MXPA00010406A - Compuestos y composiciones antipicornavirales, sus usos farmaceuticos y materiales para su sintesis - Google Patents

Abstract

Los compuestos péptido y peptidomiméticos de la fórmula:en donde las variables de la fórmula son como se definen en la descripción, inhiben o bloquean ventajosamente la actividad biológica de la proteasa 3C picornaviral. Estos compuestos, asícomo las composiciones farmacéuticas que contienen estos compuestos, sonútiles para tratar a pacientes o huéspedes infectados con uno o más picornavirus, tal como RVP. También se proporcionan intermediarios y métodos de síntesis para preparar tales compuestos.

Description

COMPUESTOS Y COMPOSICIONES ANTIPICORNAVIRA ES , SUS USOS FARMACÉUTICOS Y MATERIALES PARA SU SÍNTESIS CAMPO Y APLICABILIDAD INDUSTRIAL DE LA INVENCIÓN La invención se refiere a compuestos pep idomiméticos y similares a péptidos que inhiben ventajosamente la actividad enzimática de las proteasas 3C picornavirales , especialmente las proteasas 3C de rinovirus (RVPs) y que retardan el crecimiento viral en el cultivo celular. La invención también se refiere al uso de tales compuestos en composiciones farmacéuticas y tratamientos terapéuticos para infecciones rinovirales. La invención se refiere además a procesos para sintetizar tales compuestos y compuestos útiles en tales síntesis.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Los picornavirus son una familia -de ARN de hebra positiva, no envueltos, pequeños virus que contienen ^ "íue infectan humanos y otros animales. Estos virus incluyen pnovirus de humano, poliovirus de humano, coxsac kievirus de humano, echovirus de humano, enterovirus de bovino y humano, virus de Ref .123433 encef alomiocarditis , virus de meningitis, virus de pie y boca, virus de hepatitis A, y otros. Los rinovirus de humano son una causa principal de resfriado común. A la fecha, no hay terapias efectivas en el mercado que curen el resfriado común, solo tratamientos que disminuyan los síntomas.

Las infecciones picornavirales podrian tratarse inhibiendo las enzimas 3C proteoliticas. Estas enzimas se requieren para la maduración natural de los picornavir us . Son responsables para el corte autocat ali tico de la poliproteina genómico grande, en las proteinas virales esenciales. Los miembros de la familia de la proteasa 3C son cisteina proteasas, en donde el grupo sulfhidrilo más frecuentemente corta el enlace de la amida glutamina-glicina. Se cree que la inhibición de las proteasas 3C bloquea el corte proteolitico de la poliproteina, que en cambio puede retardar la maduración y replicación de los virus interfiriendo con la producción de partículas virales. Por lo tanto, la inhibición del procesamiento de esta cisteina proteasa con moléculas pequeñas selectivas que se reconocen específicamente, deberla representar un importante y útil método para tratar y curar las infecciones virales de esta naturaleza y, en particular, el resfriado común.

Algunos inhibidores de moléculas pequeñas de la actividad enzimática de las proteasas 3C picornavi rales (i.e., compuestos ant ipi cor na vi rales ) se han descubierto recientemente. Ver, por ejemplo: Solicitud de Patente U.S. No. 08/850,398, presentada el 2 de mayo de 1997, por Webber et al,; Solicitud de Patente U.S. No. 08/991,282, presentada el 16 de diciembre de 1997, por Dragovich et al,; y Solicitud de Patente U.S. No. 08/991,739, presentada el 16 de diciembre de 1997, por Webber et al. Estas solicitudes de patentes U.S., las descripciones de las cuales se incorporan aqui por referencia, describen ciertos compuestos ant ipicornavir ales . Existe aún un deseo de descubrir compuestos de moléculas pequeñas que son especialmente potentes agentes ant ipicornavirales .

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN De esta manera, un objetivo de esta invención es descubrir compuestos de moléculas pequeñas que sean especialmente potentes agentes ant ipicor na vi r ales . Un objetivo adicional de la invención es proporcionar intermediarios útiles para la síntesis de los SMK¡:G.A-.. compuestos inhibidores de proteasas y métodos de sintéticos útiles para tales síntesis. Aún, un objetivo adicional de la invención es desarrollar composiciones farmacéuticas que sean altamente efectivas para tratar enfermedades mediadas por la inhibición de las proteasas 3C picornavirales , tal como el resfriado Tales objetivos se han logrado a través del descubrimiento de los compuestos de la invención, que son inhibidores de proteasas 3C picornavirales que exponen particularmente fuerte actividad antiviral. Se ha descubierto sorprendentemente que los compuestos de péptidos y peptidomiméticos que contienen un grupo heterociclo de cinco miembros tienen alta actividad de inhibición de proteasas rinovirales. Se ha encontrado además sorprendentemente que la actividad de inhibición de proteasas rinovirales de los compuestos peptidicos y peptidomiméticos podria mejorarse significativamente reemplazando un radical similar a glutamina encontrado en algunos compuestos de inhibición de proteasas rinovirales conocidos con una cadena lateral que comprende una gamma o delta-lact ama .

Los inhibidores de la presente invención son de la siguiente fórmula general (I) en donde : Y es N(Ry)-, -C(Ry) (Ry)-, -0-, donde cada Ry es independientemente -H o alquilo inferior; • Rj es -H, -F, -alquilo, -OH, -SH o un grupo 0- alquilo; R2 y R3 son cada uno independientemente H; en donde n es un entero de 0 a 5, AL es CH o N, A2 y cada A3 se seleccionan independientemente de C(R41) (R41), N(R41), S, S(O), S(0)2 y O, y A< es NH o NR41, en donde cada R41 es independientemente H o alquilo inferior, con la condición de que no más que dos heteroátomos se presenten consecutivamente en el anillo representado anteriormente formado por A, , A2, (A3)n, A4 y C=0, y al menos uno de R2 y R3 es -A R5 y R6 son cada uno independientemente H, F, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalqui lo , un grupo arilo, o un grupo heteroarilo; R7 y R8 son cada uno independientemente H, un grupo a?Xt ASf. alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, -0R17, -SR17, -NR17R18, -NR19NR17R1B, o -NR17OR18, en donde R17, R18 y R19 son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, o un grupo acilo, con la condición de que al menos uno de R7 y R8 sea un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, -OR17, -SR17, -NR17R18, -NR19NR17R1S, o -NR17OR18; R9 es un radical orgánico apropiado; y Z y Zj son cada uno independientemente H, F, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, -C(0)R21, -C02R21, -CN, -C ( O ) NR2?R22, -C (O) NR2IOR22, -C(S)R21, -C (S) NR21R22, -N02, -S0R , -S02R21, -S02NR21R22, -SO (NR21) (OR22) , -SONR2,, -S03R21, -PO(OR21)2, -PO (R21) (R22) , -PO (NR21R22) (OR23) , PO(NR21R22) (NR23R24) , -C(0)NR21NR22R23 o -C(S)NR21NR22R23, en donde R21, R22, R23 y R24 son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo , un grupo arilo, un grupo heteroarilo, un grupo acilo, o un grupo tioacilo, o donde cualquiera de dos de Rji, R22, R23 y R2Í , junto con el o los átomos que se enlazan, forman un grupo heterocicloalquilo, con la condición de que Z y Z 1 no sean ambos H; o Zj y Rlf junto con los átomos a los que se enlazan, forman un grupo cicloalquilo o heterocicloalquilo , donde Z 1 y Rt son como se definen anteriormente excepto para los radicales que no pueden formar el grupo cicloalquilo o heterocicloalquilo; o Z y Z junto con los átomos a los que se enlazan, forman un grupo cicloalquilo o heterocicloalquilo, donde Z y ? x son como se definen anteriormente excepto para los radicales que no pueden formar el grupo cicloalquilo o het erocicloalqui lo .

La invención también se refiere a profármacos, sales farmacéuticamente aceptables, metabolitos farmacéuticamente activos y solvatos farmacéuticamente aceptables de compuestos de la fórmula I.

En las modalidades preferidas de los compuestos de la fórmula I, R2 y R3 son cada uno independientemente H; donde n es un entero de 0 a 5, cada R41 es independientemente H o alquilo inferior, y la estereoquímica en el carbono representada con un asterisco podria ser R o S; con la condición de que al menos uno de R2 y R3 es Preferentemente, R9 es un heterociclo de cinco miembros que tiene uno a tres heteroátomos seleccionados de O, N y S.

En otras modalidades preferidas, las variables de la fórmula I son como sigue. Z y Z¡ se seleccionan cada uno independientemente de H, F, alquilo inferior, C02R21 y -C (0) NR21R22, con la condición de que Z y Z¡ no sean ambos H, en donde R21 y R22 son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalqui lo , un grupo arilo, un grupo heteroarilo, un grupo acilo, o un grupo tioacilo, o R21 y R22, juntos con el o los átomos que se enlazan, forman un grupo heterocicloalquilo. Al menos uno de R2 o R3 es y el otro es H. R5 y R6 se seleccionan cada uno independientemente de H, F, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, y un grupo heteroarilo, más preferentemente uno de R5 y R6 es H y el otro es alquilo o arilo (e.g., fenilmetilo insustituido o sustituido) . R7 y R8 son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, o un grupo heteroarilo; y más preferentemente uno de R7 y Rß es H y el otro es alquilo (e.g., 2-propilo, 2 -met il-2 -propilo , o 2 -met i 1 - 1-propilo ) o arilmetilo (e.g., fenilmetilo insustituido o sustituido o naf t ilmet ilo ) . R9 es un heterociclo de cinco miembros que tiene de uno a tres heteroátomos seleccionados de 0, N y S, más preferentemente un heterociclo de cinco miembros que tiene al menos un heteroátomo de nitrógeno y al menos un heteroátomo de oxigeno (e.g., 1,2-oxazolilo insustituido o sustituido (i.e., isoxazolilo), 1 , 3-oxa zolilo (i.e., oxazolilo), u oxadiazolilo ( 1 , 2 , 3-oxadia zol i lo , 1 , 2 , 4 -oxadia zoli lo , o 1 , 2 , 5-oxadia zoli lo ) . Cuando R9 es oxadiazolilo, se prefieren 1 , 2 , 4 -oxadiazoli lo sustituido con monometilo e insustituido. En modalidades especialmente preferidas, R9 es 3-isoxazoli lo o 5- isoxa zoli lo , sustituido o insustituido con uno o dos grupos metilo y/o halógenos, con cloro y flúor siendo preferidos los sustituyentes de halógeno.

En una modalidad preferida, los compuestos, profármacos, sales farmacéuticamente aceptables, metabolitos y solvatos farmacéuticamente activos tienen una actividad ant ipicornaviral con un EC50 menor o igual a 100 µM en la prueba de cultivo celular Hl-HeLa, y más preferentemente una actividad ant irr inoviral con un ECS0 menor o igual a 10 µM en el cultivo celular Hl-HeLa.

En otro aspecto, la invención se dirige a intermediarios de la fórmula II, preferentemente de la fórmula II', que son útiles en la síntesis de ciertos compuestos : en donde : p es un entero de 0 a 5; Au CH cada A, se se leccionan independientemente de C (R61) (R61) , N(R61), S, S(0), S(0)2 y O, y A14 es NH o NR61, donde cada R61 es independientemente H, alquilo, acilo o arilo, con la condición de que no más que dos heteroátomos se presenten consecutivamente en^el anillo representado anteriormente en la fórmula II formado por Allf A12, (An) n A14 y C=0; cada R141 es independientemente H o alquilo inferior; R5! es H, alquilo, acilo o arilo; R52, R53 y R54 se seleccionan cada uno independientemente de H, hidroxilo, alquilo, acilo y arilo; o cualquiera de dos de R52, R53 y R54 juntos forman =0 o =C (R57) (R58) , en donde R57 y R58 se seleccionan cada uno independientemente de H, alquilo, COjfCj- C alquilo, C ( 0 ) N ( C3-C6) alquilo y C02 (arilo) ; y R55 y R56 son cada uno independientemente H o un grupo protector apropiado para el nitrógeno.

La invención también se refiere a sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la fórmula II y II'.

La invención también se refiere a composiciones far acéuticas que contienen una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos un compuesto de la fórmula I, o un profármaco, sal farmacéuticamente aceptable, metabolito farmacéuticamente activo o solvato del mismo. Adicionalmente, la invención se refiere a métodos para inhibir proteasas 3C p i c o r n a v i r a 1 e s administrando una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos un compuesto de la fórmula I, o un profármaco, sal farmacéuticamente aceptable, metabolito o solvato farmacéuticamente activo del mismo.

DESCRIPCIÓN DETALLADA Y MODALIDADES PREFERIDAS La presente invención se refiere a compuestos de la fórmula I : en donde Y, R,, R2, R3, R5, R6, R7, R8, R9, Z y Zx son como se define anteriormente y a sales, profármacos, metabolitos activos y solvatos de los mismos farmacéuticamente aceptables. Preferentemente, tales compuestos, sales farmacéuticamente aceptables, profármacos, metabolitos activos y solvatos tienen actividad ant ipicorna vi ral , más preferentemente actividad ant ir r inovir al , que corresponde a un EC50 menor de o igual a 100 µM en la prueba de cultivo celular Hl-HeLa, más preferentemente corresponde a un EC50 menor o igual a 10 µM en la prueba de cultivo celular Hl-HeLa.

La presente invención se refiere adicionalmente a compuestos preferidos de las fórmulas I-A, I-B y I-C: donde Ry (en la fórmula I-A) es H o alquilo inferior, y R1( R2, R3, R5, R6, R7, R8, R9, Z y Z 1 son como se definen anteriormente y a sales farmacéuticamente aceptables, profármacos, metabolitos activos y solvatos de los mi smos .

Los compuestos inventivos de las fórmulas I-A, que se refieren aqui como compuestos "similares a péptidos", I-B, que se refieren aqui como compuestos "tipo cetomet ileno" y I-C, que se refieren aqui como compuestos " depsipeptídicos" , difieren en sus estructuras, que podrian afectar la biodi s tribución especifica u otras propiedades físicas; sin embargo cada uno posee una fuerte actividad de inhibición de la proteasa rinoviral.

En las modalidades preferidas de los compuestos de las fórmulas I-A, I-B y I-C anteriores: R1 es H, F o un grupo alquilo; (en la fórmula I-A) es H o metilo; R5 y R8 son cada uno H; R2 se selecciona de uno de los siguientes radicales : "i^HN O^ - -¿A ' .t A NH, R6 es un grupo alquilo, que tiene como un sustituyente opcional preferido un grupo arilo; R7, es un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, o un grupo heteroarilo; R9 es un heterociclo de cinco miembros que tiene de uno a tres heteroátomos seleccionados de 0, N, y S, preferentemente donde al menos uno de los heteroátomos es nitrógeno, que es sustituido o insustituido, en donde los sustituyentes opcionales son preferentemente halógeno o alquilo inferior y más preferentemente mono-cloro o flúor o un grupo metilo, y Z y Zj son cada uno independientemente H, F, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, o un grupo heteroarilo, -C(0)R21, -C02R21, -CN, -C ( O) NR21R22, C(0)NR21R22, -C(S)R21, -C ( S ) NR2,R22 , -N02, -S0R21, -S02R21, -S02NR21R22, -SO (NR21) (OR22) , -S0NR21, -S03R2,, -PO(OR21)2, -P0(R21) (R22) , -PO(NR21R22) (OR23) , - PO ( NR21R22 ) ( NR23R24 ) , -C (0) NR21NR22R23 o -C ( S ) NR21NR22R23, donde Z y Z3 no son ambos H, y donde R21, R22, R23 y R24 son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo , un grupo heterocicloalqui lo , un grupo arilo, o un grupo heteroarilo, un grupo acilo o un grupo tioacilo, o en donde cualquiera de dos de R21, R22, R23 y R24 junto con el o los átomos a los que se enlazan, forman un grupo heterocicloalquilo, o Z y Zj (ambos como se definen anteriormente), junto con los átomos a los que se enlazan, forman un grupo heterocicloalquilo .

En las modalidades preferidas, los compuestos de la invención son de las fórmulas I-A', I-B' y I-C : (I-EV) en donde : Z y Zj son como se definieron anteriormente; n e s 1 o 2 ; (en la fórmula I-A') es H o alquilo inferior; R6 es alquilo, cicloalquilo , heterocicloalqui lo , arilo o heteroarilo; R, es alquilo, cicloalqui lo , heterocicloalqui lo , arilo o heteroarilo, -OR„, -SR17, -NR?,Rlß, -NR19NR?,R18 o NR17OR18, donde R17, R18 y R19 son cada uno independientemente H, alquilo, cicloalqui lo , heterocicloalquilo, aplo o heteroarilo o acilo; R9 es un heterociclo de cinco miembros que tiene uno a tres heteroátomos seleccionados de 0, N y S, que es sustituido o no sustituido, donde los sustituyentes opcionales son preferentemente uno o dos grupos alquilo inferior y/o halógenos.

La invención también se refiere a profármacos, sales farmacéuticamente aceptables, metabolitos farmacéuticamente activos y solvatos de tales compuestos .

En las modalidades preferidas, los agentes de inhibición de RVP de la invención son compuestos de cualquiera de las fórmulas estereoespecíf icas I-A", I-B" y I-C" : O R7 Ry O R2 Z H O R6 H R, (I-A") O R7 O R2 Z H O R6 H R, (I-C") *»-- ---•-?•« en donde Ry, R¡ , R2, R6, R7, R9, Z y Z 1 son como se definieron anteriormente, y las sales farmacéuticamente aceptables, profármacos, metabolitos activos y solvatos de los mismos .

En las modalidades preferidas de los compuestos de la fórmula I-A", I-B" o I-C": Ri es H, F o metilo; Rv (en la fórmula I-A') es H o metilo; R2 se selecciona de uno de los siguientes radicales : AT - , R6 es arilmetilo o ar ilt iomet i lo , donde el arilo es preferentemente un grupo fenilo opcionalmente sustituido; R7 es un grupo alquilo, mas preferentemente se selecciona de 2-propilo, 2-met il-2 -propilo , 2-met?l-l-propilo y arilmetilo, donde el grupo arilo es preferentemente fenilo o naftilo; R9 es isoxazolilo, oxazolilo u oxadiazolilo, sustituido opcionalmente con uno o dos grupos alquilo inferior y/o halógenos; y Z es H y Zj es -C02R21, -CN o -C (O) NR21R22, donde R21 y R22 son como se definieron anteriormente, o Z y Z 1 juntos forman un éster o amida cíclica.

Aún más preferentemente, los agentes de inhibición de RVP de la invención son compuestos de cualquiera de las fórmulas I-A''', I-B''' y l - C ' ' : (I-A'") en donde n, Ry, Rlf R20, R e , R?, R9, Z y Z x son como se definieron anteriormente, y las sales farmacéuticamente aceptables, profarmacos, metabolitos activos y solvatos de los mi smos .

En los compuestos preferidos de la formula (I-A' ' ' ) , (I-B' ' ' ) o (I-C ' ' ) : R; es H, F o metilo; Ry (en la formula I-A') es H o metilo; es hidrogeno; R6 es arilmetilo o ar ilt iomet ilo , donde el arilo es preferentemente fenilo sustituido o insustituido con halógeno, alquilo inferior y/o alcoxi inferior; R7 es un grupo alquilo, más preferentemente se selecciona de 2-propilo, 2-met il-2 -propi lo , 2-metil-l-propilo y arilmetilo, en donde el grupo arilo es preferentemente fenilo o naftilo; R9 es isoxazolilo, oxazolilo u oxadiazolilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o dos grupos alquilo inferior y/o halógenos; y Z es H y Zt es -C02R21, -CN o -C ( O) NR21R22, donde R21 y R22 son como se definen anteriormente, o Z y j juntos forman un éster o amida cíclica.

En los compuestos especialmente preferidos de la invención de la fórmula genérica I (y las fórmulas subgenéricas ) , R es H o F.

En otro aspecto, la invención se refiere a los compuestos intermediarios de las fórmulas II y II' : .,.,. „ , átÜJ .;, g?¿¿», en donde las variables (p, An, A12, A13, A14, R51, R52, R53, R54, R55, R56 y R141) son como se definen anteriormente. Estos compuestos son útiles para sintetizar compuestos útiles farmacéuticamente de la fórmula I.

Los grupos R55 y R56 preferidos son H y grupos protectores apropiados para nitrógeno, por ejemplo, BOC (t-butiloxicarbonilo), CBZ (benciloxicarbonilo), FMOC ( fluoren- 9-met i loxicarbonilo ) , ot ros alqui loxicarboni los (e.g., met iloxicarbonilo ) , ytritil (trifenilmetilo) . Otros grupos protectores de nitrógeno apropiados podrían seleccionarse fácilmente por los expertos (ver, e.g. , Greene and Wutz, Protecting Groups in Chemical Sintesis (2nd ed.), -John Wiley S Sons, NY (1991) ) . Los grupos preferidos para R52, R53, y R54 son H, alcoxi, hidroxi y carbonilo.

Los compuestos preferidos de la fórmula II incluyen los siguientes, donde PN es un grupo protector apropiado para el nitrógeno y q es 1 o 2: Otros intermediarios preferidos incluyen los siguientes compuestos, en donde BOC es t-butiloxicarbonilo: De estos, los estereoisómeros preferidos son: Los intermediarios especialmente preferidos incluyen los siguientes compuestos: De acuerdo con una convención usada en el arte, se / en las fórmulas estructurales aquí para representar el enlace que es el punto de unión del radical o sustituyente a la estructura del centro o de la cadena principal .

Cuando los carbonos quirales se incluyen en las estructuras químicas, a menos que se represente una orientación particular, ambas formas estereoisoméricas se pretende que se abarcan.

Como se usa aquí, el término "grupo alquilo" se pretende que significa un radical monovalente de cadena lineal o ramificada de átomos de carbono y átomos de hidrógeno saturados y/o insaturados, tal como metilo (Me), etilo (Et), propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, etenilo, pentenilo, butenilo, propenilo, etinilo, butinilo, propinilo, pentinilo, hexinilo y similares, que podrían insus t i tui r se (i.e., contienen sólo carbono e hidrógeno) o sustituirse por uno o más sustituyentes apropiados como se define posteriormente (e.g., uno o más halógenos tal como F, Cl, Br o I, siendo preferidos F y Cl) . Un "grupo alquilo inferior" se pretende que significa un grupo alquilo que tiene 1 a 4 átomos de carbono en su cadena.

Un "grupo cicloalquilo" se pretende que significa un radical monocíclico, biciclico o tricíclico monovalente no aromático que contiene 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 o 14 átomos en el anillo de carbono, cada uno de los cuales podría saturarse o insaturarse, y que podría insus t ituir se o sustituirse por uno o más sus t i tuyentes apropiados como se define poste iormente, y que podría fusionarse uno o más grupos heterocicloalquilo, grupos arilo o grupos heteroarilo, que podrían insus t ituir se o sustituirse por uno o más sust i tuyentes . Los ejemplos ilustrativos de los grupos cicloalquilo incluyen los siguientes radicales: Un "grupo heterocicloalquilo" se pretende que significa un radical monocíclico, bicíclico o tricíclico monovalente no aromático, que es saturado o insaturado, que contiene 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 o 18 átomos en el anillo, que incluyen 1, 2, 3, 4 o 5 heteroátomos seleccionados de nitrógeno, oxígeno y azufre, donde el radical es insustituido o sustituido por uno o más sustituyentes apropiados como se define posteriormente, y que podrían fusionarse a uno o más grupos cicloalquilo, grupos aplo o grupos heteroarilo, que podrían insus ti tui rse o sustituirse por uno o más sustituyentes apropiados. Los ejemplos ilustrativos de los grupos heterocicloalquilo incluyen los siguientes radicales: Un "grupo arilo" se pretende que significa un radical monocíclico, bicíclico o tricíclico monovalente 36¿fe»...sJiL aromático que contiene 6, 10, 14 o 18 átomos en el anillo de carbono, que podria insust ituir se o sustituirse por uno o más sustituyentes apropiados como se define posteriormente, y a los a lo cuales podrian fusionarse uno o más grupos cicloalquilo, grupos heterocicloalquilo o grupos heteroarilo, que podrían insust i tuirse o sustituirse por uno o más sustituyentes apropiados. Los ejemplos ilustrativos de los grupos arilo incluyen los siguientes radicales: Un "grupo heteroarilo" se pretende que significa un radical monocíclico, bicíclico o tricíclico monovalente aromático que contiene 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 o 18 átomos en el anillo, que incluyen 1, 2, 3, 4 o 5 heteroátomos seleccionados de nitrógeno, oxígeno y azufre, que podrían sustituirse o insust i tuirse por uno o más sustituyentes apropiados como se define posteriormente, y que podrían fusionarse a uno o más grupos cicloalquilo, grupos heterocicloalquilo o grupos arilo, que podrían insust ituir se o sustituirse por uno o más sustituyentes apropiados. Los ejemplos ilustrativos de los grupos heteroarilo incluyen los siguientes radicales: Un "heterociclo" se pretende que significa un grupo heteroarilo o heterocicloalquilo (cada uno de los cuales, como se define anteriormente, se sustituye opcionalmente) .

Un "grupo acilo" se pretende que significa un radical -C(0)-R, donde R es un sustituyente como se define posteriormente.

Un "grupo tioacilo" se pretende que significa un radical -C(S)-R, donde R es un sustituyente como se define posteriormente.

Un "grupo sulfonilo" se pretende que significa un radical -S02-R, donde R es un sustituyente como se define posteriormente.

Un "grupo hidroxi" se pretende que significa el radical -OH.

Un "grupo amino" intenta se pretende que significa el radical -NH2.

Un "grupo alquilamino" se pretende que significa el radical -NHRa, donde Ra es un grupo alquilo.

Un grupo "dialquilamino" se pretende que significa ja¡. auae-.. el radical -NRaRb, donde Ra y Rb son cada uno independientemente un grupo alquilo.

Un "grupo alcoxi" se pretende que significa el radical -0Ra, donde Ra es un grupo alquilo. Ejemplos de grupos alcoxi incluyen metoxi, etoxi, propoxi y s imi lares .

Un "grupo alcoxicarbonilo" se pretende que significa el radical -C(0)ORa, donde Ra es un grupo alquilo .

Un "grupo alquilsulfonilo" se pretende que significa el radical -S02Ra, donde Ra es un grupo alquilo.

Un "grupo alquilaminocarbonilo" se pretende que significa el radical -C(0)NHRa, donde Ra es un grupo alquilo.

Un grupo "dialquilaminocarbonilo" se pretende que significa el radical -C(0)NRaRb, donde Ra y Rb son cada uno independientemente un grupo alquilo.

Un "grupo mercapto" se pretende que significa el radical -SH.

Un "grupo alquiltio" se pretende que significa el radical -SRa, donde Ra es un grupo alquilo.

Un "grupo carboxi" se pretende que significa el radical -C (0) OH.

Un "grupo carbemoilo" se pretende que significa el radical -C(0)NH2.

Un "grupo ariloxi" se pretende que significa el radical -0RC, donde Rc es un grupo arilo.

Un "grupo heteroariloxi" se pretende que significa el radical -0Rd, donde Rd es un grupo heteroarilo.

Un "grupo ariltio" se pretende que significa el radical -SRC, donde Rc es un grupo arilo.

Un "grupo heteroar ilt io" se pretende que significa el radical -SRa, donde Rd es un grupo heteroarilo.

El término "radical orgánico apropiado" se pretende que significa cualquier radical orgánico reconocible, _^¡^^¡ g. tal como probado por rutina, para los expertos en el arte, conforme no afecta adversamente la actividad inhibitoria de los compuestos inventivos. Los ejemplos ilustrativos de los radicales orgánicos apropiados incluyen, pero no se limitan a, grupos hidroxi, grupos alquilo, grupos oxo, grupos cicloalquilo, grupos heterocicloalquilo, grupos arilo, grupos heteroarilo, grupos acilo, grupos sulfonilo, grupos mercapto, grupos alquiltio, grupos alcoxi, grupos carboxi, grupos amino, grupos alquilamino, grupos dialquilamino, grupos carbamoilo, grupos ariltio, grupos het eroar i 11 io , y similares .

El término "sustituyente" o "sus ituyente apropiado" se pretende que significa cualquier sustituyente apropiado que podría reconocerse o seleccionarse, tal como a través de los métodos rutinarios, por los expertos en el arte. Los ejemplos ilustrativos de los sustituyentes apropiados incluyen grupos hidroxi, halógenos, grupos oxo, grupos alquilo, grupos acilo, grupos sulfonilo, grupos mercapto, grupos alquiltio, grupos alcoxi, grupos cicloalquilo, grupos heterocicloalquilo, grupos arilo, grupos heteroarilo, grupos carboxi, grupos amino, • grupos alquilamino, grupos dialquilammo , grupos carbamoilo, grupos ariloxi, grupos heteroariloxi, grupos ariltio, grupos heteroar ilt io , y similares.

El término "sustituido opcionalmente" se pretende que indica expresamente que' el grupo especificado es insustituido o sustituido por uno o más sustituyentes apropiados, a menos los sustituyentes opcionales se especifican expresamente, en tal caso el término indica que el grupo es insustituido o sustituido con los sustituyentes especificados. Como se definió anteriormente, varios grupos podrían ser insustituidos o sustituidos (i.e., se sustituyen opcionalmente) a menos que se indique aquí lo contrario (e.g., indicando que tal grupo especificado es insustituido) .

Un "profármaco" se pretende que significa un compuesto que se convierte bajo condiciones fisiológicas o mediante solvólisis o metabólicamente a un compuesto especificado que es farmacéuticamente activo .

Un "metabolito farmacéuticamente activo" se pretende que significa un producto farmacológicamente activo producido por medio del metabolismo en el cuerpo de un compuesto especificado.

Un "solvato" se pretende que significa una forma de solvato farmacéuticamente afeptable de un compuesto especificado que consérvala efectividad biológica de tal compuesto. Los ejemplos de solvatos incluyen los compuestos de la invención en combinación con agua, isopropanol, etanol, metanol, DMSO, acetato de etilo, ácido acético o etanolamina.

Una "sal farmacéuticamente aceptable" se pretende que significa una sal que conserva la efectividad biológica de los ácidos y bases libres del compuesto especificado y que no es biológicamente u otra forma indeseable. Los ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen sulfatos, pirosulfat os , bisulfatos, sulfitos, bisulfitos, fosfatos, monohidr ógenofos fat os , dihidrógeno fos fat os , met a f os fat os , pirofosfatos, cloruros, bromuros, yoduros, acetatos, propionatos, decanoatos, caprilatos, acrilatos, formatos, isobut iratos , caproatos, heptanoatos, propiolatos, oxalatos, malonatos, succinatos, suberatos, sebacatos, fumaratos, maleatos, but in- 1 , 4 -dioatos , hexin-1,6-dioatos, benzoatos, clorobenzoatos , met i lbenzoatos , dini t robenzoatos , hidroxibenzoat os , me t oxibenzoatos , ftalatos, sulfonatos, xilensul f ona tos , f enilacet a t os , f enilpropiona tos , feni lbut ira t os , citratos, lactatos, ?-hidroxibut iratos , glicolatos, tartratos, metan-sulfonatos, propansul fonatos , naf talen- 1 -sul fonatos , naft alen-2-sul fonatos y mandelatos.

Si un compuesto inventivo es una base, una sal deseada podría prepararse por cualquier método apropiado conocido en el arte, incluyendo el tratamiento de la base libre con un ácido inorgánico, tal como ácido clorhídrico; ácido bromhídrico; ácido sulfúrico; ácido nítrico; ácido fosfórico; y similares, o con un ácido orgánico, tal como ácido acético; ácido maleico; ácido succínico; ácido mandélico; ácido fumárico; ácido malónico; ácido pirúvico; ácido oxálico; ácido glicólico; ácido salicílico; ácido pir anosidí 1 ico , tal como ácido glucorónico o ácido galactur ónico ; ácido al fa-hidroxi , tal como ácido cítrico o ácido tartárico; aminoácidos, tal como ácido aspártico o ácido glutámico; ácidos aromáticos, tal como ácido benzoico o ácido cinámico; ácido sulfónico, tal como ácido p-toluensulfónico o ácido etansulfónico; y similares .

