o neuríticas) , comprendidas predominantemente de un agregado de un fragmento de péptido conocido como A beta. Los individuos con AD exhiben depósitos beta-amiloides característicos en el cerebro (placas beta amiloides) y en los vasas sanguíneos del cerebro (angiopatía beta amiloide) así como marañas neurofibrilares . Las marañas neurofibrilares no se presentan solamente en la enfermedad de Alzheimer, sino también en otros padecimientos que inducen a la demencia. En una autopsia, un gran número de estas lesiones se encuentra generalmente en las áreas del cerebro humano, importantes para la memoria y la cognición. Los números más pequeños de estas lesiones en una distribución anatómica más restringida se encuentran en los cerebros de la mayoría de los humanos más viejos quienes no tienen la AD clínica. Las placas amiloidogénicas y la angiopatía amiloide vascular también caracterizan a los cerebros de individuos con Trisomía 21 (síndrome de Down) , hemorragia cerebral hereditaria con amiloido3Ís del tipo Dutch (HCHWA-D) , y otros padecimientos neurodegenerativos. La beta-amiloide es una característica que define a la AD, ahora se piensa que es un precursor causativo o factor en el desarrollo de la enfermedad. La deposición de A beta en áreas del cerebro responsables de las actividades cognoscitivas, es al., 2001 Nature Neuroscience 4:231-232). Esta evidencia sustenta además, la propuesta de que la inhibición de la actividad de la beta-secretasa y la reducción de A beta en el cerebro, proporciona un método terapéutico para el tratamiento de la AD y otros trastornos de la beta amiloide. En la actualidad, no existen tratamientos efectivos para detener, prevenir o revertir el progreso de la enfermedad de Alzheimer. Por lo tanto, existe una necesidad urgente de agentes f rmacéuticos capaces de retardar el progreso de la enfermedad de Alzheimer y/o prevenirlo en primer lugar. Los compuestos que son inhibidores efectivos de la beta secretasa, que inhiben el desdoblamiento de la APP mediado por la beta secretasa, que son inhibidores efectivos para la producción de A beta, y/o son efectivos para reducir las placas o depósitos beta amiloides, son necesarios para el tratamiento y la prevención del padecimiento caracterizado por las placas o depósitos beta amiloides, tales como AD. En la actualidad, no existen tratamientos efectivos para detener, prevenir o revertir el progreso de la enfermedad de Alzheimer. Por lo tanto, existe una necesidad urgente de agentes farmacéuticos capaces de retardar el progreso de la enfermedad de Alzheimer y/o prevenirlo en primer lugar. Los compuestos que son inhibidores efectivos de la beta secretasa, que inhiben el desdoblamiento de la APP mediado por la beta secretasa, que son inhibidores efec.ivos para la producción de A beta, y/o son efectivos para reducir las placas o depósitos beta amiloides, son necesarios para el tratamiento y la prevención del padecimiento caracterizado por las placas o depósitos beta amiloides, tales como AD.
Breve Descripción de la Invención La presente invención se refiere a métodos de tratamiento de un sujeto que tiene, o en la prevención de un sujeto a que desarrolle, una enfermedad o condición seleccionada del grupo que consiste de la enfermedad de Alzheimer, para ayudar a prevenir o retrasar el ataque de la enfermedad de Alzheimer, para ayudar en hacer más lento el avance de la enfermedad de Alzheimer, para tratar a pacientes con el deterioro cognoscitivo moderado (MCI) y prevenir o retrasar el ataque de la enfermedad de Alzheimer en aquellos en quienes progresarían desde MCI hasta AD, para tratar el síndrome de Down, para tratar humanos que tienen hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis del tipo Dutch, para tratar angiopatía amiloide cerebral y prevenir sus consecuencias potenciales, es decir, hemorragias lobares recurrentes y simples, para tratar otras demencias degenerativas, que incluyen demencias de origen degenerativo y vascular mezcladas, demencia asociada con el mal de Parkinson, demencias frontotemporal con parkinsonismo (FTDP) , demencia asociada con la parálisis supranuclear progresiva, o H; y o son útiles para la inhibición de la enzima de proteasa del VIH. Esta patente no tiene ninguna descripción con respecto a la enfermedad de Alzheimer. La patente de E.U.A. No. 5,747,540, describe cómo hacer los compuestos anteriores y cómo utilizarlos para la inhibición de la enzima de proteasa del VIH. La patente de E.U.A. , No. 5,747,540 se incorpora aquí como referencia, en su totalidad. En un aspecto, la presente invención se refiere a métodos de tratamiento de un sujeto que tiene, o en la prevención de un sujeto a que desarrolle, una enfermedad o condición seleccionada del grupo que consiste de la enfermedad de Alzheimer, para ayudar a prevenir o retrasar el ataque de la enfermedad de Alzheimer, para ayudar en hacer más lento el avance de la enfermedad de Alzheimer, para tratar a pacientes con el deterioro cognoscitivo moderado (MCI) y prevenir o retrasar el ataque de la enfermedad de Alzheimer en aquellos en quienes progresarían desde MCI hasta AD, para tratar el síndrome de Down, para tratar humanos que tienen hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis del tipo Dutch, para tratar angiopatía amiloide cerebral y prevenir sus consecuencias potenciales, es decir, hemorragias lobares recurrentes y simples, para tratar otras demencias degenerativas, que incluyen demencias de origen degenerativo y vascular mezcladas, demencia asociada con el mal de cuyo heterociclo de con Ci-4 alquilo H; y en donde X es CONHR1 o SO2NHR1; y R1 es Ci_4 alquilo inferior, C3 cicloalquilo o H. En una modalidad, los métodos de la invención comprenden la administración del compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, de la fórmula: 2- ( (2S,4R) -4-bencil-2-hidroxi-5- { [ (1S,2R) -2-hidroxi-2 , 3- dihidro-lH-inden-l-il] amino} -5-oxopentil) -N-butilbenzamida . En una modalidad, los métodos de la invención comprenden la administración del compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, de la fórmula: (2R,4S) -2-bencil-5- {2- [ (butilamino) sulfonil] feml} -4-hidroxi- N- [ (1S, 2R) -2-hidroxi-2 , 3 -dihidro- 1H- inden- 1- il ] entanamida.
En una modalidad, los métodos de la invención comprenden la administración de un compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, de la fórmula: ó 2- ( (2S,4R) -4-bencil-2-hidroxi-5-{ [ (1S,2R) -2-hidroxi - 2 , 3-dihidro- 1H- inden- 1 -il] amino} -5-oxopentil) -N-butil-5- metilbenzamida . En ciertas modalidades preferidas, la invención proporciona métodos que comprenden la administración de un compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o una composición que comprende el compuesto, seleccionado del grupo que consiste de: ó 2- ( (2S,4R) -4-bencil-2-hidroxi-5- { [ (18, 2R) -2-hidroxi - 2 , 3-dihidro-1H- inden- 1-il] amino} -5-oxopentil) -N- butilbenzamida; ó (2R, 4S) -2-bencil-5- (2- [ (butilamino) sulfonil] fenil} -4 hidroxi-N- [ (1S, 2R) -2 -hidroxi -2 , 3 -dihidro- 1H- inden- 1 - il] pentanamida; 6 2- ( (2S.4R) -4 -bencil -2 -hidroxi -5- { [ (1S,2R) -2-hidroxi 2 , 3 -dihidro- 1H- inden- 1-il] amino} -5-oxopentil ) -N-butil - 5,6,7, 8-tetrahidronaftaleno-l-carboxamida; ó (2R, 4S) -5- [2- (aminosulfonil) fenil] -2 -bencil - -hidroxi N-[(1S,2R) -2 -hidroxi -2 , 3 -dihidro- 1H- inden- 1-il] pentanamida; 6 (2R,4S) -2-bencil-4-hidroxi-N- [ (1S,2R) -2 -hidroxi -2 , 3 - dihidro-lH-inden-l-il] -5- [1- (metoximetil) -lH-indol-2- i1] entanamida ; ó (2R,4S) -2-bencil-5- [2- (4 , 4 -dimetil -4 , 5-dihidro- 1 , 3 oxazol-2-il) -4-metilfenil] -4-hidroxi-N- [ (1S, 2R) -2-hidroxi- 2 , 3 -dihidro- lH-inden- 1- il] pentanamida ; 6 (2R,4S) -2-bencil-4-hidroxi-N- [ (1S,2R) -2 -hidroxi -2 , 3 dihidro-lH-inden-l-il] -5- [2- (hidroximetil) fenillpentanamida; ó 2- ( (2S,4R) -4-bencil-2-hidroxi-5- { [ (1S.2R) -2-hidroxi , 3 -dihidro-lH-inden-l-il] amino} -5-oxopentil) -N- (tert-but l) ¦ -metilbenzamida ; ó (2R, 4S) -2-bencil-5- (2-etoxifenil) -4-hidroxi-N [ (1S, 2R) -2-hidroxi-2 , 3 -dihidro- 1H- inden- 1 - il]pentanamida; Ó 2- ( (2S,4R) -4-bencil-2-hidroxi-5-{ [ (1S,2R) -2-hidroxi 2 , 3-dihidro-lH-inden-l-il] mino} -5-oxopentil) bencil butilcarbamato; ó (2R.4S) -2-bencil-5- (2 , 5-dimetoxifenil) -4-hidroxi-N [ ( 1S , 2R) -2-hidroxi -2 , 3 -dihidro-??- inden- 1- il ] pentanamida ; ó (2R.4S) -2-bencil-4-hidroxi-N- [(1S,2R) -2 -hidroxi-2 , 3 dihidro-lH-inden-l-il] -5- (2-hidroxifenil) pentanamida; ó (2 , 4S) -2-bencil-5- (2 , 4 -dimetoxifenil ¡ - -hidroxi -N- [ (1S, 2R) -2 -hidroxi -2 , 3 -dihidro- lH-inden-l-il] entanamida; ó (2R,4S) -2-bencil-5- (3 , 5-dibromo-2-hidroxifenil) hidroxi-N- [ (1S,2R) -2 -hidroxi -2 , 3 -dihidro- 1H- inden- 1 - il ] entanamida ; ó (2R,4S) - 2 -bencil -4 -hidroxi-N- [ (1S,2R) -2 -hidroxi -2 , 3 - dihidro-lH-inden-l-il] -5- (2 - isobutoxifenil ) pantanamida; ó (2R.4S) -2-bencil-4-hidroxi-N- [(1S,2R) -2 -hidroxi -2 , 3 dihidro-lH-inden-l-il] -5-fenilpentanamida; 6 (2R, S) -2-bencil-4-hidroxi-N- [ (1S, 2R) -2 -hidroxi-2 , 3 dihidro-lH-inden-l-il] -5- [2- (metilsulfonil ) fenil] entanamida o (2R, 4S) -2-bencil-4-hidroxi-N- [ (1S, 2R) -2 -hidroxi -2 , 3 ] pentanamida; 2 -hidroxi-2 , 3 - ) pentanamida; dos de esta por nombres de Advanced encia a las icas. También se definen a apacidad de un l sitio activo n lo cual se ima. de se observa, hidrocarburos alifáticos saturados de cadena lineal y ramificada, que tienen el número especificado de átomos de carbono (Me es metilo, Et es etilo, Pr es propilo, Bu es butilo) ; "alcoxi" representa un grupo alquilo del número indicado de átomos de carbono colocados a través de un puente de oxígeno, y "cicloalquilo" pretende incluir grupos de anillo saturado, tal como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo (Cyh) y cicloheptilo . "Halo", como se usa en la presente, significa fluoro, cloro, bromo y yodo; y "contraión" se usa para representar una especie sencilla, cargada negativamente, tal como cloruro, bromuro, hidróxico acetato, trifluoroacetato, perclorato, nitrato, benzoato, maleato, tartrato, hemitartrato, bencensulfonato, y similares. Como se usa en la presente, con excepciones como se observa, "arilo" se pretende que signifique fenilo (Ph) o naftilo . El término heterociclo o heterocíclico, como se usa en la presente, excepto en donde se observa, representa un sistema de anillo heterocíclico bicíclico de 7 a 10 miembros estables, o mono o bicíclico de 5 a 7 miembros estable, cualquier anillo de los cuales puede estar saturado o insaturado, y que consiste de átomos de carbono y desde uno hasta tres heteroátomos seleccionados del grupo que consiste N, 0 y S, y en donde los heteroátomos de nitrógeno y de azufre pueden oxidarse opcionalmente , y el heteroátomo de nitrógeno puede cuaternizarse opcionalmente, e incluye cualquier grupo bicíclico en el cual, cualquiera de los anillos de heterocíclicos antes definidos se fusiona a un anillo de benceno. El anillo heterocíclico se puede colocar en cualquier heteroátomo o átomo de carbono que resulte en la creación de una estructura estable. Los ejemplos de tales elementos heterocíclicos incluyen piperidinilo, piperazinilo, 2-oxopiperazinilo, 2-oxopiperidinilo, 2-oxopirrolodinilo, 2- oxoazepinilo, azepinilo, pirrolilo, 4-piperidonilo, pirrolidinilo, pirazolilo, pirazolidinilo, imidazolilo, imidazolinilo, imidazolídinilo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, oxazolilo, oxazolidinilo, isoxazolilo, isoxazolidinilo, morfolinilo, tiazolilo, tiazolidinilo, isotiazolilo, quinuclidinilo, isotiazolidinilo, indolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, benzimidazolilo, tiadiazoilo, benzopiranilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, furilo, tetrahidrofurilo, tetrahidropiranilo, tienilo, benzotienilo, tiamorfolinilo, tiamorfolinilo sulfóxido, tiamorfolinilo sulfona, y oxadiazolilo . Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula I (en forma de productos dispersables o solubles en aceite o en agua) , incluyen las sales no tóxicas convencionales o las sales de amonio cuaternarias que se forman, por ejemplo, a partir de ácidos o bases orgánicos o inorgánicos. Los ejemplos de tales sales de adición ácida incluyen acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, bencensulfonato, , bisulfato, butirato, citrato, canforato, canforsulfonato, ciclopentenpropionato, dicgluconato, dodecilsulfato, etansulfonato, fumarato, glucoheptanoato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, clorohidrato, bromohidrato, yodohidrato, 2- hidroxietansulfonato, lactato, maleato, metansulfonato, 2- naftalensulfonato, nicotinato, oxalato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropianato, picrato, pivalato, propianato, succinato, tartrato, tiocianato, tosilato, y undecanoato. Las sales de base incluyen sales de amonio, sales de metal alcalino, tales como sales de sodio y potasio, sales de metal alcalinotérreo tales como sales de calcio y magnesio, sales con bases orgánicas tales como sales de diciclo exilamina, N- metil-D-glucamina, y sales con aminoácidos tales como arginina, lisina y así sucesivamente. También los grupos que contienen nitrógeno básico se pueden cuaternizar con agentes tales como haluros de alquilo inferiores tales como cloruros, bromuros y yoduros de metilo, etilo, propilo, y butilo; sulfatos de dialquilo, como sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo, y diamilo haluros de cadena larga tales como cloruros, bromuros, y yoduros de decilo, laurilo, miristilo, y estearilo, haluros de aralquilo, como bromuros de bencilo y fenetilo y otros. Otras sales farmacéuticamente aceptables incluyen las sales de etanolato y sulfato.
