MXPA01004171A - Homologo zil-1a4 de interleucina-1 - Google Patents

Abstract

Son divulgados, los homólogos de interleucina-1, los materiales y los métodos para hacerlos, las composiciones que los comprenden, y los métodos para usarlos. La invención incluye a los polipéptidos que comprenden los residuos 60 hasta los 218 de la SEC ID NO:7ólos residuos 1 hasta los 157 de la SEC ID NO:10. Los polipéptidos y los polinucleótidos de la invención sonútiles dentro de los campos de diagnóstico, terapéuticos, y analíticos, incluyendo la modulación de las repuestas inmunes.

Description

HOMOLOGO ZIL1A4 DE INTERLEUCINA-1 ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN En los organismos multicelulares, el crecimiento, diferenciación, migración y metabolismo celular están controlados por una variedad de factores de polipéptidos.

Estos factores regulan tanto el desarrollo como la patogénesis . Las interleucinas son una familia de citocinas que median las respuestas inmunológicas, que incluyen la inflamación. La. interleucina-1 (IL-1) es una familia de al menos tres miembros conocidos con homología de secuencia reconocible y actividades de enlace del receptor común. La IL-la y IL-lß son citocinas pro-inflamatorias, mientras que el tercer miembro de la familia, el antagonista del receptor IL-1 (IL-lra) es un antagonista de las actividades de IL-la y IL-lß. La IL-lra es inusual en que es el único antagonista del receptor de citocina que se presenta de manera natural, conocido, sin ninguna función agonista aparente. La capacidad del IL-lra para enlazarse, pero no activar, el receptor IL-1 sugiere que la IL-lra es un regulador negativo de la inflamación (Dripps et al, J. Biol.. Chem. 266:10331-10336, 1991; Granowitz et al., Blood 79:2356-2363, 1992).

IteE: 128673 Las interleucinas median una variedad de patologías inflamatorias. A bajas concentraciones las IL-l y IL-lß actúan localmente sobre los fagocitos mononucleares y el endotelio vascular para inducir además la síntesis de 11-1 y IL-6. La IL-1 no actúa directamente sobre los leucocitos y los neutrófilos, pero provoca que los fagocitos mononucleares y células endoteliales activen los leucocitos. Cuando se secreta en grandes cantidades hacia la corriente sanguínea, la IL-1 tiene efectos endocrinos, incluyendo fiebre, la síntesis de proteínas del plasma en fase aguda y caquexia . Reportes anteriores describieron inhibidores que se presentan de manera natural de la actividad de la IL-1 en muchas fuentes: la orina de los pacientes febriles (Seckinger et al., J. Immunol. 139:1546.1549, 1987; Mazzei et al., Eur. J. Immunol, 20:683-689, 1990), los pacientes con leucemia monocítica (Seckinger et al., ibid), o pacientes con artritis crónica juvenil (Prieur et al., Lancet 2:1240-1242, 1987), el fluido sinovial de los pacientes con artritis reumatoide (Lotz et al., J. Clin. Invest, 78:713-721, 1986); y monocitos infectados con virus o células B (Scala et al., J. Exp. Med. 159:1637.1652, 1984). Estas actividades inhibidoras parecen ser heterogéneas con un rango de masa molecular desde 18 a 67 kDa, pero se mantienen en buena parte no caracterizadas. La primera demostración de un antagonista del receptor de IL-1 verdadero viene de la purificación y clonación de la IL-lra recombinante de las células mononucleares de la sangre periférica (PMNC) cultivadas sobre placas revestidas con IgG y a partir de la. línea U937 de células monocíticas humanas activadas con éster de forbol (PMA) (Cárter et al., Nature 344:633-638, 1990; Hannum et al., Nature 343:336-340, 1990; Eisenberg et al., Nature 343:341-346, 1990). El suero de la gente saludable tiene un bajo nivel de actividad IL-lra circulante (200-400 pg/ml) . Los niveles de IL-lra en el suero se incrementan dramáticamente en los pacientes con padecimientos inflamatorios agudos o crónicos, ciertos cánceres, padecimientos infecciosos y choque séptico (Fisher et al., Blood 79:2196-2200, 1992), cirugía mayor para el padecimiento de Hirshsprung (O Nuallain et al., Clin. Exp. I munol 93:218-222, 1993), el padecimiento del hígado (Sekiyama et al., Clin. Exp. Immunol. 98:71-77, 1994), el padecimiento de Hodgkin (Gruss et al., Lancet 340:968, 1992), y colitis (Hyams et al., Dig. Dis. Sci. 39:1893-1899, 1994). Otros padecimientos crónicos y agudos también inducen la producción local de IL-lra, por ejemplo, artritis reumatoide (Firestein et al., J. Immunol, 149:1054-1062, 1992), artritis de Lyme (Miller et al., Lancet 341:146-148, 1993) y el padecimiento de Crohn no perforante (Gilberts et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 91:12721-12724, 1994). La inducción de la endotoxemia en voluntarios humanos induce el exceso en 100 veces de la IL-lra sobre la IL-lß en el suero, sin embargo, este nivel es aún aparentemente insuficiente para abolir la actividad de la IL-1 in vivo (Granowitz et al., Lancet 338:1423-1424, 1991). Numerosos experimentos han mostrado el potencial para la inyección intravenosa sistémica de IL-lra para atenuar los efectos de la IL-1 o LPS administrada en modelos de animales de endotoxemia o sinovitis (Dinarello and Thompson, Immunol, Today 12:404-410, 1991). Cuando los anticuerpos para la IL-Ira se administraron vía intravenosa en un modelo de colitis inducido por formalina en conejos hubo una exacerbación significativa de la inflamación intestinal y la mortalidad (Ferretti et al., J. Clin. Invest, 94:449-453, 1994). Se ha investigado la IL-lra para usarse en el tratamiento de varios padecimientos inflamatorios crónicos severos que incluyen: artritis reumatoide (Henderson et al., Cytokine 3:246-249, 1991), leucemia mielógena crónica (CML) (Schiro et al., Blood 83:460-465, 1994), y padecimiento inflamatorio del intestino (IBD) (Cominelli et al., Gastroenterology 103:65-71, 1992). Alguna evidencia sugiere también que la IL-lra puede ser útil en el tratamiento de la psoriasis. La piel normal expresa la IL-lra principalmente en el estrato granuloso diferenciado de la epidermis, mientras que la piel psoriática expresa la IL-lra en las capas medio-basales, básales (Hammerberg et al., J. Clin. Invest 90:571-583, 1992). Los cambios en la relación IL-l :IL-lra en los estratos diferentes de la epidermis puede afectar la proliferación y diferenciación de los queratinocitos. El padecimiento del intestino inflamatorio crónico también puede involucrar una relación IL-l:IL-lra alterada puesto que se incrementa marcadamente en el padecimiento de Crohn Y la colitis ulcerativa (Cominelli et al., Cytokine 6:A171, 1994). La evidencia experimental también sugiere que la IL-lra puede ser útil en las neuropatías cerebrales crónica y aguda (Relton et al., Exp. Neurol. 138:206-213, 1996; Loddick et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 234:211-215, 1997), la diabetes mellitus dependiente de la insulina (Madrup-Polsen et al., Cytokine 5:185-191, 1993), glomerulonefritis (Lan et al., Kidney Int. 47:1303-1309, 1995), y pancreatitis (Norman et al., Ann. Surg. 221:625, 1995) .

Se ha reportado la producción incrementada de IL-1 en los pacientes con varias infecciones virales, bacterianas, fúngicas y parasíticas; coagulación intravascular; terapia IL-2 de alta dosis; tumores sólidos; leucemias, padecimiento de Alzheimer; infección por VIH; padecimientos autoinmunes; trauma (cirugía); hemodiélisis; padecimientos isquémicos (infarto al miocardio) ; hepatitis no infecciosa; asma; radiación por UV; daño interno en la cabeza; pancreatitis; peridontitis; padecimiento de injerto contra huésped; rechazo al transplante; y en sujetos sanos después de ejercicio extenuante (Dinarello, Blood 87:2095-2147, 1996). Se ha demostrado que la IL-lra recombinante es bien tolerada en los ensayos clínicos en humanos (Campion et al., Artritis and Rhematism 39:1092-1101, 1996) y ser potencialmente eficaz en el tratamiento de choque séptico (Fisher et al., JAMA 271:1836-1843, 1994), artritis reumatoide (Campion et al., Arthritis & Rheumatism 39:1092-1101, 1996) y el padecimiento de injerto contra huésped (GVHD) (Antin et al., Blood 84:1342-1348, 1994). Sin embargo, se requieren a menudo altas concentraciones de la molécula en suero debido a la afinidad de enlace del receptor, la vida media en el plasma y la permeabilidad del tejido. Así, existe una necesidad en la técnica para moléculas adicionales que modulen los procesos inflamatorios y otros procesos inmunológicos. BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona una familia de nuevos homólogos de interleucina -1 (IL-1), así como materiales y métodos para preparar los homólogos de IL-1, la composiciones que los comprenden, y los métodos para usarlos. Dentro de uno de sus aspectos, la invención proporciona así una proteína aislada que comprende una secuencia de residuos de aminoácidos seleccionados del grupo que consiste de los residuos 60 hasta 218 de la SEC ID NO: 7 y los residuos 1 hasta 157 de la SEC ID NO: 10. Dentro de una modalidad de la invención, los residuos de aminoácidos que corresponden al número de residuo 200 de la SEC ID NO: 2 es Lys. Dentro de otra modalidad de la invención, el residuo de aminoácidos que corresponden al residuo número 200 de la SEC ID NO: 2 es Asp. Dentro de una modalidad adicional de la invención, el residuo de aminoácidos que corresponde al residuo número 200 de la SEC ID NO: 2 es Glu. Dentro de una modalidad adicional de la invención la proteína comprende los residuos 60 hasta 218 de la SEC ID NO: 11. Las proteínas ejemplares en relación a esto incluyen aquellas que comprenden los residuos 60 hasta 218 de la SEC ID NO: 14 o SEC ID NO: 2. Dentro de modalidades adicionales de la invención la proteína comprende los residuos 1 hasta 218 de la SEC ID NO: 11 o los residuos 1 hasta 157 de la SEC ID NO: 12. Las proteínas ejemplares en relación a esto incluyen aquellas que comprenden los residuos 1 hasta 218 de la SEC ID NO: 14, los residuos 1 hasta 218 de Aa SEC ID NO:2, los residuos 1 hasta 157 de la SEC ID NO: 15, o los residuos 1 hasta 157 de la SEC ID NO: 9. Dentro de otras modalidades, la proteína es desde 157 hasta 1500 residuos de aminoácidos de longitud. Las proteínas pueden adicionalmente comprender una o más etiquetas de afinidad. Dentro de un segundo aspecto de la invención, se proporciona un polinucleótido aislado que codifica una proteína que comprende una secuencia de residuos de aminoácidos seleccionados del grupo que consiste de los residuos 60 hasta 218 de la SEC ID NO: 7 y los residuos 1 hasta 157 de la SEC ID NO: 10. Dentro de una modalidad el polinucleótido aislado es el ADN. Dentro de otras modalidades la proteína codificada por el polinucleótido comprende una secuencia de residuos de aminoácidos seleccionados del grupo que consiste de los residuos 60 hasta 218 de la SEC ID NO: 11 y los residuos 1 hasta 157 de la SEC ID NO: 12. Las proteínas ejemplares incluyen aquellas que comprenden los residuos 1 hasta 218 de la SEC ID NO: 14, los residuos 1 hasta 218 de la SEC ID: 2, los residuos 1 hasta 157 de la SEC ID NO: 15 o los residuos 1 hasta 157 de la SEC ID N0:9. Dentro de un tercer aspecto de la invención se proporciona un vector de expresión que comprende los siguientes elementos enlazados operablemente: un promotor de transcripción, un segmento de ADN que codifica una proteína como se describió arriba; y un terminador de transcripción. Dentro de una modalidad el vector además comprende una secuencia de señal secretoria enlazada operablemente a dicho segmento de ADN. Dentro de un cuarto aspecto de la invención, se proporciona una célula cultivada que comprende un vector de expresión' de acuerdo a la descripción anterior. También se proporciona un método para preparar una proteína que comprende cultivar la célula bajo condiciones en donde el segmento de ADN se expresa, y recuperar la proteína codificada por dicho segmento de ADN. Dentro de un quinto aspecto de la invención se proporciona un método para modular una respuesta inmune en un animal que comprende administrar a dicho animal una composición que comprende una proteína como se describió arriba en combinación con un vehículo aceptable farmacéuticamente . Estos y otros aspectos de la invención se volverán evidentes luego de la referencia a la siguiente descripción detallada de la invención y los dibujos anexos. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Las figura la-e sen un pe il de hidrofilicidad de Hopp/ oods de la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID NO: 2. El perfil se basa en una ventana de seis residuos deslizantes. Los residuos escondidos G, S y T y los residuos expuestos H, Y y . Estos residuos se indican en la figura por subíndices. La figura 2 es una alineación de dos formas empalmadas alternativamente de la zilla4 humana (SEC ID NO: 2 y la SEC ID NO: 9). Los residuos de aminoácidos se representan por los códigos estándar de una letra. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN El término "etiqueta o marca de afinidad" se usa aquí para denotar un segmento de polipéptido que se puede unir a un segundo polipéptido para proporcionar purificación del segundo polipéptido o proporcionar sitios de unión del segundo polipéptido a un substrato. De forma principal, cualquier polipéptido o proteína para el cuál está disponible un anticuerpo u otro agente de enlace específico, se puede utilizar como una marca o etiqueta de afinidad. Las marcas o etiquetas de afinidad incluyen un tracto de poli-histidina, la proteína A (Nilsson et al., EMBO J. 4:1075, 1985; Nilsson et al., Methods Enzymol. 198:3, 1991), la transferasa de glutationa S (Smith and Jonson, Gene 67:31, 1988), etiqueta de afinidad Glu-Glu (Grussenmeyer et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 82:7952-4, 1985) (SEC ID NO:42), la substancia P, el péptido Flag™ (Hopp et al., Biotechnology 6:1204-1210, 1988), el péptido de enlace a la estreptavidina, la proteína de enlace a la maltosa (Guan et al., Gene 67:21-30, 1987), la proteína de enlace a la celulosa, tioredoxina, ubiquitina, polimerasa T7 u otros epítopes antigénicos o dominios de enlace. Ver , en general, Ford et al., Protein Expression and Purification 2:95-107, 1991) . Los ADN que codifican las etiquetas de afinidad u otros reactivos están disponibles de proveedores comerciales (por ejemplo, Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ; New England Biolabs, Beverly, MA; Eastman Kodak, New Haven, CT) . El término "variante alélica" se usa aquí para denotar cualquiera de dos o mas formas alternativas de un gen que ocupa el mismo locus o sitio cromosómico. La variación alélica surge naturalmente a través de la mutación, y puede resultar en polimorfismos fenotípicos dentro de las poblaciones. Las mutaciones de gen pueden ser silentes ( sin cambio en el polipéptido codificado) o pueden codificar polipéptidos que tienen secuencias de aminoácido alterado. El término variante alélica se usa aquí también para denotar una proteína codificada por una variante alélica de un gen. El término "complemento de una molécula del polinucleótido" denota una molécula del polinucleótido que tiene una secuencia de base complementaria y orientación invertida en comparación a una secuencia de referencia. Por ejemplo, la secuencia 5'ATGCACGGG 3' es complementaria a la secuencia 5'CCCGTGCAT 3'. El término "corresponde a" cuando se aplica a las posiciones de los residuos de aminoácido en las secuencias, significa que corresponden a las posiciones en una pluralidad de secuencias, cuando las secuencias son alineadas óptimamente. El término "secuencia de nucleótido degenerado" se refiere a una secuencia de nucleótidos que incluyen uno o mas codones degenerados (comparados a una molécula de polinucleótido de referencia que codifica un polipéptido) .

Los codones degenerados contienen diferentes tripletes de nucleótidos, pero codifican el mismo residuo de aminoácido (por ejemplo., tripletes GAU y GAC que codifican cada uno Asp) . El término "vector de expresión" se usa para denotar una molécula de ADN, lineal o circular, que comprende un segmento que codifica un polipéptido de interés enlazado operablemente a segmentos adicionales que proporcionan su transcripción. Tales segmentos adicionales incluyen secuencias promotoras y de terminación, y también pueden incluir uno o mas orígenes de replicación, uno o mas marcadores seleccionables, un mejorador, una señal- de poliadenilación, etc. Los vectores de expresión son derivados generalmente de ADN de plásmido o viral, o pueden contener elementos de ambos. El término "aislado", cuando se aplica a un polinucleótido, denota que el polinucleótido se ha separado de su ambiente genético natural y así, esta libre de otras secuencias de codificación indeseadas o extrañas, y están en una forma adecuada para usarse dentro de los sistemas de producción de proteína generadas genéticamente. Tales moléculas aisladas son aquellas que se separan de su ambiente natural e incluyen ADNc y clones genómicos. Las moléculas de ADN aisladas de la presente invención están libres de otros genes los cuales están asociados de manera ordinaria, pero pueden presentarse naturalmente regiones sin traducir 5' y 3' tales como promotores y terminadores. La identificación de las regiones asociadas serán evidentes por un experto en la técnica (ver por ejemplo, Dynan and Tijan, Na ture 316: 774-78, 1985). Una proteína o polipéptido "aislado" es una proteína o polipéptido que se encuentra en una condición distinta a su ambiente natural, independiente del tejido y sangre animal. En una forma preferida, el polipéptido aislado está substancialmente libre de otro polipéptidos, particularmente de otros polipéptidos de origen animal. Se prefiere proporcionar los polipéptidos en una forma altamente purificada, por ejemplo., mayores que 95% de pureza, mas preferiblemente mayores que 99% de pureza. Cuando en este contexto se usa el término "aislado", no se excluye la presencia del mismo polipéptido en formas físicas alternativas, tales como dímeros o alternativamente formas derivadas o glicosiladas. Un "motivo" es una serie de posiciones de aminoácidos en una secuencia de proteína para la cual ciertos residuos de aminoácido sean requeridos. Un motivo define el conjunto de posibles residuos en cada posición.

El término "ligado o enlazado operablemente", cuando se refiere a segmentos de ADN, indica que los segmentos están arreglados de manera que su planeación este en función de futuros propósitos, por ejemplo, iniciar la transcripción en el promotor y proceder a través del segmento que codifica al terminador. El término "ortólogo" se refiere a un polipéptido o proteína obtenidos de una especie que es la contraparte funcional de una proteína o polipéptido de una especie diferente. Las diferencias de secuencia entre los ortólogos son el resultado de la clasificación o especiación. Un "polinucleótido" es un polímero de una hebra o doble hebra de bases desoxirribonucleótido o ribonucleótido leídas del extremo 5' al extremo 3' . Los polinucleótidos incluyen ARN y ADN, y pueden ser aislados a partir de fuentes naturales, sintetizados in vi tro, o preparados a partir de una combinación de moléculas sintéticas y naturales. Los tamaños de los polinucleótidos son expresados como pares de bases (abreviadas "bp") , nucleótidos ("nt") , o quilobases ("kb") . Cuando el contexto lo permite, los dos últimos términos pueden describir polinucleótidos que son de una o de doble hebra. Cuando el término se aplica a las moléculas de doble hebra, se usa para denotar su longitud total y se entenderá que es equivalente al término "pares de bases". Se reconocerá por aquellos expertos en la técnica que las dos hebras de un polinucleótido de doble hebra puede diferir ligeramente en su longitud y que las terminales del mismo pueden ser alternadas como resultado de la escisión enzimática; así, todos los nucleótidos que se encuentran dentro de una molécula de polinucleótido de doble hebra pueden no estar apareados. Tales extremos no apareados generalmente no excederán 20 nt en longitud. Un "polipéptido" es un polímero de residuos de aminoácidos unido por enlaces de péptido, bien sea producido sintéticamente o naturalmente. Los polipéptidos menores que aproximadamente 10 residuos de aminoácidos, se refieren comúnmente como "péptidos". El término "promotor" se usa aquí para que su significado reconocido en la técnica denote una porción de un gen que contiene las secuencias de ADN que proporcionan el enlace de polimerasa de ARN y la iniciación de la transcripción. Las secuencias del promotor se encuentran comúnmente, pero no siempre en las regiones de los genes que no codifican 5' . Una "proteína" es una macromolécula que comprende una o mas cadenas de polipéptido. Una proteína también puede comprender componentes no peptídicos, tales como grupos carbohidrato. Los carbohidratos y otros sustituyentes no peptídicos pueden ser añadidos a una proteína por la célula en la cual la proteína se produce, y variará con el tipo de célula. Las proteínas se definen aquí en términos de sus estructuras de cadenas básicas de aminoácidos; substituyentes tales como grupos carbohidrato que son generalmente no especificados, pero pueden estar presentes. El término "receptor" denota una proteína asociada con una célula que enlaza a una molécula bioactiva (por ejemplo., un ligando) y media el efecto del ligando en la célula. El término "secuencia de señal secretora" denota una secuencia de ADN que codifica un polipéptido (un "péptido secretor") que, como un componente de un polipéptido más largo, dirige el polipéptido más largo a través de una vía secretoria de una célula en la cual se sintetizó. El polipéptido más largo se escindió comúnmente para eliminar el péptido secretor durante el transito a través de la vía secretora. Un "segmento" es una porción de una molécula más larga (por ejemplo, polinucleótido o . polipéptido) que tiene atributos especificados. Por ejemplo., un segmento de ADN que codifica un polipéptido especificado es una porción de una molécula de ADN larga, tal como un plásmido o fragmento de plásmido, que, cuando se lee de la dirección 5' a 3' , codifica la secuencia de aminoácidos del polipéptido especificado. El término "variante de empalme" se usa aquí para denotar las formas alternativas de ARN transcritas de un gen. Las variaciones de empalme se presentan naturalmente a través del uso de sitios alternativos de empalme dentro de una molécula de ARN transcrita, o menos comúnmente entre moléculas de ARN transcritas separadamente, y pueden resultar en varias ARNm transcritas a partir del mismo gen. Las variantes de empalme pueden codificar polipéptidos que tienen secuencia de aminoácidos alterada. El término variante de empalme se usa también aquí para denotar una proteína codificada mediante una variante de empalme de un ARNm transcrito por un gen. Se comprenderá que los pesos moleculares y longitudes de los polímeros determinados mediante métodos analíticos imprecisos (por ejemplo; electroforesis en gel) serán valores aproximados. Cuando un valor se expresa como "aproximado" X o "aproximadamente" X, se entenderá que el valor establecido de X es exacto a ±10 %.

