MXPA03007494A - Nuevos receptores mutantes de sustitucion y su uso en un sistema de expresion genetica inducible a base de receptores nucleares. - Google Patents

Abstract

La invencion se refiere al campo de la biotecnologia o ingenieria genetica. Especificamente, esta invencion se refiere al campo de la expresion genetica. Mas especificamente, esta invencion se refiere a nuevos receptores mutantes por substitucion y su uso en un sistema de expresion genetica inducible a base de receptor y metodos para modular la expresion de un gen en una celula huesped para aplicaciones tales como terapia genetica, produccion a gran escala de proteinas y anticuerpos, analisis de seleccion de alto rendimiento a base de celulas, genomicos funcionales y regulacion de caracteristicas en organismos transgenicos.

Description

NUEVOS RECEPTORES MUTANTES DE SUSTITUCIÓN Y SU USO EN UN SISTEMA DE EXPRESIÓN GENÉTICA INDUCIBLE A BASE DE RECEPTORES NUCLEARES CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere al campo de la biotecnología o ingeniería genética. Específicamente, esta invención se refiere al campo de la expresión genética. Más específicamente, esta invención se refiere a nuevos receptores nucleares que comprenden una mutación por substitución y su uso en un sistema y métodos de expresión genética inducible a base de receptores nucleares para modular la expresión de un gen dentro de una célula huésped utilizando este sistema de expresión genética inducible. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN En la presente se citan varias publicaciones, la descripción de las cuales se incorpora en su totalidad mediante la referencia. Sin embargo, la cita de cualquier referencia en la presente no debe considerarse como una admisión de que tal referencia se encuentra disponible como "Técnica Anterior" para la presente solicitud. En el campo de la ingeniería genética, el control preciso de la expresión genética es una herramienta valiosa para estudiar, manejar y controlar el desarrollo y otros procesos fisiológicos. La expresión genética es un proceso biológico complejo que involucra varias .interacciones específicas proteína-proteína. A fin de que la expresión genética se active, de manera que produzca el ARN necesario como la primera etapa en la síntesis de proteína, debe llevarse un activador transcripcional hacia la proximidad de un promotor que controle la transcripción genética. Típicamente, el activador transcripcional por si mismo se asocia con una proteína que tiene al menos un dominio de unión de ADN que se une al ADN uniendo sitios presentes en las regiones promotoras de los genes. Así, para que ocurra la expresión genética, debe llevarse una proteína que comprenda un dominio de unión al ADN y un dominio de transactivación localizado a una distancia apropiada del dominio de unión al ADN hacia la posición correcta en la región promotora del gen. El procedimiento transgénico tradicional utiliza un promotor específico del tipo de célula para conducir la expresión de un transgen diseñado. Una construcción de ADN que contiene el transgen se incorpora primero en un genoma huésped. Cuando se activa por un activador transcripcional, la expresión del transgen ocurre en un tipo de célula dada. Otro medio para regular la expresión de genes extraños en las células es a través de promotores inducibles. Los ejemplos del uso de tales promotores inducibles incluyen el promotor PRl-a, sistemas de represor-operador procarióticos , sistemas de inmunofilina inmunosupresiva y sistemas de mayor activación de la transcripción eucariótica tales como sistemas receptores de hormona esteroide y que se describen más adelante . El promotor PRl-a del tabaco, se induce durante la respuesta sistémica de resistencia adquirida que sigue al ataque patogénico. El uso de PRl-a puede ser limitado debido a que frecuentemente responde a materiales endógenos y factores externos tales como patógenos, radiación UV-B y contaminantes. Se han descrito los sistemas de regulación genética que se basan en promotores inducidos por choque térmico, interferón y metales pesados (Wurn et al., 1986, Proc. Nati. Acad. Sci USA 83: 5414-5418; Arnheiter et al., 1990, Cell 62:51-61; Filmus et al., 1992, Nucleic. Acids Research 20:27550-27560). Sin embargo, estos sistemas tienen limitaciones debido a su efecto sobre la expresión de genes no dirigidos . Estos sistemas también tienen fugas . Los sistemas represor-operador procarioticos utilizan proteínas represoras bacteriales y las únicas secuencias de ADN operadoras a las cuales se unen. Tanto los sistemas represor-operador de la tetraciclina ("Tet") como de la lactosa ("Lac") de la bacteria Escherichia coli se han utilizado en plantas y animales para el control de la expresión genética. En el sistema Tet, la tetraciclina se une a la proteína represora TetR, dando como resultado un cambio conformacional que libera la proteína represora a parir del operador que como resultado permite que ocurra la transcripción. En el sistema Lac, un operón lac se activa en respuesta a la presencia de la lactosa o análogos sintéticos tales como isopropil-b-D-tiogalactosidasa . Desafortunadamente, el uso de tales sistemas se encuentra restringido por la química inestable de los Ixgandos, i.e.la tetraciclina y la lactosa, su toxicidad, su presencia natural o los niveles relativamente altos requeridos para la inducción o represión. Por razones similares, la utilidad de tales sistemas en animales es limitada. Las moléculas inmunosupresoras tales como FK506, rapamicina y ciclosporina A pueden unirse a las inmunofilinas FKBP12 , ciclofilina, etc. Utilizando esta información, se ha previsto una estrategia general para unir juntas a cualquiera de dos proteínas simplemente al colocar FK506 en cada una de las dos proteínas o al colocar FK506 en una y ciclosporina A en la otra. Un homodímero sintético de FK506 (FK1012) o un compuesto que resulta de la fusión de FK506-ciclosporina (FKCsA) puede utilizarse entonces para introducir la dimerización de estas moléculas (Spencer et al., 1993, Science 262: 1019-24; Belshaw et al., 1996 Proc Nati Acad Sci USA 93:4604-7). El dominio de unión Gal4 ADN que se fusiona a FKBP12 y el dominio activador VP16 que se fusiona a la ciclofilina y el compuesto FKCsA se utilizaron para mostrar la heterodimerización y activación de un gen informador bajo el control de un promotor que contiene los sitios de unión Gal . Desafortunadamente, este sistema incluye inmunosupresores que pueden tener efectos colaterales indeseables y por lo tanto, limita su uso para varias aplicaciones de conmutación de genes de mamífero. También se han empleado sistemas de mayor activación de la transcripción eucariótica tales como sistemas de receptor de hormona esteroxde. Los receptores de hormona esferoide son miembros de la superfamilia de receptores nucleares y se encuentran en células de vertebrados e invertebrados. Desafortunadamente, el uso de compuestos esferoides que activan los receptores para la regulación de la expresión genética, particularmente en plantas y mamíferos, se limita debido a su involucramiento en muchas otras trayectorias biológicas naturales en tales organismos. Con el fin de superar tales dificultades, se ha desarrollado un sistema alternativo que utiliza receptores de ecdisona de insecto (EcR) . El crecimiento, fusión y desarrollo en insectos se regula por la hormona esferoide ecdisona (hormona de fusión) y las hormonas juveniles (Dhadialla, et al., 1998, Annu. Rev. Entomol . 43: 545-569) . El objetivo molecular para la ecdisona en insectos consiste de al menos un receptor de ecdisona (EcR) y una proteína de ultraespiráculo (USP) . El EcR es un miembro de la superfamilia de receptores de esteroide nuclear que se caracteriza por el ADN de identificación y los dominios de unión al ligando y un dominio de activación (Koelle et al., 1991, Cell 67:59-77). Los receptores EcR son responsables de varios de los compuestos esteroides tal como ponasterona A y muristerona A. Recientemente, se han descrito compuestos no esteroides con actividad agonista ecdxesteroide, incluyendo los insecticidas comercialmente disponibles tebufenozida y metoxifenozida que se comercializan en todo el mundo por Rohm and Haas Company (ver Solicitud de Patente Internacional No. PCT/EP96/00686 y la Patente de E.U. 5,530,028) . Ambos análogas tienen perfiles de excepcional seguridad para otros organismos . El receptor de ecdisona de insecto (EcR) se heterodimeriza con el Ultraespiráculo (USP) , el homólogo de insecto del RXR de mamífero y une los elementos de respuesta de los receptores de ecdisteroides y ecdisona y activa la transcripción de los genes responsables de la ecdisona (Riddiford et al., 2000). Los complejos EcR/USP/ligando juegan roles importantes durante el desarrollo y la reproducción del insecto. El EcR es un miembro de la superfamilia del receptor de hormona esteroide y tiene cinco dominios modulares, dominios A/B (transactivación), C (unión al ADN, heterodimerización) , D (Articulación, heterodimerización) , E (unión al ligando, heterodimerización y transactivación) y F (transactivación) . Algunos de estos dominios tales como A/B, C y E retienen su función cuando se fusionan a otras proteínas . Los sistemas de expresión genética inducible estrechamente regulados o "conmutaciones genéticas" son útiles para varias aplicaciones tales como terapia genética, producción a gran escala de proteínas en células, ensayos de selección de alto rendimiento en base a la célula, genómicos funcionales y regulación de pruebas en plantas y animales transgénicos . La primera versión de la conmutación genética a base de EcR utilizó EcR de Drosophila melanogaster (DmEcR) y RXR de mus musculus (MmRXR) y mostró que estos receptores en la presencia del esferoide, ponasterona A, transactivan los genes informadores en líneas celulares de mamífero y ratones transgénicos (Christopherson et al., 1992; No et al., 1996) . Later, Suhr et al., 1998 mostró que el agonista de ecdisona no esteroide, tebufenozida, indujo niveles elevados de transactivación de los genes informadores en células de mamífero a través de EcR de Bómbix mori (BmEcR) en la ausencia de socios de heterodímero exógenos. Las Solicitudes de Patentes Internacionales Nos. PCT/US97/05330 ( O 97/38117) y PCT/US99/08381 (W099/58155) describen los métodos para modular la expresión de un gen exógeno en los cuales una construcción de ADN que comprende el gen exógeno y un elemento de repuesta de ecdisona se activan por una segunda construcción de ADN que comprende un receptor de ecdisona que, en la presencia de un ligando para este y opcionalmente en la presencia de un receptor capaz de actuar como un socio silencioso, se une al elemento de respuesta de ecdisona para inducir la expresión genética. El receptor de ecdisona de selección se aisló de Drosophila melanogaster. Típicamente, tales sistemas requieren la presencia del socio silencioso, preferentemente del receptor X retinoide ( XR) a fin de proporcionar la activación óptima. En células de mamífero, el receptor de ecdisona de insecto (EcR) se heterodimeriza con el receptor X retinoide (RXR) y regula la expresión de los genes objetivo en una manera dependiente del ligando. La Solicitud de Patente Internacional No. PCT/US98/14215 (WO 99/02683) describe que el receptor de ecdisona aislado del gusano de seda Bómbix morí es funcional en sistemas de mamífero sin la necesidad de un socio de dímero exógeno . La Patente de E.U. No. 6,265,173 Bl describe que los diversos miembros de la superfamilia esteroide/tiroide de los receptores pueden combinarse con el receptor de ultraespiráculo (USP) de Drosophila melanogaster o fragmentos de este que comprenden al menos el dominio de dimerización de USP para utilizarse en un sistema de expresión genética. La Patente de E.U. No. 5,880,333 describe un sistema de EcR de Drosophila melanogaster y heterodímero de ultraespiráculo (USP) utilizado en plantas en las cuales el dominio de transactivación y el dominio de unión de ADN se colocan en dos diferentes proteínas híbridas. Desafortunadamente, estos sistemas a base de USP son constitutivos en células de animal y por lo tanto, no son efectivas para regular la expresión genética del informador. En cada uno de estos casos, el dominio de transactivación y el dominio de unión de ADN (ya sea como EcR nativo como en la solicitud de Patente Internacional No. PCT/US98/14215 o como EcR modificado como en la Solicitud de Patente Internacional No. PCT/US97/05330) se incorporaron en una sola molécula y el otro socio heterodimérico, ya sea USP o RXR, se utilizó en su estado natural. Las desventajas de lo anterior describen los sistemas de regulación genética en base a EcR que incluye una actividad de fondo considerable en la ausencia de los ligandos y sin aplicabilidad de estos sistemas para uso tanto en plantas como en animales (ver la Patentes de E.U. Nos. 5,880,333 y 6,265,173 Bl) . Para la mayoría de las solicitudes que dependen de la modulación de la expresión genética, estos sistemas a base de EcR son indeseables. Por lo tanto, existe una necesidad en la técnica para mejorar los sistemas para modular de manera precisa la expresión de genes exógenos tanto en plantas como en animales. Tales sistemas mejorados serían útiles para aplicaciones tales como terapia genética, producción a gran escala de proteínas y anticuerpos, ensayos de selección de alto rendimiento en base a células, genómicos funcionales y regulación de características en animales transgénicos . Los sistemas mejorados que son simples, compactos y dependen del ligando que son relativamente económicos, fácilmente disponibles y de baja toxicidad para el huésped probarían utilidad para los sistemas biológicos de regulación. Recientemente, los Solicitantes han mostrado que un sistema de expresión genética inducible a base del receptor de ecdisona en el cual los dominios de transactivación y de unión al ADN se separan entre si al colocarlos en dos diferentes proteínas dan como resultado actividad de fondo grandemente reducida en la ausencia del ligando y actividad significativamente incrementada sobre el fondo en la presencia del ligando (solicitud pendiente PCT/US01/09050 , incorporada en la presente en su totalidad mediante la referencia) . Este sistema de dos híbridos es un sistema de modulación de la expresión genética inducible significativamente mejorado comparado a los sistemas descritos en las solicitudes PCT/US97/05330 y PCT/US98/14215. El sistema de dos híbridos explota la capacidad de un par de proteínas que interactúan para llevar el dominio de activación de la trascripción hacia una posición más favorable con relación al dominio de unión del ADN de manera que cuando el dominio de unión del ADN se une al sitio de unión de ADN sobre el gen, el dominio de transactivación activa de manera más efectiva al promotor (ver, por ejemplo, la Patente de E.U. No. 5,283,173). En resumen, el sistema de expresión genética de dos híbridos comprende dos casetes de expresión genética; el primero codifica un dominio de unión al ADN fusionado a un polipéptido del receptor nuclear y el segundo codifica un dominio de transactivación fusionado a un diferente polipéptido del receptor nuclear. En la presencia del ligando, la interacción del primer polipéptido con el segundo polipéptido ata de manera efectiva el dominio de unión del ADN al dominio de transactivación. Ya que los dominios de unión al ADN y de transactivación residen en dos moléculas diferentes, la actividad de fondo en la ausencia del ligando se reduce grandemente. Un sistema de dos híbridos también proporciona sensibilidad mejorada para los ligandos no esferoides por ejemplo diacilhidrazinas , cuando se compara a los ligandos esferoides por ejemplo ponasterona A ("PonA") o muristerona A ( "MurA" ) . Es decir, cuando se compara a esferoides, los ligandos no esteroides proporcionan mayor actividad a una baja concentración. Además, ya que la transactivación a base de conmutación genética de EcR con frecuencia depende de la línea celular, es más fácil diseñar sistemas de conmutación para obtener capacidad máxima de transactivación para cada aplicación. Además, el sistema de dos híbridos evita algunos efectos colaterales debido a la sobreexpresión de RXR que con frecuencia ocurre cuando el RXR no modificado se utiliza como un socio de conmutación. En un sistema preferido de dos híbridos, los dominios naturales de unión a ADN y transactivación de EcR o RXR se eliminan y como resultado, estas moléculas híbridas tienen menos oportunidad de interactuar con otros receptores de hormona esferoide presentes en la célula dando como resultado efectos colaterales reducidos. Los Solicitantes han hecho el descubrimiento sorprendente que un RXR de invertebrado puede funcionar similar o mejor que un RXR de invertebrado en un sistema de expresión genética inducible a base del receptor de ecdisona (ver la solicitud de E.U. copendiente 60/294,814, incorporada en la presente mediante la referencia en su totalidad) . El RXR es un miembro de la superfamilia de receptores nucleares y se clasifican en subfamilia 1, grupo B (referido a continuación como "receptores nucleares Grupo B") . Los miembros de cada grupo comparten 40-60% de identidad de aminoácidos en el dominio E (unión al ligando) (Laudet et al., Un Sistema Unificado de Nomenclatura para la Superfamilia de receptores nucleares, 1999; Cell 97: 161-163) . Además del receptor de ecdisona otros miembros de esta superfamilia 2 de receptores nucleares, Grupo B incluye: proteína de unión II de región H-2 (H-2 IIBP) , co-regulador 1 del receptor nuclear (RcoR-1) , ultraespiráculo (USP) , receptor nuclear 2C1 y factor de corion 1 (CF-1) . En un esfuerzo para proporcionar dominios de unión a ligando de receptor nuclear mejorados, los Solicitantes han identificado ahora residuos de aminoácido dentro de los receptores nucleares del Grupo B que afectan la sensibilidad y magnitud de inducción del ligando en un sistema de expresión genética inducible a base de receptores nucleares. Los Solicitantes describen en la presente la construcción de los receptores nucleares del Grupo B que comprenden mutaciones por substitución (referidas en la presente como "mutantes de substitución" ) en estos residuos críticos y la demostración de que estos receptores nucleares de mutante de substitución son útiles en los métodos para modular la expresión genética. Como se presenta aquí, los nuevos receptores nucleares mutantes por substitución de los Solicitantes y su uso en un sistema de expresión genética inducible a base de receptor nuclear proporciona un sistema mejorado de expresión genética inducible tanto en células huésped procarióticas como eucarióticas en el cual la sensibilidad del ligando y la magnitud de la transactivación pueden seleccionarse según se desee, dependiendo de la aplicación.

BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS Figura 1 : Transactivación del gen informador de los mutantes VP16/MmRXRa-EF, VP16/LmUSP-EF o VP16/MmRXRa-EF, transfectados en E265D (RXRmutE/D) o G293S (RXRmutG/S) en células NIH3T3 junto con GAL/CfEcR-DER y pFRLuc. Las células se desarrollaron en la presencia de 0 , 0.2, 1 y 10 µ? GS™-E durante 48 horas y se analizó la actividad del informador. Los números en la parte superior de las barras muestra las veces de inducción máxima. Figura 2 : transactivación del gen informador de VP16/MmRXRa-EF (RXR-E, VPlS/LmUSP-EF (LmUSP- E) ,VP16/vertebrado quimérico RXR/RXR de invertebrado (Quimera) o VP16/MmRXR -EF mutantes E401D (MutE265D) , G429S ( utG293S) o tres clones independientes de doble mutante E401D+G429S (DM1, DM2, y DM4) transfectados en células NIH3T3 junto con GAL /CfEcR-DEF y pFRLuc. Las células se desarrollaron en la presencia de 0, 0.2, 1 y 10 µ? GS™-E durante 48 horas y se analizó la actividad del informador. Los números en la parte superior de las barras muestra las veces de inducción máxima. Figura 3 : Transactivación del gen informador de GAL4CfEcRDEF, pFRLUC y VP16HsRXREF o sus ADNs de versión mutante transfectados en células NIH3T3. Las células se desarrollaron en la presencia del medio que contiene DMCO o 0.04, 0.2, 1, 5, o 25 µ? GS™-E en DMSO. La actividad del informador se analizó a las 48 horas después de agregar los ligandos. Los número en la parte superior de las barras muestra las "veces de inducción máxima. Figura 4 : Transactivación del gen informador de GAL4CfEcDEF , pFRLUC y VP16HsRXREFp o sus ADMs de versión mutante transfectados en células NIH3T3. Las células transfectadas se desarrollaron en la presencia del medio que contiene DMCO o 0.04, 0.2, 1, 5, o 25 µ? GS™-E en DMSO. La actividad del informador se analizó a las 48 horas después de agregar los ligandos. Los número en la parte superior de las barras muestra las veces de inducción máxima. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Los Solicitantes han desarrollado un nuevo sistema de expresión genética inducible a base de receptores nucleares que comprende un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprenden una mutaciones de substitución. Los Solicitantes han mostrado que el efecto de tal mutación por substitución puede incrementar la actividad de unión del ligando o la sensibilidad del ligando y puede ser específico de esteroide o no esteroide. Así, la invención de los Solicitantes proporciona un sistema de expresión genética inducible a base de receptores nucleares del Grupo B útil para modular la expresión de un gen de interés en una célula huésped. El nuevo sistema de expresión genética inducible y el uso de métodos para modular la expresión genética en una célula huésped supera las limitaciones de los sistema de expresión inducible actualmente disponibles y proporciona a los técnicos expertos con un medio eficiente para controlar la expresión genética La presente invención es útil en aplicaciones tales como terapia genética, producción a gran escala de proteínas y anticuerpos, ensayos de selección de alto rendimiento a base de células, ensayos de selección del ligando ortogonal, genómicos funcionales, proteómicos, metabolómicos y la regulación de pruebas en organismos transgénicos , en donde es deseable el control de los niveles de expresión genética. Una ventaja de la invención de los Solicitantes es que proporciona un medio para regular la expresión genética y diseñar los niveles de expresión para adecuar los requerimientos del usuario. DEFINICIONES En esta exposición, se utilizan varios términos y abreviaturas. Las siguientes definiciones se proporcionan y deben ser útiles en el entendimiento del alcance y práctica de la presente invención. En una modalidad específica, el término "cerca" o "aproximadamente" significa dentro del 20%, preferentemente dentro del 10%, más preferentemente dentro del 5%, y aún más preferentemente dentro del 1% de un volumen o rango dado. El termino "substancialmente libre" significa que una composición que comprende "A" (en donde "A" es una proteína simple, molécula de ADN, vector, célula huésped recombinante , etc.) se encuentra substancialmente libre de "B" (en donde "B" comprende una o más proteínas contaminantes, moléculas de ADN, vectores, etc.) cuando al menos 75% por peso de las proteínas, ADN, vectores (dependiendo de la categoría de las especies a las cuales A y B pertenecen) en la composición es "A". Preferentemente, "A" comprende al menos aproximadamente 90% por peso de las especies A + B en la composición, más preferentemente al menos aproximadamente 99% por peso. También se prefiere que una composición que se encuentra substancialmente libre de contaminación, contenga sólo una sola especie de peso molecular que tenga la actividad o característica de las especies de interés . El término "aislado" para los propósitos de la presente invención designa un material biológico (ácidos nucleicos o proteínas) que se han removido de su ambiente original (el ambiente en el que se encuentran presentes de manera natural) . Por ejemplo, un polinucleotido presente en su estado natural en una planta o en un animal no se encuentra aislado, sin embargo, el mismo polinucleotido separado de los ácidos nucleicos adyacentes que se encuentran presentes de manera natural, se considera "aislado". El término "purificado" no requiere que el material este presente en una forma que exhiba pureza absoluta, excluyendo la presencia de otros compuestos. Más bien es una definición relativa . Un polinucleótido se encuentra en el estado "purificado" después de la purificación del material de inicio o del material natural por al menos un orden de magnitud, preferentemente de 2 o 3 y preferentemente de 4 o 5 órdenes de magnitud. Un "ácido nucleico" es un compuesto polimérico comprendido de subunidades covalentemente enlazadas llamadas nucleótidos . Los ácidos nucleicos incluyen ácido polirribonucleico (ARN) y ácido polidesoxirribonucleico (ADN) , ambos de los cuales pueden ser monocatenarios o bicatenarios . El ADN incluye pero no se limita a ADNc, ADN genómico, ADN de plásmidos, ADN sintético y ADN semi-sintético. El ADN puede ser lineal, circular o superenrollado . Una "molécula de ácido nucleico" se refiere a la forma polimérica del éster de fosfato de ribonucleósidos (adenosina, guanosina, uridina o citidina; "moléculas de ARN") o desoxirribonucleósidos (desoxiadenosina, desoxiguanosina, desoxitimidina o desoxicitidina; "moléculas de ADN") o cualquier análoga de fosfoéster del mismo, tal como fosforotioatos y tioésteres, ya sea en la forma monocatenaria o una hélice bicatenaria. Son posibles las hélices ADN-ADN, ADN-ARN y ARN-ARN bicatenarias . El término molécula de ácido nucleico y en particular molécula de ADM o ARN, se refiere únicamente a la estructura primaria y secundaria de la molécula y no se limita a ninguna forma terciaria particular. Así, este término incluye ADN bicatenario encontrado ínter alia, en moléculas de ADN lineal o circular (e.g., fragmentos de restricción) plásmidos y cromosomas. Al tratar la estructura de moléculas de ADN bicatenaria particular, las secuencias pueden describirse en la presente de acuerdo con la convención normal de dar sólo la secuencia en la dirección 5' a 3' a lo largo de la cadena de ADN no transcrita (i.e. la cadena que tiene un homólogo de secuencia para el ARNm) . Una "molécula de ADN recombinante" es una molécula de ADN que ha sufrido una manipulación biológica molecular. El término "fragmento" se entenderá que significa una secuencia de nucleótidos de longitud reducida con relación al ácido nucleico de referencia y que comprende, sobre la porción común, una secuencia nucleótida idéntica a la del ácido nucleico de referencia. Tal fragmento de ácido nucleico de acuerdo con la invención puede ser, cuando sea apropiado, incluido en un polinucleótido mayor del cual es un constituyente. Tales fragmentos comprenden o consisten alternativamente de, oligonucleótidos que varían en longitud de al menos 6, 8, 9, 10, 12, 15, 18, 20, 21, 22, 23, 24,25, 30, 39, 40, 42, 45, 48, 50, 51, 54, 57, 60, 63, 66, 70, 75, 78, 80, 90, 100, 105, 120, 135, 150, 200, 300, 500, 720, 900, 1000 o 1500 nucleótidos consecutivos de un ácido nucleico de acuerdo con la invención. Como se utiliza en la presente, un "fragmento de ácido nucleico aislado" es un polímero de ARN o ADN que es momo- o bicatenario, opcionalmente que contiene bases de nucleótido, sintéticas, no naturales o alteradas. Un fragmento de ácido nucleico aislado en la forma de un polímero de ADN puede estar comprendido de uno o más segmentos de ADNc, ADN genómico o ADN sintético. Un "gen" se refiere a un ordenamiento de nucleótidos que codifica un polipéptido, e incluye ácidos nucleicos de ADNc y ADN genómico. "Gen" también se refiere a un fragmento de ácido nucleico que expresa una proteína o polipéptido específico que incluye secuencias reguladoras que preceden (secuencias no codificadas 5') y que sigue (secuencias no codificadas 3') la secuencia de codificación. "Gen nativo" se refiere a un gen como se encontró en la naturaleza con sus propias secuencias reguladoras. "Gen quimérico" se refiere a cualquier gen que no es un gen nativo que comprende secuencias de regulación y/o codificación que no se encuentran juntas en la naturaleza. De acuerdo con lo anterior, un gen quimérico puede comprender secuencias reguladoras y secuencias de codificación que se derivan de diferentes fuentes, o secuencias reguladoras y secuencias de codificación derivadas de la misma fuente, pero instaladas de manera diferente que las encontradas en la naturaleza. Un gen quimérico puede comprender secuencias de codificación derivadas de diferentes fuentes y/o secuencias reguladoras derivadas de diferentes fuentes . "Gen endógeno" se refiere a un gen nativo en su ubicación natural en el genoma de un organismo .' Un gen "extraño" o gen "heterólogo" se refiere a un gen no encontrado de manera natural en el organismo huésped, pero que se introduce en el organismo huésped por transferencia genética. Los genes extraños pueden comprender genes nativos insertados en un organismo no nativo o genes quiméricos. Un "transgen" es un gen que se ha introducido en el genoma por un procedimiento de transformación. ADN "heterólogo" se refiere al ADN no localizado de manera natural en la célula o en un sitio cromosomal de la célula. Preferentemente, el ADN heterólogo incluye un gen extraño a la célula. El termino "genoma" incluye ADN o ARN cromosomal asi como mitocondrial , de cloroplásto y viral. Una molécula de ácido nucleico es "hibridizable" a otra molécula de ácido nucleico, tal como un ADNc, ADN genómico o ARN, cuando una forma monocatenaria de la molécula de ácido nucleico puede fortalecer la otra molécula de ácido nucleico bajo las condiciones apropiadas de temperatura y resistencia iónica en solución (ver Sambrook eh Ú . , 1999 Mra) . Las condiciones de hibridación y lavado se conocen Líen y se ejemplifican en Sambrook, J., Fritsch, B.F. y Majliatis, T. Molecular Cloning: k Lahorahory Üálllial, Segunda Edición, Cold Sprlng Harbor Laboratory P½SS, Cold Sríng Harbor (1989), particularmente el Capítulo 11 y la Tabla 11.1 del mismo (incorporada en su totalidad en la presente mediante la referencia) . Las condiciones de temperatura y resistencia iónica determinan la "rigurosidad" de la hibridación. Las condiciones de rigurosidad pueden ajustarse para seleccionar los fragmentos moderadamente similares, tales como secuencias homologas desde organismos distantemente relacionados, hasta fragmentos altamente similares, tales como genes que duplican las enzimas funcionales de los organismos cercanamente relacionados . Para la selección preliminar de ácidos nucleicos homólogos, puede utilizasrse condiciones de hibridación de baja rigurosidad, que corresponden a una Tm de 55°, e.g., 5x SSC, 0.1% SDS, 0.25% leche y sin formamida; o 30% formamida, 5x SSC, 0.5% SDS) . Las condiciones de hibridación de moderada rigurosidad corresponden a una mayor Tm e.g., 40% formamida, con 5x o 6x SCC. Las condiciones de hibridación de alta rigurosidad corresponden a la mayor Tm e.g., 50% formamida, 5x o 6x SCC.