En un aspecto, este método de tratamiento puede usarse cuando el padecimiento es la enfermedad de Alzheimer. En otro aspecto, este método de tratamiento puede ayudar a prevenir o retrasar el inicio de la enfermedad de Alzheimer. En otro aspecto, este método de tratamiento puede ayudar a retrasar el progreso de la enfermedad de Alzheimer. En otro aspecto, este método de tratamiento puede usarse cuando la enfermedad es el deterioro cognoscitivo moderado. En otro aspecto, este método de tratamiento puede usarse cuando la enfermedad es el síndrome de Down. En otro aspecto, este método de tratamiento puede usarse cuando el padecimiento es hemorragia cerebral hereditaria con Amiloidosis del tipo Dutch. En otro aspecto, este método de tratamiento puede usarse cuando la enfermedad es angiopatía amiloide cerebral . En otro aspecto, este método de tratamiento puede usarse cuando la enfermedad es una demencia degenerativa. En otro aspecto, este método de tratamiento puede usarse cuando la enfermedad es la enfermedad de Alzheimer del tipo cuerpo de Lewis difusa. En otro aspecto, este método de tratamiento puede tratar una enfermedad existente, tal como aquellas enlistadas arriba . En otro aspecto, este método de tratamiento puede prevenir una enfermedad, tal como aquellas enlistadas arriba, desde su desarrollo o progreso. Los métodos de la invención emplean cantidades terapéuticamente efectivas: para la administración oral desde aproximadamente 0.1 mg/día hasta aproximadamente 1,000 mg/día; para la administración parenteral, sublingual, intranasal, intratecal desde aproximadamente 0.5 hasta aproximadamente 100 mg/día; para la administración de depósito e implantes desde aproximadamente 0.5 mg/día hasta aproximadamente 50 mg/día; para la administración tópica, desde aproximadamente 0.5 mg/día hasta aproximadamente 200 mg/día; para la administración rectal desde aproximadamente 0.5 mg hasta aproximadamente 500 mg. En un aspecto preferido, las cantidades terapéuticamente efectivas para la administración oral es desde alrededor de 1 mg/día hasta alrededor de 100 mg/día; y para la administración parenteral desde alrededor de 5 hasta alrededor de 50 mg diarios. En un aspecto más preferido, las cantidades terapéuticamente efectivas para la administración oral es desde alrededor de 5 mg/día hasta alrededor de 50 mg/día. La presente invención incluye también el uso de un compuesto de la fórmula (I) , o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para usarse en el tratamiento de un paciente que tiene, o para prevenir que un paciente desarrolle, una enfermedad o condición seleccionada del grupo que consiste de la enfermedad de Alzheimer, para ayudar a prevenir o retrasar el ataque de la enfermedad de Alzheimer, para tratar a pacientes con el deterioro cognoscitivo moderado (MCI) y prevenir o retrasar el ataque de la enfermedad de Alzheimer en aquellos en quienes progresaría desde MCI hasta AD, para tratar el síndrome de Down, para tratar humanos que tienen hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis del tipo Dutch, para tratar angiopatía amiloide cerebral y prevenir sus consecuencias potenciales, es decir, hemorragias lobares recurrentes y simples, para tratar otras demencias degenerativas, que incluyen demencias de origen degenerativo y vascular mezcladas, demencia asociada con el mal de Parkinson, demencia frontotemporal con parkinsonismo (FTDP) , demencia asociada con la parálisis supranuclear progresiva, demencia asociada con la degeneración basal cortical, enfermedad de Alzheimer del tipo cuerpo Lewy difusa, y quien necesita de tal tratamiento. En un aspecto, este uso de un compuesto de la fórmula (I) puede emplearse donde el padecimiento es la enfermedad de Alzheimer. En otro aspecto, este uso de un compuesto de la fórmula (I) puede ayudar a prevenir o retrasar el inicio de la enfermedad de Alzheimer.
En otro aspecto, este uso del compuesto de la fórmula (I) puede ayudar a retardar el progreso de la enfermedad de Alzheimer . En otro aspecto, este uso de un compuesto de la fórmula (I) puede emplearse cuando la enfermedad es un deterioro cognoscitivo moderado. En otro aspecto, este uso de un compuesto de la fórmula (I) puede emplearse cuando la enfermedad es el síndrome de Down. En otro aspecto, este uso de un compuesto de la fórmula (I) puede emplearse cuando la enfermedad es una hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis del tipo Dutch. En otro aspecto, este uso de un compuesto de la fórmula (I) puede emplearse donde la enfermedad es angiopatía amiloide cerebral. En otro aspecto, este uso de un compuesto de la fórmula (I) puede emplearse donde la enfermedad es demencia degenerativa . En otro aspecto, este uso de un compuesto de la fórmula (I) puede emplearse cuando el padecimiento es la enfermedad de Alzheimer del tipo cuerpo Lewy difusa. En un aspecto preferido, este uso de un compuesto de la fórmula (I) es una sal farmacéuticantente aceptable seleccionada del grupo que consiste de ácidos clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, nítrico, sulfúrico, fosfórico, cítrico, metansulfónico, CH3- (CH2) n-COOH en donde n es 0 hasta 4, HOOC- (CH2) n-COOH, donde n es como el definido arriba, HOOC-CH=CH-COOH, y fenil-COOH. En otro aspecto preferido de la invención, el sujeto o paciente preferiblemente es un sujeto o paciente humano. La presente invención incluye también métodos para inhibir la actividad beta-secretasa, para inhibir el desdoblamiento de la proteina precursora amiloide (APP) , en una mezcla de reacción, en un sitio entre Met596 y Asp597, numerada para el isotipo del aminoácido APP-695, o un sitio correspondiente de un isotipo o mutante del mismo; para inhibir la producción del péptido beta amiloide (A beta) en una célula; para inhibir la producción de la placa beta- amiloide en un animal; y para tratar o prevenir una enfermedad caracterizada por depósitos beta-amiloides en el cerebro. Cada uno de estos métodos incluyen la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula (I) , o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma . La presente invención también incluye un método para inhibir la actividad de la beta secretasa, que incluye exponer la beta-secretasa a una cantidad inhibidora efectiva de un compuesto de la fórmula (I) , o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma. En un aspecto, este método incluye exponer la beta- secretasa al compuesto in vi tro. En otro aspecto, este método incluye exponer la beta- secretasa al compuesto en una célula. En otro aspecto, este método incluye exponer la beta- secretasa al compuesto en una célula, en un animal. En otro aspecto, este método incluye exponer la beta- secretasa al compuesto en un humano. La presente invención incluye también un método para inhibir el desdoblamiento de la proteína precursora amiloide (APP) , en una mezcla de la reacción, en un sitio entre la Met596 y Asp597, numerada para el isotipo APP-695 del aminoácido; o un sitio correspondiente de un isotipo o mutante de los mismos, que incluye exponer la mezcla de reacción a una cantidad inhibidora efectiva de un compuesto de la fórmula (I) , o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma. En un aspecto, este método emplea un sitio de desdoblamiento: entre el Met652 y el Asp653, numerado para el isotipo APP-751; entre el Met 671 y el Asp 672, numerado para el isotipo APP-770; entre el Leu596 y el Asp597 de la mutación Sueca APP-695; entre el Leu652 y el Asp653 de la mutación Sueca APP-751; o entre el Leu671 y el Asp672 de la mutación Sueca APP-770. En otro aspecto, este método expone la mezcla de reacción in vi tro.
En otro aspecto, este método expone la mezcla de reacción en una célula. En otro aspecto, este método expone la mezcla de reacción en una célula animal . En otro aspecto, este método expone la mezcla de reacción en una célula humana. La presente invención también incluye un método para inhibir la producción del péptido beta amiloide (beta A) en una célula, que incluye administrar a la célula una cantidad inhibidora efectiva de un compuesto de la fórmula (I) , o una sal f rmacéuticamente aceptable de la misma. En una modalidad, este método incluye administrar a un animal . En una modalidad, este método incluye administrar a un humano . La presente invención también incluye un método para inhibir la producción de la placa beta-amiloide en un animal, que incluye administrar al animal una cantidad inhibidora efectiva de un compuesto de la fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma. En una modalidad de este aspecto, este método incluye administrar a un humano. La presente invención también incluye un método para tratar o prevenir una enfermedad caracterizada por depósitos beta-amiloides en el cerebro, que incluye administrar a un paciente, una cantidad terapéutica efectiva de un compuesto de la fórmula (I) , o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma. En un aspecto, este método emplea un compuesto en una cantidad terapéutica en el rango de desde alrededor de 0.1 hasta alrededor de 1000 mg/dla. En otro aspecto, este método emplea un compuesto en una cantidad terapéutica en el rango desde alrededor de 15 hasta alrededor de 1500 mg/día. En otro aspecto, este método emplea un compuesto en una cantidad terapéutica en el rango desde alrededor de 1 hasta alrededor de 100 mg/día. En otro aspecto, este método emplea un compuesto en un cantidad terapéutica en el rango desde alrededor de 5 hasta alrededor de 50 mg/día. En otro aspecto, este método puede usarse cuando la enfermedad es la enfermedad de Alzheimer. En otro aspecto, este método puede usarse cuando la enfermedad es un deterioro cognoscitivo moderado, síndrome de Down o hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis del tipo Dutch. La presente invención también incluye una composición que incluye beta-secretasa que forma complejos con un compuesto de la fórmula (I) , o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.
En una modalidad, este kit del recipiente incluye cada uno, un recipiente adaptado para el suministro parenteral e incluye un producto de depósito, jeringa, ampolleta, o vial. En una modalidad, este kit del recipiente incluye cada uno un recipiente adaptado para el suministro tópico e incluye un parche, almohadilla medicada, ungüento o crema. La presente invención incluye también, un kit agente que incluye un compuesto de la fórmula (I) , o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma; y uno o más agentes terapéuticos seleccionados del grupo que consiste de un antioxidante, un anti - inflamatorio , un inhibidor de la gamma secretasa, un agente neurotrófico, un inhibidor de acetil colinestarasa, una estatina, un péptido A beta y un anticuerpo anti A beta. La invención proporciona compuestos, composiciones, kits, y métodos para inhibir el desdoblamiento mediado por la beta-secretasa de la proteína precursora amiloide (APP) . Más particularmente, los compuestos, composiciones, y métodos de la invención son efectivos para inhibir la producción del péptido A-beta y para tratar o prevenir cualquier padecimiento veterinario o humano, o condición asociada con una forma patológica del péptido A-beta. Los compuestos, composiciones, y métodos de la invención son útiles para tratar humanos que tienen la enfermedad de Alzheimer (AD) , para ayudar a prevenir o retrasar el ataque de AD, para tratar a pacientes con deterioro cognoscitivo moderado (MCI) , y prevenir o retrasar el ataque de AD en aquellos pacientes quienes de otra manera esperarían el avance de MCI a AD, para tratar el síndrome de Down, para tratar la hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis del tipo Dutch, para tratar la angiopatía beta-amiloide y prevenir sus consecuencias potenciales tales como hemorragias lobares recurrentes y simples, para tratar otras demencias degenerativas, que incluye demencias de origen degenerativo y vascular mezcladas, para tratar la demencia asociada con el mal de Parkinson, demencias frontotemporales con parkisonismo (FTDP) , demencia asociada con la parálisis supranuclear progresiva, demencia asociada con la degeneración basal cortical, y la AD del tipo cuerpo Lewy difusa Los compuestos de la invención poseen actividad inhibidora de la beta-secretasa . Las actividades inhibidoras de los compuestos de la invención se demuestran fácilmente, por ejemplo, usando uno o más de los ensayos descritos aquí o conocidos en la técnica. Los compuestos de la fórmula (I) pueden formar sales cuando reaccionan con ácidos. Las sales farmacéuticamente aceptables se prefieren generalmente sobre los compuestos correspondientes de la fórmula (I) puesto que producen frecuentemente compuestos que son usualmente más solubles al agua, estables y/o más cristalinos. Las sales farmacéuticamente aceptables son cualquier sal que retiene la actividad del compuesto precursor y no imparte ningún efecto indeseable o nocivo en el sujeto al que se administra, y en el contexto en el cual se administra. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales de adición ácidas de ácidos tanto inorgánicos como orgánicos .
