MXPA01004004A - Composicion de propofol que comprende pentetato - Google Patents

Abstract

Una composición farmacéutica estéril para la administración parenteral que comprende una emulsión aceite en agua de propofol y una cantidad de pentetato suficiente para prevenir el crecimiento significativo de microorganismos por al menos 24 horas después de la contaminación adventicia extrínseca.

Description

COMPOSICIÓN DE PROPOFOL QUE COMPRENDE PENTETATO ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La pr senté invención se relaciona a propiedades 5 preservat ivas de pentetato, particularmente las propiedades 'reservativas de pentetato en una composición fa rmacéutica de emulsión aceite en agua que contiene 2 6-diisopropilfenol , es decir propofol . El pr Dpofol es un anestésico inyectable que puede ser ut ilizado para inducir y mantener la anestesia gene ral y para la sedación, por ejemplo, en unidades de cüidado intensivo donde la duración del tratamiento pu =de ser prolongado. Existe un número de formulaciones < e propofol conocidas. Ver, por ejemplo, UK 1472793, 1.as Patente de los Estados Unidos Nos. 4, 056, 635, 4, 4 2,817, 4,798,846 y 5,714,520. Las formulaciones de propofol han sido enseñadas para incluir preservativos para prevenir la contaminación extrínseca. Idealmente, la concentración preservativa se mantiene a un minimo, especialmente donde la f Drmulación se administra para el mantenimiento < e la anestesia general y sedación donde tales tratamie tos tienen en cuenta la posibilidad de que cantidade significantes de preservativo sean administradas a un paciente durante el curso del REF: 128811 .a&¡É a^Steaas&Sfctóiáí?ißfi tratamiento. Un número de preservativos ha sido sugerido para uso en formulaciones de propofol. Las formulaciones aceite en agua presentan requerimientos únicos que deben ser satisfactorios. Por ejemplo, para 5 la administración parenteral, el preservativo debe ser empleado en la fase acuosa para ser efectivo. Sin embargo, muchas especies iónicas que emplearían efectos antimicrobianos en la fase acuosa tienden a desestabilizar la emulsión. La desestabilización de emulsiones debido a especies iónicas, y en particular cationes divalentes, es también conocido que ocurra en sistemas de emulsión de nutrición parenteral total. Muller et al., Pha rm . Ind . , Vol 55(10), 948-950 (1993) . Además, para ser efectivo para el propósito destinado, a saber, la prevención de contaminación extrínseca, un preservativo debe ser un espectro amplio, es decir efectivo contra la bacteria gram negativa (tal como Pseudomona s a eruginosa y Escheri chia col i ) y gram positiva ( Staphyl ococcus a ureus ) asi como también levadura (tal como Candi da a lbi cans ) en concentraciones útiles. El edetato ha sido enseñado para ser únicamente preservativo que es un espectro amplio y es empleado en la fase acuosa sin desestabilizar las formulaciones de propofol aceite en agua. Ver, la Patente de los Estados Unidos No. 5,714,520. 3 Se conoce el pentetato como un agente de quelación de ion metálico. Holzgraefe, M . , et al., Cl in . Tox . , 24(3), 235-244 (1986). También es listado por la FDA para uso en infusiones IV. Inactive Ingredients Guide, FDA, pg. 101 (Doc #139955, Enero de 1996). El pentetato ha sido mostrado pata tener actividad inhibitoria contra la bacteria en caldo de infusión de cerebro-corazón, J. Da iry Sci en ce , Vol. 68, Suppl. 1, 1985, P210. Sin embargo, el Pentetato no ha sido previamente enseñado como un preservativo útil en emulsiones aceite en agua. De esta forma, se ha encontrado sorprendentemente que el pentetato no solamente proporciona propiedades preservat ivas adecuadas en emulsiones aceite en agua, pero sin desestabilizar también la emulsión y en concentraciones significativamente inferiores que aquellas necesarias para el edetato que es un preservativo efectivo.