MXPA03006334A - Rodenticida y metodo de seleccion. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se refiere a un rodenticida que no es toxico para los seres humanos, para los animales domesticos y para el ganado, el cual comprende, como el ingrediente activo, un material retenedor de agua, y un atrayente de roedores. Preferentemente el material retenedor de agua es un material celulosico. En ciertas modalidades el material retenedor de agua comprende alfa-celulosa. En una modalidad preferida, el material celulosico comprende celulosa purificada, derivada del corazon de la mazorca del hibrido de maiz DK 446 o del corazon de la mazorca de un agonista del hibrido DK 446. Se considera que la toxicidad selectiva, unica, de esos rodenticidas, surge de la interferencia en el transporte de agua a traves de la pared de los intestinos, particularmente en el ciego (en donde es digerida la celulosa en las ratas). El ciego es vestigial en los humanos, quienes no son afectados entonces por esos materiales. Se describe un metodo de laboratorio para la seleccion de materiales retenedores de agua, candidatos, con respecto a su actividad rodenticida en el campo, el cual involucra el examen de los intestinos (con respecto a la presencia de compactacion e hinchazon) y el ciego (con respecto a la presencia de impactacion).

Description

RODE TICIDA Y MÉTODO DE SELECCIÓN CAMPO Y ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a rodenticidas y a métodos de selección con respecto a la actividad rodenticida. En la patente GB 2,311,46413- de la solicitante, se describe una novedosa clase de rodenticidas, a base de materia celulósica derivada de (por ejemplo del corazón de las mazorcas de) ciertos híbridos del maíz, especialmente el híbrido de Dekalb DK 446 y agonistas del mismo. El material celulósico constituye el material rodenticida activo y los rodenticidas descritos no son tóxicos para los seres humanos, animales domésticos y el ganado. Aunque en la especificación de patente anterior se proporcionan algunos síntomas de los animales de prueba, y la excreción de tejido graso y adiposo se presentó como un síntoma particularmente importante, el modo de acción preciso de los rodenticidas anteriores ha permanecido sin aclararse. Los solicitantes de la presente han encontrado que aún otros híbridos, además del híbrido Dekalb DK 446, son efectivos como rodenticidas en el campo, y, al igual que el rodenticida basado en el híbrido KD 446, no son tóxicos para los humanos y para el ganado. Sorprendentemente, algunos híbridos que son REF.: 148890 efectivos como rodenticidas en el campo no son efectivos para matar ratas bajo las condiciones del laboratorio. DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Un objeto de la presente invención es proporcionar un método de selección de materiales candidatos (particularmente materiales de carbohidratos y especialmente híbridos del maíz) con respecto a la actividad rodenticida. Ahora se ha descubierto que los rodenticidas anteriores retienen agua en los intestinos, y la interrupción resultante del transporte de agua a través de la pared de los intestinos interfiere la digestión normal del roedor. Entre los diferentes métodos de transporte de agua hacia y desde las células, el paso a través de los canales de iones es uno de los procesos importantes. Estos canales varían entre los mamíferos, es decir, existe una variación entre especies, de manera tal que los ratones son los más sensibles y los humanos son los menos sensibles, a los cambios en el entorno de agua extracelular, y las ratas se encuentran en un punto intermedio. Ahora se ha descubierto que ese material celulósico es particularmente efectivo para modificar el transporte de iones en los roedores . Consecuentemente el roedor se debilita y muere. Además, en las ratas la digestión de la celulosa se lleva a cabo principalmente en el ciego, como un resultado de la acción de las bacterias que se encuentran en esa región del intestino, mientras que en los humanos el ciego es vestigial y no tiene acción digestiva en la celulosa. Ahora se considera que los materiales celulósicos retenedores de agua, cuando son ingeridos por las ratas, comprometen su digestión en el ciego. Esos materiales no tienen efecto en los humanos o en el ganado. Inesperadamente se ha descubierto que el timo es de tamaño reducido en las ratas que han sido alimentadas con los rodenticidas celulósicos anteriores, lo cual indica un sistema inmune comprometido, y se contempla que otros materiales de carbohidratos, retenedores de agua, particularmente la celulosa, tengan un efecto similar. Se considera que su efecto retenedor de agua interrumpe el transporte de iones a través de los canales de iones en la pared de los intestinos . Por consiguiente, en un aspecto la invención proporciona un rodenticida que contiene un material retenedor de agua como el ingrediente activo, y un atrayente de roedores. Preferentemente el material retenedor de agua es un material celulósico. En ciertas modalidades el material retenedor de agua comprende alfa-celulosa . En una modalidad preferida el material celulósico comprende celulosa purificada derivada del corazón de la mazorca del híbrido de maíz DK 446 o del corazón de la mazorca de un híbrido relacionado con el de un agonista del híbrido DK 446.

