MXPA00012377A - Proceso para producir un compuesto de hierro-dextranoun proceso para producir un compuesto de hierro-dextrano - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a un proceso para producir un compuesto de hierro-dextrano para el uso en tratamiento parenteral de la deficiencia de hierro en humanos o animales se obtiene un compuesto estable de peso molecular relativamente bajo deseado utilizando en primer lugar hidrogenación y luego oxidación para convertir los grupos terminales reductores en las mo1éculas de dextrano antes de la reacción con el hierro. Variando la relación de gruposhidrogenados a grupos oxigenados se puede variar el peso molecular promedio del compuesto de hierro y dextrano resultante.

Description

PROCESO PARA PRODUCIR UN COMPUESTO DE HIERRO- DEXTRANO ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Y TÉCNICA ANTERIOR La anemia por deficiencia de hierro ha sido descrita como una de las condiciones patológicas más comunes, posiblemente la más común, entre los seres humanos cuando se ve en forma global. También, en la cría de cerdos de granja moderna y otros animales domésticos, la anemia por deficiencia de hierro es un problema a menos que se tomen medidas profilácticas adecuadas. Si bien la anemia por deficiencia de hierro puede ser prevenida a menudo o curada mediante administración oral de preparaciones que contienen hierro, se prefiere en muchos casos el uso de preparaciones de hierro a dmi n i s t r ab 1 e s parenteralmente para evitar variaciones en la biodisponibilidad de las administraciones orales y para asegurar la efectiv administración. Por lo tanto, las preparaciones que contienen hierro para uso parenteral, eso quiere decir administración subcutánea, intramuscula o intravenosa, han estado durante muchos años a disposición del veterinario o del médico de humanos. S bien diversas sustancias que contienen hierro han sido utilizadas o sugeridas como componentes en p i epa r a c i one s inyectables parenteralmente contra la anemia por deficiencia de hierro, como ser el oxido férrico sacarado. Sin embargo, las preparaciones más comunes aceptadas hoy en día son las que comprenden un producto combinado de oxihidroxido férrico (o hidróxido férrico) en asociación con dextrano puesto que tales preparaciones son menos toxicas que por ejemplo los sacaratos férricos. El dextrano es un carbohidrato polimerico producido mediante los microorganismos Leuconostoc mesenteroides. Una preparación que contiene hierro para inyección parenteral debería obviamente satisfacer varios requisitos incluyendo fácil disponibilidad del hierro para la síntesis de hemoglobina, ausencia de efectos secundarios locales o generales y estabilidad en almacenamiento permitiendo una vida para el expendio satisfactoria a temperatura amb lente . Las preparaciones de h i e r r o - de x t r a no para el tratamiento de la anemia han sido come cializadas por décadas, y muchas variaciones en el proceso de fabricación y en la selección de materiales de partida han sido sugeridas con el objetivo de mejorar la estabilidad de esa clase de preparaciones y para disminuir la cantidad de efectos secundarios obtenidos en su administración. Como ejemplos de patentes que se ocupan de estos problemas se pueden mencionar los siguientes: La Patente de los Estados Unidos (1959) describe un proceso básico para producir un complejo de hier o-dextrano en el cual el peso molecular promedio del dextrano es de 30.000 a 80.000 Daltons (Da) o inferior. La adaptabilidad de estos complejos para tei apia humana no aparece de esta memoria descriptiva de patente. Re. de los Estados Unidos 24.642 (1959) comprende una explicación detallada de los requisitos para una solución de hierro para inyección intramuscular, que se incorpora a la presente como referencia. La patente se ocupa de un complejo s u s t an c i a lmen t e no iónico de hidroxido férrico con un dextrano que tiene una viscosidad intrínseca promedio a 25°C de aproximadamente 0,025 a aproximadamente 0,25, como así también un proceso para preparar ese tipo de complejo contactando un dextrano como se describe con hidróxido férrico formado in situ mediante reacción entre una sal férrica y una base de álcali. No se proporciona información alguna acerca del peso molecular deseado del dextrano, y no se sugiere ninguna modificación química del dextrano, salvo una despolimerización parcial . Patente de los Estados Unidos No. 3.093.545 (1963) . Esta patente describe algunos detalles como son temperaturas y valores de pH en un método mejorado de preparación de un producto aparentemente muy similar al preparado en la ultima patente antes mencionada. La Patente de Gran Bretaña 1.200.902 (1970) describe que en contraste con la preparación del hidróxido férrico in situ resulta ventajoso preformar el hidróxido férrico bajo condiciones controladas puesto que ese tipo de hidróxido férrico formará fácilmente complejos con dextranos. Se manifiesta que no solamente dextrano parcialmente de s po 1 ime r i z a do con un peso molecular promedio en el rango de por ejemplo 500 - 50.000 Daltons, preferentemente en el rango 1.000 - 10.000 Daltons, sino también formas modificadas o hidrogenados o dextranos oxidados o dextranos tratados con álcali entran en consideración como posibilidades teóricas. Sin embargo, los únicos dextranos específicamente mencionados son dextranos oxidados que