Si un compuesto inventivo es un ácido, una sal deseada podría prepararse por cualquier método apropiado conocido en el arte, incluyendo el tratamiento del ácido libre con una base orgánica o inorgánica, tal como una amina (primaria, secundaria o terciaria); un hidróxido de metal alcalino o metal alcalino terreo; o similares. Los ejemplos ilustrativos de sales apropiadas incluyen sales orgánicas derivadas de aminoácidos tal como glicina o arginina; amoníaco; aminas primarias, secundarias y terciarias; y aminas cíclicas, tal como piperidina, morfolina y piperazina; así como sales inorgánicas derivadas de sodio, calcio, potasio, magnesio, manganeso, hierro, cobre, zinc, aluminio y litio.

En el caso de compuestos, sales o solvatos que son sólidos, se entiende por los expertos en el arte que los compuestos inventivos, sales y solvatos podrían existir en diferentes formas de cristal, todo las cuales se pretende que están dentro del alcance de la presente invención y fórmulas especificadas.

Los compuestos inventivos podrían existir como estereoisómeros simples, racematos, y/o mezclas de enantiómeros y/o diastereómeros. Todos los estereoisómeros simples, racematos, y/o mezclas de los mismos se pretenden que están dentro del amplio alcance de la presente invención. Preferentemente, sin embargo, los compuestos inventivos se usan en la forma ópticamente pura.

Como se entiende en general por los expertos en el arte, un compuesto ópticamente puro es uno que es enantioméricamente puro. Como se usa aquí, el término "ópticamente puro" se pretende que significa un compuesto que comprende al menos una actividad suficiente. Preferentemente, una cantidad ópticamente de un enantiómero simple para producir un compuesto que tiene el compuesto farmacológicamente puro deseado de la invención que comprende al menos 90% de un isómero simple (80% de exceso enantiomérico) , más preferentemente al menos 95% (90% de e.e.), aún más preferentemente al menos 97.5% (95% de e.e.), y más preferentemente al menos 99% (98% de e.e.) .

Preferentemente en los compuestos de la fórmula I (o de cualquier fórmula subgenérica) , R¡ es H o F.

En los compuestos de la fórmula I, preferentemente R9 es un grupo isoxazolilo insustituido o sustituido, donde los sustituyentes opcionales son preferentemente uno o dos grupos metilo y/o halógenos.

Las modalidades especialmente preferidas de la invención se describen %>psteríormente con referencia a la siguiente fórmula I-A": Los compuestos preferidos de la presente invención incluyen los Compuestos (A-l)-(A-ß) de péptidos (similares a péptidos) de la formula I-A" anterior, en donde Rl es H, Z es H, Ry es H y R2, R6, R7, Z1 y R9 son respectivamente como se define posteriormente: (A-l) R2 es CH2CH2C (O) NH2, R6 es CH2Ph, R7 es CH2CH(CH3)2, Z1 es C02CH2CH3, y R9 es (A-2) R2 es CH2CH2C (Ojggg ?, R6 es CH2Ph, R7 CH2CH (CH3) 2, Zj. es C02CH2CH3, y R9 es (A-3) R2 es CH2CH2C (O) NH2 jy R7 es C (CH3) 3, Z, es C02CH2CH3 y R9 es (A- ) R2 es CH2CH2C (0) NH2, R6 es XT' R7 es C(CH3)3, Z, es C02CH2CH3 y R9 es A- (A-5) R2 es A, R6 es xr R7 es CH(CH3)2, Z, es C02CH2CH3, y R9 es 0A % (A-6) R2 es CH2CH2C (O) NH2, R6 es r€T R7 es CH2(CH3)2, Z, es C02CH2CH3, y R9 es 0A (A-7) R2 es A\ R6 es Xf. R, es C(CH3)3, Z, es C02CH2CH3, y R9 es A^ (A-8) R2 es -A R6 es XT" R7 es CH2(CH3)2, Z. es C02CH2CH3, y R9 es r.- Los compuestos similares a peptidos preferidos de la formula I-A'''' además incluyen Compuestos (A- 9) - (A-13) posteriormente, en donde Rj es H, Z es H, Zí es C02CH2CH3, Ry es CH3 y R2, R6, R7 y R9 son como se definen respectivamente posteriormente: (A-9) R2 es CH2CH2C (O) NH2, R6 es XT* R7 es y R, es (A-10) R2 es CH2CH2C (O) NH2, R6 es CH2Ph, R, es CH2CH (CH3) 2, y R9 es (A-ll) R2 es CH2CH2C (O) NH2, R6 es R7 es |l (A-12) R2 es CH2CH2C (O) NH2 R7 es CH2CH(CH3)2, y R9 es =A (A-13) R2 es CH2CH2C (O) NH2, R6 es xr ,afe-.-J-BA^.

R, es y R9 es >** Otros compuestos similares a péptidos preferidos incluyen los siguientes: .«a... '.» ,_ „ .

(A-28) Los Compuestos de t ipo-cetomet lleno preferidos (B-l)-(B-4) de la invención, se describen posteriormente en referencia a la siguiente formula I-B": (B-l) R2 es CH2CH2C (O) NH2, R6 es -,-v R7 es CH(CH3)2, Z es H, Z, es C02CH2CH3, y R9 es A (B-2) R2 es X.

R6 es XX" R7 es CH(CH3)2, Z es H, Zí es C02CH2CH3, y R9 es jA (B-3) R2 es X 1 A Z y Zj juntos son en donde el grupo carbonilo es cis al hidrógeno correspondiente a Rj en la formula I, y R9 es (B-4) R2 es y R6 es y . R-, es CH (CH3) 2, Z es H, Zj es C02CH2CH3, y R9 es 0A w<." Los Compuestos de tipo-deps ipept ídicos preferidos (C-l) y (C-2) de la invención se describen posteriormente con referencia a la siguiente fórmula I-C" , en donde Rj es H: (C-l) Z es H, R2 es CH2CH2C ( O ) NH2, R6 es Fxr es CH (CH3) 2, Zj es C02CH2CH3, y R9 es (C-2) Z es H, JO ,xr R7 es CH (CH3) 2, Zl es C02CH2CH3, y R9 es A Los compuestos adicionales podrían prepararse con referencia a la formula I seleccionando las variables de los siguientes sus ti tuyentes .

Ry = H o CH3; Rj = H o CH3; ^ R2 = °<^- O^^ F- -DO s A A o fenilmetilo (?.e., bencilo), donde el grupo aplo se sustituye opcionalment e con uno, dos o tres susti tuyentes cada uno seleccionado independientemente de halógenos, metoxi y metilo; R7 = 2-met?l-l-prop?lo, 2-prop?lo, 2-met?l-2-propilo, bencilo o V- "O y La presente invención también se refiere a un método para inhibir de la actividad de la proteasa 3C picornavi r al , que comprende poner en contacto la proteasa con una cantidad efectiva de un compuesto de la fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, o solvato del mismo. Por ejemplo, la actividad de la proteasa 3C picornaviral podría inhibirse en el tejido de mamífero administrando un compuesto de la fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, o solvato del mismo. Más preferentemente, el presente método se refiere a la inhibición de la actividad de la proteasa r inovir al .

"Tratar" o "tratamiento" se pretende que significa al menos la mitigación de la condición de enfermedad en un mamífero, tal como un humano, que se alivia por la inhibición de la actividad de una o más proteasas 3C picornavirales, tal como rinovirus de humano, poliovirus de humano, caxsackievirus de humano, virus de encefalomiocarditis , virus de meningitis y virus de la hepatitis A, e incluye: (a) tratamiento profiláctico en un mamífero, particularmente cuando el mamífero se encuentra que está predispuesto a tener la condición de enfermedad, pero aún no se diagnostica que la tiene; (b) inhibir la condición de enfermedad; y/o (c) aliviar, en total o en parte, la condición de enfermedad .

La actividad de los compuestos inventivos como inhibidores de la proteasa 3C picornaviral podría medirse por cualquier método apropiado conocido por el experto en el arte, incluyendo pruebas i n vi vo e i n vi t ro . Un ejemplo de una prueba apropiada para las mediciones de la actividad es la prueba de cultivo celular Hl-HeLa antiviral descrita aquí.

La administración de los compuestos de la fórmula I y sus profármacos, sales, metabolitos activos y solvatos farmacéuticamente aceptables podrian elaborarse de acuerdo a cualquiera de las formas de administración aceptados disponibles para los expertos en el arte. Los ejemplos ilustrativos de las formas de administración apropiadas incluyen la oral, nasal, parenteral, tópica, transdérmica y rectal. Se prefiere especialmente la liberación intranasal.

Un compuesto inventivo de la fórmula I o una sal, profármaco, metabolito activo o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo podría administrarse como una composición farmacéutica en cualquier forma farmacéutica reconocible para el experto en el arte como sea apropiado. Las formas farmacéuticas incluyen, formulaciones sólidas, semisólidas, líquidas o liof i li zadas , tal como tabletas, polvos, cápsulas, supositorios, suspensiones, liposomas y aerosoles. Las composiciones farmacéuticas de la invención también podrían incluir excipientes, diluyentes, vehículos y transportadores apropiados, asi como otros agentes farmacéuticamente activos, dependiendo del uso destinado. En las modalidades preferidas, las composiciones farmacéuticas inventivas se liberan mt ranasa lmente en la forma de suspensiones.

Los métodos aceptables para preparar las formas farmacéuticas apropiadas de las composiciones farmacéuticas se conocen o podrían determinarse ..3«E-. rutinariamente por el experto en el arte. Por ejemplo, las preparaciones farmacéuticas podrían prepararse siguiendo las técnicas convencionales de la química farmacéutica que involucra las etapas, tal como mezclado, granulado y comprimido cuando sea necesario para las formas de tabletas, o mezclado, relleno y disolución de los ingredientes como sea apropiado, para dar los productos deseados para la administración oral, parenteral, tópica, i nt r a vagina 1 , intranasal, intrabronquial, infraocular, intra-aural y/o rectal.

Los transportadores, diluyentes, vehículos o excipientes farmacéuticamente aceptables sólidos o líquidos, podrían emplearse en las composiciones farmacéuticas. Los transportadores sólidos ilustrativos incluyen almidón, lactosa, sulfato de calcio dihidratado, tierra alba, sacarosa, talco, gelatina, pectina, acacia, estearato de magnesio y ácido esteárico. Los transportadores líquidos ilustrativos incluyen jarabe, aceite de cacahuate, aceite de oliva, solución salina y agua. El transportador o diluyente podria incluir un material de liberación prolongada apropiado, tal como monoestearato de glicerilo o distearato de glicerilo, sólo a con una cera. Cuando se usa un transportador líquido, la preparación podría ser en la forma de un jarabe, elíxir, emulsión, cápsula de gelatina suave, suspensión líquida inyectable (e.g., solución) o una suspensión líquida acuosa o no acuosa.

Una dosificación de la composición farmacéutica contiene al menos una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto activo (i.e., un compuesto de la fórmula I o una sal, profármaco, metabolito activo o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo), y preferentemente se hace de una o más unidades de dosificación farmacéuticas. La dosificación seleccionada podría administrarse a un mamífero, por ejemplo, un paciente humano, con la necesidad del tratamiento mediado por la inhibición de la actividad de picornaviral 3C proteasa, por cualquier método para la administración de la dosificación conocido o apropiado, incluyendo tópicamente, por ejemplo, como un ungüento o crema; oralmente; rectalmente, por ejemplo como un supositorio; parenteralmente por inyección; o continuamente por infusión int ravaginal , intranasal, intrabronquial, intra-aural o infraocular.

Una "cantidad terapéuticamente efectiva" se pretende que significa la cantidad de un compuesto inventivo que, cuando se administra a un mamífero con la necesidad del mismo, es suficiente para efectuar el tratamiento para las condiciones de la enfermedad aliviadas por la inhibición de la actividad de una o más proteasas 3C picornavirales, tal como rinovirus de humano, poliovirus de humano, virus Coxsackie, virus de encefalomiocarditis , menigovirus y virus de hepatitis A. La cantidad de un compuesto dado de la invención que será terapéuticamente efectiva variará dependiendo de factores, tal como el compuesto particular, la condición de la enfermedad y la severidad de la misma, la identidad del mamífero con la necesidad del mismo, tal cantidad podria determinarse rutinariamente por los expertos .

A manera de ilustración, una formulación para la liberación nasal de los compuestos inventivos para el tratamiento de infecciones rinovirales puede prepararse como sigue, en donde todos los porcentajes están en peso/peso y la suspensión se prepara en agua purificada. Un compuesto de la fórmula I se microniza a un tamaño de partícula reducido, de modo que D90<10 µm. Una suspensión se prepara para contener una concentración final de aproximadamente 0.01% a apro imadamente 2% del compuesto activo, preferentemente aproximadamente de 0.2% a 2%. Un preservativo apropiado seleccionado de los conocidos en el arte podría incluirse, por ejemplo, cloruro de benzalconio/EDTA, en rangos de concentración final apropiados, e.g., aproximadamente 0.02%/0.01%. Podría incluirse un agente de suspensión, tal como la mezcla de celulosa microcristalina (concentración final de aproximadamente 1 % - 1.5 % , preferentemente aproximadamente 1 % - 1.5 % , preferentemente aproximadamente 1 .2% ) y celulosa de carboximetilcelulosa de sodio (concentración final de aproximadamente 0.1%-.02%, preferentemente aproximadamente 0.13%) . Un surfactante, tal como polisorbato 80 podría incluirse en una concentración final de aproximadamente 0.05% a 0.2%, preferentemente aproximadamente 0.1%. Un modificador de tonicidad, tal como dextrosa podria incluirse para dar una concentración final de aproximadamente 4% a 6%, preferentemente aproximadamente 5%. El pH de la solución final se ajusta conforme sea apropiado a un rango fisiológico, e.g., 4-6 usando ácidos y/o bases no tóxicas, tal como HCl y/o NaOH.

Un ejemplo de formulación para la liberación nasal del compuesto inventivo del Ejemplo 17 tiene la siguiente composición, en donde todos los porcentajes están en peso/peso y la suspensión se prepara en agua purificada : SÍNTESIS GENERAL Los compuestos inventivos de la formula (I) podrían prepararse ventajosamente por los métodos de la presente invención, incluyendo los métodos generales descritos posteriormente. En cada una de estos métodos generales, Rl r R2, R3, R5, R6, R7, R8, R9, Ry, Z y Z ? son como se define anteriormente y R4 se usa (como una representación taquigráfica) para representar: en donde R7, R8 y R9 son como se definieron anteriormente.

En el Método General I, se usa para la síntesis de los compuestos similares a péptidos de la fórmula IA, un aminoácido A, en donde Pj es un grupo protector apropiado para el nitrógeno, se somete a una reacción de formación de amida con amino alcohol (o sal del mismo) B para producir C. El compuesto C después se desprotege para dar la amina libre (o sal de la misma) D. La amina D y el aminoácido E, que podrían incorporar ya sea un grupo R4 o un grupo protector para el nitrógeno (P2), se someten a una reacción de formación de enlace que genera el compuesto F. El compuesto F se oxida al intermediario G, que después se transforma en el producto insaturado H. Si los grupos protectores se han usado en el aminoácido E, o cualquiera de los grupos R (Rj-R9) y/o en Ry y/o en Z y/o Z l r el producto H se desprotege y/o se modifica además para producir H desprotegido o modificado.

JA R. °» * » A A0H — - rX í HX RJ ?'_ ".s °il ? I' I ?' Tvo ° ,' J i. A H A0H * "A H R??" - '^'^ K^AT"A TA D 'i7 'í ?' ? AAA° '"'"A ^AN A - Desprotegido Un método alternativo para preparar el intermediario F se describe como sigue. El aminoácido E y el aminoácido (o sal del mismo) I, en donde P3 es un grupo protector apropiado para el oxigeno, se someten a una reacción de formación de enlace para producir el intermediario J. La molécula J se desprotege para producir el ácido carboxílico libre K, que se somete subsecuentemente a una reacción de formación de amida con el amino alcohol (o sal del mismo) B para generar el i nt e rmedi a i o F . "rA— wtt?Tp -- (P!,A A°» + B - En el Método General II, que también es útil para la síntesis de compuestos similares a péptidos de la fórmula I-A, un aminoácido L, en donde P,. es un grupo protector apropiado para el nitrógeno, se convierte a un derivado de ácido carboxílico M, en donde "Lv" es un grupo saliente. El compuesto M se somete a una reacción, en donde Lv se reemplaza por Rl para dar el derivado N. El derivado N después se transforma en el producto insaturado O. El compuesto insaturado O se desprotege para dar la amina libre (o sal de la misma) P, o modificada en Z o Z 1 primero, para dar O' y después se desprotege a P. El intermediario P se somete subsecuentemente a una reacción de formación de amida con el ácido carboxílico K para dar el producto final H. Si los grupos protectores se han usado en cualquier grupo R (R1-R9) y/o en Ry y/o Z y/o Zj, el producto H se desprotege y/o modifica adicionalmente para producir H desprotegido o modificado.

Desprotegido o modificado Un método alternativo para preparar el intermediario N se describe como sigue. El compuesto M se somete a una reacción en donde "Lv" se reduce al amino alcohol protegido Q. El intermediario Q se oxida subsecuentemente al derivado N.

H R; M -N ' p R2 Q En el Método General III, útil para la síntesis de los compuestos similares a péptidos de la fórmula I-A, un aminoácido L, en donde Pj es un grupo protector apropiado, se convierte a un derivado de carbonilo M, en donde " Lv" es un grupo saliente. El compuesto M se desprotege para dar la amina libre (o sal de la misma) R, que se somete subsecuentemente a una reacción de formación de amida con el ácido carboxílico K para dar el intermediario S. El compuesto S después se convierte ya sea directamente al intermediario de carbonilo G, o sucesivamente se reduce primero al alcohol F, que se oxida a G. El compuesto G se somete a una reacción para producir el producto final insaturado H. Si los grupos protectores se han usado en cualquier grupo R (Rj-R9) y/o en Ry y/o en Z y/o Z el producto H se desprotege y/o se modifica adicionalment e para producir H desprotegido o modificado.

H2N-|Av R2 R -*• Desprotegido o modificado En el Método General IV, útil para la síntesis de los compuestos similares a péptidos de la fórmula I-A, la amina libre (o sal de la misma) P, preparada a partir del intermediario O como se describe en el Método General II, se convierte a la amida T por la reacción con un aminoácido A, en donde P,. es un grupo protector apropiado para el nitrógeno. El compuesto T después se desprotege adicionalmente a la amina libre (o sal de la misma) U, que se convierte subsecuentemente a H con el aminoácido E. Si los grupos protectores se han usado en cualquier grupo R (Rj-R9) y/o en Ry y/o en Z y/o en Z ? , el producto H se desprotege y/o se modifica adicionalmente para producir H desprotegido o modificado. o P A E -— Desprotegido o modificado En el Método General V, util para la síntesis de compuestos de cetometileno de la formula I-B, la lactona ópticamente activa AA, en donde P4 es es un grupo protector apropiado para nitrógeno, y R5 y R8 son H (que podrían prepararse por el método descrito posteriormente y por varios métodos de la literatura, que incluyen: (a) Herold et al., J. Org. Chem. 1989, 54, 1178; (b) Bradbury et al., Tetrahedron Lett. 1989, 30, 3845; (c) Bradbury et al., J. Med. Chem. 1990, 33, 2335; (d) Wuts et al., J. Org. Chem. 1992 57, 6696; (e) Jones et al., J. Org. Chem. 1993, 58, 2286; (f) Pégoper et al., Tetrahedron Lett. 1995, 36, 2753; y (g) Dondoni et al., J. Org. Chem. 1995, 60, 7927) se transforma por un procedimiento de dos etapas (hidrólisis básica y oxidación subsecuente) en el acido carboxilico BB. Este material no se aisla, pero se somete a una reacción de formación de amida con la amina (o sal de la misma) P para proporcionar el producto final CC. El grupo protector P4, junto con cualquier grupo protector adicional que se ha usado en cualquier grupo R (R¡., R2/ R3, R6 y/o R-) y/o en Z y/o Zj, se desprotege subsecuentemente y/o modifica adicionalmente para producir CC desprotegido o modificado.

Des CC La lactona AA podría prepararse en la forma ópticamente activa por el siguiente Método General VI (ver: Herold et al., J. Org. Chem. 1989, 54, 1178; Bradbury et al., Tetrahedron Lett. 1989, 30, 3845; y Bradbury et al., J. Med. Chem. 1990, 33 2335) . Un ácido carboxílico ?( d-insat urado DD, que incorpora R7, se transforma en el cloruro de ácido correspondiente (no mostrado) . Este cloruro de ácido se somete a una reaccion.de formación de amida con una amina quiral o una oxazolidona quiral para proporcionar el derivado EE (en el que Xj es una amina quiral o una oxazolidona) . El compuesto EE se desprotona subsecuentemente, y el enolato resultante se alquila diastereoselect ivament e con un electrofilo correspondiente a R6 para proporcionar el compuesto FF, en donde R5 es H. Este material después se somete a una reacción de halolactoni zacion para proporcionar la halo-lactona GG, en la que R5 y Rß son H y "hal" es Br o I. La halo-lactona GG se transforma subsecuentemente en la azida HH, y este material después se convierte en la lactona AA, en donde P4 es un grupo protector apropiado para el nitrógeno .

HH GG El ácido carboxílico Y, d-insaturado DD podría prepararse por el siguiente Método General VII (ver: Herold et al., J. Org . Ch em . 1989, 54 , 1178) . Un aldehido II, que incorpora R7, se acopla con bromuro de vinilmagnes io para dar el alcohol JJ. El alcohol JJ después se transforma en el ácido carboxílico ?,d-insaturado DD por un procedimiento de tres etapas como sigue: (i) tratamiento con malonato de dietilo y Ti (OEt),- catalítico a 160°C durante 1 hora, (ii) calentamiento a 190°C durante 4 horas y (iii) hidrólisis con KOH etanólico a reflujo.

JJ DD El ácido carboxílico BB también podría prepararse por el Método General VIII (ver Hoffman et al., Te t ra h edron , 1997, 53 , 7119) . Un aminoácido KK, que incorpora R7 y en donde P4 es un grupo protector apropiado para el nitrógeno, se transforma en el ß-cetoéster LL . El compuesto LL se desprotona y el anión resultante se condensa con el triflato MM, que incorpora R6. El producto de acoplamiento de esta manera obtenido, se trata con ácido trifluoroacético para proporcionar el cetoéster NN, y este material se hidroliza subsecuentemente para proporcionar el ácido carboxílico BB. Si la hidrólisis básica resulta en la epimer i zación , el cetoéster NN puede tr ansest er i f icar se (alcohol alílico, Ti(Oi-Pr),) y se desprotege subsecuentemente bajo condiciones neutras (Pd(PPh3)4, morfolina) para dar el ácido carboxílico BB. El triflato MM, en cambio, podría prepararse del alcohol cor espondiente por el tratamiento con anhídrido trifluorometansuifónico y 2 , 6-lut idina .

La lactona AA también podría prepararse por el Método General IX (ver: Askin et al. , J. Org. Chem. 1992, 57, 2771; y McWilliams et al., J. Am . Chem. Soc. r aS_-w~ 1996, 1 1 8, 11970). Un aminoácido KK, que incorpora R7 y en donde P4 es un grupo protector apropiado para el nitrógeno, se transforma en el epóxido 00 (diastereómero simple) por el método descrito en Luly et al., J. Org . Ch em . 1987, 52 , 1487. El epóxido 00 se condensa con el anión derivado del compuesto PP, que incorpora R6 y en el que X2 es un auxiliar quiral (incluyendo ( ÍS , 2R) -1 -aminoindan-2 -ol acetonida) para proporcionar el producto de acoplamiento QQ . Este material se cicliza subsecuentemente bajo condiciones acidas para proporcionar la lactona AA . El compuesto PP podría prepararse a partir del ácido carboxílico correspondiente (no mostrado) por el método representado en Askin et al., J. Org . Ch em . 1992, 57, 2771.

KK 00 PP AA QQ El Método General X, útil en la preparación de los compuestos deps ipept ídicos de la fórmula I-C, ilustra un método para preparar el intermediario TT. El aminoácido E y el alcohol RR, en donde P5 es un grupo protector apropiado para el oxígeno, se someten a una reacción de formación de enlace de éster para producir el intermediario SS. La molécula SS se desprotege para producir el ácido carboxílico libre TT, que podría utilizarse en lugar del ácido carboxílico K en cualquiera de los métodos generales descritos anteriormente .

RR SS TT SÍNTESIS ESPECIFICAS Los siguientes métodos específicos también podrían usarse para preparar varios compuestos de acuerdo a la invención . .-tatt-j a .

El Método Específico I describe la preparación del intermediario específico 01, que podrían utilizarse como el intermediario 0 en los métodos generales descritos anteriormente. De esta manera, el éster Al (preparado como se describió en Chida et al., J. Ch em . So c . , Ch em . Comm un , 1992, 1064) se hidroliza para dar el ácido Bl, que, en cambio, se transforma en la oxa zol idinona Cl. El compuesto Cl se desprotona subsecuentemente, y el enolato resultante se alquila dias tereoselect i vamente para dar el intermediario de aillo DI. Esta entidad se oxida por vía de ozonólisis, y el aldehido resultante (no mostrado) se somete a una reacción de ammación reductiva que produce la lactama El. La metanólisis catalizada por ácido de El después proporciona el alcohol Fl. Este intermediario se oxida por vía del método de Swern (u otras condiciones de oxidación apropiadas) al aldehido resultante (no mostrado), que se somete subsecuentemente a una reacción de formación de olefina para proporcionar el intermediario específico 01. 01 El Método específico II describe la preparación del intermediario específico 02, que podría utilizarse como el intermediario O en los métodos generales descritos anteriormente. El intermediario de alilo DI se somete a una secuencia de hidrobor ación/oxidación para proporcionar un alcohol primario (no mostrado) . Esta entidad se oxida por vía del método de Swern (u otras condiciones de oxidación apropiadas) y el aldehido resultante (no mostra ^ se somete a una reacción de aminacion reductiva, que produce la lactama Gl. La metanolisis catalizada por acido de Gl después proporciona el alcohol Hl g-ste intermedia io se oxida por vía del método de Swern (u otras condiciones de oxidación apropiadas) al aldehido resultante (no mostrado), que se somete subsecuentemente a una reacción de formación de olefina para proporcionar el intermediario especifico 02.

Los siguientes intermediarios Pl, P2 y P3 podrían usarse en los métodos generales anteriores en lugar del intermediario 0, para variar el grupo subsecuente en la posición R2.

P3 Una síntesis del intermediario Pl se describe posteriormente. El intermediario Cl (descrito anteriormente) se desprotona y el enolato resultante se atrapa con un disulfuro apropiado (simétrico o mezclado) para dar el sulfuro pl (P es un grupo protector apropiado para el oxígeno) . El grupo protector de oxígeno después se remueve para dar el alcohol p2. Este intermediario se oxida por vía del método de Swern (o usando otras condiciones de oxidación apropiadas), y el aldehido resultante (no mostrado) se somete a una reacción de aminación reductiva para dar la lactama p3. La metanólisis catalizada por acida de p3 después proporciona el alcohol p4. Este intermediario se oxida por vía del método de Swern (o usando otras condiciones de oxidación apropiadas) al aldehido resultante (tampoco mostrado), que se somete subsecuentemente a una reacción de formación de olefina para proporcionar el intermediario p5. Este compuesto podría utilizarse en lugar del intermediario O en los métodos de síntesis generales anteriores; alternativamente, el grupo protector de lactama podría removerse para dar el intermediario Pl.

PS p4 p3 Para sintetizar el intermediario P2, el intermediario Cl se desprotona y el enolato resultante se atrapa con una fuente apropiada de oxígeno elect rof íl ico (e.g., una oxaziridina) para dar el alcohol p6. Este intermediario se alquila con una haluro o triflato de alquilo funcional i zado apropiadamente para dar el éter p7 (P es un grupo protector apropiado para el nitrógeno) . El grupo protector de nitrógeno después se remueve, y la amina resultante (no mostrada) se somete a las condiciones de ciclización para dar la lactama p8. La metanólisis catalizada por ácido de p8 después proporciona el alcohol p9. Este intermediario se oxida por vía del método de Swern (o usando otras condiciones de oxidación apropiadas) al aldehido resultante (tampoco mostrado), que se somete subsecuentemente a una reacción de formación de olefina para proporcionar el intermediario P2. p9 p8 No se describe ahora una síntesis del intermediario especifico P3 El intermediario DI (descrito anteriormente) se somete a ozonolisis, y el aldehido resultante (no mostrado) se reduce al alcohol correspondiente (tampoco mostrado) Este intermediario después se protege para proporcionar el compuesto plO (Pj. es un grupo protector apropiado para el oxigeno) . La funcionalidad de ímida presente en plO se hidroliza al acido carboxilico pll, y este intermediario se acopla con un derivado de hidroxi lamina apropiadamente protegido para dar la amida pl2 ( P2 es un grupo .".lA.A-^fc»... protector apropiado para el oxígeno que es estable a las condiciones que removerán P3) . El grupo protector Pj después se remueve, y el alcohol resultante (pl3) se transforma en un grupo saliente apropiado (haluro o tpflato, no mostrado) . El grupo protector P2 después se remueve, y el ácido hidroxámico resultante se cicliza para dar el intermediario pl4. La metanólisis catalizada por ácido de pl4, después proporciona el alcohol pl5. Este intermediario se oxida por vía del método de Swern (o usando otras condiciones de oxidación apropiadas) al aldehido resultante (no mostrado), que se somete subsecuentemente a una reacción de formación de olefina para proporcionar el intermediario P3.

El Método específico III describe la preparación de los intermediarios Ql, Q2 y Q3, que podrían utilizarse en los métodos generales descritos anteriormente. El compuesto conocido II se transforma en la molécula de la literatura Jl por una modificación de un procedimiento publicado (Ikuta et al., J. Med . Ch em . 1987, vol. 30, p. 1995) . Independientemente, el éster de aminoácido Kl se protege para proporcionar el éster de sililo Ll. El éster se reduce con DIBAL (o usando otras condiciones de reducción apropiadas), y el aldehido resultante (no mostrado) se somete a una reacción de formación de olefina con el intermediario Jl, que produce Ml. La desprotección del sililo de Ml, después proporciona el alcohol NI. Este intermediario se somete a una variedad de condiciones de hidrogenación para proporcionar los intermediarios Ql, Q2 y Q3. Estos intermediarios podrían transformarse en los intermediarios análogos al intermediario 01 (ver el Método Específico I anterior) por oxidación y la olefinación subsecuente.

El experto reconocerá que podrían elaborarse varios compuestos de la invención siguiendo los métodos generales y específicos descritos anteriormente, así como las enseñanzas en el arte, incluyendo las referencias citadas aquí, las descripciones de las cuales se incorporan aquí por referencia. Adicionalment e , el experto podría preparar varios compuestos de la invención de acuerdo al ejemplo descrito posteriormente o a través de las modificaciones rutinarias para las síntesis descritas aquí .

EJEMPLOS Se establecen posteriormente varios ejemplos de compuestos preferidos de la fórmula I. Las estructuras de los compuestos de los siguientes ejemplos se confirmaron por uno o más de lo siguiente: espectroscopia de resonancia magnética protónica, espectroscopia infrarroja, microanálisi s elemental, espectroscopia de masas, cromatografía de capa fina, determinación del punto de fusión y determinación del punto de ebullición. Existió cualquier discrepancia entre la fórmula estructural dada mostrada para un compuesto y su nombre químico proporcionado, la fórmula estructural aplica.