La invención proporciona también un método para producir un rodenticida, que comprende los pasos de combinar un material retenedor de agua, con un atrayente de roedores, y el material retenedor de agua es el ingrediente activo del rodenticida. La celulosa es el mayor retenedor de agua de los carbohidratos complejos, por ejemplo es más retenedor de agua que el almidón. Además, la celulosa conserva en particular su estructura tridimensional en el intestino y por lo tanto puede proporcionar centros para la proliferación microbiana. En términos prácticos, ahora se ha descubierto que esos materiales reducen el número de células inmunocompetentes cuando son ingeridos por los roedores . En particular, la generación de los linfocitos T en el timo de los roedores es inhibida por la ingestión de materiales retenedores de agua. Cualesquiera de esos efectos puede ser usado como una base para un método de selección de rodenticidas candidatos, de acuerdo con un aspecto de la invención. Como se mencionó anteriormente, en las ratas la digestión de la celulosa se lleva a cabo principalmente en el ciego, como un resultado de la acción de las bacterias que se encuentran en esa región del intestino, mientras que en los humanos el ciego es vestigial y no tiene acción digestiva en la celulosa. Ahora se considera que los materiales retenedores de agua, cuando son ingeridos por las ratas, comprometen su digestión en el ciego y debilitan su sistema inmune. Sin embargo, la rata inmunocomprometida, debilitada, sobrevivirá más probablemente en las condiciones de laboratorio que en su estado silvestre, dado que en la jaula del laboratorio dispondrá con mayor facilidad de alimento y agua, no habrá depredadores y existirá una posibilidad reducida de infección. Típicamente, se ha encontrado que bajo las condiciones de laboratorio, es decir, sin depredadores y confinadas, las ratas alimentadas ad Ubi tum con materiales celulósicos que son efectivos en el campo como rodenticidas , pierden peso en la fase inicial de prueba y luego se recuperan y sobreviven en la prueba. Más particularmente, los estudios de la presente indican que un material candidato, retenedor de agua (preferentemente un material celulósico, especialmente un híbrido del maíz) puede ser efectivo en el campo si, bajo las condiciones de laboratorio, los roedores (preferentemente ratas de laboratorio o ratones de laboratorio, pero en forma menos preferente ratas silvestres o ratones silvestres) alimentados ad Ubi tum con el material candidato (particularmente material celulósico obtenido de un híbrido del maíz) exhiben una pérdida de peso promedio de al menos 15% (preferentemente de al menos 20%, más preferentemente de al menos 25%, en la forma más preferente de al menos 30%) del peso corporal inicial durante la fase inicial (por ejemplo los primeros cinco días) de la prueba. Por consiguiente, en otro aspecto la invención proporciona un método de selección de materiales candidatos retenedores de agua, con respecto a una actividad rodenticida potencial en el campo, en donde el método comprende proporcionar materiales retenedores de agua como materiales candidatos, alimentar a los roedores con los materiales candidatos, ad libitum, bajo las condiciones del laboratorio, medir la pérdida de peso en los roedores durante una fase inicial de la prueba, y seleccionar los materiales candidatos que conduzcan a una pérdida de peso promedio de al menos 15% (preferentemente de al menos 20%, más preferentemente de al menos 25%, en la forma más preferente de al menos 30%) del peso corporal inicial . En un aspecto relacionado, la invención proporciona un método de selección de materiales retenedores de agua, con respecto a la actividad rodenticida, en donde un material retenedor de agua se alimenta a los roedores, y los roedores se analizan para determinar sí el material retenedor de agua ha interrumpido o no el transporte de agua a través de la pared de los intestinos, o en qué grado lo ha hecho. Preferentemente los roedores se analizan para determinar si el material retenedor de agua ha interrumpido o no el transporte de iones a través de la pared de los intestinos , o en qué grado lo ha hecho . Preferentemente se analiza el efecto de ingerir el material retenedor de agua, en el tamaño o condición de la glándula timo. Preferentemente el material retenedor de agua es de origen natural . Preferentemente el material retenedor de agua es un material celulósico. Preferentemente el material retenedor de agua se deriva de mazorcas de maíz. Preferentemente los roedores son examinados post mortem. En vista al modo de acción recientemente descubierto, la invención no se limita a materiales retenedores de agua derivados de mazorcas de maiz. Por consiguiente, en otro aspecto la invención proporciona un rodenticida que comprende un material celulósico retenedor de agua, como el ingrediente activo, y un atrayente de roedores, en donde el material celulósico retenedor de agua se encuentra substancialmente libre de material de mazorcas de maíz. En este aspecto la invención proporciona también un rodenticida que comprende un material celulósico retenedor de agua, como el ingrediente activo, y un atrayente de roedores, en donde el material celulósico retenedor de agua se encuentra substancialmente libre de material derivado del corazón de la mazorca del híbrido de maíz DK 446 o del corazón de la mazorca de un agonista del híbrido DK 446. También, en este aspecto la invención proporciona un método para producir un rodenticida, en donde el método comprende el paso de combinar material celulósico retenedor de agua, con un atrayente de roedores, en donde el material celulósico retenedor de agua se encuentra substancialmente libre de material de mazorcas de maíz y es el ingrediente activo del rodenticida. Preferentemente, el material celulósico retenedor de agua se encuentra substancialmente libre de material derivado del corazón de la mazorca del híbrido de maíz DK 446, o del corazón de la mazorca de un agonista del híbrido DK 446. Preferentemente, al menos el material retenedor de agua es deshidratado, preferentemente bajo condiciones de temperatura y/o presión elevadas. Los rodenticidas de la presente invención se combinan preferentemente con un material dulce tal como melazas (que actúa como un atrayente de roedores) y se les da la forma de pelotillas a través del método descrito en la GB 2,311,464, la cual se incorpora en la presente como referencia. Las pelotillas se empacan preferentemente en bolsas a prueba de humedad, a fin de conservar las propiedades en estado seco (y por lo tanto la absorción de agua) del rodenticida.

Se contempla que una amplia variedad de materiales retenedores de agua puedan ser apropiados para el uso como rodenticidas . Se espera que los materiales más útiles sean materiales no tóxicos (para los humanos) , de origen natural, tales como las celulosas cuyas propiedades retenedoras de agua surgen de su estructura macromolecular . A través de la experimentación se pueden encontrar otros materiales apropiados. Por consiguiente, en otro aspecto la invención proporciona un método de selección de materiales retenedores de agua, con respecto a su actividad rodenticida, en donde el material retenedor de agua se proporciona como alimento a los roedores (preferentemente ratas de laboratorio) y los roedores se analizan para determinar si el material retenedor de agua ha interrumpido o no el transporte de agua a través de la pared de los intestinos, o en qué grado lo ha hecho. Esa interrupción del transporte de agua puede ser detectada mediante sus efectos, por ejemplo la inhibición de la digestión, la cual puede ser determinada mediante el examen del intestino. Preferentemente los roedores son examinados post mortem. Preferentemente los roedores son examinados para ver si presentan hinchazón intestinal . Opcionalmente se analiza el efecto de ingerir el material retenedor de agua, en el tamaño o condición de la glándula timo. Preferentemente el material retenedor de agua es substancialmente no tóxico a los humanos. Otras características preferidas se definen en las reivindicaciones dependientes . En otro aspecto, la invención proporciona un método para aminorar la infestación por- roedores, el cual comprende depositar, en un área infestada por roedores, un rodenticida de conformidad con la reivindicación 16, en donde el rodenticida no es tóxico para los humanos e interrumpe la digestión de los roedores al ser ingerido. Métodos de análisis de conformidad con la invención se describen posteriormente con referencia a los siguientes ejemplos que detallan estudios separados realizados por laboratorios de análisis independientes.