tienen un peso molecular promedio de 3.000 y 5.000 Daltons, resp. El hidróxido férrico se prepara antes del contacto con el dextrano. Esto quiere decir que el producto resultante consiste en oxihidróxido férrico en el cual el dextrano forma un revestimiento en contraste con los productos más homogéneos formados precipitando el hidróxido férrico in situ, esto quiere decir en presencia del dextrano . DK 117.730 (1970) describe un proceso en el cual el dextrano hidrogenado que tiene un peso molecular entre 2.000 y 10.000 Daltons se hace reaccionar con hidróxido férrico en medio acuoso. El peso molecular promedio del dextrano utilizado en los ejemplos de realización no es indicado. Sin embargo, la viscosidad intrínseca se manifiesta como aproximadamente 0,05 que podría corresponder a un peso molecular promedio de aproximadamente 5.000 Daltons . DK 122.398 (1972) también describe el uso de dextrano hidrogenado para preparar compuestos complejos con hidróxido férrico, y se explica que se obtiene una toxicidad sustancial inferior que cuando se utiliza el dextrano no hidrogenado. El objeto de la patente es un proceso en el cual se mezcla hidróxido férrico húmedo con dextrano hidrogenado seco, y después de la adición optativa del acido cítrico o citrato, la mezcla se calienta y se purifica. La Patente de los Estados Unidos No. 3.697.502 (1972) describe un proceso para producir una preparación de hie ro-dextrano en donde se agrega acido cítrico al dextrano y se efectúa una adición simultanea de solución de hidróxido de metal alcalino y solución de cloruro férrico. El peso molecular promedio del dextrano es de entre 3.000 y 20.000 Daltons. El dextrano utilizado en los ejemplos de realización tiene un peso molecular de 7.000 y 10.000 Daltons, resp. DK 129.353 (1974) se refiere a un proceso de analogía para producir un derivado de hidroxido férrico-dextrano a un peso molecular promedio del dextrano de como mucho 50.000 Daltons, y los grupos terminales de sus cadenas de polímeros han sido modificados par convertir la unidad de a n h i d r o g 1 u c o s a de reducción de terminal en un grupo de acido carboxilico correspondiente. Si bien los limites indicados para el peso molecular del dextrano son muy amplios, es decir, de 500 a 50.000 Daltons, preferentemente de 1.000 a 10.000 Daltons, el único dextrano ejemplificado tiene un peso molecular promedio de 5.000 Daltons. DK 129.942 (1974) tiene similapdad con la patente DK ultima mencio ada en lo que antecede y se refiere a la fabricación de complejos de hidroxido férrico con acido hepton de dextrano o acido hepton de dextrina. Los ácidos hepton se preparan hidrolizando los cianhidridos correspondientes . Las Patentes de los Estados Unidos 4.827.945 (1989) y 5.102.652 (1992) ambas se relacionan con óxidos de metales s upe r p a r ama gne t i co s como son óxidos de hierro revestidos con o asociados con materiales polimericos como son dextrano. El polímero es contactado con una mezcJa de los óxidos metálicos en dos etapas de oxidación diferentes para producir un producto combinado superparamagnetico que luego es oxidado para transformar todo el oxido de metal en el mas alto de dichos pasos de oxidación. El producto es especialmente util como agente de contraste en las imágenes de resonancia magnética en diagnostico medico. Sin embargo, también se menciona que pueden utilizarse para el tratamiento de la anemia por deficiencia de hierro. El peso molecular de los polímeros, incluyendo carbohidratos como son dextrano son preferentemente de 5.000 a 250.000 Da. U S - - 4 , 370 , 476 describe la preparación de complejos de hidróxido férrico de ácidos po 11 c a r box 11 co s de dextran. Un dextrano que puede ser tratado por h i dr o g ena c i on en un proceso de oxidación de dos etapas utilizando peryodato en la primera etapa y otro agente de oxidación en la segunda tapa para formar pares de grupos carboxilicos intermedios junto a la molécula de dextrano y ya sea un grupo hidroxilo o un carboxilico como el grupo terminal. El acido p o 11 ca r box 111 co de dextrano formado se combino con hidroxido férrico para la formación de los c omp lejos . A pesar de los virios intentos para mejorar las preparaciones de hierro-dextrano para el tratamiento de la anemia, como se refleja en las patentes antes mencionadas, las preparaciones preparadas de acuerdo con el estado de la técnica aún tienen ciertas desventajas. Esto es el resultado del hecho de que en algunos pacientes, las preparaciones pueden causar h ipe r s e n s i b i 1 i dad demorada, o efectos secundarios anafiláticos severos, dando como resultado, por ejemplo, dispnea, hipotensión, choque y muerte. También se pueden observar otras reacciones toxicas . Ad i c i ona lmen t e , varias de las preparaciones de la técnica anterior no son capaces de cumplir con los requerimientos actuales en cuanto a estabilidad. La falta de estabilidad se puede manifestar en si misma como gelatinización del liquido o en la precipitación de hidróxido de hierro o o x i h i d r ó x i do . Asimismo, la cción promotora de las preparaciones de hierro-dextrano c orne r c i a lme n t e disponibles sobre la síntesis de hemoglobina en los pacientes que reciben dichas preparaciones se presenta más bien tarde después de la administración, y el restablecimiento de los niveles de hemoglobina deseados se produce frecuentemente más lenta ente de los deseado.