Métodos de la Invención Los compuestos de la invención, y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, son útiles para tratar humanos y animales que padecen de una condición caracterizada por una forma patológica de péptido beta- amiloide, tal como las placas beta-amiloides , y para ayudar a prevenir o para retrasar el ataque de tal condición. Por ejemplo, los compuestos son útiles para tratar la enfermedad de Alzheimer, para ayudar a prevenir o retrasar el ataque de la enfermedad de Alzheimer, para tratar pacientes con MCI (deterioro cognoscitivo moderado) y para prevenir o retrasar el ataque de la enfermedad de Alzheimer en aquellos que progresarían de MCI hasta AD, para tratar el síndrome de Down, para tratar humanos que tienen hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis del tipo Dutch, para tratar angiopatía amiloide cerebral y prevenir sus consecuencias potenciales, es decir, hemorragias lobares recurrentes y simples, para tratar otras demencias degenerativas, que incluyen demencias de origen degenerativo y vascular mezcladas, demencia asociada con el mal de Parkinson, demencias ototemporales con parkisonismo (FTDP) , demencia asociada con la parálisis supranuclear progresiva, demencia asociada con la degeneración basal cortical, y la enfermedad de Alzheimer tipo cuerpo Lewy difusa. Los compuestos y composiciones de la invención son particularmente útiles para tratar o prevenir la enfermedad de Alzheimer. Cuando se tratan o previenen estas enfermedades, los compuestos de la invención pueden ser usados ya sea individualmente o en combinación, como sea mejor para el paciente. Con respecto a estas enfermedades, el término "tratamiento" significa que los compuestos de la invención pueden usarse en humanos en los que existe la enfermedad. Los compuestos de la invención no necesariamente curan al sujeto que tiene la enfermedad, pero retrasarán o disminuirán el progreso o previene un progreso adicional de la enfermedad, proporcionando de este modo un periodo de vida más útil al individuo . El término "prevenir" significa que si los compuestos de la invención se administran a aquellos que no tienen la enfermedad, pero de quién normalmente se esperaría desarrolle la enfermedad o está en peligro de enfermarse, no desarrollarían la enfermedad. Además, "prevenir" también incluye retardar el desarrollo de la enfermedad en un individuo que últimamente desarrolló la enfermedad o estaría en riesgo de la enfermedad debido a la edad, antecedentes familiares, anormalidades cromosomales o genéticas, y/o debido a la presencia de uno o más marcadores biológicos de la enfermedad, tales como la mutación genética conocida de la APP o los productos de desdoblamiento de la APP en tejidos o fluidos cerebrales. Por retardo del inicio de la enfermedad, los compuestos de la invención previenen que el individuo adquiera la enfermedad durante el periodo en el cual el individuo normalmente adquiriría la enfermedad, o reduce la relación de desarrollo de la enfermedad o alguno de sus efectos pero por la administración de los compuestos de al invención al momento que el individuo adquiere últimamente la enfermedad. La prevención también incluye la administración de los compuestos de la invención a aquellos individuos que están predispuestos a la enfermedad. En un aspecto preferido, los compuestos de la invención son útiles para disminuir el progreso de los síntomas de la enfermedad. En otro aspecto preferido, los compuestos de la invención son útiles para prevenir el progreso adicional de los síntomas de la enfermedad. En el tratamiento o prevención de las enfermedades de arriba, los compuestos de la invención se administran en una cantidad terapéuticamente efectiva. La cantidad terapéuticamente efectiva variará dependiendo del compuesto particular usado y la vía de administración, como se conoce por aquellos expertos en la técnica. En el tratamiento de un paciente que muestra cualquiera de las condiciones diagnosticadas arriba, un médico puede administrar un compuesto de la invención inmediatamente y continuar con la administración indefinidamente, como sea necesario. En el tratamiento a pacientes a los cuales no se ha diagnosticado la enfermedad de Alzheimer, pero que se creé tengan un riesgo sustancial para la enfermedad de Alzheimer, el médico deberá iniciar preferiblemente el tratamiento cuando el paciente experimente los primeros síntomas pre- Alzheimer tales como, problemas cognoscitivos o de memoria asociados con la edad. Además, existen algunos pacientes a quienes pueden determinarse tengan el riesgo de desarrollar Alzheimer a través de la detección de un marcador genético tal como AP0E4 u otros indicadores biológicos que son predictivos para la enfermedad de Alzheimer. En estas situaciones, aún a pesar de que el paciente no tiene síntomas de la enfermedad, la administración de los compuestos de la invención puede iniciarse antes que los síntomas se presenten, y el tratamiento puede continuarse indefinidamente para prevenir o retardar el ataque o inicio del padecimiento.
Cantidades y Forma de la Dosis Los compuestos de la invención pueden administrarse oralmente, parenteralmente, (IV, IM, depo-IM, SQ y depo SQ) , sublingualmente, intranasalmente (inhalación) , intratecalmente, tópicamente o rectalmente. Las formas de dosificación conocidas por aquellos expertos en la técnica son adecuadas para suministrar los compusstos de la invención . Se proporcionan composiciones que contienen cantidades terapéuticamente efectivas de los compuestos de la invención. Los compuestos están formulados preferiblemente dentro de preparaciones farmacéuticas tales como tabletas, cápsulas, o elíxires, para la administración oral o en soluciones estériles o suspensiones para la administración parenteral . Típicamente, los compuestos descritos arriba, están formulados dentro de composiciones f rmacéuticas usando técnicas y procedimientos bien conocidos en la técnica. Aproximadamente de 1 a 500 mg de un compuesto o mezcla de compuestos de la invención, o sal o éster farmacéuticamente aceptable está compuesto con un vehículo, portador, excipiente, aglutinante, conservador, estabilizador, saborizante, etc., fisiológicamente aceptable, en una forma de dosificación unitaria como se llama en la práctica farmacéutica aceptada. La cantidad de sustancia activa en aquellas composiciones o preparaciones es tal, que se obtiene una dosis adecuada en el rango. Las composiciones se formulan preferiblemente en una forma de dosificación unitaria, cada dosis contiene desde aproximadamente 2 hasta aproximadamente 100 mg, más preferiblemente desde aproximadamente 10 hasta aproximadamente 30mg del ingrediente activo. El término "forma de dosificación unitaria" se refiere a unidades físicamente discretas, adecuadas como dosis unitarias para sujetos humanos u otros mamíferos, cada unidad contiene una cantidad predeterminada de material activo calculado para producir el efecto terapéutico deseado, en asociación con un excipiente farmacéutico adecuado. Para preparar las composiciones, uno o más compuestos de la invención se mezclan con un portador farmacéuticamente aceptable. Luego de mezclar o añadir los compuestos, la mezcla resultante puede ser una solución, suspensión, emulsión, o similares. Las suspensiones lipoaomales pueden también, ser adecuadas como portadores farmacéuticamente aceptables. Estos pueden prepararse de acuerdo a los métodos conocidos por aquellos expertos en la técnica. La forma de la mezcla resultante depende de un número de factores, que incluye el modo propuesto de administración y la solubilidad del compuesto en el vehículo o portador seleccionado. La concentración efectiva es suficiente para disminuir o mejorar al menos un síntoma de la enfermedad, desorden o condición tratada y que puede determinarse empíricamente.
Los portadores farmacéuticos o vehículos adecuados para la administración de los compuestos proporcionados aquí, incluyen cualquiera de tales portadores conocidos por aquellos expertos en la técnica, adecuados para el modo particular de administración. Además, los materiales activos pueden también, mezclarse con otros materiales activos que no perjudican la acción deseada, o con materiales que complementan la acción deseada o que tienen otra acción. Los compuestos pueden formularse como el ingrediente farmacéuticamente activo exclusivo en la composición o pueden combinarse con otros ingredientes activos. Donde los compuestos exhiben una solubilidad insuficiente, pueden usarse los métodos de solubilización. Tales métodos son conocidos e incluyen, pero no se limitan a, usar cosolventes tales como dimetilsulfóxido (DMSO) que usan tensoactivos tales como Tween®, y una disolución en bicarbonato de sodio acuoso. Los derivados de los compuestos, tales como sales o profármacos pueden también ser usados para formular composiciones farmacéuticas efectivas. La concentración del compuesto es efectiva para suministrar una cantidad luego de la administración que disminuye o mejora al menos un síntoma del padecimiento para el cual el compuesto se administra. Típicamente, las composiciones son formuladas para la administración de una dosis simple.
Los compuestos de la invención pueden prepararse con portadores que los protegen contra la eliminación rápida del cuerpo, tales como las formulaciones o revestimientos de liberación en el tiempo. Tales portadores incluyen formulaciones de liberación controlada, tales como, pero que no se limitan a, sistemas de suministro microencapsulados . El compuesto activo se incluye en el portador farmacéuticamente aceptable, en una cantidad suficiente para ejercer un efecto terapéuticamente útil en ausencia de efectos secundarios indeseables en el paciente tratado. La concentración terapéuticamente efectiva puede determinarse empíricamente, probando los compuestos en sistemas modelo in vi tro e in vivo conocidos, para el tratamiento de el trastorno tratado. Los compuestos y composiciones de la invención pueden incluirse en recipientes de dosis simple múltiple. Las composiciones y compuestos incluidos pueden ser proporcionados, por ejemplo, en kits, que incluyen partes componentes que pueden ensamblarse para su uso, Por ejemplo, un compuesto inhibidor en forma liofilizada y un diluyente adecuado puede ser proporcionado como componentes separados para combinarse previo a su uso. Un kit puede incluir un compuesto inhibidor y un agente terapéutico secundario para la co-administración. El agente terapéutico secundario e inhibidor puede ser proporcionado como parteis del componente por separado. Un kit puede incluir una pluralidad de recipientes, cada recipiente contiene una o nás dosis del compuesto de la invención. Los recipientes se adaptan preferentemente al modo deseado de administración, que incluye, pero no se limita a tabletas, cápsulas de gel, cápsulas de liberación sostenida, y similares para la administración oral; productos de depósito, jeringas previamente llenadas, ampolletas, viales, y similares para la administración parenteral; y parches, almohadillas medicadas, cremas, y similares para la administración tópica. La concentración del compuesto activo en la composición del fármaco dependerá de la proporción de absorción, inactivación, y excreción del compuesto activo, la lista o cuadro de dosis y la cantidad administrada así como de otros factores conocidos por aquellos expertos en la técnica. El ingrediente activo puede ser administrado una vez, o puede dividirse en un número de dosis más pequeñas para ser administradas en intervalos de tiempo. Se entiende que la dosis precisa y la duración del tratamiento es una función del padecimiento que se trata, y puede ser determinado empíricamente usando protocolos de prueba conocidos, o mediante la extrapolación de los datos probados in vivo o ín vitro. Se notará que las concentraciones y los valores de las dosis pueden variar también con la severidad de la condición que va a ser aliviada. Se entiende además que para cualquier sujeto particular, el régimen de dosis particular deberá ajustarse durante el tiempo, de acuerdo a la necesidad individual y el criterio de la persona que administra o supervisa la administración de las composiciones, y que los rangos de concentración establecidos aquí, son solamente ejemplos y no pretenden limitar el alcance o práctica de las composiciones reivindicadas. Si se desea la administración oral, el conpuesto deberá proporcionarse en una composición que la proteja del ambiente ácido del estómago. Por ejemplo, la composición puede estar formulada de un revestimiento entérico que mantiene su integridad en el estómago y libera el compuesto activo en el intestino. La composición también puede ser formulada en combinación con un antiácido u otro ingrediente. Las composiciones orales incluirán generalmente un diluyente inerte o un portador comestible y puede estar comprimido dentro de tabletas o incluido en cápsulas de gelatina. Para el propósito de la administración terapéutica, el compuesto o compuestos activos pueden estar incorporados con excipientes y usarse en la forma de tabletas, cápsulas, o pastillas. Los materiales adyuvantes y agentes de enlace farmacéuticamente compatibles pueden estar incluidos como parte de la composición. Las tabletas, pildoras, cápsulas, pastillas, y similares pueden contener cualquiera de los siguientes ingredientes o compuestos de una naturaleza similar: un aglutinante tales como, pero que no se limitan a, goma de tragacanto, acacia, almidón de maíz, o gelatina; un excipiente tal como celulosa microcristalina, almidón o lactosa; un agente desintegrante tal como, pero que no se limita a, ácido algínico y almidón de maíz; un lubricante tal como, pero que no se limita a, estearato de magnesio; un agente mejorador de flujo, tal como, pero que no se limita a, dióxido de silicio coloidal; un agente edulcorante tal como la sacarosa o sacarina; y un agente saborizante tal como una pastilla de menta, salicilato de metilo, o saborizante de frutas. Cuando la forma de dosificación unitaria es una cápsula, ésta puede contener además del material del tipo anterior, un portador líquido tal como un aceite graso. Además, las formas de dosificación unitarias pueden contener otros materiales, que modifican la forma física de la dosis unitaria, por ejemplo, revestimientos de azúcar y otros agentes entéricos. Los compuestos pueden también administrarse como un componente de un elíxir, suspensión, jarabe, barquillo, goma de mascar o similares. Un jarabe puede contener, además de los compuestos activos, sacarosa como un agente edulcorante y ciertos conservadores, tinturas, colorantes y saborizantes . Los materiales activos también pueden mezclarse con otros materiales activos que no perjudican la acción deseada, o con materiales que complementan la acción deseada. Las soluciones o suspensiones usadas paira la aplicación parenteral, intradermal, subcutánea o tópica puede incluir cualquiera de los siguientes componentes: un diluyente estéril tal como agua para la inyección, solución salina, aceite fijo, un aceite vegetal tal como el aceite de ajonjolí, aceite de coco, aceite de cacahuate, aceite de semilla de algodón, y similares, que se presentan naturalmente, o un vehículo de grasa sintético tal como el oleato de etilo, y similares, polietilen gliccl, glicerina, propilen glicol, u otro solvente sintético; agentes antimicrobianos tales como alcohol bencílico y parabenos de metilo; antioxidantes tales como ácido ascórbico y bisulfuro de sodio; agentes quelantes tales como el ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) ; amortiguadores tales como acetatos, citratos, y fosfatos; y agentes para el ajuste de tonicidad tales como cloruro de sodio y la dextrosa. Las preparaciones parenterales pueden ser incluidas en ampolletas, jeringas desechables, o frascos de dosis múltiples hechas de vidrio, plástico, u otros materiales adecuados. Los amortiguadores, conservadores, antioxidantes, y similares pueden incorporarse como se requiera. Cuando los portadores adecuados se administran intravenosamente, incluyen soluciones salinas, soluciones salinas amortiguadas con fosfato (PBS) , y soluciones que contienen agentes espesantes y solubilizantes tales como la glucosa, polietilen glicol, polipropilenglicol , y mezclas de Los compuestos de la invención pueden administrarse entéricamente o parenteralmente . Cuando se administran oralmente, los compuestos de la invención pueden administrase en formas de dosificación usual para la administración oral, como se conoce por aquellos expertos en la técnica. Estas formas de dosificación incluyen formas de dosificación unitaria sólidas usuales de tabletas y cápsulas, así como también, formas de dosis líquida tales como las soluciones, suspensiones, y elíxires. Cuando se usan formas de dosificación sólida, se prefiere que estas sean del tipo de liberación sostenida de manera que los compuestos de la invención necesitan ser administrados solamente una o dos veces diariamente. Las formas de dosificación oral se administran al paciente 1, 2, 3, ó 4 veces al día. Se prefiere que los compuestos de la invención se administren ya sea tres o menos veces, más preferiblemente, una o dos veces diariamente. Por lo tanto, se prefiere que los compuestos de la