Los espectros de resonancia magnética protónica (? RMN) se determinaron usando un espectrómetro Varian UNITYpius 300 que opera en una intensidad de campo de 300 megahertz (MHz) . Los can cambios químicos se reportan en partes por millón (ppm, d) campo abajo de un trimet i lsi laño interno estándar. Alternativamente, los espectros de 1H RMN se refer enciaron con las señales del disolvente prótico residual como sigue: CHC13 = 7.26 ppm; DMSO = 2.49 ppm; C6HD5 = 7.15 ppm. Las multiplicidades del pico se designan como sigue: s = singulete; d = doblete; dd = doblete de dobletes; t = triplete; q = cuarteto; br = resonancia amplia y m = multiplete. Las constantes de acoplamiento se dan en Hertz. Los espectros de absorción infrarroja (IR) se obtuvieron usando un espectrómetro FTIR Perkin-Elmer serie 1600. Los microanáli sis elementales se realizaron por Atlantic Microlab Inc. (Norcross, GA) y dieron los resultados para los elementos establecidos dentro de ±0.4% de los valores teóricos. La cromatografía de columna instantánea se realizó usando Silica gel 60 (Merck Art 9385) . La cromatografía de capa fina analítica (TLC) se realizó usando las láminas pre-recubiertas de Silica 60 F254 (Merck Art 5719) . Los puntos de fusión (abreviados como pf) se determinaron en un aparato Mel-Temp y no se corrigieron. Todas las reacciones se realizaron en matraces septum sellados bajo una ligera presión positiva de argón, a menos que se observara lo contrario. Todos los reactivos comerciales se usaron conforme se recibieron de sus respectivos suministradores con las siguientes excepciones: el tetrahidrofurano (THF) se destiló a partir de cetil benzofenona de sodio antes del uso; el diclorometano (CH2C12) se destiló a partir de hidruro de calcio antes del uso; el cloruro de litio anhidro se preparó calentando a 110 ° C a vacío durante toda la noche .

Se usan aquí las siguientes abreviaciones: Et20 se refiere a éter dietílico; DMF se refiere a N,N-dimetilformamida; DMSO se refiere a dimetiisulfóxido; y MTBE se refiere a ter-butil metil éter. Otras abreviaciones incluyen: CH3OH (metanol) , EtOH (etanol) , EtOAc (acetato de etilo) , DME (etilen glicol dimetil éter) , Ac (acetilo) , Me (metilo) , Ph (fenilo) , Tr (trifenilmetilo) , Cbz (benciloxicarbonilo) , Boc (ter-butoxicarbonilo) , TFA (ácido trifluoroacético) , DIEA ( N , N -di i sopropi l et i lamina ) , DBU ( 1 , 8 -dia z abiciclo [ 5.4.0 ] undec- 7 -eno ) , HOBt ( 1-hidroxiben zot r i a zol hidratado ) , PyBOP ( hexa f luorof os f ato de ben zot r ia zol-il-oxi -t r is -pirrolidino-f osf onio) , HATU ( hexaf luorof os f ato de O- ( 7 -azabenzotria zol- 1-il) -N,N,N' ,N' -tetrametiluronio) , EDC (clorhidrato de 1 - ( 3 - d ime t i 1 ami n op r op i 1 ) - 3 -et ilcarbarbodi imida ) , DCC ( diciclohexi lcarbodiimida ) , DDQ (2 , 3-dicloro-5, 6-diciano-l , 4 -benzoquinona ) , DMAP ( 4 -dimetilaminopiridina ) , Gln (glutamina) , Le.u (leucina) , Phe (fenilalanina) , Val (valina) , His (histidina) , 1-Naft ( 1 -naf t i lalanina ) , 2-naft (2-na f tilalanina ) , o-t-But i 1-Gly (ter-butil glicina) , ácido ( S ) -Pirrol-Ala ( ( 2 S , 3 ' S ) - 2 - amino- 3 - ( 2 ' - oxopir rolidin-3 ' -il ) -propiónico ) y ácido (S)-Piper-Ala ( (2S,3S' )-2-amino-3-(2'-oxo-piperidin-3' -iDpropiónico) . Adicionalmente, " L" representa aminoácidos que se presentan naturalmente.

Un sistema que se llama simplificado que emplea abreviaciones de aminoácidos, se usa para identificar algunos intermediarios y productos finales. Cuando se nombran los compuestos, las abreviaciones de aminoácidos en itálicas representan modificaciones en el término C de tal residuo, en donde aplica lo siguiente: (1) los esteres de ácidos acrílicos se reportan como " E" ( trans ) propenoat os ; (2) las 3-metilen-dihidrofuran-2-onas se reportan como " E" (trans) 2-(ct-vinil-?-bitirolactonas); y (3) Los 5 -v i n i l i s o x a z o l e s s e r ep o r t a n c omo " E" ( trans ) pr openisoxazoles . Además, la terminología " AAj? [ COCH2] -AA2" indica que, para cualquier secuencia peptídica, dos aminoácidos (AAj y AA2) usualmente se enlazados por un enlace de amida se reemplazan por un radical isóstero dipeptídico de cetomet ileno . La terminología " AA1-NCH3-AA2" indica que, para cualquier secuencia peptídica, el enlace de amida que usualmente conecta los dos aminoácidos (AAj .y AA2) se reemplaza por un enlace de N-metil amida. La terminología "AAj-0-AA2)" indica que, para cualquier secuencia peptídica, el enlace de amida que usualmente conecta los dos aminoácidos (AAX y AA2) se reemplaza por un enlace de éster .

Se describen posteriormente Ejemplos de modalidades de acuerdo con la invención.

Ejemplo 1 - Preparación del Compuesto de Comparación #1: 5- (3 ' - (Cbz-L-Leu-L-Phe-L- Gln ) -E-Propen) -isoxazol (Compuesto de Comparación #1) 1. Preparación del Intermediario Cbz-L- (Tr-Gln) -OMe Cbz-L- (Tr-Gln) (0.26 g, 0.50 mmol, 1 equiv.) se adicionó a una solución de cloruro de acetilo (0.25 mL, 3.52 mmol, 7.0 equiv.) en CH3OH (5 mL), y la agitación se continuó a 23°C durante 1 h (hora) . El disolvente se removió a presión reducida, y el residuo se disolvió en CH2C12 (100 mL) y se lavó con agua (100 mL), NaHC03 saturado (100 mL) y salmuera (100 mL) . La capa orgánica se secó con Na2S04 y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (EtOAc al 20% en hexanos) para proporcionar Cbz-L- (Tr-Gln)-OMe (0.23 g, rendimiento de 84%) como un sólido blanco: pf = 139-140°C; IR (crn"1) 1742, 1207; 1H RMN (DMSO-d6) d 1.16 (t, 1H, J = 7.0), 1.77 (m, 1H), 1.97 (m, 1H), 3.61 (s, 3H), 4.99 (m, 1H), 5.03 (s, 2H), 7.02-7.55 (m, 20H), 7.69 (d, 1H, J = 7.7), 8.59 (s, 1 H ) ; Anal. (C33H32N205) C, H, N.

Preparación del Intermediario Cbz-L- (Tr-Glutaminol) Se adicionó cloruro de litio (0.24 g, 5.66 mmol, 2.0 equiv.) a una solución de Cbz-L- ( Tr-Gln ) -OMe (1.50 g, 2.79 mmol, 1 equiv.) en THF:EtOH 2:1 (30 mL) y la mezcla se agitó a 23°C hasta que todos los sólidos se hubieron disuelto (10 minutos) . Se adicionó borohidrato de sodio (0.21 g, 5.55 mmol, 2.0 equiv.), y la mezcla de reacción se agitó durante toda la noche a 23°C. Los disolventes se removieron a presión reducida, el residuo se tomó en agua (50 mL ) y el pH se ajustó a 2-3 con HCl al 10%. El producto se extrajo con EtOAc (50 mL ) , y la capa orgánica se lavó con agua (50 mL) antes de secar con MgS04. La capa orgánica se concentró y el residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (gradiente de elución, EtOAc al 20-50% en benceno) para dar Cbz-L- (Tr-glut aminol ) (1.02 g, 72% de rendimiento) como un sólido vitreo blanco: pf = 66-70°C; IR (crn"1) 3318, 1699, 1510, 1240; 'H RMN (DMS0-d6) d 1.40 (m, 1H), 1.72 (m, 1H), 2.26 (m, 2H), 3.17-3.50 (m, 3H), 4.64 (t, 1H, J = 5.0), 5.00 (s, 2H), 7.00-7.40 (m, 20H), 6.96 (d, 1H, J = 8.5), 8.54 (s, 1H); Anal. (C32H32N204) C, H, N.

Preparación del Intermediario L- (Tr-Glutaminol) Una suspensión de Cbz-L- ( Tr-glut aminol ) (1.93 g, 3.79 mmol) en CH3OH (25 mL ) y Pd/C (10%, 0.19 g) se agitó bajo una atmósfera de hidrógeno (balón) durante 4 horas, después se filtró a través de una capa de Celita. El filtrado se concentró a presión reducida para dar L- (Tr-glutaminol ) como un sólido amorfo blanco (1.38 g, rendimiento de 98%) : pf = 191-193°C; IR (c "1) 3255 (br), 1642, 1527; XH RMN (DMSO-d6) d 1.29 (m, 1H), 1.53 (m, 1HJ2.29 (m, 2H), 3.08 (m, 1H), 3.18 (m, 2H), 3.38 (s, br, 2H) . 4.43 (s, br, 1H) . 7.14-7.28 (m, 15H), 8.62 (s, 1H) .

Preparación del Intermediario Cbz-L-Leu-Phe-L- (Ir-Glutaminol) Se adicionó carbonildumida zol (0.17 g, 1.05 mmol, 1.0 equiv.) a una solución de Cbz-L-Leu-Phe-OH (0.41 g, 1.0 mmol, 0.95 equiv.) en THF (10 mL) y la mezcla de reacción se agitó a 23°C durante 1 hora. Después se adicionó L- ( Tr-Glutaminol ) (0.39 g, 1.05 mmol, 1 equiv.), y la solución resultante se agitó durante toda la noche. Los volátiles se removieron a presión reducida, y el residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (gradiente de elución, CH3OH 2-4% en CHC13) para dar Cbz-L-Leu-L-Phe-L- (Tr-glut ammol ) (0.47 g, rendimiento de 62%) como un sólido amorfo blanco: pf = 92-95°C; IR (crn"1) 3302, 1657, 1520, 1238; :H RMN (DMSO-d6) d 0.79 (t, 6H, J = 7.0), 1.30 (m, 2H), 1.44 (m, 2H) , 1.75 (m, 1H), 2.22 (m, 2H), 2.82 (m, 1H), 2.97 (m, 1H), 3.14 (m, 1H), 3.25 (m, 1H), 3.63 (m, 1H), 3.95 (m, 1H), 4.48 (m, 1H), 4.65 (t, 1H, J = 5.0), 4.96 (d, 1H, J = 13.0), 5.02 (d, 1H, J = 13.0), 7.07-7.33 (m, 25H), 7.42 (d, 1H, J = 8.0), 7.66 (d, 1H, J = 8.5), 7.86 (d, 1H, J = 8.0), 8.52 (s, 1H); Anal. ( C47H52N4O6-0.5H20) C, H, N.

Preparación del Intermediario Cbz-L-Leu-L-Phe-L- (Tr-Gln) -H Se adicionó ácido o-yodobenzoico (0.63 g, 2.25 mmol, 3.0 equiv.) a una solución de Cbz-L-Leu-L- Phe-L- (Tr-glutaminol) (0.58 g, 0.75 mmol, 1 equiv.) en DMSO (7.5 mL) a 23°C. Después de agitar durante 2 horas, se removió DMSO a presión reducida. El residuo se diluyó dos veces con CH2C12 y el disolvente se evaporó para remover cualquier DMSO restante. El residuo se diluyó con EtOAc (30 mL) y se filtró y el filtrado se lavó con solución de Na2S203 al 5%/NaHC03 al 5% (30 mL), agua (30 mL) y salmuera (30 mL) y después se secó con Na2S04. El disolvente se removió a presión reducida para dar Cbz-L-Leu-L-Phe-L- (Tr-Gln) -H (0.53 g, rendimiento de 52%) como un sólido vitreo blanco, que se usó inmediatamente sin purificación adicional. 1H RMN (DMSO-d6) d 0.79 (m, 6H) , 1.00-1.98 (m, 5H), 2.27 (m, 2H), 2.84 (m, 1H), 3.02 (m, 1H), 3.98 (m, 2H), 4.58 (m, 1H), 4.99 (s, 2H), 7.14-7.32 (m, 25H), 7.39 (d, 1H, J = 8.1), 7.97 (d, 1H, J = 8.5), 8.38 (d, 1H, J = 8.0), 8.60 (s, 1H), 9.20 (s, 1H) .

Preparación del Intermediario 5- { 3 ' - ( Cbz-L-Leu-L- he-L-(Tr-Gln) ) -E-Propen} -Isoxazol Una solución de KN ( ( CH3) 3Si ) 2 (0.95 mL de una solución 0.5M en THF, 0.477 mmol, 1.0 equiv.) se adicionó a una suspensión de bromuro de isoxazol-5-ilmetil-trifenilfosfonio (0.222 g, 0.525 mmol, 1.1 equiv.) en THF ( 20 mL) a 0°C, y la reacción se agitó a 0°C durante 30 minutos. Una solución de Cbz-L-Leu-L-Phe-L- (Trn-Gln) -H (0.366 g, 0.477 mmol, 1 equiv.) en THF (10 mL) se adicionó y la mezcla de reacción después se agitó durante toda la noche a 23°C. La disolvente se removió ín va cuo , y el residuo se diluyó con EtOAc (30 mL) , se lavó con agua (30 mL) y después se secó con MgS04. El disolvente se removió a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice instantánea (gradiente de elución, CH3OH al 0-1% en CHC13) para dar 5- { 3 ' ( Cbz-L-Leu-L-Phe-L- ( Tr-Gln ) ) -E-propen ) -isoxa zol (0.307 g, 70% de rendimiento) como un sólido amorfo: IR (cm"1) 3423, 1678, 1568, 1265, 1043, 711; JH RMN (DMSO-d6) d 0.77-0.81 (m, 6H), 1.21-1.36 (m, 2H) , 1.40-1.55 (m, 1H), 1.60-1.80 (m, 2H), 2.34-2.45 (m, 2H), 2.82-2.87 (m, 1H), 2.91-3.04 (m, 1H), 3.95-4.00 (m, 1H), 4.41-4.50 (m, 1H-), 4.53-4.60 (m, 1H), 4.99 (q, 2H, J = 6.0), 6.19 (d, 1H, J = 15.0), 6.36 (dd, 1H, J = 15.0), 6.46 (s, 1H), 7.15-7.33 (m, 20H), 7.42 (d, 1H, J = 9.0), 7.56-7.63 (m, 5H), 7.96 (d, 1H, J = 9.0), 8.08 (d, 1H, J = 9.0), 8.51 (s, 1H), 8.58 (s, 1 H ) ; HRMS cale, para Cs,HslNsO(+Cs 964.3050 (M+Cs), encontrado 964.3018.

Preparación del Producto: 5- (3 ' - (Cbz-L-Leu-L-Phe-L-Gln) -E-Propen) -Isoxazol Se adicionó ácido trifluoroacético (1 mL ) a una solución de 5- { 3 ' - ( Cbz -L-Leu-L-Phe-L- ( Tr-Gln ) ) -E-propenf-isoxazol (0.214 g, 0.257 mmol) en CH2C12 (10 mL) y la mezcla de reacción se agitó a 23°C durante toda la noche. El disolvente se removió i n va cuo y el residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice instantánea (gradiente de elución CH3OH al 0-1% en CHC13) para dar 5- (3 ' - (Cbz-L-Leu-L-Phe-L-Gln) -E-propen) -isoxazol como un sólido blanco (0.054 g, rendimiento de 36%) : 'H RMN (DMSO-d6) d 0.77-0.83 (m, 6H), 1.26-1.46 (m, 2H), 1.47-1.62 ( , 1H) , 1.69-1.79 (m, 2H), 2.04-2.29 (m, 2H), 2.83-2.88 (m, 1H), 2.97-3.10 (m, 1H), 3.99-4.12 (m, 1H), 4.37-4.43 (m, 1H), 4.48-4.57 (m, 1H), 5.01 (q, 2H, J = 6.0), 6.20 (d, 1H, J = 15.0), 6.36 (dd, 1H, J = 15.0, 6.0), 6.45 (d, 1H, J = 3.0), 6.75 (s, 1H), 7.14-7.29 (m, 6H), 7.31-7.40 (m, 5H), 7.45 (d, 1H, J = 9.0), 8.04 (d, 1H, J = 9.0) , 8.07 (d, 1H, J = 9.0) , 8.51 (d, 1H, J = 3.0) ; Anal. (C32H39N506) C, H, N.

Ejemplo 2 - Preparación del Compuesto A-l : Etil-3- ( (5 ' -metilisoxazol-3 ' -carbonil) -L-Leu-L-Phe-L-Gln) -E -propenoato Preparación del Intermediario Boc-L- (Tr-Gln) -N (OMe) Me Se adicionó cloroformato de isobutilo (4.77 mL, 36.8 mmol, 1.0 equiv.) a una solución de Boc-L-(Tr-Gln)-0H (18.7 g, 36.7 mmol, 1 equiv.) y 4-metilmorfolina (8.08 mL, 73.5 mmol, 2.0 equiv.) en CH2C12 (250 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 20 min. (minutos), después se adicionó clorhidrato de N , O-dimeti lhídroxi lamina (3.60 g, 36.7 mmol, 1.0 equiv.) . La solución resultante se agitó a 0°C durante 20 min y a 23 ° C durante 2 horas (h) y ,-ma,,, zs&?y después se dividió entre agua (150 mL) y CH2C12 (2 x 150 mL ) . Las capas orgánicas combinadas se secaron con Na2S04 y se concentraron. La purificación del residuo por cromatografía de columna instantánea (gradiente de elución, hexanos al 40-20% en EtOAc) proporcionó Boc-L-(Tr-Gln) -N (OMe ) (16.1 g, rendimiento de 82%) como una espuma blanca: IR (crn"1) 3411, 3329, 3069, 1701, 1659; XH RMN (CDC13) d 1.42 (s, 9H), 1.63-1.77 (m, 1H), 2.06-2.17 (m, 1H), 2.29-2.43 ( , 2H), 3.17 (s, 3H), 3.64 (s, 3H), 4.73 (s, br, 1H), 5.38-5.41 (m, 1H), 7.20-7.31 (m, 15H) ; Anal. (C31H37N305) C, H, N.

Preparación del Intermediario Boc-L- (Tr-Gln) -H Se adicionó hidruro de diisobut i laluminio (50.5 mL de una solución 1.5 M en tolueno, 75.8 mmol, 2.5 equiv.) a una solución de Boc-L- ( Tr-Gln ) -N (OMe ) Me (16.1 g, 30.3 mmol, 1 equiv.) en THF a -78°C y la mezcla de reacción se agitó a -78°C durante 4 horas. Se adicionaron secuencialmente metanol (4 mL) y HCl l.OM (10 mL) y la mezcla se calentó a 23°C. La suspensión resultante se diluyó con Et20 (150 mL), y se lavó con HCl l.OM (3 x 100 mL), NaHC03 saturado a la mitad (100 mL) y agua (100 mL ) . La capa orgánica se secó con MgS04, se filtró y se concentró para dar Boc-L- ( Tr-Gln ) -H crudo (13.8 g, rendimiento de 97%) como un sólido blanco: pf = 114-116°C; IR (crn"1) 3313, 1697, 1494; lR RMN (CDC13) d 1.44 (s, 9H) , 1.65-1.75 (m, 1H), 2.17-2.23 (m, 1H), 2.31-2.54 (m, 2H), 4.11 (s, br, 1H), 5.38-5.40 (m, 1H), 7.11 (s, 1H), 7.16-7.36 (m, 15H), 9.45 (s, 1H) .

Preparación del Intermediario etil-3- (Boc-L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato Se adicionó bis ( trimet ils ilil ) amida de sodio (22.9 mL de una solución 1.0 M en THF, 22.9 mmol, 1.0 equiv.) a una solución de f os fonoacet ato de trietilo (5.59 g, 22.9 mmol, 1.0 equiv.) en THF (200 mL) a -78°C, y la solución resultante se agitó durante 20 minutos a tal temperatura. El Boc-L- ( Tr-Gln ) -H crudo (10.8 g, 22.9 mmol, 1 equiv.) en THF (50 mL) se adicionó por vía de cánula y la mezcla de reacción se agitó durante 2 horas a -78°C, se calentó a 0°C durante 10 minutos y después se dividió entre HCl 0.5M (150 mL) y una mezcla 1:1 de EtOAc y hexanos (2 x 150 mL) . Las capas orgánicas combinadas se secaron con Na2S04 y se concentraron. La purificación del residuo por cromatografía de columna instantánea (EtOAc al 40% en hexanos) proporcionó etil-3- [Boc-L- (Tr-Gln) ] -E-pr openoato (10.9 g, 88% de rendimiento) como una espuma blanca: IR (cm"1) 3321, 1710; JH RMN (CDC13) d 1.27 (t, 3H, J = 7.2) , 1.42 (s, 9H) , 1.70-1.78 (m, 1H) , 1.80-1.96 (m, 1H) , 2.35 (t, 2H, J = 7.0) , 4.18 (q, 2H, J = 7.2) , 4.29 (s, br, 1H) , 4.82-4.84 (m, 1H) , 5.88 (dd, 1H, J = 15.7, 1.6) , 6.79 (dd, 1H, J = 15.7, 5.3) , 6.92 (s, 1H) , 7.19-7.34 (m, 15 H ) ; Anal. (C33H38N205) C, H, N.

Preparación del Intermediario etil-3- (Boc-L-Phe-L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato Una solución de HCl en 1,4-dioxano (4.0M, 15 mL), se adicionó a una solución de etil-3- (Boc-L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato (3.26 g, 6.01 mmol, 1 equiv.) en el mismo disolvente (15 mL ) a 23 ° C . Después de 2 h, los volátiles se removieron a presión reducida para proporcionar etil-3- (H2N-L-(Tr-Gln)) -E-propenoato- HCl. Este material se disolvió en CH2C12 (60 mL) y se adicionaron secuencialmente Boc-L-Phe-OH (1.59 g, 6.01 mmol, 1.0 equiv.), HOBt (1.22 g, 9.02 mmol, 1.5 equiv.), 4-metilmorf olina (1.98 mL, 18.03 mmol, 3 equiv.) y EDC (1.73 g, 9.02 mmol, 1.5 equiv.) . La mezcla de reacción se agitó a 23 ° C durante toda la noche, y después se dividió entre agua (100 mL) y CH2C12 (2 x 100 mL) . Las capas orgánicas combinadas se secaron con Na2S04, se concentraron y el residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (EtOAc al 40% en hexano) para proporcionar etil-3- (Boc-L- Phe-L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato (3.55 g, 85%) como espuma blanca: IR (cm"1) 3306, 1706, 1661; XH RMN (CDC13) d 1.29 (t, 3H, J = 7.2), 1.38 (s, 9H), 1.65-1.76 (m, 1H), 1.87-1.99 (m, 1H), 2.25-2.27 (m, 2H), 2.94-3.01 (m, 2H), 4.14-4.26 (ra, 3H), 4.48-4.53 (m, 1H), 4.95 (s, br, 1H), 5.64 (d, 1H, J = 15.8), 6.29 (d, 1H, J = 8.1), 6.64 (dd, 1H, J = 15.8, 5.4), 6.80 (s, br, 1H), 7.14-7.32 (m, 20H); Anal. (C42H47N306) C, H, N.

Preparación del Intermediario etil-3- (Boc-L-Leu-L-Phe-L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato Una solución de HCl en 1,4-dioxano (4.0 M, 15 mL) se adicionó a una solución de etil-3- ( Boc-L-Phe-L- ( Tr-Gln )) -E-propenoato (6.40 g, 9.28 mmol, 1 equiv.) en el mismo disolvente (15 mL) a 23°C. Después de 2 horas, los volátiles se removieron a presión reducida. El residuo se disolvió en CH2C12 (100 mL) y se adicionaron secuencialmente Boc-L-Leu-OH (2.58 g, 11.1 mmol, 1.2 equiv.), HOBt (1.88 g, 13.9 mmol, 1.5 equiv.), 4-met ilmorf olina (3.06 mL, 27.8 mmol, 3 equiv.) y EDC (2.67 g, 13.92 mmol , 1.5 equiv.) . La mezcla de reacción se agitó a 23°C durante toda la noche, y después se dividió entre agua (100 mL) y CH2C12 (2 x 100 mL) . Las capas orgánica combinadas se secaron con Na2S04 y se concentraron y el residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (CH3OH al 2% en CH2C12) para proporcionar et?l-3- (Boc-L-Leu-L-Phe-L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato (6.46 g, rendimiento de 87%) como espuma blanca: IR (crn"1) 3284, 1651, 1515; :H RMN (CDC13) d 0.86 (d, 3H, J = 6.0), 0.89 (d, 3H, J = 6.0), 1.29 (t, 3H, J = 7.2), 1.34 (s, 9H) , 1.38-1.60 (m, 3H), 1.62-1.89 (m, 1H), 1.95-1.97 (m, 1H), 2.28-2.30 (m, 2H), 3.06-3.08 (m, 2H), 3.92-3.94 (m, 1H), 4.17 (q, 2H, J = 7.2), 4.48-4.51 (m, 2H), 4.67 (m, 1H), 5.66 (d, 1H, J = 15.9), 6.51-6.57 (m, 2H), 6.69 (dd, 1H, J = 15.6, 5.1), 7.10-7.33 (m, 21H); Anal. ( C48H58N407 • 0.33H20) C, H, N.

Preparación del Intermediario etil-3- ((5' -metilisoxazol -3 ' -carbonil) -L-Leu-L-Phe-L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato Una solución de HCl en 1,4-dioxano (4.0 M, 3 mL) se adicionó a una solución de et ?l-3- ( Boc-L-Leu-L- Phe-L-(Tr-Gln) ) -E-propenoato (0.216 g, 0.27 mmol, 1 equiv.) en el mismo disolvente (3 mL) a 23°C. Después de 2 horas, los volátiles se removieron a presión reducida. El residuo se disolvió en CH2C12 (15 mL), se enfrió a 0°C y se adicionaron secuencialmente trietilamina (0.112 mL, 0.81 mmol, 3.0 equiv.) y cloruro de 5-met il i soxazol-3-carboni lo (0.058 g, 0.40 mmol, 1.5 equiv.) . La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 30 minutos a 0°C durante 30 minutos, y después se dividió entre agua (50 mL) y CH2C12 (2 x 50 mL) . Las capas orgánica combinadas se secaron con Na2S04 y se concentraron y el residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (CH3OH al 2% en CH2C12) para proporcionar etil-3- ( (5 '-metilisoxazol-3' -carbonil) -L-Leu-L-Phe-L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato (0.199 g, rendimiento de 91%) como una espuma blanca: IR (cm"1) 3286, 1650, 1541; XH RMN (CDC13) d 0.86 (d, 3H, J = 5.4), 0.89 (d, 3H, J = 5.7), 1.28 (t, 3H, J = 7.2), 1.43-1.59 (m, 2H), 1.67-1.75 (m, 1H), 1.95-1.99 (m, 2H), 2.28 (t, 2H, J = 7.2), 2.41 (s, 3H), 2.97-3.04 (m, 1H), 3.06-3.13 (m, 1H), 4.17 (q, 2H, J = 7.2), 4.31-4.33 (m, 1H), 4.48-4.52 (m, 2H), 5.72 (d, 1H, J = 15.9), 6.19 (s, 1H), 6.41 (d, 1H, J = 7.5), 6.59 (d, 1H, J = 8.1), 6.71 (dd, 1H, J = 15.3, 6.0), 6.95 (d, 1H, J = 6.6), 7.09-7.21 (m, 21H); Anal. ( C48H53N507 • H20 ) C, H, N.

Preparación del producto de etil-3- ( (5 ' -metilisoxazol-3 ' -carbonil) -L-Leu-L-Phe-L-Gln) -E-propenoato Se adicionaron secuencialmente t ri isopropil si laño (0.077 mL, 0.376 mmol, 1.8 equiv.) y ácido trifluoroacético (3 mL) a una solución de etil((5'-metilisoxazol-3 ' -carbonil) -L-Leu-L-Phe-L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato (0.185 g, 0.21 mmol, 1 equiv.) en CH2C12 (3 mL) a 23°C, produciendo una solución amarillo claro. La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos a 23°C, tiempo en el cual llegó a ser incolora. Los volátiles se removieron a presión reducida, y el sólido blanco resultante se trituró con Et20 (10 mL), se filtró y se secó con aire para dar et il-3- ( ( 5 ' -met i lisoxa zol-3 ' -carbonil ) -L-Leu-L-Phe-L-Gln) -E-propenoato (0.87 g, rendimiento de 81%) como sólido blanco: pf = 223-225°C; IR (cm-1) 3298, 1662, 1544, 1457, 1278; :H RMN (DMS0-d6) 6 0.81 (d, 3H, J = 6.0) , 0.85 (d, 3H, J = 6.3) , 1.23 (t, 3H, J = 6.9), 1.38-1.42 (m, 1H), 1.48-1.77 (m, 4H), 2.04 (t, 2H, J = 7.2), 2.46 (s, 3H), 2.78-2.86 (m, 1H), 2.93-3.00 (m, 1H), 4.11 (q, 2H, J = 7.2), 4.36-4.54 (m, 3H), 5.63 (d, 1H, J = 15.6), 6.56 (s, 1H), 6.68 (dd, 1H, J = 15.9, 5.4), 6.76 (s, br, 1H), 7.19 (m, 6H), 8.09 (d, 1H, J = 8.1 ) , 8.14 (d, 1H, J = 7.8), 8.58 (d, 1H, J = 7.5 ) ; A n a l . ( C 2 9H 3 9N 507 ) C , H , N .

Ejemplo 3 - Preparación del compuesto A-2: Etil-3-( (isoxazol-5 ' -carbonil) -L-Leu-L-Phe-L-Gln) - E -propenoato Preparación del intermediario etil-3- ( (i soxazol-5 ' -carbonil) -L-Leu-L-Phe-L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato Este compuesto se preparó a partir de etil-3-(Boc-L-Leu-L-Phe-L- ( Tr-Gln )) -E-propenoato y cloruro de isoxa zol-5-carbon? lo usando el procedimiento descrito anteriormente (Ejemplo 2) para la preparación de etil-3- ( ( 5 ' -metilisoxazol-3 ' -carbonil ) -L-Leu-L-Phe-L- ( Tr-Gln) ) -E-propenoato: IR (crn-1) 3282, 1643, 1530; lH RMN (CDC13) d 0.87 (t, 6H, J = 6.6), 1.29 (t, 3H, J = 7.2), 1.49-1.64 (m, 3H), 1.69-1.80 (m, 1H), 1.90-1.96 (m, 1H), 2.30 (t, 2H, J = 7.2), 2.92-2.96 (m, 1H), 3.02-3.09 (m, 1H), 4.17 (q, 2H, J = 7.2) , 4.42-4.48 (m, 3H), 5.69 (d, 1H, J = 15.3), 6.65 (s, br, 1H), 6.66 (dd, 1H, J = .9, 5.4), 6.76-6.79 (m, 2H), 7.00-7.31 (m, 22H), 8.24 (s, 1H) ; Anal. ( C47H5jN507 • 0.75H20 ) C, H, N.

Preparación de etil-3- ( (isoxazol-5 ' -carbonil) -L-Leu-L-Phe-L-Gln) -E-propenoato Se preparó el compuesto de título a partir de etil-3- ( (?soxazol-5'-carbon?l) -L-Leu-L-Phe-L- (Tr-Gln) )-E-propenoato usando un procedimiento análogo al descrito anteriormente (Ejemplo 2) para la preparación de etil-3- ( (5 ' -met?l?soxazol-3 ' -carbonil) -L-Leu-L-Phe-L-Gln) -E-propenoato: pf = 217-220°C; IR (crn"1) 3202, 1655, 1541; 1H RMN (DMS0-d6) d 0.81 (d, 3H, J = 6.0), 0.86 (d, 3H, J = 6.0), 1.21 (t, 3H, J = 7.2), 1.42-1.75 (m, 5H), 2.04 (t, 2H, J = 7.2), 2.78-2.87 (m, 1H), 2.94-3.01 (m, 1H), 4.11 (q, 2H, J = 7.2), 4.37 (m, 1H), 4.41-4.52 (d, 2H), 5.64 (d, 1H, J = 15.6), 6.68 (dd, 1H, J = 15.9, 5.4), 6.76 (s, br, 1H), 7.12-7.19 (m, 7H), 8.02 (d, 1H, J = 8.1) , 8.20 (d, 1H, J = 8.1), 8.74 (d, 1H, J = 1.8) , 8.94 (d, 1H, J = 7.8) ; Anal. (C28H37N507) C, H, N.