La hibridación requiere que los dos ácidos nucleicos contengan secuencias complementarias, aunque dependiendo de la rigurosidad de la hibridación, son posibles los desacoplamientos entre las bases. El término "complementario" se utiliza para describir la relación entre las bases de nucleótidos que son capaces de hibridizarse entre si. Por ejemplo, con respecto al ADN, la adenosina es complementaria a la timina y la citosina es complementaria a la guanina. De acuerdo con lo anterior, la presente invención también incluye fragmentos de ácido nucleico aislados que son complementarios a las secuencias completas como se describe o utiliza en la presente así como aquellas secuencias de ácido nucleico substancialmente similares . En una modalidad especifica de la invención, los polinucleótidos se detectan al emplear condiciones de hibridación que comprenden una etapa de hibridación a Tm de 55 °C y utilizando condiciones como se estableció arriba. En una modalidad preferida, la Tm es de 60 °C; en una modalidad más preferida, la Tm es de 63 °C; en una modalidad aún más preferida, la Tm es de 65 °C. Los lavados de post-hibridación también determinan las condiciones de rigurosidad. Un conjunto de condiciones preferidas utiliza una serie de lavados que se inician con 6X SSC, 0.5% SDS a temperatura ambiente durante 15 minutos (min) , después se repite con 2X SSC, 0.5% SDS a 45°C durante 30 minutos y después se repite dos veces con 0.2X SSC, 0.5% SDS a 50°C durante 30 minutos. Un conjunto más preferido de condiciones de rigurosidad utiliza mayores temperaturas en las cuales los lavados son idénticos a los anteriores excepto para la temperatura de los dos lavados finales de 30 minutos en 0.2X SSC, 0.5% SDS que se incrementó a 60 °C. Otro conjunto preferido de condiciones altamente rigurosas utiliza dos lavados finales en 0. IX SSC, 0.1% SDS a 65°C. La hibridación requiere que los dos ácidos nucleicos comprendan secuencias complementarias, aunque dependiendo de la rigurosidad de la hibridación, son posibles los desacoplamientos entre las bases . La rigurosidad apropiada para hibridizar los ácidos nucleicos depende de la longitud de los ácidos nucleicos y el grado de complementación, variables bien conocidas en la técnica. Entre mayor es el grado de similitud u homología entre dos secuencias de nucleótidos, mayor es el valor de Tm para híbridos de ácidos nucleicos que tienen aquellas secuencias. La estabilidad relativa (correspondiente a la mayor Tm) de hibridaciones de ácidos nucleicos disminuye en el siguiente orden: ARN.-ARN, AD :AR , AD :AD : Para híbridos mayores de 100 nucleótidos de longitud, se han derivado ecuaciones para calcular Tm (ver Sambrook et al., supra, 9.50-0.51). Para hibridación con ácidos nucleicos más cortos, i.e., oligonucleótidos , la posición de los desacoplamientos se vuelve más importante, y la longitud de los oligonucleótidos determina su especificidad (ver Sambrook et al., supra, 11.7-11.8). En una modalidad específica de la invención, los polinucleótidos se detectan al empelara condiciones de hibridación que comprenden una etapa de hibridación en sal de menos de 500 mM y al menos 37 grados Celsius, y una etapa de lavado en 2XSSPE en al menos 63 grados Celsius. En una modalidad preferida, las condiciones de hibridación comprenden sal de menos de 200 mM y al menos 37 grados Celsius para la etapa de hibridación. En una modalidad más preferida, las condiciones de hibridación comprenden 2XSSPE y 63 grados Celsius tanto para las etapas de hibridación como la de lavado . En una modalidad, la longitud de los ácidos nucleicos hibridizables es al menos de aproximadamente 10 nucleótidos . Se pre iere una longitud mínima para un ácido nucleico, hibridizable de aproximadamente 15 nucleótidos; más preferentemente al menos aproximadamente 20 nucleótidos; y más preferentemente la longitud es de al menos 30 nucleótidos. Además, los técnicos expertos reconocerán que la temperatura y la concentración de sal de la solución de lavado puede ajustarse según sea necesario de acuerdo con factores tales como longitud de la sonda . El término "sonda" se refiere a la molécula de ácido nucleico monocatenaria que puede tener pares de base con un ácido nucleico objetivo monocatenario complementario para formar una molécula bicatenaria. Como se utiliza en la presente, el término "oligonucleótido" se refiere a un ácido nucleico, generalmente de al menos 18 nucleótidos, que es hibridizable a una molécula de ADN genómico, una molécula de ADNc, una ADN de plásmido o una molécula de ARNm. Los oligonucleótidos pueden etiquetarse e.g., con nucleótidos-32P o nucleótidos a los cuales se ha conjugado so a1en emen e una etiqueta, tal como biotina. Un oligonucleótido etiquetado puede utilizarse como una sonda para detectar la presencia de un ácido nucleico. Los oligonucleótidos (uno o ambos de los cuales puede etiquetarse) pueden utilizarse como iniciadores de PCR, ya sea para clonar la longitud completa o un fragmento de un ácido nucleico, o para detectar la presencia de un ácido nucleico. Un oligonucleótido puede utilizarse también para formar una triple hélice con una molécula de ADN. En general, los oligonucleótidos se preparan sintéticamente, preferentemente en un sintetizador de ácido nucleico. De acuerdo con lo anterior, los oligonucleótidos pueden prepararse con uniones análogas de fosfoéster que ocurren de manera natural, tal como uniones de tioéster, etc. Un "iniciador" es un oligonucleótido que hibridiza a una secuencia de ácidos nucleicos objetivo para crear una región de ácido nucleico bicatenaria que puede servir como un punto de inicio para la síntesis de ADN bajo condiciones adecuadas. Tales iniciadores pueden utilizarse en una reacción en cadena de polimerasa. "Reacción en cadena de polimerasa" se abrevia PCR y significa un método in vivo para amplificar enzimáticamente las secuencias de ácido nucleico específicas . La PCR involucra una serie repetitiva de ciclos de temperatura, comprendiendo cada ciclo tres etapas: desnaturalización del ácido nucleico modelo para separar los filamentos de la molécula objetivo, fortalecer un iniciador de oligonucleótido de PCR monocatenario para el ácido nucleico modelo y la extensión del (de los) iniciador (es) fortalecidos mediante la polimerasa de ADN. La PCR proporciona un medio para detectar la presencia de la molécula objetivo y, bajo condiciones cuantitativas o semi-cuantitativas , determinar la cantidad relativa de esa molécula objetivo dentro del grupo de inicio de ácidos nucleicos. La "transcripción inversa-reacción en cadena de polimerasa" se abrevia RT-PCR y significa un método in vitro para producir enzimáticamente una molécula o moléculas de ADNc objetivo a partir de una molécula o moléculas de ARN, seguida por la amplificación enzimática de una secuencia o secuencias de ácidos nucleicos específica dentro de la molécula o moléculas de ADNc objetivo como se describe arriba. La T-PCR también proporciona un medio para detectar la presencia de la molécula objetivo y, bajo condiciones cuantitativas o semi-cuantitativas , determinar la cantidad relativa de la molécula objetivo dentro del grupo de inicio de ácidos nucleicos. Una "secuencia de codificación" de ADN es una secuencia de ADN bicatenaria que se transcribe y se traduce a un polipéptido en una célula in vivo o in vitro cuando se coloca bajo el control de las secuencias reguladoras apropiadas. "Secuencias reguladoras apropiadas" se refiere a las secuencias de nucleótidos ubicadas corriente arriba (secuencias no codificadas 5'), dentro o corriente abajo (secuencias no codificadas 3') de una secuencia de codificación y que influencia la transcripción, procesamiento o estabilidad del ARW o traducción de la secuencia de codificación asociada. Las secuencias reguladoras pueden incluir promotores, secuencias líder de traducción, intrones, secuencias de reconocimiento de poliadenilación, sitio de procesamiento de ARN, sitio de unión al efector y estructura de contención de ciclo. Los límites de la secuencia de codificación se determinan mediante un codón de inicio en la terminal 5' (amino) y un codón de detención de traducción en la terminal 3' (carboxilo) . Una secuencia de codificación puede incluir, pero no se limita a, secuencias procarióticas , ADNc de ARNm, secuencias de ADN genómico y aún secuencias de ADN sintético. Si se pretende la secuencia de codificación para la expresión en una célula eucariótica, una secuencia de terminación de transcripción y señal de poliadenilación se localizará usualmente en 3' a la secuencia de codificación. La "estructura de lectura abierta" se abrevia ORF y significa una longitud de secuencia de ácidos nucleicos, ya sea ADN, ADNc o ARN, que comprende una señal de inicio de traducción o codón de inicio, tal como un ATG o AUG y un codón de terminación y puede traducirse potencialmente a una secuencia de polipéptido. El término "cabeza a cabeza" se utiliza en la presente para describir la orientación de dos secuencias de polinucleótidos en relación entre si. Dos polinucleótidos se colocan en una orientación cabeza a cabeza cuando el extremo 5' del filamento de codificación de un polinucleótido se encuentra adyacente al extremo 5' del filamento de codificación del otro polinucleótido, mediante lo cual la dirección de la transcripción de cada polinucleótido procede lejos del extremo 5' del otro polinucleótido. El término cabeza a cabeza puede abreviarse (5')-a-(5') y puede indicarse también por los símbolos (<— —») o (3 ' -5 ' 5 ' —>3 ' ) . El termino "cola a cola" se utiliza en la presente para describir la orientación de dos secuencias de polinucleótidos en relación entre si . Dos polinucleótidos se colocan en una orientación cola a cola cuando el extremo 3' del filamento de codificación de un polinucleótido se encuentra adyacente al extremo 3 ' del filamento de codificación del otro polinucleótido, mediante lo cual la dirección de transcripción de cada polinucleótido procede hacia el otro polinucleótido. El término "cola a cola" puede abreviarse (3')-a-(3') y puede indicarse también por los símbolos (-» <=-) o (5'?3'3'<-5') . El término "cabeza a cola" se utiliza en la presente para describir la orientación de dos secuencias de polinucleótidos en relación entre si . Dos polinucleótidos se colocan en una orientación cabeza a cola cuando el extremo 5' del filamento de codificación de un polinucleótido se encuentra adyacente al extremo 3' del filamento de codificación del otro polinucleótido, mediante lo cual la dirección de transcripción de cada polinucleótido procede en la misma dirección que el otro polinucleótido. El término "cabeza a cola" puede abreviarse (5')-a-(3') y puede indicarse también por los símbolos (—> —») o (5'—>3 ' 5'—>3 ' ) . El término "corriente abajo" se refiere a la secuencia de nucleótidos que se localiza en 3' con referencia a la secuencia de nucleótidos. En particular, las secuencias de nucleótidos corriente abajo generalmente se refiere a las secuencias que siguen el punto de inicio de la transcripción. Por ejemplo, el codón de inicio de traducción de un gen se localiza corriente abajo del sitio de inicio de la transcripción . El término "corriente arriba"' se refiere a una secuencia de nucleótidos que se localiza en 5' con referencia a la secuencia de nucleótidos. En particular, las secuencias de nucleótidos corriente arriba generalmente se refiere a las secuencias que se localizan en el sitio 5' de la secuencia de codificación o punto de inicio de la transcripción. Por ejemplo, la mayoría de los promotores se localizan corriente arriba del sitio de inicio de la transcripción. Los términos "endonuclesa de restricción" y "enzima de restricción" se refiere a una enzima que se une y corta dentro de una secuencia de nucleótidos especifica dentro de un ADN bicatenario . "Recombinación homologa" se refiere a la inserción de una secuencia de ADN extraña en otra molécula de ADN, e.g., inserción de un vector en un cromosoma. Preferentemente, el vector se dirige a un sitio cromosomal específico para la recombinación homologa. Para la recombinación homologa específica, el vector contendrá regiones de homología suficientemente largas para las secuencias del cromosoma para permitir la unión complementaria y la incorporación del vector en el cromosoma. Las regiones de homología más largas y el mayor grado de similitud de secuencia, pueden incrementar la eficiencia de la recombinación homologa.

Pueden utilizarse varios métodos conocidos en la técnica para propagar un polinucleótido de acuerdo con la invención. Una vez que se establece un sistema adecuado de huésped y las condiciones de crecimiento, los vectores de expresión recombinante pueden propagarse y prepararse en cantidad. Como se describe en la presente, los vectores de expresión que pueden utilizarse incluyen, pero no se limitan a, los siguientes vectores o sus derivados: virus humano o animal tal como virus vacunal o adenovirus ; virus de insecto tal como baculovirus ; vectores de levadura; vectores de bacteriófago (e.g., lambda) y vectores de ADN de plásmido y cósmido, por nombrar solo unos cuantos. Un "vector" es cualquier medio para la clonación y/o transferencia de un ácido nucleico hacia una célula huésped. Un vector puede ser un replicón al cual puede anexarse otro segmento de ADN con el fin de llevarlo cerca de la replicacion del segmento anexado. Un "replicón" es cualquier elemento genético [e.g., plásmido, fago, cósmido, cromosoma, virus) que funciona como una unidad autónoma de replicacion de ADN in vivo, i.e. capaz de replicacion bajo su propio control . El término "vector" incluye tanto medios virales como no virales para introducir el ácido nucleico en una célula in vivo, ex vivo o in vit.ro. Puede utilizarse un gran número de vectores conocidos en la materia para manipular lo ácidos nucleicos, incorporar elementos de respuesta y promotores en los genes, etc. Los vectores posibles incluyen, por ejemplo plásmidos o virus modificados incluyendo por ejemplo bacteriófagos tales como derivados de lambda o plásmidos tales como pBR322 o derivados del plásmido pUC o el vector Bluescript . Por ejemplo, la inserción de los fragmentos de ADN que corresponden a los elementos de respuesta y promotores en un vector adecuado puede realizarse al ligar los fragmentos de ADN apropiados en un vector seleccionado que tiene terminales cohesivas complementarias . De manera alternativa, los extremos de las moléculas de ADN pueden modificarse enzimáticamente o puede producirse cualquier sitio mediante secuencias de nucleótidos ligantes (enlazadores) en las terminales de ADN. Tales vectores pueden diseñarse para contener genes marcadores seleccionables que proporcionan la selección de células que han incorporado el marcador en el genoma celular. Tales marcadores permiten la identificación y/o selección de las células huésped que incorporan y expresan las proteínas codificadas por el marcador. Los vectores virales y particularmente los vectores retrovirales , se han utilizado en una amplia variedad de aplicaciones de suministro de genes en la célula, así como sujetos de animales vivos. Los vectores virales que pueden util-izarse incluyen, pero no se limitan a retrovirus, virus adeno asociados, varicela, baculovirus, vacunal, herpes simplex, Epstein Barr, adenovirus, geminivirus y vectores caulimovirus . Los vectores no virales incluyen plásmidos, liposomas, lxpidos eléctricamente cargados (citofectinas) , complejos ADN-proteína y biopolímeros . Además de un ácido nucleico, un vector también puede comprender una o más regiones de regulación y/o marcadores seleccionables útiles en la selección, medición y monitoreo de los resultados de transferencia de ácidos nucleicos (transferencia a que tejido, duración de expresión, etc.). El término "plásmido" se refiere a un elemento cromosomal extra que con frecuencia lleva un gen que no es parte del metabolismo central de la célula y usualmente se encuentra en la forma de moléculas de ADN bicatenario circular. Tales elementos pueden ser secuencias que se replican de manera autónoma, secuencias de integración de genoma, fagos o secuencias de nucleótidos, lineales, circulares o superenrollados, de una ADN o ARN mono- o bicatenaria derivada de cualquier fuente, en la cual varias secuencias de nucleótido se han unido o recombinado en una construcción única que es capaz de introducir un fragmento promotor y una secuencia de ADN a un producto de gen seleccionado junto con la secuencia 3' no traducida apropiada en una célula. Un "vector de clonación" es un "replicón" que es una longitud de unidad de un ácido nucleico, preferentemente ADN, que se replica secuencialmente y que comprende un origen de replicación, tal como un plásmido, fago o cósmido, al que puede anexarse otro segmento de ácido nucleico a fin de llevarlo cerca de la replicación del segmento anexado. Los vectores de clonación pueden ser capaces de la replicación en un tipo de célula y de expresión en otro ("vector de doble efecto" ) . Los vectores pueden introducirse en las células huésped deseadas por métodos conocidos en la técnica, e.g., transfección, electroporación, microinyección, transducción, fusión celular, dextrán DEAD, precipitación de fosfato de calcio, lipofección (fusión de lisosoma) , uso de pistola de genes o un transportador de vector de ADN (ver e.g., Wu et al., 1992, J. Biol. Chem. 267: 963-967; Wu y Wu, 1988, J. Biol. Chem. 263: 14621-14624; y Hartmut et al., Solicitud de Patente Canadiense No. 2,012,311, presentada el 15 de Marzo, de 1990. Un polinucleótido de acuerdo con la invención también puede introducirse in vivo por lipofección. Durante la década pasada, se ha incrementado el uso de liposomas para encapsulación y transfección de ácidos nucleicos in vi tro . Los lípidos catiónicos sintéticos diseñados para limitar las dificultades y daños encontrados con la transfección mediada por liposomas pueden utilizarse para preparar liposomas para transfección in vivo de un gen que codifica un marcador (Felgner et al., 1987, Proc . Nati. Acad. Sci . U.S.A 84: 7413; Mackey, et al . , 1988, Proc . Nati Acad. Sci . U.S.A. 85: 8027-8031; y Ulmer et al . , 1993, Science 259: 1745-1748). El uso de lípidos catiónicos puede promover la encapsulación de ácidos nucleicos negativamente cargados y también promover la fusión con membranas celulares negativamente cargadas (Felgner y Ringold, 1989, Science 337:387-388). Los compuestos y composiciones de lipido particularmente útiles para transferir ácidos nucleicos se describen en las Publicaciones de Patente Internacional W095/18863 y W096/17823 y la Patente de E.U. No. 5,459,127. El uso de lipofección para introducir genes exógenos en los órganos específicos in vivo tiene ciertas ventajas prácticas. El objetivo molecular de liposomas para células específicas representa un área de beneficio. Es claro que dirigir la transfección a tipos de células particulares se preferiría particularmente en un te ido con heterogeneidad celular, tal como páncreas, hígado, riñon y cerebro. Los lípidos pueden acoplarse químicamente a otras moléculas para el propósito del objetivo (Mackey et al., 1988, supra) . Los péptidos de objetivo e.g., hormonas o neurotransmisores y proteínas tales como anticuerpos o moléculas no péptidas pueden acoplarse químicamente a los liposomas. Otras moléculas también son útiles para facilitar la transfección de un ácido nucleico in vivo, tal como un oligopéptido catiónico (e.gr. , W095/21931), péptidos derivados de proteínas de unión a ADN (e.gr. , WO96/25508) o polímero catiónico (e.g., W095/21931) . También es posible introducir un vector in vivo como un plásmido de ADN desnudo (ver las Patentes de E.U. 5,693,622, 5,589,466 y 5,580,859). También pueden utilizarse procedimientos de suministro de ADN mediados por receptor (Curiel et al., 1992, Hum Gene Ther. 3: 147-154; y Wu y u, 1987, J. Biol. Chem. 262: 4429-4432). El término "transfección" significa la absorción de ARN o ADN exógeno o heterólogo por una célula. Una célula se ha "transfectado" por ARN o ADN exógeno o heterólogo cuando tal ARN o ADN se ha introducido en la célula. Una célula ha sido "transformada" por ARN o ADN exógeno o heterólogo cuando el ARN o ADN transfectado efectúa un cambio fenotípico. El ARN o ADN de transformación puede integrarse (covalentemente enlazado) en el ADN cromosomal que compone el genoma de la célula. "Transformación" se refiere a la transferencia de un fragmento de ácido nucleico hacia el genoma de un organismo huésped, dando como resultado herencia genéticamente estable. Los organismos huésped que contienen los fragmentos de ácido nucleico transformados se refieren como organismos "transgénicos" o "recombinantes" o "transformados" .

El término "región genética" se referirá a una región de una molécula de ácido nucleico o una secuencia de nucleótidos que comprende un gen que codifica un polipéptido. Además, el vector recombinante que comprende un polinucleotido de acuerdo con la invención puede incluir uno o más orígenes para la replicacion en el huésped celular en 'el cual se pretende su amplificación o su expresión, marcadores o marcadores selecciónateles . El término "marcador selecciónatele" significa un factor de identificación, usualmente un antibiótico o gen de resistencia química que es capaz de seleccionarse en base al efecto del gen marcador, í.e. resistencia a un antibiótico, resistencia a un herbicida, marcadores colorimétricos , enzimas, marcadores fluorescentes y lo similar, en donde el efecto se utiliza para rastrear la herencia de un ácido nucleico de interés y/o la identificación de una célula u organismo que ha heredado el ácido nucleico de interés. Ejemplo de genes marcadores seleccionables conocidos y utilizados en la técnica incluyen: genes que proporcionan resistencia a la ampicilina, estreptomicina, gentamicina, kanamicina, higromicina, herbicida bialafos, sulfonamida y lo similar; y genes que se utilizan como marcadores fenotípicos, i.e. genes reguladores de la antocianina, gen de isopentil transferasa y lo similar. El término "gen informador" significa un ácido nucleico que codifica un factor de identificación que es capaz de identificarse en base al efecto del gen informador, en donde el efecto se utiliza para rastrear la herencia de un ácido nucleico de interés para identificar una célula u organismo que ha heredado el ácido nucleico de interés y/o para medir la inducción o transcripción de la expresión genética. Ejemplos de genes informadores conocidos y utilizados en la técnica incluyen: luciferaza (Luc) , proteina verde fluorescente (GFP) , cloranfenicol acetiltransferasa (CAT) , ß-galactosidasa (LacZ) , ß-glucuronidasa (Gus) y lo similar. Los genes marcadores seleccionables también pueden considerarse genes informadores . "Promotor" se refiere a una secuencia de ADN capaz de controlar la expresión de una secuencia de codificación o ARN funcional. En general, una secuencia de codificación se localiza en 3' en una secuencia promotora. Los promotores pueden derivarse en su totalidad de un gen nativo o estar compuestos de diferentes elementos derivados de diferentes promotores encontrados en la naturaleza o aún comprender segmentos de ADN sintético. Se entiende por aquellos de experiencia en la materia que los diferentes promotores pueden dirigir la expresión de un gen en diferentes tejidos o tipos de células o en diferentes etapas del desarrollo o en respuesta a diferentes condiciones ambientales o fisiológicas. Los promotores que causan que un gen se exprese en la mayoría de los tipos celulares la mayoría de las veces se refieren comúnmente como "promotores constitutivos" . Los promotores que causan que un gen se exprese en un tipo de célula específico se refiere comúnmente como "promotores específicos de célula" o "promotores específicos de tejido". Los promotores que causan que un gen se exprese en una etapa específica del desarrollo o diferenciación celular se refieren comúnmente como "promotores desarrolladamente específicos" o "promotores específicos de la diferenciación celular" . Los promotores que se inducen y causan que un gen se exprese después de la exposición o tratamiento de la célula con un agente, molécula biológica, químico, ligando, luz o lo similar que induce al promotor se refieren comúnmente como "promotores inducibles" o "promotores regulables" . Se reconoce además que ya que en la mayoría de los casos no se han definido los límites exactos de las secuencias reguladoras, los fragmentos de ADN de diferentes longitudes pueden tener actividad promotora idéntica . Una "secuencia promotora" es una región reguladora de ADN capaz de unir la ARN polimerasa en una célula e iniciar la transcripción de una secuencia de codificación corriente abajo (dirección 3'). Para propósitos de definir la presente invención, la secuencia promotora se limita en su terminal 3' por el sitio de inicio de transcripción y se extiende corriente arriba (dirección 5') para incluir el número mínimo de bases o elementos necesarios para iniciar la transcripción a niveles detectables por los antecedentes de arriba. Dentro de la secuencia promotora se encontrará un sitio de inicio de transcripción (definido convenientemente por ejemplo, mediante la representación con la nucleasa SI) , así como dominios de unión de proteína (secuencias de consenso) responsables de la unión de la ARN polimerasa. Una secuencia de codificación se encuentra "bajo el control" de la secuencia de control transcripcional y translacional en una célula cuando el ARN polimerasa transcribe la secuencia de codificación en AR m, que se empalma entonces en trans-ARN (si la secuencia de codificación contiene intrones) y se traduce en la proteína codificada por la secuencia de codificación. "Secuencias de control transcripcional y translacional" son secuencias reguladoras de ADN, tal como los promotores, mej oradores, terminadores y lo similar, que proporcionan la expresión de una secuencia de codificación en una célula huésped. En células eucarióticas , las señales de poliadenilación son secuencias de control. El término "elemento de respuesta" significa uno o más elementos de ADN que actúan en cis los cuales confieren capacidad de respuesta a un promotor mediado a través de la interacción con los dominios de unión a ADN del primer gen quimérico. Este elemento de ADN puede ser ya sea palindrómico (perfecto o imperfecto) en su secuencia o compuesto de motivos de secuencia o semi-sitios separados por un número variable de nucleótidos. Los semi-sitios pueden ser similares o idénticos e instalados como repeticiones directas o inversas o como un solo semi-sitio o multímeros de semi-sitios adyacentes en tándem. Los elementos de respuesta pueden comprender un promotor mínimo aislado de los diferentes organismos dependiendo de la naturaleza de la célula u organismo en el que el elemento de respuesta se incorporará. El dominio de unión de ADN de la primera proteína híbrida se une en la presencia o ausencia de un ligando, a la secuencia de ADN de un elemento de respuesta para iniciar o suprimir la transcripción del (de los) gen (es) corriente abajo bajo la regulación de este elemento de respuesta. Ejemplos de secuencias de ADN para los elementos de respuesta del receptor de ecdisona natural incluyen: RRGG/TTCANTGAC/ACYY (ver Cherbas L. et al., (1991), Genes Dev. 5, 120-131); AGGTCAN(n)AGGTCA, en donde N(n) puede ser uno o más nucleótidos espaciadores (ver D'Avino PP . , et al., (1995), Mol Cell Endocrinol . 113, 1-9); y GGGTTGAATGAATTT (ver Antoniewski C. et al., (1994). Mol Cell Biol .. 14, 4465-4474) . El término "operablemente enlazado" se refiere a la asociación de secuencias de ácidos nucleicos en un solo fragmento de ácido nucleico de manera que la fusión de uno se afecte por el otro. Por ejemplo, un promotor se encuentra operablemente enlazado con una secuencia de codificación cuando es capaz de afectar la expresión de esa secuencia de codificación (i.e. que la secuencia de codificación se encuentra bajo el control transcripcional del promotor) . Las secuencias de codificación pueden enlazarse operablemente a secuencias de regulación en orientación de sentido o antisentido . El término "expresión" como se utiliza en la presente, se refiere a la transcripción y acumulación estable de sentido (ARNm) o ARN de antisentiso derivado de un ácido nucleico o polinucleótido . La expresión también puede referirse a la traducción del ARNm a una proteína o polipéptido. El término "cásete" , "cásete de expresión" y "cásete de expresión genética" se refiere a un segmento de ADN que puede insertarse en un ácido nucleico o polinucleótido en sitios de restricción especifica o por recombinación homologa. El segmento de ADN comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido de interés, y el cásete y los sitios de restricción se diseñan para asegurar la inserción del cásete en la estructura de lectura apropiada para la transcripción y traducción. "Cásete de transformación" se refiere a un vector específico que comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido de interés y que tiene elementos en adición al polinucleótido que facilita la transformación de una célula huésped particular. Los casetes, casetes de expresión, casetes de expresión genética y casetes de transformación de la invención también pueden comprender elementos que permitan mejorar la expresión de un polinucleótido que codifica a un polipéptido de interés en una célula huésped. Estos elementos pueden incluir, pero no se limitan a: un promotor, un promotor mínimo, un mej orador, un elemento de respuesta, una secuencia terminadora, una secuencia de poliadenilación y lo similar. Para propósitos de esta invención, el término "conmutación genética" se refiere a la combinación de un elemento de respuesta asociado con un promotor, y un sistema a base de EcR el cual, en la presencia de uno o más ligandos, modula la expresión de un gen en el cual se incorporan el elemento de respuesta y el promotor. Los términos "modular" y "modula" significa inducir, reducir o inhibir la expresión del ácido nucleico o gen, que da como resultado la inducción, reducción o inhibición respectiva de la producción de proteína o polipéptido . Los pl smidos o vectores de acuerdo con la invención pueden comprender además al menos un promotor adecuado para conducir la expresión de un gen en una célula huésped. El término "vector de expresión" significa un vector, plásmido o vehículo diseñado para permitir la expresión de una secuencia de ácidos nucleicos insertada seguida por la transformación en el huésped. El gen clonado i.e. la secuencia de ácidos nucleicos insertada, se coloca usualmente bajo el control de los elementos de control tal como un promotor, un promotor mínimo, un mej orador o lo similar. Las regiones de control de inicio o promotores, que son útiles para conducir la expresión de un ácido nucleico en la célula huésped deseada son numerosas y familiares para aquellos de experiencia en la técnica. Virtualmente, cualquier promotor capaz de conducir estos genes es adecuado para la presente invención incluyendo pero sin limitarse a: promotores virales, promotores bacteriales, promotores animales, promotores de mamífero, promotores sintéticos, promotores constitutivos, promotores específicos de tejido, promotores específicos del desarrollo, promotores inducibles, promotores regulados por luz; CYC1, HIS3, GAL1, GAL4 , GALIO, ADH1, PGK, PH05, GAPDH, ADC1, TRP1 , URA3, LEU2, ENO, TPI, promotores de fosfatasa alcalina (útiles para la expresión en Saecharomyees) ; el promotor AOX1 (útil para la expresión en Pichia) ; ß-lactamasa, promotores lac, ara, tet, trp, IPL, IPR, T7 tac, y tre (útiles en la expresión de Escherichia coli) ; promotores regulados por la luz, específicos de semilla, específicos del polen, específicos de ovario, relacionados a la patogénesis o enfermedad, virus del mosaico de la coliflor 35S, CMV 35S mínimo, virus del mosaico de la vena de mandioca (CsVMV) , proteína que se une a la clorofila a/b, ribulosa 1, 5-bisfosfato carboxilasa, específico brote, específico de raíz, quitinasa, inducible por estrés, virus baciliforme del tungro del arroz, promotor de la super-planta, leucina aminopeptidasa de la papa, nitrato reductasa, manopino sintasa, nopalino sintasa, ubiquitina, proteína zein y antocianina (útil para la expresión en células de planta) ; los promotores de animal y mamífero conocidos en la técnica incluyen, pero no se limitan a: la región promotora SV40 temprana (SV40e) , el promotor contenido en la repetición terminal de longitud 3 ' (LTR) de virus del sarcoma de Rous (RSV) , los promotores del E1A o los genes de adenovirus (Ad) del promotor tardío principal (MLP) , el promotor temprano del citomegalovirus (CMV) , el promotor de la timidin cinasa (TK) del virus de herpes simplex (HSV) , un promotor del factor de agrandamiento 1 alfa (EF1) , un promotor de fosfoglicerato cinasa (PGK) , un promotor de ubiquitina (Ubc) , un promotor de albúmina, la secuencia reguladora del promotor de metalotioneina-L de ratón y regiones de control transcripcional , los promotores ubicuos (HPRT, vimentina, cc-actina, tubulina y lo similar) , los promotores de los filamentos intermedios (desmina, neurofilamentos , queratina, GFAP, y lo similar) , los promotores de los genes terapéuticos (del tipo MDR, CFTR o factor VIII, y lo similar) , promotores relacionados a la patogénesis o enfermedad y promotores que exhiben especificidad de tejido y se han utilizado en animales transgénicos , tal como la región de control del gen de elastasa I que se activa en células acinares de páncreas, región de control del gen de insulina activa en células beta pancreáticas, región de control del gen de inmunoglobulina activa en células linfoides, región de control del virus del tumor mamario en ratón activa en células testiculares , de mama, células linfoides y mast; gen de albúmina, región de control de Apo AI y ??? AII activa en hígado, región de control del gen alfa-fetoproteína activa en hígado, región de control del gen alfa antitripsina 1 activa en el hígado, ¦ región de control del gen beta-globina activa en células mieloides, región de control del gen de proteína de mielina básica activa en células de oligodentrocitos en el cerebro, región de control del gen de la cadena 2 de miosina ligera activa en músculo esquelético, y región de control del gen de la hormona liberadora gonadotrópica activa en el hipotálamo, promotor de piruvato cinasa, promotor de vilina, promotor de la proteína intestinal que se une al ácido graso, promotor de la a-actina de células de músculo liso, y lo similar. Además, estas secuencias de expresión pueden modificarse por la adición de secuencias mej oradoras y reguladoras y lo similar . Los mej oradores que pueden utilizarse en las modalidades de la invención incluyen pero no se limitan a: un mejorador de SV40, un mejorados de citomegalovirus (CMV) , un mejorador del factor de agrandamiento 1 (EF1) , mej oradores de levadura, mejoradores de gen viral y lo similar. Las regiones de control de terminación, i.e. secuencias terminadoras o de poliadenilación, también pueden derivarse de varios genes nativos para los huéspedes preferidos. Opcionalmente, un sitio de terminación puede ser innecesario, sin embargo, es más preferible si se incluye. En una modalidad preferida de la invención, la región de control de terminación puede estar comprendida o derivarse de una secuencia sintética, señal de poliadenilación sintética, señal de poliadenilación tardía SV40, una señal de poliadenilación SV40, una señal de poliadenilación de hormona de crecimiento de bovino (BGH) , secuencias terminadoras virales o lo similar. Los términos "secuencias no de codificación 3 ' " o "región no traducida 3' (UTR) " se refiere a secuencias de ADN localizadas corriente abajo (3') de una secuencia de codificación y pueden comprender secuencias de reconocimiento de poliadenilación [poli (A) ] y otras secuencias que codifican las señales de regulación capaces de afectar el procesamiento del ARNm o la expresión genética. La señal de poliadenilación se caracteriza usualmente por afectar la adición de los tractos del ácido poliadenílico hasta el extremo 3' del precursor de ARNm. "Región reguladora" significa una secuencia de ácidos nucleicos que regula la expresión de una segunda secuencia de ácidos nucleicos. Una región reguladora puede incluir secuencias que son responsables de manera natural de expresar un ácido nucleico particular (una región homologa) o puede incluir secuencias de un origen diferente que son responsables de expresar diferentes proteínas o aún proteínas sintéticas (una región heteróloga) . En particular, las secuencias pueden ser secuencias de genes procarióticos , eucarióticos o virales o derivadas de secuencias que estimulan o reprimen la transcripción de genes en una manera específica o no específica y en una manera inducible o no inducible. Las regiones reguladoras incluyen orígenes de replicación, sitios de empalme ARN, promotores, me oradores , secuencias de terminación transcripcional y secuencias de señal que dirigen el polipéptido hacia la trayectoria secretora de la célula objetivo. Una región reguladora de una "fuente heteróloga" es una región reguladora que no se asocia de manera natural con el ácido nucleico expresado. Incluidas entre las regiones reguladoras heterólogas se encuentran las regiones reguladoras de especies diferentes, regiones reguladoras de genes diferentes, secuencias reguladoras híbridas y secuencias reguladoras que no ocurren en la naturaleza pero que se diseñan por alguien que tiene experiencia en la materia . "Transcripción de ARN" se refiere al producto resultante de la transcripción catalizada por polimerasa de ARN de una secuencia de ADN. Cuando la transcripción del ARN es una copia complementaria perfecta de la secuencia de ADN, se refiere a una transcripción primaria o puede ser una secuencia de ARN derivada del procesamiento post-transcripcional de la transcripción primaria y se refiere como el ARN maduro. "ARN mensajero (ARNm)" se refiere al ARN que se encuentra dentro de los intrones y que puede traducirse en proteínas por la célula. "ADNc" se refiere al ADN bicatenario que es complementario y se deriva del ARNm. ARN" de "sentido" se refiere a la transcripción del ARN que incluye el ARNm y así puede traducirse en proteína por la célula. ARN de "antisentido" se refiere a la transcripción del ARN que es complementaria a toda o parte de la transcripción primaria objetivo o ARNm y que bloquea la expresión de un gen objetivo. La complementariedad de un ARN de antisentido puede ser con cualquier parte de la transcripción genética específica, i.e. en la secuencia no de codificación 5', la secuencia no de codificación 3' o la secuencia de codificación. "ARN funcional" se refiere al ARN de antisentido, ARN ribosomal u otro ARN que ya no ha traducido un efecto en los procesos celulares. Un "polipeptido" es un compuesto polimérico comprendido de residuos de aminoácido covalentemente enlazados . Los aminoácidos tienen la siguiente estructura general . H -C-COOH I NH2 Los aminoácidos se clasifican en siete grupos sobre la base de la cadena lateral R: (1) cadenas laterales alifáticas, (2) cadenas laterales que contienen un grupo hidroxílico (OH) , (3) cadenas laterales que contienen átomos de azufre, (4) cadenas laterales que contienen un grupo acidico o amida, (5) cadenas laterales que contienen un grupo básico, (6) cadenas laterales que contienen un anillo aromático y (7) prolina, un imino ácido en el que la cadena lateral se fusiona al grupo amino . Un polipeptido de la invención comprende preferentemente al menos aproximadamente 14 aminoácidos. Una "proteína" es un polipeptido que realiza un rol estructural o funcional en una célula viva. Un "polipeptido aislado" o "proteína aislada" es un polipeptido o proteína que se encuentra substancialmente libre de aquellos compuestos que se asocian normalmente con esta en el estado natural (e.gr., otras proteínas o polipéptidos, ácido nucleicos, carbohidratos, lípidos) . "Aislado" no significa excluir mezclas artificiales o sintéticas con otros compuestos o la presencia de impurezas que no interfieren con la actividad biológica y que pueden estar presentes, por ejemplo, debido a purificación incompleta, adición de estabilizadores o que componen una preparación farmacéuticamente aceptable. Un "polipéptido mutante por substitución" o un "mutante por substitución" se entenderá que significa un polipéptido mutante que comprende una substitución de al menos un (1) aminoácido tipo silvestre o que ocurre de manera natural con un aminoácido diferente con relación al polipéptido tipo silvestre o que ocurre de manera natural. Un polipéptido mutante por substitución puede comprender sólo una (1) substitución de aminoácido tipo silvestre o que ocurre de manera natural y puede referirse como un polipéptido "mutante de punto" o un "mutante de un solo punto". Alternativamente, un polipéptido mutante por substitución puede comprender una substitución de dos (2) o más aminoácidos tipo silvestre o que ocurren de manera natural con dos o más aminoácidos con relación al polipéptido tipo silvestre o que ocurre de manera natural. De acuerdo con la invención, un polipéptido de dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución comprende una substitución de al menos un (1) aminoácido tipo silvestre o que ocurre de manera natural con un aminoácido diferente con relación al polipéptido de dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B tipo silvestre o que ocurre de manera natural . En donde el polipéptido mutante por substitución comprende una substitución de dos (2) o más aminoácidos tipo silvestre o que ocurren de manera natural, esta substitución puede comprender ya sea un número equivalente de aminoácidos tipo silvestre o que ocurren de manera natural cancelados por la substitución, i.e., 2 aminoácidos tipo silvestre o que ocurren de manera natural reemplazados con dos aminoácidos no de tipo silvestre o que no ocurren de manera natural o un número no equivalente de aminoácidos tipo silvestre cancelados por la substitución, i.e., 2 aminoácidos de tipo silvestre se reemplazan con un aminoácido no tipo silvestre (una substitución + mutación de cancelación) o 2 aminoácidos de tipo silvestre se reemplazan con 3 aminoácidos no de tipo silvestre (una substitución + mutación de inserción).. Los mutantes por substitución pueden describirse utilizando un sistema de nomenclatura abreviado para indicar el residuo de aminoácido y el número reemplazado dentro de la secuencia de polipéptidos de referencia y el nuevo residuo de aminoácido substituido. Por ejemplo, un mutante por substitución en el cual el vigésimo segundo (20avo) residuo de aminoácido de un polipéptido se substituye puede abreviarse como "x20z", en donde "x" es el aminoácido a reemplazarse, "20" es la posición del residuo de aminoácido o número dentro del polipéptido y "z" es el nuevo aminoácido substituido. Por lo tanto, un mutante por substitución intercambiablemente abreviado como "E20A" o "Glu20Ala" indica que el mutante comprende un residuo de alanina (comúnmente abreviado en la técnica como "A" o "Ala") en lugar del ácido glutámico (comúnmente abreviado en la técnica como "e" o "Glu") en la posición 20 del polipéptido. Una mutación por substitución puede hacerse mediante cualquier técnica para mutagénesis conocida en la técnica, incluyendo pero sin limitarse a, mutagénesis dirigida al sitio in vitro (Hutchinson, C. et al., 1978, J. Biol. Chem. 253:6551; Zoller y Smith, 1984, DMA 3: 479-488; Oliphant et al., 1986, Gene 44: 177; Hutchinson et al., 1986, Proc. Nati. Acad. Sci . U.S.A. 83: 710), uso de enlazadores TAB® (Pharmacia) , digestión de endonucleasa de restricción/ cancelación y substitución de fragmento, mutagénesis mediada por PCR/dirigida al oligonucleótido y lo similar. Se prefieren las técnicas en base a PCR para la mutagénesis dirigida al sitio (ver Higuchi, 1989, "Utilizando PCR para Diseñar ADN" , en PCR Technology: Principies and Applications for DNA Amplification, H. Erlich, ed. , Stockton Press, Capítulo 6, p 61-70) . "Fragmento" de un polipeptido de acuerdo con la invención se entenderá que significa un polipeptido cuya secuencia de aminoácido es más corta que la del polipeptido de referencia y que comprende, sobre la porción completa con estos polipeptido de referencia, una secuencia de aminoácidos idéntica. Tales fragmentos, pueden, cuando sea apropiado, incluirse en un polipeptido mayor del cual ellos son una parte. Tales fragmentos de un polipéptido de acuerdo con la invención pueden tener una longitud de al menos 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 13, 14, 15, 16, 17,18, 19, 20, 21, 22, 25, 26, 30, 35, 40, 45, 50, 100, 20 , 240 o 300 aminoácidos. Una "variante" de un polipéptido o proteína es cualquier análoga, fragmento, derivado o mutante que se deriva de un polipéptido o proteína y que retiene al menos una propiedad biológica del polipéptido o proteína. En la naturaleza pueden existir diferentes variantes del polipéptido o proteína. Estas variantes pueden ser variaciones alélicas caracterizadas por diferencias en las secuencias de nucleótido del gen estructural que codifican para la proteína o puede involucrar empalme diferencial o modificaciones post-translacionales . El técnico experto puede producir variantes que tengan substituciones, cancelaciones, adiciones o reemplázaos de uno o múltiples aminoácidos. Estas variantes pueden incluir ínter alia: (a) variantes en la cuales uno o más residuos de aminoácido se substituyen con aminoácidos conservadores o no conservadores, (b) variantes en las cuales se agrega uno o más aminoácidos al polipéptido o proteina, (c) variantes en las cuales uno o más aminoácidos incluyen un grupo substituyente y (d) variantes en las cuales el polipéptido o proteina se fusiona con otro polipéptido tal como albúmina de suero. Las técnicas para obtener estas variantes, incluyendo técnicas genéticas (supresiones, cancelaciones, mutaciones, etc.), químicas y enzimáticas, se conocen por personas que tienen experiencia ordinaria en la técnica. Una variante de polipéptido comprende preferentemente al menos aproximadamente 14 aminoácidos . Una "proteína heteróloga" se refiere a una proteína producida no de manera natural en la célula. Una "proteína madura" se refiere a un polipéptido procesado post-translacionalmente ; i.e." uno del cual se ha retirado cualquier pre- o propéptidos presentes en el producto de translación primario. Proteína "precursora" se refiere al producto primario de la traducción del ARNm; i.e. con pre- y propéptidos aún presentes. El Pre- y los propéptidos pueden ser, pero no se limitan a señales de localización intracelular . El término "péptido de señal" se refiere a un polipéptido de terminal amino que precede a la proteína madura secretada. El péptido de señal se desdobla y por lo tanto no se encuentra presente en la proteína madura. Los péptidos de señal tienen la función de dirigir y translocar las proteínas secretadas a través de la membranas celulares. El péptido de señal también se refiere como proteína de señal . Una "secuencia de señal" se incluye al inicio de la secuencia de codificación de una proteína a expresarse en la superficie de una célula. Esta secuencia codifica un péptido de señal, N-terminal para el polipéptido maduro, que dirige la célula huésped para translocar el polipéptido. El término "secuencia de señal de translocación" se utiliza en la presente para referirse a esta clasificación de secuencia de señal . Las secuencias de señal de translocación pueden encontrarse asociadas con una variedad de proteínas nativas para eucariotes y procariotes y con frecuencia son funcionales en ambos tipos de organismos. El término "homología" se refiere al porcentaje de identidad entre dos polinucleótidos o dos residuos de polipéptido. La correspondencia entre la secuencia de un residuo a otro puede determinarse por técnicas conocidas en la materia. Por ejemplo, la homología puede determinarse por una comparación directa de la información de secuencia entre dos moléculas de polipéptido al alinear la información de secuencia y utilizar programas de computadora ya disponibles.