EJEMPLO 1 PROPÓSITO El propósito de este estudio fue determinar la efectividad del ERADIMOUSE para el control de ratas Comunes (Rattus norvegicus) . Esta fue una prueba de 15 días, sin elección, con un período de observación posterior a la prueba, de 5 días, para determinar la eficacia del laboratorio.

SUBSTANCIA DE PRUEBA La sustancia de prueba fue el ERADIMOUSE, un rodenticida en forma de pelotillas (pelotillas de 5mm (3/16 plg) de diámetro) el cual es un producto comercial de los solicitantes, que no es tóxico para los humanos o para el ganado, y que ha probado ser efectivo en el campo. Consiste de 95% en peso de material de corazón de mazorca de maiz blanco, derivado de "Corn Cobb 20-40 grind" obtenido comercialmente de Mount Pulaski Products Inc., 908 N. Vine St., Mount Pulaski, Illinois 62548, Estados Unidos de Norteamérica y 5% en peso de melazas, y es producido de acuerdo con el proceso descrito en la patente de la solicitante GB 2,311,464B. SISTEMA DE PRUEBA Especie - rata común {Rattus norvegicus) . Cepa - tipo silvestre, originalmente del área de Chicago, Illinois, atrapada durante la primavera y verano del 2000, y puesta en una colonia al aire libre. Fuente de Suministro - Las ratas fueron atrapadas vivas usando trampas para atrapar animales vivos, de tamaños apropiados (Tomahawke o similar) en una colonia cautiva en Colorado. Las ratas fueron colocadas en jaulas de cautiverio. Todas las ratas en cautiverio fueron monitoreadas diariamente para asegurarse de que el alimento y el agua estuviesen disponibles ad libitum, y los cambios del material de cama fueron realizados dos veces por semana. Justificación de la Selección - Se usó la rata común (tipo silvestre) porque se identificó que la población fuente tenía una alta proporción de ratas con resistencia genética a los rodenticidas a base de warfarina. Tamaño - El peso promedio de las ratas el día 0 fue de 297.1 g (+13.4 SE) . Entre los grupos de prueba las hembras promediaron un peso de 246.2 g -(+20.00 SE) y los machos promediaron un peso de 331.8 g (+16.9 g) , mientras que los machos de control pesaron 313.4 g (+24.2 SE) . Edad - Cualquier edad de las ratas fue aceptable siempre y cuando se cumpliera el criterio del peso mínimo. Sexo y Número - El grupo de tratamiento consistió de 10 machos y 10 hembras. El grupo de control fue únicamente de machos (n = 10) . Condición Física - Los animales de prueba eran saludables y activos. ALOJAMIENTO, IDENTIFICACIÓN Y CONDICIONES AMBIENTALES DEL SISTEMA DE PRUEBA Alojamiento y Ambiente - Se reservó un cuarto de prueba exclusivamente para las ratas usadas en este estudio. Las ratas se mantuvieron en jaulas metálicas con fondo de cedazo, que tenían un área superficial de aproximadamente 972 era2 durante la prueba. Todas las ratas se mantuvieron en jaulas individuales durante la duración de este estudio. Las jaulas se rotularon de forma tal que el número de la jaula correspondiese con el número del animal de prueba registrado en las formas de recolección de datos. Se mantuvo un período de iluminación correspondiente a 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad por la duración de la prueba. El cuarto se iluminó con bulbos incandescentes de color rojo, dado que la investigación ha demostrado que la luz roja aminora el estrés de las ratas silvestres cautivas (otoño de 1974) . Las lecturas altas y bajas de temperatura y humedad fueron registradas diariamente usando un dispositivo de medición Thermo-Hygro de Fisher Scientific. ALIMENTO Y AGUA DEL SISTEMA DE PRUEBA Aclimatación - Dieta para roedores fresca F6 ( ) 8664 de Teklad (Harían Teklad, Madison, WI) estuvo disponible ad libitum para todas las ratas durante la aclimatación y el período posterior a la prueba. Agua de botellas equipadas con tubos para beber, de acero inoxidable, estuvo disponible ad libitum durante toda la aclimatación, la fase de prueba, y el período posterior a la prueba. Prueba - Se proporcionó la sustancia de prueba EradiMouse, a las ratas del grupo de tratamiento, durante el período de prueba de 15 días. A las ratas del grupo de control se les ofreció la dieta para roedores fresca Teklad F6. El agua estuvo disponible ad libitum. Período Posterior a la Prueba - La dieta para roedores fresca Teklad F6 fue proporcionada todas las veces durante el período de observación posterior a la prueba, de 5 días, ' o- en cualquier período prolongado. El agua de las botellas equipadas con tubos para beber, de acero inoxidable, fue proporcionada ad libitum. DISEÑO EXPERIMENTAL Número de Animales por Grupo - El grupo de prueba consistió de 20 ratas Comunes - (10 machos y 10 hembras) . Un grupo adicional de 10 ratas macho sirvió como el grupo de control . Asignación de Grupos - A las ratas macho se las asignó a los grupos de tratamiento y de control, usando un programa de aleatorizacíón computarizada (Ran30) . Consumo de Alimento - El consumo de alimento se monitoreó durante el período de aclimatación de 5 días, el período de exposición de 15 días, y el período de recuperación posterior al tratamiento de 5 días . Peso Corporal - Los pesos corporales se registraron durante la aclimatación, cuando se encontraron animales muertos, y cuando las ratas fueron sacrificadas por eutanasia. Necropsia, Análisis Microbiológico, e Histología - Los animales del grupo de tratamiento que murieron durante el estudio fueron sometidos a la necropsia en grueso, el día de la muerte, para investigar signos de toxicosis u otra causa de la muerte. De igual manera, cada vez que una rata macho moría, se seleccionaba aleatoriamente una rata de control y se sacrificaba por eutanasia. Los controles se sometieron también a la necropsia. Los tejidos de los órganos, incluyendo el tracto gastrointestinal (desde el esófago hasta el colon, con los extremos amarrados para prevenir derrames) , el hígado, y los ríñones, fueron extraídos y colocados en bolsas plásticas etiquetadas, y las muestras de órganos se llevaron al Laboratorio de Diagnóstico del Hospital Veterinario de la Universidad del Estado de Colorado. Los contenidos del tracto gastrointestinal fueron analizados