VK---W*-- Ejemplo 4 - Preparación del Compuesto A-4 : etil-3- ( (5 ' -metilisoxazol-3 ' -carbonil) -L-a- (t-butil-Glv) -L- (4-Me-Phe) -L-Gln) -E-propenoato Preparación del Intermediario etil-3- (Boc-L- ( 4 -Me -Phe) -L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato Se disolvió e 111 - 3 - ( H 2 - L - ( T r - G 1 n ) ) - E -pr openoa t o • HCl (preparado como se describió en el Ejemplo 2 anterior, 1.37 g, 3.10 mmol) en DMF (10 mL) a 23°C. Se adiciono dnsopropiletilamina (1.08 mL, 6.20 mmol), seguido por Boc-L- ( 4 -Me-Phe ) -OH (0.87 g, 3.10 mmol) . La reacción se enfrió a 0°C. Se adicionó HATU (1.18 g, 3.10 mmol), y la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente. La DMF se removió m va cuo . El residuo se disolvió en EtOAc (30 mL) , y la fase orgánica se lavo secuencialmente con solución de HCl al 10% (25 mL), solución de NaHC03 saturado (25 mL), H20 (25 mL) y salmuera (25 mL) . El disolvente se secó (MgSO,) y se filtró, y el residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (gradiente de elución, CH30H al 0-75% en CHC13) para dar etil-3- (Boc-L- ( -Me-Phe ) -L-(Tr-Gln) ) -E-propenoato (1.48 g, rendimiento de 68%) como un sólido amorfo blanco: IR (crn-1) 1713, 1655, 1491, 1175; XH RMN (DMSO-d6) d 1.20 (t, 3H, J = 7.0), 1.30 (s, 9H), 1.62-1.66 (m, 2H), 2.23 (s, 3H), 2.32 (m, 2H) , 2.72 (m, 1H), 2.84 (m, 1H), 4.07-4.09 (m, 1H), 4.10 (q, 2H, J = 7.0), 4.38 (m, 1H), 5.64 (d, 1H, J = 15.5), 6.72 (dd, 1H, J = 15.5, 5.4), 6.88 (d, 1H, J = 8.0), 7.04 (d, 2H, J = 7.7), 7.10 (d, 2H, J = 7.7), 7.14-7.28 (m, 15H), 8.02 (d, 1H, J = 8.0), 8.53 (s, 1H); Anal. (C43H49N306) C, H, N.

Preparación del intermediario etil-3- (Boc-L-o- (t-butil-Gly) -L- (4-Me-Phe) -L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato Se disolvió etil-3- (Boc-L- ( 4-Me-Phe ) -L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato (1.45 g, 2.06 mmol) en 1,4-dioxano (27 mL), y se adicionó una solución de HCl en 1,4-dioxano (4.0 M, 14 mL) . La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. El disolvente se removió por evaporación y el residuo se colocó en EtOAc (50 mL) . La fase orgánica se lavó con NaHC03 saturado (50 mL) y después salmuera (50 mL ) , se secó (MgS04) y el disolvente se removió a presión reducida para dar 1.23 g de un sólido casi amorfo. Este material se acopló con Boc-L-a- ( t-but il-Gly ) -OH usando el procedimiento descrito para la síntesis de etil- 3- ( Boc-L- ( 4 -Me- Phe ) -L- (4-Me-Phe) -L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato anterior para proporcionar etil-3- (Boc-L-a- (t-butil-Gly) -L- ( 4 -Me-Phe ) -L- ( Tr-Gln) ) -E-propenoato ( rendimiento de 49% ) como un sólido amorfo blanco: IR 1655, 1507, 1248, 1171; :H RMN (DMS0-d6) d 0.81 (s, 9H), 1.21 (t, 3H, J = 7.0), 1.37 (s, 9H) , 1.52-1.70 (m, 2H), 2.22 (s, 3H), 2.26-2.28 (m, 2H), 2.73-2.91 (m, 2H), 3.86 (d, 1H, J = 9.6), 4.05-4.14 (m, 2H), 4.31-4.63 (m, 1H), 4.47-4.55 (m, 1H), 5.54 (d, 1H, J = 15.4), 6.37 (d, 1H, J = 9.6), 6.65 (dd, 1H, J = 15.8, 5.5), 7.01 (d, 2H, J = 8.1), 7.07 (d, 2H, J = 7.7) , 7.11-7.32 (m, 15H), 8.03 (d, 1H, J = 8.1), 8.10 (d, 1H, J = 7.7), 8.49 (s, 1H); Anal. (C49H60N4O7- 0.4H20) C, H, N.

Preparación del intermediario etil-3- ((5'-metilisoxazol-3 ' -carbonil) -L-«- ( t-butil-Gly) -L- (4-Me-Phe) -L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato Se desprotegió etil-3- (Boc-L-a- (t-butil-Gly) -L- ( 4 -Me - Ph e ) - L - ( T r - G 1 n ) ) - E - p r ope n oa t o usando el procedimiento descrito para la desprotección de etil-3-( Boc-L- (4-Me-Phe) -L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato anterior, y la amina resultante (0.22 g, 0.30 mmol) se disolvió en CH2C12 (3 mL) . Se adicionó piridina (0.025 mL, 0.32 mmol) , y la reacción se enfrió a 0 ° C . Se adicionó cloruro de 5-metil isoxazol- 3-carboni lo (0.046 g, 0.32 mmol) . La reacción se dejó calentar a temperatura ambiente, y se agitó durante una hora. El disolvente se removió ín va c uo , y el residuo se sometió a cromatografía de columna instantánea (gradiente de elución, CH30H al 0-1% en CH2C12) para proporcionar etil-3- ( (5 ' -metilisoxazol-3 ' -carbonil) -L-cc- (t-butil-Gly) -L-( 4-Me-Phe ) -L- (Tr-Gln )) -E-propenoato (0.19 g, rendimiento 77%) como un sólido blanco amorfo; IR (cm"1) 1651, 1518; JH RMN <DMSO-d d 0.88 (s, 9H), 1.20 (t, 3H, J = 7.0), 1.55-1.67 (m, 2H), 2.14 (s, 3H), 2.18-2.28 (m, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.70-2.77 (m, 1H), 2.86-2.93 (m, 1H), 4.07-4.14 (m, 2H), 4.46 (d, 1H, J = 9.6), 4.50-4.55 (m, 1H), 5.54 (d, 1H, J = 15.8), 6.59 (s, 1H), 6.65 (dd, 1H, J = 15.8, 5.5, 15.8), 6.95 (d, 2H, J = 8.1), 7.05 (d, 2H, J = 8.1), 7.13-7.28 (m, 15H), 7.60 (d, 1H, J = 9.6), 8.13 (d, 1H, J = 8.1), 8.41 (d, 1H, J = 8.1), 8.51 (s, 1H); Anal. (C49H55N507) C, H, N.

Preparación del producto de etil-3- ( (5 ' -metilisoxazol-3 ' -carbonil) -L-o- (t-butil-Gly) -L- (4-Me-Phe) -L-Gln) -E-propenoato Se disolvió e t il - 3 - ( ( 5 ' -me 111 i soxa z o 1 - 3 ' -ca rbon il) -L-a- (t-butil-Gly) -L-(4-Me- Phe) -L-(Tr-Gln))-E-propenoato (0.17 g, 0.20 mmol) en CH2C12 (4 mL) a 23°C. Se adicionó ácido trifluoroacético (0.4 mL ) , y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante seis horas. Los disolventes se removieron in vacuo, y el residuo se sometió a cromatografía de columna instantánea (gradiente de elución, CH30H al 0-2% en CH2C12) para proporcionar etil-3-{ (5'-metilisoxazol-3'-carbonil) -L-a- (t-butil-Gly) -L- (4-Me-Phe) -L-Gln) -E-propenoato (0.085 g, rendimiento de 73%) como un sólido blanco amorfo: IR (crn"1) 1661, 1541, 1206; XH RMN (DMSO-d6) d ?.88 (s, 9H), 1.21 (t, 3H, J = 7.0), 1.60-1.73 (m, 2H), 2.01-2.06 (m, 2H), 2.14 (s, 3H), 2.50 (s, 3H), 2.70-2.77 (m, 1H), 2.86-2.93 (m, 1H), 4.07-4.14 (m, 2H), 4.34-4.37 (m, 1H), 4.45 (d, 1H, J = 9.6), 4.50-4.55 (m, 1H), 5.57 (d, 1H, J = 15.8), 6.60 (s, 1H), 6.66 (dd, 1H, J = 15.8, 5.1), 6.75 (s, br, 1H), 6.96 (d, 2H, J = 8.1), 7.06 (d, 2H, J = 7.7) , 7.17 (s, br, 1H), 7.65 (d, 1H, J = 9.6), 8.14 (d, 1H, J = 8.1), 8.40 (d, 1H, J = 7 . 7 ) ; An a l . ( C 30H 4 1N 5O , - 0 . 5 T FA • 0 . 5 H 20 ) C , H , N .

Ejemplo 5 - Preparación del compuesto A-4 : Etil-3- ( ( 5 ' -metilisoxazol-3 ' -carbonil) -L-a- ( t-butil-Glv) -L- (4-F-Phe-) -L-Gln) -E-propenoato Preparación del intermediario etil-3- (Boc-L- (4-F-Phe) -L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato Se disolvió Boc-L- ( 4 -F- Phe ) -OH (1.41 g, 5.0 mmol) en THF (50 mL) . Se adicionó etil-3- ( H2N-L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato • HCl (preparado como se describió en el Ejemplo 2 anterior, 1.0 g, 5.0 mmol), seguido por Et3N (0.70 mL, 5.0 mmol) . Se adicionó carbonildiimidazol (0.81 g, 5.0 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas. El disolvente se removió in va c u o , y el residuo se sometió a cromatografía de columna instantánea (gradiente de elución, CH3OH al 0-1% en CH2C12) para proporcionar etil-3- (Boc-L- ( 4-F-Phe ) -L-(Tr-Gln) ) -E-propenoato (1.13 g, rendimiento de 32%) como un sólido blanco amorfo: IR (crn-1) 1712, 1666, 1510, 1169; 1H RMN (DMS0-d6) d 1.20 (t, 3H, J = 7.0), 1.29 (s, 9H) , 1.61-1.70 (m, 2H), 2.27-2.34 (m, 2H), 2.74-2.78 (m, 1H), 2.86-2.90 (m, 1H), 4.06-4.13 (m, 3H) , 4.36-4.40 (m, 1H), 5.58 (d, 1H, J = 15.6), 6.71 (dd, 1H, J = 15.6, 5.5), 6.98 (d, 1H, J = 8.1), 7.03-7.09 (m, 2H), 7.14-7.28 (m, 17H), 8.06 (d, 1H, J = 8.1), 8.53 (s, 1H) LRMS (M+Na) 730.

Preparación del intermediario etil-3- (Boc-L-a- (t-butil-Gly) -L- (4-F-Phe) -L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato Se desprotegió et?l-3- (Boc-L- ( -F-Phe ) -L- (Tr-Gln )) -E-propenoato y se acopló con Boc-L-a- ( t-but il-Gly)-OH usando los procedimientos descritos anteriormente para preparar et?l-3- ( Boc-L-a- ( t-butil-Gly ) -L- (4-Me-Phe) -L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato, para proporcionar et?l-3- (Boc-L-a- (t-butil-Gly) -L- ( 4-F-Phe ) -L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato ( rendimiento de 54% ) como un sólido amorfo blanco: IR (cm_1) 1720, 1651, 1506, 1168; XH RMN (DMSO-d6) d 0.80 (s, 9H), 1.20 (t, 3H, J = 7.0), 1.36 (s, 9H), 1.53-1.67 (m, 2H), 2.23-2.28 (m, 2H), 2.79-2.94 (m, 2H), 3.85 (d, 1H, J = 9.9), 4.09 (q, 2H, J = 7.0), 4.31-4.35 (m, 1H), 4.53-4.55 (m, 1H), 5.46 (d, 1H, J = 15.8), 6.36 (d, 1H, J = 9.2), 6.64 (dd, 1H, J = 15.8, 5.5) , 6.97-7.03 (m, 2H) , 7.13-7.28 (m, 17H) , 8.08 (d, 1H, J = 8.1) , 8.14 (d, 1H, J = 8.1) , 8.49 (s, 1H) ; Anal. (C48H57N407F) C, H, N.

Preparación del intermediario etil-3- ( (5 ' -metilisoxazol-3 ' -carbonil) -L-a- (t-butil-Gly) -L- (4-F-Phe) -L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato Se desprotegió etil-3- (Boc-L-a- (t-butil-Gly) -L- (4-F-Phe) -L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato y se acopló con cloruro de 5 -me t i 1 i s o x a z o 1 - 3 - c a r bon i 1 o usando los procedimientos descritos anteriormente para preparar etil-3- ( (5 ' -metil isoxa zol- 3 ' -carbonil) -L-a- (t-butil-Gly) -L- (4 -Me- Phe) -L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato, para proporcionar et il- 3- ( 5 ' -met ilisoxazol-3 ' -carbonil ) -L-a- (t-butil-Gly) -L- (4-F-Phe) -L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato (rendimiento de 74%) como un sólido amorfo blanco: IR (crn"1) 1659, 1535, 1510; 'H RMN (DMS0-d6) d 0.88 (s, 9H), 1.20 (t, 3H, J = 7.4), 1.52-1.67 (m, 2H), 2.23-2.28 (m, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.75-2.82 (m, 1H), 2.89-2.96 (m, 1H), 4.09 (q, 2H, J = 7.0), 4.32-4.36 (m, 1H), 4.45 (d, 1H, J = 9.6), 4.50-4.55 (m, 1H), 5.44 (d, 1H, J = 15.6) , 6.58 (s, 1H), 6.63 (dd, 1H, J = 15.6, 5.5, 15.6), 6.93-6.99 (m, 2H), 7.13-7.28 (m, 17H), 7.64 (d, 1H, J = 9.6), 8.16 (d, 1H, J = 8.5), 8.46 (d, 1H, J = 8.1), 8.51 (s, 1H) Anal. (C48H52N507F) C, H, N.

Preparación de etil-3- ( (5 ' -metilisoxazol-3 ' -carbonil) • L-a- (t-butil-Gly) -L- (4-F-Phe) -L-Gln) -E-propenoato Se desprotegió et i 1- 3- [ ( 5 ' -met il isoxa zol - 3 ' -carbonil) -L-a- (t-butil-Gly) -L- (4-F-Phe) -L-(Tr-Gln) ]-E-propenoato usando un procedimiento análogo al descrito anteriormente para la preparación de et?l-3- ( (51-met?l?soxazol-3' -carbonil) -L-a- (t-butil-Gly) -L- ( 4-Me-P e ) -L-Gln) -E-propenoato para proporcionar etil-3- ( (5 ' -met?lisoxazol-31 -carbonil) -L-a- (t-butil-Gly) -L- ( 4-F-Phe ) -L-Gln ) -E-propenoato (rendimiento de 80%) como un sólido amorfo blanco: IR (crn"1) 1653, 1543, 1223; :H RMN (DMS0-d6) d 0.88 (s, 9H), 1.21 (t, 3H, J = 7.0), 1.59-1.75 (m, 2H), 2.01-2.06 (m, 2H), 2.46 (s, 3H), 2.75-2.82 (m, 1H), 2.89-2.96 (m, 1H), 4.09 (q, 2H, J = 7.0) , 4.33-4.36 (m, lH), 4.44 (d, 1H, J = 9.6), 4.50-4.58 (m, 1H) , 5.47 (d, 1H, J = 15.8), 6.59 (s, 1H), 6.64 (dd, 1H, J = 15.8, 5.5) , 6.75 (s, br, 1H) , 6.94-7.00 (m, 2H) , 7.16 (s, br, 1H) , 7.18-7.23 (m, 2H) , 7.69 (d, 1H, J = 9.6) , 8.16 (d, 1H, J = 8.1) , 8.44 (d, 1H, J = 8.1) ; Anal. (C29H38Ns07F) C, H, N.

Ejemplo 6 - Preparación del compuesto a-5: etil-3-f (51-metilisoxazol-3 ' -carbonil) -L-Val-L- (4-F-Phe) -L- ( (S) -Pirrol-Ala) i -E-propenoato Preparación del intermediario ter-butil éster del ácido (4S) -4- (2 ' -carboxietil) -2 , 2-dimetiloxazolidin-3-carboxí lico Se adicionó hidróxido de sodio (27 mL de una solución 4. OM en H20, 108 mmol, 3.0 equiv. ) a una solución de ter-butil éster del ácido (4S) -4-(2-metoxicarboniletil ) -2 , 2-dimetil-oxazolid?n-3-carboxílico (preparado como se describe en Chida et al. , J. Chem. Soc. , Chem. Commun. 1992, 1064) (10.5 g, 36.5 mmol, 1 equiv. ) en CH30H (150 mL) y la mezcla de reacción brumosa resultante se agitó a 23°C durante 3.5 h. La mezcla se concentró a presión reducida hasta volumen de -30 mL, y después se dividió entre HCl 0.5M (150 mL) y EtOAc (2 x 150 mL) . Las capas orgánicas combinadas se secaron con MgS04 y se filtraron por gravedad. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se secó a vacío, para proporcionar ter-butil éster del ácido ( 4 S ) -4 - ( 2 ' -carboxiet i 1 ) -2 , 2 -dimet iloxazolidin-3-carboxí lico (10.0 g, rendimiento del crudo de 100%) . Este material se usó sin purificación adicional: 1H RMN (CDC13, mezcla de rotámeros) d 1.49 (s), 1.57 (s), 1.60 (s), 1.84-2.05 (m) , 2.39-2.41 (m), 3.71-3.74 (m), 3.91-4.05 (m) .

Preparación del intermediario ter-butil éster del ácido (4S,4"S)-4-{3'- (4"-bencil-2"-oxo-oxazolidin-3"-il) -3' -oxopropil ) -2 , 2 -dimetiloxazolidin- 3 -carboxilico Se adicionaron secuencialmente trietilamina (8.87 mL, 63.6 mmol, 3.0 equiv.) y cloruro de pivaloilo (2.61 mL, 21.2 mmol, 1.0 equiv.) a una solución de ter-butil éster del ácido ( 4 S ) - 4 - { 2 ' carboxi e t i 1 ) - 2 , 2 -dimet iloxazolidin-3-carboxí lico (5.80 g, 21.2 mmol, 1 equiv.) en THF (450 mL) a 0°C. La reacción brumosa se agitó a 0°C durante 3.5 h, después se adicionaron secuencialment e cloruro de litio (0.988 g, 23.3 mmol, 1.1 equiv.) y ( S ) - ( - ) -4 -bencil-2 -oxa zol idinona (3.57 g, 20.1 mmol, 0.95 equiv.) . Después se calentar a 23°C y agitar durante 19 h, la mezcla de reacción se dividió entre HCl 0.5M (150 mL) y EtOAc (2 x 150 mL) . Las capas orgánicas combinadas se lavaron con Na2C03 saturado a la mitad (150 mL), se secaron con MgS04 y se filtraron por gravedad. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (EtOAc al 30% en hexanos) para dar ter-butil éster del ácido (4S,4"S)-4-(3'-(4"-bencil-2"-oxo-oxazol?din-3"-?l)-3'-oxopropil}-2,2-dimet?loxazolidin-3-carboxí lico (7.17 g, 83%) como un aceite incoloro: IR (cr1) 2978, 1783, 1694; 'H RMN (CDC13, mezcla de rotámeros) d 1.49(s), 1.59 (s), 1.63 (s), 2.01-2.10 (m) , 2.76 (dd, J = 13.5, 9.8), 2.82-3.13 (m), 3.30-3.41 (m) , 3.76-3.82 (m), 3.90 (s, br), 3.97 (dd, J = 9.0, 5.6), 4.10-4.19 (m), 4.63-4.71 (m), 7.22-7.36 (m); Anal. (C23H32N206) C, H, N.

Preparación del intermediario ter-butil éster del ácido (2lS,4S,4"S)-4-(2'-(4l,-benoil-2"-oxo-oxa2olidin-3"-carbonil) -pent-4 ' -enil)-2 ,2-dimetiloxazolidin-3-carboxilico Una solución de ter-butil éster del ácido (4S,4"S)- 4-{3'-(4"-bencil-2"-oxo-oxazolidin-3"-il) -3'-oxopropi 1} -2, 2-dimet i loxazolidin-3-carboxí lico (7.17 g, 16.6 mmol, 1 equiv.) en THF (50 mL) se adicionó a una solución de bis ( trimet i 1 si lil ) amida de sodio (16.6 mL de una solución l.OM en THF, 16.6 mmol, 1.0 equiv.) en el mismo disolvente (150 mL) a -78°C. La mezcla de reacción se agitó durante 20 min. a -78°C, y después se adicionó yoduro de alilo (4.55 mL, 49.8 mmol, 3.0 equiv. ) . Después de agitar un adicional de 3 h a -78°C, la mezcla de reacción se mantuvo a -45°C durante 2 h, y después se dividió entre una mezcla 2:1 de NH4C1 saturado a la mitad y Na2S203 al 5% (300 mL) y una mezcla 1:1 de EtOAc y hexanos (2 x 200 mL ) . Las capas orgánicas combinadas se lavaron con H20 (200 mL), se secaron con MgS04 y se filtraron por gravedad. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (EtOAc al 15% en hexanos) para proporcionar ter-butil éster del ácido (2'?,4S,4"S)-4-(2'-(4"-bencil-2"-oxo-oxazolidin-3"-carbonil) -pent-4 ' -enilJ-2, 2-dimetiloxazolidin-3-carboxílico (4.29 g, 55%) como un aceite incoloro: IR (cm"1) 2978, 1780, 1695; 'H RMN (CDC13, mezcla de rotámeros) d 1.45 (s), 1.49 (s), 1.68-1.80 (m), 2.13-2.47 (m) , 2.49-2.67 (m), 3.32 (dd, J = 13.4, 3.1), 3.69-3.97 (m) , 4.11-4.21 (m) , 4.66-4.74 (m) , 5.06-5.13 (m) , .74-5.88 (m) , 7.20-7.36 (m) ; Anal. (C26H36N206) C, H, N.

Preparación del intermediario ter-butil éster del ácido (ÍS, 3S) -{3- (1 ' - (2" ,4"-dimetoxibencil) -2 ' -oxo-pirrolidin-3' -il) -1-hidroximetilpropil } -carbámico Se burbujeó ozono a través de una solución de ter-butil éster del ácido (2'S,4S,4"S)-4-{2'-(4"-bencil-2"-oxo-oxazolidin-3" -carbonil) -pent-4 ' -enil ) -2, 2 -dimetiloxazolidin-3-carboxí lico (4.29 g, 9.08 mmol, 1 equiv.) en CH2C12 (200 mL) y CH30H (0.735 mL, 18.1 mmol, 2.0 equiv.) a -78°C hasta que persistió un color azul. La mezcla de reacción después se purgó con argón hasta que llegó a ser incolora. Se adicionó sulfuro de metilo (6.67 mL, 90.8 mmol, 10 equiv.), la mezcla se agitó a -78°C durante 3.5 h, y se mantuvo a 0°C durante un adicional de 1 h. Después de dividir la mezcla de reacción entre H20 (200 L) y una mezcla 1:1 de EtOAc y hexanos (2 x 200 mL), las capas orgánicas combinadas se secaron con MgS04 y se filtraron por gravedad. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se utilizó inmediatamente sin purificación adicional.

El residuo anterior se disolvió en una mezcla 1:1 de THF y EtOH (240 mL) a 23°C, y clorhidrato de 2,4- <*&>•-! dimet oxibenci lamina (7.40 g, 36.3 mmol, 4.0 equiv.), acetato de sodio (2.98 g, 36.2 mmol, 4.0 equiv.), y se adicionaron secuencialmente cianobor ohidrat o de sodio (1.14 g, 18.1 mmol, 2.0 equiv.) . La suspensión resultante se agitó durante 18 h a 23°C, y después se dividió entre HCl 0.5 M (400 mL) y EtOAc (2 x 200 mL) . Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHC03 saturado a la mitad (300 mL), se secaron con Na2S04 y se concentraron a presión reducida. El residuo se pasó a través de una columna de gel de sílice corta (eluyendo con EtOAc al 50% en hexanos) para dar ter-butil éster del ácido ( 3 ' S , 4 S ) - 4 - { 1 ' - ( 2 " , 4 " -dimet oxibencí 1 ) -2 ' -oxo-p?rrolidin-3'-ilmet?l}-2,2-dimetil-oxazol?din-3-carboxílico contaminado con ( S ) - ( - ) -4 -bencil-2 -oxazolidina .

Este material se disolvió en CH30H (100 mL) y se adicionó TsOH-H20 (0.345 g, 1.81 mmol, 0.20 equiv.) . La mezcla de reacción se calentó a 50°C, y se mantuvo a tal temperatura durante 2.5 h. Después de enfriar a 23°C, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida hasta el volumen de -20 mL y se dividió entre NaHC03 saturado a la mitad (150 mL) y una mezcla 9:1 de CH2C12 y CH3OH (2 x 150 mL) . Las capas orgánicas combinadas se secaron con Na2S04 y se concentraron a presión reducida.

La purificación del residuo por cromatografía instantánea (CH3OH al 3% en CH2C12) proporcionó ter-butil éster del ácido ( 1 S , 3 ' S ) - ( 2 - ( 1 ' - ( 2 " , 4 " -dimetoxibencil ) -2 ' -oxo-pirrolid?n-3 ' -il ) - 1 -hidroximetilpropil } -carbámico (1.62 g, 44%) como una espuma: IR (crn"1) 3328, 1669; XH RMN (CDC13) d 1.44 (s, 9H) , 1.50-1.75 (m, 2H) , 1.90-2.00 (m, 1H) , 2.17-2.27 (m, 1H) , 2.52-2.62 (m, 1H) , 3.14-3.24 (m, 2H) , 3.51-3.65 (m, 3H) , 3.70-3.78 (m, 1H) , 3.80 (s, 6H) , 4.35 (d, 1H, J = 14.3) , 4.48 (d, 1H, J = 14.3) , 5.51-5.54 (m, 1H) , 6.42-6.46 (m, 2H) ; Anal. (C21H32N206) C, H, N.

Preparación del intermediario etil-3- {Boc-L- ( (N-2 , 4-dimetoxibencil) - (S) -Pirrol-Ala) ) -E-propenoato Se adicionó gota a gota DMSO (0.270 mL, 3.80 mmol, 3 equiv.) a una solución a -78°C de cloruro de oxalilo (0.166 mL, 1.90 mmol, 1.5 equiv.) en CH2C12 (14 mL) . La mezcla de reacción se agitó 20 min, después se adicionó una solución de ter-butil éster del ácido (lS,3'S)-(2- (1 ' - (2", 4 "-dimetoxibencil) -2 ' -oxo-pirrolidin-3' -il) -1-hidroximet ilpropi 1 } -carbámico (0.518 g, 1.27 mmol, 1 equiv.) en CH2C12 (13 mL) por vía de cánula a lo largo del lado del recipiente de reacción. Después de agitar 20 min, se adicionó gota a gota trietilamina (1.06 mL, 7.60 mmol, 6 equiv.), y la mezcla de reacción se agitó durante 1.5 h. Se adicionó ácido acético (0.479 mL, 8.37 mmol, 6.6 equiv.) y la mezcla de reacción se calentó a 0°C durante 5 min, después se diluyó con MTBE (200 mL) y se lavó con agua, NaHC03 saturado, y salmuera (25 mL cada una) . La fase orgánica se secó con Na2S04 y se concentró para proporcionar el aldehido crudo como una espuma (0.516 g, ' cuant.), que se usó sin purificación adicional.

Se adicionó bis ( trimet ils il i 1 ) amida de sodio (1.23 mL de una solución l.OM en THF, 1.23 mmol, 1 equiv.) a una solución de f os fonoacetato de trietilo (0.244 mL , 1.23 mmol, 1 equiv.) en THF (15 mL) a -78°C, y la solución resultante se agitó durante 20 min a tal temperatura. El aldehido crudo (preparado anteriormente, 0.500 g, 1.23 mmol, 1 equiv.) en THF (13 mL) se adicionó por vía de cánula a lo largo del lado del recipiente de reacción, y la mezcla de reacción se agitó durante 45 min, a -78°C, se calentó a 0°C durante 7 min, y se dividió entre HCl 0.5M (20 mL) y MTBE (2 x 50 mL) . Las capas orgánicas combinadas se secaron con MgS04 y se concentraron. La purificación del residuo por cromatografía de columna instantánea (EtOAc al 60% en hexanos) proporcionó etil-3- 1 Boc-L- ( (N-2 , 4- a¡g" dimetoxibencil) - (S) -Pirrol-Ala) ) -E-propenoato (0.356 g, 61%) como una espuma blanca: Rf = 0.43 (EtOAc al 60% en hexanos) ; IR (crn"1) 3307, 1708, 1678; :H RMN (CDC13) d 1.28 (t, 3H, J = 7.2) , 1.43 (s, 9H) , 1.52-1.70 (m, 2H) , 1.98-2.09 (m, 1H) , 2.21-2.34 (m, 1H) , 2.48-2.59 (m, 1H) , 3.16-3.24 (m, 2H) , 3.80 (s, 6H) , 4.18 (q, 2H, J = 7.2) , 4.27-4.40 (m, 1H) , 4.41 (s, 2H) , 5.40 (d, lH, J = 8.1) , 5.95 (dd, 1H, J = 15.6, 1.6) , 6.41-6.48 (m, 2H) , 6.86 (dd, 1H, J = 15.6, 5.3) , 7.08-7.13 (m, 1H) ; Anal. (C25H36N207- 0.25H20) C, H, N.

Preparación del intermediario etil-3- {Boc-L- (4-F-Phe) -L- ( (N-2 , 4-dimetoxibencil) - (S) -Pirrol-Ala) ) -E-propenoato Este material se preparó a partir de et 11 - 3 - ( Boc-L-( (N-2,4-d?metox?benc?l)-(S)-P?rrol-Ala) } -E-propenoato y Boc-L- ( 4 -F-Phe ) -OH usando un procedimiento similar al descrito para la preparación de etil-3- (Boc-L- ( 4- e-Phe ) -L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato (Ejemplo 4) anterior: Rf = 0.34 (EtOAc al 60% en hexanos); IR (cr1) 3258, 1705, 1666; XH RMN (CDC13) d 1.28 (t, 3H, J = 7.2), 1.45 (s, 9H) , 1.51-1.66 (m, 2H), 1.78-1.90 (m, 1H), 2.06-2.23 (m, 2H), 2.99 (dd, 1H, J = 13.7, 6.2), 3.11 (dd, 1H, J = 13.7, 5.3), 3.17-3.23 (m, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.81 (s, S*fc* *4&.. 3H) , 4.18 (q, 2H, J = 7.2), 4.35 (s, 2H) , 4.38-4.51 (m, 2H) , 5.29-5.37 (m, 1H) , 5.76 (d, 1H, J = 15.8) , 6.43-6.47 (m, 2H) , 6.72 (dd, 1H, J = 15.8, 5.3) , 6.83-6.91 (m, 2H) , 7.09-7.17 (m, 3H) , 7.92 (br, 1H) ; Anal. (C34H 4N308) C, H, N.

