MXPA01007537A - Conjugados moleculares ionicos de poliesters biodegradables y polipeptidos bioactivos - Google Patents

Abstract

Se expone una composición farmacéutica de liberación sostenida. La composición incluye un poliéster que contiene un grupo COOH libre iónicamenteconjugado con un polipéptido bioactivo que comprende por lo menos una amina ionogénica efectiva, en donde por lo menos el 50%en peso del polipéptido presente en la composición estáiónicamente conjugado con el poliéster.

Description

CONJUGADOS MOLECULARES IÓNICOS DE POLIESTERES BIODEGRADABLES Y POLIPÉPTIDOS BIOACTIVOS REFERENCIA CRUZADA DE LAS SOLICITUD S RELACIONADAS Esta solicitud es una continuación en parte de la solicitud copendiente No. 08/867,308, presentada el 2 de junio de 1997, que se otorga como la patente de los Estados Unidos No. 5,863,985 el 26 de enero de 1999, que es una solicitud de continuación de la solicitud No. 08/464,735, presentada el 29 de junio de 1995, otorgada ahora como la No. 5,672,659 el 30 de septiembre de 1997, que es una solicitud en fase nacional de la PCT/US94/00148 , presentada el 5 de enero de 1994 y que es una solicitud en fase del PCT de la solicitud irlandesa No. 930005 presentada el 6 de enero de 1993.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Esta invención pertenece a la liberación sostenida de polipéptidos bioactivos. Muchos sistemas para la administración de fármacos se han desarrollado, probado y utilizado para la liberación in vivo controlada de composiciones farmacéuticas. Se han utilizado, por ejemplo, poliésteres como el poli (ácido DL-láctico) , poli (ácido glicólico) , poli (e-caprolactona) y otros diversos copolimeros para liberar moléculas biológicamente activas como la progesterona; éstos han estado en la forma de microcápsulas, películas y varillas (Pitt CG, Marks, TA y Schindler, A. 1980) . Durante la implantación, por ejemplo subcutánea o intramuscular, de la composición de agente polimérico/terapéutico, , el agente terapéutico se libera durante un periodo específico de tiempo. Estos sistemas poliméricos biodegradables y biocompatibles están diseñados para permitir que el agente terapéutico atrapado se difunda desde la matriz polimérica. Durante la liberación del agente terapéutico, el polímero se degrada in vivo , eliminando la necesidad del retiro quirúrgico del implante. Aunque los factores que contribuyen a la degradación del polímero no se han comprendido del todo, se cree que tal degradación de los poliésteres puede regularse por la accesibilidad de enlaces éster a la hidrólisis no enzimática y autocatalítica de los componentes poliméricos. Diversas publicaciones de la EPO y de patentes de los Estados Unidos se han enfocado en aspectos del diseño de matrices poliméricas y de su papel en la regulación de la velocidad y del alcance de la liberación de agentes terapéuticos in vivo . Por ejemplo, Deluca (Publicación de la EPO 0 467 389 A2/Universidad de Kentucky) describe una interacción física entre un polímero hidrofóbico biodegradable y una proteína o polipéptido. La composición formada era una mezcla de un agente terapéutico y un polímero hidrofóbico que presentaba liberación difusional sostenida desde la matriz, después de su introducción en un sujeto. % Hutchinson (patente de los Estados Unidos 4, 767, 628/ICI) controló la liberación de un agente terapéutico mediante dispersión uniforme en un dispositivo polimérico. Se declara que esta formulación proporciona liberación continua controlada mediante la superposición de dos fases: primera, una lixiviación dependiente de la difusión del fármaco desde la superficie de la formulación, y segunda, la liberación, por canales acuosos, inducida por degradación del polímero SUMARIO DE LA INVENCIÓN En general, la invención representa una formulación farmacéutica de liberación sostenida compuesta por un poliéster que contienen grupos COOH libres, iónicamente conjugados con un polipéptido biológicamente activo, compuesto de por lo menos una amina ionogénica efectiva, en donde por lo menos el 50% en peso del polipéptido presente en la composición se conjuga iónicamente con el poliéster. En modalidades preferidas, el poliéster se modifica para aumentar la proporción carboxilo a grupo terminal hidroxilo de más de uno y hasta llegar a infinito, es decir, que todos los grupos hidroxilo pueden sustituirse con carboxilos. Los ejemplos de poliésteres adecuados son aquellos que se originan de compuestos como ácido L-láctico, ácido D-láctico, ácido DL-láctico, e-caprolactona, p-dioxanona, ácido e-caproico, carbonato de trimetileno (TMC) sustituido y no sustituido, 1, 5-dioxepan-2-ona, 1,4-dioxepan-2-ona, glicólido, ácido glicólico, L-lactide, D-lactide, DL-lactide, mesolactide, alquilen oxalato, cicloalquilen oxalato, alquilen succinato, (ß-hidroxibutirato) y copolímeros, racematos o isómeros ópticamente activos de cualquiera de los anteriores, en donde el TMC sustituido se sustituye con alquilo (C?-C4) , de preferencia metilo. También pueden utilizarse otros polímeros de heterocadena relacionados con poliésteres tradicionales (por ejemplo, poliortoésteres, poliortocarbonatos y poliacetales) . De preferencia, el poliéster se hace policarboxílico mediante reacción con ácido málico, ácido cítrico o ácido tartárico. En modalidades preferidas el poliéster está parcialmente rematado con ácido mediante anhídrido glutárico. En otras modalidades preferidas el poliéster está totalmente rematado con ácido mediante anhídrido glutárico. De preferencia, el poliéster tiene un grado de polimerización promedio de entre 10 y 300 y, con más preferencia, de entre 20 y 50. Los conjugados moleculares iónicos de esta invención se hacen, de preferencia, con poliésteres rematados con ácido policarboxílico conjugados con polipéptidos bioactivos monobásico y polibásicos que tienen por lo menos un grupo amino ionogénico efectivo. De manera alternativa, puede utilizarse cualquier poliéster para formar un conjugado molecular iónico de la invención siempre y cuando esté pretratado con una base adecuada, por ejemplo, con NaOH. Además, puede utilizarse cualquier péptido estable con ácido, por ejemplo, el péptido que libera la hormona del crecimiento (GHRP) , hormona que libera a la hormona luteinizante (LHRH) , somatostatina, bombesina, péptido liberador de gastrina (GRP) , calcitonina, bradiquinina, galanina, hormona estimuladora de melanocito (MSH) , factor liberador de hormona de crecimiento (GRF) , amilina, taquiquininas, secretina, hormona paratiroidea (PTH) , encefalina, endotelina, péptido liberador del gen de calcitonina (CGRP) , neuromedinas , proteína liberadora de la hormona paratiroidea (PTHrP) , glucagon, neurotensina, hormona adrenocorticotrófica (ACTH) , péptido YY (PYY) , péptido liberador de glucagon (GLP) , péptido intestinal vasoactivo (VIP) , péptido activador de adenilatociclasa de la pituitaria (PACAP) , motilin, substancia P, neuropéptido Y (NPY) , TSH y análogos y fragmentos de los mismos. Estos conjugados moleculares iónicos pueden liberar sus componentes bioactivos in vivo , a velocidades predeterminadas determinadas por la estructura química, el peso molecular y el pKa de ambos componentes de estos conjugados. Un mecanismo para la liberación del fármaco implica la transformación de la forma insoluble conjugada en componentes solubles en agua, en parte, a través de la hidrólisis del poliéster hidrofóbico. Por lo tanto, la liberación del polipéptido bioactivo aumenta, independientemente con: (a) la disminución en la diferencial de pKa entre el poliéster y el polipéptido bioactivo, (b) la reactividad química de la cadena de poliéster que se refleja en la nucleofilicidad del carbonilo, (c) la disminución en la densidad del poliéster, conforme se relaciona con la temperatura de transición vitrea y la capacidad de cristalización disminuida al mínimo y (d) el aumento en la hidrofilicidad de la matriz. En modalidades preferidas el polipéptido comprende de 1 a 50 por ciento en peso del peso total del conjugado molecular iónico y, de preferencia más del 85%, con más preferencia el 95% y todavía con más preferencia el 99% del polipéptido presente en la composición está iónicamente conjugado con el poliéster, el componente poliéster del conjugado molecular iónico tiene una viscosidad de aproximadamente entre 0.05 y 0.7 dl/g en cloroformo y el poliéster tiene un peso molecular promedio de entre 1,200 y 40,000 aproximadamente. Los conjugados moleculares iónicos poliméricos de la invención pueden elaborarse fácilmente en micropartículas o microesferas inyectables y en varillas o películas implantables, sin la necesidad de utilizar procesamientos que incluyan sistemas no acuosos de dos fases o emulsiones de fase múltiple. De preferencia, las micropartículas se elaboran: (a) disolviendo la composición en un solvente orgánico aprótico miscible en agua, (b) mezclando el solvente orgánico en agua y (c) aislando las micropartículas del agua. En modalidades preferidas, el solvente orgánico se selecciona del grupo de acetona, acetonitrilo, tetrahidrofurano, dimetilformamida y dimetoxi etilenglicol . En modalidades preferidas el conjugado molecular iónico de poliéster/polipéptido es capaz de liberar in vivo una dosis terapéuticamente efectiva de un polipéptido bioactivo en un periodo de por lo menos 20 días y, con más preferencia, de hasta 95 días, pero no menos de 7 días. En otras modalidades adicionales preferidas la liberación del conjugado molecular iónico terapéutico es esencialmente monofásico.