TÉCNICA COPENDIENTE La solicitud de patente danesa no publicada co-pendiente 420/98 (que se incorpora a la presente como referencia) describe una invención mediante la cual ciertas de las desventajas antes mencionadas son superadas. Dicha invención se basa en el reconocimiento de que muchas de las desventajas especificadas están asociadas con la presencia de dextrano insuficientemente hidrolizado, de peso molecular relati amente elevado en el dextrano utilizado como material de partida como asi también con la presente de sacaridos de ba o peso molecular en el mismo. Este reconocimiento es utilizado para producir, es decir por medio de técnica de membrana, un compuesto de hierro-dextrano que se caracteriza porque comprende dextrano hidrogenado que tiene un peso molecular promedio ponderal (Mw) entre 700 y 1400 Da, preferentemente aproximadamente 1.000 Da, un peso molecular promedio numérico (Mn) de 400 a 1.400 Da y en donde el 90% en peso del dextrano tiene pesos moleculares de menos de 2.700 Da y el Mw del 10% en peso, fracción del dextrano que tiene los pesos moleculares más elevados está por debajo de 3.200 Da, en asociación estable con oxihidroxido férrico. SÍNTESIS DE LA INVENCIÓN Si bien el producto de la Solicitud de Patente danesa antes citada 420/98 presenta una mejora sustancial en cuanto a las reacciones toxicas disminuidas y tendencia reducida a causar h i pe r s en s ib 111 dad o efectos secundarios a na f i 1 á c t i co s y también involucra mejoras en cuanto a la estabilidad, existe aún la necesidad de un medio para controlar el peso molecular promedio del compuesto de hierro-dextrano final, y por ende la b i od i s pon i b 111 da d del hierro para la síntesis de hemoglobina en el organismo humano o animal. Si un compuesto de hierro-dextrano que tiene un contenido de hierro de por ejemplo 15 - 45 % b.w. se prepara utilizando un dextrano que tiene un peso molecular promedio ponderal de aproximadamente 1.000 Da, en el cual el dextrano s u s t a nc i a lme n t e todos los grupos aldehidos reductores se han hidrogenado a grupos alcohol, el peso molecular pico aparente (Mp) sera típicamente de aproximadamente 140.000 Da. Se desea poder producir compuestos de hierro-dextrano de peso molecular inferior y mejorada estabilidad, especialmente para obtener compuestos en los que el hierro es fácilmente disponible para la síntesis de hemoglobina en los organismos humanos o ani ales. La presente invención se basa en el reconocimiento de que un hierro-dextrano estable de peso molecular relativamente bajo puede obtenerse si los grupos aldehido reductores del dextrano hidrolizado, antes de la reacción con el componente hierro, son solamente parcialmente hidrogenados en grupos alcohol mientras que s u s t a nc i a lme n t e todos los grupos aldehido remanentes son oxidados en grupos ca rbox i 11 c o s . El peso molecular del hierro-dextrano formado cuando .1 dextrano ha recibido ese tipo de p r e t r a t ama en t o es s u s t anc i a lme n t e inferior al peso molecular de un hierro-dextrano producido utilizando un dextrano hidrolizado similar que ha sido pretratado soLamente, mediante una h i d r o g e n a c i ó n posiblemente completa. Ajustando la relación de la cantidad de grupos de reducción hidrogenados con la cantidad de grupos de reducción oxidados, es posible influenciar el peso molecular promedio del compuesto de hierro-dextrano resultante. Sin embargo, si la proporción de los grupos oxidados en eL dextrano es demasiado elevada, el hierro-dextrano tendrá estabilidad insuficiente. Ha resultado que para obtener un producto estable, la cantidad de grupos reductores en el dextrano antes de la oxidación no debe exceder un valor que corresponde a 15% en peso. Por lo tanto, la presente invención se refiere a un proceso para producir un compuesto de hierro-dextrano estable que tiene un peso molecular relativamente bajo y una distribución de peso molecular estrecha, proceso en el cual el peso molecular de un dextrano es reducido mediante hidrólisis, y sus grupos terminales aldehido funcionales son convertidos en grupos de alcohol mediante h i dr oge na c i on , el dextrano hidrogenado como una solución acuosa se combina con por lo menos una sal férrica soluble en agua, se agrega base a la solución resultante para formar hidroxido férrico, y la mezcla resultante se calienta para transformar el hidroxido férrico en oxihidroxido férrico como un compuesto de asociación con el dextrano, proceso que se caracteriza porque la h i d r og ena c i on es solamente parcial, dejando, sin embargo, como mucho 15% en peso de azúcar reductor, calculado sobre la cantidad total de hidratos de carbono, y combinándose dicho dextrano antes con la sal férrica, y luego de someterse a h i dr o g e na c i ón se somete a una oxidación, dicha h i dr ogena c i ón y oxidación se realizan para obtener dextrano que tiene s u s t a nc i a lme n t e todos los grupos aldehido convertidos en grupos alcohol y carboxílico. Por consiguiente, la h i d r o gen a c i ón se lleva a cabo antes de la oxidación como una hidrogenación parcial dejando una porción de los grupos aldehido del dextrano sin reaccionar, y la oxidación se lleva a cabo posteriormente para obtener una conversión s u s t a nc i a lme n t e completa de dicha porción de grupos aldehido en grupos ácido carboxílico . Se cree que medaante esta secuencia de la hidrogenación y oxidación, se obtiene una ventajosa distribución del alcohol resultante y del grupo acido carboxílico, puesto que llevando a cabo la h i dr o gena c i ón como una operación inicial, la hidrogenación que form al alcohol se produce principalmente en aquellos grupos aldehido adheridos a las moléculas de dextrano de peso molecular relativamente ba o, mientras que los grupos aldehido en los dextranos de peso molecular superior se hacen reaccionar principalmente en el paso de oxidación lo que significa que los grupos acido carboxilico formados mediante la oxidación serán introducidos en gran medida en el dextrano de peso molecular mas alto. Esta distribución de los grupos alcohol y de los grupos acido carboxilico en la fracción de peso molecular inferior y la fracción de peso molecular superior, resp., es una ventaja porque se espera que la estabilidad del producto resultante sera mejor que si