Preparación del intermediario etil-3- {Boc-L-Val-L- (4-F-Phe)-L-[(N-2, 4 -dimetoxibencil ) - (S) -Pirrol-Ala] }-E-propenoato Este compuesto se preparó a partir de etil-3-(Boc-L- ( 4 -F-Phe) -L- ( (N-2, 4-dimetoxibencil) - (S) -Pirrol-Ala) } -E-propenoato y Boc-L-Val-OH usando un procedimiento similar al descrito anteriormente para la preparación de et i 1 - 3- ( Boc-L- Phe-L- ( Tr-Gln ) ) -E-propenoato (Ejemplo 2); Rf = 0.24 (EtOAc al 60% en hexanos); IR (crn"1) 3284, 1713, 1678 br, 1643; JH RMN (CDC13) d 0.91 (d, 3H, J = 6.8), 0.97 (d, 3H, J = 6.8), 1.28 (t, 3H, J = 7.2), 1.45 (s, 9H), 1.50-1.62 (m, 2H), 1.66-1.82 (m, 1H), 1.90-2.02 (m, 1H), 2.08-2.21 (m, 2H) , 2.94 (dd, 1H, J = 13.5, 5.8), 3.17-3.27 (m, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 3.97-4.05 (m, 1H), 4.17 (q, 2H, J = 7.2) , 4.27 (d, 1H, J = 14.3) , 4.29-4.38 (m, 1H), 4.40 (d, 1H, J = 14.3), 4.86-4.93 (m, 1H), 5.10 (d, 1H, J = 8.7), 5.76 (dd, 1H, J = 15.6, 1.2), 6.45-6.52 (m, 2H) , 6.70 (dd, 1H, J 15.6, 5.4), 6.79-6.88 (m, 3H) , 7.12-7.22 (m, 3H) , : .30 (d, 1H, J = 5.9); Anal . (C39H53FN409) C, H, N.

Preparación del intermediario etil-3-{(5'-metilisoxazol-3 ' -carbonil) -L-Val-L- (4-F-Phe) -L- ( (N-2 , 4-dimetoxibencil) - (S) -Pirrol-Ala) } -E-propenoato Este compuesto se preparó a partir de et?l-3-{Boc-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-( (N-2, 4-dimetoxibencil) - (S) -Pirrol-Ala )) -E-propenoato y cloruro de isoxazol-5-carbonilo usando el procedimiento descrito anteriormente (Ejemplo 2) para la preparación de etil-3- ( ( 5 ' -metil isoxa zol -3 ' -carbonil) -L-Leu-L-Phe-L- (Tr-Gln))-E-propenoato: R£ = 0.36 (CH3OH al 5% en CH2C12); IR (cr1) 3284, 1717, 1650; JH RMN (CDC13) d 0.97 (d, 3H, J = 6.8), 1.01 (d, 3H, J = 6.8), 1.28 (t, 3H, J = 7.2), 1.51-1.64 (m, 2H), 1.72-1.84 (m, 1H), 1.95-2.05 (m, 1H), 2.11-2.33 (m, 2H), 2.4 (s, 3H), 2.98 (dd, 1H, J = 13.7, 5.6), 3.16-3.24 (m, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 4.17 (q, 2H, J = 7.2), 4.23 (d, 1H, J = 14.3), 4.31-4.42 (m, 1H), 4.40 (d, 1H, J = 14.3), 4.44-4.50 (m, 1H) , 4.88-4.96 (m, 1H), 5.79 (dd, 1H, J = 15.6, 1.4), 6.43-6.49 (m, 3H), 6.71 (dd, 1H, J = 15.6, 5.3), 6.80-6.88 (m, 2H), 6.94 (d, 1H, J = 9.3), 7.11-7.17 (m, 3H), 7.29 (d, 1H, J = 8.7), 8.33 (d, 1H, J = 6.2); Anal. (C39H48FN509- O .5H20) C, H, N.

Preparación del produc o etil-3-{ (5' -metilisoxazol-3 ' -carbonil) -L-Val-L- (4 -F-Phe) -1- ( (S) -Pirrol-Ala) }-E-propenoato Una suspensión de et i 1-3- ( ( 5 ' -met i li soxa zol-3 ' -carbonil) -L-Val-L- (4 -F-Phe) -L- ( (N-2, -dimet oxibencil ) -(S) -Pirrol-Ala) } -E-propenoato (0.263 g, 0.351 mmol, 1 equiv.), agua (2 gotas) y DDQ (0.104 g, 0.458 mmol, 1.3 equiv.) se sometió a reflujo durante 9 h y después se dejó enfriar a temperatura ambiente durante 8 h. La mezcla de reacción se diluyó con CH2C12 (200 raL) y se lavó con una mezcla 2:1 de NaHC03 saturado y NaOH ÍN (20 mL) . La fase orgánica se secó con MgS04 y se evaporó. La purificación del residuo por cromatografía de columna instantánea (gradiente de elución CH3OH al 2-3% en CH2C12 dio etil-3- ( (5 ' -metilisoxazol-3 ' -carbonil) -L-Val-L- ( 4 -F-Phe) -L- ( (S) -Pirrol-Ala) ) -E-propenoato (0.117 g, 56%) como un sólido blanco: pf = 219-220°C; Rf = 0.23 (CH3OH al 5% en CH2C12); IR (cr1) 3401 br, 3295, 1655 br; :H RMN (CDC13) d 0.94 (d, 3H, J = 6.8), 0.97 (d, 3H, J = 6.5), 1.29 (t, 3H, J = 7.2), 1.54-1.65 (m, 1H), 1.72-1.91 (m, 2H), 2.07-2.26 (m, 2H), 2.28-2.39 (m, 1H), 2.49 (d, 3H, J = 0.9) , 3.01 (dd, 1H, J = 13.8, 6.1) , 3.12 (dd, 1H, J = 13.8, 6.4) , 3.26-3.38 (m, 2H) , 4.18 (q, 2H, J = 7.2) , 4.34 (dd, 1H, J = 8.7, 7.2) , 4.43-4.54 (m, 1H) , 4.90 (dt, 1H, J = 9.0, 6.2) , 5.76 (dd, 1H, J = 15.6, 1.6) , 6.00 (s, 1H) , 6.42 (q, 1H, J = 0.9) , 6.72 (dd, 1H, J = 15.6, 5.4) , 6.86-6.94 (m, 2H) , 7.01 (d, 1H, J = 9.0) , 7.11-7.18 (m, 2H) , 7.21 (d, 1H, J = 8.7) , 7.76 (d, 1H, J = 7.2) ; Anal . ( C30H38FN5O7 ) C, H, N .

Ejemplo 7 - Preparación del compuesto A-6 : etil-3- F < 5 ' — metilisoxazol-3 ' -carbonil) -L-Val-L- (4-F-Phe) -L-Glnl -E-propenoato Preparación del intermediario etil-3- {Boc-L- (4-F) -Phe-L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato Este compuesto se preparó a partir de etil-3-(Boc-L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato y Boc-L- (4-F) -Phe-OH usando un ^tf^," "-'- procedimiento similar al descrito anteriormente (Ejemplo 2) para la preparación de et il-3- { Boc-L-Phe-L-(Tr-Gln) } -E-propenoato : IR (crn'1) 3328, 1707, 1506, 1168; ^ RMN (CDC13) d 1.29 (t, 3H, J = 7.2), 1.37 (s, 9H), 1.66-1.78 (m, 1H), 1.88-1.98 (m, 1H), 2.3 (t, 2H, J = 6.6), 2.85-2.92 (m, 1H), 2.97-3.04 (m, 1H), 4.18 (q, 2H, J = 7.2), 4.52 (m, 1H), 4.96 (m, 1H), 5.60 (d, 1H, J = 15.6), 6.56 (d, 1H, J = 8.1), 6.66 (dd, 1H, J = 15.6, 5.1), 6.80 (s, br, 1H), 6.92-6.98 (m, 2H), 7.08-7.12 (m, 2H) , 7.17-7.23 (m, 6H), 7.24-7.33 (m, 10H); Anal. (C42H4GFN306) C, H, N.

Preparación del intermediario etil-3- {Boc-L-Val-L- ( 4-F) -Phe-L- (Tr-Gln) } -E-propenoato Este compuesto se preparó a partir de etil-3-{Boc-L- { 4-F) -Phe-L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato y Boc-L-Val-OH de la manera descrita anteriormente (Ejemplo 2) para la preparación de et i 1- 3- ( Boc-L-Leu-L- Phe-L- ( Tr-Gln ) } -E-propenoato: IR (cr1) 3319, 1657, 1511, 1172; XH RMN (CDC13) d 0.78 (d, 3H, J = 6.9), 0.87 (d, 3H, J = 6.9), 1.29 (t, 3H, J = 7.2) , 1.37 (s, 9H), 1.69-1.79 (m, 1H), 1.93-2.06 (m, 2H), 2.33 (t, 2H, J = 7.2), 2.97-3.04 (m, 1H), 3.73-3.77 (m, 1H), 4.18 (q, 2H, J = 7.2), 4.42-4.54 (m, 2H), 4.80 (d, 1H, J = 6.9), 5.61 (dd, 1H, J = 15.6, 1.5) , 6.44 (d, 1H, J = 7.8) , 6.69 (dd, 1H, J = 15.9, 5.4) , 6.71 (s, br, 1H) , 6.92-6.98 (m, 2H) , 7.07-7.13 (m, 2H) , 7.18-7.31 (m, 16H) , 8.02 (s, 1H) ; Anal. (C47H55FN407) C, H, N.

Preparación del intermediario etil-3-{ (5 ' -metilisoxazol-3' -carbonil) -L-Val-L- (4-F) -Phe-L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato Este compuesto se preparó a partir de etil-3-{Boc-L-Val-L- (4-F) -Phe-L- (Tr-Gln) } -E-propenoato y cloruro de 5-met ili soxa zol- 3-carbonilo de una manera similar a la descrita anteriormente (Ejemplo 2) para la preparación de etil-3- ( (5 ' -metilisoxazol-3 ' -carbonil) -L-Leu-L-Phe-L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato : IR (cr1) 3319, 1657, 1511, 1172; 2H RMN (CDC13) d 0.84 (d, 3H, J = 6.9), 0.89 (d, 3H, J = 6.9), 1.30 (t, 3H, J = 7.2), 1.68-1.80 (m, 1H), 1.95-2.06 (m, 1H), 2.08-2.17 (m, 1H), 2.34 (t, 2H, J = 7.2), 2.44 (s, 3H), 2.87-2.94 (m, 1H), 3.01-3.08 (m, 1H), 4.18 (q, 2H, J = 7.2), 4.48-4.56 (m, 2H), 5.68 (dd, 1H, J = 15.6, 1.8), 6.23 (s, 1H), 6.39 (d, 1H, J = 7.8), 6.70 (dd, 1H, J = 15.9, 5.4), 6.84-6.90 (m, 3H), 7.04-7.08 (m, 4H), 7.17-7.30 (m, 16H); Anal. (C47H50N5O7) C, H, N .

Preparación del producto etil-3-{ (51 -metilisoxazol-3 ' -carbonil) -L-Val-L- (4-F) -Phe-L-Gln) -E-propenoato Se desprotegió et ?l-3- { ( 5 ' -met ilisoxa zol- 3 ' -carbonil ) -L-Val-L- ( 4-F) -Phe-L- (Tr-Gln) } -E-propenoato usando el procedimiento descrito anteriormente (Ejemplo 2) para la preparación de etil-3-{ ( 5 ' -met il isoxa zol- 3 ' -carbonil ) -L-Leu-L-Phe-L-Gln } -E-propenoato : IR (cr1) 3284, 1652, 1542; :H RMN (DMSO-d6) d 0.76 (d, 3H, J = 6.9), 0.79 (d, 3H, J = 6.9), 1.20 (t, 3H, J = 7.2), 1.57-1.76 (m, 2H), 1.96-2.06 (3H), 2.46 (s, 3H), 2.75-2.83 (m, 1H), 2.89-2.96 (m, 1H), 4.09 (q, 2H, J = 7.2), 4.13-4.25 (m, lH), 4.35 (m, 1H), 4.49-4.56 (m, 1H), 5.53 (d, 1H, J = 15.6), 6.57 (s, 1H), 6.66 (dd, 1H, J = 15.6, 5.4), 6.75 (s, br, 1H), 6.97-7.03 (m, 2H), 7.17-7.24 (m, 3H), 8.15 (d, 1H, J = 7.8), 8.24 (d, 1H, J = 8.7), 8.32 (d, 1H, J = 8.1); Anal. (C28H36N507) C, H, N.

Ejem lo 8 - Preparación del compuesto A-7: etil-3-f (5'-metilisoxazol-3 ' - carbón i l)jr~L-a- (t-butil -Glv) -L- (4-F-Phe) -L- ( (S) -Pirrol-Ala) ) -E-propenoato Preparación del intermediario Boc-L- (4-F-Phe) -Obn Se adicionaron secuencialmente DCC (0.765 g, 3.71 mmol, 1.05 equiv.), alcohol bencílico (0.347 mL, 3.35 mmol, 0.95 equiv.) y DMAP (0.022 g, 0.18 mmol, 0.05 equiv.) a una solución de Boc-L- ( 4 -F- Phe ) -OH (1.0 g, 3.53 mmol, 1 equiv.) En CH2C12 (15 mL) . Después de agitar 18 h, el precipitado se removió por filtración, y el filtrado se diluyó con MTBE (75 mL) , se lavó con KHS04 al 10% y salmuera (10 ml cada uno), se secó con Na2S04 y se evaporó. La purificación del residuo por cromatografía de columna instantánea (EtOAc al 12% en hexanos) dio Boc-L- ( 4 - F-Phe ) -OBn (0.992 g, 79%) como un sólido blanco. Los resultados del espectro de JH RMN .-¿¿-a. igualan a la literatura (ver Jackson et al., J. Org . Chem . 1992, vol. 57, 3397).

Preparación del intermediario Boc-L-a- (t-butil-Gly) -L-(4-F-Phe) -OBn Se agitó Boc-L- ( 4 -F- Phe ) -OBn (2.0 g, 5.36 mmol, 1 equiv.) durante 1 h en una mezcla de CH2C12 (20 mL) y TFA (10 mL), después se adicionó más TFA (10 mL) y la solución de reacción se agitó una hora adicional. Los volátiles se evaporaron y el residuo se disolvió en DMF (30 mL) . Se adicionó Boc-L-a- (t-butil-Gly ) -OH (1.24 g, 5.36 mmol, 1 equiv.) y la solución se enfrió a 0°C. Se adicionaron secuencialmente N , N-diisopropi let i lamina (2.80 mL, 16.1 mmol, 3 equiv.) y HATU (2.04 g, 5.37 mmol) . Después de agitar durante 20 min, la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente durante 1 h, después se diluyó con MTBE (500 mL) y se lavó con KHS04 al 5% (100 mL), NaHC03 saturado (50 mL) y salmuera (50 mL ) . La fase orgánica se secó y se evaporó. La purificación del residuo por cromatografía de columna instantánea (EtOAc al 20% en hexanos) dio Boc-L-a- (t-butil-Gly) -L- (4-F-Phe) -OBn (2.04 g, 78%) como una espuma blanca: Rf = 0.49 (EtOAc al 25% en hexanos); IR (cr1] 3307, 1737, 1655 br; :H RMN (CDC13) d 0.94 (s, 9H), 1.45 (s, 9H), 3.04 (dd, 1H, J = 14.2, .8), 3.11 (dd, 2H, J = 14.2, 6.1), 3.79 (d, 1H, J = 9.3), 4.88 (dt, 1H, J =^7.8, 5.8), 5.08 (d, 1H, J = 12.0), 5.16-5.23 (m, 1H), 5.19 (d, 1H, J = 12.0), 6.08 (d, 1H, J = 7.8), 6.83-6.97 (m, 4H), 7.28-7.40 (m, 5 H ) ; Anal. (C27H35FN205) C, H, N.

Preparación del intermediario etil-3- {Boc-L-a- ( t-butil -Gly) -L- (4 -F-Phe) -L- ( (N-2 , 4 -dimetoxibencil) - (S) -Pirrol-Ala) ) -E-propenoato Una solución de HCl en 1,4-dioxano (4.0 M, 8 mL) se adicionó a una solución de et 11 - 3 - ( Boc-L- ( (N-2 , 4 -dimetoxibencil )- (S) -Pirrol-Ala) } -E-propenoato (0.309 g, 0.648 mmol, 1 equiv.) en 1,4-dioxano (8 mL) . Después de agitar durante 1.5 h, los volátiles se evaporaron para dar la sal de amina cruda como una espuma.

Se adicionó paladio sobre carbono (10%, 200 mg) a una solución de Boc-L-a- ( t-but i 1 -Gly ) -L- ( 4 - F-Phe ) -OBn (2.04 g, 4.19 mmol) en EtOAc (200 mL) . La atmósfera se reemplazó con hidrógeno por vía de un balón. Después de agitar 3 h, la atmósfera se reemplazó con argón, y la mezcla de reacción se filtró a través de papeles filtro Whatman #3 y #5. El filtrado se evaporó para dar una --»•-»- -»"» espuma blanca .

Esta espuma se combinó con la sal de amina cruda (preparada anteriormente) en DMF (5 mL ) y se enfrió a 0°C. Se adicionaron secuencialmente N,N-diisopropiletilamina (0.339 mL, 1.95 mmol, 3 equiv.) y HATU (0.247 g, 0.650 mmol, 1 equiv.) . Después de agitar 20 min, la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente durante 1 h, después se diluyó con MTBE (100 mL) y se lavó con KHSO„ al 5%, NaHC03 saturado y salmuera (15 mL cada uno) . La fase orgánica se secó y se evaporó. La purificación del residuo por cromatografía de columna instantánea (EtOAc al 60% en hexanos) dio eti 1-3- { Boc-L-a- ( t-but il-Gly) -L- ( 4 -F-Phe ) -L- ( (N-2,4-d?metoxibencil)-(S)-Pirrol-Ala) ) -E-propenoato (0.364 g, 74%) como una espuma blanca: Rf = 0.34 (EtOAc al 60% en hexanos); IR (cr1) 3384, 1713, 1655; LH RMN (CDC13) d 1.01 (s, 9H), 1.28 (t, 3H, J = 7.2), 1.46 (s, 9H) , 1.50-1.63 (m, 2H), 1.68-1.81 (m, 1H), 1.85-1.99 (m, 1H), 2.09-2.20 (m, 1H), 2.94 (dd, 1H, J = 13.5, 5.4), 3.15-3.26 (m, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 3.97 (d, 1H, J = 9.3), 4.17 (q, 2H, J = 7.2), 4.27-4.38 (m, 1H), 4.29 (d, 1H, J = 14.3), 4.42 (d, 1H, J = 14.3), 4.84-4.92 (m, 1H), 5.22 (d, 1H, J = 9.6), 5.74 (dd, 1H, J = 15.6, 1.6), 6.45-6.53 (m, 2H), 6.69 (dd, 1H, J = 15.6, 5.4) , 6.76-6.87 (m, 3H) , 7.10-7.28 (m, 3H) , 8.26 (d, 1H, J = 5.9) ; Anal. ( C40H55FN4O9) C, H, N.

Preparación del intermediario etil-3-{ (5'-metilisoxazol-3 ' -carbonil) -L-a- (t-butil-Gly) -L- (4-F-Phe)-L-((N-2, 4 -dimetoxibencil ) -(S) -Pirrol-Ala) )-E-propenoato Este compuesto se preparó a partir de etil-3-{Boc-L-a- (t-butil-Gly) -L- ( 4 -F-Phe) -L- ( (N-2, 4 -d ime t ox i benci 1 ) - ( S ) - P i r r ol - Al a ) ) -E -pr openoa t o y cloruro de isoxa zol-5-carboni lo usando el procedimiento descrito anteriormente (Ejemplo 2) para la preparación deetil-3-( ( 5 ' -met i 1 isoxa zol-3 ' -carbonil ) -L-Leu-L-Phe-L- (Tr-Gln) } -E-propenoato: R£ = 0.60 (CH3OH al 10% en CHC13) ; IR (cr1) 3295, 1713, 1666, 1643; 2H RMN (CDC13) d 1.07 (s, 9H), 1.29 (t, 3H, J = 7.2), 1.51-1.64 (m, 2H), 1.71-1.83 (m, 1H), 1.96-2.07 (m, 1H), 2.11-2.21 (m, 1H), 2.49 (s, 3H), 2.99 (dd, 1H, J = 13.7, 5.9), 3.13-3.26 (m, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 4.18 (q, 2H, J = 7.2), 4.23-4.48 (m, 4H), 4.85-4.93 (m, 1H), 5.76 (dd, 1H, J = 15.6, 1.4), 6.40-6.52 (m, 3H), 6.71 (dd, 1H, J = 15.6, 5.3), 6.79-6.88 (m, 2H), 6.92 (d, 1H, J = 9.0), 7.09-7.22 (m, 3H), 7.37 (d, 1H, J = 9.0), 8.27 (d, 1H, J = 6.2); Anal. ( C40H50FN5O9« O .25H20) C, H, N.

Preparación del producto et?l-3- { (5 ' -met?l?soxazol-3 ' -carbonil) -L-a- (t-butil-Gly) -L- (4-F-Phe) -L- ( (S) -Pinol-Ala) } -E-propenoato .* Este compuesto se preparo a partir de et?l-3-( (51-met?l?soxazol-3'-carbon?l) -L-a- (t-butil-Gly) -L- (4-F-Phe)-L-( (N-2,4-d?metox?benc?l)-(S)-P?rrol-Ala) }-E-propenoato usando un procedimiento como se describió anteriormente (Ejemplo 6) para la preparación de etil-3-{ (5 ' -met lll soxa zol-3 ' -carbonil) -L-Val-L- (4-F-Phe)-L-( (S) -Pirrol-Ala) ) -E-propenoato : Rf = 0.30 (CH30H al 5% en CH2C12) ; IR (cm 1) 3307 br, 1684, 1660; JH RMN (CDC13) d 1.02 (s, 9H) , 1.29 (t, 3H, J = 7.2), 1.51-1.61 (m, 1H) , 1.75-1.97 (m, 2H), 2.14-2 25 (m, 1H), 2.28-2.40 (m, 1H), 2.50 (s, 3H), 3.03 (d, 2H, J = 6.5), 3.27-3.42 (m, 2H) , 4.18 (q, 2H), 4.18 (q, 2H, J = 7.2), 4.36 (d, 1H, J = 9.8), 4.52-4.63 (m, 1H), 4.86-4.95 (m, 1H), 5.71 (dd, 1H, J = 15.6, 1.4) , 6.44 (s, 1H) , 6.57-6.64 (m, 1H) , 6.73 (dd, 1H, J = 15.6, 5.3) , 6.83-6.91 (m, 2H) , 7.09-7.15 (m, 2H) , 7.28-7.36 (m, 2H) , 7.59 (d, 1H, J = 8.1) ; Anal. ( C31H40FN5O7 ) C, H, N.

Ejemplo 9 - Preparación del cofpuesto A-8: etil-3-{ (5' -metilisoxazol-3 ' -carbonil) -L-Val-L- (4-F- -Phe) -L- ( (S) - Piper-Ala) ) -E-propenoato Preparación del intermediario ter-butil éster del ácido (2'S,4S,4"S)-4-{2'- (4" -bencil -2" -oxo -oxazolidin-3"-carbonil) -5 ' -hidroxipentil} -2 , 2-dimetiloxazolidin-3-carboxilico Una solución del complejo de borano-tetrahidrof urano (0.96 mL de una solución l.OM en THF, 0.96 mmol, 1 equiv.) se adicionó a una solución a 0°C de ter-butil éster del ácido ( 2 ' S , 4 S , 4 " S ) -4 - { 2 ' - ( 4 " -bencil- 2 "-oxo-oxa zol idin- 3 "-carbonil) -pent -4 ' -enil ) -2 , 2-dimet?loxazol?din-3-carboxí lico (preparado como se describió en el ejemplo 6, 0.455 g, 0.963 mmol, 1 equiv.) en THF (3 mL) . Después de agitar 30 min, se adicionaron agua (3 mL) y perborato de sodio tetrahidratado (0.148 g, 0.962 mmol, 1 equiv.), y el baño de hielo se removió. Después de una hora adicional, la mezcla de reacción se diluyó con MTBE (125 mL ) , se lavó con agua (15 mL) y salmuera (2 x 15 mL ) , se secó con Na2S04, y se concentró. La purificación del residuo por cromatografía de columna instantánea (EtOAc al 50% en hexanos) proporcionó ter-butil éster del ácido ( 2 ' S , 4 S , 4 " S ) -4 - { 2 ' - ( 4 " -benci 1-2 " -oxo-oxazolidin-3" -carbonil) -5 ' -hidroxipentil } -2 , 2 -dimet iloxa zolidin-3-carboxí lico (0.339 g, 72%) como un cristal incoloro: R£ = 0.41 (EtOAc al 50% en hexanos); IR (cr1) 3486, 1780, 1693; ? RMN (CDC13) d 1.42-1.85 (m, 21H), 2.13-2.24 (m, 1H), 2.70 (dd, 1H, J = 13.1, 10.0), 3.29-3.38 (m, 1H), 3.61-4.22 (m, 8H), 4.63-4.76 (m, 1H) , 7.19-7.38 (m, 5H) ; Anal . ( C26H38N207 • 0.5H20 ) C, H, N.

Preparación del intermediario ter-butil éster del ácido (1S, 3 ' S) -{2- (1 ' - (2" , 4" -dimetoxibencil) -2 ' -oxo-piperidin-3 ' -il) -1-hidroximetiletil ) -carbámico Se disolvió ter-butil éster del ácido (2 ' S, 4S, 4"S) -4-( 2 ' - (4"-bencil-2"-oxo-oxazolidin-3"-carbonil) -5 ' -hidroxipentil } -2, 2-dimetiloxazolidin-3- carboxílico (3.88 g, 7.92 mmol, 1 equiv.) en Et3N (3.97 mL, 28.51 mmol, 3.6 equiv.) . La mezcla se enfrió a -12°C, y se adicionó una solución de complejo de trióxido de a zufre-pir idina (5.04 g, 31.67 mmol, 4 equiv.) en DMSO (150 mL ) a una velocidad para mantener la temperatura entre 8-17°C. La solución se agitó a 23°C durante 3 h. La mezcla de reacción se enfrió en un baño de agua fría y se apagó por la adición de H20 (150 mL) . La solución resultante se extrajo con EtOAc (2 x 150 mL) . Las capas orgánicas combinadas se lavaron con ácido cítrico al 5% (100 mL), salmera (100 mL) y se secaron con Na2S04 y se filtraron. El disolvente se removió a presión reducida y el residuo se secó a vacío para dar una espuma blanca (3.53 g) .

A una solución de este material (3.53 g, 7.22 mmol, 1 equiv.) en una mezcla 2:1 de THF y EtOH (120 mL) se adicionó clorhidrato de 2 , 4 -dimet oxibenci lamina (5.88 g, 28.89 mmol, 4 equiv.), NaOAc (2.37 g, 28.89 ramol, 4 equiv.) y NaBH3CN (0.908 g, 14.45 mmol, 2 equiv.) . La mezcla de reacción se agitó durante toda la noche (2o h) y después se diluyó con MTBE (200 mL) . La capa orgánica se lavó con KHS04 al 10% (100 mL), NaHC03 saturado (100 mL) y salmuera (100 m ) y se secó con Na2S04 y se concentró para dar una espuma amarillo pálido.

A una solución de esta espuma (3.34 g, 7.22 mmol, 1 equiv.) en CH30H J( 50 mL) se adicionó ácido p- toluensulf ónico (0.275' , 1.44 mmol, 0.2 equiv.) . La mezcla de reacción se agitó a 50°C durante 2.5 h y después se diluyó con CH2C12 (100 mL) . La capa orgánica se lavó con NaHC03 saturado (100 mL), se secó con Na2S04 y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (CH30H al 3% en CH2C12) para dar ter-butil éster del ácido (lS,3'S)-{2- (l'-(2",4"-dimetoxibencil)-2'-oxo-piperidin-3'-il)-l- hidroximet il-etil ) -carbámico como una espuma blanca (1.33 g, 44% en tres pasos) : :H RMN (CDC13) d 1.44 (s, 9H), 1.71-1.85 (m, 2H), 1.92-1.98 (m, 2H), 2.40-2.48 (m, 1H), 2.71-2.78 (m, 1H), 3.19-3.32 (m, 2H), 3.45- 3.69 (m, 4H), 4.11-4.20 (m, 2H), 4.68 (m, 1H), 6.44 (s, 1H) , 7.20-7.33 (m, 2H) .

Preparación del producto etil-3-{ (5' -metilisoxazol-3 ' - carbonil) -L-Val-L- (4-F-Phe) -L- ( (S) -Piper-Ala) )-E- propenoato Se convirtió el ter-butil éster del ácido (1S,3'?) {2- (1 ' - (2", "-dimetox?bencil) -2 ' -oxo-piperidin-3' -il) - 1 -hidroximet iletil ) -carbámico al producto etil-3-f (5'' metilisoxazol-3' -carbonil) -L-Val-L- (4-F-Phe)-L-((S) Piper-Ala ) ) -E-propenoato de una manera análoga a la conversión de ter-but.il ester del acido (lS,3'S)-{2-( 1 ' - (2" , 4"-d?metox?benc1llí) -2 ' -oxo-p?per?d?n-3' -íl) -1-hidroximetiletil } -carbamico al producto et?l-3-( (5'-met?l?soxazol-3'-carbon?l)-L¡rVal-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pirrol-Ala) } -E-propenoato descrito en el Ejemplo 6 anterior: Rf = 0.24 (CH30H al 5% en CH2C12); IR (crn"1) 3284 br, 1713, 1655, 1637 br; JH RMN (CDC13) d 0.94 (d, 3H, J = 6.8), 0.98 (d, 3H, J = 6.8), 1.29 (t, 3H, J = 7.2), 1.43-1.56 (m, 2H), 1.66-1.78 (m, 1H), 1.83-2.05 (m, 4H) , 2.16-2.28 (m, 1H), 2.49 (m, 3H), 3.00 (dd, 1H, J = 13.7, 6.2), 3.13 (dd, 1H, J = 13.7, 5.9), 3.21-3.37 (m, 2H), 4.18 (q, 2H, J = 7.2), 4.36-4.45 (m, 2H), 4.80-4.88 (m, 1H), 5.76 (dd, 1H, J = 15.6, 1.6), 5.96 (s, 1H), 6.43 (s, 1H), 6.70 (dd, 1H, J = 15.6, 5.3), 6.81 (d, 1H, J = 8.7), 6.86-6.98 (m, 2H), 7.09-7.19 (m, 2H), 7.22-7.29 (m, 1H), 8.07 (d, 1H, J = 6.5).

Ej emplo 10 - Preparación del compuesto B-l : eti -3 - { ( 5 ' -meti li soxazol -3 ' Aarbonill -L-Valf ( COCH,) -L-Gln ) - E-propenoato A Preparación del intermediario Ácido trans-6-metil-hept-4-enoico .

Una solución de isobut iraldehí do (9.59 g, 133 mmol, 1 equiv.) en THF (50 mL) se adicionó gota a gota por vía de embudo de adición a una solución de bromuro de vinilmagnesio (133 mL de una solución l.OM en THF, 133 mmol, 1.0 equiv.) en THF (300 mL) a 0°C. Una vez que se completó la adición, la mezcla de reacción se agitó durante 30 min, a 0 ° C y después se adicionó cloruro de etil malonilo (17.0 mL, 133 mmol, 1.0 equiv.) . Después de agitar durante 1 h a 0 ° C , la mezcla de reacción se dividió entre NH4C1 saturado (150 mL) y una mezcla 1:1 de EtOAc y hexanos (2 x 200 „,HL ) . Las capas orgánicas combinadas se secaron con Na2S04 y se concentraron. La purificación del residuo por filtración a través de gel de sílice (eluyendo con EtOAc al 5% en hexanos) proporcionó el intermediario del éster de malonato (11.5 g, rendimiento de 40%) . Este material no se caracterizó, pero se combinó (rigurosamente) con Ti(OEt)4 (1.13 mL, 5.39 mmol, 0.10 equiv.) y se calentó a 190°C durante 4 h, y después se enfrió a 60°C. Se adicionaron secuencialmente EtOH (50 mL) y KOH 6.0M (50 mL ) , y la mezcla de reacción café se sometió a reflujo durante 4 h. Después de enfriar a 23°C, la mezcla de reacción se filtró a través de un medio calcinado y el filtrado se dividió entre agua (150 mL) y Et20 (2 x 150 mL) . La capa acuosa después se acidificó a pH = 2 (como se indicó por el papel de pH) con HCl concentrado y se extrajo con una mezcla 1:1 de EtOAc y hexanos (2 x 150 mL) . Las capas orgánicas combinadas se secaron con Na2S04, se concentraron y el residuo se destiló a presión reducida para proporcionar el ácido trans-6-met il-hept- 4 -enoico (3.58 g, 47%) como un líquido incoloro: pe 107-112°C (1 Torr); IR (cr1) 2960, 1170; ¡H RMN (CDC13) d 0.96 (d, 6H, J = 6.5), 2.18-2.45 (m, 5H), 5.31-5.50 (m, 2H); Anal. (C8H1402) C, H.