Las composiciones de liberación sostenida de la invención se elaboran, de preferencia: (a) proporcionando un poliéster que tiene grupos COOH libres y un polipéptido bioactivo que tiene por lo menos una amina ionogénica efectiva y (b) conjugando iónicamente el poliéster con el polipéptido para formar un conjugado molecular iónico, en donde por lo menos el 85% en peso del polipéptido presente en la composición se conjuga iónicamente con el poliéster. El poliéster puede ser uno con suficientes grupos COOH libres para comenzar o, si una cantidad insufÍcente de estos grupos está disponible para el nivel de carga de péptido deseado en el inicio, el poliéster puede: (1) hacerse reaccionar con, por ejemplo, ácido málico, cítrico o tartárico mediante esterificación o intercambio funcional, o (2) rematarse con ácido con, por ejemplo, anhídrido glutárico o (3) el poliéster puede tratarse con una base, por ejemplo, NaOH, para exponer los grupos ácido. Finalmente, el conjugado molecular iónico de poliéster/polipéptido puede convertirse en películas o varillas implantables o micropartículas o microesferas inyectables capaces de liberar el polipéptido in vivo . De preferencia, el poliéster se sintetiza por condensación directa de autocatalización o de catalización de uno o más hidroxiácidos , por ejemplo, ácido glicólico y ácido láctico, en la presencia de una concentración predeterminada de un hidroxiácido policarboxílico, por ejemplo, ácido málico, ácido cítrico o ácido tartárico. Los poliésteres formados de esta manera poseen grupos terminales hidroxilo rematados con ácido que están, de preferencia, parcialmente o totalmente rematado con ácido. Los poliésteres también pueden sintetizarse catalizando la polimerización de ruptura del anillo de lactonas o por polimerización de monómero cíclicos, como por ejemplo e-caprolactona, p-dioxanona, carbonato de trimetileno, 1, 5-dioxepan-2-ona o 1, 4-dioxepan-2-ona en la presencia de un iniciador de cadena, por ejemplo de un hidroxi policarboxílico. Otro método para la sintetización incluye hacer reaccionar un hidroxiácido con dímero cíclico, seguido por la condensación del sistema de cadena abierta en la presencia de un ácido policarboxílico. Otro método adicional sintético incluye hacer reaccionar un ácido orgánico policarboxílico con un poliéster preformado. En las modalidades preferidas antes mencionadas, el poliéster rematado con ácido tiene una proporción carboxilo a grupo terminal hidroxilo de más de uno y hasta el infinito (es decir, eliminando todos los grupos hidroxilo) con un grado de polimerización promedio de entre 10 y 300 y, en modalidades particularmente preferidas, entre 20 y 50. De manera alternativa, un poliéster se vuelve capaz de formar un conjugado iónico molecular con un polipéptido bioactivo mediante el tratamiento con una base, por ejemplo con NaOH. De preferencia, el conjugado iónico molecular de poliéster/polipéptido se sintetiza mediante la interacción directa entre el poliéster, por ejemplo, en la forma libre y el polipéptido, por ejemplo en la forma libre, en el medio líquido apropiado. En otras modalidades preferidas los solventes adecuados para la formación del conjugado serían una mezcla solvente aprótica [por ejemplo, acetona, tetrahidrofurano (THF) o dimetiléter de etilenglicol] y un solvente adecuado para el péptido (por ejemplo, agua) en proporciones tales que los dos sistemas sean miscibles. De preferencia, el polipéptido es una sal de un ácido monocarboxílico con un pKa mayor o igual a 3.5. De preferencia, el polipéptido tiene al menos un grupo amino ionogénico efectivo. En las modalidades preferidas, el polipéptido es de 1 a 50 por ciento en peso y, de preferencia, de 10 a 20 por ciento del conjugado molecular iónico de poliéster/polipéptido. En modalidades preferidas, los grupos carboxilo accesibles del poliéster están parcialmente neutralizados con bases orgánicas o iones de metal alcalino. En otras modalidades preferidas, el tratamiento con álcali proporciona la disociación de cadena del poliéster y la formación de sitios de unión de peso molecular más bajo. En otro aspecto, la presente invención está dirigida a un poliéster (designado como poliéster A) que contiene uno o más grupos COOH libres y que tiene una proporción carboxilo a hidroxilo mayor a uno, en donde el poliéster contiene un miembro seleccionado del grupo que consiste de: ácido L- láctico, ácido D-láctico, ácido DL-láctico, ácido málico, ácido cítrico, e-caprolactona, p-dioxanona, ácido e-caproico, alquilen oxalato, cicloalquilen oxalato, alquilen succinato, ß-hidroxibutirato, carbonato de trimetileno sustituido o no sustituido, 1 , 5-dioxepan-2-ona, 1, 4-dioxepan-2-ona, glicólido, ácido glicólico, L-lactide, D-lactide, DL-lactide, mesolactide y cualesquiera copolímeros, racematos o isómeros ópticamente activos de los mismos, siempre y cuando el ácido cítrico, la e-caprolactona y el glicólido sean miembros del poliéster. Una modalidad preferida del poliéster anterior (designado como poliéster B) es aquella en donde el poliéster comprende ácido cítrico, e-caprolactona y glicólido. Una modalidad preferida del poliéster inmediatamente anterior (designado como poliéster C) es aquella en donde la proporción de e-caprolactona a glicólido en el poliéster es de 90 e-caprolactona : 10 glicólido a 99 e-caprolactona : 1 glicólido. Un poliéster preferido del poliéster inmediatamente anterior (designado como poliéster D) es aquel en donde la proporción de e-caprolactona a glicólido en el poliéster es de 97 e-caprolactona : 3 glicólido. Todavía en otro aspecto, la presente invención está dirigida a una composición que comprende poliéster A, poliéster B, poliéster C o poliéster D, conjugados iónicamente con uno o más polipéptidos bioactivos que comprenden por lo menos una amina ionogénica efectiva, en donde por lo menos el 50% en peso del polipéptido presente en la composición está iónicamente conjugado con el poliéster. Una modalidad preferida de la composición inmediatamente anterior en aquella en donde el polipéptido bioactivo se selecciona del grupo que consiste de LHRH, somatostatina, bombesina/GRP, calcitonina, bradiquinina, galanina, MSH, GRF, amilina, taquiquininas, secretina, PTH, CGRP, neuromedinas, PTHrP, glucagon, neurotesina, ACTH, GHRP, GLP, VIP, PACAP, encefalina, PYY, motilina, substancia P, NPY, TSH y análogos o fragmentos de los mismos . Una modalidad preferida de la composición inmediatamente anterior es aquella en donde el polipéptido bioactivo se selecciona del grupo que consiste de LHRH, somatostatina y análogos o fragmentos de los mismos. Una modalidad preferida de la composición inmediatamente anterior es aquella en donde el análogo de LHRH es de la fórmula pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 y el análogo de somatostatina es de la fórmula H2N-ß-D-Nal-Cys-Tyr-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2, en donde los dos residuos Cys del análogo de somatostatina se unen entre sí . Una modalidad preferida de la composición inmediatamente anterior es aquella en donde la composición está en la forma de una varilla. Una modalidad preferida de la composición inmediatamente anterior es aquella en donde la varilla tiene un recubrimiento de un poliéster. Una modalidad preferida de la composición inmediatamente anterior es aquella en donde el poliéster que recubre a la varilla es un poliéster absorbible. Una modalidad preferida de la composición inmediatamente anterior es aquella en donde el poliéster absorbible contiene uno o más grupos COOH libres y tienen una proporción carboxilo a hidroxilo mayor a uno, en donde el poliéster contiene un miembro seleccionado del grupo que consiste de ácido L-láctico, ácido D-láctico, ácido DL-láctico, ácido málico, ácido cítrico, ácido tartárico, e-caprolactona, p-dioxanona, ácido e-caproico, alquilen oxalato, cicloalquilen oxalato, alquilen succinato, ß-hidroxibutirato, carbonato de trimetileno substituido o no substituido, 1, 5-dioxepan-2-ona, 1,4-dioxepan-2-ona, glicólido, ácido glicólico, L-lactide, D-lactide, DL-lactide, meso-lactide y cualesquiera copolímeros, racematos o isómeros ópticamente activos de los mismos. Una modalidad preferida de la composición inmediatamente anterior es aquella en donde el poliéster absorbible que contiene la varilla es el mismo del poliéster comprendido en la composición. Todavía en otro aspecto, la presente invención está dirigida a un poliéster (designado como poliéster E) que contiene uno o más grupos COOH libres y que tiene una proporción carboxilo a hidroxilo mayor a uno, en donde el poliéster contiene un miembro seleccionado del grupo que consiste de ácido L-láctico, ácido D-láctico, ácido DL-láctico, ácido málico, ácido cítrico, ácido tartárico, e-caprolactona, p-dioxanona, ácido e-caproico, alquilen oxalato, cicloalquilen oxalato, alquilen succinato, ß-hidroxibutirato, carbonato de trimetileno sustituido o no sustituido, 1, 5-dioxepan-2 -ona, 1, 4-dioxepan-2 -ona, glicólido, ácido glicólico, L-lactide, D-lactide, DL-lactide, meso-lactide, y cualesquiera copolímeros, racematos o isómeros ópticamente activos de los mismos, siempre y cuando el ácido tartárico sea un miembro del poliéster. Una modalidad preferida del poliéster anterior (designado como poliéster F) es aquella en donde el poliéster comprende ácido L-láctico, ácido D-láctico o en donde el poliéster comprende ácido L-láctico o ácido D-láctico y ácido glicólico. Otra modalidad preferida del poliéster E (designado como poliéster G) es aquella en donde el poliéster comprende ácido tartárico, e-caprolactona y carbonato de trimetileno. Una modalidad preferida del poliéster inmediatamente anterior (designado como poliéster H) es aquella en donde la proporción de e-caprolactona a carbonato de trimetileno en el poliéster es desde 90 e-caprolactona : 10 carbonato de trimetileno hasta 99 e-caprolactona : 1 carbonato de trimetileno. Una modalidad preferida del poliéster inmediatamente anterior (designado como poliéster I) es aquella en donde la proporción de e-caprolactona a carbonato de trimetileno en el poliéster es de 98 e-caprolactona : 2 carbonato de trimetileno. Todavía en otro aspecto adicional, la presente invención está dirigida a una composición que comprende poliéster E, poliéster F, poliéster G, poliéster H o poliéster I, conjugado iónicamente con uno o más polipéptidos bioactivos que comprenden por lo menos una amina ionogénica efectiva, en donde por lo menos el 50% en peso del polipéptido presente en la composición está conjugado iónicamente con el poliéster. Una modalidad preferida de la composición inmediatamente anterior es aquella en donde el polipéptido bioactivo se selecciona del grupo que consiste de LHRH, somatostatina, bombesina/GRP, calcitonina, bradiquinina, galanina, MSH, GRF, amilina, traquiquininas, secretina, PTH, CGRP, neuromedinas , PTHrP, glucagon, neurotensina, ACTH, GHRP, GLP,' VIP, PACAP, encefalina, PYY, motilina, substancia P, NPY, TSH y análogos y fragmentos de los mismos . Una modalidad preferida de la composición inmediatamente anterior es aquella en donde el polipéptido bioactivo se selecciona del grupo que consiste de LHRH, somatostatina y análogos o fragmentos de los mismos. Una modalidad preferida de la composición inmediatamente anterior es aquella en donde el análogo de LHRH es de la fórmula pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 y el análogo de somatostatina es de la fórmula H2N-ß-D-Nal-Cys-Tyr-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2, en donde los dos residuos Cys del análogo de somatostatina se unen entre sí . Una modalidad preferida de la composición inmediatamente anterior es aquella en donde la composición está en la forma de una varilla.

