MXPA03009593A - Polipeptidos antimicrobianos y sus usos. - Google Patents

Abstract

Los metodos y las composiciones de la presente invencion encuentran uso en impactar patogenos microbianos y en mejorar la resistencia a enfermedades de patogenos, particularmente en vegetales. Las composiciones de la invencion incluyen polipeptidos que poseen propiedades antimicrobianas, particularmente propiedades funguicidas, y las moleculas de acido nucleico que codifican. Los polipeptidos de la invencion son aislados desde la hemolinfa y cuerpos grasos de larvas de insectos inducidos por inyeccion de hongos patogenos vegetales. Se proporcionan adicionalmente celulas vegetales, vegetales, una semilla de los mismos, transformadas con las moleculas de acido nucleico de la invencion, para conferir asi resistencia a la enfermedad en los vegetales.

Description

POLIPEPTIDOS ANTIMICROBIANOS Y SUS USOS CAMPO DE LA INVENCION La invención concierne a la resistencia a las enfermedades vegetales, particularmente a la resistencia a patógenos fúngicos. Más específicamente la presente invención concierne al uso de polipéptidos antimicrobianos que se encuentra ¦ de manera natural, aislados de insectos, inducidos con patógenos vegetales.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Organismos multicelulares producen una batería de péptidos y proteínas antimicrobianas para defenderse a sí mismos contra el ataque o daño microbiano. Muchos de estos péptidos y proteínas inducidas poseen amplia actividad antimicrobiana contra bacterias Gram-positivas y/o Gram-negativas (Boman, H. G. (1995) Annu. Rev. Immunol. 13:61-92) . Este sistema de defensa, llamado "inmunidad innata", puede representar una protección química que despliegan los organismos para detener microbios peligrosos en su punto de contacto . Los péptidos y proteínas producidos en respuesta al ataque bacteriano tienden a trabajar muy diferentemente desde antibióticos convencionales. Los antibióticos trabajan para bloquear una proteína crucial en un microbio invasor. El modo de acción de las proteínas defensivas antimicrobianas varia. En algunos casos perforan las membranas de un microbio e interrumpen la señalización interna del microbio. En otros casos, pueden actuar para incrementar la actividad inmune de la célula huésped. Se han aislado varios péptidos antimicrobianos y se han caracterizado parcialmente sus estructuras. Las defensinas, un tipo de los péptidos antimicrobianos, son péptidos ricos en cisteina. Se han aislado defensinas desde insectos y mamíferos. Las defensinas de insectos son péptidos de 34 - 43 aminoácidos con tres puentes disulfuros . Son producidos por el cuerpo graso del insecto (Hoffmann y colaboradores (1992) Immunol. Today 13:411-15) . Se ha mostrado que interrumpen la permeabilidad de la membrana citoplásmica de Micrococcus luteus, que resulta de la formación de canales iónicos dependientes del voltaje en la membrana citoplásmica (Cociancich y colaboradores (1993) J. Biol. Chém. 268:19239-19245). Las tioninas son otro grupo de pequeños péptidos antimicrobianos ricos en cisteina. Se piensa que las tioninas desempeñan un papel en la protección de vegetales contra la infección microbiana. Se encuentran en el endospermo de semillas, tallos, raíces, y en hojas resistentes a patógenos o etioladas de muchas especies de plantas (Bohlmann y colaboradores (1991) Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 42: 227-240) . Las tioninas presentan toxicidad a bacterias, hongos, levaduras, e igualmente a varios tipos celulares de mamíferos. Las enfermedades en plantas tienen muchas causas que incluyen hongos, virus, bacterias, y nematodos. Los hongos fitopatógenos dan como resultado pérdidas significativas en el rendimiento de las cosechas, así como también devastamientos epidémicos. Adicionalmente, el principio de las enfermedades vegetales han dado como resultado fallas catastróficas en las cosechas que han desencadenado hambrunas y han causado cambios sociales importantes . Los métodos moleculares de protección de cosechas no solamente tienen el potencial para implementar nuevos mecanismos para la resistencia a las enfermedades, sino que también pueden también ser implementados más rápidamente que los métodos de reproducción tradicionales . Por consiguiente, los métodos moleculares son necesarios para suplementar los métodos de reproducción tradicionales para proteger a los vegetales del ataque patógeno. Los hongos patógenos vegetales atacan a todas las aproximadamente 300,000 especies de plantas florales, pero una especie vegetal única puede ser huésped de solamente unas cuantas especies fúngicas, y la mayoría de los hongos usualmente tienen un rango de huéspedes limitado. Es por esta razón que la mejor estrategia general a la fecha para controlar enfermedades fúngicas vegetales ha sido usar cultivares resistentes seleccionados o desarrollados por reproductores de vegetales. Desafortunadamente, aún con el uso de cultivares resistentes, actualmente persiste el potencial de las enfermedades epidémicas serias de los cultivos, como se pone en evidencia por el surgimiento del pulgón de la hoja de maíz del sur y de la avena Victoria. Por consiguiente, los métodos moleculares que utilizan los mecanismos de resistencia a plagas ¦ de insectos de vegetales que se encuentran de manera natural, para mejorar la resistencia de enfermedades vegetales a los microbios, particularmente a hongos patógenos.

SUMARIO DE IA INVENCIÓN Se proporcionan composiciones y métodos para aumentar la resistencia a patógenos. Las composiciones comprenden péptidos antipatógenos o agentes defensivos que son inducidos en insectos al poner en contacto al insecto con un patógeno de interés . Las composiciones incluyen polipéptidos que poseen propiedades antimicrobianas, particularmente propiedades fungicidas, y moléculas de ácido nucleico que codifican a dichos polipéptidos . Los métodos y composiciones de la presente invención encuentran uso al impactar a patógenos microbianos vegetales y al mejorar la resistencia a enfermedades vegetales por patógenos microbianos. Se proporcionan también los "cassettes" de expresión que comprenden las moléculas de ácido nucleico que codifican a los agentes defensivos, secuencias de vectores y células huéspedes para la expresión de los polipéptidos y anticuerpos para los polipéptidos. Las composiciones de la invención proporcionan adicionalmente células vegetales, vegetales, y semillas de las mismas, transformadas con las moléculas de ácido nucleico de la invención. Las plantas transgénicas de la presente invención son transformadas con una secuencia de nucleótidos de la invención y exhiben resistencia creciente a las enfermedades antimicrobianas, particularmente resistencia a enfermedades fúngicas que aminoran la necesidad de químicos agrícolas artificiales para proteger cultivos extensivos y aumentar la producción de las cosechas. Los métodos de la invención involucran transformar establemente una planta con al menos un "cassette" de expresión que comprende al menos una secuencia de nucleótidos de la invención, enlazada operablemente con un promotor capaz de conducir la expresión de la secuencia de nucleótidos en el vegetal o célula vegetal. Se reconoce que una variedad de promotores serán útiles en la invención, la selección de la cual dependerá en parte de la localización de tejido deseada y del nivel de expresión de las secuencias de nucleótidos descritas y de los polipéptidos correspondientes. Se reconoce que los niveles de expresión de los agentes defensivos en la célula vegetal pueden ser controlado de manera de lograr óptima resistencia a la enfermedad.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Figura 1. Alineación de la secuencia de aminoácidos del polipéptido Magl precursor (SEQ ID NO: 2) con la clase de proteínas inmunes conocidas como atacinas. El polipéptido Magl precursor tuvo 78 % de similitud de secuencia con el polipéptido precursor de la Atacina E/F (SEQ ID NO: 19, No. de Acceso: P01513) . Las secuencias restantes son: polipéptido precursor de Atacina A (SEQ ID NO: 17, No. de acceso: P50725) ; polipéptido precursor de Atacina B (SEQ ID NO: 18, No. de Acceso: P01512) ; y el polipéptido precursor de Atacina conocido como Nuecina (SEQ ID NO: 20, No. de Acceso: Q26431) . Figura 2. Alineación de la secuencia de aminoácidos del polipéptido Magl precursor SEQ ID NO: 2) con secuencias de polipéptidos homologas de la invención codificadas por cDNAs aislados inducidos en bibliotecas de Manduca sexta (SEQ ID NOS: 4, 6, 8 y 10) . Figura 3. Las secuencias de amino ácidos N- terminal para los cuatro fragmentos de la digestión con Lys-C del polipéptido Magl (SEQ ID NO: 96, 97, 98, y 99) .

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE IA INVENCIÓN La presente invención proporciona composiciones y métodos para mejorar la resistencia a las enfermedades vegetales a patógenos vegetales, particularmente patógenos fúngicos. Las composiciones de la invención incluyen péptidos y polipéptidos que poseen actividad antimicrobiana, particularmente actividad antifúngica. Dichos péptidos o polipéptidos son mencionados colectivamente en la presente como "agentes defensivos"". Las moléculas de ácido nucleico que codifican a dichos agentes defensivos, asi como también vegetales transformados con las moléculas de ácido nucleico, se incluyen también. La invención está dirigida hacia composiciones y métodos para inducir resistencia a plagas vegetales en un vegetal. Los agentes defensivos comprenden secuencias de polipéptidos y de nucleótidos derivadas de insectos . Por consiguiente, las composiciones y métodos son también útiles en la protección de vegetales contra patógenos fúngicos, virus, nematodos, y los similares. Se proporcionan composiciones para controlar agentes patógenos vegetales, particularmente agentes microbianos patógenos vegetales, más particularmente agentes fúngicos patógenos vegetales. Composiciones específicas proporcionadas incluyen polipéptidos antimicrobianos derivados de insectos, y las moléculas de ácidos nucleicos que codifican a dichos polipéptidos. Se proporcionan vegetales, células vegetales, tejidos vegetales y semillas de los mismos transformadas con las secuencias de nucleótidos de la invención. Adicionalmente, las composiciones de la invención pueden ser usadas en formulaciones por sus actividades de resistencia a enfermedades . La presente invención se proporciona para moléculas de ácidos nucleicos aisladas que comprenden secuencias de nucleótidos que codifican a las secuencias de aminoácidos mostradas en la SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 22, 23, 25, 26, 28, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 41, 43, 44, 46, 47, 49, 50, 53, 53, 56, 58, 59, 61, 62, 64, 65, 67, 68, 70, 71, 73, 74, 76, 77, 79, 80, 82, 83, 85, 86, 88, 89, 91,92, 94, 95, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, o 127. Adicionalmente se proporcionan polipéptidos que tienen una secuencia de aminoácidos codificada por una molécula de ácido nucleico descrita en la presente, por ejemplo, aquella expuesta en las SEQ ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39, 42, 45, 48, 51, 54, 57, 60, 63, 66, 69, 72, 75, 78, 81, 84, 87, 90, 93, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, o 126, y fragmentos y variantes de las mismas . Se proporcionan métodos para la expresión de estas secuencias en un vegetal huésped para conferir resistencia mejorada a las enfermedades del vegetal huésped a patógenos vegetales, particularmente a patógenos fúngicos vegetales. Los métodos de la invención involucran transformar establemente un vegetal con al menos un "cassette" de expresión que comprende al menos una secuencia de nucleótidos de la invención unida operablemente con un promotor capaz de conducir la expresión de la secuencia de nucleótidos en la célula vegetal . Se reconoce que una variedad de promotores serán útiles en la invención, la selección de los cuales dependerá en parte del nivel deseado y de la localización de tejido de expresión deseada de las secuencias de nucleótidos descritas. Se reconoce que los niveles y localización de tejido de expresión pueden ser ' controlados para modular los niveles de los polipéptidos antimicrobianos en la célula vegetal para optimizar la resistencia a enfermedades vegetales a un patógeno particular. Por "patógenos vegetales" o "plagas vegetales", se pretende cualquier microorganismo que pueda causar daño a un vegetal, tales como inhibir o hacer más lento el crecimiento de un vegetal, al dañar los tejidos de un vegetal, al debilitar el sistema inmune de un vegetal o la resistencia de un vegetal a esfuerzos abióticos, y/o al causar la muerte prematura del vegetal, etc. Patógenos vegetales y plagas vegetales incluyen microbios tales como hongos, virus, bacterias y nematodos. Por "resistencia a enfermedades" o "resistencia a patógenos", se pretende que los vegetales evitan los síntomas de enfermedad los cuales son los resultados de interacciones patógenas vegetales. Esto es, se evita que los patógenos ocasionen enfermedades vegetales y los síntomas de enfermedades asociados, o alternativamente, los síntomas de enfermedades ocasionados por el patógeno son minimizados o reducidos. Los métodos de la invención pueden utilizarse para proteger a vegetales de enfermedades particularmente de aquellas enfermedades que son ocasionadas por patógenos fúngicos vegetales. Un "agente antimicrobiano", un "agente pesticida", un "agente defensivo", y/o un "agente funguicida", actuará similarmente para suprimir, controlar y/o matar al patógeno que invad . Un agente defensivo poseerá actividad defensiva. Por "actividad defensiva" se pretende una actividad antipatógena, antimicrobiana, o antifúngica. Por "composiciones antipatógenas" se pretende que las composiciones de la invención tienen actividad contra patógenos; incluyendo hongos, microorganismos, virus, y nematodos, y asi son capaces de suprimir, controlar, y/o matar a los organismos patógenos que invaden. Una composición antipatógena de la invención reducirá los síntomas de la enfermedad que resulta del desafio patógeno microbiano en al menos 5 % hasta aproximadamente 50 %, al menos aproximadamente 10 % hasta aproximadamente 60 %, al menos aproximadamente 30 % hasta aproximadamente 70 %, al menos aproximadamente 40 % hasta aproximadamente 80 %, o al menos aproximadamente 50 % hasta aproximadamente 90 % o superior. Por consiguiente, los métodos de la invención puede ser utilizada para proteger organismos, particularmente vegetales, de enfermedades, particularmente aquellas enfermedades que son causadas por patógenos invasores. Son comúnmente conocidos en el arte ensayos que miden la actividad antipatógena, como son los métodos para cuantificar la resistencia a enfermedades en vegetales después de la infección patógena. Ver, por ejemplo, la Patente EUA No. 5,614,395, incorporada a la presente como referencia. Dichas técnicas incluyen, medir durante el tiempo el diámetro promedio de la lesión, la biomasa patógena, y el porcentaje total de tejidos vegetales desintegrados. Por ejemplo, un vegetal ya sea gue expresa a un polipéptido antipatógeno o bien que tiene una composición antipatógena aplicada en su superficie, muestra una necrosis de tejido decreciente (es decir, diámetro de lesión) o una disminución en la muerte vegetal después del desafió patógeno en comparación con un vegetal control que no se ha expuesto a la composición antipatógena. Alternativamente, la actividad antipatógena puede ser medida por medio de una disminución en la biomasa patógena. Por ejemplo, un vegetal que expresa a un polipéptido antipatógeno o que es expuesta a una composición antipatógena es desafiada con un patógeno de interés. Durante el tiempo, se obtienen muestras de tejido de tejidos inoculados con patógeno y se extrae el RNA. El por ciento de un transcripto de RNA de patógeno especifico en relación al nivel de un transcripto especifico vegetal, permite que el nivel de la biomasa de patógeno sea determinado. Ver, por ejemplo, Toma y colaboradores (1998) Plant Biology 95:15107-15111, incorporado a la presente como referencia. Además, ensayos de funguicidas in vitro incluyen, por ejemplo, la adición de concentraciones variables de la composición funguicida a discos de papel y la colocación de los discos sobre agar que contenga una suspensión del patógeno de interés. Después de la incubación, se desarrollan zonas de inhibición claras alrededor de los discos que contienen una concentración efectiva del polipéptido funguicida (Liu y colaboradores (1994) Plant Biology 91:1888-1892, incorporado a la presente como referencia) . Se usan en el arte métodos adicionales para medir las propiedades funguicidas in vitro de una composición (Hu y colaboradores (1997) Plant Mol. Biol. 34: 949- 959; Cammue y colaboradores (1992) J. Biol. Chem. 267: 2228- 2223; y Thevissen y colaboradores (1996) J. Biol. Chem. 271: 15018 -15025, todos los cuales se incorporan a la presente como referencia) . Los patógenos de la invención incluyen, pero no se limitan a, virus o viroides, bacterias, insectos, nematodos, hongos, y los similares. Los virus incluyen cualquier virus vegetal, por ejemplo, virus mosaico de pepino o tabaco, virus de mosaico de manchas en anillo, virus de necrosis, virus mosaico de maíz enano, etc. Patógenos virales y fúngicos específicos para las cosechas principales incluyen: Soya : Phytophthora megaspexma f. Sp. Glycinea, Macrophomina phaseolina, Rhizoctonia solani, Sclerotinia. sclerotiorum, Fusarium oxysporum, Diaporthe phaseolorum var. Sojae (Phomopsis sojae) , Diaporthe phaseolorum var. caulivora, Sclerotiu rolfsii, Cercospora kikuchii , Cercospora sojina, Peronospora manshuricar Colletotrichum dematium (Colletotichum truncatum) , Corynespora cassiicola r Septoria glycines, Phyllosticta sojicola, Alternarla alternata, Pseudomonas syringae p.v. glycinea, Xanthomonas campestris p.v. phaseoli, Microsphaera difusa, Fusarium semitectum, Phialophora gregata, Virus mosaico de' soya, Glomerella glycines, virus mosaico de manchas en anillo del tabaco, Virus estriado del tabaco , Phakospora pachyrhizi , Pythium aphanidermatu , Pythium ultimun, Pythium debaryanum, Virus del tomate marchito en manchas, Heterodera glycines Fusarium solani; Cañóla: abugo candida. Alternarla brassicae, Leptosphaeria maculans, Rhizoctonia solani, Sclerotinia clerotiorun, Mycosphaerella brassiccola, Pythium ultimun, Pronospora parasítica, Fusarium roseum, alternaría alternata; Alfalfa: Clavibactermichiganensis subsp. Insidiosum, Pythium ultimun, Pythium irregulare, Pythium splendens, Pythium debaryanum, Pythium aphanidermatum, Phytophthora megasperma, Peronospora trifoliorum, Poma medicaginis var. Medicaginis, Cercospora medicaginis, Pseudopeziza medicaginis, Leptotrochila medicaginis, Fusarium, Xanthomonas campestris p.v. alfalfae, Aphanomyces euteiches, Stemphylium herbarum, Stemphylium alfalfae; Trigo : Pseudomonas syringae p.v. atrofaciens, ürocystis agropyri, Xanthomonas campestris p.v. translucens, Pseudomonas syringae p.v. syringae, Alternaría alternata, Cladosporium herbarum, Fusarium graminearum, Fusarium avenaceum, Fusarium culmorum, Ustilago tritici, Ascochyta tritici, Cephalosporium gra ineum, Collotetrichum graminicola, Erysiphe graminis f. Sp. Tritici , Puccinia graminis f. Sp, Tritici, Puccinia recóndita f. Sp. Tritici, Puccinia striiformis, Pyrenophora tritici-repentis, Septoria nodorum, Septoria tritici, Septoria avenae, Pseudocercosporella herpotrichoides, Rhizoctonia solani, Khizoctonia cerealis, Gaeumannomyces graminis var. Triticir Pythium aphanidermatum, > Pythium arrhenomanes, Pythium ultimunr Bipolaris sorokinianar Virus de la Cebada Amarilla Enana, Virus Mosaico de Cebadilla, Virus Mosaico del Trigo Arraigado, Virus Mosaico estriado de Trigo, Virus Estriado Fusiforme del Trigo, Virus Estriado del Trigo Americano, Claviceps purpurea, Tilletia laevis, Ustilago tritici, Tilletia indica, Khizoctonia solani, Pythium arrhenomanes, Pythium gramicola, Pythium aphanidermatum, Virus de las Planicies Altas, Virus estriado del trigo europeo; Girasol : Plasmophora halstedii, Sclerotinia sclerotium, Callistephus Amarillos, Septoria helianthi , Phomopsis helianthi, alternaría helianthi, Alternaría zinniae, Botrytis cinérea, Poma macdonaldii, Macrophonia phaseolina, Erysiphe Rhyzopus oryzae, Rhyzopus stolonifer, Puccinia helianthi, Verticillium dahliae, Erwinia carotovorum p.v. carotovora, Cephalosporium acremonium, Phytophthora cryptogea, Albugo tragopogonis; Maíz: Fusarium moniliforme vr. Subglutinans, Erwinia stewartii, Fusarium verticilloides, Fusarium moniliforme, Gibberella Zeae, (Fusarium graminearum) , Stenocarpella aydis (Diplodia maydis) , Pythium irregulare, Pythium debaryanum, Pythium graminicola, Pythium spendens, Pythium -ultimun, Pythium aphanidermatum, Aspergillus flavus, Bipolaris maydis 0, T (Cochliobolus heterostrophus) , Helminthosporium carbonum I, II & III (Cochliobolus carbonum), Excserohílum turcicum I, II & III, Helminthosporium pedicellatum, Physoderma maydis, Phyllosticta maydis, Kabatiella maydis, Cercospora sorghi , Ustilago maydis, Puccinia sorghi, Puccinia polysora, Macrophomina phaseolina, Penicilliu oxalicum, Nigrospora oryzae, Cladosporium herbarum, Curvularia lunata, Curvularia inaequalis, Curvularia pallescens, Clavibacter michiganense subsp. Nebraskense, Trichoderma viride. Virus A y B Mosaico de Maíz Enano, Virus Mosaico Estriado de Trigo, Virus de Maíz Clorótico Enano, Claviceps sorghi, Pseudomonas avenae, Erwinia chrysanthemi pv. Zea, Erwinia carotovora, Corn stunt spiroplasma, Diplodia macrospora, Sclerophthora macrospora, Peronosclerospora sorghi, Peronosclerospora philippinensis , Peronosclerospora maydis, Peronosclerospora sacchari, Sphacelotheca reiliana, Physopella zeae, Cephalosporium maydis, Cephalosporium acremonium, Virus del Maíz Clorótico Moteado, Virus de las Altas Planicies, Virus Mosaico de Maiz, Virus del Maíz Rayado Fino, Virus Estriado de Maiz, Virus Estriado de maiz, Virus de Maiz Veteado, Virus de Maiz Rugoso Enano; Sorgo: Exserohilum turcicum, Colletotruchum graminicola (Glomerella graminicola) , Cercospora sorghi, Gloeocercospora sorghi, Ascochyta sorghina, Pseudomonas syringae p.v. syringae, Xanthomonas campestris p.v. holcicola, Pseudomonas andropogonis, Puccinia purpurea, Macrophomina phaseolina, Periconina circinata, Fusarium moniliforme, Alternarla alternata, Bipolaris sorghicolar Helminthosporium sorghicola, Curvularia lunata, Poma insidiosa, Pseudomonas avenae, (Pseudomonas alboprecipitans) , Ramulispora sorghi, Ramulispora sorghicola, Phyllachara sacchari , Sporisorium reilianum (Sphacelotheca reiliana) , Sphaceolotheca cruenta, Sporisorium sorghi, Virus A & B Mosaico de Maíz Enano, Mosaico H de la Caña de Azúcar, Claviceps sorghi, Rhizoctonia solani, Acremonium strictum, Sclerophthora macrospora, Peronosclerospora sorghi, Peronosclerospora philippinensis, Sclerospora graminicola, Fusarium graminearum, Fusarium oxysporum, Pythium arrhenomanes, Pythium graminicola; Arroz : Mognaporthe grísea, Rhizoctonia solani, etc. Se ha demostrado que los agentes defensivos específicos de la invención tienen actividad antipatógena contra patógenos particulares. Se reconoce que pueden demostrar actividad contra otros patógenos, particularmente otros patógenos fúngicos. Algunos pueden igualmente exhibir actividad antipatógena de amplio espectro. Se reconoce que aunque polipéptidos antifúngicos pueden demostrar actividad contra una plaga particular, dichos agentes defensivos pueden tener actividad contra numerosos patógenos fúngicos, asi como también otras plagas vegetales. Asi, un vegetal transformado con un agente defensivo particular de la invención puede demostrar resistencia de amplio espectro. En una modalidad de la invención, agentes defensivos son aislados desde la hemolinfa de larvas de insectos inducidos por inyección de un hongo patógeno vegetal. Los polipéptidos antimicrobianos inducidos pueden ser colocados en al menos cuatro grupos conforme a su homología de secuencia de aminoácidos con clases de proteínas conocidas. Estos cuatro grupos consisten de la atacina, lebocina, y clases de proteínas inhibidoras de la serina proteasa, y un grupo que no demuestra homología substancial con proteínas conocidas. Los agentes defensivos mejoran la resistencia a las enfermedades por hongos patógenos, Magnathorpa grísea (M. grísea), Rhízoctonia solaní (R. solaní), y Fusaríum vertícílloídes (F. vertícílloides) . Específicamente, los polipéptidos de la invención fueron identificados desde la hemolinfa de larvas de insectos inducidos por inyección del hongo patógeno vegetal, M. grísea, R. Solaní, o F. Vertícílloídes . Las composiciones de la invención comprenden secuencias de aminoácidos y de ácidos nucleicos de M. sexta (cornudo del tabaco) , Heliothis virescens (oruga de las yemas de tabaco) , Ostrinia nubilalis (barrenillo del maíz Europeo), Peregrinus maydis . (distribuidor de la planta de maíz) , Helicoverpa zea (gusano del elote del maiz) , y Agrotis ípsilon (oruga podadera negra) . Particularmente, un cDNA de extensión total de M. sexta, designada en la presente, Magl (SEQ ID NO: 1), y la secuencia de aminoácidos correspondiente (SEQ ID NO: 2) ; un cDNA de extensión total de M. sexta, designada en la presente, Rhizoc2 o iimlc .pk003. f3 (SEQ ID NO: 3), y la secuencia de aminoácidos correspondiente (SEQ ID NO: 4) ; un cDNA parcial de M. sexta, designada en la presente, iiglc.pk004. f3 (SEQ ID NO: 5) , y la secuencia de aminoácidos correspondiente (SEQ ID NO: 6) ; un cDNA parcial de M. sexta, designádo en la presente imilc.pkOOl .h.7 (SEQ ID NO: 7), y la secuencia de aminoácidos correspondiente (SEQ ID NO: 8), un cDNA parcial de M. sexta, designada en la presente imilc.pk002.m21 (SEQ ID NO: 9), y la secuencia de aminoácidos correspondiente (SEQ ID NO: 10) ; un cDNA de extensión total de M. sexta, designado en la presente, Rhizocl (SEQ ID NO:ll), y la secuencia de aminoácidos correspondiente (SEQ ID NO: 12) ; un cDNA de extensión total de M. sexta, designado en la presente, Fusl (SEQ ID NO: 13) , y la secuencia de aminoácidos correspondiente (SEQ ID NO: 14) ; y un cDNA de extensión total de M. sexta, designado en la presente, Rhizoc3 (SEQ ID NO: 15), y la secuencia de aminoácidos correspondiente (SEQ ID NO: 16) . El polipéptido Magl maduro se aisló desde la hemolinfa de larvas de M. sexta inducidas por inyección del hongo patógeno vegetal M. grísea. El polipéptido precursor de Magl consiste de 206 aminoácidos. Este polipéptido pertenece a una amplia clase de proteínas inmunes de insectos conocidas como atacinas que fueron aisladas originalmente de Hyalophora cecropia. Un cDNA que codifica al polipéptido precursor de Magl (SEQ ID NO: 1) , se aisló subsecuentemente desde una biblioteca de cDNA derivada de los cuerpos grasos de M. sexta inducidos por patógenos. El polipéptido precursor de Magl comparte 78 % de similitud de secuencia con el precursor de atacina E/F (SEQ ID NO: 19, Figura 1) . Las proteínas de atacina son inducidas por inyección de insectos (en su mayoría especies de lepidopterano) con bacterias, y se ha demostrado que poseen propiedades antibacterianas (Kokum y colaboradores (1984) EMBO J. 3:2071- 2075; Engstrom y colaboradores (1984) EMBO J. 3: 2065-2070; Engstrom y colaboradores (1984) EMBO J. 3: 3347-3351; Bowman y colaboradores (1985) Dev. Comp. Immunol . 9: 551-558; Sun y colaboradores (1991) Eur. J. Biochem. 196: 247- 254; y Ko, K. (2000) http: //www. acisoc. org/ feature/ biotechnology/ antimicrobial . htlm) . El polipéptido Magl fue inducido por inyección de un insecto con un hongo patógeno vegetal, antes que por inducción con una bacteria. Además, el polipéptido Magl aislado demostró actividad fungicida a menos concentraciones contra el patógeno vegetal, M. grísea (ver el Ejemplo 1) . Además, los polipéptidos expuestos en las SEQ ID NOS: 6, 8, y 10, y codificados por los clones de cDNA, iiglc.pk004.f3, imilc.pkOOl .h7, y imilc.pk002.m21, respectivamente, son también homólogos de atacina. Estos polipéptidos presentan aproximadamente 48 a 62.3 % de identidad de secuencia con el polipéptido Magl (SEQ ID NO: 2) (ver la Figura 1) . Estos clones de cana fueron aislados de M. grises (iiglc.pk004.f3) y B. Bassiana (imilc.pkOOl .h7 y imilc .pk002.m21) inducidos por bibliotecas de cDNA derivados de M. sexta . Similar al polipéptido precursor de Magl, el polipéptido precursor de Rhizoc2 (SEQ ID NO: 3) también comparte homología de secuencia con la clase de proteínas de atacina. El polipéptido precursor de Rhizoc2 comparte 75 % de similitud de secuencia y 68 % de identidad de secuencia con la proteína del precursor de atacina E/F mostrada en la Figura 1 (SEQ ID NO: 19) . El cDNA que codifica al polipéptido precursor de Rhizoc2 (SEQ ID NO: 3) se aisló desde una biblioteca de cDNA de los cuerpos grasos de M. sexta inducidos por R. Solani. El polipéptido precursor de Rhizoc2 consiste de 196 aminoácidos y el polipéptido maduro demuestra actividad funguicida a bajas concentraciones contra el patógeno vegetal R. Solani (ver el Ejemplo 1) . El cDNA parcial, imilc .pkOOl .h7 identificado desde una biblioteca de M. sexta inducida por B. Bassiana es un fragmento de la secuencia de Rhizoc2. Otro polipéptido, designado Rhizocl, con homología con la clase de lebocina de proteínas inmunes de insecto, fue aislado de manera similar -desde la hemolinfa de larvas de M. sexta inducida por inyección del hongo patógeno vegetal, R. Solani. Un cDNA que codifica al polipéptido precursor de Rhizocl (SEQ ID NO: 11) fue aislado subsecuentemente desde una biblioteca de cDNA de los cuerpos grasos de M. sexta inducido por M. grísea. El polipéptido precursor de Rhizoc 1 consiste de 142 aminoácidos y comparte 65 % de similitud de secuencia y 61 % de identidad de secuencia con la proteína precursora de lebocina 4 (No. de Acceso: JC5666) .

El polipéptido de Rhizocl demuestra actividad funguicida a menos concentraciones contra los patógenos vegetales, R. Solani y F. Verticilloides (ver el ejemplo 1) . A diferencia de otros elementos de la clase lebocina de polipéptidos, el polipéptido de Rhizocl fue inducido desde la inyección de un insecto con un patógeno fúngico vegetal, a diferencia de por inducción con una bacteria.

Verdaderamente, se ha demostrado que otros polipéptidos de lebocina poseen propiedades funguicidas en vez de antibacterianas (Hará y Yamakawa (1995) Biochem. J. 310: 651- 656; Chowdhury, S. y colaboradores (1995) Biochem. Biophys. Res. Com. 214: 271- 278; y Furukawa, S. Y colaboradores (1997) Biochem. Biophys. Res. Com. 238: 769-774) . Se han identificado homólogos de Rhizocl adicionales. Las secuencias de nucleotidos de los homólogos de Rhizocl se exponen en las SEQ ID NOS: 27, 33, 45, 48, 51, 72, 81, y 84. Las secuencias de aminoácidos de los homólogos de Rhizocl se exponen en las SEQ ID NOS: 28, 29, 34, 35, 46, 47, 49, 50, 52, 53, 74, 82, 83, 85 y 86. Un polipétido maduro, designado Fusl, se aisló desde la hemolinfa de larvas de M. sexta inducidas por inyección del hongo patógeno vegetal, F. Verticilloides . Este polipéptido demuestra actividad funguicida a menos concentraciones contra el patógeno vegetal F. Verticilloides (ver el Ejemplo 1) . Un cDNA que codifica al polipéptido Fusl maduro y parte de la secuencia de señal (SEQ ID NO: 13) fue aislada subsecuentemente desde una biblioteca de cDNA derivada desde los cuerpos grasos de M. sexta inducida por M. grísea. El polipéptido Fusl de la invención es homólogo a varias proteínas aisladas desde especies de insectos que pertenecen a la clase de proteínas conocidas como las inhibidoras de la serina proteasa (Frobius y colaboradores (2000) Eur. J. Biochem. 267: 2046- 2053; Armes y colaboradores (1988) J. Biol. Chem. 263: 11523- 1127; y Sasaki, T. (1988) Biol. Chem. 369: 1235- 1241). El polipéptido Fuál tiene aproximadamente 47 % de similitud de secuencia con estas proteínas. Los polipéptidos identificados por Frobius y colaboradores fueron aislados desde la hemolinfa de Gallería mellonemma después de inyección de larvas con una preparación polisacárida de levadura, y demostraron inhibición de serina proteasas desde el hongo entomopatógeno, Metarhizium anlsopliae, un insecto patógeno. Se creó una secuencia de nucleótidos de Fusl desviada del codon unida a la secuencia de señal BAA. la secuencia de nucleótidos de Fusl desviada del codón fue desarrollada de acuerdo con el codón de elección de M. sexta. La secuencia de nucleótidos de Fusl-??? desviada del codón se expone en la SEQ ID NO: 120 y la secuencia de Fusl desviada del codón es expuesta en la SEQ ID NO: 122. La secuencia de aminoácidos del polipéptido Fusl-??? se expone en la SEQ ID NO: 121 y la SEQ ID NO: 123. Se han identificado homólogos de Fusl adicionales. Las secuencias de nucleótidos de los homólogos de Fusl se exponen en las SEQ ID NOS: 21, 36, y 78. Las secuencias de aminoácidos de los homólogos de Fusl se exponen en las SEQ ID NOS: 22, 23, 37, 38, 79, y 80. Un polipéptido maduro designado, Rhizoc3, se aisló desde la hemolinfa desde larvas de M. sexta inducidas por inyección del hongo patógeno vegetal, R. Solani. Este polipéptido demostró actividad funguicida a menos concentraciones contra el patógeno vegetal, R. Solani (ver el Ejemplo 1) . Un cDNA que codifica al polipéptido precursor de Rhizoc3 (SEQ ID NO: 15) fue aislado subsecuentemente desde una biblioteca de cDNA derivada de los cuerpos grasos de M. sexta inducido por M. grísea. El polipéptido precursor de Rhizoc3 consiste de 61 aminoácidos y no demuestra homología de secuencia con cualquier proteina conocida. Se identificaron homólogos de Fus4. Las secuencias de nucleótidos de los homólogos de Fus4 se exponen en las SEQ ID NOS: 24, 30, 39, 42, 54, 57, 60, 63, 66, 69, 75, 87, 90, y 93. Las secuencias de aminoácidos de los homólogos de Fus4 se exponen en las SEQ ID NOS: 25, 26, 31, 32, 40, 41, 43, 44, 55, 56, 58, 59, 61, 62, 64, 65, 67, 68, 70, 71, 76, 77, 88, 89, 91, 92, 94, y 95. Se identificaron polipéptidos adicionales activos contra especies de Fusarium desde Agrotis Ípsilon. Las secuencias de nucleótidos de Fus6, Fus7, Fus8, Fus9, y FuslO se exponen en las SEQ ID NOS: 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, y 118. Las secuencias de aminoácidos de los polipéptidos Fus6, Fus7, Fus8, Fus9, y FuslO se exponen en las SEQ ID NOS: 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, y 119. Se creó una secuencia de nucleótidos de Fus2 desviada del codón unida a la secuencia de señal ?¾?. La secuencia de nucleótidos de Fus2-B-¾A desviada del codón se expone en la SEQ ID NO: 124 y la secuencia de Fus2 desviada del codón se expone en la SEQ ID NO: 126. La secuencia de aminoácidos del polipéptido Fus2-BAA se expone en las SEQ ID NO: 125 y SEQ ID NO: 127. Los polipéptidos codificados por las secuencias de nucleótidos de la invención pueden ser procesados en polipéptidos maduros como se discutió en otra parte de la presente. La región desde el nucleótido 169 al nucleótido 298 de la SEQ ID NO: 11 codifica al péptido de R izocl maduro. La región del nucleótido 58 al nucleótido 624 de la SEQ ID NO: 3 codifica al péptido de Rhizoc2 maduro. La región del nucleótido 86 al nucleótido 208 de la SEQ ID NO: 15 codifica al péptido de Rhizoc3 maduro. La región desde el nucleótido 46 al nucleótido 216 de la SEQ ID NO: 13 codifica al péptido de Fusl maduro. La secuencia de nucleótidos expuesta en la SEQ ID NO: 102 codifica al péptido de Fus 6 maduro, cuya secuencia de aminoácidos es expuesta en la SEQ ID NO: 103. Las secuencia de nucleótidos expuesta en la SEQ ID NO: 106 codifica al péptido de Fus7 maduro, cuya secuencia de aminoácidos se expone en la SEQ ID NO: 107. La secuencia de nucleótidos expuesta en la SEQ ID NO: 110 codifica al péptido Fus8 maduro, cuya secuencia de aminoácidos se expone en la SEQ ID NO: 111. La secuencia de nucleótidos expuesta en . SEQ ID NO: 114 codifica al péptido de Fus9 maduro, cuya secuencia de aminoácidos se expone en la SEQ ID NO: 115. La secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO: 118 codifica al péptido de FuslO maduro, cuya secuencia de aminoácidos se expone en la SEQ ID NO: 119. Fragmentos y variantes de las secuencias de nucleótidos y polipéptidos descritos codificados asi, son abarcados por la presente invención. Por "fragmento" se pretende una porción de una secuencia de nucleótidos o de una porción de la secuencia de aminoácidos. Fragmentos de una secuencia de nucleótidos pueden codificar a fragmentos de polipéptidos que retienen la actividad biológica de la proteina nativa y por consiguiente poseen actividad funguicida y antimicrobiana. Por "actividad antimicrobiana" o "actividad funguicida" se pretende la habilidad de suprimir, controlar, y/o matar al microbio u hongo patógeno invasor, respectivamente. Una composición de la invención que posee actividad funguicida o antimicrobiana reducirá los síntomas de enfermedades que resultan del desafio de patógenos funguicidas o microbianos en al menos 5 % hasta aproximadamente 50 %, al menos aproximadamente 10 % hasta aproximadamente 60 %, al menos aproximadamente 30 % hasta aproximadamente 70 %, al menos aproximadamente 40 % hasta aproximadamente 80 %, o al menos 50 % hasta aproximadamente 90 % o mayor. Alternativamente, fragmentos de una secuencia de nucleótidos que son útiles como sondas de hibridación generalmente no codifican a proteínas de los fragmentos que retienen la actividad biológica. Así, fragmentos de una secuencia de nucleótidos pueden variar desde al menos aproximadamente 20 nucleótidos, aproximadamente 50 nucleótidos, aproximadamente 100 nucleótidos, y hasta la secuencia de nucleótidos de extensión total que codifica a las proteínas de la invención. Alternativamente, fragmentos de una secuencia de nucleótidos de la invención pueden codificar a fragmentos de polipéptido que son antigénicos, así, son capaces de provocar una respuesta inmune. Un "polipéptido antigénico" se define en la presente como un polipéptido que es capaz de generar un anticuerpo. Se abarcan en esta invención, fragmentos de polipéptido antigénico de las secuencias de aminoácidos descritas. Un fragmento de nucleótidos de la SEQ ID NO: 1 que codifica a una porción antigénica o activa biológicamente de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 1 (Magl) , codificará a al menos 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 150, o 200 aminoácidos contiguos, o hasta el número total de aminoácidos ,(206) presentes en la SEQ ID NO : 2. Un fragmento de nucleótidos de la SEQ ID NO: 3 que codifica a una porción antigénica o activa biológicamente de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 4 (Rhizoc2) , codificará a al menos 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, o 190 aminoácidos contiguos, o hasta el número total de aminoácidos (196) presente en la SEQ ID NO: 4. Un fragmento de nucleótido de la SEQ ID NO: 5 que codifica a una porción antigénica o activa biológicamente de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 6 (iiglc .pk004. f3 ) , codificará a al menos 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, o 70 aminoácidos contiguos, o hasta el número total de aminoácidos (80) presente en la SEQ ID NO: 6. Un fragmento de nucleótido de la SEQ ID NO: 7 que codifica a una porción antigénica o activa biológicamente de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 8 (imilc.pkOOl ,h7) , codificará a al menos 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, o 110 aminoácidos contiguos, o hasta el número total de aminoácidos (111) presente en la SEQ ID NO: 8. Un fragmento de nucleótido de la SEQ ID NO: 9 que codifica a una porción antigénica o activa biológicamente de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10 (imilc.pk002.m21) , codificará a al menos 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130 o 140 aminoácidos contiguos, o hasta el número total de aminoácidos (148) presente en la SEQ ID NO: 10. Un fragmento de nucleótido de la SEQ ID NO: 11 que codifica a una porción antigénica o activa biológicamente de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 (Rhizocl) , codificará a al menos 15, 20, 25, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 130, o 140 aminoácidos contiguos, o hasta el número total de aminoácidos (142) presente en la SEQ ID NO: 12. Un fragmento de nucleótido de la SEQ ID NO: 13 que codifica a una porción antigénica o activa biológicamente de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 14 (Fusl) , codificará a al menos 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, o 70 aminoácidos contiguos, o hasta el número total de aminoácidos (71) presente en la SEQ ID NO: 14. Un fragmento de nucleótido de la SEQ ID NO: 15 que codifica a una porción antigénica o activa biológicamente de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID ÑO: 16 (Rhizoc3) , codificará a al menos 5, 10, 15, 10, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, o 60 aminoácidos contiguos, o hasta el número total de aminoácidos (61) presente en la SEQ ID NO: 16.