Preparación del intermediario (2R-hidroxi-lR-metil-2-fenil-etil) -metil amida del ácido trans-6-metil-hept-4-enoico .

Se adicionó cloruro de oxalilo (2.25 mL, 25.8 mmol, 1.05 equiv.) a una solución del ácido t rans - 6-met il-hept-4-enoico (3.50 g, 24.6 mmol, 1 equiv.) y N,N-dimetilformamida (0.03 mL, 0.39 mmol, 0.016 equiv.) en benceno (60 mL) a 23°C. La mezcla de reacción se agitó a 23°C durante 2 h, y después se concentró a presión reducida. El aceite resultante se disolvió en THF (20 mL) y se adicionó por vía de cánula a una solución de ( IR, 2R) - (-) -pseudoef edrina (3.87 g, 23.4 mmol, 1 equiv.) y trietilamma (3.92 mL , 28.1 mmol, 1.2 equiv.) en THF (150 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 30 mm., después se dividió entre NH4C1 saturado a la mitad (150 mL) y EtOAc (2 x 150 mL) . Las capas orgánicas combinadas se secaron con Na2S04, se concentraron y el residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (gradiente de elución EtOAc al 40-50% de EtOAc en hexanos) para proporcionar (2R-hidroxi-lR-met il-2 -f eni 1 -et i 1 ) -met i 1 amida del ácido trans- 6-met il-hept -4 -enoico (6.31 g, 93%) como un aceite viscoso: R£ = 0.35 (EtOAc al 50% en hexanos) ; IR (cm"1) 3382, 1622; XH RMN (CDC13, mezcla de rotámeros) d 0.96 (d, J = 6.8) , 0.97 (d, J = 6.5), 1.11 (d, J = 6.9) , 2.18-2.59 (m) , 2.82 (s), 2.92^(s), 3.99-4.04 (m), 4.32-4.42 (m) , 4.44-4.49 (m) , 4.S5-4.62 (m) , 5.32-5.49 (m), 7.24-7.42 (m) ; Anal. (ClßH27N02) C, H, N.

Preparación del intermediario (2R-hidroxi-lR-metil-2-feniletil) metil amida del ácido trans-6-2S- (4-fluorobencil) -hept-4-enoico .

Se adicionó n-butil-litio (32.5 mL de una solución 1.6 M en hexanos, 52.0 mmol, 3.1 equiv.) a una suspensión de cloruro de litio anhidro (7.18 g, 169 mmol, 10 equiv.) y diisopropilamina (7.80 mL, 55.7 mmol, 3.3 equiv.) en THF (250 mL) a -78°C. La mezcla de reacción se agitó durante 30 min a -78°C, se mantuvo a 0°C durante 5 min., y se enfrió subsecuentemente nuevamente a -78°C. Se adicionó ( 2R-hidroxi - lR-met i 1-2-feni 1-et i 1 ) met il amida del ácido t r ans- 6-met i 1 -hept- 4 -enoico (4.91 g, 17.0 mmol, 1 equiv.) en THF (50 mL) por vía de cánula y la solución resultante se agitó a -78°C durante 1.75 h, se mantuvo a 0°C durante 20 min., se agitó a 23°C durante 5 min., y después se enfrió nuevamente a 0°C. Se adicionó una solución de bromuro de 4 -bromobencilo (6.34 mL, 50.9'mmol, 3 equiv.) en THF (15 mL) y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante min., la cual después se dividió entre NH„C1 saturado a la mitad (230 mL) y ü%?a mezcla 1:1 de EtOAc y hexanos (200 mL, 2 x 150 mL) . Las capas orgánicas combinadas se secaron con Na2S04 y se concentraron. La purificación del residuo por cromatografía de columna instantánea (gradiente de elución EtOAc al 20-40% en hexanos) proporcionó (2R-hidroxi-lR-metil-2-feniletil) metil amida del ácido t rans- 6-2 S- ( 4 -fluorobenci 1 ) -hept -4 -enoico (6.33 g, 94%) como un aceite viscoso: R£ = 0.38 (EtOAc al 40% en hexanos); IR (cr1) 3378, 1614; JH RMN (CDC13, mezcla de rotámeros) d 0.85-0.95 (m), 0.96 (d, J = 6.8), 2.10-2.32 (m), 2.34-2.46 (m), 2.58 (s), 2.67-2.79 (m) , 2.82-2.94 (m), 3.00-3.18 (m), 3.94 (br), 4.37-4.52 (m) , 5.24-5.42 (m), 5.44-5.56 (m), 6.89-7.01 (m) , 7.19-7.38 (m); Anal. (C25H32FN02) C, H, N.

Preparación del intermediario 5S- ( lR-bromo-2-metilpropil) -3R- (4-fluorobencil) dihidrofuran-2-ona .

Se adicionó N-bromosuccinimida (2.93 g, 16.5 mmol, 1.05 equiv.) en pequeñas porciones durante 10 minutos a una solución de ( 2 R-hidr oxi - 1 R-me t i 1 - 2 -f eni let i 1 ) met il amida del ácido trans- 6-met i 1-2 S- ( 4 -fluorobencil) -hept-4-enoico (6.24 g, 15.7 mmol, 1 equiv.) y ácido acético glacial (4.49 mL, 78.4 mmol, 5 equiv.) en una mezcla 4:1 de THF y H20 (165 mL) a 0°C. La solución amarilla resultante se agitó durante 15 min. a 0°C y después se calentó a 23°C y se sometió a reflujo subsecuentemente durante 45 min. Después de enfriar a 23°C, la mezcla de reacción se dividió entre NaHC03 saturado a la mitad (200 mL) y una mezcla 1:1 de EtOAc y hexanos (2 x 200 mL, 100 mL) . Las capas orgánicas combinadas se secaron con Na2S04 y se concentraron. La purificación cromatográfica instantánea del residuo (gradiente de elución de EtOAc al 4-10% en hexanos) dio 5S- ( lR-br omo-2 -met i lpropil ) -3R- (4-f luorobencil) dihidrofuran-2 -ona (4.14 g, 80%) como un aceite amarillo pálido (que contenía aproximadamente 5-10% de impurezas no identificadas por !H RMN) : Rf = 0.56 (EtOAc al 25% en hexanos); IR (crn"1) 1772, 1614; 'H RMN (CDC13, isómero principal) d 0.94 (d, 3H, J = 6.5), 1.00 (d, 3H, J = 6.8), 2.05-2.35 (m, 3H), 2.83 (dd, 1H, J = 13.6, 8.4), 2.92-3.03 (m, 1H), 3.11 (dd, 1H, J = 13.6, 4.7), 3.90 (dd, 1H, J = 9.0, 3.7), 4.33-4.40 (m, 1H), 6.98-7.06 (m, 2H), 7.14-7.20 (m, 2H); Anal. ( C?5H18Br F02) C, H.

Preparaci ón de l in termedi ari o 5 S - ( l S - a z ido - 2 -metilpropil ) -3R- ( 4 -f luoroljencil ) dihidrof uran -2 -ona .

Una suspensión de azida de sodio (1.90 g, 29.2 mmol, 2.5 equiv.) y 5S- ( lR-br omo-2-met ilpropil )- 3R- ( 4 -f luorobencil ) dihidrofuran-2-ona (3.85 g, 11.7 mmol, 1 equiv.) en N , N-dimet i lformamida (40 mL) se calentó a 50°C durante 67 horas. La mezcla de reacción se enfrió a 23 ° C y se dividió entre NaCl saturado a la mitad (200 mL) y una mezcla 1:1:1 de EtOAc, hexanos y acetona (2 x 200 mL, 100 mL) . Las capas orgánicas combinadas se secaron con Na2S04, se concentraron y el residuo se purificó por croma ografía de columna instantánea (gradiente de elución de EtOAc al 9-17% en hexanos) para dar 5 S - ( 1 S - a z i d o - 2 -me t i 1 p r op i 1 ) - 3 R - ( 4 -f luorobencil ) ihidrof uran-2-ona (2.10 g, 62%) como un sólido blanco (que contenía aproximadamente 5-10% de impurezas no identificadas por ? RMN) : pf 91-96°C; R£ = 0.44 (EtOAc al 25% en hexanos); IR (cr1) 2097, 1772; XH RMN (CDC13, isómero principal) d 0.99 (d, 3H, J = 6.5), 1.02 (d, 3H, J = 6.8), 1.95-2.20 (m, 3H), 2.78-2.88 (m, 1H), 2.94 (d, 1H, J = 7.0, 4.2), 3.03-3.17 (m, 2H), 4.37-4.43 (m, 1H), 6.97-7.09 (m, 2H), 7.14-7.21 (m, 2H) .

Preparación del intermediario ter-butil éster del ácido {2-metil-lS- (4R- (4-fluorobejfcil) -5-oxotetrahidrofuran-2S-il) propil } -carbámico Una suspensión de 5S- ( IS-a z?do-2 -met i lpr opil ) -3R- ( 4 -f luorobencil ) dihidrofuran-2-ona (2.02 g, 6.93 mmol, 1 equiv.), dicarbonato de di-ter-butilo (2.12 g, 9.71 mmol, 1.4 equiv.) y Pd/C (10%, 0.20 g) en CH30H (100 mL) se agitó bajo una atmósfera de hidrógeno (balón) durante 16 horas. La mezcla de reacción se filtró a vacío a través de un papel Whatman #3 y se concentró. La purificación del residuo por cromatografía de columna instantánea (EtOAc al 15% en hexanos) proporcionó ter-butil éster del ácido {2-met?l-lS- (4R- (4-f luorobencil) -5-oxotetrahidrofuran-2S-il ) propil ) -carbámico (1.58 g, 62%) como una espuma blanca: R£ = 0.80 (MeOH al 5% en CH2C12) ; IR (cr1) 3331, 1766, 1702; XH RMN (CDC13) d 0.93 (d, 3H, J = 6.8), 0.95 (d, 3H, J = 6.5), 1.41 (s, 9H), 1.71-1.83 (m, 1H), 1.95-2.06 (m, 1H), 2.16-2.27 (m, 1H), 2.80 (dd, 1H, J = 13.5, 8.6), 2.88-2.99 (m, 1H), 3.09 (dd, 1H, J = 13.5, 4.4), 3.32-3.40 (m, 1H), 4.42 -4.48 (m, 2H), 6.95-7.03 (m, 2H), 7.11-7.18 (m, 2 H ) ; Anal. (C20H28FNO„) C, H, N.

Preparación del intermediario e til - 3 - { Boc-L- Valf (COCH2) -L- (4-F-Phl L- (Tr-Gln) } -E-propenoato . > Se adicionó hidróxido de litio (9.62 mL de una solución acuosa 1M, 9.62 mmol, 5 equiv.) a una solución de ter-butil éster del ácido ( 2-met il - ÍS- ( 4 R- ( 4 -fluorobencil ) -5-oxotetrahidrofuran-2S-il ) propil } -carbámico (0.703 g, 1.92 mmol, 1 equiv.) en DME (25 mL) a 23°C. La suspensión resultante se agitó a 23°C durante 30 min, y después se dividió entre KHS04 al 10% (50 mL) y CH2C12 (3 x 100 mL) . Las capas orgánicas combinadas se secaron con Na2S04, se concentraron y el residuo se disolvió en CH2C12 (30 mL) . Se adicionaron secuencialmente cribas moleculares de 4A pulverizadas (0.70 g) , N-óxido de 4 -met i lmor f ol ina (0.451 g, 3.85 mmol, 2 equiv.) y perrutenato de te trapropi lamonio (0.068 g, 0.19 mmol, 0.10 equiv.) . La mezcla de reacción negra resultante se agitó durante 1.33 horas a 23°C, después se filtró a vacío a través de papel #3 Whatman y después de papel #5 Whatman. El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar un residuo obscuro, que se disolvió en CH2C12 (30 mL) . Se adicionaron secuencialmente etil-3- (H2N-L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato crudo-HCl (2.30 mmol, 1.2 equiv., preparado como se describió en el Ejemplo 2 para la preparación de etil-3- { (5 ' -metilisoxazol-3 ' -carbonil) -L-Leu-L-Phe-L-Gln ) -E-propenoato) , 4 - ¡et ilmor folina (0.846 mL , 7.69 mmol, 4 equiv.), HOBt ( 0.3?l 0 g, 2.89 mmol, 1.5 equiv.), y EDC (0.553 g, 2.88 mmol, 1.5 equiv.) y la mezcla de reacción se agitó durante 19 horas a 23°C y después se dividió entre salmuera (100 mL) y CH2C12 (3 x 100 mL) . Las capas orgánicas combinadas se secaron con Na2S04 y se concentraron. La purificación del residuo por cromatografía de columna instantánea (gradiente de elución de EtOAc al 35-40% en hexanos) proporcionó etil-3- (Boc-L- Va l?(COCH2)-L-( 4-F-Phe)-L- (Tr-Gln) J-E-propenoato (0.820 g, 53%) como una espuma de color canela: Rf = 0.50 (EtOAc al 50% en hexanos); IR (cr1) 3307, 1708, 1666; ¡H RMN (CDC13) 6 0.67 (d, 3H, J = 6.8) , 0.92 (d, 3H, J = 6.8), 1.28 (t, 3H, J = 7.2), 1.40 (s, 9H), 1.53-1.67 (m, 1H), 1.91-2.04 (m, 2H), 2.32-2.41 (m, 2H), 2.46-2.55 (m, 1H), 2.63 (dd, 1H, J = 12.1, 5.9), 2.69-2.80 (m, 1H), 2.83 (dd, 1H, J = 12.1, 8.2), 3.03 (dd, 1H, J = 17.7, 10.0), 4.05-4.11 (m, 1H), 4.17 (q, 2H, J = 7.2), 4.40 - 4.50 (m, 1H), 4.84 (d, 1H, J = 8.4), 5.38 (d, 1H, J = 15.7), 6.01 (d, 1H, J = 8.04), 6.60 (dd, 1H, J = 15.7, 5.0), 6.92-6.99 (m, 2H), 7.03-7.12 (m, 3H) ; 7.17-7.30 (m, 15H); Anal. ( C48H56FN307) C, H, N.

Preparación del producto etil-3-{ (51 -metilisoxazol-3 ' -carbonil) -L-Val? (COCH2) -L- (4-F-Phe) -L-Gln) -E-propenoato Se convirtió etil-3- { Boc-L-Val? ( COCH2 ) -L- ( 4 -F-Phe)-L-(Tr-Gln) }-E-propenoato al producto et il-3- { ( 5 ' -metilisoxazol-3 '-carbonil) -L-Valf(COCH2)-L-( 4-F-Phe)-L-Gln } -E-propenoato de una manera análoga a la descrita en el Ejemplo 2 anterior para la conversión de etil-3-( Boc-L-Leu-L-Phe-L- (Tr-Gln) } -E-propenoato al producto etil-3- ( (5 '-metilisoxazol-3' -carbonil) -L-Leu-L-Phe-L-Gln}-E-propenoato: pf = 220 °C (desc.) : Rf = 0.35 (CH3OH al 10% en CH2C12); IR (cm"1) 3277, 1715, 1643; :H RMN (DMS0-d6) d 0.81 (d, 3H, J = 6.2), 0.87 (d, 3H, J = 6.9), 1.21 (t, 3H, J = 6.5), 1.59-1.67 (m, 2H), 2.03 (s, br, 2H), 2.21-2.24 (m, 1H), 2.46 (s, 3H), 2.57-2.68 (m, 3H), 2.80-2.95 (m, 2H), 4.09 (q, 2H, J = 6.5), 4.30-4.34 (m, 2H), 5.41 (d, 1H, J = 15.5) , 6.55 (s, 1H), 6.61 (dd, 1H, J = 15.5, 5.5), 6.73 (s, 1H), 6.99-7.16 (m, 5H), 8.01 (d, 1H, J = 7.8) , 8.69 (d, 1H, J = 8.7) ; Anal .

(C29H37FN407) C, H, N.

Ejemplo 11 - Preparación del Compuesto A-10: eti -3-( (5 ' -metilisoxazol-3 ' -carbonil) -L-Leu-NCH,-L-Phe-L-Gln ) -E-propenoato Preparación del intermediario Boc-L-Leu-NCH3-L-Phe-OCH3 Se disolvió NCH3-L-Phe-OCH3 • HCl (1.4 g) en CH2C12 (50 m ) y se vertió en una combinación de NaOH ÍN acuoso (ac) (7 mL) y NaHC03 acuoso saturado (25 mL) . Después de mezclar, se separó la fase orgánica y la fase acuosa se lavó con CH2C12 (3 x 50 mL) . Las fases orgánicas combinadas se secaron con Na2S04 y se evaporaron para dar la amina libre como un aceite incoloro (1.14 g, 5.90 mmol) . Una solución de esta amina y (iPr)2NEt (1.13 mL, 6.49 mmol en DMF (10 mL) se adicionó gota a gota a una solución a 0°C de Boc-L-Leu-OH (1.50 g, 6.49 mmol) y HOBt (0.877 g, 6.49 mmol) en DMF (10 mL) . Se adicionó DCC (1.47 g, 7.12 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 1 h, y después se agitó a 23°C durante 48 h. La mezcla se filtró para remover el precipitado (ppt) y el filtrado se evaporó. El residuo se disolvió en CH2C12 (200 mL), se lavó con NaHC03 acuoso saturado (40 mL ) , se secó con Na2S04 y se evaporó. El residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (EtOAc al 25% en hexanos) para dar Boc-L-Leu-NCH3-L- Phe-0CH3 como un sólido blanco (2.04 g, 85%) : pf = 126-127 °C; IR (cm"1) 3401, 3319, 1743, 1708, 1649; *H RMN (CDC13) (isómero principal) d 0.92 (d, 3H, J = 6.8), 0.95 (d, 3H, J = 6.5), 1.32-1.38 (m, 2H), 1.41 (s, 9H), 1.61-1.77 (m, 1H), 2.90 (s, 3H), 3.04 (dd, 1H, J =* 14.5 , 10.5), 3.37 (dd, 1H, J = 14.5, 5.5), 3.72 (s, 3H), 4.48-4.57 (m, 1H), 4.98-5.04 (m, 1H), 5.20 (dd, 1H, J = 10.5, 5.5), 7.16-7.32 (m, 5H); Anal. (C22H34N205) C, H, N.

Preparación del intermediario Boc-L-Leu-NCH3-L-Phe-OH Se disolvió Boc-L-Leu-NCH3-L-Phe-OCH3 (0.625 g, 1.54 mmol) en CH3OH (20 mL) y se enfrió a 0°C. Se adicionó gota a gota NaOH acuoso (6.15 mL de una solución 2N, 12.3 mmol) . La mezcla de reacción se agitó durante 3 h a 23°C, y después se vertió en KHS04 al 10% (150 mL) . Esta mezcla se extrajo con CH2C12 (3 x 100 mL) , y las fases orgánicas combinadas se secaron con Na2SO„ y se evaporaron para dar Boc-L-Leu-NCH3-L- Phe-OH como una espuma blanca (0.617 g, cuant.), que se usó sin pur i f icación .

Preparación del intermediario etil-3- {Boc-L-Leu-NCH3-L-Phe-L- (Tr-Gln) } -E-propenoato Este intermediario se preparó a partir de Boc-L-Leu-NCH3-L-Phe-OH y e t i 1 - 3 - { H2N-L - ( T r -G 1 n ) } -E -propenoato • HCl (preparado como se describió en el Ejemplo 2) de una manera análoga a la descrita para la preparación de et ll- 3- { Boc-L-Leu-L-Phe-L- ( Tr-Gln ) } -E-propenoato en el Ejemplo 2 anterior: IR (cm"1) 3295, 1713, 1672, 1649; 'H RMN (CDC13) (mezcla de isómeros) d 0.65 (d, J = 6.2), 0.66 (d, J = 6.5) , 0.84 (d, J = 6.5) , 0.88 (d, J = 6.5), 1.02-1.22 (m), 1.23-1.38 (m), 1.33 (s), 1.41 (s), 1.55-1.82 (m), 1.89-2.07 (m), 2.23-2.30 (m), 2.90 (s), 2.94 (s), 3.01 (dd, J = 14.6, 10.9), 3.03-3.13 (m), 3.26-3.37 (m), 3.27 (dd, J = 14.6, 3.4), 3.42-3.54 (m) , 4.00-4.22 (m) , 4.37-4.73 (m) , 4.82-4.89 (m) , 5.63-5.70 (m) , 5.95 (dd, J = 15.9, 1.2) , 6.23-6.28 (m) , 6.66-6.75 (m) , 6.79-6.89 (m) , 7.09-7.34 (m) , 8.14 (d, J = 8.7) ; Anal . (C49H60N4O7) C, H, N.

Preparación del producto etil-3-{ (5' -metil isoxazol -3 ' carbonil) -L-Leu-NCH3-L-Phe-L-Gln ) -E-propenoato Se convirtió et il- 3- { Boc-L-Leu-NCH3-L- Phe-L- ( Tr-Gln) )- E-propenoato al producto et?l-3- ( (5'-met?lisoxazol-3' -carbonil )-L-Leu-NCH3-L-Phe-L-Gln)-E-propenoato de una manera análoga a la descrita en el Ejemplo 2 anterior para la conversión de et 11 - 3 -( Boc-L-Leu-L-Phe-L- ( Tr-Gln ) ) -E-propenoato al producto etil-3-{ ( 5 ' -met?lisoxazol-3 ' -carbonil ) -L-Leu-NCH3-L- Phe -L-Gln)-E-propenoato: R£ = 0.23 (CH3OH al 5% en CH2C12); IR (cr1) 3295, 1713, 1666, 1637; JH RMN (CDC13) (mezcla de isómeros) d 0.65 (d, J = 6.5), 0.71 (d, J = 6.5), 0.93 (d, J = 6.5), 0.94 (d, J = 6.5), 1.30 (t, J = 7.2), 1.24-1.73 (m) , 1.81-2.22 (m), 2.45 (s), 2.48 (s), 2.86-2.93 (m) , 2.96 (s), 2.97 (s), 3.03-3.14 (m), 3.21-3.31 (m) , 3.48 (dd, J = 14.0, 5.9), 4.19 (q, J = 7.2), 4.20 (q, J = 7.2), 4.38-4.45 (m), 4.52-4.70 (m), 4.74-4.81 (m) , 5.62-5.67 (m) , 5.73-5.79 (m), 5.81 (dd, J = 15.6, 1.6), 5.99 (dd, J = 15.6, 1.6), 6.03-6.09 (m), 6.35 (s), 6.39 (s), 6.40-6.45 (m), 6.77-6.94 (m), 7.42 (d, J = 7.2), 8.13 (d, J = 7.8) .

Ej emplo 12 - Preparación del compues to C- l : etil - 3 -í ( 5 ' -metilisoxazol-3 ' -carbonil ) -L-Val-O-L- ( 4 -F-Phe ) -L-Gln ) -E-propenoato Preparación del intermediario (S) -l-hidroxi-3- (4-fluorofenil) propionato de alilo En un matraz equipado con un termómetro y un condensador de reflujo se disolvió ( S ) - 1 -hidr oxi - 3- ( 4 -f luorof eni 1 ) propionato de metilo (preparado a partir de L-H2N- ( 4-F-Phe ) -0CH3 por el método descrito en Hoffman et al., retrahedron 1992, vol. 48, 3007) (0.99 g, 5.0 mmol) en alcohol alílico (50 mL) . Se adicionó t et r ai sopropóxido de titanio (1.53 mL, 5.0 mmol), y la reacción se llevó a 90°C durante 3.5 h. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se vertió en 250 mL de solución de EtOAc/NH4Cl saturado 1:1. La fase orgánica se separó y se lavó con agua (100 mL) , salmuera (100 mL), se secó (MgS04), y el disolvente se removió. El residuo se sometió a cromatografía de columna instantánea eluyendo con un gradiente de 5-10% de EtOAc/hexanos para proporcionar 0.77 g (68%) de (S)-l-hidr oxi - 3- ( 4 -f luor o f eni 1 ) propiona t o de aillo como un líquido claro: R£ = 0.21 (EtOAc al 15 % /hexanos ) ; IR (limpio) 3470 (ancho), 1734, 1510, 1221 cr1; :H RMN (DMSO-d6) d 1.24-1.27 (m, 1H), 2.92-2.99 (m, 1H), 3.09-3.15 (m, 1H) 4.43-4.47 (m, 1H), 4.65 (d, 2H, J = 5.9), 5.28-5.37 (m, 2H), 5.86-5.95 (m, 1H), 6.95-7.01 (m, 2H) , 7.16-7.21 (m, 2H) .

Preparación del intermediario Boc-L-Val-O-L- (4-F-Phe) -OCH2CH=CH2 Se disolvió ( S ) -1 -hidr oxi-3 - ( 4 -flúor of eni 1 ) propionato de alilo (0.070 g, 0.31 mmol) en CH2C12 (20 mL) . Se adicionó Boc-L-Val-OH (0.068 g, 0.31 mmol), seguido por DMAP (0.004 g, 0.03 mmol) y DCC (0.067 g, 0.33 mmol) . La reacción se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche, y el disolvente se removió i n va c u o . El residuo se sometió a cromatografía de columna instantánea eluyendo con un gradiente de EtOAc al 3- 5 % /hexanos . Se obtuvo el producto Boc-L- Val -O-L- ( 4 -F-Phe ) -OCH2CH=CH2 como 0.12 g (90%) de un aceite claro: R£ = 0.18 (EtOAc al 10%/hexanos) ; IR (limpio) 1752, 1717, 1510 crn"1; ?H RMN (DMSO-d6) d 0.80-0.85 (m, 6H), 1.36 (s, 9H), 1.97-2.04 (m, 1H), 3.07-3.15 (m, 2H), 3.89-3.94 (m, 1H), 4.51-4.55 (m, 2H), 5.17-5.30 (m, 3H), 5.75-5.84 (m, 1H), 7.06-7.17 (m, 3H), 7.27-7.32 (m, 2H); Anal. (C22H30NO6F) C, H, N.

Preparación del intermediario etil-3- {Boc-L-Val-O-L- (4-F-Phe) -L- (Tr-Gln) } -E-propenoato Se disolvió Boc-L-Val-O-L- ( 4 - F- Phe ) -OCH2CH=CH2 (0.65 g, 1.52 mmol) en THF (15 mL) . Se adicionó tetracis (trif enilfosf ina) de paladio (0) (0.035 g, 0.03 mmol) y la reacción se agitó 5 min a 23°C. Se adicionó gota a gota morfolina (0.16 mL, 1.83 mmol), y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. El disolvente se removió m va cu o , y el residuo se colocó en 50 mL de hexanos/Et20 4:1. El producto se extrajo en solución de NaHC03 (50 mL ) y la fase orgánica se desechó. La fase acuosa se acidificó a pH = 1-2 con KHS04 sólido y el producto se re-extrajo en EtOAc (50 mL ) . La fase orgánica se lavó con salmuera (50 mL ) , se secó (MgS04) y se concentró para dar 0.50 g (86%) del ácido libre como un aceite claro. Este material se disolvió en DMF (6 mL) . Se adicionó diisopropiletilamina (0.43 mL, 2.50 mmol), seguido por etil-3- (H2N-L-(Tr-Gln) } -E-propenoato- HCl (preparado como se describió en el Ejemplo 2 anterior, 0.55 g, 1.25 mmol) . La reacción se enfrió a 0 ° C . Se adicionó HATU (0.48 g, 1.25 mmol), y la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente. La DMF se removió i n va c uo . El residuo se disolvió con EtOAc (30 mL) y la fase orgánica se lavó consecutivamente con solución de HCl al 10% (25 mL) , solución NaHC03 saturado (25 mL), H20 (25 mL) y salmuera (25 mL) . La capa orgánica se secó (MgS04) , se filtró y se concentró y el residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (MeOH al 0-l%/CH2Cl2) para dar 0.40 g (39%) de etil-3- { Boc-L-Val-O-L- ( 4 -F-Phe ) -L- (Tr-Gln ) ) -E-propenoato como un sólido amorfo blanco: R£ = 0.25 (MeOH al 3%/CHCl3) ; IR (KBr) 1691, 1512, 1159 cr1; JH RMN (DMSO-d6) d 0.78-0.83 (m, 6H), 1.20 (t, 3H, J = 7.0) , 1.35 (s, 9H), 1.58-1.66 (m, 2H), 1.96-2.02 (m, 1H), 2.19-2.33 (m, 2H), 2.99-3.02 (m, 2H), 3.82-3.87 (m, 1H), 4.09 (q, 2H, J = 7.0), 4.33-4.37 (m, 1H) , 5.03-5.08 (m, 1H), 5.60 (d, 1H, J = 15.8, 5.5), 7.02-7.08 (m, 2H), 7.14-7.28 (m, 18H), 8.12 (d, 1H, J = 8.1), 8.59 (s, 1H) ; Anal. ( C47H54N308F) C, H, N.

Preparación del producto et?l-3-{ (5' -met?l?soxazol-3 ' • carbonil) -L-Val-O-L- (4-F-Phe) -L-Gln) -E-propenoato Se convirtió et?l-3- { Boc-L-Val-O-L- ( 4-F-Phe ) -L-(Tr-Gln) ) -E-propenoato al producto et?l-3-{ (5'-met?l?soxazol-3'-carbon?l)-L-Val-0-L-(4-F-Phe)-L-Gln)-E-propenoato de una manera análoga a la descrita en el Ejemplo 2 anterior para la conversión de et?l-3- ( Boc-L-Leu-L-Phe-L- ( Tr-Gln ) } -E-propenoato al producto et?l-3-( (5 ' -met?l?soxazol-3 ' -carbonil) -L-Leu-L- Phe-L-Gln ) -E-propenoato: R£ = 0.05 (MeOH al 3%/CHCl3) ; IR (KBr) 1746, 1719, 1661, 1549 cr1; ?H RMN (DMSO-d6) d 0.87 (d, 3H, J = 6.6), 0.92 (d, 3H, J = 6.6), 1.20 (t, 3H, J = 7.0), 1.61-1.74 (m, 2H), 1.96-2.01 (m, 2H), 2.15-2.22 (m, 1H), 2.46 (s, 3H), 3.00-3.03 (m, 2H), 4.10 (q, 2H, J = 7.0), 4.27-4.32 (m, 1H), 4.33-4.38 (m, 1H), 5.06-5.11 (m, 1H), 5.63 (d, 1H, J = 15.6), 6.54 (s, 1H), 6.68 (dd, 1H, J = 15.6, 5.5), 6.78 (s, br, 1H), 6.95-7.00 (m, 2H), 7.20-7.24 (m, 3H), 8.06 (d, 1H, J = 8.1), 8.87 (d, 1H, J = 7 . 7 ) ; An a l . ( C 28H 35N „ Oß F ) C , H , N .