Una modalidad preferida de la composición inmediatamente anterior es aquella en donde la varilla tiene un recubrimiento de un poliéster. Una modalidad preferida de la composición inmediatamente anterior es aquella en donde el poliéster absorbible contiene uno o más grupos COOH libres y tiene una proporción carboxilo a hidroxilo mayor a uno, en donde el poliéster contiene un miembro seleccionado del grupo que consiste de: ácido L-láctico, ácido D-láctico, ácido DL-láctico, ácido málico, ácido cítrico, ácido tartárico, e-caprolactona, p-dioxanona, ácido e-caproico, alquilen oxalato, cicloalquilen oxalato, alquilen succinato, ß-hidroxibutirato, carbonato de trimetileno substituido o no substituido, 1, 5-dioxepan-2-ona, 1, 4 -dioxepan-2 -ona, glicólido, ácido glicólico, L-lactide, D-lactide, DL-lactide, meso-lactide y cualesquiera copolímeros, racematos o isómeros ópticamente activos de los mismos. Una modalidad preferida de la composición inmediatamente anterior es aquella en donde el poliéster absorbible que contiene la varilla es el mismo del poliéster comprendido en la composición. "Polipéptido", como se utiliza aquí, se refiere a una proteína, péptido, oligopéptido ^ u oligopéptido sintético . "Policarboxílico", como se utiliza aquí, se refiere a compuestos que tienen más de un grupo carboxilo, por ejemplo, ácido málico, ácido cítrico y ácido tartárico. "Grado de polimerización promedio", como se utiliza aquí, se refiere al número de secuencias monoméricas repetidas. "Amina ionogénica efectiva", como se utiliza aquí, se refiere a un polipéptido que contiene por lo menos un grupo amino capaz de formar un ion bajo las condiciones prevalentes . "Rematado con ácido", como se utiliza aquí, se refiere a compuestos que tienen un terminal ácido. "Parcialmente rematado con ácido", como se utiliza aquí, se refiere a compuestos que tienen 1-99 por ciento de sus grupos terminales hidroxilo rematados con ácido. "Totalmente rematado con ácido", como se utiliza aquí, se refiere a compuestos que tienen más del 99.9% de sus grupos hidroxilo rematados con ácido. "Hidroxiácidos", como se utiliza aquí, se refiere a cualquier compuesto que contiene grupos hidroxilo y carboxilo. "Hidroxiácido monocarboxí1ico" , como se utiliza aquí, se refiere a un ácido orgánico con un grupo carboxilo y uno o más grupos hidroxilo. "Hidroxiácido policarboxílico", como se utiliza aquí, se refiere a un hidroxiácido con más de un grupo carboxilo. "Agente separador orgánico", como se utiliza aquí, se refiere a líquidos orgánicos que se destilan conjuntamente con agua. "Bioactivo", como se utiliza aquí, se refiere a una molécula que provoca o afecta un evento biológico. "Acidizar" , como se utiliza aquí, se refiere a una reacción química que ocurre por una ruptura del anillo. "Policondensación", como se utiliza aquí, se refiere a la formación de un poliéster por la condensación de dos o más moléculas . Poliéster "absorbible", como se utiliza aquí, se refiere a un poliéster insoluble al agua que sufre una disociación de cadena en el ambiente biológico formando subproductos solubles al agua. La presente invención proporciona una nueva composición farmacéutica que une químicamente un poliéster biodegradable y biocompatible, con oligopéptidos, polipéptidos, péptidos y/o proteínas como una especie iónica homogénea. Mediante la unión química de poliésteres de distintos pesos moleculares a los agentes terapéuticos, las características químicas de la composición pueden diseñarse precisamente para satisfacer las demandas de la liberación monofásica controlada de la molécula de polipéptido biológicamente activo in vivo . Además, las composiciones de la invención se optimizan fácilmente para poseer propiedades funcionales para una mayor carga de un polipéptido terapéuticamente activo. Otras particularidades y ventajas de la invención serán evidentes a partir de la siguiente descripción detallada de las modalidades preferidas y a partir de las reivindicaciones .

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 es una ilustración que representa isómeros de copolímero de glicólido (del tipo málico) /lactide rematado con ácido policarboxílico. La Figura 2 es una ilustración de un conjugado molecular iónico que ilustra las interacciones químicas entre el copolímero lactide/glicólido (del tipo málico) y Somatuline (BIM-23014) . La Figura 3 es una gráfica que ilustra el porcentaje de péptido liberado de los conjugados moleculares iónicos en amortiguador de PBS a 37°C durante un periodo de 28 días.

DESCRIPCIÓN DE LAS MODALIDADES PREFERIDAS Síntesis Los poliésteres absorbibles o biodegradables de la invención están diseñados para poseer la reactividad química deseada para proporcionar la capacidad de hidrólisis, controlada de la cadena y para exhibir una máxima capacidad de unión a oligopéptidos, polipéptidos o proteínas que tengan una carga positiva neta a un pH fisiológico, mediante la selección apropiada de los monómeros, comonómeros o comeros constituyentes para formar cadenas con pesos moleculares y composiciones predeterminadas . Un diseño sintético tripartita, dentro de la habilidad de las personas con pericia ordinaria en este campo, se emplea para preparar las composiciones de la presente invención. Las etapas incluyen: (1) la síntesis de los poliésteres rematados con ácido policarboxílico, (2) la síntesis del conjugado iónico polipéptido/poliéster por interacción iónica de poliésteres rematados con ácido policarboxílico (o un poliéster tratado con una base) y polipéptidos biológicamente activos, y (3) la conversión de conjugados iónicos con implantes, varillas, microesferas o micropartículas capaces de liberar in vivo , al agente terapéutico durante por lo menos 7 días. (1) Síntesis de poliésteres rematados con ácido policarboxílico Las cadenas de poliéster rematadas con ácido policarboxílico de la invención se sintetizan por métodos como condensación directa de un ácido 2 hidroxi y un ácido orgánico policarboxílico, polimerización por crecimiento en etapas de productos acidizados, polimeración por ruptura del anillo de una lactona o una mezcla de lactonas o por intercambio funcional de un ácido orgánico policarboxílico con poliésteres de alto peso molecular preformados (ver Figura 1) . A continuación se incluyen las descripciones de la síntesis de poliésteres rematados con ácido policarboxílico mediante los métodos antes mencionados. La condensación directa de ácidos 2 -hidroxi en una forma ópticamente activa y/o inactiva y una cantidad predeterminada de un ácido orgánico policarboxílico en la presencia o ausencia de catalizadores inorgánicos u organometálicos, por ejemplo, la condensación de ácido DL-láctico, ácido glicólico y ácido DL-málico, en general, se logra calentando los ácidos hidroxi monocarboxílicos o la mezcla de dos o más ácidos hidroxi monocarboxílico en la presencia de una fracción de hidroxiácido policarboxílico en un reactor de vidrio equipado para proporcionar un flujo continuo de nitrógeno seco y agitación de masa (designado como Poliéster del tipo IA, consultar la Tabla I) . Normalmente, la policondensación se conduce a 150-170°C durante 4 a 72 horas. La agitación de la mezcla de reacción puede proporcionarse por un agitador magnético o haciendo burbujear al gas nitrógeno a través de la masa de poliéster. La polimerización se continúa hasta que se alcanza el peso molecular promedio deseado (determinado en términos de viscosidad de la solución) y/o el índice de acidez (determinado por titulación del grupo terminal) . El análisis de poliéster por titulación del grupo terminal se efectúa de la siguiente manera: Las muestras de poliéster (300 mg a 500 mg) se pesan con exactitud y se disuelven en una cantidad mínima (10-30 ml) de acetona. Después de la disolución, las soluciones se diluyeron en 100 ml con alcohol bencílico (Mallinckrodt , Analytical Reagent) y se titularon hasta un punto terminal rosa pálido (fenolftaleina) utilizando hidróxido de potasio en solución de alcohol bencílico (Normalizado vs . HCl estándar) . El volumen de la solución base utilizada para la muestra (?Vs) se compara con el volumen de base utilizado para un solvente (?Vo) , para determinar el índice de acidez para el poliéster.

Peso de la muestra (mg) índice de acidez = - {AVs(ml)-AVo(ml) }xN de Base Al concluir la polimerización, el poliéster se aisla y se extrae con agua o una solución de hidróxido de sodio acuosa diluida, desde una solución orgánica adecuada para retirar las cadenas de bajo peso molecular solubilizables o solubles en agua. El análisis del poliéster por medio de GPC se efectúa como sigue: Los pesos moleculares promedios (MW) de poliéster se determinaron por GPC utilizando una bomba de suministro del solvente Waters modelo 6000 y un detector Dynamax (Rainin) modelo UV-D. Las corridas se efectuaron en tetrahidrofurano (Burdick & Jackson grado UV) utilizando una columna Jordi Gel DVB de 1000Á, de 50cm x 10 mm (Jordi Associates) a una velocidad de flujo de 1.2 ml/min a 25 °C. La detección pico fue a 220 nm y 1.0 AUFS . La columna se calibró utilizando estándares de referencia de poliestireno de banda angosta (Polysciences Inc.) a Mw=4000, 9,200 y 25, 000. Una modificación del proceso de condensación directa implica el uso de un agente separador y una resina catiónica de intercambio como un catalizador de condensación (designado como Poliéster del tipo IB, consultar la Cuadro I) . Este proceso requiere una etapa de filtración y evaporación para retirar el catalizador y el agente separador, respectivamente. Los ejemplos típicos de poliésteres elaborados por estos procesos y los datos analíticos pertinentes se describen en el Cuadro I .

CUADRO I : POLIESTERES ELABORADOS POR EL MÉTODO DE CONDENSACIÓN DIRECTA Poliésteres del Tipo IA # Polímero Carga Condiciones de índice ?inh Tg, polimerización de °C acidez 1 Ácido L-láctico (88%) 35.7gm (0.349M) 100°C/0.7 h 563 0.24 11 Ácido glicólico 4.65gm (0.612M) 165°C/17.5 h Ácido cítrico 1.75gm (0.0091M) 2 Ácido L-láctico (88%) 25.6gm (0.25M) 165°C/22 h 820 0.14 27 Ácido glicólico 19.2gm (0.25M) Ácido málico 1.5gm (O.OllM) Poliésteres del tipo IB 3 Ácido L-láctico (88%) 25.6gm (0.25M) 132°C/53 h 842 0.11 15 Ácido glicólico 19.2gm (0.25M) Ácido cítrico 2.13gm (O.OllM) Utilizando trampa Amberlyst Dean-Stark. Se decantó Perlas catalizadoras 0.5 gm y se filtró en #15 acetona. Se secó. Se Tolueno 150 ml lavó con agua . Se secó al vacío. 4 Ácido L-láctico (88%) 25.6gm (0.25M) 132°C/68 h 1421 0.20 28 Ácido glicólico 19.2gm (0.25M) Ácido málico 1.5gm (O.OllM) Utilizando trampa Amberlyst Dean-Stark, se Tolueno 100 mi decantó, filtró y secó. Se lavó con agua y se secó al vacío * Determinado en un calorímetro de barrido diferencial (TA 2100 DSC) utilizando una muestra de 2-10 mg y una velocidad de calentamiento de 10°C/min en una atmósfera de nitrógeno La polimerización de crecimiento por etapas de productos acidizados, en donde un hidroxiácido se deja reaccionar con dímeros cíclicos y la condensación subsecuente del sistema de cadena abierta resultante en la presencia de cantidades predeterminadas de un ácido policarboxílico y en la presencia o ausencia de un catalizador de condensación adecuada, por ejemplo un ácido glicólico, ácido L-lactide y DL-málico, esencialmente el mismo del proceso de condensación descrito arriba, excepto porque emplea una mezcla de un hidroxiácido monocarboxílico, un dímero cíclico de un segundo hidroxiácido y un hidroxiácido policarboxílico. Los ejemplos de poliésteres elaborador mediante este proceso y los datos analíticos pertinentes se resumen en el Cuadro II . Cuando el dímero cíclico es pretratado con agua, el sistema es tratado como una polimerización de crecimiento de una sola etapa.

