MXPA03006188A - Compuestos similares a amino ceramida y metodos terapeuticos para su uso. - Google Patents

Abstract

Se proporcionan compuestos novedosos parecidos a la amino ceramida, que inhiben la formacion de glucosil ceramida (GlcCer), al inhibir la actividad de la enzima GlcCer sintasa, disminuyendo asi el nivel de glicoesfingolipidos. Los compuestos de la presente invencion tienen una mejorada actividad inhibidora de la GlcCer sintasa y, por lo tanto, son muy utiles en metodos terapeuticos para tratar varias condiciones y enfermedades asociadas con niveles alterados de glicoesfingolipidos.

Description

COMPUESTOS SIMILARES A AMINO CERAMIDA Y MÉTODOS TERAPÉUTICOS DE USO GARANTÍA El trabajo sobre esta invención se garantiza en parte por los Institutos Nacionales de Salud, Cesión ROI DK55823. El Gobierno puede tener ciertos derechos en la invención.

CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención en general se relaciona con compuestos similares a ceramida y, más particularmente, con profármacos de compuestos similares a ceramida que inhiben la formación de glucosiloceramida .

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Cientos de glucoesfingolipidos (GSLs) se derivan de glucosiloceramida (GlcCer), que se forma enzimát reamente a partir de ceramida y UDP-glucosa. La enzima involucrada en la formación de GlcCer es la ÜDP-glucosa:N-acilesfingosina glucosilotransferasa (el GlcCer sintasa) . La proporción de formación de GlcCer bajo condiciones fisiológicas puede depender del nivel de tejido de UDP-glucosa que a su vez depende del nivel de glucosa en un tejido particular (Zador, I.Z. et al., "A Role for Glyco sphingolipid Accumulatoin in the Renal Hypertrophy of Strepto zo ocin-induced Diabetes Mellitus", J. Clin. Invest. 91:797-803 (1993)). Análisis in vitro basados en el rendimiento endógeno de ceramida inferior a las proporciones sintéticas que las mezclas que contienen ceramida agregada, que sugiere que los niveles de tejido de ceramida también son normalmente limitantes de la proporción (Brenkert, A. et al., "Synthesis of Galactosyl Ceramide and Glucosyl Ceramide by Rat Grain:Assay Procedures and Changes with Age", Brain Res. 36:183-193 (1972)). Se ha encontrado que el nivel de los GSL controla una variedad de funciones celulares, tales como por ejemplo, crecimiento, diferenciación, adhesión entre células o entre células y proteínas matriz, unión de microorganismos y virus a las células, y metástasis de células tumorales. Además, el precursor de GlcCer, ceramida, puede provocar diferenciación o inhibición del desarrollo celular (Bielawska, A. et al., "Modulation of Cell Gro th and Diferentiation by Ceramide", FEBS Letters 307:211-214 (1992)) y estar involucrado en el funcionando de la vitamina D3, factor-a necrosis tumoral, int erleucinas , y apoptosis (muerte celular programada) . Los esfingoles (bases esfingoideas ) , precursores de ceramida, y productos del catabolismo de ceramida, también han mostrado tener influencia en muchos sistemas celulares, posiblemente al inhibir la proteina cinasa C (PKC, por sus siglas en inglés) . Es probable que todos los GSL experimentan hidrólisis catabólica, de tal forma que cualquier bloqueo en la GlcCer sintasa finalmente debe conducir a la depleción de los GSL y profundos cambios en el funcionando de una célula u organismo. Un inhibidor de GlcCer sintasa, PDMP ( lR-fenil-2R-decanoilamino-3-morfolino-l-propanol) , anteriormente identificado como el D-treo isómero (Inokuchi, J. et al., "Preparation of the Active Isomer of l-Phenyl-2-Decanoylamino-3-Morpholino-l-Propanol, Inhibitor of Glucocerebroside Synthetase", J. Lipid Res. 28:565-571 (1987)), se ha encontrado que produce una variedad de cambios químicos y fisiológicos en las células y en animales (Radin, N.S. et al., Use of 1-Pheny1- 2 - Decanoy1 amino- 3 -Morpholino-l-propanol (PDMP), an Inhibitor of Glucosyloceramide" , In NeuroProtocols , A Companion to Methods in Neurosciences , S.K. Fisher et al., Ed., (Academic Press, San Diego) 3:145-155 (1993) y Radin, N.S. et al., "Metabolic Effects of Inhibiting Glucosylceramide Synthesis with PDMP and Other Substances", In Advances in ipid Research ; sphingolipids in Signaling, Parte B., R.M. Bell et al., Ed. (Academic Press, San Diego) 28:183-213 (1993) ) . En particular es interesante la capacidad del compuesto para curar a ratones de cáncer inducido por células de carcinoma Ehrlich asertes (Inokuchi, J. et al., "Antitumor Activity in Mice of an Inhibitor of Glucosphingolipid Biosynthesis" , Cáncer Lett. 38:23-30 (1987)), para producir la acumulación de esfingosina y ' N, -dimetilesfingosina (Felding-Habermann, B. et al., "A Ceramide Analog Inhibits T Cell Proliferative Response Through Inhibition of Glycosphingolipid Synthesis and Enhancement of N,N-Dimethylsphingosine Synthesis", Biochemistry 29:6314-6322 (1990)), y detiene el desarrollo celular (Shayman, J.A. et al., "Modulation of Renal Epithelial Cell Growth by Glucosylceramide: Asociation with Protein Kinase C, Sphingosine, and Diacylglyceride", J. Biol. Chem. 266:22968-22974 (1991) ) . Se ha encontrado que los compuestos con grupos acilo de cadena grasa más larga son substancialmente más eficaces (Abe, A. et al., "Improved Inhibitors of Glucosylceramide Synthesis", J. Biochem. 111:191-196 (1992)). La importancia del metabolismo con GSL se subraya por la gravedad de los trastornos que resultan de los defectos en las enzimas metabolizantes de GSL. Por ejemplo, las enfermedades de Tay Sachs, Gaucher, y Fabry, que resultan de los defectos enzimáticos en la trayectoria degenerativa del GSL y la acumulación de GSL en el paciente, todos tienen manifestaciones clínicas graves. Otro ejemplo de la importancia de la función de GSL se observa en un mecanismo mediante el cual los glóbulos sanguíneos cuyas superficies contienen selectinas, pueden, bajo ciertas condiciones, unirse a los GSL en las paredes de los vasos sanguíneos y producen una inflamación grave que amenaza la vida (Alón, R. et al., "Glycolipid Ligands for Selectins Support Leukocyte Tethering & Rolling Under Physiologic Flow Conditions". J. Immunol . , 154:5356-5366 (1995)) . En la actualidad sólo existe un tratamiento disponible para pacientes con la enfermedad de Gaucher, en donde la enzima normal que se ha aislado de tejidos normales humanos o células cultivadas se administran al paciente. Al igual que con cualquier fármaco aislado de material humano, es necesario tener mucho cuidado para evitar la contaminación con un virus u otras substancias peligrosas . El tratamiento para un paciente individual es sumamente caro, costando ciento de