Un fragmento de nucleótido de la SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39, 42, 45, 48, 51, 54, 57, 60, 63, 66, 69, 72, 75, 78, 81, 84, 87, 90, 93, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, o 126 que codifica a una porción antigénica o activa biológicamente de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 22, 23, 25, 26, 28, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 41, 43, 44, 46, 47, 49, 50, 52, 53, 55, 56, 58, 59, 61, 62, 64, 65, 67, 68, 70, 71, 73, 74, 76, 77, 79, 80, 82, 83, 85, 86, 88, 89, 91, 92, 94, 95, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, o 127, codificará al menos a 5, 10, 15/ 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, o 55 aminoácidos contiguos, o hasta el número total de aminoácidos presente en la SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 22, 23, 25, 26, 28, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 41, 43, 44, 46, 47, 49, 50, 52, 53, 55, 56, 58, 59, 61, 61, 64, 65, 67, 68, 70, 71, 73, 74, 76, 77, 79, 80, 82, 83, 85, 86, 88, 89, 91, 92, 94, 95, 101, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, o 127. Una porción activa biológicamente de una secuencia de polipéptidos expuesta en la SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 22, 23, 25, 26, 28, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 41, 43, 44, 46, 47, 49, 50, 52, 53, 55, 56, 58, 59, 61, 62, 64, 65, 67, 68, 70, 71, 73, 74, 76, 77, 79, 80, 82, 83, 85, 86, 88, 89, 91, 92, 94, 95, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, o 127 puede ser preparada aislando una porción de una de las secuencias de nucleótidos expuestas en la SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39, 42, 45, 48, 51, 54, 57, 60, 63, 66, 69, 72, 75, 78, 81, 84, 87, 90, 93, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, o 126, que .expresan a la porción codificada del polipéptido (por ejemplo, por expresión recombinante in vitro) , y que evalúa la actividad de la porción codificada del polipéptido. Alternativamente, fragmentos de una secuencia de nucleótidos que son útiles como sondas de hibridación generalmente no codifican a los polipéptidos del fragmento que retienen la actividad biológica. Asi, fragmentos de una secuencia de nucleótidos pueden variar desde al menos aproximadamente 15 nucleótidos, aproximadamente 30 nucleótidos, aproximadamente 50 nucleótidos, aproximadamente 100 nucleótidos, y hasta la secuencia de nucleótidos de extensión total que codifica a los polipéptidos de la invención. Fragmentos de la secuencia de nucleótidos expuesta en la SEQ ID NO: 1, desde el nucleótido 4 al 621, pueden variar desde al menos 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 125, 150, 200, 300, 400, o 500 nucleótidos contiguos, o hasta el número total de nucleótidos presentes (618) en la SEQ ID NO: 1 que codifican a la SEQ ID NO: 2 (Magl) . Fragmentos de la secuencia de nucleótidos expuesta en la SEQ ID NO: 3, desde el nucleótido 34 hasta el 624, puede variar desde al menos 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 125, 150, 200, 300, 400 o 500 nucleótidos contiguos, o hasta el número total de nucleótidos (588) presentes en la SEQ ID NO: 3 que codifican a la SEQ ID NO: 4 (Rhizoc2) . Fragmentos de la secuencia de nucleótidos expuestos en la SEQ ID NO: 5 (iiglc .pk00 . f3 ) , desde el nucleótido 4 hasta el 249, pueden variar desde al menos 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 125, 150, o 200 nucleótidos contiguos, o hasta el número total de nucleótidos (240) presentes en la SEQ ID NO: 5 que codifican a la SEQ ID NO: 6. Fragmentos de la secuencia de nucleótidos expuesta en la SEQ ID NO: 7 (imil.pk001.h7), desde el nucleótido 4 al 336, pueden variar desde al menos 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 125, 150, 200, 250, o 300 nucleótidos contiguos, o hasta el número total de nucleótidos (333) presentes en la SEQ ID NO: 7 que codifican a la SEQ ID NO: 8. la SEQ ID NO: 7 es un fragmento de la secuencia de nucleótidos expuesta en la SEQ ID NO: 3. Fragmentos de la secuencia de nucleótidos expuesta en la SEQ ID NO: 9 (imilc .pk002.m21 ) , desde el nucleótido 4 hasta el 447, pueden variar desde al menos 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 125, 150, 200, 250, 300, 350, o 400 nucleótidos contiguos, o hasta el número total de nucleótidos (444) presentes en SEQ ID NO: 9 que codifican a la SEQ ID NO: 10. Fragmentos de la secuencia de nucleótidos expuesta en la SEQ ID NO: 11 (Rhizocl) , desde el nucleótido 28 al 456, pueden variar desde al menos 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 125, 150, 200, 250, 300, 350, o 400 nucleótidos contiguos, o hasta el número total de nucleótidos (426) presentes en la SEQ ID NO: 11 que codifican a la SEQ ID NO: 12. Fragmentos de la secuencia de nucleótidos expuesta en la SEQ ID NO: 13 (Fusl) , desde el nucleótido 22 al 237, pueden variar desde al menos 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 125, 150, 175, o 200 nucleótidos contiguos, o hasta el número total de nucleótidos (216) presentes en la SEQ ID NO: 13 que codifican a la SEQ ID NO: 14. Fragmentos de la secuencia de nucleótidos expuesta en la SEQ ID NO: 15 (Rhizoc3), desde el nucleótido 23 al 208, pueden variar desde al menos 15, 20, 30, 40, 50, 60,70, 80, 90, 100, 125, o 150 nucleótidos contiguos, o hasta el número total de nucleótidos (183) presentes en la SEQ ID NO: 15 que codifica SEQ ID NO: 16. Fragmentos de la Secuencia de nucleótidos expuesta en la SEQ ID NO: 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39, 42, 45, 48, 51, 54, 57, 60, 63, 66, 69, 72, 75, 78, 81, 84, 87, 90, o 93 puede variar desde al menos 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 125, o 150 nucleótidos contiguos, o hasta el número total de nucleótidos presentes en la SEQ ID NO: 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39, 42, 45, 48, 51, 54, 57, 60, 63, 66, 69, 72, 75, 78, 81, 84, 87, 90, o 93 que codifican a la SEQ ID NO: 22, 23, 25, 26, 28, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 41, 43, 44, 46, 47, 49, 50, 52, 53, 55, 56, 58, 59, 61, 62, 64, 65, 67, 68, 70, 71, 73, 74, 76, 77, 79, 80, 82, 83, 85, 86, 88, 89, 91, 92, 94, o 95, respectivamente. Fragmentos de la secuencia de nucleótidos expuesta en la SEQ ID NO: 100 (Fus6) , desde el nucleótido 1 al 195, pueden variar desde al menos 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 125, 150, 175, 180, 185, 190, o 195 nucleótidos contiguos, o hasta el número total de nucleótidos (358) presentes en la SEQ ID NO: 100 que codifican a la SEQ ID NO: 101. Fragmentos de la secuencia de nucleótidos expuesta en la SEQ ID NO: 104 (Fus7) , desde el nucleótido 1 al 95, pueden variar desde al menos 15, 20, 30, 40, 50,, 60, 70, 80, 90, 100, 125, 150, 175, 180, 185, 190, o 195 nucleótidos contiguos, o hasta el número total de nucleótidos (387) presentes en la SEQ ID NO: 104 que codifican a la SEQ ID NO: 105. Fragmentos de la secuencia de nucleótidos expuesta en í la SEQ ID NO: 108 (Fus8) , desde el nucleótido 1 al 195, pueden variar desde al menos 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90,100, 125, 150, 175, 180, 185, 190, o 195 nucleótidos contiguos, o hasta el número total de nucleótidos (361) presentes en la SEQ ID NO: 108 que codifican a la SEQ ID NO: 109. Fragmentos de la secuencia de nucleótidos expuesta en la SEQ ID NO: 112 (Fus9) , desde el nucleótido 1 al 195, pueden variar desde al menos 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 125, 150, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, o 291 nucleótidos contiguos, o hasta el número total de nucleótidos (466) presentes en la SEQ ID NO: 112 que codifican a la SEQ ID NO: 113. Fragmentos de la secuencia de nucleótidos expuesta en la SEQ ID NO: 116 (FuslO) , desde el nucleótido 1 al 195, pueden variar desde al menos 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 125, 150, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 210, o 220 nucleótidos contiguos, o hasta el número total de nucleótidos (372) presentes en la SEQ ID NO: 116 que codifican a la SEQ ID NO: 117. La invención abarca composiciones de proteínas o ácidos nucleicos substancialmente purificadas o aisladas. Una proteína o molécula de ácido nucleico "purificada" o "aislada", o porción biológicamente activa de la misma, está substancialmente libre de otro material celular, o de medio de cultivo cuando se producen por técnicas recombinantes , o substancialmente libres de precursores químicos o de otros químicos cuando se sintetizan químicamente. Preferiblemente, un ácido nucleico "aislado" está libre de secuencias (preferiblemente secuencias codificadoras de proteínas) que flanquean naturalmente al ácido nucleico (es decir, secuencias localizadas en los extremos 5' y 3' del ácido nucleico) en el DNA genómico del organismo del cual se deriva el ácido nucleico. Por ejemplo, en varias modalidades, la molécula de ácido nucleico aislada puede contener menos de aproximadamente 5 kb, 4 kb, 3 kb, 2 kb, 1 kb, 0.5 kb, o 0.1 kb de secuencias de nucleótidos que flanquean de manera natural a la molécula de ácido nucleico en el DNA genómico de la célula de la cual se deriva el ácido nucleico . Una proteína que está substancialmente libre de material celular incluye preparaciones de proteína que tienen menos de aproximadamente 30 %, 20 %, 10 %, 5 , (en peso seco) de proteína contaminante. Cuando la proteína de la invención o la porción activa biológicamente de la misma es producida recombinantemente, preferiblemente el medio de cultivo representa menos de aproximadamente 30 %, 20 %, 10 %, o 5 % (en peso seco) de precursores químicos o no proteínas de interés químico.

Por "variantes" se pretende substancialmente secuencias similares. Para secuencias de nucleótidos variantes conservadoras incluyen aquellas que, a causa de la degeneración del código genético, codifican a la secuencia de aminoácidos de uno de los polipéptidos de la invención. Las variantes alélicas se encuentran de manera natural de modo que éstas pueden ser identificadas con el uso de técnicas de biología molecular bien conocidas, como, por ejemplo, con la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y de hibridación como se resume posteriormente. Secuencias de nucleótidos variantes también incluyen secuencias de nucleótidos derivadas sintéticamente, tal como las generadas, por ejemplo, por uso de la mutagénesis en sitio dirigido pero que aún codifica a un polipéptido de la invención. Generalmente, variantes de una secuencia de nucleótidos particular de la invención tendrán al menos 40 %, 50 %, 60 %, 65 70 %r % , 80 %, í 35 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 96 %, %, 08 %, 99 %, o más de identidad de secuencia de la secuencia de nucleótidos particular como se determina por medio del programa de alineación de secuencias descrito en alguna otra parte de la presente, usando los parámetros faltantes . Por polipéptido "variante" se pretende un polipéptido derivado del polipéptido nativo por eliminación ( también llamada truncación) o adición de uno o más aminoácidos en el extremo N- terminal y/o C- terminal del polipéptido nativo; eliminación o adici'pn de uno o más aminoácidos en uno o más sitios en el polipéptido nativo; o substitución de uno o más aminoácidos en uno o más sitios en el polipéptido nativo. Los polipéptidos variantes abarcados por la presente invención son activos biológicamente, esto es, continúan poseyendo la actividad biológica deseada del polipéptido nativo, por consiguiente, continuarán poseyendo actividad funguicida y/o antibacteriana. Dichas variantes pueden resultar de, por ejemplo, polimorfismo genético o de manipulación humana. Variantes activas biológicamente de un polipéptido nativo de la invención tendrán al menos 40 %, 50 %, 60%, 70 %, 75 %, 80 %, 85 , 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 , 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o más identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos por el polipéptido nativo como se determina por medio del programa de alineación de secuencias descrito en otra parte de la presente, usando parámetros faltantes. Una variante activa biológicamente para los polipéptidos de la invención pueden diferir de los polipéptidos por tan pocos como 1-15 residuos de aminoácidos, tan pocos como 1- 10, tales como 6 - 10, tan pocos como 5, tan pocos como 4, 3, 2, o aún 1 residuo de aminoácido Puede ensayarse la actividad biológica de los polipéptidos de la invención por medio de cualquier método en el arte (ver por ejemplo, la Patente EUA No. 5,614,395; Thomma y colaboradores (1998) Plant Biology 95: 15107 -15111; Liu y colaboradores (1994) Plant Biology 91:1888-1892; Hu y colaboradores (1997) Plant Mol. Biol. 34: 949 -959; Cammue y colaboradores (1992) J. Biol. Chem. , 267: 2228-2233: y Thevissen y colaboradores (1996) J. Biol. Chem. 271: 15018 - 15025, todos los cuales se incorporan a la presente como referencia) . Los polipéptidos de la invención pueden ser alterados de varias maneras que incluyen substituciones, eliminaciones, truncaciones, e inserciones de aminoácidos. Los métodos para tales manipulaciones son conocidos en el arte. Por ejemplo, variantes de la secuencia de aminoácidos del polipéptido de la invención pueden ser preparados por mutaciones en el DNA. Los métodos para la mutagénesis y las alteraciones de secuencias de nucleótidos son bien conocidos en el arte. Ver por ejemplo, unkel (1985) Proc. Nati. Acad. Sci . USA 82: 488 - 492; Kunkel y colaboradores (1987) Methods of Enzy ol. 154: 367- 382; Patente EUA NO. 4, 873,192; Walker y Gastar, eds . (1983) Techniques in Molecular Biology (Mac Millan Publishing Company, New York) y las referencias citadas en la presente. Pueden encontrarse Guias para substituciones de aminoácidos apropiadas que no afectan la actividad biológica del polipéptido de interés en el Modelo de Dayhoff y colaboradores (1978) Atlas of Protein Secuence and Structure (Nati. Biomed. Res. Found. , Washington, O.C.) , incoporados a la presente como referencia. Pueden preferirse substituciones conservadoras, tales como el intercambio de un aminoácido con otro que tenga propiedades similares . Asi, los genes y las secuencias de nucleótidos de la invención incluyen tanto las secuencias como se encuentran de manera natural como formas imitantes. Asimismo, los polipéptidos de la invención abracan tanto los polipéptidos como se encuentran de manera natural como formas modificadas y variaciones de los mismos. Dichas variantes continuarán poseyendo la actividad funguicida, o en algunos casos antimicrobiana deseada. Obviamente, las mutaciones que se harán en el DNA que codifica a la variante no deberán colocar a la secuencia afuera del marco de lectura y preferiblemente no deberán de crear regiones complementarias que podrían producir estructura de mRNA secundaria. Ver, la Publicación de Solicitud de Patente No. 75, 44. No se espera que las eliminaciones, inserciones, y substituciones de las secuencias de polipéptidos abarcadas en la presente produzcan cambios radicales en las características del polipéptido. No obstante, cuando es difícil predecir el efecto exacto de la substitución, eliminación, o inserción antes de hacerlo, un experto en la materia apreciará que se evaluará el efecto por medio de ensayos de cribado rutinarios para la actividad antimicrobiana y/o fungicida como se menciona en supra. Secuencias de nucleótidos y polipéptidos variantes también abarcan secuencias y polipéptidos derivados de un procedimiento mutagénico y recombinogénico tal como de redistribución de DNA. Con un procedimiento tal, una o más secuencias codificadoras diferentes en las moléculas de ácido nucleico descritas en la SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39, 42, 48, 51, 54, 57, 60, 63, 66, 69, 72, 75, 78, 81, 84, 87, 90, 93, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, o 126 pueden ser manipuladas para crear unos nuevos polipéptidos que posean las propiedades deseadas. De esta manera, se generan bibliotecas de polinucleótidos recombinantes desde una población de polinucleótidos de secuencias relacionadas que comprenden regiones de la secuencia que tienen identidad de secuencia substancial y pueden ser recombinadas homologamente in vitro o in vivo. Por ejemplo, usando este procedimiento, motivos de secuencia que codifican a una región de interés pueden ser redistribuidos entre las moléculas de ácidos nucleicos de la invención y otros antimicrobianos conocidos que codifican secuencias de nucleótidos para obtener una nueva secuencia de nucleótidos que codifica para un polipéptido con una propiedad mejorada de interés, tal como propiedades funguicidas y/o antimicrobianas incrementadas a concentraciones o especificidad de polipéptido inferiores por patógenos vegetales particulares. Por ejemplo, una especificidad por un patógeno fúngico vegetal particular que incluyen, pero no se limitan a, patógenos tales como M. grísea y F. Verticilloides . Las estrategias para dicha redistribución de DNA son conocidas en el arte. Ver, por ejemplo, Stemmer (1994) Proc. Nati. Acad. Sel. USA 91: 10747 - 10751; Stemmer (1994) Nature 370: 389 - 391; Crameri y colaboradores (1997) Nature Biotech. 15: 436 438; Moore y colaboradores (1997) J. Mol. Biol. 272: 336 -347; Zhang y colaboradores (1997) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 94:4504-4509; Crameri y colaboradores (1998) Nature 391: 288- 291; y la Patentes EUA Nos. 5,605,793 y 5, 837, 458. Las secuencias de nucleótidos de la invención pueden ser usadas para aislar las secuencias correspondientes desde otros organismos, particularmente de otros insectos. De esta manera, métodos tales como PCR, hibridación, y los similares, pueden ser usados para identificar dichas secuencias, basados en su homología de secuencia a las secuencias expuestas en la presente. Las secuencias aisladas con base en su identidad de secuencia a las secuencias de nucleótidos de extensión total expuestas en la presente o a fragmentos de las mismas son abracadas por la presente invención. Dichas secuencias incluyen secuencias que son ortólogas de las secuencias descritas. Por ""ortólogas" se pretende genes derivados de un gen ancestral común y que se encuentran en diferentes especies como un resultado de la formación de especies. Los genes encontrados en diferentes especies se consideran ortólogos cuando sus secuencias de nucleótidos y/o sus secuencias de polipéptidos codificadas comparten identidad substancial como se define en otra parte de la presente. Las funciones de los ortólogos son a menudo muy conservadas entre las especies. Asi, son abracadas en la presente invención, las secuencias aisladas que codifican a una proteina antimicrobiana y que hibridizan bajo condiciones restrictivas a las secuencias de nucleótidos descritas en la presente, o a fragmentos de éstas. En un procedimiento de PCR, pueden diseñarse cebadores de oligonucleótidos para uso en reacciones de PCR para amplificar las secuencias de DNA correspondientes desde cDNA o DNA genómico extraídos desde cualquier insecto de interés. Métodos para diseñar cebadores de oligonucleótidos y de clonación por PCR son generalmente conocidos en el arte y se describen en Sambrook y colaboradores (1989) Molecular Clonlng: A Laboratory Manual (2a. Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainview, New York) . Ver también Innis. y colaboradores, ed. (1990) PCR Protocole: A Gulde to Methods and Applications (Academic Press, New York); Innis y Gelfand, Eds. (1995) PCR Strategies (Academic Press, New York); e Innis y Gelfand, Eds. (1999) PCR Methods Manual (Academic Press, New York) . Métodos conocidos de PCR incluyen, pero no se limitan a métodos que utilizan cebadores emparejados, cebadores encajados, cebadores específicos únicos, cebadores degenerados, cebadores específicos del gen, cebadores específicos del vector, cebadores disparejos parcialmente, y los similares . En técnicas de hibridación, toda o parte de la secuencia de nucleótidos conocida se usa como una sonda que híbrida selectivamente a otras secuencias de nucleótidos correspondientes presentes en una población de fragmentos de DNA genómico o fragmentos de cDNA clonados (es decir, bibliotecas de cDNA o genómico) desde un organismo seleccionado. Las sondas de hibridación pueden ser fragmentos de DNA genómico, fragmentos de cDNA, fragmentos de RNA, u otros oligonucleótidos, y pueden ser marcados con un grupo detectable tal como 32P, o cualquier otro marcador detectable. Así, por ejemplo, pueden elaborarse sondas para hibridación por medio de oligonucleótidos sintéticos marcadores basados en las secuencias resistentes a enfermedades de la invención. Métodos para preparación de sondas para hibridación y para construcción de bibliotecas de cDNA y genómica son generalmente conocidas en el arte y se describen en Sambrook y colaboradores (1989) Molecular Clonlng: A Laboratory Manual (2a. ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainview, New York) . Por ejemplo, una secuencia de nucleótidos completa descrita en la presente o una o más porciones de la misma, pueden ser usadas como una sonda capaz de hibridar específicamente a las secuencias de nucleótidos correspondientes y de RWA reportero. Para lograr la hibridación específica bajo una variedad de condiciones, dichas sondas incluyen secuencias que son únicas entre las secuencias de nucleótidos de la invención y son preferiblemente al menos aproximadamente de 10 nucleótidos de extensión, y más preferiblemente de 20 nucleótidos de extensión. Dichas sondas pueden ser usadas para amplificar las secuencias correspondientes desde un organismo seleccionado por PCR. Esta técnica puede ser usada para aislar secuencias codificadoras adicionales desde un organismo deseado o como un ensayo de diagnóstico para determinar la presencia de secuencias codificadoras en un organismo. Las técnicas de hibridación incluyen cribado por hibridación de bibliotecas de DNA cultivadas en placa (ya sea placas o colonias; ver por ejemplo, Sambrook y colaboradores (1989) Molecular Cloning: a Laboratory Manual (2a. Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainview, New York) . La hibridación de dichas secuencias puede llevarse a cabo bajo condiciones restrictivas. Por ^condiciones restrictivas" o "condiciones de hibridación restrictivas" se pretende condiciones bajo las cuales una sonda hibridizará a una secuencia objetivo hasta un grado más detectablemente que a otras secuencias (por ejemplo, al menos dos veces sobre las anteriores) . Las condiciones restrictivas son dependientes de las secuencias y serán diferentes en diferentes circunstancias . Por controlar la restricción de la hibridación y/o condiciones de lavado, secuencias objetivo que son 100 % complementarias de la sonda pueden ser identificadas (sondeos homólogos) . Alternativamente, las condiciones restrictivas pueden ser ajustadas para permitir alguna diferencia en secuencias de modo que sea detectado menor grado de similitud (sondeos heterólogos) . Generalmente, una sonda es menos de aproximadamente 1000 nucleótidos de extensión, preferiblemente menos de aproximadamente 500 nucleótidos de extensión. Asi, se abarcan en la presente invención, secuencias aisladas que codifican para un polipéptido antimicrobiano y el cual híbrida bajo condiciones restrictivas a una secuencia descrita en la presente, o a fragmentos de éstas. Típicamente, condiciones restrictivas serán aquellas en las cuales la concentración de sales es inferior que aproximadamente 1.5 M de ión sodio, típicamente aproximadamente 0.01 a 1.0 M de concentración de ión sodio (o de otra sal) a pH 7.0 a 8.3 y la temperatura es al menos aproximadamente 30 °C para sondas cortas (por e emplo, 10 a 50 nucleótidos) y al menos aproximadamente 60 °C para sondas largas (por ejemplo más de 50 nucleótidos) . Las condiciones restrictivas pueden lograrse con la adición de agentes desestabilizadores tales como formamida. Las condiciones de baja astringencia ejemplares incluyen la hibridación con una solución reguladora de formamida al 30 a 35 %, NaCl 1 M, SDS al 1 % (dodecil sulfato de sodio) a 37 °C, y un lavado en IX a 2X de SSC (20X SSC = 3.0 M de NaCl/ citrato trisódico 0.3 M) a 50 a 55 °C. Las condiciones restrictivas moderadas ejemplares incluyen hibridación en formamida al 40 a 45 , NaCl 1.0 M, SDS al 1 % a 37 °C, y un lavado en 0.5X a IX de SSC a 55 a 60 °C. Las condiciones restrictivas de alta severidad incluyen la hibridación en formamida al 50 %, NaCl 1M, SDS al 1 % a 37 °C, y un lavado en 0.1X de SSC a 60 a 65 °C. La duración de la híbrida es generalmente inferior a aproximadamente 24 horas, usualmente aproximadamente 4 a aproximadamente 12 horas . La especificidad es típicamente la función de los lavados post-hibridación, los factores críticos que son la fuerza iónica y la temperatura de la solución de lavado final. Para híbridos de DNA-DNA, la Tm puede ser aproximada desde la ecuación de Meinkoth y Wahl (1984) Anal. Biochem. 138: 267- 284: Tm = 81.5 °C + 16.6 (log M) + 0.41 (% de GCJ-0.61 (% de form) - 500/L; en donde M es la molaridad de cationes monovalentes, el % de GC es el porcentaje de nucleótidos de guanosina y de- citosina en el DNA, % de form es el porcentaje de formamida en la solución de hibridación, y L es la extensión del híbrido en pares base. La Tm es la temperatura (bajo fuerza iónica y pH definidos) a la cual el 50 % de una secuencia objetivo complementaria híbrida a una sonda perfectamente emparejada. Tm es reducida en aproximadamente 1 °C por cada 1 % de diferencia; así, las condiciones de Tm, de hibridación, y/o de lavado pueden ser ajustadas para hibridar a secuencias de la identidad deseada. Por ejemplo, si se buscan secuencias con > 90 % de identidad, la Tm puede ser disminuida 10 °C. Generalmente, se seleccionan condiciones restrictivas que sean 5 °C inferiores que el punto de fusión térmico (Tm) para la secuencia específica y su complemento a un pH y fuerza iónica específicas. Sin embargo, condiciones restrictivas rigurosamente pueden utilizar una hibridación y/o lavado a 1, 2, 3, o 4 °C inferior al punto de fusión térmico (Tm) ; condiciones restrictivas moderadamente pueden utilizar una hibridación y/o lavado a 6, 7, 8, 9, o 10 °C inferior al punto de fusión térmico (Tm) ; condiciones de baja restrictividad pueden utilizar una hibridación y/o lavado a 11, 12, 13, 14, 15, o 20 °C inferior al punto de fusión térmico (Tm) . Usando la ecuación, composiciones de lavado e hibridación, y Tm deseada, aquellos expertos en la materia comprenderán que variaciones en la restricción de hibridación y/o soluciones de lavado son descritas inherentemente. Si el grado deseado de diferencia dan como resultado un Tm de menos de 45 °C (solución acuosa) o 32 °C (solución de formamida) , se prefiere incrementar la concentración de SSC de modo que pueda usarse una temperatura más alta. Una guia extensiva para la hibridación de ácidos nucleicos se encuentra en Tijssen (1993) Laboratory Techniques in Blochemistry and Molecular Biology-Hybridization with Nucleic Acid Probes, Parte I Capitulo 2 (Elsevier, New York); y Ausubel y colaboradores, eds . (1995) Current Protocole in Molecular Biology, Capitulo 2 (Greene Publishing & Wiley-Interscience, New York) . Ver Sambrook y colaboradores (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2a. Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainview, New York) . Se usan los siguientes términos para describir la relación de secuencias entre dos o más ácidos nucleicos o polinucleótidos: (a) "secuencia de referencia", (b) "ventana de comparación", (c) "identidad de secuencia", (d) "porcentaje de identidad de secuencia", y (e) "identidad substancial" . (a) Como se usa en la presente, "secuencia de referencia", es una secuencia definida usada como una base para comparación de secuencias. Una secuencia de referencia puede ser un subgrupo o la integridad de una secuencia especifica; por ejemplo, un segmento de una secuencia de gen o de cDNA de extensión total, o la secuencia de gen o de cDNA completa. (b) Como se usa en la presente, "ventana de comparación", hace referencia a un segmento especifico y contiguo de una secuencia de polinucleótidos, en donde la secuencia de polinucleótidos en la ventana de comparación puede comprender adiciones o eliminaciones (es decir, espacios) en comparación con la secuencia de referencia (la cual no comprende adiciones o eliminaciones) para la alineación óptima de dos secuencias. Generalmente, la ventana de comparación es al menos de 20 nucleótidos contiguos de extensión, y opcionalmente puede ser de 30, 40, 50, 100, o más larga. Los expertos en la materia comprenderán que evitar una gran similitud con una secuencia de referencia debido a la inclusión de espacios en la secuencia de polinucleótidos una desventaja de espacios es introducida típicamente y es substraída del número de parejas. Los métodos de alineación de secuencias por comparación son bien conocidos en el arte. Así, la determinación del por ciento de identidad entre dos secuencias cualquiera puede lograrse usando un algoritmo matemático. Ejemplos no limitantes de dichos algoritmos matemáticos son el algoritmo de Myers y Miller (1988) CABIOS 4: 11- 17; el algoritmo de homología local de Smith y colaboradores (1981) Adv. Appl, Math. 2: 482; el algoritmo de alineación de homología de Needleman y Wunsch (1970) J. Mol. Biol. 48: 443-453; el método de búsqueda por similitud de Pearson y Lipman (1988) Proc. Nati. Acad. Sci . 85: 2444 - 2448; el algoritmo de Karlin y Altschul (1990) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 87: 2264, modificado como en Karlin y Altschul (1993) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 90: 5873- 5877. Pueden utilizarse las implementaciones por cómputo de estos algoritmos matemáticos para comparación de secuencias para determinar la identidad de secuencia. Dichas implementaciones incluyen, pero no se limitan a: CLUSTAL en el programa PC/Gene (disponible de Intelligenetics , Mountain View, California) ; el programa ALIGN (versión 2.0); el programa ALIGN PLUS (versión 3.0, copyright 1997); y GAP, BESTFIT, BLAST, FASTA, y TFASTA en el Wisconsin Genetics Software Package, Versión 8 (disponible de Genetics Computer Group (GCG) , 575 Science Drive, Madison, Wisconsin, USA) . La alineación usando estos programas puede efectuarse usando los parámetros faltantes . El programa CLUSTAL es bien descrito por Higgins y colaboradores, (1988) Gene 73: 237-244 (1988); Higgins y colaboradores (1989) CABIOS 5: 151- 153; Corpet y colaboradores (1988) Nucleic Acids Res. 16: 10881 - 90; Huang y colaboradores (1992) CABIOS 8: 155- 65; y Pearson y colaboradores (1994) Meth. Mol. Biol. 24: 307- 331. Los programas ALIGN y ALIGN PLUS están basados en el algoritmo de Myers y Miller (1988) supra. Una tabla del peso de residuos PAM120, una desventaja de espacio de extensión de 12, y una desventaja de espacio de 4 pueden usarse con el programa ALIGN en comparación con secuencias de aminoácidos . Los programas BLAST de Altschul y colaboradores (1990) J. Mol. Biol. 215: 403 están basados en el algoritmo de Karlin y Altschul (1990) supra. La familia BLAST de programas que pueden ser usados para la búsqueda de similitud en bases de datos incluyen BLASTN para secuencias de consulta de nucleótidos contra secuencias de base de datos de nucleótidos ; BLASTP para secuencias de consulta de péptidos contra una base de datos de péptidos; BLASTX para secuencias de consulta de nucleótidos contra secuencias de base de datos de proteínas; TBLASTN para secuencias de consulta de proteínas contra secuencias de base de datos de nucleótidos; y TBLASTX para secuencias de consulta de nucleótidos contra bases de datos de nucleótidos con la traslación de todas las secuencias de nuclaótidos a proteína. Las búsquedas de nucleótidos por BLAST puede efectuarse con el programa BLASTN, resultado = 100, longitud de palabra = 12, para obtener secuencias de nucleótidos homologas a una secuencia de nucleótidos que codifica a un polxpéptxdo de la invención. Las búsquedas de proteínas por BLAST pueden efectuarse con el programa BLASTX, resultado = 50, longitud de palabra = 3, para obtener secuencias de aminoácidos homologas a una proteína o polxpéptxdo de la invención. Para obtener alineaciones espaciadas para propósitos de comparación, puede utilizarse BLAST Gapped (en BLAST 2.0) como se describe en Altschul y colaboradores (1997) Nucleic Acíds Res. 25: 3389. Alternativamente, puede usarse PSI-BLAST (en BLAST 2.0) para efectuar una búsqueda iteractiva que detecta relaciones " distantes entre moléculas. Ver Altschul y colaboradores (1997) supra. Cuando se utiliza BLAST, BLAST Gapped, PSI-BLAST, pueden usarse los parámetros faltantes de los programas respectivos (por ejemplo, BLASTN para secuencias de nucleótidos, BLASTX para proteínas) . Ver www. ncbi. hlm. nih. gov. La alineación puede efectuarse manualmente por inspección. A menos que se establezca de otra manera, los valores de identidad/similitud de secuencias proporcionados en la presente se refieren al valor obtenido usando la versión 10 de GAP usando los parámetros siguientes: % de identidad usando Peso de GAP de 50 y Peso de Extensión de 3; % de similitud usando Peso de Espacio de 12 y Peso de Extensión de 4, o cualquier programa equivalente. Por "programa equivalente" se pretende cualquier programa de comparación de secuencias que, para dos secuencias cualquiera en cuestión, genera una alineación que tiene parejas de residuos de aminoácido o de nucleótidos idénticas y un por ciento de identidad de secuencia idéntica en comparación con la alineación correspondiente generada por el programa preferido . GAP usa el algoritmo de Needleman y Wunsch (1970) J. Mol. Biol. 48: 443- 453, para encontrar la alineación de dos secuencias completas que maximize el número de parejas y minimize el número de espacios. GAP considera todas las alineaciones y posiciones de espacios posibles y crea la alineación con el mayor número de bases emparejadas y el menor número de espacios. Teniendo en cuenta la condición de una desventaja por creación de espacios y una desventaja por extensión de espacios en unidades de bases emparejadas. GAP debe de beneficiarse de la desventaja por creación de espacios, el número de parejas por cada inserto de espacio. Si se selecciona una desventaja por extensión de espacio mayor de cero, GAP debe de, además beneficiarse por cada espacio insertado de la extensión del espacio regula la desventaja de la extensión del espacio. Los valores de la desventaja por la creación de espacios faltantes y los valores de la desventaja por la extensión de espacios en la Versión 10 del Wisconsin Genetics Software Package para secuencias de proteínas son 8 y 2 respectivamente. Para secuencias de nucleótidos la desventaja por creación de espacios faltantes es 50 mientras que la desventaja por extensión de espacios faltantes es 3. Las desventajas por extensión de espacios y por creación de espacios pueden expresarse como un entero seleccionado del grupo de enteros que consiste de 0 a 200. Así, por ejemplo las desventajas por creación de espacios y por extensión de espacios puede ser 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65 o mayor. GAP presenta un elemento de la familia de mejores alineaciones. Puede haber muchos elementos de esta familia, pero ningún otro elemento tiene una calidad superior. GAP presenta cuatro figuras o méritos para alineación: Calidad, Proporción, Identidad, y Similitud. La Calidad es la métrica maximizada a fin de alinear las secuencias. La Proporción es la calidad dividida entre el número de bases en el segmento más corto. El Por ciento de Identidad es el por ciento de los símbolos que actualmente emparejan. El Por ciento de Similitud es el por ciento de los símbolos que son similares. Los símbolos que se atraviesan desde espacios se ignoran. Se califica una similitud cuando el valor de la matriz calificadora para un par de símbolos es mayor que o igual a 0.50, el umbral de similitud. La matriz calificadora usada en la Versión 10 del Wisconsin Genetics Software Package es BLOSUM62 (ver Henikoff y Henikoff (1989) Proc. Nati. Acad. Sel. USA 89: 10915) . Para propósitos de la presente invención, la comparación de secuencias de polipéptidos o de nucleótidos para la determinación del por ciento de identidad de secuencia con las secuencias de polipéptidos o de nucleótidos descritas en la presente se hace preferiblemente usando el programa Clustal (Versión 1.7 o posterior) con sus parámetros faltantes o cualquier programa equivalente. Por "Programa equivalente" se pretende cualquier programa de comparación de secuencias que, para dos secuencias cualquiera en cuestión, genera una alineación que tiene parejas de residuos de aminoácidos o de nucleótidos idénticas y un por ciento de identidad de secuencia idéntico en comparación con la alineación correspondiente generada por medio del programa preferido. (c) Como se usa en la presente, "identidad de secuencia" o "identidad" en el contexto de dos secuencias de polipéptidos o de ácidos nucleicos, hace referencia a los residuos en las dos secuencias que son iguales cuando se alinean para máxima correspondencia sobre una ventana de comparación especifica. Cuando el porcentaje de identidad de secuencia se usa con referencia a proteínas, se reconoce que las posiciones de los residuos que no son idénticos a menudo difieren por substituciones de aminoácidos conservadoras, en donde los residuos de aminoácidos son substituidos por otros residuos de aminoácidos con propiedades químicas similares (por ejemplo, carga o hidrofobicidad) y por consiguiente no cambian las propiedades funcionales de la molécula. Cuando las secuencias difieren en substituciones conservadoras, el por ciento de identidad de secuencia puede ajustarse hacia arriba para corregir por la naturaleza conservadora de la substitución. Secuencias que difieren por las substituciones conservadoras se dice que tienen "similitud de secuencia" o "similitud". Los medios para hacer estos ajustes son bien conocidos por los expertos en la materia. Típicamente éstos involucran calificar una substitución conservadora como una parcial en vez de una diferencia completa, aumentando así el porcentaje de identidad de secuencia. Asi, por ejemplo, donde se da un aminoácido idéntico se da una calificación de 1 y a ninguna substitución conservadora se da una calificación de cero, a una substitución conservadora se da una calificación entre cero y 1. La calificación de substituciones conservadoras se calcula, por ejemplo, como implementada en el programa PC/GENE (Intelligenetics, Mountain View, California) . (d) Como se usa en la presente "porcentaje de identidad de secuencia" significa el valor determinado al comparar dos secuencias alineadas óptimamente sobre una ventana de comparación, en donde la porción de la secuencia de polinucleótidos en la ventana de comparación puede comprender adiciones o eliminaciones (es decir, espacios) en comparación con la secuencia de referencia (la cual no comprende adiciones o eliminaciones) para alineación óptima de las dos secuencias. El porcentaje se calcula determinando el número de posiciones en las cuales los residuos de aminoácidos o bases de ácido nucleico idénticos tienen lugar en ambas secuencias para producir el número de posiciones emparejadas, dividiendo el número de posiciones empare adas entre el número total de posiciones en la ventana de comparación, y multiplicando el resultado por 100 para producir el porcentaje de identidad de secuencia. (e) (i) El término "identidad substancial" de secuencias de polinucleótido significa que un polinucleótido comprende una secuencia que tiene al menos 70 %, 80 %, 90 %, 95 %, o más identidad de secuencia en comparación con una secuencia de referencia usando uno de los programas de alineación descritos usando parámetros estándares . Un experto en la materia reconocerá que estos valores pueden ser ajustados apropiadamente para determinar la identidad correspondiente de polipéptidos codificados por dos secuencias de nucleótidos al tomar en cuenta degeneración del codón, similitud de aminoácidos, posicionamiento del marco de lectura, y los similares . Identidad substancial de secuencias de aminoácidos para estos propósitos, normalmente significa identidad de secuencias de al menos 60 %, más preferiblemente al menos 70 %, 80 %, 90 %, o 95 %. Otro indicador de que secuencias de nucleótidos son substancialmente idénticas es si dos moléculas hibridizan entre si bajo condiciones restrictivas. Generalmente, las condiciones restrictivas son seleccionadas para ser aproximadamente 5 °C inferior al punto de fusión térmico (Tm) para la secuencia especifica a un pH y fuerza iónica específicos. No obstante, las condiciones restrictivas abarcan temperaturas en el intervalo de aproximadamente 1 °C hasta aproximadamente 20 °C, dependiendo del grado restrictivas deseado como se calificó de otra manera en la presente. Los ácidos nucleicos que no hibridizan entre sí bajo condiciones restrictivas son aún substancialmente idénticos si los polipéptidos que ellos codifican son substancialmente idénticos . Esto puede tener lugar, por ejemplo, cuando se crea una copia de un ácido nucleico usando la degeneración de codón máxima permitida por el código genético. Un indicador de que dos secuencias de ácido nucleico son substancialmente idénticas, es cuando el polipéptído codificado por el primer ácido nucleico es inmunológicamente reactivo cruzadamente con el polipéptido codificado por el segundo ácido nucleico. (e) (ii) El término "identidad substancial" en el contexto de un péptido indica que un péptido comprende una secuencia con al menos 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, o 95 % de identidad de secuencia con la secuencia de referencia sobre una ventana de comparación específica. Preferiblemente, se conduce la alineación óptima usando el algoritmo de alineación de homología de Needleman y Wunsch (1970) J. Mol. Biol. 48: 443 - 453. Un indicador de que dos secuencias de péptidos son substancialmente idénticas es que un péptido es reactivo inmunológicamente con anticuerpos puestos contra el segundo péptido. Así, un péptido es idéntico substancialmente a un segundo péptido, por ejemplo, donde los dos péptidos difieren solamente por una substitución conservadora. Péptidos que son "substancialmente similares" comparten secuencias como se hizo notar anteriormente, excepto que las posiciones de residuo que no son idénticas pueden diferir por cambios de aminoácidos conservadores . Las secuencias de ácidos nucleicos de la presente invención pueden ser expresadas en una célula huésped tal como células de bacterias, hongos, levaduras, insectos, mamíferos, o vegetales. Se espera que los expertos en la materia sean conocedores de los numerosos sistemas de expresión disponibles para expresión de un ácido nucleico que codifica a un polipéptido de la presente invención. No se intenta describir con detalle los varios métodos conocidos para llevar a cabo la expresión de polipéptidos en procariotas o eucariotas . Como se usa en la presente, "heterólogos", con referencia a un ácido nucleico es un ácido nucleico que se origina desde una especie extraña, o, si se origina desde las mismas especies, es substancialmente modificado desde su forma nativa en composición y/o locus humano por intervención humana deliberada. Por ejemplo, un promotor operablemente unido a un gen estructural heterólogo es de una especie diferente de la cual se derivó el gen estructural, o si es de la misma especie, uno o ambos son substancialmente modificados desde su forma original. Una proteina heteróloga, puede originarse de una especie extraña, o si se origina de la misma especie, es modificada substancialmente desde su forma original por medio de la intervención humana deliberada. Por "célula huésped", se quiere decir, que comprende una secuencia de ácido nucleico heteróloga de la invención. Las células huéspedes pueden ser células procariotas tales como E. Coli, o células eucariotas tales como células de levaduras, insectos, anfibio, o de mamíferos. Preferiblemente, las células huéspedes son células vegetales monocotiledóneas o dicotiledóneas, particularmente células vegetales de maíz y de arroz. Las secuencias de la invención que confieren resistencia a las enfermedades se proporcionan en "cassettes" de expresión o construcciones de DNA para expresión en el vegetal de interés. El "cassette" puede incluir secuencias reguladoras 5' y 3' unidas operablemente a una secuencia de nucleótidos de la invención. Por "unido operablemente" se pretende una unión funcional entre una secuencia promotora y una segunda secuencia, en donde la secuencia promotora inicia y media la transcripción de la secuencia de ácidos nucleótidos correspondiente a la segunda secuencia. Generalmente, unido operablemente, significa que las secuencias de ácidos nucleicos que son unidas son contiguas y, donde sea necesario, dos regiones codificadoras de proteínas juntas, contiguas y en el mismo marco de lectura. El "cassette" puede contener adicionalmente al menos un gen adicional para ser co-transformado en el organismo. Alternativamente, el o los genes adicionales pueden ser proporcionados en "cassettes" de expresión múltiples. ün "cassette" de expresión tal es proporcionado con una pluralidad de sitios de restricción para inserción de la secuencia resistente a la enfermedad a estar bajo regulación transcripcional de las regiones reguladoras. El "cassette" de expresión puede contener adicionalmente genes marcadores seleccionables . El "cassette" de expresión incluirá en la dirección 5' -3' de transcripción, una región de iniciación translacional y transcripcional, una secuencia de péptidos de señal, una secuencia de DNA resistente a la enfermedad de la invención, y una región de terminación translacional o transcripcional, funcional en vegetales. La región de iniciación transcripcional, el promotor, pueden ser nativos o análogos o extraños o heterólogos al huésped vegetal. Adicionalmente, el promotor puede ser la secuencia natural o alternativamente una secuencia sintética. Por "extraña" se pretende que la región de iniciación transcripcional no se encuentre en la planta nativa en la cual se introdujo la región de iniciación transcripcional. Como se usa en la presente, un gen quimérico comprende una secuencia codificadora unida operablemente a una región de iniciación de transcripción que es heteróloga a la secuencia codificadora . Aunque puede ser preferible expresar la secuencia usando promotores heterólogos, pueden usarse las secuencias promotoras nativas . Dichas construcciones variarían los niveles de expresión de la proteína/RNA resistente a las enfermedades en el vegetal o en la célula vegetal. Así, se altera el fenotipo del vegetal o de la célula vegetal. La región de terminación puede ser nativa con la región de iniciación transcripcional , puede ser nativa con la secuencia de DNA operablemente unida de interés, o puede derivarse de otra fuente. Regiones de terminación convenientes están disponibles del Ti-plásmido de A. tumefaciens, tales como las regiones de terminación de la octopina sintasa y la nopalina sintasa. Ver también Guerineau y colaboradores (1991) Mol. Gen. Genet. 262: 141 - 144; Proudfoot (1991) Cell 64: 671- 674; Sanfacon y colaboradores (1991) Genes Dev. 5: -141- 149; Mogen y colaboradores (1990) Plant Cell 2: 1261 - 1272; Munroe y colaboradores (1990) Gene 91: 151 - 158; Bailas y colaboradores (1989) Nucleic Acids Res. 17: 7891 - 7903; y Joshi y colaboradores (1987) Nucleic Acid Res. 15: 9627 -9639. En donde sea apropiado, las secuencias de nucleótidos pueden ser optimizadas para incrementar la expresión en el huésped transformado. Esto es, las secuencias de nucleótidos pueden ser sintetizadas usando codones preferidos de vegetales para expresión mejorada en vegetales. Los métodos para sintetizar genes o secuencias de nucleótidos preferidos de vegetales están disponibles en el arte. Ver, por ejemplo, Patentes EUA Nos. 5,380,831, y 5,436,391, y Murria y colaboradores (1989) Nucleic Acids Res. 17: 477 - 498, incorporados a la presente como referencia. Se han creado secuencias de nucleótidos que codifican a Fusl y a Fus2 unidos operablemente a BAA. y al codón de elección para expresión en células huéspedes, La secuencia de nucleótidos de BAA-Fusl fue desviada del codón de conformidad con el uso del codón de M. sexta. La secuencia de nucleótidos de BAA-Fus2 fue desviada del codón de conformidad con el uso del codón de Strepto yces coelicolor. Los patrones de uso del codón de S. Coelicolor se parecen a los patrones de uso del codón de muchos vegetales. El desarrollo de las secuencias desviadas del codón se describe en otra parte en la presente. Se conocen modificaciones de secuencia adicionales para mejorar la expresión genética en un huésped celular. Estas incluyen la eliminación de secuencias que codifican a señales de poliadenilación parásitas, señales en sitio empalmado intron-exon, repeticiones como traspuestas, y otras secuencias bien caracterizadas que pueden ser nocivas a la expresión genética. El contenido de G-C de la secuencia puede ser ajustado a niveles promedio para un huésped celular dado, como se calcula con referencia a genes conocidos expresados en la célula huésped. Cuando es posible, la secuencia es modificada para evitar estructuras de mRNA secundarias en horquilla previstas. En ciertas modalidades de la invención, es deseable utilizar el polipéptido maduro o la secuencia de nucleótidos que codifica al polipéptido maduro. En la célula, se encuentran f ecuentemente modificaciones proteoliticas de secuencias de aminoácidos. El evento proteolitico remueve aminoácidos del polipéptido precursor para producir un polipéptido maduro. El proceso proteolitico puede ser muy específico de la secuencia. A menudo los péptidos precursores son inactivos mientras que los péptidos maduros poseen la actividad deseada. Así, el aislamiento de un péptido con base en su actividad da como resultado el aislamiento del péptido maduro, activo. El descubrimiento de la existencia de pre-secuencias tiene lugar cuando se identifica la secuencia de nucleótidos que codifica al péptido maduro. El marco de lectura abierto que codifica al péptido maduro también codifica a las pre-secuencias que fueron removidas por la célula. La maduración proteolítica de secuencias de aminoácidos tiene lugar en múltiples localizaciones celulares que incluyen, pero no se limitan al retículo endoplásmico, el citoplasma, la mitocondria, los cloroplastos, el núcleo, el aparato de Golgi, y la matriz extracelular . El proceso proteolítico de péptidos se discute en Creighton, T. E. (1993) Proteins: Structures & Molecular Properties, W. H. Freeman & Co., U.S.A. y Albert y colaboradores eds . (1994) Molecular Biology of the Cell. Garland Publishing, Inc., New York, incorporados a la presente como referencia. En vez de depender de una célula huésped para procesar apropiadamente el polipéptido de la invención, puede ser deseable el empleo de una secuencia de nucleótidos que codifican al péptido maduro . Los "cassettes" de expresión pueden contener adicionalmente secuencias líderes 5' en la construcción del ""cassette" de expresión. Dichas secuencias líderes pueden actuar para mejorar la translación. Los líderes de translación son conocidos en el arte e incluyen: líderes de picornavirus, por ejemplo líder de EMCV (región no codificadora en 5' de Encefalomiocarditis) (Elroy-Stein y colaboradores (1989) PNAS USA 86: 6126-6130); líderes de polivirus, por ejemplo, líder de TEV (Virus Etch de Tabaco) (Allison y colaboradores (1986); líder de MDMV (Virus Mosaico de Maíz Enano); Virology 154:9-20), y proteína que enlaza a la inmunoglobulina humana de cadena pesada (BIP) , (Macejak y colaboradores (1991) Nature 353: 90 - 94); líder no trasladado de itiRNA de proteína recubierta de virus mosaico de alfalfa (AMV RNA 4) (Jobling y colaboradores (1987) Nature 325: 622 - 625); líder del virus mosaico de tabaco (TMV) (Gallie y colaboradores (1989) en Molecular Biology of RNA, ed. Cech (Liss, New York) , pp. 237- 256) ; y líder del virus moteado clorótico de maíz (MCMV) (Lommet y colaboradores (1991) Virology 81: 382 - 385). Ver también, Della- Cioppa y colaboradores (1987) Plant Physiol. 84: 965 - 968. Pueden también utilizarse otros métodos conocidos para mejorar la translación, por ejemplo, intrones, y los similares . Los péptidos de señal pueden estar fusionados con la secuencia de nucleótidos resistente a las enfermedades de la invención para dirigir el transporte del producto genético expresado afuera de la célula en el sitio de acción deseado en el espacio intercelular. Ejemplos de péptidos de señal incluyen aquellos unidos de manera nativa a la proteína alfa amilasa de Cebada (BAA) , esporamina, orizacistatina-1, y los de las proteínas relacionadas con la patogénesis vegetal, por ejemplo, PR-1, PR-2, etc. Al preparar el "cassette" de expresión, pueden manipularse los varios fragmentos de ??? de manera de proporcionar las secuencias de DNA en la orientación apropiada y, cuando sea apropiado, en el marco de lectura apropiado. Hacia este fin, pueden usarse adaptadores o enlazadores para juntar los fragmentos de DNA o pueden involucrarse otras manipulaciones para proporcionar los sitios de restricción convenientes, remoción de DNA superfluos, remoción de sitios de restricción, o los similares. Para este propósito, pueden involucrarse mutagénesis in vitro, reparación de cebador, restricción, fortalecimiento, re-substituciones, por ejemplo, transiciones y trasversiones . Generalmente el ""cassette" de expresión comprenderá un gen marcador selecciónatele para la selección de células transformadas. Se utilizan genes marcadores seleccionables para la selección de células o tejidos transformados. Genes marcadores incluyen genes que codifican la resistencia antibiótica, tales como aquellos que codifican a la neomicina fosfotransferasa II (NEO) e higromicina fosfotransferasa (HPT) , asi como también genes que confieren resistencia a compuestos " herbicidas, tales como glucosinato amónico, bromoxinil, imidazolinonas, y, 2, 4-diclorofenoxiacetato (2,4-D), y sulfonilurea (Sus) . Ver generalmente, Yarraton (1992) Curr. Opin. Bíotech 3: 506 -511; Christopherson y colaboradores (1992) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 89: 6314 - 6318; Yao y colaboradores (1992) Cell 71: 63 - 72; Reznikoff (1992) Mol. Microbiol. 6: 2419 - 2422; Barkley y colaboradores (1980) en The Operon, pp. 177 - 220; Hu y colaboradores (1987) Cell 48: 555 - 566; Brown y colaboradores (1987) Cell 49: 603 - 612; Figge y colaboradores (1988) Cell 52: 713 - 722; Deuschle y colaboradores (1989) Proc. Acad. Sci. USA 86: 5400 - 5404; Fuerst y colaboradores (1989) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 86: 2549 - 2553; Deuschle y colaboradores (1990) Science 248: 480 - 483; Gossen (1993) Ph. D. Thesis, University of Heidelberg; Reines y colaboradores (1993) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 90: 1917 - 1921; Labow y colaboradores (1990) Mol. Cell. Biol. 10: 3343 - 3356; Zambretti y colaboradores (1992) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 89: 3952 - 3956; Baim y colaboradores (1991) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 88: 5072 -5076; Wyborski y colaboradores (1991) Nucleic Acids Res. 19: 4647 - 4653; Hillehand - Wissman. (1989) Topics Mol. Struc. Biol. 10: 143 - 162, Degenkolb (1991) Antimicrob. Agents Chemother. 35: 1591 _ 1595; leinschnidt y colaboradores (1988) Biochemistry 27: 1094 - 1104; Bonin (1993) Ph. D. Thesis, University of Heidelberg; Gossen y colaboradores (1992) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 89: 5547 -5551; Oliva y colaboradores (1992) Antimicrob. Agents Chemotherapy. 36: 913 - 919; Hlavka y colaboradores (1985) Handbook of experimental Pharmacologyr Vol . 78 (Springer-Verlag, Berlín); Gilí y colaboradores (1988) Nature 334 : 721 - 724. Dichas descripciones se incorporan a la presente como referencia.