CUADRO I I : POLIMERIZACIÓN DE CRECIMIENTO POR ETAPAS DE PRODUCTOS ACICLIZADOS Poliésteres del Tipo II # Polímero Carga Condiciones de índice ?inh Tg , polimerización de °C* acidez 1 Monómero L- lactide lO . Ogm ( 0 . 07M) 160 °C/29 h 1200 0.21 20 Ácido glicólico 10 . 7gm ( 0 . 14M) Ácido málico 0 . 79gm ( 0 . 0061M) 2 Monómero L-lactide 20.0gm (0.139M) 25°C-155°C / 1800 0.13 27 1.5 Acido glicólico 7.1gm (0.093M) 155°C/70 h Ácido málico l.Olgm (0.0075M) Disolver en DCM lavar con agua y secar al vacío * Determinado en un calorímetro de barrido diferencial (TA 2100 DSC) utilizando una muestra de 2-10 mg y una velocidad de calentamiento de 10°C/min en una atmósfera de nitrógeno La polimerización de ruptura del anillo de una lactona o mezcla de lactonas en la presencia de una concentración predeterminada de hidroxiácido-policarboxílico como un iniciador de cadena y una cantidad catalítica de un catalizador organometálico, por ejemplo de una mezcla de ácido L-lactide, glicólido y DL-málico en la presencia de octoato de estaño emplea monómeros cíclicos secos o una mezcla de monómeros cíclicos, un hidroxiácido policarboxílico y una cantidad traza de octoato de estaño (utilizado como solución 0.33M en tolueno), que son transferidos bajo una atmósfera seca libre de oxígeno hacia un reactor de vidrio equipado para agitación mecánica o magnética. La reacción de polimerización se continúa bajo nitrógeno seguida de un esquema de calentamiento adecuado hasta que se alcance el peso molecular deseado (según se mide en términos de viscosidad de solución) . A la conclusión del esquema de polimerización, la temperatura se hace descender y el monómero no reaccionado se destila bajo presión reducida. La masa de poliéster se enfría entonces y las fracciones de bajo peso molecular solubles en agua se retiran por extracción a baja temperatura de una solución orgánica adecuada. La solución se seca entonces y el solvente se retira. El peso molecular se determina después en términos de la viscosidad inherente y el índice de acidez se determina por titulación del grupo terminal . Los ejemplos de poliésteres preparados por este proceso y los datos analíticos pertinentes se proporcionan en el Cuadro III.

CUADRO I II : POLIESTERES ELABORADOS POR POLIMERIZACIÓN DE RUPTURA DEL ANILLO Poliésteres del Tipo III # Polímero Carga Condiciones de índice nin Tg, polimerización de °C* acidez 1 Ácido glicolido 3.22gm (0.028M) 120°C/0.5 h 2,150 0.79** Ácido L-lactide 10.7gm (0.14M) 150°C/6 h Ácido málico 0.79gm (0.0061M) 120°C/11 h 2 Ácido glicólido 2.84gm (0.0245M) 120°C/0.5 h 1,206 0.08 26 Ácido D, L-lactide 2u.0gm (0.139M) 180°C/2.5 h Ácido málico 0.876gm(0.00541M) 130°C/15 h 3 Ácido glicólido 2.84gm (0.0245M) 155°C/1 937 0.10 27 Ácido D, -lactide 20.0gm (0.139M) 185°C/2.5 Ácido cítrico 1.256gm(0.00654M) 190°C/2.5 h 160°C/13 h 4 Ácido glicólido 8.06gm (0.0694M) 180°C/1 h 970 0.26 23 Ácido D, L-lactide lO.Ogm (0.0694M) 185°C/2 h Ácido málico 0.744gm(0.00555M) 195°C/7 h 120°C/9 h Ácido glicólido 8.06gm (0.0694M) 150°C/0.5 h 10138 0.39 30 D, -lactide lO.Ogm (0.0694M) 185°C/4 h 1, 6-hexanodiol 0.656gm(0.00555M) 150°C/1.5 h 120°C/3 h * Determinado en un calorímetro de barrido diferencial (TA 2100 DSC) utilizando una muestra de 2-10 mg y una velocidad de calentamiento de 10°C/min en una atmósfera de nitrógeno. ** En hexofluoroisopropanol .

El intercambio funcional de ácido orgánico hidroxi-polibásico o policarboxílico con poliésteres de alto peso molecular preformados con una proporción COH/OH de la unidad a prácticamente cero, de preferencia en presencia de un catalizador organometálico, por ejemplo, de reacción por fusión de un copolímero lactide/glicólido al 85/15 con un peso molecular mayor a 5,000 y COOH/OH=l con ácido DL-málico en la presencia de óctoato de estaño, para producir poliéster de peso molecular más bajo con C00H/0H>1, implica calentar un poliéster de alto peso molecular con una cantidad predeterminada de hidroxiácido-policarboxílico o ácido policarboxílico en la presencia de una cantidad traza de un catalizador organometálico como el octoato de estaño. Los reactivos se calientan a más de 150°C bajo nitrógeno seco con agitación intensa hasta que se completa el intercambio funcional (según se mide por agotamiento de ácido policarboxílico residual no reaccionado) . En efecto, esto se determina supervisando el peso molecular (en términos de viscosidad de solución utilizando viscometría capilar a 28°C) del poliéster de peso molecular inferior resultante y la presencia de ácido policarboxílico no reaccionado. Esto se logra por extracción acuosa de una muestra de poliéster y análisis del extracto utilizando cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) . Los niveles de ácido policarboxílico , monómero residual y dímero se determinaron por HPLC utilizando una bomba de suministro de solvente Waters modelo 6000 y un detector Dynamax (Rainin) modelo UV-D (205 nm, 1.0 AUFS) . Las corridas se efectuaron utilizando amortiguador Na2P0 de 0.025N, pH=3.5 (velocidad de flujo isocrático=l .0 ml/min) utilizando un Nucleosil C18, 5 um, de columna de 25 cm x 4.6 mm. El poliéster deseado se aisla y purifica como se describe arriba para la polimerización de ruptura del anillo. Un ejemplo de un poliéster elaborado por este proceso y los datos analíticos pertinentes se proporcionan en el Cuadro IV.

CUADRO IV : POLIESTERES ELABORADOS POR INTERCAMBIO FUNCIONAL Poliésteres del Tipo IV # Polímero Carga Condiciones de índice ?inh Tg, polimerización de °C* acidez 1 Boehringer A001 8gm (50/50 de di- 150°C/5 h 670 0.26 25 lactide/glicdlido) Ácido cítrico** 0.8 gm (0.00417M) * Determinado en un calorímetro de barrido diferencial (TA2100 DSC) utilizando una muestra de 2-10 mg y una velocidad de calentamiento de 10°C/min en una atmósfera de nitrógeno . ** Una cantidad catalítica de octoato de estaño (2 gotas de solución M 0.33, aproximadamente 0.03 nmol) .

Otros monómeros adecuados para la síntesis de los poliésteres utilizados en la invención entre otros, son: ácido L-láctico, ácido DL-láctico, e-caprolactona, p-dioxanona, ácido e-caproico, carbonato de trimetileno, 1,5-dioxepan-2-ona, 1, 4 -dioxepan-2 -ona, glicólido y meso-lactide. Los ejemplos de iniciadores de cadena policarboxílica útiles y/o de modificadores de cadena incluyen ácido málico, ácido cítrico y ácido tartárico. (2) Síntesis del conjugado iónico de poliéster/polipéptido por interacción iónica de polißsteres rematados con ácido policarboxílico y polipéptidos biológicamente activos. Los poliésteres biodegradables rematados con ácido policarboxílico descritos arriba se utilizan para elaborar conjugados moleculares iónicos con proteínas, polipéptidos u oligopéptidos mono o policarboxílicos con grupos amina ionogénicos accesibles efectivos (ver Figura 2) . Más aún, cualquier poliéster se vuelve capaz de formar un conjugado molecular iónico con un polipéptido siempre y cuando sea tratado con una base, por ejemplo NaOH 0.1N.

Este tratamiento expone a los grupos ácido del poliéster para interacción iónica de múltiples sitios con el polipéptido catiónico. De esta manera, la formación de estos conjugados se logra por interacción molecular directa de los componentes en el solvente apropiado con o sin un pretratamiento del poliéster con una base inorgánica para aumentar al máximo su capacidad de velocidad de unión al fármaco básico. Como se observa arriba, la interacción iónica de sus componentes iónicos conjugados aumenta dentro de la diferencia en sus valores pKa. El poliéster se disuelve en un solvente aprótico adecuado en una concentración en un intervalo del 2% al 20% peso/volumen. Estos solventes deben disolver a los poliésteres, pero también deben ser parcialmente miscibles con agua. Los solventes adecuados utilizados para este propósito incluyen tetrahidrofurano, acetona y dimetiléter de etilenglicol. A esta solución, se añade una solución acuosa de base como sodio, potasio o hidróxido de amonio o carbonato para aumentar al máximo la capacidad de unión del poliéster. En general, la cantidad de base añadida corresponde a la cantidad de ácido representada por el nivel de contra anión del péptido básico que va a utilizarse . Después de mezclar brevemente la combinación con base de poliéster, se añade una solución acuosa de péptido o de sal de péptido a niveles de carga péptido/poliéster de 2% a 50% peso/peso (péptido/poliéster) . Esta mezcla se agita por un periodo de tiempo (hasta por 3 horas) y después los solventes se retiran y el producto se seca bajo vacío. El material resultante puede entonces, procesarse adicionalmente para la formulación de dosis. Las composiciones farmacéuticas resultantes están diseñadas para ser composiciones químicamente uniformes elaboradas totalmente de conjugados moleculares iónicos y carecen esencialmente de dominios microscópicamente o macroscópicamente dispersados del fármaco activo en la matriz biodegradable. Los ejemplos de conjugados moleculares iónicos preparados y los datos analíticos pertinentes se proporcionan en el Cuadro V.

CUADRO V: UNION PEPTIDO-CONJUGADO IÓNICO MOLECULAR^ Polímero utilizado Péptido2 % Carga % Retención' 50/50 di lactide/glicdlido I 10 47 (Comercial) I 20 25 índice de acidez = 22,000 II 20 73 ?inh = 0.53 III 20 48.5 Poli L-lactide I 10 62 (Comercial) II 20 40 Mw(prom.) = 2,000 índice de acidez = 850 Poli L-lactide 10 54 (Comercial) Mw (prom.) = 50,000 índice de acidez = 2100 48/48/4 Poli d, 1-lactide/glicólido/ 20 43 1/6 hexanodiol (Método III) índice de acidez = 10,138 ?inh = 0.39 49/49/2 Poli L-láctico/ I 10 100 glicólico/ácido málico I 20 99 (Tipo IB) I 30 95.5 índice de acidez = 1400 I 40 96.0 ?inh = 0.20 I 50 99.8 II 20 99.8 III 20 77.5 83.3/14.7/2 Poli L-láctico/glicdlico/ácido I 20 96 cítrico (Tipo IA) índice de acidez = 563 ?inh = 0.24 49/49/2 Poli d, 1-lactide/glicólido/ácido I 20 96 málico (Tipo II) III 20 73.9 índice de acidez = 1200 ?inh = 0.21 48/48/4 Poli d, 1-lactide/glicólido/ácido I 10 90 cítrico (Tipo III) índice de acidez = 589 ?inh = 0.22 En todos los casos, los conjugados se formaron, como se bosqueja en el texto, utilizando acetona como solvente e hidróxido de sodio como base. Todos los péptidos utilizados fueron en forma de sal de acetato. Péptidos: I BIM-21003 D-Trp6-LHRH (pGlu-His-Trp-Ser-Tyr- D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly NH2) pka = 10.1 II BIM-23014 (H2N-ß-D-Nal -Cys-Tyr-Trp-Lys-Val-Cys-Thr NH2)pka = 9.8 III BIM-26226 (H2N-D-F5Phe-Gln-Trp-Ala-Val-D-Ala-His-Leu- OCH3) pka = 8.0 % Retención: Medida enjuagando los conjugados iónicos de poliéster/péptido secados con agua D.I. y cuantificando el péptido soluble en enjuagues mediante HPLC.