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La invención es una composición farmacéutica estéril para la administración parenteral que comprende una emulsión aceite en agua de propofol y una cantidad de pentetato suficiente para prevenir el crecimiento significativo de microorganismos por al menos 24 horas después de la contaminación adventicia extrínseca . Por una emulsión aceite en agua se quiere decir un sistema de dos fases distintas que está en equilibrio y en efecto, en general, es estable cinéticamente e inestable termodinámicamente. El pentetato, como se utiliza en la presente, se refiere a diet ilent riaminpentaacetato o "DTPA", y derivados del mismo. En general, los derivados adecuados de DTPA son aquellas sales que tienen afinidad inferior para DTPA de calcio. Derivados particulares incluyen pero no están limitados a pentetato trisódico-cálcico . La prevención del crecimiento significativo de microorganismos quiere decir crecimiento de microorganismos que es de preferencia no más de un incremento de 10 veces seguido de la contaminación extrínseca comúnmente encontrada en medios de tratamiento tales como unidades de cuidado intensivo en hospitales y similares. Para propósitos de esta definición, la contaminación es por lo general de aproximadamente 10- 103 colonias que forman unidades/ml, a temperaturas en el intervalo de 20-25°C. Tipicamente el pentetato está presente en composiciones de la presente invención en cantidades suficientes para prevenir un incremento de 10 veces en ¡J& fefe»a»«¡A.., É?arj?t?lMt?'-^MUßd el crecimiento microbiano 24 horas después de la contaminación extrínseca. Por lo general, la cantidad de pentetato es menos del 0.3% en peso, el limite superior dictado principalmente por el deseo de minimizar la concentración de preservativo utilizado para evitar resultados de toxicidad. De preferencia, el pentetato está presente en una cantidad de no más de 0.1% en peso. De preferencia, se utiliza en el intervalo de 0.0005% a 0.1% en peso, de preferencia en el intervalo de 0.0005% a 0.005% en peso. Las composiciones de la presente invención tipicamente comprenden de 0.1 a 5% en peso de propofol y de más preferencia de 1 a 2% de propofol. De mayor preferencia, la formulación comprende 1% ó 2% de propofol. Se puede preparar la emulsión aceite en agua disolviendo propofol y otros ingredientes de aceite solubles en un solvente inmiscible en agua, proporcionando una fase acuosa que comprende un surfactante y otros ingredientes solubles en agua (con la excepción de pentetato), y homogeneizando el aceite y las fases acuosas para proporcionar una emulsión concentrada. El solvente inmiscible en agua está presente adecuadamente en una cantidad que es hasta 30% en peso de la composición, más adecuadamente 5-25%, de preferencia 10-20% y en particular aproximadamente 10%. vlyf? X Un intervalo amplio de solventes inmiscibles en agua puede ser utilizado en las composiciones de la presente invención. Tipicamente el solvente inmiscible en agua es un aceite vegetal, por ejemplo aceite de soya, de cártamo, de semillas de algodón, de maiz, de girasol, de cacahuete, de ricino o de oliva. De preferencia el aceite vegetal es aceite de soya. Alternativamente, el solvente inmiscible en agua es un éster de un ácido de cadena media o larga por ejemplo, un mono-, di-, o triglicérido; o es un palmitato químicamente modificado o manufacturado, un éster de gliceral o aceite de ricino polioxil hidrogenado. En una alternativa adicional el solvente inmiscible en agua puede ser un aceite marino, por ejemplo hígado de bacalao u otro aceite derivado del pescado. Solventes adecuados también incluyen aceites fraccionados por ejemplo aceite de coco fraccionado o aceite de soya modificado. Además, las composiciones de la presente invención pueden comprender una mezcla de dos o más de los solventes inmiscibles en agua anteriores. La fase de aceite, que comprende propofol y un solvente inmiscible en agua, se homogeneiza con una fase acuosa que comprende un surfactante para proporcionar una emulsión concentrada. El surfactante puede estar presente en cantidades de no más de aproximadamente 2%, más adecuadamente de aproximadamente 1% a aproximadamente 2% en peso, y de preferencia de aproximadamente 1.2% en peso de la composición. Los surfactantes adecuados incluyen surfactantes no 5 iónicos sintéticos, por ejemplo éteres y esteres etoxilados y copolimeros en bloque de polipropileno- polietileno, y fosfátidos por ejemplo fosfátidos que se presentan naturalmente tales como fosfátidos de huevo y soya y fosfátidos modificados o artificialmente 0 manipulados (por ejemplo preparado por fraccionamiento fisico y/o cromatografía), o mezclas de los mismos. Surfactantes preferidos son fosfátidos de huevo y soya. Más preferida es la lecitina de huevo. La composición de la presente invención está adecuadamente 5 formulada para estar en pH de 6.5 a 9.5 y de más preferencia 7.0-8.5, si es necesario por medio de álcali tal como hidróxido de sodio. Pueden ser agregados los modificadores de la tonicidad que son compuestos que hacen a la composición 0 isotónica con sangre. Los modificadores de la tonicidad están adecuadamente presentes en cantidades hasta aproximadamente 3% en peso, de más preferencia de aproximadamente 1% a aproximadamente 2.5% y más adecuadamente de aproximadamente 2.25% en peso de la 5 composición total. Los modificadores de la tonicidad "a_£ r?