La lista anterior de genes marcadores selecciónateles no significa que sea limitante. Puede usarse en la presente invención, cualquier gen marcador seleccionable . Pueden usarse numerosos promotores en la práctica de la invención. Los promotores pueden ser seleccionados con base en los resultados deseados. Esto es, los ácidos nucleicos pueden combinarse con promotores constitutivos, preferidos de tejido, inducibles u otros, para expresión en vegetales. Los promotores constitutivos incluyen, por ejemplo, el promotor del núcleo del promotor de Rsyn7 y otros promotores constitutivos descritos en WO 99/43838 y la Patente EUA No. 6,072,050; promotor de Scpl (Patente EUA 6,072,050), actina de arroz (McElroy y colaboradores (1990) Plant Cell 2: 163 - 171); Ubiquitina (Christensen y colaboradores (1989) Plant Mol. Biol. 12: 619 - 632 y Christensen y colaboradores (1992) Plant Mol. Biol. 18: 675 - 689); pEMU (Last y colaboradores (1991) Theox. Appl . Genet. 81: 581 - 588); MAS (Velten y colaboradores (1984) EMBO J. 3: 2723 - 2730); promotor de ALS (Patente EUA No. 5,659,026), h2B de Maíz (Solicitud de PCT con No. de Serie: WO 99/43797) y los similares. Otros promotores constitutivos incluyen, por ejemplo, las Patentes EUA Nos. 5, 608, 149; 5, 608,144; 5, 604,121; 5,569,597; 5,466,785; 5,399, 680; 5,268, 463; 5,608,142; y 6,177,611. Generalmente, será benéfico expresar el gen desde un promotor inducible, particularmente desde un promotor inducible de patógenos . Los promotores incluyen aguellos desde proteínas relacionadas con la patogénesis (proteínas PR) , las cuales son inducidas después de infección por un patógeno; por ejemplo proteínas PR, proteínas SAR, beta-1, 3-glucanasa, quitinasa, etc. Ver, por ejemplo, Redolfi y colaboradores (1983) Neth. J. Plant Pathol. 89: 245- 254; Uknes y colaboradores (1992) Plant Cell 4: 645 - 656; y Van Loon (1985) Plant Mol. Virol . 4: 111 - 116. Ver también O 99/ 43819, incorporados a la presente como referencia. Son promotores de interés los que son expresados locamente en o cerca del sitio de infección patógena. Ver, por ejemplo, Marineau y colaboradores (1987) Plant Mol. Biol. 9: 335- 342; Matón y colaboradores (1989) Molecular Plant. Microbe Interaction 2: 325 - 331; Somsisch y colaboradores (1986) Proc. Acad. Sci. USA 83: 2427 - 2430; Somsisch y colaboradores (1988) Mol. Gen. Genet. 2: 93 -98: y Yang (1996) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 93: 14972 -14977. Ver también, Chen y colaboradores (1996) Plant J. 10: 955 - 966; Zhang y colaboradores (1994) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 91: 2507 - 2511; Warner y colaboradores (1993) Plant J. 3: 191 - 201; Siebertz y colaboradores (1989) Plant Cell 1: 961 - 968; Patente EUA No. 5,750,386 (inducible por nematodo) ; y las referencias citadas en la presente. De particular interés, es el promotor inducible por el gen PRMs de maíz, cuya expresión es inducida por el Fusarium moniliforme patógeno (ver, por ejemplo, Cordero y colaboradores (1992) Physiol. Mol. Plant Path. 41 : 189-200) . Adicionalmente, cuando los patógenos consiguen entrar en vegetales a través de heridas o daños de insectos, puede usarse un promotor inducible por herida en las construcciones de la invención. Los promotores inducibles por herida incluyen el gen inhibidor de la proteinasa de papa (husillo II) (Ryan (1990) Ann. Rev. Phytopath. 28: 425 - 449; Duan y colaboradores (1996) Nature Biotechnology 14: 494 - 498); wunl y wun2, Patente EUA No. 5,428,148; winl y win2 (Staford y colaboradores (1989) Mol. Gen. Genet. 215: 200 - 208) ; sistemina (McGurl y colaboradores (1992) Science 225: 1570- 1573); IP1 (Rohmeier y colaboradores (1993) Plant Mol. Biol. 22:783- 792; Eclelkamp y colaboradores (1993) FEBS Letters 323: 73 - 76); gen MPI (Corderok y colaboradores (1994) Plant J. 6 (2) : 141 -150) ; y los similares, incorporados a la presente como referencia. Pueden usarse promotores regulados químicamente para modular la expresión de un gen en un vegetal a través de- la aplicación de un regulador químico exógeno. Dependiendo del objetivo, el promotor puede ser un promotor inducible químicamente, donde la aplicación del producto químico induce la expresión genética, o un promotor reprimible químicamente, donde la aplicación del producto químico reprime la expresión genética. Se conocen en el arte promotores inducibles químicamente e incluyen, pero no se limitan a, el promotor In2~2 de maíz, el cual es activado por herbicidas de seguridad con bencensulfonamida, el promotor GST de maíz, el cual es activado por compuestos electrofílicos hidrofóbicos que se usan como herbicidas pre-emergentes, y el promotor PR-la del tabaco, el cual es activado por ácido salicílico. Otros promotores de interés regulados químicamente incluyen promotores responsables de esteroides (ver, por ejemplo, el promotor inducible por medio de glucocorticoides en Schena y colaboradores (1991) Proc. Nati. Acad. Sel. USA 88: 10421 - 10425 y McNellis y colaboradores (1998) Plant J. 14(2): 247- 257) y promotores reprimibles con tetraciclina e inducibles con tetraciclina (ver, por ejemplo, Gatz y colaboradores (1991) Mol. Gen. Genet. 221: 229- 237, y Patentes EUA Nos. 5,814,618 y 5,789,156), incorporadas a la presente como referencia. Pueden utilizarse promotores preferidos de tejido para expresión de polipéptidos antimicrobianos mejorados objetivo en un tejido vegetal particular. Ver, por ejemplo, Yamamoto y colaboradores (1997) Plant J. 12 (2) : 255-265; awamata y colaboradores (1997) Plant Cell Physíol. 38(7) : 792- 803; Hansen y colaboradores (1997) Mol. Gen Genet. 254 (3) : 337- 343; Russell y colaboradores (1997) Transgenic Res. 6(2) : 157- 168; Rinehart y colaboradores (1996) Plan Physiol. 112(3) : 1331-1341; Van Camp y colaboradores (1996) Plant Physiol. 112(2) : 525- 535; Canevascini y colaboradores (1996) Plant Physiol. 112 (2 ): 513-52 ; Yamamoto y colaboradores (1994) Plant Cell Physiol. 35(5) : 773- 778; Lam (1994) Results Probl . Cell Differ. 20: 181-196; Orozco y colaboradores (1993) Plant Mol. Biol . 23(6): 1129- 1138; Matsuoka y colaboradores (1993) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 90 (20) : 9586-9590; y Guevara-García y colaboradores (1993) Plant J. 4(3) : 495- 505. Dichos promotores pueden ser modificados para debilitar la expresión. El método de transformación/transfección no es crítico en la presente invención; están disponibles actualmente varios métodos de transformación o de transfección. Así, puede emplearse cualquier método, que proporcione transformación/transfección efectiva. Los protocolos de transformación así como también los protocolos para introducir secuencias de nucleótidos en vegetales pueden variar dependiendo del tipo de vegetal o de célula vegetal, es decir, monocotiledóneas o dicotiledóneas, objetivos para transformación. Los métodos adecuados para introducir secuencias de nucleótidos en células vegetales y la inserción subsecuente en el genoma vegetal incluye microinyección (Crossway y colaboradores (1986) Biotechniques 4:320-334), Electroporación (Riggs y colaboradores (1986) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 83; 5602-5606, transformación mediada por Agrobacterium (Townsend y colaboradores, Patente EUA No. 5,563,055; Zhao y colaboradores, Patente EUA No. 5,981,840), transferencia genética directa (Paszko ski y colaboradores (1984) EMBO J. 3:2717-2722) , y aceleración de partículas balísticas (ver, por ejemplo, Sanford y colaboradores, Patente EUA No. 4,945,050; Tomes y colaboradores Patente EUA No. 5,879,918; Tomes y colaboradores, Patente EUA No. 5,886,244; Bidney y colaboradores, Patente EUA No. 5,932,782; Tomes y colaboradores (1995) "Direct DNA Transfer into Intact Plant Cells via Microprojectile Bombardment", en Plant Cell, Tissue, and Organ Culture: Funda entak Methods, Ed. Gamborg y Phillips (Springer-Verlag, Berlín) ; MaCabe y colaboradores (1988) Biotechnology 6: 923- 926); y transformación de Lecl (WO 00/28058) . También ver Weissinger y colaboradores (1988) Ann. Rev. Genet. 22:421-477; Sanford y colaboradores (1987) Partículate Science and Technology 5: 27-37 (cebolla); Christou y colaboradores (1988) Plant Physiol. 87: 671-674 (soya); McCabe y colaboradores (1988) Bio/'Technology 6: 923-926 (soya) ; Finer y McMullen (1992) In Vitro Cell Dev. Biol. 27 p:175-182 (soya); Singh y colaboradores (1998) Theor. Appl.

Genet. 96:319-324 (soya); Datta y colaboradores (1990) Biotechnology 8: 736- 740 (arroz); Klein y colaboradores (1988) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 85:4305-4309 (maíz); Klein y colaboradores (1988) Biotechnology 6:559-563 (maíz); Tomes, Patente EUA No. 5,240,855; Buising y colaboradores Patente EUA Nos. 5,322,783 y 5,324,646; Tomes y colaboradores (1995) "Direct DNA Tzansfer into Intact Plant Cells vía Microprojectile Bombardment", en Plant Cell, Tissue, and Organ Culture: Fundamental Methods, Ed. Gamborg (Springer-Verlag, Berlín) (maíz) ; Klein y colaboradores (1988) Plant Physiol 91: 440- 444 (maíz); Fromm y colaboradores (1990) Biotechnology 8: 833-839 (maíz) ; Hooykaas-Van Slogteren y colaboradores (1984) Nature (Londres) 311:763-764; Bowen y colaboradores, Patente EUA No. 5,736,369 (cereales); Bytebier y colaboradores (1987) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 84: 5345-5349 [Liliaceae) ; De Wet y colaboradores (1985) en The Experimental Manipulation of Ovule Tissues, Ed. Chapman y colaboradores (Longman, New York), pp. 197-209 (polen); Kaeppler y colaboradores (1990) Plant Cell Reports 9: 415-418 y Kaeppler y colaboradores (1992) Theox. Appl. Genet. 84: 560- 566 (transformación mediada por monocristales filamentosos); D'Halluin y colaboradores (1992) Plant Cell 4: 1495- 1505 (Electroporación); Li y colaboradores (1993) Plant Cell Reports 12: 250- 255 y Christou y Ford (1995) Annals of Botany 75: 407-413 (arroz); Osjoda y colaboradores (1996) ¦ Nature Biotechnology 14: 745- 750 (maíz vía Agrobacterium tumefaciens) ; todos los cuales se incorporan a la presente como referencia. Las células que han sido transformadas pueden ser desarrolladas en vegetales de conformidad con las maneras convencionales. Ver, por ejemplo, McCormick y colaboradores (1986) Flant Cell Repo ts 5: 81-84. Estos vegetales pueden entonces ser desarrollados, y ya sea polinizados con la misma cepa transformada o con diferentes cepas, y el híbrido resultante que tiene la expresión constitutiva de las características fenotípicas identificadas deseadas. Pueden desarrollarse dos o más generaciones para asegurar que la expresión constitutiva de las características fenotípicas deseadas se mantiene establemente y se heredan y luego se logran las semillas cosechadas para asegurar la expresión constitutiva de las características fenotípicas deseadas . Puede usarse la presente invención para la transformación de cualquier especie vegetal, incluyendo, pero no limitándose a, monocotiledóneas y dicotiledóneas. Ejemplos de vegetales de interés incluyen, pero no se limitan a, arroz [Oryza sativa) , maíz {Zea mays) , Brassica sp. (por ejemplo, B. Napus, B. Rapa, B. Júncea), particularmente aquellas especies de Brassica útiles como fuentes de aceite de semilla, alfalfa {Medicago sativa) , centeno {Sécale cereale) , sorgo {Sorghum bicolor,. Sorghum vulgare) , mijo (por ejemplo, mijo perla (Pennisetum glaucum) , mijo mayor {Panicum milliaceüm) , panizo {Setaria itálica), mijo digitario (Eleusine corácana) , girasol {Helianthus annuus) , cártamo {Carthamus tinctorius) , trigo {Triticum aestivum) , soya {Glycine max) , tabaco {Nicotiana tabacum) , papa {Solanum tuberosum) , cacahuate {Arachís hypogaea) , algodón [Gossypium barbadense, Gossypium hirsulum) , papa dulce {Ipomoea batatus) , mandioca {Manihot esculenta) , café {Coffea spp.) , coco {Cocos nucífera) , piña {Ananas comosus) , árboles cítricos {Citrus spp.), cacao {Theobroma cacao) , té {Canellia sinensis) , plátano {Musa spp.), aguacate {Persea americano), higo {Ficus casica) , guayaba {Psidium guajava) , mango {Mangif ra indica) , olivo {Olea europea), papaya {carica papaya), marañón {Anacardium occidentale) , macadamia {Macadamia integrifolía) , almendra {Prunus amygdalus) , remolacha dulce (Beta vulgaris) , caña de azúcar {Saccharum spp.), avena, cebada, vegetales plantas ornamentales, y coniferas. Los vegetales incluyen tomates { ycopersicon esculentum) , lechuga (por ejemplo, Lactuca sativa), alubias verdes {Phaseolus vulgaris), alubias de lima {Phaseolus limensis) , chícharos {Lathyrus spp.), y elementos del género Cucumis tales como pepino (C. Sativus) , cantalupo (C. cantalupensis) , y melón bordado (C. meló) . Las plantas ornamentales incluyen azalea (Rhododendron spp. ) , hortensia (Macrophylla hydrangea) , hibiscus (Hibiscus rosasanensis) , rosas (Rosa spp.), tulipanes (Tulipa spp.), narciso (Narcissus spp.), petunias (Petunia híbrida), clavel (Dianthus caryophyllus) , nochebuena (Euphorbia pulchexrima) , y crisantemos. La coniferas que pueden emplearse en la práctica de la presente invención incluyen por ejemplo, pinos tales como pino rígido (Pinus taeda) , pino antillano (Pinus elliotii) , pino amarillo (Pinus ponderosa) , pino torcido (Pinus contorta) , y pino Monterrey (Pinus radiata) ; abeto de Douglas (Pseudotsuga menziesii) ; abeto hemlock del Occidente (Tsuga canadensis) picea de Sitka (Picea glauca) ; madera roja [Sequoia empervirens) ; abetos verdaderos tales como el abeto plateado (Abies amabilis) y abeto bálsamo (Abies balsamea) ; y cedros tales como cedro rojo de occidente (Thuja plicata) y cedro amarillo de Alaska (Chamaecyparis nootkatensis) . Preferiblemente, los vegetales de la presente invención son vegetales cultivados (por ejemplo, arroz, maíz, alfalfa, girasol, Brassica, soya, algodón, cártamo, cacahuate, sorgo, trigo, mijo, tabaco, etc.) . Pueden usarse células procariotas como huéspedes para expresión. Las procariotas mayormente están representadas por varias cepas de E. Coli; no obstante, pueden también usarse otras cepas microbianas. Se usan comúnmente secuencias control procarióticas, las cuales se definen en la presente para incluir promotores para iniciación de transcripción, opcionalmente con un operador, junto con secuencias de enlace de ribosoma, incluyen promotores usados comúnmente como sistemas promotores de beta lactamasa (penicilinasa) y lactosa (lac) (Chang y colaboradores (1977) Nature 198: 1056), el sistema promotor de triptofano (trp) (Goeddel y colaboradores (1980) Nucleic Acids Res. 8: 4057) y el promotor de P L derivado de lambda y el sitio de enlace de ribodoma N-gen (Shimatake y colaboradores (1981) Nature 292: 128). La inclusión de marcadores de selección en vectores de DNA transfectados en E. Coli es también útil- Ejemplos de dichos marcadores incluyen genes que especifican la resistencia a ampicilina, tetraciclina, o cloramfenicol . El vector es seleccionado para permitir la introducción en la célula huésped apropiada. Los vectores bacterianos son típicamente de origen fágico o plásmido. Las células bacterianas apropiadas son infectadas con partículas del vector fágico o transfectadas con DAN de vector fágico desnudo. Si se usa un vector plásmido, las células bacterianas son transfectadas con el DNA del vector plásmido. Sistemas de expresión para expresar a un polipéptido de la presente invención están disponibles usando Bacillus sp. y Salmonella (Palva y colaboradores (1983) Gene 22: 229- 235); Mosbach y colaboradores (1983) Nature 302: 543-545) . Se conocen en el arte una variedad de sistemas de expresión eucarióticos tales como levaduras, lineas celulares de insectos, células de mamíferos y vegetales. Como se explica de manera breve posteriormente, un polinucleótido de la presente invención puede ser expresado en estos sistemas eucarióticos. En algunas modalidades se emplean células vegetales transfectadas/ transformadas, como se discute en lnfxar como sistemas de expresión para la producción de los polipéptidos de la presente invención.

Las secuencias de la presente invención pueden también estar ligadas a varios vectores de expresión para uso al transfectar cultivos celulares de, por ejemplo, origen vegetal, de insectos o de mamíferos. Cultivos celulares ilustrativos útiles para la producción de los péptidos son células de mamíferos. Se han desarrollado en el arte, numerosas líneas células huéspedes capaces de expresar proteínas intactas, e incluyen las líneas celulares HEK293, BHK21, y CHO. Los vectores de expresión para estas células incluyen secuencias control de expresión, tales como un origen de replicación, un promotor (por ejemplo, el promotor de CMV, un promotor tk de HSV o promotor pgk (fosfoglicerato quinasa) , un mejorador (Queen y colaboradores (1986) Immunol. Rev. 89: 49), y sitios de información de procesamiento necesarios, tales como sitios de enlace de ribosoma, sitios de empalme de R A, sitios de poliadenilación (por ejemplo, un sitio de adición amplio T Ag poli A de SV40) , y secuencias terminadoras transcripcionales . Otras células animales útiles para la producción de polipéptidos de la presente invención están disponibles, por ejemplo, de la American Type Culture Collection. Vectores apropiados para expresar polipéptidos de la presente invención en células de insectos usualmente son derivadas del baculovirus SF9. Las lineas celulares de insectos adecuadas incluyen lineas celulares de larvas de mosquito, gusano de seda, gardama, polilla y Drosophila tales como una linea celular de Sc neider (Ver, Schnider (1987) J. Embryol. Exp. Morphol. 27: 353- 365). Como con levaduras, cuando se emplean células huéspedes vegetales o de animales superiores, las secuencias terminadoras de transcripción o de poliadenilación, se incorporan típicamente en el vector. Un ejemplo de una secuencia terminadora es la secuencia de poliadenilación del gen de la hormona de crecimiento bovino. Pueden también incluirse secuencias para asegurar el empalme del transcripto. Un ejemplo de una secuencia de empalme es el intron VP1 de SV40. (Sprague y colaboradores (1983) J. Virol. 45: 773- 781) . Adicionalmente, secuencias de genes para controlar la replicación en la célula huésped pueden incorporarse en el vector tales como aquellas encontradas en vectores del tipo del virus de papiloma bovino (Saveria-Campo (1985) DNA Cloning Vol. JJ A Practical Approachr D. M. Glover, Ed., IRL Press, Arlington, Virginia, págs . 213- 238). Células huéspedes eucarióticas inferiores (por ejemplo, levaduras) y de animales son competentes o convertidas en competentes por transfección por varios medios. Hay varios métodos bien conocidos de introducir DNA en células animales. Estos incluyen: precipitación con fosfato de calcio, fusión de las células receptoras con protoplastos bacterianos que contienen el DNA, tratamiento de las células receptoras con liposomas que contienen el DNA, DEAE dextrina, electroporación, biolisticas, y micro-inyección del DNA directamente en las células . Las células transfectadas son cultivadas por medios bien conocidos en el arte (Kuchler (1997) Biochemical Methods In Cell Culture and Virology, Doeden, Hutchinson & Ross, Inc.). Es bien conocida la síntesis de secuencias de nucleótidos heterólogas en levaduras (Sherman y colaboradores (1982) Methods in Yeast Genetics, Cold Spring Harbor Laboratory) . Dos levaduras utilizadas ampliamente para la producción de proteínas eucarióticas son Saccháromyces cerevisiae y Pichia pastorls. Son conocidos en el arte vectores, cepas, y protocolos para expresión en Saccháromyces y Pichia y están disponibles de proveedores comerciales, tales como promotores, que incluyen 3-fosfoglicerato quinasa o alcohol oxidasa, y un origen de replicación, secuencias de terminación y los similares que se deseen. Un polipéptido de la presente invención, una vez expresado, puede ser aislado desde levaduras por medio del lisado celular y aplicando técnicas estándares de aislamiento de proteínas a los Usados. El monitoreo del proceso de purificación puede lograrse usando técnicas de tinción Western, espectro de absorción de rayos UV, radioinmunoensayo, u otras técnicas de inmunoensayo estándares. La invención está dirigida hacia un método general para identificar y elaborar composiciones antimicrobianas, particularmente composiciones antifúngicas . Los métodos involucran la inyección de un insecto con una suspensión de un hongo patógeno vegetal para inducir polipéptidos de insectos que posean actividad antimicrobiana. Dichos polipéptidos son aislados desde la hemolinfa del insecto usando una combinación de cromatografía líquida de alta resolución y espectrofotometría. La estrategia general para el descubrimiento de estos péptidos antimicrobianos derivados de insectos involucran desafiar a los insectos con un patógeno vegetal seleccionado y colectar muestras de hemolinfa y de cuerpos grasos a varios tiempos post-inducción. Por ejemplo, muestras de hemolinfa y de cuerpos grasos pueden ser colectadas a aproximadamente intervalos de 8 horas, 16 horas, 24 horas, o 48 horas. Se reconoce que cualquier método para separación e identificación de proteínas puede ser usado para aislar péptidos y secuencias de ácido nucleico correspondientes. Aunque no se enlazan por cualquier método particular, la identificación de péptidos antimicrobianos activos contra el patógeno objetivo puede lograrse usando un procedimiento por bioensayo miniaturizado, genómico y proteómico integrados. Este procedimiento consiste de la separación de hemolinfa aislada desde insectos inducidos. Puede usarse cualquier método de separación, incluyendo separación por HPLC. Las fracciones de la separación auxiliada por HPLC pueden ser separadas en fracciones de 30 segundos en un formato de placa para microtítulo, es decir placa para microtítulo de 96 pocilios. Las fracciones colectadas de esta manera se secan y se usan directamente en un ensayo de crecimiento fúngico (FGA) en el cual las fracciones secas son resuspendidas en 100 µ? de caldo de dextrosa de papa de media potencia que contenga una suspensión del patógeno fúngico objetivo. Las fracciones que contienen péptidos antimicrobianos son identificados en el FGA por su habilidad para inhibir el crecimiento fúngico después de varias horas, generalmente 24 a 48 horas. Estas fracciones se sometieron a purificación adicional a fin de aislar péptidos individuales y se determina el péptido especifico responsable, por la actividad observada por medio del FGA. Este péptido es subsecuentemente conformado en secuencias N-terminalmente y se determina su peso molecular por espectrometría de masa para proporcionar información para identificar el gen correspondiente desde datos de la secuencia derivada de bibliotecas de cDNA del insecto correspondiente. La secuencia de aminoácidos completa del péptido se determina por medio de la translación de la secuencia de ácidos nucleicos y del polipéptido maduro identificado tanto con base en la secuencia N-terminal como en la información del peso molecular . Los agentes defensivos de la invención abarcan los péptidos activos maduros asi como también pre-formas de los péptidos o sin procesar. En donde un péptido maduro ha sido aislado la secuencia prepro o secuencia de señal, puede ser obtenida por medio de numerosas técnicas de biología molecular general conocidas en el arte. Como se indicó, los agentes defensivos pueden ser aislados desde cualquier insecto de interés. Son de particular interés los insectos que viven en ambientes duros e insectos que son predadores vegetales naturales. Aunque puede utilizarse cualquier insecto, puede ser benéfico usar insectos predadores de un vegetal particular de interés. Por ejemplo, para obtener agentes defensivos para usar en maíz, aunque puede usarse cualquier insecto, pueden ser benéficos los depredadores de maíz. Aunque un agente defensivo puede ser inducido por medio de un patógeno particular, se anticipa que el agente defensivo puede ser efectivo contra uno o más patógenos adicionales, que incluyen pero no se limitan a, cualquiera de los patógenos enlistados anteriormente. Los polipéptidos son probados para actividad antimicrobiana usando ensayos in vitro como se describe en otra parte de la presente. Polipéptidos antimicrobianos aislados son sometidos a proteolisis, y el amino termini de los fragmentos proteoliticos resultantes son conformados en secuencias. Se usan oligonucleótidos degenerados que codifican a secuencias amino terminales marcadas para identificar a cDNAs que codifican al polipéptido antimirobiano desde bibliotecas de cDNA de insectos inducidas por el patógeno correspondiente. Las moléculas de ácidos nucleicos que codifican a los polipéptidos antimicrobianos se usan para la transformación de células vegetales para generar vegetales con resistencia mejorada a enfermedades. Adicionalmente, las composiciones de la invención pueden ser usadas para generar formulaciones que posean actividades de resistencia a las enfermedades. Se proporcionan métodos para incrementar la resistencia a patógenos en un vegetal. Los métodos involucran transformar establemente un vegetal con una construcción de DNA que comprende una secuencia de nucleótidos de un agente defensivo de la invención unido operablemente a un promotor que conduce la expresión en un vegetal. Dichos métodos pueden encontrar uso en agricultura, particularmente al limitar el impacto de patógenos fúngicos vegetales sobre vegetales cultivados. Las secuencias de nucleótidos antimicrobianos comprenden las moléculas de ácidos nucleicos de insectos de la invención y variantes y fragmentos funcionales de los mismos. La selección del promotor dependerá de la localización y duración deseada de las secuencias de nucleótidos antimicrobianas. Los promotores de la invención incluyen promotores constitutivos, inducibles y preferidos de tejido. Como se discutió anteriormente, la secuencia de nucleótidos de la invención codifica a polipéptidos con propiedades antimicrobianas, particularmente propiedades fungicidas. Por consiguiente, las secuencias de la invención pueden mejorar la resistencia a las enfermedades de vegetales transgénicos por disrupción de la función celular de patógenos vegetales, particularmente patógenos fúngicos vegetales. Sin embargo, se reconoce que la presente invención no es dependiente de un mecanismo de defensa particular. Mejor dicho, las composiciones y métodos de la invención trabajan para incrementar la resistencia de la planta a patógenos independientemente de cómo se logra o se aumenta esa resistencia. Los métodos de la invención pueden usarse con otros métodos disponibles en el arte para mejorar la resistencia a las enfermedades en vegetales . De manera similar, las composiciones antimicrobianas descritas en la presente pueden ser usadas solas o en combinación con otras secuencias de nucleótidos, polipéptidos o agentes para proteger contra enfermedades y patógenos vegetales. Aunque puede usarse una cualquiera de una variedad de segundas secuencias de nucleótidos, modalidades especificas de la invención abracan las segundas secuencias de nucleótidos que, cuando se expresan en vegetales, ayudan a incrementar la resistencia de un vegetal a patógenos. Proteínas, péptidos, y lisozimas que se encuentran de manera natural en insectos (Jaynes y colaboradores (1987) Bioassays 6: 263- 270), vegetales (Broekaert y colaboradores (1997) Critical Reviews in Plant Sciences 16: 297- 323) , animales (Vunnam y colaboradores (1997) J. Peptide Res. 49: 59- 66), y humanos (Mitra y Zang (1994) Plant Physiol. 106: 977-981; Nakajima y colaboradores (1997) Plant Cell Reports 16: 674-679) son también fuente potencial de resistencia a las enfermedades vegetales (Ko, K. (2000) / „ ,; . ,-.; _ „? _ _ .· .

. - ¦ · . ' ) . Ejemplos de dichas secuencias que confieren resistencia a vegetales incluyen aquellas que codifican a la Proteina Activadora de rhoGTPasa (rhoGAP) de girasol, lipoxigenasa (LOX) , Alcohol Deshidrogenasa (ADH) , y Proteina-1 Inducible de Esclerotinia (SCIP-1) descrita en la solicitud EüA 09/ 714,767, incorporada a la presente como referencia. Estas secuencias de nucleótidos mejoran la resistencia a las enfermedades vegetales a través de la modulación del desarrollo, rutas de desarrollo, y el sistema de defensa a patógenos vegetales. Otras proteínas de defensa vegetales incluyen las descritas en WO 99/43823 y WO 99/43821, todos los cuales se incorporan a la presente como referencia. Se reconoce que dichas segundas secuencias de nucleótidos pueden ser usadas tanto en la orientación en el sentido como antisentido dependiendo de los resultados deseados. En una modalidad de la invención, al menos un "cassette" de expresión que comprende una molécula de ácido nucleico que codifica al polipéptido Magl expuesto en la SEQ ID NO: 2, se incorpora establemente en un huésped vegetal de arroz, para conferir resistencia mejorada vegetal a patógenos fúngicos, particularmente al patógeno M. grísea. Aunque la selección del promotor dependerá de la duración y de la localización de la expresión de la secuencia de nucleótidos de Magl, los promotores preferidos incluyen promotores inducibles por patógenos y constitutivos. Por "inducible" se pretende la habilidad de la secuencia promotora para regular la expresión de una secuencia de nucleótidos unida operablemente en respuesta a un estímulo. En el caso de un promotor inducible por patógeno, la regulación de la expresión será en respuesta a un estímulo derivado de patógeno. Otra modalidad de la invención involucra la incorporación estable de al menos un "cassette" de expresión que comprenda una secuencia de nucleótidos que codifique a al menos uno de: el polipéptido Rhizocl expuesto en la SEQ ID NO: 12, el polipéptido Rhizoc2 expuesto en la SEQ ID NO: 4, o el polipéptido Rhizoc3 expuesto en la SEQ ID NO: 16 en un huésped vegetal de arroz para conferir en el vegetal resistencia a las enfermedades mejorada a patógenos fúngicos, particularmente al patógeno R. Solani. Aunque la selección del promotor dependerá de la duración y de la localización de la expresión deseada de la secuencia de nucleótidos Magl, promotores preferidos incluyen promotores inducibles por patógenos y constitutivos . Una modalidad adicional de la invención involucra la incorporación estable de al menos un "cassette" de expresión que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica a al menos uno del polipéptido Rhizocl expuesto en la SEQ ID NO: 12 o el polipéptido Fusl expuesto en la SEQ ID NO: 14 en un huésped vegetal de maíz para conferir en la planta, resistencia mejorada a patógenos fúngicos, particularmente al patógeno F. Verticilloides . En una modalidad, la secuencia de nucleótidos es una secuencia desviada del codón, tal como la secuencia desviada del codón expuesta en la SEQ ID NO: 122, 124, 126, o 128. Aunque la selección del promotor dependerá de la duración y localización de expresión deseada de la secuencia de nucleótidos Magl, los promotores preferidos incluyen promotores inducibles por patógenos y constitutivos. En una modalidad de la invención, los polipéptidos de la invención pueden ser formulados con un portador aceptable en una composición antimicrobiana esto es, por ejemplo, una suspensión, una solución, una emulsión, un polvo espolvoreado, un granulo dispersable, un polvo humectable, y un concentrado emulsificable, un aerosol, un gránulo impregnado, un adyuvante, o una pasta recubrible, y también en encapsulaciones, por ejemplo, substancias poliméricas . En otra modalidad, los agentes defensivos comprenden los polipéptidos aislados de la invención. Los agentes defensivos de la invención encuentran uso en la descontaminación de patógenos vegetales durante el procesamiento de granos para consumo alimentario humano y animal; durante el procesamiento de pienso, y durante el procesamiento de material vegetal para ensilado. En esta modalidad, los agentes defensivos de la invención, se presentan para material vegetal para ensilado, granos, o un cultivo alimentario contaminado, o durante una etapa apropiada del procedimiento de procesamiento, en cantidades efectivas para actividad anti-microbiana. Las composiciones pueden ser aplicadas al ámbito de un patógeno vegetal por, por ejemplo, nebulización, atomización, espolvoreado, dispersión, recubrimiento o vertido, introduciéndolos en o sobre el suelo, introduciéndolos en agua de irrigación, por tratamiento de semillas, o espolvoreado en el momento en el que el patógeno vegetal ha comenzado a aparecer o antes de la aparición de plagas como una medida protectora. Se reconoce que puede usarse en la práctica de la invención cualquier medio para llevar los polipéptidos de los agentes defensivos en contacto con el patógeno vegetal . Se proporcionan métodos para controlar patógenos vegetales, que comprenden aplicar una cantidad descontaminante de un polipéptido o composición de la invención al ámbito del patógeno vegetal. Los polipéptidos de la invención pueden ser formulados con un portador aceptable en una composición esto es, por ejemplo, una suspensión, una solución, una emulsión, un polvo espolvoreado, un gránulo dispersable, un polvo humectable, un concentrado emulsificable, un aerosol, un gránulo impregnado, un adyuvante, una pasta recubrible, y también encapsulaciones en, por ejemplo, substancias poliméricas. Las composiciones descritas anteriormente pueden ser obtenidas por medio de la adición de un agente surfactante, un portador inerte, un conservador, un humectante, un estimulante alimentario, un atrayente, un agente encapsulador, un aglutinante, un emulsificante, un colorante, un protector de rayos UV, un regulador, un agente de afluencia o fertilizante, donadores de micronutrientes u otras preparaciones que influyen el desarrollo vegetal. Uno o más productos agroquimicos que incluyen, pero no se limitan a, herbicidas, insecticidas, fungicidas, bactericidas, nematocidas, moluscicidas, acaricidas, reguladores del crecimiento vegetal, auxiliares de recolección, y fertilizantes, pueden combinarse con portadores, surfactantes, o adyuvantes empleados usualmente en el arte de la formulación u otros componentes para facilitar el manejo y aplicación del producto para micotoxinas objetivo particulares. Los portadores y adyuvantes adecuados pueden ser sólidos o líquidos y corresponden a las substancias empleadas ordinariamente en tecnología de formulación, por ejemplo, substancias minerales regeneradas o naturales, solventes, dispersantes, agentes humectantes, adherentes, aglutinantes, o fertilizantes. Los ingredientes activos de la presente invención se aplican normalmente en la forma de composiciones y pueden aplicarse en el área de cultivo o vegetal a ser tratado, simultáneamente o en sucesión, con otros compuestos. En algunas modalidades, los métodos de aplicar un ingrediente activo de la presente invención o una composición agroquímica de la presente invención (que contiene al menos una de las proteínas de la presente invención) son, aplicación foliar, recubrimiento de semillas, y aplicación al suelo. Los agentes surfactantes adecuados incluyen, pero no se limitan a, compuestos aniónicos tales como carboxilato de, por ejemplo, un metal; un carboxilato de un ácido graso de cadena larga; un N-acilsarcosinato; mono- o di-ésteres de ácido fosfórico con etoxilatos de alcohol graso o sales de dichos ásteres; sulfatos de alcohol graso tales como dodecil sulfato de sodio, octadecil sulfato de sodio, o cetil sulfato de sodio; sulfatos de alcohol graso etoxilados, sulfatos de alquilfenol etoxilados; sulfonatos de lignina; sulfonatos de petróleo; alquil aril sulfonatos tales como alquil bencensulfonatos o sulfonatos de alquilnaftaleno inferiores, por ejemplo, sulfonato de butil-naftaleno; sales de condensados de naftalen-formaldehído sulfonado; sales de condensados de fenol-formaldehído sulfonado; sulfonatos más complejos tales como sulfonatos de amida, por ejemplo, el producto de condensación sulfonado de ácido oleico y N-metil taurina; o los sulfosuccinatos de dialquilo, por ejemplo, el sulfonato o dioctil succinato de sodio. Los agentes no iónicos incluyen productos de condensación de ésteres de ácidos grasos, alcoholes grasos, amidas de ácidos grasos o fenoles grasos de alquilo graso o alquenilo substituidos con óxido de etileno, ésteres grasos de éteres de alcohol polihidrico, por ejemplo, ésteres de ácido graso de sorbitan, productos de condensación de dichos ésteres con óxido de etileno, por ejemplo ésteres de ácido graso de polietilen sorbitan, copolimeros de óxido de etileno y óxido de propileno en bloque, glicoles acetilénicos tales como 2, 4, 7, 9-tetraetil-5-decin-4, 7-diol, o glicoles acetilénicos etoxilados. Los ejemplos de un agente surfactante catiónico incluye, por ejemplo, una mono-, di-, o poliamina alifática tal como un acetato, naftenato, u oleato; o aminas que contengan oxigeno tal como un óxido aminado de polioxietilen alquilamina; una amina unida a amida preparada por la condensación de un ácido carboxilico con una di- o poliamina; o una sal de amonio cuaternario. Ejemplos de materiales inertes incluyen, pero no se limitan a, minerales inorgánicos tales como caolín, filosilicatos, carbonatos, sulfatos, fosfatos o materiales botánicos tales como alcornoque (Ochroma bicolor) , olote de maíz pulverizado, cáscaras de cacahuate, cáscaras de arroz, y cortezas de nogal. Las composiciones de la presente invención pueden estar en una forma adecuada para aplicación directa o como concentrado de composición primaria, la cual requiere dilución con una cantidad adecuada de agua o de otro diluyente antes de aplicación. La concentración descontaminante variará dependiendo de la naturaleza de la formulación particular, específicamente si es un concentrado o ser usada directamente. En una modalidad adicional, las composiciones, así como también los polipéptidos de la presente invención pueden ser tratados antes de la formulación para prolongar la actividad cuando se aplica al ámbito de un patógeno vegetal mientras que el pretratamiento no sea nocivo para la actividad. Dicho tratamiento puede ser por medios químicos o físicos mientras que el tratamiento no afecte nocivamente a las propiedades de las composiciones. Los ejemplos de reactivos químicos incluyen, pero no se limitan a, agentes halogenantes; aldehidos tales como formaldehído y glutaraldehído; anti-infecciosos, tales como cloruro de zefiran; alcoholes, tales como isopropanol y etanol; y fijadores histológicos, tales como fijador de Bouin y fijador de Helly (ver, por ejemplo, Humason (1967) Animal Tissue Techniques (W. H. Freeman and Co.) . En una modalidad de la invención, las composiciones de la invención comprenden un microbio que tiene integrado establemente la secuencia de nucleótidos de un agente defensivo. Los microbios resultantes pueden ser procesados y usados como un nebulizador microbiano. Puede usarse cualquier microorganismo adecuado para este propósito. Ver, por ejemplo, Gaertner y colaboradores (1993) en Advanced Engineered Pesticidesr Kim (Ed.). En una modalidad, las secuencias de nucleótidos de la invención son introducidas en microorganismos que se multiplican en vegetales (epífitos) para liberar los agentes defensivos para cultivos objetivo potenciales. Pueden ser epífitos, por ejemplo, bacterias gram-positivas o gram-negativas . Adicionalmente se reconoce que completas, es decir, sin lisar, las células del microorganismo transformado pueden ser tratadas con reactivos que prolongan la actividad del polipéptido producido en el microorganismo cuando el microorganismo es aplicado al ámbito de un vegetal objetivo. Puede usarse una secuencia de señal de secreción en combinación con el gen de interés de modo que la enzima resultante sea secretada afuera del microorganismo para presentación en el vegetal objetivo. De esta manera, un gen que codifica a un agente defensivo de la invención puede ser introducido vía un vector adecuado en un huésped microbiano, y el huésped transformado aplicado al medio ambiente, vegetales o animales. Microorganismos huéspedes que son conocidos para ocupar la "fitoesfera" (filoplano, filoesfera, rizoesfera, y/o rizoplano) de uno o más cultivos de interés pueden ser seleccionados por transformación. Estos microorganismos son seleccionados en cuanto a su capacidad de competir exitosamente en el medio ambiente particular con los microorganismos de tipo salvaje, para proporcionar mantenimiento y expresión estables del gen que expresa al polipéptido destoxificante, y para protección mejorada de enzimas de la invención de la degradación e inactivación ambiental . Dichos microorganismos incluyen bacterias, algas, y hongos . Son de particular interés microorganismos tales como- bacterias, por ejemplo, Pseudomonas, Erwinia, Serratia, Klebsiella, Xanthomonas, Streptomycesr Rhizobiumr Rhodopseudomonasr Methylius, Agrobacterium, Acetobacterr Lactobacillus, Arthrobacter, Leuconostoc y Alcallgenes; hongos, particularmente levaduras, por ejemplo, Saccharomyces, Pichia, Cryptococcus, Kluyveromyces, Sporobolomyces, Rhodotorula, aureobasidium, y Gliocladium. Son de particular interés especies bacterianas de fitoesfera tales como Pseudomonas syringae, Pseudomonas fl uorescens, Serratia marcescens, Acetobacter xylinum, Agrobacteria, Rhodopseudomonas spheroides, Xanthomonas campestris, Rhizobium melioti , Alcaligenes entrophusr Clavibacter xyli , y Azotobacter vinlandii; y especies de levaduras de fitoesfera tales como hodotor la rubra, R. Glutinisr R. Marina, R. Aurantiaca, Cryptococcus albidus, C. diffluens, C. laurent.ll, Saccharomyces rose!, S. Pretoriensls, S. Cerevisiae, Sporobolomyces rosues, S. Odorus, Kluyveromyces veronae, y Aureobasidlum pullulans . Procariotas ilustrativos, tanto gram-positivos como gram-negativos, incluyen Enterobacetriaceae, tales como Escherichia, Erwinia, Shigella, Salmonella, y Proteus;Bacillaceae; Rhizobiaceae, tales como Rhizobium; Spirillaceae, tales como photobacterium, zymomonas, Serratia, Aeromonas, Vibrio, Desulfovibrio, Spirillu ; Lactobacillaceae; Pseudomonadaceae, tales como Pseudomonas y Acetobacter; Azotobacte ceae; y Nitrobacteraceae. Entre los eucariotas son hongos, tales como Phycomycetes y Ascomycetes, los cuales incluyen levaduras, tales como Saccharomyces y Schizosaccharomyces; y levaduras Basidiomycetes, tales como Rhodotorula, Aureobasidlum, Sporobolomyces, y las similares. En una modalidad de la invención, los agentes defensivos de la invención pueden ser usados como un compuesto farmacéutico para el tratamiento de patógenos microbianos y hongos en humanos y en otros animales. Enfermedades y trastornos causados por patógenos microbianos y hongos incluyen pero no se limitan a meningoencefalitis fúngica, infecciones fúngicas superficiales, tiña, pie de Atleta, histoplasmosis, candidiasis, coccidioidoma, cryptococcus pulmonar, tricosporonosis, piedra, tiña negra, queratitis fúngica, onicomicosis, tiña capitis, cromomicosis, aspergilosis, aspergilosis pulmonar endobronquial, mucormicosis, cromoblastomicosis, dermatofitosis, tiña, fusariosis, ptiriasis, micetoma, pseudalesqueriasis, y esporotricosis .