Peso del péptido c arg ado - Peso del péptido so lub le % Retención = 100% x Peso del péptido c arg ado (3) Conversión de conjugados iónicos en implantes, varillas, microesferas o micropartículas capaces de liberar in vivo al agente terapéutico por, al menos, 20 días en un perfil monofásico. Las sales de conjugado iónico de la invención pueden convertirse en: (A) microesferas estériles inyectables (con o sin de 0.1 a 10% de un alcohol polihídrico sólido como auxiliar para el procesamiento) que contienen de 1 a 50% en peso de polipéptido que puede liberarse de conformidad con un perfil esencialmente monofásico y que pueden sostener una actividad farmacológica durante un periodo de una a 12 semanas, (B) películas estériles implantables elaboradas por moldeo, prensado o extrusión con o sin un auxiliar de procesamiento farmacológicamente inactivo, y que son capaces de proporcionar un perfil de liberación similar al descrito en (A) , y (C) varillas estériles inyectables elaboradas por extrusión o prensado, capaces de proporcionar un perfil de liberación similar al descrito en (A) . Además, las varillas pueden estar recubiertas con un poliéster para proporcionar una capa adicional de control de la velocidad de liberación de un agente terapéutico. De preferencia, las varillas están recubiertas con un poliéster absorbible, con más preferencia, el poliéster absorbible tal y como se define aquí y con más preferencia, el poliéster absorbible del recubrimiento es igual al poliéster comprendido en la varilla.

Ensayo de liberación in vi tro : Las muestras del material conjugado iónico molido y seco, con un peso de 50 mg cada una, se colocaron en viales de escintilación de 25 mm de diámetro. Una alícuota de 5 ml de amortiguador de PBS modificado (amortiguador de PBS: 2.87 g de Na2HP04, 0.654 g de NaH2P04, 5.9 g de NaCl , 0.5 g de NaN3, C.S. 1.0 litro con agua desionizada, pH=7.27) se añadió a cada vial y los viales se colocaron en un agitador Environ-Shaker Orbit Lab-Line y se agitó en remolino a 120 R.P.M. y 37°C. Los viales se retiraron periódicamente y se decantaron y se volvieron a llenar con solución de PBS fresca. La cantidad de péptido liberado se determinó a partir de las soluciones de PBS decantadas por HPLC.

Extracción de péptido a partir de conjugados iónicos: Una mezcla de 50 mg de un conjugado molecular iónico se mezcló en 20 ml de cloruro de metileno. La mezcla se extrajo secuencialmente con porciones de 50 ml, 20 ml y 20 ml de ácido acético 2N. Los extractos de ácido acético se combinaron y se analizaron respecto al contenido de péptido por cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) . El análisis del péptido por HPLC es como sigue: El análisis por HPLC se efectuó utilizando una bomba de suministro de solvente Waters modelo M-45 y un detector EM Science MACS 700 a una longitud de onda de 220 nm y 1.0 AUFS . Los péptidos se corrieron utilizando un Lichrospher (separaciones EM) C18, 100Á, 5µm, columna de 25cm x 4.6 mm y acetonitrilo al 30%/TFA al 0.1% como un amortiguador eluyente isocrático. A continuación se presentan los detalles (Cuadro VI) del ensayo in vierto que demuestra la cantidad de péptido liberado durante un periodo de 28 días para los conjugados moleculares iónicos de 49:49:2 L-láctico/glicólico/málico\D-Trp6 [LHRH] (Ejemplo #8), 49:49:2 : L-láctico/glicolico/málico\somatostatina-análogo inhibidor de tumor (Ejemplo #9) y 73.5:24.5:2 poli-L-lactide/glicólico/málico: D-Trp6 [LHRH] (Ejemplo #10).

CUADRO VI : DATOS DEL ENSAYO IN VITRO DÍA DE ENSAYO PORCIENTO DE PÉPTIDO LIBERADO TOTAL Eiemplo #8 Ejemplo #9 Ejemplo #10 1 5.5% 12.5% 11% 7 26.9% 21.3% 53% 14 55.2% 47.3% 55% 17 84.4% 72.2% 60% 21 98.6% 82.5% 66% 24 100% 98.2% 75% 28 — 99.6% — Cuanti icación de péptidos en conjugados iónicos Los péptidos iónicamente unidos en los productos conjugados se midieron disolviendo 10 mg de muestra en 5.7 ml de una mezcla de acetona al 9:1 y ácido trifluoroacético acuoso 0.1M. Las soluciones se sometieron a agitación en remolino a aproximadamente 25°C por un periodo de entre 15 y 24 horas aproximadamente y después se filtraron a través de cartuchos de filtro de teflón de 0.5 µm. Los filtrados se analizaron después respecto al contenido de péptido mediante cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) . Los análisis de péptido mediante HPLC se corrieron utilizando un Wisp Autosampler Milliporo modelo 717, una bomba modelo 510 y un detector UV modelo 486 ajustado a 220 nm. Los péptidos se corrieron en una Lichrospher (Separaciones EM) de columna de 25 cm x 4.6 mm C18, 5 µm, 100Á, con velocidad de flujo de 1.0 ml por minuto utilizando acetonitrilo al 35% en amortiguador de perclorato de sodio al 0.14% como un sistema eluyente isocrático. Los péptidos se cuantificaron por comparación del área del pico correcto en la muestra corrida con el área de un péptido estándar inyectado.

Uso Los conjugados iónicos de polipéptido/poliésteres portadores de ácido descritos aquí pueden suministrarse a un recipiente solos o en combinación con un medio farmacéuticamente aceptable. Aunque puede ser conveniente administrarse por vía subcutánea, intramuscular, parenteral, mediante supositorio y por vía nasal, la preparación terapéutica se suministra de acuerdo con el padecimiento que va a tratarse. La concentración de la composición en las formulaciones de la invención variarán dependiendo de una variedad de aspectos, entre los que se incluyen la dosis que va a suministrarse y la vía de administración. Sin elaboración adicional, se cree que una persona con pericia en la técnica puede, utilizando la descripción anterior, hacer uso de la presente invención hasta su completo alcance. Las siguientes modalidades se consideran, por lo tanto, como meramente ilustrativas y no limitan el resto de la exposición en ninguna forma.

EJEMPLO 1 - MÉTODO DE CONDENSACIÓN DIRECTA - Síntesis de 50/50 Poli (D,L-Láctico-co-glicólico) catalizado por Amerlyst 15. Se mezcló ácido D, L-láctico (mezcla acuosa al 85%, 13.7 g, 0.13 mol) con ácido glicólico (10 g, 0.13 mol) en un matraz de fondo redondo equipado con un agitador magnético, una trampa Dean-Stark y un condensador de agua fría. Se añadió tolueno (100 ml) y perlas de Amberlyst 15 (100 mg) y la mezcla se sometió a reflujo bajo nitrógeno por 72 horas, retirando el agua de la mezcla. La mezcla se enfrió, el tolueno se decantó de la masa solidificada y el producto se disolvió en cloruro de metileno (250 ml) . La solución de cloruro de metileno se trató con carbón vegetal activado (Darco, 500 mg) , se filtró y se secó al vacío en un evaporador giratorio. El poliéster se secó además al alto vacío (1 mm de Hg) a 40°C para dar un polvo blanco. (?inh en CHC13=0.3, Ácido #=2439, Tg=12°C) .

EJEMPLO 2 - MÉTODO DE CONDENSACIÓN DIRECTA - Síntesis de 49/49/2 Poli (L-láctico-co-glicólico/cítrico) catalizado por Amberlyst 15. Utilizando un sistema similar al anterior, el ácido L-láctico (mezcla acuosa al 88%, 25.6 g, 0.25 mol) se combinó con ácido glicólico (19.2 g, 0.25 mol), monohidrato de ácido cítrico (2.33 g, 0.011 mol), perlas de Amberlyst 15 (500 mg) y tolueno (150 ml) en un matraz de fondo redondo. La mezcla se calentó con agitación a reflujo por 51 horas, retirando el agua mediante la trampa Dean-Stark. v El tolueno se decantó a partir del producto semisólido. El poliéster se disolvió en acetona (300 ml) y se filtró y se secó en un evaporador giratorio. El poliéster sólido se volvió a disolver entonces en cloruro de metileno y se lavó dos veces con agua (2 x 150 ml) para retirar oligómeros solubles. La solución orgánica se concentró en un evaporador giratorio y el producto se secó perfectamente bajo vacío para rendir un sólido blanco (ver el Cuadro I, Poliéster del tipo IB, Polímero #4) . (?inh en CHC13=0.11, Ácido #=842, Tg=15°C) .

EJEMPLO 3 - MÉTODO DE POLIMERIZACIÓN POR CRECIMIENTO EN ETAPAS - Síntesis de 73.5/24.5/2 Poli (L-lactide-co-glicólico/málico) catalizado por ácido málico. Utilizando una ampolla cilindrica de 150 ml de capacidad con un accesorio para inyección de aire, se combinó L-lactide (20 g, 0.139 mol) con ácido glicólico (7.1 g, 0.093 mol) y ácido (d,l) -málico (1.0 g, 0.0075 mol) . La mezcla se agitó haciendo burbujear nitrógeno a través de la entrada del inyector de aire (100 ml/min) y se calentó de 25°C a 155°C durante 100 minutos. La temperatura de reacción se mantuvo a 155°C durante 70 horas y el agua de la polimerización se retiró en una trampa fría en la tubería de salida del reactor. Después de 70 horas la reacción se enfrió a 100 °C y se vertió en un receptor de acero inoxidable enfriado hasta su endurecimiento. El poliéster sólido se disolvió entonces en cloruro de metileno y se lavó dos veces con agua (2 x 150ml) para retirar los oligómeros solubles. La solución orgánica se concentró en un evaporador giratorio y el producto se secó cuidadosamente bajo vacío para dar un sólido blanco (ver el Cuadro II, poliéster del tipo II, polímero #2). (?inh en CHC13=0.13, Ácido #=1800, Tg=27°C) .