los grupos alcohol y acido carboxilico estuviesen distribuidos al azar, y especialmente mejor que si los grupos acido carboxilico estuviesen principalmente presentes en la porción de peso molecular inferior del dextrano. Sin embargo, esta invención no se limita a ninguna teoría especifica concerniente a la razón para la estabilidad satisfactoria del producto producido por dicha realazacion preferida. En dextranos de peso molecular relativamente bajo como aquellos que se consideran principalmente de acuerdo con la presente invención, la influencia de los grupos terminales (grupos aldehido hidrogenados en grupos alcohol u oxidados en grupos acido carboxilico) en las cadenas polimericas es s u s t an c i a lme n t e mas pronunciada que en dextranos de peso molecular superior, puesto que la fracción (en base al peso) de los grupos terminales funcionales es superior. Por lo tanto, es importante que los grupos ácido carboxílico, que de otro modo causan la inestabilidad, estén presentes en la fracción de peso molecular relativamente alto de las moléculas de dextrano. Se prefiere realizar la h i dr oge n a c i o n por medio de borohidruro de sodio en solución acuosa. La oxidación preferentemente se lleva a cabo por medio de un h?_poclor?to, preferentemente hipoclorito de sodio, en solución acuosa básica. Es importante que se utilice un oxidante que tiene una capacidad oxidativa adecuada para transformar a los grupos aldehido en grupos ácido carboxilico sin atacar otros sitios de las moléculas de dextrano. Mediante ensayos basados en análisis de RMN de los dextranos resultantes ha resultado que el hipoclorito de sodio es un oxidante adecuado en este respecto, puesto que parece ser que todos los átomos de oxígeno introducidos por la oxidación están presentes en los grupos ácido carboxilico. El proceso de la presente invención, en principio, no se encuentra limitado al uso de dextranos que tienen pesos moleculares y distribución de peso molecular específicos, sin embargo se prefiere el uso de un dextrano que tiene antes de la formación del hierro-dextrano un peso molecular inferior a 7.500 Da. Para obtener un producto que es considerado como el mas adecuado para el tratamiento de la anemia por deficiencia de hierro, se prefiere una realización del proceso que es caracterizada porque luego de la hidrólisis aunque antes de ser combinado con la sal férrica soluble en agua, el dextrano es purificado mediante uno o mas procesos de membrana utilizando una membrana que tiene un valor de corte adecuado para detener al dextrano de peso molecular por encima de 2.700 Da, posi Lemente seguido por hidrólisis adicional, y seguido por uno o mas procesos de membrana utilizando membranas con un corte entre 340 y 800 Da eliminando a las moléculas mas pequeñas . Una realización mas específicamente preferida comprende los siguientes pasos terminales del proceso: preparar una solución acuosa que comprende el dextrano purificado hidrogenado y oxidado y por lo menos una sal férrica soluble en agua; ajustar el pH de dicha solución acuosa a un valor por encima de 10 mediante la adición de una base; calentar la mezcla hasta una temperatura por encima de 100°C hasta que se convierte en una solución coloidal negra o marrón oscuro que puede ser filtrada a través de un filtro de 0,45 µm; y ne tralización adicional, purificación y estabilización utilizando filtración, procesos de membrana y calentamiento y adición de uno o más estabilizadores, y optativamente secar la solución para obtener el compuesto de hierro-dextrano deseado como un polvo estable. Los líquidos para inyección pueden producirse redisolviendo este polvo, ajustando el pP, esterilizando mediante filtración y cargando en ampollas o frascos. La esterilización también puede efectuarse sometiendo a autoclave las ampollas o frascos cargados. Alternati amente, se omite la operación de secado, y se produce un líquido para inyección a partir de la solución purificada sin secado intermedio del mismo. Como se explicó anteriormente, una característica de la invención es el ajuste de la relación de grupos aldeh?_do de dextrano hidrogenado con los grupos dextrano de aldehido oxidado, como asi también el porcentaje total de tales grupos. Es esencial que s u s t a nc i a lme n t e la totalidad de los grupos reductores en el dextrano hidrolizado utilizado como material inicial se conviertan mediante la h i dr o gen a c i on o la oxidación. Esto se debe a que cualquier grupo reductor remanente reacciona con los compuestos férricos cuando se contacta con los mismos para formar compuestos ferro que por administración parenteral son mas tóxicos que los compuestos férricos . Por lo tanto, una realización preferida adicional del proceso de la invención se caracteriza porque la oxidación del dextrano hidrolizado e hidrogenado se lleva a cabo para disminuir el contenido de azúcar reductor hasta no mas del 4 % en peso. La cantidad de azúcar reductor en el dextrano hidrolizado antes de la h i dr o g e na c i on no es importante de ninguna manera y típicamente estara en el rango de 20 - 50 % en peso. La invención también comprende un compuesto de hierro-dextrano producido de acuerdo con el proceso antes definido, compuesto que es caracterizado porque el peso molecular pico aparente (Mp) del mismo es de 50.000-150.000 Da, preferentemente 70.000 -130.000 Da, más preferentemente 80.000-120.000 Da, y su contenido de hierro es de 15-45 % en peso. Cuando una preparación acuosa de ese tipo de compuesto de hierro-dextrano se inyecta i n t r amu s cu 1 a rme n t e a un paciente que sufre de anemia por deficiencia de hierro, se puede observar una influencia positiva en la producción de hemoglobina antes que cuando una cantidad co r r e spond e n t e de hierro se inyecta en una preparación basada en los compuestos de hier o-dextrano comerciales que tienen un peso molecular pico aparente de no menos de 150.000 Da. En la presente memoria descriptiva y en las reivindicaciones adjuntas, las indicaciones de los pesos moleculares se refieren a tales pesos determinados mediante cromatografía de permeación en gel. Se evaluó la estabilidad como la ausencia de cambios perjudiciales visibles, como son formación de gel o precipitación, del producto después de calentamiento a 70°C o más durante 10 mi n .