invención se administren en forma de dosis oral. Se prefiere que cualquiera que sea la forma de dosis que se use, ésta esté diseñada de manera que proteja los compuestos de la invención y el ambiente ácido del estómago. Las tabletas revestidas entéricas son bien conocidas por aquellos expertos en la técnica. Además, las cápsulas llenas con esferas pequeñas cada una de las cuales revestidas para proteger de la acidez estomacal, son bien conocidas por aquellos expertos en la técnica . Cuando se administra oralmente, una cantidad terapéuticamente efectiva administrada, para inhibir la actividad de la beta secretase, para inhibir una producción de A beta, para inhibir una deposición de A beta, o para tratar o prevenir la AD que es desde alrededor de 0.1 mg/día hasta alrededor de 1, 000 mg/día. Se prefiere que la dosis oral sea desde alrededor de 1 mg/día hasta alrededor de 100 mg/día. Se prefiere más que la dosis oral sea desde alrededor de 5 mg/día hasta alrededor de 50 mg/día. Se entiende que un paciente puede ser iniciado con una dosis diaria, que puede variar con el tiempo conforme a los cambios y a la condición del paciente. Los compuestos de la invención también pueden ser suministrados ventajosamente en una formulación de dispersión nano cristalina. La preparación de tales formulaciones se describe, por ejemplo, en la patente E.U.A. No. 5,145,684. Las dispersiones nano cristalinas de inhibidores de la proteasa del VIH y su método de uso son descritos en la patente E.U.A No. 6,045,829. Las formulaciones nano cristalinas ofrecen típicamente una mayor biodisponibilidad de compuestos f rmacos . Los compuestos de la invención pueden ser administrados parenteralmente , por ejemplo, mediante IV, IM, depo-ISM, SC, o depo-SC. Cuando se administran parenteralmente, debe suministrarse una cantidad terapéuticamente efectiva desde alrededor de 0.5 hasta alrededor de 100 mg/día, preferiblemente desde alrededor de 5 hasta alrededor de 50 mg diariamente. Cuando se usa una formulación de depósito para inyectarse una vez al mes o una vez cada dos semanas, la dosis deberá ser de alrededor de 0.5 mg/día hasta alrededor de 50 mg/día, o una dosis mensual de alrededor de 15 mg hasta alrededor de 1,500 mg. En parte debido al olvido de los pacientes con la enfermedad de Alzheimer, se prefiere que la forma de dosis parenteral sea una formulación de depósito. Los compuestos de la invención pueden administrarse sublingualmente . Cuando se suministran sublingualmente, los compuestos de la invención deberán darse una o cuatro veces diariamente en las cantidades descritas de arriba para la administración de IM. Los compuestos de la invención pueden administrarse intranasalmente . Cuando se dan mediante esta ruta, las formas de dosis apropiada son, un rocío nasal o polvo seco, como se conoce por aquellos expertos , en la técnica. La dosis de los compuestos de la invención para la administración intranasal es la cantidad descrita arriba para la administración de IM. Los compuestos de la invención pueden ser administrados intratecalmente . Cuando se dan por esta ruta, la forma de dosis apropiada puede ser una forma de dosis parenteral como se conoce por aquellos expertos en la técnica. La dosis de los compuestos de la invención para la administración intratecal es la cantidad descrita arriba para la administración IM. Los compuestos de la invención pueden ser administrados tópicamente. Cuando se dan por esta ruta, la forma de dosis apropiada es una crema, ungüento, o parche. Debido a la cantidad de los compuestos de la invención que van a ser administrados, se prefiere el parche. Cuando se administra tópicamente, la dosis es desde alrededor de 0.5 mg/día hasta alrededor de 200 mg/día. Debido a que la cantidad que puede ser suministrada por un parche es limitada, pueden usarse dos o más parches . El número y tamaño del parche no es importante, lo que es importante es que una cantidad terapéuticamente efectiva de los compuestos de la invención son suministrados como se conoce por aquellos expertos en la técnica. Los compuestos de la invención pueden ser administrados rectalmente mediante supositorios como se conoce por aquellos expertos en la técnica. Cuando se administra mediante supositorios, la cantidad terapéuticamente efectiva es desde alrededor de 0.5 mg hasta alrededor de 500 mg. Los compuestos de la invención pueden administrarse mediante implantes como se conoce por aquellos expertos en la técnica. Cuando se administra un compuesto de la invención mediante un implante, la cantidad terapéuticamente efectiva es la cantidad descrita arriba para la administración de depósito . La invención aquí son los nuevos compuestos de la invención y nuevos métodos para usar los compuestos de la invención. Dado un compuesto en particular de la invención, y una forma de dosis deseada, un experto en la técnica conocería como preparar y administrar la forma de dosis apropiada . Los compuestos de la invención son usados de la misma manera, mediante la misma vía de administración, usando las mismas formas de dosificación farmacéutica, y el mismo cuadro de dosis como se describe arriba, para prevenir el padecimiento o para tratar a pacientes con MCI (deterioro cognoscitivo moderado) y prevenir o retrasar el ataque de la enfermedad de Alzheimer en aquellos en quienes progresaría desde el MCI hasta la AD, para tratar o prevenir el síndrome de Down, para tratar humanos que tienen hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis del tipo Dutch, para tratar angiopatía amiloide cerebral y prevenir sus consecuencias potenciales, es decir, hemorragias lobares recurrentes y simples, para tratar otras demencias degenerativas, que incluyen demencias de origen degenerativo y vascular mezcladas, demencia asociada con el mal de Parkinson, demencias frontotemporales con parkinsonismo (FTDP) , demencia asociada con la parálisis supranuclear, demencia asociada con la degeneración basal cortical, y la enfermedad de Alzheimer del tipo cuerpo Lewy disfusa. Los compuestos de la invención pueden usarse en combinación, entre sí o con otros agentes terapéuticos o metodologías usadas para tratar o prevenir las condiciones listadas arriba. Tales agentes incluyen inhibidores de la gamma-secretasa; vacunas anti-amiloides y agentes farmacéuticos tales como clorohidrato de donepezil (tabletas A ICEPT) , clorohidrato de tacrina (cápsulas COGNEX) u otros inhibidores de la acetilcolina esterasa y con agentes directos o indirectos neurotrópicos del futuro. Además, los compuestos de la fórmula (I) pueden también ser usados con inhibidores de la P-glicoproteír.a (P-gp) . Los inhibidores de P-gp y el uso de tales compuestos son conocidos por aquellos expertos en la técnica. Ver por ejemplo, Cáncer Research, 53, 4595-4S02 (1993), Clin. Cáncer Res., 2, 7-12 (199S) , Cáncer Research, 56, 4171-4179 (1996), las publicaciones internacionales WO99/64001 y WOOl/10387. La cuestión importante es que el nivel sanguíneo del inhibidor P-gp es tal, que éste ejerce su efecto al inhibir la P-gp para disminuir los niveles sanguíneos del cerebro de los compuestos de la invención. Para ese fin, el inhibidor P-gp y los compuestos de la invención, pueden ser administrados al mismo tiempo, mediante la misma vía de administración o diferente, o en diferentes tiempos. Lo importante no es el tiempo de administración sino que tenga un nivel sanguíneo efectivo del inhibidor P-gp. Los inhibidores de P-gp adecuados incluyen ciclosporina A, verapamil, tamoxifeno, quinidina, Vitamina E-TGPS, ritonavir, acetato de megestrol, progesterona, rapamicina, 10 , 11 -metanodibenzosuberano, fenotiazinas , derivados de acridina tales como GF120918, FK506, VX-710, LY335979, PSC- 833, GF-102,918 y otros esteroides. Se entiende que los agente adicionales encontrarán que tienen la misma función y se consideran también por aer útiles. Los inhibidores de P-gp pueden administrarse oralmente, parenteralmente, (IV, IM, IM-depo, SQ; SQ-depo) , tópicamente, sublingualmente , rectalmente, intranaaalmente, intratecalmente y mediante implantes. La cantidad terapéuticamente efectiva de los inhibidores de P-gp es desde aproximadamente 0.1 hasta aproximadamente 300 mg/kg/día, preferiblemente aproximadamente de 0.1 hasta aproximadamente 150 mg/kg diarios. Se entiende que mientras un paciente puede iniciarse con una dosis, esa dosis puede variar durante el tiempo conforme a los cambios en la condición del paciente. Cuando se administra oralmente, los inhibidores de P-gp pueden administrase en formas de dosis usuales, para la administración oral como se conoce por aquellos expertos en la técnica. Estas formas de dosificación incluyen las formas de dosificación unitaria sólida usual de tabletas y cápsulas, así como las formas de dosificación líquida tales como las soluciones, suspensiones y elíxires. Cuando se usan las formas de dosificación, se prefiere que estas sean del tipo de liberación sostenida de manera que los inhibidores de P-gp necesitan ser administrados solamente una o dos veces diariamente. Las formas de dosificación oral se administran al paciente una a cuatro veces al día. Se prefiere que los inhibidores de P-gp sean administrados ya sea, tres o menos veces al día, más preferiblemente una vez o dos veces diariamente. Por lo tanto, se prefiere que los inhibidores de P-gp se administren en forma de dosis sólida, y además, se prefiere que la forma de dosis sólida sea una forma de liberación sostenida que permita una dosificación de una o dos veces al día. Se prefiere que cualquiera que sea la forma de dosis, esté diseñada de manera que proteja a los inhibidores de P-gp del ambiente ácido del estómago. Las tabletas revestidas entéricas son bien conocidas por aquellos expertos en la técnica. Además, las cápsulas que se llenan con esferas pequeñas revestidas cada una de ellas revestidas para proteger al estomago de la acidez, también son bien conocidas por aquellos expertos en la técnica. Además, los inhibidores de P-gp pueden administrarse parenteralmente . Cuando se administra parenteralmente , pueden ser administrados por IV, IM, depo-IM, SQ o depo-SQ. Los inhibidores de P-gp pueden darse sublingualmente . Cuando se dan sublingualmente, los inhibidores de P-gp deberán Ber dados de una a cuatro veces diariamente en la misma cantidad como para la administración IM. Los inhibidores de P-gp pueden ser dados intranasalmente . Cuando se dan mediante esta vía de administración, las forma de dosis apropiadas son, un rocío nasal o polvo seco como se conoce por aquellos expertos en la técnica. La dosis de los inhibidores P-gp para la administración intranasal es la misma que para la administración IM. Los inhibidores de P-gp pueden ser dados intratecalmente . Cuando se dan mediante esta vía de administración, la forma de dosis apropiada puede ser una dosis parenteral como se conoce por aquellos expertos en la técnica . Los inhibidores de P-gp pueden ser dados tópicamente. Cuando se dan mediante esta vía de administración, la forma de dosis apropiada es una crema, ungüento o parche. Debido a la cantidad de inhibidores P-gp necesarios que van a ser administrados, se prefiere el parche. Sin embargo, la cantidad que puede ser administrada por un parche es limitada. Por lo tanto, pueden requerirse dos o más parches. El número y tamaño del parche no es importante, lo que es importante es que se suministre la cantidad terapéuticamente efectiva de los inhibidores de P-gp, como se conoce por aquellos expertos en la técnica. Los inhibidores de P-gp pueden ser administrados rectalmente mediante supositorios, como se conoce por aquellos expertos en la técnica. Los inhibidores de P-gp pueden ser administrados mediante implantes, como se conoce por aquellos expertos en la técnica. No existen novedades acerca de la vía de administración, tampoco de las formas de dosificación para administrar los inhibidores de P-gp. Dado un inhibidor de P-gp particular, y una forma de dosificación deseada, un experto en la técnica sabría como preparar la forma de dosis apropiada para el inhibidor de P-gp. Los compuestos empleados en los métodos de la invención, pueden usarse en combinación uno con el otro, o con otros agentes o métodos terapéuticos, para tratar o evitar las condiciones arriba enlistadas. Tales agentes o métodos incluyen: inhibidores de la acetilcolina esterasa tal como tacrina (tertahidroaminoacridina, comercializado como COGNEXR) , clorohidrato de donepezil (comercializado como AriceptR y rivastigmina (comercializado como ExelonR) inhibidores de la gamma secretasa; agentes anti-inflamatorios tales como inhibidores de la oiclooxigenasa II ; antioxidantes tales como vitamina E y gincolídas, métodos inmunológicos tales como por ejemplo, inmunización con el péptido beta A, o administración de anticuerpos del péptido beta anti-A estatinas; y agentes neurotrópicos directos o indirectos tales como CerebrolysinR, AIT-082 (Emilieu, 2000, Aren. Neurol . 57:454), y otros agentes neurotrópicos del futuro. Será evidente para un experto en la técnica que la dosis exacta y la frecuencia de administración dependerá de los compuestos particulares de la invención administrados, la condición particular que se trata, la severidad de la condición que se trata, la edad, el peso, la condición física general del paciente en particular, los individuos pueden tomar otros medicamentos administrados por los médicos, quienes son expertos en esta técnica.
Inhibición del desdoblamiento de la APP Los compuestos de la invención inhiben el desdoblamiento de la APP entre el Met595 y el Asp596 numerados para la isoforma APP695, o un mutante de los mismos, o en un sitio correspondiente de una isoforma diferente, tal como la APP751 o APP770, o un mutante del mismo (algunas veces referido como el "sitio beta secretasa" ) . Aunque no se desea ligarse a una teoría en particular, la inhibición de la actividad de la beta- secretasa se piensa que inhibe la producción del péptido beta-amiloide (A beta) . La actividad inhibidora se demuestra en una variedad de ensayos de inhibición, por medio de los cuales, el desdoblamiento de un substrato de APP en presencia de una enzima beta-secretasa se analiza en presencia del compuesto inhibidor, bajo condiciones suficientemente normales para resultar en un desdoblamiento, en el sitio de desdoblamiento de la beta-secretasa. La reducción del desdoblamiento de APP en el sitio de desdoblamiento de la beta-secretasa comparada con un control inactivo o no tratado se correlaciona con al actividad inhibidora. Se conocen los sistemas de ensayo que pueden usarse para demostrar la eficacia de los inhibidores del compuesto de la invención. Los sistemas de ensayo representativos son descritos, por ejemplo, en las patentes E.U.A. Nos. 5,942,400, 5,744,346, así como también en los ejemplos de abajo. La actividad enzimática de la beta-secretasa y la producción de A beta pueden ser analizadas in vi tro o in vivo, usando substratos de APP sintéticos y/o mutados, naturales, enzimas sintéticas y/o mutadas naturales y el compuesto de prueba. El análisis puede incluir células primarias o secundarias que expresan enzimas y APP sintéticas y/o mutadas, nativas, enzimas y APP nativas que expresan modelos animales, o pueden utilizar modelos de animales transgénicos que expresan al substrato y a la enzima. La detección de la actividad enzimática puede ser mediante el análisis de uno o más de los productos de desdoblamiento, por ejemplo, mediante inmunoensayos , ensayos cromogénicos o fluorométricos, CLAR u otros medios de detección. Los compuestos inhibidores se determinan como aquellos que tienen la capacidad para disminuir la cantidad del producto de desdoblamiento de al beta-secretasa en comparación con la de un control, en donde el desdoblamiento mediado por la beta- secretasa en el sistema de la reacción se observa y se mide en ausencia de los compuestos inhibidores.
Beta-Secretasa Se conocen varias formas de la enzima de la beta- secretasa, y están disponibles y útiles para ensayos de la actividad enzimática e inhibición de la actividad de la enzima. Estas incluyen formas sintéticas y recombinantes nativas de la enzima. La beta-secretasa de humano se conoce como la enzima de desdoblamiento APP del sitie Beta (BACE) , Asp2 y memapsina 2, y se ha caracterizado, por ejemplo, en la patente E.U.A. No. 5,744,346 y las solicitudes de patente PCT publicadas W098/22597, WOOO/03819, WO01/23533, y WO00/17369, así como también en las publicaciones literarias (Hussain et al., 1999, Mol. Cell . Neurosci. 14:419-427; Vassar et al., 1999, Science 286:735-741; Yan et al., 1999, Wature 402:533- 537; Sinha et al., 1999, Nature 40:537-540; y Lin et al., 2000, PNAS USA 97:1456-1460). Las formas sintéticas de la enzima también se han descrito (W098/22597 y WO00/17369) . La beta-secretasa puede extraerse y purificarse a partir del tejido del cerebro humano y puede producirse en las células, por ejemplo, las células de mamíferos que expresan la enzima recombinante . Los métodos preferidos emplean compuestos que son efectivos para inhibir el 50% de la actividad enzimática de la beta-secretasa en una concentración menor a 50 micromolar, preferiblemente a una concentración de 10 micromolar o menos, más preferiblemente 1 micromolar o menos, y más preferiblemente 10 nanomolar o menos.