miles, o incluso millones de dólares, durante un lapso de vida del paciente. De esta forma seria conveniente proporcionar un tratamiento que incluya la administración de un compuesto que sea barato y fácil de conseguir y/o se pueda producir a partir de materiales comunes mediante reacciones simples. Posiblemente de incluso mayor relevancia clínica es la función de los glucolipidos en el cáncer. Por ejemplo, se ha encontrado que ciertos GSL sólo se presentan en tumores; ciertos GSL se presentan a concentraciones anormalmente altas en tumores; ciertos GSL, se agregan a células tumorales en medios de cultivo, ejercen marcadas acciones estimuladoras o inhibidoras en el crecimiento tumoral; los anticuerpos para ciertos GSL inhiben el crecimiento de tumores; los GSL que se liberan de los tumores en el fluido extracelular circundante inhiben el sistema de inmunodefensa normal del cuerpo; la composición de los GSL tumorales cambia a medida que los tumores van aumentando de malignidad; y, en ciertos tipos de cáncer, el nivel de un GSL que circula en la sangre proporciona información útil con respecto a la respuesta del paciente al tratamiento. Debido al impacto significativo que los GSL tienen sobre diversos procesos bioquímicos, sigue habiendo una necesidad por compuestos que tengan una actividad de inhibición mejorada de GlcCer sintasa. De esta forma sería conveniente proporcionar compuestos que inhiban la actividad de GlcCer sintasa. También sería conveniente proporcionar compuestos que inhiban la actividad de GtcCer sintasa, disminuyendo con esto el nivel de los GSL y aumentando los niveles del precursor de GSL, por ejemplo, aumentando los niveles de ceramida y esfingoles . Sería más conveniente proporcionar compuestos que inhiban la actividad de GlcCer sintasa y disminuyan el nivel de los GSL sin aumentar también los niveles de ceramida crecientes . También sería conveniente proporcionar los compuestos y métodos terapéuticos para tratar las condiciones y enfermedades asociadas con los niveles alterados de GSL y/o los niveles precursores de GSL. Podría ser más conveniente proporcionar estos compuestos en la forma de profármacos que se pueden transformar después en los compuestos activos dentro de una célula.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Se proporcionan compuestos novedosos que inhiben la formación de GlcCer al inhibir la enzima GlcCer sintasa, disminuyendo con esto el nivel de los GSLs. Los compuestos de la presente invención están en la forma de profármacos. Al igual que los profármacos, están en una forma inactiva hasta que se introducen en una célula u organismo, donde se convierten entonces a una forma activa. También se proporcionan compuestos activos que sean más hidrofóbicos para ayudar en el transporte a través de las membranas celulares aumentando asi la concentración de los compuestos en las células blanco. Las formas activas de los compuestos de la presente invención han mejorado la actividad para la inhibición de GtcCer sintasa y por lo tanto son bastante útiles en los métodos terapéuticos para el tratamiento de diversas condiciones y enfermedades asociadas con niveles alterados de GSL, asi como también los niveles precursores de GSL. Por ejemplo, los compuestos de la presente invención pueden ser útiles en los métodos que incluyen desarrollo y metástasis de cáncer, desarrollo de tejidos normales, la capacidad de los mic oorganismos patogénicos para unirse a células normales, la unión entre células similares, la unión de toxinas a células humanas, y la capacidad de las células cancerosas para bloquear el proceso normal de ataque citotóxico inmunológico . Los objetivos, ventajas, y características adicionales de la presente invención se harán más evidentes a partir de la siguiente descripción y reivindicaciones anexas, tomadas junto con los dibujos de compañía.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Las diversas ventajas de la presente invención se harán evidentes para alguien con experiencia en la técnica al leer la siguiente especificación y las reivindicaciones, y al hacer referencia a los siguientes dibujos: la Figura 1 es un esquema que muestra la estructura de homólogos de etilendioxi-P4 sustituidos con carbno-3; la Figura 2 es una gráfica que muestra la inhibición de glucosilceramida sintasa mediante D-t-etilendioxi-P4 y los profármacos de etilendioxi-P ; y la Figura 3 es una traza de HPLC que muestra la conversión del profármaco en el compuesto activo en presencia de citosol hepático.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LAS MODALIDADES PREFERIDAS Se proporcionan los compuestos novedosos en forma de profármacos que inhiben la formación de GtcCer al inhibir la enzima GlcCer sintasa, disminuyendo con esto el nivel de los GSL. Los compuestos de la presente invención se convierten a su forma activa una vez que se hayan absorbido por una célula. Los compuestos de la presente invención tienen actividad inhibidora mejorada de GtcCer sintasa y por lo tanto son bastante útiles en los métodos terapéuticos para tratar diversas condiciones y enfermedades asociadas con niveles alterados de GSL. Los profármacos tienen propiedades farmacocinéticas mejoradas, entre las que se incluyen, transporte mejorado en las células. Una vez que el profármaco entra en la célula u organismo blanco, éste se convierte en la forma activa mediante procesos metabólleos . Los compuestos de la presente invención en general tienen la siguiente fórmula: en donde Ri es un grupo fenilo, de preferencia un grupo fenilo sustituido como p-metoxi, hidroxi, substituciones con dioxano tales como por ejemplo, metilendioxi, etilendioxi, y trimetilendioxi , ciclohexilo u otro grupo acíclico, t-butilo u otro grupo alifático ramificado, o cadena larga de alquilo o alquenilo, de preferencia de 7 a 15 átomos de carbono con un doble enlace enseguida del núcleo de la estructura. La cadena alifática puede tener un grupo hidroxilo cerca de los dos centros asimétricos, que corresponde a la fitoesfingosina . R2 es un residuo de alquilo de un ácido graso, de 10 a 18 átomos de carbono. El ácido graso puede estar saturado o insaturado, o poseer una pequeña sustitución en la posición C-2 (por ejemplo, un grupo hidroxilo) . R3 es una amina terciaria, de preferencia una amina cíclica tal como por ejemplo, pirrolidina, azetidina, morfolina o piperidina, en donde el átomo de nitrógeno se une al núcleo (es decir, una amina terciaria ) . R4 es cualquier grupo que se hidroliza selectivamente en una célula blanco, de preferencia un acetilo, -C0 ( CH2 ) nCH3 , en donde n es al menos 1, , en donde R5 es un grupo alquilo.