Ejemplo 13 - Preparación del compuesto A-ll: etil-3-{ (5 ' -metilisoxazo -3 ' -carbonil) -L- (2-naf t) -NCH,-L- (4-F-Phe) -L-Gln ) -E-propenoato Preparación del intermediario etil-3- {Boc-NCH3-L- (4-F-Phe) -L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato Se disolvieron Boc- ( 4 - F-Phe ) -OH (4.46 g, 15.75 mmol, 1 equiv.) y CH3I (7.84 mL, 126 mmol, 8 equiv.) en THF seco (100 mL) y se enfriaron a 0°C. Después de agitar a 23°C durante 24 h, Se adicionaron cuidadosamente a la mezcla EtOAc (3 mL) y H20 (3 mL) y la suspensión resultante se evaporó a sequedad. Después de disolver en H20 (100 mL), la mezcla de reacción se lavó con Et20 (2 x 100 mL) . La capa acuosa se acidificó a pH = 3 con solución de ácido cítrico al 10% y después se extrajo con EtOAc (2 x 100 mL) . Los extractos combinados de EtOAc se lavaron sucesivamente con NaHCO, saturado a la mitad (150 mL), Na2S203 al 5% (150 mL) y H20 (150 mL ) , se secaron con Na2S04 y se concentraron para dar Boc-NCH3- ( 4 - F-Phe ) -OH como una espuma amarillo pálido (4.37 g, 80%), que se usó sin purificación adicional: ;H RMN (CDC13, mezcla de isómeros) d 1.35 (s), 1.40 (s), 2.69 (s), 2.75 (s), 2.96-3.13 (m), 3.23-3.33 (m) , 4.54-4.58 (m), 4.76-4.81 (m), 6.96-7.01 (m), 7.15-7.17 (m) .

Una solución de HCl en 1,4-dioxano (4.0 M, 15 mL) se adicionó a una solución de etil-3- ( Boc-L- (Tr-Gln )) -E-propenoato (preparado como se describió en el Ejemplo 2 anterior, 3.57 g, 6.73 mmol, 1 equiv.) en el mismo disolvente (15 mL) a 23°C. Después de 2 h, los volátiles se removieron a presión reducida. El residuo se disolvió en CH2C12 (50 mL) y se adicionaron secuencialmente Boc-NCH3- ( 4 - F- Phe ) -OH (preparado como en el párrafo precedente, 2.0 g, 6.73 mmol, 1.0 equiv.), HOBt (1.23 g, 9.09 mmol, 1.5 equiv.), 4-metilmorfolina (2.0 mL, 18.19 mmol, 3 equiv.), y EDC (1.74 g, 9.09 mmol, 1.5 equiv.) . La mezcla de reacción se agitó a 23°C durante toda la noche y después se dividió entre agua (100 mL) y CH2C12 (2 x 100 mL ) . Las capas orgánicas combinadas se secaron con Na2S04, se concentraron y el residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (EtOAc al 30% en hexano) para proporcionar et i 1-3- { Boc-NCH3-L- (4-F-Phe)-L-(Tr-Gln) } -E-propenoato (4.07 g, 84%) como espuma blanca: IR (cr1) 1666, 1510, 1167; JH RMN (CDC13, mezcla de isómeros) d 1.29 (t, J = 7.2), 1.37 (s), 1.65-1.75 (m), 1.95-2.06 (m) , 2.29-2.33 (m) , 2.66 (s), 2.91-2.99 (m), 3.22-3.29 (m) , 4.18 (q, J = 7.2), 4.52-4.58 (m), 5.68 (d, J = 15.9), 6.45 (d, J = 8.4), 6.74 (dd, J = 15.6, 5.4), 6.91-6.99 (m) , 7.11-7.33 (m); Anal. ( C43H48FN306) C, H, N.

Preparación del intermediario etil-3- {Boc-L- (2-naft) -NCH3-L- (4-F-Phe) -L- (Tr-Gln) } -E-propenoato Una solución de HCl en 1,4-dioxano (4.0M, 3 mL) se adicionó a una solución de e 111 - 3- ( Boc-NCH3-L- ( 4 - F- Phe) -L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato (0.388 g, 0.54 mmol, 1 equiv.) en el mismo disolvente (3 mL) a 23°C. Después de 2 h, los volátiles se removieron a presión reducida. El residuo se disolvió en DMF (10 mL), se enfrió a 0°C y se adicionaron secuencialmente DIEA (0.188 mL, 1.08 mmol, 2 equiv.), Boc-L- ( 2 -na f t ) -OH (0.170 g, 0.54 mmol, 1.0 equiv . ) y HATU (0.205 g, 0.54 mmol, 1 equiv.) . La mezcla de reacción se agitó a 23°C durante 1 h. Los volátiles se removieron a presión reducida, y el residuo resultante se colocó en EtOAc (50 mL) y se lavaron con HCl 0.5N (50 mL) , NaHC03 saturado (50 mL) y salmuera (50 mL) . La capa orgánica se secó con Na2S04, se concentró y el residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (EtOAc al 40% en hexano) para proporcionar et?l-3- (Boc-L- (2-naft ) -NCH3-L- (4- F-Phe) -L- (Tr-Gln) )-E-propenoato (0.437 g, 88%) como la espuma blanca; IR (cm" 1 ) 1656, 1509, 1162; ?H RMN (CDC13, mezcla de isómeros) d 0.88 (t, J = 7.2), 1.27 (s), 1.30 (s), 1.48-1.58 (m), 1.64-1.67 (m) , 1.97-2.11 (m) , 2.23-2.28 (m), 2.42-2.50 (m) , 2.62-2.69 (m), 2.80 (s), 2.90 (s), 3.00-3.07 (m), 3.15-3.20 (m) , 3.25-3.32 (m), 4.18 (q, J = 7.2), 4.42-4.46 (m) , 4.53-4.56 (m), 4.61-4.66 (m), 4.72-4.82 (m), 5.94-5.00 (m) , 5.63 (d, J = 15.6), 6.12 (d, J = 15.6), 6.60 (dd, J = 15.6, 5.4), 6.75-6.89 (m), 6.70-7.08 (m), 7.19-7.30 (m) , 7.41-7.50 (m), 7.70-7.82 (m), 8.80 (d, J = 8.4); Anal. ( C56H59FN407) C, H, N.

Preparación del producto etil-3-{ (51 -metilisoxazol-3 ' -carbonil) -L- (2-naft) -NCH3-L- (4 -F-Phe) -L-Gln)-E-propenoato Se convirtió et?l-3- { Boc-L- ( 2-naft ) -NCH3-L- ( 4-F-Phe)-L-(Tr-Gln) }-E-propenoato al producto et ?l-3- { ( 5 ' -me t?lisoxazol-3' -carbonil) -L-(2-naft) -NCH3-L-(4-F-Phe) -L-Gln ) -E-propenoato de una manera análoga a la descrita - *¿»"-aa«asa-a en el Ejemplo 2 anterior para la conversión de et?l-3-{ Boc-L-Leu-L-Phe-L- (Trn-Gln) } -E-propenoato al producto et?l-3- { (5'-met?l?soxazol-3'-carbon?l)-L-Leu-L-Phe-L-Gln} -E-propenoato; IR (cm 1) 3296, 1654, 1510; XH RMN (DMSO-d6, mezcla de isómeros) d 1.17-1.24 (m), 1.62-1.78 (m) , 2.04-2.15 (m), 2.38 (s), 2.71-2.79 (m), 2.84 (s), 2.87-2.92 (m) , 3.03 (s), 3.15 (d, J = 7.5), 3.98- 4.06 (m) , 4.08-4.12 (m), 4.38-4.42 (m), 4.94 (m), 5.03- 5.07 (m) , 5.09-5.18 (m) , 5.66-5.82 (m) , 6.42 (s) , 6.43 (s) , 6.66-6.81 (m) , 6.88-6.94 (m) , 7.01-7.06 (m) , 7.13-7.17 (m) , 7.24-7.34 (m) , 7.43-7.46 (m) , 7.56 (s) , 7.76-7.84 (m) , 8.08 (d, J = 7.8) , 8.60 (d, J = 8.4) , 9.01 (d, J = 7.2) ; Anal. ( C37H40FN5O7'0.75H20 ) C, H, N.

Ejemplo 1 - Preparación del compuesto A-9: et l-3- { (5 ' -met?l?soxazol-3 ' -carbonil) -L-H?s-NCH,-L- ( -F-Phe) -L-Gln } -E-propenoato (A-9) Se convirtió et il-3- { Boc-NCH3-L- ( 4 - F- Phe ) -L- ( Tr-Gln) } -E-propenoato (descrito en el Ejemplo 13 anterior) al producto et i 1 - 3- { ( 5 ' -met i lisoxa zol- 3 ' -carboni 1 ) -L-His-NCH3-L- ( -F-Phe ) -L-Gln ) -E-propenoato de una manera análoga a la preparación del producto etil-3-{ (5'-met?lisoxazol-3' -carbonil) -L- (2-naft) -NCH3-L- (4 -F-Phe) -L-Gln } -E-propenoato descrito en el Ejemplo 13 anterior (utilizando Boc-L- ( Tr-Hi s ) -OH en lugar de Boc-L-{2-naft)-OH); IR (cr1) 3302, 1665, 1202; :H RMN (DMSO-d6, mezcla de isómeros) d 1.21 (t, J = 7.2) 1.70-1.78 (m), 2.05-2.09 (m) , 2.41 (s), 2.44 (s), 2.69-3.26 (m), 4.11 (q, J = 7.2), 4.38-4.53 (m), 5.07-5.19 (m), 6.51-5.84 (m) , 6.44 (s), 6.48 (s), 6.63-6.86 (m), 6.89-7.01 (m), 7.09-7.19 (m) , 7.23-7.42 (m), 8.02 (d, J = 8.7), 8.15 (d, J = 8.1), 8.59 (d, J = 8.7), 8.94 (s), 9.04 (s), 9.14 (d, J = 6.9); Anal. (C30H36FN7O7-TFA-H2O ) C, H, N.

Ejemplo 15 - Preparación del compuesto A-12: etil-3-( (5 ' -metilisoxazol-3 ' -carbonil) -L-Leu-NCH3-L- (4-F-Phe) -L-Gln ) -E-propenoato Se convirtió et i 1 - 3- ( Boc-NCH3-L- ( 4 - F- Phe ) -L- ( Tr-Gln) } -E-propenoato (descrito en el Ejemplo 13 anterior) al producto e t i 1 -3- { ( 5 ' -met il i soxa zol- 3 ' -carboni 1 ) -L-Leu-NCH3-L- ( 4 -F-Phe ) -L-Gln ) -E-propenoato de una manera análoga a la preparación del producto etil-3-{ (5'-metil?soxazol-3' -carbonil) -L- (2-naft) -NCH3-L- ( 4-F- Phe ) -L-Gln ) -E-propenoato descrito en el Ejemplo 13 anterior (utilizando Boc-L-Leu-OH en lugar de Boc-L- ( 2-naft ) -OH); IR (cm"1) 3325, 1663, 1171; !H RMN (DMSO-d6, mezcla de isómeros) d 0.64-0.67 (m), 0.86-0.88 (m), 1.17-1.23 (m) , 1.32-1.40 (m), 1.59-1.75 (m), 1.98-2.07 (m), 2.42 (s), 2.45 (s), 2.08 (s), 2.86-2.93 (m), 2.99 (s), 3.12-3.20 (m) , 4.05-4.15 (m) , 4.41-4.50 (m), 4.82-5.07 (m), 5.62 (d, J = 15.9), 5.86 (d, J = 15.9), 6.51 (s), 6.53 (s), 6.68-6.73 (m) , 6.93-6.99 (m), 7.09-7.21 (m), 7.26- 7.31 (m) , .03 (d, J = 7.8) , 8.08 (d, J = 7.8) , 8.41 (d, J = 8.1) , .94 (d, J = 7.2) ; Anal. ( C30H40FN5O7- 1.25CH2C12) C, H, N .

Ejemplo 16 - Preparación del compuesto A-13: etil-3-{ (5 ' -metilisoxazol-3 ' -carbonil) -L- (1-naf ) -NCH,-L- (4-F-Phe) -L-Gln) -E-propenoato Se convirtió et 11 - 3- { Boc-NCH3-L- ( 4 -F- Phe ) -L- ( Tr-Gln) } -E-propenoato (descrito en el Ejemplo 13 anterior) al producto et i 1- 3- { ( 5 ' -met ilisoxa zol- 3 ' -carbonil ) -L-( 1-naft ) -NCH3-L- ( 4-F-Phe) -L-Gln) -E-propenoato de una manera análoga a la preparación del producto etil-3-{ (5' -metilisoxazol-3' -carbonil) -L-(2-naft) -NCH3-L-(4-F-Phe ) -L-Gln ) -E-propenoato descrito en el Ejemplo 13 anterior, pero utilizando Boc-L- ( 1 -na f t ) -OH en lugar de Boc-L- (2-naft) -OH) ; IR (cr1) 3308, 1659, 1169; ?H RMN (DMSO-d6, mezcla de isómeros) d 1.16-1.23 (m), 1.61- 1.78 (m) , 1.98-2.02 (m) , 2.07-2.12 (m) , 2.41 (s) , 2.43 (s) , 2.77 (s) , 2.78 (s) , 2.84-2.87 (m) , 2.93-3.03 (m) , 3.08-3.14 (m) , 3.31-3.38 (m) , 4.00-4.15 (m) , 4.27-4.32 (m) , 4.40-4.46 (m) , 4.58-4.64 (m) , 5.07-5.17 (m) , 5.57-5.73 (m) , 6.45 (s) , 6.57-6.61 (m) , 6.71-6.88 (m) , 6.89-6.91 (m) , 7.11-7.19 (m) , 7.31-7.38 (m) , 7.50-7.58 (m) , 7.73-7.78 (m) , 7.83-7.94 (m) , 8.08 (d, J = 8.1) , 8.13 (d, J = 8.7) , 8.62 (d, J = 8.1) , 9.14 (d, J = 8.1) ; Anal. (C37H 0FN5O7) C, H, N.

Ejemplo 17 - Preparación del compuesto B-2 : etil-3-( (5 ' -me ilisoxazol-3 ' -carbonil) -L- Va lili (COCH,)-L-(4-F-Phe) -L- ( (S) -Pirrol-Ala) ) -E-propenoato Preparación del intermediario etil-3- { Boc-L- Val? (COCH2) -L- (4 -F-Phe) -L-{ (N-2 , 4 -dimetoxibencil) - (S) -Pirrol-Ala } -E-propenoato Este intermediario se preparó a partir de ter butil -aa¿-"- --fr- éster del ácido { 2-met il - ÍS- ( R- ( 4 -f luorobencil ) -5-oxotetrahidrofuran-2S-il) propil} -carbámico (descrito en el Ejemplo 10) y et i 1 - 3 - ( Boc-L- ( ( N-2 , 4 -dimetoxibencil) - (S) -Pirrol-Ala) } -E-propenoato (descrito en el Ejemplo 6) de una manera análoga a la preparación de etil-3- (Boc-L- (4-Me-Phe)-L- (Tr-Gln) }-E-propenoato (Ejemplo 4) anterior; R£ = 0.24 (EtOAc al 60% en hexanos) ; IR (cr1) 3293, 1717, 1668; [H RMN (CDC13) d 0.82 (d, 3H, J = 6.8) , 1.01 (d, 3H, J = 6.8) , 1.30 (t, 3H, J = 7.2) , 1.51-1.65 (m, 2H) , 1.84-1.96 (m, 1H) , 2.16-2.37 (m, 2H) , 2.47 (s, 3H) , 2.49-2.55 (m, 3H) , 2.85-3.01 (m, 2H) , 3.12-3.25 (m, 3H) , 3.77 (s, 3H) , 3.78 (s, 3H) , 4.18 (q, 2H, J = 7.2) , 4.31-4.49 (m, 3H) , 4.65-4.70 (m, 1H) , 5.53 (dd, 1H, J = 15.7, 1.4) , 6.39-6.44 (m, 3H) , 6.63 (dd, 1H, J = 15.7, 5.4) , 6.93-7.01 (m, 2H) , 7.05-7.10 (m, 1H ) , 7.12-7.18 (m, 2H) , 7.24 (d, 1H, J = 8.7) , 7.47 (d, 1H, J = 6.5) ; Anal. (C4oH49FN4O9-0.5H20) C, H, N.

Preparación del producto etil-3-{ (51 -me til isoxazol -3 ' -carbonil) -L-Valf (COCH2 ) -L- (4-F- Phe) -L- ( (S) -Pirrol-Ala) } -E-propenoato Se convirtió e 111 -3 - f Boc-L-Va lf ( COCH2) -L- ( 4 -F-Phe) -L- ( (N-2, 4-dimetoxibencil) - (S) -Pirrol-Ala) }-E- ,?¡ .:i¡... 3tta_ propenoato de una manera análoga a la conversión de etil-3- ( Boc-L-Val-L- ( 4-F-Phe) -L- ( (N-2 , 4 -dimetoxibencil) - (S) -Pirrol-Ala) J-E-propenoato al producto etil-3- ( ( 5 ' -met?lisoxazol-3 ' -carbonil ) -L-Val-L-(4-F-Phe)-L-((S) -Pirrol-Ala) }-E-propenoato descrito en el Ejemplo 6 anterior: pf = 178 - 181 ° C ; R£ = 0.49 (CH30H al 10% en CHC13); IR (cr1) 3295, 1678 br; :H RMN (CDC13) d 0.85 (d, 3H, J = 6.8), 1.03 (d, 3H, J = 6.5), 1.30 (t, 3H, J = 7.2), 1.51-1.62 (m, 1H), 1.71-1.93 (m, 2H) , 2.27-2.40 (m, 2H), 2.47 (s, 3H), 2.51-2.75 (m, 3H), 2.82-2.98 (m, 2H), 3.11-3.24 (m, 1H), 3.26-3.42 (m, 2H) , 4.18 (q, 2H, J = 7.2), 4.41-4.53 (m, 1H), 4.63-4.72 (m, 1H), 5.50 (d, 1H, J = 15.4) , 5.88 (s, 1H), 6.39 (s, 1H) , 6.63 (dd, 1H, J = 15.4, 5.3) , 6.92-7.03 (m, 2H) , 7.08-7.31 (m, 4H) ; Anal. ( C31H39FN407) C, H, N.

Ejemplo 18 - Preparación del compuesto C-2: etil-3-( (5 ' -metilisoxazol-3 ' -carbonil) -L-Val-O-L- (4-F-Phe) -L-( (S) -Pirrol-Ala) ) -E-propenoato Preparación del intermediario (5 ' -metilisoxazol-3 ' -carbonil) -L-Val-O-L- (4-F-Phe) -OCH2CH=CH2 Se disolvió Boc-L-Val-O-L- ( 4 - F-Phe ) -OCH2CH=CH2 (preparado como se describió en el Ejemplo 12 anterior, 0.91 g, 2.15 mmol) en 1,4-dioxano (28 mL) y se adicionó una solución de HCl en 1,4-d?oxano (4.0 M, 14 mL) . La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 14 h. El disolvente se removió por evaporación y el residuo se colocó en EtOAc (50 mL) . La fase orgánica se lavó con solución de NaHC03 saturado (50 mL) y después salmuera (50 mL) , se secó (MgS04) y el disolvente se removió para dar 0.66 g (cuant.) de un aceite claro.

Este material se disolvió en CH2C12 (20 mL) . Se adicionó piridina (0.17 mL, 2.08 mmol), y la reacción se enfrió a 0 ° C . Se adicionó cloruro de 5-met i li soxa zol -3-carboni lo (0.33 g, 2.27 mmol) disuelto en 2 mL de CH2C12, y la reacción se calentó a temperatura ambiente durante 1 h. El disolvente se removió i n va c u o , y el residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea eluyendo con una gradiente de EtOAc al 5- 10 % /hexanos . Se obtuvo el producto (51-metilisoxazol-3 ' -carbonil) -L-Val-O-L- (4-F-Phe) -OCH2CH=CH2 como 0.70 g (82%) de un sólido cristalino blanco: R£ = 0.20 (EtOAc al 30%/hexanos) ; IR (KBr) 1745, 1661, 1553, 1186 cr1; ?H RMN (DMSO-d6) d 0.85-0.92 (m, 6H), 2.14-2.21 (m, 1H), 2.46 (s, 3H), 3.05-3.19 (m, 2H), 4.32-4.37 (m, 1H), 4.53-4.60 (m, 2H), 5.16-5.28 (m, 3H), 5.74-5.85 (m, 1H), 6.56 (s, 1H), 7.01-7.07 (m, 2H) , 7.26-7.29 (m, 2H), 8.76 (d, 1H, J = 8.1) ; Anal. (C22H25N206F) C, H, N.

Preparación del intermediario etil-3-{ (5 ' -metilisoxazol-3 ' -carbonil) -L-Val-O-L- (4-F-Phe) -L- ( (N-2 , 4 -dimetoxibencil) - (S) -Pirrol-Ala) ) -E-propenoato Se disolvió ( 5 ' -met i 1 isoxa zol-3 ' -carboni 1 ) -L-Val -O-L- (4-F-Phe) -OCH2CH=CH2 (0.67 g, 1.55 mmol) en THF (15 mL) . Se adicionó t et r acis ( t r i f eni 1 fos f ina ) de paladio (0) (0.036 g, 0.03 mmol), y la mezcla de reacción se agitó durante 5 minutos. Se adicionó gota a gota morfolina (0.16 mL, 1.86 mmol), y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 6 h. El disolvente se removió ín va c u o , y se colocó en 50 mL de Et20. El producto se extrajo dos veces en solución NaHC03 saturado (50 mL), y la fase orgánica se desechó. La fase acuosa se acidificó a pH = 1-2 con HCl al 10%, y el producto se extrajo dos veces con EtOAc (40 mL) . La fase orgánica se lavó con salmuera (50 mL), se secó (MgS04), y se concentró para dar 0.57 g (95%) de un aceite que cristalizó al reposar.

Una porción de este material (0.19 g, 0.50 mmol) se disolvió en DMF (3 mL) . Se adicionó diisopropiletilamina (0.34 mL, 1.0 mmol), seguido por etil-3-(H2N-L-((N-2, 4 -dimetoxibencil ) - (S) -Pirrol-Ala) ) -E-propenoato • HCl (preparado como se describió en los Ejemplos 4 y 6 anteriores, 0.19 g, 0.50 mmol) . La reacción se enfrió a 0 ° C . Se adicionó HATU (0.19 g, 0.50 mmol), y la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente. La DMF se removió i n va c u o . El residuo se disolvió con EtOAc (30 mL), y la fase orgánica se lavó consecutivamente con solución de HCl al 10% (25 mL), solución saturada de NaHC03 (25 mL), H20 (25 mL) y salmuera (25 mL) . El disolvente se seco (MgS04) y se filtro, y el residuo se purifico por cromatografía de columna instantánea (MeOH al 0- 1.0% /CH2C12 ) para dar et?l-3- ( (5 '-met?l?soxazol-3'-ca rbonil) -L-Val-O-L- (4-F-Phe) -L- ( (N-2, 4-d?metox?benc?l) - (S) -Pirrol-Ala) }-E-propenoato (0.27 g, 72%) como un solido amorfo blanco: R£ = 0.18 (MeOH al 3%/CHCl3); IR (KBr) 1671, 1547, 1510, 1209 cr1; XH RMN (DMSO-d6) d 0.88 (d, 3H, J = 7.0), 0.93 (d, 3H, J = 7.0), 1.20 (t, 3H, J = 7.0), 1.41-1.58 (m, 2H) , 1.79-1.98 (m, 2H), 2.07-2.24 (m, 2H), 2.44 (s, 3H), 3.01-3.13 (m, 4H), 3.73 (s, 3H), 3.76 (s, 3H), 4.09 (q, 2H, J = 7.0), 4 24 (s, 2H), 4.30 (t, 1H, J = 7.4), 4.45-4.48 (m, 1H), 5.12 (t, 1H, J = 6.3), 5.59 (d, 1H, J = 15.8), 6.45 (dd, 1H, J = 8.5, 2.2), 6.54-6.56 (m, 2H), 6.73 (dd, 1H, J = 15.5, 4.8), 6.89-6.95 (m, 3H), 7.20 (d, 1H, J = 8.5), 7.22 (d, 1H, J = 8.5), 8.08 (d, 1H, J = 8.8), 8.89 (d, 1H, J = 7.4) .

Preparación de producto et?l-3- { (5 ' -met?l?soxazol-3 ' carbonil) -L-Val-O-L- (4 -F-Phe) -L- ( (S) -Pirrol-Ala) }-I propenoato Se disolvió et ll - 3 - { ( 5 ' -met ll i soxa zol - 3 ' carbonil ) -L-Val-O-L- ( 4-F-Phe ) -L- ( (N-2 , 4 dimetilbencil )- (S) -Pirrol-Ala) } -E-propenoato (0.25 g, 0.33 mmol) en CHC13 (6 mL) . Se adicionaron dos gotas de agua, seguido por DDQ (0.10 g, 0.43 mmol) . La reacción se calentó a 50-55°C durante 8 h. Debido al enfriamiento, la mezcla de reacción se vertió en EtOAc (30 mL) . La fase orgánica se lavo con 30 mL de solución de NaHC03/NaOH 1 N 2:ly después salmuera (30 mL), se seco (MgS04) y se concentro. El residuo se sometió a cromatografía de columna instantánea eluyendo con MeOH al 0-2%/CH2Cl2. Se obtuvo el producto et?l-3-{ (5'-met?l?soxazol-3'-carbon?l) -L-Val-O-L- (4-F-Phe)-L-((S) -Pirrol-Ala) } -E-propenoato como 0.18 g (90%) de un solido blanco amorfo: R£ = 0.09 (MeOH al 3%/CHCl3); IR (KBr) 1680, 1549 cr1; :H RMN (DMSO-d6) d 0.91 (d, 3H, J = 6.6), 0.95 (d, 3H, J = 6.6), 1.20 (t, 3H, J = 7.0), 1.36-1.44 (m, 1H), 1.56-1.61 (m, 1H), 1.74-1.82 (m, 1H) , 1.94-1.99 (m, 2H), 2.18-2.25 (m, 1H), 2.45 (s, 3H) , 2.98-3.18 (m, 4H), 4.09 (q, 2H, J = 7.0), 4.28-4.32 (m, 1H), 4.43-4.46 (m, 1H), 5.12 (m, 1H), 5.58 (d, 1H, J = 15.8) , 6.56 (s, 1H) , 6.72 (dd, 1H, J = 15.8, 4.8) , 6.91-6.97 (m, 2H) , 7.21 (d, 1H, J = 5.9) , 7.23 (d, 1H, J = 5.9) , 7.59 (s, 1H) , 8.06 (d, 1H, J = 8.8) , 8.92 (d, 1H, J = 7.4) ; Anal. ( C30H37N„OBF ) C, H, N.

Ejemplo 19 - Preparación del compuesto B-3: 2- 5'-metilisoxazol-3 ' -carbonil) -L-Valil; (COCH,) -L- ( -F-Phe) -L- ( (S) -Pirrol-Ala) )-E- (a-vinil-?-butirolactona) Preparación del intermediario Boc-L- { (N-2 , 4-di etoxibencil) - (S) -Pirrol-Ala} -E- (a-vinil-?-butirolac ona) Se oxidó ter-butil éster del ácido (lS,3'S)-(2-(l'-(2", 4 "-dimetoxibencil) -2 '-oxo-pirrolidin-3'-il)-l-hidroximetiletil } -carbámico (0.360 g, 0.881 mmol, 1 equiv.) al aldehido correspondiente de la manera descrita en la preparación de et i 1-3- ( Boc-L- ( ( N-2 , 4 -dimetoxibencil )-( S ) -Pirrol-Ala ) } -E-propenoato (Ejemplo 6) . Este aldehido se combinó con 3 - ( t r i feni 1 -?5-f os faní 1 iden ) -dihidrofuran-2 -ona (preparado de una manera análoga a la descrita en Baldwin et al., J. Org.

Ch em . 1971, vol. 36, 1441) (0.320 g, 0.924 mmol, 1.05 equiv.) en una mezcla de glicol dimetil éter (10 mL) y DMF (2 mL) . La mezcla de reacción de calentó en un baño de aceite a 100°C durante 1.5 h, se dejó enfriar a 23 ° C durante toda la noche, y después se diluyó con MTBE (200 mL) , se lavó con agua (20 mL) y salmuera (20 mL) , se secó con Na2S04 y se evaporó. El residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (CH3OH al 2.5% en CH2C12, después EtOAc al 67% en CH2C12) para dar Boc-L-( (N-2, 4-d?metox?bencil) - (S) -P?rrol-Ala}-E- (a-vinil-?-butirolactona) como un aceite (0.250 g, 60%); Rf = 0.50 (EtOAc al 67% en CH2C12); IR (cr1) 3307, 1754, 1678; :H RMN (CDC13) d 1.42 (s, 9H), 1.46-1.68 (m, 2H), 2.02-2.13 (m, 1H), 2.18-2.30 (m, 1H), 2.44-2.56 (m, 1H), 2.91-3.04 (m, 1H), 3.15-3.27 (m, 3H), 3.80 (s, 6H), 4.34-4.43 (m, 5H), 5.63-5.69 (m, 1H), 6.42-6.47 (m, 2H), 6.48-6.53 (m, 1H), 7.09-7.13 (m, 1H) .

Preparación del producto 2- { (5 ' -metilisoxazol-3 ' -carbonil) -L-Val? (COCH2) -L- (4-F- Phe) -L- ( (S) -Pirrol-Ala) } -E- (a-vinil -?-butirolactona) Se convirtió Boc-L- ( N-2 , 4 -dimet oxibencí 1 )-( S ) - Pi r r ol -Ala } -E- ( a- vini 1 -?-but irolact ona ) al producto 2-( (5 ' -met?l?soxazol-3 ' -carbonil) -L-Val? (COCH2) -L- (4-F- Phe) -L- ( (S) -Pirrol-Ala) }-E- (a-vinil-?-butirolactona) de una manera análoga a la descrita anteriormente para la preparación del producto etil-3-{ ( 5 ' -met i 1 i soxa zol -3 '-carbonil) -L-Va lf(COCH2)-L- (4-F-Phe)-L-((S) -Pirrol-Ala) } -E-propenoato (Ejemplo 17) : R£ = 0.28 (CH3OH al 5% en CH2C12) ; IR (cr1) 3378 br, 1749, 1678 br; ? RMN (CDC13) d 0.84 (d, 3H, J = 6.8), 1.03 (d, 3H, J = 6.8), 1.45-1.55 (m, 1H), 1.75-2.00 (m, 2H), 2.25-2.43 (m, 2H) , 2.46-2.59 (m, 2H), 2.48 (s, 3H), 2.63-2.72 (m, 1H), 2.77-2.90 (m, 3H), 3.06-3.26 (m, 2H), 3.29-3.44 (m, 2H), 4.32-4.46 (m, 3H), 4.65-4.71 (m, lH), 5.72 (s, 1H) , 6.14-6.20 (m, 1H), 6.40 (s, 1H), 6.94-7.02 (m, 2H), 7.03-7.11 (m, 2H), 7.24 (d, 1H, J = 9.0) , 7.60 (d, 1H, J = 6.02); Anal. ( C31H37FN407 ) C, H, N.

Ejemplo 20 - Preparación del compuesto B-4 : etil-3-{ (5 ' -metilisoxazol-3 ' -carbonil) -L-Val (COCH?) -L- (4-F-Phe) -L- ( (S) -Piper-Ala) } -E-propenoato (B-4) Este producto se preparó en analogía al producto et?l-3- { (5' -metilisoxazol-3' -carbonil) -L-Val-L- (4-F-Phe ) -L- (( S ) -Piper-Ala ) } -E-propenoato (Ejemplo 9) y el producto etil-3-{ ( 5 ' -met i lisoxa zol - 3 ' -carboni 1 ) -L-Valf(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-Gln) -E-propenoato (Ejemplo 10) descrito anteriormente: pf = 161-162°C; R£ = 0.30 (CH3OH en CH2C12); IR (cr1) 3295, 1713, 1649; XH RMN (CDC13) d 0.84 (d, 3H, J = 6.8), 1.03 (d, 3H, J = 6.8), 1.30 (d, 3H, J = 7.2), 1.43-1.55 (m, 2H), 1.77-1.90 (m, 2H), 1.95-2.12 (m, 2H), 2.27-2.38 (m, 1H), 2.44-2.58 (m, 2H), 2.48 (s, 3H), 2.66-2.76 (m, 1H), 2.80-2.93 (m, 2H), 3.12-3.42 (m, 3H), 4.18 (q, 2H, J = 7.2), 4.39-4.49 (m, 1H), 4.65-4.72 (m, 1H), 5.50 (dd, 1H, J = 15.9, 1.6), 5.80 (s, 1H), 6.38-6.41 (m, 1H), 6.62 (dd, 1H, J = 15.9, 5.3), 6.94-7.02 (m, 2H), 7.08-7.28 (m, 4H) .