De manera alternativa, la homología puede determinarse por hibridación de polinucleótidos bajo condiciones que forman duplos estables entre regiones homologas, seguido por la digestión con nucleasa(s) específica (s) de un solo filamento y la determinación del tamaño de los fragmentos digeridos. Como se utiliza en la presente, el término "homólogo" en todas sus formas gramaticales y variaciones ortográficas se refiere a la relación entre proteínas que poseen un "origen evolutivo común" incluyendo proteínas de superfamilias (e.g., la superfamilia de inmunoglobulinas) y proteínas homologas de diferentes especies {e.g., cadena ligera de miosina, etc.) (Reeck et al., 1987, Cell 50: 667) . Tales proteínas (y sus genes de codificación) tienen homología de secuencia, según se refleja por su alto grado de similitud de secuencia. Sin embargo, en uso común y en la presente solicitud, el término "homólogo" cuando se modifica con un adverbio tal como "altamente" , puede referirse a la similitud de secuencia y no a un origen evolutivo común. De acuerdo con lo anterior, el término "similitud de secuencia" en todas sus formas gramaticales se refiere al grado de identidad o correspondencia entre secuencias de ácidos nucleicos o aminoácidos de proteína que pueden o no compartir un origen evolutivo común (ver Reeck et al., 1987, Cell 50 : 667) . En una modalidad específica, dos secuencias de ADN son "substancialmente homologas" o "substancialmente similares" cuando al menos aproximadamente 50% (preferentemente al menos 75% y más preferentemente al menos aproximadamente 90% o 95%) de los nucleótidos se igualan a la longitud definida de las secuencias de ADN. Las secuencias que son substancialmente homologas pueden identificarse al comparar las secuencias utilizando software estándar disponible en bancos de datos de secuencias o en un experimento de hibridación Southern bajo, por ejemplo, condiciones rigurosas como se define por ese sistema particular. Definir, condiciones de hibridación apropiadas se encuentra dentro de la experiencia de la técnica. Ver, e.g., Sambrook et al., 1989, supra Como se utiliza en la presente "substancialmente similar" se refiere a fragmentos de ácido nucleico en donde los cambios en una o más bases de nucleótido dan como resultado la substitución de uno o más aminoácidos, pero no afectan las propiedades funcionales de la proteína codificada por la secuencia de ADN. "Substancialmente similar" también se refiere a los fragmentos de ácido nucleico en donde los cambios en una o más bases de nucleótido no afecta la capacidad del fragmento de ácido nucleico para mediar la alteración de la expresión genética mediante tecnología de antisentido o co-supresión . "Substancialmente similar" también se refiere a modificaciones de los fragmentos de ácido nucleico de la presente invención tal como cancelación o inserción de una o más bases de nucleótido que no afectan substancialmente las propiedades funcionales de la transcripción resultante. Se entiende por lo tanto que la invención comprende más de las secuencias ej emplificativas específicas . Cada una de las modificaciones propuestas se encuentran muy dentro de la experiencia rutinaria en la técnica, como es la determinación de la retención de la actividad biológica de los productos codificados. Además, el técnico experto reconoce que las secuencias substancialmente similares comprendidas por esta invención también se definen por su capacidad para hibridizarse , bajo condiciones de rigurosidad (0.1X SSC, 0.1% SDS, 65°C y lavado con 2X SSC, 0.1% SDS seguido por 0.1X SSC, 0.1% SDS), con las secuencias ejemplificadas en la presente. Los fragmentos de ácido nucleico substancialmente similares de la presente invención son aquellos fragmentos de ácido nucleico cuyas secuencias de ADN son al menos 70% idénticas a la secuencia de ADN de los fragmentos de ácido nucleico aquí reportados. Los fragmentos de ácido nucleico substancialmente preferidos de la presente invención son aquellos fragmentos de ácido nucleico cuyas secuencias de ADN son al menos 80% idénticas a la secuencia de ADN de los fragmentos de ácido nucleico aquí reportados. Los fragmentos de ácido nucleico más preferidos son al menos 90% idénticos a la secuencia de ADN de los fragmentos de ácido nucleico aquí reportada. Aún más preferidos, son los fragmentos de ácido nucleico que son al menos 95% idénticos a la secuencia de ADN de los fragmentos de ácido nucleico aquí reportada. Dos secuencias de aminoácido son "substancialmente homologas" o "substancialmente similares" cuando más de aproximadamente 40% de los aminoácidos son idénticos, o más del 60% son similares (funcionalmente idénticos) . Preferentemente, las secuencias similares u homologas se identifican poe el alineamiento utilizando, por ejemplo, el programa pileup GCG (Genetics Computer Group, Programa Manual para el Paquete GCG, Versión 7, Madison, Wisconsin) . El término "correspondiente a" se utiliza en la presente para referirse a secuencias similares u homologas, ya sea que la posición exacta sea idéntica o diferente de la molécula para la cual se mide la similitud u homología. Un alineamiento de secuencia de ácidos nucleicos o aminoácidos puede incluir espacios. Así, el término "correspondiente a" se refiere a la similitud de secuencia, y no a la numeración de los residuos de aminoácido o bases de nucleótidos. Una "porción substancial" de una secuencia de aminoácidos o nucleótidos comprende suficiente secuencia de aminoácidos de un polipéptido o de la secuencia de nucleótidos de un gen para identificar putativamente a ese polipéptido o gen para putativamente identificar ese polipéptido o gen, ya sea por evaluación manual de la secuencia por alguien de experiencia en la técnica, o por comparación e identificación de secuencias automatizada por computadora utilizando algoritmos tales como BLAST (Basic Local Alignment Search Tool; Altschul, S.F., et al., (1993) J. Mol. Biol.. 215: 403-410; ver también www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/) . En general, es necesario una secuencia de diez o más aminoácidos contiguos o treinta o más nucleótidos a fin de identificar putativamente un polipéptido o secuencia de ácidos nucleicos como homologa a una proteína o gen conocido. Además, con respecto a secuencias de nucleótidos, las sondas de oligonucleótidos específicas de gen que comprenden 20-30 nucleótidos contiguos pueden utilizarse en métodos de identificación de gen dependientes de la secuencia (i.e. hibridación Southern) y aislamiento (e.gr., hibridación in si tu de colonias bacteriales o placas de bacteriófagos) . Además, los oligonucleótidos cortos de 12-15 bases pueden utilizarse como iniciadores de amplificación en PCR con el fin de obtener un fragmento de ácido nucleico particular que comprende los iniciadores. De acuerdo con lo anterior, una "porción substancial" de una secuencia nucleótida comprende suficiente secuencia para identificar y/o aislar específicamente un fragmento de ácido nucleico que comprende la secuencia. El término "porcentaje de identidad", como se conoce en la materia, es una relación entre dos o más secuencias de polipéptidos o dos o más secuencias de polinucleótidos , según se determina al comparar las secuencias. En la materia, "identidad" también significa el grado de relación de secuencia entre las secuencias de polipéptidos o polinucleótidos, según pueda ser el caso, como se determinó por el acoplamiento entre cadenas de tales secuencias. La "identidad" y "similitud" puede calcularse fácilmente por métodos conocidos, incluyendo pero sin limitarse a aquellos descritos en: Computational Molecular Biology (Lesk, A.M. , ed. ) Oxford University Press, New York (1988) ; Biocomputing: Informatics and Genome Projects (Smith, D. W., ed.) Academic Press, New York (1993); Computer Analysís of Seguence Data, Part I (Griffin, A. M. y Griffin, H. G. , eds . ) Humana Press, New Jersey (1994); Sequence Analysís in Molecular Biology (von Heinje, G. , ed.) Academic Press (1987) ; y Sequence Analysis Primer (Gribskov, M. y Devereux, J. , eds.) Stockton Press New York (1991). Los métodos preferidos para determinar la identidad se diseñan para dar el mejor acoplamiento entre las secuencias probadas. Los métodos para determinar la identidad y similitud se codifican en programas de computadora públicamente "disponibles. Los cálculos de los alineamientos de secuencia y el porcentaje de identidad pueden realizarse utilizando el programa Megalign de la serie de computación de bioinformáticos LASERGENE (DNASTAR Inc, Madison, WI) . El alineamiento múltiple de las secuencias puede realizarse utilizando el método de alineamiento Clustal (Higgins y Sharp (1989) CABIOS: 5:151-153) con los parámetros preestablecidos (PENALIDAD DE ESPACIO=10, PENALIDAD DE LONGITUD DE ESPACIO=10) . Pueden seleccionarse los parámetros preestablecidos para alineamientos en pares utilizando el método Clustal: KTUPLE 1, PENALIDAD DE ESPACI0=3 , VENTANA=5 y DIAGONALES SALVADAS=5. El término "software de análisis de secuencia" se refiere a cualquier algoritmo de computadora o programa de software que es útil para el análisis de las secuencias de nucleótidos o aminoácidos. El "software de análisis de secuencia" puede estar comercialmente disponible o desarrollarse de manera independiente. El software típico de análisis de secuencia incluirá pero no se limitará a la serie de programas GCG (Wisconsin Package Versión 9.0, Genetics Computer Group (GCG) , Madison, WI) , BLASTP, BLASTN, BLASTX, (Altschul et al., J. Mol. Biol. 215: 403-410 (1990), y DNASTAR (DNASTAR, Inc. 1228 S. Park St , Madison, WI 53715 EUA) . Dentro del contexto de esta solicitud se entenderá que en donde se utiliza el software de análisis de secuencia para el análisis, los resultados del análisis se basarán en los "valores preestablecidos" del programa de referencia a menos que se especifique de otra manera. Como se utiliza en la presente "valores preestablecidos" significará cualquier conjunto de valores o parámetros que se encuentren cargados originalmente con el software cuando se inicia por primera vez . Los "genes sintéticos" pueden instalarse a partir de bloques de construcción de oligonucleótidos que se sintetizan químicamente utilizando procedimientos conocidos por aquellos de experiencia en la materia. Estos bloques de construcción se ligan y se fortalecen para formar segmentos de genes que después se instalan enzimáticamente para construir los genes completos. "Químicamente sintetizado", según se refiere a una secuencia de ADN, significa que los nucleótidos componentes se instalaron in vi tro. La síntesis química manual de ADN puede realizarse utilizando procedimientos bien establecidos, o la síntesis química automatizada puede realizarse utilizando una de varias máquinas comercialmente disponibles . De acuerdo con lo anterior, los genes pueden diseñarse para la expresión genética óptima en base a la optimización de las secuencias de nucleótidos para reflejar la desviación del codón de la célula huésped. El técnico experto aprecia la probabilidad de la expresión genética exitosa si el uso del codón se desvía hacia aquellos codones favorecidos por el huésped. La determinación de los codones preferidos puede basarse en un estudio de genes derivado de la célula huésped en donde la información de secuencia se encuentra disponible. Como se utiliza en la presente, dos o más sistemas de regulación genética operable de manera individual se mencionan para ser "ortogonales" cuando: a) la modulación de cada uno de los sistemas dados por su ligando respectivo, en una concentración seleccionada, da como resultado un cambio medible en la magnitud de la expresión del gen de ese sistema, y b) el cambio es estadísticamente diferente de manera significativa al cambio en la expresión de todos los otros sistemas operables simultáneamente en la célula, tejido u organismo, sin importar la simultaneidad o secuencialidad de la modulación real. Preferentemente, la modulación de cada sistema de regulación genética operable de manera individual afecta un cambio en la expresión genética al menos 2 veces más que todos los otros sistemas operables en la célula, tejido u organismo. Más preferentemente, el cambio es al menos 5 veces mayor. Aún más preferentemente, el cambio es al menos 10 veces mayor. Aún más preferentemente, el cambio es al menos 100 veces mayor. Aún todavía más preferentemente, el cambio es al menos 500 veces mayor. Idealmente, la modulación de cada uno de los sistemas dados por su ligando respectivo en una concentración seleccionada da como resultado un cambio medible en la magnitud de expresión del gen de ese sistema y ningún cambio medible en la expresión de todos los otros sistemas operables en la célula, tejido u organismo. En tales casos, el sistema múltiple de regulación genética inducible se dice que es "totalmente ortogonal" . La presente invención es útil para la búsqueda de ligandos ortogonales y sistemas de expresión genética a base de receptores ortogonales tales como aquellos descritos en la solicitud co-pendiente de E.U. 60/237,446, que se incorpora en la presente mediante la referencia en su totalidad . SISTEMAS DE MODULACIÓN DE EXPRESIÓN GENÉTICA DE LA INVENCIÓN Asi, los Solicitantes han identificado en la presente residuos de aminoácido que afectan la sensibilidad y magnitud de inducción del ligando en el sistema de expresión genética inducible a base de receptores nucleares del Grupo B. Los Solicitantes describen en la presente la construcción de los receptores nucleares del Grupo B que comprenden mutaciones de substitución (referidas en la presente como "imitantes por substitución") en estos residuos críticos y la demostración de que estos receptores nucleares mutantes por substitución son útiles en los métodos para modular la expresión genética. Como se presenta aquí, los nuevos receptores nucleares mutantes por substitución de los Solicitantes y su uso en un sistema de expresión genética inducible a base de receptores nucleares proporciona un sistema mejorado de expresión genética inducible en células huésped tanto procarióticas como eucarióticas en las cuales la sensibilidad y magnitud de transactivación del ligando puede seleccionarse según se desee, dependiendo de la aplicación . Así, la presente invención se refiere a nuevos polinucleótidos y polipéptidos del receptor nuclear del Grupo B mutantes por substitución, a un sistema de expresión genética inducible a base del receptor nuclear que comprende tales polinucleótidos y polipéptidos del receptor nuclear del Grupo B mutado, y los métodos para modular la expresión de un gen dentro de una célula huésped utilizando tal sistema de expresión genética inducible a base de receptores nucleares. En particular, la presente invención se refiere a un sistema de modulación de expresión genética que comprende al menos un cásete de expresión genética que es capaz de expresarse en una célula huésped que comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido que comprende un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución.