Los compuestos de la presente invención se convierten en la célula a las formas inhibidoras activas de los compuestos que tienen la fórmula general : en donde Ri, R2 y 3 se definieron anteriormente para los compuestos de profármaco. Se contemplan todos los cuatro isómeros estructurales de los compuestos dentro de la presente invención y se pueden utilizar ya sea solos o en combinación (es decir, DL-treo o DL-eritro) . En una modalidad, los compuestos de la presente invención incluyen los profármacos de los Inhibidores de GtcCer Sintasa expuestos en la patente de los Estados Unidos No. 6,030,995, incorporada en la presente como referencia. Los compuestos de profármaco comprenden un grupo hidrolizable unido covalentemente al átomo de oxigeno del hidroxilo de la estructura de 1-propanol. Los compuestos preferidos de la presente invención son los profármacos de D-t-3' , 4 ' -etilendioxi-l-fenil-2-palmitoilamino-3 -pirrolidino- 1-propanol , también denominados en la presente como D-t-3', 4'-etilendioxi-P4 (o D-t-EtD0-P4 en las figuras), y D-t- ' -hidro i-l-fenil-2-palmitoilamino-3-pirrolidino-1-propanol, también denominados en la presente como D-t-4-t'-hidroxi-P4. En otra modalidad de la presente invención los profármacos de la presente invención comprenden un grupo hidrolizable coval entemente unido (R ) al hidroxilo de la estructura de 1-propanol que se hidroliza selecti amente dentro de la célula, de preferencia enzimáticamente . La entidad química puede ser cualquier grupo que se hidrolice selectivamente para producir un compuesto activo con un hidroxilo sin modificar en la célula. Como un ejemplo no limitante, la Figura 3 muestra la conversión selectiva de D-t-3 ' , 4 ' -etilendioxi-P4 modificado con acetilo en presencia de citosol. En ausencia de citosol, el profármaco no se convierte al compuesto activo en una solución acuosa. En una modalidad preferida, el grupo se une al compuesto activo a través de un enlace de éster. grupo químico de preferencia es un acetilo, ¦CO ( CH2 ) nCH3 , en donde n es al menos 1 o en en donde R5 es un grupo alquilo. Los profármacos modificados son inactivos como inhibidores de GlcCer Sintasa (símbolos abiertos, Figura 2). Sin embargo, la escisión de la entidad química para formar un hidroxilo sin modificar produce un inhibidor potente ( Figura 2 ) .

En otra modalidad, los compuestos de la presente invención son profármacos en donde Rj. es 4'-hidroxi-fenilo y el grupo hidrolizable (Re) se une covalentemente al 4'-hidroxi. Estos compuestos tienen la fórmula general: en donde R2 es un residuo de alquilo de un ácido graso, de 10 a 18 átomos de carbono. El ácido graso puede estar saturado o insaturado, o posee una pequeña sustitución en la posición C-2 (por ejemplo, un grupo hidroxilo) . R3 es una amina terciaria, de preferencia una amina cíclica tal como por ejemplo, pirrolidina, azetidina, morfolina o piperidina, en donde el átomo de nitrógeno se une al núcleo (es decir, a una amina R.6 es cualquier grupo que se hidrolice selectivamente en una célula blanco, de preferencia un acetilo, -CO(CH2)nCH3 en donde n es al menos 1, en donde R5 es un grupo alquilo.