-jR&r, '- ? 'jí2S adecuados incluyen glicerina. La emulsión concentrada se conduce al volumen final con agua y de nuevo se homogeneiza. La emulsión puede ser filtrada. Finalmente, se agrega pentetato acuoso. Alternativamente, el pentetato puede ser agregado inicialmente en la fase acuosa. La formulación se esteriliza. Las composiciones de la presente invención son tipicamente formulaciones acuosas estériles y se preparan de acuerdo con las técnicas de manufacturación convencionales utilizando, por ejemplo, aséptico manufacturado o esterilización terminal por autoclave. Las composiciones de la presente invención son útiles como anestésicos, los cuales incluyen sedación e inducción y mantenimiento de anestesia general. Por consiguiente, en otro aspecto la presente invención proporciona un método para producir anestesia (incluyendo sedación e inducción y mantenimiento de anestesia general) en un animal de sangre caliente, incluyendo humanos, que comprende administrar parenteralmente una composición farmacéutica acuosa, estéril que comprende una emulsión aceite en agua en el cual el propofol es emulsificado en un solvente inmiscible en agua con agua y un surfactante y además comprende una cantidad efectiva de pentetato. ÍfaSÍ£=2'J i^v&agiaBMN aisa Regímenes de dosis serán apreciados por aquellos expertos en la técnica y pueden variar de paciente a paciente. Por lo general, los niveles de dosis de propofol para producir anestesia general son de aproximadamente 2.0-2.5 mg/kg por un adulto. Dosis para el mantenimiento de anestesia son por lo general de aproximadamente 4-12 mg/kg/hora. Los efectos sedativos se pueden lograr con, por ejemplo, una dosis de 0.3-4.5 mg/kg/hora. Las ventajas referidas en lo anterior para incluir pentetato en composiciones de propofol se aplican también a emulsiones grasas intravenosas que tipicamente se administran, a pacientes que necesitan de las mismas, durante periodos de un dia o más. Ejemplos de tales emulsiones grasas intravenosas incluyen Intralipid (comercializado por Pharmacia), Lipofundin (Braun) y Travamulsion (Baxter). Intralipid, Lipofundin y Travamulsion son todos marcas comerciales. El pentetato utilizado como un inhibidor antimicrobiano es también extendido para todos los productos farmacéuticos y en la industria alimenticia y cosmética y para todas las otras industrias químicas y de productos naturales que usan preservativos. Esta invención proporciona una emulsión grasa intravenosa que comprende una cantidad de pentetato íS?- t flfßíi» para prevenir el crecimiento significativo de microorganismos por al menos 24 horas. En particular, la presente invención proporciona una composición acuosa, estéril para la administración parenteral que comprende una emulsión aceite en agua en donde es emulsificado un solvente inmiscible en agua con agua y estabilizado por medio de un surfactante y que comprende además una cantidad de pentetato suficiente para prevenir el crecimiento significativo de microorganismos por al menos 24 horas. Agentes terapéuticos o farmacéuticos adecuados son aquellos capaces de ser administrados parenteralmente en una emulsión aceite en agua. Tipicamente tales agentes son compuestos lipofilicos y pueden por ejemplo ser agentes ant ifúngicos , anestésicos, agentes antibacterianos, agentes anti-cáncer, anti-eméticos , agentes que actúan en el sistema nervioso tales como diazepam, esteroides, barbitúricos y preparaciones vitamínicas. En particular la presente invención se relaciona a tales emulsiones aceite en agua que tipicamente se administran, a pacientes que necesitan de las mismas, durante periodos de un dia o más. Los comentarios en la presente que se relacionan a composiciones de propofol típicos y preferidos de esta invención y la preparación de las mismas aplican mu ta ti s mu tandi s a emulsiones grasas intravenosas, emulsiones aceite en agua que contienen un agente terapéutico o farmacéutico, productos alimenticios y cosméticos, productos orales, tópicos y parenterales . Niveles de dosis de propofol para producir anestesia general, inducción y mantenimiento, y para producir efecto sedante, pueden ser derivados de la literatura sustantiva y pueden ser determinados por un experto en la técnica para adecuarse en un paciente dado y en un régimen de tratamiento.