La presente invención proporciona un grupo de proteínas nuevas, llamadas "zilla4", las cuales son miembros de la familia IL-1. El análisis de una secuencia de zilla4 de humano representativa (SEC ID N0:1 y NO: 2) indica que esta proteína, similar a otros miembros de la familia, contiene una estructura esencial o de núcleo de 12 hebras ß arrolladas en un barril ß, con las hebras ß separadas una de otra mediante lazos o bucles. Los lazos o bucles entre estas hebras ß son ampliamente variables entre los miembros de la familia y se cree que están involucrados en el enlace del receptor. Estos lazos o bucles, que contienen cada uno al menos tres residuos de aminoácido y pueden contener hasta 17 residuos, no forman hélices o hebras ß, pero pueden (y frecuentemente lo hacen) contener vueltas o giros de ß. Con respecto a la SEC ID NO: 2, las 12 hebras ß son formadas por los residuos 60-64, 68-72, 77-79, 90-96, 108-113, 118-123, 132-138, 154-160, 165-169, 175-179, 187-189, y 201-204. Estas hebras se caracterizan por un alto contenido de residuos de aminoácidos hidrofóbicos (Leu, Val, Phe, y lie) . Los lazos o bucles incluyen residuos 65-67, 73-76, 80-89, 97-107, 114-117, 124-131, 139-153, 161-164, 170-174, 180-186, y 190-200.

Además, para los lazos o bucles y las hebras ß, las proteínas zilla4 se caracterizan por la presencia de motivos conservados en las posiciones correspondientes a (1) residuos 167-171 de la SEC ID NO:2, (2) residuos 173-177 de la SEC ID NO:2, (3) residuos 186-190 de la SEC ID NO:2, y (4) residuos 199-204 de la SEC ID NO:2. Estos motivos se muestran en la Tabla 1 usando el código de caracteres simples estándar para los residuos de aminoácidos. Los corchetes indican los residuos alternativos en una posición dada dentro del motivo. Tabla 1 La presente invención proporciona así, una familia de proteínas zilla4 como se muestra en la SEC ID NO: 7. La estructura de alto orden de la familia de proteínas IL-1 también puede ser visualizada como tres monómeros covalentes de 4 hebras montadas en una estructura de 12 hebras (un "trébol") . Cuando estos monómeros están sobrepuestos entre si, los residuos 90 (lie), 115 (Glu) y 200 (Glu) de la SEC ID NO: 2 ocupan posiciones similares en sus respectivos monómeros. Una segunda forma de empalme alternativa de zilla4 de humano se muestra en la SEC ID NO: 8 y la SEC ID NO: 9. La comparación de esta forma corta con la proteína de la SEC ID NO: 2 y el análisis de la secuencia genómica correspondiente indica que el ADN de la SEC ID NO: 8 carece de dos exones en comparación a la SEC ID NO:l. La secuencia de aminoácidos que se muestra en la SEC ID NO: 9 puede variar como se muestra en la Tabla 1. La invención proporciona así, una segunda familia de proteínas zilla4 como se muestra en la SEC ID NO:10. Las proteínas de la presente invención modulan las respuestas inmunológicas . Como se usa aquí, "respuesta inmunológica" incluye una o mas de la proliferación celular, diferenciación celular, maduración celular, y activación celular. La modulación de las respuestas inmunológicas incluyen la modulación de la inflamación. Estos indicadores de las respuestas inmunológicas son medidas mediante métodos conocidos en la técnica y se describen con mayor detalle aquí.

Se espera que las proteínas de la presente invención tengan una actividad pro-inflamatoria (agonista) o antiinflamatoria (antagonista) , dependiendo de la secuencia del aminoácido en particular. En general, las proteínas zilla4 que tienen un residuo Lys que corresponde a la posición 200 de la SEC ID NO:2 (posición 139 de la SEC ID NO: 9) tendrá una actividad anti-inflamatoria. Mientras aquellos que tienen un residuo Glu en esta posición tendrán actividad pro-inflamatoria. La actividad pro-inflamatoria pueden ser atenuada mediante la substitución de Asp por Glu en esta posición. Las variaciones de la secuencia en las posiciones que corresponden a los residuos 90 y 155 de la SEC ID NO: 2 (residuos 29 y 94 de la SEC ID NO: 9, respectivamente) pueden también influir en la actividad biológica. Dentro de ciertas modalidades de la presente invención también se incluyen las proteínas zilla4 que tienen Lys, Glu, o lie en una posición correspondiente al residuo 90 de la SEC ID NO: 2 y Ala, lie, o Thr en una posición correspondiente al residuo 155 de la SEC ID NO: 2. Las secuencias de las proteínas zilla4 que tienen substituciones en residuos de aminoácido correspondientes a las posiciones 90, 155, y 200 de la SEC ID NO: 2 se muestran en la SEC ID NO: 11 y la SEC ID NO: 12. Mientras no se desee limitarse la teoría, se cree que las proteínas zilla4 actúan a través de los receptores IL-1 o receptores homólogos IL-1. Estos receptores se caracterizan por la presencia de dominios de inmunoglobulina tipo C-2 e incluyen al receptor IL-1 tipo 1 (Sims et al., Proc. Na ti . Acad. Sci . USA 8_6: 8946-8950, 1989), receptor IL-1 tipo II (McMahan et al., EMBO J. 10:2821-2832, 1991), ST2 (Tominaga et al., Biochim . Biophys . Acta 1171:215-218, 1992), molécula de adhesión celular/proteína de enlace al opiode (Shark and Lee, Gene 155:213-217, 1995), y receptor FGF básico (Isacchi et al., Nuc. Acids Res . 18:1906, 1990; Dione et al., EMBO J. ^:2685-2692, 1990). Las actividades pro y anti inflamatorias pueden ser probadas usando pruebas o ensayos estándar de la actividad IL-1 conocidos en la técnica. Mientras no se desee limitarse por la teoría, los residuos Met en las posiciones 1, 12 y 43 de la SEC ID ?O:2 puede representar sitios de inicio de traducción alternativa. Los residuos 54 y 60 siguen sitios de procesamiento proteolítico potencial. La presente invención proporciona así, polipéptidos que comprenden residuos de aminoácidos 60-218 de la SEC ID ?O:7, preferiblemente residuos 60-218 de la SEC ID ?O:ll, mas preferiblemente residuos 60-218 de la SEC ID ?O:2 o SEC ID ?O:14. La invención también proporciona polipéptidos que comprenden residuos de aminoácidos 54-218 de la SEC ID NO: 7, preferiblemente residuos 54-218 de la SEC ID NO: 11, mas preferiblemente residuos 54-218 de la SEC ID NO: 2 o la SEC ID NO: 14. La invención también proporciona polipéptidos que comprenden residuos de aminoácido 43-218 de la SEC ID NO:7, preferiblemente residuos 43-218 de la SEC ID NO: 11, mas preferiblemente residuos 43-218 de la SEC ID NO: 2 o la SEC ID NO: 14; y polipéptidos que comprenden residuos de aminoácidos 12-218 de la SEC ID NO: 7, preferiblemente residuos 12-218 de la SEC ID NO: 11, mas preferiblemente residuos 12-218 de la SEC ID NO: 2 o SEC ID NO: 14. Estas proteínas comprenden motivos 1-4 descritos arriba en las posiciones correspondientes a los residuos 167-171, 173-177, 186-190, y 199-204, respectivamente, de la SEC ID NO:2. Además, las proteínas comprenden hebras ß en las posiciones correspondientes a los residuos 60-64, 68-72, 77-79, 90-96, 108-113, 118-123, 132-138, 154-160, 165-169, 175-179, 187-189, y 201-204 de la SEC ID NO: 2, en donde estas hebras ß están separadas entre sí mediante los lazos o bucles antes mencionados. Aquellos expertos en la técnica reconocerán que las modificaciones menores pueden ser elaboradas en las proteinas de la presente invención sin alterar la función biológica. Por ejemplo, mediante la variación de la longitud de varias regiones de la molécula, en particular los lazos o bucles y otras secuencias no definidas mediante hebras ß o motivos, la longitud de la proteína zilla4 pueden variar. Las extensiones pequeñas pueden también ser elaboradas en las hebras ß. Se prefiere limitar la extensión de las substituciones de aminoácido, inserciones, y eliminaciones de manera que las proteínas resultantes sean al menos 95% idénticas a los residuos 60-218 de la SEC ID NO: 7 o los residuos 1 a 157 de la SEC ID NO: 10. El por ciento de la identidad de secuencia se determina mediante los métodos convencionales. Ver, por ejemplo., Altschul et al., Bull . Ma th . Bio . _4_8: 603-616, 1986, and Henikoff and Henikoff, Proc. Na ti . Acad. Sci . USA 89: 10915-10919, 1992. De manera breve, dos secuencias de aminoácidos se alinean para optimizar los registros de alineamiento usando una penalidad por abertura de espacio de 10, una penalidad de extensión de abertura de 1, y la matriz de registro o puntuación "BLOSUM62" de Henikoff and Henikoff (ibid. ) como se muestra en la Tabla 2 (los aminoácidos se indican mediante los códigos de una letra) . El por ciento de identidad después se calcula como: Número total de apareamientos idénticos X 100 [longitud de la secuencia más larga más el número de espacios introducidos en la secuencia más larga para alinear las dos secuencias] •»- Ol *? (0 r. rt Ol Ol 0- r- V T 7 *? *? U. to T - l T- p- T u_ o i r^' -- ?- rj- ^ «O ^ T O ^ N I _? •* 1< N O «7 «)' 7 <? ': - CVJ ro — ** I «? <r- © <? C!' V ,? T7 «,> ro X » <? <? C1, T ,>^ ,:^ *?I ^^ ,? O ß |. f T f. ,? l? (. o <li (j n <? UJ ? f o <? <? -j- f <? , o , <? r e>? Ü a> C0 'V rt rt -?- -- O *- 0l rt '«- »- 0t 0l ">- O ß ^ o - T V ^ T T ^ ^ T O T -t rt *? z » *- '? o © ? '-- <? f © c>i ? ? ,- o ? '?i «"? 0C » o « «,? -j- o w o «? «* ? t '7 « '7 í? fi, c? < "* T í? íí, o -7 -7 ? '? '7 T V 'y ': -<- o «? o? e, < --- Z --- o s u ? _ _? --: S ?-. a OT H 5 v > El nivel de la identidad entre las secuencias de aminoácidos puede ser determinada usando el "FASTA" algoritmo de búsqueda de similaridad descrito por Pearson and Lipman ( Proc . Na ti . Acad. Sci . USA 85:244, 1988) y por Pearson (Meth . Enzymol . 183: 63, 1990). De manera breve, FASTA caracteriza primero la similaridad de secuencia mediante la identificación de regiones compartidas por la secuencia en cuestión (por ejemplo., la SEC ID NO: 2) y una secuencia de prueba que tiene ya sea la más alta densidad de identidades (si la variable ktup es 1) o pares de identidades (si ktup=2), sin considerar las substituciones, inserciones, o eliminaciones conservativas de aminoácidos. Las diez regiones con la alta densidad de las identidades son re-registradas mediante la comparación de la similaridad de todos los aminoácidos apareados usando una matriz de substitución de aminoácidos, y las terminaciones de las regiones son "ajustadas" para incluir solo aquellos residuos que contribuyen a un alto registro. Si hay varias regiones con registros mayores que el valor "próximo" (calculada mediante una fórmula predeterminada basada en la longitud de la secuencia y el valor ktup) , entonces las regiones iniciales ajustadas se examinaron para determinar en todo caso si las regiones se pueden unir para formar un alineamiento aproximado con espacios. Finalmente, las regiones de altos registros de las dos secuencias de aminoácidos se alinean usando una modificación del algoritmo Needleman-Wunsch-Sellers (Needleman and Wunsch, J. Mol . Biol.48: 444, 1970; Sellers, SIAM J. Appl . Ma th . 26:787, 1974), que permite las inserciones y eliminaciones de los aminoácidos. Los parámetros preferidos para el análisis FASTA son: ktup=l, penalidad por abertura de espacio = 10, penalidad por la extensión del espacio = 1, y matriz de substitución = BLOSUM62. Estos parámetros pueden ser introducidos en un programa FASTA mediante la modificación de la fila de matriz de registro ("SMATRIX") , como se explicó en el Apéndice 2 de Pearson, 1990 { ibid. ) . El FASTA también puede ser usado para determinar la identidad de secuencia de las moléculas de ácido nucleico usando una proporción como se describió arriba. Para las comparaciones de las secuencias de nucleótidos, el valor ktup puede estar en el rango de uno a seis, preferiblemente de tres a seis, mas preferiblemente tres, con otros conjuntos de parámetros establecidos automáticamente. Se prefiere sustituir un residuo de aminoácido con un residuo de carácter similar (una "substitución conservativa") . La matriz BLOSUM62 (Tabla 2) es una matriz de substitución de aminoácidos derivada de aproximadamente 2,000 alineamientos múltiples locales de segmentos de secuencia de proteína, que representa regiones altamente conservadas de más de 500 grupos de proteínas relacionadas (Henikoff and Henikoff, ibid. ) . Así, las frecuencias de substitución BLOSUM62 pueden ser usadas para definir las substituciones de aminoácidos conservativas que pueden ser introducidas en las secuencias de aminoácidos de la presente invención. Como se usó aquí, el término "substitución de aminoácido conservativa" se refiere a una substitución representada por un valor BLOSUM62 mayor que -1. Por ejemplo, una substitución de aminoácido es conservativa si la substitución se caracteriza por un valor BLOSUM62 de 0, 1,2, o 3. Las substituciones de aminoácido conservativas preferidas se caracterizan por un valor BLOSUM62 de al menos uno 1 ( por ejemplo., 1, 2 o 3) , mientras mas substituciones de aminoácido conservativas preferidas se caracterizan por un valor BLOSUM62 de al menos 2 ( por ejemplo; 2 o 3) . Las proteínas de la presente invención pueden también comprender residuos de aminoácidos que no se presentan naturalmente. Los aminoácidos que no se presentan naturalmente incluyen sin limitación, trans-3-metilprolina, 2, 4-metanoprolina, cis-4 -hidroxiprolina, trans-4-hidroxiprolina, N-metilglicina , allo-treonina, metiltreonina, hidroxietilcisteina, hidroxietilhomocisteina, nitroglutamina, homoglutamina, ácido pipecólico, ácido tiazolidin carboxílico, deshidroprolina, 3-y 4-metilprolina, 3, 3-dimetilprolina, tert-leucina, norvalina, 2-azafenilalanina, 3-azafenilalanina, 4-azafenilalanina, y 4-fluorofenilalanina. Varios métodos se conocen en la técnica incorporando residuos de aminoácidos que se presentan no naturalmente en las proteínas. Por ejemplo, un sistema in vitro puede ser empleado en donde las mutaciones no sentido (dirección 3' ) son suprimidas usado su ARNt supresor, aminoacilado químicamente. Los métodos para sintetizar aminoácidos y ARNt aminoacilantes se conocen en la técnica.