Preferentemente, el dominio de unión de ligando de receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución es de un receptor X retinoide a, un receptor X retinoide ß, un receptor X retinoide ?, una proteína de unión II región H-2 (H-2 IIVP) , el co-regulador-1 del Receptor nuclear (RcoR-1) , la proteína de ultraespiráculo, el receptor nuclear 2C1 y el factor de corion 1 (CF-1) . Más preferentemente, el dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución es de un receptor X retinoide a de vertebrado, receptor X retinoide pde vertebrado, receptor X retinoide ? de vertebrado o un receptor X retinoide de invertebrado. En una modalidad específica, el sistema de modulación de expresión genética comprende a) un primer cásete de expresión genética que comprende un polinucleótido que codifica un primer polipéptido que comprende un dominio de transactivación, un dominio de unión de ADM que reconoce un elemento de respuesta asociado con un gen cuya expresión se va a modular; y un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución y b) un segundo cásete de expresión genética que comprende un polinucleótido que codifica un segundo polipéptido que comprende un dominio de unión al ligando de receptor nuclear. El sistema de modulación de expresión genética puede comprender además un tercer cásete de expresión genética que comprende: i) un elemento de respuesta reconocido por el dominio de unión al ADN del primer polipéptido; ii) un promotor que se activa por el dominio de transactivación del primer polipéptido; y iii) un gen cuya expresión se va a modular. En una modalidad preferida, el segundo polipéptido comprende un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo H seleccionado del grupo que consiste del dominio de unión del ligando de un receptor de ecdisona (EcR) , un receptor ubicuo (UR) , un receptor huérfano 1 (OR-1) , un NER-1, un receptor que interactúa con la proteína 15 (RIP-15) un receptor X de hígado (LXRct, un receptor X farnesoide (FXR) , un receptor que interactúa con la proteína 14 (RIP-14) y un receptor de farnesol (HRR-1) . En otra modalidad específica, el sistema de modulación de expresión genética comprende un primer cásete de expresión genética que comprende un polinucleótido que codifica un primer polipéptido que comprende un dominio de unión a ADW que reconoce un elemento de respuesta asociado con un gen cuya expresión se va a modular y un primer dominio de unión del ligando de receptor nuclear, y un segundo cásete de expresión genética que comprende un polinucleótido que codifica un segundo polipéptido que comprende un dominio de transactivación y un segundo dominio de unión del ligando del receptor nuclear, en donde uno de los dominios de unión de ligandos del receptor nuclear es un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución. En una modalidad preferida, el primer polipéptido se encuentra substancialmente libre de un dominio de transactivación y el segundo polipéptido se encuentra substancialmente libre de un dominio de unión a 7ADN. Para propósitos de esta invención "substancialmente libre" significa -que la proteína en cuestión no contiene una secuencia suficiente del dominio en cuestión para proporcionar activación o actividad de unión. El sistema de modulación de expresión genética puede comprender además un tercer cásete de expresión genética que comprende: i) un elemento de respuesta reconocido por el dominio de unión de ADN del primer polipéptido del primer cásete de expresión genética; ii) un promotor que' se activa por el dominio de transactivación del segundo polipéptido codificado del segundo cásete de expresión genética; y iii) un gen cuya expresión se va a modular. En otra modalidad específica, el sistema de modulación de expresión genética comprende un cásete de expresión genética que comprende un polinucleótido que codifica un primer polipéptido que comprende un dominio de unión de ADN que reconoce un elemento de respuesta asociado con un gen cuya expresión se va a modular y un dominio de unión del ligando del receptor nuclear, y un segundo cásete de expresión genética que comprende un polinucleótido que codifica un segundo polipéptido que comprende un dominio de transactivación y un dominio de unión del ligando del receptor nuclear, en donde uno de los dominios de unión del ligando del receptor nuclear es un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución. En una modalidad preferida el primer polipéptido se encuentra substancialmente libre de un dominio de transactivación y el segundo polipéptido se encuentra substancialmente libre de un dominio de unión de ADN. Para propósitos de la invención, "substancialmente libre" significa que la proteína en cuestión no contiene una secuencia suficiente del dominio en cuestión para proporcionar la activación o actividad de unión. El sistema de modulación de expresión genética comprende además un tercer cásete de expresión genética que comprende: i) un elemento de respuesta reconocido por el dominio de unión de ADN del primer polipéptido del primer cásete de expresión genética; ii) un promotor que se activa por el dominio de transactivación del segundo polipéptido del segundo cásete de expresión genética; y iii) un gen cuya expresión se va a modular. En una modalidad preferida, cuando solo un dominio de unión del ligando del receptor nuclear es un dominio de unión del ligando del Grupo B que comprende una mutación por substitución, el otro dominio de unión del ligando del receptor nuclear puede ser de cualquier otro receptor nuclear que forma un dímero con el dominio de unión del ligando del Grupo B que comprende una mutación por substitución. En una modalidad específica, el dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución es un dominio de unión del ligando del receptor X retinoiode que comprende una mutación por substitución y el otro dominio de unión del ligando del receptor nuclear (socio) es un receptor nuclear del Grupo H. En una modalidad preferida el dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo H se selecciona del grupo que consiste de dominios de unión de ligando de un receptor de ecdisona (EcR) , un receptor ubicuo (UR) , un receptor huérfano 1 (0R-1), un NER-1, un receptor que interactúa con la proteína 15 (RIP-15) un receptor ß de hígado (LXRP) , un receptor de hormona esteroide similar a proteína (RLD-1) , un receptor X de hígado (LXR) , un receptor X de hígado (LRXa.) , un receptor X farnesoide (FXR) , un receptor que interactúa con la proteína 14 (RIP-14) y un receptor de farnesol (HRR-1) . El dominio de unión del ligando (LBD) del receptor de ecdisona (EcR) puede ser de un EcR de invertebrado, preferentemente seleccionado de la clase de EcR de Artrópodo. Preferentemente el EcR se selecciona del grupo que consiste de un EcR de Lepidóptero, un ECR de Díptero, un EcR de Ortóptero, un EcR de Homóptero y un EcR de Hemíptero. Más preferentemente, el dominio de unión del ligando de EcR para utilizarse en la presente invención es de un EcR de gusano del brote del abeto Choristoneura fumiferana ("CfEcR"), un EcR de escarabajo Tenebrio molitor ("TmEcR"), un EcR. de Manduca sexta ( "MsEcR" ) un EcR de Heliothies virescens ( "HvEcR" ) , un EcR de mosquito rojo Chironomus tentans ("CtEcR"), un EcR de gusano de seda Bo bix morí ( "BmEcR" ) , un EcR de mariposa Bicyclus anynana ( "BanEcR" ) , un EcR de mariposa común Junonia coenia ( "JcEcR" ) , un EcR de mosca de la f uta Drosophila melanogaster ("DmEcR"), un EcR de mosquito Aedes aegypti ( "AaEcR" ) , un EcR de moscón Lucilia capitata ( "LcEcR" ) , un EcR de moscón Lucilia cuprina ("LucEcR"), un EcR de moscón Calliphora vicinia ("CvEcR"), un EcR de la mosca del Mediterráneo Ceratitis capitata ( "CcEcR" ) , un EcR de saltamontes Locusta migratoria ( "LmEcR" ) , un EcR de áfido Myzus persicae ( "MpEcR" ) , un EcR de cangrejo violinista Celuca pugilator ("CpEcR"), un EcR de garrapata estrella solitaria Amblyomma americanum ("AmaEcR"), un EcR de mosca blanca Bamecia argentifoli ("BaEcR" SEQ ID NO: 112), o un EcR de saltamontes Nephotetix cincticeps ("NcEcR", SEQ ID NO: 113). Más preferentemente, el LBD es de un CfEcR, un DmEcR o un AmaEcR. Un dominio de unión del ligando del receptor nuclear puede comprende una mutación de truncamiento, una mutación por cancelación, una segunda mutación por substitución u otra modificación. En una modalidad específica, el LBD es de un polipéptido de EcR tuneado. El truncamiento del polipéptido de EcR da como resultado una cancelación de al menos 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, .75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 205, 210, 215, 220, 225, 230, 235, 240, 245, 250, 255, 260 o 265 aminoácidos. Preferentemente, el truncamiento del polipéptido de EcR da como resultado una cancelación de al menos un dominio parcial de polipéptido. Más preferentemente, el truncamiento del polipéptido de EcR da como resultado una cancelación de al menos un dominio completo de polipéptido. En una modalidad específica, el truncamiento del polipéptido de EcR da como resultado una cancelación de al menos un dominio A/B, un dominio C, un dominio D, un dominio F, un dominio A/B/C, unos dominios A/B/1/2-C, unos dominios A/B/C/D, unos dominios A/B/C/D/F, unos dominios A/B/F, unos dominios A/B/C/F, un dominio parcial E, o un dominio parcial F. También puede realizarse una combinación de varias cancelaciones de dominios completos y parciales . En una modalidad específica, el gen cuya expresión se va a modular es un gen homólogo con respecto a la célula huésped. En otra modalidad específica, el gen cuya expresión se va a modular es un gen heterólogo con respecto a la célula huésped . Los ligandos para utilizarse en la presente invención como se describe abajo, cuando se combinan con el dominio de unión del ligando del (de los) receptor (es) nuclear (es) , los cuales a su vez se unen al elemento de respuesta enlazado a un gen, proporciona (n) los medios para la regulación temporal externa de la expresión del gen. El mecanismo de unión o el orden en el que los diversos componentes de la invención se unen entre si, es decir, por ejemplo, el dominio de unión ligando a ligando, el dominio de unión al ADN al elemento de respuesta, el dominio de transactivación al promotor, etc. no es crítico. En un ejemplo específico, la unión del ligando al dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B y opcionalmente su socio de dominio de unión del ligando del receptor nuclear permite la expresión o supresión del gen. Este mecanismo no excluye el potencial para la unión del ligando al receptor nuclear del Grupo B (GBNR) o su socio, y la formación resultante de los complejos de homodxmero activo {e.g., GBNR + GBNR o socio + socio) . Preferentemente, uno o más de los dominios del receptor se varía produciendo una conmutación genética híbrida. Típicamente, uno o más de los tres dominios, un dominio de unión a ADN (DBD) , un dominio de unión a ligando (LBD) , y dominio de transactivación (AD) , puede seleccionarse a partir de una fuente diferente a la fuente de los otros dominios de manera que los genes híbridos y las proteínas híbridas resultantes se optimizan en la célula u organismo huésped seleccionado para la actividad de transactivación, unión complementaria del ligando, y reconocimiento del elemento de respuesta específica. Además, el elemento de respuesta por si mismo puede modificarse o substituirse con elementos de respuesta para otros dominios de proteína de unión de ADN tal como la proteina Gal-4 de levadura (ver Sdo ski, et al., (1988), Nature, 335: 563-564) o la proteína LexA de Escherichia coli (ver Brent y Ptashne (1985), Cell, 43:729-736), o los elementos de respuesta sintética específicos para interacciones dirigidas con proteínas diseñadas, modificadas y seleccionadas para tales interacciones específicas (ver, por ejemplo, Kim, et al.,. (1997), Proc. Nati. Acad. Sci . USA, 94:3616-3620) para adaptar los receptores híbridos. Otra ventaja para sistemas de dos híbridos es que permiten seleccionar un promotor utilizado para conducir la expresión genética de acuerdo con un resultado final deseado. Tal doble control puede ser particul rmente importante en áreas de terapia genética, especialmente cuando las proteínas citotóxicas se producen, debido tanto a la sincronización de la expresión así como a las células en donde la expresión que ocurre puede controlarse. Cuando los genes, operablemente enlazados a un promotor adecuado, se introducen en las células del sujeto, la expresión de los genes exógenos se controla por la presencia del sistema de esta invención. Los promotores pueden regularse constitutiva o induciblemente o pueden ser específicos de tejido (es decir, se expresan sólo en un tipo de célula particular) o específico de ciertas etapas de desarrollo del organismo. El receptor X retinoide es un miembro de la superfamilia de receptores nucleares y clasificado en la subfamilia 2, Grupo B (referido en la presente como "receptores nucleares del Grupo B" ) . Los miembros de cada grupo comparten 40-60% de identidad de aminoácidos en el dominio E (unión al ligando) (Laudet et al., Un Sistema de Nomenclatura Unificado para la Superfamilia de Receptores Nucleares, 1999, Cell 97: 161-163). Además del receptor X retinoide, otros miembros de esta superfamilia 2 de receptores nucleares, Grupo B incluyen: proteína de unión de la región II H-2 (H-2RIIBP) , Receptor Nuclear co-regulador- 1 (RcoR-1) proteina de ultraespiráculo (USP) receptor nuclear 2C1 y factor de corion 1 (CF-1) . Los Solicitantes demostraron previamente que un RXR de vertebrado en sociedad con un sistema de expresión genética a base del receptor de ecdisona proporciona un sistema de expresión genética inducible en células de levadura y mamífero que se caracterizan por la sensibilidad del ligando y magnitud de transactivación incrementada (ver Solicitud pendiente PCT/US01/09050) . Recientemente los solicitantes han mostrado que un RXR que un RXR de invertebrado puede funcionar tan bien o mejor que un RXR de vertebrado en un sistema de expresión genética a base del receptor de ecdisona al incrementar la transactivación genética y la sensibilidad del ligando del sistema de expresión genética (ver solicitud pendiente de US 60/294, 814) . Como se describe en la presente, los solicitantes han identificado ahora residuos de aminoácido críticos dentro del dominio de unión del ligando de RXRs que afecta la transactivación y la sensibilidad del ligando de un sistema de expresión a base de receptores nucleares. En los Ejemplo 2-4 infra, los solicitantes han identificado aminoácidos de receptores X retinoide de invertebrado (ver los Ejemplo 2 y 3) y proteínas de ultraespiráculo de invertebrado (ver Ejemplo 4) los dominios de unión del ligando que difieren de los aminoácidos de los RXRs de vertebrado. Los solicitantes hicieron mutantes de substitución dentro de los dominios de unión del ligando RXR al reemplazar el aminoácido RXR de vertebrado tipo silvestre con el de un RXR o USP de invertebrado en su posición análoga y probaron estos mutantes de substitución para su capacidad de transactivar la expresión genética en un sistema de expresión genética inducible a base de receptores nucleares. Como se presentó en los Ejemplos de la presente, los Solicitantes han identificado ahora varios nuevos mutantes de substitución del dominio de unión de ligando del receptor X retinoide que exhiben niveles inesperados y sorprendentes de la actividad de transactivación y/o sensibilidad del ligando.