EJEMPLO 4 - MÉTODO DE POLIMERIZACIÓN POR RUPTURA DE ANILLO - Síntesis de 75/25 Poli (L-lactide-co-glicólido) iniciado por ácido málico. L-lactide (12.0 g, 0.0833 mol), glicólido (3.21 g, 0.0277 mol), ácido málico (0.3042 g, 0.00227 mol) y catalizador de octoato de estaño (0.33 M en tolueno, 67 µL, 0.022 mol) se añadieron bajo condiciones de nitrógeno seco a una ampolla de vidrio con un agitador magnético. El sistema se purgó con N2 y se evacuó con vacío varias veces antes de sellar la ampolla. Los reactivos se fundieron entonces a 140°C y la fusión se calentó a 180°, 190°, 180° y 150°C durante 1, 4.5, 12 y 2 horas, respectivamente. Después se enfriarse a temperatura ambiente, el poliéster se volvió a calentar a 110 °C bajo un vacío de menos de 1 mm de Hg por aproximadamente una hora para retirar el monómero, se volvió a enfriar a temperatura ambiente, se enfrió rápidamente en nitrógeno líquido, se aisló y se secó bajo vacío. (?inh en CHC13=0.20, Ácido #=2560, Tg=39°C) .

EJEMPLO 5 - MÉTODO DE POLIMERIZACIÓN POR RUPTURA DE ANILLO - Síntesis de 50/50 poli (D,L-lactide-co-glicólido) iniciado por ácido cítrico. Se mezcló D, L-lactide (10.0 g, 0.0694 mol) con glicólido (8.06 g, 0.0694 mol), ácido cítrico (1.07 g, 0.00555 mol) y catalizador de octoato de estaño (0.33 M en tolueno, 84 µL, 0.0278 mmol) bajo una atmósfera de nitrógeno seco en una ampolla de vidrio que contenía un agitador magnético y se selló bajo vacío. Los reactivos se fundieron y se calentaron a 180°, 185°, 195° y 120°C durante 1, 2, 7 y 9 horas, respectivamente. El poliéster se enfrió a temperatura ambiente, se enfrió rápidamente en nitrógeno líquido, se aisló y se secó. (?inh en CHC13=0.26, Ácido #=970, Tg=23°C).

EJEMPLO 6 - MÉTODO DE POLIMERIZACIÓN POR RUPTURA DE ANILLO - Síntesis de 50/50 poli (D, L-lactide-co-glicólido) iniciada por 1, 6-hexanodiol. Utilizando un sistema similar al descrito arriba, D, L-lactide (10.0 g, 0.0694 mol), glicólido (8.06 g, 0.0694 mol), 1, 6-hexanodiol (0.656 g, 0.00555 mol) y octoato de estaño (0.33 M en tolueno, 84 µL, 0.0278 mmol) se añadieron bajo condiciones de nitrógeno seco a una ampolla de vidrio que se selló subsecuentemente bajo vacío. Los constituyentes se calentaron a 150°, 185°, 150° y 120°C durante 0.5, 4, 1, 5 y 3 horas, respectivamente. El poliéster resultante se recuperó y se secó (ver el Cuadro III, poliéster del tipo III, polímero #5) . (?inh en CHC13=0.39, Ácido #=10,138, Tg=30°C) .

EJEMPLO 7 - MÉTODO DE INTERCAMBIO FUNCIONAL - Síntesis de 50/50 poli (D, L-lactide-co-glicólido) que lleva carboxílico. 50/50 poli (D, L-lactide-co-glicólido) (Boehringer A001, 8 g) , ácido cítrico (0.8 g, 4.16 mmol) y octoato de estaño (2 gotas) se añadieron a una ampolla de vidrio bajo condiciones de nitrógeno seco y se selló. La mezcla se calentó a 150 °C por 4 horas, se enfrió a temperatura ambiente, se enfrió rápidamente en nitrógeno líquido, se aisló y se secó (ver el Cuadro IV, poliéster del tipo IV, polímero #1). (?inh en CHC13=0.26, Ácido #=670, Tg=23°C) .

EJEMPLO 8 - Síntesis de un conjugado molecular iónico de 49:49:2 L-láctico/glicólico/málico (ver el Cuadro I, polímero #4) y D-Trp6 [LHRH] . 500 mg de 49:49:2 L-láctico/glicólico/málico (sintetizado por condensación directa, Mw=9,500, Ácido #==1420) se disolvieron en 10 ml de acetona (reactivo analítico Mallinckrodt) . Una porción de la solución de hidróxido de sodio 0. ÍN (1.14 ml) se añadió y la mezcla se agitó a temperatura ambiente por 15 minutos. Una solución de 100 mg de D-Trpe [LHRH] (Péptido I BIM-21003, 87% de contenido base, 7% de contenido de acetato) en 1.0 ml de agua se añadió y la mezcla se agitó por 1 hora a temperatura ambiente. Los solventes se retiraron entonces, primero por Rotovap a T<40°C y después en un desecador por 1 hora a temperatura ambiente bajo vacío a 1 mm de Hg. El sólido secado se trituró y se agitó en 100 ml de agua desionizada y se aisló por filtración. El filtrado acuoso se probó por HPLC y se descubrió que contenía <1 mg de péptido soluble. El material sólido se secó varios días a vacío para dar 540 mg de polvo blanco. El polvo se utilizó en un ensayo in vi tro (ver el Cuadro VI, ejemplo #8) .

EJEMPLO 9 - Síntesis de un conjugado molecular iónico de 49:49:2 L-láctico/glicólico/málico (ver el Cuadro I, polímero #4) y Análogo inhibidor de tumor/somatostatina. 100 mg de 49:49:2 L-Láctico/glicólico/málico (sintetizado por condensación directa, Mw=9,500, Ácido #=1420) se disolvió en 2 ml de acetona (reactivo analítico Mallinckrodt) . Una porción de la solución de hidróxido de sodio 0. ÍN (0.32 ml) se añadió y la mezcla se agitó a temperatura ambiente por 15 minutos. Una solución de 20 mg de somatostatina/análogo inhibidor de tumor (Péptido II BIM-23014, 83% de contenido base, 9.8% de contenido de acetato) en 1.2 ml de agua se añadió y la mezcla se agitó por 1 hora a temperatura ambiente . Los solventes se retiraron entonces, primero por Rotovap a T<40°C y después en un desecador por 1 hora a temperatura ambiente bajo vacío a 1 mm de Hg . El sólido secado se trituró y se agitó en 20 ml de agua desionizada y se aisló por filtración. El filtrado acuoso se probó por HPLC y se descubrió que contenía <0.05 mg de péptido soluble. El material sólido se secó varios días a vacío para dar 106 mg de polvo blanco. El polvo se trituró y se utilizó en un ensayo de liberación in vi tro (ver el Cuadro VI, ejemplo #9) .

EJEMPLO 10 - Síntesis de un conjugado molecular iónico de 73.5:24.5:2 poli L-lactide/glicólico/málico (ver el Cuadro II, ver polímero #2) y D-Trp6 [LHRH] . 800 mg de 73.5:24.5:2 poli L-lactide/glicólico/málico (sintetizado por crecimiento por etapas de productos acidizados: Ácido #=1800) se disolvió en acetona (16 ml) . Una porción de solución de hidróxido de sodio 0. ÍN (2.8 ml) se añadió y la solución se agitó a temperatura ambiente por 20 minutos. Una solución de 200 mg de D-Trp6 [LHRH] (BIM-21003, 87% de contenido base, 7% de contenido de acetato) en 2 ml de agua se añadió y la mezcla se agitó durante 90 minutos. Los solventes se retiraron y el sólido resultante se trituró en agua desionizada como en el ejemplo 8 indicando menos de 1% de sal de péptido soluble presente. Los sólidos aislados se secaron 4 días a vacío para dar 839 mg de polvo blanco. El polvo se trituró y se utilizó para un ensayo de liberación in vitro (ver el Cuadro VI, ejemplo #10) .

EJEMPLO 11 - Formación de micropartícula 1.50 de conjugado iónico de péptido-polímero de poliéster de ácido L-lactide/glicólido/d, 1-málico (65:33:2). Los conjugados se sintetizaron por polimerización de ruptura de anillo como en el ejemplo 4 (MW=4700 polidispersidad = 1.3 según se determina por GPC en una columna de lecho lineal mixto de Gel Jordi de 50 x 1 cm, eluyente THF, detector de fotodispersión Wyatt Mini Dawn dn/dc = 0.05, ácido #1475 por titulación, Tg=42°C), se disolvieron en 40 ml de acetona. Los grupos ácido se neutralizaron con 2.0 ml de solución de hidróxido de sodio 0.5M y se agitaron por 5 minutos . Una solución de 0.5 g de BIM-23014 (83.7% de contenido de péptido, 11.5% de contenido de acetato) en 20 ml de agua Milli-Q se añadió lentamente con mezclado a la solución de polímero. Un adicional de 40 ml de acetona también se añadió por porciones durante la adición del péptido para evitar la precipitación. La solución incolora y transparente se agitó por una hora y después se evaporó hasta secar bajo vacío. El sólido blanco resultante se volvió a disolver en una mezcla de 20 ml de acetona y 2 ml de agua Milli-Q para formar una solución transparente. Esta solución se inyectó vía un filtro de teflón de 0.2 µ en un recipiente de agitación rápida de 500 ml de agua Milli-Q a 4°C. La fase compleja de péptido/polímero se separó inmediatamente en partículas pequeñas al contacto con el agua. Después de mezclar la pasta por 30 min a 4°C, la acetona residual se retiró bajo presión reducida y los sólidos se aislaron por centrifugación, se volvieron a suspender con 100 ml de agua Milli-Q y se centrifugaron. Los sólidos aislados se secaron por liofilización para dar 1530 mg de polvos blancos de fluencia suave. El tamaño de partícula varía de 2 a 100 µm. Se mostró que el Tg del conjugado iónico ocurre a los 53 °C. Se descubrió que el péptido residual total (no unido) en todos los sobrenadantes acuosos es de 63 mg mediante análisis HPLC. Se determinó, mediante análisis de nitrógeno elemental, que el contenido total de péptido inicial es de 19.9% en peso. Se determinó que el porcentaje de péptido extraíble del conjugado es de 16.9% en peso, utilizando la técnica de extracción de acetona/TFA 0.1M. El conjugado resultante, por lo tanto, retiene el carácter iónico del 84.8% (extraíble).

Sistema de suministro de varilla del tipo 1 (CONC2 v CGC1) Ejemplo A-l: Preparación de ácido cítrico iniciado 97/3 caprolactona/copolímero glicólido (CGC1) Un matraz de fondo redondo equipado para agitación mecánica se secó a la flama dos veces y se purgó con argón seco. El matraz se cargó con e-caprolactona (1.455 mol, 166 g) , glicólido (0.08865 mol, 10.3 g) , ácido cítrico (0.075 mol, 14.4 g) y octoato de estaño (0.0003 mol, 375 µl de solución 0.8 M en tolueno) . La polimerización se condujo utilizando el siguiente esquema: Bajo purga de argón la carga se calentó, de temperatura ambiente a aproximadamente 150°C, durante un periodo de aproximadamente 1 hora y 20 minutos con agitación continua después de la fusión (a 70 rpm) . La carga se mantuvo a aproximadamente 150°C por aproximadamente 11.5 horas. A la conclusión de la polimerización, la pequeña cantidad de monómero no reaccionado se destiló a aproximadamente 120°C por aproximadamente 15 minutos bajo vacío (aproximadamente 0.1 mm de Hg) . El material se vació en frascos y se dejó enfriar. El polímero se analizó por GPC (Mn=3543, M =7708) , FTIR, DSC (Tm 52.0°C) y titulación respecto al contenido carboxílico (peso equivalente promedio = 623 Da) . Se disolvieron veinte gramos de polímero en 50.0 mL de acetona y la solución se precipitó en agua de hielo por agitación. El producto sólido se aisló por filtración. El polímero purificado se analizó por GPC (Mn=4214, Mw=9688) , DSC (TM 45.2°C) y titulación (peso equivalente promedio = 780) .