para ver si se encontraba la especie Clostridium, así como otros microbios anaerobicos y aeróbicos . Los tej idos histológicos del tracto gastrointestinal, el hígado, y ríñones, fueron analizados para evaluar cualquier lesión o anormalidad. Observaciones - Todas las ratas fueron observadas diariamente durante la aclimatación, exposición, y el período posterior a la prueba, para investigar signos de toxicosis, morbilidad, o mortalidad. METODOS ESTADÍSTICOS Los datos del ambiente, las observaciones, la mortalidad y la necropsia, fueron tabulados y presentados descriptivamente . Los datos del consumo diario de alimentos para la aclimatación y el período de prueba, fueron analizados en forma separada, usando un análisis de varianza (A OVA, por sus siglas en inglés) con mediciones repetidas de 2 factores, con el consumo de alimentos como la variable dependiente, el grupo de dieta (grupo de tratamiento de machos, -grupo de tratamiento de hembras, y control de machos) como el factor de prueba, y el tiempo como el factor de repetición. RESULTADOS Y DISCUSIÓN Las temperaturas dentro del cuarto de prueba se mantuvieron entre 20 y 29 °C, y la humedad varió de 29 a 72% durante el período de estudio. Consumo de Alimentos - Durante la aclimatación, las ratas macho (15.4 g/día + 0.8 SE) y hembra (17.3 g/día + 1.2 SE) de los grupos de tratamiento consumieron ligeramente menos alimentos que las ratas hembra del grupo de control (20.7 g/día + 1.4 SE) (F2, 27 = 5.21, P = 0.01). La comparación post hoc (prueba de Tukey) indicó que el grupo de tratamiento de machos consumió menos alimentos por día que el control (P<0.05), pero no hubo diferencia entre las hembras y el grupo de control, más que aquellas que fueron programadas para el tratamiento . Obsérvese que uno de los machos del grupo de tratamiento (rata # 15) consumió menos de 10 g de alimento durante los primeros cuatro días de aclimatación, y esta falta de consumo sesgó los datos. Esta rata consumió 26 g en los días 5 y 6 de aclimatación, por lo tanto se seleccionó este animal para incluirlo en el grupo de tratamiento. La evaluación del consumo de alimentos durante la fase definitiva indicó un efecto significativo del tratamiento (F2, 405 .= 3.11, p = 0.046), el tiempo (F14,405 = 4.68, P<0.001), y la interacción del tratamiento y del tiempo (F28,405 = 3.19, P<0.001). Tanto los machos como las hembras de los grupos de prueba con Eradimouse parecieron consumir menos que los controles durante los primeros cuatro dias después de que inició la prueba. El consumo de alimentos entre grupos fue relativamente equivalente durante los días 5-10, pero las ratas que consumían Eradimouse parecieron comer más que los controles durante los días 11 - 15 de la prueba (figura 2) . El análisis post hocK con la prueba de Tukey indica que las hembras consumieron menos que los controles en los días 1, 2 y 4 (P<0.05); mientras que los machos consumieron menos que los controles el día 1 (P<0.05). Los machos y hembras consumieron aproximadamente la misma cantidad de alimentos cada día (P>0.05), y los patrones del consumo de alimentos para cada sexo fueron similares (figura 2) . Estos datos parecen sugerir que las ratas rechazaron inicialmente el sabor del cebo Eradimause, pero a causa del hambre compensaron la pérdida al finalizar el ensayo del día 15. Peso Corporal - De los animales que murieron durante el período de prueba (2 hembras y 5 machos) , las hembras perdieron un promedio de 35.5% del peso corporal antes de la prueba, y los machos perdieron 33.9% (combinados = 34.4% + 4.3 SE) . Las 6 ratas a las que se les proporcionó Erradimouse, que fueron sacrificadas por eutanasia el día 15, también perdieron peso substancial (22.1% + 2.4 SE), pero la pérdida de peso de las que fueron sacrificadas por eutanasia no fue tan grande como las que murieron (t = 2.39, 11 df, P =0.0356). Los 5 machos de control, que fueron sacrificados durante la prueba, perdieron 1.9% del peso corporal antes de la prueba, y las 3 adicionales que fueron sacrificadas por eutanasia, ese día, ganaron 0.7%. Datos de sumario se presentan en la tabla 2. Observaciones - Las ratas permanecieron activas la mayor parte del ensayo. De acuerdo con los registros de observación, una de las ratas tratadas (#28) apareció moribunda el día 14, y este animal fue encontrado muerto 5.75 horas después de las observaciones iniciales. Aparte de parecer perder peso, las ratas no exhibieron ningún otro signo clínico de enfermedad. Mortalidad - Un total de 7 ratas (35%) que fueron alimentadas con el cebo Eradimouse murieron durante la prueba y el período de recuperación (5 machos y 2 hembras) . Todas las 5 ratas macho murieron durante la fase de prueba actual. Una de las hembras (#7) murió el primer día de la recuperación, y la otra murió el día 8 de la prueba. Necropsia - La mayoría de las ratas no exhibió ninguna anormalidad externa, aunque la rata # 15 tenía algunas lesiones en su pata y en el pecho, y la rata # 20 tenía una pequeña herida en su pata (Tabla 2) . De las 7 ratas del grupo de prueba con Eradimouse, que murieron durante el estudio, S exhibieron tractos gastrointestinales vacíos pero hinchados. Una de las ratas (#26) tenía parásitos en el hígado. Tres de las diez ratas de control que fueron sacrificadas tenían también tractos gastrointestinales hinchados o llenos de gas, pero estos estaban llenos de alimento. Dos ratas de control mostraron anormalidades en el hígado, incluyendo una con puntos amarillos y la otra con parásitos. Al terminar el período de alimentación (día 15) , n = 9 ratas fueron sacrificadas por eutanasia (6 del grupo de tratamiento con Eradimouse y 3 controles) , se sometieron a la necropsia y se enviaron muestras de tejidos al Laboratorio de Diagnóstico Veterinario. Los tres controles no mostraron anormalidades internas. Tres de las seis del grupo del Eradimouse tenían descoloración del hígado, y tres de las seis tenían tractos gastrointestinales hinchados. Una rata no exhibió anormalidades internas. REFERENCIAS Fall , M. W. 1974. The use of red light for handling wild rats. Laboratory Animal Science. 24:4.