La invención ademas comprende una composición farmacéutica para la profilaxis o tratamiento de la deficiencia de hierro mediante administración parenteral, composición que se caracteriza porque comprende un compuesto como se define anteriormente. Ese tipo de composición farmacéutica preferentemente comprende ademas una sal de un hidroxiacido orgánico, preferentemente seleccionada entre citratos y gluconatos como estabilizador. Finalmente, la mvencion comprende el uso de un compuesto de hierro-dextrano como se define anteriormente para la preparación de una composición terapéutica admi n i s t r ab 1 e parenteralmente para la profilaxis o el tratamiento de deficiencia de hierro mediante la administración parenteral . La invencaon se ilustra ad i c i o na lme n t e por medio de los siguientes ejemplos no limitativos. EJEMPLO 1 (i) Hidrólisis, h i dr o gena c i on y oxidación del dextrano 2.522 kg de dextrano hidrolizado recogidos como material infaltrado de una membrana que tiene un valor de corte <5.000 Da, se hidroliza a pH 1,5 a una temperatura de 95° C . La hidrólisis se controla c r orna t o gr á f i carne n t e utilizando cromatografía de pene t r ab i 1 i dad en gel (GPC) , y se termina mediante enfriamiento cuando el peso molecular del material que se está hidrolizando se estima que ha logrado el valor deseado, es decir, un peso molecular promedio ponderal de 700-1400 Da. Mediante la hidrólisis, se produce dextrano de bajo peso molecular aunque también se forma glucosa. Después de enfriamiento y neutralización, la cantidad de glucosa y oligómeros de peso molecular muy bajo se reduce mediante procesos de membrana que tienen un valor de corte de 340-800 Da. Después de este proceso, el contenido de dextrano es determinado mediante rotación óptica (aD20-200) como de 1976 g, y la cantidad de azúcar de reducción se determina mediante el uso de reactivo de Somogyi como de 32,0 % en peso. La capacidad de reducción es disminuida en primer lugar mediante tratamiento con borohidruro de sodio. Para el dextrano de 939 kg, se agregan 18,4 kg de borohidruro de sodio a pH básico. Mediante esta hidrogenación parcial se espera que entre los grupos aldehido que son hidrogenados, aquellos dextranos con peso molecular relativamente bajo prevalecen. Después del tratamiento con borohidruro de sodio, se determina la capacidad de reducción como de 6,53 % en peso. De aquí en más, la solución se neutraliza a pH < 7,0, y subsiguientemente es desionizada. Los pesos moleculares promedio y la distribución del peso molecular se determanan c r oma t o g r á f i came n t e . La cromatografía también revela que el 90% en peso del dextrano tiene pesos moleculares inferiores a 2700 Da y que el peso molecular promedio ponderal (Mw) de la fracción de 10% en peso del dextrano que tiene los pesos moleculares más elevados está por debajo de 3200 Da. Se encontró que Mw es de 1200 y el peso molecular promedio (Mn) es 800 Da. A continuación, la oxidación se lleva a cabo utilizando hipoclorito de sodio a pH 9,5 y a 50°C. Se agregan 1075 I de una solución acuosa de NaOCl al 15% . Después de la terminación de la oxidación, se determina el azúcar reductor como 0,9 % en peso.