EJEMPLOS Preparación de Formulaciones de Propofol TABLA I : Cantidades I Componentes % (peso) Propofol 1.0 aceite de soya 10.0 lecitina de huevo 1.2 glicerina 2.25 pentetato trisódico-cálcico 0.0005% hidróxido de sodio cs agua para inyección a 100 La composición de la presente invención está adecuadamente formulada a pH 7.0-8.5.

Preparación : Todas las etapas de procesamiento se llevan a cabo bajo nitrógeno y los pesos se refieren al peso en el volumen final. Se prepara una emulsión aceite en agua acuosa, estéril para la administración parenteral como sigue: 1. Se prepara una fase acuosa agregando glicerina y lecitina de huevo en agua. 2. Se prepara la fase de aceite agregando propofol al aceite . 3. Se agrega la fase de aceite a la fase acuosa a 40°C y se homogeneiza a altas presiones mayores de ,000 PSI. 4. Se conduce la emulsión concentrada al volumen final con agua y se homogeneiza a alta presión. Se formó después la emulsión final, se filtró y se agregó la solución acuosa de pentetato. Se puede agregar el pentetato aqui o en la etapa 1. Se rellena luego en recipientes bajo nitrógeno y autoclave.

La emulsión aceite en agua que contenia 0.005%, 0.001% de pentetato o 1% de propofol y 0.005%, 0.001% ó 0.0005% de pentetato se puede preparar en una forma similar utilizando las cantidades de ingredientes como se describió en la Tabla I.

ACTIVIDAD MICROBIOLÓGICA Se prepararon formulaciones de aceite en agua de propofol (Tabla I) que contenían varios aditivos y 0%, 0.005%, 0.001% y 0.0005% de pentetato como se describió en lo anterior. Se agregaron cultivos de caldo de cuatro organismos de prueba de eficacia de preservativos USP estándar S taphyl ococcus a ureus (ATCC 6538), Escheri ch ia col i (ATCC 8739), Pseudomona s a eruginosa (ATCC 9027) y Candida a lbi can s (ATCC 10231) a las formulaciones de prueba en aproximadamente 100 colonias que forman unidades por mi. Estas alícuotas se incubaron a 20-25°C y se probaron por cuentas viables de los organismos después de 24 y 48 horas. Los datos para las formulaciones de emulsión de propofol se dan a continuación. El pentetato por si mismo es efectivo en la prevención de un incremento no más de 10 veces en el crecimiento de microorganismos por al menos 24 horas después de la contaminación microbiana a concentraciones tan bajas como 0.0005%.