La transcripción y la traducción de plasmidos que contienen mutaciones no sentido (dirección 3' ) se llevan acabo en un sistema libre de células que comprende un extracto S30 de E. Coli y enzimas comercialmente disponibles y otros reactivos. Las proteínas son purificadas mediante cromatografía. Ver, por ejemplo., Robertson et al; J. Am . Chem . Soc . 113:2722, 1991; Ellman et al; Methods Enzymol . 202:301, 1991; Chung et al., Science 259:806-9, 1993; and Chung et al., Proc . Na ti . Acad. Sci . USA 90:10145-9, 1993). En un segundo método, la traducción se lleva a cabo en oocitos de Xenopus mediante la microinyección de ARNm mutante y ARNt supresor aminoacilado químicamente (Turcatti et al., J. Biol . . Chem . 271:1991-8, 1996). Dentro del tercer método, las células E. Coli se cultivaron en ausencia de un aminoácido natural que va a ser reemplazado (por ejemplo., fenilalalina) y en la presencia de los aminoácidos deseados que no se presentan naturalmente (por ejemplo., 2-azafenilalanina, 3-azafenilalanina, 4-azafenilalalnina, o 4- fluorofenilalanina) . Los aminoácidos que no se presentan naturalmente se incorporan en la proteína en lugar de su contraparte natural. Ver, Koide et al., Biochem . 33 : 7470-6, 1994. Los residuos que se presentan naturalmente pueden ser convertidos a especies que no se presentan de forma natural mediante modificación química in vi tro. La modificación química puede ser combinada con mutagénesis dirigida al sitio para expandir adicionalmente el rango de las substituciones (Wynn and Richards, Protein Sci . 2:395-403, 1993) . Dentro de la presente invención los cambios de la secuencia de aminoácidos pueden ser elaborados en la secuencia zilla4 mostrada en la SEC ID NO: 2 para obtener otras proteínas zilla4. Estos cambios son elaborados para minimizar el rompimiento de la estructura de alto orden esencial en la actividad biológica. En particular, el arreglo de las hebras ß y los lazos no se romperán, así, se prefiere elaborar substituciones de aminoácido conservativas dentro de las hebras ß, particularmente cuando se reemplazan los residuos hidrofóbicos. Aquellos expertos en la técnica reconocerán que los residuos hidrofóbicos y aromáticos pueden substituirse algunas veces por otros en una secuencia. Por ejemplo, la fenilalanina se presenta en motivos 1, 2, 3, y 4 como se describió arriba, en donde se cree que sirven con una función hidrofóbica. Los efectos de los cambios de la secuencia de aminoácidos pueden ser predichos mediante modelos por computadora usando un programa adecuado (por ejemplo., el visor Insight II® y las herramientas de modelación de homología; MSI, San Diego, CA) o determinados mediante el alineamiento y análisis de las estructuras de cristal. Ver, Priestle et al., EMBO J. 1_: 339-343, 1988; Priestle et al., Proc. Na ti . Acad. Sci . USA 86:9667-9671, 1989; Finzel et al., J. Mol . Biol . 209:779-791, 1989; Graves et al. , Biochem . 29:2679-2684, 1990; Clore and Gronenborn, J. Mol . Biol . 221:47-53, 1991; Vigers et al., J. Biol . . Chem . 269:12874-12879, 1994; Schreuder et al., Eur. J. Biochem . 227:838-847, 1995; and Schreuder et al., Nature 386:194-200, 1997. Un perfil de hidrofilicidad de la SEC ID NO: 2 se muestra en la figura 1. Aquellos expertos en la técnica reconocerán que la hidrofobicidad y la hidrofilicidad serán tomadas en cuenta cuando se diseñen las alteraciones en la secuencia de aminoácidos de un polipéptido zilla4, de modo que no se rompa el perfil completo. El alineamiento de zilla4 con otros miembros de la familia proporciona también la guía en la selección de las substituciones de aminoácidos, particularmente si está disponible la información acerca de los efectos de las substituciones de aminoácido en otros miembros de la familia. Por ejemplo, el alineamiento sugiere que el residuo 200 (Glu) puede ser reemplazado con Lys, que resulta en un cambio en la actividad de agonista a antagonista (Ju et al., Proc . Na ti . Acad. Sci . USA 88^:2658-2662, 1991; Oldfield et al., Protein Eng. 6:865-871, 1993). Esta variante de la SEC ID NO: 2 (designada "zilla4-E200K") se muestra en la SEC ID NO: 14. Una variante correspondiente de la SEC ID NO: 9 se muestra en la SEC ID NO: 15. Se prefiere en general no alterar las secuencias de los lazos o bucles debido a que se cree que las regiones de la molécula son importantes para el enlace del receptor, no obstante, los residuos 170, 171, 174, 186, 190, 199, y 200 de la SEC ID NO:2 pueden ser substituidos dentro de los límites de los motivos definidos aquí. Sin embargo, la alteración adicional de los lazos o bucles puede ser usada para generar herramientas para la investigación de la especificidad de enlace del receptor y otros aspectos de la biología de la interleucina. Los aminoácidos esenciales en las proteínas de la presente invención pueden ser identificados de acuerdo a los procedimientos conocidos en la técnica, tal como la mutagénesis dirigida al sitio o mutagénesis con exploración de alanina (Cunningham and Wells, Science 224, 1081-1085, 1989; Bass et al., Proc. Nati. Acad. Sci . USA 88:4498-4502, 1991) . En la técnica moderna, las mutaciones de alanina simple se introducen en cada residuo en la molécula, y las moléculas mutantes resultantes se probaron para su actividad biológica u otras propiedades para identificar los residuos de aminoácido que son críticos para la actividad de la molécula. Las substituciones de aminoácidos pueden ser elaboradas y probadas usando métodos conocidos de mutagénesis y selección, tales como aquellos descritos por Reidhaar-Olson and Sauer ( Science 241: 53-57, 1988) o Bowie and Sauer ( Proc . Na ti . Acad. Sci . USA 86:2152-2156, 1989). De manera breve, los autores describen los métodos para aleatorizar simultáneamente dos o mas posiciones en un polipéptido, seleccionando un polipéptido funcional, y después secuenciar los polipéptidos mutagenizados para determinar el espectro de las substituciones disponibles en cada posición. Otros métodos que pueden ser usados incluyen (por ejemplo, Lowman et al., Biochem.. 30:10832-10837, 1991; Ladner et al., patente norteamericana No. 5,223,409; Huse, WIPO Publicación WO 92/06204) y mutagénesis dirigida a la región (Derbyshire et al., Gene 46:145, 1986; Ner et al., ADN 1_: 121 , 1988). Las variantes de ADN de la zilla4 descritos y las secuencias de los polipéptidos pueden ser generados a través de la reestructuración del ADN como se describió por Stemmer, Na ture 370:389-391, 1994 and Stemmer, Proc. Na ti . Acad. Sci . USA 91:10747-10751, 1994. De manera breve, los genes variantes se generaron mediante la recombinación homologa in vi tro mediante la fragmentación aleatoria de un gen de origen seguido por la reunión usando PCR, que resulta en las mutaciones de punto introducidas aleatoriamente. Esta técnica puede ser modificada usando una familia de genes de origen, tales como variantes alélicas o genes de clases diferentes, para introducir variabilidad adicional en los procesos. La selección o clasificación para la actividad deseada, seguida por iteraciones adicionales o mutagénesis y pruebas, proporcionan una rápida "evolución" de las secuencias seleccionando mutaciones deseables mientras que se seleccionan simultáneamente contra cambios nocivos. Los métodos de mutagénesis descritos arriba se pueden combinar con métodos de selección de alto volumen o alta eficiencia para detectar la actividad biológica de las proteínas variantes de zilla4. Las moléculas de ADN mutagenizadas que codifican las proteínas zila 4 activas se pueden recuperar de las células hospederas y secuenciar rápidamente usando un equipo moderno. Estos métodos permiten la determinación rápida de la importancia de los residuos de aminoácidos individuales en un polipéptido de interés y se pueden aplicar a los polipéptidos de estructura desconocida. Los ensayos para la actividad biológica de la IL-1 y el enlace del receptor son conocidos en la técnica. Los ensayos de actividad ejemplar incluyen los ensayos de mitogénesis en los cuales las células responsivas a la IL-1 (por ejemplo, células D10.N4.M) se incuban en la presencia de IL-1 o una proteína zilla4 de prueba durante 72 horas a 37 °C en una atmósfera de C02 al 5%. Se agrega IL-2 (y opcionalmente IL-4) al medio de cultivo para mejorar la sensibilidad y especificidad en el ensayo. Entonces se agrega [3H] timidina y la incubación se continúa durante 6 horas. La cantidad de etiqueta incorporada es indicativa de la actividad agonista. Ver, Hopkins and Humprhreys, J. Immunol. Methods 120:271-276, 1989; Greenfeder et al., J. Biol. Chem. 270:22460-22466, 1995. La estimulación con Zilla4 de la proliferación celular también se puede medir usando timocitos cultivados en una proteína zilla4 en combinación con fitohemaglutinina. La proliferación se detecta como incorporación de 3H-timidina o a través del uso de un ensayo colorimétrico basado en el desdoblamiento metabólico del bromuro de 3- (4, 5-dimetiltiazol-2-il) -2, 5-difenil tetrazolio (NTT) (Mosman, J. Immunol. Meth. 65:55-63, 1983) . De manera breve, se agrega una solución de MTT a 100 µl de células de ensayo y las células se incuban a 37°C. Después de 4 horas, se agregan 200 µl de HCL 0.04N en isopropanol, la solución se mezcla, y se mide la absorbancia a 570 nm. Se puede medir el enlace del receptor por el método de enlace competitivo de Labriola-Tompkins et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 88:11182-11186, 1991. De manera breve, se incuban las membranas preparadas a partir de células de timoma EL-4 (Paganelli et al., J. Immunol. 138:2249-2253, 1987) en la presencia de la proteína de prueba durante 30 minutos a 37°C. Se agregan IL-la o IL-lß etiquetadas, y la incubación se continúa durante 60 minutos. El ensayo se termina mediante filtración por membrana. Se determina la cantidad de etiqueta enlazada mediante medios convencionales (por ejemplo, por el contador ?) . En un ensayo alternativo, se mide la capacidad de la proteína zilla4 para competir con la IL-1 etiquetada para enlazarse a los fibroblastos dérmicos humanos cultivados, de acuerdo al método de Dower at al. (Nature 324:266-268, 1986). De manera breve, la células se incuban en una placa de 96 pozos de fondo redondo, en un medio de cultivo adecuado (por ejemplo, RPMI 1640 que contiene BSA al 1%, azida de sodio al 0.1% y HEPES 20 mM, pH 7.4) a 8°C en una plataforma de agitación en la presencia de IL-1 etiquetada. Se agregan varias concentraciones de la proteína zilla4. Después de la incubación (típicamente aproximadamente dos horas) , las células se separan de la etiqueta no enlazada mediante centrifugación de alícuotas de 60µl hasta 200 µl de aceites de ftalato en tubos de centrífuga con 400 µl de polietileno y se cortan las puntas de los tubos con una hoja de afeitar como se describe por Segal y Hurwitz, J. Immunol. 118:1338-1347, 1977. El enlace del receptor también se puede medir usando los receptores inmovilizados o los fragmentos del receptor enlazado al ligando. Por ejemplo, un receptor IL-1 inmovilizado se puede exponer a la IL-1 etiquetada y a la proteína de prueba no etiquetada, por lo que una reducción en el enlace de la IL-1 comparado a un control es indicativo de la actividad de enlace del receptor en la proteina de prueba. Dentro de otro formato, se inmoviliza un receptor o un receptor de enlace al ligando en un biosensor (por ejemplo, BIACore®, Pharmamcia Biosensor, Piscataway, NJ) y se determina el enlace. Los ADNc clonados que codifican a los receptores IL-1 humanos y de ratón se describen por Dower et al., patente norteamericana No. 5,081,228. Los antagonistas de IL-1 exhibirán el enlace al receptor pero no exhibirán esencialmente actividad de IL-1 en los ensayos o reducirán la respuesta mediada por IL-1 cuando se combina con IL-1. En vista del bajo nivel de ocupación requerido para producir una respuesta a la IL-1, puede ser necesario un gran exceso del antagonista (típicamente de 10 a 1000 veces de exceso molar) para neutralizar la actividad de la IL-1. La activación celular se puede ensayar midiendo la expresión de las moléculas de adhesión o las citocinas por las células responsivas. Se conoce que las moléculas de adhesión tales como las ICAM, VCAM y la E-selectina sobre las células endoteliales son inducidas por la IL-lß y otras citocinas (Collins et al., J. Biol.. Chem. 267:1623-16329, 1992; lademarco et al., J. Biol. Chem. 267:1623-16329, 1992; Voraberger et al., J. Immunol. 147:2777-2786, 1991). En varias combinaciones, estas y otras moléculas soportan la adhesión de los leucocitos a las paredes de los vasos y la extravasación, los cuales son las etapas claves en la respuesta a la infección, la inflamación y el daño al tejido (Bevilacqua, Annu. Rev. Immunol. 11:767-804, 1993). Las células endoteliales de las venas umbilicales humanas (HUVEC) se cosechan a partir de venas del cordón umbilical y se establecen en cultivos primarios por métodos que son bien conocidos en el arte. La sobre-regulación de las moléculas de adhesión se puede medir por métodos citométricos de flujo utilizando anticuerpos específicos para estos marcadores de superficies celulares, mediante un ensayo tipo ELISA, o midiendo la adherencia a las células inmunes tales como los monocitos, las células T, o los neutrófilos. Se pueden usar células aisladas para este propósito, como pueden ser células inmortalizadas derivadas de estas líneas, tales como THP-1, U-937, HL-60 o células Jurkat. La expresión de estas moléculas de adhesión se puede medir en la presencia o ausencia de IL-lß u otras citocinas. Las células T, las células asesinas naturales (NK) , y los monocitos/macrófagos son los principales productores de citocinas (Cassatellas, Immunology Today 16:21-26, 1995). La liberación de citocina se puede inducir en estas células por varios estímulos inflamatorios y se puede medir mediante ensayos como se describió por Parrilo, N. Engl. J. Med. 328:1471-1477, 1993 o Eperon and Jungi, J. Immunol. Methods. 194:121-129, 1996. Uno de tales ensayos utiliza la línea de células monocíticas THP-1 inducidas por lipopolisacáridos (LPS) . La liberación de citocinas se puede detectar por inmunoensayo, tal como ELISA utilizando anticuerpos específicos para la citocina de interés. Tanto la activación como la inhibición de la liberación de citocinas se puede medir por estos métodos. Ver, Sandborg et al., J. Immunol . 155:5206-5212, 1995. Las proteínas de la presente invención pueden además comprender extensiones de amino- o carboxilo-terminales, tales como un residuo de metionina amino-terminal, un péptido enlazador pequeño de hasta aproximadamente 20-25 residuos, o una etiqueta de afinidad como se discutió arriba. Se pueden usar dos o más etiquetas de afinidad en combinación. Los polipéptidos que comprenden etiquetas de afinidad pueden además comprender un enlazador de polipéptido y/o un sitio de escisión proteolítico entre el polipéptido zilla4 y la etiqueta de afinidad. Los sitios de escisión preferidos incluyen los sitios de escisión de la trombina y los sitios de escisión del factor Xa. La presente invención proporciona una variedad de otras fusiones de polipéptidos. Por ejemplo, un polipéptido de zilla4 se puede preparar como una fusión a una proteína dimerizante como se describe en la patentes norteamericanas Nos. 5,155,027 y 5,567,584. Las proteínas dimerizantes preferidas en relación a esto incluyen dominios de regiones constantes de inmunoglobulina. Las fusiones de inmunoglobulina-polipéptido zilla4 se pueden expresar genéticamente en células producidas por ingeniería genética para producir una variedad de análogos multiméricos de zilla4. Además, un polipéptido zilla4 se puede unir a otra molécula bioactiva, tal como una citocina, para proporcionar una molécula multi-funcional . Una o más hélices de un polipéptido zilla4 se pueden unir a otra citocina para mejorar o de otra forma modificar sus propiedades biológicas. Los dominios auxiliares se pueden fusionar a los polipéptidos zilla4 para dirigirlos hacia células, tejidos o macromoléculas específicas (Por ejemplo, colágeno) . Por ejemplo, un polipéptido o proteína zilla4 se puede dirigir hacia un tipo predeterminado de célula mediante la fusión de un polipéptido zilla4 a un ligando que se enlaza específicamente a un receptor sobre la superficie de la célula objetivo. De esta manera, los polipéptidos y proteínas pueden ser dirigidos a objetivos con propósitos terapéuticos o de diagnóstico. Un polipéptido zilla4 se puede fusionar a dos o más porciones, tal como una etiqueta de afinidad para purificación y un dominio de objetivo. Las fusiones de polipéptidos también pueden comprender uno o más sitios de escisión, particularmente entre los dominios. Ver, Tuan et al., Connective Tissue Research 34:1-9, 1996. Las fusiones de polipéptidos de la presente invención contendrán generalmente no más de aproximadamente 1,500 residuos de aminoácidos, preferiblemente no más de aproximadamente 1,200 residuos, más preferiblemente no más. de aproximadamente 1,000 residuos, y en muchos casos será considerablemente menor. Por ejemplo, un polipéptido zilla4 de 218 residuos (por ejemplo, residuos 1-218 de la SEC ID NO: 2) se puede fusionar a la ß-galactosidasa de E. Coli (1,021 residuos; ver Casadaban et al., J. Bacteriol. 143:971-980, 1980), un espaciador de 10 residuos, y un sitios de escisión del factor Xa de 4 residuos para generar un polipéptido de 1,253 residuos. En un segundo ejemplo, los residuos 60-218 de la SEC ID NO: 14 se pueden fusionar a la proteína de enlace a la maltosa (aproximadamente 370 residuos) , un sitio de escisión de 4 residuos, y una etiqueta de polihistidina de 6 residuos. La presente invención además proporciona moléculas de polinucleótidos que incluyen las moléculas de ADN y ARN, que codifican las proteínas zilla4. Los polinucleótidos de la presente invención incluyen la hebra sentido (dirección 5' ) ; la hebra anti-sentido (dirección 3'); y el ADN de doble hebra, que tiene tanto las hebras sentido como anti-sentido hibridizadas por tratamiento con calor y frío junto con los enlaces de hidrógeno. Las secuencias de ADN representativas que codifican las proteínas zilla4 se establecen en las SEC ID NO:l, SEC ID NO: 8 y SEC ID NO: 13. Las secuencias de ADN adicionales que codifican estas y otras proteínas zilla4 se pueden generar fácilmente por aquellos con habilidades ordinarias en la técnica en base al código genético. Las secuencias de ARN de contraparte se pueden generar mediante substitución de U por T. Aquellos hábiles en la técnica reconocerán fácilmente que, en vista de la degeneración del código genético, es posible la variación considerable de la secuencia entre estas moléculas de polinucleótidos. La SEC ID NO: 16 es una secuencia de ADN degenerado que engloba todos los ADN que codifican el polipéptido zilla4 de la SEC ID NO: 2. La SEC ID NO: 17 es una secuencia de ADN degenerado que engloba todos los ADN que codifican el polipéptido zilla4 de la SEC ID NO: 14. La SEC ID NO: 18 y la SEC ID NO: 19 son secuencias de ADN degenerado que engloban todos los ADN que codifican los polipéptidos zilla4 de la SEC ID NO: 9 y la SEC ID NO: 15, respectivamente. Aquellos hábiles en la técnica reconocerán que la secuencias degeneradas de la SEC ID NO: 16, la SEC ID NO: 17, la SEC ID NO: 18, y la SEC ID NO: 19 también proporcionan todas las secuencias del ARN que codifican la SEC ID NO:2, la SEC ID NO:14, la SEC ID NO:9 y la SEC ID NO: 15, respectivamente substituyendo U por T. Así, los polinucleótidos que codifican el polipéptido zilla4 comprenden el nucleótido 1 al nucleótido 654 de la SEC ID NO: 16, el nucleótido 1 al nucleótido 654 de la SEC ID NO: 17, el nucleótido 1 al nucleótido 471 de la SEC ID NO: 18, el nucleótido 1 al nucleótido 471 de la SEC ID NO: 19, las porciones de estas secuencias que codifican las proteínas zilla4 más cortas como se describió arriba, y sus respectivos ARN equivalentes se contemplan por esta invención. La tabla 3 establece los códigos de una letra usados dentro de la SEC ID NOS: 16-19 para denotar las posiciones de los nucleótidos degenerados. Las "resoluciones" son los nucleótidos denotados por una letra del código. El "complemento" indica el código para los nucleótidos complementarios. Por ejemplo, el código Y denota ya sea C o T, y su complemento R denota A o G, siendo A complementaria a T, y G siendo complementaria a C.

TABLA 3 Nucleótido Resolución Nucleótido Complemento A A T T C C G G G G C C T T A A R A|G Y C|T Y C|T R A|G M A|C K G|T K G|T M A|C S C|G S C|G W A|T W A|T H A|C|T D A|G|T B CIGIT V A|C|G V A|C|G B C | G | T D A|G|T H A|C|T N A|C|G|T N A|C|G|T Los codones degenerados usados en la SEC ID NOS: 16-19 que abarcan todos los codones posibles para dar un aminoácido, son mostrados en la Tabla 4.