Las composiciones de la invención pueden ser usadas como compuestos farmacéuticos para proporcionar tratamiento para enfermedades y trastornos asociados con, pero no limitándose a, los siguientes patógenos fúngicos: Histoplasma capsulatum, Candida spp. (C. albicans, C. tropicalis, C. parapsilosis, C. guilliermondii , C. glabrata/Torulopsis glabrata, C. rusei , C. lusitaniae) r Aspergillus fvmigatum, A. Flavue, A. Nigerr Bhizopus spp. r Rhizomucor spp. , Cunninghamella spp. , Apophysomyces spp. r Saksenaee spp. r Mucor spp. r y Absidia spp. La eficiencia de las composiciones de la invención como tratamientos anti-fúngicos puede determinarse a través de ensayos anti-fúngicos conocidos por los expertos en la materia. Los agentes defensivos pueden ser administrados a un paciente a través de numerosos medios. La administración generalizada puede también ser por medios transmucósicos o transdérmicos . Para administración transmucósica o transdérmica, se usan en la formulación penetradores apropiados a la barrera a ser permeada. Dichos penetradores son generalmente conocidos en el arte, e incluyen, por ejemplo, para administración transmucósica, detergentes, sales biliares, y derivados de ácido fusidico. La administración transmucósica puede lograrse a través del uso de nebulizadores nasales o supositorios. Para administración transdérmica, los compuestos activos son formulados en pomadas, ungüentos, geles, o cremas como se conocen generalmente en el arte. Los compuestos pueden también prepararse en la forma de supositorios (por ejemplo, con bases para supositorios convencionales tales como manteca de cacao y otros glicéridos) o enemas de retención para liberación rectal. En una modalidad, los compuestos activos se preparan con portadores que protegerán al compuesto contra la eliminación rápida del cuerpo, tales como una formulación de liberación controlada, que incluya implantes y sistemas de liberación microencapsulados . Pueden usarse polímeros biocompatibles, biodegradables, tales como vinil acetato de etileno, polianhídridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres, y ácido poliláctico. Los métodos para la preparación de dichas formulaciones serán obvias para los expertos en la materia. Pueden también obtenerse los materiales, comercialmente de Alza Corporation & Nova Pharmaceuticals, Inc. Las suspensiones liposómicas (incluyendo los liposomas objetivo para células infectadas con anticuerpos monoclonales para antigenos virales) pueden también usarse como portadores aceptables farmacéuticamente. Estos pueden prepararse de conformidad con métodos conocidos por los expertos en la materia, por ejemplo, como se describe en la Patente EUA No. 4,522,811.

Es especialmente ventajoso formular composiciones orales o parenterales en forma de dosificación unitaria para facilidad de administración y uniformidad de dosificación. Forma de dosificación unitaria, como se usa en la presente se refiere a unidades discretas físicamente adaptadas como dosificaciones unitarias para el sujeto a ser tratado con cada unidad que contenga una cantidad predeterminada de compuesto activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el portador farmacéutico requerido. Dependiendo del tipo y de la severidad de la enfermedad, aproximadamente 1 g/kg hasta aproximadamente 15 mg/kg (por ejemplo, 0.1 a 20 mg/kg) de anticuerpo es una dosificación candidata inicial para administración al paciente, si, por ejemplo, por una o más administraciones separadas, o por infusión continua. Una dosis diaria típica debe de variar desde aproximadamente 1 µg/kg hasta aproximadamente 100 mg/kg o más, dependiendo de los factores anteriormente mencionados . Para administraciones repetidas durante varios dias o más prolongados, dependiendo de la condición, el tratamiento ese sostiene hasta que tiene lugar la deseada supresión de los síntomas de la enfermedad. Sin embargo, otros regímenes de dosificación pueden ser útiles. El progreso de esta terapia es monitoreada fácilmente por medio de técnicas y ensayos convencionales. Un régimen de dosificación ejemplar se describe en WO 94/04188. La especificación para las formas de dosificación unitaria de la invención es dictada por y es dependiente de las características únicas del compuesto activo y del efecto terapéutico particular a ser logrado, y las limitaciones inherentes en el arte de elaborar un compuesto activo tal para el tratamiento de individuos . "Tratamiento", se define en la presente como la aplicación o la administración de un agente terapéutico a un paciente, o aplicación o administración de un agente terapéutico a un tejido o linea celular aislados de un paciente, que tenga una enfermedad, un síntoma de enfermedad o una predisposición hacia una enfermedad, con el propósito de curar, sanar, aliviar, auxiliar, alterar, remediar, mejorar, o afectar la enfermedad, los síntomas de enfermedad o la predisposición hacia la enfermedad. Un "agente terapéutico" incluye, pero no se limita a, pequeñas moléculas, péptidos, anticuerpos, ribozimas y oligonucleótidos antisentido. Los agentes defensivos de la invención pueden ser usados para cualquier aplicación incluyendo superficies recubiertas para microbios objetivos. De esta manera, los microbios objetivo incluyen patógenos o microorganismos humanos . Las superficies que deben de ser recubiertas con los agentes defensivos de la invención incluye tapetes y equipos médicos estériles. Los poüpéptidos enlazados a polímeros de la invención pueden ser usados para recubrir superficies. Los métodos para incorporar las composiciones con propiedades antimicrobianas en polímeros son conocidos en el arte. Ver la Patente EUANo. 5,847,047 incorporada a la presente como referencia. Un polipéptido aislado de la invención puede ser usado como un inmunogeno para generar anticuerpos que enlazan a agentes defensivos usando técnicas estándares para la preparación de anticuerpos monoclonales y policlonales .

Pueden usarse los agentes defensivos de extensión total o, alternativamente, la invención proporciona fragmentos de péptidos antigénicos de agentes defensivos para uso como inmunógenos. El péptido antigénico de un agente defensivo comprende al menos 8, preferiblemente 10, 15, 20, o 30 residuos de aminoácidos de las secuencias de aminoácidos mostradas en las SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 22, 23, 25, 26, 28, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 41, 43, 44, 46, 47, 49, 50, 52, 53, 55, 56, 58, 59, 61, 62, 64, 65, 67, 68, 70, 71, 73, 74, 76, 77, 79, 80, 82, 83, 85, 86, 88, 89, 91, 92, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, o 127, y abarcan un epitope de un agente defensivo de modo que un anticuerpo promovido contra el péptido forma un complejo inmune especifico con los polipéptidos anti-microbianos . Los epitopes preferidos abarcados por el péptido antigénico son regiones de agentes defensivos que están localizadas sobre la superficie de la proteína, por ejemplo, regiones hidrofílicas . Por consiguiente, otro aspecto de la invención pertenece a anticuerpos monoclonales y policlonales del agente anti-defensivo que enlazan a un agente defensivo. Los anticuerpos similares a agentes defensivos policlonales pueden ser preparados por inmunización de un sujeto adecuado (por ejemplo, conejo, cabra, ratón, u otro mamífero) El título de anticuerpo de agente defensivo en el sujeto inmunizado puede ser monitoreado durante el tiempo por medio de técnicas estándares, tales como con un ensayo inmunosorbente enlazado a una enzima (ELISA) usando polipéptidos antimicrobianos inmovilizados. A un tiempo de inmunización apropiado, por ejemplo, cuando los títulos de anticuerpo de agente anti-defensivo son más altos, las células que producen el anticuerpo pueden obtenerse del sujeto y ser usados para preparar anticuerpos monoclonales por medio de técnicas estándares, tales como la técnica del hibridoma, descrita originalmente por Kohler y Milstein (1975) Nature 256: 495- 497, la técnica del hibridoma de células B humanas ( ozbor y colaboradores (1983) Immunol. Today 4: 72), la técnica del hibridoma-EBV (Colé y colaboradores) en Monoclonal Antibodies and Cáncer Therapyr Ed. Reisfeld y Sell (Alan R. Liss, Inc. New York, NY) , páginas 77-96) o técnicas de trioma. La tecnología para producir hibridomas es bien conocida (ver generalmente Coligan y colaboradores, Eds . (1994) Current Protocole In Immunology (John Wiley & Sons, Inc., New York, NY) ; Galfre y colaboradores (1977) Nature 266: 55052; Kenneth (1980) en Monoclonal Antibodies: A New Dimensión In Biological Analyses (Plenum Publishing Corp., NY; y Lerner (1981) Yale J. Biol. Med. , 54: 387-402) . Alternativa para preparar hibridomas que secretan anticuerpos monoclonales, puede identificarse y aislarse un anticuerpo similar al agente anti-defensivo monoclonal, por medio del cribado de una biblioteca de inmunoglobulina combinatoria recombinante (por ejemplo, una biblioteca que presenta un fago de anticuerpo) con un agente defensivo para asi aislar los elementos de la biblioteca de inmunoglobulina que enlazan al agente defensivo. Equipos para generar y cribar bibliotecas que presenten fago están comercialmente' disponibles (por ejemplo, Recombinant Phage Antibody System de Pharmacia, No. de Catálogo 27-9400-01; y SurfZAPTM Phage Display Kit de Stratagene, No. de Catálogo 240612) . Adicionalmente, ejemplos de métodos y reactivos particularmente manejables para uso al generar y cribar bibliotecas que presentan anticuerpos pueden encontrarse por ejemplo e, Patente USA No. 5,223,409; Publicaciones de PCT Nos.: WO 92/18619; WO 91/17271; WO 92/20791; WO 92/15679; 93/01288; WO 92/01047; 92/09690; y 90/ 02809; Fuchs y colaboradores (1991) Bio/ echnology 9:1370-1372; Hay y colaboradores (1992) Hum. Antibod. Hybridomas 3: 81-85; Huse y colaboradores (1989) Science 246: 1275-1281; Grifiths y colaboradores (1993) EMBO J. 12: 725- 734. Los anticuerpos pueden ser usados para identificar homólogos de los agentes defensivos de la invención. Los ejemplos siguientes se ofrecen a manera de ilustración y no a manera de limitación.

EXPERIMENTAL Ejemplo 1. Bioensayo para Actividad Fungicida polipéptidos de la hemolinfa de Manduca sexta Después de resolución por cromatografía líquida (LC) , varias fracciones que contienen el polipéptido de M. sexta inducido por patógeno, se ensayaron por actividad fungicida contra los patógenos vegetales M.grisea, R. Solani r y F. verticilloides . Las fracciones de LC fueron primero liofilizadas en placas de microtítulo de 96 pocilios. Se añadió una suspensión de 100 µ? de M. grísea (u otros patógenos mencionados), a la concentración de ensayo de crecimiento fúngico estándar (2500 esporas/ml) , a los pocilios de la placa de microtítulo que contenían el polipéptido, y las placas se sellaron con Borden® Sealwrap™ Las placas fueron entonces colocadas a 28 °C en una cámara obscura por 24 horas. El crecimiento hifal, se monitoreó usando un microscopía de disección. Los polipéptidos contenidos en los pocilios que carecían de crecimiento hifal o que desplegaron crecimiento hifal reducido en comparación con los pocilios control, se consideró que poseían actividad fungicida. Se calificó otra vez el crecimiento hifal, 48 horas post inoculación, para una determinación final de actividad fungicida. Ejemplo 2. Inducción de Respuesta antimicrobiana en Manduca sexta Larvas de M. sexta en el quinto estado larvario fueron inyectadas intersegmentalmente con 20 µ? de una suspensión muy concentrada de hifal de M. grisea y esporas previamente raspadas de una colonia de placa de agar. Las larvas fueron entonces colocadas sobre dieta fresca y se recubrió. Después de 24, 48, y 72 horas, se colectó la emolinfa de las larvas por recorte del excedente usando tijeras quirúrgicas finas sobre una lámina de Parafilm™. De esta manera se colectó 1 ml/insecto. La hemolinfa se transfirió a un matraz cónico de 50 mi y se colocó sobre hielo mientras que las larvas remanentes se siguieron procesando. Una vez que todas las larvas fueron procesadas, se añadió fenil tiolurea hasta una concentración final de 20 M. Se añadió también a la muestra, aprotinina (concentración final de 20 µg/ml) . Las muestras fueron centrifugadas (3000 rpm) por 5 minutos para compactar las células. El sobrenadante remanente (hemolinfa) se sometió a extracción en fase sólida usando columnas de extracción en fase sólida Supelco Discovery® DSC-18. Las columnas se preacondicionaron usando metanol al 100 %, se equilibraron con solvente A (acetonitrilo al 5 %, 0.1 % de TFA; 1 volumen de columna) al 100 % antes de cargar la muestra. Después la hemolinfa (sobrenadante) se filtró a través, la columna se lavó con solvente A antes de eluir con un volumen de columna de Solvente B al 60 %/ Solvente A al 40 % (Solvente B: 95: acetonitrilo al 95 %, TFA al 0.1 %) . El eluyente colectado se congeló a - 80 °C y se liofilizó hasta sequedad. Las muestras de hemolinfa se resuspendieron entonces en un pequeño volumen de agua (usualmente 200 -500 µ?) y se hizo un ensayo de BCA para determinar la concentración de proteina. Después de la etapa de fraccionamiento en fase-sólida, las muestras de hemolinfa se fraccionaron por HPLC y se probaron por bioensayo. La inducción de M. sexta con B. Bassiana y R. Solani se efectuó de manera similar. Se construyeron bibliotecas de cDNA de M. sexta inducidos por los patógenos (JVf. grísea; B. Bassiana; R. Solani) correspondientes de conformidad con los protocolos estándares. Brevemente, se aisló el RRA total de los cuerpos grasos de M. sexta inducida por patógenos. Los mRNAs fueron aislados usando un equipo para purificación de mRNA (BRL) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Las bibliotecas de cDNA se construyeron usando el equipo para síntesis de ZAP-cDNA y el fagémido pBluescript (Stratagene) . Ejemplo 3. Fraccionamiento por HPLC de Polipéptidos desde la Hemolinfa de Manduca sexta Inducida por Magnaportha grísea La hemolinfa de larvas de M. sexta inducida por M. grísea (ver el Ejemplo 2) se fraccionó sobre HP-1100 HPLC, usando una columna Vydac C4 (4.6 - 250 mía) (Figura 3). Un sistema de gradiente se usó para eluir proteínas enlazadas. Las condiciones de gradiente se indican posteriormente. Se colectaron las fracciones a intervalos de 1 minuto en una placa para microtítulo de 96 pocilios y se ensayaron para actividad fungicida contra M. grísea (ver el Ejemplo 1) . Este protocolo se siguió también para fraccionamiento de péptidos de la hemolinfa de M. sexta inducida por B. Bassiana y R. Solani. Se condujo también el bioensayo para actividad fungicida (Ejemplo 1) usando los patógenos vegetales R. Solani y F. vexticilloides. Condiciones de Gradiente: Solventes Solvente A: Acetonitrilo al 5 %, TFA al 0.1 % Solvente B: Acetonitrilo al 95 %, TFA al 0.1 % Gasto 0.6 ml/min Gradiente 0-60 % de B durante 70 minutos Ejemplo 4. Purificación por Microsondeo del Polipéptido Fungicida, Magl Después de fraccionamiento por HPLC, las fracciones del Ejemplo 3 que poseen actividad fungicida (fracciones de 47- 52 min) se separaron adicionalmente por LC-microsondeo (Microchrome Bioresources) usando una columna Vydack C4 (1-150 iran) . Las condiciones de gradiente se indican posteriormente. El eluyente de columna se colectó de una manera tal para resolver mejor los picos con el mayor contenido de polipéptido (Figura 4) ; Los polipéptidos eluidos fueron ensayados para actividad fungicida contra M. grísea (Ver el Ejemplo 1) .La fracción de polipéptido que contiene la mayor actividad fungicida se indica con una flecha . Condiciones de Gradiente: Solventes Solvente A: Acetonitrilo al 5 %, TFA al 0.1 % Solvente B: Acetonitrilo al 95 %, TFA al 0.1 % Gasto 50 µ?/min Gradiente Solvente B al 5- 65 % en 70 minutos La fracción de polipéptido que contiene la mayor actividad fungicida (indicada con una flecha en la figura 4, fue resuelta adicionalmente usando LC-microsondeo (Michrome Bioresources ) en una columna Vydack C-18 (figura 5). Las condiciones de gradiente siguientes. Otra vez las fracciones que contienen el polipéptido fueron ensayadas para actividad fungicida contra M. grísea (Ver el Ejemplo 1) . (El polipéptido purificado resultante se designó Magl) .

Condiciones de Gradiente Solventes Solvente A: Acetonitrilo al 5 %, HFBA al 0.1 % Solvente B: Acetonitrilo al 95 %, HFBA al 0.1 % Gasto 50 µ?/min Gradiente 5- 65 % de solvente B en 70 minutos. Este protocolo se siguió también para la purificación por microsondeo de los polipéptidos fungicidas identificados en la hemolinfa de M. sexta inducida por R. Bassiana y R. Solani. Se condujo también el bioensayo para actividad fungicida usando los patógenos vegetales R. Solani y F. verticilloides . Ejemplo 5. Determinación del Peso Molecular de Magl Se determinó el peso molecular del polipéptido Magl aislado del Ejemplo 4, usando Cromatografía Líquida-espectrofotometría de Masa (LC-MS) . La masa molecular de Magl se determinó usando espectrometría de masa por electronebulización en un espectrómetro de masa LCZ con plataforma para Micromasa (Micromass, Manchester, UK) . Un microsondeo LC (Michrom Bioresources, Auburn CA) liberó la proteína y la fase móvil (acetonitrilo/agua) usando una columna en fase inversa. Se obtuvo el espectro en modalidad iónica positiva usando un voltaje capilar de 3.5 kV, un voltaje de cono de 45V, y una temperatura de fuente de 90 °C. se exploró el espectro en un intervalo de 600- 3000 a una velocidad de 3.5 s/exploración. Se determinaron las masas moleculares usando el algoritmo de desconvolución de entropía máxima (MaxEnt) para transformar el intervalo de m/z de 600 - 3000 para dar un espectro en escala de masa verdadera. Se efectuó la calibración de masa, usando mioglobina de corazón de caballo. Se efectuó un protocolo similar para los otros polipéptidos de la invención. Ejemplo 6. Digestión de Magl con la Endoproteinasa Lys- C La endoproteinasa Lys-C grado secuenciador (Boehringer Mannheim) liofilizada se reconstituyó en 50 µ? de agua redestilada en una concentración de regulador de 50 mM de Tricina pH 8.0, 10 mM de EDTA, y 0.5 mg/ml de rafinosa. El polipéptido Magl del ejemplo 4 se disolvió en regulador de digestión (25 mM de Tris HC1 pH 8.5, 1 nM de EDTA) en una proporción de 1:50 de Lys-C a polipéptido Magl en peso. La reacción se dejó proceder por 20 horas a 37 °C. El polipéptido digerido se fraccionó usando una columna C4 en HPLC de microsondeo con un gradiente de 5- 65 % de acetonitrilo en TFA al 0.1 % durante 70 minutos a un gasto de 50 µ?/min (Figura 6) . Cuatro fragmentos aislados se colectaron y se sometieron a análisis de la secuencia N-terminal .

Se siguió un protocolo similar para la digestión de otros polipéptidos fungicidas de la invención. Ejemplo 7. Determinación de la Secuencia de Aminoácidos N- terminal de Fragmentos del Polipéptido Magl Los N- termini de los fragmentos de Magl aislados del Ejemplo 6, fueron secuenciados en un Secuenciador de Proteínas ABI Procise® 494, que consiste de una estación de trabajo química un sistema de análisis de PTH, control computacional y un "software" llamado secuencia automática. Se usaron los protocolos estándares para correr el sistema y determinar las secuencias (ver la Figura 7) . Las secuencias de aminoácidos N— terminal de fragmentos aislados de los otros polipéptidos de la invención, se determinaron de manera similar. La secuencia del péptido N- terminal es crítica al determinar el sitio de procesamiento exacto o preciso para la conversión del pro-péptido en la forma madura y activa de la proteína (como en este Ejemplo, Magl) . Estoe es, en particular, importante para proteínas secretoras. La secuencia del péptido N- terminal se dedujo tanto del peso molecular generado por medio de LC-MS de la proteína activa como del peso molecular predicho del mismo polipéptido codificado con base en la secuencia de cDNA identificada (en el Ejemplo 8) . Al conocer el termini preciso de la proteína madura, uno puede diseñar y construir moléculas de DNA que codifican a la proteina madura activa completa para expresión en vegetales. Cuando sea necesario, elementos adicionales que controlan específicamente vegetales y secuencias objetivo pueden ser adaptados e incorporados en el diseño genético a fin de mejorar y llevar a cabo la expresión del polipéptido maduro en vegetales . Para asegurar la especificidad y funcionalidad originales de la proteína de Magl retenida en el vegetal, la expresión de la forma madura activa de la proteína en el vegetal es esencial. Ejemplo 8. Aislamiento del Clon de cDNA que codifica a Magl Se cosecharon los cuerpos grasos directamente en nitrógeno líquido antes de procesar. El RNA total de los cuerpos grasos de Manduca sexta desafiado se preparó por pulverizar el tejido con un mortero y triturador en nitrógeno líquido y células lisadas en la presencia de Trizol (Life Technologies) de acuerdo con el protocolo del fabricante. RNA poli A (+) fue purificado por afinidad con oligo (dT) -celulosa desde RNA total usando el Equipo de Purificación de mRNA (Amersham Pharmacia Biotech) siguiendo los protocolos del fabricante en la preparación de la construcción de la biblioteca de cDNA. Se efectuó la primera síntesis de cDNA de hebra usando Superscript II (Life Technologies) y subsecuente segunda síntesis, adición de enlazadores, y clonación direccional en sitios de restricción de pBlue Script SK" (Stratagene) , de acuerdo con las instrucciones proporcionadas con el equipo de cDNA de Stratagene (Stratagene) . El cDNA fue purificado usando una columna de cDNA (Life Technologies) inmediatamente antes de la ligación en el vector. Se efectuó la formación de secuencias de los clones de la biblioteca de cDNA, usando el equipo ABI PRISM Big Dye Terminator Cycle Sequencing Ready con FS Ampli Taq DNA polimerasa (Perkin Elmer) y se analizaron en un Formador de Secuencias de DNA Automático ABI Modelo 373. La secuencia del gen de Magl se identificó por secuenciación de aproximadamente 2000 clones de la biblioteca de cDNA preparado desde itiRNA derivado de los cuerpos grasos de M. sexta desafiada. Las secuencias de aminoácidos derivadas del amino termini del péptido completo o de los productos de fragmentación proteolítica, fueron usadas para comparar con la biblioteca de la secuencia del clon de cDNA correspondiente trasladada en los 6 marcos posibles. Secuencias que contenían 100 % de identidad con secuencias de aminoácidos N— terminales fueron totalmente trasladadas y su peso molecular predicho se comparó con el peso molecular de la proteína de Magl purificada. Las secuencias con pesos moleculares comparables fueron identificadas como que probablemente codifican a Magl . Ejemplo 9. Aislamiento del Clon de cDNA que Codifica a un Polipéptido de Interés La secuencia marcada del aminoácido N- terminal de un polipéptido de interés se usó para identificar a los clones de cDNA que codifican al polipéptido. Los oligonucleótidos degenerados que codifican a las secuencias de aminoácidos marcadas del polipéptido se usan como sondas para detectar cDNAs que codifican al polipéptido en una biblioteca de cDNA de M. sexta inducida por patógeno (ver el Ejemplo 2) . De esta manera se aisla y secuencia un cDNA de extensión total que codifica al polipéptido de interés. Se efectúa la secuenciación completa del clon de cDNA identificado, para confirmar que codifica al polipéptido purificado . La confirmación es proporcionada por medio del peso molecular predicho del polipéptido codificado por el cDNA que es el mismo que el peso molecular del polipéptido generado por LC-MS . Ejemplo 10. Construcción de Polipéptidos Fungicidas que Expresan en Baculovirus Recombinantes . Las secuencias de nucleótidos que codifican a los polipéptidos de la invención pueden ser introducidas en el genoma del baculovirus mismo. Para este propósito las secuencias de nucleótidos pueden ser colocadas bajo el control de 1 promotor de polihedrina, el promotor de IE1, o cualquier otro de los promotores de baculovirus. El cDNA, junto con secuencias líderes apropiadas es entonces insertado en vector de transporte de baculovirus usando técnicas de clonación molecular estándares . Después de la transformación de E. Coli DH5a, se seleccionaron colonias aisladas y se preparó el DNA plásmido y se analizó por análisis de enzimas de restricción. Las colonias que contenían el fragmento apropiado se aislaron, se propagaron, y se preparó el DBA plásmido por co-transíección. Ejemplo 11. Expresión de Polipéptidos Fungicidas en Células de Insectos Los polipéptidos de la invención pueden ser expresados en células de insectos . Para este propósito se propagaron células de Spodoptera frugiperda (Sf-9 o Sf-21) en medio ExCell 401 (JRH Biosciences, Lenexa, KS) , o medio similar, suplementado con suero fetal bovino al 3.0 %. Se añadió Lipofectin® (50 µ? a 0.1 mg/ml, Gibco/BRL) a una alícuota de 50 µ? del vector de transporte que contenía las secuencias de nucleótidos antimicrobianas (500 ng) y AcNPV negativa polihedrina linearizada (2.5 g, DNA viral Bacugold®, Pharmigen, San Diego, CA) . Se co-transfectaron células Sf-9 (aproximadamente 50 % monocapas) con la solución de vector de transporte/DNA viral. El fluido sobrenadarte del experimento de co-transfección se colectó a 5 días post-transfección y se aislaron virus recombinantes empleando los protocolos de purificación en placa estándares, en donde solamente se seleccionaron las placas positivas a la poli edrina (O'Reilly y colaboradores (1992), Baculovirus Expréssion Vecto s: A Laboratory Manual, W. H. Freeman & Company, New York) . Se inocularon células Sf-9 en cajas de petri de 35 mm (50 % monocapas) con 100 µ? de una dilución en serie de la suspensión viral, y se colectaron los fluidos sobrenadantes a 5 días post-infección. A fin de preparar mayores cantidades de virus para caracterización, estos fluidos sobrenadantes se usaron para inocular cultivos de tejido mayores para propagación en gran escala de virus recombinante . La expresión del polipéptido fungicida codificado por medio de baculovirus recombinantes puede confirmarse usando un bioensayo (tal como el descrito en el Ejemplo 4), LC-MS, o anticuerpos. Ejemplo 12. Expresión de Péptidos Fungicidas en Pichia Las secuencias de nucleótidos que codifican a los polipéptidos de la invención pueden ser expresadas en Pichia bajo el control del promotor constitutivo o inducible y terminada para permanecer intracelular o para ser secretada en el medio. Las secuencias de nucleótidos son clonadas en el vector de expresión de Pichia usando técnicas moleculares estándares. La transformación de cepas de Pichia (por ejemplo X-33, GS115, SMD1168, KM71 etc - Invitrogen, Carlsbad, CA) involucra la linearización de la construcción e introducción del DNA en células de Pichia competentes para transformación por medios químicos o por electroporación de acuerdo con los protocolos estándares. Se seleccionaron los transformantes ya sea por la resistencia a Zeocina o blasticidina o por su capacidad para crecer sobre medio deficiente en histidina. Se efectuaron pruebas de expresión en pequeña escala sobre transformantes seleccionados para identificar altos expresores de los polipéptidos de la invención para aumentar a escala adicional. En un sistema inducible, tal como cuando el péptido está bajo el control del promotor A0X1, los transformantes se desarrollaron en medio con glicerol como una fuente de carbono y se indujeron por crecimiento en medio que contenía metanol en vez de glicerol. La inducción continua durante un período de 24 -120 horas se logró por adición de metanol (concentración final de 0.5 %) cada 24 horas. La expresión funcional del polipéptido se confirmó por medio de análisis por LC-MS/purificación y bioensayo. Ejemplo 13. Expresión de Polipéptidos Fungicidas en Bacterias Las secuencias de nucleótidos que codifican a los polipéptidos de la invención pueden ser expresadas en bacterias y los péptidos objetivo por expresión intracelular o extracelular . Los cDNAs pueden ser clonados en un vector de expresión bacteriana adecuado (por ejemplo, vectores pET (Novagen, Madison, I) bajo el control de un promotor constitutivo o inducible usando técnicas de clonación molecular estándares. El plásmido que contiene el gen de interés es introducido en células bacterianas competentes para transformación usando los protocolos estándares para transformación química o electroporación y los transformantes son seleccionados usando la resistencia antibiótica. Además, a las cepas de E. Coli tradicionales comúnmente usadas para transformación pueden usarse cepas imitantes tales como Origami™ (Novagen) que son permisibles para la formación del enlace disulfuro, especialmente con péptidos ricos en cisteína para expresar a péptidos funcionales. Sistemas inducibles tales como cepas de E. Coli que producen el gen de T7 RNA polimerasa (lisogen lambda - DE3) puede usarse en la expresión del gen de interés bajo un promotor T7, es inducido por adición de IPTG por períodos variables de tiempo. La expresión y la actividad del polipéptido se confirman por LC-MS y bioensayos . Ejemplo 14. Transformación de Callo Embriogénico de Arroz por Bombardeo y Regeneración de Vegetales Transgénicos . Cultivos celulares de callo embriogénicos derivados del escutelo de semillas germinantes sirvieron como el material fuente para los experimentos de transformación. Este material es generado por semillas de arroz estériles germinantes sobre un medio de iniciación de callo (sales de MS, Nitsch y vitaminas Nitsch, 1.0 mg/ 12.4-D y 10 µ? de AgNC ) en la obscuridad a 27 - 28 °C. El callo embriogénico que prolifera desde el escutelo de los embriones es entonces transferido a medio CM (sales N6, Nirsch y vitaminas Nitsch, 1 mg/ 12.4-D, Chu y colaboradores, 1985, Sci . , Sínica 18: 659-668). Cultivos de callo se mantienen en CM por sub-cultivos de rutina a intervalos de dos semanas y se usan para transformación en 10 semanas de iniciación. El callo se prepara por transformación por subcultivo de piezas de 0.5- 1.0 itim aproximadamente 1 mía de separación, dispuestos en un área circular de aproximadamente 4 cm de diámetro, en el centro de un círculo de papel Whatman No. 541 colocado en medio CM. Las placas con callo se incubaron en la obscuridad a 27- 28 °C por 3- 5 días. Precio al bombardeo, los filtros con callo se transfirieron a CM suplementado con manitol 0.25 M y sorbitol 0.25 M por 3 horas en la obscuridad. Las tapas de las placas de petri se dejaron entreabiertas por 20 - 45 minutos en una campana estéril para permitir que se disipe la humedad.

El DNA de plásmido circular de dos diferentes plásmidos, uno que contiene el marcador seleccionable para transformación de arroz y uno que contiene el nucleótido de la invención, son co-precipitados sobre la superficie de partículas doradas. Para lograr esto, un total de 10 µg de DNA en una proporción de 2:1 de característica: se añaden DNAs marcadores seleccionables a una alícuota de 50 µ? de partículas doradas resuspendidas a una concentración de 60 mg/ml. Se añadieron luego cloruro de calcio (50 µ? de una solución 2.5 M) y espermidina (20 µ? de una solución 0.1M) a la suspensión de DNA-dorado cuando el tuvo era sometido a vórtice por 3 minutos . Las partículas doradas se centrifugaron en una microcentrífuga por 1 segundo y se removió el sobrenadante. Las partículas doradas se lavaron entonces dos veces con 1 mi de etanol absoluto y luego se resuspendieron en 50 µ? de etanol absoluto y se sonicaron (baño sonicador) por un segundo para para dispersar las partículas doradas. La suspensión dorada se incubó a - 70 °C por cinco minutos y se sonicaron (baño sonicador) si es necesario para dispersar las partículas. Seis microlitros de partículas doradas recubiertas de DNA se cargaron entonces sobre discos macroportadores mylar y se deja evaporar el etanol. Al final del período de secado, una placa de petri que contenía el tejido se colocó en la cámara del PDS-1000/He.