RESULTADOS Ejemplo 1 Formulación sin preservativo Log 10 CFU / mi Organismo Inicial 24 horas S . aureus 1.8 3.1 P. aeruginosa 1.7 3.3 E. coli 1.8 >4.8 C. albicans 1.9 >4.8 Ejemplo 2 Formulación con Pentetato (0.005%) Log 10 CFU / mi Organismo Inicial 24l horas S. aureus 1.9 2.0 P. aeruginosa 1.9 0.5 E. coli 2.0 1.8 C. albicans 2.2 2.7 Ejemplo 3 Formulación con Pentetato (0.001%) Log 10 CFU / mi Organismo Inicial 24 horas S . aureus 1.9 2.0 P. aeruginosa 1.9 0.0 E. coli 1.9 1.7 C . albicans 2.3 2.7 Ejemplo 4 Formulación con Pentetato (0.0005%) Organismo Inicial 24 horas 48 horas S. aureus 1 .9 2.1 - S. aureus 1 .9 2.2 2.6 S. aureus 2 .0 2.2 2.7 P. aeruginosa 1 .8 0.5 - P. aeruginosa 2 .0 0.6 0.5 P. aeruginosa 2 .0 1.0 0.5 E. coli 1 .8 1.6 - E. coli 2 .0 1.9 1.8 E. coli 2 .0 1.9 1.5 C. albicans 2 .3 2.7 - C. albicans 2 .0 2.3 2.4 C. albicans 2 .0 2.2 2.5 Ejemplo 5 Emulsión grasa con Pentetato (sin Propofol) (0.0005%) Log 10 CFU / mi Organismo Inicial 2 4 1 horas S . a ureus 2.1 2.7 P . a eruginosa 2.1 1.0 E . coli 2.0 1.7 C. albi cans 2.0 2.1 EJEMPLOS COMPARATIVOS TABLA II : Cantidades Formulación de Emulsión con EDTA Componentes % (peso) propofol 1.0 aceite de soya 10.0 lecitina de huevo 1.2 glicerina 2.25 edetato de sodio 0.005% hidróxido de sodio cs agua por inyección a 100 Se prepararon formulaciones aceite en agua de propofol (Tabla II) que contenían 0.00125%, 0.0025%, ems. jgs¿&« 0.00375% y 0.005% de EDTA cómo se describió para la formulación de pentetato, excepto utilizando EDTA en la fase acuosa. Las formulaciones se probaron como se describió en lo anterior agregando aproximadamente 104, 103, 102 y 102 colonias que forman unidades/ml de S. aureus, P. aeruginosa , E. coli, y C. albicans, incubando respectivamente a 20-25°C por 24 horas y probando por cuentas viables de los organismos. Los resultados se muestran a continuación. El EDTA se encontró que es inefectivo para prevenir un incremento no mayor de 10 veces en el crecimiento microbiano de espectro amplio en concentraciones de 0.0025% y por debaj o .

Ejemplo Comparativo A Formulación de Emulsión con EDTA (0.00125%) Log 10 CFU / mi Organismo Inicial 24 horas S . a ureus .1 4.3 P. aeruginosa 4.0 6.3* E. coli 2.6 2.4 C. albicans 2.8 4.2* *= Se observó un incremento de más de 10 veces en el crecimiento microbiano.

'AÍ8 Ejemplo Comparativo B Formulación de Emulsión con EDTA (0.0025%) Log 10 CFU / mi Organismo Inicial 24 horas S . aureus 4.1 4.2 P. aeruginosa 4.0 3.7 E. coli 2.7 1.5 C. albicans 2.8 3.9* *= Se observó un incremento de más de 10 veces en el crecimiento microbiano.

Ejemplo Comparativo C Formulación de Emulsión con EDTA (0.00375%) Log 10 CFU / mi Organismo Inicial 24 horas S. aureus 4.0 4.3 P. aeruginosa 4.0 3.7 E. coli 2.6 2.1 C. albicans 2.9 3.8 Ejemplo Comparativo D Formulación de Emulsión con EDTA (0.005%) Log 10 CFU / mi Organismo Inicial 24 horas S . aureus 4.1 4.2 P. a eruginosa 3.9 3.5 E . col i 2.5 2.3 C. albi cans 2.9 3.9 Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención .

Claims (23)