Dada la cercana relación del receptor X retinoide a otros receptores nucleares del Grupo B, las mutaciones de substitución del dominio de unión del ligando del receptor X retinoide identificadas de los Solicitantes también se espera que funcionen cuando se induce en la posición análoga de los dominios de unión del ligando de otros receptores nucleares del Grupo B para modificar su unión del ligando o sensibilidad al ligando en un sistema de expresión genética a base de receptores nucleares del Grupo B . Los nuevos polinucleótidos y polipéptidos del dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B mutado por substitución de los Solicitantes son útiles en un sistema de modulación genética inducible a base de receptores nucleares para varias aplicaciones incluyendo terapia genética, expresión de proteínas de interés en las células huésped, producción de organismos transgénicos y ensayos a base de células . En particular, los Solicitantes describen en la presente un nuevo sistema de modulación de expresión genética que comprende un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución. Este sistema de expresión genética puede ser un sistema de expresión genética a base de "conmutación simple" en el cual el dominio de transactivación, dominio de unión de ADN y dominio de unión del ligando se encuentran en un polipéptido codificado. Alternativamente, el sistema de modulación de expresión genética puede ser una "doble conmutación" o sistema de modulación de expresión genética a base de "dos híbridos" en el que el dominio de transactivación y el dominio de unión de ADN se localizan en dos diferentes polipéptidos codificados. Los Solicitantes han demostrado por primera vez que un receptor nuclear mutado por substitución puede utilizarse como un componente de un sistema de expresión genética inducible a base de receptores nucleares para modificar la actividad de unión del ligando y/o especificidad del ligando tanto en células procarióticas como eucarióticas . Como se trata en la presente, los hallazgos de los Solicitantes son tanto inesperados como sorprendentes . Preferentemente el sistema de modulación de expresión genética a base del receptores nucleares del Grupo B de la presente invención puede ser ya sea heterodimérico y homodimérico . En una modalidad preferida el dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B se heterodimeriza con un dominio de unión de ligando del receptor de ecdisona para formar un complejo de función con EcR. Un complejo de EcR funcional en general se refiere a un complejo de proteína heterodimérica que consiste de dos miembros de la familia de receptores esteroides, una proteína del receptor de ecdisona obtenida de varios insectos y una proteina de ultraespiráculo (USP) o el homólogo vertebrado de USP, la proteína del receptor X retinoide (ver Yao, et al., (1993) Nature 366: 476-479; Yao, et al., (1992) Cell 71: 63-72) . Sin embargo, el complejo también puede ser un homodimero como se detalla abajo. El complejo del receptor ecdisteroide funcional también puede incluir proteína (s) adicional (es) tal como inmunofilinas . Los miembros adicionales de la familia de proteínas del receptor esteroide, conocidos como factores transcripcionales (tal como DHR38 o betaFTZ-1) , también pueden ser socios dependiente del ligando o independientes para EcR, USP y/o RXR. Adicionalmente , otros cofactores pueden requerirse tal como proteínas generalmente conocidas como co-activadores (también llamadas adaptadores o mediadores) . Estas proteínas no unen específicamente secuencias al ADN y no se involucran en la transcripción basal . Ellas pueden ejercer su efecto sobre la activación de la transcripción a través de varios mecanismos, incluyendo estimulación de unión a ADN de los activadores, al afectar la estructura de cromatina, o al mediar las interacciones del complejo de inicio del activador. Los ejemplos de tales co-activadores incluyen RIP140, TIF1, RAP46/Bag-1, ARA70, SRC-l/NcoA-l , TIF2/GRIP/McoA-2 , ACTR/AIB1/RAC3/pCIP así como la proteína de unión del elemento B de respuesta del co-activador C mezclado, CBP/p300 (para revisión ver Glass et al., Curr Opin. Cell Biol . 9:222-232, 1997). También pueden requerirse los co-factores de proteina generalmente conocidos como correpresores (también conocidos como represores, silenciadores o mediadores de silencio) para inhibir de manera efectiva la activación transcripcional en la ausencia del ligando . Estos correpresores pueden interactuar con el receptor de ecdisona no ligado para silenciar la actividad en el elemento de respuesta. La evidencia actual sugiere que la unión del ligando cambia la conformación del receptor, que da como resultado la liberación de los correpresores y el reclutamiento de los co-activadores anteriormente descritos, aboliendo mediante esto su actividad silenciosa. Los ejemplos de correpresores incluyen N-CoR y SMRT (para revisión, ver Hor itz et al., Mol. Endocrinol . 10: 1167-1177, 1936) . Estos cofactores pueden ser endógenos dentro de la célula u organismo o pueden agregarse de manera exógena como transgenes para expresarse en forma regulada o no regulada. Los complejos de homodímero de la proteína del receptor de ecdisona, USP, o RXR también pueden ser funcionales bajo algunas circunstancias . El complejo de receptor de ecdisona típicamente incluye proteínas que son miembros de la superfamilia del receptor nuclear en donde todos los miembros se caracterizan generalmente por la presencia de un dominio de transactivación de la terminal amino, un dominio de unión a ADN ("DBD") y un dominio de unión del ligando ( "LBD" ) separados del DBD por una región de articulación. Como se utiliza en la presente, el término "dominio de unión de ADN" comprende una secuencia mínima de polipéptidos de una proteína de unión a ADN, hasta la longitud completa de una proteína de unión a ADN mientras que el dominio de unión de ADN funciona para asociarse con un elemento de respuesta particular. Los miembros de la superfamilia de receptores nucleares se caracterizan también por la presencia de cuatro o cinco dominios: A/B, C, D, E y en algunos miembros F (ver la patente de E.U. 4,981,784 y Evans, Science 240:889-895 (1988) ) . El dominio ,??/?" corresponde al dominio de transactivación, "C" corresponde al dominio de unión de ADN, "D" corresponde a la región de articulación y ??" corresponde al dominio de unión del ligando. Algunos miembros de la familia también pueden tener otros dominios de transactivación en el sitio de terminal carboxilo del LBD correspondiente a "F" . El DBD se caracteriza por la presencia de dos indicadores de zinc de cisterna entre los cuales se encuentran dos motivos de aminoácido, el P-box y el D-box, que confieren especificidad para los elementos de respuesta de ecdisona. Estos dominios pueden ser nativos, modificados o quiméricos de diferentes dominios de proteínas receptoras heterólogas . El receptor EcR, como un subconjunto de la familia de receptores esteroides, también posee menos regiones bien definidas responsables de las propiedades de heterodimerización . Debido a que los dominios de receptores nucleares son modulares por naturaleza, el LBD, DBD y los dominios de transactivación pueden intercambiarse . Los sistemas de conmutación genética se sabe que incorporan componentes del complejo del receptor de ecdisona. Sin embargo, en estos sistemas conocidos, si se utiliza EcR se asocia con dominios de unión a ADN y dominios de transactivación nativos o modificados en la misma molécula. USP y RXR se utilizan típicamente como socios silenciosos. Los Solicitantes han mostrado previamente que cuando los dominios de unión a ADN y los dominios de transactivación se encuentran en la misma molécula la actividad de fondo en la • ausencia del ligando es alta y que tal actividad se reduce dramáticamente cuando los dominios de unión a ADN y los dominios de transactivación se encuentran en diferentes moléculas, es decir, en cada uno de dos socios de un complejo heterodimérico u homodimérico (ver PCT/US01/09050) . CASETES DE EXPRESIÓN GENÉTICA DE LA INVENCIÓN El nuevo sistema de expresión genética inducible a base de receptores nucleares de la invención comprende al menos un cásete de expresión genética que es capaz de expresarse en una célula huésped, en donde el cásete de expresión genética comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido que comprende un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución. Así, la invención de los Solicitantes también proporciona nuevos casetes de expresión genética para utilizarse en el sistema de expresión genética de la invención. En una modalidad específica, el cásete de expresión genética que es capaz de expresarse en una célula huésped comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido seleccionado del grupo que consiste de a) un polipéptido que comprende un dominio de transactivación, un dominio de unión de ADN y un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución; b) un polipéptido que comprende un dominio de unión de ADN y un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución; y c) un polipéptido que comprende un dominio de transactivación y un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución. En otra modalidad específica, la presente invención proporciona un cásete de expresión genética que es capaz de expresarse en una célula huésped, en donde el cásete de expresión genética comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido híbrido seleccionado del grupo que consiste de a) un polipéptido híbrido que comprende un dominio de transactivación, un dominio de unión de ADN, y un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución; b) un polipéptido híbrido que comprende un dominio de unión de ADN y un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución; y c) un polipéptido híbrido que comprende un dominio de transactivación y un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución. Un polipéptido híbrido de acuerdo con la invención comprende al menos dos fragmentos de polipéptido, en donde cada fragmento de polipéptido es de una fuente diferente, i.e., un polipéptido diferente, un receptor nuclear diferente, una especie diferente, etc. El polipéptido híbrido de acuerdo con la invención puede comprender al menos dos dominios de polipéptido, en donde cada dominio de polipéptido es de una fuente diferente. En una modalidad específica, el dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución es de un receptor X retinoide ot (RXR ) , receptor X retinoide ß (RXRP) , receptor X retinoide ? (RXRy) , proteína de unión de región II H-2 (H-2RIIBP) , receptor nuclear co-regulador- 1 (RcoR-1) proteína de ultraespiráculo (USP) receptor nuclear 2C1 o factor de corion 1 (CF-1) . En una modalidad preferida, el dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B es de un receptor X retinoide oc de vertebrado, un recepto X retinoide ß de vertebrado, un receptor X retinoide ? de vertebrado o un receptor X retinoide de invertebrado . Asi, la presente invención también proporciona un cásete de expresión genética que comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido seleccionado del grupo que consiste de a) un polipéptido que comprende un dominio de transactivación, un dominio de unión de ADN y un dominio de unión del ligando de receptor X retinoide que comprende una mutación por substitución; b) un polipéptido que comprende un dominio de unión de ADN y un dominio de unión al ligando del receptor X retinoide que comprende una mutación por substitución; y c) un polipéptido que comprende un dominio de transactivación y un dominio de unión del ligando del receptor X retinoide que comprende una mutación por substitución. Preferentemente, el cásete de expresión genética comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido híbrido seleccionado del grupo que consiste de a) un polipéptido híbrido que comprende un dominio de transactivación, un dominio de unión de ADN, y un dominio de unión del ligando del receptor X retinoide que comprende una mutación por substitución; b) un polipéptido híbrido que comprende un dominio de unión de ADN y un dominio de unión del ligando de receptor X retinoide que comprende una mutación por substitución; y c) un polipeptido híbrido que comprende un dominio de transactivación y un dominio de unión del ligando de receptor X retinoide que comprende una mutación por substitución en donde el polipeptido híbrido codificado comprende al menos dos fragmentos de polipéptido, en donde cada fragmento de polipéptido es de una fuente diferente . El dominio de unión del ligando (LBD) del receptor X retinoide (RXR) puede ser de un RXR de invertebrado, preferentemente, el dominio de unión del ligando RXR para utilizarse en la presente invención es de un humano Homo sapiens (HsRXR) , un ratón Mus musculus (MmRXR) , una rata Ratus norvegicus (RnRXR) , un pollo Gallus gallus (GgRXR) , un cerdo Sus scrofa domestica (SsRXR) , una rana Xenopus lavéis (XlRXR) , un pez cebrita Danio rerio (DrRXR) , un homólogo de RXR de escarabajo Tenebrio molitor ( "TmRXR" ) , un homólogo USP/RXR de saltamontes Lacusta migratoria (referida como "LmUSP" o "LmRXR" ) , un homólogo de RXR de áfido Myzus persicae ("MpRXR") , un homólogo de RXR de abeja melífera Apis mellifera ( "AmRXR" ) , un homólogo de RXR de cangrejo violinista Celuca pugilator ("CpRXR"), un homólogo 1 de RXR de un garrapata estrella solitaria Amblyomma americanum ("AmaRXRl") , un homólogo 2 de RXR de garrapata estrella solitaria Amblyomma americanum ("AmaRXR2"), una turicata Polyandrocarpa misakiensis (PiríRXR) , o un RXR de medusa Tripedalia cystophora (TcRXR) . Más preferentemente, el LBD es de un MmRXR o un HsRXR. En una modalidad especifica, el dominio de unión de ligando del receptor nuclear del Grupo B se codifica por un polinucleotido que comprende una mutación de codón que da como resultado una substitución de un residuo de aminoácido, e en donde el residuo de aminoácido se encuentra en una ' posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de a) 401 o 429 de la SEQ ID NO:l, b) 401 y 429 de la de la SEQ ID NO-.l, c) 337, 344, 355, 385, 431, 442, 462, 470, 472, 473, 495, 500, 511, 516, o 528 de la SEQ ID NO: 2, d) 321, 322, y 323 de la SEQ ID NO : 2 , e) 450, 451, y 452 de la SEQ ID N0:2, f) 455, 456, 457, y 458 de la SEQ ID NO : 2 , g) 470, 472, y 473 de la SEQ ID NO : 2 , h) 475, 476, 477, 478, y 479 de la SEQ ID NO : 2 , e i) 481, 482, y 483 de la SEQ ID N0:2. En una modalidad preferida, el dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B es de un receptor X retinoide En una modalidad específica, el dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B se codifica por un polipéptido que comprende una mutación de codón que da como resultado una substitución de a) un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 401 de la SEQ ID N0:1, b) un residuo de serina en la posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 429 de la SEQ ID NO : 1 , c) un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 401 de la SEQ ID NO : 1 , y un residuo de serina en una posición equivalente o análoga al aminoácido de un residuo de aminoácido 429 de la SEQ ID NO:l, d) un residuo de serina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 337, 495, 500 o 528 de la SEQ ID NO: 2, e) un residuo de asparagina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 344 de la SEQ ID NO: 2, f) un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al aminoácido de los residuos de aminoácido 355 o 511 de la SEQ ID N0:2, g) un residuo de alanina en una posición equivalente o análoga a los residuos de aminoácido 385 o 470 de la SEQ ID NO : 2 , h) un residuo de leucina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 431 o 462 de la SEQ ID NO: 2, i) un residuo de lisina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 442 de la SEQ ID NO: 2, j ) un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 472 de la SEQ ID N0:2, k) un residuo de ácido glutamico en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 473 de la SEQ ID NO: 2, 1) un residuo de valina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 516 de la SEQ ID NO: 2, m) un residuo de leucina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 321 de la SEQ ID NO : 2 , un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 322 de la SEQ ID NO : 2 , y un residuo de valina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 323 de la SEQ ID NO : 2 , n) un residuo de ácido glutámico en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 450 de la SEQ ID NO: 2, un residuo de valina en una posición equivalente o análoga alaminoácido del residuo de aminoácido 451 de la SEQ ID NO:2, y un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 452 de la SEQ ID ¥0:2, o) un residuo de lisina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 455 de la SEQ ID NO: 2, un residuo de serina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 456 de la SEQ ID NO : 2 , un residuo de alanina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 457 de la SEQ ID NO: 2, y un residuo de glutamina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 458 de la SEQ ID N0:2, p) un residuo de alanina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 470 de la SEQ ID NO: 2, un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 472 de la SEQ ID NO : 2 , y un residuo de tirosina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 473 de la SEQ ID NO : 2 , q) un residuo de treonina en una posición equivalente o análoga al aminoácido de los residuo de aminoácido 475, 477 y 478 de la SEQ ID NO : 2 , un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 476 de la SEQ ID NO:2, y un residuo de histidina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 479 de la SEQ ID N0:2, o r) un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 481 de la SEQ ID NO : 2 , un residuo de ácido glutámico en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 472 de la SEQ ID NO: 2, y un residuo de prolina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 483 de la SEQ ID NO:2. En una modalidad preferida, el dominio de unión de ligando del receptor nuclear del Grupo B es de un receptor X retinoide . En otra modalidad especifica, el dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución es de un dominio de unión del ligando del receptor X retinoide que comprende una mutación por substitución codificada por un polipéptido que comprende una mutación de codón o mutaciones de codón que dan como resultado una mutación por substitución seleccionada del grupo que consiste de a) E401D o G429S de la SEQ ID N0:1, b) E401D y G429S de la SEQ ID NO : 1 , c) T337S, D344N, K355R, S385A, M431L, R442K, V462L, S470A, E471D T473E, A495S, E500S, K511R, T516V, o A528S de la SEQ ID NO:2, d) G321L, P322R, G323V de la SEQ ID NO : 2 , e) D450E, A451V y K452R de la SEQ ID NO:2, f) S455K, N456S, P457A, y S458Q de la SEQ ID NO:2, g) S470A, E472D, y T473Y de la SEQ ID NO : 2 , h) C475T, K476R, Q477T, K478T, y Y479H de la SEQ ID NO : 2 , e i) E481D, Q482E, y Q483P de la SEQ ID NO : 2 En otra modalidad especifica, el dominio de unión de ligando del receptor nuclear del Grupo B comprende una mutación por substitución en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido a) 401 o 429 de la SEQ ID NO:l, b) 401 y 429 de la de la SEQ ID NO:l, c) 337, 344, 355, 385, 431, 442, 462, 470, 472, 473, 495, 500, 511, 516, o 528 de la SEQ ID NO:2, d) 321, 322, y 323 de la SEQ ID NO : 2 , e) 450, 451, y 452 de la SEQ ID NO:2, f) 455, 456, 457, y 458 de la SEQ ID NO : 2 , g) 470, 472, y 473 de la SEQ ID NO : 2 , h) 475, 476, 477, 478, y 479 de la SEQ ID NO:2, e i) 481, 482, y 483 de la SEQ ID NO : 2. En una modalidad preferida, el dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B es de un receptor X retinoide Preferentemente, el dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B comprende una substitución de a) un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 401 de la SEQ ID N0:1, b) un residuo de serina en la posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 429 de la SEQ ID N0:1, c) un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 401 de la SEQ ID NO : 1 , y un residuo de serina en una posición equivalente o análoga al aminoácido de un residuo de aminoácido 429 de la SEQ ID NO:l, d) un residuo de serina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 337, 495, 500 o 528 de la SEQ ID NO:2, e) un residuo de asparagina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 344 de la SEQ ID NO: 2, f) un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al aminoácido de residuos de aminoácido 355 o 511 de la SEQ ID NO:2, g) un residuo de alanina en una posición equivalente o análoga a los residuos de aminoácido 385 o 470 de la SEQ ID NO : 2 , h) un residuo de leucina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 431 o 462 de la SEQ ID NO-.2, i) un residuo de lisina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 442 de la SEQ ID NO:2, j) un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 472 de la SEQ ID NO : 2 , k) un residuo de ácido glutamico en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 473 de la SEQ ID NO : 2 , 1) un residuo de valina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 516 de la SEQ ID NO : 2 , m) un residuo de leucina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 321 de la SEQ ID NO: 2, un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 322 de la SEQ ID N0:2, y un residuo de valina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 323 de la SEQ ID N0:2, n) un residuo de ácido glutámico en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 450 de la SEQ ID N0:2, un residuo de valina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 451 de la SEQ ID NO:2, y un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 452 de la SEQ ID N0:2, o) un residuo de lisina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 455 de la SEQ ID NO : 2 , un residuo de serina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 456 de la SEQ ID NO: 2, un residuo de alanina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 457 de la SEQ ID NO: 2, y un residuo de glutamina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 458 de la SEQ ID NO: 2, p) un residuo de alanina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 470 de la SEQ ID NO:2, un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 472 de la SEQ ID NO : 2 , y un residuo de tirosina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 473 de la SEQ ID NO : 2 , g) un residuo de treonina en una posición equivalente o análoga al aminoácido de los residuos de aminoácido 475, 477 y 478 de la SEQ ID NO : 2 , un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 476 de la SEQ ID NO : 2 , y un residuo de istidina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 479 de la SEQ ID NO : 2 , o r) un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 481 de la SEQ ID NO : 2 , un residuo de ácido glutámico en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 472 de la SEQ ID NO:2, y un residuo de prolina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 483 de la SEQ ID NO: 2. En una modalidad preferida, el dominio de unión de ligando del receptor nuclear del Grupo B es de un receptor X retinoide. En otra modalidad específica, el dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución es un dominio de unión del ligando del receptor X retinoide que comprende una mutación por substitución, en donde la mutación por substitución se selecciona del grupo que consiste de a) E401D o G429S de la SEQ ID NO:l, b) E401D y G429S de la SEQ ID NO : 1 , c) T337S, D344N, K355R, S385A, M431L, R442K, V462L, S470A, E471D T473E, A495S, E500S, K511R, T516V, o A528S de la SEQ ID NO : 2 , d) G321L, P322R, G323V de la SEQ ID NO: 2, e) D450E, A451V y K452R de la SEQ ID NO : 2 , f) S455K, N456S, P457A, y S458Q de la SEQ ID NO: 2, g) S470A, E472D, y T473Y de la SEQ ID NO: 2, h) C475T, K476R, Q477T, K478T, y ?479? de la SEQ ID NO : 2 , e i) E481D, Q482E, y Q483P de la SEQ ID NO:2. El dominio de unión de ADN (DBD) puede ser cualquier dominio de unión de ADN con un elemento de respuesta conocido incluyendo dominios de unión a ADN sintéticos y quiméricos, análogas, combinaciones o modificaciones de estos. Preferentemente, el DBD es un DBD GAL4, un DBD LexA, un DBD del factor de transcripción, un DBD de miembro del receptor nuclear del Grupo B, un DBD del miembro de la superfamilia del receptor nuclear de la hormona esteroide/tiroide, un DBD LacZ bacterial, o un DBD. Más preferentemente, el DBD es un DBD receptor de ecdisona (EcR) [SEQ ID NO: 3 (polinucleótido) o SEQ ID NO. 4 (polipéptidos) ] , un DBD GAL4 [SEQ ID NO: 5 (polinucleótido) o SEQ ID NO: 6 (polipéptido) ] , o un DBD LexA [ (SEQ ID NO : 7 (polinucleótido) o SEQ ID NO: 8 (polipéptido)]. El dominio de transactivación (abreviado "AD" o "TA" ) puede ser cualquier AD miembro del receptor nuclear del Grupo B, AD del receptor nuclear de la hormona esteroide/tiroide, AD sintético o quimérico, AD de poliglutamina, AD de aminoácido básico o acídico, un AD VP16, un AD GAL4, un AD NF-??, un AD BP64, un dominio de activación acídica B42 (B42AD) , un dominio de transactivación p65 (p65AD) , o un análoga, combinación o modificación de estos. En una modalidad específica, el AD es un AD sintético o quimérico, o se obtiene de un receptor de ecdisona, un receptor glucocorticoide , VP16, GAL4 , NF-??, o AD de dominio de activación acídico B42. Preferentemente, el AD es un AD de EcR [SEQ ID NO: 9 (polinucleótido) o SEQ ID NO: 10 (polipéptido) ] , un AD VP16 [SEQ ID NO: 11 (polinucleótido) o SEQ ID NO: 12 (polipéptido)], un AD B42 [SEQ ID NO: 13 (polinucleótido) o SEQ ID NO: 14 (polipéptido)], o un AD p65 [SEQ ID NO: 15 (polinucleótido) o SEQ ID NO: 16 (polipéptido) ] . En una modalidad específica, el cásete de expresión genética codifica un polipéptido híbrido que comprende a) un dominio de unión de ADN codificado por un polinucleótido que comprende una secuencia de ácidos nucleicos de la SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5 o SEQ ID NO : 7, o un dominio de transactivación codificado por un polinucleótido que comprende una secuencia de ácidos nucleicos de la SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, o SEQ ID NO: 15; y un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución codificada por un polinucleótido de acuerdo con la invención b) un dominio de unión a ADN codificado por un polinucleotido que comprende una secuencia de ácidos nucleicos de la SEQ ID NO : 3 , SEQ ID NO: 5 o SEQ ID NO : 7, y un dominio de unión de ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución codificada por un polinucleotido de acuerdo con la invención, o c) dominio de transactivación codificado por un polinucleotido que comprende una secuencia de ácidos nucleicos de la SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13 O SEQ ID NO: 15; y un dominio de unión de ligando receptor nuclear de Grupo B que comprende una mutación por substitución codificada por un polinucleotido de acuerdo con la invención. Preferentemente, el dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución es un dominio de unión del ligando del receptor del ecdisona que comprende una mutación por substitución codificada por un polinucleotido de acuerdo con la invención. En otra modalidad específica, el cásete de expresión genética codifica un polipéptido híbrido que comprende a) un dominio de unión de ADN que comprende una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID N0:4, SEQ ID NO : 6 o SEQ ID NO: 8; un dominio de transactivación que comprende una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO : 12 , SEQ ID NO: 14 o SEQ ID NO: 16; y un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución de acuerdo con la invención; b) un dominio de unión a ADN que comprende una secuencia acida de secuencia de aminoácidos de aminoácidos SEQ ID NO:4, SEQ ID NO : 6 o SEQ ID NO : 8 / y un el dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución de acuerdo con la invención, o c) un dominio de transactivación que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12 SEQ ID NO : 14 O SEQ ID NO : 6 ; y un dominio de unión del ligando receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución de acuerdo con la invención. Preferentemente, el dominio de unión del ligando receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución es un dominio de unión de ligando del receptor de ecdisona que comprende una mutación por substitución de acuerdo con la invención. El elemento de respuesta ("RE") puede ser cualquier elemento de respuesta con un dominio de unión de ADN conocido o un análoga, combinación o modificación de estos. Puede emplearse un solo RE o múltiples REs, ya sea múltiples copias de la misma RE o dos o más REs diferentes en la presente invención, . En una modalidad específica, el RE es un RE de GAL4 ( "GAL RE" ) , LexA, un RE del receptor nuclear del Grupo B, un RE del receptor nuclear de hormona esteroide/tiroide o un RE sintético que reconoce un dominio sintético de unión a ADN. Preferentemente, el RE es un RE de ecdisona (EcRE) que comprende una secuencia de polinucleótidos de la SEQ ID NO: 17, un GAL4RE que comprende una secuencia de polinucleótidos de la SEO ID NO: 18 o un RE LexA (operon, "op") que comprende una secuencia de polinucleótidos de la SEQ ID NO: 19 ( "2XLexAopRE" ) . Puede obtenerse un dominio de unión de ADN del receptor nuclear de hormona esteroide/tiroide, un dominio de activación o un elemento de respuesta de acuerdo con la invención a partir de un receptor nuclear de hormona esteroide/tiroide seleccionado del grupo que consiste del receptor a de hormona tiroide (TR ) , receptor tiroide 1 (c-erbA-1) , receptor ß de hormona tiroide ( ) , receptor a de ácido retinóico (RARa) , receptor ß de ácido retinóico ( AR , HAP) , receptor ? de ácido retinóico (RARy) , receptor de ácido retinóico similar a gamma (RARD) , receptor oc activado por el proliferador de peroxisoma (PPARa) , receptor ß activado por el proliferador de peroxisoma (PPAR ) , receptor d activado por el proliferador de peroxisoma (PPARó, NUC-1) , receptor relacionado con el activador del proliferador de peroxisoma (FFAR) , receptor ? activado por el proliferador de peroxisoma (PPARy) , receptor huérfano codificado por el filamento no codificado del receptor de la hormona tiroide (REVERBot) , receptor relacionado a v-erb A (EAR-1) , receptor relacionado a v-erb (EAR-1A) , ?) , receptor huérfano codificado por el filamento no codificado del receptor ß de hormona tiroide ( EVE Bp) , receptor relacionado a v-erb (EAR-?ß) , receptor nuclear huérfano BD73 (BD73) , receptor relacionado a rev-erbA (RVR) , proteína 126 indicadora de zinc (HZF2) , proteína E75 inducible por ecdisona (E75) , proteína E78 inducible por ecdisona (E78) , receptor 78 de Drosophila (DR-78) , receptor huérfano relacionado a retinoide (RORa) , receptor a Z retinoide (RZRa) , receptor huérfano ß relacionado a retinoide (RORP) , receptor ß Z retinoide (RZR ) , receptor huérfano ? relacionado a retinoide (RORy) , receptor ? Z retinoide (RZRy) , receptor huérfano relacionado a retinoide (TOR) , receptor de hormona 3 (HR-3) , receptor de hormona 3 de Drosaphila (DHR-3) , receptor de hormona Manduca (MHR-3) , receptor de hormona 3 de Gallería (GHR-3) , receptor nuclear 3 de C. elegans (CNR-3) , receptor de hormona 3 de Choristoneura (CHR-3) , receptor nuclear 14 de C. elegans (CNR-14) , receptor de ecdisona (ECR) , receptor ubicuo (UR) , receptor nuclear huérfano (OR-1), NER-1, proteína 15 que interactúa con el receptor (RIP-15) , receptor ß X de hígado (LXRp) , proteína similar al receptor de hormona esferoide (RLD-1) , receptor de X hígado (LXR) , receptor a X de hígado (LXRcc) , receptor X farnesoide (FXR) , proteína 14 que interactúa con el receptor (RIP-14) , HRR-1, receptor de vitamina D (VDR) , receptor nuclear huérfano (ONR-1) , receptor de X pregnano (PXR) , receptor esferoide y xenobiótico (SXR) , receptor X de benzoato (BXR) , receptor nuclear (MB-67) , receptor 1 androstano constitutivo (CAR-1) , receptor androstano constitutivo (CARa) , receptor 2 androstano constitutivo (CAR-2), receptor ß androstano constitutivo (CARp) , receptor 96 de hormona de Drosophila (DHR-96) , receptor 1 de hormona nuclear (NHR-1) , factor nuclear 4 de hepatocito (HNF-4) , factor nuclear 4G de hepatocito (HNF-4G) , factor nuclear 4B de hepatocito (HNF-4B) , factor nuclear 4D de hepatocito (H F-4D , DH F-4) , receptor a X retinoide (RXR ) , receptor ß X retinoide (RXR ) , proteína de unión II de la región H-2 (H-2RIIBP) , co-regulador 1 de receptor nuclear (RCoR-1) , receptor ? X retinoide (RXRy) , Ultraespiráculo (USP) , receptor nuclear 2C1, factor de corion 1 (CF-1) , receptor testicular 2 (TR-2) , receptor testicular 2-11 (TR2-11) , receptor testicular 4 (TR-4) TAK-1, receptor de hormona de Drosophila (DHR78) , Sin cola (TLL) , homólogo de sin cola (TLX) , XTLL, factor de transcripción I del promotor corriente arriba de ovoalbúmina de pollo (COUP-TFI) , factor de transcripción A del promotor corriente arriba de ovoalbúmina de pollo (COUP-TFA) , EAR-3, SVP-44, factor de transcripción II del promotor corriente arriba de ovoalbúmina de pollo (COUP-TFII) , factor de transcripción B del promotor corriente arriba de ovoalbúmina de pollo (COUP-TFB) , ARP-1, SVP-40, SVP, factor de transcripción III del promotor corriente arriba de ovoalbúmina de pollo (COUP-TFIII ) , factor de transcripción G del promotor corriente arriba de ovoalbúmina de pollo (COUP-TFG) , SVP-46, EA -2, receptor de estrógeno a (ERoc) , receptor de estrógeno ß (ERp) , receptor 1 relacionado a estrógeno (ERR1) , receptor a relacionado a estrógeno (ERR ) , receptor 2 relacionado a estrógeno (ERR2), receptor ß relacionado a estrógeno (ERRp) , receptor glucocorticoide (GR) , receptor mineralcorticoide (MR) , receptor de progesterona (PR) , receptor andrógeno (AR) , gen B inducido por el factor de crecimiento del nervio (NGFI-B) , receptor nuclear similar a Nur-77 (TRS) , N10, receptor Huérfano (NUR-77) , gen de respuesta temprana de Humano (NAK-1) , factor 1 relacionado a Nurr (NURR-1) , un gen de respuesta temprana inmediata humano (NOT) , receptor nuclear 1 de regeneración de hígado (R R-1) , indicador de zinc 3 hematopoyético (HZF-3) , proteina 1 relacionada a Nur (TINOR) , receptor 1 huérfano nuclear (MOR-1) , receptor relacionado a' NOR1 (MINOR) , receptor 38 de hormona de Drosophila (DHR-38) , receptor nuclear 8 de C elegans (CNR-8) , C48D5, factor esteroidogénico (SF1) , péptido similar a endozepina (ELP) , factor 1 de fushi tarazu (FTZ-Fl) , proteína de unión adrenal 4 (AD4BP) , homólogo de receptor de hígado (LRH-1) , receptor huérfano A relacionado a Ftz-Fl (xFFrA) , receptor huérfano B relacionado a Ftz-Fl (xFFrB) , receptor nuclear relacionado a LRH-1 (FFLR) , receptor nuclear relacionado a LRH-1 (PHR) , factor de transcriptina de fetoproteína (FTF) , factor nuclear de célula germinal (GCNFM) , receptor asociado a testículo relacionado al receptor retinoide (RTR) , knirps (KNI) , relacionado a knirps (K RL) , Gónada embriónica (EGON) , gen de Drosophila para el receptor nuclear dependiente del ligando (EAGLE) , receptor nuclear similar a tritorax (ODR7) , Tritorax, gen del cromosoma X de la región crítica congénita de hipoplasia adrenal inversa al sexo sensible a la dosis (DAX-1) , hipoplasia adrenal congénita e hipogonadismo hipogonadotrópico (AHCH) y socios de heterodímero corto (SHP) . Asi, la presente invención también proporciona un cásete de expresión genética que comprende i) un elemento de respuesta que comprende un dominio reconocido por un polipeptido que comprende un dominio de unión a ADN; ii) un promotor que se activa por un polipéptido que comprende un dominio de transactivación; y iii) un gen cuya expresión se va a modular. Los genes de interés para utilizarse en los casetes de expresión genética de los Solicitantes pueden ser genes endógenos o genes heterólogos . La información de la secuencia de ácidos nucleicos o aminoácidos para un gen o proteína deseados puede ubicarse en una o muchas bases de datos de acceso público, por ejemplo, GENBA K, EMBL, Swiss-Prot y PIR o en muchas publicaciones de revistas relacionadas con la biología. Así, aquellos expertos en la técnica tienen acceso a la información de secuencia de ácidos nucleicos para virtualmente todos los genes conocidos. Tal información puede ser utilizada entonces para construir las construcciones deseadas para la inserción de los genes de interés dentro de los casetes de expresión genética utilizados en los métodos de los Solicitantes descritos en la presente . Los ejemplos de genes de interés para utilizarse en los casetes de expresión genética de los Solicitantes incluyen, pero no se limitan a: genes que codifican los polipéptidos terapéuticamente deseables o los productos que pueden utilizarse para tratar una condición, una enfermedad, un trastorno, una disfunción, un defecto genético, tales como anticuerpos monoclonales , enzimas, proteasas, citocinas, interferones , insulina, eritropoyetina, factores de coagulación, otros factores o componentes sanguíneos, vectores virales para terapia genética, virus para vacunas, objetivos para descubrimientos de drogas, genómicos funcionales y análisis y aplicaciones proteómicos y lo similar . Para propósitos de esta invención, los receptores nucleares y los receptores del Grupo B también incluyen receptores nucleares quiméricos y sintéticos y receptores nucleares del Grupo B y sus homólogos. POLINUCLEOTIDOS DE LA INVENCIÓN El nuevo sistema de expresión genética inducible a base de receptores nucleares de la invención comprende al menos un cásete de expresión genética que comprende un polinucleótido que codifica un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución. Estos casetes de expresión genética, los polinucleótidos que comprenden y los polipéptidos que codifican son útiles como componentes de un sistema de expresión genética a base de receptores nucleares para modular la expresión de un gen dentro de una célula huésped. Así, la presente invención también proporciona un polinucleótido aislado que codifica un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución. En una modalidad especifica, el dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B se codifica por un polinucleótido que comprende una mutación de codón que da como resultado una substitución de un residuo de aminoácido, en donde el residuo de aminoácido se encuentra en una posición equivalente o análoga a un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de a) 401 o 429 de la SEQ ID N0:1, b) 401 y 429 de la SEQ ID N0:1, c) 337, 344, 355, 385, 431, 442, 462, 470, 472, 473, 495, 500, 511, 516, o 528 de la SEQ ID NO : 2 , d) 321, 322, y 323 de la SEQ ID NO : 2 , e) 450, 451, y 452 de la SEQ ID NO : 2 , f) 455, 456, 457, y 458 de la SEQ ID NO : 2 , g) 470, 472, y 473 de la SEQ ID NO : 2 , h) 475, 476, 477, 478, y 479 de la SEQ ID NO : 2 , e i) 481, 482, y 483 de la SEQ ID NO : 2. En una modalidad preferida, el dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B es de un receptor X retinoíde En otra modalidad específica, el dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B se codifica por un polinucleótido que comprende una mutación de codón que da como resultado una substitución de a) un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 401 de la SEQ ID NO : 1 , b) un residuo de serina en la posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 429 de la SEQ ID N0:1, c) un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 401 de la SEQ ID MO:l, y un residuo de serina en una posición equivalente o análoga al aminoácido de un residuo de aminoácido 429 de la SEQ ID NO : 1 , d) un residuo de serina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 337, 495, 500 o 528 de la SEQ ID NO: 2, e) un residuo de asparagina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 344 de la SEQ ID NO : 2 , f) un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al aminoácido de residuos de aminoácido 355 o 511 de la SEQ ID NO : 2 , g) un residuo de alanina en una posición equivalente o análoga a los residuos de aminoácido 385 o 470 de la SEQ ID N0:2, h) un residuo de leucina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 431 o 462 de la SEO ID NO : 2 , i) un residuo de lisina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 442 de la SEQ ID NO: 2, j ) un residuo de ácido aspartico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 472 de la SEO ID NO : 2 , k) un residuo de ácido glutamico en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 473 de la SEQ ID NO: 2, 1) un residuo de valina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 516 de la SEQ ID NO: 2, m) un residuo de leucina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 321 de la SEQ ID NO : 2 , un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 322 de la SEQ ID NO : 2 , y un residuo de valina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 323 de la SEQ ID N0:2, n) un residuo de ácido glutámico en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 450 de la SEQ ID NO: 2, un residuo de valina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 451 de la SEQ ID NO : 2 , y un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 452 de la SEQ ID MO:2, o) un residuo de lisina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 455 de la SEQ ID NO: 2, un residuo de serina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 456 de la SEQ ID NO: 2, un residuo de alanina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 457 de la SEQ ID NO : 2 , y un residuo de glutamina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 458 de la SEQ ID N0:2, p) un residuo de alanina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 470 de la SEQ ID NO : 2 , un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 472 de la SEQ ID NO : 2 , y un residuo de tirosina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 473 de la SEQ ID N0:2, q) un residuo de treonina en una posición equivalente o análoga al aminoácido de los residuos de aminoácido 475, 477. y 478 de la SEQ- ID NO: 2, un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 476 de la SEQ ID NO: 2, y un residuo de histidina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 479 de la SEQ ID N0:2, o r) un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 481 de la SEQ ID N0:2, un residuo de ácido glutámico en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 482 de la SEQ ID N0:2, y un residuo de prolina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 483 de la SEQ ID N0:2. En una modalidad preferida, el dominio de unión de ligando del receptor nuclear del Grupo B es de un receptor X retinoide. En otra modalidad específica, el dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución es un dominio de unión del ligando del receptor X retinoide que comprende una mutación por substitución codificada por un polinucleotido que comprende una mutación de codón o mutaciones de codón que dan como resultado una mutación por substitución se selecciona del grupo que consiste a) E401D o G429S de la SEQ ID NO:l, b) E401D y G429S de la SEQ de ID NO:l, c) T337S, D344N, K355R, S385A, M431L, R442K, V462L, S470A, E471D T473E, A495S, E500S, 511R, T516V, o A528S de la SEQ ID NO:2, d) G321L, P322R, G323V de la SEQ ID NO: 2, e) D450E, A451V y K452R de la SEQ ID NO:2, f) S455 , N456S, P457A, y S458Q de la SEQ ID NO:2, g) S470A, E472D, y T473Y de la SEQ ID NO:2, h) C475T, K476R, Q477T, K478T, y ?479? de la SEQ ID NO:2, e i) E481D, Q482E, y Q483P de la SEQ ID NO:2. La presente invención también proporciona un polinucleotido aislado que codifica un polipéptido seleccionado del grupo que consiste de a) un polipéptido que comprende un dominio de transactivación, un dominio de unión a ADN y un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución de acuerdo con la invención; b) un polipéptido que comprende un dominio de unión ^de ADM y un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución de acuerdo con la invención; y c) un polipéptido que comprende una dominio de transactivación y un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución de acuerdo con la invención . En una modalidad específica, el polinucleótido aislado codifica un polipéptido híbrido seleccionado del grupo que consiste de a) un polipéptido híbrido que comprende un dominio de transactivación, un dominio de unión de ADN y un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución de acuerdo con la invención; b) un polipéptido híbrido que comprende un dominio de unión de ADN y un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución de acuerdo con la invención; y c) un polipéptido híbrido que comprende un dominio de transactivación y un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución de acuerdo con la invención. La presente invención también se refiere a un polinucleótido aislado que codifica un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución, en donde la mutación por substitución afecta la actividad de unión del ligando o la sensibilidad del ligando del dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B. En particular, la presente invención se refiere a un polinucleótido aislado que codifica a un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución, en donde la mutación por substitución reduce la actividad de unión del ligando o la sensibilidad de ligando del dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B. En una modalidad específica, la presente invención se refiere a un polinucleótido aislado que codifica un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución, en donde la mutación por substitución reduce la actividad de unión a esteroide' o la sensibilidad al esteroide del dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B. Preferentemente el polinucleótido aislado comprende una mutación de codón que da como resultado una substitución de un residuo de aminoácido, en donde el residuo de aminoácido se encuentra en una posición equivalente o análoga a, a) el residuo de aminoácido 401 o 429 de la SEQ. ID.NOrl, o b) el residuo de aminoácido 344, 431, 442, 495, 510 o 528 SEQ. ID.NO:2. Más preferentemente el polinucleótido aislado comprende una mutación de codón que da como resultado una substitución de a) un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 401 de la SEQ ID N0:1, b) un residuo de serina en la posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 429 de la SEQ ID NO:l, c) un residuo de asparagina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 344 de la SEQ ID NO: 2, d) un residuo de leucina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 341 de la SEQ ID N0:2, e) un residuo de lisina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 442 de la SEQ ID NO: 2, f) un residuo de serina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 495 o 528 de la SEQ ID NO : 2 , o g) un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga del residuo de aminoácido 511 de la SEQ ID NO : 2. aún más preferentemente el polinucleotido aislado comprende una mutación de codón que da como resultado una mutación por substitución seleccionada del grupo que consiste de a)E401D o G429S de la SEQ ID NO:l y b) D344N, M 431L, R442K, A495S, K511R o A528S de la SEQ ID NO : 2. En una modalidad específica, la presente invención se refiere a un polinucleotido aislado que codifica un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución, en donde la mutación por substitución reduce la actividad de unión del ligando no esteroide o la sensibilidad del ligando del dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B. Preferentemente el polinucleótido aislado comprende una mutación de codón que da como resultado una substitución de un residuo de aminoácido, en donde el residuo de aminoácido se encuentra en una posición equivalente o análoga a, a) el residuo de aminoácido 401 o 429 de la SEQ. ID.NO:l, o b) el residuo de aminoácido 344, 431, 442, 495, 511 o 528 SEQ . ID.NO:2. Más preferentemente el polinucleótido aislado comprende una mutación de codón que da como resultado una substitución de a) un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 401 de la SEQ ID NO:l, b) un residuo de serina en la posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 429 de la SEQ ID N0:1, c) un residuo de asparagina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 344 de la SEQ ID N0:2, d) un residuo de leucina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 431 de la SEQ ID N0:2, e) un residuo de lisina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 442 de la SEQ ID NO:2, f) un residuo de serina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 495 o 528 de la SEQ ID NO: 2, o g) un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga del residuo de aminoácido 511 de la SEQ ID NO : 2. aún más preferentemente el polinucleótido aislado comprende una mutación de codón que da como resultado una mutación por substitución seleccionada del grupo que consiste de a)E401D o G429S de la SEQ ID NO : 1 y b) D344N, M431L, R442K, A495S, 511R o A528S de la SEQ ID NO : 2. Además, la presente invención también se refiere a un polinucleótido aislado que codifica un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución, en donde la mutación por substitución mejora la actividad de unión del ligando o la sensibilidad del ligando del dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B. En una modalidad especifica, la presente invención se refiere a un polinucleótido aislado que codifica a un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución, en donde la mutación por substitución mejora la actividad de unión a esferoide o la sensibilidad áJ esferoide del dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B. Preferentemente, el polinucleótido aislado comprende una mutación de codón que da como resultado una substitución de un residuo de aminoácido en una posición equivalente o análoga a, a) los residuos de aminoácido 52 o 96 de la SEQ ID NO: 1 o b) el residuo de aminoácido 91 de la SEQ ID NO: 3. Más preferentemente, el polinucleótido aislado comprende una mutación de codón que da como resultado una substitución de un residuo de aminoácido en una posición equivalente o análoga a residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de a) 401 o 429 de la SEQ ID NO : 1 , b) 401 y 429 de la SEQ ID N0:1, c) 337, 355, 385, 462, 470, 472, 473, o 500 de la SEQ ID NO : 2 , d) 321, 322, y 323 de la SEQ ID NO : 2 , e) 450, 451, y 452 de la SEQ ID NO : 2 , f) 455, 456, 457, y 458 de la SEQ ID NO : 2 , g) 470, 472, y 473 de la SEQ ID NO : 2 , h) 475, 476, 477, 478, y 479 de la SEQ ID NO : 2 , e i) 481, 482, y 483 de la SEQ ID NO:2. Más preferentemente el polipéptido aislado comprende una mutación de codón que da como resultado una substitución de a) un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 401 de la SEQ ID NO:l, b) un residuo de serina en la posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 429 de la SEQ ID NO:l, c) un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 401 de la SEQ ID N0:1, y un residuo de serina en una posición equivalente o análoga al aminoácido de un residuo de aminoácido 429 de la SEQ ID N0:1, d) un residuo de serina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 337, o 500 de la SEQ ID NO : 2 , e) un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 355 de la SEQ ID NO:2, f) un residuo de alanina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 385 o 470 de la SEQ ID NO:2, g) un residuo de leucina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 462 de la SEQ ID NO : 2 , h) un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 472 de la SEQ ID NO:2, i) un ácido glutámico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 473 de la SEQ ID NO : 2 , j) un residuo de leucina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 321 de la SEQ ID NO : 2 , un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 322 de la SEQ ID NO : 2 , y un residuo de valina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 323 de la SEQ ID NO:2, k) un residuo de ácido glutámico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 450 de la SEQ ID N0:2, un residuo de valina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 451 de la SEQ ID NO:2, y un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 452 de la SEQ ID NO : 2 , 1) un residuo de lisina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 455 de la SEO ID NO : 2 , un residuo de serina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 45S de la SEQ ID NO: 2, un residuo de alanina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 457 de la SEQ ID NO:2, un residuo de glutamina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 458 de la SEQ ID N0:2, m) un residuo de alanina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 470 de la SEQ ID N0:2, un residuo de ácido aspartico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 472 de la SEQ ID NO : 2 , y un residuo de tirosina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 473 de la SEQ ID NO:2, n) un residuo de treonina en una posición equivalente o análoga a los residuo de aminoácidos 475, 477 y 478 de la SEQ ID NO: 2, un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 476 de la SEQ ID NO : 2 , y un residuo de histidina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 479 de la SEQ ID NO:2, u o) un residuo de ácido aspartico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 481 de la SEQ ID NO: 2, un residuo de ácido glutamico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 482 de la SEQ ID NO:2, y un residuo de prolina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 483 de la SEQ ID N0:2. Aun más preferentemente el polinucleotido aislado comprende una mutación de codón o mutaciones de codón que dan como resultado una mutación por substitución seleccionada del grupo que consiste de a) E401D o G429S de la SEQ ID N0:1, b) E401D y G429S de la SEQ de ID NO:l, c) T337S, K355R, S385A, V462L, S470A, E471D T473E O , E500S de la SEQ ID NO : 2 , d) G321L, P322R y G323V de la SEQ ID NO:2, e) D450E, A451V y K452R de la SEQ ID NO : 2 , f) S455K, N456S, P457A, y S458Q de la SEQ ID N0:2, g) S470A, E472D, y T473Y de la SEQ ID NO: 2, h) C475T, K476R, Q477T, K478T, y Y479H de la SEQ ID NO : 2 , e i) E481D, Q482E, y Q483P de la SEQ ID NO : 2. En otra modalidad específica, la presente invención se refiere a un polinucleótido aislado que codifica a un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución, en donde la mutación por substitución mejora la actividad de unión no esteroide o la sensibilidad no esteroide del dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B. Preferentemente, el polinucleótido aislado comprende una mutación de codón que da como resultado una substitución de un residuo de aminoácido en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de a) 401 o 429 de la SEQ ID NO:l, b) 401 y 429 de la SEQ ID N0:1, c) 337, 355, 385, 462, 470, 472, 473, o 500 de la SEQ ID NO : 2 , d) 321, 322, y 323 de la SEQ ID NO : 2 , e) 450, 451, y 452 de la SEQ ID NO:2, f) 455, 456, 457, y 458 de la SEQ ID NO : 2 , g) 470, 472, y 473 de la SEQ ID NO: 2, h) 475, 476, 477, 478, y 479 de la SEQ ID NO : 2 , e i) 481, 482, y 483 de la SEQ ID NO: 2. Más preferentemente el polipéptido aislado comprende una mutación de codón que da como resultado una substitución de a) un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 401 de la SEQ ID N0:1, b) un residuo de serina en la posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 429 de la SEQ ID N0:1, e) un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 401 de la SEQ ID N0:1, y un residuo de serina en una posición equivalente o análoga al aminoácido de un residuo de aminoácido 429 de la SEQ ID N0:1, d) un residuo de serina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 337, o 500 de la SEQ ID NO:2, e) un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 355 de la SEQ ID NO: 2, f) un residuo de alanina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 385 o 470 de la SEQ ID NO:2, g) un residuo de leucina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 462 de la SEQ ID NO: 2, h) un residuo de ácido aspartico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 472 de la SEQ ID NO : 2 , i) un ácido glutámico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 473 de la SEQ ID NO : 2 , j) un residuo de leucina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 321 de la SEQ ID NO : 2 , un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 322 de la SEQ ID NO : 2 , y un residuo de valina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 323 de la SEQ ID NO: 2, k) un residuo de ácido glutámico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 450 de la SEQ ID NO: 2, un residuo de valina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 451 de la SEQ ID NO:2, y un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 452 de la SEQ ID NO:2, 1) un residuo de lisina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 455 de la SEQ ID NO : 2 , un residuo de serina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 456 de la SEQ ID NO : 2 , un residuo de alanina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 457 de la SEQ ID NO: 2, un residuo de glutamina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 458 de la SEQ ID NO : 2 , m) un residuo de alanina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 470 de la SEQ ID NO : 2 , un residuo de ácido aspartico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 472 de la SEQ ID N0:2, y un residuo de tirosina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 473 de la SEQ ID N0:2, n) un residuo de treonina en una posición equivalente o análoga a los residuo de aminoácidos 475, 477 y 478 de la SEQ ID NO: 2, un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 476 de la SEQ ID N0:2, y un residuo de histidina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 479 de la SEQ ID NO : 2 , u o) un residuo de ácido aspartico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 481 de la SEQ ID NO: 2, un residuo de ácido glutamico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 482 de la SEQ ID NO : 2 , y un residuo de prolina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 483 de la SEQ ID N0:2. Aun más preferentemente el polinucleotido aislado comprende una mutación de codón o mutaciones de codón que dan como resultado una mutación por substitución seleccionada del grupo que consiste de a) E401D o G429S de la SEQ ID N0:1, b) E401D y G429S de la SEQ de ID N0:1, c) T337S, K355R, S385A, V462L, S470A, E471D T473E o, E500S de la SEO ID NO : 2 , d) G321L, P322R y G323V de la SEQ ID N0:2, e) D450E, A451V y K452R de la SEQ ID NO: 2, f) S455K, N456S, P457A, y S458Q de la SEQ ID NO:2, g) S470A, E472D, y ?473? de la SEQ ID NO:2, h) C475T, K476R, Q477T, K478T, y Y479H de la SEQ ID NO : 2 , e i) E481D, Q482E, y Q483P de la SEQ ID NO: 2. En otra modalidad específica, la presente invención se refiere a un polinucleótido aislado que codifica a un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución, en donde la mutación por substitución mejora tanto la actividad de unión esferoide o sensibilidad esteroide como la actividad de unión no esteroide o la sensibilidad no esteroide del dominio de unión de ligando del Grupo B. En otra modalidad específica, la presente invención también se refiere a un polinucleótido aislado que codifica un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución, en donde la mutación por substitución incrementa la sensibilidad de un heterodímero que comprende el dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución y un socio de dimerización. En una modalidad específica, el socio de dimerización es un polipéptido receptor de ecdisona . En otra modalidad especifica el socio de dimerización es un polipéptido de EcR truncado . Además, la presente invención se refiere a un vector de expresión que comprende un polinucleótido de acuerdo con la invención, operativamente enlazado a un elemento regulador de la transcripción. Preferentemente, el polinucleótido que codifica un dominio de unión del ligando del receptor nuclear que comprende una mutación por substitución se enlaza operativamente con una secuencia de control de expresión que permite la expresión del dominio de unión del ligando del receptor nuclear en una célula huésped competente para la expresión. La secuencia de control de expresión puede comprender un promotor que es funcional en la célula huésped en la cual se desea la expresión. El vector puede ser una molécula de ADN de plásmido o un vector viral . Los vectores virales preferidos incluyen retrovirus, adenovirus, virus adeno-asociado, virus de herpes y virus vacinal. La invención se refiere además a un virus recombinante desviador de la replicación que comprende en su genoma, el polinucleótido que codifica a un dominio de unión del ligando del receptor nuclear que comprende una mutación por substitución como se describió arriba. Así, la presente invención también se refiere a una célula huésped aislada que comprende tal vector de expresión, en donde el elemento de regulación de transcripción es operativo en la célula huésped . La presente invención también se refiere a un polipéptido aislado codificado por un polinucleótido de acuerdo con la invención. POLIPEPTIDOS DE LA INVENCIÓN El nuevo sistema de expresión genética inducible a base de receptores nucleares de la invención comprende al menos un cásete de expresión genética que comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido que comprende un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución. Así, la presente invención también proporciona un polipéptido aislado que comprende un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución de acuerdo con la invención. En otra modalidad específica, el dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B comprende una mutación por substitución en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido, a) 401 o 429 de la SEQ ID N0:1, b) 401 y 429 de la SEQ ID N0:1, c) 337, 344, 355, 385, 431, 442, 462, 470, 472, 473, 495, 500, 511, 516, o 528 de la SEQ ID NO:2, d) 321, 322, y 323 de la SEQ ID NO:2, e) 450, 451, y 452 de la SEQ ID N0:2, f) 455, 456, 457, y 458 de la SEQ ID NO:2, g) 470, 472, y 473 de la SEQ ID NO:2, h) 475, 476, 477, 478, y 479 de la SEQ ID NO : 2 , e i) 481, 482, y 483 de la SEQ ID NO : 2. Preferentemente, el dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B comprende una substitución de a) un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 401 de la SEQ ID NO:l, b) un residuo de serina en la posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 429 de la SEQ ID NO:l, c) un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 401 de la SEQ ID N0:1, y un residuo de serina en una posición equivalente o análoga al aminoácido de un residuo de aminoácido 429 de la SEQ ID NO:l, d) un residuo de serina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 337, 495, 500 o 528 de la SEQ ID NO:2, e) un residuo de asparagina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 344 de la SEQ ID NO:2, f) un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al aminoácido de residuos de aminoácido 355 o 511 de la SEQ ID NO: 2, g) un residuo de alanina en una posición equivalente o análoga a los residuos de aminoácido 385 o 470 de la SEQ ID NO:2, ) un residuo de leucina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 431 o 462 de la SEQ ID NO: 2, i) un residuo de lisina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 442 de la SEQ ID NO:2f j) un residuo de ácido aspartico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 472 de la SEQ ID N0:2, k) un residuo de ácido glutamico en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 473 de la SEQ ID NO : 2 , 1) un residuo de valina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 516 de la SEQ ID NO : 2 , m) un residuo de leucina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 321 de la SEQ ID NO : 2 , un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 322 de la SEQ ID N0:2, y un residuo de valina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 323 de la SEQ ID N0:2, n) un residuo de ácido glutámico en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 450 de la SEQ ID NO: 2, un residuo de valina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 451 de la SEQ ID NO: 2, y un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 452 de la SEQ ID N0:2, o) un residuo de lisina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 455 de la SEQ ID NO : 2 , un residuo de serina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 456 de la SEQ ID NO : 2 , un residuo de alanina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 457 de la SEQ ID NO: 2, y un residuo de glutamina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 458 de la SEQ ID NO : 2 , p) un residuo de alanina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 470 de la SEQ ID NO : 2 , un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 472 de la SEQ ID NO : 2 , y un residuo de tirosina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 473 de la SEQ ID NO: 2, q) un residuo de treonina en una posición equivalente o análoga al aminoácido de los residuos de aminoácido 475, 477 y 478 de la SEQ ID NO: 2, un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 476 de la SEQ ID N0:2, y un residuo de histidina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 479 de la SEQ ID NO : 2 , o r) un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 481 de la SEQ ID NO: 2, un residuo de ácido glutámico en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 482 de la SEQ ID NO:2, y un residuo de prolina en una posición equivalente o análoga al aminoácido del residuo de aminoácido 483 de la SEQ ID N0:2. En una modalidad preferida, el dominio de unión de ligando del receptor nuclear del Grupo B es de un receptor X retinoide. En otra modalidad específica, el dominio de unión del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución es un dominio de unión del ligando del receptor X retinoide que comprende una mutación por substitución, en donde la mutación por substitución se selecciona de un grupo que consiste de a) E401D o G429S de la SEQ ID NO : 1 , b) E401D y G429S de la SEQ de ID NO : 1 , c) T337S, D344N, K355R, S385A, 431L, R442K, V462L, S470A, E471D T473E, A495S, E500S, K511R, T516B o A528S de la SEQ ID NO:2, d) G321L, P322R y G323V de la SEQ ID NO:2, e) D450E, A451V y K452R de la SEQ ID NO : 2 , f) S455K, N456S, P457A, y S458Q de la SEQ ID NO: 2, g) S470A, E472D, y T473Y de la SEQ ID NO:2, h) C475T, K476R, Q477T, K478T, y Y479H de la SEQ ID NO : 2 , e i) E481D, Q482E, y Q483P de la SEQ ID NO:2. La presente invención también proporciona un polipéptido aislado seleccionado del grupo que consiste de a) un polipéptido aislado que comprende un dominio de transactivación, un dominio de unión de ADN y un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución de acuerdo con la invención; b) un polipéptido aislado que comprende un dominio de unión de ADN y un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución de acuerdo con la invención; y c) un polipéptido aislado que comprende un dominio de transactivación y un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución de acuerdo con la invención. En una modalidad preferida, el dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B es de un receptor X retinoide. La presente invención también proporciona un polipéptido híbrido aislado seleccionado del grupo que consiste de a) un polipéptido híbrido aislado que comprende un dominio de transactivación, un dominio de unión de ADN y un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución de acuerdo con la invención; b) un polipéptido híbrido aislado que comprende un dominio de unión de ADN y un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución de acuerdo con la invención; y c) un polipéptido híbrido aislado que comprende un dominio de transactivación y un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución de acuerdo con la invención. En una modalidad preferida, el dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B es de un receptor X retinoide. La presente invención también proporciona un polipéptido aislado que comprende un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución que afecta la actividad de unión del ligando o la sensibilidad del ligando del dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B. En particular, la presente invención se refiere a un polipéptido de receptor nuclear del Grupo B que comprende un dominio de unión del ligando que comprende una mutación por substitución que reduce la actividad de unión del ligando o la sensibilidad del ligando del dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B En una modalidad específica, la presente invención se refiere a un polipéptido aislado que comprende un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución, en donde la mutación por substitución reduce la- actividad de unión esferoide o la sensibilidad esferoide del dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B. Preferentemente el polipéptido aislado comprende una substitución de un residuo de aminoácido en una posición equivalente o análoga a, a) el residuo de aminoácido 401 o 429 de la SEQ. ID.NOrl, o b) el residuo de aminoácido 344, 431, 442, 495, 511 o 528 SEQ. ID.NO: 2. Más preferentemente el polinucleotido aislado comprende una substitución a) un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 401 de la SEQ ID NO:l, b) un residuo de serina en la posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 429 de la SEQ ID N0:1, c) un residuo de asparagina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 344 de la SEQ ID NO : 2 , d) un residuo de leucina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 431 de la SEQ ID NO: 2, e) un residuo de lisina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 442 de la SEQ ID N0:2, f) un residuo de serina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 495 o 528 de la SEQ ID N0:2, o g) un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga del residuo de aminoácido 511 de la SEQ ID NO : 2. aún más preferentemente el polinucleotido aislado comprende una mutación de substitución seleccionada del grupo que consiste de a)E401D o G429S de la SEQ ID N0:1 y b) D344N, M431L, R442K, A495S, K511R o A528S de la SEQ ID NO: 2. En una modalidad específica, la presente invención se refiere a un polipéptido aislado que comprende un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución, en donde la mutación por substitución reduce la actividad de unión de ligando no esferoide o la sensibilidad del ligando del dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B. Preferentemente, el polipéptido aislado comprende una substitución de un residuo de aminoácido en una posición equivalente o análoga a, a) el residuo de aminoácido 401 o 429 de la SEQ ID NO-.l, b) los residuos de aminoácido 344,441 442, 495, 511 o 528 de la SEQ ID NO. 2. Más preferentemente el polipéptido aislado comprende una substitución de a) un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 401 de la SEQ ID NO:l, b) un residuo de serina en la posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 429 de la SEQ ID 110:1, c) un residuo de asparagina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 344 de la SEQ ID NO : 2 , d) un residuo de leucina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 431 de la SEQ ID NO: 2, e) un residuo de lisina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 442 de la SEQ ID N0:2, f) un residuo de serina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 495 o 528 de la SEQ ID NO: 2, o g) un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga del residuo de aminoácido 511 de la SEQ ID NO: 2. aún más preferentemente el polipéptido aislado comprende una mutación de substitución seleccionada del grupo que consiste de a)E401D o G429S de la SEQ ID N0:1 y b) D344N, M431L, 442K, A495S, K511R o A528S de la SEQ ID N0:2. Además, la presente invención se refiere a un polipéptido que comprende un dominio de unión de ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución que mejora la actividad de unión del ligando o la actividad del ligando del dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B. En una modalidad específica, la presente invención se refiere a un polipéptido que comprende un dominio de unión de ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución que mejora la actividad de unión esferoide o la sensibilidad esferoide del dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B. Preferentemente, el polipéptido aislado comprende una substitución de un residuo de aminoácido en una posición equivalente o análoga a un residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de a) 401 o 429 de la SEQ ID NO : 1 , b) 401 y 429 de la SEQ ID N0:1, c) 337, 355, 385, 462, 470, 472, 473, o 500 de la SEQ ID N0:2, d) 321, 322, y 323 de la SEQ ID N0:2, e) 450, 451, y 452 de la SEQ ID N0:2, f) 455, 456, 457, y 458 de la SEQ ID NO : 2 , g) 470, 472, y 473 de la SEQ ID NO:2, h) 475, 476, 477, 478, y 479 de la SEQ ID NO:2, e i) 481, 482, y 483 de la SEQ ID NO : 2. Más preferentemente el polipéptido aislado comprende una substitución de a) un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 401 de la SEQ ID NO : 1, b) un residuo de serina en la posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 429 de la SEQ ID NO : 1 , c) un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 401 de la SEQ ID N0:1, y un residuo de serina en una posición equivalente o análoga al aminoácido de un residuo de aminoácido 429 de la SEQ ID NO : 1 , d) un residuo de serina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 337, o 500 de la SEQ ID NO: 2, e) un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 355 de la SEQ ID NO : 2 , f) un residuo de alanina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 385 o 470 de la SEQ ID NO : 2 , g) un residuo de leucina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 462 de la SEO ID NO: 2, h) un residuo de ácido aspartico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 472 de la SEQ ID NO : 2 , i) un ácido glutámico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 473 de la SEQ ID NO:2, j) un residuo de leucina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 321 de la SEQ ID N0:2, un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 322 de la SEQ ID NO:2, y un residuo de valina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 323 de la SEQ ID NO : 2 , k) un residuo de ácido glutámico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 450 de la SEQ ID NO : 2 , un residuo de valina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 451 de la SEQ ID NO : 2 , y un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 452 de la SEQ ID NO:2, 1) un residuo de lisina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 455 de la SEQ ID NO : 2 , un residuo de serina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 456 de la SEQ ID NO : 2 , un residuo de alanina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 457 de la SEQ ID NO : 2 , un residuo de glutamina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 458 de la SEQ ID N0:2, m) un residuo de alanina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 470 de la SEQ ID NO: 2, un residuo de ácido aspartico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 472 de la SEQ ID NO : 2 , y un residuo de tirosina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 473 de la SEQ ID NO: 2, n) un residuo de treonina en una posición equivalente o análoga a los residuo de aminoácidos 475, 477 y 478 de la SEQ ID NO : 2 , un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 476 de la SEQ ID NO: 2, y un residuo de histidina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 479 de la SEQ ID NO: 2, u o) un residuo de ácido aspartico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 481 de la SEQ ID NO: 2, un residuo de ácido glutamico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 482 de la SEQ ID NO: 2, y un residuo de prolina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 483 de la SEQ ID NO : 2. Aun más preferentemente el polinucleotido aislado comprende una mutación por substitución seleccionada del grupo que consiste de a) E401D o G429S de la SEQ ID NO : 1 , b) E401D y G429S de la SEQ de ID NO : 1 , c) T337S, K355 , S385A, V462L, S470A, E471D T473E o, E500S de la SEQ ID NO:2, d) G321L, P322R y G323V de la SEQ ID NO : 2 , e) D450E, A451V y K452R de la SEQ ID NO : 2 , f) S455K, N456S, P457A, y S458Q de la SEQ ID NO:2, g) S470A, E472D, y T473Y de la SEQ ID NO : 2 , h) C475T, K476R, Q477T, K478T, y Y479H de la SEQ ID NO : 2 , e i) E481D, Q482E, y Q483P de la SEQ ID NO : 2. En otra modalidad especifica, la presente invención se refiere a un polinucleótido aislado que comprende a un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución, que mejora la actividad de unión no esteroide o la sensibilidad no esteroide del dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B. Preferentemente, el polinucleótido aislado comprende una substitución de un residuo de aminoácido en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido seleccionado del grupo que consiste de a) 401 o 429 de la SEQ ID NO : 1 , b) 401 y 429 de la SEQ ID NO:l, c) 337, 355, 385, 462, 470, 472, 473, o 500 de la SEQ ID NO : 2 , d) 321, 322, y 323 de la SEQ ID NO : 2 , e) 450, 451, y 452 de la SEQ ID NO : 2 , f) 455, 456, 457, y 458 de la SEQ ID NO : 2 , g) 470, 472, y 473 de la SEQ ID NO : 2 , h) 475, 47S, 477, 478, y 479 de la SEQ ID NO:2, e i) 481, 482, y 483 de la SEQ ID NO:2. Más preferentemente el polipéptido aislado comprende una substitución de a) un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 401 de la SEQ ID NO : 1 , b) un residuo de serina en la posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 429 de la SEQ ID NO:l, c) un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 401 de la SEQ ID NO:l, y un residuo de serina en una posición equivalente o análoga al aminoácido de un residuo de aminoácido 429 de la SEQ ID N0:1, d) un residuo de serina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 337, o 500 de la SEQ ID NO : 2 , e) un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 355 de la SEQ ID NO: 2, f) un residuo de alanina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 385 o 470 de la SEQ ID N0:2, g) un residuo de leucina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 462 de la SEQ ID NO : 2 , h) un residuo de ácido aspártico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 472 de la SEQ ID NO: 2, i) un ácido glutámico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 473 de la SEQ ID N0:2, j) un residuo de leucina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 321 de la SEQ ID N0:2, un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 322 de la SEQ ID NO : 2 , y un residuo de valina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 323 de la SEQ ID NO:2, k) un residuo de ácido glutamico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 450 de la SEQ ID N0:2, un residuo de valina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 451 de la SEQ ID NO: 2, y un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 452 de la SEQ ID NO: 2, 1) un residuo de lisina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 455 de la SEQ ID NO : 2 , un residuo de serina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 4-56 de la SEQ ID N0:2, un residuo de alanina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 457 de la SEQ ID NO: 2, un residuo de glutamina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 458 de la SEQ ID N0:2, m) un residuo de alanina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 470 de la SEQ ID NO : 2 , un residuo de ácido aspartico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 472 de la SEQ ID NO : 2 , y un residuo de tirosina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 473 de la SEQ ID N0:2, n) un residuo de treonina en una posición equivalente o análoga a los residuo de aminoácidos 475, 477 y 478 de la SEQ ID NO : 2 , un residuo de arginina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 476 de la SEQ ID NO : 2 , y un residuo de histidina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 479 de la SEQ ID N0:2, u o) un residuo de ácido aspartico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 481 de la SEQ ID N0:2, un residuo de ácido glutamico en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 482 de la SEQ ID NO : 2 , y un residuo de prolina en una posición equivalente o análoga al residuo de aminoácido 483 de la SEQ ID NO : 2. Aun más preferentemente el polinucleotido aislado comprende una mutación por substitución seleccionada del grupo que consiste de a) E401D o G429S de la SEQ ID N0:1, b) E401D y G429S de la SEQ de ID NO:l, c) T337S, K355R, S385A, V462L, S470A, E471D ?473? o, E500S de la SEQ ID NO:2, d) G321L, P322R y G323V de la SEQ ID N0:2, e) D450E, A451V y K452R- de la SEQ ID NO : 2 , f) S455 , N456S, P457A, y S458Q de la SEQ ID NO:2, g) S470A, E472D, y T473Y de la SEQ ID N0:2, h) C475T, K476R, Q477T, K478T, y Y479H de la SEQ ID NO : 2 , e i) E481D, Q482E, y Q483P de la SEQ ID NO: 2. En otra modalidad específica, la presente invención se refiere a un poliéptido ' aislado que comprende un dominio de unión de ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución, en donde la mutación por substitución mejora tanto la actividad de unión esferoide o sensibilidad esteroide como la actividad de unión no esferoide o la sensibilidad no esteroide del dominio de unión del ligando del Grupo B. En otra modalidad específica, la presente invención también se refiere a un poliéptido que comprende un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución, en donde la mutación por substitución incremente la sensibilidad del ligando de un heterodímero que comprende el dominio de unión de ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución y un socio de dimerización. En una modalidad específica el socio de dimerización es un polipéptido de receptor de ecdisona. En otra modalidad específica, el socio de dimerización es un polipéptido de EcR truncado. La presente invención también se refiere a composiciones que comprenden un polipéptido de acuerdo con la invención. MÉTODO PARA MODULAR LA EXPRESIÓN DEL GEN DE LA INVENCIÓN La invención de los Solicitantes también se refiere a los métodos para modular la expresión del gen en una célula huésped utilizando un sistema de modulación de la expresión del gen de acuerdo con la invención. Específicamente, la invención de los Solicitantes proporciona un método para modular la expresión de un gen en una célula huésped que comprende las etapas de: a) introducir en la célula huésped un sistema de modulación de la expresión del gen de acuerdo con la invención; y b) introducir en la célula huésped un ligando; en donde el gen a modularse es un componente de un cásete de expresión genética que comprende: i) un elemento de respuesta que comprende un dominio reconocido por el dominio de unión al ADN del sistema de expresión genética; ii) un promotor que se activa mediante el dominio de transactivación del sistema de expresión genética y iii) un gen cuya expresión se modula, por lo cual a la introducción del ligando en la célula huésped, se modula la expresión genética . La invención también proporciona un método para modular la expresión de un gen en una célula huésped que comprende las etapas de: a) introducir en la célula huésped un sistema de modulación de la expresión genética de acuerdo a la invención; b) introducir en la célula huésped un cásete de expresión genética de acuerdo a la invención, en donde el cásete de expresión genética comprende: i) un elemento de respuesta que comprende un dominio reconocido por el dominio de unión al ADN del sistema de expresión genética; ii) un promotor que se activa mediante el dominio de transactivación del sistema de expresión genética y iii) un gen cuya expresión se modula; y c) introducir en la célula huésped un ligando; mediante lo cual a la introducción del ligando en la célula huésped, se modula la expresión genética. La invención de los Solicitantes también proporciona un método para modular la expresión de un gen en una célula huésped que comprende un cásete de expresión genética que comprende un elemento de respuesta que comprende un dominio al cual se une el dominio de unión del ADM del primer polipéptido híbrido del sistema de modulación de expresión genética; un promotor que se activa mediante el dominio de transactivación del segundo polipéptido híbrido del sistema de modulación de la expresión genética; y un gen cuya expresión se modula; en donde el método comprende las etapas de: a) introducir en la célula huésped un sistema de modulación de la expresión genética de acuerdo a la invención; y b) introducir en la célula huésped un ligando; por lo cual a la introducción del ligando en el huésped, se modula la expresión genética. Los genes de interés para la expresión en una célula huésped utilizando los métodos de los Solicitantes pueden ser genes endógenos o genes heterógenos . La información de las secuencias de ácido nucleico o aminoácidos para un gen o proteína deseados puede localizarse en una de las muchas bases de datos de acceso público, por ejemplo, GENEBAWK, EMBL, Swiss-Prot y PIR o en muchas publicaciones de periódicas relacionadas. Así, aquellos expertos en la materia tienen acceso a la información de secuencias de ácido nucleico para virtualmente todos los genes conocidos. Tal información puede entonces utilizarse para construir las construcciones deseadas para la inserción del gen de interés dentro de los casetes de expresión genética utilizados en los métodos de los Solicitantes descritos en la presente.