TABLA 1 Pesos Corporales (PC) de ratas Comunes durante la prueba de - 15 días, sin elección, con cebo Eradimouse.

ID Sexo Dieta Murió/Sac . PC antes (g) PC después (g) 1* H E Sac. 209.4 56.0 2 H E Sac. 323.3 319.9 3 H E Sac . 128.8; 135.7 4 H E Sac. 220.6 229.6 H E Sac. 177.6 187.5 6 H E Sac. 246.3 250.8 7 H E Murió 260.0 159.1 8* H E Sac. 287.9 226.4 9* H E Sac. 282.1 225.4 26 H E Murió 325.5 221.0 * M E Sac . 365.3 267.0 11* M E Sac. 264.9 228.9 13 M E Sac. 369.4 346.5 14 M E Sac. 312.2 294.8 M E Murió 336.1 302.3 17 M E Murió 279.5 160.7 19 M E Murió 299.6 189.3 TABLA 1 (Continuación) Pesos Corporales (PC) de ratas Comunes durante la prueba de 15 días, sin elección, con cebo Eradimouse.

ID Sexo Dieta Murió/Sac . PC antes (g) PC después (g) 22* M E Sac . 362.1 251.8 23 M E Murió 440.6 270.2 28 M E Murió 288.5 168.4 12* M C Sac. 320.5 320.5 16 M C Sac. 253.1 270.5 18 M C Sac. 285.7 314.1 * M c - Sac. 355.8 352.3 21 M C Sac. 394.6 292.4 24* M C Sac. 299.6 309.0 M C sac. 435.7 416.1 27 M C Sac. 178.1 198.1 29 M C Sac . 249.8 232.5 M C Sac . 361.4 332.4 *Las ratas fueron sacrificadas e.~ L día 15.

TABLA 2 Resultado de la necropsia en grueso realizada en Comunes durante la prueba con cebo Eradimouse I Sex Tratamient Murió/Sac Externa Interna D o o 7 H Eradimause Murió Sin el GIa estaba muy anormalidades hinchado; no había alimento 1 M Eradimouse Murió Abrasiones en Tracto intestinal 5 pecho y patas hinchado; no había alimento 1 M Eradimouse Murió Sin Estómago e Intestinos 7 anormalidades hinchados ; no había alimento 1 M Eradimouse Murió GI vacío/hinchado 9 2 M Eradimouse Mur ó GI hinchado, vacío 3 2 H Eradimouse Murió Parásitos en el Hígado 6 2 M Eradimouse Murió GI hinchado-LI negro-no 8 había alimento en el GI 1 Control Sac . Sin anormalidades 2 1 M Control Sac. Algunos puntos amarillos 6 observados en el hígado 1 Control Sac . GI hinchado; lleno 8 2 M Control Sac. Pequeña herida Sin anormalidades 0 en una pata TABLA 2 (Continuación) Resultado de la necropsia en grueso realizada en ratas Comunes durante la prueba con cebo "Eradimouse .

I Sex Tratamient Murió/Sac Externa Interna D o o • 2 M Control Sac . Sin « w 1 anorma1idades 2 M Control Sac . 4 2 M Control Sac . 5 2 M Control Sac . LIb tenía gases (< que los 7 tratados) , pero lleno 2 M Control Sac . 9 3 M Control Sac. Parásitos en el hígado 0 1 H Eradimouse Sac. Hígado descolorido (amarillo) 2 H Eradimouse Sac . El LI estaba distendido, pero lleno 3 H Eradimouse Sac. El GI estaba hinchado/con gases, pero lleno 4 H Eradimouse Sac. El GI estaba hinchado/con gases, pero lleno H Eradimouse Sac. El LI estaba distendido, pero lleno TABLA 2 (Continuación) Resultado de la necropsia en grueso realizada en Comunes durante la prueba con cebo Eradimouse I Sex Tratamient Murió/Sac Externa Interna D o o 6 H Eradimouse Sac . u u El LI estaba distendido/con gases, pero lleno 8 H Eradimouse Sac . « n Descoloración del hígado (amarillo) 9 H Eradimouse Sac . u w Sin anormalidades 1 Eradimouse Sac. « u Gran volumen de dieta en 0 LI 1 M Eradimouse Sac . w u Se observó cierta 1 hinchazón en el LI (< que las tratadas) 1 M Eradimouse Sac. El LI estaba 3 distendido/con gases, pero lleno 1 M Eradimo se Sac. LI/SI estaban ambos 4 distendidos/con gases, llenos 2 M Eradimo se Sac. GI + estómago hinchado. 2 lleno; puntos amarillos en el hígado · aGI = Tracto gastrointestinal bLI = Intestino grueso Conclusión El estudio muestra que el ERADIMOUSE interfiere en la digestión de las ratas tipo silvestre y conduce a la pérdida de peso, pero no necesariamente a la muerte bajo condiciones de laboratorio. La ingestión del producto causa hinchazón intestinal como un resultado de la inhibición de la digestión normal, a su vez considerada una causa de la interrupción del transporte de agua a través de la pared de los intestinos. EJEMPLO 2 OBJETIVO Determinar la efectividad de la sustancia de prueba para producir la muerte en las ratas tratadas, cuando se administre como alimento, ad libitum, por un período de 14 dias . MÉTODOS Y MATERIALES 1. Sustancia de prueba: Identificación: ERADIRAT, lote #020901.