Después de la oxidación, se efectúa la diafiltración contra agua pura para obtener una conductividad específica de 3 mS/cm. La cantidad de dextrano en esta etapa era de 635 kg. El análisis de RMN mostró que todos los átomos de oxígeno de doble enlace estaban presentes como grupos ácido carboxílico . (ii) Síntesis del hierro-dextrano 300 kg de dextrano, producidos como se indica anteriormente, están como una solución al 15 % mezclada con 300 kg de FeCl3, 6H20. A la mezcla agitada, se agregan 250 kg de Na2C?3 como una solución acuosa saturada para obtener un pH de 3,5, y a continuación, se eleva el pH a 11,5 utilizando 50 litros de NaOH acuoso concentrado (27 % p/v) . La mezcla obtenida de ese modo se calienta por encima de los 100° C hasta que se vuelve una solución coloidal negra o marrón oscuro que se puede filtrar a través de un filtro de 0,45 µm . La solución se enfría y es neutralizada hasta un pH de 5,00 utilizando ácido clorhídrico concentrado y se filtra. La solución se purifica utilizando procesos de membrana hasta que el contenido de cloruro en la solución es inferior a 0,68 % calculado sobre una base de una solución que contiene 5 % p/v de hierro . Si el contenido de cloruro de la solución es inferior a lo deseado para obtener una solución isotonica, se agrega cloruro de sodio y el pH se ajusta finalmente a 5,6 y la solución se filtra a través de un filtro de membrana de 0,45 µm (o alternativamente 0,2 µm) . La solución se seca por pulverización y el polvo de hierro-dextrano esta listo para ser comercializado o para procesamiento adicional. Como alternativa al secado por pulverización, la solución puede utilizarse para directa producción de l.quidos para inyección que tienen un contenido de hierro de por ejemplo 5%, como se describe anteriormente. Cuando se utilLza el polvo de hierro-dextrano para producir líquidos para inyección o infusión, el polvo es redisuelto en un medio acuoso, el pH es controlado, y, en caso de ser necesario, se ajusta, y la solución se carga en ampollas o frascos después de ser esterilizada por filtración. Alternativamente, la esterilización puede llevarse a cabo sometiendo a autoclave después de cargar en ampollas o frascos.