Ejemplos de genes de interés para la expresión en una célula huésped utilizando los métodos de los Solicitantes incluyen, pero no se limitan a: antigenos producidos en plantas como vacunas, enzimas similar a alfa-amilasa, fitasa, glucanes, xilasa y xilanasa, genes para resistencia contra insectos, nemátodos, hongos bacterias, virus y tensiones abióticas, nutracéuticos, f rmacéuticos, vitaminas, genes para modificar el contenido de aminoácidos, resistencia herbicida, frió, sequía, y tolerancia al calor, productos industriales, aceites, proteínas, carbohidratos, antioxidantes, plantas masculinas estériles, flores, combustibles, otras características de producción, polipéptidos terapéuticamente deseables que codifican genes o productos que pueden utilizarse para tratar una condición, una enfermedad, un trastorno, una disfunción, un defecto genético, tal como anticuerpos monoclonales , enzimas, proteasas, citocinas, interferones, insulina, eritropoyetina, factores de coagulación, otros factores o componentes sanguíneos, vectores virales para terapia de gen, virus para vacunas, objetivos para descubrir drogas, genómicos funcionales y análisis y aplicaciones proteómicas y lo similar . Los ligandos aceptables son cualquiera que module la expresión del gen cuando la unión del dominio de unión de ADN del sistema de expresión genética de acuerdo a la invención al elemento de respuesta en la presencia del ligando da como resultado la activación o supresión de la expresión de los genes. Los ligandos preferidos incluyen un ecdisteroide, tal como ecdisona, 20-hidroxiecdisona, ponasterona A, muristerona A y lo similar, ácido 9-cis-retinóico, análogas sintéticos del ácido retinóico, ?,?'-diacilhidracinas tales como las descritas en las Patentes de E.U. No. 6,013,836; 5,117,057; 5,530,028; y 5,378,726; dibenzoilalquil cianohidracinas tales como las descritas en la Solicitud Europea No. 461,809; N-alquil-N, ' -diaroilhidracinas tales como las descritas en la Patente de E.U. No. 5,225,443; N-acil-N-alquilcarbonilhidracinas tales como las descritas en la Solicitud Europea No. 234,994; N-aroil-N-alquil-N' -aroilhidracinas tales como las descritas en la Patente de E.U. No. 4,985,461; cada una de las cuales se incorpora en la presente mediante la referencia y otros materiales similares incluyendo 3 , 5-di-tert-butil-4-hidroxi-N-isobutil-benzamida, 8-0-acetilharpagida, oxisteroles 22R hidroxicolesterol , 24 (S) hidroxicolesterol , 25-epoxicolesterol , T0901317 , 5-alfa-6-alfa-epoxicolesterol-3 -sulfato (ECHS) , 7-cetocolesterol-3-sulfato, farnesol, ácidos biliares, 1 , 1-bifosfonato éster, Hormona Juvenil III, un ácido 9-cis-retinoico, ácido 4- (1- (3 , 5, 5, 8, 8-pentametil-5, 6, 7, 8-tetrahidro-2-naftil) -etenil) benzoico (3-metil-TTEB) , (ácido (E)-2)2-(5,6,7, 8-tetra-hidro-3 ,5,5,8, 8-pentametil-2 -naftil ) ropen-l-il) -4-tiofencarboxilico, 2- (5 , 6 , 7 , 8 -tetra-hidro-3 ,5,5,8, 8-tetrametil-2-naftil) -2- (carboxifenil) -1,3-dioxolano, ácido 4- (5H-2 , 3- (2 , 5-dimetil-2 , 5-hexano) -5-metil-dibenzo (b,e) (1 , ) diazepin-ll-il) -benzoico (HX600) o análogos de tiadiazepina de los mismos, ácido 3,7,11,15-tetrametil hexadecanoico (ácido fit mico) , ácido 6- (1- (3,5,5,8, 8-pentametil-5 , 6,7, 8-tetrahidronaftalen-2-il) ciclopropil) nicotínico, 2 (4-caroxifenil) -2- (5, 6, 7, 8-tetrahidro-5 , 5,8, 8-tetrametil-2-nafatlenil) -1, 3-ditiano, o ácido 4- (2-metil) -1- (5, 6 , 7 , 8-tatrahidro-5 , 5 , 8 , 8-tetrametil-2-nafatalenil) ropenil) benzoico y lo similar. En una modalidad preferida, el ligando para utilizarse en el método de modular la expresión genética de los Solicitantes es un compuesto de la fórmula: en donde : E es un alquilo (C -C6) que contiene un carbón terciario o un ciano alquilo (C3~C5) que contiene un carbón terciario; R1 es H, Me, Et , i-Pr, F, formil, CF3, CHF2, CHC12, CH2F, CH2C1, CH20H, CH20Me, CH2CN, CN, C°CH, 1-propinilo, 2- propinilo, vinilo, OH, OMe, OEt, ciclopropilo, CF2CF3, CH=CHCN, alilo, azido, SCN o SCHF2; R2 es H, Me, Et , n-Pr, i-Pr, formil, CF3 , CHF2, CHCl2; C¾F, CH2C1, CH2OH, CH2OMe, CH2CN, CN, C°CH, 1-propinilo, 2- propinilo, vinilo, Ac, F, Cl , OH, OMe, OEt , O-n-Pr, Oac, Me2, NEt2, SMe, SEt, SOCF3, OCF2CF2H, COEt , ciclopropilo, CF2CF3, CH=CHCN, alilo, azido, OCF3, OCHF2, O-i-Pr, SCN, SCHF2, SOMe, NH-CN o unido con R3 y los carbonos de fenilo a los cuales R2 y R3 se unen para formar un etilenodioxi, un anillo de dihidrofurilo con el oxígeno adyacente a un carbono de fenil, o un anillo de dihidropirilo con el oxígeno adyacente a un carbono de fenilo; R3 es H, Et o junto con R2 y los carbones de fenilo a los cuales R2 y R3 se unen para formar un etilenodioxi, un anillo de dihidrofurilo con el oxígeno adyacente a un carbono de fenilo o un anillo de dihidropirilo con el oxígeno adyacente a un carbono de fenilo; R4, R5 y Re son independientemente H, Me, Et, F, Cl, Br, formil, CF3, CHF2, CHC12, CH2F, CH2C1 , C¾OH, CN, C°CH, 1- propinilo, 2 -propinilo, vinilo, OMe, OEt, SMe o SEt. En otra modalidad preferida, el ligando para utilizarse en el método de modular la expresión genética de los Solicitantes es una ecdisona, 20-hidroxiecdisona, ponasterona A, muristerona A, En otra modalidad preferida el ligando para utilizarse en el método de modular la expresión del gen de los Solicitantes es un ácido 9-cis-retinoico, ácido 4- (1- (3,5,5,8, 8 -pentametil-5 , 6,7, 8-tetrahidro~2-naftil) -etenil) benzoico (3 -metil-TTEB) , (ácido (E) -2)2- (5, 6, 7, 8-tetra-hidro-3,5,5,8, 8-pentametil-2-naftil) propen-l-il) -4-tiofencarboxílico, 2- (5, 6 , 7, 8-tetra-hidro-3 ,5,5,8,8-tetrametil-2-naftil) -2- (carboxifenil) -1, 3-dioxolano, ácido 4- (5H-2,3- (2 , 5-dimetil-2 , 5-hexano) -5-metil-dibenzo (b,e) (1 , 4) diazepin-ll-il) -benzoico (HX600) o análogos de tiadiazepina de los mismos, ácido 3 , 7, 11, 15-tetrametil hexadecanoico (ácido fitámico) , ácido 6- (1- (3 , 5 , 5 , 8 , 8-pentametil-5 , 6,7, 8-tet ahidronaftalen-2-il) ciclopropil) nicotínico, 2 (4-caroxifenil) -2- (5 , 6 , 7, 8-tetrahidro-5 ,5,8,8-tetrametil-2-nafatlenil) -1, 3-ditiano, o ácido 4- (2-metil) -1- (5,6,7, 8-tatrahidro-5, 5 , 8, 8-tetrametil-2-nafatalenil) propenil) benzoico. En otra modalidad preferida, puede utilizarse un segundo ligando además del primer ligando tratado anteriormente en el método de modular la expresión de un gen de los Solicitantes Preferentemente, este segundo ligando es 9-cis-ácido retinóico o un análogo sintético del ácido retinóico. CELULAS HUÉSPED Y ORGANISMOS NO-HUMANOS DE LA INVENCIÓN Como se describió anteriormente, el sistema de modulación de la expresión genética de la presente invención puede utilizarse para modular la expresión genética en una célula huésped. La expresión en células huésped transgénicas puede ser útil para la expresión de varios genes de interés. La invención de los Solicitantes proporciona la modulación de la expresión genética en células huésped procarióticas y eucarióticas . La expresión en células huésped transgénicas es útil para la expresión de varios polipéptidos de interés incluyendo pero sin limitarse a antigenos producidos en plantas como vacunas, enzimas similar alfa-amilasa, fitasa, glucanes, xilasa y xilanasa, genes para la resistencia contra insectos, nemátodos, hongos, bacterias, virus y tensiones abióticas, nutracéuticos , antígenos, farmacéuticos, vitaminas, genes para modificar el contenido de aminoácidos, resistencia herbicida, frío, sequía y tolerancia al calor, productos industriales, aceites, proteínas, carbohidratos, antioxidantes , plantas masculinas estériles, flores, combustibles, otras características de producción, polipéptidos terapéuticos, intermediarios de la trayectoria; para la modulación de trayectorias ya existentes en el huésped para la síntesis de nuevos productos hasta ahora no posibles de utilizar en el huésped; ensayos a base de células, ensayos genómicos funcionales, producción de proteínas bioterapéuticas, ensayos proteómicos y lo similar. Adicionalmente los productos del gen pueden ser útiles para conferir mayores rendimientos de crecimiento de los huéspedes o para permitir que se utilice un modo de crecimiento alternativo . Asi, la invención de los Solicitantes proporciona una célula huésped aislada que comprende un sistema de expresión genética de acuerdo a la invención. La presente invención también proporciona una célula huésped aislada que comprende un cásete de expresión genética de acuerdo a la invención. La invención de los Solicitantes también proporciona una célula huésped aislada que comprende un polinucleótido o un polipéptido de acuerdo a la invención. En otra modalidad la invención se refiere a una célula huésped transfectada con un vector de expresión de acuerdo a la invención. La célula huésped puede ser una célula bacterial, una célula fungal, una célula de nemátodo, una célula de insecto, una célula de pescado, una célula de planta, una célula aviar, una célula animal o una célula de mamífero. En aún otra modalidad, la invención se refiere a un método para producir un dominio de unión del ligando receptor nuclear que comprende una mutación por substitución, en donde el método comprende cultivar la célula huésped como se describió anteriormente en un medio de cultivo bajo condiciones que permitan la expresión de un polinucleótido que codifique el dominio de unión del ligando del receptor nuclear que comprende una mutación por substitución y aislar el dominio de unión del ligando del receptor nuclear que comprende una mutación por substitución a partir del cultivo. En una modalidad especifica, la célula huésped aislada es una célula huésped procariótica o una célula huésped eucariotica. En otra modalidad específica, la célula huésped aislada es una célula huésped de invertebrado o una célula huésped de vertebrado. Preferentemente, la célula huésped se selecciona del grupo que consiste de una célula bacterial, una célula fungal, una célula de levadura, una célula de nemátodo, una célula de insecto, una célula de pescado, una célula de planta, una célula aviar, una célula animal y una célula de mamífero. Más preferentemente, la célula huésped es una célula de levadura, una célula de nemátodo, una célula de insecto, una célula de planta, una célula de pez cebrita, una célula de pollo, una célula de hámster, una célula de ratón, una célula de rata, una célula de conejo, una célula de gato, una célula de perro, una célula de bovino, una célula de cabra, una célula de vaca, una célula de cerdo, una célula de caballo, una célula de oveja, una célula de simio, una célula de mono, una célula de chimpancé o una célula de humano. Los ejemplos de las células huésped preferidas incluyen, pero no se limitan a, especies fúngales o de levadura tales como Aspergilus, Trichoderma, Saccharomyces, Pichia, Candida, Hansenula o especies bacteriales tales como las de los géneros Synechocystis, Synechococcus, Salmonella, Bacíllus, Acinetobacter, Rhodococcus, Streptomyces, Escherichia, Pseudomonas, Methylomonas, Methylobacter, Alcaligenes, Synechocystis, Anabaena, Thiobacillus, Methanobacterium y Klebsiella; especies de plantas seleccionadas del grupo que consiste de unas células huésped de manzana, Arabidopsls, bajra, plátano, cebada, frijol, remolacha, frijol mungo, garbanzo, chile, pepino, berenjena, vicia, maíz, melón, mijo, judía mungo, avena, quimbombó, Panicum, papaya, cacahuate, pera, pimienta, chícharo de árbol, piña, Phaseolus, papa, calabaza, arroz, sorgo, soya, chayóte, caña de azúcar, betabel, girasol, camote, té, tomate, tabaco, sandía y trigo; de animal; y de mamífero. En una modalidad específica la célula huésped es una célula de levadura seleccionada del grupo que consiste de una célula huésped de Saccharomyces, una Pichia y una Candida . En otra modalidad específica, la célula huésped es una célula de nemátodo Caenorhabdus elegans. En otra modalidad específica, la célula huésped es una célula de insecto. En otra modalidad específica, la célula huésped es una célula de planta seleccionada del grupo que consiste de una célula de manzana, Arabidopsis, bajra, plátano, cebada, frijol, remolacha, frijol mungo, garbanzo, chile, pepino, berenjena, vicia, maíz, melón, mijo, judía mungo, avena, quimbombó, Panicum, papaya, cacahuate, pera, pimienta, chícharo de árbol, piña, Phaseolus, papa, calabaza, arroz, sorgo, soya, chayóte, caña de azúcar, betabel, girasol, camote, té,, tomate, tabaco, sandía, y trigo. En otra modalidad específica, la célula huésped es una célula de pez cebrita. En otra modalidad específica, la célula huésped es una célula de pollo. En otra modalidad específica, la célula huésped es una célula de mamífero, seleccionada del grupo que consiste de una célula de hámster, una célula de ratón, una célula de rata, una célula de conejo, una célula de gato, una célula de perro, una célula de bovino, una célula de cabra, una célula de vaca, una célula de cerdo, una célula de caballo, una célula de oveja, una célula de mono, una célula de chimpancé, o una célula de humano. La transformación de la célula huésped se conoce bien en la materia y puede lograrse por una variedad de métodos incluyendo sin limitarse a la electroporación, infección viral, transfección de plásmido/vector, transfección mediada por vector no-viral, transformación mediada por Agrobacterium, bombardeo de partículas y lo similar. La expresión de los productos del gen deseados involucra cultivar las células huésped transformadas bajo condiciones adecuadas e inducir la expresión del gen transformado. Las condiciones de cultivo y los protocolos de expresión genética en células procariotícas y eucarióticas se conocen bien en la materia (ver General Methods sección de Ejemplos) . Las células pueden recolectarse y los productos del gen aislarse de acuerdo a protocolos específicos para el producto del gen. Además, la célula huésped puede seleccionarse para que module la expresión del polinucleótido de interés o modifique y procese el producto del polipéptido en la manera especifica deseada. Las células huésped diferentes tienen características y mecanismos específicos para el procesamiento y modificación translacional y post-translacional [e.g. , glicosilacion, desdoblamiento (e.g. de secuencia de señal)] de proteínas. Las líneas celulares apropiadas o los sistemas de huésped pueden seleccionarse para asegurar la modificación y procesamiento deseados de la proteína extraña expresada. Por ejemplo, la expresión en un sistema bacterial puede utilizarse para producir un producto de proteína de núcleo no-glicosilado . Sin embargo, un polipéptido expresado en bacterias puede no doblarse apropiadamente. La expresión en levadura puede producir un producto glicosilado. La expresión en células eucarióticas puede incrementar la probabilidad de glicosilacion "nativa" y el doblamiento de una proteína heteróloga. Además, la expresión en células de mamífero puede proporcionar una herramienta para reconstituir o constituir la actividad del polipéptido. Además, los diferentes sistemas de expresión vector/huésped pueden afectar las reacciones del procesamiento, tal como los desdoblamientos proteolíticos, hasta un diferente grado. La invención de los Solicitantes también se refiere a organismos no-humanos que comprenden una célula huésped aislada de acuerdo a la invención. En una modalidad específica, el organismo no-humano es un organismo procariótico o un organismo eucariótico. En otra modalidad específica, el organismo no-humano es un organismo invertebrado o un organismo vertebrado . Preferentemente, el organismo no-humano se selecciona del grupo que consiste de una bacteria, un hongo, una levadura, un nemátodo, un insecto, un pez, una planta, una ave, un animal y un mamífero. Más pref rentemente, el organismo no humano es una levadura, un nemátodo, un insecto, una planta, una pez cebrita, un pollo, un hámster, un ratón, una rata, un conejo, un gato, un perro, un bovino, una cabra, una vaca, un cerdo, un caballo, una ove a, un simio, un mono, o un chimpancé . En una modalidad específica, el organismo no-humano es una levadura seleccionada del grupo que consiste de Saccharomyces, Pichia y Candida. En otra modalidad específica, el organismo no-humano es un nemátodo Caenorhabdus elegans . En otra modalidad específica, el organismo no humano es una planta seleccionada del grupo que consiste de una manzana, Arabidopsis, bajra, plátano, cebada, frijol, remolacha, frijol mungo, garbanzo, chile, pepino, berenjena, vicia, maíz, melón, mijo, judía mungo, avena, quimbombó, Panícum, papaya, cacahuate, pera, pimienta, chícharo de árbol, piña, Phaseolus, papa, calabaza, arroz, sorgo, soya, chayóte, caña de azúcar, betabel, girasol, camote, té, tomate, tabaco, sandía y trigo. En otra modalidad específica, el organismo no-humano es un ratón Mus musculus. MEDICIÓN DE LA EXPRESIÓN/TRANSCRIPCIÓN DEL GEN Una medición útil de los métodos de la invención de los Solicitantes es la del estado transcripcional de la célula incluyendo las identidades y abundancias de ARN, preferentemente especies ARNm. Tales mediciones se conducen convenientemente al medir las abundancias de ADNc mediante cualquiera de las diversas tecnologías de expresión genética existentes. La tecnología de ordenamiento de ácidos nucleicos es una técnica útil para determinar la expresión diferencial del ARNm. Tal tecnología incluye, por ejemplo, fragmentos de oligonucleótidos y microordenamientos de ADN. Estas técnicas dependen de los fragmentos u oligonucleótidos de ADN que corresponden a diferentes genes o ADNcs que se inmovilizan sobre un soporte sólido e hibridizan para sondas preparadas a partir de grupos de ARNm total extraídos de células, tejidos u organismos completos y convertidos a ADNc . Los fragmentos de oligonucleótidos son ordenamientos de oligonucleótidos sintetizados sobre un substrato utilizando técnicas fotolitográficas . Se han producido fragmentos que pueden analizarse para hasta 1700 genes. Los microordenamientos de ADN son ordenamientos de muestras de ADN, típicamente productos de PCR, que se imprimen robóticamente sobre un portaobjetos de microscopio. Se analiza cada gen mediante una secuencia de ADN objetivo de longitud total o parcial. Los microordenamientos con hasta 10,000 genes se preparan ahora rutinariamente de manera comercial . La principal diferencia entre estas dos técnicas es que los fragmentos de oligonucleótidos típicamente utilizan oligonucleótidos de 25-mer que permite el fraccionamiento de moléculas de ADN cortas mientras que los objetivos de ordenamientos de ADN mayores, de aproximadamente 100 pares de bases, pueden proporcionar más sensibilidad al fraccionar mezclas de ADN complejas. Otra medición útil de los métodos de la invención de los Solicitantes es la de determinar el estado de traducción de la célula al medir las abundancias de las especies de proteínas constituyentes presentes en la célula utilizando procesos bien conocidos en la técnica.