TABLA 4 Código de Codón Aminoácido Codones una letra degenerado Cys C TGC TGT TGY Ser S AGC AGT TCA TCC TCG TCT WSN Thr T ACA ACC ACG ACT ACN Pro P CCA CCC CCG CCT CCN Ala A GCA GCC GCG GCT GCN Gly G GGA GGC GGG GGT GGN Asn N AAC AAT AAY Asp D GAC GAT GAY Glu E GAA GAG GAR Gln Q CAÁ CAG CAR His H CAC CAT CAY Arg R AGA AGG CGA CGC CGG CGT MGN Lys K AAA AAG AAR Met M ATG ATG He I ATA ATC ATT ATH Leu L CTA CTC CTG CTT TTA TTG YTN Val V GTA GTC GTG GTT GTN Phe F TTC TTT TTY Tyr Y TAC TAT TAY Trp W TGG TGG Ter • TAA TAG TGA TRR Asn | Asp B RAY GluIGln Z SAR Any X NNN Alguien de las habilidades ordinarias en la técnica debe apreciar que alguna ambigüedad se introduce en la determinación de un codón degenerado, representativo de todos los codones posibles que codifican a cada aminoácido. Por ejemplo, el codón degenerado para la serina (WSN) puede, en algunas circunstancias, codifica la arginina (AGR) , y el codón degenerado para la arginina (MGN) puede, en algunas circunstancias, codificar la serina (AGY) . Una relación similar existe entre los codones que codifican la fenilalanina y la leucina. Así, algunos polinucleótidos abarcados por la secuencia degenerada pueden codificar secuencias de aminoácido variantes, pero una de las habilidades ordinarias en la técnica puede fácilmente identificar a tales secuencias variantes por medio de la referencia a las secuencias de aminoácido mostradas en la SEC ID NOS: 2, 9, 14 y 15. Las secuencias variantes pueden fácilmente ser probadas para la funcionalidad como aquí se describe. Dentro de las modalidades preferidas de la invención, bajo condiciones severas, los polinucleótidos aislados deben hibridizar a la regiones de similar tamaño de las SEC ID NO:l, SEC ID NO: 8, ó una secuencia complementaria de las mismas. En general, las condiciones severas son seleccionadas ante aproximadamente 5°C más abajo que el punto de fusión térmico (Tm) para la secuencia especifica en una fuerza iónica y un pH definidos. La Tm es la temperatura (bajo la concentración iónica y el pH definidos) en la cual el 50% de la secuencia de objetivo se hibridiza a una sonda acoplada perfectamente. Las condiciones de concentración típicas son aquellas en que la concentración de la sal es de hasta aproximadamente 0.03 M en un pH 7 y la temperatura es de al menos aproximadamente 60 °C. Alguien de habilidades ordinarias en la técnica también debe apreciar que las diferentes especies pueden exhibir un uso de un codón preferencial. Ver, en general, Grantham et al., Nuc . Acids Res , 8:1893-912, 1980; Haas et al. Curr. Biol . 6:315-24, 1996; Wain-Hobson et al., Gene 13_: 355-64, 1981; Grosjean and Fiers, Gene 18:199-209, 1982; Holm, Nuc. Acids Res . 14:3075-87, 1986; e Ikemura, J. Mol . Biol . 158 : 573-97, 1982. Los codones preferidos para una especie en particular pueden ser introducidas dentro de los polinucleótidos de la presente invención por medio de una variedad de métodos conocidos en la técnica. La introducción de las secuencias preferidas de los codones dentro del ADN recombinante pueden, por ejemplo, incrementar la producción de la proteína mediante hacer la traducción de la proteína más eficiente dentro de un tipo de célula ó especies en particular. Por consiguiente, las secuencias del codón degenerado en la SEC ID NOS: 16-19 sirven como platilla ó patrón para optimizar la expresión de los polinucleótidos en los varios tipos de células y especies comúnmente usados en la técnica y divulgados aquí. Las secuencias que contienen codones preferidos pueden ser probadas y optimizadas para la expresión en varias especies de células hospederas, y se prouban para la funcionalidad como se divulgó aquí mismo. Como se ha notado previamente, los polinucleótidos zilla4 provistos por la presente invención incluyen el ADN y el ARN. Los métodos para preparar el ADN y el ARN son bien conocidos en la técnica. En general, el ARN se aisla desde un tejido ó una célula que produce grandes cantidades de ARN zilla4. Tales tejidos y células son fácilmente identificados por medio del manchado Northern (Thomas, Proc. Na ti . Acad. Sci . USA 72:5201, 1980), e incluyen la medula espinal, el cerebro fetal, pulmón fetal, nodulos linfáticos, glioblastoma, monocitos, células Daudi (una línea celular de limfoma Burkitt humana) , y células endoteliales de la vena umbilical (HUVEC) . El ARN total puede ser preparado usando una extracción con guanidina-HCl seguida del aislamiento por medio de la centrifugación en un gradiente de CsCl (Chirgwin et al., Biochemistry 1^:52-94, 1979). El ARN Poli (A)+ se prepara a partir de un ARN total usando el método de Aviv y Leder (Proc. Nati. Acad. Sci . USA 69:1408-12, 1972). El ADN complementario (ADNc) se prepara a partir de un ARN poli (A) + usando los métodos conocidos. Alternativamente, el ADN genómico pueden ser aislado. Los polinucleótidos que codifican a los polipéptidos zilla4 son después identificados y aislados por medio de, por ejemplo, la hidridización ó PCR. Los polinucleótidos de la presente invención pueden también ser sintetizados usando el equipo automatizado ("maquinas de genes") de acuerdo a los métodos conocidos en la técnica. Ver, por ejemplo, Glick and Pasternak, Molecular Biotechnology, Priciples & Applications of Recombinant DNA, ASM Press, Washington, D. C, 1994; Itakura et al., Annu. .Rev. Biochem . 53:323-356, 1984; y Cumie et al., Proc. Netl . Acad. Sci . USA 87: 633-637, 1990. Las secuencias del polinucleótido zilla4 divulgadas aquí mismo pueden ser usadas para aislar los polinucleótidos que codifican otras proteínas zilla4. Tales otras proteínas incluyen alternativamente los ADNc empalmados (incluyendo los ADNc que codifican las proteínas zilla4 secretadas) y a los polinucleótidos de contraparte desde las otras especies (ortólogos) . Estos polinucleótidos ortólogos pueden ser usados, ínter alia , para preparar las respectivas proteínas ortólogas. Otras especies de interés incluyen, pero no están limitadas a, mamíferos, aves, anfibios, reptiles, peces, insectos y otros especies de vertebrados e invertebrados. De particular interés son los polinucleótidos y las proteínas zilla4 de otras especies de mamíferos, incluyendo el primate no humano, roedor, porcino, ovino, canino, felino, y el equino. Los ortólogos de zilla4 de humano pueden ser clonados- usando información y composiciones provistas por la presente invención en combinación con las técnicas convencionales de clonación. Por ejemplo, un ADNc pueden ser clonado usando un ARNm obtenido de un tejido ó un tipo de célula que expresa el zilla4. Las fuentes adecuadas de ARNm pueden ser identificadas por medio del PCR ó por medio de un manchado Northern haciendo una prueba con sonda (Thomas, Proc. Na ti . Acad. USA 22:^201, 1980) con sondas diseñadas a partir de la secuencia divulgada aquí mismo. Una biblioteca es después preparada a partir del ARNm de una línea celular o tejido positivo. Un ADNc que codifica al zilla4 puede después ser aislado por medio de una variedad de métodos, tales como hacer una prueba con una sonda con un ADNc humano completo ó parcial ó con uno ó más conjuntos de sondas degeneradas basadas en las secuencias divulgadas. La hibridización debe generalmente ser realizada a condiciones de baja severidad, en donde el lavado se lleva a cabo en 1 x SSC con un lavado inicial a 40°C y con intervalos mayores de lavados subsecuentes a 5°C hasta que el antecedente se reduce adecuadamente. Un ADNc pueden también ser clonado usando la reacción de la cadena de la polimerasa, ó PCR (Mullís, la patente Norteamericana No. 4,683,202), usando cebadores diseñados de la secuencia zilla4 representativa del humano divulgada aquí mismo. Dentro de un método adicional, la biblioteca del ADNc puede ser usada para transformar ó transfectar células hospederas, y la expresión del ADNc de interés puede ser detectada con un anticuerpo al polipéptido zilla4. Las técnicas similares pueden ser aplicadas para el aislamiento de los clones genómicos. Las sondas y los cebadores preferidos son mostrados abajo en la Tabla 5. Estas sondas y cebadores pueden ser derivados de las regiones menos degeneradas de un alineación de zilla4 (SEC ID NO:l), IL-lra, IL-la, y IL-lß. Los cebadores "consensos" y de "complemento" son útiles para clonar tanto los ortólogos como los parálogos, mientras los cebadores de "zilla4" deben, en general, ser más selectivos para los ortólogos. Para cada conjunto de cebadores, son indicados los residuos correspondientes del zilla4 humano (SEC ID N0:2) . Tabla 5 Aquellos expertos en la técnica deben reconocer que la secuencia divulgada en la SEC ID N0:1 representa un solo alelo del zilla4 humano, y que la variación natural, incluyendo la variación alélica y el empalme alternativo (por ejemplo, como se mostró en la SEC ID N0:8), se esperan que ocurran. Las variantes alélicas de esta secuencia puede ser clonados por medio de hacer una prueba con sonda con ADNc ó bibliotecas genómicas de los diferentes individuos de acuerdo a los procedimientos estándares. Las variantes alélicas de la secuencia del ADN mostradas en la SEC ID NO:l, incluyendo aquellas que contienen mutaciones silenciosas o silentes y aquellas en que el resultado de las mutaciones en los cambios de la secuencia del aminoácido, están dentro del alcance de la presente invención, como son proteínas que son variantes alélicas de SEC ID NO: 2. Los ADNc generados a partir de los ARNm alternativamente empalmados, q ue retienen la actividad de modular inmune del zilla4 están incluidas dentro del alcance de la presente invención, como son los polipéptidos codificados por medio de tales ADNc y los ARNm. Por ejemplo, la proteína mostrada en la SEC ID NO: 2 se cree que representa una forma citoplásmicamente expresada de la proteína en vista de la falta de una secuencia del péptido de señal. Se espera que esta sea unas forma alternativamente empalmada del ADN que incluye una secuencia de señal secretoria. Las variantes alélicas y las variantes empalmadas de estas secuencias pueden ser clonadas por medio del ADNc haciendo una prueba con una sonda ó por medio de bibliotecas genómicas a partir de los diferentes individuos ó tejidos de acuerdo a los procedimientos estándares conocidos en la técnica. Para cualquier polipéptido zilla4, incluyendo las variantes y las proteínas de fusión, alguien de habilidades ordinarias de la técnica puede fácilmente generar una secuencia de polinucleótido completamente degenerada que codifica a esa variante usando la información anteriormente mostrada en las Tablas 3 y 4, arriba. Además, aquellos expertos en la técnica pueden usar programas de computo estándares para idear las variantes de zilla4 basados en las secuencias de nucleótidos y aminoácido descritas aquí mismo. La presente invención así provee un medio legible en computadora codificado con una estructura de datos que proveen al menos una de las siguientes secuencias: SEC ID NO:l, SEC ID NO:2, SEC ID NO:7, SEC ID NO:8, SEC ID NO:9, SEC ID NO: 10, SEC ID NO: 11, SEC ID NO: 12, SEC ID NO: 13, SEC ID NO: 14, SEC ID NO: 15, SEC ID NO: 16, SEC ID NO: 17, SEC ID NO: 18, SEC ID NO: 19, y porciones de las mismas. Las formas adecuadas de medios leíbles en computadora incluyen medios magnéticos y medios opcionalmente leíbles. Los ejemplos de los medios magnéticos incluyen un disco duro ó fijo, un microcircuito de memoria de acceso aleatorio (RAM) , disco flexible, cinta lineal digital (DLT) , un disco de sub-memoria, y un disco ZIP™. Los medios opcionalmente leíbles están ejemplificados por los discos compactos (por ejemplo, Disco Compacto de memoria de solo lectura (ROM) , disco compacto reescribible (RW) , y disco compacto grabable) , y discos digitales versátiles / video (DVD) (por ejemplo, DVD-ROM, DVD-RAM, y DVD+RW) . Las proteínas de la presente invención, incluyendo las proteínas de longitud completa, las proteínas variantes, y las proteínas de fusión pueden ser producidas en células hospederas genéticamente diseñadas de acuerdo a las técnicas convencionales. Las células hospederas adecuadas son aquellos tipos de células que pueden ser transformadas ó transfectadas con el ADN exógeno y crecer en cultivo, e incluye las células bacterianas, las células fúngicas, y las células cultivadas eucarióticas superiores. Son preferidas, las células eucarióticas, particularmente las células cultivadas de organismos multicelulares. Las técnicas para manipular las moléculas de ADN clonadas e introducir el ADN exógeno dentro de una variedad de células hospederas son divulgados por Sambrook et al., Molecular Cloning: A Labora tory Manual , 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989, and Ausubel et al., eds., Current Protocols in Molecular Biology, Green and Wiley and Sons, NY, 1993) . En general una secuencia de ADN que codifica una proteína zilla4 está operablemente ligada a otros elementos genéticos requeridos para su expresión, generalmente incluyen un promotor y un terminador de trascripción, dentro de un vector de expresión. El vector debe también comúnmente contener uno ó más marcadores seleccionables y uno ó más origines de replicación, aunque aquellos expertos en la técnica deben reconocer que dentro de marcadores seleccionables de ciertos sistemas pueden ser provistos en vectores separados, y la replicación del ADN exógeno puede ser provista mediante la integración dentro del genoma de la célula hospederas. La Selección de los promotores, terminadores, marcadores seleccionables, vectores y otros elementos es un diseño de cuestión de rutina dentro del nivel de las habilidad ordinaria de la técnica. Muchos de tales elementos son descritos en la literatura y están disponibles a través de proveedores comerciales. Para dirigir una proteína zilla4 dentro de la vía secretoria de una célula hospederas, una secuencia de señal secretoria (también conocida como una secuencia líder, secuencia prepro ó una secuencia pre) se provee en el vector de la expresión. La secuencia de señal secretoria puede ser aquella de un gen zilla4, ó puede ser derivada de otra proteína secretada (por ejemplo, t-PA) ó sintetizada de novo . La secuencia de señal secretoria esta operablemente ligada a una secuencia de ADN zilla4, por ejemplo las dos secuencias asociadas en el marco correcto de lectura y posicionadas para dirigir el polipéptido recientemente sintetizado dentro de la vía secretoria de la célula hospederas. Las secuencias de señal secretoria están comúnmente posicionadas en 5' en la secuencia del ADN que codifica al polipéptido de interés, aunque ciertas secuencias de señal pueden ser posicionadas en algún otro sitio en la secuencia del ADN de interés (ver por ejemplo, Welch et al., la patente Norteamericana No. 5,037,743; Holland et al., la patente Norteamericana No. 5,143,830). En la alternativa, una proteína zilla4 se expresa citoplásmicamente y se aisla después de lisis de las células hospederas. Las células de mamíferos cultivadas son hospederos adecuados para su uso dentro de la presente invención. Los métodos para introducir el ADN exógeno dentro de las células hospederas de mamífero incluyen la transfección mediada con fosfato de calcio (Wigler et al., Cell 14_:725, 1978; Corsaro and Pearson, Soma tic Cell Genetics 1_: 603 , 1981: Graham and Van der Eb, Virology 52:456, 1973), la electroporación (Neumann et al., Embo J. 1:841-845, 1982), transfección mediada por DEADE-dextrina Uausubel et al., ibid) , y la transfección mediada por liposomas (Hawley-Nelson et al., Focus 15:73, 1993; Ciccarone et al., Focus 15:80, 1993). La producción de polipéptidos recombinanates en células cultivadas de mamífero se divulgó por, por ejemplo, Levison et al., la patente Norteamericana No: 4,713,339; Hagen et al., la patente Norteamericana No: 4,784,950; Palmiter et al., la patente Norteamericana No: 4,579,821; y Ringold, la patente Norteamericana No: 4,656,134. Las células cultivadas de mamífero adecuadas incluyen la COS-1 (ATCC No. CRL 1650), COS-7 (ATCC No. CRL 1651), BHK (ATCC No. CRL 1632), BHK 570 (ATCC No. 10314), 293 (ATCC No. CRL 1573; Graham et al., J. Gen . Virol . 36:59-72, 1977) y las líneas de células de ovario de hámster chino (por ejemplo CHO-Kl; ATCC No. CCL 61) . Las líneas de la célula adicionales adecuadas son conocidas en la técnica y están disponibles de depositarios públicos tales como the American Type Culture Collection, Rockville, Maryland. En general, son preferidos los promotores fuertes de la trascripción, tales como promotores de SV-40 ó citomegalovirus. Ver, por ejemplo, la patente Norteamericana No: 4,956,288. Otros promotores adecuados incluyen aquellos de loe genes de la metalotioneina (la patente Norteamericana No: 4,579,821 y 4,601,978) y el promotor del adenovirus tardío principal. La selección del fármaco es generalmente usada para las células cultivadas de mamífero en la cuales el ADN ajeno ha sido insertado. Tales células están comúnmente referidas como "transfectantes". Las células que han sido cultivadas en presencia de un agente selectivo y son capaces de pasar el gen de interés a su progenie son referidas como "transfectantes estables". Un marcador ejemplar seleccionable es un gen que codifica la resistencia a la neomicina antibiótica. La selección se lleva a cabo en presencia de un fármaco de tipo neomicina, tal como un G-418 ó alguno similar. Los sistemas de selección pueden también ser usados para incrementar el nivel de expresión del gen de interés, un proceso referido como "amplificación". La amplificación se lleva a cabo mediante el cultivo de los transfectantes en presencia de un nivel bajo del agente selectivo y después se incrementa la cantidad del agente selectivo para seleccionar las células que producen altos niveles de productos de genes introducidos. Un marcador ejemplar amplificable seleccionable es dihidrofolato reductasa, que confiere resistencia al metotrexato. Pueden ser usados otros genes de resistencia al fármaco (por ejemplo, resistencia a la higromicina, resistencia a multi fármacos, la acetiltransferasa de puromicina) . Otras células más eucarióticas también pueden ser usadas como hospederas, incluyendo células de insecto, células de plantas y células de aves. El uso de Agrobacterium rhizogenes como un vector para los genes de expresión en las células de la planta han sido revisadas por Sinkar et al., J. Biosci . (Bangalore) J -^47-58, 1987. La transformación de las células de insecto y la producción de los polipéptidos anteriores en ese sentido se divulgó por Guarino et al., la patente Norteamericana No: 5,162,222 y la publicación WIPO WO 94/06463. Las células de insecto pueden ser infectadas con baculovirus recombinante, comúnmente derivado de virus de la polihedrosis nuclear Autographa californica (AcNPV) . Ver, King and Possee, The Baculovirus Expression System: A Laboratory Guide, London, Chapman & Hall; O'Reilly et al., Baculovirus Expression Vectors: A Laboratory Manual, New York. Oxford University Press., 1994; y Richardson, Ed., Baculovirus Expression Protocols. Methods in Molecular Biology, Humana Press, Totowa, NJ, 1995. El baculovirus recombinante también puede ser producido a través del uso de un sistema basado en el transposon descrito por Luckow et al., ( J. Virol . 62:4566-4579, 1993). Este sistema, el cual utiliza los vectores de transferencia, esta comercialmente disponible en forma de un equipo (equipo Bac-to-Bac™, Life Technologies, Rockville, MD) . El vector de transferencia (por ejemplo, pFastBacl™, Life Technologies) que contiene un transposon Tn7 para mover el ADN que codifica la proteína de interés dentro de un genoma de baculovirus mantenido en E coli como un plásmido más grande llamado un "bácmido". Ver, Hill-Perkins and Possee, J. Gen . Virol . 11^: 911-916 , 1990; Bonning et al., J. Gen . Virol 15_: 1551-1556, 1994; y Chazenbalk and Rapoport, J. Biol . Chem . 220:1543-1549, 1995. Para la producción de proteína, el virus recombinante se usa para infectar las células hospederas, típicamente una línea de célula derivada del gusano de polilla, Spodoptera frugiperda (por ejemplo, las células Sf9 ó Sf21) ó Trichoplusia ni (por ejemplo, las células Hidh Five™; Invitrogen, Carisbad, CA) . Ver, en general Glick and Pasternak, Molecular Biotechnology: Principies and Applications of Recombinant DNA, ASM Press, Washington, D. C, 1994. Ver también, la patente Norteamericana No: 5,300,435. Los procedimientos usados están generalmente descritos en los manuales de laboratorio disponibles (por ejemplo, King and Possee, ibid. ; O'Reilly et al., ibid. ; Richardson, ibid) . Las células fúngicas, incluyendo las células de levadura, pueden también ser usadas dentro de la presente invención . Las especies de levadura de particular interés en este respecto incluyen a Saccharomyces cerevisiae, Pichia pastoris, y Pichia methanolica . Los métodos para transformar las células S . Cerevisiae con ADN exógeno y para producir los polipéptidos recombinantes del mismo son divulgadas por, por ejemplo, Kawasaki, la patente Norteamericana No: 4,599,311; Kawasaki et al., la patente Norteamericana No: 4,931,373; Brake, la patente Norteamericana No: 4,870,008; Welch et al., la patente Norteamericana No: 5,037,743; y Murria et al., la patente Norteamericana No: 4,845,075. Las células transformadas son seleccionadas por el fenotipo determinado por el marcador seleccionable, comúnmente resistente al fármaco ó la habilidad de crecer en la ausencia de un nutriente en particular (por ejemplo, la leucina) . Un sistema de vector preferido para su uso en la Sccharomyces cerevisiae es el sistema de vector POTl divulgado por Kawasaki et al., (la patente Norteamericana No: 4,931,373), la cual permite transformar a las células para ser seleccionadas por medio del crecimiento en los medios que contienen glucosa. Los promotores y terminadores adecuados para su uso en el hongo son aquellos a partir de los genes de la enzima glicolitica (ver, por ejemplo, Kawasaki, en la patente Norteamericana No: 4,599,311; Kinsman et al., la patente Norteamericana No: 4,615,974; y Bitter, la patente Norteamericana No: 4,977,092) y los genes del alcohol dehidrogenasa. Ver también la patente Norteamericana No: 4,990,446; 5,063,154; 5,139,936 y 4,661,454. Los sistemas de transformación para las otras levaduras incluyendo Hansenula polymorpha , Schizosaccharomyces pombe, Kluyveromyces lactis, Kluyveromyces fragilis , Ustilago maydis, Pichia pastoris , Pichia methanolica , Pichia guillermondii y Candida mal tosa son bien conocidas en la técnica. Ver, por ejemplo, Gleeson et al., Gen . Microbiol . 132:3459-3465, 1986; Cregg, la patente Norteamericana No: 4,882,279; y Raymond et al., Yeast 14, 11-23, 1998. Las células Arpergillus pueden ser utilizadas de acuerdo a los métodos de McKnight et al., la patente Norteamericana^ No: 4,935,349. Los métodos para transformar al Acremoni um chrysogenum son revelados por Lambowitz, la patente Norteamericana No: 4,486,533. La producción de las proteínas recombinantes en Pichia methanolica se divulgó en las patentes Norteamericanas No: 5,716,808, 5,736,383, y 5,88,768; y en las publicaciones WIPO WO 99/14347 y WO 99/14320. Las células hospederas Procarióticas, incluyendo las variedades de la bacteria Escherichia coli , Bacillus y otros géneros son también células hospederas útiles dentro de la presente invención. Las técnicas para la transformación de estos hospederos y la expresión de las secuencias de ADN extraño clonadas aquí mismo son bien conocidas en la técnica (ver, por ejemplo, Sambrook et al., ibid) . Cuando se expresa un polipéptido zilla4 en una bacteria tal como E. Coli , el polipéptido puede ser retenido en la citoplasma, ya sea en una forma soluble ó como granulos insolubles, ó pueden ser dirigidos al espacio periplásmico mediante una secuencia de secreción bacteriana. Cuando la proteína esta presente como granulos insolubles, las células son disueltas o usadas, y los granulos son recuperados y desnaturalizados usando, por ejemplo, isotiocinato de guanidina ó urea. El polipéptido desnaturalizado puede entonces ser redoblado ó replegado y dimerizado mediante diluir el desnaturalizante, tal como por medio de la diálisis en contra de una solución de urea y una combinación de glutationa reducida y oxidada, seguida de una diálisis en contra una solución salina amortiguada. En el caso más reciente, el polipéptido puede ser recuperado a partir del espacio peri plasmático en una forma soluble y funcional mediante desestabilizar las células (por medio, por ejemplo, la sonicación ó impacto osmótico) para liberar los contenidos del espacio peri plasmático y recuperar la proteína, obviando así la necesidad por la desnaturalización y redoblado ó replegado. Las células hospederas transformadas ó transfectadas son cultivadas de acuerdo a los procedimientos generales en un medio de cultivo que contiene nutrientes y otros componentes requeridos para el crecimiento de las células hospederas elegidas. Un variedad de medios adecuados, incluyendo los medios definidos y los medios complejos, son conocidos en la técnica y generalmente incluyen una fuente de carbón, una fuente de nitrógeno, aminoácidos esenciales, vitaminas y minerales. Según se requiera, los medios pueden también contener tales componentes como factores de crecimiento ó suero. El medio de crecimiento debe generalmente se seleccionado para células que contienen el ADN exógenamente añadido por medio de, por ejemplo, la selección del fármaco ó deficiencia en un nutriente esencial que es complementado por el marcador seleccionable transportado sobre el vector de expresión ó co-transfectado dentro de la célula hospedera. Usando los métodos divulgados arriba, alguien con la habilidades ordinarias en la técnica puede identificar y/ó preparar una variedad de proteína zilla4 que tenga actividad inmunomodulatoria. Tales polipéptidos pueden también incluir segmentos adicionales de polipéptido como generalmente se divulgó arriba. Es preferido purificar las proteínas de la presente invención a >80% de pureza, más preferentemente a >90% de pureza, aún más preferentemente >95% de pureza, y particularmente es preferido un estado farmacéuticamente puro, que sea mayor que el 99.9% puro con respecto a las macromoléculas contaminantes, particularmente otras proteínas y ácidos nucleicos, y libre de agentes infecciosos y pirogénicos. Preferentemente, una proteína purificada esta substancialmente libre de otras proteínas, particularmente de otras proteínas de origen animal. Las proteínas zilla4 (incluyendo a las proteínas de fusión) son purificadas mediante métodos de purificación convencionales de proteína, típicamente mediante una combinación de técnicas cromatográficas. Ver, en general, Afiinity Chromatography: Principies & Methods, Pharmacia LKB Biotechnology, Uppsala, Suecia, 1998; y Scopes, Protein Purification: Principies and Practice, Springer-Verlag, New York, 1994. Las proteínas que comprenden una etiqueta de afinidad a la polihistidina (típicamente aproximadamente 6 residuos de histidina) son purificadas mediante la cromatografía de afinidad sobre una resina de níquel o cobalto inmovilizada. Ver, por ejemplo, Houchuli et al., Bio/Technol , 6: 1321-1325, 1998. Las proteínas que comprenden una etiqueta glu-glu pueden ser purificadas mediante la cromatografía de inmunoafinidad de acuerdo a los procedimientos convencionales. Ver, por ejemplo, Grussenmeyer et al., ibid. Las fusiones de proteína enlazada a la maltosa son purificadas en una columna de amilosa de acuerdo a los métodos conocidos en la técnica. Las proteínas zilla4 de la presente invención pueden ser usadas para modular la inflamación y otros procesos inmunológicos. De particular interés es la reducción de la inflamación mediante las formas antagonistas de la zilla4 (por ejemplo, SEC ID N0:14). Así, ciertas proteínas zilla4 pueden ser usadas para tratar ó prevenir enfermedades crónicas e inflamatorias agudas tales como la artritis, incluyendo la artritis reumatoide, osteoartritis, y artritis de Lyme, y la psoriasis; para reducir el daño del tejido después de la isquemia; y para tratar el choque séptico, la enfermedad injerto versus huésped, y la leucemia. Otras condiciones que pueden ser moduladas por las proteínas zilla4 incluyen el cáncer, la anemia, . la enfermedad inflamatoria del intestino, autoinmunidad, neuropatologías agudas y crónicas, conmoción cerebral, síndrome de la enfermedad aguda respiratoria, restenosis, y SIDA. Como aquí se usa, los términos "tratar" y "tratamiento" deben entenderse que incluyen la reducción de los síntomas así como también los efectos sobre los procesos subyacentes de la enfermedad. Los antagonistas pueden tener una actividad in vivo similar a la del antagonista receptor IL-1 (IL-lra) que ha mostrado efectos benéficos en pruebas clínicas dirigidas al tratamiento de la artritis reumatoide (Campion et al., Artri tis & Rheuma tism 39:1092-1101, 1996), la enfermedad de injerto versus huésped (Antin et al., Blood 84.: 1342-1348, 1994), el choque séptico (Fisher et al., JAMA 271:1836-1843, 1994), y la leucemia (Dinarello, Blood 82-2095-2147, 1996). Los datos experimentales también sugieren que el antagonismo de la actividad de la IL-1 debe proveer beneficios en el tratamiento de la enfermedad de inflamación del intestino (incluyendo la enfermedad de Crohn y la colitis ulcerativa) (revisada por Hendel et al., Exp. Opin . Invest . Drugs 5:843-850, 1996; ver también et al., Gastroenterology 103: 65-71, 1992), pancreatitis aguda (Norman et al., Ann . Surg. 221: 625-634, 1995), glomérulo nefritis (Lan et al., Kindey Int . 42-1303-1309, 1995), e isquemia cerebral (Relton et al., Exp. Neurology 138:206-213, 1996; Loddick et al., Biophys Res . Comm . 234:211-215, 1997) . Loa agonistas pueden promover la curación de las heridas en vista de los efectos de la IL-1 sobre la secreción del factor de crecimiento y la proliferación de las células ó ser útiles en el tratamiento de infecciones, en particular en infecciones gastrointestinales. Las proteínas zilla4 pueden ser probadas en modelos de animales de enfermedad. Loa modelos de animales de psoriasis incluyen el análisis de las alteraciones histológicas en la epidermis de la cola del ratón adulto (Hofbauer et al., Bri t . J. Derma tol . 118;85-86, 1988; Baldón et al., Arch Derma tol . Res . 211 : 121-125, 1985). En este modelo, la actividad antipsoriatica se indica por la inducción de una capa granular y la ortoqueratosis en las área de la escala entre las articulaciones de la epidermis de la cola. Típicamente, un ungüento tópico se aplica diariamente por siete días consecutivos, después el animal se sacrifica, y la piel de la cola se examina histológicamente. Un modelo adicional se provee injertando la piel humana psoriática a los ratones (desnudos) congénitamente atímicos (Krueger et al., J. Invest . Derma tol . 64_:307-312, 1975). Tales injertos han mostrado retener las característica histológicas por hasta once semanas. Como en el modelo de la cola de ratón, las composición de prueba se aplica a la piel en intervalos determinados por un periodo de una a varias semanas, en tal tiempo los animales son sacrificados y los injertos de piel son examinados histológicamente. Un tercer modelo ha sido divulgado por Fretland et al., { Inflamma tion 14:272-739, 1990; incorporado aquí mismo como referencia) . Brevemente, la inflamación se induce en la epidermis en los cobayos ó conejillos de indias mediante la aplicación tópicamente de (forbol—12-miristato-13-acetato) de éster de forbol; PMA) , típicamente aproximadamente 2 g/ml en acetona, a un oído y se condujo al oído contralateral . Los compuestos de prueba son aplicados concurrentemente con PMA, ó pueden ser oralmente administrados. El análisis histológico se realiza 96 horas después de la aplicación del PMA. Este modelo duplica muchos síntomas de la psoriasis humana, incluyendo el edema, la diapédesis inflamatoria de las células y la infiltración, los altos niveles de LTB4 y la proliferación epidérmica. La isquemia cerebral puede ser estudiada en un modelo de rata como se divulgó por Relton et al., { ibid) y Loddick et al., ( ibid) . Los modelos de cicatrización de la herida incluyen el modelo de incisión lineal de la piel de Mustoe et al., { Science 237 : 1333, 1987). En un procedimiento típico, una incisión de 6-cm se hace en la piel dorsal de una rata adulta, después se cierra con pinzas o abrazaderas para heridas. Las substancias de prueba y los controles (en solución, gel, ó en forma de polvo) son aplicados antes de un cierre primario. Se prefiere una aplicación limitada que una solo aplicación, aunque las aplicaciones adicionales pueden hacerse en los días sucesivos con una inyección cuidadosa en varios sitios bajo la incisión. La resistencia al rompimiento de la herida se evalúa entre 3 y 21 días después de realizar la herida. En un segundo modelo, escisiones múltiples, pequeñas, de grosor completo, se hacen en el oído del conejo. El cartílago en el oído entablilla la herida, removiendo la variable de la contracción de la herida de la evaluación del cierre. Son aplicados los tratamientos y los controles experimentales. La geometría y la anatomía del sitio de la herida permiten una cuantificación confiable de crecimiento de las células y la migración epitelial, así como también el análisis cuantitativo de la bioquímica de las heridas (por ejemplo, el contenido del colágeno). Ver, Mustoe et al., J. Clin . Invest . 8 :694, 1991. El modelo del oído del conejo puede ser modificado para crear unas condiciones de herida isquémica, que más estrechamente se asemejan a la situación clínica (Ahn ET AL., Ann . Plast . Surg. 241:17, 1990). En un tercer modelo, la cicatrización de heridas en la piel de grosor parcial en los cerdos ó cobayos ó conejillos de indias se evalúa (leGrand et al., Growth Factors 8 : 301 , 1993) . Los tratamientos experimentales son aplicados diariamente sobre ó bajo un vendaje. Se determinó, siete días después la cicatrización, el espesor del tejido de granulación. Este modelo se prefiere para los estudios de respuesta a la dosis, como este es más cuantitativo que los otros modelos in vivo de la cicatrización de la herida. Un modelo de escisión de grosor completo también pueden ser empleado. Con este modelo, la epidermis y la dermis son removidas hacia abajo del panniculus carnosum ó capa grasosa carnosa en los roedores ó en la grasa subcutánea en los cerdos. Los tratamientos experimentales son aplicados tópicamente sobre ó bajo un vendaje, y pueden ser aplicados diariamente sí se desea. Los cierres de la herida ocurren mediante una combinación de la contracción y el no crecimiento de la célula y la proliferación. El termino de la medición incluye el tiempo de cierre de la herida, una valoración histológica, y los parámetros bioquímicos del tejido de la herida. Los modelos de cicatrización deteriorada de la herida son también conocidos en la técnica (por ejemplo, Cromack et al., Surgery 113 : 36, 1993; Pierce et al., Proc Na ti . Acad. Sci . USA 86:2229, 1989; Greenhalgh et al., AMER. J. Pa thol . 136:1235, 1990). El retraso ó la prolongación del proceso de la cicatrización de la herida pueden ser inducido farmacológicamente por medio del tratamiento con esteroides, la irradiación del lugar de la herida, ó por estados de enfermedades concomitantes (por ejemplo, la diabetes) . Las incisiones lineales ó incisiones de grosor completo son más comúnmente usadas como la herida experimental. El punto final ó término son como se divulgó arriba para cada tipo de herida. Los implantes subcutáneos pueden ser usados para evaluar los compuestos que actúan tempranamente en las etapas de la cicatrización de la herida (Broadley et al., Lab . Invest . 65:571, 1985; Sprugel et al., Amer. J. Pa thol . 129 :601, 1987). Los implantes son preparados en un contenedor no inflamatorio, relativamente, poroso (por ejemplo, las esponjas de polietileno ó implantes de politetrafluoroetileno expandido rellenado con colágeno de bovino) y colocado subsecuentemente en los ratones ó ratas. El interior del implante se evacúa de células, produciendo un "espacio de herida" que esta bien definido y separado del tejido preexistente. Este arreglo permite la evaluación del influjo de la célula y el tipo de célula así como también la medida de la vasculogénesis / angiogénesis y de la producción de la matriz extracelular. Como se divulgó por Jovcic et al., ( leukemia 10:546-549, 1996), la proliferación de las células hematopoieticas progenitoras es la respuesta a los niveles del IL-1. Los efectos de IL-1 y los agonistas y los antagonistas del mismo pueden ser medidos usando animales de prueba sub letalmente irradiados (por ejemplo, los ratones) . Brevemente, un compuesto de prueba se administra directamente a los ratones irradiados, ó las células de la médula ósea son preincubadas con el compuesto de prueba y transplantadas . en los ratones irradiados. Los efectos proliferativos y anti-proliferativos son vistos como los cambios en la formación de la colonia como se comparó con los controles. La inducción de la tolerancia a la isquemia puede ser medida en jerbos de Mongolia como se divulgó por Hallenbeck, Neurology 49 (Suppl. 4) : S5-S9, 1997. La expresión de las proteínas zilla4 en los animales provee modelos para más estudios de los efectos biológicos de la sobreproducción ó inhibición de la actividad de la proteína in vivo . Los polinucleótidos que codifican a zilla4 pueden ser introducidos en los animales de prueba, tales como los ratones, usando vectores virales ó ADN desnudo ó descubierto, ó pueden ser producidos animales transgenicos. Una metodología in vivo para ensayar o probar las proteínas de la presente invención utiliza sistemas virales de suministro. Los virus ejemplares para este propósito incluyen el adenovirus, herpesvirus, retrovirus, virus de vacuna, y virus adeno-asociado (AAV) . El adenovirus, un virus de ADN doblemente encallado ó varado, es actualmente el vector de transferencia de gen mejor estudiado para el reparto ó suministro de los ácidos nucleicos heterólogos. Para un revisión, ver Becer et al., Meth . Cell Biol . . 4_3: 161-89, 1994; y Douglas and Curiel, Sciences & Medicine 4_: 44-53, 1997. El sistema de adenovirus ofrece varias ventajes. El adenovirus puede (i) acomodar injertos de ADN relativamente grandes; (ii) hacerse crecer a alta titulación; (iii) infectar a un amplio rango de tipos de células de mamífero; y (iv) ser usado con muchos diferentes promotores incluyendo los promotores ubicuos, de tejidos especifico, y regulables. Debido a que los adenovirus son estables en la corriente sanguínea, pueden ser administrados por medio de una inyección intravenosa. Cuando son administrados intravenosamente a animales intactos, el adenovirus principalmente se dirige al hígado. Sí el sistema de suministro adenoviral tiene una supresión del gen El, el virus no puede duplicarse en las células hospederas. Sin embargo, el tejido del huésped (por ejemplo, el hígado) debe expresar y procesar (y, sí esta presente una secuencia de señal, secretar) la proteína heteróloga. Las proteínas secretadas deben entrar en la circulación en el hígado altamente vascularizado, y se pueden determinar los efectos sobre el animal infectado. En otra modalidad, un gen zilla4 pueden ser introducido en un vector retroviral como se describe, por ejemplo, por Anderson et al., la patente Norteamericana No: 5,399,346; Man et al., Cell 33:153, 1983: Termin et al., la patente Norteamericana No: 4,650,764: Temin et al., la patente Norteamericana No: 4,980,289; Markowitz et al., J. Virol . 62^:1120, 1988; Temin et al., la patente Norteamericana No: 5,124,263; Douglas et al., la publicación WIPO WO 95/07358; y Kuo et al., Blood 82:845, 1993. En un método alternativo, el vector puede ser introducido por medio de la "lipofección" in vivo usando liposomas. Los lípidos cationicos sintéticos pueden ser usados para preparar liposomas para la transfección in vivo de un gen que codifica a un marcador (Felder et al., Proc . Na ti . Acad. Sci . USA 84:7413-7, 1987; Mackey et al., Proc. Na ti . Acad. Sci . USA 85:8027-31, 1988). El uso de la lipofección para introducir genes exógenos en los órganos específicos in vivo tiene ciertas ventajas practicas, incluyendo tener como objetivo molecular de los liposomas las células especificas. La transfección dirigida a tipos de célula en particular es particularmente ventajosa en un tejido con la heterogeneidad celular, tal como el páncreas, el hígado, el riñon, y el cerebro. Los lípidos pueden ser químicamente acoplados a otras moléculas para el propósito de dirigir el objetivo. Los péptidos objetivo (por ejemplo, las hormonas ó neurotransmisores), las proteínas tales como los anticuerpos, ó moléculas no peptídicas pueden ser acopladas químicamente a los liposomas. Dentro de otra modalidad, las células objetivo son removidas desde el animal, y el ADN se introduce como un plasmido de ADN desnudo ó descubierto. Las células transformadas son después re-implantadas dentro del cuerpo del animal. Los vectores del ADN desnudo ó descubierto pueden ser introducidos dentro de las células hospederas deseadas por medio de métodos conocidos en la técnica, por ejemplo, la transfección, electroporación, microinyección, transducción, fusión celular, DEAE dextrano, precipitación del fosfato de calcio, el uso de una pistola de gen ó el uso de una transportador de vector de ADN. Ver, por ejemplo, Wu et al., J. Biol . Chem . 261_: 963-7, 1992; Wu et al., J. Biol . Chem . 263_: 14621-4, 1988. Los animales transgénicos, diseñados por ingeniería genética para expresar un gen zilla4, y los animales que exhiben una ausencia completa de la función del gen zilla4, referidos como "ratones agénicos" (Snouwaert et al., Science 257 : 1083, 1992), pueden ser generados (Lowell et al., Na ture 366:740-42, 1993). Ver también, Brinster et al.., Pro . Na ti . Acad. Sci . USA 8^:836-840, 1988; Palmier et al., Pro. Na ti . Acad. Sci . USA 88:478-482, 1991; Whitelaw et al., Transgenic Res . _1:3-13, 1991; y publicaciones WIPO WO 89/01343 y WO 91/02318) . Los polinucleótidos usados en los animales transgenicos generados que expresan un gen zilla4 deben preferentemente contener uno ó más intrones; así son preferidas las secuencias genómicas. La metodología antisentido puede ser usada para inhibir la transcripción de un gen zilla4 para examinar los efectos de tal inhibición in vivo . Los polinucleótidos que son complementarios a un segmento de un polinucleótido que codifica la zilla4 (por ejemplo, un polinucleótido como se mostró anteriormente en la SEC ID NO:l) son diseñados para enlazarse al ARNm que codifica la zilla4 y para inhibir la traducción de tal ARNm. La actividad de las proteínas zilla4 pueden ser medida con un microfisiómetro biosensor a base de silicio que mide la proporción de acidificación extracelular ó la secreción del protón asociada con el receptor que enlaza y respuestas celulares subsecuentes fisiológicas. Un dispositivo ejemplar tal es el Microfisiometro Citosensor™ manufacturado por Molecular Devices, Sunnyvale, CA. Una variedad de respuestas celulares, tales como la proliferación, transporte del ion, producción de energía, respuesta inflamatoria, activación regulatoria y del receptor, y los similares, pueden ser medidos por este método. Ver, por ejemplo, McConnell et al., Science 252:1906-1912, 1992; Pitchford et al., Meth . Enzymol . 228:84-108, 1997; Arimilli et al., J. Immunol . Meth . 212_: 49-59, 1998; y Van Liefde et al., Eur. J. Pharmacol . 346: 87-95, 1998. Los antagonistas del zilla4 pueden ser identificados exponiendo las células con la proteína zilla4 en presencia y ausencia del compuesto de prueba, por lo tanto una reducción en la actividad estimulada por el zilla4 es un indicativo de las actividad antagonista en el compuesto de prueba. Para el uso farmacéutico, las proteínas de la presente invención son formuladas para suministro local, incluyendo el suministro tópico, ó parenteral, incluyendo el intravenoso, subcutáneo, ó intraperitoneal de acuerdo a los métodos convencionales. La administración intravenosa debe ser por inyección ó infusión. En muchas instancias será benéfico administrar la proteína por infusión o inyecciones múltiples por día durante un periodo de varios días a varias semanas, algunas veces precedida por una inyección de bolo. En general, las formulaciones farmacéuticas deben incluir una proteína zilla4 en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable, tal como la solución salina, solución salina amortiguadora, dextrosa al 5% en agua ó los similares. Las formulaciones pueden además incluir uno ó más excipientes, preservativos, solubilizadores, agentes de amortiguación, albúmina para prevenir la perdida de proteína en las superficies viales, etc. Los métodos de la formulación son bien conocidos en la técnica y son divulgados, por ejemplo, en Remington: the Science and Practice of Pharmacy, Gennaro, ed., Mack Publishing Co. Easton, PA, 19th ed., 1995. Como se notó arriba, las inhibición de la actividad del IL-1 requiere un gran exceso molar del antagonista. Las dosis de las proteínas antagonistas zilla4 deben en general ser bastantes grandes, particularmente cuando se trata con condiciones que amenazan la vida. El Il-lra aparece inofensivo en dosis altas. Así, las dosis de las proteínas del antagonista zilla4 deben variar de tan bajo como 10 mg por paciente por día, a tan alto como 100 mg ó más por hora inyectada por un periodo de días. Se ha encontrado que dosis de IL-lra es eficaz en los estudios clínicos incluyendo 70 mg por paciente, por día, en artritis reumatoide y hasta 3,400 mg por paciente, por día, en la enfermedad de injerto versus huésped. La dosis exacta debe ser determinada por el médico de acuerdo a los estándares aceptados, tomando en cuenta la naturaleza y severidad de las condición a tratarse, rasgos ó características del paciente, etc. La determinación de la dosis esta dentro del nivel de la habilidad ordinaria en la técnica. Las proteínas pueden ser administradas para un tratamiento agudo, durante una semana o menos, pero debe a menudo ser usada en el tratamiento de condiciones crónicas requiriendo de una administración durante varias semanas a varios meses ó aún más. En general, una cantidad terapéuticamente efectiva de una proteína zilla4 es una cantidad suficiente para producir una mejora clínicamente significativa en uno ó más indicadores estándares apropiados para la condición a tratar. Los términos terapéuticos deben ser aparentes para aquellos expertos en la técnica. Las proteínas zilla4, tanto las agonistas como las antagonistas, pueden ser usadas como estándares en ensayos del IL-1 y el inhibidor del IL-1. Tales ensayos pueden comprender cualquiera de un numero de formatos estándares y ELISA. Los estándares de la proteína zilla4 pueden ser preparados en la forma de etiquetado usando un radioisótopo, enzima, fluoroforo, u otro compuesto que produce una señal detectable. Las proteínas pueden ser empaquetadas en forma de un equipo, tales equipos comprenden una ó más frascos que contienen la proteína zilla4 y, opcionalmente, un diluente, un anticuerpo, un proteína de enlace etiquetada, etc. Los equipos de ensayo también pueden ser usados en la investigación de laboratorio para detectar la actividades de IL-1 y del inhibidor del IL-1 producidas por las células cultivadas ó animales de prueba. Las proteínas zilla4 también son útiles como reactivos de investigación. por ejemplo, las proteínas zilla4 agonistas pueden ser usadas como componentes de cultivo de célula para promover el crecimiento de - las células sensibles al IL-1, incluyendo los fibroblastos, células de músculos lisos, y células mesangiales. Los agonistas pueden ser combinados con el IL-3 y otras citocinas para expandir las células de la sangre periférica CD34*, y con 11-3 e IL-6 para promover las proliferación de las células madre. Las proteínas zilla4 y las porciones que soportan al epítope de la misma pueden ser usadas para generar anticuerpos que específicamente enlazan a la zilla4. Un "epítope" es una región de una proteína en la cual un anticuerpo puede enlazarse. Ver, por ejemplo, Geysen et al., Proc. Na ti . Acad. Sci . USA 81:3998-4002, 1984. Los epítopes pueden ser lineales ó conformacionales, la más reciente se compone de regiones discontinuas de la proteína que forma un epitope sobre el plegamiento de la proteína. Los epítopes son generalmente de al menos 6 residuos de aminoácido en longitud. Los péptidos sintéticos relativamente cortos que imitan la parte de una secuencia de proteína son rutinariamente capaces de producir un antisuero de una secuencia de proteína que reacciona con la proteína parcialmente imitada. Ver, Sutcliffe et al., Science 219:660-666, 1983. Los anticuerpos que reconocen los epítopes cortos, lineales son particularmente útiles en los aplicaciones analíticas y de diagnostico que emplean una proteína desnaturalizada, tal como la prueba con manchado Western (Tobin, Proc. Na ti . Acad. Sci . USA 76:4350-4356, 1979) , ó en el análisis de células fijas ó muestras de tejidos. Los anticuerpos de los epítopes son también útiles para detectar fragmentos de zilla4 en, por ejemplo, los fluidos del cuerpo ó medios de cultivo de célula. Los polipéptidos antigénicos, que llevan al epítope que contiene una secuencia de al menos seis, preferentemente al menos nueve, más preferentemente de 15 a aproximadamente 30 residuos de aminoácidos contiguos de un proteína zilla4 (por ejemplo, SEC ID NO:2). Pueden también ser usados, los polipéptidos comprenden un porción grande de una proteína zilla4, por ejemplo de 30 a 50 residuos hasta la secuencia completa. Se prefiere que las secuencia de aminoácido del polipéptido que lleva al epítope se seleccione para proveer una solubilidad substancial en solventes acuosos, que es la secuencia que incluye residuos relativamente hidrofílicos, y se evitan substancialmente los residuos hidrofóbicos. Ver la Fig. 1 anexa. La secuencias que contienen los residuos de prolina son los referidos. Particularmente se prefiere a tales regiones que incluyen los residuos 122-127, 123-128, y 147-152 de la SEC ID NO:2. Como aquí se usa, el término "anticuerpos" incluye los anticuerpos policlonales, los anticuerpos monoclonales, fragmentos que enlazan al antígeno del mismo tales como los fragmentos F(ab')2 y Fab, anticuerpos de una cadena simple, y los similares, incluyendo los anticuerpos genéticamente diseñados. Los anticuerpos no humanos pueden ser humanizados por medio de injertar solo los CDR no humanos en la estructura de trabajo humano y las regiones constantes, por medio de incorporar los dominios no humanos variables (opcionalmente "revistiéndolos" con una superficie similar a la humana por medio de reemplazamiento de los residuos expuestos, en donde el resultado es un anticuerpo "ocultos" o "revestido") . En algunas instancias, los anticuerpos humanizados pueden retener los residuos no humanos dentro de la estructura de trabajo de la región variable del humano, que domina para mejorar las características de enlazamiento propias. Aunque los anticuerpos humanizados, cuya vida media biológica puede ser incrementada, y la potencia para desfavorecer las reacciones inmunes en la administración a humanos se reduce. Un experto en la técnica puede generar los anticuerpos humanizados con dominios específicos y constantes diferentes (por ejemplo, las subclases Ig diferentes) para facilitar ó inhibir las varias funciones de inmunidad asociadas con los dominios en particular constantes de anticuerpos. Las técnicas alternativas para generar ó seleccionar los anticuerpos útiles aquí mismo en la exposición in vitro de los linfocitos a una proteína zilla4, y la selección de las bibliotecas que exhiben al anticuerpo en el fago ó vectores similares (por ejemplo, a través del uso del polipéptido zilla4 inmovilizado ó etiquetado) . Los anticuerpos son definidos por ser específicamente enlazados sí se enlazan a una proteína zilla4 con una afinidad de al menos 10 veces más grande que la afinidad de enlazar al polipéptido (no el zilla4) de control. Se prefiere a los anticuerpos que exhiben una afinidad de enlazce (Ka) de 106 M"1 ó mayores, preferentemente 107 M"1 ó mayores, más preferentemente 108 M"1 ó mayores, y más preferentemente 109 M"1 ó mayores. La afinidad de un anticuerpo monoclonal puede fácilmente determinarse por medio de alguien de habilidades en la técnica (ver, por ejemplo, Scatchard, Kann. NY Acad. Sci 51:660-672, 1949). Los métodos para preparar los anticuerpos policlonales y monoclonales son bien conocidos en la técnica (ver, por ejemplo, Hurell, J. G. R. Ed. Monoclonal Hybridoma Antibodies : Techniques and Applica tions , CRDC Press, Ine, Boca, Ratón, Fl, 1982) . Como será evidente por alguien de habilidades ordinarias en la técnica, los anticuerpos policlonales pueden generarse a partir de una variedad de animales de sangre caliente tales como los caballos, las vacas, cabras, borregos, perros, pollos, conejos, ratones y ratas. La inmunogenicidad de una proteína zilla4 puede ser incrementada a través del uso de un adyuvante tal como el alumbre (hidróxido de aluminio) o el adyuvante completo ó incompleto de Freund. Los polipéptidos útiles para inmunizar también incluyen los polipéptidos de fusión, tales como fusiones de una proteína de zilla4 ó una porción de la misma con un polipéptido de inmunoglobulina o con proteína de enlace a la maltosa. Este inmunógeno de polipéptido puede ser una molécula de longitud completa o una porción de la misma. Sí la porción del polipéptido es "similar al hapteno", tal porción pueden ser ventajosamente asociada ó ligada a un transportador de macromolécula (tal como la hemociania de limpet de cerradura (KLH) , albúmina de suero de bovino (BSA) ó toxoide de tétano) para la inmunización. Una variedad de ensayos conocidos por aquellos expertos en la técnica pueden ser usados par detectar los anticuerpos que específicamente enlazan a la proteína zilla4. Los ensayos ejemplares son descritos en detalle en Antibodies : A Labora tory Manual , Harlow and Lañe (Eds), Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988. Los ejemplos representativos de tales ensayos incluyen la inmunoelectroforesis concurrente, radio-inmunoensayos, los ensayos de inmunosorbente enlazado a la enzima (ELISA), los ensayos de manchado por puntos, los ensayos de manchado Western, la inhibición ó los ensayos de competición, y los ensayos de emparedados. Los anticuerpos del zilla4 pueden ser usados para la purificación de la afinidad de las proteínas zilla4; en los ensayos de diagnostico para determinar los niveles de circulación de las proteínas zilla4, para detectar ó cuantificar la proteína zilla4 soluble como un marcador de la patología adyacente ó enfermedad; para la inmulocalización dentro de los animales totales ó en las secciones de los tejidos, incluyendo las aplicaciones de inmunodiagnóstico; para la inmunohistoquimica; para seleccionar bibliotecas de expresión; y para otros usos que deben ser evidentes por aquellos expertos en la técnica. Para ciertas aplicaciones, incluyendo los usos de los diagnósticos in vi tro y in vivo, es ventajoso emplear anticuerpos etiquetados. Las marcas ó etiquetas directas adecuadas incluyen los radionúclidos, enzimas, . substratos, cofactores, inhibidores, fluorescentes, marcadores, marcadores quimioluminiscentes, partículas magnéticas y - los similares; marcas ó etiquetas indirectas pueden caracterizar el uso de biotina-avidina u otros pares complemento / anticomplemento como intermediarios. La presente invención también provee reactivos polinucleótidos para el uso diagnostico. Por ejemplo, un gen zilla4, una sonda que comprende un ADN ó ARN zilla4, ó una secuencia de los mismos puede ser usada para determinar sí el gen zilla4 esta presente en el cromosoma 2 de un paciente humano ó sí una mutación ha ocurrido. Las aberraciones cromosomales detectables en el sitio del gen zilla4 incluye, pero no están limitadas a, aneuploidia, los cambios en el numero de copias del gen, inserciones, supresiones, cambios y rearreglos en el sitio de restricción. Tales aberraciones pueden ser detectables usando los polinucleótidos de la presente invención empleando técnicas genéticas moleculares, tales como un análisis (RFLP) polimorfismo de fragmento de longitud de restricción, análisis (RFLP) de repetición corta una tras otra empleando técnicas PCR, y otras técnicas de análisis de enlace genético conocidas en la técnica (Sambrook et al., ibid. ; Ausubel et al., ibid. ; a. J. Marian, Chest 108:255-265, 1995). La invención es además ilustrada por los siguientes ejemplos no limitantes. EJEMPLOS Ejemplo 1 Una marca de la secuencia expresada (EST) se identificó en una base de datos publica por su homología de secuencia a la familia 11-1 de las proteínas. Una segunda EST se identificó en una base de datos privada por su superposición con la primera EST. El análisis de un clon correspondiente a la segunda EST indicaba la presencia de un intron en su extremo 5' . Basándose en una secuencia de consenso derivada de la segunda EST, los cebadores se diseñaron. Un par de estos cebadores (zc20, 038, SEC ID NO:32 y zc20, 039, SEC ID O: 33) se usó para examinar el tejido a base de PCR. Un total de 23 bibliotecas de ADNc humano se prepararon a partir de varios tejidos utilizando un equipo comercialmente disponible (un equipo de Amplificación de ADNc Marathón™ de Clotech Laboratories, Inc., Palo Alto, CA) . Esta bibliotecas se usaron como plantilla ó patrón del PCR. 3 µl de cada biblioteca del ADNc (diluido en 1/100), 20 pmoles de cada uno de los cebadores oligonucleotidos zc20,038 (SEC ID NO:32) y zc20,039 (SEC ID NO:33); y 1 U de la polimerasa del ADN Taq (Polimerasa Ex Taq™; PanVera, Madison, Wl) se usaron en reacciones de 25-µl. Las reacciones se hicieron ó realizaron como sigue: 94 °C por 2 minutos, después 35 ciclos de 94°C por 20 segundos, 63°C por 30 segundos, 72°C por 30 segundos; y terminando con una incubación de 2 minutos a 72 °C. Los productos PCR se hicieron correr en un gel. Las bandas de tamaño apropiado se encontraron en la medula ósea, Daubi, cerebro fetal, pulmón fetal, glioblastoma, HUVEC, ganglio linfático, y monocitos, pero no en las células CD4+, las células CD8+, riñon, hígado, isleta, páncreas, glándula salivales, músculo esquelético, bazo, estomago, testículos, y útero. y Ejemplo 2 En base a la información de la distribución del tejido arriba, el ADNc zilla4 se clonó usando PCR con RACE 5' y 3A El RACE 5' se realizó en la medula ósea, Daubi, cerebro fetal, pulmón fetal, glioblastoma, HUVEN, ganglio linfático, monocitos, y testículos. 3 µl de cada biblioteca de ADNc (diluidos en 1/100) , 20 pmoles de cada uno de los cebadores oligonucleotidos zc9739 (SEC ID NO: 34) y zc20, 142 (SEC ID NO: 35), y 1 U de una mezcla 1:1 de la polimerasa de ADN Taq y el anticuerpo anti-Taq (TaqSTart™, Clotech Laboratories) (el anticuerpo Ex TaglTaq 1:1) se usaron en reacciones de 25-µl. Las reacciones se hicieron ó realizaron como sigue: 94 °C por 2 minutos, después 5 ciclos de 94 °C por 20 segundos, 67°C por 1 minuto, 30 ciclos de 94°C por 20 segundos; 64°C por 30 segundos, 72°C por 1 minuto; y terminar con una incubación de 1 minutos a 72 °C. Los productos PCR se hicieron ó realizaron en un gel de agarosa. Las bandas obvias se obtuvieron de Daubi, cerebro fetal, pulmón fetal, glioblastoma, y ganglio linfático. Las bandas después se purificaron con una columna giratoria que contiene una membrana de gel de sílice (Equipo de extracción con gel QIAquick™; Qiagen, Inc., Valencia, CA) y se secuenciaron. La secuencia resultante de las bandas PCR extendidas en el extremo 5' de la primera EST, pero en desacuerdo con el segundo clon EST, que se creía que contenía un intron en el extremo 5' . Debido a que la secuencia de extremo 3' del segundo clon EST se diferencia del primer EST, se realizó la RACE 3' . Los ADNc (preparados como se divulgó arriba) de los tres tejidos (Daubi, cerebro fetal, y ganglio linfático) se usaron como plantillas ó patrones. 3 µl de cada ADNc (diluidos en 1/100) , 20 pmoles de cada uno de los cebadores oligonucleotidos zc9739 (SEC ID NO:34) y zc20,040 (SEC ID NO:38), y 1 U del anticuerpo £.?Tag|Taq 1:1 se usaron en las reacciones de 25-µl. Las reacciones se hicieron ó realizaron como sigue: 94 °C por 2 minutos, después 5 ciclos de 94 °C por 20 segundos, 70°C por 30 segundos, 25 ciclos de 94°C por 20 segundos, 64°C por 30 segundos, 72°C por 30 segundos; y terminar con una incubación de 2 minutos a 72 °C. Un µl de una dilución 1/30 de cada uno de los productos PCR se usó como plantilla ó patrón para una prueba PCR una después de la otra. 20 pmoles de cada uno de los cebadores oligonucleotidos zc9719 (SEC ID NO: 36) y zc20,041 (SEC ID NO: 39) y 1 U del anticuerpo ExTaglTaq 1:1 se usaron en reacciones de 25-µl. Las reacciones de hicieron ó realizaron como sigue: 94 °C por 2 minutos; después 5 ciclos de 94 °C por 20 segundos, 68 °C por 30 segundos; 30 ciclos de 94 °C por 20 segundos, 64 °C por 30 segundos, 72 °C por 30 segundos; y terminar con una incubación de 2 minutos a 72 °C. Los productos PCR se hicieron correr en un gel de agarosa. Las bandas obvias se obtuvieron en Daubi, cerebro fetal. Las bandas después se purificaron con una columna giratoria que contiene una membrana de gel de sílice (Equipo de extracción con gel Q Aquick™; Qiagen, Inc., Valencia, CA) y se secuenciaron. La secuencia resultante de las bandas PCR se extendieron en el extremo 3' de la original EST, pero estuvieron en desacuerdo con el segundo clon EST. La secuencia de ADN de consenso, un compuesto de seis productos de RACE 5' , productos de dos EST y dos RACE 3' , se muestran en la SEC ID NO:l.