Esta muestra consistía de alimento en forma de pelotillas, en una bolsa blanca. El ERADIRAT, un rodenticida en forma de pelotillas (pelotillas con un diámetro de (Smm (3/8 plg) ) el cual es un producto comercial de los solicitantes, que no es tóxico para los seres humanos o el ganado, y que ha demostrado ser efectivo. Consiste de 94% en peso de material del corazón de mazorcas de maíz ¦ blanco, obtenido comercialícente de "Corn Cobb 20-40 grind" obtenido comercialmente de Mount Pulaski Products Inc., 908 N. Vine St., Mount Pulaski, Illinois 62548, Estados Unidos de Norteamérica, 5% en peso de melazas y 1% en peso de harina de trigo. 2. Animal de Prueba : Especie: Rata (rattus norvegicus) Cepa : Sprague Dawley Proveedor: Harían Sprague Dawley Indianápo1is , IN Número/Sexo : 10'machos 10 hembras (nulíparas y no preñadas) 10 controles (5 machos y 5 hembras) Durante la aclimatación y el período de prueba, cada animal fue alojado y mantenido de acuerdo con la "Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio" (NRC, 1996) . Todos los animales fueron identificados por el método de la ranura en la oreja y tenían tarjetas en la jaulas, que proporcionaba los números del animal individual y del proyecto. Los animales se alojaron individualmente en jaulas de alambre suspendidas y fueron alimentadas con Purina Rodent Chow certificada y agua de la llave, ad libitum. Nota: el primer día las ratas fueron alimentadas con alimento para roedores no certificado. Todos los animales fueron aclimatados por 7 días antes de la prueba. Se observó la salud general y lo adecuado de los animales para la prueba durante este período. Al comienzo del día después de la llegada, se llevaron a cabo los análisis del consumo tanto de alimento como de agua. 3. Procedimiento experimental : Después del período de aclimatación, se seleccionaron 20 ratas Sprague Dawley (10 machos, 10 hembras) como el sistema de prueba, y 10 ratas Sprague Dawley (5 machos y 5 hembras) se seleccionaron como controles. Las ratas para cada sistema de prueba por sexo se seleccionaron calculando el peso corporal promedio y determinando el intervalo de límite de peso aceptable (+/- 20% del peso promedio) . Los pesos corporales iniciales de los animales de prueba variaron desde 130.7 g hasta 148.2 g en las hembras de prueba, de 153.0 g a 169.6 g en los machos de prueba, de 134.0 g a 145.2 g en las hembras de control, y de 155.5 g a 162.5 en los machos de control. La sustancia de prueba se administró oralmente ad libitum. Los animales de control recibieron Purina Rodent Chow certificada ad libitum. Diariamente se calculó el consumo de alimento y agua. Cada día se pesó y registró la cantidad de alimento restante en la tolva. Si era necesario se adicionaba más alimento para asegurar la alimentación ad libitum y se registró este total. Adicionalmente, el alimento que caía sobre la almohadilla absorbente debajo de cada jaula, fue retirado y pesado y registrado para cada animal . - La cantidad consumida para cada animal fue calculada a partir de estos valores. (Cantidad de alimento total del día previo regresada a la tolva (g) ) - (peso del alimento restante en la tolva (g) ) - (peso del alimento recuperado de la almohadilla absorbente (g) ) = cantidad de alimento consumido (g) Cada día las botellas de agua se pesaron y registraron. Si era necesario se adicionaba más agua para asegurar la disponibilidad de agua ad lijitum. La cantidad total se pesó y se registró. La cantidad consumida se calculó a partir de estos valores (Cantidad de agua total del día previo en la botella (g) ) - (peso del agua restante en la botella para el día actual (g) ) = (cantidad de agua consumida (g) ) Nota: 1.0 g es equivalente a 1.0 mi de agua. Los promedios para la aclimatación y para el período de prueba, tanto para el consumo de alimentos como de agua, pueden verse en las tablas 5, 6 y 7.

Nota: Se tuvo el cuidado, lo más que se pudo según nuestras capacidades, de no perder sustancia de prueba, alimento o agua. Cierta cantidad de pérdida fue inevitable durante los procedimientos debido a derrames . Se examinaron signos de toxicidad en los animales, dos veces por día, durante todo el período de observación de 14 días . El día 14 los animales se observaron solamente una vez . Las observaciones incluyeron las siguientes: los sistemas circulatorio, respiratorio, autónomo y nervioso central; la actividad somatomo ora; patrones de comportamiento; inicio de temblores, convulsiones, salivación, letargía, diarrea; la piel y el pelaje; y los ojos y las membranas mucosas. Las muestras fecales, tanto para los animales de prueba como para los animales de control, fueron recolectadas los días 1, 3, 7, 10 y 14. Se guardaron congeladas para un posible análisis futuro. Los pesos corporales de las ratas (registrados hasta la décima más cercana de un gramo) se registraron diariamente. Los pesos iniciales y finales, así como el cambio en el peso corporal total, se registran en las tablas 3 y 4. Al término del estudio, el día 14, todas las ratas fueron sacrificadas por eutanasia (mediante dióxido de carbono) y se llevaron a cabo las necropsias en grueso. Las muestras de tejido para un posible examen histológico futuro, se tomaron de cada uno de los animales de prueba. Los tejidos tomados y conservados en formalina al 10% fueron ambos ríñones> el tracto gastrointestinal completo y secciones del hígado. Las observaciones de la necropsia se documentan en la tabla 1. Adicionalmente, el contenido de los estómagos fue recolectado y almacenado congelado para un posible examen futuro. RESULTADOS Todos los 20 animales de prueba sobrevivieron al período de observación de 14 días; sin embargo, todos experimentaron pérdida de peso. Ver la tabla 3 para las pérdidas de peso específicas . Las observaciones fueron como sigue : Rata # 1 : Pareció normal los días del 1 al 3. Los días del 4 al 6 el animal tenía una ligera deshidratación. Los días del 7 al 14, el animal pareció normal. Rata # 2 : Pareció normal los días del 1 al 3. El día 4 el animal pareció deshidratado. El día 5 el animal pareció normal . El día 6 el animal tuvo una ligera deshidratación. Los días del 7 al 14 del animal pareció normal . Rata # 3 : Pareció normal los días del 1 al 3. El día 4 el animal tuvo ojos opacos y pareció deshidratado. El día 5 permaneció la deshidratación. El día 6 el animal estaba sólo ligeramente deshidratado. Los días del 7 al 14 el animal pareció normal . Rata # 4 : Pareció normal los días del 1 al 3.