Ejemplo B-l: Preparación de conjugado iónico (CONC1) . Se disolvieron 1.5 g de un polímero purificado (CGC1) en 7.5 mL de acetonitrilo en un vial de vidrio. En un vial separado, se disolvieron 250.0 mg de LHRH-acetato en 1.5 ml de agua destilada. El polímero disuelto se filtró a través de un filtro de jeringa Acrodisc de 0.45 µm en un vial que contenía 83.8 mg de carbonato de sodio (para neutralizar el acetato de LHRH) . La solución de LHRH se añadió gota a gota a la solución de polímero filtrada. La solución combinada se mezcló con una barra de agitación magnética durante aproximadamente 1.5 horas a temperatura ambiente. El conjugado se precipitó añadiéndolo por goteo a un alcohol isopropilo (IPA) enfriado por nitrógeno líquido. El precipitado se recolectó por centrifugación y se secó durante la noche bajo vacío. El conjugado producido fue de 73.5%. El conjugado se analizó por DSC (Tm 50.9°C) y análisis elemental FTIR. El análisis elemental del material rindió 1.81% de nitrógeno. Con base en esto, el contenido de LHRH se determinó en 10.0%.

Ejemplo C-1: Preparación de un sistema de suministro en forma de varilla El conjugado iónico (0.3987g de C0NC2) y el polímero (1.206g de CGCl) se mezclaron por trituración suave y se fundieron a aproximadamente 58°C en un bloque de calentamiento. El material fundido se mezcló y después se extrajo hacia tubos capilares 18G y se dejó enfriar. Se extruyó y las varillas se cortaron en longitudes que tenían la dosis apropiada de fármaco y se colocaron en una aguja espinal estéril de calibre 10 (lista para inyectarse) . Todas las etapas del Ejemplo C-1 se condujeron en una campana de flujo laminar, Las varillas tuvieron un contenido de LHRH de 2.5%.

Sistema de suministro de varilla del tipo 2 (CQNC2 y CGCl) Ejemplo A-2: Preparación de ácido cítrico iniciado 97/3 caprolactona/copolímero glicólido (CGCl) El mismo polímero (CGCl) elaborado en el Ejemplo A-l se utilizó en este ejemplo.

Ejemplo B-2: Preparación de conjugados iónicos (C0NC2) . Se preparó CONC2 conforme el procedimiento descrito en el Ejemplo B-l. Mediante análisis elemental, el por ciento de nitrógeno fue de 2.31%. Con base en esto el contenido de LHRH fue de 12.76%.

Ejemplo C-2: Preparación de un sistema de suministro en forma de varilla Se mezclaron mecánicamente el C0NC2 (0.1854 g) y 0.5565 g de CGCl purificado y después se calentaron a aproximadamente 60 °C. El material mezclado y fundido se extrajo hacia tubos capilares calibre 18 y se extruyó con un pistón. Las varillas se cortaron en longitudes que tenían la dosis apropiada de fármaco y se colocaron en una aguja espinal estéril de calibre 18 (lista para inyectarse) . Todas las etapas del Ejemplo C-2 se condujeron en una campana de flujo laminar. Las varillas tuvieron un contenido de LHRH de 3.2%.

Sistema de suministro de varilla del tipo 3 Ejemplo A-3: Preparación de ácido tartárico iniciado 98/2 caprolactona/copolímero de carbonato de trimetileno (TMC) (CTT1) Un matraz de fondo redondo equipado para agitación mecánica se secó a la flama tres veces y se purgó con argón seco. El matraz se cargó con e-caprolactona (1.47 moles, 168 g) , TMC (0.03 mol, 3.06 g) , ácido tartárico (0.0142 mol, 2.134 g) y octoato de estaño (0.0003 mol, 375 µl de solución 0.8 M en tolueno) . La polimerización se condujo utilizando el siguiente esquema: Bajo purga de argón la carga se calentó de temperatura ambiente a aproximadamente 150 °C durante aproximadamente 1 hora con agitación de la mezcla (60 rpm) . La temperatura se mantuvo a aproximadamente 150°C durante aproximadamente 9 horas. El monómero no reaccionado se destiló a aproximadamente 100°C por aproximadamente 1 hora bajo presión reducida (0.1 mm) . El polímero se vertió en frascos y se dejó enfriar.

El polímero se analizó por GPC (Mn=13221, Mw=35602) Ejemplo B-3: Preparación de conjugados iónicos (C0NCTT1) . Se disolvieron 1.5 g de un polímero purificado del Ejemplo A-3 en 7.5 mL de acetonitrilo en un vial de vidrio. En un vial separado, se disolvieron 250 mg de LHRH-acetato en 1.5 ml de agua destilada. El polímero disuelto se filtró a través de un filtro de jeringa Acrodisc de 0.45 µm en un vial que contenía 56.5 mg de carbonato de sodio (para neutralizar el acetato de LHRH) . La solución de LHRH se añadió gota a gota a la solución de polímero filtrada. La solución combinada se mezcló con una barra de agitación magnética durante aproximadamente 3 horas a temperatura ambiente. El conjugado se precipitó añadiéndolo por goteo en un IPA enfriado con nitrógeno líquido por agitación. El precipitado se recolectó por centrifugación y se secó durante la noche bajo vacío. El conjugado producido fue de 81.1%. El análisis elemental del material rindió 2.04% de nitrógeno. Con base en esto, el contenido de LHRH se determinó como 11.3% Ejemplo C-3: Preparación de un sistema de suministro en forma de varilla Se fundió CTT1 (0.8909 g) a aproximadamente 55°C.

A esto se añadió 0.2250 g de CONCTT1 y todo el sistema se calentó a aproximadamente 65 °C. El sistema fundido se extrajo después hacia tubos capilares calibre 18 y se extruyó con un pistón. Las varillas se cortaron en longitudes que tenían la dosis apropiada de fármaco y se colocaron en una aguja espinal estéril de calibre 18 (lista para inyección) . Todas las etapas del Ejemplo C-3 se condujeron en una campana de flujo laminar. Las varillas tenían un contenido de LHRH de 2.3%.

Sistema de suministro de varilla del tipo 4 Ejemplo A-4: Preparación de ácido cítrico iniciado 94/6 caprolactona/copolímero glicólido (CGT6) Un matraz de fondo redondo equipado para agitación mecánica se secó a la flama tres veces y se purgó con argón seco. El matraz se cargó con e-caprolactona (1.41 moles, 161 g) , glicólido (0.09 mol, 10.4 g) , ácido tartárico (0.005 mol, 0.73 g) y octoato de estaño (0.0003 mol, 375 µl de solución 0.8 M en tolueno) . La polimerización se condujo utilizando el siguiente esquema: Bajo purga de argón la carga se calentó de temperatura ambiente a aproximadamente 150 °C durante un periodo de aproximadamente 1 hora agitando al mismo tiempo la mezcla de reacción fundida (60 rpm) . La temperatura se mantuvo a aproximadamente 150°C por aproximadamente 1 hora. Después ésta se elevó a aproximadamente 180°C por aproximadamente cuatro horas . El material se enfrió a aproximadamente 107°C y se colocó bajo vacío a 1.5mm de Hg por aproximadamente 1.5 horas . El material se vació en frascos y se dejó enfriar. Después de la recolección el polímero se analizó por DSC (Tm=54.5°C) y GPC (Mn=26254, Mw=68101) .

Ejemplo B-4: Preparación de conjugados iónicos (CONCTT2) . Se preparó C0NCTT2 se preparó como se describe en el Ejemplo B-l pero utilizando LHRH-acetato y el copolímero del Ejemplo A4.

Ejemplo C-4: Preparación de un sistema de suministro en forma de varilla CGT6 (1.4 g) y CONCTT2 (0.4779 g) se calentaron a aproximadamente 57 °C, se enfriaron, se trocearon, y después se volvieron a calentar a la misma temperatura. El sistema fundido se extrajo hacia tubos capilares de calibre 18 y se extruyó con un pistón. Las varillas se cortaron en longitudes que tenían la dosis apropiada de fármaco y se colocaron en una aguja espinal estéril de calibre 10 (lista para inyección) . Todas las etapas del Ejemplo C-4 se condujeron en una campana de flujo laminar. Las varillas tenían un contenido de LHRH de 2.8%.

Ejemplo D-4: Recubrimiento de la varilla del sistema C-4 utilizando precursor de copolímero inerte CGT6 (1.4 g) se disolvió en 1.5 ml de diclorometano. Las varillas del Ejemplo C-4 se sumergieron en esta solución de polímero, se retiraron inmediatamente y se secaron bajo condiciones ambientales en una campana de flujo laminar. A partir de la descripción anterior, una persona con pericia en la técnica puede determinar fácilmente las características esenciales de esta invención y, sin apartarse del espíritu y alcance de la misma, puede efectuar diversos cambios y modificaciones de la invención para adaptarla a diversos usos y condiciones . Por lo tanto, otras modalidades quedan también dentro de las reivindicaciones .