Ejemplo 3 La región de codificación de zilla4 completa se inserta dentro del vector pCR®2.1 (Invitrogen, Carlsbad, CA) . La prueba PCR se realizó usando 3 µl de cada 1/100 diluidos en ADNc de Daubi, cerebro fetal, pulmón fetal, glioblastoma, ganglio linfático y teste; 20 pmoles de cada uno de los cebadores oligonucleotidos ZC20,308 (SEC ID NO: 40) y ZC20,309 (SEC ID NO: 41); y 1 U de una mezcla de 4:14 de la polimerasa de ADN Tag, polimerasa de ADN Pfu (Stratogene, La Jolla, CA) , y el anticuerpo anti-Tag (TaqStart™, Clontech Laboratories) (ExTag/Pfu/Taq 4:14) en mezclas de reacción de 25-µl. Las reacciones se hicieron ó realizaron como sigue: 94 °C por 2 minutos; después 35 ciclos de 94°C por 20 segundos, 62°C por 30 segundos, 72°C por 30 segundos; y terminar con una incubación de 4 minutos a 72 °C. Los productos PCR se hicieron ó realizaron sobre un gel, y las bandas se purificaron con una columna giratoria que contiene una membrana de gel de sílice (Equipo de extracción con gel QIAquick™; Qiagen, Inc., Valencia, CA) . Seis µl del fragmento PCR purificado con gel se ligaron a 2 µl del vector pCR®2.1 (Invitrogen) usando un equipo de clonación comercialmente disponible (Equipo de Clonación TEMPERATURA AMBIENTE; Invitrogen) y se incubó a 16°C durante la noche. 1 µl de la mezcla de ligación se mezcló con 10 µl de células hospederas E. Coli (células Electromax DH10B™; obtenidas de Life Tachnologies, Ine, Gaithersburg, MD) , se sometieron a electroporación, después se mezcló, con 400 µl LB, y agitaron a 37°C por 30 minutos. 100 µl de células se colocan en placas LB/amp con 80 µl de 0.1 M IPTG y 80 µl de X-gal mg/mL, y las placas se incubaron a 37 °C durante la noche. Mientras las colonias se seleccionaron por medio de la prueba PCR usando las mismas condiciones de arriba, excepto que la plantilla ó patrón eran colonias bacteriales en lugar del ADNc, y la mezcla de la enzima era el anticuerpo f-xTagl Taq 1:1. Las colonias con insertos se seleccionaron para someterlas a secuenciación. Ejemplo 4 Los manchados Northern se realizaron usando una serie de manchados Northern (Manchados Múltiples en Tejido Humano I, II y III, Manchado Master del ARN Humano y MTN II del Fetal Humano a partir de Clontech Laboratories, Inc., Palo Alto, CA) . La sonda se hizo de un producto de PCR purificado con gel usando el segundo clon EST como una plantilla ó patrón. Las condiciones de la prueba PCR son como se divulgaron en el Ejemplo 1. El ADN se etiquetó radioactivamente con un equipo comercialmente disponible (Sistema de etiquetado de cebador aleatorio Rediprime™ II; Amersham Corp., Arlington Heihts, IL) de acuerdo a las instrucciones de los fabricantes. La sonda se purificó usando una columna de empuje comercialmente disponible (Columna NucTrap®; Stratagene, La jolla, CA, ver ía solicitud Norteamericana No. 5,336,412). Una solución comercial de hibridización (Solución de Hibridización ExpressHyb™; Clontech Laboratories, Ine, Palo Alto, CA) se usó para la hibridización y como una solución hibridizante para los manchas. La hibridización tomo lugar durante la noche a 65 °C, y las manchas después se lavaron tres veces en 0.1 X SSC y 0.1% SDS a 55°C. No se encontró una señal obvia en la mayoría de los tejidos, excepto se detecto una señal débil en los testículos y la placenta en la Manchado Master del ARN. Ejemplo 5 Un ADNc de zilla4 alternativamente empalmado se clonó a partir de una biblioteca de una pulmón humano fetal. Las secuencias del ADN y del amino ácido de este clon son mostradas en la SEC ID NO: 8 y SEC ID NO: 9. El clon carecía de 183 bp cuando se comparó con la SEC ID NO:l. Ejemplo 6 El zilla4 se correlacionó en un mapa con el cromosoma humano 2 usando la versión comercialmente disponible de la Panel de Correlación Híbrida Radiación Stanford G3 (Research Genetics, Inc., Huntsville, AL). Este panel que contiene ADN que se puede someter a PCR a partir de cada uno de los clones híbridos de radiación 83 del total del genoma humano, dos ADN de control efectivos (donador RM y el recipiente A3) . Un servidor WWW disponible públicamente (http://shgc-www.stanford.edu) permite la localización cromosomica de los marcadores. Para la correlación con mapas del zilla4, las mezclas de reacción de 20-µl se realizaron en placas de microtitulación de 96 pozos que se pueden someter a PCR (Stratagene, La Jolla, CA) y se usó en un formador de ciclos térmicos (RoboCycler® Gradient 96; Stratagene, La Jolla, CA) . Cada uno de las mezclas de reacción 85 consisten de un amortiguador de 2 µl (amortiguador de reacción PCR 10 X Klen Taq, Clontech Laboratories, Ine, Palo Alto, CA) , una mezcla de PNTd de 1.6 µl(2.5 mM cada uno, PERKIN-ELMER, Foster City, CA) , cebador de sentido (dirección 5' ) de 1 µl (SEC ID NO: 43), un cebador de anti-sentido (dirección 5') de 1 µl (SEC ID NO:44), 2 µl de un agente que incrementa la densidad y teñido de rastreo (RediLoad, Research Genetics, Inc., Hunstvillew, AL), 0.4 µl de una mezcla de polimerasa del ADN / anticuerpo comercialmente disponible (Mezcla de Polimerasa Klen Taq 50Xadvantage™, Clontech Laboratories, Inc.), 25 ng del ADN a partir de clon híbrido individual ó un control y x µl ddH20 para un volumen total de 20 µl. Las mezclas obtenidas se sobrecolocaron con una cantidad igual de un aceite mineral y se sellaron. La prueba de PCR se hizo ó realizó para una desnaturalización inicial de 5 minutos a 94 °C; una desnaturalización en 35 ciclos de 45 segundos a 94 °C, 45 segundos se hibridizó con calor y enfriamiento a 60 °C, y una extensión de 75 segundos a 72 °C; seguida por la extensión final de 7 minutos a 12 ° C . Los productos de reacción se separaron por medio de llevar a cabo la electrofóresis sobre un gel de agarosa al 2%. Los resultados mostraron un enlace del gen zilla4 con el marcador AFMa037xfl de la estructura de trabajo del cromosoma 2 humano con un registro LOD de 12.5 y una distancia de 8.60 cR_10000 desde el marcador. El uso de los genes / marcadores circundantes posicionados en la región cromosomal del zilla4. Ejemplo 7 El zilla4 humano recombinante se produce en E. Coli usando sistema de fusión de doble afinidad de la proteína (MBP) que enlaza a la etiqueta Hisß/ maltosa como generalmente se divulgó por Pryor and Leiting, Prot . Expr. Pur. 10:309-319, 1997. Un sitio de escisión en la trombina se coloca en la unión entre la etiqueta de afinidad y las secuencias de zilla4. El construir la fusión reúne en el vector pTAP98, que comprende las secuencias para la duplicación y selección en E. Coli y en la levadura, el promotor de la E. Coli tac, y un sitio único pequeño justo corriente abajo del sitio de las secuencias que codifica a la trombina MBP-HÍS6. El ADNc zilla4 (SEC ID N0:1) se amplía haciendo la prueba de PCR usando cebadores los cuales cada uno se comprende de 40 bp de una secuencia homologa a la secuencia del vector y 25 bp de la secuencia que templa al ADNc. La reacción se hace ó realiza usando la polimerasa del ADN Pwo (Boehringer Mannheim, Indiapolis, IN) para 30 ciclos de 94 °C, 30 segundos; 60°C, 60 segundos; y 72°C, 60 segundos. Un microgramo del fragmento resultante se mezcla con 100 ng de Smal-cut pTAP98, y la mezcla se transforma en levadura para reunir el vector por medio de la recombinación homologa (Oldenburg et al., Nucí . Acids . Res . 25:451-452, 1997). Los transformantes Ura+ son seleccionados. El ADN plásmido se prepara a partir de los transformantes de la levadura y se transforma en E. coli MC 1061. El ADN plásmido conjuntado después se prepara a partir de los transformantes de MC 1061 mediante el método de minipreparación después de raspar una placa entera. El ADN plásmido se analiza mediante la digestión de restricción usando Ncol y EcoRI .