Los días 4 y 5 el animal estaba deshidratado. Los días del 6 al 14 el animal pareció normal . Rata # 5 : Pareció normal los días del 1 al 4. El día 5 el animal exhibió ligera deshidratación. Los días del 6 al 14 el animal pareció normal . Rata # 6 : Pareció normal los días del 1 al 3. El día 4 el animal estaba ligeramente deshidratado. El día 5 el animal tenía los ojos opacos y estaba deshidratado. El día 6 el animal tuvo ligera deshidratación. Los días del 7 al 14 el animal pareció normal. Rata # 8 : Pareció normal los días del 1 al 3. Los días 4 y 5 el animal estaba deshidratado. Los días del 6 al 14 el animal pareció normal. Rata # 9 : Pareció normal los días del 1 al 3. Los días 4 y 5 el animal estaba deshidratado. Los días del 6 al 14 el animal pareció normal . Rata # 1S: Pareció normal todo el período de observación de 14 días . Rata # 17 : Pareció normal los días del 1 al 3. Los días 4 y 5 el animal pareció ligeramente deshidratado. Los días del 6 al 14 el animal pareció normal . Rata # 21: Pareció normal los días del 1 al 3. El día 4 el animal tuvo ojos opacos y pareció deshidratado. El día 5 el animal tuvo temblores, ojos opacos y estaba deshidratado. Los días del 6 al 14 el animal pareció normal.

Rata # 24: Pareció normal los días del 1 al 3. Los días 4 y 5 el animal pareció deshidratado. Los días del 6 al 14 'el animal pareció normal. Rata # 26: Pareció normal los días del 1 al 3. El día 4 el animal tenía ojos opacos y estaba deshidratado. El día 5 el animal tuvo respiración rápida, ojos opacos y estaba deshidratado. El día 6 el animal estaba ligeramente deshidratado . Los días del 7 a 14 el animal pareció normal . Rata # 27: Pareció normal los días del 1 al 3. El día 4 el animal pareció deshidratado. Los días del 5 al 14 el animal pareció normal. Rata # 29: Pareció normal los días del 1 al 3. Los días 4 y 5 el animal estaba deshidratado. Los días del 6 al 14 el animal pareció normal. Rata # 30: Pareció normal los días del 1 al 3.

Los días 4 y 5 el animal tenía ligera deshidratación. Los días del 6 al 14 el animal pareció normal . Rata # 31: Pareció normal los días del 1 al 3. Los días 4 y 5 el animal tenía ligera deshidratación. Los días del 6 al 14 el animal pareció normal . Rata # 32: Pareció normal los días del 1 al 3. El día 4 el animal tenía temblores, ojos opacos y estaba deshidratado. El día 5 el animal tenía ojos opacos y deshidratación. Los días del 6 al 14 el animal pareció normal .

Rata # 33: Pareció normal los días del 1 al 4. El día 5 el animal tenía ligera deshidratación. Los días del 6 al 14 el animal pareció normal . Rata # 35: Pareció normal los días del 1 al 3. Los días 4 y 5 el animal tenía ligera deshidratación. Los días del 6 al 14 el animal pareció normal . Todos los 10 animales de control sobrevivieron, ganaron peso, y parecieron normales durante el período de observación de 14 días. Ver la tabla 4 para las ganancias de peso específicas . El día 14 todas las 20 ratas de prueba fueron sacrificadas por eutanasia y se les practicó la necropsia. Tres de los animales de prueba tenían los intestinos delgados llenos de fluido, uno de los cuales tenía un área de color amarillo pálido de 1 x 1 cm2 sobre el revestimiento estomacal . Todos los otros animales de prueba parecieron normales. Diez animales de control fueron sacrificados por eutanasia y se les practicó la necropsia. Todos los animales de control parecieron normales. La evaluación estadística de los datos del estudio no se consideró necesaria.