EJEMPLO 2 (i) Hidrólisis, h i dr oge na c i ón y oxidación del dextrano. Esta porción de La síntesis se lleva a cabo como se describe en (i) en el Ejemplo 1 anterior. (11) Síntesis del hierro-dextrano 240 kg del dextrano antes mencionado como una solución al 12 % se mezclan con 300 kg de FeCl3 , 6H20. A la mezcla agitada, se agregan 250 kg de Na2C03 como una solución acuosa saturada para obtener un valor de pH de 3,5, y a continuación, se eleva el pH de la mezcla a pH 11,6 utilizando 50 litros de NaOH acuoso concentrado (27% p/v) . La mezcla obtenida de ese modo se calienta por encima de los 100°C hasta que se vuelve una solución coloidal negra o marrón oscuro que se puede filtrar a través de un filtro de 0,45 µm . La solución se enfría, se neutraliza hasta pH 5,3 utilizando ácido clorhídrico concentrado y se filtra. La solución se purifica utilizando procesos de membrana hasta que el contenido de cloruro es inferior a 0,68% calculado sobre una base de una solución que contiene 5% p/v de hierro.

Si la solución se calienta en esta etapa hasta más de 100°C durante 2 horas, el peso molecular pico aparente (Mp) es de 104898 Da después de enfriamiento. La solución es estable. La solución es ecada por pulverización y el polvo de hierro-dextrano es acabado de ese modo. Este polvo es adecuado para producir una preparación de hierro-dextrano líquida que contiene aproximadamente 5% p/v de hierro. En ambos ejemplos, el rendimiento de polvo de hierro-dextrano es de mas del 95%, calculado en base al hierro utilizado en el proceso.

EJEMPLO 3 Se produjeron otras preparaciones de hierro-dext ano utilizando los procedimientos similares al descrito en el Ejemplo 1 y 2. Las características de los materiales iniciales, los intermediarios y los resultados se muestran en la tabla que aparece a c on t ua c i ón . T bla Síntesis No. 1 2 3 4 5 Peso molecular 6200 2566 1212 1212 922 del dextrano hidrolizado (Da) Azucares 4, % en 14, X en 6,5% en 6, 5% en 8, 9% en reductores peso peso peso peso peso después del paso de reducción Azucares 1,2% en 3,0% en 0, 9% en 0, 9% en 1, 8'- en Reductores peso peso peso peso peso después del paso de oxidación Cantidad 240 kg 240 kg 300 kg 240 kg 240 kg utilizada de dextrano reducido y oxidado Cantidad 300 kg 300 kg 300 kg 300 kg 300 kg utilizada de FeCl3 , 6H20 Mp de hierro- 126,350 102,653 88,146 96,875 88,326 dextrano (Da) Estable Si Si Si Si Si * ) : Ensayo de estabilidad a 70 °C durante 10 m i n . Por lo tanto, es posible producir preparaciones de hierro-dextrano de peso molecular bajo estables utilizando dextranos hidrogenados y oxidados a diversos grados dentro del alcance de la invención.

EJEMPLO 4 (Ejemplo Comparativo) 604 kg de un dextrano con un peso molecular de 1209 Da y un contenido de azúcares reductores de 26, 6% en peso, se oxidaron, sin previa hidrogenación, mediante tratamiento con 1780 I de una solución al 15% (p/v) de NaOCl en agua a pH 9, 5, temperatura 50°C. Después de la oxidación, el contenido de los azúcares reductores se determinó a 0, 54 % . Un intento preliminar de sintetizar compuestos de hierro-dextrano utilizando este dextrano oxidado falló debido a que la mezcla que contenía hierro y dextrano formó un gel incluso antes de agregar la totalidad del Na2C03. El calentamiento de ese tipo de solución de gelificación no conduce a la formación de una solución coloidal y filtrable estable. Este Ejemplo muestra que es esencial disminuir la proporción de grupos reductores en el dextrano mediante hidrogenación antes de llevar a cabo la oxidación.

EJEMPLO 5 Se preparó una solución de hierro-dextrano como en el Ejemplo 2. Después del p oceso de membrana de eliminación de cloruro, se ajustó el pH a 8,5 utilizando 10,5 kg de ácido cítrico disuelto en una solución de hidróxido de sodio acuoso. Luego, la solución se calentó hasta más de 100°C durante 2 horas. Después de enfriamiento, el pH se ajusta a 5,6 utilizando ácido clorhídrico concentrado. La solución se ajusta hasta una concentración que corresponde a 5,0% p/v de hierro. Se determinó que el peso molecular pico aparente era de 111.666 y el compuesto es estable. Comparando este Ejemplo con el Ejemplo 2 se observa que la adición del citrato no altera significativamente el peso molecular del producto de hierro-de trano.