La cadena BL21 E. Coli se usó para expresión del zilla4. Las células son transformadas por medio de la electroporación y el crecimiento sobre las placas mínimas la glucosa que contienen ácidos casamino y ampicilina. Para la producción a gran escala las células crecen en un medio liquido que contiene ampicilina. Después de una hora a 37 °C, el IPTG se añade a la concentración final de 1 mM, y las células crecen por 2-3 horas adicionales a 37°C. Las células se rompen usando cuentas de vidrio, y los extractos son preparados de acuerdo a los métodos convencionales. Ejemplo 8 La proteína de fusión zilla4 recombinante se purifica mediante la cromatografía de afinidad. La resina de cobalto inmovilizada (resina Talón®; Clontech Laboratories, Ine, Palo Alto, CA) se equilibra en el amortiguador de enlace. Un mL de la resina empacada por 50 mg de proteína se combina con una solución de la proteína clarificada en un tubo, y el tubo se tapa y se sella, después se coloca en un agitador durante la noche a 4°C. La resina después se hace bolitas por medio de la centrifugación a 4°C y se lava tres veces con un amortiguador de enlace. La proteína se eluye con un amortiguador de enlace que contiene imidazol 0.2 M. La resina y amortiguador de elución son mezclados por al menos una hora a 4°C, la resina se hace bolitas, y el supernadante se remueve. Una alícuota se analiza por medio de la electrofóresis del gel, y se estima la concentración. La resina de la Amilosa se equilibra en un amortiguador de enlace de amilosa (20 mM Tris-HCl, pH 7.0, 100 mM NaCl, 10 mM EDTA) y se combina con el supernatante a partir de la resina de cobalto en una proporción de 2 mg de la proteína de fusión por mL de resina. Las etapas de enlace y lavado son llevadas a cabo como se divulgó arriba. La proteína se eluye con el amortiguador de enlace de la amilosa que contiene 10 mM de maltosa usando un volumen tan pequeño como sea posible para minimizar la necesidad de la concentración subsecuente. La proteína eluida se analiza mediante la electrofóresis del gel y el manchado con el azul Coomassie usando un BSA estándar, y por medio del manchado usando un anticuerpo anti-MBP. A partir de lo anterior, se aprecia que, aunque las modalidades especificas de la invención han sido descritas aquí mismo para los propósitos de la ilustración, varias modificaciones pueden hacerse sin desviarse del espíritu y del alcance de la invención. En conformidad, la invención no esta limitada excepto por las reivindicaciones adjuntas.