TABLA 3 Cambio en los Pesos Corporales de las Ratas para los Animal de Prueba Inicial Final No. ID del Sexo Día 0 (g) Día 14 (g) Cambio en el Animal peso corporal 1 M 153.6 136.5 -17.1 2 M 160.6 125.4 -35.2 3 M 156.5 131.4 -25.1 4 M 169.6 151.8 -17.8 5 M 161.0 139.0 -22.0 6 M 154.5 132.1 -22. 8 M 153.0 123.8 -29.2 TABLA 3 (Continuación) Cambio en los Pesos Corporales de las Ratas para los Animales de Prueba Inicial Final No. ID del Sexo Día 0(g) Día 14 (g) Cambio en el Animal peso corporal 9 M 163.6 135.3 : -28.3 16 M 165.0 137.2 -27.8 17 M 163.6 151.4 -12.2 21 H 141.7 122.3 -19.4 24 H 138.2 125.4 -12.8 26 H 133.4 129.1 -4.3 27 H 140.0 135.0 -5.0 29 H 141.8 131.5 -10.3 30 H 148.2 131.8 -16.4 31 H 134.0 123.7 -10.3 32 H 145.1 131.5 -13.6 33 H 130.7 124.1 -6.6 35 H 136.9 124.1 -12.8 TABLA 4 Cambio en los pesos corporales de las ratas para los animal de control Inicial Final No. ID del Sexo Día 0 (g) Dia 14 (g) Cambio en el Animal peso corporal 13 M 158.2 245.4 +87.2 14 M 155.5 256.1 +100.6 15 M 162.5 263.1 +100.6 18 M 155.5 270.1 +114.6 19 M 160.0 263.7 +103.7 23 H 145.2 187.6 +42.4 28 H 139.5 179.5 +40.0 34 H 134.0 170.0 +36.0 36 H 139.2 186.2 +47.0 37 H 134.3 183.6 +49.3 TABLA 5 Consumo Promedio de Alimento y Agua para los Animal Prueba # ID Sexo Peso promedio Peso promedio Volumen promedio Volumen del del alimento del alimento de agua promedio de animal consumido consumido consumida antes agua consumida antes de la durante la de la prueba durante la prueba (g)1 prueba (g)2 (mi) prueba (mi) 1 M 16.0 29.3 21.8 39.8 2 M 17.1 26.1 27.1 37.1 3 M 16.9 26.0 22.8 36.2 4 M 18.1 25.9 23.8 35.9 M 17.4 27.4 24.2 38.0 6 M 16.5 27.4 22.2 37.5 8 M 14.3 27.8 19.1 37.0 9 M 16.6 25.9 21.5 33.7 16 M 18.2 27.8 21.6 35.3 17 M 16.2 27.8 22.9 37.1 21 H 14.1 27.3 22.3 39.6 24 H 14.7 25.8 20.8 35.53 26 H 15.0 27.2 19.3 40.3 27 H 15.7 26.7 21.9 39.3 29 H 14.4 29.0 18.7 39.4 H 16.8 25.6 25.9 35.7 31 H 16.3 29.3 19.3 37.6 TABLA 5 (Continuación) Consumo Promedio de Alimento y Agua para los Animal Prueba ¾as ratas recibieron Purina Rodent Chow certificada. 2Las ratas recibieron la sustancia de prueba, Eradirat, # 020901 3Cálculo en base a 13 días debido a fugas en la botella de agua 4Cálculo en base a 6 días debido a fugas en la botella de agua TABLA 6 Consumo Promedio de Alimento y Agua para los Animales Control *Las ratas recibieron Purina Rodent Chow certificada TABLA 7 Promedios del Consumo de Alimento y Agua para todos Animales SUMARIO El Eradirat, lote #020901 se administró a un grupo de 20 ratas blancas (10 machos y 10 hembras) para evaluar sus características tóxicas de conformidad con los requerimientos federales enlistados en la 40 CFR 158, subdivisión F, Serie 81-1. Los animales fueron observados durante 14 días. Se registraron cualesquiera y todas las anormalidades clínicas y del comportamiento, incluyendo las mortalidades. El día 14 todas las 20 ratas se sometieron a necropsia para realizar una patología en grueso. Al momento de la necropsia, 17 de las ratas de prueba parecieron normales, mientras que tres tenían los intestinos delgados llenos de fluido, uno de los cuales tenía un parche amarillento sobre el revestimiento estomacal. Conclusión El estudio anterior muestra que el Eradirat interfiere en la digestión de las ratas de laboratorio y conduce a la deshidratación y pérdida de peso, pero no a la muerte bajo las condiciones del laboratorio. En otros estudios de laboratorio (las ratas Rattus norvegius capturadas en su estado silvestre) el impacto en el ciego y en el intestino se observó en el análisis post mortem seguido de la ingestión de un rodenticida similar en forma de pelotillas, de conformidad con la invención. Se observó compactamiento en el ciego y en el intestino, en otros estudios de laboratorio, seguido de la ingestión de un rodenticida similar en forma de pelotillas, de conformidad con la invención. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (16)

1. . REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Un método de selección de materiales candidatos retenedores de agua, con respecto a su actividad rodenticida potencial en el campo, el método está caracterizado porque comprende: (a) proporcionar materiales retenedores de agua, como materiales candidatos; (b) alimentar a los roedores con los materiales candidatos ad libitum bajo condiciones de laboratorio; y seleccionar aquellos materiales candidatos que : i) conduzcan a una pérdida de peso promedio de al menos 15%, preferentemente de al menos 20%, más preferentemente de al menos 25%, y en la forma más preferente de al menos 30%, del peso corporal inicial, durante una fase inicial del análisis; o ii) causen la interrupción del transporte de agua o del transporte de iones a través de la pared de los intestinos de los roedores .
2. 2. Un método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque se analiza el tamaño o condición de la glándula timo del roedor para determinar si ha ocurrido o no esa interrupción.
3. 3. Un método de conformidad con la reivindicación 1 o con la reivindicación 2, caracterizado porque los roedores son examinados para ver si se presenta una o más de las siguientes situaciones: hinchazón de los intestinos, impactación o compactación del ciego, e impactación o compactación del intestino.
4. 4. Un método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el material retenedor de agua es de origen natural .
5. 5. Un método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el material retenedor de agua es un material celulósico.
6. 6. Un método de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque el material retenedor de agua se deriva de mazorcas de maíz.
7. 7. Un método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque los roedores son examinados post mortem.
8. 8. Un método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque los roedores son ratas de laboratorio, preferentemente rattus norvegicus, o son ratones de laboratorio.
9. 9. Un método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el material retenedor de agua es substancialmente no tóxico para los seres humanos .
10. 10. Un rodenticida caracterizado porque comprende un material retenedor de agua, preferentemente un material celulósico retenedor de agua, más preferentemente alfa-celulosa como el ingrediente activo, y un atrayente de roedores, en donde el uso del rodenticida interrumpe el transporte del agua o el transporte de iones a través de la pared de los intestinos del roedor.
11. 11. Un rodenticida de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el atrayente de roedores comprende un material dulce.
12. 12. Un rodenticida de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque el atrayente de roedores comprende melaza.
13. 13. Un recipiente de rodenticida, a prueba de humedad, caracterizado porque se encuentra de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 10 a la 12.
14. 14. El uso de un material retenedor de agua, preferentemente un material celulósico retenedor de agua, más preferentemente alfa-celulosa junto con un atrayente de roedores, en la fabricación de un rodenticida para la interrupción del transporte de iones o del transporte de agua, a través de la pared de los intestinos de un roedor, en donde el material retenedor de agua es el ingrediente activo del rodenticida.
15. 15. El uso de conformidad con la reivindicación 14 , en donde al menos el material retenedor de agua se seca bajo condiciones de temperatura y/o presión elevadas.
16. 16. Un método para aminorar la infestación por roedores, caracterizado porque comprende depositar, en un área infestada por roedores, un rodenticida de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 10 a la 12, en donde el rodenticida no es tóxico para, los seres humanos, y al ser ingerido interrumpe la digestión de los roedores.