Substrato APP Los ensayos que demuestran la inhibición del desdoblamiento mediado por la beta-secretasa de APP pueden utilizar cualesquiera de las formas conocidas de APP, que incluye el isotipo "normal" del aminoácido 695 descrito por Kang et al., 1987, Nature 325:733-6, el isotipo del aminoácido 770 descrito por Kitaguchi et al., 1981, Wature 331:530-532, y variantes tales como la mutación Sueca (KM670- 1NL) (APP-SW) , la mutación London (V7176F) , y otros. Ver, por ejemplo, la patente E.U.A. No. 5,776,846 y también Hardy, 1992, Nature Genet. 1:3233-234, para una revisión de las mutaciones variantes conocidas. Los substratos útiles adicionales incluyen la modificación del aminoácido dibásico, APP-K descrito, por ejemplo, en la WO 00/17369, los fragmentos de APP, y péptidos sintéticos que contienen el sitio de desdoblamiento de la beta-secretasa, tipo silvestre (WT) o forma imitada, por ejemplo, SW, como se describe, por ejemplo, en la patente E.U.A. No. 5,942,400 y WO00/03819. El substrato APP contiene el sitio de desdoblamiento de la beta-secretasa de la APP (KM-DA o NL-DA) por ejemplo, un péptido APP completo o variante, un fragmento de APP, un APP sintético o recombinante, o un péptido de fusión. Preferiblemente, el péptido de fusión incluye el sitio de desdoblamiento de la beta-secretasa fusionado a un péptido que tiene un radical para un ensayo enzimático, por ejemplo, que tiene propiedades de detección y/o aislamiento. Una porción útil puede ser un epítopo antigénico para enlazar un anticuerpo, una etiqueta u otra porción de detección, un substrato de unión, y similares.
Anticuerpos Los productos característicos del desdoblamiento de APP pueden medirse mediante inmunoensayos usando varios anticuerpos, como se describe, por ejemplo, en Pirttila et al., 1999, Weuro. Lett. 249:21-4, y la patente E.U.A. No. 5,612,486. Los anticuerpos útiles para detectar A beta incluye, por ejemplo, el anticuerpo monoclonal 6E10 (Senetek, St . Louis, MO) que reconoce específicamente un epítopo en los aminoácidos 1 a 16 del péptido A beta; anticuerpos 162 y 164 (New York State Institute for Basic Research, Staten Island, NY) que son específicos para A beta de humano 1-40 y 1-42, respectivamente; y anticuerpos que reconocen la región de unión del péptido beta-amiloide, el sitio entre los residuos 16 y 17, como se describe en la patente E.U.A. No. 5,593,846. Los anticuerpos formulados contra un péptido sintético de residuos 591 a 596 de APP y anticuerpo SW192 aumentados contra 590-596 de la mutación Sueca también son útiles en el inmunoensayo de APP y sus productos de desdoblamiento, como se describe en la patente E.U.A. No. 5,604,102 y 5,721,130.
Sistemas de Ensayo Los ensayos para determinar el desdoblamiento de la APP en el sitio de desdoblamiento de la beta-secretasa son bien conocidos en la técnica. Los ejemplos de los ensayos, se describen, por ejemplo, en la patente E.U.A. No. 5,744,346 y 5,942,400 y se describen en los ejemplos de abajo.
Ensayos libres de células Los ensayos ejemplares que pueden usarse para demostrar la actividad inhibidora de los compuestos de la invención se describen, por ejemplo, en la WO00/17369, WO 00/03819, y las patentes E.U.A. Nos. 5,942,400 y 5,744,346. Tales ensayos pueden realizarse en incubaciones libres de células o en incubaciones celulares que usan células que expresan a una beta-secretasa y a un substrato de APP que tiene un sitio de desdoblamiento de la beta-secretasa. Un substrato de APP que contiene el sitio de desdoblamiento de la beta-secretasa de APP, por ejemplo, una APP o variante, un fragmento de APP, o un substrato de APP sintético o recombinante que contiene la secuencia de aminoácido: KM-DA o NL-DA, se incuba en presencia de la enzima beta-secretasa, un fragmento de la miama, una variante de polipéptido recombinante o sintético que tiene actividad beta-secretasa y efectiva para desdoblar el sitio de desdoblamiento de desdoblamiento de la beta-secretasa de APP, bajo condiciones de incubación adecuadas para la actividad de desdoblamiento de la enzima. Los substratos adecuados incluyen opcionalmente , derivados que pueden ser proteínas de fusión o péptidos que contienen el péptido del substrato y una modificación útil para facilitar la purificación o detección del péptido o sus productos del desdoblamiento de la beta-secretasa. Las modificaciones útiles incluyen, la inserción de un epítopo antigénico conocido para unir un anticuerpo; el enlace de una etiqueta o porción detectable, el enlace de un substrato de unión, y similares. Las condiciones de incubación adecuadas para un ensayo in vi tro libre de células incluyen, por ejemplo: un substrato de aproximadamente 200 nanomolar a 10 micromplar, una enzima de aproximadamnete 10 a 200 picomolar, y un compuesto inhibidor de aproximadamente 0.1 nanomolar a 10 micromolar, en una solución acuosa, con un pH aproximado de 4 a 7, a aproximadamente a 37 grados C, durante un periodo de tiempo de aproximadamente 10 minutos a 3 horas. Estas condiciones de incubación son solamente ejemplos, y pueden variar como se requiera para los componentes del ensayo particular y/o sistema de medición deseado. La optimización de las condiciones de incubación para los componentes del ensayo particular deben considerar a la enzima beta-secretasa específica usada y su pH óptimo, cualquiera de las enzimas y/o marcadores adicionales que podrían ser usados en los ensayos, y similares. Tal optimización es rutina y no requerirá una experimentación indebida. Un ensayo útil, utiliza un péptido de fusión que tiene una proteína que une a la maltosa (MP) fusionada a los 125 aminoácidos de la terminación C de APP-SW. La porción MBP se captura en un substrato del ensayo mediante el anticuerpo de captura anti-MBP. La incubación de la proteína de fusión capturada en presencia de los resultados de la beta-secretasa resulta en el desdoblamiento del substrato en el sitio de desdoblamiento de la beta-secretasa. El análisis de la actividad de desdoblamiento puede ser, por ejemplo, mediante el inmunoensayo de los productos de desdoblamiento. Tal inmunoensayo detecta un epítopo único expuesto al término carboxi de la proteína de fusión desdoblada, por ejemplo, usando el anticuerpo SW192. Este ensayo se describe, por ejemplo, en la patente E.U.A. No 5,942,400.
Ensayo Celular Numerosos ensayos basados en células pueden usarse para analizar la actividad de la beta-secretasa y/o proceso de la APP para liberar A beta. El contacto de un substrato de APP con una enzima de la beta-secretasa dentro de la célula y en presencia o ausencia de un inhibidor del compuesto de la invención, puede usarse para demostrar la actividad inhibidora de la beta-secretasa del compuesto. Preferiblemente, el ensayo en presencia de un compuesto inhibidor útil proporciona aproximadamente al menos 30%, más preferiblemente al menos del 50% de inhibición de la actividad enzimática, comparada con la de un control no inhibido. En una modalidad, se usan las células que expresan naturalmente a la beta-secretasa. Alternativamente, las células se modifican para expresar una enzima variante sintética o beta-secretasa recombinante como se discutió arriba. El substrato de APP puede añadirse al medio de cultivo y se expresa preferiblemente en las células. Pueden usarse, las células que expresan APP naturalmente, formas mutantes o variantes de APP, o células transformadas para expresar una isoforma de APP, fragmentos de APP, APP sintético o recombinante, APP variante o mutante, o proteínas de fusión o péptidos de APP sintéticos que contienen el sitio de desdoblamiento de APP de la beta-secretasa, con la condición que la APP expresada se permita poner en contacto con la enzima y pueda analizarse la actividad de desdoblamiento enzimático. Las líneas celulares de humano que procesan normalmente A beta a partir de la APP, proporcionan medios útiles para ensayar las actividades inhibidoras de los compuestos de la invención. La producción y liberación de A beta y/u otros productos de desdoblamiento en un medio de cultivo puede medirse por ejemplo, mediante inmunoensayos , tales como, el inmunotransferencia Western o el inmunoensayo (EIA) ligado a la enzima tal como por ELISA. Las células que expresan un substrato de APP y una beta- secretasa activa pueden ser incubadas en presencia de un compuesto inhibidor para demostrar la inhibición de la actividad enzimática comparada con la de un control. La actividad de la beta-secretaaa puede medirse mediante el análisis de uno o más productos de desdoblamiento del substrato de la APP. Por ejemplo, la inhibición de la actividad de la beta-secretasa contra el substrato de APP se esperaría para disminuir la liberación de la beta-secretasa de los productos del desdoblamiento de la APP inducida por la beta-secretasa específica, tales como la A beta. Aunque las células tanto neurales y no neurales procesan y liberan la A beta, los niveles de actividad de la beta- secretasa endógena son bajos y con frecuencia difíciles de detectar mediante EIA. Se prefiere, por lo tanto, el uso de tipos celulares conocidos que tienen actividad beta- secretasa, proceso aumentado de APP a A beta, y/o producción aumentada de A beta. Por ejemplo, la transfección de células con la forma imitante Sueca de APP (APP-SW) ; con APP-K o con APP-S -KK proporciona células que tienen actividad beta- secretasa aumentada y producen cantidades de A beta que pueden medirse fácilmente. En tales ensayos, por ejemplo, las células que expresan APP y beta- secretasa se incuban en un medio de cultivo bajo condiciones adecuadas para la actividad enzimática de beta- secretasa en su sitio de desdoblamiento, en el substrato de APP. En una exposición de células al compuesto inhibidor, la cantidad de A beta liberada dentro del medio y/o la cantidad de los fragmentos CTF99 de APP en los lisados celulares se reduce en comparación con la del control . Los productos del desdoblamiento de APP pueden analizarse, por ejemplo, mediante las reacciones inmunes con anticuerpos específicos, como se discutió arriba. Las células preferidas para el análisis de la actividad de la beta- secretasa incluyen células neuronales de humano primarias, células neuronales de animales transgénicos primarias, en donde el transgen es APP, y otras células tales como aquellas de una línea celular 293, estable, que expresa APP, por ejemplo, APP-SW.
Ensayos IB vivo: Modelos de animales Varios modelos de animales pueden usarse para analizar la actividad de la beta-secretasa y/o el proceso de la APP para liberar A beta, como se describe arriba. Por ejemplo, los animales transgénicos que expresan el substrato de APP y enzima de la beta-secretasa pueden usarse para demostrar la actividad inhibidora de los compuestos de la invención. Se han descrito, por ejemplo, ciertos modelos de animales transgénicos en las patentes E.U.A. Nos.: 5,877,399; 5,612,486; 5,387,742; 5,720,936; 5,850,003; 5,877,015, y 5,811,633 y en Ganes et al., 1995, Nature 373:523. Se prefieren animales que muestren características asociadas con la patofisiología de la AD. La administración de los inhibidores del compuesto de la invención para el ratón transgénico descrito aquí proporciona un método alternativo para demostrar la actividad inhibidora de los compuestos. Se prefiere también, la administración de los compuestos en un portador terapéuticamente efectivo vía una vía de administración que alcanza el tejido objetivo en una cantidad terapéutica apropiada. La inhibición del desdoblamiento mediado por la beta- secretase de APP en el sitio de desdoblamiento de la beta- secretasa y de la liberación de la A beta, puede analizarse en estos animales mediante la medición de los fragmentos de desdoblamiento en los fluidos corporales del animal tales como, los tejidos o el fluido cerebral. Se prefiere el análisis de los tejidos cerebrales para los depósitos o placas de A beta. El contacto de un substrato de APP con una enzima beta- secretasa en presencia de un compuesto inhibidor de la invención bajo condiciones suficientes, permiten el desdoblamiento mediado enzimático de APP y/o liberación de A beta del substrato, los compuestos de la invención son efectivos para reducir el desdoblamiento mediado por la beta- secretasa de APP en el sitio de desdoblamiento de la beta- secretasa y/o efectivo para reducir las cantidades liberadas de una A beta. Cuando tal administración de los compuestos inhibidores de la invención se pone en contacto con un modelo animal, por e emplo, como se describe arriba, los compuestos son efectivos para reducir la deposición de A beta en los tejidos del cerebro del animal, y para reducir el número y/o tamaño de las placas beta amiloides, Cuando tal administración es para un sujeto humano, los compuestos son efectivos para inhibir o disminuir el progreso de la enfermedad caracterizada por aumentar las cantidades de A beta, para disminuir el progreso de la AD en la, y/o para prevenir el ataque o desarrollo de la AD en un paciente vista físico/químico con respecto a la composición, formulación, estabilidad, aceptación del paciente y biodisponibilidad. Una cantidad terapéuticamente efectiva se define como una cantidad efectiva para reducir o disminuir al menos un síntoma del padecimiento que se trata, o para reducir o disminuir el ataque de una o más señales clínicas o síntomas del padecimiento. Se deberá notar que, como se usa en esta especificación y en las reivindicaciones anexadas, las formas en singular, "un" , "uno" y "los" incluyen referencias plurales a menos que el contenido dicte claramente otra cosa. Así, por ejemplo, la referencia hecha a una composición que contiene "un compuesto" incluye una mezcla de dos o más compuestos. Se deberá notar que el término "o" se emplea generalmente en este sentido incluyendo a "y/o" a menos que el contenido dicte claramente otra cosa. Como se observa anteriormente, dependiendo de si los átomos de carbono asimétricos están presentes, los compuestos de la invención pueden estar presentes como mezclas de isómeros, especialmente como racematos, o en forma de isómeros puros, especialmente antípodos ópticos. Las sales de los compuestos que tienen grupos formadores de sal son especialmente sales de adición ácidas, sales con bases o, en donde están presentes diversos grupos formadores de gales, también pueden ser sales internas o sales mezcladas . Las sales son especialmente, las sales farmacéuticamente aceptables o no tóxicas de los compuestos de fórmula I. Tales sales se forman por ejemplo, por los compuestos de fórmula I que tienen un grupo ácido, por ejemplo un grupo carboxi o un grupo sulfo, y son por ejemplo, sales de los mismos con bases adecuadas, tales como sales de metales no tóxicos derivadas de los metales de los grupos la, Ib, lia y Ilb de la Tabla Periódica de los Elementos, por ejemplo, sales de metales alcalinos, especialmente, sales de litio, sodio o potasio, o sales de metales alcalino térreos, por ejemplo, sales de calcio o de magnesio, también sales de zinc o sales de amonio, así como sales formadas de aminas orgánicas, tales como mono-, di- o tri- alquilaminas hidroxi substituidas, especialmente mono-, di- o trialquilaminas inferiores, o con bases de amonio cuaternarias, por ejemplo, con metil, etil, dietil o trietilamina, mono, bis, o tris- (2-hidroxi-alquilo inferior) aminas , tales como etanol, dietanol o trietanolamina, tris (hidroximetil) metilamina o 2- hidroxi tertbutilamina, N,N-di-alquilo inferior-N- (hidroxi- alquilo inferior) -aminas, tales como N,N-dimetil-N- (2- hidroxietil) amina, o N-metil-D-glucamina, o hidróxidos de amonio cuaternario, tales como hidróxido de tetrabutilamonio. Los compuestos de la formula I que tiene un grupo básico, por ejemplo un grupo amino, pueden formar sales de adición ácidas, por ejemplo, con ácidos inorgánicos apropiados, por ejemplo, ácidos hidrohálicos, tales como ácido clorhídrico o ácido bromhidrico, o ácido sulfúrico con el reemplazo de uno o ambos protones, ácido fosfórico con el reemplazo de uno o más protones, etc, ácido ortofosfórico o ácido metafosfórico, o ácido p rofosfórico con el reemplazo de uno o más protones, o con ácidos carboxílico, sulfónico, sulfo o fosfónico orgánicos o ácidos sulfámicos N-substituidos, por ejemplo ácido acético ácido propiónico, ácido glicólico, ácido suc ínico, ácido maléico, ácido hidroximaléico, ácido metilmaléico, ácido fumárico, ácido málioo, ácido tartárico, ácido gl cónico, ácido glucárico, ácido glucurónico, ácido cítrico, ácido benzóico, ácido cinámico, ácido mendélico, ácido salicílico, ácido 4- aminosalicílico, ácido 2 -fenoxibenzoico, ácido 2- acetoxibenzoico, ácido embónico, ácido nicotínico o ácido isonicotínico, así como aminoácidos, tales como los aminoácidos alfa mencionados anteriormente, y con ácido metansulfónico, ácido etansulfónico, ácido 2-hidroxietansulfónico, ácido etan- 1, 2-disulfónico, ácido bencensulfónico, ácido 4- metilbencensulfónico, ácido naftalen-2 -sulfónico, 2 6 3- fosfoglicerato, glucosa-6-fosfato, o ácido N-ciclo exilsulfámico (formador de cíclamatos) o con otros compuestos orgánicos ácidos, tal como ácido ascórbico. Los compuestos de la fórmula I que tienen grupos ácidos y básicos también pueden formar sales internas.