El aire en la cámara es entonces evacuado a un vacío de 28 - 29 pulgadas de Hg. El microportador es acelerado con una onda de choque de helio usando una membrana de ruptura que se activa cuando la presión de He en el tubo de choque alcanza 1080 - 1100 p.s.i. El tejido es colocado aproximadamente 8 cm desde el protector de detención y el callo es bombardeado dos veces. Cinco a siete placas de tejido son bombardeadas de esta manera con las partículas doradas recubiertas de DNA. Después del bombardeo, el tejido calloso es transferido á medio CM sin sorbitol o manitol suplementario. En 3-5 días después del bombardeo el tejido calloso es transferido a medio SM (medio CM que contiene 50 mg/1 de higromicina) . Para lograr esto, el tejido calloso es transferido de las placas a tubos cónicos de 50 mi estériles y se pesaron. Se añadió agar superior fundido a 40 °C usando 2.5 mi de agar superior/ 100 mg de callo. Los aglomerados de callo se rompieron en fragmentos de menos de 2 mm de diámetro por administración repetida a través de una pipeta de 10 mi. Alícuotas de tres mililitros de las suspensiones de callo se plaquearon sobre medio SM recientemente preparado y las placas se incubaron en la obscuridad por 4 semanas a 27 - 28 °C. Después de 4 semanas se identificaron eventos de callo transgénico, se transfirieron a placas de SM recientemente preparado y se desarrollaron por dos semanas adicionales en la obscuridad a 27 - 28 °C. El callo desarrollado se transfirió a medio RM1 (sales de MS, Nitsch y vitaminas de Nitsch, sacarosa al 2 %, sorbitol al 3 %, gelrita al 0.4 % + 50 ppm de hig B) por 2 semanas en la obscuridad a 25 °C. Después de 2 semanas el callo se transfirió a medio K 2 (sales de MS, Nitsch y vitaminas de Nitsch, sacarosa al 3 %, gelrita al 0.4 % + 50 ppm de hig B) y se colocó bajo luz blanca fría (~ 40 µ?p?"2?~ 2) con un fotoperiodo de 12 horas a 25 °C y 30 - 40 % de humedad. Después de 2 - 4 semanas en la luz, el callo generalmente comienza a organizarse y forma brotes. Los brotes se remueven del medio/callo circundante y se transfiere suavemente a medio RM3 (1/2 x sales de MS, Nitsch y vitaminas de Nitsch, sacarosa al 1 % + 50 ppm de higromicina B) en fitobandejas (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) y se continuó la incubación usando las mismas condiciones que se describieron en la etapa previa. Los vegetales se transfirieron de EM3 a pocilios de 4 pulgadas que contenían Metro mix 350 después de 2 - 3 semanas, cuando tuvo lugar el crecimiento de brotes y de raíces. Los vegetales se desarrollaron usando un ciclo de luz / obscuridad de 12 hr /12 hr usando un régimen de temperatura de ~ 30/ 18 °C día/noche. Ejemplo 15. Transformación de Maíz por Bombardeo de Partículas y Regeneración de Vegetales Transgénicos Embriones de maíz inmaduros de vegetales donadores de invernadero son bombardeados con un plásmido que contiene una secuencia de nucleótidos de la invención enlazada operablemente a un promotor de ubiquitina y el gen marcador seleccionable PAT ( ohlleben y colaboradores (1988) Gene 70: 25-37), el cual confiere resistencia al insecticida Bialafos. Alternativamente, el gen marcador seleccionable está provisto de un plásmido separado. La transformación se efectúa como sigue. Los medios receptores siguen a continuación. Preparación del Tejido Objetivo Los jilotes se descascararon y la superficie se esterilizó en blanqueador Clorox al 30 % más Micro detergente al 0.5 % por 20 minutos, y se enjuagaron dos veces con agua estéril. Los embriones inmaduros se extirparon y se colocaron a un lado del eje del embrión (lado superior del escutelo), 25 embriones por placa, en medio 560Y por 4 horas y luego se alinearon en la zona obj etivo de 2.5 cm en preparación para el bombardeo . Preparación de DNA Se hace un vector plásmido que comprende la secuencia de nucleótidos déla invención enlazada operablemente a un promotor de ubiquitina. Este DNA de plásmido más el DNA del plásmido que contenía un marcador seleccionable de PAT se precipita sobre 1.1 um (diámetro promedio) de tungsteno compactado usando un procedimiento de precipitación con CaCl2 como sigue: 100 µ? de partículas de tungsteno compactadas en agua 10 µ? (1 µg) de DNA en regulador de Tris EDTA (1 µg de DNA total) 100 µ? de CaCl2 2.5 M 10 µ? de espermidina 0.1 M cada reactivo se añade secuencialmente a la suspensión de partículas de tungsteno, mientras que se mantienen en el multitubo generador de vórtice. La mezcla final se sónica brevemente y se deja incubar bajo vórtice constante por 10 minutos. Después del período de precipitación, los tubos se centrifugan brevemente, se remueve el líquido, se lava con 500 mi de etanol al 100 %, y se centrifuga por 30 segundos. De nuevo se remueve el líquido, y se añaden 105 µ? de etanol al 100 % al compactado de partículas de tungsteno final . Para el bombardeo con la pistola de partículas, las partículas de DNA/tungsteno se sonicaron brevemente y se tiñeron 10 µ? sobre el centro de cada microportador y se dejaron secar aproximadamente 2 minutos antes del bombardeo . Tratamiento con la pistola de Partículas Las placas de muestras se bombardearon al nivel No . 4 en la pistola de partículas No. HE34-1 o No. HE34-2. Todas las muestras recibieron un solo disparo a 650 PSI, con un total de diez alícuotas tomadas de cada tubo de DNA/partículas preparadas. Tratamiento Subsecuente Después del bombardeo, los embriones se guardaron en medio 560Y por 2 días, luego se transfirieron a medio de selección 560R que contenía 3 mg/litro de Bialafos, y subcultivadas cada 2 semanas. Después de aproximadamente 10 semanas de selección, los clones de callo-resistentes a la selección se transfirieron al medio 288J para iniciar la regeneración vegetal. Después de la maduración del embrión somático (2 — 4 semanas) , los embriones somáticos bien desarrollados se transfirieron al medio para germinación y se transfirieron al cuarto de cultivo iluminado. Aproximadamente 7 - 10 días después las plántulas que se desarrollaron se transfirieron a medio libre de hormonas a 272V en tubos por 7-10 días hasta que las plántulas estuvieron bien establecidas. Las plantas se transfirieron entonces a insertos en macetas (equivalentes a tiestos de 2.5") que contienen que contienen suelo para plantación y crecimiento por 1 semana en una cámara de crecimiento, crecimiento subsecuente 1 - 2 semanas adicionales en el invernadero, luego se transfirieron a 600 macetas clásicas {1.6 galones) y crecieron hasta madurez. Las plantas se monitorearon y calificaron por expresión de la secuencia de nucleótidos que codifica al polipéptido fungicida de la invención, o por la presencia del polipéptido fungicida por métodos inmunológicos, o por actividad fungicida por ensayos conocidos en el arte, descritos por supra en la presente. Bombardeo y Medio de Cultivo El medio de bombardeo (560Y) comprende 4.0 g/1 de sales básales de ?G6 (SIGMA C-1416) , 1.0 ml/1 de la Mezcla de Vitaminas1 de Erikson (1000X SIGMA-1511) , 0.5 mg/1 de clorhidrato de tiamina, 120.0 g/1 de sacarosa, 1.0 mg/1 de 2,4-D, y 2.88 g/1 de L-prolina (llevado al volumen con H20 D-I siguiendo con el ajuste de pH a 5.8 con KOH) 2.0 g/1 de Gelrita (añadida después de llevar a volumen con H20 D-I); y 8.5 ml/1 de nitrato de plata (añadido después de esterilizar el medio y enfriar a temperatura ambiente) . El medio de selección (560R) comprende 4.0 g/1 de sales básales de N6 (SIGM C-1416), 1.0 ml/1 de Mezcla de Vitaminas de Erikson (1000X SIGMA-1511), 0.5 mg/1 de clorhidrato de tiamina, 30.0 g/1 de sacarosa, y 2.0 mg/1 de 2,4-D (llevado al volumen con H20 D-I, siguiendo con ajuste de pH a 5.8 con KOH); 3.0 g/1 de Gelrita (añadida después de llevar a volumen con ¾0 D-I); y 0.85 mg/1 de nitrato d eplata y 3.0 mg/1 de Bialafos (ambos añadidos después de esterilizar el medio y enfriar a temperatura ambiente) . El medio de regeneración vegetal (288J) comprende 4.3 g/1 de sales de MS (GIBCO 11117-074), 5.0 ml/1 de solución madre de vitaminas de MS (0.100 g de ácido nicotinico, 0.02 g/1 de clorhidrato de tiamina, 0.10 g/1 de clorhidrato de piridoxina, y 0.40 g/1 de glicina llevada a volumen con H20 D-I pulida) (Murashige y Skoog (1962) Physiol. Plant. 15:473), 100 mg/1 de mioinositol, 0.5 ml/1 de zeatina, 60 g/1 de sacarosa, y 1.0 ml/1 de 0.1 mM de ácido abscisico (llevado a volumen con ¾0 D-I pulida después de ajustar a pH 5.6); 3.0 g/1 de gelrita (añadida después de llevar a volumen con H20 D-I); y 1.0 mg/1 de ácido indolacético y 3.0 mg/1 de bialafos (añadido después de esterilizar el medio y enfriar a 60 °C) . El medio (272V) libre de hormona comprende 4.3 g/1 de sales de MS (GIBCO 11117-074), 5.0 ml/1 de solución madre de vitaminas de MS (0.100 g/1 de ácido nicotinico, 0.02 g/1 de clorhidrato de tiamina, 0.10 g/1 de clorhidrato de piridoxina, y 0.40 g/1 de glicina llevada a volumen con H20 D-I pulida), 0.1 g/1 de mioinositol, y 40.0 g/1 de sacarosa (llevada a volumen con H20 D-I pulida después de ajustar el pH a 5.6) ; y 6 g/1 de bacto-agar (añadido después de llevar a volumen con H20 D-I pulida), se esterilizó y enfrió a 60 °C. Ejemplo 16. Transformación de Maíz mediada por Agrobacterium y Regeneración de Vegetales Transgénicos Para la transformación de Maíz mediada por Agrobacterium con una secuencia de nucleótidos optimizada para vegetales de la invención, preferiblemente el método de Z ao se emplea (Patente EUA No. 5,981,840, y la publicación de patente de PCT WO 98/32326; los contenidos de lascuales se incorporan a la presente como referencia) . Brevemente, embriones inmaduros se aislan de maíz y los embriones se ponen en contacto con una suspensión de Agrobacterium, donde las bacterias son capaces de transferir la secuencia de nucleótidos optimizada para vegetales de la invención a al menos una célula de al menos uno de los embriones inmaduros (etapa 1: la etapa de infección) . En esta etapa los embriones maduros son preferiblemente sumergidos en una suspensión de Agrobacterium para la iniciación de inoculación. Los embriones son co-cultivados por una vez con el Agrobacterium (etapa 2: la etapa de co-cultivo) . Preferiblemente los embriones maduros son cultivados en medio sólido después de la etapa de infección. Después de • este periodo de co-cultivación se contempla una etapa de ^reposo" opcional. En esta etapa de reposo, los embriones son incubados en la presencia de al menos un antibiótico conocido para inhibir el crecimiento de Agrobacterium sin la adición de un agente selectivo para transformantes vegetales (etapa 3: etapa de reposo). Preferiblemente los embriones inmaduros son cultivados en medio sólido con antibiótico, pero sin un agente selector, para eliminación de Agrobacterium y para una fase de reposo para las células infectadas. Después se cultivan los medios inoculados en medio que contenga un agente selectivo y el callo transformado de crecimiento es recuperado (etapa 4 : la etapa de selección) . Preferiblemente, los embriones inmaduros son cultivados en medio sólido con un agente selectivo dando como resultado el crecimiento selectivo de células transformadas. El callo es entonces regenerado en vegetales (etapa 5: la etapa de regeneración), y preferiblemente el calli desarrollado sobre medio selectivo es cultivado sobre medio sólido para regenerar los vegetales. Ejemplo 17. Transformación de Embriones de Soya y Regeneració de Vegetales Transgénicos Embriones de soya se bombardearon con un plásmido que contenia una secuencia de nucleótidos de la invención enlazada operablemente a un promotor de ubiquitina como sigue. Para inducir embriones somáticos, cotiledones, 3 - 5 mm de longitud extirpados desde la superficie esterilizada, semillas inmaduras del cultivar de soya A2872, son cultivadas en la luz o en la obscuridad a 26 °C sobre un medio de agar apropiado por 6 a diez semanas. Embriones somáticos que producen embriones secundarios son entonces extirpados y colocados en un medio liquido adecuado. Después de la selección repetida por aglomeraciones de embriones somáticos que se multiplican como anteriormente, embriones en etapa globular, las suspensiones se mantienen como se describe posteriormente. Cultivos de la suspensión embriogénica de soya pueden mantenerse en 35 mi de medio liquido sobre un agitador rotatorio, 150 rpm, a 26 °C con luz fluorescente sobre una programación 16:8 horas de día/noche. Los cultivos son subcultivados cada dos semanas por inoculación de aproximadamente 35 mg de tejido en 35 mi de medio líquido. Cultivos de la suspensión embriogénica de soya pueden entonces ser transformadas por el método de bombardeo con pistola de partículas (Klein y colaboradores (1987) Nature (London) 327: 70- 73, Patente EUA No. 4,945,050). Para estas transformaciones puede usarse un instrumento Du Pont Biolistic PDS1000/HE (retroadaptable con helio) . Un gen marcador seleccionable que puede usarse para facilitar la transformación de soya es un transgen compuesto del promotor 35S del Virus Mosaico de Coliflor (Odell y colaboradores (1985) Nature 313: 810- 812), el gen de la higromicina fosfotransferasa del plásmido pjR225 (de E . Coli; Gritz y colaboradores (1983) Gene 25: 179 - 188), y la región 3' del gen de la nopalina sintasa desde el T-DNA del plásmido Ti de Agrobacterium tumefaciens . El "cassette" de expresión que comprende la secuencia de nucleótidos de la invención operablemente enlazada al promotor de ubiquitina puede ser aislado como un fragmento de restricción. Este fragmento puede entonces ser insertado en un sitio de restricción único del vector que porta el gen marcador. Se añade a 50 µ? de una suspensión de 60 mg/ml de partículas doradas de 1 µ?a (en orden) : 5 µ? de DNA (1 g/µl) , 20 µ? de espermidina (0.1 M) , y 50 µ? de Ca C12 (2.5 M). La preparación de partículas se agita entonces por 3 minutos, se centrifuga en microcentrífuga por 10 segundos y se remueve el sobrenadante. Las partículas recubiertas de DNA se lavan entonces una vez en 400 µ? de etanol al 70 % y se resuspenden en 40 µ? de etanol anhidro. La suspensión de partículas/DNA puede ser sonicada tres veces por un segundo cada una. Cinco microlitros de las partículas doradas recubiertas de DNA se cargan entonces en cada macro disco portador. Aproximadamente 300 - 400 mg de un cultivo en suspensión preparado dos semanas antes se colocan en una placa de petri de 60 x 15 mm vacía y el líquido residual se remueve del tejido con una pipeta. Por cada experimento de transformación, aproximadamente 5 - 10 placas de tejido se bombardean normalmente. La presión de ruptura de membrana se ajusta a 1100 psi, y la cámara se evacúa a un vacío de 28 pulgadas de mercurio. El tejido se coloca aproximadamente 3.5 pulgadas alejado del protector de retención y se bombardea tres veces. Después del bombardeo, el tejido puede ser dividido en mitades y retro-colocado en liquido y cultivado como se describió anteriormente. Cinco a siete días post-bombardeo, el medio liquido puede ser intercambiado con medio recientemente preparado y once a doce dias post-bombardeo con medio recientemente preparado que contenga 50 mg/ml de higromicina. Este medio selectivo puede ser reemplazado semanalmente . Siete a Ocho semanas post-bombardeo, se observa crecer tejido transformado, verde desde el no transformado, aglomerados embriogénicos necróticos. El tejido verde aislado es removido e inoculado en matraces individuales para generar nuevo, propagado clonalmente, cultivos en suspensión embriogénica transformada. Cada nueva linea puede ser tratada como un evento de transformación independiente. Estas suspensiones pueden entonces ser sub-cultivadas y mantenidas como aglomerados de embriones inmaduros o regenerados en vegetales completos por maduración y germinación de embriones somáticos individuales. Ejemplo 18. Transformación de Tejido del Meristema del Girasol y Regeneración de Vegetales Transgénicos Tejidos de meristema de girasol se transforman con un "cassette" de expresión que contiene la secuencia de nucleótidos de la invención enlazada operablemente a un promotor de ubiquitina como sigue (ver también la Patente Europea Número EP 0 486233, incorporada a la presente como referencia, y Malone-Schoneberg y colaboradores (1994) Plant Science 103: 199 - 207). Semillas de girasol maduras (Hellianthus annuus . ) son descascaradas usando una trilladora de cabeza para trigo. Las semillas son esterilizadas en superficie por 30 minutos en una solución blanqueadora de Clorox al 20 % con la adición de dos gotas de Tween 20 por 50 mi de solución. Las semillas son enjuagadas dos veces con agua destilada estéril. Se prepararon ejes embriónicos extirpados y mantenidos en cultivo por medio de una modificación de los procedimientos descritos por Schrammeijer y colaboradores (Schrammei er y colaboradores (1990) Plant Cell Rep. 9: 55 - 60) . Las semillas se embebieron con agua destilada por 60 minutos siguiendo el procedimiento de esterilización en superficie. Los cotiledones de cada semilla se rompen entonces, produciendo una fractura limpia en el plano del eje embriónico. Después de la separación de la punta radicular, los tejidos extirpados y mantenidos en cultivo son bisectados longitudinalmente entre las hojas primordiales. Las dos mitades son colocadas, superficie cortada, sobre medio GBA que consiste de elementos minerales de Murashige y Skoog (Murashige y colaboradores (1962) Physiol. Plant., 15 : 473 - 497), adiciones de vitaminas de Shepard (Shepard (1980) en Emergent Techniques for the Genetic Improvement of Crops (University of Minnesota Press, St. Paul, Minnesota), 40 mg/1 de sulfato de adenina, 30 g/1 de sacarosa, 0.5 mg/1 de 6- bencil-aminopurina (???) , 0.25 mg/1 de ácido indol- 3- acético (IAA), 0.1 mg/1 de ácido giberélico (GA3) , pH 5.6, y 8 g/ 1 de Fitagar. Los tejidos extirpados y mantenidos en cultivo son sometidos a bombardeo por microproyectil antes del tratamiento con Agrobacterlum (Bideney y colaboradores (1992) Plant Mol. Biol. 18: 301 - 313). Treinta o cuarenta tejidos extirpados y mantenidos en cultivo son colocados en un circulo en el centro de una placa de 60 x 20 mm para este tratamiento. Aproximadamente 4.7 mg de irdcroproyectiles de tungsteno de 1.8 mm son resuspendidos en 25 mi de regulador de TE estéril (10 mM de Tris HC1, 1 mM de EDTA, pH 8.0) y se usan alícuotas de 1.5 mi por bombardeo. Cada placa es bombardeada dos veces a través de un protector de nytex de 150 mm colocada 2 cm encima de las muestras en dispositivo de aceleración de partículas PDS 1000®. En todos los experimentos de transformación se usaron cepas EHA105 de Agrobacterium tumefaciens desarmadas. Un vector plásmido binario que comprende el "cassette" de expresión que contiene la secuencia de nucleótidos de la invención enlazada operablemente al promotor de ubiquitina es introducido en la cepa EHA105 de Agrobacterium via congelación-descongelación como se describe en Holsters y colaboradores (1978) Mol. Gen. Genet. 163: 181 - 187. Este plásmido comprende adicionalmente un gen marcador seleccionable de kanamicina (es decir nptll) . Las bacterias para los experimentos de transformación vegetal son desarrolladas toda la noche (28 °C y agitación continua de 100 RPM) en medio YEP liquido (10 gm/1 de extracto de levadura, 10 gm/1 de Bactopeptona, y 5 gm/1 de NaCl, pH de 7.0) con los antibióticos apropiados para la cepa bacteriana y mantenimiento de plásmido binario. La suspensión es usada cuando alcanza un ODeoo de aproximadamente 0.4 a 0.8. Las células de Agrobacterium son compactadas y resuspendidas a un ??e?? final de 0.5 en un medio de inoculación comprendido de 12.5 mM MES pH de 5.7, 1 gm/1 de NH4C1, y 0.3 gm/1 de MgS0 . Los tejidos extirpados y mantenidos en cultivo recientemente bombardeados son colocados en una suspensión de Agrobacterium, son mezclados y dejados sin perturbación por 30 minutos. Los tejidos extirpados y mantenidos en cultivo se transfieren entonces a medio GBA y son co-cultivados, cortados en la superficie inferior, a 26 °C y 18 horas al dia. Después de tres dias de co-cultivación, los tejidos extirpados y mantenidos en cultivo son transferidos a medio 374B (medio GBA sin reguladores de crecimiento y un nivel reducido de sacarosa de 1 %) suplementado con 250 mg/1 de cefotaxima y 50 iug/1 de sulfato de kanamicina. Los tejidos extirpados y mantenidos en cultivo son cultivados por dos a cinco semanas en selección y luego transferidos a medio 374B recientemente preparado sin kanamicina por 1 a dos semanas de desarrollo continuo. Los tejidos extirpados y mantenidos en cultivo con áreas de crecimiento diferenciadas resistentes al antibiótico, que no han producido brotes adecuados para extirpación son transferidos a medio GBA que contenia 250 mg/1 de cefotaxima para un segundo tratamiento fitohormonal de 3 días. Las muestras de hojas desde brotes resistentes a la kanamicina, verdes son ensayadas para la presencia de NPTII por ELISA y para la presencia de expresión transgénica por medio del ensayo para expresión de la secuencia de nucleótidos que codifica al polipéptido fungicida de la invención, la presencia del polipéptido fungicida por medio de métodos inmunológicos, o para actividad fungicida por ensayos conocidos en el arte descrito en supra en la presente. Los brotes NPUI-positivos son injertados al híbrido 6440 de Pioneer® en rizomas de plántulas de girasol desarrolladas in vitro. Las semillas esterilizadas superficialmente fueron germinadas en medio 48-0 (Murashige de media potencia y sales de Skoogs, sacarosa al 0.5 %, gelrita al 0.3 %, pH 5.6) y desarrolladas bajo las condiciones descritas para el cultivo de los tejidos extirpados mantenidos en cultivo. La porción superior de la plántula es removida, se hace una tajada vertical de 1 cm en el hipocotilo, y el brote transformado es insertado en el corte. El área completa es raspada con Parafilm para asegurar el brote. Los vegetales injertados pueden ser transferidos al suelo después de una semana de cultivo in vitro. Los injertos en el suelo son mantenidos bajo condiciones muy húmedas seguidas por un aclimatado lento al ambiente del invernadero. Los sectores transformados de los vegetales TO (generación progenitora) que maduran en el invernadero son identificadas para NPTII por ELISA y/o por el análisis de actividad fungicida de extractos de hojas mientras que las semillas transgénicas cosechadas desde los vegetales TO positivas a NPTII son identificadas por el análisis de actividad fungicida de pequeñas porciones del cotiledón de la semilla seca. Un protocolo alternativo de transformación de girasol permite la recuperación de la progenie transgénica sin el uso de la presión de selección química. Este método es usado generalmente en casos en donde las secuencias de nucleótidos de la presente invención son enlazadas operablemente a promotores constitutivos o induciblés . Las semillas son descascaradas y esterilizadas superficialmente por 20 minutos en una solución blanqueadora de Clorox al 20 % con la adición de dos gotas de Tween 20 por 100 mi de solución. Luego se enjuagan tres veces con agua destilada. Las semillas esterilizadas son embebidas en la obscuridad a 26 °C por 20 horas sobre papel filtro humedecido con agua. Los cotiledones y el radical de la raíz se removieron, y los tejidos extirpados y mantenidos en cultivo de meristema se cultivaron sobre 374E (medio GBA que consiste de sales de MS, vitaminas de Shepard, 40 mg/1 de sulfato de adenina, sacarosa al 3 %, 0.5 mg/1 de 6-BAP, 0.25 mg/1 de JAA, 0.1 mg/1 de GA, y 0.8 % de Fitagar a pH de 5.6) por 24 horas bajo la obscuridad. Las hojas primarias se removieron para exponer el meristema apical , alrededor de 40 tejidos extirpados y mantenidos en cultivo se colocaron con el domo frontal superior apical en un circulo de 2 cm en el centro de 374M (medio GBA con Fitagar al 1.2 %) , y luego se cultivaron en el medio por 24 horas en la obscuridad. Aproximadamente 18.8 mg de partículas de tungsteno de 1.8 µ?a se resuspendieron en 150 µ? de etanol absoluto. Después de sonicación, 8 µ? de éste se gotearon sobre el centro de la superficie del macroportador . Cada placa es bombardeada dos veces con discos de ruptura a 650 psi en el primer nivel a 26 mm de Hg de vacío de la pistola de helio. El plásmido de interés es introducido en la cepa EHA105 de Agrobacterium tumefaciens via congelación descongelación como se describió anteriormente. El compactado de bacterias desarrolladas toda la noche a 28 °C en un medio YEP liquido (10 g/1 de extracto de levadura, 10 g/1 de Bactopeptona, y 5 g/1 de NaCl, pH de 7.0) en la presencia de 50 µg/l de kanamicina es resuspendido en un medio de inoculación (12.5 mM de ácido 2- (N-morfolino) etansulfónico, NES, 1 g/1 de NH4C1 y 0.3 g/1 de MgS04 a pH de 5.7) para alcanzar una concentración final de 4.0 a OD60o- Los tejidos extirpados y mantenidos en cultivo bombardeados con partículas se transfirieron a medio GBA (374E) , y una goticula de suspensión bacteriana se colocó directamente sobre la parte superior de la meristema. Los tejidos extirpados mantenidos en cultivo se co-cultivaron sobre el medio por 4 dias, después de lo cual los tejidos extirpados mantenidos en cultivo se transfirieron a medio 374C (GBA con sacarosa al 1 % y sin BAP, IAA, GA3 y suplementado con 250 µg/ml de cefotaxima) . Las plántulas se cultivaron sobre el medio por aproximadamente dos semanas bajo condiciones de incubación a 26 °C y dias de 16 horas. Los tejidos extirpados y mantenidos en cultivo (alrededor de 2 cm de largo) de las dos semanas de cultivo en medio 374C son cribados por la expresión de la secuencia de nucleótidos de la invención o por la presencia del polipéptido codificado de la invención por métodos inmunológicos o actividad fungicida, o los similares.

Después se identificaron los tejidos extirpados mantenidos en cultivo positivos, aquellos brotes que no exhibieron actividad fungicida fueron descartados, y cada tejido positivo se subdividió en tejidos nodales. Un tejido nodal contiene al menos un nodo potencial.

Los segmentos nodales se cultivaron en medio GBA por tres a cuatro días para promover la formación de yemas auxiliares desde cada nodo. Luego se transfirieron a medio 374C y se dejaron desarrollar por cuatro semanas adicionales. Las yemas desarrolladas se separaron y se cultivaron por cuatro semanas adicionales en medio 37 C. Las muestras de hojas conjuntadas de cada brote recientemente recuperado se cribaron otra vez por el ensayo de actividad proteinica apropiado. En este momento, los brotes positivos recuperados de un solo nodo generalmente se habían enriquecido en el sector transgénico detectado en el ensayo inicial previo al cultivo nodal . Los brotes positivos recuperados para un polipéptido fungicida de la invención se injertaron en rizomas de plántulas de girasol desarrollados in vitro en el híbrido 6440 de Pioneer. Los rizomas se prepararon de la siguiente manera. Las semillas se descascararon y se esterilizaron superficialmente por 20 minutos en una solución balanqueadora de Clorox al 20 % con la adición de dos a tres gotas de Tween 20 por 100 mi de solución, y se enjuagó tres veces con agua destilada. Las semillas esterilizadas fueron germinadas sobre el filtro humedecido con agua por tres días, luego se transfirieron en medio 48 (sal de MS de media potencia, sacarosa al 0.5 %, gelrita al 0.3 %, pH de 5.0) y se desarrollaron a 26 °C bajo la obscuridad por tres días, luego se incubaron en condiciones de cultivo 16 horas por día. La porción superior de las plántulas seleccionadas se removió, se hizo un corte vertical en cada hipocotilo, y una plántula transformada se insertó en un corte en V. El área de corte se raspó con Parafilm. Después de una semana de cultivo en el medio, las plantas injertadas se transfirieron al suelo. En las primeras dos semanas, se mantuvieron bajo condiciones muy húmedas para aclimatarse al ambiente del invernadero . Ejemplo 19. Preparación de anticuerpos. Se utilizaron métodos estándares para la producción de anticuerpos, tales como los descritos en Harlow y Lañe (1988) Antlbodíes : A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor, NY: Cold Spring Harbor Laboratory; incorporado a la presente en su integridad como referencia. Específicamente, los anticuerpos para los polipéptidos de la invención fueron producidos por inyección de conejos blancos de Nueva Zelanda hembras (Bethyl Laboratory, Montgomery, Tex.) seis veces con 100 microgramos de polipéptido purificado desnaturalizado.

Los animales fueron sangrados a intervalos de dos semanas. Los anticuerpos fueron purificados por cromatografía de afinidad con antígeno inmovilizado con Affigel 15 (BioRad) como se describe en Harlo y Lañe (1988) Antibodles: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, NY. La columna de afinidad se preparó con polipéptidos purificados esencialmente como recomendó BioRad RTM. La detección inmune de antigenos sobre tinciones de PVDF se llevó a cabo siguiendo el protocolo de Meyer y colaboradores (1988)) J. Cell. Biol. 107: 163; incorporado a la presente en su integridad como referencia, usando el equipo ECL de ersham (Arlington Heights, III) . E emplo 20. Construcción del Vector de Trans ormación de Fusl Una versión sintética del gen de Fusl correspondiente al péptido Fusl maduro se construyó con un codón de elección representativo de Manduca sexta (SEQ ID NO: 120 y SEQ ID NO: 122) . La preferencia del codón seleccionada para Fusl se derivó de la base de datos de uso del codón Kazusa (disponible desde www. Kazusa. or. jp/codón/) . La secuencia de señal BAA se añadió a Fusl para facilitar la exportación de afuera de la célula y en el espacio intercelular (Rahmatullah RJ y colaboradores (1989) Plant Mol. Biol. 12(1) : 119 - 121) . La secuencia de aminoácidos ???-Fusl es expuesta en la SEQ ID NO: 121 y SEQ ID NO: 123. Promotores constitutivos fuertes fueron seleccionados para expresar a Fusl en tejidos susceptibles a F. verticilloides . BAA-Fusl (SEQ ID NO: 120) fue subclonada subsecuentemente en los sitios correspondientes de vectores que contienen ya sea el promotor de ubiquitina de maíz: ubi-intron o el promotor de h2B de maíz: ubi-intron (Patente EUA Número 6,177,611, incoprorado a la presente como referencia) . BAA-Fusl se colocó detrás del promotor indicado con una secuencia 3' correspondiente al terminador pinll. Este "cassette" es flanqueado por sitios de enzimas de restricción no compatibles designados para clonar direccionalmente el "cassette" en un plásmido binario que contiene el "cassette" 35S-PAT-35S del gen marcador seleccionable . Los sitios de enzima de restricción fueron usados para subclonar el "cassette" promotor/intron:BA¾_Fusl :pinll ter en un plásmido binario para transformación de maiz. Ejemplo 21.Construcción de Vectores de Transformación de Fus2 Una versión sintética de Fus2 operablemente enlazado a un péptido de señal de alfa amilasa de cebada (BAA) modificado se construyó con un codón de elección representativo de Streptomyces coellcolor (SEQ ID NO: 124 y SEQ ID NO: 126) . El uso del codón de S. Coelicolor fue seleccionado a causa de su total similitud con el uso del codón observado en vegetales- La preferencia del codón seleccionado para Fus2 se deriva de la base de datos en uso del codón Kazusa (disponible de www. Kazusa. or. jp/codón/) . Ver las Tablas 1 y 2. La secuencia de señal de BAA. se añadió a la de Fus2 para facilitar la exportación de Fus2 afuera de la célula y en el espacio intercelular. La modificación en el extremo 3' del péptido de señal- se hizo para lograr la fragmentación del péptido de señal correcto como se predice por medio del programa SIGNALP (Versión 1.1) (Center for Biological Sequence Analysis, Technical University of Deñmark) . La secuencia de aminoácidos de BAA-Fus2 se expone en la SEQ ID NO: 125 y SEQ ID NO: 127. Se construyó el gen sintético usando una serie de oligonucleótidos complementarios sobrepuestos que fueron fortalecidos juntos, lenow trató para reparar los espacios, y la amplificación por PCR usando los cebadores correspondientes a los extremos 5' y 3' del gen sintético. Los sitios de enzima de restricción fueron incorporados en los cebadores de PCR para facilitar la clonación del gen. El producto de PCR fue TOPO clonado en pCR2.1 (Invitrogen) y la secuencia verificada. Un fragmento de enzima de restricción que contenia B-¾A-Fus2 fue subclonado subsecuentemente en los sitios correspondientes de los vectores que contenían ya sea el promotor de ubiquitina de maíz: ubi-intron o el promotor de h2B de maíz: ubi-intron. Los vectores contenían una secuencia 3' correspondiente al terminador pinll. El fragmento BAA-Fus2 se clonó entre el promotor indicado y el terminador pinll. Promotores constitutivos fuertes se seleccionaron para expresar a Fus2 en tejidos susceptibles a F. verticilloides . El "cassette" del promotor/intron: BAA-Fus2 rpinll ter es flanqueado por sitios de enzima de restricción no compatibles designados para clonar direccionalmente el "cassette" en un plásmido binario que contiene un marcador seleccionable . Se usaron los sitios de enzima de restricción para subclonar el "cassette" del promotor/intron:B;A-Fus2 : Pinllter en un plásmido binario para transformación de maiz.

Tabla 1. Streptomyces coellcolor A3 (2) [gbbct] : 6257 CDS' s (2043281 codones) campos: [tripleto] [frecuencia: por millar] ([número]) uuu 0.4 ( 863) UCU 0.6 ( 1266) UAU 1.0 ( 1962) UGU 0.7 ( 1448) uuc 26.0( 53065) ucc 20.2 ( 41262) UAC 19.5 (39789) UCC 7.0 ( 14341) UUA 0.1 ( 128) UCA 1.0 ( 2137) UAA 0.1 ( 290) UGA 2.4 C 4878) UUG 2.4 ( 4935) UCG 13.8 ( 28229) UAG 0.5 ( 1089) UCG 15.1 30770) cuu l .S ( 3129) CCU 1 .5 ( 2995) CAI) 1.6 ( 3366) CCU 5.5 ( 111 83) cuc 36.6 ( 74736) CCC 25.4 ( 51951) CAC 21.5 (44018) CGC 39.1(79956) CUA 0.3 ( 657) CCA 1 .3 ( 2633) CAA 1.3 ( 2593) CCA 2.5 ( 51 24) CUG 61.3 C12S241) CCC 33.6 ( 68652) CAG 25.1 (51248) CGG 32.065332) AUU 0.6 ( 1 228) ACU 1 .1 < 2347) AAU 0.7 ( 1436) ACU 1.5 ( 3030) AUC 27.6 ( 56340) ACC 39.6 { 80826) AAC 16.2 (33191) AGC 12.3 25187) AUA 0.7 C 1367) ACA 1 .6 ( 3194) AAA 1.0 ( 2041) ACA 0.8 ( 1574) AUG 15.8 ( 32271) ACG 18.9 (38697) AAG 19. C40293) ACG 3.7 ( 7488) CUU 1.4 { 2905) CCU 2.9 ( 5908) GAU 2.9 { 6024) GGU 9.3 ( 18920) GUC 47.2 ( 96460) GCC 78.6 (160548) GAC 58.0 (H8S95) GGC 61.4 (1 25467) GUA 2.7 ( 5416) CCA 5.3 ( 10890) GAA 8.5 (17445) GGA 7.1 ( 14608) CUG 35.3 ( 72144) GCG 49.B (101831) GAG 48.5 (99056) GGG 18.2(37288) Codificador 72.38 % por GC, la. carta 72.74 % por GC, 2a. Carta 51.39 por GC, 3a. Carta 93.00 % por GC.

Tabla 2. Streptomyces coelicolor [gbbct]: 2110 CDS's (646333 codones) Campos: [tripleto] [frecuencia: por millar] ([número]) UÜU 0.5 { 329} UCU 0.8 ( 496) UAU 1.0 ( 676) UGU 0.8 ( 517} uuc 25.7 <16596) UCC 20.1 (12971) UAC 19.4 (12521) UGC 7.3 ( 4734} UUA 0.1 ( 49) UCA 1.2 ( 797) UAA 0.2 ( 105) UGA 2.6 ( 1650) UUC 2.6 < 1696) UCG 13.5 { 8729) UAG 0.5 { 355) UCG 15.2 ( 9813) cuu 1.9 ( 1228) CCU 1.8 ( 1178) CAU 1.9 ( 1251) CGU 5.6 ( 3602) cuc 36.2 ( 23411) CCC 25.4 ( 16419) CAC 22.6 (14594) CGC 39.2 ( 25310) CUA O.S ( 304) C.CA 1.6 ( 1018} CAA 1.7 ( 1076) CGA 2.9 ( 1885) CUC 59.3 ( 38346) CCG 32.7 ( 21145) CAC 25.8 ( 16677) CGC 31.5 ( 20333) AUU 0.8 ( 497) ACU 1.4 ( 925) AAU 0.8 ( 515) AGU 1.6 ( 1023) AUC 27.8 (17997) ACC 39.9 ( 25804) AAC 16.2 ( 10447) AGC 12.7 ( 8194) AUA 0.7 { 444) ACA 1.9 ( 1245) AAA 1.3 ( 829) AGA 0.8 ( 537) AUG 16.1 ( 10392) ACG 19.1 ( 12377) AAC 19.8 ( 12795) AGG 3.8 ( 2441) CUU 1.7 ( 1086) GCU 3.8 ( 2429) CAU 3.5 ( 2251) GGU 9.7 ( 5867} GDC 46.3 ( 29904) GCC 77.5 ( 50098) GAC 58.2 ( 37624) GGC 58.8 ( 38034) GUA 2.7 ( 1767) GCA 6,7 ( 302) GAA 9.6 ( 6215) GGA 7.3 ( 4689) GUG 33.9 ( 21929) GCG 48.6 ( 31399) GAG 47.9 (30970) GGG 17.8 ( 11502) odificador 71. 94 % por GC, la. carta 72.3 3 % por GC, 2 carta 51.28 % por GC, 3a. carta 92.14 por GC Todas las publicaciones y solicitudes de patentes mencionadas en la especificación son indicadoras del nivel de los expertos en la materia a los cuales pertenece esta invención. Todas las publicaciones y solicitudes de patentes se incorporan como referencia en la misma extensión que si cada publicación o solicitud de patente individual fuera especifica e individualmente indicada para ser incorporada como referencia. Aunque la invención anteriormente mencionada ha sido descrita con algún detalle a manera de ilustración y ejemplo para propósitos de claridad de comprensión, será obvio que pueden practicarse ciertos cambios y modificaciones pueden en el alcance de las reivindicaciones anexas .