La hidrólisis del grupo unido covalentemente al 4 '-hidroxilo dentro de la célula produce un compuesto activo que tiene un 4' -hidroxilo libre. Un compuesto preferido es el profármaco de D-t-4'-hidroxi-P . Todavía en otra modalidad, los compuestos de la presente invención son profármacos en donde Ri es 4 ' -hidroxi-fenilo y en donde los grupos hidrolizables se unen covalentemente tanto al hidroxilo de la estructura de 1-propanol (R4) como al 4'-hidroxi del fenilo (Re) . La estructura general de estos compuestos es: en donde R2 es un residuo de alquilo de un ácido graso, de 10 a 18 átomos de carbono. El ácido graso puede estar saturado o insaturado, o posee una pequeña sustitución en la posición C-2 (por ejemplo, un grupo hidroxilo) . R3 es una amina terciaria, de preferencia una amina cíclica tal como por ejemplo, pirrolidina, azetidina, morfolina o piperidina, en donde el átomo de nitrógeno se une al núcleo (es decir, una amina terciaria) . R4 y R5 son cualquier grupo que se hidrolice selectivamente en una célula blanco, de preferencia un acetilo, -C0 ( CH2 ) nCH3 , en donde n es al menos 1, , en donde R5 es un grupo alquilo.

Las propiedades farmacocinéticas de un compuesto activo se pueden reforzar al hacer que la molécula sea más lipofílica. Una ventaja es aumentar la permeabilidad a través de la membrana celular, dando por resultado en mayores concentraciones intracelulares del compuesto activo. En una modalidad, un grupo alquilo se une covalentemente al compuesto de la presente invención. Estos compuestos pueden tener las fórmulas generales : en donde n es un número entero de aproximadamente 1 hasta 19; R2 es un residuo de alquilo de un ácido graso, de 10 a 18 átomos de carbono. El ácido graso puede estar saturado o insaturado, o posee una pequeña sustitución en la posición C-2 (por ejemplo, un grupo hidroxilo) . R.3 es una amina terciaria, de preferencia una amina cíclica tal como por ejemplo, pirrolidina, azetidina, morfolina o piperidina, en donde el átomo de nitrógeno se une al núcleo (es decir, a una amina terciaria ) . La cadena de alquilo unida al grupo fenilo hace que el compuesto activo sea más lipofilico, permitiendo que se obtenga una mayor concentración en las células blanco. De preferencia, la cadena de alquilo está insaturada. La presencia de la cadena de alquilo da por resultado en un compuesto activo que se asemeja al substrato que se presenta en la naturaleza de GtcCer Sintasa que comprende una esfingosina . Los compuestos de la presente invención se sintetizan fácilmente mediante métodos bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, los compuestos de la presente invención se pueden sintetizar mediante la esterificación del hidroxi (o alcohol) con el anhídrido adecuado. En una modalidad de la presente invención, se proporcionan los métodos para el tratamiento de pacientes que padecen de errores genéticos innatos en el metabolismo de GlcCer y sus productos anabólicos normales ( lactosilceramida y los GSL más complejos) con los profármacos. Los trastornos actualmente conocidos en esta categoría incluyen Gaucher, Fabry, Tay-Sachs, Sandhoff, y GM1 gangliosidosis . Los errores genéticos están en la incapacidad del paciente para sintetizar una enzima hidrolítica que tiene eficacia normal. Su hidrolasa ineficaz permite que el GSL se acumule gradualmente a un grado tóxico, debilitando o matando a la victima. Los compuestos de la presente invención disminuyen la formación de los GSL, permitiendo asi que la hidrolasa defectuosa "atrape" y restaure las concentraciones de los GSL a sus niveles normales y de esta forma los compuestos se pueden administrar para tratar a esos pacientes. Con respecto a la enfermedad de Gaucher, se ha calculado que la mayoría de GlcCer acumulado de pacientes en el hígado y el bazo proviene de glóbulos sanguíneos que se destruyen finalmente en estos órganos después de han alcanzado el fin de su periodo de vida. La fracción real, el lípido derivado de glóbulos sanguíneos contra el lípido formado en el hígado y células de bazo, es realmente bastante incierto, aunque la fuente externa debe ser importante . Por lo tanto, es necesario para los compuestos de la presente invención reducir los glóbulos sanguíneos a medida que se forma o (en el caso de los leucocitos) mientras que todavía están circulando en la sangre. Juzgando a partir de pruebas de toxicidad, los leucocitos siguen funcionando adecuadamente a pesar de su pérdida de GSL. Aunque los estudios de toxicidad no tuvieron larga duración para producir muchos glóbulos rojos nuevos con bajo contenido de GSL, es posible que los glóbulos rojos en circulación también experimenten la rotación (pérdida continua más reemplazo) de los GSL. En una modalidad alternativa de la presente invención, para el tratamiento de trastornos que implican desarrollo y división celular, se administran altas dosificaciones de los compuestos de la presente invención aunque sólo durante un tiempo relativamente corto. Estos trastornos incluyen cáncer, enfermedades vasculares por colágeno, aterosclerosis , y la hipertrofia renal de pacientes diabéticos. La acumulación o cambios en los niveles celulares de los GSL se han implicado en estos trastornos y biosintesis de GSL bloqueador podría permitir que los mecanismos restauradores normales del cuerpo resuelvan el desequilibrio. Con la aterosclerosis, se ha mostrado que las células epiteliales arteriales se desarrollan más rápido en presencia de un producto GlcCer ( lactosilceramida ) . La lipoproteína sérica oxidada, un material que por lo general circula en la sangre, estimula la formación de placas y lactosilceramida en el revestimiento interno de los vasos sanguíneos. El tratamiento con los compuestos de la presente invención podría inhibir este efecto mitogénico .