Para propósitos de aislado y purificado, también es posible usar sales farmacéuticamente inaceptables. La presente invención se puede entender mejor con referencia a los siguientes ejemplos. Estos ejemplos se pretenden que sean representativos de modalidades especificas de la invención, y no se pretende que sean limitantes del alcance de la invención.
EJEMPLOS BIOLOGICOS Ejemplo A Ensayo de la Inhibición de la Enzima Los compuestos de la invención se analizaron para la actividad inhibidora mediante el uso del ensayo MBP-C125. Este ensayo determina la inhibición relativa del desdoblamiento de la beta-secretasa de un substrato de APP modelo, MBP-C125SW, mediante los compuestos ensayados comparados con la de un control no tratado. Una descripción detallada de los parámetros del ensayo pueden encontrarse, por ejemplo, en la Patente E.U.A. No. 5,942,400. Brevemente, el substrato es un péptido de fusión formado a partir de la proteína de unión de la maltosa ( BP) y los 125 aminoácidos de APP-SW en la terminación carboxi, la mutación Sueca. La enzima de la beta-secretasa se derivó a partir del tejido del cerebro humano como se describe en Sinha et al, 1999, Wature 40:537-540) o producida recombinantemente como la enzima de longitud completa (aminoácidos 1-501) , y puede prepararse, por ejemplo, a partir de las 293 células que expresan el ADNc recombinante, como se describe en la O00/47618. La inhibición de la enzima se analiza, por ejemplo, mediante una inmunoprueba de los productos del desdoblamiento de la enzima. Un ELISA ejemplar usa un anticuerpo de captura anti- BP que se deposita en placas de unión superior de 96 pozos, bloqueadas y previamente revestidas, seguido por la incubación con un sobrenadante de la reacción de la enzima diluida, una incubación con un anticuerpo reportero específico, por ejemplo, un anticuerpo reportero anti-SW192 biotinilado, y una incubación adicional con estreptavidina/fosfatasa alcalina. En el ensayo, el desdoblamiento de la proteína de fusión MBP-C125SW intacta, resulta en la generación de un fragmenta amino-terminal truncado, exponer a un nuevo epítopo SW-192 de anticuerpo- positivo en el término carboxi. La detección se lleva a cabo mediante una señal del substrato fluorescente en el desdoblamiento de la fosfatasa. El ELISA solo detecta el desdoblamiento seguido por la Leu 596 en el sitio de mutación APP-SW 751 del substrato.
Procedimiento del Ensayo Especifico: Los compuestos se diluyeron en una serie de dilución 1:1 en una curva de concentración de seis puntos (dos pozos por concentración) en una fila de 96 placas por compuesto probado. Cada uno de los compuesto probados se prepararon en DMSO para hacer una solución de reserva de 10 milimolares. La solución de reserva se diluyó consecutivamente en DMSO para obtener una concentración del compuesto final de 200 micromolares en el punto superior de una curva de dilución de 6 puntos. Se añadieron diez microlitros (10) de cada dilución en cada uno de los dos pozos en la fila C de una placa con fondo V correspondiente, a la cual se pre-añadieron 190 microlitros de NaOAc de 52 milimolar, DMSO al 7.9%, pH de 4.5. La placa del compuesto diluida en NaOAc se hizo girar para precipitar en forma de pelotillas y 20 microlitros/pozos se transfirieron a una placa de fondo plano correspondiente, a la cual se añadieron 30 microlitros de una mezcla de enzima-substrato enfriada en hielo (2.5 microlitros de substrato MBP-C125SW, 0.03 microlitros de la enzima y 24.5 microlitros de TX100 al 0.09% helado por 30 microlitros). La mezcla de la reacción final del compuesto 200 micromolar en el punto de la curva más alto es en el DMSO al 5%, el NaOAc 20 milimolar, TX100 al 0.06%, a un pH de 4.5. La reacción de la enzima se inició a 37 grados centígrados calentando las placas. Después de 90 minutos a 37 grados C, se añadieron 200 microlitros/pozos del diluyente espécimen frío, para detener la reacción y se transfirieron 20 microlitros/pozos a una placa de ELISA revestida con un anticuerpo anti-MBP correspondiente para recoger los datos, que contienen el diluyente del espécimen de 80 microlitros/pozos . Esta reacción se incubó durante toda la noche a 4 grados centígrados y la prueba ELISA se realizó al día siguiente después de una incubación de 2 horas con un anticuerpo anti-192SW, seguido por estreptavidina-AP conjugada y un substrato fluorescente. La señal se leyó en un lector de placa fluorescente. La potencia de inhibición del compuesto, relativa, se determinó calculando la concentración del compuesto que mostró una reducción del cincuenta por ciento en la señal (IC50) detectada, en comparación con la señal de la reacción de la enzima en los pozos de control con el compuesto no añadido .
Ejemplo B Ensayo para la Inhibición Libre de Células que Utiliza un Substrato APP Sintético Un substrato APP sintético que puede ser desdoblado mediante la beta-secretasa y que tiene biotina en la terminación N y que se hace fluorescente por la unión covalente del verde Oregon en el residuo Cys, se usó para ensayar la actividad de la beta-secretasa en presencia o ausencia de los compuestos inhibidores de la invención. Los substratos útiles incluyen lo siguiente: Biotina-SEVNL-DAEFRC [verde Oregon] K [SEC ID NO: 1] mediante la enzima. La incubación en presencia o ausencia del inhibidor del compuesto demuestra la inhibición específica del desdoblamiento enzimático de la beta-secretasa de su substrato APP sintético.
Ejemplo C Inhibición de la beta-secretasa: Ensayo P26-P4'SW Los substratos sintéticos que contienen el sitio de desdoblamiento de la beta-secretasa de APP se usaron para probar la actividad de la beta-secretasa, usando los métodos descritos, por ejemplo, en la solicitud de PCT O00/47618 publicada. El substrato P26-P4'SW es un péptido de la secuencia : (biotina) CGGADRGLTTRPGSGLTNI TEEISEVNLDAEP [SEC ID NO: 6] La P26-P1 estándar tiene la secuencia: (biotina) CGGADRGLTTRPGSGLTNIKTEEISEVNL [SEC ID NO: 7]. Brevemente, los substratos sintéticos acoplados con biotina son incubados en una concentración de desde aproximadamente 0 hasta aproximadamente 200 micromolar en este ensayo. Cuando se prueban los compuestos inhibidores, se prefiere una concentración del substrato de aproximadamente 1.0 micromolar. Los compuestos de prueba diluidos en DMSO se añadieron a la mezcla de la reacción, con una concentración de DMSO final del 5%. Los controles también contienen una concentración final de DMSO del 5%. La concentración de la enzima beta secretasa en la reacción varió, para dar las concentraciones del producto con el rango lineal del ensayo ELISA, aproximadamente de 125 a 2000 picomolar, después de la dilución . La mezcla de la reacción incluye también acetato de sodio 20 milimolar, pH 4.5, Tritón X100 al 0.06%, y se incubó a 37 grados centígrados durante aproximadamente 1 a 3 horas. Las muestras se diluyeron entonces con un amortiguador de ensayo (por ejemplo, cloruro de sodio 145.4 nanomolar, fosfato de sodio 9.51 nanomolar, azida de sodio 7.7 millimolar, Tritón X45 al 0.05%, albúmina de suero bovino 6g/l, pH 7.4) para apagar la reacción, después se diluyó además para inmunoensayar los productos del desdoblamiento. Los productos del desdoblamiento pueden ensayarse por ELISA. Las muestras diluidas y estándares se incubaron en placas de ensayo revestidas con el anticuerpo de captura, por ejemplo, SW192, durante aproximadamente 24 horas a 4 grados centígrados. Después de lavar en un amortiguador TTBS (cloruro de sodio 150 milimolar. Tris 25 milimolar, Teen 20 al 0.03%, pH 7.5), las muestras se incubaron con estreptavidina AP dé acuerdo a las instrucciones de fabricación. Después de una hora de incubación a la temperatura ambiente, las muestras se lavaron en TTBS y se incubaron con una solución A del substrato fluorescente (2-amino- 2-metil-1-propanol 31.2 g/litro, 30 mg/litro, pH 9.5) . La reacción con fosfato de estreptavidina-alcalina permite la detección mediante fluorescencia. Los compuestos que son inhibidores efectivos de actividad beta-secretasa demuestran reducir el desdoblamiento del substrato en comparación con la de control.
Ejemplo D Ensayos que usan substratos de ollgopéptidos sintéticos Los oligopéptidos sintéticos se prepararon para incorporar el sitio de desdoblamiento conocido de la beta- secretasa, y la etiquetas detectables opcionalmente, tales como las porciones cromogénicas o fluorescentes. Ejemplos de tales péptidos, así como sus métodos de producción y detección son descritos en la Patente E.U.A. No.: 5,942,400, incorporada aquí por referencia. Los productos de desdoblamiento pueden detectarse usando cromatocrafía líquida de alta resolución, o métodos de detección cromogénica o fluorescente apropiados para el péptido que va a ser detectado, de acuerdo a los métodos bien conocidos en la técnica . A modo de ejemplo, un péptido tiene la secuencia (biotina) -SEVNLDAEF [SEC ID NO:8], y el sitio de desdoblamiento se encuentran entre los residuos 5 y 6. Otro substrato preferido tiene la secuencia ADRGLTTRPGSLTNIKEEISEVNLDAEF [SEC ID NO: 9] , y el sitio de desdoblamiento se encuentra entre los residuos 26 y 27. Estos substratos de APP sintéticos se incubaron en puede analizarse mediante inmunoensayos , usando anticuerpos para la detección específica. La actividad enzimática se midió en presencia y ausencia de los inhibidores del compuesto para demostrar la inhibición especifica de la beta- secretasa mediada por el desdoblamiento del substrato de APP.
Ejemplo F Inhibición de la beta-secretasa en los modelos animales de AD Pueden usarse varios modelos animales para examinar la inhibición de la actividad de la beta-secretasa. Ejemplos de modelos animales útiles en la invención incluyen, pero no se limitan a, ratón, conejillos de indias, perro y similares. Los animales usados pueden ser del tipo salvaje, transgénico, o modelos agénicos. Además, los modelos mamíferos pueden expresar mutaciones en APP, tales como la APP695-SW y similares descritos aquí. Ejemplos de modelos mamíferos no humanos transgénicos se describen en las Patentes E.U.A. Nos. 5,604,102, 5,912,410 y 5,811,633. Los ratones PDAPP, preparados como se describe en Games et al., 1995, «ature 373:523-527 son útiles para analizar la supresión in vivo de la A beta liberada en presencia de compuestos inhibidores putativos. Como se describe en la Patente E.U.A. No. 6,191,166, a un ratón PDAPP de 4 meses de edad se le administró un compuesto formulado en el vehículo, tal como aceite de maíz. El ratón se dosificó con un compuesto (1-30 mg/ml ; preferiblemente 1-10 mg/ml). Después de este tiempo, por ejemplo, de 3 a 10 horas, los animales se sacrificaron y los cerebros se retiraron para analizarlos. Los animales transgénicos se administraron en una cantidad del compuesto inhibidor formulado en un portador adecuado para el modo elegido de administración. Los animales de control fueron no tratados, tratados con un vehículo, o tratados con un compuesto inactivo. La administración puede ser aguda, es decir, una dosis simple o dosis múltiple en un día, o puede ser crónica, es decir, la dosis se repite diariamente durante un periodo de días. Al inicio del tiempo 0, el tejido del cerebro o fluido cerebral se obtuvo a partir de los animales seleccionados y analizados en presencia de péptidos de desdoblamiento de APP, que incluyen A beta, por ejemplo, anticuerpos específicos que usan inmunoensayos para la detección de A beta. Al final del periodo de prueba, los animales se sacrificaron y el tejido del cerebro o fluido cerebral se analizó en presencia de placas beta-amiloide y/o A beta. El tejido se analizó también para la necrosis. Se espera que los animales administrados con los inhibidores del compuesto de la invención demuestren A beta reducida en los tejidos del cerebro o fluidos del cerebro y placas beta amiloides reducidas en el tejido del cerebro, en comparación con la de los controles no tratados.