1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones: 1. Una composición farmacéutica estéril para la administración parenteral, caracterizada porque comprende una emulsión aceite en agua de un agente farmacéutico lipofilico y una cantidad de pentetato suficiente para prevenir un incremento de no más de 10 veces en el crecimiento de cada una de Pse udomona s aeruginosa , Escherichia coli , Staphylococcus aureus y Candida a lbi cans por al menos 24 horas después de la contaminación adventicia extrínseca.
2. 2. Una composición farmacéutica estéril para la administración parenteral, caracterizada porque comprende una emulsión aceite en agua de propofol y una cantidad de pentetato suficiente para prevenir un incremento de no más de 10 veces en el crecimiento de cada una de Pseudomonas a eruginosa , Escheri chia coli , Staphyl ococcus a ureus y Candida albicans por al menos 24 horas después de la contaminación adventicia extrínseca.
3. 3. Una composición farmacéutica estéril para la administración parenteral, caracterizada porque comprende una emulsión aceite en agua de propofol y no más del 0.1% en peso de pentetato.
4. 4. La composición farmacéutica estéril de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende de aproximadamente 0.0005% a aproximadamente 0.1% en peso de pentetato.
5. 5. La composición farmacéutica estéril de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende no más del 30% en peso de un solvente inmiscible en agua.
6. 6. La composición farmacéutica estéril de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende de 10% a 20% en peso de un solvente inmiscible en agua.
7. 7. La composición farmacéutica estéril de conformidad con la reivindicación 6, caracterizada porque el solvente inmiscible en agua es un aceite vegetal o un éster de un ácido graso.
8. 8. La composición farmacéutica estéril de conformidad con la reivindicación 7, caracterizada feS^Sj&fi porque el solvente inmiscible en agua es aceite de soya .
9. 9. La composición farmacéutica estéril de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el pH es de aproximadamente 6.5 a 9.5.
10. 10. La composición farmacéutica estéril de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende de 1% a aproximadamente 2% de propofol.
11. 11. La composición farmacéutica estéril de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende aproximadamente 1% de propofol.
12. 12. La composición farmacéutica estéril de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende aproximadamente 2% de propofol.
13. 13. La composición farmacéutica estéril de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque además comprende un surfactante.
14. 14. La composición farmacéutica estéril de conformidad con la reivindicación 13, caracterizada porque el surfactante es un fosfátido que se presenta naturalmente .
15. 15. La composición farmacéutica estéril de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada porque el fosfátido que se presenta naturalmente es lecitina de huevo.
16. 16. La composición farmacéutica estéril de conformidad con la reivindicación 13, caracterizada porque el surfactante es un fosfátido que no se presenta naturalmente.
17. 17. La composición farmacéutica estéril de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque es isotónica con sangre.
18. 18. La composición farmacéutica estéril de conformidad con la reivindicación 17, caracterizada porque es isotónica con sangre por incorporación de glicerina .
19. 19. Una composición farmacéutica estéril en la forma de una emulsión aceite en agua, caracterizada porque comprende: a) aproximadamente 2% en peso de propofol; b) aproximadamente 10% en peso de aceite de soya; c) aproximadamente 1.2% en peso de lecitina de huevo; d) aproximadamente 2.25% en peso de glicerina; e) aproximadamente 0.0005% en peso de pentetato; f) agua al 100%.
20. 20. Una composición farmacéutica estéril en la forma de una emulsión aceite en agua, caracterizada porque comprende: a) aproximadamente 1% en peso de propofol; b) aproximadamente 10% en peso de aceite de soya; c) aproximadamente 1.2% en peso de lecitina de huevo; d) aproximadamente 2.25% en peso de glicerina; e) aproximadamente 0.0005% en peso de pentetato; f) agua al 100%.
21. 21. Una emulsión grasa intravenosa, estéril, caracterizada porque comprende una cantidad de pentetato suficiente para prevenir un incremento de no más de 10 veces en el crecimiento de cada una de Pseudomonas aeruginosa , Escherichia coli , Staphylococcus aureus y Candida albicans por al menos 24 horas después de la contaminación adventicia extrínseca.
22. . ^ BSst? 22. Un método para la preparación de una composición farmacéutica estéril para la administración parenteral, caracterizado porque comprende las etapas de: a) proporcionar una fase de aceite que comprende una composición farmacéutica y un solvente inmiscible en agua; b) proporcionar una fase acuosa que comprende un surfactante; c) homogeneizar la fase de aceite y las fases acuosas para proporcionar una emulsión concentrada; d) proporcionar una formulación acuosa de pentetato; e) agregar la formulación acuosa de pentetato a la emulsión concentrada; f) esterilizar la emulsión.
23. 23. Un método para la limitación del crecimiento microbiano en una composición farmacéutica de emulsión aceite en agua, estéril seguido de la contaminación extrínseca de la composición estéril, caracterizado porque comprende incorporar en la emulsión aceite en agua una cantidad de pentetato suficiente para prevenir un incremento de al menos 10 veces en el crecimiento de los microorganismos por al menos veinticuatro horas después de la contaminación extrínseca.