LISTADO DE SECUENCIAS <110> Altier, Daniel J. Herrmann, Rafael Lu, Albert L. McCutchen, Billy F. Presnail, James K. eaver, Janiñe L. ¥¡onqr James F. H. <120> Polipéptidos Antimicrobianos y sus Usos <130> 357188/244486 <150> 60/285,355 <151> 20-04-2001 <160> 127 <170> FastSEQ versión 4.0 para Windows <210> 1 <21l> 766 <212> DNA <213> Manduca sexta <220> <221> CDS <222> (1) ... (621) <400> 1 atg ttc acc aaa ttc gtc gtc ctg gtc tgt ctt ctc gtt ggt gct aag 48 Met Phe Thr Lys Phe Val Val Leu Val Cys Leu Leu Val Gly Ala Lys 1 5 10 15 gct cgg cct cag ctc ggc gct ctc act ttc aat tct gat ggc act tcc 96 Ala Arg Pro Gln Leu Gly Ala Leu Thr Phe Asn Ser Asp Gly Thr Ser 20 25 30 ggg gcg gcc gtc aaa gtt cea ttt ggt ggc aac aag aat aat ata ttt 144 Gly Ala Ala Val Lys Val Pro Phe Gly Gly Asn Lys Asn Asn lie Phe 35 40 45 agt gct ate ggt ggg gct gat ttt aac gct aat cae aaa ctg agt tct 192 Ser Ala lie Gly Gly Ala Asp Phe Asn Ala Asn His Lys Leu Ser Ser 50 55 60 gcg act gct gga gta gcg ctt gat aat ate cga gg cae gga ctc agt 240 Ala Thr Ala Gly Val Ala Leu Asp Asn lie Arg Gly His Gly Leu Ser 65 70 75 80 ttg acg gat acc cae ate ecc ggc ttt gga gac aag ttg acg gcg gcc 288 Leu Thr Asp Thr His lie Pro Gly Phe Gly Asp Lys Leu Thr Ala Ala 85 90 95 ggc aag ttg aac ctc ttc cae aac aac aac cae gat ctg acc gcc aac 336 Gly Lys Leu Asn leu Pne His Asn Asn Asn His Asp Leu Thr Ala Asn 100 105 110 gct ttc gcc acc agg aac atg ceg aac att cct cag gtt cea aac ttc 384 Ala Phe Ala Thr Arg Asn Met Pro Asn lie Pro Gln Val Pro Asn Phe 115 120 125 aac acc gtt ggt ggc gga. ctg gac tac atg ttc aag aac aag gtg ggc 432 Asn Thr Val Gly Gly Gly Leu Asp Tyr Met Phe Lys Asn Lys Val Gly 130 135 140 gct tea tta ggc gcc gcg cae act gac ttt ate aac cgc aac gac tac 480 Ala Ser Leu Gly Ala Ala His Thr Asp Phe lie Asn Arg Asn Asp Tyr 145 150 · 155 160 tct gtg ggc ggc aag ttg aac ctg ttc cgg aac ceg age acc teg ctc 528 Ser Val Gly Gly Lys Leu Asn Leu Phe Arg Asn Pro Ser Thr Ser Leu 165 170 175 gac ttc aac gcc ggc ttt aag aag ttc gac acg ecc ttc atg aga tcc 576 Asp Phe Asn Ala Gly Phe Lys Lys Phe Asp Thr Pro Phe Met Arg Ser 180 185 190 ggc tgg gaa ecc aac atg ggc ttc tcc ctc tcc aag ttc ttc taa 621 Gly Trp Glu Pro Asn Met Gly Phe Ser Leu Ser Lys Phe Phe * 195 200 205 ttactttagt atatctctca gtattatgaa ttgtcttttt ttattaatgt aatccgcctt 681 ttgtaccgaa taaatatttt tatataaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 741 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaa 766 <210> 2 <211> 206 <212> PRT <213> Manduca <400> 2 Met Phe Thr Lys Phe Val Val Leu Val Cys Leu Leu Val Gly Ala L s 1 5 10 15 Ala Arg Pro Gln Leu Gly Ala Leu Thr Phe Asn Ser Asp Gly Thr Ser 20 25 30 Gly Ala Ala Val Lys Val Pro Phe Gly Gly Asn Lys Asn Asn lie Phe 35 40 45 Ser Ala lie Gly Gly Ala Asp Phe Asn Ala Asn His Lys Leu Ser Ser 50 55 60 Ala Thr Ala Gly Val Ala Leu Asp Asn lie Arg Gly His Gly Leu Ser 65 70 75 80 Leu Thr Asp Thr His lie Pro Gly Phe Gly Asp Lys Leu Thr Ala Ala 85 90 95 Gly Lys Leu Asn Leu Phe His Asn Asn Asn His Asp Leu Thr Ala Asn 100 105 110 Ala Phe Ala Thr Arg Asn Met Pro Asn lie Pro Gln Val Pro Asn Phe 115 120 125 Asn Thr Val Gly Gly Gly Leu Asp Tyr Met Phe Lys Asn Lys Val Gly 130 135 140 Ala Ser Leu Gly Ala Ala His Thr Asp Phe lie Asn Arg Asn Asp Tyr 145 150 155 160 Ser Val Gly Gly Lys Leu Asn Leu Phe Arg Asn Pro Ser Thr Ser Leu 165 170 175 Asp Phe Asn Ala Gly Phe Lys Lys Phe Asp Thr Pro Phe Met Arg Ser 180 185 190 Gly Trp Glu Pro Asn Met Gly Phe Ser Leu Ser Lys Phe Phe 195 200 205 <210> 3 <211> 760 <212> DNA <213> Manduca sexta <220> <221> CDS <222> (34) ... (624) <221> aspecto_misc <222> (0) ... (0) <223> n = A, T, C o G <400> 3 attcggcacg aggacgatgt ggtgttcgta cea atg gtg gta tca agg gta cgg 54 attcggcacg aggacgatgt ggtgttcgta cea atg gtg gta tca agg gta cgg 54 Met Val Val Ser Arg Val Arg 1 5 cgc gac acá cae ggc teg gtc acc gtc aac teg gac ggc acc tec gga 102 Arg Asp Thr His Gly Ser Val Thr Val Asn Ser Asp Gly Thr Ser Gly 10 15 20 gcg ate gtc aag gtg ceg ttc gca ggc gac gac aag aac ate gtc age 150 Ala lie Val Lys Val Pro Phe Ala Gly Asp Asp Lys Asn lie Val Ser 25 30 35 gee ate ggt ggc etc gac ,ctc gac aag aac etc aag atg age ggc gee 198 Ala lie Gly Gly Leu Asp Leu Asp Lys Asn Leu Lys Met Ser Gly Ala 40 45 50 55 acá gcg ggc ttg gct tac gac aac gtc aat gga cae ggc gct act ctt Thr Ala Gly Leu Ala Tyr Asp Asn Val Asn Gly His Gly Ala Thr Leu 60 65 70 acá aac acá cat ata ecc age ttc ggt gac aag ctg acg gca gee ggc Thr Asn Thr His lie Pro Ser Phe Gly Asp Lys Leu Thr Ala Ala Gly 75 80 85 aag ttg aac gtg ttc cat aac gac aac cae aac ctg gac gtg aag gcg lys Leu Asn Val Phe His Asn Asp Asn His Asn Leu Asp Val Lys Ala 90 95 100 ttg gee acc agg acc atg ceg gat att ceg cgc gtg ecc gac ttc aac 390 Leu Ala Thr Arg Thr Met Pro Asp lie Pro Arg Val Pro Asp Phe Asn 105 110 115 acc tac ggc ggc ggc gtc gac tac atg ttc aag gac aag gtg ggc gcg 438 Thr Tyr Gly Gly Gly Val Asp Tyr Met Phe Lys Asp Lys Val Gly Ala 120 125 130 135 teg gcg age gct gcg cae acg ect etc ttc gat cgc aac gac tac tec 486 Ser Ala Ser Ala Ala His Thr Pro Leu Phe Asp Arg Asn Asp Tyr Ser 140 145 150 gtg ggc ggc aag ctg aac ctg ttc cgt gac aag acc acc teg etc gac Val Gly Gly Lys Leu Asn Leu Phe Arg Asp Lys Thr Thr Ser Leu Asp 155 160 165 ttc aac gee gac tac aag aag ttc gag atg ecc aac ttc aag tec gac 582 Phe Asn Ala Asp Tyr Lys Lys Phe Glu Met Pro Asn Phe Lys Ser Asp 170 175 180 tgg acá ecc aac ate ggc ttc tca ttc age aag ttt tgg tag 624 Trp Thr Pro Asn lie Gly Phe Ser Phe Ser Lys Phe Trp * 185 190 195 tttattatta tgattcaagt catccacgtt ttgtacgggt gtaattaatt acgattttaa 684 agtttaagta tttatattta aataaatatt ttggaaatna aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 744 aaaaaaaaaa etegag 760 <210> 4 <211> 196 <212> PRT <213> Manduca sexta <400> 4 Met Val Val Ser Arg Val Arg Arg Asp Thr His Gly Ser Val Thr Val 1 5 10 15 Asn SMet Val Val Ser Arg Val Arg Arg Asp Thr His Gly Ser Val Thr Val 1 5 10 15 Asn Ser Asp Gly Thr Ser Gly Ala lie Val Lys Val Pro Phe Ala Gly 20 25 30 Asp Asp L s Asn lie Val Ser Ala lie Gly Gly Leu Asp Leu Asp Lys 35 40 45 Asn Leu Lys Met Ser Gly Ala Thr Ala Gly Leu Ala Tyr Asp Asn Val 50 55 60 Asn Gly His Gly Ala Thr Leu Thr Asn Thr His lie Pro Ser Phe Gly 65 70 75 80 Asp Lys Leu Thr Ala Ala Gly Lys Leu Asn Val Phe His Asn Asp Asn 85 90 95 His Asn Leu Asp Val Lys Ala Leu Ala Thr Arg Thr Met Pro Asp lie 100 105 110 Pro Arg Val Pro Asp Phe Asn Thr Tyr Gly Gly Gly Val Asp Tyr Met 115 120 125 Phe Lys Asp Lys Val Gly Ala Ser Ala Ser Ala Ala His Thr Pro Leu 130 135 140 Phe Asp Arg Asn Asp Tyr Ser Val Gly Gly Lys Leu Asn Leu Phe Arg 145 150 155 160 Asp Lys Thr Thr Ser Leu Asp Phe Asn Ala Asp Tyr Lys Lys Phe Glu 165 170 175 Met Pro Asn Phe Lys Ser Asp Trp Thr Pro Asn lie Gly Phe Ser Phe <210> 5 <211> 246 <212> DNA <213> Manduca sexta <220> <221> CDS <222> (1) ... (240) <221> aspectos mise <222> 234, 242, 243, 244, 246 <223> n = A, T, C, o G <400> 5 atg tcc ctg tcg tgt ctc ttc ctc gtt gcg ctg gcg ctg gtg ggc gca 48 Met Ser Leu Ser Cys Leu Phe Leu Val Ala Leu Ala Leu Val Gly Ala 1 5 10 15 gag age aga tac ate gcc gac gat gtg gtg ttg gta ccg atg atg gta 96 Glu Ser Arg Tyr lie Ala Asp Asp Val Val Leu Val Pro Met Met Val 20 25 30 tea cgg gta agg cgc gac acá cae ggc tcg gtc acc gtc aac tcg gac 144 Ser Arg Val Arg Arg Asp Thr His Gly Ser Val Thr Val Asn Ser Asp 35 40 45 ggc acc tcc ggg age gtc gtc aag gtg ccg ttc gca ggc gac gac aag 192 Gly Thr Ser Gly Ser Val Val Lys Val Pro Phe Ala Gly Asp Asp Lys 50 55 60 aac gtc ttt age gcc ate ggt ggt ctc gac ctc gat aag aan ctc aag 240 Asn Val Phe Ser Ala lie Gly Gly Leu Asp Leu Asp Lys Xaa Leu Lys 65 70 75 80 annngn 246 <210> 6 <211> 80 <212> PRT <213> Manduca sexta <220> <221> VARIANTE <222> 78 <223> Xaa = Cualquier aminoácido <400> 6 Met Ser Leu Ser Cys Leu Phe Leu Val Ala Leu Ala Leu Val Gly Ala 1 5 10 15 Glu Ser Arg Tyr lie Ala Asp Asp Val Val Leu Val Pro Met Met Val 20 25 30 Ser Arg Val Arg Arg Asp Thr His Gly Ser Val Thr Val Asn Ser Asp 35 40 45 Gly Thr Ser Gly Ser Val Val Lys Val Pro Phe Ala Gly Asp Asp Lys 50 55 60 Asn Val Phe Ser Ala lie Gly Gly Leu Asp Leu Asp Lys Xaa Leu Lys 65 70 75 80 <210> 7 <211> 336 <212> DNA <213> Manduca sexta <220> <221> CDS <222> (1) ... (336) <400> 7 ggc acg agg tcc ctg tcg tgc ctc ttg tta ttt gcg ctg gcg ctg atg 48 Gly Thr Arg Ser Leu Ser Cys Leu Leu Leu Phe Ala Leu Ala Leu Met 1 5 10 15 ggc gcg gag age aga ttc ate gcc gac gat gtg gtg ttc gta cea atg 96 Gly Ala Glu Ser Arg Phe lie Ala Asp Asp Val Val Phe Val Pro Met 20 25 30 gtg gta tea agg gta cgg cgc gac acá cae ggc tcg gtc acc gtc aac 144 Val Val Ser Arg Val Arg Arg Asp Thr His Gly Ser Val Thr Val Asn 35 40 45 tcg gac ggc acc tcc gga gcg ate gtc aag gtg ceg ttc gca ggc gac 192 Ser Asp Gly Thr Ser Gly Ala lie Val Lys Val Pro Phe Ala Gly Asp 50 55 60 gac aag aac ate gtc age gcc ate ggt ggc ctc gac ctc gac aag aac 240 Asp Lys Asn lie Val Ser Ala lie Gly Gly Leu Asp Leu Asp Lys Asn 65 70 75 80 ctc aag atg age ggc gcc ac gcg ggc ttg gct tac gac aac gtc aat 288 Leu Lys Met Ser Gly Ala Thr Ala Gly leu Ala Tyr Asp Asn Val Asn 85 90 95 gga cae ggc gct act ctt acá aac acá cat ata ecc aag ctt cgg tga 336 Gly His Gly Ala Thr Leu Thr Asn Thr His lie Pro Lys Leu Arg * 100 105 110 <210> 8 <211> 111 <212> PRT <213> Manduca <400> 8 Gly Thr Arg Ser Leu Ser Cys Leu Leu Leu Phe Ala Leu Ala Leu Met 1 5 10 15 Gly Ala Glu Ser Arg Phe lie Ala Asp Asp Val Val Phe Val Pro Met 20 Gly Thr Arg Ser Leu Ser Cys Leu Leu Leu Phe Ala Leu Ala Leu Met 1 5 10 15 Gly Ala Glu Ser Arg Phe lie Ala Asp Asp Val Val Phe Val Pro Met 20 25 30 Val Val Ser Arg Val Arg Arg Asp Thr His Gly Ser Val Thr Val Asn 35 40 45 Ser Asp Gly Thr Ser Gly Ala lie Val Lys Val Pro Phe Ala Gly Asp 50 55 60 Asp Lys Asn lie Val Ser Ala lie Gly Gly Leu Asp Leu Asp Lys Asn 65 70 75 80 <210> 9 <211> 444 <212> DNA <213> Manduca sexta <220> <221> CDS <222> (1) ... (444) <221> aspectos_misc <222> 123, 339, 421 <223> n = A, T, C o G <400> 9 atg tcc ctg tcg tgc ctc ttg tta ttt gcg ctg gcg ctg atg ggc gcc 48 Met Ser Leu Ser Cys Leu Leu Leu Phe Ala Leu Ala Leu Met Gly Ala 1 5 10 15 gag age aga tac atc gct gac gat gtg gtg ttc gta ceg ata gtg gta 96 Glu Ser Arg Tyr lie Ala Asp Asp Val Val Phe Val Pro lie Val Val 20 25 30 tea agg gta cgg cgt gac acá cae ggn tcg gtc acc gtc aac tcg gac 144 Ser Arg Val Arg Arg Asp Thr His Gly Ser Val Thr Val Asn Ser Asp 35 40 45 ggc acc t c gga gcg atc gtc aag gtg ceg ttc gca ggc aac gac aag 192 Gly Thr Ser Gly Ala lie Val Lys Val Pro Phe Ala Gly Asn Asp Lys 50 55 60 aac atc gtc age gcc atc ggc ggc ctc gac ctc gac aag aac ttc aag 240 Asn lie Val Ser Ala lie Gly Gly Leu Asp Leu Asp Lys Asn Phe Lys 65 70 75 80 atg age ggc gcc acá gcg ggc ttg gca tac gac aac gtc aat aga cae 288 Met Ser Gly Ala Thr Ala Gly Leu Ala Tyr Asp Asn Val Asn Arg His 85 90 95 ggg gct act ctt ac aac acá cat ata ecc age ttc ggt gac aag ctg 336 Gly Ala Thr Leu Thr Asn Thr His lie Pro Ser Phe Gly Asp Lys Leu 100 105 110 acn gca acc ggc aag ttg aac gtg ttc caá aac gac aaa cae aac ect 384 Thr Ala Thr Gly Lys Leu Asn Val Phe Gln Asn Asp Lys His Asn Pro 115 120 125 gga cgt gaa ggg gtt ggg cae caá gga cea tgc caá nta ttc cae gcg 432 Gly Arg Glu Gly Val Gly His Gln Gly Pro Cys Gln Xaa Phe His Ala 130 135 140 tgg ceg act tea 444 Trp Pro Thr Ser 145 <210> 10 <211> 148 <212> P T <213> Manduca sexta <220> <221> VARIANTE <222> 141 Cualquier Aminoácido Met Ser Leu Ser Cys Leu Leu Leu Phe Ala Leu Ala Leu Met Gly Ala 1 5 10 15 Glu Ser Arg Tyr lie Ala Asp Asp Val Val Phe Val Pro lie Val Val 20 25 30 Ser Arg Val Arg Arg Asp Thr His Gly Ser Val Thr Val Asn Ser Asp 35 40 45 Gly Thr Ser Gly Ala lie Val Lys Val Pro Phe Ala Gly Asn Asp Lys 50 55 60 Asn lie Val Ser Ala lie Gly Gly Leu Asp Leu Asp Lys Asn Phe Lys 65 70 75 80 Met Ser Gly Ala Thr Ala Gly Leu Ala Tyr Asp Asn Val Asn Arg His 85 90 95 Gly Ala Thr Leu Thr Asn Thr His lie Pro Ser Phe Gly Asp Lys Leu 100 105 110 Thr Ala Thr Gly Lys Leu Asn Val Phe Gln Asn Asp Lys His Asn Pro 115 120 125 Gly Arg Glu Gly Val Gly His Gln Gly Pro Cys Gln Xaa Phe His Ala 130 135 140 Trp Pro Thr Ser 145 <210> 11 <211> 617 <212> DNA <213> Manduca sexta <220> <221> CDS <222> (28) ... (456) <400> 11 gaattcggca cgaggctacg ggctaca atg tct aag ttt ata tcc ata ctt tgt 54 Met Ser Lys Phe lie Ser lie Leu Cys 1 5 gtt gtc gcc tta ctg cta ata gca gaa act tat tgt tta aca agt ggt 102 Val Val Ala Leu Leu Leu He Ala Glu gaattcggca cgaggctacg ggctaca atg tct aag ttt ata tcc ata ctt tgt 54 gtt cgc ate ata caá ecc act tat agg cct cea ecc agg aga cct gtt Val Arg lie lie Gln Pro Thr Tyr Arg Pro Pro Pro Arg Arg Pro Val 30 35 40 att tac aga gct gca cgc gac gct gga gat gaa ecc ttg tgg ctg tac lie Tyr Arg Ala Ala Arg Asp Ala Gly Asp Glu Pro Leu Trp Leu Ty caá gga gac gac cae cct cga gee cct tca age ggc gac cat cct gta 246 Gln Gly Asp Asp His Pro Arg Ala Pro Ser Ser Gly Asp His Pro Val 60 65 70 ctg ecc tcg ate ata gac gat gtg aag ctg gac ecc aac agg cgg tat 294 Leu Pro Ser lie lie Asp Asp Val Lys Leu Asp Pro Asn Arg Arg Tyr 75 80 85 gcg cgt agt gta age gag cct tcg tca cag gag cat cat gac cgc ttt 342 Ala Arg Ser Val Ser Glu Pro Ser Ser Gln Glu His His Asp Arg Phe 90 95 100 105 gcg agg age ttc gac tec cgc age age aag cat cae ggc ggc agt cae 390 Ala Arg Ser Phe Asp Ser Arg Ser Ser Lys His His Gly Gly Ser His 110 115 120 tec acg tec ggc ggc age cgc gac act gga gct act cae ceg gga tac 438 Ser Thr Ser Gly Gly Ser Arg Asp Thr Gly Ala Thr His Pro Gly Tyr 125 130 135. aat cgt cgt aac tca taa tttetettea - gtttctaaat atttttgttt 486 Asn Arg Arg Asn Ser * 140 ctgctactaa ttttttctca tcaatattct tgtttgcttt caaatctttc attttatgat 546 aataatatgt atactgatca ttatattgaa ataaatgatt aaattgaaaa aaaaaaaaaa 606 aaaaactcga g 617 <210> 12 <211> 142 <212> PRT <213> Manduca sexta <400> 12 Met Ser Lys Phe lie Ser lie Leu Cys Val Val Ala Leu Leu Leu lie 1 5 10 15 Ala Glu Thr Tyr Cys Leu Thr Ser Gly Val Arg lie lie Gln Pro Thr 20 25 30 Tyr Arg Pxo Pro Pro Arg Arg Pro Val lie Tyr Arg Ala Ala Arg Asp 35 Tyr Arg Pro Pro Pro Arg Arg Pro Val lie Tyr Arg Ala Ala Arg Asp 35 40 45 Ala Gly Asp Glu Pro Leu Trp Leu Tyr Gln Gly Asp Asp His Pro Arg 50 55 60 Ala P o Ser Ser Gly Asp His Pro Val Leu Pro Ser lie lie Asp Asp 65 70 75 80 Val Lys Leu Asp Pro Asn Arg Arg Tyr Ala Arg Ser Val Ser Glu Pro 85 90 95 Ser Ser Gln Glu His His Asp Arg Phe Ala Arg Ser Phe Asp Ser Arg 100 105 110 Ser Ser Lys His His Gly Gly Ser His Ser Thr Ser Gly Gly Ser Arg 115 120 125 Asp Thr Gly Ala Thr His Pro Gly Tyr Asn Arg Arg Asn Ser 130 135 140 <210> 13 <211> 370 <212> DNA <213> Manduca sexta <220> <221> CDS <222> (1) ... (216) <400> 13 cta tac tgt ctt ttg ttt ttg tgt ttc att act ttc tcc atg agt gaa Leu Tyr Cys Leu Leu Phe Leu Cys Phe lie Thr Phe Ser Met Ser Glu 1 5 10 15 gat ccg aga tgt tct cag ccg att gca tct ggt gtg tgc ttt gga aat 96 Asp Pro Arg Cys Ser Gln Pro lie Ala Ser Gly Val Cys Phe Gly Asn 20 25 30 att gaa aaa ttc gga tac gac ate gac gag cae aaa tgt gta cag ttc 144 lie Glu Lys Phe Gly Tyr Asp lie Asp Glu His Lys Cys Val Gln Phe 35 40 45 gtg tac gga gga tgc ttt ggc aat gac aac caá ttc gac tcg ctt gaa Val Tyr Gly Gly Cys Phe Gly Asn Asp Asn Gln Phe Asp Ser Leu Glu 50 55 60 gaa tgt caá gca gtt tgt ect taa ccattccgat gtttataaat gacgtgtata Glu Cys Gln Ala Val Cys Pro 65 70 taatgcaaga atgcattata gccaatcaat cgatttttaa tcgattcaga agccgttatc 306 gattatgaca ttgctgtgca attttctaaa tatttaattt agtgttattc atattcactt 366 tcaa 370 <210> 14 <211> 71 <212> PRT <213> Manduca sexta <400> 14 Leu Tyr Cys Leu Leu Phe Leu Cys Phe lie Thr Phe Ser Met Ser Glu 1 5 10 15 Asp Pro Arg Cys Ser Gln Pro lie Ala Ser Gly Val Cys Phe Gly Asn 20 25 30 lie Glu Lys Phe Gly Tyr Asp lie Asp Glu His Lys Cys Val Gln Phe 35 40 45 Val Tyr Gly Gly Cys Phe Gly Asn Asp Asn Gln Phe Asp Ser Leu Glu 50 55 60 Glu Cys Gln Ala Val Cys Pro 65 70 <210> 15 <211> 948 <212> DNA <213> Manduca sexta <220> <221> CDS <222> (23) ... (208) <400> 15 gaattcggca cgagggttga ca atg aaa age caá ttg caa atc gta ttg ttg 52 Met Lys Ser Gln Leu Gln lie Val Leu Leu 1 5 10 ttg ctg acg gtg atg ttt gca ata act tat gcc ggt tac tac acá ac 100 Leu Leu Thr Val Met Phe Ala lie Thr Tyr Ala Gly Tyr Tyr Thr Thr 15 20 25 acá caa cgt cat ttt gca gta age tgc agt caa gct tgt gaa tea gaa 148 Thr Gln Arg His Phe Ala Val Ser Cys Ser Gln Ala Cys Glu Ser Glu 30 35 40 gga age aac tgt gaa ttg gtt aga age tat gta tgg act tgc tat tgt 196 Gly Ser Asn Cys Glu Leu Val Arg Ser Tyr Val Trp Thr Cys Tyr Cys 45 50 55 tat tgt cea tga ttttggctat gtttccaaga acatagtttt attatatggt 248 Tyr Cys Pro * 60 gtaacacgaa aggaaaataa ttattttact gaagaatatt tttacaagaa agaaataaga 308 gacaagaaag aaaaaaaaac aagacagtta tattttgtaa gaaggggacc tcgtgcatca 368 gaaaggaaat gtagttaatc atttaaagga ctgtatatgt tttaaatttt tetcaegaaa 428 tgaatctgaa gtgatttttc tgaegactac gaaaattgtc gcggacataa tatatattte 488 tgacaaatcc taatttgcac aggaatattt gaaagtggta tttaagetta tgcactgcgc 548 agtgtccttg tatataatca ttttactatt oaagttgaat gaaacaattg aaatttgcat 608 caaattgtgc tttgtaaatc tcttatggtc acatettaeg gctgcatcat gtgtcaaccg 668 agagatattt tatcgtaata ttaagttcta cgctggtggt tatgttttaa ttgtttagtg 728 tcatttacca agtacatetc taaatttcta gtttcagttt agatttttaa gcggaatatt 788 ttaatctgta ataactacat atccttgaag gagtaggcag aggcgcaacg ctgcattccc 848 ttttcgccgt gtgtattaca teccatgata tgatgagggg cgagcctatc gccgtatcgg 908 ggataaattc ccgattccgg gctgatactg agaagaaaaa 948 <210> 16 <211> 61 <212> PRT <213> Manduca sexta <400> 16 Met Lys Ser Gln Leu Gln lie Val Leu Leu Leu Leu Thr Val Met Phe 1 5 10 15 Ala lie Thr Tyr Ala Gly Tyr Tyr Thr Thr Thr Gln Arg His Phe Ala 20 25 30 Val Ser Cys Ser Gln Ala Cys Glu Ser Glu Gly Ser Asn Cys Glu Leu 35 40 45 Val Arg Ser Tyr Val Trp Thr Cys Tyr Cys Tyr Cys Pro 50 55 60 <210> 17 <211> 254 <212> PRT <213> Trichoplusia <400> 17 Met Phe Thr Tyr Lys Leu lie Leu Gly Leu Val Leu Val Val Ser Ala 1 5 10 15 Ser Ala Arg Tyr Leu Val Phe Glu Asp Leu Glu Gly Glu Ser Tyr Leu 20 25 30 Val Pro Asn Gln Ala Glu Asp Glu Gln Val Leu Glu Gly Glu Pro Phe 35 40 45 Tyr Glu Asn Ala Val Gln Leu Ala Ser Pro Arg Val Arg Arg Gln Ala 50 55 60 Gln Gly Ser Val Thr Leu Asn Ser Asp Gly Ser Met Gly Leu Gly Ala 65 70 75 80 Lys Val Pro lie Val Gly Asn Glu Lys Asn Val Leu Ser Ala Leu Gly 85 90 95 Ser Val Asp Leu As Asp Gln Leu Lys Pro Ala Ser Arg Gly Met Gly 100 105 110 Leu Ala Xeu Asp Asn Val Asn Gly His Gl Leu Ser Val Met Lys Glu 115 120 125 Thr Val Pro Gly Phe Gly Asp A g Leu Thr Gly Ala Gly Arg Val Asn 130 135 140 Val Phe His Asn Asp Asn His Asp lie Ser Ala Lys Ala Pie Val Thr 145 150 155 160 Lys Asn Met Pro Asp Phe Pro Asn Val Pro Asn Phe Asn Thr Val Gly 165 170 175 Gly Gly Val Asp Tyr Met Tyr Lys Asn Lys Val Gly Ala Ser Leu Gly 180 185 190 Met Ala Asn Thr Pro Phe Leu Asp Arg Lys Asp Tyr Ser Ala Met Gly 195 200 205 Asn Leu Asn Val Phe Arg Ser Pro Thr Thr Ser Val Asp Phe Asn Ala 210 215 220 Gly Phe Lys Lys Phe Asp Thr Pro Val Phe Lys Ser Asn Trp Glu Pro 225 230 235 240 Asn Phe Gly Leu Thr Phe Ser Arg Ser Phe Gly Asn Lys Trp 245 250 <210> 18 <211> 233 <212> PRT <213> Hyalop ora cecropia <400> 18 Met Phe Ala Lys Leu Phe Leu Val Ser Val Leu leu Val Gly Val Asn 1 5 10 15 Ser Arg Tyr Val Leu Val Glu Glu Pro Gly Tyr Tyr Asp Lys Gln Tyr 20 25 30 Glu Glu Gln Pro Gln Gln Trp Val Asn Ser Arg Val Arg Arg Gln Ala 35 40 45 Gly Ala Leu Thr lie Asn Ser Asp Gly Thr Ser Gly Ala Val Val Lys 50 55 60 Val Pro lie Thr Gly Asn Glu Asn His Lys Phe Ser Ala Leu Gly Ser 65 70 75 80 Val Asp Leu Thr Asn Gln Met Lys Leu Gly Ala Ala Thr Ala Gly Leu 85 90 95 Ala Tyr Asp Asn Val Asn Gly His Gly Ala Thr Leu Thr Lys Thr His 100 105 110 lie Pro Gly Phe Gly Asp Lys Met Thr Ala Ala Gly Lys Val Asn Leu 115 120 125 Phe His Asn Asp Asn His Asp Phe Ser Ala Lys Ala Phe Ala Thr Lys 130 135 140 Asn Met Pro Asn lie Pro Gln Val Pro Asn Phe Asn Thr Val Gly Ala 145 150 155 160 Gly Val Asp Tyr Met Phe Lys Asp Lys lie Gly Ala Ser Ala Asn Ala 165 170 175 Ala His Thr Asp Phe lie Asn Arg Asn Asp Tyr Ser Leu Gly Gly Lys 180 185 190 Leu Asn Leu Phe Lys Thr Pro Thr Thr Ser Leu Asp Phe Asn Ala Gly 195 200 205 Trp Lys Lys Phe Asp Thr Pro Phe Phe Lys Ser Ser Trp Glu Pro Ser 210 215 220 Thr Ser Phe Ser Phe Ser Lys Tyr Phe 225 230 <210> 19 <211> 235 <212> PRT <213> Hyalophora cecropia <400> 19 Met Phe Gly Lys He Val Phe Leu Leu Leu Val Ala Leu Cys Ala Gly 1 5 10 15 Val Gln Ser Arg Tyr Leu lie Val Ser Glu Pro Val Tyr Tyr He Glu 20 25 30 His Tyr Glu Glu Pro Glu Leu Leu Ala Ser Ser Arg Val Arg Arg Asp 35 40 45 Ala His Gly Ala Leu Thr Leu Asn Ser Asp Gly Thr Ser Gly Ala Val 50 55 60 Val Lys Val Pro Phe Ala Gly Asn Asp Lys Asn He Val Ser Ala lie 65 70 75 80 Gly Ser Val Asp Leu Thr Asp Arg Gln Lys Leu Gly Ala Ala Thr Ala 85 90 95 Gly Val Ala Leu Asp Asn IZe Asn Gly His Gly Leu Ser Leu Thr Asp 100 105 110 Thr His lie Pro Gly Phe Gly Asp Lys Met Thr Ala Ala Gly Lys Val 115 120 125 Asn Val Phe His Asn Asp Asn His Asp lie Thr Ala Lys Ala Phe Ala 130 135 140 Thr Arg Asn Met Pro Asp lie Ala Asn Val Pro Asn Phe Asn 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Asn Ser Pro Ser 115 120 125 Ala lie Pro Asn Ala Pro Asn Phe Asn Thr Leu Gly Gly Gly Val Asp 130 135 140 Tyr Met Phe Lys Gln Lys Val Gly Ala Ser Leu Ser Ala Ala His Ser 145 150 155 160 Asp Val lie Asn Arg Asn Asp Tyr Ser Ala Gly Gly Lys Leu Asn Leu 165 170 175 Phe Arg Ser Pro Ser Ser Ser Leu Asp Phe Asn Ala Gly Phe Lys Lys 180 185 190 Phe Asp Thr Pro Phe Tyr Arg Ser Ser Trp Glu Pro Asn Val Gly Phe 195 200 205 Ser Phe Ser Lys Phe Phe 210 <210> 21 <211> 326 <212> DNA <213> Manduca sexta <220> <221>CDS <222> (1) ... (177) <400> 21 atg agt gaa gat ccg aga tgt tct cag ccg att gca tct ggt gtg tgc 48 Met Ser Glu Asp Pro Arg Cys Ser Gln Pro lie Ala Ser Gly Val Cys 1 5 10 15 ttt gga aat att gaa aaa ttc gga tac gac ate gac gag cae aaa tgt 96 Phe Gly Asn lie Glu Lys Phe Gly Tyr Asp lie Asp Glu His lys Cys 20 25 30 gta cag ttc gtg tac gga gga tgc ttt ggc aat gat aac caá ttc gac 144 Val Gln Phe Val Tyr Gly Gly Cys Phe Gly Asn Asp Asn Gln Phe Asp 35 40 45 teg ctt gaa gaa tgt caá gca gtt tgt ect taa ccattccaat gtttataaat 197 Ser Leu Glu Glu Cys Gln Ala Val Cys Pro * 50 55 gacgtgtata taatacacac aataatcaat cgatttttaa tegatteaga agccgttatc 257 tattactaaa ttgctgtgca attttataaa tatttaattt agtgttatta atattcactt 317 tcaaaaata 326 <210> 22 <211> 58 <212> PRT <213> Manduca sexta <400> 22 Met Ser Glu Asp Pro Arg Cys Ser Gln Pro lie Ala Ser Gly Val Cys 1 5 10 15 Phe Gly Asn lie Glu Lys Phe Gly Tyr Asp lie Asp Glu His Lys Cys 20 25 30 Val Gln Phe Val Tyr Gly Gly Cys Phe Gly Asn Asp Asn Gln Phe Asp 35 40 45 Ser Leu Glu Glu Cys Gln Ala Val Cys Pro 50 55 <210> 23 <211> 58 <212> PRT <213> Manduca sexta <400> 23.