En una modalidad adicional de la presente invención, los pacientes que padecen de infecciones se pueden tratar con los compuestos de la presente invención. Muchos tipos de bacterias patogénicas se deben unir a los GSL específicos antes de que puedan inducir sus efectos tóxicos. Como se muestra en Svensson, M. et al., "Epithelial Glucosphingolipid Expression as a Determinant of Bacterial Adherence and Cytokine Production", Infect. and Immun . 62:4404-4410 (1994), incorporado expresamente como referencia, el tratamiento con PDMP reduce la adherencia de E. coli a células mamiferas . Diversos virus, tales como por ejemplo, el tipo A de influenza, también se deben ligar a un GSL. Diversas toxinas bacterianas, como las verotoxinas, no pueden actúan por sí mismas sin unirse primero a un GSL. De esta forma, al disminuir el nivel de los GSL, el grado de infección se puede mejorar. Además, cuando un paciente ya está infectado a un grado que se pueda reconocer y se pueda diagnosticar, los compuestos de la presente invención pueden retardar el desarrollo adicional de la infección eliminando los sitios de unión que siguen libres. Se ha mostrado que los tumores producen substancias, a saber gangliósidos , una familia de los GSL, que evitan que el hospedero, es decir, el paciente, genere anticuerpos contra el tumor. Al bloquear la capacidad del tumor para secretar estas substancias, se pueden producir anticuerpos contra el tumor. De esta forma, al administrar los inhibidores de GlcCer sintasa de la presente invención al paciente, los tumores agotarán sus GSL y las defensas inmunológicas normales del cuerpo entrarán en acción y destruirán el tumor. Esta técnica se describe en Inokuchi, J. et al., "Antitumor Activity in Mice of an Inhibitor of Glycosphingolipid Biosynthesis" , Cáncer Lett . 38:23-30 (1987), incorporado expresamente como referencia. Los compuestos de la presente invención y en particular los compuestos alifáticos requieren dosis mucho más bajas que las descritas anteriormente. Esto es particularmente importante debido a que la dosis más baja puede reducir ciertos efectos secundarios. Además, debido a que los compuestos alifáticos de la presente invención no producen acumulación de ceramida, son menos tóxicos. Además, 1-fenil-2-palmitoilamino-3-pirrolidino- 1-propanol (P4), puede actuar via dos depleción de GSL y acumulación ceramida .