Claims (42)

1. REIVINDICACIONES : 1. Un poliéster que contiene uno o más grupos COOH libres y que tiene una proporción carboxilo a hidroxilo mayor a uno, en donde el poliéster contiene un miembro seleccionado del grupo que consiste de: ácido L-láctico, ácido D-láctico, ácido DL-láctico, ácido málico, ácido cítrico, e-caprolactona, p-dioxanona, ácido e-caproico, alquilen oxalato, cicloalquilen oxalato, alquilen succinato, ß-hidroxibutirato, carbonato de trimetileno sustituido o no sustituido, 1, 5-dioxepan-2 -ona, 1,4-dioxepan-2-ona, glicólido, ácido glicólico, L-lactide, D-lactide, DL-lactide, meso-lactide y cualesquiera copolímeros, racematos o isómeros ópticamente activos de los mismos, siempre y cuando el ácido cítrico, la e-caprolactona y el glicólido sean miembros del poliéster.
2. 2. Un poliéster según la reivindicación 1, en donde el poliéster comprende ácido cítrico, e-caprolactona y glicólido.
3. 3. Un poliéster según la reivindicación 2, en donde la proporción de e-caprolactona a glicólido en el poliéster es de 90 e-caprolactona : 10 glicólido a 99 e-caprolactona : 1 glicólido.
4. 4. Un poliéster según la reivindicación 3, en donde la proporción de e-caprolactona a glicólido en el poliéster es de 97 e-caprolactona : 3 glicólido.
5. 5. Una composición que comprende un poliéster según la reivindicación 1, iónicamente conjugado con uno o más polipéptidos bioactivos que comprenden por lo menos una amina ionogénica efectiva, en donde por lo menos el 50% en peso del polipéptido presente en la composición se conjuga iónicamente con el poliéster.
6. 6. Una composición que comprende un poliéster según la reivindicación 2, iónicamente conjugado con uno o más polipéptidos bioactivos que comprenden por lo menos una amina ionogénica efectiva, en donde por lo menos el 50% en peso del polipéptido presente en la composición se conjuga iónicamente con el poliéster.
7. 7. Una composición que comprende un poliéster según la reivindicación 3, iónicamente conjugado con uno o más polipéptidos bioactivos que comprenden por lo menos una amina ionogénica efectiva, en donde por lo menos el 50% en peso del polipéptido presente en la composición se conjuga iónicamente con el poliéster.
8. 8. Una composición que comprende un poliéster según la reivindicación 4, iónicamente conjugado con uno o más polipéptidos bioactivos que comprenden por lo menos una amina ionogénica efectiva, en donde por lo menos el 50% en peso del polipéptido presente en la composición se conjuga iónicamente con el poliéster.
9. 9. Un poliéster que contiene uno o más grupos COOH libres y que tiene una proporción carboxilo a hidroxilo mayor a uno, en donde el poliéster contiene un miembro seleccionado del grupo que consiste de: ácido L-láctico, ácido D-láctico, ácido DL-láctico, ácido málico, ácido cítrico, ácido tartárico, e-caprolactona, p-dioxanona, ácido e-caproico, alquilen oxalato, cicloalquilen oxalato, alquilen succinato, ß-hidroxibutirato, carbonato de trimetileno sustituido o no sustituido, 1, 5-dioxepan-2-ona, 1, 4-dioxepan-2-ona, glicólido, ácido glicólico, L-lactide, D-lactide, DL-lactide, meso-lactide y cualesquiera copolímeros, racematos o isómeros ópticamente activos de los mismos, siempre y cuando el ácido tartárico sea un miembro del poliéster.
10. 10. Un poliéster según la reivindicación 9, en donde el poliéster comprende ácido L-láctico o ácido D-láctico, o en donde el poliéster comprende ácido L-láctico o ácido D-láctico y ácido glicólico.
11. 11. Un poliéster según la reivindicación 9, en donde el poliéster comprende ácido tartárico, e-caprolactona y carbonato de trimetileno.
12. 12. Un poliéster según la reivindicación 11, en donde la proporción de e-caprolactona a carbonato de trimetileno en el poliéster es de 90 e-caprolactona : 10 carbonato de trimetileno a 99 e-caprolactona : 1 carbonato de trimetileno.
13. 13. Un poliéster según la reivindicación 12, en donde la proporción de e-caprolactona a carbonato de trimetileno en el poliéster es de 98 e-caprolactona : 2 carbonato de trimetileno.
14. 14. Una composición que comprende un poliéster según la reivindicación 9, iónicamente conjugado con uno o más polipéptidos bioactivos que comprenden por lo menos una amina ionogénica efectiva, en donde por lo menos el 50% en peso del polipéptido presente en la composición se conjuga iónicamente con el poliéster.
15. 15. Una composición que comprende un poliéster según la reivindicación 11, iónicamente conjugado con uno o más polipéptidos bioactivos que comprenden por lo menos una amina ionogénica efectiva, en donde por lo menos el 50% en peso del polipéptido presente en la composición se conjuga iónicamente con el poliéster.
16. 16. Una composición que comprende un poliéster según la reivindicación 12, iónicamente conjugado con uno o más polipéptidos bioactivos que comprenden por lo menos una amina ionogénica efectiva, en donde por lo menos el 50% en peso del polipéptido presente en la composición se conjuga iónicamente con el poliéster.
17. 17. Una composición que comprende un poliéster según la reivindicación 13, iónicamente conjugado con uno o más polipéptidos bioactivos que comprenden por lo menos una amina ionogénica efectiva, en donde por lo menos el 50% en peso del polipéptido presente en la composición se conjuga iónicamente con el poliéster.
18. 18. Una composición que comprende un poliéster según la reivindicación 10, iónicamente conjugado con uno o más polipéptidos bioactivos que comprenden por lo menos una amina ionogénica efectiva, en donde por lo menos el 50% en peso del polipéptido presente en la composición se conjuga iónicamente con el poliéster.
19. 19. Una composición según la reivindicación 5, en donde el polipéptido bioactivo se selecciona del grupo que consiste de LHRH, somatostatina, bombesina/GRP, calcitonina, bradiquinina, galanina, MSH, GRF, amilina, taquiquininas, secretina, PTH, CGRP, neuromedinas , PTHrP, glucagon, neurotensina, ACTH, GHRP, GLP, VIP, PACAP, encefalina, PYY, motilina, substancia P, NPY, TSH y análogos o fragmentos de los mismos.
20. 20. Una composición según la reivindicación 14, en donde el polipéptido bioactivo se selecciona del grupo que consiste de LHRH, somatostatina, bombesina/GRP, calcitonina, bradiquinina, galanina, MSH, GRF, amilina, taquiquininas, secretina, PTH, CGRP, neuromedinas, PTHrP, glucagon, neurotensina, ACTH, GHRP, GLP, VIP, PACAP, encefalina, PYY, motilina, substancia P, NPY, TSH y análogos o fragmentos de los mismos.
21. 21. Una composición según la reivindicación 18, en donde el polipéptido bioactivo se selecciona del grupo que consiste de LHRH, somatostatina, bombesina/GRP, calcitonina, bradiquinina, galanina, MSH, GRF, amilina, taquiquininas, secretina, PTH, CGRP, neuromedinas, PTHrP, glucagon, neurotensina, ACTH, GHRP, GLP, VIP, PACAP, encefalina, PYY, motilina, substancia P, NPY, TSH y análogos o fragmentos de los mismos.
22. 22. Una composición según la reivindicación 19, en donde el polipéptido bioactivo se selecciona del grupo que consiste de LHRH, somatostatina y análogos o fragmentos de los mismos.
23. 23. Una composición según la reivindicación 20, en donde el polipéptido bioactivo se selecciona del grupo que consiste de LHRH, somatostatina y análogos o fragmentos de los mismos .
24. 24. Una composición según la reivindicación 21, en donde el polipéptido bioactivo se selecciona del grupo que consiste de LHRH, somatostatina y análogos o fragmentos de los mismos.
25. 25. Una composición según la reivindicación 22, en donde el análogo de LHRH es de la fórmula pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 y el análogo de somatostatina es de la fórmula H2N-ß-D-Nal-Cys-Tyr-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2, en donde los dos residuos Cys del análogo de somatostatina están unidos entre sí.
26. 26. Una composición según la reivindicación 23, en donde el análogo de LHRH es de la fórmula pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 y el análogo de somatostatina es de la fórmula H2N-ß-D-Nal-Cys-Tyr-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2, en donde los dos residuos Cys del análogo de somatostatina están unidos entre sí.
27. 27. Una composición según la reivindicación 24, en donde el análogo de LHRH es de la fórmula pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 y el análogo de somatostatina es de la fórmula H2N-ß-D-Nal-Cys-Tyr-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2, en donde los dos residuos Cys del análogo de somatostatina están unidos entre sí.
28. 28. Una composición según la reivindicación 19, en donde la composición está en la forma de una varilla.
29. 29. Una composición según la reivindicación 20, en donde la composición está en la forma de una varilla.
30. 30. Una composición según la reivindicación 21, en donde la composición está en la forma de una varilla.
31. 31. Una composición según la reivindicación 28, en donde la varilla tiene un recubrimiento de un poliéster.
32. 32. Una composición según la reivindicación 31, en donde el poliéster que recubre a la varilla es un poliéster absorbible.
33. 33. Una composición según la reivindicación 32, en donde el poliéster absorbible contiene uno o más grupos COOH libres y que tiene una proporción carboxilo a hidroxilo mayor a uno, en donde el poliéster contiene un miembro seleccionado del grupo que consiste de ácido L-láctico, ácido D-láctico, ácido DL-láctico, ácido málico, ácido cítrico, ácido tartárico, e-caprolactona, p-dioxanona, ácido e-caproico, alquilen oxalato, cicloalquilen oxalato, alquilen succinato, ß-hidroxibutirato, carbonato de trimetileno sustituido o no sustituido, 1, 5-dioxepan-2-ona, 1, 4 -dioxepan-2 -ona, glicólido, ácido glicólico, L-lactide, D-lactide, DL-lactide, meso-lactide y cualesquiera copolímeros, racematos o isómeros ópticamente activos de los mismos.
34. 34. Una composición según la reivindicación 33, en donde el poliéster absorbible que recubre a la varilla es igual al poliéster comprendido en la composición.
35. 35. Una composición según la reivindicación 29, en donde la varilla tiene un recubrimiento de un poliéster.
36. 36. Una composición según la reivindicación 35, en donde el poliéster que recubre a la varilla es un poliéster absorbible.
37. 37. Una composición según la reivindicación 36, en donde el poliéster absorbible contiene uno o más grupo's COOH libres y que tiene una proporción carboxilo a hidroxilo mayor a uno, en donde el poliéster contiene un miembro seleccionado del grupo que consiste de ácido L-láctico, ácido D-láctico, ácido DL-láctico, ácido málico, ácido cítrico, ácido tartárico, e-caprolactona, p-dioxanona, ácido e-caproico, alquilen oxalato, cicloalquilen oxalato, alquilen succinato, ß-hidroxibutirato, carbonato de trimetileno sustituido o no sustituido, 1, 5-dioxepan-2-ona, 1, 4-dioxepan-2-ona, glicólido, ácido glicólico, L-lactide, D-lactide, DL-lactide, meso-lactide y cualesquiera copolímeros, racematos o isómeros ópticamente activos de los mismos.
38. 38. Una composición según la reivindicación 37, en donde el poliéster absorbible que recubre a la varilla es igual al poliéster comprendido en la composición.
39. 39. Una composición según la reivindicación 30, en donde la varilla tiene un recubrimiento de un poliéster.
40. 40. Una composición según la reivindicación 39, en donde el poliéster que recubre a la varilla es un poliéster absorbible.
41. 41. Una composición según la reivindicación 40, en donde el poliéster absorbible contiene uno o más grupos COOH libres y que tiene una proporción carboxilo a hidroxilo mayor a uno, en donde el poliéster contiene un miembro seleccionado del grupo que consiste de ácido L-láctico, ácido D-láctico, ácido DL-láctico, ácido málico, ácido cítrico, ácido tartárico, e-caprolactona, p-dioxanona, ácido e-caproico, alquilen oxalato, cicloalquilen oxalato, alquilen succinato, ß-hidroxibutirato, carbonato de trimetileno sustituido o no sustituido, 1, 5-dioxepan-2-ona, 1, 4 -dioxepan-2 -ona, glicólido, ácido glicólico, L-lactide, D-lactide, DL-lactide, meso-lactide y cualesquiera copolímeros, racematos o isómeros ópticamente activos de los mismos.
42. 42. Una composición según la reivindicación 41, en donde el poliéster absorbible que recubre a la varilla es igual al poliéster comprendido en la composición.