Ejemplo G Inhibición de la producción de A beta en loa pacientes humanos . Los pacientes que padecen de la enfermedad de Alzheimer (AD) muestran una cantidad aumentada de A beta en el cerebro. A los pacientes con AD se les administró una cantidad del compuesto inhibidor formulado en un portador adecuado para el modo elegido de administración. La administración se repitió diariamente durante la duración del periodo de prueba. Al inicio del d£a 0, se realizaron las pruebas de memoria y cognoscitivas, por ejemplo, una vez por mes. Se espera que los pacientes administrados con los inhibidores del compuesto muestren un retraso o estabilidad del progreso de la enfermedad como se analizó mediante los cambios en una o más de los siguientes parámetros de la enfermedad: Una A beta presente en el CSF o el plasma; cerebro o volumen hipocampal; depósitos A beta en el cerebro; placa amiloide en el cerebro; y registros de la función de la memoria y cognoscitiva, en comparación con los pacientes no tratados del control.
Ejemplo H Prevención de la producción de A Beta en pacientes con riesgo de adquirir AD. Los pacientes predispuestos o con riesgo de adquirir AD se identificaron ya sea mediante el reconocimiento de un patrón de herencia familiar, por ejemplo, en presencia de la mutación Sueca, y/o monitoreando los parámetros diagnósticos. Los pacientes identificados como predispuestos o con riesgo de desarrollar AD se les administró una cantidad del compuesto inhibidor formulado en un portador adecuado para el modo elegido de administración. La administración se repitió diariamente para la duración del periodo de prueba. Al inicio del día 0, se realizaron las pruebas de memoria y cognoscitivas, por ejemplo, una vez por mes. Se espera que los pacientes administrados con los inhibidores del compuesto mostraran un retraso o estabilización en el progreso de la enfermedad analizada por los cambios en uno o más de los parámetros del padecimiento siguiente: A beta presente en CSF o plasma; cerebro o volumen hipocampal; placa amiloide en el cerebro; y registros para la función de la memoria y cognoscitiva, comparada con los pacientes no tratados del control.
Preparación de los Compuestos Los compuestos de la presente invención pueden prepararse como composiciones farmacéuticas que comprenden cualquier compuestos de la presente invención y un portador farmacéuticamente aceptable. Los compuestos empleados en los métodos de la presente fase de solución se realiza, pero la síntesis en fase sólida por las técnicas Merrifield puede emplearse en su lugar. La adición y remoción de uno o más grupos protectores también es una práctica típica. La información adicional con relación al antecedente sintético, está contenida en la EPO 0337714. Algunas abreviaturas que pueden aparecer en esta solicitud son como sigue Abreviaturas Designación Grupo Protector BOC (Boc) t-butiloxicarbonilo CBZ (Cbz) benciloxicarbonilo (carbo- benzoxi) TBS (TBDMS) t-bu il-dimetilsililo Grupo Activante HBT (HOBT o HOBt) hidrato hidroxibenzot ia Designación Reactivo de Acoplamiento Reactivo BOP hexafluorofosfato de benzotriazol-l-iloxitris- (dimetilamino) foafonio B0P-C1 cloruro bis (2-oxo-3- oxazolidinil) fosfinico EDC clorohidrato de l-etil-3- (3- dimetil- aminopropil ) carbodiimida Otros (BOC)20(BOC20) bicarbonato di-t-butílico n-Bu4N+F" fluoruro de tetrabutil amonio nBuLi (n-Buli) n-butillitio DMF dimetilformamida Et3N trietilamina EtOAc acetato etílico TFA ácido trifluoroacético DMAP dimetilaminopiridir.a DME dimetoxietano LDA diisopropilamida de litio THF tetrahidrofurano Aminoácidos Ue L-isoleucina Val L-valina Un método para producir compuestos de Formula I se establece en el Esquema de Reacción I. ión, el tiado A sterior on A se al como idad . El por WO e bromo D i u otros inal. La un ácido el grupo recto o en G, La do el Ejem lo 1 Conversión del acetónido al acetónido de Alilo Ae on a Acetónido 32.1 g Bromuro de Alilo 12.70 g Litiobexametildisilazida (LHMDS) 1.0 M en THF 105 mL Tetrahidrofurano (THF) 200 mL El acetónido se disolvió en 200 mL de THF en un matraz de 3 cuellos de 100 mL equipado con un embudo de adición, y se desgasificó por burbujeo en nitrógeno durante 20 min. La mezcla se enfrío hasta -25°C y el bromuro de alilo se agregó por medio de una jeringa pesada. El LHMDS se transfiere al embudo de adición bajo nitrógeno a presión por medio de una cánula. El LHMDS se permite que caiga lentamente en la mezcla de reacción agitada magnéticamente durante 20 min. La hirina y Ejemplo 3 Conversión de Acetónido de ali o a yodohidrina y ciclización al Epóxido con NCS/Nal La yodohidrina en IPAC se agitó con hidróxido de litio en agua durante 3 h a 25°-30°C. La fase orgánica superior se lavó con 200 mL de agua y 200 mL de salmuera y se secó sobre ca 2 g de sulfato de magnesio. La solución de IPAC se filtró y se evaporó (50°-60°C, 100 Torr) reduciendo hasta 50 mL donde el epóxido comenzó a cristalizarse. La mezcla se permitió enfriar a 25°C durante 30 minutos, y 75 mL de metilciclohexano se agregó en porciones de 10 mL con agitación durante 30 min. La mezcla se añejó durante 1 h y los cristales se filtraron completamente y se lavaron con 2x20 mL de metilciclohexano y secaron para dar 24.10 g (64%) del epóxido como un sólido blanco cristalino de 99.9 A% de pureza por CLAR. El licor madre y los lavados se evaporaron hasta un aceite y se disolvieron en 40 mL de IPAC. La solución se trató con 10 g de carbono Darco GS0 durante 2 h a 25°C y se filtró a través de una almohadilla de Solkaf. El filtrado se evaporó, se redujo hasta ca 20 mL, y 40 mL de metilciclohexano se agregaron. El epóxido cristalino se filtró completamente y se lavó con 2x10 mL de metilciclohexano para proporcionar otros 4.96 g (13%) del epóxido 96.2 A% b CLAR. La conversión de la yodohidrina a epóxido puede también realizarse por la adición de tert- butóxido de potasio 1.7M en THF (0.70 mL, 1.2 mmol) ó hidróxido de potasio 5M en metanol (0.24 mL, 1.2 mmol) o DIEA (155 mg, 1.2 mmol) hasta una solución de la yodohidrina (505 mg, 1.0 mmol) en IPAC (2-3 mL) seguido por lavado con 2x2 mL 5 de agua y cristalización del metilciclohexano- IPAC . Acetónido de alilo 26.15 g N-clorosuccinamida (NCS) 22.7 g Yoduro de sodio 25.5 g Bicarbonato de sodio acuoso (0.5 M) 350 ML 10 Acetato de Isopropilo (IPAC) 300 mL El NCS y Nal se agitan juntos en 200 mL de agua durante 20 minutos. La mezcla se volvió café obscura y luego 15 inmediatamente se separó un sólido negro. El sólido se disolvió y el color se decoloró hasta amarillo claro con un añejamiento adicional. El acetónido de alilo crudo se disolvió en IPAC y se agitó con el bicarbonato de sodio acuoso y la solución amarilla clara preparada arriba durante 20 17 horas. La solución de bisulfito de sodio acuoso (38-40%) se agregó y la fase orgánica superior se separó. La fase orgánica se lavó con 300 mL de agua y 2x100 mL de salmuera. En este punto la solución de yodohidrina cruda en IPAC se puede tomar directamente en la siguiente etapa o la solución 25 se puede evaporar y cristalizar del metilciclohexano- IPAC llo .93 ece 868 ado dor sta g, la de la se -l- 129.6, 128.8, 128.2, 127.2, 126.8, 125.6, 124.1, 96.8, 79.2, 65.8, 50.0, 48.0, 44.8, 39.2, 37.4, 36.2, 26.6, 24.1. Ejemplo 6 Hz, FAB) .49; J = J = 8.2 7.80 .81; mL, 1.5 ol) de n- tó a esta -70°C. El mg, 0.50 8 mL (1.5 urante 30 se diluyó 3x5 mL de aron con arillo se tOAc/Hex) n 6 mL de de ácido lvente se 10 mL de extractos e secaron 2:1, 1:1 un sólido 8 (t, J = (bs, 1H) , 1H) , 6.60 70.95; H, 1. mg, 3.0 mmol) de e agitó a hasta - 3 (377.5 (161 mg, mmol) de ó a esta lentar a lución se trató con y luego mezcla de n 5 mL de . La fase extractos e secaron atografía r 113 mg n 2 mi de mmol) de imetil-2- le agregó solución minutos, L de THF La mezcla n 5 mL de se acuosa orgánicos re MgS0 . stantánea (96%) de (s, 3H) , (m, 5H) , 6.44 (dd, g, 3.0 de n- anisol ratura ltante de THF t2. La gó con a fase ánicos MgS04. ntánea 200 mg solvió trató ratura se ajustó a 0°C. La e CH2C12 y salmuera e columna un sólido 8 (t, J = (bt, 1H) , H) , 6.80- 74.72; H, 1. il-N-tert- HF, se le 71.32; H, 08. (400 mg, mL (1.98 marilla se arse hasta epóxido 3 amente con n se agitó se diluyó on agua y marillo se EtOAc/Hex) 7.2 mi de mg, 0.97 on on ra 5% mg ) , 00 J N, de gó se on luego se trató con epóxido 3 (250 mg, 0.66 mmol) en 2 tnL de THF seguido inmediatamente con 0.24 mL (-.98 mmoL) de BF3OEt2. La mezcla de reacción se agitó durante 45 min., se apagó con NaHC03 acuoso y ae diluyó con EtOAc. El extracto orgánico se lavó con agua y salmuera y se secó sobre Na2S04. El aceite amarillo se sometió a cromatografía instantánea (Si02; 1:4 EtOAc/Hex) para proporcionar 260 mg (76%) del acetónido. El acetónido de arriba (260 mg, 0.50 mmol) en 10 mi de metanol se trató con ácido camforsul fónico (310 mg, 1.35 mmol) y todo se agitó durante 3 h. El solvente se removió con presión reducida, el residuo se tomó en EtOAc y se lavó con HC03 2 saturado. El extracto orgánico se lavó con salmuera y se secó sobre Na2S0 . La cromatografía de columna (Si02; 2:3 EtOAc/Hex) y trituración con EtOAc/Hex proporcionó 89 me (37%) de 81 como un sólido blanco; pf = 148°-150°C. lH RMN ( CDCI3 ) S 0.89 (d, 1H) , 1.70 (t, 1H), 2.08 (t, 1H) , 2.61 (d, 1H) , 2.79 (m, 4H) , 2.95 (m, 3H) , 3.76 (s, 3H) , 3.80 (s, 3H) , 4.04 (m, 1H) , 4.22 (m, 1H) , 5.29 (m, 1H) , 5.78 (d, 1H) , 6.75 (m, 2H) , 6.82 (m, 1H) , 7.03- 7.31 (m, 9H) . jemplo 9, 12, se le 1.0 M en ambiente ó durante x2 y los a2S0 . La y re%) de 8m 2.80 (m, (m, 1H) , H) , 6.82- etoxibenceno regó 0.79 mL ión amarilla de enfriar ntonces con HF y luego 2. La mezcla con NaHC03 nico se lavó ite amarillo 4 EtOAc/Hex) en 10 mi de g, 1.4 mmol) removió con se lavó con con salmuera a (Si02; 2:3 onó 66 mg 2.08 (t, 4.00 (ra, Hz, 1H) , 7.01, N, .46 mmol) regó 0.46 se enfrió gregó. La 2 h y se y se secó i02; 35% rcionó 20 de 43 on on ra 0% mg ) , 76 m, i, 98 la se agitó a esta temperatura durante 1 h antea de enfriar hasta -70°C. El dianión resultante se trata entonces con epóxido 3 (250 g, 0.66 mmol) en 2 mL de THF y luego inmediatamente con 0.24 mL (1.98 mmoL) de BF3OEt2. La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos, se apagó con NaHC03 saturado y se diluyó con EtOAc . El extracto orgánico se lavó con agua y salmuera y se secó sobre Na2S0 . El aceite amarillo se sometió a cromatografía instantánea (Si02; 20% EtOAc/Hex) para proporcionar 0.26 g (79%) de acetónido. El acetónido de arriba (260 mg, 0.52 mmol) en 10 mi de metanol, se trató con ácido camforsulfónico (320 mg, 1.4 mmol) y todo se agitó durante 4 h. El solvente se removió con presión reducida, el residuo ae tomó en EtOAc y se lavó con NaHCC>3x2 saturado. El extracto orgánico se lavó con salmuera y se secó sobre a2S04. La cromatografía de columna (Si02; 2: 3 EtOAc/Hex) y trituración con EtOAc/Hex proporcionó 71 mg (30%) de 8r como un sólido blanco; pf = 139°-141°C. *H RMN (CDC13) d 0.90 (d, 1H) , 1.78 (t, 1H) , 2.16 (m, 2H) , 2.47 (s, 3H) , 2.78-3.06 (m, 8H) , 4.15 (m, 1H) , 4.24 (m, 1H) , 5.30 (m, 1H) , 5.78 (d, 1H) , 7.08-7.35 (m, 13H) . 1.8M en , se le mg, 0.66 todo se n NaHC03 lavó con tró bajo 0%) del y ácido ceno, se zcla de aturado, rafía de tOAc/Hex o; pf = reflujo durante 8 h, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El solvente se removió bajo presión reducida y el residuo se tomó en EtOAc. La fase org nica se lavó con NaOHx2 1N, agua y salmuera. El secado sobre Na2SO.i proporcionó 2.1 g (88%) de 2-etoxibromobenceno. LH RMN (CDC13) d. 1.48 (t, 3H) , 4.09 (q, 2H) , 6.80 (t, 1H) , 6.88 (d, 1H) , 7.23 (m, 1H) , 7.52 (d, 1H) .
B. 2- Isobutoxibromohenceno A una solución de 2-bromofenol (0.67 mi, 5.8 mmol) en 25 mi de acetona, se le agregó K2CO3 (2.0 g, 14. S mmol) y 1-yodo- 2-metilpropano (0.75 mi, 6.4 mmol). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 19 h, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El solvente se removió bajo presión reducida y el residuo se tomó en EtOAc. La fase orgánica se lavó con NaOHx2 1N, agua y salmuera. El secado sobre Na2S04 proporcionó 330 mg (25%) de -isobutoxibromobenceno . ¾ RMN (CDCI3) d. 1.09 (d, 6H) , 2.17 (m, 1H) , 3.78 (d, 2H) , 6.80 (t, 1H) , 6.87 (d, 1H) , 7.22 (t, 1H) , 7.52 (d, 1H) .