Claims (16)

REIVINDICACIONES

1. Proceso para producir un compuesto de hierro-dext ano en el cual el peso molecular de un dextrano es reducido ediante hidrólisis y los grupos terminales de aldehido funcional del mismo son convertidos en grupos alcohol mediante hidrogenacion; dicho dextrano como una solución acuosa se combina con por lo menos una sal férrica soluble en agua; se agrega base a la solución resultante para formar hidroxido férrico, y la mezcla resultante se calienta para transformar el hidroxido férrico en oxihidroxido férrico como un compuesto de asociación con el dextrano, caracterizado porque la h i dr oge na c i on es solo parcial dejando, sin embargo, como mucho 15% en peso de azúcar reductor, calculado sobre la cantidad total de hidratos de carbono, y dicho dextrano antes de ser combinado con la sal férrica, y después de ser sometido a h i dr oge na c i on es sometido a una oxidación, llevándose a cabo dicha h i d r o g e n a c i o n y oxidación para obtener dextrano que tiene s u s t a n c i a lme n t e todos los grupos aldehido convertidos en grupos alcohol y ca rbo x i 1 i c o s .

2. Proceso de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque el dextrano antes de ser combinado con por lo menos una sal férrica tiene un peso molecular medio menor que 7000 Da.

3. Proceso de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque después de la hidrólisis, aunque antes de ser combinado con la sal férrica soluble en agua, el dextrano es purificado mediante una o más separaciones de membrana que tienen un valor de corte adecuado para eliminar las moléculas de dextrano superiores a 2700 Da, posiblemente seguido por hidrólisis adicional, y una o más separaciones de membrana que tienen un valor de corte entre 340 y 800 Da eliminando las moléculas más pequeñas.

4. Proceso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, caracterizado porque las moléculas de dextrano tienen un contenido de azúcares reductores no superior al 4 % en peso después de la oxidación.

5. Proceso de acuerdo con cualquiera de las reivin icaciones 1-4, caracterizado porque la h i dr ogena c i ón se lleva a cabo mediante borohidruro de sodio en solución acuosa.

6. Proceso de acuerdo con cualquiera de las rei indicaciones 1-5, caracterizado porque la oxidación se lleva a cabo por medio de un hipoclorito, preferentemente hipoclorito de sodio en solución acuosa básica.

7. Proceso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado por los siguientes pasos: preparar una solución acuosa que comprende el dextrano hidrogenado y oxidado y por lo menos una sal férrica soluble en agua; ajustar el pH de dicha solución acuosa a un valor por encima de 10 mediante la adición de una base; calentar la mezcla hasta una temperatura por encima de 100°C hasta que se convierte en una solución coloidal negra o marrón oscuro que puede ser filtrada a través de un filtro de 0.45 µm; purificación y estabilización de la solución utilizando filtración, calentamiento y separaciones de membrana y adición de uno o más estabilizadores, y opcionalmente secar la solución para obtener el compuesto de hierro-dextrano deseado como un polvo estable .

8. Proceso de acuerdo con la reivindicación 7, caracterizado porque la estabilización comprende la adición de por lo menos una sal de un hidroxiácido orgánico preferentemente seleccionado de los citratos y gluconatos.

9. Proceso para producir una preparación de dextrano, en cuyo proceso el peso molecular de un dextrano es reducido por hidrólisis y los grupos terminales de aldehido funcional convertidos en grupos de alcohol por h i dr o gena c i ón caracterizado porque la hidrogenación es solamente parcial, dejando, sin embargo, en más del 15% en peso de azúcar reductor, calculado sobre la cantidad total de hidratos de carbono, y el dextrano es subsecuentemente sujeto a oxidación, la h i d r o ge n a c i ón y oxidación se realizan para obtener dextrano que tiene s u s t a nc i a lmen t e todos los grupos aldehido convertidos en grupos alcohol y carboxílico .

10. Compuesto de hierro-dextrano producido de acuerdo con las reivindicaciones 1-8, caracterizado porque su peso molecular pico aparente (Mp) es de 50.000-150.000 Da, preferentemente 70.000-130.000, más preferentemente 80.000-120.000 Da y su contenido de hierro es de 15-45% en peso.

11. Preparación de dextrano obtenible por un proceso de acuerdo a la reivindicación 9.

12. Preparación de dextrano de acuerdo a la reivindicación 11, obtenible por un proceso de acuerdo a la r e i v i nd i ca c a on 9.

13. Composición farmacéutica para la profilaxis o el tratamiento de la deficiencia de hierro mediante la administración parenteral que comprende un compuesto de acuerdo con la reivindicación 9.

14. Composición farmacéutica de acuerdo con la r e i vi nd i ca c a on 13, caracterizada porque comprende una sal de un hidroxiácido orgánico, preferentemente seleccionado entre citratos y gluconatos como estabilizador.

15. Uso de un compuesto de hierro-dextrano de acuerdo con la reivindicación 10, para la preparación de una composición terapéutica que se puede administrar parenteralmente para la profilaxis o el tratamiento de la deficiencia de hierro mediante la administración parenteral.

16. Uso de una preparación de dextrano obtenible por un proceso de acuerdo a la reivindicación 9, por la producción de un compuesto hierro-dextrano