Cuando se desea la identificación de los genes asociados con varias funciones fisiológicas, puede emplearse un análisis en el cual se midan los cambios en tales funciones como crecimiento celular, apoptosis, senectud, diferenciación, adhesión, unión a moléculas específicas, unión a otra célula, organización celular, oganogenia, transporte intracelular, facilitación del transporte, conversión de energía, metabolismo, miogenia, neurogenia y/o hematopoyesis . Además, puede utilizarse la expresión genética de marcador o informador seleccionable para medir la modulación de la expresión genética utilizando la invención de los Solicitantes . Se conocen bien en la técnica otros métodos para detectar los productos de la expresión genética e incluyen inmunotransferencias Southern (detección de ADM) , inmunotransferencia de mancha o franja (ADM, ARN) , inmunotransferencia Northern (ARN) , RT-PCR (RNA) , inmunotransferencia Western (detección de polipéptido) y análisis ELISA (polipéptidos) . Aunque menos preferidas, las proteínas etiquetadas pueden utilizarse para detectar una secuencia de ácido nucleico particular a la cual se hibridiza . En algunos casos es necesario amplificar la cantidad de una secuencia de ácido nucleico. Esto puede llevarse a cabo utilizando uno o más de varios métodos adecuados incluyendo, por ejemplo, reacción en cadena de polimerasa ("PCR"), reacción en cadena de ligasa ( "LCR" ) , amplificación por desplazamiento de filamento ("SDA"), amplificación a base de transcripción y lo similar. La PCR se lleva a cabo de acuerdo con técnicas conocidas en las cuales, por ejemplo, se trata una muestra de ácido nucleico en la presencia de una polimerasa de ADN termoestable, bajo condiciones de hibridación, con un par de iniciadores de oligonucleótidos , con un iniciador que hibridiza a un filamento (modelo) de la secuencia específica a detectarse. Los iniciadores son suficientemente complementarios a cada filamento modelo de la secuencia específica a hibridizar con el mismo. Se sintetiza un producto de extensión de cada iniciador y es complementario al filamento modelo de ácido nucleico al cual se hibridiza. El producto de extensión sintetizado a partir de cada iniciador también puede servir como un modelo para la síntesis adicional de los productos de extensión utilizando los mismos iniciadores. Después de un número suficiente de rondas de síntesis de los productos de extensión, puede analizarse la muestra como se describió anteriormente para valorar si se encuentra presente la secuencia o secuencias a detectarse. ANÁLISIS DE SELECCIÓN DE LIGANDOS La presente invención también se refiere a métodos de selección para un compuesto que induce o reprime la transactivación de un dominio de unión del ligando del receptor nuclear que comprende una mutación por substitución en una célula al poner en contacto un dominio de unión del ligando del receptor nuclear con una molécula candidato y detectar la actividad del gen informador en la presencia del ligando. Los compuestos candidato puede ser agonistas o antagonistas del dominio de unión del ligando del receptor nuclear. En una modalidad preferida, el dominio de unión del ligando del receptor nuclear se expresa a partir de un polinucleótido en la célula y la actividad de transactivación (i.e., expresión o represión de un gen informador) o se mide la actividad de unión del compuesto. De acuerdo con lo anterior, además del diseño racional de agonistas y antagonistas en base a la estructura de un dominio de unión del ligando del receptor nuclear, la presente invención contempla un método alternativo para identificar ligandos específicos de un dominio de unión del ligando del receptor nuclear utilizando varios ensayos de selección conocidos en la técnica. Cualquier técnica de selección conocida en la técnica puede utilizarse para seleccionar agonistas o antagonistas del dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B. Por ejemplo, la línea celular adecuada que comprende un sistema de expresión genética en base a receptores nucleares de acuerdo con la invención puede transíectarse con un cásete de expresión genética que codifica un gen marcador operablemente enlazado a un promotor inducible o reprimible. Las células transfectadas se exponen entonces a una solución de prueba que comprende un compuesto agonista o antagonista candidato y después se ensaya para la expresión o represión del gen marcador. La presencia de mayor expresión del gen marcador con relación a las células de control no expuesta a la solución de prueba es una indicación de la presencia de un compuesto agonista en la solución de prueba. De manera inversa, la presencia de menor expresión genética del marcador con relación a las células de control no expuestas a la solución de prueba es indicativa de la presencia de un compuesto antagonista en la solución de prueba. La presente invención contempla tamices para los ligandos de molécula pequeña o ligandos análogas o imitaciones, así como tamices para ligandos naturales que se unen y funcionan como agonista o antagonista para un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B de acuerdo con la invención in vivo. Por ejemplo, las bibliotecas de productos naturales pueden seleccionarse utilizando ensayos de la invención para moléculas que funcionan como agonistas o antagonistas de la actividad del sistema de expresión genética en base a receptores nucleares.

La identificación y selección de antagonistas se facilita además al determinar las características estructurales de la proteína, e.g., utilizando cristalografía de rayos X, difracción de neutrón, espectrometría de resonancia magnética nuclear y otras técnicas para la determinación de la estructura. Esta técnicas proporcionan el diseño racional o identificación de agonistas y antagonistas . Otro procedimiento utiliza bacteriófago recombinante para producir grandes bibliotecas. Pueden construirse bibliotecas muy grandes utilizando el "método de fago" [Scott y Smith, 1990, Science 249: 386-390 (1990); Cwirla, et al., Proc . Nati. Acad. Sci . , 87: 6378-6382 (1990); Devlin et al., Science 249:404-406 (1990)], (106-108 entidades químicas) . Un segundo procedimiento utiliza principalmente métodos químicos, de los cuales son ejemplos el método de Geysen [Geysen et al., Molecular Immunology 23: 709-715 (1986) ; Geysen et al., J. Immunoiogic ethod 102: 259-274 (1987) ] y el método de Fodor et al., [Science 251: 767-773 (1991)]. Furka et al., [14th International Congress of Biochemistry, Volume 5, Resumen FR:013 (1988); Furka, Jnt. J". Peptide Protein Res. 37:487-493 (1991)], Houghton [Patente de E.U. No. 4,631,211, expedida en Diciembre de 1986] y Rutter et al., [Patente de E.U. No. 5,010,175, expedida el 23 de 7Abril, de 1991] describe los métodos para producir una mezcla de péptidos que pueden probarse como agonistas o antagonistas . En otro aspecto, las bibliotecas sintéticas [Meedels et al . , Proc . Nati Acad Sci USA 90: 10700-4 (1993); Ohlmeyer et al., Proc. Nati Acad. Sci USA 90: 10922-10926 (1993); Lam et al., Publicación de Patente Internacional No. WO 92/00252; Kocis et al., Publicación de Patente Internacional No. WO 9428028 cada una de las cuales se incorpora en la presente mediante la referencia en su totalidad] y lo similar puede utilizarse para seleccionar ligandos candidatos de acuerdo con la presente invención. La selección puede realizarse con células recombinantes que expresen un dominio de unión del ligando de receptor nuclear de acuerdo con la invención o alternativamente, utilizando una proteína purificada, e.g., recombinantemente producida, como se describe arriba. Por ejemplo, pueden utilizarse dominios de unión a ligando de receptor nuclear solubles, etiquetados para seleccionar bibliotecas, como se describe en las referencias anteriores. En una modalidad, un dominio de unión del ligando de receptor nuclear del Grupo B de acuerdo con la invención puede etiquetarse directamente. En otra modalidad, puede utilizarse un reactivo secundario para detectar la unión de un dominio de unión del ligando de receptor nuclear de la invención para una molécula de interés, e.g., una molécula anexada a un soporte en fase sólida. La unión puede detectarse por la formación in situ de un cromóforo mediante una etiqueta de enzima. Las enzimas adecuadas incluyen, pero no se limitan a, fosfatasa alcalina y peroxidasa de rábano picante. En una modalidad adicional, puede utilizarse un ensayo de dos colores, utilizando substratos cromogénicos con dos etiquetas de enzima en diferentes moléculas aceptoras de interés. Los ligandos de reactivos cruzados y de reactivos simples pueden identificarse con ensayos de dos colores. Otras etiquetas para el uso de la invención incluyen perlas de látex coloreadas, perlas magnéticas, etiquetas fluorescentes [e.g., isotiocinato de fluorescencia (FITC) , ficoeritrin (PE) , rojo Texas (TR) , rodamina, serie de series de lantánidos libres o quelados, especialmente Eu3+, para nombrar unos cuantos fluoróforos) , moléculas quimioluminiscentes , radio isótopos o etiquetas de imagen de resonancia magnética. Los ensayos de dos colores pueden realizarse con dos o más perlas de látex coloreadas o fluoróforos que emiten a diferentes longitudes de onda. Las moléculas o células etiquetadas pueden detectarse visualmente o por medios mecánicos/ópticos. Los medios mecánicos/ópticos incluyen clasificación de fluorescencia activada i . e. , análogas de FACS y medios de remoción micromanipuladores . La presente invención puede entenderse mejor mediante la referencia a los siguientes ejemplos no limitantes, que se proporcionan como ej emplificativos de la invención . EJEMPLOS Los Solicitantes han desarrollado un nuevo sistema de expresión genética inducible a base de receptor nuclear que comprende un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución. Los Solicitantes han mostrado que el efecto de tal mutación por substitución puede incrementar la actividad de unión del ligando o la sensibilidad del ligando y puede ser específica de esferoide o no esferoide. Así, la invención de los Solicitantes proporciona un sistema de expresión genética inducible a base del receptor nuclear del Grupo B útil para modular la expresión de un gen de interés en una célula huésped. El nuevo sistema de expresión genética inducible de los Solicitantes y su uso en métodos para modular la expresión genética en una célula huésped supera las limitaciones de los sistemas de expresión inducible actualmente disponibles y proporciona al técnico experto un medio efectivo para controlar la expresión del gen. Los nuevos polinucleótidos y polipéptidos del receptor nuclear mutado por substitución de los Solicitantes son útiles en un sistema de modulación genética inducible a base de receptor nuclear para varias aplicaciones incluyendo pero sin limitarse a terapia genética, expresión de proteínas de interés en células huésped, producción de organismos transgénicos y análisis a base de células. MÉTODOS GENERALES Las técnicas estándar de ADN recombinante y clonación molecular utilizadas en la presente se conocen bien en la técnica y se describen en Sambrook, J, Fritsch, E..F. y Maniatis, T. Molecular Cloning: A Laboratory Manual; Cold Spring Harbor laboratory Press: Cold Spring Harbor, N.Y. (1989) (Maniatis) y por T.J. Silhayy, M.L. Bennan, y L.W. Enquist, Experimente with Gene Fusions, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y. (1984) y por Ausubel, F.M. et al., Current Protocol in Molecular Biology, Greene Publishing Assoc . y Wiley-Interscience (1987) . Los materiales y métodos adecuados para el mantenimiento y crecimiento de cultivos bacteriales se conocen bien en la técnica. Las técnicas adecuadas para utilizarse en los siguientes ejemplos pueden encontrarse como se establecen en el Manual of Methods for General Bacteriology (Phillipp Gerhardt, R.G.E. Murray, Ralph N. Costilow, Eugene W. Nester, Willis A. Wood, Noel R. Krieg y G. Briggs Phillips, eds) , American Society for Microbiology, Washington, DC. (1994)) o por Thomas D. Brock en Biotechnology: A Textbook of Industrial Microbiology, Segunda Edición, Sinauer Associates, Inc. Sunderland, ?? (1989) . Todos los reactivos, enzimas de restricción y materiales utilizados para el crecimiento y mantenimiento de las células huésped se obtuvieron de Aldrich Chemical (Milwaukee, WI) , DIFCO Laboratories (Detroit, MI), GIBCO/BRL (Gaithersburg, MD) o Sigma Chemical Company (St. Louis, MO) a menos que se especifique de otra manera. Las manipulaciones de secuencias genéticas pueden realizarse utilizando el conjunto de programas disponibles del Genetics Computer Group Inc. (Wisconsin Package Versión 9.0 Genetics Computer Group (GCG) , Madison, WI) . Cuando se utiliza el programa GCG "Intensificado", puede utilizarse el valor predeterminado 12 de creación de espacio y el valor predeterminado 4 de extensión de espacio. Cuando se utiliza el programa de "Espacio" CGC o "Mejor Ajuste", puede utilizarse la penalidad de creación de espacio predeterminado de 50 y la penalidad de extensión de espacio predeterminado de 3. En cualquier caso en donde los parámetros del programa GCG no se sugieran, en estos y cualquier otro programa, pueden utilizarse los valores predeterminados. El significado de las abreviaturas es el siguiente "h" significa hora(s),' "min" significa minuto (s), "seg" significa segundo (s), "d" significa día(s) "µ?" significa microlitro (s) , "mi" significa mililitro (s) , "L" significa litro (s), "µ?" significa micromolar, "mM" significa milimolar, ^g" significa microgramo (s) , "mg" significa miligramo (s) , "A" significa adenina o adenosina, "T" significa timina o timidina, "G" significa guanina o guanosina, "C" significa citidina o citosina, "xg" significa gravedad en tiempos, "nt" significa nucleótido (s) , "aa" significa aminoácido (s) , "bp" significa par (es) de bases, "kb" significa kilobase (s) , "k" significa kilo, "µ" significa micro, y "°C" significa grados Celsius.

EJEMPLO 1 Este Ejemplo describe la construcción de varios casetes de expresión genética que comprende los nuevos polinucleótidos y polipéptidos de receptor nuclear del Grupo B mutados por substitución de la invención para utilizarse en un sistema de expresión genética inducible a base de receptores nucleares. Los Solicitantes construyeron varios casetes de expresión genética en base al EcR de gusano del brote del abeto Choristoneura fumiferana ("CfEcR"), receptor X retinoide de ratón Mus musculus ("MmRXRa") , receptor X retinoide ß humano de Homo sapiens ("HsRXRp") proteina de ultraespiráculo de saltamontes Locusta migratoria (referida en la presente de manera intercambiable como "LmUSP" o "LmRXR" ) que es un homólogo de RXR de invertebrado de RXR de vertebrado y USP de C. fumiferana ("CfUSP"). Las construcciones preparadas de receptor comprenden un dominio de unión del ligando de cualquiera de un EcR, un USP de invertebrado, un RXR de vertebrado o un RXR de invertebrado; y un dominio de unión a ADN de GAL4 (DBD) o un dominio de transactivación de VP1S (AD) . Las construcciones informadoras incluyen un gen informador, luciferasa o LacZ (ß-galactosidasa) ( operablemente enlazado a una construcción de promotor sintético que comprende un elemento de respuesta GAL4 al cual se une Gal4 DBD. Varias combinaciones de este receptor y construcciones del informador se co- ransíectaron en células de mamífero como se describe en los Ejemplos 2-4 infra . Casetes de Expresión Genética: Los casetes de expresión genética (conmutaciones) se construyeron como sigue, utilizando métodos de clonación estándar disponibles en la técnica. Lo siguiente es una breve descripción de la preparación y composición de cada conmutación utilizada en los Ejemplos descritos en la presente. 1.1 - GAL4CfEcR-DEF/VP16LmUSP-EF: Los dominios D, E y F tipo silvestre del EcR del gusano del brote del abeto Choristoneura fumiferana ( "CfEcR-DEF" ; SEQ ID NO: 20) se fusionó a un dominio de unión de DNA de GAL4 ( "Gal4DNABD" o "Gal4DBD" ; SEQ ID NO: 5) y se colocó bajo el control de un promotor SV40e (SEQ ID NO: 21) . Los dominios E y F de la protexna de ultraespiráculo de saltamontes Locusta migratoria ("LmUSP-EF"; SEQ ID NO: 22) se fusionaron al dominio de transactivación de VP16 ( "VP16AD" ; SEQ ID NO: 11) y se colocaron bajo el control de un promotor SV40e (SEQ ID NO: 21) . Cinco sitios de unión del elemento de respuesta de consenso GAL4 ( "5XGAL4RE" ; que comprenden 5 copias de un GAL4RE que comprenden la SEQ ID NO: 18) se fusionaron a un promotor mínimo Elb sintético (SEQ ID NO: 23) y se colocaron corriente arriba del gen de luciferasa (SEQ ID NO: 24) . 1.2 - GAL4CfEcR-DEF/VP16MmRXRa-EF : Esta construcción se preparó de la misma manera como en la conmutación 1.1 de arriba excepto que LmUSP-DEF se reemplazaron con los dominios E y F de MmRXRoc ( "MmRXRa-EF" , SEQ ID NO: 25) . 1.3- GAL4CfEcR-DEF/VP16mutanteMmRXRa-EF : Esta construcción se preparó de la misma manera como en la conmutación 1.2 de arriba excepto que MmRXRa-EF tipo silvestre se reemplazó con MmRXRa-EF que comprende un dominio de unión a ligando que comprende una mutación por substitución seleccionada de la Tabla 1 de abajo Tabla 1. Mutantes por Substitución del Dominio de Unión al Ligando (LBD) del Receptor X Retinoide a de Mus musculus ( "MmRXRa" ) .