C. 2 - (metoximetoxi) -bromobenceno A una solución de 2-bromofenol (0.67 mi, 5.8 mmol) y diisopropiletilamina (1.1 mi, 6.4 mmol) se le agregó clorometil metil éter (0.49 mi, 6.4 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h, se apagó con NaHC03 saturado y se diluyó con CH2C12. La fase orgánica se lavó con agua y se secó sobre Na2S04 para proporcionar 700 mg (58%) del compuesto del título. lH RMN (CDC13) d. 3.52 (s, 3H) , 5.24 (s, 2H) , 6.88 (t, 1H) , 7.15 (d, 1H) , 7.25 (m, 1H) , 7.54 (d, 1H) .
D. 2-Bromo-5-fenoxifenol A una solución de t-butilamina (1.1 mi, 10.7 mmol) en 13 mi de tolueno, se enfrió a -30°C. se agregó bromo (0.28 mi, 5.35 mmol) . La mezcla se enfrió a -70°C y se trató con 3- fenoxifenol (2.0 g, 10.7 mmol) disuelto en 2 mi de CH2C12. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 h, se apagó con agua y se diluyó con CH2C12. La fase orgánica se lavó con agua y salmuera y se secó sobre Na2S04. La cromatografía de columna (Sí02; 5:95 EtOAc/Hex) proporcionó 380 mg (14%) de 2 -bromo- 5-fenoxifenol . ¾ RMN (CDCI3) d. 5.48 (s, 1H) , 6.49 (dd, 1H) , 6.67 (d, 1H) , 7.01 (d, 2H) , 7.13 (t, 1H) , 7.35 (m, 3H) .
E. 2 -Metoxi -4 -fenoxibromobenceno A una solución de 2-bromo-5-fenoxifenol (0.38 g, 1.4 mmol) en 6 mi de acetona, se le agregó K2C03 (0.58 g, 4.2 mmol) y yodometano (0.26 mi, 4.2 mmol). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 8 h, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El solvente se removió bajo presión reducida y el residuo se tomó en EtOAc. La fase orgánica se lavó con NaOH 1N, agua y salmuera. El secado sobre Na2S0 proporcionó 0.36 g (92%) de 2-metoxi-4-fenoxibromobenceno. XH R (CDC13) d. 3.83 (s, 3H) , 6.45 (dd, 1H) , 6.62 (d, 1H) , 7.00 (d, 2H) , 7.12 (t, 1H) , 7.34 (t, 2H) , 7.43 (d, 1H) . Se notará que, como se usó en esta especificación y las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares, "un", "uno" y "el" incluyen referencias plurales a menos que el contenido dicte claramente otra cosa. Así, por ejemplo, la referencia hecha a una composición que contiene "un compuesto" incluye una mezcla de dos o más compuestos. Se deberá notar que el término "o" se emplea generalmente en este sentido incluyendo a "y/o" a menos que el contenido dicte claramente otra cosa. Salvo que se defina de otra manera, todos los términos científicos y técnicos usados en la presente tienen el mismo significado como se entiende comúnmente por alguien de experiencia en el arte, al cual pertenece esta invención. Todas las patentes y publicaciones referidas en la presente se incorporan por ello para referencia para todos los propósitos. La invención se ha descrito con referencia a varias modalidades y técnicas específicas y preferidas. Sin embargo, se entenderá que muchas variaciones y modificaciones pueden hacerse mientras se mantengan dentro del espíritu y alcance de la invención. ?? ?? ?? ?? ha, el mejor la práctica la presente

Claims (1)

  1. se es la al na la enfermedad de al tratamiento, al sujeto un 1, o una sal enfermedad de idad de enzima orque comprende tratamiento un 1, o una sal ivindicación 1, nistración de un e aceptable del ujeto que tiene, desarrolle, una que consiste de enir o retrasar para tratar a erado (MCI) y d de Alzheimer hasta AD, para nos que tienen osis del tipo ral y prevenir rragias lobares ras demencias en degenerativo on el mal de parkinsonismo s supranuclear neración basal po cuerpo Le y al tratamiento, ración de una esto de fórmula mismo: de 10 cos uyo más _ alquilo a de las sto es R1 es Ci alquilo inferior, C3_7 cicloalquilo o H; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 7. El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el compuesto es y X es CONHR1 o SOzNHR1 ; R1 es alquilo inferior, C3-7 cicloalquilo o H o u: sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 8. El método de conformidad con cualesquiera de 1 reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el compuesto es o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 9. El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el compuesto es o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 10. El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el compuesto es o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 11. El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque comprende administrar un compuesto, o sal farmacéuticamente aceptable del mismo, seleccionado del grupo que consiste de: ó 2- ( (2S,4R) -4-bencil-2-hidroxi-5- { [ (1S,2R) -2-hidroxi 2, 3-dihidro-lH-inden-l-il] amino} -5-oxopentil) -N- butilbenzamida ; ó (2R,4S) -2-bencil-5- {2- [ (butilamino) sulfonil] fenil}-4 hidroxi-N- [ (1S,2R) -2 -hidroxi -2 , 3 -dihidro-lH- inden- 1 - i1] pentanamida ; ó 2- ( (2S,4R) -4-bencil-2-hidroxi-5-{ [ (1S,2R) -2-hidroxi 2 , 3 -dihidro- 1H-inden- 1-il] amino} -5-oxopentil) -N-butil- 5,6,7, 8-tetrahidronaftaleno-l-carboxamida; ó (2R, 4S) -5- [2- (aminosulfonil ) fenil] -2-bencil-4-hidroxi N-[(1S,2R) -2 -hidroxi-2 , 3 -dihidro-1H-inden- 1-il] pentanamida ó 2- ( (2S,4 ) -4-bencil-2-hidroxi-5-{ [(1S,2R) -2-hidroxi 2 , 3 -dihidro-lH-inden-l-il] amino} -5-oxopentil) -5,6,7,8- tetrahidronaftaleno-l-carboxamida; ó (2R,4S) -5- (l-benzotien-2-il) -2 -bencil -4 -hidroxi-N [(1S, 2R) -2 -hidroxi -2 , 3 -dihidro-lH-inden-l-il] entanamida; 25 ó (2R,4S) -2-bencil-5- (1 , 1 ' -bifenil -2 -il ) -4 -hidroxi-N (2R,4S) -2-benoil-4-hidroxi-N- [ (lS,2ft) -2-hidroxi-2, 3 1H- inden- 1-il] -5- [2- (hidroximetil) fenil] entanamida; 6 (2R,4S) -2-bencil-4-hidroxi-N- [ (1S,2R) -2 -hidroxi-2 , 3 dihidro-lH-inden-l-il] -5- (2-metoxifenil)pentanamida; ó 2- ( (2S,4R) -4-bencil-2-hidroxi-5- { [(1S,2R) -2-hidroxi 2 , 3-dihidro-lH-inden-l-il] amino} -5-oxopentil) -N- (tert-butil) ¦ 5-metilbenzamid ; 6 (2R,4S) -2-bencil-5- (2-etoxifenil) -4-hidroxi-N [ (1S, 2R) -2-hidroxi-2 , 3 -dihidro- 1H- inden- 1 - il] pentanamida ; «k oxi- i-N- 2 , 3 - ó (2R, 4S) -2-bencil-5- (2 , 4 -dimetoxifenil i -4 -hidroxi-N [ (1S, 2R) -2-hidroxi-2, 3-dih dro-lH-inden-l-il]pentanamida; ó (2R,4S) -2-bencil-5- (3 , 5-dibromo-2 -hidroxifenil) hidroxi-N- [ (1S,2R) -2 -hidroxi -2 , 3 -dihidro- 1H- inden- 1 - il ] entanamida ó (2R,4S) -2-bencil-4-hidroxi-N- [(1S,2R) -2-hidroxi- dihidro-lH-inden-l-il] -5- (2-isobutoxifenil ) pentanamida; ó (2R,4S) -2-bencil-4-hidroxi-N- [(1S,2R) -2 -hidroxi -2 , 3 - dihidro-lH-inden-l-il] -5- [2- (metilsulfonil) fenil] pentanamida; rocíclicos S, cuyo uno o más lo de to to lo de un o, po o o e a . alquilo ación ación fero. , n a 0 s o ejo de beta- heterociclo C1 alquilo y 25. Un método de tratamiento de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque comprende además, la administración de uno o más agentes terapéuticos seleccionados del grupo que comprende un antioxidante, un anti-inflamatorio, un inhibidor de gamma secretasa, un agente órficorófico, un inhibidor de acetil colinesterasa, una estatina, inhibidores P-gp, un péptido beta A, y un péptido anti-beta A. 26. El uso de un compuesto, o mezclas de los mismos, seleccionados del grupo que consiste de: ó 2- ( (2S,4R) -4-bencil-2-hidroxi-5- { [ (18, 2R) -2-hidroxi- 2 , 3 -dihidro-lH-inden-l-il] amino} -5-oxopentil) -N- butilbenzamida ; 6 (2R, 4S) -2-bencil-5- {2- [ (butilamino) sulfonil] fenil} -4- hidroxi-N- [ (1S,2R) -2 -hidroxi -2 , 3 -dihidro- lH-inden-1 - il] pentanamida; ó 2- ( (2S,4R) -4-bencil-2-hidroxi-5-{ [ (1S,2R) -2-hidroxi 2 , 3-dihidro-lH-inden-l-il] amino} -5-oxopentil) -N-butil- 5,6,7, 8 -tetrahidronaftaleno- 1 -carboxamida ; 6 (2R,4S)-5-[2- (aminosulfonil ) fenil] -2 -bencil -4 -hidroxi N- [ (1S,2R) -2-hidroxi-2,3-dihidro-lH-inden-l-H]pentanamida; ó 2- ( (2S,4R) -4-bencil-2-hidroxi-5- { [ (1S,2R) -2-hidroxi 2 , 3 -dihidro-lH-inden-l-il] amino} -5-oxopentil) -5,6,7,8- tetrahidronaftaleno- l-carboxamid ,· ó (2R,4S) -2-bencil-4-hidroxi-N- [ (1S,2R) -2-hidroxi - dihidro-lH-inden-l-il] -5- (5 -metiltien-2 - il ) entanamida ; ó (2R,4S) -5- (l-benzotien-2-il) -2 -bencil -4 -hidroxi-N [ (1S , 2R) -2-hidroxi-2 , 3 -dihidro- 1H- inden- 1 - il] entanamida; ó (2R,4S) -2-bencil-5- (1, l-dióxido-l-benzotien-2-íl) -4 hidroxi-N- [ (1S,2R) -2 -hidroxi-2 , 3 -dihidro- 1H- inden- 1 - il] pent ó ) -2 -hidroxi-2 , 3 dihidro-lH-inden-l-il] -5- [1- (metoximetil ) -lH-indol-2- il] entanamida; ó (2R,4S) -2-bencil-5- (1,1' -bifenil -2 -il ¡ -4-hidroxi-N [ (1S, 2R) -2-hidroxi-2 , 3-dihidro-lH-inden-l-il] per.tanamida; 6 (2R, S) -2-bencil-5- [2- ( , 4-dimetil-4 , 5-dihidro-l, 3 oxazol-2-il) -4-metilfenil] -4 -hidroxi-N- [ (1S, R) -2-hidroxi- 2 , 3 -dihidro- ??-inden- 1 - il] pentanamida; ó (2R,4S) -2-bencil-4-hidroxi-N- [ (1S,2R) -2-hidroxi-2 , 3 dihidro-lH-inden-l-il] -5- [2- (hidroximetil) fenil]pentanamida; 6 (2R,4S) -2-bencil-4-hidroxi-N- [ (1S,2R) -2-hidroxi- dihidro-lH-inden-l-il] -5- (2 -metoxifenil) pentanamida; Ó 2- ( (2S,4R) -4-bencil-2-hidroxi-5-{ [ (1S,2 ) -2-hidroxi- 2 , 3 -dihidro-lH-inden-l-il] amino} -5 -oxopentil ) -N- (tert-butil) - 5-metilbenzamida; ó (2R,4S) -2-bencil-5- (2-etoxifenil) -4 -hidroxi -N- [ (1S , 2R) -2 -hidroxi -2 , 3 -dihidro-lH-inden-l-il] pentanamida ; ó 2- ( (2S, 4R) -4 -bencil -2-hidroxi- 5- { [ (1S, 2R) -2-hidrox - 2 , 3 -dihidro-lH-inden-l-il] amino} -5- oxopenti1 ) bencilbuti1carbamato ; ó (2R, 4S) -2-bencil-5- (2 , 4-di.metoxifeniil) -4-hidroxi-N [ (1S,2R) -2 -hidroxi-2 , 3 -dihidro-lH- inden- 1 - il ] pentanaraida; ó (2 ,4S) -2-bencil-5- (3 , 5-dibromo-2 -hidroxifenil ) -4 hidroxi -N- [ (1S,2R) -2 -hidroxi -2 , 3 -dihidro- 1H- inden- 1 - il] pentanam ó (2R,4S) -2-bencil-4-hidroxi-N- [ (1S,2R) -2 -hidroxi -2 , 3 dihidro-lH-inden-1-il] -5- (2 -isobutoxifenil) pentanamida; ó (2R,4S) -2-bencil-4-hidroxi-N- [ (1S,2R) -2 -hidroxi-2 , 3 dihidro-lH-inden-l-il] -5- [2- (metiltio) fenil] entanamida; ó (2R, 4S) -2-bencil-4-hidroxi-N- [ (1S, 2R) -2 -hidroxi-2 , 3- dihidro-lH-inden-l-il] -5- [2- (metilsulfonil) fenil] pentanamida; (2R,4S) -2-bencil-4-hidroxi-N- [(1S.2R) -2 -hidroxi -2 , 3 - lH-inden-l-il] -5- [2- (metoximetoxi) fenil] pentanamida; ó (2R,4S) -2-bencil-4-hidroxi-N- [(1S,2R) -2-hidroxi-2, 3- dihidro-lH-inden-l-il] -5- (2 -metoxi-4 -fenoxifenil) pentanamida; para la manufactura de un medicamento para el tratamiento o prevención de condiciones seleccionadas del grupo que consiste de enfermedad del Alzheimer, deterioro cognoscitivo moderado (MCI) , síndrome de Down, hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis del tipo Dutch, angiopatía amiloide cerebral, demencias degenerativas, que incluyen demencias de origen degenerativo y vascular mezcladas, demencia asociada con el mal de Parkinson, demencias frontotemporales con parkinsonismo (FTDP) , demencia asociada con la parálisis supranuclear progresiva, demencia asociada con la degeneración basal cortical, o enfermedad de Alzheimer del tipo cuerpo Lewy difusa. ar la enfermedad nhibir la enzima l péptido beta A conocidos de la a presente.
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