Se hace constar que con relación a esta fecha el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención. 1/28 LISTADO DE SECUENCIA 888 <110> ZymoGenetics. Inc. <120> ZIL1A4 HOMOLOGO DE LA INTERLEUCINA- 1 936 <130> 98-59PC <150> US 09/179.614 984 <151> 1998-10-27 <160> 44 1032 <170> FastSEQ para Windows Versión 3.0 <210> 1 <211> 1600 1080 <212> ADN <213> Homo sapiens <220> 1128 <221> CDS <222> (847) ...(150 <400> 1 : 1176 cgggcaggt ccagaagcta ttaccttaat tggttatgtg gatttcccct catactgagc 60 ' gctgtgtgt ggtgttgtaa aacatagcca tacacagtaa ctgacaaggg caaatgtgat 120 • ' gaaaaatgc aaggaagtgc agataaatag ctaatgggct gtagaaggaa gctagtcctt 180 gagggcttg atcaaggaag gtccttttgc atgtcacctt tgaagaagag gggacataga 240 1224 gaggtatag tgcatcccgg agtgtacctg gaagggaaca tgaaaagagg acatttttct 300 tgggacatg gggactccac ttgcatgaac tctggaattg gggcaaagaa ccatcatgag 360 acaagggct tccttgaacc tcccaggctc attggctgat cta>?accctg tgtcccctct 420 tccttcact ctcctctgtt ttctatacct gtattattgg actggactgg aagccacctg 480 ' 12?2 tctatcaca agtaccttga aatgtgttga ataggtgtgg cacagtcctt agcagagtgg 540 actaccccc acaggaattt gtttatacct ttggcatgga aaatagcagg aaatgagtga 600 cactgataa ctgaggatgc tatttattat tggccaaagg aatacttgtg ttgtatttgc 660 taaccactc acaaactgtt gattacaaat gagtaccaga cctagctcct tcaagtaaag 720 I320 atcctgaga actgaaggca aacagagctc caggagtcca agacagagcc acagaccacg 780 ' ggatccctg gcccaggtct tggacttcat tccattttct gttgagtaat aaactcaacg 840 1368 3/28 tgg ttc atc tgc acc tcc tgc aat tgt aat gag cct gtt ggg gtg acá 1416 Trp Phe He Cys Thr Ser Cys Asn Cys Asn Glu Pro Val Gly Val Thr 175 180 185 190 gat aaa ttt gag aac agg aaa cac att gaa ttt tea ttt caá cea gtt 1464 Asp Lys Phe Glu Asn Arg Lys His lie Glu Phe Ser Phe Gln Pro Val 195 200 205 tgc aaa gct gaa atg age ccc agt gag gtc age gat tag gaaactgccc 1513 Cys Lys Ala Glu Met Ser Pro Ser Glu Val Ser Asp * 210 215 cattgaacgc cttcctcgct aatttgaact aattgtataa aaacaccaaa cctgctcact 1573 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaa 1600 <210> 2 <211> 218 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Ser Phe Val Gly Glu Asn Ser Gly Val Lys Met Gly Ser Glu Asp 1 5 10 15 Trp Glu Lys Asp Glu Pro Gln Cys Cys Leu Glu Asp Pro Ala Gly Ser 20 25 30 Pro Leu Glu Pro Gly Pro Ser Leu Pro Thr Met Asn Phe Val His Thr 35 40 45 Ser Pro Lys Val Lys Asn Leu Asn Pro Lys Lys Phe Ser He His Asp 50 55 60 Gln Asp His Lys Val Leu Val Leu Asp Ser Gly Asn Leu He Ala Val 65 70 75 80 Pro Asp Lys Asn Tyr He Arg Pro Gu He Phe Phe Ala Leu Ala Ser 85 90 95 Ser Leu Ser Ser Ala Ser Ala Glu Lys Gly Ser Pro He Leu Leu Gly 100 105 110 Val Ser Lys Gly Glu Phe Cys Leu Tyr Cys Asp Lys Asp Lys Gly Gln 115 120 125 Ser His Pro Ser Leu Gln Leu Lys Lys Glu Lys Leu Met Lys Leu Ala 130 135 140 Ala Gln Lys Glu Ser Ala Arg Arg Pro Phe He Phe Tyr Arg Ala Gln 145 150 155 160 Val Gly Ser Trp Asn Met Leu Glu Ser Ala Ala Hps Pro Gly Trp Phe 165 170 175 He Cys Thr Ser Cys Asn Cys Asn Glu Pro Val Gly Val Thr Asp Lys 180 185 190 4/28 Phe Glu Asn Arg Lys His He Glu Phe Ser Phe Gln Pro Val Cys Lys 195 200 205 Ala Glu Met Ser Pro Ser Glu Val Ser Asp 210 215 <210> 3 <211> 5 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> porción de péptido <221> VARIANTE <222> (D...Ü) <223> Xaa es Leu o Phe <221> VARIANTE <222> (2)... (2) <223> Xaa es Glu o Thr <221> VARIANTE <222> (4)... (4) <223> Xaa es Ala o Val <221> VARIANTE <222> (5)... (5) <223> Xaa es Ala o Glp <400> 3 Xaa Xaa Ser Xaa Xaa 1 5 <210> 4 <211> 5 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220 <223> porción de péptido <221> VARIANTE <222> (2)... (2) <223> Xaa ¿s Gly o Asn 5/28 <221> VARIANTE <222> (3) ... (3) <223> Xaa es Leu o Trp <221> VARIANTE <222> (4)... (4) <223> Xaa es Phe o Tyr <221> VARIANTE <222> (5)... (5) <223> Xaa es He o Leu <400> 4 Pro Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 5 <211> 5 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> porción de péptido <221> VARIANTE <222> (1)...(1) <223> Xaa es Pro o Trp <221> VARIANTE <222> (2)... (2) <223> Xaa es Val o Leu <221> VARIANTE <222> (3)... (3) <223> Xaa es Ser. Cys. Phe. Arg. He o Gly 221> VARIANTE <222> (4)... (4) <223> Xaa es Leu o; Val <221> VARIANTE <222> (5)... (5) <223> Xaa es Thr. Ala o Gly <400> 5 6/28 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 5 <210> 6 <211> 6 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> porción de péptido <221> VARIANTE <222> (1)...(1) <223> Xaa es Thr o He <221> VARIANTE <222> (2)... (2) <223> Xaa és Asp, Lys o Glu <221> VARIANTE <222> (4)... (4) <223> Xaa és Ser, Tyr. Thr o Gln <221> VARIANTE <222> (5)... (5) <223> Xaa es Phe, Met o He <221> VARIANTE <222> (6)... (6) <223> Xaa es Gln. Asn, He o Leu <400> 6 Xaa Xaa Phe Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 7 <211> 218 <212> PRT <213> .Secuencia Artificial . <220> <223 variante de proteína <221> VARIANTE <222> (90)... (90) 7/28 <223> Xaa es Lys. Glu. o He <221> VARIANTE <222> (155)... (155) <223> Xaa es Ala. He. o Thr <221> VARIANTE <222> (167)... (167) <223> Xaa es Leu o Phe <221> VARIANTE <222> (168)... (168) <223> Xaa es Glu o Thr <221> VARIANTE <222> (170)... (170) <223> Xaa es Al a o Val <221> VARIANTE <222> (171)... (171) <223> Xaa es Ala o Gln <221> VARIANTE <222> (174)... (174) <223> Xaa es Gly or Asn <221> VARIANTE <222> (175)... (175) <223> Xaa es Leu o Trp <221> VARIANTE <222> (176)... (176) <223> Xaa es Phe o Tyr <221> VARIANTE <222> (177)... (177) <223> Xaa es He o Leu <221> VARIANTE <222> (186)... (186) <223> Xaa es Pro o Trp <221> VARIANTE <222> (187)... (187) <223> Xaa es Val o Leu 8/28 <221> VARIANTE <222> (188)... (188) <223> Xaa es Ser. Cys. Phe. Arg. lie. o Gly <221> VARIANTE <222> (189)... (189) <223> Xaa es Leu or Val <221> VARIANTE <222> (190)... (190) <223> Xaa es Thr, Ala. o Gly <221> VARIANTE <222> (199)... (199) <223> Xaa es Thr o. He <221> VARIANTE <222> (200)... (200) <223> Xaa es Lys. Asp. o Glu <221> VARIANTE <222> (202)... (202) <223> Xaa es Ser. Tyr. Thr, o Gln <221> VARIANTE <222> (203)... (203) <223> Xaa es Phe. Met. o He <221> VARIANTE <222> (204)... (204) <223> Xaa es Gln. Asn. He. o Leu <400> 7 Met Ser Phe Val Gly Glu Asn Ser Gly Val Lys Met G">y Ser Glu Asp 1 5 10 15 Trp Glu Lys Asp Glu Pro Gln Cys Cys Leu Glu Asp Pro Ala Gly Ser 25 30 Pro Leu Glu Pro Gly Pro Ser Leu Pro Thr Met Asn Phe Val His Thr 40 45 Ser Pro Lys Val Lys Asn Leu Asn Pro Lys Lys Phe Ser He His Asp 50 55 60 Gln Asp His Lys Val Leu Val Leu Asp Ser Gly Asn Leu He Ala Val 65 70 75 80 9/28 Pro Asp Lys Asn Tyr He Arg Pro Glu Xaa Phe Phe Ala Leu Ala Ser 85 90 95 Ser Leu Ser Ser Ala Ser Ala Glu Lys Gly Ser Pro He Leu Leu Gly 100 105 110 Val Ser Lys Gly Glu Phe Cys Leu Tyr Cys Asp Lys Asp Lys Gly Gln 115 120 125 Ser His Pro Ser Leu Gn Leu Lys Lys Glu Lys Leu Met Lys Leu Ala 130 135 140 Ala Gln Lys Glu Ser Ala Arg Arg Pro Phe Xaa Phe Tyr Arg Ala Gln 145 150 155 160 Val Gly Ser Trp Asn Met Xaa Xaa Ser Xaa Xaa His Pro Xaa Xaa Xaa 165 170 175 Xaa Cys Thr Ser Cys Asn Cys Asn Glu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Asp Lys 180 185 190 Phe Glu Asn Arg Lys His Xaa Xaa Phe Xaa Xaa Xaa Pro Val Cys Lys 195 200 205 Ala Glu Met Ser Pro Ser Glu Val Ser Asp 210 215 <210> 8 <211> 636 <212> ADN <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (135)... (608) <400> 8 gaattcggct tcctgagaac tgaaggcaaa cagagctcca ggagtccaag acagagccac 60 agaccacgag gatccctggc ccaggtcttg gacttcattc cattttctgt tgagtaataa 120 actcaacgtt gaaa atg tcc ttt gtg ggg gag aac tea gga gtg aaa atg 170 Met Ser Phe Val Gly Glu Asn Ser Gly Val Lys Met 1 5 10 ggc tet gag gac tgg gaa aaa gat gaa ccc cag tgc tgc tta gaa gag 218 Gly Ser Glu Asp Trp Glu Lys Asp Glu Pro Gln Cys Cys Leu Glu Glu 15 20 25 ate ttc ttt gca tta gcc tea tcc ttg age tea gcc tet gcg gag aaa 266 He Phe Phe Ala Leu Ala Ser Ser Leu Ser Ser Ala Ser Ala Glu Lys 30 35 40 10/28 gga agt ccg att ctc ctg ggg gtc tet aaa ggg gag ttt tgt ctc tac 314 Gly Ser Pro He Leu Leu Gly Val Ser Lys Gly Glu Phe Cys Leu Tyr 45 50 55 60 tgt gac aag gat aaa gga caá agt cat cea tcc ctt cag ctg aag aag 362 Cys Asp Lys Asp Lys Gly Gn Ser His Pro Ser Leu Gln Leu Lys Lys 65 70 75 gag aaa ctg atg aag ctg gct gcc caá aag gaa tea gca cgc cgg ccc 410 Glu Lys Leu Met Lys Leu Ala Ala Gln Lys Glu Ser Ala Arg Arg Pro 80 , 85 90 ttc atc ttt tat agg gct cag gtg ggc tcc tgg aac atg ctg gag tcg 458 Phe He Phe Tyr Arg Ala Gln Val Gly Ser Trp Asn Met Leu Glu Ser 95 100 105 gcg gct cac ccc gga tgg ttc atc tgc acc tcc tgc aat tgt aat gag 506 Ala Ala His Pro Gly Trp Phe He Cys Thr Ser Cys Asn Cys Asn Glu 110 115 120 cct gtt ggg gtg acá gat aaa ttt gag aac agg aaa cac att gaa ttt 554 Pro Val Gly Val Thr Asp Lys Phe Glu Asn Arg Lys His He Glu Phe 125 130 135 140 tea ttt caá cea gtt tgc aaa gct gaa atg age ccc agt gag gtc age 602 Ser Phe Gln Pro Val Cys Lys Ala Glu Met Ser Pro Ser Glu Val Ser 145 150 155 gat tag gaaactgccc cattgaaaag cegaatte 636 Asp * <210> 9 <211> 157 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 Met Ser Phe Val Gly Glu Asn Ser Gly Val Lys Met Gly Ser Glu Asp 1 5 10 15 Trp Glu Lys Asp Glu Pro Gln Cys Cys Leu Glu Glu He Phe Phe Ala 20 25 30 Leu Ala Ser Ser Leu Ser Ser Ala Ser Ala Glu Lys Gly Ser Pro He 35 40 45 11/28 Leu Leu Gly Val Ser Lys Gly Glu Phe Cys Leu Tyr Cys Asp Lys Asp 50 55 60 Lys Gly Gln Ser His Pro Ser Leu Gln Leu Lys Lys Glu Lys Leu Met 65 70 75 80 Lys Leu Ala Ala Gln Lys Glu Ser Ala Arg Arg Pro Phe He Phe Tyr 85 90 95 Arg Ala Gln Val Gly Ser Trp Asn Met Leu Glu Ser Ala Ala His Pro 100 105 110 Gly Trp Phe He Cys Thr Ser Cys Asn Cys Asn Glu Pro Val Gly Val 115 120 125 Tnr Asp Lys Phe Glu Asn Arg Lys His He Glu Phe Ser Phe Gln Pro 130 135 140 Val Cys Lys Ala Glu Met Ser Pro Ser Glu Val Ser Asp 145 150 155 <210> 10 <211> 157 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> 'proteína variante <221> VARIANTE <222> (29) . . . (29) <223> Xaa es Lys . Glu, o He <221> VARIANTE <222> (94) . . . (94) <223> Xaa es Ala. He. o Thr <221> VARIANTE <222> (106).., (106) <223> Xaa es Leu o Phe <221> VARIANTE <222> (107),.. (107) <223> Xaa es Glu o Thr <221> VARIANTE <222> (109)... (109) <223> Xaa e¿ Ala o Val <221> VARIANTE <222> (110) . . . ( 110) 12/28 <223> Xaa • Ala o: Gln <221> VARIANTE <222> (113)... (113) <223> Xaa es Gly o: Asn <221> VARIANTE <222> (114)... (114) <223> Xaa es Leu o Trp <221> VARIANTE <222> (115)... (115) <223 Xaa es Phe or Tyr <221> VARIANTE <222> (116)... (116) <223> Xaa es He o Leu <221> VARIANTE <222> (125)... (125) <223> Xaa es Pro o Trp <221> VARIANTE <222> (126)... (126) <223> Xaa es Val o Leu <2 1> VARIANTE <222> (127)... (127) <223> Xaa es Ser. Cys. Phe. Arg. He, o G'ly <22l> VARIANTE <222 (128)... (128) <223> Xaa es Leu o Val <221> VARIANTE <222> (129)... (129) <223> Xaa és Thr. Ala. o Gly <221> VARIANTE <222> (138)... (138) <223> Xaa es Thr o He <221> VARIANTE <222> (139)... (139) <223> Xaa es Lys, Asp. o Glu 13/28 <221> VARIANTE <222> (141)... (141) <223> Xaa es Ser. Tyr. Thr. o Gln <221> VARIANTE <222> (142) . . . (142) <223> Xaa es Phe. Met , o He <221> VARIANTE <222> (143)... (143) <223> Xaa es Gln. Asn. He. o Leu <400> 10 Met Ser Phe Val Gly Glu Asn Ser Gly Val Lys Met Gly Ser Glu Asp 1 5 10 15 Trp Glu Lys Asp Glu Pro Gln Cys Cys Leu Glu Glu Xaa Phe Phe Ala 25 30 Leu Ala Ser Ser Leu Ser Ser Ala Ser Ala Glu Lys Gly Ser Pro He 40 45 Leu Leu Gly Val Ser Lys Gly Glu Phe Cys Leu Tyr Cys Asp Lys Asp 50 55 60 Lys Gly Gln Ser His Pro Ser Leu Gln Leu Lys Lys Glu Lys Leu Het 65 70 75 80 Lys Leu Ala Ala Gln Lys Glu Ser Ala Arg Arg Pro Phe Xaa Phe Tyr 85 90 95 Arg Ala Gln Val Gly Ser Trp Asn Met Xaa Xaa Ser Xaa Xaa His Pro 100 105 110 Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Thr Ser Cys Asn Cys Asn Glu Xaa Xaa Xaa Xaa 115 120 125 Xaa Asp Lys Phe Glu Asn Arg Lys His Xaa Xaa Phe Xaa Xaa Xaa Pro 130 135 140 Val Cys Lys Ala Glu Met Ser Pro Ser Glu Val Ser Asp 145 150 155 <210> 11 <211> 218 <212> PRT 213> Secuencia Artificial <220> <223> proteína variante <221> VARIANTE <222> (90 ) . . . (90 ) 14/28 <223 Xaa es Lys . Gl u o He <221> VARIANTE <222> (155)... (155) <223> Xaa es Ala. He o Thr <221> VARIANTE <222> (200)... (200) <223> Xaa és Lys. Asp o Glu <400> 11 Met Ser Phe Val Gly Glu Asn Ser Gly Val Lys Met Gly Ser Glu Asp 1 5 10 15 Trp Glu Lys Asp Glu Pro Gln Cys Cys Leu Glu Asp Pro Ala Gly Ser 25 30 Pro Leu Glu Pro Gly Pro Ser Leu Pro Thr Met Asn Phe Val Hs Thr 40 45 Ser Pro Lys Val Lys Asn Leu Asn Pro Lys Lys Phe Ser He His Asp 50 55 60 Gln Asp His Lys Val Leu Val Leu Asp Ser Gly Asn Leu lie Ala Val 65 70 75 80 Pro Asp Lys Asn Tyr He Arg Pro Glu Xaa Phe Phe Ala Leu Ala Ser 85 90 95 Ser Leu Ser Ser Ala Ser Ala Glu Lys Gly Ser Pro He Leu Leu Gly 100 105 110 Val Ser Lys Gly Glu Phe Cys Leu Tyr Cys Asp Lys Asp Lys Gly Gln 115 120 125 Ser His Pro Ser Leu Gln Leu Lys Lys Glu Lys Leu Met Lys Leu Ala 130 135 140 Ala Gln Lys Glu Ser Ala Arg Arg Pro Phe Xaa Phe Tyr Arg Ala Gln 145 150 155 160 Val Gly Ser Trp Asn Met Leu Glu Ser Ala Ala H.s Pro Gly Trp Phe 165 170 175 He Cys Thr Ser Cys Asn Cys Asn Glu Pro Val Gly Val Thr Asp Lys 180 185 190 Phe Glu Asn Arg Lys His He Xaa Phe Ser Phe Gln Pro Val Cys Lys 195 200 205 Ala Glu Met Ser Pro Ser Glu Val Ser Asp 210 215 <210> 12 <211> 157 <212> PRT <213> Secuencia Artificial 15/28 <220> <223> proteína variante <221> VARIANTE <222> (29)... (29) <223> Xaa es Lys. Glu. o He <221> VARIANTE <222> (94)... (94) <223> Xaa es Ala, He. o Thr <221> VARIANTE <222> (139)... (139) <223> Xaa es Lys. Asp. o Glu <400> 12 Met Ser Phe Val Gly Glu Asn Ser Gly Val Lys Met Gly Ser Glu Asp 1 5 10 15 Trp Glu Lys Asp Glu Pro Gln Cys Cys Leu Glu Glu Xaa Phe Phe Ala 25 30 Leu Ala Ser Ser Leu Ser Ser Ala Ser Ala Glu Lys Gly Ser Pro He 40 45 Leu Leu Gly Val Ser Lys Gly Glu Phe Cys Leu Tyr Cys Asp Lys Asp 50 55 60 Lys Gly Gln Ser H.s Pro Ser Leu Gln Leu Lys Lys Glu Lys Leu Met 65 70 75 80 Lys Leu Ala Ala Gln Lys Glu Ser Ala Arg Arg Pro Phe Xaa Phe Tyr 85 90 95 Arg Ala Gln Val Gly Ser Tf Asn Met Leu Glu Ser Ala Ala His Pro 100 105 110 Gly Trp Phe He Cys Thr Ser Cys Asn Cys Asn Glu Pro Val Gly Val 115 120 125 T r Asp Lys Phe Glu Asn Arg Lys His He Xaa Phe Ser Phe G n Pro 130 135 140 Val Cys Lys Ala Glu Met Ser Pro Ser Glu Val Ser Asp 145 150 155 <210> 13 <211> 657 <212> ADN <213> Secuencia Artificial <220> <221> CDS <222> (1)...(657) 16/28 <221> variación <222> (598) . . . (601) <223 codon degenerado #200 (aar) codifica a <223> ADN variante <400> 13 atg tcc ttt gtg ggg gag aac tea gga gtg aaa atg ggc tet gag gac 48 Met Ser Phe Val Gly Glu Asn Ser Gly Val Lys Met Gly Ser Glu Asp 1 5 10 15 tgg gaa aaa gat gaa ccc cag tgc tgc tta gaa gac ccg gct gga age 96 Trp Glu Lys Asp Glu Pro Gln Cys Cys Leu Glu Asp Pro Ala Gly Ser 20 25 30 ccc ctg gaa cea ggc cea age ctc ccc acc atg aat ttt gtt cac acá 144 Pro Leu Glu Pro Gly Pro Ser Leu Pro Thr Met Asn Phe Val His Thr 35 40 45 agt cea aag gtg aag aac tta aac ccg aag aaa ttc age att cat gac 192 Ser Pro Lys Val Lys Asn Leu Asn Pro Lys Lys Phe Ser He His Asp 50 55 60 cag gat cac aaa gta ctg gtc ctg gac tet ggg aat ctc ata gca gtt 240 Gln Asp His Lys Val Leu Val Leu Asp Ser Gly Asn Leu He Ala Val 65 70 75 80 cea gat aaa aac tac ata cgc cea gag atc ttc ttt gca tta gcc tea 288 Pro Asp Lys Asn Tyr He Arg Pro Glu He Phe Phe Ala Leu Ala Ser 85 90 95 tcc ttg age tea gcc tet gcg gag aaa gga agt ccg att ctc ctg ggg 336 Ser Leu Ser Ser Ala Ser Ala Glu Lys Gly Ser Pro He Leu Leu Gly 100 105 110 gtc tet aaa ggg gag ttt tgt ctc tac tgt gac aag gat aaa gga caá 384 Val Ser Lys Gly Glu Phe Cys Leu Tyr Cys Asp Lys Asp Lys Gly Gln 115 120 125 agt cat cea tcc ctt cag ctg aag aag gag aaa ctg atg aag ctg gct 432 Ser His Pro Ser Leu Gln Leu Lys Lys Glu Lys Leu Met Lys Leu Ala 130 135 140 17/28 gcc caá aag gaa tea gca cgc cgg ccc ttc atc ttt tat agg gct cag 480 Ala Gln Lys Glu Ser Ala Arg Arg Pro Phe He Phe Tyr Arg Ala Gln 145 150 155 160 gtg ggc tcc tgg aac atg ctg gag tcg gcg gct cac ccc gga tgg ttc 528 Val Gly Ser Trp Asn Met Leu Glu Ser Ala Ala His Pro Gly Trp Phe 165 170 175 atc tgc acc tcc tgc aat tgt aat gag cct gtt ggg gtg acá gat aaa 576 He Cys Thr Ser Cys Asn Cys Asn Glu Pro Val Gly Val Thr Asp Lys 180 185 190 ttt gag aac agg aaa cac att aar ttt tea ttt caá cea gtt tgc aaa 624 Phe Glu Asn Arg Lys His He Xaa Phe Ser Phe Gln Pro Val Cys Lys 195 200 205 gct gaa atg age ccc agt gag gtc age gat tag 657 Ala Glu Met Ser Pro Ser Glu Val Ser Asp * 210 215 <210> 14 <211> 218 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223 proteína variante <400> 14 Met Ser Phe Val Gly Glu Asn Ser Gly Val Lys Met Gly Ser Glu Asp 1 5 10 15 Trp Glu Lys Asp Glu Pro Gln Cys Cys Leu Glu Asp Pro Ala Gly Ser 20 25 30 Pro Leu Glu Pro Gly Pro Ser Leu Pro Thr Met Asn Phe Val His Thr 35 40 45 Ser Pro Lys Val Lys Asn Leu Asn Pro Lys Lys Phe Ser He His Asp 50 55 60 Gln Asp His Lys Val Leu Val Leu Asp Ser Gly Asn Leu He Ala Val 65 70 75 80 Pro Asp Lys Asn Tyr He Arg Pro Glu He Phe Phe Ala Leu Ala Ser 85 90 95 Ser Leu Ser Ser Ala Ser Ala Glu Lys Gly Ser Pro He Leu Leu Gly 100 105 110 18/28 Val Ser Lys Gly Glu Phe Cys Leu Tyr Cys Asp Lys Asp Lys Gly Gln 115 120 125 Ser His Pro Ser Leu Gln Leu Lys Lys Glu Lys Leu Met Lys Leu Ala 130 135 140 Ala Gln Lys Glu Ser Ala Arg Arg Pro Phe He Phe Tyr Arg Ala Gln 145 150 155 160 Val Gly Ser Trp Asn Met Leu Glu Ser Ala Ala His Pro Gly Trp Phe 165 170 175 He Cys Thr Ser Cys Asn Cys Asn Glu Pro Val Gly Val Thr Asp Lys 180 185 190 Phe Glu Asn Arg Lys His He Lys Phe Ser Phe Gln Pro Val Cys Lys 195 200 205 Ala Glu Met Ser Pro Ser Glu Val Ser Asp 210 215 <210> 15 <211> 157 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223 proteína variante <400> 15 Met Ser Phe Val Gly Glu Asn Ser Gly Val Lys Met Gly Ser Glu Asp 1 5 10 15 Trp Glu Lys Asp Glu Pro Gln Cys Cys Leu Glu Glu He Phe Phe Ala 25 30 Leu Ala Ser Ser Leu Ser Ser Ala Ser Ala Gl u Lys Gly Ser Pro He 40 45 Leu Leu Gly Val Ser Lys Gly Glu Phe Cys Leu Tyr Cys Asp Lys Asp 50 55 60 Lys Gly Gln Ser His Pro Ser Leu Gln Leu Lys Lys Glu Lys Leu Met 65 70 75 80 Lys Leu Ala Al a Gln Lys Glu Ser Ala Arg Arg Pro Phe He Phe Tyr 85 90 95 Arg Ala Gln Val Gly Ser Trp Asn Met Leu Glu Ser Ala Ala His Pro 100 105 110 Gly Trp Phe He Cys Thr Ser Cys Asn Cys Asn Gl u Pro Val Gly Val 115 120 125 Thr Asp Lys Phe Glu Asn Arg Lys His He Lys Phe Ser Phe Gln Pro 130 135 140 Val Cys Lys Ala Glu Met Ser Pro Ser Glu Val Ser Asp 145 150 155 19/28 <210> 16 <211> 654 <212> ADN <213> Secuencia Artificial <220> <221> m?sc_feature <222> (1)...(654) <223 m es cualquier nucleótido <223> i secuencia degenerada <400> 16 atgwsnttyg tnggngaraa ywsnggngtn aaratgggnw sngargaytg ggaraargay 60 garccncart gytgyytnga rgayccngcn ggnwsnccny tngarccngg nccn snytn 120 ccnacnatga ayttygtnca yacnwsnccn aargtnaara ayytnaaycc naaraartty 180 wsnathcayg aycargayca yaargtnytn gtnytngayw snggnaayyt nathgcngtn 240 ccngayaara aytayathg nccngarath ttyttygcny tngcnwsnws nytnwsnwsn 300 gcnwsngcng araarggnws nccnathytn ytnggngtnw snaarggnga rttytgyytn 360 taytgygaya argayaargg ncarwsncay ccnwsnytnc arytnaaraa rgaraarytn 420 atgaarytng cngcncaraa rgarwsngcn mgnmgnccnt tyathttyta ymgngcncar 480 gtnggnwsnt ggaayatgyt ngarwsngcn gcncayccng gntggttyat htgyacnwsn 540 tgyaaytgya aygarccngt nggngtnacn gayaarttyg araaymgnaa rcayathgar 600 ttywsnttyc arccngtntg yaargcngar atgwsnccnw sngargtnws ngay 654 <210> 17 <211> 654 <212> ADN <213> Secuencia Artificial <220> 221> variación <222> (I) . . . (654) 223> n es cualquier nucleótido <223> secuencia degenerada <400> 17 atgwsnttyg tnggngaraa ywsnggngtn aaratgggnw sngargaytg ggaraargay 60 garccncart gytgyytnga rgayccngcn ggnwsnccny tngarccngg nccnwsnytn 120 ccnacnatga ayttygtnca yacnwsnccn aargtnaara ayytnaaycc naaraartty 180 wsnathcayg aycargayca yaargtnytn gtnytngayw snggnaayyt nathgcngtn 240 ccngayaara aytayathmg nccngarath ttyttygcny tngcnwsnws nytnwsnwsn 300 gcnwsngcng araarggnws nccnathytn ytnggngtnw snaarggnga rttytgyytn 360 taytgygaya argayaargg ncarwsncay ccnwsnytnc arytnaaraa rgaraarytn 420 20/28 atgaarytng cngcncaraa rgarwsngcn pignmgnccnt tyathttyta ymgngcncar 480 gtnggnwsnt ggaayatgyt ngarwsngcn gcncayccng gntggttyat htgyacnwsn 540 tgyaaytgya aygarccngt nggngtnacn gayaarttyg araaymgnaa rcayathaar 600 ttywsnttyc arccngtntg yaargcngar atgwsnccnw sngargtnws ngay 654 <210> 18 <211> 471 <212> ADN <213> Secuencia Artificial <220> <223> secuencia degenerada <221> rm sc_f eature <222> (1 ) . . . (471 ) <223> n - A.T.C or G 400> 18 atgwsnttyg tnggngaraa ywsnggngtn aaratgggpw sngargaytg ggaraargay 60 garccncart gytgyytnga rgarathtty ttygcnytng cnwsnwsnyt nwsnwsngcn 120 wsngcngara arggnwsncc nathytnytn ggngtnwsna arggngartt ytgyytntay 180 tgygayaarg ayaarggnca rwsncayccn wsnytncary tnaaraarga raarytnatg 240 aarytngcng cncaraarga rwsngcnmgn mgnccnttya thttytaymg ngcncargtn 300 ggnwsntgga ayatgytnga rwsngcngcn cayccnggpt ggttyathtg yacnwsntgy 360 aaytgyaayg arccngtngg ngtnacngay aarttygara aymgnaarca yathgartty 420 wsnttycarc cngtntgyaa rgcngaratg wsnccnwsng argtnwsnga y 471 <210> 19 <211> 471 <212> ADN <213 Secuencia Artificial <220> 223 secuencia degenerada <221> mi se feature <222> ( 1) .7. (471) <223> n - A.T.C or G <400> 19 atgwsnttyg tnggngaraa ywsnggngtn aaratgggnw sngargaytg ggaraargay 60 garccncart gytgyytnga rgarathtty ttygcnytng cnwsnwsnyt nwsnwsngcn 120 wsngcngara arggnwsncc nathytnytn ggngtnwsna arggngartt ytgyytntay 180 tgygayaarg ayaarggpca rwsncayccn wsnytncary tnaaraarga raarytnatg 240 aarytngcng cncaraarga rwsngcnmgn mgnccnttya thttytaymg ngcncargtn 300 21/28 ggnwsntgga ayatgytnga rwsngcngcn cayccnggnt ggttyathtg yacnwsntgy 360 aaytgyaayg arcengtngg ngtnacngay aarttygara aymgnaarca yathaartty 420 wsnttycarc cngtntgyaa rgengaratg wsnccnwsng argtnwsnga y 471 <210> 20 <211> 17 <212> ADN <213> Secuencia Artificial <220> <221> variación <222 (D . . . Ü7) <223 n es cualquier nucleótido <223 cebador oligonucleótido <400> 20 cayccnggnt ggttyat 17 <210> 21 <211> 17 <212> ADN <213> Secuencia Artificial <220> <221> variación <222> (1 ) . . . (17) <223> n es cualquier nucleótido <223> cebador oligonucleótido <400> ¿i ydyccnrrny kntwyht 17 <210> 22 <211> 17 <212> ADN 213> Secuencia Artificial <220> <221> variación <222> (1)...(17) 223 n es cualquier nucleótido 223> cebador oligonucleótido 22/28 <400> 22 adranmrny ynggrhr 17 <210> 23 <211> 17 <212> ADN <213 Secuencia Artificial <220> <221> variación <222> (D...Ü7) 223> n es cualquier nucleótido <223> cebador oligonucleótido <400> 23 athgarttyw snttyca 17 <210> 24 <211> 17 <212> ADN <213> Secuencia Artificial <220> <221> variación <222> (1)...(17) <223> n es cualquier nucleótido <223 cebador oligonucleótido <400> 24 aynranttyh vnwtnyw 17 <210> 25 <211> 17 <212> ADN <213> Secuencia Artificial <220> <221> variación <222> (1)...(17) <223 n es cualquier nucleótido <223> cebador oligonucleótido 23/28 <400> 25 wrnawnbdra antynrt 17 <210> 26 <211> 17 <212> ADN <213> Secuencia Artificial <220> <221> variación <222> (D...Ü7) <223 n es cualquier nucleótido <223> cebador oligonucleótido <400> 26 aarttywsna thcayga 17 <210> 27 <211> 17 <212> ADN <213> Secuencia Artificial <220> <221> variación , <222> (1)...(17) <223> n es cualquier nucleótido <223> cebador oligonucleótido <400> 27 rmnt yhbnh tnhrnga 17 <210> 28 <211> 17 <212> ADN <213> Secuencia Artificial <220> <221> variación <222> (1)...(17) <223> ' n es cualquier nucleótido <223 cebador oligonucleótido 24/28 <400> 28 tcnydnadnv drmanky 17 <210> 29 <211> 17 <212> ADN <213> Secuencia Artificial <220> 22l> v-ariación <2Z2> (1)...(17) <223> n es cualquier nucleótido 223> cebador oligonucleótido <400> 29 garttytgyy tntaytg 17 <210> 30 <211> 17 <212> ADN <213> Secuencia Artificial <220> <221> variación <222> (1)...(17) 223> n es cualquier nucleótido <223> cebador oligonucleótido <400> 30 vanhtntryb tnwvpks 17 <210> 31 <211> 17 <212> ADN <213 Secuencia Artificial <220 221> variación <222> (1)...(17) <223> n es cualquier nucleótido <223> cebador oligonucleótido 25/28 400> 31 smnbwnavry anadntb 17 <210> 32 <211> 24 <212> ADN <213> Secuencia Artificial <220> <223> cebador oligonucleótido <400> 32 gacaaagtca tccatccctt cagc 24 <210> 33 <211> 22 <212> ADN <213> Secuencia Artificial <220> <223> cebador oligonucleótido <400> 33 cagcatgttc caggagccca ce 22 <210> 34 <211> 27 <212> ADN <213> Secuencia Artificial <220> 223> cebador oligonucleótido <400> 34 ccatcctaat acgactcact atagggc 27 <210> 35 <211> 22 <212> DN <213> Secuencia Artificial <220> <223> cebador oligonucleótido 26/28 <400> 35 cgccgactcc agcatgttcc ag 22 <210> 36 <211> 23 <212> ADN <213 Secuencia Artificial <220> <223> cebador oligonucleótido <400> 36 actcactata gggctcgagc cgc 23 <210> 37 <211> 24 <212 ADN <213 Secuencia Artificial <220> <223> cebador oligonucleótido 400> 37 gggcagccag cttcatcagt ttct 24 <210> 38 <211> 24 <212> ADN <213> Secuencia Artificial <220> <223> cebador oligonucleótido <400> 38 ggctcaggtg ggctcctgga acat 24 <210> 39 <211> 24 <212> ADN <213> Secuencia Artificial <220> 223> cebador oligonucleótido <400> 39 27/28 ggatggttca tctgcacctc ctgc 24 <210> 40 <211> 24 <212> ADN <213> Secuencia Artificial <220> <223 cebador oligonucleótido <400> 40 cctgagaact gaaggcaaac agag 24 <210> 41 <211> 24 <212> ADN <213 Secuencia Artificial <220> <223> cebador oligonucleótido <400> 41 ttcaatgggg cagtttccta atcg 24 <210> 42 <211> 6 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> péptido tag <400> 42 Glu Tyr Met Pro Met Glu 1 5 <210> 43 <211> 18 <212> ADN <213> Secuencia Artificial <220> <223> cebador oligonucleótido ZC20 , 360 <400> 43 28/28 tcccctcttt ccttcact 18 <210> 44 <211> 18 <212> ADN <213> Secuencia Artificial <220> <223> cebador oligonucleótido ZC20 , 360 <400> 44 gtgccacacc tattcaac 18