En una modalidad alternativa, se proporciona una preparación similar a vacuna. Aquí, se retiran células cancerosas del paciente (de preferencia tan completamente como sea posible), y las células se hacen crecer en cultivo para obtener muchas células cancerosas. Las células luego se exponen al inhibidor durante un tiempo suficiente para agotar los GLS de las células (en general de 1 a 5 días) y se vuelven a inyectar en el paciente. Estas células reinyectadas actúan como antígenos y se destruyen por el sistema de inmunodefensa del paciente. Las células cancerosas restantes (que se podrían eliminar físicamente) también serán atacadas por los anticuerpos del paciente. En una modalidad preferida, los gangliósidos en circulación dek paciente en el plasma se eliminan mediante plasmaféresi s , debido a que los gangliósidos en circulación podrían tender a bloquear el sistema de inmunodefensa . Se cree que los tumores dependen particularmente de la síntesis de GSL para mantener su crecimiento ( Ha komori , S . , "New Directions in Cáncer Therapy Based on Aberrant Expressoin of Glycosphingolipis" Anti-adhesion and Ortho-Signaling Therapy", Cáncer Cells 3:461-470 (1991)) . La acumulación de ceramida en los tumores tratados también retarda su crecimiento o los extermina. Los tumores también generan grandes cantidades grandes de GSL y las secreta en el cuerpo del paciente, evitando con esto la respuesta normal del hospedero mediante células inmunoprotectoras , que deben generar anticuerpos contra células tumorales ? de otra manera destruirlas (por ejemplo, los tumores son débilmente antigénicos ) . También se ha mostrado que la depleción de GSL bloquea la metástasis de las células tumorales (Inokuchi, J. et al., "Inhibition of Experimental Metástasis of Murine Lewis Long Carcinoma by an Inhibitor of Glucosylceramide Synthase and its Possible Mechanism of Action", Cáncer Res. 50:6731-6737 (1990) . La angiogénesis tumoral (por ejemplo, la producción de capilares sanguíneos) se influye de manera importante por los GSL (Ziche, M. et al., "Angiogénesis Can Be Stimulated or Repressed in In Vivo by a Change in GM3 : GD3 Ganglioside Ratio", Lab. Invest. 67:711-715 (1992)) . Provocar la depleción del tumor de sus GSL debe bloquear a los tumores para generar los nuevos vasos sanguíneos que necesitan para desarrollarse. Una característica importante adicional de los compuestos de la presente invención es su única capacidad de bloquear el crecimiento de células tumorales resistentes a múltiples fármacos ("MDR") incluso a dosificaciones mucho más bajas. Esto se demostró con PDMP por Rosenwald, A.G. et al., "Efeccts of the Glycosphingolipid Synthesis Inhibitor, PDMP, on Lysosomes in Cultured Cells", J. Lipíd Res. 35:1232 (1994), incorporado expresamente como referencia. Las células tumorales que sobreviven a una serie inicial de tratamientos terapéuticos con frecuencia reaparecen algunos años después con nuevas propiedades -ahora son resistentes a un segundo esquema de tratamiento, incluso con diferentes fármacos. Este cambio se ha atribuido a la aparición en el tumor de grandes cantidades de una proteina MDR especifica ( -glucoproteina ) . Se ha sugerido que la proteina cinasa C (PKC) puede estar implicada en la acción o formación de P-glucoproteina (Blobe, G.C. et al., "Regulation of PKC and Its Role In Cáncer Biology", Cáncer Metástasis Rev. 13:411-431 (1994)) . Sin embargo, las disminuciones en PKC tienen otros efectos importantes, en partidular retardando el crecimiento. Se sabe que PDMP dismimuye el volumen celular de PKC (Shayman, J.A. et al., "Modulation of Renal Epithelial Cell Growth by Glucosylceramide: Association with Protein Kinase C, Sphingosine, and Diacylglyceride", J. Bíol. Chem. 266:22968-22974 (1991)) aungue no está claro por qué bloquea tan eficazmente el crecimiento de las células MDR (Rosenwald, A.G. et al., "Effects of the Glycosphingolipid Synthesis Inhibitor, PDMP, On Lysosomes in Cultured Cells", J. Lipid Res. 35:1232 (1994)). Un reciente informe mostró que diversas aminas lipoidales que bloquean la acción de MDR también disminuyen el nivel de la esfingomielinasa ácida enzimática (Jaffrezou, J. et al., "Inhibition of Lysosomal Acid Sphingomyelinase by Agents which Reverse Multidrug Resistance", Biochim. Biophys. Acta 1266:1-8 (1995)). También se encontró que uno de estos agentes aumenta el contenido celular de esfingosina 5 veces, un efecto también observado con PDMP. Un agente, el clorpromazina, se comporta similar a los compuestos de la presente invención, en su capacidad para disminuir los niveles de tejido de GlcCer (Hospattankar, A.V. et al., "Changes in Liver Lipids After Administration of 2-Decanoylamino-3-Morpholinopropiophenone and Chlorpromazine" , Lipids 17 : 538-543 (1982) ) . Se apreciará por aquellos expertos en la técnica que los compuestos de la presente invención se pueden emplear en una amplia variedad de formas farmacéuticas; el compuesto se puede emplear puro o mezclado con un portador farmacéuticamente aceptable u otros excipientes o aditivos. Generalmente hablando, el compuesto se administrará oral o intravenosamente. Se apreciará que también se pueden emplear las sales terapéuticamente aceptables de los compuestos de la presente invención. La selección de dosificación, velocidad/ frecuencia y medios de administración están dentro de la experiencia del técnico y pueden dejarse al juicio del médico que está tratando o veterinario que atiende. El método de la presente invención se puede emplear solo o en conjunto con otros regímenes terapéuti os. También se apreciará que los compuestos de la presente invención también son útiles como una herramienta de investigación por ejemplo, para investigar adicionalmente el metabolismo de GSL. Las composiciones dentro del alcance de la invención incluyen aquellas que comprenden un compuesto de la presente invención en una cantidad eficaz para alcanzar un fin pretendido. La determinación de una cantidad eficaz y el fin pretendido están dentro de la experiencia de la técnica. Las dosificaciones preferidas dependen por ejemplo, de la gravedad de la enfermedad y la respuesta individual del paciente al tratamiento. En el sentido en que se utiliza en la presente, el término "sales farmacéuticamente aceptables" pretende dar a entender las sales de los compuestos de la presente invención con ácidos farmacéuticamente aceptables, por ejemplo, ácidos inorgánicos tales como por ejemplo, ácidos sulfúrico, clorhídrico, fosfórico, etc. u orgánicos tal como por ejemplo, acético. Las composiciones farmacéuticamente aceptables de la presente invención también pueden incluir portadores adecuados que comprenden excipientes y auxiliares que facilitan el procesamiento de los compuestos activos en las preparaciones que se pueden utilizar farmacéuticamente. Estas preparaciones se pueden administrar oralmente (por ejemplo, tabletas, grageas y cápsulas), rectalmente (por ejemplo, supositorios), así como la administración mediante inyección. Las preparaciones farmacéuticas de la presente invención se fabrican de una forma que sea conocida, por ejemplo, utilizando el mezclado convencional, granulación, elaboración de grageas, procesos de disolución o liofilización . De esta forma, las preparaciones farmacéuticas para uso oral se pueden obtener al combinar los compuestos activos con excipientes sólidos, moliendo opcionalmente una mezcla resultante y procesando la mezcla de gránulos, después de agregar los auxiliares adecuados, si se desea o es necesario, para obtener tabletas. Los excipientes adecuados son, en particular, materiales de relleno tales como azúcares, por ejemplo, lactosa o sacarosa, manitol o sorbitol, preparaciones de celulosa y/o fosfatos de calcio, por ejemplo, difosfato tricálcico o fosfato ácido de calcio, asi como también aglutinantes tales como por ejemplo, pasta de almidón, utilizando, por ejemplo, almidón de maíz, almidón de trigo, almidón de arroz, almidón de papa, gelatina, goma de tragacanto, metilcelulosa y/o polivinilpirrolidona. Si se desea, se pueden agregar agentes desintegrantes tales como por ejemplo, los almidones mencionados anteriormente y también almidón de carboximetilo , polivinilpirrolidona reticulada, agar, o ácido alginico o una sal de los mismos, tal como por ejemplo, alginato de sodio. Los auxiliares son, sobre todo, agentes reguladores de flujo y lubricantes, por ejemplo, sílice, talco, ácido esteárico o sales de los mismos, tales como por ejemplo, estearato de magnesio o estearato de calcio, y/o polietilenglicol . Los centros de las grageas se proporcionan con recubrimientos adecuados los cuales, si se desea, son resistentes a los jugos gástricos-. Para este fin, se pueden utilizar soluciones concentradas de azúcar, que pueden contener opcionalmente goma arábiga, talco, poli inilpirrolidona , polietilenglicol y/o dióxido de titanio, soluciones de goma laca y solventes orgánicos adecuados o mezclas de solventes. Con el fin de producir recubrimientos resistente a los jugos gástricos, se utilizan soluciones de preparaciones de celulosa adecuadas, tales como por ejemplo, ftalato de acetilcelulosa o ftalato de hidroxipropilmetilcelosa . Se pueden agregar tintes o pigmentos a las tabletas o recubrimientos de la gragea, por ejemplo, para la identificación o con el fin de caracterizar diferentes combinaciones dosis del compuesto activo. Otras preparaciones farmacéuticas que se pueden utilizar oralmente incluyen cápsulas de ajuste suave hechas de gelatina, asi como también cápsulas selladas, suaves, hechas de gelatina y un píastificante como glicerol o sorbitol. Las cápsulas de ajuste suave pueden contener los compuestos activos en forma de gránulos que se pueden mezclar con materiales de relleno tales como por ejemplo, lactosa, aglutinantes tales como por ejemplo, almidones, y/o lubricantes tales como por ejemplo, talco o estearato de magnesio y, opcionalmente , estabilizantes. En las cápsulas suaves, los compuestos activos de preferencia se disuelven o suspenden en líquidos adecuados, tales como por ejemplo, aceites grasos, parafina liquida, o polietilenglicoles líquidos. Además, se pueden utilizar estabilizantes. Las preparaciones farmacéuticas posibles que se pueden utilizar rectalmente incluyen, por ejemplo, supositorios que constan de una combinación de los compuestos activos con una base para supositorio. Las bases adecuadas para supositorio son, por ejemplo, triglicéridos naturales o sintéticos, hidrocarburos de parafina, polietilenglicoles o alcanoles superiores. También es posible utilizar cápsulas rectales de gelatina que constan de una combinación de los compuestos activos con una base. Los posibles materiales base incluyen, por ejemplo, triglicéridos líquidos, polietilenglicoles o hidrocarburos de parafina.