Met Ser Glu Asp Pro Arg Cys Ser Gln Pro lie Ala Ser Gly Val Cys 1 5 10 15 Phe Gly Asn lie Glu Lys Phe Gly Tyr Asp lie Asp Glu His Lys Cys 20 25 30 Val Gln Phe Val Tyr Gly Gly Cys Phe Gly Asn Asp Asn Gln Phe Asp 35 40 45 Ser Leu Glu Glu Cys Gln Ala Val Cys Pro 50 55 <210> 24 <211> 365 <212> DNA <213> Heliothis virescens <220> <221> CDS <222> (1) ... (192) <400> 24 atg aat ttc tcg cgg ata ttt ttc ttc gtg ttc gcg tgt ttg gta gca 48 Met Asn Phe Ser Arg lie Phe Phe Phe Val Phe Ala Cys Leu Val Ala 1 5 10 15 gtg tgc age gtg tcg gcg gcg ect gag ceg agg tgg aag gtc ttc aag 96 Val Cys Ser Val Ser Ala Ala Pro Glu Pro Arg Trp Lys Val Phe Lys 20 25 30 aaa att gag aag atg ggt cgc aac ata agg gac ggt gtc ate aaa gct 144 Lys lie Glu Lys Met Gly Arg Asn lie Arg Asp Gly Val lie Lys Ala 35 40 45 gcg cea gct ate gaa gtc ctg ggc cag gct aaa gct ctt gga aaa tag 192 Ala Pro Ala lie Glu Val Leu Gly Gln Ala Lys Ala Leu Gly Lys * 50 55 60 atcttaacta ttaaggaata acgttcaaag tattataagt gttcattacc tcgaatatca 252 aagaatatct tatgtatttt ttttttttgt aaatattttt gcgtttattt tatgtaatac 312 teagagtgea tgcaattaaa ttgttttaaa gcgttaaaaa aaaaaaaaaa aaa 365 <210> 25 <211> 63 <212> PRT <213> Heliothis virescens <400> 25 Met Asn Phe Ser Arg lie Phe Phe Phe Val Phe Ala Cys Leu Val Ala 1 5 10 15 Val Cys Ser Val Ser Ala Ala Pro Glu Pro Arg Trp Lys Val Phe Lys 20 25 30 Lys lie Glu Lys Met Gly Arg Asn lie Arg Asp Gly Val lie Lys Ala 35 40 45 Ala Pro Ala lie Glu Val Leu Gly Gln Ala Lys Ala Leu Gly Lys 50 55 60 <210> 26 <211> 63 <212> PRT <213> Heliothis virescens <400> 26 Met Asn Phe Ser Arg He Phe Phe Phe Val Phe Ala Cys Leu Val Ala 1 5 10 15 Val Cys Ser Val Ser Ala Ala Pro Glu Pro Arg Trp Lys Val Phe Lys 20 25 30 Lys He Glu Lys Met Gly Arg Asn He Arg Asp Gly Val He Lys Ala 35 40 45 Ala Pro Ala He Glu Val Leu Gly Gln Ala Lys Ala Leu Gly Lys 50 55 60 <210> 27 <211> 600 <212> DNA <213> Manduca sexta <220> <221> CDS <222> (36) ... (464) <400> 27 actagtggat cccccgggct gcaggacggg ctaca atg tct aag ttt ata tcc 53 Met Ser Lys Phe He Ser 1 5 ata ctt tgt gtt gtc gcc tta ctg cta ata gca gaa act tat tgt tta 101 He Leu Cys Val Val Ala Leu Leu Leu He Ala Glu Thr Tyr Cys Leu 10 15 20 acá agt ggt gtt cgc ate ata caá ccc act tat agg cct cea ccc agg 149 Thr Ser Gly Val Arg He He Gln Pro Thr Tyr Arg Pro Pro Pro Arg 25 30 35 aga cct gtt att tac aga gct gca cgc gac gct gga gat gaa ccc ttg 197 Arg Pro Val He Tyr Arg Ala Ala Arg Asp Ala Gly Asp Glu Pro Leu 40 45 50 tgg ctg tac caá gga gac gac cae cct cga gcc cct tea age ggc gac 245 Trp Leu Tyr Gln Gly Asp Asp His Ero Arg Ala Pro Ser Ser Gly Asp 55 60 65 70 cat cct gta ctg ccc teg ate ata gac gat gtg aag ctg gac ccc aac 293 His Pro Val Leu Pro Ser He He Asp Asp Val Lys Leu Asp Pro Asn 75 80 85 agg cgg tat gcg cgt agt gta age gag cct tcg tca cag gag cat cat 341 Arg Arg Tyr Ala Arg Ser Val Ser Glu Pro Ser Ser Gln " Glu His His 90 95 100 gac cgc ttt gcg agg age ttc gac tec cgc age age aag cat cae ggc 389 Asp Arg Phe Ala Arg Ser Phe Asp Ser Arg Ser Ser Lys His His Gly 105 110 115 ggc agt cae tec acg tec ggc ggc age cgc gac act gga gct act cae 437 Gly Ser His Ser Thr Ser Gly Gly Ser Arg Asp Thr Gly Ala Thr His 120 · 125 130 tcg gga tac aat cgt cgt aac tca taa tttetettea gtttctaaat 484 Ser Gly Tyr Asn Arg Arg Asn Ser * 135 140 atttttgttt ctgctactaa ttttttctca tcaatattct tgtttgcttt caaatcttto 544 attttatgat aataatatgt atactgatca ttatattgaa ataaatgatt aaattg 600 <210> 28 <211> 142 <212> PRT <213> Manduca <400> 28 Met Ser Lys Phe lie Ser lie Leu Cys Val Val Ala Leu Leu Leu He 1 5 10 15 Ala Glu Thr Tyr Cys Leu Thr Ser Gly Val Arg He He Gln Pro Thr 20 25 30 Tyr Arg Pro Pro Pro Arg Arg Pro Val lie Tyr Arg Ala Ala Arg Asp 35 40 45 Ala Gly Asp Glu Pro Leu Trp Leu Tyr Gln Gly Asp Asp His Pro Arg 50 55 60 Ala Pro Ser Ser Gly Asp His Pro Val Leu Pro Ser He He Asp Asp 65 70 75 80 Val Lys Leu Asp Pro Asn Arg Arg Tyr Ala Arg Ser Val Ser Glu Pro 85 90 95 Ser Ser Gln Glu His His Asp Arg Phe Ala Arg Ser Phe Asp Ser Arg 100 105 110 Ser Ser Lys His His Gly Gly Ser His Ser Thr Ser Gly Gly Ser Arg 115 120 125 Asp Thr Gly Ala Thr His Ser Gly Tyr Asn Arg Arg Asn Ser 130 135 140 <210> 29 <211> 142 <212> PRT <213> Manduca <400> 29 Met Ser Lys Phe lie Ser lie Leu Cys Val Val Ala Leu Leu Leu lie 1 5 10 15 Ala Glu Thr Tyr Cys Leu Thr Ser Gly Val Arg lie lie Gln Pro Thr 20 25 30 Tyr Arg Pro Pro Pro Arg Arg Pro Val lie Tyr Arg Ala Ala Arg Asp 35 40 45 Ala Gly Asp Glu Pro Leu Trp Leu Tyr Gln Gly Asp Asp His Pro Arg 50 55 60 Ala Pro Ser Ser Gly Asp His Pro Val Leu Pro Ser lie lie Asp Asp 65 70 75 80 Val lys Leu Asp Pro Asn Arg Arg Tyr Ala Arg Ser Val Ser Glu Pro fm 90 95 Ser Ser Gln Glu His His Asp Arg Phe Ala Arg Ser Phe Asp Ser Arg 100 105 110 Ser Ser Lys His His Gly Gly Ser His Ser Thr Ser Gly Gly Ser Arg 115 120 125 Asp Thr Gly Ala Thr His Ser Gly Tyr Asn Arg Arg Asn Ser 130 135 140 <210> 30 <211> 360 <212> DNA <213> Ostrinia nubilal <220> <221> CDS <222> (1) ... (201) <400> 30 atg aac ttc tcc aaa att ttg ttc gct gtg ttc gct ate ttc atg gct 4f Met Asn Phe Ser Lys lie Leu Phe Ala Val Phe Ala lie Phe Met Ala 1 5 10 15 ttt gcc gcg gta tcc gct gca ccc aac cct aga tgg aat cct ttt aag 96 Phe Ala Ala Val Ser Ala Ala Pro Asn Pro Arg Trp Asn Pro Phe Lys 20 25 30 aaa ctg gag cgt gtg ggc cag aac ate cgt gac ggg ate ate aaa gca 144 Lys Leu Glu Arg Val Gly Gln Asn lie Arg Asp Gly lie lie Lys Ala 35 40 45 gct cea gca gtt gca gtg gtg ggc caá gct gcc acc ata tac aag ggc 192 Ala Pro Ala Val Ala Val Val Gly Gln Ala Ala Thr lie Tyr Lys Gly 50 55 60 ggg aaa taa ataactacat catcatcatc gtcatcatca teatcatetg 241 Gly Lys * 65 tgacgccaaa agatgcttat atatgctgct ggggatatga cttcatgtgg acaagcatct 301 ttactaactt tttgtatata attttgtacc aaaaatggta tggtaaagtt atgaaacgt 360 <210> 31 <211> 66 <212> P T <213 Ostrinia nubilalis <400> 31 Met Asn Phe Ser Lys lie Leu Phe Ala Val Phe Ala lie Phe Met Ala 1 5 10 15 Phe Ala Ala Val Ser Ala Ala Pro Asn Pro Arg Trp Asn Ero Phe Lys 20 25 30 Lys Leu Glu Arg Val Gly Gln Asn lie Arg Asp Gly lie lie Lys Ala 35 40 45 Ala Pro Ala Val Ala Val Val Gly Gln Ala Ala Thr lie Tyr Lys Gly 50 55 60 Gly Lys 65 <210> 32 <211> 66 <212> PRT <213> Ostrinia nubilalis <400> 32 Met Asn Phe Ser Lys lie Leu Phe Ala Val Phe Ala lie Phe Met Ala 1 5 10 15 Phe Ala Ala Val Ser Ala Ala Pro Asn Pro Arg Trp Asn Pro Phe Lys 20 25 30 Lys Leu Glu Arg Val Gly Gln Asn lie Arg Asp Gly lie lie Lys Ala 35 40 45 Ala Pro Ala Val Ala Val Val Gly Gln Ala Ala Thr lie Tyr Lys Gly 50 55 60 Gly Lys 65 <210> 33 <211> 407 <212> DNA <213> Ostrinia nubilalis <220> <221> CDS <222> (3) ... (281) <221> aspecto_misc <222> 378 <223> n = A, T, C, o G <400> 33 cae cag gta gtg ttg tgt tec ctg gee gee gtg ctt ctg gcg ttc His Gln Val Val Leu Cys Ser Leu Ala Ala Val Leu Leu Ala Phe 1 5 10 15 gtc gct gaa teg tea gcg cag cgt ttc ate cag ceg acc tac agg ceg Val Ala Glu Ser Ser Ala Gln Arg Phe lie Gln Pro Thr Tyr Arg Pro 20 25 30 ceg ect caá cga cea ceg aag ata tac aga ctg cga aga gat gca ggc Pro Pro Gln Arg Pro Pro Lys lie Tyr Arg Leu Arg Arg Asp Ala Gly 35 40 45 gaa ceg cta tgg ctg tac caá ggt gat gat gtt cag cga gee cea gee Glu Pro Leu Trp Leu Tyr Gln Gly Asp Asp Val Gln Arg Ala Pro Ala 50 55 60 acc ggc gac cat cct tac ctt ccg cea aac ate gac gac atc cat cta 239 Thr Gly Asp His Pro Tyr Leu Pro Pro Asn lie Asp Asp lie His Leu 65 70 75 gac ccc aac acc aag ata cgc tcg cag cgt cga ctc tcc tag 281 Asp Ero Asn Thr Lys lie Arg Ser Gln Arg Arg Leu Ser * 80 85 90 cgctaagcgt ggaggaggca gccacagcac ctccagtggg aagcaaggga cactggcgca 341 acgcaccccg gggtacaatc ggccgcaacg cccgaangca taagattcga ccccatctcc 401 ccggct 407 <210> 34 <211> 90 <212> PRT <213> Ostrinia imbilalis <400> 34 Val Val Leu Cys Ser Leu Ala Ala Val Leu Leu Ala Phe Val Ala Glu 1 5 10 15 Ser Ser Ala Gln Arg Phe lie Gln Pro Thr Tyr Arg Pro Pro Pro Gln 20 25 30 Arg P o P o Lys lie Tyr Arg Leu Arg Arg Asp Ala Gly Glu E o Leu 35 40 45 Trp leu Tyr Gln Gly Asp Asp Val Gln Arg Ala Pro Ala Thr Gly Asp 50 55 60 His Pro Tyr Leu Pro Pro Asn lie As Asp lie His Leu Asp Ero Asn 65 70 75 80 Thr Lys lie Arg Ser Gln Arg Arg Leu Ser 85 90 <210> 35 <211> 92 <212> PRT <213> Ostrinia nubilalis <400> 35 His Gln Val Val Leu Cys Ser Leu Ala Ala Val Leu Leu Ala Phe Val 1 5 10 15 Ala Glu Ser Ser Ala Gln Arg Phe lie Gln Pro Thr Tyr Arg Pro Pro 20 25 30 P o Gln Arg Pro Pro Lys lie Tyr Arg Leu Arg Arg Asp Ala Gly Glu 35 40 45 Pro Leu Trp Leu Tyr Gln Gly Asp Asp Val Gln Arg Ala Pro Ala Thr 50 55 60 Gly Asp His Pro Tyr Leu ro Pro Asn lie Asp Asp lie His Leu Asp 65 70 75 80 Pro Asn Thr Lys lie Arg Ser Gln Arg Arg Leu Ser 85 90 <210> 36 <211> 362 <212> DNA <213> Ostrinia nubilalis <220> <221> CDS <222> (1) ... (252) <400> 36 atg ttc aaa tta agt ttt att att ttc atg ttg gtg gcc att gcg age 48 Met Phe Lys Leu Ser Phe lie lie Phe Met Leu Val Ala lie Ala Ser 1 5 10 15 gtt tta age agt gaa gcc cea gcc cea gac tgc acc teg ect ctt gag 96 Val Leu Ser Ser Glu Ala Pro Ala Pro Asp Cys Thr Ser Pro Leu Glu 20 25 30 acc gga cea tgc aga ggc agg aaa gtt gct ttc ggc tac gat act gac 144 Thr Gly Ero Cys Arg Gly Arg Lys Val Ala Phe Gly Tyr Asp Thr Asp 35 40 45 ttg gaa gga tgc aaa cag ttc ate tac gga gga tgt gac ggc aac ggc 192 Leu Glu Gly Cys Lys Gln Phe lie Tyr Gly Gly Cys Asp Gly Asn Gly 50 55 60 aac cgt tac aac act cta gag gag tgt cag gct gct tgc gag agt gac 240 Asn Arg Tyr Asn Thr Leu Glu Glu Cys Gln Ala Ala Cys Glu Ser Asp 65 70 75 80 tgc aac aaa taa taacgaaatg caagcaatca attgggtatt tgacagcaca Cys Asn Lys * gtcaattgac atactfctttt taaactgfcca aaacgcaaca fctccctattt ttcacatttt 352 gcaaagtaga 362 <210> 37 <211> 83 <212> PRT <213> Ostrinia nubilalis <400> 37 Met Phe Lys Leu Ser Phe lie lie Phe Met Leu Val Ala lie Ala Ser 1 5 10 15 Val Leu Ser Ser Glu Ala Pro Ala Pro Asp Cys Thr Ser Pro Leu Glu 20 25 30 Thr Gly Pro Cys Arg Gly Arg Lys Val Ala Phe Gly Tyr Asp Thr Asp 35 40 45 Leu Glu Gly Cys Lys Gln Phe lie Tyr Gly Gly Cys Asp Gly Asn Gly 50 55 60 Asn Arg Tyr Asn Thr Leu Glu Glu Cys Gln Ala Ala Cys Glu Ser Asp 65 70 75 80 Cys Asn Lys ¾:210> 38 <211> 83 <212> PRT <213> Ostrinia nubilalis <400> 38 Met Phe Lys Leu Ser Phe lie lie Phe Met Leu Val Ala lie Ala Ser 1 5 10 15 Val Leu Ser Ser Glu Ala Pro Ala Pro Asp Cys Thr Ser Pro Leu Glu 20 25 30 Thr Gly Pro Cys Arg Gly Arg Lys Val Ala Phe Gly Tyr Asp Thr Asp 35 40 45 Leu Glu Gly Cys Lys Gln Phe lie Tyr Gly Gly Cys Asp Gly Asn Gly 50 55 60 Asn Arg Tyr Asn Thr Leu Glu Glu Cys Gln Ala Ala Cys Glu Ser Asp 65 70 75 80 Cys Asn Lys <210> 39 <211> 242 <212> DNA <213> Ostrinia nubilalis <220> <221> CDS <222> (1) ... (201) <400> 39 atg aat ttc tcc aaa att ctt ttc gcg ate ttc gct tgt ttc atg gcg Met Asn Phe Ser Lys lie Leu Phe Ala lie Phe Ala Cys Phe Met Ala 1 5 10 15 ttc gee gee gtg tea gct gct ect gaa cea aga tgg aac ceg ttt aag Phe Ala Ala Val Ser Ala Ala Pro Glu Pro Arg Trp Asn Pro Phe Lys 20 25 30 aaa ctt gag ga gtg ggc cag aac ate cga gac ggc ate gtg aag gca 144 Lys Leu Glu Arg Val Gly Gln Asn lie Arg Asp Gly lie Val Lys Ala 35 40 45 caá cea gct ate caá gta gtg gga gaa gcg gct acá ata tac aga ggt 192 Gln' Pro Ala lie Gln Val Val Gly Glu Ala Ala Thr lie Tyr Arg Gly 50 55 60 ggt aaa taa tttaccacat agcaaacatc gtctagttta aaaatcgaat 241 Gly Lys * 65 a 242 <210> 40 <21l> 66 <212> PRT <213> Ostrinia nubilalis <400> 40 Met Asn Phe Ser Lys lie Leu Phe Ala lie Phe Ala Cys Phe Met Ala 1 5 10 15 Phe Ala Ala Val Ser Ala Ala Pro Glu Pro Arg Trp Asn Pro Phe Lys 20 25 30 Lys Leu Glu Arg Val Gly Gln Asn lie Arg Asp Gly He Val Lys Ala 35 40 45 Gln Pro Ala lie Gln Val Val Gly Glu Ala Ala Thr He Tyr Arg Gly 50 55 60 Gly Lys 65 <210> 41 <211> 63 <212> PRT <213> Ostrinia nubilalis <400> 41 Met Asn Phe Ser Lys lie Leu Phe Ala lie Phe Ala Cys Phe Met Ala 1 5 10 15 · Phe Ala Ala Val Ser Ala Ala Pro Glu Pro Arg Trp Asn Pro Phe Lys 20 25 30 Lys Leu Glu Arg Val Gly Gln Asn He Arg Asp Gly He Val Lys Ala 35 40 45 Gln Pro Ala lie Gln Val Val Gly Glu Ala Ala Thr lie Tyr Arg 50 55 60 <210> 42 <211> 471 <212> DNA <213> Ostrinia nubilal <220> <221> cds <222> (1) ... (19 <400> 42 atg aaa ttt tca aag gtt ttc ttc gtt ttc ttc gca ttc gtg gct gcg 48 Met Lys Phe Ser Lys Val Phe Phe Val Phe Phe Ala Phe Val Ala Ala 1 5 10 15 ttt gcg acg gtc acc gct tcg cea ttc aac tta ggg aag gaa ctg gaa 96 Phe Ala Thr Val Thr Ala Ser Pro Phe Asn Leu Gly Lys Glu Leu Glu 20 25 30 gga ate ggc cag aga gtg agg gac age ate ate agt gee cga ceg gct 144 Gly lie Gly Gln Arg Val Arg Asp Ser lie lie Ser Ala Arg Pro Ala 35 40 45 gtt gac acc ate ttg gaa gee cag aag ata ttc aag gga ggc gac aaa 192 Val Asp Thr lie Leu Glu Ala Gln Lys lie Phe Lys Gly Gly Asp Lys 50 55 60 gac tga acgaaatgac gtcataattt aaatacaaat attttfcttaa gttagtttta 248 Asp * 65 caacataaaa cgttaafcacc tacgtacgfcfc tgaggaaaaa ctcattagat tattattcat 308 gtaaattatg tagattagca aaagagaatt tcaaafctacc tttgfcttgga actcggattc 368 tgtgatataa tatatgttta ttttaaagta tttagttgta tctattttta ttttcacagt 428 cageacattt ectaattaat fcfcfcgaacfctfc gaafcfcagagt aag 471 <210> 43 <211> 65 <212> PRT <213> Ostrinia nubilalis <400> 43 Met Lys Phe Ser Lys Val Phe Phe Val Phe Phe Ala Phe Val Ala Ala 1 5 10 15 Phe Ala Thr Val Thr Ala Ser Pro Phe Asn Leu Gly Lys Glu Leu Glu 20 25 30 Gly lie Gly Gln Arg Val &?g Asp Ser lie lie Ser Ala Arg Pro Ala 35 40 45 Val Asp Thr lie Leu Glu Ala Gln Lys lie Phe Lys Gly Gly Asp Lys 50 55 60 Asp 65 <210> 44 <211> 60 <212> PRT <213> Ostrinia nubilalis <400> 44 Met Lys Phe Ser Lys Val Phe Phe Val Phe Phe Ala Phe Val Ala Ala 1 5 10 15 Phe Ala Thr Val Thr Ala Ser Pro Phe Asn Leu Gly Lys Glu Leu Glu 20 25 30 Gly lie Gly Gln Arg Val Arg Asp Ser lie lie Ser Ala Arg Pro Ala 35 40 45 Val Asp Thr lie Leu Glu Ala Gln Lys lie Phe Lys 50 55 60 <210> 45 <211> 464 <212> DNA <213> Ostrinia nubilalis <220> <221> CDS <222> (1) . . . (464) <400> 45 atg caá cga gta gtg ttg tgt tcc ctg gcc gcc gtg ctc ctg gcg ttc 48 Met Gln Arg Val Val Leu Cys Ser Leu Ala Ala Val Leu Leu Ala Phe 1 5 10 15 gtc gct gaa tcg tea gcg cag cgt ttc ate cag ceg acc tac agg ceg 96 Val Ala Glu Ser Ser Ala Gln Arg Phe lie Gln Pro Thr Tyr Arg Pro 20 25 30 ceg ect ca cga cea ceg aag ata tac aga ctg cga aga gat gca ggc 144 Pro Pro Gln Arg Pro Pro Lys lie Tyr Arg Leu Arg Arg Asp Ala Gly 35 40 45 gaa ceg cta tgg ctg tac caá ggt gat gat gtt cag cga gcg cea gcc 192 Glu Pro Leu Trp Leu Tyr Gln Gly Asp Asp Val Gln Arg Ala Pro Ala 50 55 60 acc ggt gac cae ect tac ctg ceg cea aac ate gac gac ate cat cta 240 Thr Gly Asp His Pro Tyr Leu Pro Pro Asn lie Asp Asp lie His Leu 65 70 75 80 gac ccc aac acc aga tac gct cgc age gtc gac tct cct agc gct aag 288 Asp Pro Asn Thr Arg Tyr Ala Arg Ser Val Asp Ser Pro Ser Ala Lys 85 90 95 cgt gga gga ggc age cae age acc tec agt gga age agg gat act ggc 336 Arg Gly Gly Gly Ser His Ser Thr Ser Ser Gly Ser Arg Asp Thr Gly 100 105 110 gee acg cae ccc ggg tac aat cgc cgc aac gee cga age ata aga ttc 384 Ala Thr His Pro Gly Tyr Asn Arg Arg Asn Ala Arg Ser lie Arg Phe 115 120 125 gac cct ate tct ceg ctg ceg tec ceg act ttc cct aaa cea ttc gac 432 Asp Pro lie Ser Pro Leu Pro Ser Pro Thr Phe Pro Lys Pro Phe Asp 130 135 140 ceg ttc aac ccc cgg cct gtt teg ccc acc ag 464 Pro Phe Asn Pro Arg Pro Val Ser Pro Thr 145 150 <210> 46 <211> 154 <212> PRT <213> Ostrinia nubilalis <400> 46 Met Gln Arg Val Val Leu Cys Ser Leu Ala Ala Val Leu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Val Ala Glu Ser Ser Ala Gln Arg Phe lie Gln Pro Thr Tyr Arg Pro 20 25 30 Pro Pro Gln Arg Pro Pro Lys lie Tyr Arg Leu Arg Arg Asp Ala Gíy 35 40 45 Glu Pro Leu Trp Leu Tyr Gln Gly Asp Asp Val Gln Arg Ala Pro Ala 50 55 60 Thr Gly Asp His Pro Tyr Leu Pro Pro Asn lie Asp Asp lie His Leu 65 70 75 80 Asp Pro Asn Thr Arg Tyr Ala Arg Ser Val Asp Ser Pro Ser Ala Lys 85 90 95 Arg Gly Gly Gly Ser His Ser Thr Ser Ser Gly Ser Arg Asp Thr Gly 100 105 110 Ala Thr His Pro Gly Tyr Asn Arg Arg Asn Ala Arg Ser lie Arg Phe 115 120 125 Asp Pro lie Ser Pro Leu Pro Ser Pro Thr Phe Pro Lys Pro Phe Asp 130 135 140 Pro Phe Asn Pro Arg Pro Val Ser Pro Thr 145 150 <210> 47 <211> 181 <212> PRT <213> Ostrinia nubilalis <220> <221> VARIANTE <222> 155 <223 Xaa = Cualquier aminoácido <400> 47 Met Gln Arg Val Val Leu Cys Ser Leu Ala Ala Val Leu Leu Ala Phe 1 5 10 15 Val Ala Glu Ser Ser Ala Gln Arg Phe lie Gln Pro Thr Tyr Arg Pro 20 25 30 Pro Pro Gln Arg Pro Pro Lys lie T r Arg Leu Arg Arg As Ala Gly 35 40 45 Glu Pro Leu Trp Leu Tyr Gln Gly Asp Asp Val Gln Arg Ala Pro Ala 50 55 60 Thr Gly Asp His Pro Tyr Leu Pro Pro Asn lie Asp Asp lie His Leu 65 70 75 80 As Pro Asn Thr Arg Tyr Ala Arg Ser Val Asp Ser Pro Ser Ala Lys 85 90 95 Arg Gly Gly Gly Ser His Ser Thr Ser Ser Gly Ser Arg Asp Thr Gly 100 105 110 Ala Thr His Pro Gly Tyr Asn Arg Arg Asn Ala Arg Ser lie Arg Phe 115 120 125 Asp Pro lie Ser Pro Leu Pro Ser Pro Thr Phe Pro Lys Pro Phe Asp 130 135 140 Pro Phe Asn Pro Arg Pro Val Ser ro Thr Xaa Pro Phe Pro Leu Tyr 145 150 155 160 Ala Arg Ser Arg Arg Asp lie Gln Phe Pro Gln Lys Pro Lys His His 165 170 175 Asp lie Val Leu Thr <210> 48 <211> 538 <212> DNA <213> Heliotliis virescens <220> <221> CDS <222> (1) ... (432) <400> 48 atg gca aaa tcc att ttc gcg ctt gga gtt ate gca gtt ctg ttg ata Met Ala Lys Ser lie Phe Ala Leu Gly Val lie Ala Val Leu Leu lie 1 5 10 15 acá gaa tcc aac tgt tgg aga agt gat etc ect ate ata etc ceg act Thr Glu Ser Asn Cys Trp Arg Ser Asp Leu Pro lie lie Leu Pro Thr 20 25 30 tat aaa ect ect cgt acc ceg age acc gtt att ate agg ac gta cgc 144 Tyr Lys Pro Pro Arg Thr Pro Ser Thr Val lie lie Arg Thr Val Arg 35 40 45 gaa gee gga gat aaa ceg tta tgg etc tac caá gga gac gat cae ceg 192 Glu Ala Gly Asp Lys Pro Leu Trp Leu Tyr Gln Gly Asp Asp Hls Pro 50 55 60 cga gee ect tea age ggc gat cat ect gta ctg ecc ceg ate ata gac 240 Arg Ala Pro Ser Ser Gly Asp His Pro Val Leu Pro Pro lie lie Asp 65 70 75 80 gat gtg aaa ctg gac ecc aac aga cgg tac gcg cgt agt gtg aac gag 288 Asp Val Lys Leu Asp Pro Asn Arg Arg Tyr Ala Arg Ser Val Asn Glu 85 90 95 ecc teg tet cag gag cat cae gaa cgc ttt gtg agg age ttc gac tcc 336 Pro Ser Ser Gln Glu His His Glu Arg Phe Val Arg Ser Phe Asp Ser 100 105 110 cgc age age agg cat cae ggc ggc agt cae tcc acg tcc age ggc age 384 Arg Ser Ser Arg His His Gly Gly Ser His Ser Thr Ser Ser Gly Ser 115 120 125 cgc gac act gga gct act cat ceg gga tac aat cgt cgt aac tea taa 432 Arg Asp Thr Gly Ala Thr His Pro Gly Tyr Asn Arg Arg Asn Ser * 130 135 140 tctgtggttt aatgtattag atatttgtgt ttaacattaa aacatttttg aaattgtcta 492 etegaataaa tacatttacc tattttaaaa aaaaaaaaaa aaaaaa 538 <210> 49 <211> 143 <212> PRT <213> Heliothis virescens <400> 49 Met Ala Lys Ser lie Phe Ala Leu Gly Val lie Ala Val Leu Leu lie 1 5 10 15 Thr Glu Ser Asn Cys Trp Arg Ser Asp Leu Pro lie lie Leu Pro Thr 20 25 30 yr Lys Pro Pro Arg Thr Pro Ser Thr Val lie lie Arg Thr Val Arg 35 40 45 Glu Ala Gly Asp Lys Pro Leu Trp Leu Tyr Gln Gly Asp Asp His Pro 50 55 60 Arg Ala Pro Ser Ser Gly Asp His Pro Val Leu Pro Pro lie lie Asp 65 70 75 80 Asp Val Lys Leu Asp Pro Asn Arg Arg Tyr Ala Arg Ser Val Asn Glu 65 90 95 Pro Ser Ser Gln Glu His His Glu Arg Phe Val Arg Ser Phe Asp Ser 100 105 110 Arg Ser Ser Arg His His Gly Gly Ser His Ser Thr Ser Ser Gly Ser 115 120 125 Arg Asp Thr Gly Ala Thr His Pro Gly Tyr Asn Arg Arg Asn Ser 130 135 1 0 <210> 50 <211> 143 <212> PRT <213> Heliothis virescens <400> 50 Met Ala Lys Ser lie Phe Ala Leu Gly Val lie Ala Val Leu Leu lie 1 5 10 15 Thr Glu Ser Asn Cys Trp Arg Ser Asp Leu Pro lie lie Leu Pro Thr 20 25 30 Tyr Lys Pro Pro Arg Thr Pro Ser Thr Val lie lie Arg Thr Val Arg 35 40 45 Glu Ala Gly Asp Lys Pxo Leu Trp Leu Tyr Gln Gly Asp Asp His Pro 50 55 60 Arg Ala Pro Ser Ser Gly Asp His Pro Val Leu Pro Pro lie lie Asp 65 70 75 80 Asp Val Lys Leu Asp Pro Asn Arg Arg Tyr Ala Arg Ser Val Asn Glu 85 90 95 Pro Ser Ser Gln Glu His His Glu Arg Phe Val Arg Ser Phe Asp Ser 100 105 110 Arg Ser Ser Arg His His Gly Gly Ser His Ser Thr Ser Ser Gly Ser 115 120 125 Arg Asp Thr Gly Ala Thr His Pro Gly Tyr Asn Arg Arg Asn Ser 130 135 140 <210> 51 <211> 481 <212> DNA <213> Heliot is virescens <220> <221> CDS <222> (1) (429) <400> 51 atg aag tca gta ctt gta ctt tgc gtt gtt gcg gtg ttg cat acg gca 48 Met Lys Ser Val Leu Val Leu Cys Val Val Ala Val Leu His Thr Ala 1 5 10 15 gca tcc tca ggc tgg aat aaa aat aat ggc ggc ate ata ctt ceg acc 96 Ala Ser Ser Gly Trp Asn Lys Asn Asn Gly Gly lie lie Leu Pro Thr 20 25 30 ttt aga ect cea ect ata tgg cea gga att acc agg ac gta cgt gaa 144 Phe Arg Pro Pro Pro lie Trp Pro Gly lie Thr Arg Thr Val Arg Glu 35 . 40 45 gct gga gat caá ect tta tgg ctg tac caá gga gac aat cac ceg cga 192 Ala Gly Asp Gln Pro Leu Trp Leu Tyr Gln Gly Asp Asn His Pro Arg 50 55 60 gee ect tca age ggc gat cat ect gta ctg ecc tcg ate ata gac gat 240 Ala Pro Ser Ser Gly Asp His Pro Val Leu Pro Ser lie lie Asp Asp 65 70 75 80 gtg aag ttg gac ecc aac agg cgg tac gtg cgt agt gtg aac gag ceg 288 Val Lys Leu Asp Pro Asn Arg Arg Tyr Val Arg Ser Val Asn Glu Pro 85 90 · 95 tcg tca cag gag cat cac gaa cgc ttt gtg agg age ttc gac tcc cgc 336 Ser Ser Gln Glu His His Glu Arg Phe Val Arg Ser Phe Asp Ser Arg 100 105 110 age age agg cat cac ggc ggc age cac tet acg tcc age ggc age cgc 384 Ser Ser Arg His His Gly Gly Ser His Ser Thr Ser Ser Gly Ser Arg 115 120 125 gac act gga gct act cat ceg gga tac aat cgt cgt aac tca taa 429 Asp Thr Gly Ala Thr His Pro Gly Tyr Asn Arg Arg Asn Ser * 130 135 140 tctgtggtfct aatccattag aaatttgtgt ttgtattttg afcaaaaacaa fcg 481 <210> 52 <211> 142 <212> PRT <213> Heliot is virescens <400> 52 Met Lys Ser Val Leu Val Leu Cys Val Val Ala Val Leu His Thr Ala 1 5 10 15 Ala Ser Ser Gly Txp Asn Lys Asn Asn Gly Gly lie lie Leu Pro Thr 20 25 30 Phe Arg Pro Pro Pro lie Trp Pro Gly lie Thr Arg Thr Val Arg Glu 35 40 45 Ala Gly Asp Gln Pro Leu Trp Leu Tyr Gln Gly Asp Asn His Pro Arg 50 55 60 Ala Pro Ser Ser Gly Asp His Pro Val Leu Pro Ser lie lie Asp Asp 65 70 75 80 Val Lys Leu Asp Pro Asn Arg Arg Tyr Val Arg Ser Val Asn Glu Pro 85 90 95 Ser Ser Gln Glu His His Glu Arg Phe Val Arg Ser Phe Asp Ser Arg 100 105 110 Ser Ser Arg His His Gly Gly Ser His Ser Thr Ser Ser Gly Ser Arg 115 120 125 Asp Thr Gly Ala Thr His Pro Gly Tyr Asn Arg Arg Asn Ser 130 135 140 <210> 53 <211> 142 <212> PRT <213> Heliothis virescens <400> 53 Met Lys Ser Val Leu Val Leu Cys Val Val Ala Val Leu His Thr Ala 1 5 10 15 Ala Ser Ser Gly Trp Asn Lys Asn Asn Gly Gly lie lie Leu Pro Thr 20 25 30 Phe Arg Pro Pro Pro lie Trp Pro Gly lie Thr Arg Thr Val Arg Glu 35 40 45 Ala Gly Asp Gln Pro Leu Trp Leu Tyr Gln Gly Asp Asn His Pro Arg 50 55 60 Ala Pro Ser Ser Gly Asp His Pro Val Leu Pro Ser lie lie Asp Asp 65 70 75 80 Val Lys Leu Asp Prn Asn Arg Arg Tyr Val Acg Ser Val Asn Glu Pro 85 90 95 Ser Ser Gln Glu His His Glu Arg Phe Val Arg Ser Phe Asp Ser Arg 100 105 110 Ser Ser Arg His His Gly Gly Ser His Ser Thr Ser Ser Gly Ser Arg 115 120 125 Asp Thr Gly Ala Thr His Pro Gly Tyr Asn Arg Arg Asn Ser 130 135 140 <210> 54 <211> 418 <212> DNA <213> Heliothis vir <220> <221> CDS <222> (1) ... (192) <400> 54 atg aat tct aaa ata gtg att ttt ttg tgc att tgt ttt gtt ctt gtg 48 Met Asn Ser Lys lie Val lie Phe Leu Cys lie Cys Phe Val Leu Val 1 5 10 15 tea acg gca acg gca tgg gat ttg ttt aaa gaa att gag gga gca ggt 96 Ser Thr Ala Thr Ala Trp Asp Leu Phe Lys Glu lie Glu Gly Ala Gly 20 25 30 cag agg gtg cgt gat gcc atc atc age gct ggc cct gcg gtc gac gtg 144 Gln Arg Val Arg Asp Ala lie lie Ser Ala Gly Pro Ala Val Asp Val 35 40 45 etc acc aaa act aaa gga tta ttc gac age tct gaa gaa aaa gat tag 192 Leu Thr Lys Thr Lys Gly Leu Phe Asp Ser Ser Glu Glu Lys Asp * 50 55 60 tttataataa aatgtaaact cagettagat taggtacaga cgctagccgg tcaacgtacc 252 aacgtctgtc aaattttacc aatcgaactt taaccttcca ctgttgtgat aaggttgaaa 312 atctattgag gaaatttgtc agattgtgat ttgccaggtc gacgtgttgg tatctgtaaa 372 tttatacttt cattaagtaa tattgtagct gtaacactga aagaac 418 <210> 55 <211> 57 <212> PRT <213> Heliothis virescens <400> 55 Met Asn Ser Lys lie Val lie Phe Leu Cys lie Cys Phe Val Leu Val 1 5 10 15 Ser Thr Ala Thr Ala Trp Asp Leu Phe Lys Glu lie Glu Gly Ala Gly 20 25 30 Gln Arg Val Arg Asp Ala lie lie Ser Ala Gly Pro Ala Val Asp Val 35 40 45 Leu Thr Lys Thr Lys Gly Leu Phe Asp 50 55 <210> 56 <211> 63 <212> PRT <213> Heliothis virescens <400> 56 Met Asn Ser Lys lie Val lie Phe Leu Cys lie Cys Phe Val Leu Val 1 5 ' 10 15 Ser Thr Ala Thr Ala Trp Asp Leu Phe Lys Glu lie Glu Gly Ala Gly 20 25 30 Gln Arg Val Arg Asp Ala lie lie Ser Ala Gly Pro Ala Val Asp Val 35 40 45 Leu Thr Lys Thr Lys Gly Leu Phe Asp Ser Ser Glu Glu Lys Asp 50 55 60 <210> 57 <211> 275 <212> UNA <213> Heliothis virescens <220> <221> CDS <222> (1) ... (189) <400> 57 atg aac ttc tea agg ata ttt ttc ttc gtg ttc gcg tgt ttg gta gta 48 Met Asn Phe Ser Arg lie Phe Phe Phe Val Phe Ala Cys Leu Val Val 1 5 10 15 ctg tgc age gtg tcg gcg gcg cct gag ccg agg tgg aag gtc ttc aag 96 Leu Cys Ser Val Ser Ala Ala Pro Glu Pro Arg Trp Lys Val Phe Lys 20 25 30 aaa att gag aag atg ggt cgc aac ate cga gac ggc ate gta aag gct 144 Lys lie Glu Lys Met Gly Arg Asn lie Arg Asp Gly lie Val Lys Ala 35 40 45 gga cea gcg ata gca gtt etc ggc caá gct aaa gca tta gga taa 189 Gly Pro Ala lie Ala Val Leu Gly Gln Ala Lys Ala Leu Gly * 50 55 60 ataattattg tattattaat attaagagtt taatatctaa gtcgcattta aatactcatt 249 ctgccataaa taaatgtatt ttaagt 275 <210> 58 <211> 62 <212> PRT <213> Heliothis virescens <400> 58 Met Asn Phe Ser Arg lie Phe Phe Phe Val Phe Ala Cys Leu Val Val 1 5 10 15 leu Cys Ser Val Ser Ala Ala Pro Glu Pro Arg Trp Lys Val Phe Lys 20 25 30 Lys lie Glu Lys Met Gly Arg Asn lie Arg Asp Gly lie Val Lys Ala 35 40 45 Gly Pro Ala lie Ala Val Leu Gly Gln Ala Lys Ala Leu Gly 50 55 60 <210> 59 <211> 62 <212> PRT <213> Heliothis virescens <400> 59 Met Asn Phe Ser Arg lie Phe Phe Phe Val Phe Ala Cys Leu Val Val 1 5 10 15 Leu Cys Ser Val Ser Ala Ala Pro Glu Pro Arg Trp Lys Val Phe Lys 20 25 30 Lys lie Glu Lys Met Gly Arg Asn lie Arg Asp Gly lie Val Lys Ala 35 · 40 45 Gly Pro Ala lie Ala Val Leu Gly Gln Ala Lys Ala Leu Gly 50 55 60 <210> 60 <211> 397 <212> DNA <213> Helicoverpa z <220> <221> aspecto-mise <222> 229, 267, 326 <223> n = A, T, C o <400> 60 atg aat tec aaa att gta tta ttc ctg tgt gtt tgt ttg gtg ctt gtg 48 Met Asn Ser Lys lie Val Leu Phe Leu Cys Val Cys Leu Val Leu Val 1 5 10 15 tcg acg gca aca gca tgg gac ttc ttt aag gaa ctt gaa gga gca gga 96 Ser Thr Ala Thr Ala Trp Asp Phe Phe lys Glu Leu Glu Gly Ala Gly 20 25 30 caá aga gtc cgc gat gct ate ate age gct ggc ect gct gtc gac gtt 144 Gln Arg Val Arg Asp Ala lie lie Ser Ala Gly Pro Ala Val Asp Val 35 40 45 etc acc aaa gct aag ggg cta tac gac age tec gaa gaa aaa gat tag 192 Leu Thr Lys Ala Lys Gly Leu Tyr Asp Ser Ser Glu Glu Lys Asp * 50 55 60 gatataagcc aatcaaatca tcatcatcat agtcaanaat caatcaaaat caaaactcat 252 ttattcaaac ttggntgcaa aacaagcact tttcgaacgt caaaaaaaaa tttacataag 312 acagcccccc aatncgccca cccttcacca acttccctaa gttgtttttt gctggggaaa 372 gaaagaagtt ggcgcaacaa aacct 397 <210> 61 <211> 63 <212> PRT <213> Helicoverpa zea <400> 61 Met Asn Ser Lys lie Val Leu Phe Leu Cys Val Cys Leu Val Leu Val 1 5 10 15 Ser Thr Ala Thr Al Trp Asp Phe Phe Lys Glu Leu Glu Gly Ala Gly 20 25 30 Gln Arg Val Arg Asp Ala lie lie Ser Ala Gly Pro Ala Val Asp Val 35 40 45 Leu Thr Lys Ala Lys Gly Leu Tyr Asp Ser Ser Glu Glu Lys Asp 50 55 60 <210> 62 <211> 57 <212> PRT <213> Helicoverpa <400> 62 Met Asn Ser Lys He al Leu Phe Leu Cys Val Cys Leu Val Leu Val 1 5 10 15 Ser Thr Ala Thr Ala Trp Asp Phe Phe Lys Glu Leu Glu Gly Ala Gly 20 25 30 Gln Arg Val Arg Asp Ala He He Ser Ala Gly Pro Ala Val Asp Val 35 40 45 Leu Thr Lys Ala Lys Gly Leu Tyr Asp 50 55 <210> 63 <211> 263 <212> DNA <213> Manduca sexta <220> <221> CDS <222> (1) ... (186) <221> aspecto_misc <222>56, 65, 108, 123 <223> n = A, T, C o G <400> 63 atg aac ttc tct cgc gtt ttg ttc ttc gtg ttt gct tgc gtc agc gca 48 Met Asn Phe Ser Arg Val Leu Phe Phe Val Phe Ala Cys Val Ser Ala 1 5 10 15 ttc gcc gng act tca gnt gcg ccc tgt aat ccc ttt aag gaa ctg gag 96 Phe Ala Xaa Thr Ser Xaa Ala Pro Cys Asn Pro Phe Lys Glu Leu Glu 20 25 30 aga gct ggc can cga gtc cgc gac gen gtc ate age gcc gcg ect gca 144 Arg Ala Gly Xaa Arg Val Arg Asp Ala Val lie Ser Ala Ala Pro Ala 35 40 45 gtc gcg acc gtc gga cag gcg gcc gcc ate gcc age gga taa 186 Val Ala Thr Val Gly Gln Ala Ala Ala lie Ala Ser Gly * 50 55 60 taaccaatgg atgcttcact attcattatt atcataaatt atatgtgcca taccttaata 246 tgttccttac atttgta 263 <210> 64 <211> 61 <212> PRT <213> Manduca sexta <220> <221> VARIANTE <222> 19, 22, 36 <223> Xaa = Cualquier aminoácido <400> 64 Met Asn Phe Ser Arg Val Leu Phe Phe Val Phe Ala Cys Val Ser Ala 1 5 10 15 Phe Ala Xaa Thr Ser Xaa Ala Pro Cys Asn Pro Phe Lys Glu Leu Glu 20 25 30 Arg Ala Gly Xaa Arg Val Arg Asp Ala Val lie Ser Ala Ala Pro Ala 35 40 45 Val Ala Thr Val Gly Gln Ala Ala Ala lie Ala Ser Gly 50 55 60 <210> 65 <211> 61 <212> PRT <213> Manduca sexta <220> <221> VARIANTE <222> 19, 22, 36 <223> Xaa = Cualquier aminoácido <400> 65 Met Asn Phe Ser Arg Val Leu Phe Phe Val Phe Ala Cys Val Ser Ala 1 5 10 15 Phe Ala Xaa Thr Ser Xaa Ala Pro Cys Asn Pro Phe Lys Glu Leu Glu 20 25 30 Arg Ala Gly Xaa Arg Val Arg Asp Ala Val lie Ser Ala Ala Pro Ala 35 40 45 Val Ala Thr Val Gly Gln Ala Ala Ala lie Ala Ser Gly 50 55 60 <210> 66 <211> 367 <212> DNA <213> Manduca sexta <220> <221> CDS <222> (1) ... (186) <400> 66 atg aac ttc tcc agg atc ttc ttc ttc gtc ttc gcc ttg gtt ctt ggc Met Asn Phe Ser Arg lie Phe Phe Phe Val Phe Ala Leu Val Leu Gly 1 5 10 15 atg tct gct gta tea gca gct ecc aaa tgg aag att ttt aag aaa att 96 Met Ser Ala Val Ser Ala Ala Pro Lys Trp Lys lie Phe Lys Lys lie 20 25 30 gaa aaa gtc gga agg aac gtc cgt gat ggt att atc aaa gcg gga cea 144 Glu Lys Val Gly Arg Asn Val Arg Asp Gly lie lie Lys Ala Gly Pro 35 40 45 gcg ata caá gtg ctg gga cag gcg aaa gcg att gga aaa tga 186 Ala lie Gln Val Leu Gly Gln Ala Lys Ala lie Gly Lys * 50 55 60 agctgtattg cagtgttctt aaagtcttta ttacctcaac aaaatgccat aactgtatac 246 tettatagat aagtgaatca gaagaatgat ctgatgtaga gataatgaat ctgcctgtat 306 ttctttgaat aaattaagtg aatgtaaata tttttttaaa taaataattt ttattaatct 366 t 367 <210> 67 <211> 61 <212> PRT <213> Manduca sexta <400> 67 Met Asn Phe Ser Arg lie Phe Phe Ehe Val Phe Ala Leu Val Leu Gly 1 5 10 15 Met Ser Ala Val Ser Ala Ala Pro Lys Trp Lys lie Phe Lys Lys lie 20 25 30 Glu Lys Val Gly Arg Asn Val Arg Asp Gly lie lie Lys Ala Gly Pro 35 40 45 Ala lie Gln Val Leu Gly Gln Ala Lys Ala lie Gly Lys 50 55 60 <210> 68 <211> 61 <212> PRT <213> Manduca sexta <400> 68 Met Asn Phe Ser Arg lie Phe Phe Phe Val Phe Ala Leu Val Leu Gly 1 5 10 15 Met Ser Ala Val Ser Ala Ala Pro Lys Trp Lys lie Phe Lys Lys lie 20 25 30 Glu Lys Val Gly Arg Asn Val Arg Asp Gly lie lie Lys Ala Gly Pro 35 40 45 Ala lie Gln Val Leu Gly Gln Ala Lys Ala lie Gly Lys 50 55 60 <210> 69 <211> 230 <212> DNA <213> Manduca sexta <220> <221> CDS <222> (1) ... (135) <400> 69 atg gct tea gct gca ect tgg aat ecc ttc aag gag ctg gag aga gct 48 Met Ala Ser Ala Ala Pro Trp Asn Pro Phe Lys Glu Leu Glu Arg Ala 1 5 10 15 ggt cag cga gtc cgc gac gcc ate ate age gca ggc cea gca gtc gcg 96 Gly Gln Arg Val Arg Asp Ala lie lie Ser Ala Gly Pro Ala Val Ala 20 25 30 acc gtc gga cag gcg gcc gct ate gcc agg ggt ggt taa gcaacgaatg 145 Thr Val Gly Gln Ala Ala Ala lie Ala Arg Gly Gly * 35 40 ctttatctat gaatatgctt attaattata taagtttcat gtatctttat tacaataatg 205 atttggtata ataaacgtca ataat 230 <210> 70 <211> 44 <212> PRT <213> Manduca sexta <400> 70 Met Ala Ser Ala Ala Pro Trp Asn Pro Phe Lys Glu Leu Glu Arg Ala 1 5 10 15 Gly Gln Arg Val Arg Asp Ala lie lie Ser Ala Gly Pro Ala Val Ala 20 25 30 Thr Val Gly Gln. Ala Ala Ala lie Ala Arg Gly Gly 35 40 <210> 71 <211> 44 <212> PRT <213> Manduca sexta <400> 71 Met Ala Ser Ala Ala Pro Trp Asn Pro Phe Lys Glu Leu Glu Arg Al 1 5 10 15 Gly Gln Arg Val Arg Asp Ala lie lie Ser Ala Gly Pro Ala Val Al 20 25 30 Thr Val Gly Gln Ala Ala Ala lie Ala Arg Gly Gly 35 40 <210> 72 <211> 287 <212> DNA <213> Manduca sexta <220> <221> CDS <222> (25) ... (287) <400> 72 actagtggat cccccgggct gcag ggt gaa acá ate atg aaa ttg cta ctg 51 Gly Glu Thr lie Met Lys Leu Leu Leu 1 5 att ttg ggc gtt gcg ctg gtg ttg ctc ttt ggt gag tcc tta ggt cag 99 lie Leu Gly Val Ala Leu Val Leu Leu Phe Gly Glu Ser Leu Gly Gln 10 15 20 25 cga ttt age cag ect acg ttc aag cta ect ca ggt aga ttg acá ctt 147 Arg Phe Ser Gln Pro Thr Phe Lys Leu Pro Gln Gly Arg Leu Thr Leu 30 35 40 agt cga aaa ttt agg gag tcc ggc aat gag cea cta tgg ttg tat caá 195 Ser Arg Lys Phe Arg Glu Ser Gly Asn Glu Pro Leu Trp Leu Tyr Gln 45 50 55 ggc gac aac ata cea aag gca cea tea act gca gaa cat ecc ttc ctt 243 Gly Asp Asn lie Pro Lys Ala Pro Ser Thr Ala Glu His Pro Phe Leu 60 65 70 ceg tet ata ata gat gat gtg aag ttc aat cea gat aga aga ta 287 Pro Ser lie lie Asp Asp Val Lys Phe Asn Ero Asp Arg Arg 75 80 85 <210> 73 <211> 87 <212> PRT <213> Manduca <400> 73 Gly Glu Thr lie Met Lys Leu Leu Leu lie Leu Gly Val Ala Leu Val 1 •5 10 15 Leu Leu Phe Gly Glu Ser Leu Gly Gln Arg Phe Ser Gln Pro Thr Phe 20 25 30 Lys Leu Pro Gln Gly Arg Leu Thr Leu Ser Arg Lys Phe Arg Glu Ser 35 40 45 Gly Asn Glu Pro Leu Trp Leu Tyr Gln Gly Asp Asn lie Pro Lys Ala 50 55 60 Pro Ser Thr Ala Glu His Pro Phe Leu Pro Ser lie lie Asp Asp Val 65 70 75 80 Lys Phe Asn Pro Asp Arg Arg 85 <210> 74 <211> 87 <212> PRT <213> Manduca sexta <400> 74 Gly Glu Thr lie Met Lys Leu Leu Leu lie Leu Gly Val Ala Leu Val 1 5 10 15 Leu Leu Phe Gly Glu Ser Leu Gly Gln Arg Phe Ser Gln Pro Thr Phe 20 25 30 Lys Leu Pro Gln Gly Arg Leu Thr Leu Ser Arg Lys Phe Arg Glu Ser 35 40 45 Gly Asn Glu Pro Leu Trp Leu Tyr Gln Gly Asp Asn lie Pro Lys Ala 50 55 60 Pro Ser Thr Ala Glu His Pro Phe Leu Pro Ser lie lie Asp Asp Val 65 70 75 80 Lys Phe Asn Pro Asp Arg Arg 85 <210> 75 <211> 220 <212> DNA <213> Manduca sexta <220> <221> CDS <222> (1) ... (192) <400> 75 atg aac ttc tcc cgc att ttc ttc ttt gtg ttc gct ctg gtc ctc agt Met Asn Phe Ser Arg lie Phe Phe Phe Val Phe Ala Leu Val Leu Ser 1 5 10 15 ctg tcg gcg gtg tcc gcg gct cct gaa ccg aaa tgg aag gtg ttt aag Leu Ser Ala Val Ser Ala Ala Pro Glu Pro Lys Trp Lys Val Phe Lys 20 25 30 aaa att gaa aaa atg ggc cga aat ate aga gat gga att ate aaa gct 144 lys lie Glu Lys Met Gly Arg Asn lie Arg Asp Gly lie lie Lys Ala 35 40 45 ggc cea gcg att gaa gtc ctt ggc gca gct aag gcc ata gga aag tga 192 Gly Pro Ala lie Glu Val Leu Gly Ala Ala Lys Ala lie Gly Lys .* 50 55 60 aoctaatget tccttgttag tctatttt 220 <210> 76 <211> 63 <212> PRT <213> Manduca sexta <400> 76 Met Asn Phe Ser Arg lie Phe Phe Phe Val Phe Ala Leu Val Leu Ser 1 5 10 15 Leu Ser Ala Val Ser Ala Ala Pro Glu Pro Lys Trp Lys Val Phe Lys 20 25 30 Lys lie Glu Lys Met Gly Arg Asn lie Arg Asp Gly lie lie Lys Ala 35 40 45 Gly Pro Ala lie Glu Val Leu Gly Ala Ala Lys Ala lie Gly Lys 50 55 60 <210> 77 <211> 63 <212> PRT <213> Manduca sexta <400> 77 Met Asn Phe Ser Arg lie Phe Phe Phe Val Phe Ala Leu Val Leu Ser 1 5 10 15 Leu Ser Ala Val Ser Ala Ala Pro Glu Pro Lys Trp Lys Val Phe Lys 20 25 30 Lys lie Glu Lys Met Gly Arg Asn lie Arg Asp Gly lie lie Lys Ala 35 40 45 Gly Pro Ala lie Glu Val Leu Gly Ala Ala Lys Ala lie Gly Lys 50 55 60 <210> 78 <211> 293 <212> DNA <213> Manduca sexta <220> <221> CDS <222> (1) ... (279) <400> 78 atg aat tta tta tat ttc ctt tcg ttt ctg ggc tgt att act ctc tgc 48 Met Asn Leu Leu Tyr Phe Leu Ser Phe Leu Gly Cys lie Thr Leu Cys 1 5 10 15 ttg agt gcc ggt ttg tac aaa cct cct aat aac ata gaa tct gag aac 96 Leu Ser Ala Gly Leu Tyr Lys Pro Pro Asn Asn lie Glu Ser Glu Asn 20 25 30 gaa gtt tac acc gga aat att tgc ttc ttg cca ttg gaa gtt ggg gta 144 Glu Val Tyr Thr Gly Asn lie Cys Phe Leu Pro Leu Glu Val Gly Val 35 40 45 tgc cga gct ctg ttc ttt agg tac gga tac gat cca gcg ata aag gca 192 Cys Arg Ala Leu Phe Phe Arg Tyr Gly Tyr Asp Pro Ala lie Lys Ala 50 55 60 tgc aag gaa ttc atg tac ggc ggt tgc caá ggg aac gct aac aat ttc 240 Cys Lys Glu Phe Met Tyr Gly Gly Cys Gln Gly Asn Ala Asn Asn Phe 65 70 75 80 aag act tta gaa gaa tgc cag gaa gcc tgt gaa gcc taa gtacctggac 289 Lys Thr Leu Glu Glu Cys Gln Glu Ala Cys Glu Ala * 85 90 ttcg 293 <210> 79 <211> 92 <212> PRT <213> Manduca sexta <400> 79 Met Asn Leu Leu Tyr Phe Leu Ser Phe Leu Gly Cys lie Thr Leu Cys 1 5 10 15 Leu Ser Ala Gly Leu Tyr Lys Pro Pro Asn Asn lie Glu Ser Glu Asn 20 25 30 Glu Val Tyr Thr Gly Asn lie Cys Phe Leu Pro Leu Glu Val Gly Val 35 40 45 Cys Arg Ala Leu Phe Phe Arg Tyr Gly Tyr Asp Pro Ala lie Lys Ala 50 55 60 Cys Lys Glu Phe Met Tyr Gly Gly Cys Gln Gly Asn Ala Asn Asn Phe 65 70 75 80 Lys Thr Leu Glu Glu Cys Gln Glu Ala Cys Glu Ala 85 90 <210> 80 <211> 92 <212> PRT <213> Manduca <400> 80 Met Asn Leu Leu Tyr Phe Leu Ser Phe Leu Gly Cys lie Thr Leu Cys 1 5 10 15 Leu Ser Ala Gly Leu Tyr Lys Pro Pro Asn Asn lie Glu Ser Glu Asn 20 25 30 Glu Val Tyr Thr Gly Asn lie Cys Phe Leu Pro Leu Glu Val Gly Val 35 40 45 Cys Arg Ala Leu Phe Phe Arg Tyr Gly Tyr Asp Pro Ala lie Lys Ala 50 55 60 Cys Lys Glu Phe Met Tyr Gly Gly Cys Gln Gly Asn Ala Asn Asn Phe 65 70 75 80 Lys Thr Leu Glu Glu Cys Gln Glu Ala Cys Glu Ala 85 90 <210> 81 <211> 489 <212> DNA <213> Manduca sexta <220> <221> CDS <222> (1) ... (489) <400> 81 atg aaa ttg cta ctg att ttg ggc gtt gcg ctg gtg ttg ctc ttt ggt 48 et Lys Leu Leu Leu lie Leu Gly Val Ala Leu Val Leu Leu Phe Gly 1 5 10 15 gag tcc tta ggt cag cga ttt age cag ect acg ttc aag cta ect caá 96 Glu Ser Leu Gly Gln Arg Phe Ser Gln Pro Thr Phe Lys Leu Pro Gln 20 25 30 ggt aga ttg acá ctt agt cga aaa ttt agg gag tcc ggc aat gag cea 144 Gly Arg Leu Thr Leu Ser Arg Lys Phe Arg Glu Ser Gly Asn Glu Pro 35 40 45 cta tgg ttg tat caá ggc gac aac ata cea aag gca cea tea act gca 192 Leu Trp Leu Tyr Gln Gly Asp Asn lie Pro Lys Ala Pro Ser Thr Ala 50 55 60 gaa cat ecc ttc ctt ccg tet ata ata ga. gafc gtg aag ttc aat cea 240 Glu His Pro Phe Leu Pro Ser lie lie Asp Asp Val Lys Phe Asn Pro 65 70 75 80 gat aga aga tac gcg cgc agt ctt ggt acá cea gac cat tat cat gga 288 Asp Arg Arg Tyr Ala Arg Ser Leu Gly Thr Pro Asp His Tyr His Gly 85 90 95 ggc cgt cat tcc ata tet cga ggt age cag age acá gga ccg act cat 336 Gly Arg His Ser lie Ser Arg Gly Ser Gln Ser Thr Gly Pro Thr His 100 105 110 ccg ggc tat aat cgc cgt aac gee agg agt gtc gaa acg tta gct age 384 Pro Gly Tyr Asn Arg Arg Asn Ala Arg Ser Val Glu Thr Leu Ala Ser 115 120 125 caá gaa cat cta age age ctg ccg atg gat age caá gag act tta ctg 432 Gln Glu His Leu Ser Ser Leu Pro Met Asp Ser Gln Glu Thr Leu Leu 130 135 140 cgt ggc acc agg age gtg gaa acá cta gct agt cag gaa cat cta age 480 Arg Gly Thr Arg Ser Val Glu Thr Leu Ala Ser Gln Glu His Leu Ser 145 150 155 160 age ctg ccg 489 Ser Leu Pro <210> 82 <211> 163 <212> PRT <213> Manduca sexta <400> 82 Met Lys Leu Leu Leu lie Leu Gly Val Ala Leu Val Leu Leu Phe Gly 1 5 10 15 Glu Ser Leu Gly Gln Arg Phe Ser Gln Pro Thr Phe Lys Leu Pro Gln 20 25 30 Gly Arg Leu Thx Leu Ser Arg Lys Phe Arg Glu Ser Gly Asn Glu Pro 35 40 45 Leu Trp Leu Tyr Gln Gly Asp Asn lie Pro Lys Ala Pro Ser Thr Ala 50 55 60 Glu His Pro Phe Leu Pro Ser lie lie Asp Asp Val Lys Phe Asn Pro 65 70 75 80 Asp Arg Arg Tyr Ala Arg Ser Leu Gly Thr Pro Asp His Tyr His Gly 85 90 95 Gly Arg His Ser lie Ser Arg Gly Ser Gln Ser Thr Gly Pro Thr His 100 105 110 Pro Gly Tyr Asn Arg Arg Asn Ala Arg Ser Val Glu Thr Leu Ala Ser 115 120 125 Gln Glu His Leu Ser Ser Leu Pro Met Asp Ser Gln Glu Thr Leu Leu 130 135 140 Arg Gly Thr Arg Ser Val Glu Thr Leu Ala Ser Gln Glu His Leu Ser 145 150 155 160 Ser Leu Pro <210> 83 <211> 165 <212> PRT <213> Manduca sexta <400> 83 Met Lys Leu Leu Leu lie leu Gly Val Ala Leu Val Leu Leu Phe Gly 1 5 10 15 Glu Ser Leu Gly Gln Arg Phe Ser Gln Pro Thr Phe Lys Leu Pro Gln 20 25 30 Gly Arg Leu Thr Leu Ser Arg Lys Phe Arg Glu Ser Gly Asn Glu Pro 35 40 45 Leu Trp Leu Tyr Gln Gly Asp Asn lie Pro Lys Ala Pro Ser Thr Ala 50 55 60 Glu His Pro Phe Leu Pro Ser lie lie Asp Asp Val Lys Phe Asn Pro 65 0 75 80 Asp Arg Arg Tyr Ala Arg Ser Leu Gly Thr Pro Asp His Tyr His Gly 85 90 95 Gly Arg His Ser lie Ser Arg Gly Ser Gln Ser Thr Gly Pro Thr His 100 105 110 Pro Gly Tyr Asn Arg Arg Asn Ala Arg Ser Val Glu Thr Leu Ala Ser 115 120 125 Gln Glu Hls Leu Ser Ser Leu Pro Met Asp Ser Gln Glu Thr Leu Leu 130 135 140 Arg Gly Thr Arg Ser Val Glu Thr Leu Ala Ser Gln Glu His Leu Ser 145 150 155 160 Ser Leu Pro Met Asp 165 <210> 84 <211> 475 <212> DNA <213> Manduca sexta <220> <221> CDS . <222> (2) ... (475) <221> aspecto_misc <222> 12, 13, 14 <223> n = A, T, C o G <400> 84 g ccg ctc tag ann ngt gga tcc ccc ggg ctg cag gca aaa tcc aat ttc 49 Pro Leu * Xaa Xaa Gly Ser Pro Gly Leu Gln Ala Lys Ser Asn Phe 1 5 10 15 gcg ctt gga gtt ate gca att ctg ta ata acá gaa tcc aac tgt tgg 97 Ala Leu Gly Val lie Ala lie Leu Leu lie Thr Glu Ser Asn Cys Trp 20 25 30 aga agt gat ctc ect ate ata ctc ccg act tat aaa ect ect cgt acc 145 Arg Ser Asp Leu Pro lie lie leu Pro Thr Tyr Lys Pro Pro Arg Thr 35 40 45 ccg age acc att att ate agg acá gta cgc gaa gee gga gat aaa ceg 193 Pro Ser Thr lie lie lie Arg Thr Val Arg Glu Ala Gly Asp Lys Pro 50 55 60 tta tgg etc tac caa gga gac gat cae ccg caa gee cct tea age ggc 241 Leu Trp Leu Tyr Gln Gly Asp Asp His Pro Gln Ala Pro Ser Ser Gly 65 70 75 gat cat cct gta ctg ccc tcg att ata gac gat gtg caa ctg gat ccc 289 Asp His Pro Val Leu Pro Ser lie lie Asp Asp Val Gln Leu Asp Pro 80 85 90 95 aac aga cgg tac gcg cgt agt gtg age gag ccg tcg tet cag gat cat 337 Asn Arg Arg Tyr Ala Arg Ser Val Ser Glu Pro Ser Ser Gln Asp His 100 105 110 cae gaa cgc ttt gtg agg age ttc gac tec cgc age age aag cat cae 385 His Glu Arg Phe Val Arg Ser Phe Asp Ser Arg Ser Ser Lys His His 115 120 125 ggc ggc agt cae tec acg tec age ggc age cgc gac act gga gct act 433 Gly Gly Ser His Ser Thr Ser Ser Gly Ser Arg Asp Thr Gly Ala Thr 130 135 140 cat ccg gga tac aat cgc cgt aac tea taa tet gtg gtt taa 475 His Pro Gly Tyr Asn Arg Arg Asn Ser * Ser Val Val * 145 150 155 <210> 85 <211> 141 <212> PRT <213> Manduca <400> 85 Lys Ser Asn Phe Ala Leu Gly Val lie Ala lie Leu Leu lie Thr Glu 1 5 10 15 Ser As Cys Trp Arg Ser Asp Leu Pro lie lie Leu Pro Thr Tyr Lys 20 25 30 Pro Pro Arg Thr Pro Ser Thr lie lie lie Arg Thr Val Arg Glu Ala 35 40 45 Gly Asp Lys Pro Leu Trp Leu Tyr Gln Gly Asp Asp His Pro Gln Ala 50 55 60 Pro Ser Ser Gly Asp His Pro Val Leu Pro Ser lie lie Asp Asp Val 65 70 75 80 Gln Leu Asp Pro Asn Arg Arg Tyr Ala Arg Ser Val Ser Glu Pro Ser 85 90 95 Ser Gln Asp His His Glu Arg Phe Val Arg Ser Phe Asp Ser Arg Ser 100 105 110 Ser Lys His His Gly Gly Ser His Ser Thr Ser Ser Gly Ser Arg Asp 115 120 125 Thr Gly Ala Thr His Pro Gly Tyr Asn Arg Arg Asn Ser 130 135 140 <210> 86 <211> 155 <212> PRT <213> Manduca sexta <220> <221> VARIANTE <222> 3, 4 <223> Xaa = Cualquier aminoácido <400> 86 Pro Leu Xaa Xaa Gly Ser Pro Gly Leu Gln Ala Lys Ser Asn Phe Ala 1 5 10 15 Leu Gly Val lie Ala lie leu Leu lie Thr Glu Ser Asn Cys Trp Arg 20 25 30 Ser Asp Leu Pro lie líe Leu Pro Thr Tyr Lys Pro Pro Arg Thr Pro 35 40 45 Ser Thr lie lie lie Arg Thr Val Arg Glu Ala Gly Asp Lys Pro Leu 50 55 60 Trp Leu Tyr Gln Gly Asp Asp His Pro Gln Ala Pro Ser Ser Gly Asp 65 70 75 80 His Pro Val Leu Pro Ser lie lie Asp Asp Val Gln Leu Asp Pro Asn 85 90 95 Arg Arg Tyr Ala Arg Ser Val Ser Glu Pro Ser Ser Gln Asp His His 100 105 110 Glu Arg Phe Val Arg Ser Phe Asp Ser Arg Ser Ser Lys His His Gly 115 120 125 Gly Ser His Ser Thr Ser Ser Gly Ser Arg Asp Thr Gly Ala Thr His 130 135 140 Pro Gl Tyr Asn Arg Arg Asn Ser Ser Val Val 145 150 155 <210> 87 <211> 273 <212> DNA <213> Manduca sexta <220> <221> CDS <222> (1) ... (204) <400> 87 atg aaa ttc tcc cgt gtt tta ttc ttc gtc ttc gct tgc ttc gcc gca 48 Met Lys Phe Ser Arg Val Leu Phe Phe Val Phe Ala Cys Phe Ala Ala 1 5 10 15 ttt acá gta act gcg gcc aag cea tgg gac ttc tta aag gag ctg gag Phe Thr Val Thr Ala Ala Lys Pro Trp Asp Phe Leu Lys Glu Leu Glu 20 25 30 ggt gca ggt caá agg att cgt gac gct ate ate age gcg cag ceg gcg 144 Gly Ala Gly Gln Arg lie Arg Asp Ala lie lie Ser Ala Gln Pro Ala 35 40 45 gtg gaa acc ate gcg cag gca acc gcc att ttc aaa gga caá tea aaa 192 Val Glu Thr lie Ala Gln Ala Thr Ala lie Phe Lys Gly Gln Ser Lys 50 55 60 gaa gaa gat teta tfcgtgtcatt acagtattac atatttaagg atataatttt 244 Glu Glu Asp * 65 attttgacaa tatatteatt taattcaac 273 <210> 88 <211> 67 <212> PRT <213> Manduca sexta <400> 88 Met Lys Phe Ser Arg Val Leu Phe Phe Val Phe Ala Cys Phe Ala Ala 1 5 10 15 Phe Thr Val Thr Ala Ala Lys Pro Trp Asp Phe leu Lys Glu leu Glu 20 25 30 Gly Ala Gly Gln Arg He Arg Asp Ala He He Ser Ala Gln Pro Ala 35 40 45 Val Glu Thr He Ala Gln Ala Thr Ala He Phe L s Gly Gln Ser Lys 50 55 60 Glu Glu Asp 65 <210> 89 <211> 60 <212> PRT <213> Manduca sexta <400> 89 Met Lys Phe Ser Arg Val Leu Phe Phe Val Phe Ala Cys Phe Ala Ala 1 5 10 15 Phe Thr Val Thr Ala Ala lys Pro Trp Asp Phe Leu lys Glu leu Glu 20 25 30 Gly Ala Gly Gln Arg He Arg Asp Ala He He Ser Ala Gln Pro Ala 35 40 45 Val Glu Thr He Ala Gln Ala Thr Ala He Phe Lys 50 55 60 <210> 90 <211> 418 <212> DNA <213> Peregrinus ma <220> <221> CDS <222> (1) ... (192) <221> aspecto mise <222> 259, 305, 330, 340, 358, 359, 372, 380, 397, 417 <223> n = A, T, C o G <400> 90 atg aag ttc tcc cga gtg ttc ctg ttc gtg ttc gcg tgc ctg gtc gcg 48 Met Lys Phe Ser Arg Val Phe Leu Phe Val Phe Ala Cys Leu Val Ala 1 5 10 15 ctg age gcc gtc age gcc gcg cca gag ccg agg tgg aag gtc ttc aag 96 Leu Ser Ala Val Ser Ala Ala Pro Glu Pro Arg Trp Lys Val Phe Lys 20 25 30 aag att gag aag atg ggc cgc aac ate aga gac ggt ate gtc aag gca 144 Lys lie Glu Lys Met Gly Arg Asn lie Arg Asp Gly lie Val Lys Ala 35 40 45 ggt ect gct gtc gag gtg ttg ggt gca gcc aaa gcg ctg ggg aag taa 192 Gly Pro Ala Val Glu Val Leu Gly Ala Ala Lys Ala Leu Gly Lys * 50 55 60 teageagtat catcttcatc ateatcaett aatatcatca caagtettat ggtgtgacca 252 gcatatnctg gtgaccaaca acccctttaa attcctaaac ccaccaaaaa ggncgggtaa 312 cgcacttgtt acgcctcngg tgttttgnaa tgtccaaggg ggtggnnggc gattgettan 372 ccatcaanaa tgatteette tgatncgttt aaccggtaat ttecna 418 <210> 91 <211> 63 <212> PRT <213> Pere.grinus maidis <400> 91 Met Lys Phe Ser Arg Val Phe Leu Phe Val Phe Ala Cys Leu Val Ala 1 5 10 15 Leu Ser Ala al Ser Ala Ala Pro Glu Pro Arg Trp Lys Val Phe Lys 20 25 30 Lys lie Glu Lys Met Gly Arg Asn lie Arg Asp Gly lie Val Lys Ala 35 40 45 Gly Pro Ala Val Glu Val Leu Gly Ala Ala L s Ala Leu Gly Lys 50 55 60 <210> 92 <211> 63 <212> PRT <213> Peregrinus maidis <400> 92 Met Lys Phe Ser Arg Val Phe Leu Phe Val Phe Ala Cys Leu Val Ala 1 5 10 15 Leu Ser Ala Val Ser Ala Ala Pro Glu Pro Arg Trp Lys Val Phe Lys 20 25 30 lys lie Glu Lys Met Gly Arg Asn lie Arg Asp Gly lie Val Lys Ala 35 40 45 Gly Pro Ala Val Glu Val Leu Gly Ala Ala Lys Ala Leu Gly Lys 50 55 60 <210> 93 <211> 370 <212> DNA <213> Peregrinus maidis <220> <221> CDS <222> (1) ... (225) <400> 93 atg aag ttc tcc cga gtg ttc ctg ttc gtg ttc gcg tgc ctg gtc gcg Met Lys Phe Ser Arg Val Phe Leu Phe Val Phe Ala Cys Leu Val Ala 1 5 10 15 ctg age gcc gtc age gcc gcg cea. gag ccg agg tgg aag gtc ttc aag Leu Ser Ala Val Ser Ala Ala Pro Glu Pro Arg Trp Lys Val Phe Lys 20 25 30 aag att gag aag atg ggc cgc aac ate aga gac ggt ate gtc aag gca Lys lie Glu Lys Met Gly Arg Asn lie Arg Asp Gly lie Val Lys Ala 35 40 45 ggt ect gct gtc gag gtg ttg ggt gca age ca ggc gct ggg gaa gta Gly Pro Ala Val Glu Val Leu Gly Ala Ser Gln Gly Ala Gly Glu Val 50 55 60 ate age agt ate ate ttc ate ate ate act taa tatcatcaea gtcttatggt 245 lie Ser Ser lie lie Phe lie lie lie Thr * 65 70 gtgaccagca tatctggtga caacaaccct taaattccta acccaccaaa agggcggtaa 305 cgcacttgtt acgcctcggg tgtttgaaat gtccaagggg tgggcggcga ttgettacca 365 acaag 370 <210> 94 <211> 74 <212> PRT <213> Peregrinus mai <400> 94 Met Lys Phe Ser Arg Val Phe Leu Phe Val Phe Ala Cys Leu Val Ala 1 5 10 15 Leu Ser Ala Val Ser Ala Ala Pro Glu Pro Arg Trp Lys Val Phe Lys 20 25 30 Lys lie Glu Lys Met Gly Arg Asn lie Arg Asp Gly lie Val Lys Ala 35 40 45 Gly Pro Ala Val Glu Val Leu Gly Ala Ser Gln Gly Ala Gly Glu Val 50 55 60 lie Ser Ser lie lie Phe lie lie lie Thr 65 70 <210> 95 <211> 63 <212> PRT <213> Peregrinus maid <400> 95 Met Lys Phe Ser Arg Val Phe Leu Phe Val Phe Ala Cys Leu Val Ala 1 5 10 15 Leu Ser Ala Val Ser Ala Ala Pro Glu Pro Arg Trp Lys Val Phe Lys 20 25 30 Lys lie Glu Lys Met Gly Arg Asn lie Arg Asp Gly lie Val Lys Ala 35 40 45 Gly Pro Ala Val Glu Val Leu Gly Ala Ser Gln Gly Ala Gly Glu 50 55 60 <210> 96 <211> 12 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Secuencia de péptidos de Magl digerida por Lys-C <400> 96 Val Gly Ala Ser Leu Gly Ala Ala His Thr Asp Phe 1 5 10 <210> 97 <211> 17 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Secuencia de péptidos de Magl digerida por Lys- <400> 97 Asn Asn lie Phe Ser Ala lie Gly Gly Ala Asp Phe Asn Ala Asn His 1 5 10 15 Lys <210> 98 <211> 12 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Secuencia de péptidos de Magl digerida por Lys-C <400> 98 Lys Phe Asp Thr Pro Phe Met Arg Ser Gly Trp Glu 1 5 10 <210> 99 <211> 12 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Secuencia de péptidos de Magl digerida por Lys-C <400> 99 Leu Asn Leu Phe His Asn Asn Asn His Asp Leu Thr 1 5 10 <210> 100 <211> 358 <212> DNA <213> Agrotis ipsil <220> <223> CDS <222> (1) ... (195) <221> aspecto_misc <222> (0) ... (0) <223> Fus6 <400> 100 atg gcc gcc aac aag act ate ttc ctt ctc gtg ctg atc gcc ttc gca 48 Met Ala Ala Asn Lys Thr lie Phe Leu Leu Val Leu lie Ala Phe Ala 1 5 10 15 atg gtg atg gtg acc gtg gag gcc gtc cgt gtg gga ccc tgc gac cag 96 Met Val Met Val Thr Val Glu Ala Val Arg Val Gly Pro Cys Asp Gln 20 25 30 gtc tgc age cgc atc gat gct gag aag aac gag tgc tgc aga gct cac 144 Val Cys Ser Arg lie Asp Ala Glu Lys Asn Glu Cys Cys Arg Ala His 35 40 45 ggc tac tec gga tac age age tgt aga tat ggg cag atg caá tgt tac 192 Gly Tyr Ser Gly Tyr Ser Ser Cys Arg Tyr Gly Gln Met Gln Cys Tyr 50 55 60 tga cggaactcca caagageaac agttttctaa ccactttttc aactttgtcc 245 agaggtaatc aagattgcct catcacttca aaggttcttt tttgtcattt attaacttgt 305 tttcaaaatt aaccgattaa attaattaat ttaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa 358 <210> 101 <211> 64 <212> PRT <213> Agrotis Ípsilon <400> 101 Met Ala Ala Asn Lys Thr lie Phe Leu Leu Val Leu lie Ala Phe Ala 1 5 10 15 Met Val Met Val Thr Val Glu Ala Val Arg Val Gly Pro Cys Asp Gln 20 25 30 Val Cys Ser Arg lie Asp Ala Glu Lys Asn Glu Cys Cys Arg Ala His 35 40 45 Gly Tyr Ser Gly Tyr Ser Ser Cys Arg Tyr Gly Gln Met Gln Cys Tyr 50 55 60 <210> 102 <211> 123 <212> DNA <213> Agrotis Ípsilon <220> <221> CDS <222> (1) ... (123) <221> aspecto_misc <222> (0) ... (0) <223> Fus6 <400> 102 gtc cgt gtg gga ccc tgc gac cag gtc tgc age cgc atc gat gct gag 48 Val Arg Val Gly Pro Cys Asp Gln Val Cys Ser Arg lie Asp Ala Glu 1 5 10 15 aag aac gag tgc tgc aga gct cae ggc tac tcc gga tac age age tgt 96 Lys Asn Glu Cys Cys Arg Ala His Gly Tyr Ser Gly Tyr Ser Ser Cys 20 25 30 aga tat ggg cag atg caá tgt tac tga 123 Arg Tyr Gly Gln Met Gln Cys Tyr * 35 40 <210> 103 <21l> 40 <212> PRT <213> Agrotis Ípsilon <400> 103 Val Arg Val Gly Pro Cys Asp Gln Val Cys Ser Arg lie Asp Ala Glu 1 5 10 15 Lys Asn Glu Cys Cys Arg Ala Hls Gly Tyr Ser Gly Tyr Ser Ser Cys 20 25 30 Arg Tyr Gly Gln Met Gln Cys Tyr 35 40 <210> 104 <211> 387 <212> DNA <213> Agrotis ípsilon <220> <22L> CDS <222> (1) ... (195) <221> aspecto_misc <222> (0) ... (0) <223> Fus7 <400> 104 atg gtt gcc aac aag act ate ctc ctt ctc gtg ctg ate gcc ttc gca 48 Met Val Ala Asn lys Thr lie Leu Leu Leu Val Leu lie Ala Phe Ala 1 5 10 15 atg gtg atg gtg acc gtg gaa gcc gtc cat gtg gga ccc tgc gac cag 96 Met Val Met Val Thr Val Glu Ala Val His Val Gly Pro Cys Asp Gln 20 25 30 gtc tgc age cgc atc gac gct gag aag gac gag tgc tgc aga gct cae 144 Val Cys Ser A g lie Asp Ala Glu Lys Asp Glu Cys Cys Arg Ala His 35 40 45 ggc cae tec ggc tac age age tgc aga. "t c gga cag atg caá tgt tac 192 Gly His Ser Gly Tyr Ser Ser Cys Arg Tyr Gly Gln Met Gln Cys Tyr 50 55 60 tga cggtactccg caacaacaac ggtactatag tggagctatt gtgtaacttt 245 tecaaataca tgtgaaagtt aactgtgata tttttaagtt cctttacttt tgaattcggc 305 atgtgattaa gttattgttt aataaaagga attatttatg aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 365 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aa 387 <210> 105 <211> 64 <212> PRT <213> Agrotis Ípsilon <400> 105 Met Val Ala Asn Lys Thr lie Leu Leu Leu Val Leu lie Ala Phe Ala 1 5 10 15 Met Val Met Val Thr Val Glu Ala Val His Val Gly Pro Cys Asp Gln 20 25 30 Val Cys Ser Arg lie Asp Ala Glu Lys Asp Glu Cys Cys Arg Ala His 35 40 45 Gly His Ser Gly Tyr Ser Ser Cys Arg Tyr Gly Gln Met Gln Cys Tyr 50 55 60 <210> 106 <211> 123 <212> DNA <213> Agrotis Ípsilon <220> <221> CDS <222> (1) ... (123) <221> aspecto_misc <222> (0) ... (0) <223> Fus7 <400> 106 gtc cat gtg gga ccc tgc gac cag gtc fcgc age cgc atc gac gct gag 8 Val His Val Gly Pro Cys Asp Gln Val Cys Ser Arg lie Asp Ala Glu 1 5 10 15 aag gac gag tgc tgc aga gct cae ggc cae tcc ggc tac age age tgc 96 Lys Asp Glu Cys Cys Arg Ala His Gly His Ser Gly Tyr Ser Ser Cys 20 2 30 aga tac gga cag atg caá tgt tac tga 123 Arg Tyr Gly Gln Met Gln Cys Tyr * 35 40 <210> 107 <211> 40 <212> PRT <213> Agrotis Ípsilon <400> 107 Val His Val Gly Pro Cys Asp Gln Val Cys Ser Arg lie Asp Ala Glu 1 5 10 15 Lys Asp Glu Cys Cys Arg Ala His Gly His Ser Gly Tyr Ser Ser Cys 20 25 30 Arg Tyr Gly Gln Met Gln Cys Tyr 35 40 <210> 108 <211> 361 <212> DNA <213> Agrotis Ípsilon <220> <221> CDS <222> (1) ... (195) <221> aspecto_misc <222> (0) ... (0) <223> Fus8 <221> aspecto_misc <222> 327, 328, 330, 331, 332, 333 <223> n = A, T, C o G <400> 108 atg gtt gcc aac aag acc ate ttc ctt ctc gtg ctg ate gec ttc gca 48 Met Val Ala Asn Lys Thr lie Phe Leu Leu Val Leu lie Ala Phe Ala 1 5 10 15 atg gtg atg gtg acc gtg gag gcc gtc cgt gtg gga ecc tgc gac cag 96 Met Val Met Val Thr Val Glu Ala Val Arg Val Gly Bro Cys Asp Gln 20 25 30 gtc tgc age cgc ate gac gct gag aag gac gag tgc tgc aga gct cae 144 Val Cys Ser Arg lie Asp Ala Glu Lys Asp Glu Cys Cys Arg Ala His 35 40 45 ggc cae tec ggc tac age age tgc aga tac gga cag atg caá tgt tac 192 Gly His Ser Gly Tyr Ser Ser Cys Arg Tyr Gly Gln Met Gln Cys Tyr 50 55 60 tga cggaactccg caacgacaac ggtactatag tggagctact gtgtaacttc 245 tctaaatttc tattaettte gaattcggca tgtgataaag ttattgttta ataaaaggaa 305 ttatttataa aaaaaaaaaa annnnnnnaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaa 361 <210> 109 <211> 64 <212> PRT <213> Agrotis Ípsilon <400> 109 Met Val Ala Asn Lys Thr lie Phe Leu Leu Val Leu lie Ala Phe Ala 1 5 10 15 Met Val Met Val Thr Val Glu Ala Val Arg Val Gly Pro Cys Asp Gln 20 25 30 Val Cys Ser Arg lie Asp Ala Glu Lys Asp Glu Cys Cys Arg Ala His 35 40 45 Gly His Ser Gly Tyr Ser Ser Cys Arg Tyr Gly Gln Met Gln Cys Tyr 50 55 60 <210> 110 <211> 123 <212> DNA <213> Agrotis Ípsilon <220> <221> CDS <222> (1) ... (123) <221> aspecto_misc <222> (0) ... (0) <223> Fus8 <400> 110 gtc cgt gtg gga ccc tgc gac cag gtc tgc age cgc ate gac gct gag 48 Val Arg Val Gly Pro Cys Asp Gln Val Cys Ser Arg lie Asp Ala Glu 1 5 10 15 aag gac gag tgc tgc aga gct cae ggc cac tcc ggc tac age age tgc 96 Lys Asp Glu Cys Cys Arg Ala His Gly His Ser Gly Tyr Ser Ser Cys 20 25 30 aga tac gga cag atg caá tgt tac tga 123 Arg Tyr Gly Gln Met Gln Cys Tyr * 35 40 <210> 111 <211> 40 <212> PRT <213> Agrotis Ípsilon <400> 111 Val Arg Val Gly Pro Cys Asp Gln Val Cys Ser Arg lie Asp Ala Glu 1 5 10 15 lys Asp Glu Cys Cys Arg Ala His Gly His Ser Gly Tyr Ser Ser Cys 20 25 30 Arg Tyr Gly Gln Met Gln Cys Tyr 35 40 <210> 112 <211> 466 <212> DNA <213> Agrotis Ípsilon <220> <221> CDS <222> (1) ... (123) <221> aspecto_misc <222> (0) ... (0) <223> Fus9 <400> 112 atg aac aag caa ctg tta gtc gtc ctt ttg gcc atg tgc ctt gtc agc 48 Met Asn Lys Gln Leu Leu Val Val Leu Leu Ala Met Cys Leu Val Ser 1 5 10 15 gct cae gct ttc gtg aaa cgc gat gtc cea acá. aat gca gac tta cag 96 Ala His Ala Phe Val Lys Arg Asp Val Pro Thr Asn Ala Asp Leu Gln 20 25 30 gga caa cta gaa gcc ttg aga aac acc ctt aat cag tta acc aac tca 144 Gly Gln Leu Glu Ala Leu Arg Asn Thr Leu Asn Gln Leu Thr Asn Ser 35 40 45 gtc att aat caa act tca act gtt ttc gac ccg gaa gaa att aag aag 192 Val lie Asn Gln Thr Ser Thr Val Phe Asp Pro Glu Glu lie Lys Lys 50 55 60 aat ate gat aaa gcc att gac ac gct age aaa gcc att gat agt tta 240 Asn lie Asp Lys Ala lie Asp Thr Ala Ser Lys Ala lie Asp Ser Leu 65 70 75 80 gtg aaa cea caa gga gga gaa gcc cag ecc gct g c cag cea gca gcc 288 Val Lys Pro Gln Gly Gly Glu Ala Gln Ero Ala Ala Gln Pro Ala Ala 85 90 95 taa ttttatgttt aagactgatt tttatgacca cataaaatac ctcaaataaa 341 acatcaaaat taatctgctt cttcctatct ttcagaaaac taaattaaat aaataattta 401 tacgtctgct taaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 461 aaaaa 466 <210> 113 <211> 96 <212> PRT <213> Agrotis ípsilon " <400> 113 Met Asn Lys Gln Leu Leu Val Val Leu Leu Ala Met Cys Leu Val Ser 1 5 10 15 Ala His Ala Phe Val Lys Arg Asp Val Pro Thr Asn Ala Asp Leu Gln 20 25 30 Gly Gln Leu Glu Ala Leu Arg Asn Thr Leu Asn Gln Leu Thr Asn Ser 35 40 45 Val lie Asn Gln Thr Ser Thr Val Phe Asp Pro Glu Glu lie Lys Lys 50 55 60 Asn lie Asp Lys Ala lie Asp Thr Ala Ser Lys Ala lie Asp Ser Leu 65 70 75 80 Val Lys Pro Gln Gly Gly Glu Ala Gln Pro Ala Ala Gln Pro Ala Ala 85 90 95 <210> 114" <211> 222 <212> DNA <213> Agrotis ípsilon <220> <221> CDS <222> (1) ... (222) <221> aspecto_misc <222> (0) ... (0) <223> Fus9 <400> 114 gat gtc cea acá aat gca gac tta cag gga caá cta gaa gee ttg aga Asp Val Pro Thr Asn Ala Asp Leu Gln Gly Gln Leu Glu Ala Leu Arg 1 5 10 15 aac acc ctt aat cag tta acc aac tea gtc att aat caá act tea act Asn Thr Leu Asn Gln Leu Thr Asn Ser Val lie Asn Gln Thr Ser Thr 20 25 30 gtt ttc gac ceg gaa gaa att aag aag aat ate gat aaa gee att gac 144 Val Phe Asp Pro Glu Glu lie Lys Lys Asn lie Asp Lys Ala lie Asp 35 40 45 acá gct age aaa gee att gat agt tta gtg aaa cea caá gga gga gaa 192 Thr Ala Ser Lys Ala lie Asp Ser Leu Val Lys Pro Gln Gly Gly Glu 50 55 60 gee cag ecc gct gee cag cea gca gee taa 222 Ala Gln Pro Ala Ala Gln Pro Ala Ala * 65 70 <210> 115 <211> 73 <212> PRT <213> Agrotis ípsilon <400> 115 Asp Val Pro Thr Asn Ala Asp Leu Gln Gly Gln Leu Glu Ala Leu Arg 1 5 10 15 Asn Thr Leu Asn Gln Leu Thr Asn Ser Val lie Asn Gln Thr Ser Thr 20 25 30 Val Phe Asp Pro Glu Glu lie Lys Lys Asn lie Asp Lys Ala lie Asp 35 40 45 Thr Ala Ser Lys Ala lie Asp Ser Leu Val Lys Pro Gln Gly Gly Glu 50 55 60 Ala Gln Pro Ala Ala Gln Pro Ala Ala 65 70 <210> 116 <211> .372 <212> DNA <213> Agrotis Ípsilon <220> <221> CDS <222> (1) ... (222) <221> aspecto_misc <222> (0) ... (0) <223> FuslO <221> aspecto_misc <222> 242 <223> n = A, T, C o G <400> 116 atg tcg aaa age tac cag tcc gtg ttg ttg ttg gtg tgc ctc acg ttc 48 Met Ser Lys Ser Tyr Gln Ser Val Leu Leu Leu Val Cys Leu Thr Phe 1 5 10 15 ctg gtg ate gtc tcg tet ceg cag aat gct gtc cag gct gat gta cae Leu Val lie Val Ser Ser Pro Gln Asn Ala Val Gln Ala Asp Val His 20 25 30 ate ggc age tgc gtg tgg gga gct gtt gac tac act tcg aac tgc aac lie Gly Ser Cys Val Trp Gly Ala Val Asp Tyr Thr Ser Asn Cys Asn 35 40 45 aat gaa tgc aag cgg cgt gga tac aaa gga gga cat tgt gga age ttc Asn Glu Cys Lys Arg Arg Gly Tyr Lys Gly Gly His Cys Gly Ser Phe 50 55 60 gct aat gtt aat tgt tgg tgt gaa caá tag gacaacaatt taacattagn 242 Ala Asn Val Asn Cys Trp Cys Glu Gln * 65 70 acactaaaca aaccatcaaa atttg agac gtggacacct ttcatagttt ttataccttg 302 tcactatggt ggatggacta tcaaaatggt tcatgatttt gaaatttgta tctttaatct 362 cggactgatg 372 <210> 117 <211> 73 <212> PRT <213> Agrotis Ípsilon <400> 117 Met Ser Lys Ser Tyr Gln Ser Val Leu Leu Leu Val Cys Leu Thr Phe 1 5 10 15 Leu Val lie Val Ser Ser Pro Gln Asn Ala Val Gln Ala Asp Val His 20 25 30 lie Gly Ser Cys Val Trp Gly Ala Val Asp Tyr Thr' Ser Asn Cys Asn 35 40 45 Asn Glu Cys Lys Arg Arg Gly Tyr Lys Gly Gly Hls Cys Gly 3er Phe 50 55 60 Ala Asn Val Asn Cys Trp Cys Glu Gln 65 70 <210> 118 <211> 135 <212> DNA <213> Agrotis Ípsilon <220> <221> CDS <222> (1) ... (135) <221> aspecto_misc <222> (0) ... (0) <223> FuslO <400> 118 gat gta cae ate ggc age tgc gtg tgg gga gct gtt gac tac act teg Asp Val His lie Gly Ser Cys Val Trp Gly Ala Val Asp Tyr Thr Ser 1 5 10 15 aac tgc aac aat gaa tgc aag cgg cgt gga tac aaa gga gga cat tgt Asn Cys Asn Asn Glu Cys Lys Arg Arg Gly Tyr Lys Gly Gly His Cys 20 25 30 gga age ttc gct aat gtt aat tgt tgg tgt gaa caá tag Gly Ser Phe Ala Asn Val Asn Cys Trp Cys Glu Gln * 35 40 <210> 119 <211> 44 <212> PRT <213> Agrotis ípsilon <400> 119 Asp Val His lie Gly Ser Cys Val Trp Gly Ala Val Asp Tyr Thr Ser 1 5 10 15 Asn Cys Asn Asn Glu Cys Lys rg Arg Gly Tyr Lys Gly Gly His Cys 20 25 30 Gly Ser Phe Ala Asn Val Asn Cys Tr Cys Glu Gln 35 40 <210> 120 <211> 243 <212> DNA <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia de nucleótidos con codón de selección que codifica a ???-Fusl. Codón de selección para Manduca sexta <221> CDS <222> (1) ... (243) <221> sig_péptido <222> (1) ... (72) <223> Secuencia de señal BAñ. <221> aspecto_misc <222> (0) ... (0) <223> BAA-Fusl <400> 120 atg gca aac aag cat ttg age ctg age ctc ttt ttg gtt ctg cta gga Met Ala Asn Lys His Leu Ser Leu Ser Leu Phe Leu Val Leu Leu Gly -20 -15 -10 ctc tea gee teg ctt gct agt ggt gaa gac ecc aga tgfc tcc caá ceg Leu Ser Ala Ser Leu Ala Ser Gly Glu Asp Pro Arg Cys Ser Gln Pro -5 1 5 ate gct tcc ggc gtg tgc ttc ggc aac att gag aag ttc gga tat gat lie Ala Ser Gly Val Cys Phe Gly Asn lie Glu Lys Phe Gly Tyr Asp 10 15 20 ate gac gag cae aaa tgc gtg cag ttt gta tac ggg ggc tgc ttc ggt 192 lie Asp Glu His Lys Cys Val Gln Phe Val Tyr Gly Gly Cys Phe Gly 25 30 35 40 aat gat aac caá ttc gac tet ctg gag gaa tgc cag gcg gtc tgt ect 240 Asn Asp Asn Gln Phe Asp Ser Leu Glu Glu Cys Gln Ala Val Cys Pro 45 50 55 taa 243 <210> 121 <211> 80 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <221> SEÑAL <223> Secuencia de nucleótidos con codón de selección que codifica a RAA-Fusl . Codón de selección para Manduca sexta <400> 121 Met Ala Asn Lys His Leu Ser Leu Ser Leu Phe Leu Val Leu Leu Gly -20 -15 -10 Leu Ser Ala Ser Leu Ala Ser Gly Glu Asp Pro Arg Cys Ser Gln Pro -5 1 5 lie Ala Ser Gly Val Cys Phe Gly Asn lie Glu Lys Phe Gly Tyr Asp 10 15 20 lie Asp Glu His Lys Cys Val Gln Phe Val Tyr Gly Gly Cys Phe Gly 25 30 35 40 Asn Asp Asn Gln Phe Asp Ser Leu Glu Glu Cys Gln Ala Val Cys Pro 45 50 55 <210> 122 <211> 171 <212> DNA <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia de nucleótidos con codón de selección que codifica a BAA-Fusl. Codón de selección para Manduca sexta <221> aspecto_misc <222> (0) ... (0) <223> Fusl <221> CDS <222> (1) ... (171) <400> 122 gaa gac ccc aga tgt tcc caá ccg ate gct tec ggc gtg tgc ttc ggc Glu Asp Pro Arg Cys Ser Gln Pro lie Ala Ser Gly Val Cys Phe Gly 1 5 10 15 aac att gag aag ttc gga tat gat ate gac gag cae aaa tgc gtg cag Asn lie Glu Lys Phe Gly Tyr Asp lie Asp Glu His Lys Cys Val Gln 20 25 30 ttt gta tac ggg ggc tgc ttc ggt aat gat aac caá ttc gac tct ctg 144 Phe Val Tyr Gly Gly Cys Phe Gly Asn Asp Asn Gln Phe Asp Ser Leu 35 40 45 gag gaa tgc cag gcg gtc tgt cct taa 171 Glu Glu Cys Gln Ala Val Cys Pro * 50 55 <210> 123 <211> 80 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> BAA-Fusl <221> SEÑAL <222> (1) ... (24) <223> ?? <400> 123 Met Ala Asn Lys His Leu Ser Leu Ser Leu Phe Leu Val Leu Leu Gly -20 -15 -10 Leu Ser Ala Ser Leu Ala Ser Gly Glu Asp Pro Arg Cys Ser Gln Pro -5 1 5 lie Ala Ser Gly Val Cys Phe Gly Asn lie Glu Lys Phe Gly Tyr Asp 10 15 20 lie Asp Glu His Lys Cys Val Gln Phe Val Tyr Gly Gly Cys Phe Gly 25 30 35 40 Asn Asp Asn Gln Phe Asp Ser Leu Glu Glu Cys Gln Ala Val Cys Pro 45 50 55 <210> 124 <211> 207 <212> DNA <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia de nucleótidos con codón de selección que codifica a BAA-Fus2. Codón de selección para Streptomyces coelicolor <221> CDS <222> (1) ... (207) <221> sig_péptido <222> (1) ... (75) <223> Secuencia de señal de BAA <221> aspecto_misc <222> (0) ... (0) <223> BAA- us2 <400> 124 atg gcg aac aag cae ctg tcc ctc tcc ctc ttc ctg gtc ctg ctg ggc Met Ala Asn Lys His Leu Ser Leu Ser Leu Phe Leu Val Leu Leu Gly -25 -20 -15 -10 ctc tcg gcg acc ccg tcc gcc cag gcg gac gcc ggc gac gag ccg ctg Leu Ser Ala Thr Pro Ser Ala Gln Ala Asp Ala Gly Asp Glu Pro Leu -5 1 5 tgg ctg tac cag ggc gac gac cae ecc aga gcc ccg age age ggg gac 144 Trp Leu Tyr Gln Gly Asp Asp His Pro Arg Ala Pro Ser Ser Gly Asp 10 15 20 cae ccg gtg ctc ecc tcg ate ate gac gac gtc aag ctg gac ecc aac 192 His Pro Val Leu Pro Ser lie lie Asp Asp Val Lys Leu Asp Pro Asn 25 30 35 cgg cgc tac gcc tga 207 Arg Arg Tyr Ala * 40 <210> 125 <211> 68 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <221> SEÑAL <222> (1) ... (25) <223> Secuencia de nucleótidos con codón de selección que codifica a BAA-Fus2. Codón de selección para Streptomyces coelicolor <400> 125 Met Ala Asn Lys His Leu Ser Leu Ser Leu Phe Leu Val Leu Leu Gly -25 -20 -15 -10 Leu Ser Ala Thr Pro Ser Ala Gln Ala Asp Ala Gly Asp Glu Pro Leu -5 1 5 Trp Leu Tyr Gln Gly Asp Asp His Pro Arg Ala Pro Ser Ser Gly Asp 10 15 20 His Pro Val Leu Pro Ser lie lie Asp Asp Val Lys Leu Asp Pro Asn 25 30 35 Arg Arg Tyr Ala 40 <210> 126 <211> 132 <212> DNA <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia de nucleótidos con codón de selección que codifica a Fus2. Codón de selección para Streptomyces coelicolor <221> CDS <222> (1) ... (132) <221> aspecto mise <222> (0) ... (0) <223> Fus2 <400> 126 gac gcc ggc gac gag ccg ctg tgg ctg tac cag ggc gac gac cae ecc Asp Ala Gly Asp Glu Pro Leu Trp Leu Tyr Gln Gly Asp Asp His Pro 1 5 10 15 aga gcc ccg age age ggg gac cae ccg gtg etc ecc teg ate ate gac Arg Ala Pro Ser Ser Gly Asp His Pro Val Leu Pro Ser lie lie Asp 20 25 30 gac gtc aag ctg gac ecc aac cgg cgc tac gcc tga Asp Val Lys Leu Asp Pro Asn Arg Arg Tyr Ala * 35 40 <210> 127 <211> 68 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia de nucleótidos con codón de selección que codifica a Fus2. Codón de selección para Streptomyces coelicolor <221> SEÑAL <222> (1) ... (25) <221> BAA <400> 127 Met Ala Asn Lys His Leu Ser Leu Ser Leu Phe Leu Val Leu Leu Gly -25 -20 -15 -10 Leu Ser Ala Thr Pro Ser Ala Gln Ala Asp" Ala Gly Asp Glu Pro Leu -5 1 5 Trp Leu Tyr Gln Gly Asp Asp His Pro Arg Ala Pro Ser Ser Gly Asp 10 15 20 His Pro Val Leu Pro Ser lie lie Asp As Val Lys Leu Asp Pro Asn 25 30 35 Arg Arg Tyr Ala 40