Claims (17)

1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones 1.- Una proteina aislada, caracterizada porque comprende una secuencia de residuos de aminoácidos, seleccionada del grupo que consiste: los residuos 60 hasta los 218 de la SEC ID NO: 7; y los residuos 1 hasta los 157 de la SEC ID NO: 10.
2. 2. - La proteína aislada de la reivindicación 1, caracterizada porque el residuo de aminoácido que corresponde al residuo número 200 de la SEC ID NO: 2 es Lys.
3. 3.- La proteína aislada de la reivindicación 1, caracterizada porque el residuo de aminoácido correspondiente al residuo número 200 de la SEC ID NO: 2 es Asp.
4. 4.- La proteína aislada de la reivindicación 1, caracterizada porque el residuo de aminoácido correspondiente al residuo número 200 de la SEC ID NO: 2 es Glu.
5. 5.- La proteína aislada de la reivindicación 1 caracterizada porque dicha proteína comprende los residuos 60 hasta los 218 de la SEC ID NO: 11.
6. 6.- La proteína aislada de la reivindicación 5 caracterizada porque dicha proteína comprende los residuos 60 hasta los 218 de la SEC ID NO: 14 ó SEC ID NO: 2.
7. 7.- La proteína aislada de la reivindicación 1 caracterizada porque dicha proteína comprende los residuos 1 hasta los 218 de la SEC ID NO: 11 ó los residuos 1 hasta los 157 de la SEC ID NO: 12
8. 8.- La proteína aislada de la reivindicación 7 caracterizada porque dicha proteína comprende; los residuos 1 hasta los 218 de la SEC ID NO: 14 los residuos 1 hasta los 218 de la SEC ID NO: 2 los residuos 1 hasta los 157 de la SEC ID NO: 15; ó los residuos 1 hasta los 157 de la SEC ID NO: 9.
9. 9.- La proteína aislada de cualquiera de las reivindicaciones 1- 8, caracterizada porque dicha proteína es de los residuos de aminoácidos 157 hasta 1500 en longitud.
10. 10.- La proteína aislada de cualquiera de las reivindicaciones 1- 9, caracterizada porque además comprende una etiqueta de afinidad.
11. 11.- Un polinucleótido aislado que codifica a una proteína de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1-10.
12. 12.- El polinucleótido aislado de la reivindicación 11, caracterizado porque es el ADN.
13. 13.- Un vector de expresión, caracterizado porque comprende los siguientes elementos operablemente enlazados: (a) un promotor de transcripción; (b) un segmento de ADN que codifica a un proteína de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1-10; y (c) un terminador de la transcripción.
14. 14.- El vector de expresión de la reivindicación 17, caracterizado porque además comprende una secuencia de señal secretoria operablemente enlazada a dicho segmento de ADN.
15. 15.- Un células cultivada, caracterizada porque comprende un vector de expresión de acuerdo a la reivindicación 14.
16. 16.- Un método de preparar un proteína, caracterizado porque comprende: cultivar una célula de acuerdo a la reivindicación 15 bajo las condiciones en donde dicho segmento del ADN se expresa; y recuperar la proteína codificada por el segmento del ADN.
17. 17. - El uso de una proteína de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-10 para la manufactura de una medicina para modular una respuesta inmune en un animal. HOMOLOGO ZIL1A4 DE INTERLEUCINA-1 RESUMEN DE LA INVENCIÓN Son divulgados, los homólogos de interleucina-1, los materiales y los métodos para hacerlos, ' las composiciones que los comprenden, y los métodos para usarlos. La invención incluye a los polipéptidos que comprenden los residuos 60 hasta los 218 de la SEC ID NO: 7 ó los residuos 1 hasta los 157 de la SEC ID NO: 10. Los polipéptidos y los polinucleótidos de la invención son útiles dentro de los campos de diagnc. Acó, terapéuticos, y analíticos, incluyendo la modulación Je las repuestas inmunes .