Mutación Substitución de Aminoácidos MmRXRa LBD Aminoácidos "WT a correspondientes en utante" Resultante MmRXRa de longitud total (SEQ ID NO:l) E401ID Ácido Glutámico (E) a 401 Ácido Aspártico (D) G429S Glicina (G) a Serina (S) 429 E401D/G429S Ácido Glutámico (E) a 401 y 429 Ácido Aspártico (D) y respectivamente Glicina (G) a Serina (S) 1.4 GAL4CfEcR-DEF/VPl6MmXRaHl-7LmUSP-H8-12quimera: construcción se preparó de la misma manera que en la conmutación 1.1 de arriba excepto que LmUSP-EF se reemplazó con un dominio de unión a ligando quimérico que comprende hélices (H) 1-7 de MmRXR -EF y hélices 8-12 de LmUSP-EF (SEQ ID NO: 26) . 1.5 - GAL4CfEcR-DEF/VP16HsRXRP-EF: Esta construcción se preparó de la misma manera que la conmutación 1.1 anterior excepto que LmUSP-EF se reemplazó con los dominios E y F de H? R ("Hs XR -EF" ; SEQ ID NO: 27). 1.6 - GAL4CfEcR-DEF/VPlSmutanteHsRXR -EF: Esta construcción se preparó de la misma manera como en la conmutación 1.5 anterior excepto que Hs XRP-EF tipo silvestre se reemplazó con HsRXRp-EF mutante que comprende un dominio de unión a ligando que comprende una mutación por substitución seleccionada de la tabla 2 de abajo. Tabla 2 Mutantes por Substitución del Dominio de Unión al Ligando (LBD) del Receptor X Retinoide ß de Homo sapiens ("HsRXR ") . Mutación Substitución de Aminoácidos "WT a Aminoácidos HSRXRP LBD Mutante" Resultante Correspondientes en Hs XR de longitud total (SEQ ID NO: 2) G321L/P322 / Glicina (G) a Leucina (L) , Prolina 321, 322, y 323 G323V (P) a Arginina (R) , y Glicina (G) a Valina (V) respectivamente T337S Treonina (T) a Serina (S) 337 D344N Ácido Aspartico(D) a Aspargina (N) 344 K355R Lisina (K) a Arginina (R) 355 S385A Serina (S) a Alanina (A) 385 431L Metionina ( ) a Leucina (L) 431 R442K Arginina (R) a Lisina (K) 442 D450E/A451V/K Ácido Aspartico (D) a Ácido 450, 451, y 452 452R Glutámico (E) , Alanina (A) a Valina (V) , y Lisina ( ) a Aspargina (R) respectivamente S455K/N456S/P Serina (S) a Lisina (K) , Aspargina 455,456,457, y 457A/S458Q (N) a Serina (S) , Prolina (P) a Alanina (A) , y Serina (S) a 458 Glutamina (Q) respectivamente V462L Valina (V) a Leucina (L) 462 S470A Serina (S) a Alanina (A) 470 E472D Ácido Glutámico (E) a Ácido 472 Aspartico (D) T473E Treonina (T) a Ácido Glutámico (E) 473 S470A/E472D/ Serina (S) a Alanina (A) , Ácido 470, 472, y 473 T473Y Glutámico (E) a Ácido Aspartico (D) , y Treonina (T) a Tirosina (Y) respectivamente C475T/K476R/ Cisterna (C) a Treonina (T) , Lisina 475, 476, 477, Q477T/K478T/ (K) a Arginina (R) , Glutanina (Q) a 478, y 479 Y479H Treonina (T) , Lisina (K) a Treonina (T) , y Tirosina (Y) a Histidina (H) respectivamente E481D/Q482E/ Ácido Glutámico (E) a Ácido 481, 482, y 483 Q483P Aspartico (D) , Glutamina (Q) a Ácido Glutámico (E) y Glutamina (Q) a respectivamente Prolina (P) A495S Alaniña (A) a Serina (S) 495 G500S Glicina (G) a Serina (S) 500 K511R Lisina (K) a Arginina (R) 511 T516V Treonina (T) a Valina (V) 516 A528S Alanina (A) a Serina (S) 528 Construcciones de los Dominios de Unión del Ligando del Receptor X Retinoide que Comprende una Mutación por Substitución : En un esfuerzo por modificar la actividad de transactivación de RXR, los residuos dentro de los dominios de unión del ligando RXR que se predij eron para ser importantes en base a las comparaciones de secuencia se mutaron en RXRs de dos diferentes organismos . Las Tablas 1 y 2 indican los residuos de aminoácido dentro del dominio de unión del ligando de MmRXRa y HsRXRp, respectivamente que se mutaron y examinaron para la modificación de la capacidad de transactivación.. Cada una de las mutaciones por substitución de aminoácidos listadas en las Tablas 1 y 2 se construyeron en un ADNc de RXR por mutagenesis dirigida al sitio mediada por PCR. También se construyeron un mutante de doble punto RXR LBD (ver Tabla 1) , cuatro diferentes imitantes de triple punto RXR LBDs (ver Tabla 2) , un mutante de cuádruplo punto RXR LBD (ver Tabla 2) , y un mutante de quíntuple punto RXR LBD (ver Tabla 2) . La mutagénesis dirigida al sitio de PCR se realizó, utilizando equipo de mutagénesis dirigida al sitio Quikchange (Stratagene, La Jolla, CA) utilizando las condiciones de reacción y los parámetros de ciclado como sigue. La mutagénesis dirigida al sitio de PCR se realizó utilizando lx del regulador de reacción (suministrado por el fabricante) , 50 ng del modelo de ADNds, 125 ng del iniciador anterior (FP) , 125 ng de iniciador complementario inverso (RCP) y 1 µ? de mezcla NTPd (suministrada por el fabricante) en un volumen de reacción final de 50 µ? . Los pares de iniciador anterior y el iniciador complementario inverso utilizados para producir cada mutación por substitución se presentan en las Tablas 3 y . Los parámetros de ciclado utilizados consisten de un ciclo de desnaturalización a 95°C durante 30 segundos, seguido por 16 ciclos de desnaturalización a 95 °C durante 30 segundos, fortalecimiento a 55 °C durante 1 minuto y extendido a 68 °C durante 22 minutos. Tabla 3 : Iniciadores de PCR para una Construcción de Dominio de Unión al Ligando MmRXRa Mutante por Substitución. MUTANTE INICIADOR SECUENCIA DE NUCLEOTDOS (SEQ ID NO:) INICIADORA (51 A 31 ) E401D FP GTGTATGCGTCACTAGATGCGTACTGCAAACAC (SEQ ID NO: 28) E401D RCP GTGTTTGCAGTACGCATCTAGTGACGCATACAC (SEQ ID NO: 29) G429S FP GCACTGCGTTCCATCAGCCTCAAGTGCCTGGAG (SEQ ID NO: 30) G429S RCP CTCCAGGCACTTGAGGCTGATGGAACGCAGTGC (SEQ ID NO: 31) Tabla : Iniciadores de PCR para una Construcción de Dominio T516V RCP GGAAGGTGTCGATGGGGACGTCACCAATGAGCT (SEQ ID NO: 71) A528S FP ATGGAGATGCTTGAGTCTCCCCATCAACTGGCC (SEQ ID NO: 72) AS28S RCP GGCCAGTTGATGGGGAGACTCAAGCATCTCCAT (SEQ ID NO: 73) Los productos de ácido nucleico de PCR resultantes que codifica los dominios de unión a ligando RXR mutante se fusionaron entonces cada uno a un dominio de transactivación como se describe en los Ejemplos 1.3 y 1.6 anteriores. Las construcciones del receptor VP16/receptor RXR mutante se probaron para la actividad al transfectarlos hacia células NIH3T3 junto con GAL4/CfEcR-DEF y pFRLuc en la presencia de un ligando no esteroide . Ligandos : El ligando no esteroides N~ (2-etil-3-metoxibenzoil) -N' - (3 , 5-dimetilbenzoil) -N' -tert-butilhidrazina (GS™-E) es un ligando esteroide estable sintético, sintetizado en Rohm and Haas Company. El ligando se disolvió en D SO y la concentración final de DMSO se mantuvo a 0.1% tanto en controles como en tratamientos . Transfecciones : Los ADNs correspondientes a las diversas construcciones de conmutación perfiladas en el Ejemplo 1.1-1.6 se transfectaron en células NIH3T3 de ratón (ATCC) como sigue. Se siguieron los métodos estándar para cultivos y mantenimiento de las células. Las células se cosecharon cuando alcanzaron el 50% de confluencia y se pusieron en placas de 6, 12 o 24 pozos a 125, 000, 50,000 o 25,000 células, respectivamente, en 2.5, 1.0 o 0.5 mi de medio de crecimiento conteniendo 10% de suero de bovino fetal (FBS) , respectivamente. Al siguiente día, las células se enjuagaron con el medio de crecimiento y se transfectaron durante cuatro horas. Se utilizó Superfect™ (Qiagen Inc.) como el reactivo de transfección. Para las placas de 12 pozos, se mezcló 4 µ? de Superfect™ con 100 µ? de medio de crecimiento. Un µg de construcción informadora y 0.25 µg de cada construcción de receptor del par de receptores a analizarse se agregaron a la mezcla de transfección. Se agregó una segunda construcción informadora [pTKRL (Promega) , 0.1 µg/mezcla de transfección] que comprende un gen de luciferaza Renilla operablemente enlazado y colocado bajo el control de un promotor constitutivo de timidina cinasa (TK) y se utilizó para normalización. Los contenidos de la mezcla de transfección se mezclaron en un mezclador de torbellino y se dejó reposar a temperatura ambiente durante 30 minutos. Al final de la incubación, la mezcla de transfección se agregó a las células mantenidas en 400 µ? de medio de crecimiento. Las células se mantuvieron a 37°C y 5% de C02 durante cuatro horas. Al final de la incubación, se agregaron 500 µ? de medio de crecimiento conteniendo 20% de FBS y ya sea dimetisulfóxido (DMSO; control) o solución de DMSO de ligando no esteroide y las células se mantuvieron a 37°C y 5% de C02 durante 48 horas. Las células se cosecharon y se ensayó la actividad del informador. El mismo procedimiento se siguió para las placas de 6 y 24 pozos excepto que todos los reactivos se duplicaron para las placas de 6 pozos y se redujo a la mitad para las placas de 24 pozos. Ensayos del Informador: Las células se cosecharon 40 horas después de agregar el ligando. Se agregó 125 µ? de amortiguador de lisis pasiva (parte del sistema de ensayo de informador fue de Dual-Luciferase™ de Promega Corporation) a cada pozo de la placa de 24 pozos. Las placas se colocaron en un agitador giratorio durante 15 minut s. Se analizaron veinte µ? del lisado. La actividad de Luciferaza se midió utilizando el sistema de análisis de informador Dual-luciferase™ de Promega Corporation siguiendo las instrucciones del fabricante. Se midió la ß-galactosidasa utilizando equipo de análisis Galacto-Star™ de TROPIX siguiendo las instrucciones del fabricante. Todas las actividades de la luciferaza y ß-galactosidasa se normalizaron utilizando luciferaza Ranilla como estándar. Se calcularon los aumentos de actividades al dividir las unidades de luz relativa normalizada ("RLU") en células tratadas con ligando con RLU normalizado en células tratadas con DMSO (control no tratado) EJEMPLO 2 En células de mamífero, el insecto receptor de ecdísona {Choristoneura fumiferana) (CfEcR) se heterodimeriza con el ultraespiráculo (USP) o su receptor X retinoide homólogo ( XR) y transactiva genes que se colocan bajo el control de los elementos de respuesta. La inducibilidad del ligando de esta transactivación en base a EcR depende de su socio de heterodimerización. Como se mostró previamente por los Solicitantes, la transactivación a través de CfEcR en sociedad con USPs de insecto es independiente del ligando, mientras que la transactivación a través de CfEcR en sociedad con RxRs de invertebrado o vertebrado es dependiente del ligando (ver la Solicitud de Patente de E. U. pendiente 60/294,814, incorporada en la presente mediante la referencia en su totalidad) . Los Solicitantes han ahora descubierto que la secuencia de RXR puede modificarse mediante la mutación por substitución del dominio de unión al ligando para influenciar la magnitud déla transactivación asi como la sensibilidad del ligando de un sistema de expresión genética inducible a base de EcR. Este Ejemplo describe la identificación de tres mutantes por substitución del dominio de unión al ligando MmRXRa que exhiben sensibilidad al ligando mejorada en respuesta al ligando no esteroide. Brevemente, los Solicitantes construyeron tres mutantes por substitución del dominio de unión al ligando de isoforma RXR de ratón y crearon los casetes de expresión genética de ADNc VP16/mutanteMmRXRa-EF como se describió en el Ejemplo 1 de arriba utilizando equipo de mutagénesis dirigida al sitio mediada por PCR de Quikchange (Stratagene, La Jolla, CA) . Los ADNcs mutados se probaron junto con GAL4/CfEcR-DEF en el análisis del informador de luciferaza conducido por GAL4 y los resultados se compararon a las conmutaciones VP16/MmRXRa-EF Y VP16/MmRXRa-LmUSPquimera~EF tipo silvestre en células NIH3T3 de ratón. Transfecciones : Los ADNs correspondientes a las diversas construcciones de conmutación perfiladas en el Ejemplo 1, específicamente las conmutaciones 1.1-1.4, se transfectaron en células NIH3T3 de ratón (ATCC) como sigue. Las células se cosecharon cuando alcanzaron el 50% de confluencia y se pusieron en placas de 24 pozos a 125,000 células/pozo, en 0.5 mi de medio de crecimiento conteniendo 10% de suero de bovino fetal (FBS) . Al siguiente día, las células se enjuagaron con el medio de crecimiento y se transfectaron durante cuatro horas. Se encontró que Superfect™ (Qiagen Inc.) fue el mejor reactivo de transfección para células 3T3. Se mezcló dos µ? de Superfect™ con 100 µ? de medio de crecimiento y 50 ng del cásete GAL4/CfEcR-DEF, se agregaron 50 ng de VP16/LmUSP-EF, VP16/MmRXRatipo-silvestre-EF, VP16/MmRXRa-LmISPquime a-EF, o VP16/mutante mRXRa-EF y 200 ng de pFRLuc a la mezcla de transfección. Se agregó una segunda construcción de informador [pTKRL (Promega) , 0.05 g/mezcla de transfección] que comprende un gen de luciferaza Renilla operablemente enlazado y colocado bajo el control de un promotor constitutivo de timidina cinasa (TK) y se utilizó para normalización. Los contenidos de la mezcla de transfección se mezclaron en un mezclador de torbellino y se dejó reposar a temperatura ambiente durante 30 minutos. Al final de la incubación, la mezcla de transfección se agregó a las células mantenidas en 200 µ? de medio de crecimiento. Las células se mantuvieron a 37 °C y 5% de C02 durante cuatro horas. Al final de la incubación, se agregaron 250 µ? de medio de crecimiento conteniendo 20% de FBS y ya sea dimetisulfóxido (DMSO; control) o una solución de DMSO de 0.2, 1, o 10 µ? del ligando no esteroide GS™-E [N- (2 -etil-3 -metoxibenzoil)N' - (3 , 5-dimetilbenzoil) -N' -tert-butilhidrazina] se agregó y las células se mantuvieron a 37°C y 5% de C02 durante 40 horas. Las células se cosecharon y se ensayó la actividad del informador como se describió arriba. Se calcularon los incrementos de actividades al dividir las unidades de luz relativa normalizada ("RLU") en células tratadas con el ligando con RLU normalizado en células tratadas con DMSO (control no tratado) . Como se trató anteriormente, los Solicitantes han mostrado previamente que los homólogos de RXR y de RXR de invertebrado no lepidóptero/no díptero (USPs) , referidos en la presente colectivamente como RXRs de invertebrados, unen EcR y transactivan a los informadores a niveles mayores que los logrados por RXR de vertebrados en células de mamífero. Sin embargo los RXRs de vertebrado proporcionan inferiores niveles de fondo en la ausencia del ligando. Los Solicitantes compararon las secuencias de aminoácidos de los dominios de unión al ligando de RXRs de vertebrados y RXRs de invertebrados y han identificado dos aminoácidos particulares que se conservan en todos los RXRs de vertebrado pero son diferentes en los RXR de invertebrado. Los Solicitantes determinaron si remplazar un aminoácido de RXR de vertebrado con un aminoácido de RXR de invertebrado daría como resultado una mayor actividad en la inducción, pero aún proporciona bajo fondo en la ausencia del ligando Los solicitantes han identificado ahora dos residuos de aminoácido dentro de los dominios EF de una isoforma a, de vertebrado de RXR de ratón ("MmRXRa-EF") que, cuando se substituye, produce un RXR mutante que exhibe sensibilidad incrementada a un ligando no esteroide. El efecto de estas dos substituciones : una substitución de ácido aspártico en el residuo de aminoácido 401 (E401D mutante) , y una substitución de serina en el residuo de aminoácido 429 (G429S mutante) de la SEQ ID N0:1 sobre la actividad del receptor MmRXRa-EF mutado se presenta en la Figura 1. En ensayos de transactivación en células NIH3T3, el mutante E401D se comportó más similar a un RXR de invertebrado que a un RXR de vertebrado al demostrar tanto mayor fondo como mayores niveles de inducción (ver Figura 1) . El mutante G429S se comportó más similar al RXR de invertebrado, demostrando sensibilidad incrementada al ligando pero menos fondo (ver Figura 1) . Así, los Solicitantes demostraron un resultado sorprendente e inesperado de que un solo cambio de aminoácido puede alterar drásticamente el comportamiento del MmRXRa-EF en la presencia y ausencia del ligando. Para determinar si la combinación de estas dos mutaciones proporcionaría un RXR mejorado adicionalmente que cualquier mutación de un único punto solo, los Solicitantes elaboraron el doble mutante por substitución MnRXRoc-EF que comprende una mutación de punto en ambas posiciones E401D y G429S. Tres clones independientes de estos dobles mutantes (DM) se analizaron en células NIH3T3 y se compararon con cada mutante de un único punto solo, MnRXRot-EF, y un RXR de vertebrado/RXR de invertebrado quimérico (ver Figura 2) . Los resultados de los Solicitantes mostraron que estos dobles mutantes funcionan tan bien como los RXR quiméricos, demostrando bajos niveles de fondo en la ausencia del ligando y niveles de inducción incrementada y sensibilidad al ligando. Estos nuevos dobles mutantes por substitución proporcionan un RXR ventajoso para utilizarse en aplicaciones in vivo.

Los solicitantes también han determinado que estos mutantes por substitución MnRXRa-EF responden mejor que HsRXR -EF tipo silvestre en la presencia de una pronastetrona A de ligando esteroide (Invitrogen) , similar en su respuesta a GS™-E presentado en las Figuras 1 y 2 (datos no mostrados) . EJEMPLO 3 Como se trató anteriormente, el uso del RXR de invertebrado, LmUSP (también referido en la presente como LmRXR) como un socio heterodimérico para CfEcR mejoró tanto la sensibilidad como la magnitud de la inducción de un sistema de expresión genético inducible a base de CfEcR. Los solicitantes han alineado las secuencias de polipéptido de los dominios de unión al ligandoLmRXR y HsRXR (dominios EF) e identificaron residuos de aminoácido que son diferentes entre estas dos proteínas. Este ejemplo describe el análisis de los Solicitantes de los mutantes por substitución HsRXRp en el cual se substituyeron aminoácidos LmRXR en el lugar de los residuos tipo silvestre en HsRXRP . Los Solicitantes han identificado ahora varios mutantes por substitución que modifican tanto la sensibilidad como la magnitud de inducción de un sistema de expresión genética inducible a base de CfEcR en células de mamífero. Brevemente, los Solicitantes construyeron y analizaron mutantes por substitución en la isoforma ß-EF de RXR humano (HsRXRP-EF) , en donde los aminoácidos que son diferentes en Hs XRP-EF en comparación al LmUSP-EF homólogo de RXR de invertebrado se mutaron al residuo de aminoácido LmUSP-EF y se analizaron para su efecto sobre la actividad de transactivación en células NIH3T3 como se describió en el Ejemplo 2 anterior en la presencia de 0, 0.04, 02, 1, 5 , o 25 µ? del ligando no esteroide GS™-E [N- (2-etil-3 -metoxibenzoil) ' - (3 , 5-dimetilbenzoil) -N' -tert-butilhidrazina] . Las células se cosecharon y se analizó la actividad del informador como se describió anteriormente. Se calculó el incremento de actividades al dividir las unidades de luz relativa normalizada ("RLU") en células tratadas con ligando con RLU normalizadas en células tratadas con DMSO (control no tratado) . Como se muestra en la Figura 3, los imitantes por substitución HsRXRp-EF, TOS, DAK/EVR, SNPS/KSAQ, V/L, S/A, T/E, CKQKY/TRTTH, y EQQ/DEP mejoraron el incremento de inducción y la magnitud de la inducción. Los mutantes por substitución de los Solicitantes HsRXRp-EF, DAK/EVR, SNPS/KSAQ, V/L, S/A, T/E, CKQKY/TRTTH, y EQQ/DEP también mejoraron la sensibilidad al ligando no esteroide (ver Figura 3) . Los resultados presentados en la Figura 3 también muestran que los mutantes por substitución de HsRXRP-EF, D344N, A495S (etiquetados como A/S con una inducción incrementada de 30), y A528S (etiquetada como A/S con una inducción incrementada de 21) exhibieron reducción en la inducción incrementada, magnitud de inducción, y/o sensibilidad al ligando en comparación al tipo silvestre. Los Solicitantes también han determinado que estos mutantes por substitución HsRXRp-EF responden mejor que HsRXRP-EF tipo silvestre en la presencia del ligando esteroide, ponasterona A (Invitrogen) , similar a su respuesta a GS™-E presentado en la Figura 3 (datos no mostrados) . EJEMPLO 4 Como se trató anteriormente, el sistema de regulación genética en base a CfEcR es dependiente del ligando cuando los RXRs se utilizan como el socio heterodimérico y es independiente del ligando cuando los USPs se utilizan como los socios heterodiméricos . Sin embargo, la expresión del gen informador se induce a niveles muy elevados cuando los CfUSP se utilizan como el socio heterodimérico. Para mejorar RXR como socio heterodimérico, los Solicitantes han alineado las secuencias de polipéptidos de varios dominios de unión del ligando USP y RXR (dominios EF) e identificado los residuos de aminoácidos que son diferentes entre estos dos miembros de la familia de receptores nucleares. En particular, los Solicitantes identificaron residuos que se conservan en todos los USPs pero son diferentes en los RXRs y se mutan estos residuos en HsRXR .

Estos mutantes por substitución se analizaron en células NIH4T3 como se describe en el Ejemplo 2 anterior en la presencia de 0, 0.04, 0.2, 1, 5, o 25 µ? del ligando no esteroide GS™-E [N- (2 -etil-3-metoxibenzoil) N' - (3 , 5-dimetilbenzoil) -N' -tert-butilhidrazina] . Las células se cosecharon y se analizó la actividad del informador como se describió anteriormente. Se calculó el incremento de actividades al dividir las unidades de luz relativa normalizada ("RLU") en células tratadas con ligando con RLU normalizadas en células tratadas con DMSO (control no tratado) . Brevemente, este Ejemplo describe la construcción y análisis de los mutantes por substitución en la isoforma ß-EF de RXR humano (HsRXRP-EF) , en donde los aminoácidos que son diferentes en HsRXRP~EF en comparación a los residuos conservados de proteínas de ultraespiráculo se mutaron a los residuos de aminoácido de USP y se analizaron para su efecto sobre la actividad de transactivación en células NIH3T3. Los Solicitantes también han determinado que estos mutantes por substitución ß-EF responden mejor que HsRXRp-EF tipo silvestre en la presencia del ligando esteroide, ponasterona A (Invitrogen) , similar a su respuesta a GS™-E presentada en la Figura 4 (datos no mostrados) .

Claims (22)

1. REIVINDICACIONES 1. Un sistema de modulación de expresión genética comprende : a) un primer cásete de expresión genética que es capaz de expresarse en una célula huésped que comprende un polinucleotido que codifica un primer polipéptido que comprende: i) un dominio de transactivación; ii) un dominio de unión de ADN que reconoce un elemento de respuesta asociado con un gen cuya expresión se va a modular; y iii) un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución, y b) un segundo cásete de expresión genética que es capaz de expresarse en la célula huésped que comprende un polinucleotido que codifica un segundo polipéptido que comprende un dominio de unión del ligando del receptor nuclear seleccionado del grupo que consiste de un receptor de ecdisona, un receptor ubicuo, un receptor huérfano 1, un receptor nuclear 1 de hormona esteroide, un receptor X retinoide que interactúa con la proteína- 15, un receptor X ß de hígado, un receptor de hormona esteroide similar a proteína, un receptor X de hígado, un receptor X a de hígado, un receptor X farnesoide, un receptor que interactúa con la proteína 14 , y un receptor de farnesol .
2. 2. Un sistema de modulación de expresión genética que comprende : a) un primer cásete de expresión genética que es capaz de expresarse en la célula huésped que comprende un polipéptido que codifica un primer polipéptido que comprende : i) Un dominio de unión a ADN que reconoce un elemento de respuesta asociado con un gen cuya expresión se va a modular; y ii) un dominio de unión del ligando del receptor nuclear; y b) un segundo cásete de expresión genética que es capaz de expresarse en la célula huésped que comprende un polinucleótido que codifica un segundo polipéptido que comprende: i) un dominio de transactivación; y ii) un dominio de unión del ligando del receptor nuclear en donde uno de ios dominios de unión del ligando del receptor nuclear es un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución .
3. 3. El sistema de modulación de expresión genética de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde el dominio dé unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B se selecciona del grupo que consiste de un receptor X retincide, una proteína de unión de la región II H-2 (H-2RIIBP) , el corregulador 1 del Receptor Nuclear (RCoR-1) , una proteina de ultraespiráculo, un receptor nuclear 2C1, y el factor 1 de corión (CF-1) .
4. 4. El sistema de m modulación de expresión genética de acuerdo con la reivindicación 3, en donde el dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B se codifica por un nucleótido que comprende una mutación de codon que da como resultado una substitución de un residuo de aminoácido, en donde el residuo de aminoácido se encuentra en una posición equivalente o análoga a a) 401 o 429 de la SEQ ID NO:l, b) 401 y 429 de la de la SEQ ID NO:l, c) 337, 344, 355, 385, 431, 442, 462, 470, 472, 473, 495, 500, 511, 516, o 528 de la SEQ ID NO: 2, d) 321, 322, y 323 de la SEQ ID NO: 2, e) 450, 451, y 452 de la SEQ ID NO : 2 , f) 455, 456, 457, y 458 de la SEQ ID NO : 2 , g) 470, 472, y 473 de la SEQ ID NO: 2, h) 475, 476, 477, 478, y 479 de la SEQ ID NO : 2 , e i) 481, 482, y 483 de la SEQ ID NO:2.
5. 5. El sistema de modulación de expresión genética de acuerdo con la reivindicación 4, en donde el dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución es un dominio de unión del ligando del receptor X retinoide.
6. 6. El sistema de modulación de expresión genética de acuerdo con la reivindicación 5, en donde la mutación por substitución se selecciona del grupo que consiste de a) E401D ' 5 o G429S de la SEQ ID NO : 1 , b) E401D y G429S de la SEQ ID N0:1, c) T337S, D344N, K355R, S385A, M431L, R442K, V462L, S470A, E471D T473E, A495S, E500S, K511R, T516V, o A528S de la SEQ ID N0:2, d) G321L, P322R, y G323V de la SEQ ID N0:2, e) D450E, A451V y K452R de la SEQ ID N0:2, f) S455K, N456S, 10 P457A, y S458Q de la SEO ID NO : 2 , g) S470A, E472D, y T473Y de la SEQ ID NO : 2 , h) C475T, 476R, Q477T, K478T, y Y479H de la SEQ ID NO:2, e i) E481D, Q482E, y Q483P de la SEQ ID N0:2
7. 7. El sistema de modulación de expresión genética de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en 15 donde el dominio de unión de ADN se selecciona del grupo que consiste de un dominio de unión de ADN del receptor de ecdisona, un dominio de unión de ADN GAL4, y un dominio de unión de ADN de LexA.
8. 8. El sistema de modulación de expresión genética 20 de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde el dominio de transactivación se selecciona del grupo que consiste de un dominio de transactivación del receptor de ecdisona, un dominio de transactivación VP16, un dominio de transactivación del activador acídico B42 y un dominio de 25 transactivación p65.
9. 9. Un cásete de expresión genética que comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido seleccionado a partir del grupo que consiste de a) un polipéptido que comprende un dominio de transactivación, un dominio de unión a ADN y un dominio de unión de ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución, b) un polipéptido que comprende un dominio de unión a ADN y un dominio de unión de ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución, y c) un polipéptido que comprende un dominio de transactivación ¦ y un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución.
10. 10. Un polinucleótido aislado que codifica a un dominio de unión de ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución, en donde el polinucleótido aislado comprende una mutación de codón que da como resultado una substitución de un residuo de aminoácido en una posición equivalente o análoga a, a) 401 o 429 de la SEQ ID NO : 1 , b) 401 y 429 de la de la SEQ ID NO : 1 , c) 337, 344, 355, 385, 431, 442, 462, 470, 472, 473, 495, 500, 511, 516, o 528 de la SEQ ID NO : 2 , d) 321, 322, y 323 de la SEQ ID N0:2, e) 450, 451, y 452 de la SEQ ID NO : 2 , f) 455, 456, 457, y 458 de la SEQ ID NO : 2 , g) 470, 472, y 473 de la SEQ ID NO:2, h) 475, 476, 477, 478, y 479 de la SEQ ID NO:2, e i) 481, 482, y 483 de la SEQ ID NO : 2.
11. 11. El polinucleótido aislado de acuerdo con la reivindicación 10, en donde la mutación de codón da como resultado una mutación por substitución seleccionada del grupo que consiste de a) de a) E401D o G429S de la SEQ ID NO:l, b) E401D y G429S de la SEQ ID NO:l, c) T337S, D344N, K355R, S385A, M431L, R442K, V462L, S470A, E471D T473E, A495S, E500S, K511R, T516V, o A528S de la SEQ ID NO:2, d) G321L, P322R, y G323V de la SEQ ID NO.-2, e) D450E, A451V y K452R de la SEQ ID NO:2, f) S455 , N456S, P457A, y S458Q de la SEQ ID NO:2, g) S470A, E472D, y T473Y de la SEQ ID NO: 2, h) C475T, K476R, Q477T, K478T, y Y479H de la SEQ ID NO:2, e i) E481D, Q482E, y Q483P de la SEQ ID NO : 2.
12. 12. Un vector de expresión que comprende el polinucleótido aislado de la reivindicación 10 operativamente enlazado a un elemento de regulación de transcripción.
13. 13. Una célula huésped que comprende el vector de expresión de la reivindicación 12, en donde el elemento de regulación de transcripción opera en la célula huésped.
14. 14. En polipéptido aislado codificado por el polinucleótido aislado de acuerdo con la reivindicación 10.
15. 15. Un polipéptido aislado que comprende un dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución, en donde la mutación por substitución se encuentra en la posición equivalente o análoga a, a) 401 o 429 de la SEQ ID NO : 1 , b) 401 y 429 de la de la SEQ ID N0:1, c) 337, 344, 355, 385, 431, 442, 462, 470, 472, 473, 495, 500, 511, 516, o 528 de la SEQ ID NO:2, d) 321, 322, y 323 de la SEQ ID NO : 2 , e) 450, 451, y 452 de la SEQ ID NO : 2 , f) 455, 456, 457, y 458 de la SEQ ID NO: 2, g) 470, 472, y 473 de la SEQ ID NO : 2 , h) 475, 476, 477, 478, y 479 de la SEQ ID NO : 2 , e i')' 481, 482, y 483 de la SEQ ID NO : 2.
16. 16. El polinucleótido asilado de acuerdo con la reivindicación 15, en donde el dominio de unión del ligando del receptor nuclear del Grupo B que comprende una mutación por substitución es un dominio de unión del ligando del receptor X retinoide.
17. 17. El polipéptido aislado de acuerdo con la reivindicación 16, en donde la mutación por substitución se selecciona del grupo que consiste de a) E401D o G429S de la SEQ ID NO:l, b) E401D y G429S de la SEQ ID NO:l, c) T337S, D344N, K355 , S385A, M431L, R442K, V462L, S470A, E471D T473E, A495S, E500S, K511R, T516V, o A528S de la SEQ ID NO:2, d) G321L, P322R, y G323V de la SEQ ID NO:2, e) D450E, A451V y K452R de la SEQ ID NO : 2 , f) S455K, N456S, P457A, y S458Q de la SEQ ID NO : 2 , g) S470A, E472D, y T473Y de la SEQ ID NO: 2, h) C475T, K476R, Q477T, K478T, y Y479H de la SEQ ID N0:2, e i) E481D, Q482E, y Q483P de la SEQ ID NO : 2.
18. 18. Un método para modular la expresión de un gen en una célula huésped que comprende las etapas de: a) introducir en la célula huésped el sistema de modulación de expresión genética de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2 ; y b) introducir en la célula, huésped un ligando; en donde el gen a modularse es un componente de un cásete de expresión genética que comprende: i) un elemento de respuesta reconocido por el dominio de unión de ADN; ii) un promotor que se activa por el dominio de transactivación; y iii) un gen cuya expresión se va a modular; por lo cual a la introducción del ligando en la célula huésped, se modula la expresión del gen de b) iii) .
19. 19. El método de acuerdo con la reivindicación 18, en donde el ligando es a) un compuesto de la fórmula: R3 en donde : E es un alquilo (C4-C3) que contiene un carbón terciario o un ciano alquilo (C3-C5) que contiene un carbón terciario; R1 es H, Me, Et, i-Pr, F, formil, CF3, CHF2, CHC12/ CH2F, CH2C1, CH2OH, CH20Me, CH2CN, CN, C°CH, 1-propinilo, 2- propin lo, vinilo, OH, OMe, OEt, ciclopropilo, CF2CF3, CH=CHCN, alilo, azido, SCN, o SCHF2; R2 es H, Me, Et, n-Pr, i-Pr, formil, CF3, CHF2, CHC12, CH2F, CH2C1, CH2OH, CH20Me, CH2CN, CN, C°CH, 1-propinilo, 2- propinilo, vinilo, Ac, F, Cl, OH, OMe, OEt, O-n-Pr, Oac, Me2, NEt2 , SMe, SEt, SOCF3, OCF2CF2H, COEt, ciclopropilo, CF2CF3, CH=CHCN, alilo, azido, OCF3, OCHF2/ O-i-Pr, SCN, SCHF2, SOMe, NH-CN o unido con R3 y los carbonos de fenilo a los cuales R2 y R3 se unen para formar un etilenodioxi, un anillo de dihidrofurilo con el oxígeno adyacente a un carbono de fenilo, o un anillo de dihidropirilo con el oxígeno adyacente a un carbono de fenilo; R3 es H, Et, o junto con R2 y los carbones de fenilo a los cuales R2 y R3 se unen para formar un etilenodioxi, un anillo de dihidrofurilo con el oxígeno adyacente a un carbono de fenilo, o un anillo de dihidropirilo con el oxígeno adyacente a un carbono de fenilo; R4, R5 y Rs son independientemente H, Me, Et, F, Cl, Br, formil, CF3, CHF2, CHC12 C¾F, CH2C1 , C¾0H, CN, C°CH, 1- propinilo, 2 -propinilo, vinilo, OMe, OEt, SMe, o Set; o una ecdisona, 20-hidroxiecdisona, ponasterona A, muristerona A; un oxisterol, un 22 (R) hidroxicolesterol , 24 (S) hidroxicolesterol , 25-epoxicolesterol , T0 01317, 5-alfa-6-alfa-epoxicolesterol-3 -sulfato, 7-cetocolesterol-3-sulfato, farnesol, ácidos biliares, 1 , 1-bifosfonato esteres u Hormona Juvenil III ; o un ácido 9-cis-retinóico, ácido 4 (1- (3,5,5,8, 8-pentametil-5 , 6,7, 8-tetrahidro-2~ naftil) -etenil) benzoico (3 -metil-TTEB) , (ácido (E) -2) 2- (5, 6, 7, 8-tetra-hidro-3, 5, 5, 8, 8-pentametil-2-naftil) propen-l-il) -4-tiofencarboxilico) , 2- (5 , 6 , 7 , 8-tetra-hidro-3,5,5,8, 8-tetrametil-2-naftil) -2- (carboxifenil) -1 , 3-dioxolano, ácido 4-(5H-2,3- (2 , 5-dimetil-2 , 5-hexano) -5-metil-dibenceno (b, e) (1,4) diacepin-ll-il) -benzoico (HX600) o tiadiazepin análogos de los mismos, ácido 3 , 7 , 11 , 15-tetrametil hexadecanóico (ácido titánico), ácido 6- (1- (3 , 5 , 5 , 8 , 8-pentametil-5 ,6,7, 8-tetrahidronaftaleno-2 -il) ciclopropil) nicotínico, 2- (4-caroxifenil) -2- (5, 6, 7, 8-tetrahidro-5 , 5,8, 8-tetrametil-2-naftalenil) -1 , 3-ditiano, o ácido 4- (2-metil) - 1- (5 , 6 , 7 , 8-tetrahidro-5 ,5,8, 8-tetrametil-2 - naftaleño) ropenil ) benzoico .
20. 20. El método de acuerdo con la reivindicación 18, en donde el método comprende además introducir en la célula huésped un segundo ligando, en donde el segundo ligando es ácido 9-cis retinoico o un análogo sintético del ácido retinóico (existiría una situación en donde usted agregarla ácido 9-cis retinóico y un análogo sintético del ácido retinóico al mismo tiempo (como ligando 1 y 2?) ..
21. 21. Una célula huésped que comprende el sistema de modulación de expresión genética de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2.
22. 22. Un organismo no humano que comprende la célula huésped de la reivindicación 21.