Las formulaciones adecuadas para administración parenteral incluyen soluciones acuosas de los compuestos activos en forma soluble en agua, por ejemplo, sales solubles en agua. Además, se puede administrar una suspensión de los compuestos activos como suspensiones en inyección oleosa adecuadas. Solventes o vehículos lipofilicos adecuados incluyen aceites grasos, tales como por ejemplo, aceite de ajonjolí, o ésteres sintéticos de ácido graso, por ejemplo, oleato de etilo o triglicéridos . Las suspensiones acuosas para inyección pueden contener substancias que aumenten la viscosidad de la suspensión tales como por ejemplo, carboximetil celos a de sodio, sorbitol y/o dextrano. Opcionalmente, la suspensión también puede contener estabilizantes . Alternativamente, los compuestos activos de la presente invención se pueden administrar en la forma de liposomas, composiciones farmacéuticas en donde el compuesto activo está contenido ya sea disperso o generalmente presente en corpúsculos que constan de capas acuosas concentradas que se adhieren a la capa lipidica hidrofóbica. El compuesto activo puede estar presente tanto en la capa acuosa como en la capa lipidica o en el sistema no homogéneo en general conocido como una suspensión lipofilica. Los anteriores y otros aspectos de la invención se pueden entender mejor junto con los siguientes ejemplos, que se presentan con fines de ilustración y no a manera de limitación.

EJEMPLO ESPECÍFICO 1 Síntesis del derivado acetílico de D- t-3 ' , ' -etilendioxi-p4 Una mezcla de D-t-3 ' , 4 ' -et ilendioxi-P4 (100 mg, 0.18 m mol), piridina (0.3 mi) y anhídrido acético (1 mi) se agitó a TA durante 2 días. Todos los solventes se eliminaron in vacuo. El residuo luego se purificó mediante una columna de sílice elaborada con MeOH al 5% en CHC13.

EJEMPLO ESPECÍFICO 2 Síntesis del derivado de piridinio de D-t-3 ' , 4 ' -etilendioxi-p4 Se agregó anhídrido nicotínico (0.07 m mol) a D-t-3' , 4' -etilendioxi-P4 (40 mg, 0. 07 mmole DIEA (1 mi), CH2C12 (1 mol) y DMAP (3 mg) y se agitó a TA durante un día. El éster se purificó mediante sílice con MeOH al 5% en cloroformo.

DIEA: Diisopropiletilamina . DMAP: 4 -Dimetilaminopiridina . El análisis anterior expone y describe modalidades solamente de ejemplo de la presente invención. Alguien con experiencia en la técnica reconocerá fácilmente a partir de este análisis, y a partir de los dibujos acompañantes, que se pueden realizar diversos cambios, modificaciones y variaciones en la misma sin apartarse del espíritu y alcance de la invención. Todas las publicaciones citadas en la presente están expresamente incorporadas como referencia .