Claims (23)

1. NOVEDAD DE LA INVENCION Habiendo descrito la presente invención, se considera como novedad, y por lo tanto se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes:
2. REIVINDICACIONES: 1. Una molécula de ácido nucleico caracterizada porque comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste de: (a) una secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID
3. NO: 1, 3, 5, 9, 11, 13, 15, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39, 42, 45, 48, 51, 54, 57, 60, 63, 66, 69, 72, 75, 78, 81, 84, 87, 90, 93, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, o 126; (b) una secuencia de nucleótidos que codifica a un polipéptido expuesto en SEQ ID NO: 2, 4, 6, 10, 12, 14, 16, 22, 23, 25, 26, 28, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 41, 43, 44, 46, 47, 49, 50, 52, 53, 55, 56, 58, 59, 61, 62, 64, 65, 67, 68, 70, 71, 73, 74, 76, 77, 79, 80, 82, 83, 85, 86, 88, 89, 91, 92, 94, 95, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, o 127; (c) una secuencia de nucleótidos que codifica a un polipéptido que tiene al menos aproximadamente 90 % de identidad de secuencia de la secuencia de aminoácido mostrado en SEQ ID NO: 2, 4, 6, 10, 12, 14, 16, 22, 23, 25, 26, 28, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 41, 43, 44, 46, 47, 49, 50, 52, 53, 55, 56, 58, 59, 61, 62, 64, 65, 67, 68, 70, 71, 73, 74, 76, 77, 79, 80, 82, 83, 85, 86, 88, 89, 91, 92, 94, 95, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, o 127, en donde el polipéptido posee actividad defensiva; (d) una secuencia de nucleótidos que híbrida bajo condiciones restrictivas a una secuencia de nucleótidos que tiene una secuencia expuesta en SEQ ID NO: 1, 3, 5, 9, 11, 13, 15, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39, 42, 45, 48, 51, 54, 57, 60, 63, 66, 69, 72, 75, 78, 81, 84, 87, 90, 93, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, o 126, en donde la secuencia de nucleótidos codifica a un polipéptido que posee actividad defensiva; (e) una secuencia de nucleótidos que tiene 99 % de identidad de secuencia a una secuencia de nucleótidos que codifica a una secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 2, 4, 6, 10, 12, 14, 16, 22, 23, 25, 26, 28, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 41, 43, 44, 46, 47, 49, 50, 52, 53, 55, 56, 58, 59, 61, 62, 64, 65, 67, 68, 70, 71, 73, 74, 76, 77, 79, 80, 82, 83, 85, 86, 88, 89, 91, 92, 94, 95, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, o 127, en donde la secuencia de nucleótidos codifica a un polipéptido que posee actividad defensiva; y (f) una secuencia de nucleótidos que consiste de un complemento de una cualquiera de las secuencias de nucleótidos en (a), (b) , (c) , (d) , o (e) . 2. La molécula de ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende adicionalmente secuencias de ácidos nucleicos vectores . 3. Una célula huésped diseñada para expresar al polipéptido codificado por cualquiera de las moléculas de ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 1.
4. 4. La célula huésped de conformidad con la reivindicación 3, caracterizada porque la célula huésped es seleccionada del grupo que consiste de hongos, levaduras y vegetales.
5. 5. Un virus caracterizado porque comprende una molécula de ácido nucleico aislado de conformidad con la reivindicación 1.
6. 6. Un "cassette" de expresión caracterizado porque comprende una molécula de ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el ácido nucleico está operablemente enlazado a un promotor que conduce la expresión en una célula vegetal.
7. 7. El "cassette" de expresión de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque el promotor es seleccionado del grupo que consiste de promotores, constitutivos, inducibles y preferidos de tejido.
8. 8. El "cassette" de expresión de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque el promotor es un promotor inducible por patógeno.
9. 9. Un polipéptido aislado caracterizado porque comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de: (a) Una secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO: 2, 4, 6, 10, 12, 14, 16, 22, 23, 25, 26, 28, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 41, 43, 44, 46, 47, 49, 50, 52, 53, 55, 56, 58, 59, 61, 62, 64, 65, 67, 68, 70, 71, 73, 74, 76, 77, 79, 80, 82, 83, 85, 86, 88, 89, 91, 92, 94, 95, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, o 127; (b) una secuencia de aminoácidos que tiene al menos aproximadamente 90 % de identidad de secuencia de la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 2, 4, 6, 10, 12, 14, 16, 22, 23, 25, 26, 28, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 41, 43, 44, 46, 47, 49, 50, 52, 53, 55, 56, 58, 59, 61, 62, 64, 65, 67, 68, 70, 71, 73, 74, 76, 77, 79, 80, 82, 83, 85, 86, 88, 89, 91, 92, 94, 95, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, o 127, en donde el polipéptido posee actividad defensiva; y (c) una secuencia de aminoácidos que comprende al menos 35 aminoácidos contiguos de la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 2, 4, 6, 10, 12, 14, 16, 22, 23, 25, 26, 28, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 41, 43, 44, 46, 47, 49, 50, 52, 53, 55, 56, 58, 59, 61, 62, 64, 65, 67, 68, 70, 71, 73, 74, 76, 77, 79, 80, 82, 83, 85, 86, 88, 89, 91, 92, 94, 95, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, o 127, en donde el polipéptido posee actividad defensiva;
10. 10. Una composición caracterizada porgue comprende el polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 9.
11. 11. Un vegetal transformado que comprende en su genoma al menos un "cassette" de expresión incorporado establemente que comprende una secuencia de nucleótidos operablemente enlazada a un promotor que conduce la expresión en la célula vegetal, en donde la secuencia de nucleótidos está caracterizada porque comprende una secuencia de nucléotidos seleccionada del grupo que consiste de: (a) una secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO: 1, 3, 5, 9, 11, 13, 15, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39, 42, 45, 48, 51, 54, 57, 60, 63, 66, 69, 72, 75, 78, 81, 84, 87, 90, 93, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, o 126; (b) una secuencia de nucleótidos que codifica a un polipéptido expuesto en SEQ ID NO: 2, 4, 6, 10, 12, 14, 16, 22, 23, 25, 26, 28, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 41, 43, 44, 46, 47, 49, 50, 52, 53, 55, 56, 58, 59, 61, 62, 64, 65, 67, 68, 70, 71, 73, 74, 76, 77, 79, 80, 82, 83, 85, 86, 88, 89, 91, 92, 94, 95, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, o 127. (c) una secuencia de nucleótidos que codifica a un polipéptido que tiene al menos aproximadamente 90 % de identidad de secuencia de la secuencia de aminoácidos mostrado en SEQ ID NO: 2, 4, 6, 10, 12, 14, 16, 22, 23, 25, 26, 28, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 41, 43, 44, 46, 47, 49, 50, 52, 53, 55, 56, 58, 59, 61, 62, 64, 65, 67, 68, 70, 71, 73, 74, 76, 77, 79, 80, 82, 83, 85, 86, 88, 89, 91, 92, 94, 95, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, o 127, en donde el polipéptido posee actividad defensiva; y (d) una secuencia de nucleótidos que codifica a un polipéptido que comprende al menos 35 aminoácidos contiguos de SEQ ID NO: 2, 4, 6, 10, 12, 14, 16, 22, 23, 25, 26, 28, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 41, 43, 44, 46, 47, 49, 50, 52, 53, 55, 56, 58, 59, 61, 62, 64, 65, 67, 68, 70, 71, 73, 74, 76, 77, 79, 80, 82, 83, 85, 86, 88, 89, 91, 92, 94, 95, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, o 127, en donde el polipéptido posee actividad defensiva .
12. 12. El vegetal transformado de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque el promotor es seleccionado del grupo que consiste de promotores constitutivos, inducibles, y preferidos de tejido.
13. 13. El vegetal transformado de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque el promotor es un promotor inducible por patógeno.
14. 14. El vegetal transformado de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque el vegetal es seleccionado del grupo que consiste de arroz, maíz, alfalfa, girasol, Brassica, soya, algodón, cártamo, cacahuate, sorgo, trigo, mijo, y tabaco.
15. 15. Semilla transformada del vegetal de conformidad con la reivindicación 11.
16. 16. Un método para mejorar la resistencia a patógenos fúngicos- de enfermedades vegetales, caracterizado porque comprende : (a) transformar una planta con al menos un "cassette" de expresión incorporado establemente que comprende una secuencia de nucleótidos enlazada operablemente a un promotor que conduce la expresión en una célula del vegetal, en donde la secuencia de nucleótidos comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste de: (i) una secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO: 1, 3, 5, 9, 11, 13, 15, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39, 42, 45, 48, 51, 54, 57, 60, 63, 66, 69, 72, 75, 78, 81, 84, 87, 90, 93, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, o 126; (ii) una secuencia de nucleótidos que codifica a un polipéptido expuesto en SEQ ID NO: 2, 4, 6, 10, 12, 14, 16, 22, 23, 25, 26, 28, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 41, 43, 44, 46, 47, 49, 50, 52, 53, 55, 56, 58, 59, 61, 62, 64, 65, 67, 68, 70, 71, 73, 74, 76, 77, 79, 80, 82, 83, 85, 86, 88, 89, 91, 92, 94, 95, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, o 127; (iii) una secuencia de nucleótidos que codifica a un polipéptido que tiene al menos aproximadamente 90 % de identidad de secuencia de la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2, 4, 6, 10, 12, 14, 16, 22, 23, 25, 26, 28, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 41, 43, 44, 46, 47, 49, 50, 52, 53, 55, 56, 58, 59, 61, 62, 64, 65, 67, 68, 70, 71, 73, 74, 76, 77, 79, 80, 82, 83, 85, 86, 88, 89, 91, 92, 94, 95, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, o 127, en donde el polipéptido posee actividad defensiva; (iv) una secuencia de nucleótidos que codifica a un polipéptido que comprende al menos 35 aminoácidos contiguos de SEQ ID NO: 2, 4, 6, 10, 12, 14, 16, 22, 23, 25, 26, 28, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 41, 43, 44, 46, 47, 49, 50, 52, 53, 55, 56, 58, 59, 61, 62, 64, 65, 67, 68, 70, 71, 73, 74, 76, 77, 79, 80, 82, 83, 85, 86, 88, 89, 91, 92, 94, 95, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, o 127, en donde el polipéptido posee actividad defensiva; y (b) determinar el nivel de aumento de la resistencia al patógeno fúngico en el vegetal.
17. 17. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el vegetal es seleccionado del grupo que consiste de arroz, maíz, alfalfa, girasol, Brassica, soya, algodón, cártamo, cacahuate, sorgo, trigo, mijo, y tabaco .
18. 18. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el vegetal posee resistencia mejorada a Magnaportha gxlsea, Bhlzoctonia solanir o Fusarium vertlcillo des.
19. 19. Un anticuerpo que enlaza selectivamente a un polipéptido aislado caracterizado porgue comprende una secuencia de aminoácidos que comprende al menos 35 residuos de aminoácidos contiguos de una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de la SEQ ID NO: 2, 4, 6, 10, 12, 14, 16, 22, 23, 25, 26, 28, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 41, 43, 44, 46, 47, 49, 50, 52, 53, 55, 56, 58, 59, 61, 62, 64, 65, 67, 68, 70, 71, 73, 74, 76, 77, 79, 80, 82, 83, 85, 86, 88, 89, 91, 92, 94, 95, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, o 127.
20. 20. Un método para aislar polipéptidos que confieren resistencia a enfermedades vegetales en un insecto, el método está caracterizado porque comprende: (a) inyectar al insecto con una suspensión de un patógeno fúngico vegetal; (b) colectar la hemolinfa del insecto; y (c) aislar los polipéptidos que confieren resistencia a enfermedades vegetales contenidos en la hemolinfa del insecto usando cromatografía liquida y espectrofotometria de masa.
21. 21. Una molécula de ácido nucleico caracterizada porque comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste de: (a) una secuencia de nucleótidos caracterizada porque comprende al menos 25 nucleótidos contiguos de la secuencia de nucleótidos expuesta en las SEQ ID NO: 1, 3, 5, 9, 11, 13, 15, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39, 42, 45, 48, 51, 54, 57, 60, 63, 66, 69, 72, 75, 78, 81, 84, 87, 90, 93, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, o 126; y (b) una secuencia de nucleótidos que consiste de un complemento de una cualquiera de las secuencias de nucleótidos en (a) .
22. 22. Una molécula de ácido nucleico aislada caracterizada porque comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste de: (a) una secuencia de nucleótidos expuesta en los nucleótidos desde el 169 al 298 de la SEQ ID NO: 11; (b) una secuencia de nucleótidos expuesta en los nucleótidos desde el 58 hasta el 624 de la SEQ ID NO: 3; (c) una secuencia de nucleótidos expuesta en los nucleótidos desde el 86 hasta el 208 de la SEQ ID NO: 15; (d) una secuencia de nucleótidos expuesta en los nucleótidos desde el 46 hasta el 216 de la SEQ ID NO: 13; y (e) una secuencia de nucleótidos caracterizada porque tiene 90 % de identidad de una secuencia de nucleótidos en (a), (b) (c) , o (d) , en donde la secuencia de nucleótidos codifica a un polipéptido que tiene actividad defensiva.
23. 23. ün polipéptido aislado caracterizado porque comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de: (a) una secuencia de aminoácidos codificada por la secuencia de nucleótidos expuesta en los nucleótidos desde el 169 hasta el 298 de la SEQ ID NO: 11; (b) una secuencia de aminoácidos codificada por la secuencia de nucleótidos expuesta en los nucleótidos desde el 58 hasta el 624 de la SEQ ID NO: 3; (c) una secuencia de aminoácidos codificada por la secuencia de nucleótidos expuesta en los nucleótidos desde el 86 hasta el 208 de la SEQ ID NO: 15; (d) una secuencia de aminoácidos codificada por la secuencia de nucleótidos expuesta en los nucleótidos desde el 46 hasta el 216 de la SEQ ID NO: 13; y (e) una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 90 % de identidad de secuencia de la secuencia de aminoácidos expuesta en (a), (b) , [c] , o (d) , en donde el polipéptido posee actividad defensiva.