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES 1. Un compuesto seleccionado del grupo que consiste de la fórmula: en donde Ri es una estructura aromática, una estructura alicíclica, una estructura alifática ramificada o un grupo alifático lineal que tiene de 5 a 15 átomos de carbono; y R2 es una cadena alifática que tiene de 10 a 18 átomos de carbono; R3 es una amina terciaria; y R4 es un grupo que se hidroliza selectivamente en una célula blanco. 2. El compuesto según la Reivindicación 1, en donde R3 es pirrolidino. 3. El compuesto según la Reivindicación 1, en donde R se selecciona del grupo que consiste de un acetilo, -C0 (CH2) nCH3, en donde n es al menos 1 y , en donde R5 es un grupo alquilo. 4. El compuesto según la Reivindicación 1, en donde Rx es 4-hidroxifenilo . 5. El compuesto según la Reivindicación 1, en donde Ri es 3 , 4-etilendioxi . 6. Un método para inhibir el crecimiento de células cancerosas en un mamífero que comprende el paso de administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que comprende el compuesto según la Reivindicación 1 y las sales farmacéuticamente aceptables del mismo. 7. Un método para tratar a un paciente que tiene esf ingolipidosis al reducir la síntesis de glucoes fingolípido que comprende el paso de administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que comprende el compuesto según la Reivindicación 1 y las sales farmacéuticamente aceptables del mismo. 8. Un método para tratar a un paciente que tiene una infección microbiana o viral que comprende el paso de administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que comprende el compuesto según la Reivindicación 1 y las sales farmacéuticamente aceptables del mismo. 9. Un método para tratar a un paciente que tiene un tumor resistente a fármacos, que comprende el paso de administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que comprende el compuesto según la Reivindicación 1 y las sales farmacéuticamente aceptables del mismo. 10. Un método por reducir la angiogénesis tumoral en un paciente que comprende el paso de administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que comprende el compuesto según la Reivindicación 1 y las sales farmacéuticamente aceptables del mismo. 11. Un método de vacunación que comprende los pasos de : a) . retirar células cancerosas sensibles a los compuestos provenientes de un paciente; b) . tratar las células cancerosas in vítro con una cantidad eficaz de una composición que comprende el compuesto según la Reivindicación 1 y las sales farmacéuticamente aceptables del mismo. 12. ün compuesto seleccionado del grupo que consiste de la fórmula: en donde Ri es una estructura aromática, una estructura aliciclica, una estructura alifática ramificada o un grupo alifático lineal que tiene de 5 a 15 átomos de carbono; y R2 es una cadena alifática que tiene de 10 a 18 átomos de carbono; 3 es una amina terciaria; R4 es ün grupo que se hidroliza selectivamente en una célula blanco o un átomo de hidrógeno; y; R6 es un grupo que se hidroliza selectivamente en una célula blanco. 13. El compuesto según la Reivindicación 12, en donde R3 es pirrolidino. 14. El compuesto según la Reivindicación 12, en donde R4 se selecciona del grupo que consiste de un acetilo, -C0 ( CH2 ) 11CH3 , en donde n es al menos 1 y , en donde R5 es un grupo alquilo. 15. El compuesto según la Reivindicación 12, en donde R¾ se selecciona del grupo que consiste de un acetilo, -CO ( CH2 ) nCH3 , en donde n es al menos 1 y , en donde R5 es un grupo alquilo. compuesto según la Reivindicación en donde Ri es 4 -hidroxifenilo . compuesto según la Reivindicación en donde Ri es 3 , -etilendioxi . 18. Un método para inhibir el crecimiento de células cancerosas en un mamífero que comprende el paso de administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que comprende el compuesto según la Reivindicación 12 y las sales farmacéuticamente aceptables del mismo. 19. Un método para tratar a un paciente con esfingolipidosis al reducir la síntesis de glucoesfingolípido que comprende el paso de administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que comprende el compuesto según la Reivindicación 12 y las sales farmacéuticamente aceptables del mismo. 20. Un método para tratar a un paciente que tiene una infección microbiana o viral que comprende el paso de administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que comprende el compuesto según la Reivindicación 12 y las sales farmacéuticamente aceptables del mismo. 21. Un método para tratar a un paciente que tiene un tumor resistente a fármacos, que comprende el paso de administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que comprende el compuesto según la Reivindicación 12 y las sales farmacéuticamente aceptables del mismo. 22. Un método por reducir la angiogénesis tumoral en un paciente que comprende el paso de administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que comprende el compuesto según la Reivindicación 12 y las sales farmacéuticamente aceptables del mismo. 23. Un método de vacunación que comprende los pasos de: a) . retirar células cancerosas sensibles a los compuestos provenientes de un paciente; b) . tratar las células cancerosas in vitro con una cantidad eficaz de una composición que comprende el compuesto según la Reivindicación 12 y las sales farmacéuticamente aceptables del mismo. 24. Un compuesto seleccionado del grupo que consiste de las fórmulas: donde R2 es una cadena alifática que tiene de 10 a 18 átomos de carbono; y R3 es una amina 25. El compuesto según la Reivindicación 24, en donde R3 es pirrolidino. 26. Un método para inhibir el crecimiento de células cancerosas en un mamífero que comprende el paso de administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que comprende el compuesto según la Reivindicación 24 y las sales farmacéuticamente aceptables del mismo. 27. Un método para tratar a un paciente que tiene esfingolipidosis al reducir la síntesis de glucoesfingolípidos que comprende el paso de administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que comprende el compuesto según la Reivindicación 24 y las sales farmacéuticamente aceptables del mismo. 28. Un método para tratar a un paciente que tiene una infección microbiana o viral que comprende el paso de administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que comprende el compuesto según la Reivindicación 24 y las sales farmacéuticamente aceptables del mismo. 29. Un método para tratar a un paciente que tiene un tumor resistente a fármacos, que comprende el paso de administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que comprende el compuesto según la Reivindicación 24 y las sales farmacéuticamente aceptables del mismo. 30. Un método por reducir la angiogénesis tumoral en un paciente que comprende el paso de administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que comprende el compuesto según la Reivindicación 24 y las sales farmacéuticamente aceptables del mismo. 31. Un método de vacunación que comprende los pasos de: a) . retirar células cancerosas sensibles a los compuestos provenientes de un paciente; b) . tratar las células cancerosas in vltro con una cantidad eficaz de una composición que comprende el compuesto según la Reivindicación 24 y las sales farmacéuticamente aceptables del mismo. RE SUMEN DE LA INVENCIÓN Se proporcionan profármacos novedosos de compuestos similares a amino ceramida que inhiben la formación de gluco siloceramida (GlcCer) al inhibir la enzima GlcCer sintasa, disminuyendo con esto el nivel de glucoesfingolipidos . Los compuestos de la presente invención tienen actividad mejorada para la inhibición de GlcCer sintasa y por lo tanto son muy útiles en los métodos terapéuticos para tratar diversas condiciones y enfermedades asociadas con niveles alterados de glucoesfingolipidos .