Ejemplos 21 a 30 Para los Ejemplos 21-30, se prepararon los siguientes compuestos (A-14) a (A-23), respectivamente, usando los métodos de síntesis análogos a los descritos anteriormente para los compuestos de la fórmula I-A: (A-19) Ejemplo 31 - Preparación del Compuesto de Comparación #2 : etil-3- (Cbz-L-Leu-L-Phe-L-Gln) -E-propenoato ( Compuesto de comparación #2) ^g^^^^ ^^^^^^^^^^^^.

Preparación del intermediario [Boc-L- (Tr-Gln) ] -N (OMe) Me Se adicionó cloroformato de isobutilo (4.77 mL, 36.8 mmol, 1.0 equiv.) a una solución de N-a-Boc-?-tr it il-L-glut amina (18.7 g, 36.7 mmol, 1 equiv.) y 4-met i lmor f ol ina (8.08 mL, 73.5 mmol, 2.0 equiv.) en CH2C12 (250 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 20 minutos, y después se adicionó clorhidrato de N , O-dimet i lhidroxilamina (3.60 g, 36.7 mmol, 1.0 equiv.) . La solución resultante se agitó a 0°C durante 20 minutos y a 23°C durante 2 horas, y después se dividió entre agua (150 mL) y CH2C12 (2 x 150 mL) . Las capas orgánicas combinadas se secaron con Na2S04 y se concentraron. La purificación del residuo por cromatografía de columna instantánea (gradiente de elución de hexanos al 40-20% en EtOAc) proporcionó (Boc-L-(Tr-Gln) }-N(OMe)Me (16.1 g, 82%) como una espuma blanca: IR (cr1) 3411, 3329, 3062, 1701, 1659; :H RMN (CDC13) d 1.42 (s, 9H) , 1.63-1.77 (m, 1H), 2.06-2.17 (m, 1H), 2.29-2.43 (m, 2H), 3.17 (s, 3H), 3.64 (s, 3H), 4.73 (s, br, 1H), 5.38-5.41 (m, 1H), 7.20-7.31 (m, 15 H ) ; Anal. (C3jH37N305) , C, H, N.

Preparación del intermediario {Boc-L- (Tr-Gln) } -H Se adicionó hidruro de diisobutilaluminio (50.5 mL, de una solución 1.5M en tolueno, 75.8 mmol, 2.5 equiv.) a una solución de { Boc-L- ( Tr-Gln ) ) -N ( OMe ) Me (16.1 g, 30.3 mmol, 1 equiv.) en THF a -78°C y la mezcla de reacción se calentó a -78°C durante 4 h. Se adicionaron secuencialmente metanol (4 mL) y HCl 1.0 M (10 mL), y la mezcla se calentó a 23°C. La suspensión resultante se diluyó con Et20 (150 mL) y se lavó con HCl 1.0 M (3 x 100 mL) , NaHC03 saturado a la mitad (100 mL) y agua (100 mL) . La capa orgánica se secó con Na2S04, se filtró y se concentró para dar { Boc-L- ( Tr-Gln ) } -H crudo (13.8 g, 97%) como un sólido blanco: pf = 114 - 116 ° C ; IR (cr1) 3313, 1697, 1494; XH RMN (CDC13) d 1.44 (s, 9H), 1.65-1.75 (m, 1H) , 2.17-2.23 (m, 1H), 2.31-2.54 (m, 2H), 4.11 (s, br, 1H), 5.38-5.40 (m, 1H), 7.11 (s, 1H), 7.16-7.36 (m, 15H) , 9.45 (s, 1H) .

Preparación del intermediario etil-3- {Boc-L- (Tr-Gln) }-E-propenoato Se adicionó bi s ( t r imet il s i lil ) amida de sodio (22.9 mL de una solución 1.0 M en THF, 22.9 mmol, 1.0 equiv.) a una solución de f os fonoacetat o de trietílo (5.59 g, 22.9 mmol, 1.0 equiv.) en THF (200 mL) a -78°C, y la solución resultante se agitó durante 20 minutos a tal temperatura. El ( Boc-L- ( Tr-Gln ) } -H crudo (10.8 g, 22.9 mmol, 1 equiv.) en THF (50 mL) se adicionó por vía de cánula y la mezcla de reacción se agitó durante 2 horas a -78°C, se calentó a 0°C durante 10 minutos y se dividió entre HCl 0.5 M (150 mL) y una mezcla de EtOAc y hexanos 1:1 (2 x 150 mL ) . Las capas orgánicas combinadas se secaron con Na2S04 y se concentraron. La purificación del residuo por cromatografía de columna instantánea (EtOAc al 40% en hexanos) proporcionó etil-3- { Boc-L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato (10.9 g, 88%) como una espuma blanca: IR (cm"1) 3321, 1710; XH RMN (CDC13) d 1.27 (t, 3H, J = 7.2), 1.42 (s, 9H), 1.70-1.78 (m, 1H), 1.80-1.96 (m, 1H), 2.35 (t, 2H, J = 7.0), 4.18 (q, 2H, J = .2) , 4.29 (s, br, 1H), 4.82-4.84 (m, 1H), 5.88 (dd, 1H, J = 15.7, 1.6), 6.79 (dd, 1H, 15.7, 5.3), 6.92 (s, 1H) , 7.19-7.34 (m, 15H); Anal. ( C33H38N205 ) , C, H, N.

Preparación del intermediario etil-3- { Cbz-L-Leu-L-Phe-L- (Tr-Gln) ) -E-propenoato Una solución de HCl en 1,4-dioxano (4.0 M, 20 mL) se adicionó a una solución de etil- 3 -{ Boc-L- ( Tr-Gln )} -E-propenoato (1.0 g, 1.84 mmol, 1 equiv.) en el mismo disolvente (20 mL) a 23°C. Después de 3 horas, los volátiles se removieron a presión reducida. El residuo se disolvió en CH2C12 (50 mL) y se adicionaron secuencialmente Cbz-L-Leu-L-Phe-OH (0.759 g, 1.84 mmol, 1.0 equiv.), HOBt (0.373 g, 2.76 mmol, 1.5 equiv.), 4-metilmorfolina (0.809 mL, 7.36 mmol, 4.0 equiv.) y EDC (0.529 g, 2.76 mmol , 1.5 equiv.) . La mezcla de reacción se agitó a 23°C durante 18 horas, y después se dividió entre agua (150 mL) y EtOAc (2 x 150 mL) . Las capas orgánicas combinadas se secaron con Na2S04 y se concentraron. La purificación por cromatografía de columna del residuo (CH30H al 5% en CH2C12) proporcionó etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L- (Tr-Gln) } -E-propenoato (1.25 g, 83%) como un sólido blanco: pf = 192-194°C; IR (cr1) 3295, 1696, 1678, 1655, 1519; XH RMN (CDC13) d 0.84 (d, 3H, J = 6.5), 0.86 (d, 3H, J = 9.5), 1.24-1.32 (m, 1H), 1.28 (t, 3H, J = 7.2), 1.43-1.75 (m, 3H), 1.91-2.06 (m, 1H), 2.20-2.38 (m, 2H), 2.93-3.02 (m, 1H), 3.07-3.18 (m, 1H), 3.95-4.02 (m, 1H), 4.17 (q, 2H, J = 7.2), 4.43-4.55 (m, 2H), 4.82-4.95 (m, 2H), 5.69 (d, 1H, J = 15.7), 6.46 (d, 1H, J = 7.5), 6.60 (d, 1H, J = 8.1), 6.69 (dd, 1H, J = 15.7, 5.1), 7.09-7.38 (m, 27H); Anal. (C51H56N407) , C, H, N.

Preparación del producto etil-3- (Cbz-L-Leu-L-Phe-L-Gln) -E-propenoato Se adicionó ácido trifluoroacético (20 mL) a una solución de et il- 3- { Cbz-L-Leu-L- Phe-L- ( Tr-Gln ) } -E-propenoato (1.25 g, 1.49 mmol, 1 equiv.) y triisopropilsilano (1.53 mL, 7.47 mmol, 5.0 equiv.) en CH2C12 (20 mL) a 23°C, produciendo una solución amarillo claro. La mezcla de reacción se agitó durante 20 minutos a 23°C, tiempo durante el cual llegó a ser incolora. Se adicionó tetracloruro de carbono (20 mL), y los volátiles se removieron a presión reducida. El residuo se trituró con Et20 (20 mL) y el sólido blanco resultante se colectó por filtración a vacío, se lavó con Et20 (3 x 150 mL) y se secó con aire para proporcionar etil-3- (Cbz-L-Leu-L-Phe-L-Gln) -E-propenoato (0.717 g, 81%): Pf = 219-221°C; IR (cm"1) 3300, 1672, 1535; XH RMN (DMSO-d6) d 0.78 (d, 3H, J = 6.8), 0.82 (d, 3H, J = 6.5), 1.21 (t, 3H, J = 7.0), 1.25-1.37 (m, 2H) , 1.42-1.54 (m, 1H) , 1.58-1.80 (m, 2H) , 2.02-2.09 (m, 2H) , 2.84 (dd, 1H, J = 13.2, 8.9) , 2.97 (dd, 1H, J = 13.2, 5.8) , 3.93-4.01 (m, 1H) , 4.11 (q, 2H, J = 7.0) , 4.33-4.52 (m, 2H) , 4.97 (d, 1H, J = 12.3) , 5.04 (d, 1H, J = 12.3) , 5.64 (d, 1H, J = 15.9) , 6.69 (dd, 1H, J = 15.9, 5.4) , 6.76 (s, 1H) , 7.13-7.37 (m, 11H), 7.43 (d, 1H, J = 7.8), 7.99 (d, 1H, J = 8.1) 8.04 (d, 1H, J = 8.1); Anal. (C32H42N407), C, H, N.

Ejemplo 32 - Preparación del compuesto de comparación #3 : etil-3- (Cbz-L-Val-L-Phe-L-Gln) -E-propenoato (Compuesto de comparación #3) Preparación del intermediario etil-3- {Boc-L-Phe-L- (Tr-Gln) } -E-propenoato Una solución de HCl en 1,4-dioxano (4.0 M, 10 mL) se adicionó a una solución de et i 1 - 3- ( Boc-L- ( Tr-Gln ) }-E-propenoato (preparado como se describió en el Ejemplo 31, 3.05 g, 5.62 mmol, 1 equiv.) en el mismo disolvente (20 mL) a 23°C. Después de 3 horas, los volátiles se removieron a presión reducida. El residuo se disolvió en CH2C12 (50 mL) y se adicionaron secuencialmente Boc- L-Phe-OH (1.49 g, 5.62 mmol, 1.0 equiv.), HOBt (0.911 6.74 mmol, 1.2 equiv.), 4 -met ílmorfolina (1.85 mL, 16.8 mmol, 3.0 equiv.) y EDC (1.29 g, 6.73 mmol, 1.2 equiv. ) . La mezcla de r eacción se agitó a 23°C durante 18 horas, y después se dividió entre agua (150 mL) y EtOAc (2 x 150 mL) . Lae capas orgánicas combinadas se secaron con Na2S04 y se concentraron. La purificación cromatográfica del resiLduo (gradiente de elución, EtOAc al 40-50% en hexanos) piroporcionó etil- 3 -( Boc-L- Phe-L-(Tr-Gln) } -E-propenoato (2.77 g, 71%) como una espuma blanca: IR (cm"1) 3306 1706, 1661; H RMN (CDC13) d 1.29 (t, 3H, J = 7.2) , 1.38 ((s, 9H), 1.65-1.76 (m, 1H), 1.87-1.99 (m, 1H), 2.25-2.27 (m, 2H), 2.94-3.01 (m, 2H), 4.14-4.26 (m, 3H), 4.48-4.53 (m, 1H), 4.95 (s, br, 1H), .64 (d, 1H, J = 15.8) , 6.29 (d, 1H, J = 8.1) , 6.64 (dd, 1H, J = 15.8, 5.4), 6 80 (s, br, 1H) , 7.14-7.32 (m, 20H) ; Anal . (C42H47N306) , C, H, N.

Preparación del intermediario etil-3- { bz-L-Val-L-Phe-L- (Tr-Gln) } -E-propenoato Una solución de HC! en 1,4-dioxano (4.0 M, 8 mL) se adicionó a una solucí ón de et?l-3- ( Boc-L-Phe-L- (Tr-Gln) } -E-propenoato (0.296 g, 0.429 mmol, 1 equiv.) en el mismo disolvente (1C mL) a 23°C. Después de 3 horas, los volátiles se removieron a presión reducida. El residuo se disolvió en CH2C12 (10 mL) y después se adicionaron secuencialmente Cbz-L-Val-OH (0.108 g, 0.430 mmol, 1.0 equiv.), HOBt (0.070 g, 0.518 mmol, 1.2 equiv.), 4 -met ilmor fol ina (0.142 mL, 1.29 mmol, 3.0 equiv.) y EDC (0.099 g, 0.516 mmol, 1.2 equiv.) . La mezcla de reacción se agitó a 23°C durante 4 horas, y después se dividió entre agua (100 mL) y EtOAc (2 x 100 mL) . Las capas orgánicas combinadas se secaron con Na2S04 y se concentraron. La purificación cromatográfica del residuo (gradiente de elución, CH3OH al 3% en CH2C12) proporcionó et il- 3 - { Cbz-L-Va 1-L-Phe-L- ( Tr-Gln ) }-E-propenoato (0.220 g, 62%) como un sólido blanco: pf = 195-198°C; IR (cr1) 3284, 1689, 1646; XH RMN (CDC13) d 0.69 (d, 3H, J = 6.9), 0.82 (d, 3H, J = 6.5), 1.28 (t, 3H, J = 7.2), 1.63-1.74 (m, 1H), 1.96-2.02 (m, 2H), 2.22-2.35 (m, 2H), 2.93 (dd, 1H, J = 14.0, 7.6), 3.10 (dd, 1H, J = 14.0, 6.7), 3.81-3.85 (m, 1H), 4.17 (q, 2H, J = 7.2), 4.48-4.58 (m, 2H), 4.87 (d, 1H, J = 12.0), 4.94 (d, 1H, J = 12.0) , 5.06 (d, 1H, J = 6.9) , 5.67 (d, lH, J = 15.6) , 6.43 (d, 1H, J = 7.5) , 6.63-6.72 (m, 2H) , 7.10-7.40 (m, 26H) ; Anal. ( C50H54N4O7) , C, H, N.

Preparación del producto etil-3- (Cbz-L-Val-L-Phe-L-Gln) -E-propenoato Se adicionó ácido trifluoroacético (5 mL) a una solución de etil-3 -{ Cbz-L-Val-L-Phe-L- ( Tr-Gln ) } -E-propenoato (0.188 g, 0.229 mmol, 1 equiv.) y triisopropilsilano (0.300 mL, 1.46 mmol , 6.4 equiv.) en CH2C12 (10 mL ) a 23°C, produciendo una solución amarillo claro. La mezcla de reacción se agitó durante 20 min a 23°C, tiempo durante el cual llegó a ser incolora. Se adicionó tetracloruro de carbono (10 mL) , y los volátiles se removieron a presión reducida. El residuo se trituró con Et20 (20 mL) y el sólido blanco resultante se colectó por filtración a vacío, se lavó con Et20 (3 x 50 mL) y se secó con aire para proporcionar etil-3- (Cbz-L-Val-L-Phe-L-Gln) - E-propenoato (0.094 g, 71%) : pf = 240°C (desc.); IR (cr1) 3263, 1686, 1640; JH RMN (DMS0-d6) d 0.73 (d, 6H, J = 6.9), 1.21 (t, 3H, J = 7.2), 1.60-1.75 (m, 2H), 1.83-1.90 (m, 1H), 2.03-2.08 (m, 2H), 2.83 (dd, 1H, J = 13.6, 8.6), 2.96 (dd, 1H, J = 13.6, 6.2), 3.79-3.84 (m, 1H), 4.10 (q, 2H, J = 7.2), 4.37-4.49 (m, 1H), 4.51-4.56 (m, 1H), 4.99 (d, 1H, J = 12.5), 5.06 (d, 1H, J = 12.5), 5.61 (d, 1H, J = 15.5), 6.67 (dd, 1H, J = 15.5, 5.5), 6.76 (s, 1H), 7.13-7.36 (m, 12H), 8.06 (d, 2H, J = 8.1); ^^j^^j Anal . (C31H40N4O7) , C, H, N .

Ejemplo 33 - Preparación del compuesto (A-24) : etil-3-í Cbz-L-Leu-L-Phe-L- ( (S) -Pirrol-Ala) ) -E-propenoato Preparación del intermediario etil-3- { Cbz-L-Leu-L-Phe-L- ( (N-2 , 4-dimetoxibencil) - (S) -Pirrol-Ala) }-E-propenoato Una solución de HCl en 1,4-d?oxano (4.0 M, 4 mL) se adicionó a una solución de et i 1- 3- { Boc-L- ( (N-2 , 4 -dimetoxibencil) - (S) -Pirrol-Ala) }-E-propenoato (preparado como se describió en el Ejemplo 6) (0.139 g, 0.292 mmol , 1 equiv. ) en 1,4-dioxano (4 mL) . Después de agitar 1.5 h, los volátiles se evaporaron para dar la sal de amina cruda, que se usó sin purificación adicional .

Esta sal se disolvió en CH2C12 (7 mL) y después se adicionaron secuencialmente Cbz-L-Leu-L-Phe-OH (0.156 g, 0.378 mmol, 1.3 equiv.), 4 -met ilmor fol ina (0.128 mL, 1.16 mmol, 4 equiv.), HOBt (0.067 g, 0.50 mmol, 1.7 equiv.) y EDC (0.095 g, 0.50 mmol, 1.7 equiv.) . Después de agitar 20 horas, la mezcla de reacción se vertió en salmuera (15 mL ) y se extrajo con CH3OH al 10% en CH2C12 (3 x 25 mL ) . Las fases orgánicas combinadas se secaron con Na2S04 y se evaporaron. La purificación del residuo por cromatografía de columna instantánea (gradiente de elución, EtOAc al 60% en hexanos) proporcionó etil-3-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-( (N-2, 4 -dimetoxibencil ) -(S) -Pirrol-Ala) ) -E-propenoato (0.158 g, 701) como una espuma: 'H RMN (CDC13) d 0.87-0.92 (m, 6H), 1.28 (t, 3H, J = 7.2), 1.46-1.68 (m, 5H), 1.74-1.86 (m, 1H), 1.97-2.19 (m, 2H), 3.02 (dd, 1H, J = 13.7, 5.6), 3.11-3.24 (m, 3H), 3.78 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 4.17 (q, 2H, J = 7.2), 4.20-4.30 (m, 2H), 4.35-4.45 (m, 2H), 4.82-4.90 (m, 1H), 5.07 (d, 1H, J = 12.3), 5.1 (d, 1H, J = 12.3), 5.36 (d, 1H, J = 7.8), 5.82 (dd, 1H, J = 15.6, 1.2), 6.42-6.46 (m, 2H), 6.72 (dd, 1H, J = 15.6, 5.3), 6.88 (d, 1H, J = 8.7), 7.09 (d, 1H, J = 9.0), 7.13-7.20 (m, 5H), 7.29-7.37 (m, 5H), 8.09 (d, 1H, J = 6.5) .

Preparación del producto etil-3- { Cbz-L-Leu-L-Phe-L-( (S) -Pirrol-Ala) } -E-propenoato Se combinaron et i 1 - 3- { Cbz -L-Leu-L- Phe-L- ( ( N-2 , 4 -dimetoxibencil)- (S)-Pirrol-Ala) }-E-propenoato (0.156 g, 0.202 mmol, 1 equiv.) y amonio nitrato de cerio (IV) (0.277 g, 0.505 mmol, 2.5 equiv.) en una mezcla de THF/agua 2:1 (3 mL) y se agitó 2 horas. La mezcla de reacción se vertió en salmuera (15 mL) y se extrajo con CH3OH al 10% en CH2C12 (3 x 25 mL) . Las fases orgánicas combinadas se secaron con Na2S04 y se evaporaron. La purificación del residuo por cromatografía de columna instantánea (gradiente de elución de CH30H al 2-5% en CH2C12) proporcionó et i 1- 3 -{ Cb z -L-Leu-L- Phe-L- (( S ) -Pirrol-Ala) } -E-propenoato (0.059 g, 47%) como un sólido casi blanco: H RMN (CDC13) d 0.85-0.92 (m, 6H), 1.28 (t, 3H, J = 7.2), 1.39-1.65 (m, 4H), 1.68-1.93 (m, 2H), 2.08-2.20 (m, 1H), 2.27-2.38 (m, 1H), 3.02-3.13 (m, 2H), 3.24-3.32 (m, 2H), 4.11-4.20 (m, 1H), 4.18 (q, 2H, J = 7.2), 4.47-4.58 (m, 1H), 4.81-4.89 (m, 1H), 5.05 (d, 1H, J = 12.1), 5.12 (d, 1H, J = 12.1), 5.26 (d, 1H, J = 8.1), 5.78 (dd, 1H, J = 15.7, 1.2), 6.23 (s, 1H), 6.72 (dd, 1H, J = 15.7, 5.3), 7.13-7.25 (m, 6H), 7.30-7.37 (m, 5H) , 7.54 (d, 1H, J = 7.2) .

Ejemplo 34 - Preparación del compuesto (A-25) : etil-3-{ Cbz -L-Val-L-Phe-L- ( (S) -Pirrol-Ala) ) -E-propenoato Preparación del intermediario etil-3- { Cbz-L-Val-L-Phe-L- ( (N-2 , 4-dimetoxibencil) - (S) -Pirrol-Ala) }-E-propenoato De una manera análoga a la usada para la conversión de etil-3- ( Boc-L- (Tr-Gln) } -E-propenoato a etil-3-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L- (Tr-Gln ) } -E-propenoato descrita en el Ejemplo 31, se acopló e t i 1 - 3 - ( Boc-L- ( ( N-2 , 4 -dimetoxibencil ) - (S ) -Pirrol-Ala) } -E-propenoato (preparado como en el Ejemplo 33) con Cbz-L-Val -L-Phe- OHparaproporcionaretil-3-(Cbz-L-Val-L-Phe-L-( (N-2,4-dimetoxibencil) - (S) -Pirrol-Ala) ) -E-propenoato ; IR (cm" x) 3288, 1699, 1652; XH RMN (CDC13) d 0.87 (d, 3H, J = 6.8) , 0.95 (d, 3H, J = 6.5) , 1.28 (t, 3H, J = 7.2) , 1.48-1.60 (m, 2H) , 1.70-1.84 (m, lH) , 1.95-2.20 (m, 3H) , 3.01 (dd, 1H, J = 13.4, 5.6) , 3.09-3.25 (m, 3H) , 3.78 (s, 3H) , 3.80 (s, 3H) , 4.03-4.10 (m, 1H) , 4.17 (q, 2H, J = 7.2) , 4.24 (d, 1H, J = 14.2) , 4.33-4.44 (m, 1H) , 4.38 (d, 1H, J = 14.2) , 4.85-4.94 (m, 1H) , 5.08 (d, 1H, J = 12.1) , 5.14 (d, 1H, J = 12.1) , 5.39 (d, 1H, J = 8.1) , 5.80 (dd, 1H, J = 15.6, 1.2) , 6.42-6.47 (m, 2H) , 6.70 (dd, 1H, J = 15.6, 5.3) , 6.81 (d, 1H, J = 9.0) , 7.11-7.20 (m, 6H) , 7.31-7.39 (m, 5H) , 8.11 (d, 1H, J = 6.2) ; Anal (C42H52N409) C, H, N.

Preparación del producto etil-3- { Cbz-L-Val-L-Phe-L-( (S) -Pirrol-Ala) } -E-propenoato Una suspensión de et ll- 3- ( Cb z-L-Val-L-Phe-L- ( ( N-2, 4-dimetoxibencil) - (?) -Pirrol-Ala) }-E-propenoato (0.215 g, 0.284 mmol, 1 equiv. ) , DDQ (0.071 g, 0.31 mmol, 1.1 equiv.) y agua (3 gotas ) en CHC13 (4 mL) se agitó 1 h a 23°C y después se calentó a reflujo durante 6 h. Después de enfriar durante toda la noche, se adicionó más DDQ (0.019 g, 0.084 mmol, 3 equiv.), y la mezcla se calentó a 67°C durante 1 h y después se evaporó. La purificación del residuo por cromatografía de columna instantánea (gradiente de elución, CH3OH al 2-5% en CH2C12 proporcionó material ligeramente impuro, que se disolvió en CH2C12 (70 mL) y se lavó con NaHC03 t Á 'y saturado (2 x 30 mL) y salmuera (30 mL), y después se seco con Na2S04 y se evaporo. El residuo se agito en Et20 (10 mL ) durante 20 minutos, y el solido se colecto por filtración y se seco a vacio para proporcionar et?l-3-{ Cbz -L-Val-L- Phe-L- ( (S)-P?rrol-Ala) } -E-propenoato (0.060 g, 35%) como un solido casi blanco: pf = 215-217°C; IR (cr1) 3413, 3295, 1696, 1649; JH RMN (CDC13) d 0.83 (d, 3H, J = 6.5), 0.91 (d, 3H, J = 6.8), 1.28 (t, 3H, J = 7.2), 1.50-1.59 (m, 1H), 1.70-1.91 (m, 2H), 2.03-2.17 (m, 2H), 2.26-2.38 (m, 1H), 3.03 (dd, 1H, J = 13.5, 6.4), 3.12 (dd, 1H, J = 13.5, 6.4), 3.21-3.34 (m, 2H), 3.96 (dd, 1H, J = 8.3, 6.4), 4.17 (q, 2H, J = 7.2) , 4.45-4.56 (m, 1H), 4.83-4.92 (m, 1H), 5.07 (d, 1H, J = 12.1), 5.13 (d, 1H, J = 12.1), 5.29 (d, 1H, J = 8.3), 5.77 (dd, 1H, J = 15.8, 1.2), 5.94 (s, 1H), 6.71 (dd, 1H, J = 15.8, 5.3), 6.95 (d, 1H, J = 9.0), 7.14-7.27 (m, 5H), 7.31-7.38 (m, 5H), 7.57 (d, 1H, J = 7.2); Anal (C33H 2N407) C, H, N.

Ejemplo 35 - Preparación del compuesto (A-26) : etil-3-í Cbz-L-Leu-L-Phe-L- ( (S) -Piper-Ala) ) -E-propenoato Preparación del producto etil-3- { Cbz-L-Leu-L-Phe-L-( (S) -Piper-Ala) } -E-propenoato Se convirtió ter-butil éster del ácido (lS,3'S)-(2-( 1'- (2", 4 "-dimetoxibencil) -2' -oxo-piperidin-3'-il)-l-hidroxi-met i let il } -carbámico (preparado como se describió en el Ejemplo 8) al producto et il - 3- { Cbz-L- Leu-L- Phe-L- ( (S) -Piper-Ala) ) -E-propenoato de una manera análoga a la conversión de ter-butil éster del ácido (lS, 3'S)-(2- (l'- (2",4"-dimetoxibencil)-2'-oxo-pirrolidin-3'-il) -1-hidroximetil-etil} -carbámico al producto etil-3-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((S) -Pirrol-Ala) } - E-propenoato como se describió en el Ejemplo 34: IR ( cm" 3422, 3307, 1713, 1649; :H RMN'(CDC13) d 0.86-0.92 (m, 6H), 1.28 (t, 3H, J = 7.2), 1.38-1.75 (m, 6H), 1.77-1.89 (m, 1H) , 1.96-2.11 (m, 2H) , 3.07 (d, 2H, J = 6.2) , 3.20-3.27 (m, 2H) , 4.13-4.24 (m, 1H) , 4.18 (q, 2H, J = 7.2) , 4.41-4.53 (m, 1H) , 4.76-4.85 (m, 1H) , 5.06 (d, 1H, J = 12.1) , 5.12 (d, 1H, J = 12.1) , 5.34 (d, 1H, J = 7.8) , 5.78 (dd, 1H, J = 15.6, 5.4) , 6.17 (s, 1H) , 6.70 (dd, 1H, J = 15.6, 5.4) , 7.00 (d, 1H, J = 8.4) , 7.13-7.27 (m, 6H) , 7.30-7.37 (m, 5H) , 7.83 (d, 1H, J = 6.8) ; Anal (C35H46N407- 0.5H20) C, H, N.

Ejemplo 36 - Preparación del compuesto (A-27) : etil-3- (Cbz-L-Leu-L- Phe-L- ( (R) -Pirrol-Ala) ) -E-propenoato Preparación del intermediario ter-butil éster del ácido (4S,4"R)-4-{3'- (4"-bencil-2"-oxo-oxazolidin-3"-il) -3 ' -oxopropil } -2 , 2 -dimetiloxazolidin- 3-carboxilico Se adicionaron secuencialment e trietilamma (6.43 mL, 46.1 mmol, 3.0 equiv.) y cloruro de pivaloilo (1.89 mL, 15.3 mmol, 1.0 equiv.) a una solución de ter-butil éster del ácido (4S)-4- (2 '-carboxietil) -2, 2-dimetiloxazolidin-3-carboxí lico (4.20 g, 15.3 mmol, 1 equiv.) en THF (300 mL) a 0°C. La mezcla de reacción brumosa se agitó a 0°C durante 3.5 h, y después se adicionaron secuencialmente cloruro de litio (0.716 g, 16.9 mmol, 1.1 equiv.) y ( R) - ( + ) -4 -bencí 1 -2 -oxazolidinona (2.59 g, 14.6 mmol , 0.95 equiv. ) . Después de calentar a 23°C durante 19 h, la mezcla de reacción se dividió entre HCl 0.5 M (150 mL) y EtOAc (2 x 150 mL) . Las capas orgánicas combinadas se lavaron con Na2C03 saturado a la mitad (150 mL ) , se secaron con MgS04 y se filtró por gravedad. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (EtOAc al 30% en hexanos) para dar el ter-butil éster del ácido (4S,4"R)-4-(3'-(4"-benc?l-2"-oxo-oxazolidin-3"-il)-3'-oxoprop?l}-2,2-dimet?loxazolidin-3-carboxílico (6.15 g, 97%) como un aceite incoloro: IR (cm"1) 2978, 1783, 1694; !H RMN (CDC13, mezcla de isómeros) d 1.46 (s), 1.58 (s), 1.63 (s), 2.01-2.05 (m), 2.72-3.13 (m), 3.29-3.33 (m) , 3.74-3.79 (m), 3.82-4.09 (m) , 4.11-4.25 (m) , 4.67-4.70 (m) , 7.20-7.37 (m); Anal. (C23H32N206) C, H, N.

Preparación del intermediario ter-butil éster del ácido (2,R,4S,4"R)-4-{2'-(4"-bencil-2"-oxo-oxazolidin-3"-carbonil)-pent-4'-enil}-2,2-dimetiloxazolidin-3-carboxilico Una solución de ter-butil éster del ácido (4S,4"R)-4-( 3 ' - (4"-bencil-2"-oxo-oxazolidin-3"-il) -3 ' -oxopropil}-2,2-dimetiloxazolidin-3-carboxílico (6.15 g, 14.2 mmol, 1 equiv.) en THF (25 mL) se adicionó a una solución de bi s ( t r imet i 1 si 1 i 1 ) amida de sodio (14.2 mL de una solución 1.0 M en THF, 14.2 mmol, 1.0 equiv.) en el mismo disolvente (50 mL ) a -78°C. La mezcla de reacción se agitó durante 15 minutos a -78°C y después se adicionó yoduro de alilo (3.90 mL, 42.6 mmol, 3.0 equiv. ) . Después de agitar un adicional de 2 h a -78°C, la mezcla de reacción se mantuvo a -45°C durante 2 h y después se dividió entre una mezcla 2:1 de NH4C1 saturado a la mitad y Na2S203 al 5% (200 mL ) y una mezcla 1:1 de EtOAc y hexanos (2 x 150 mL) . Las capas orgánicas combinadas se lavaron con H20 (100 mL) , se secaron con MgS04 y se filtraron por gravedad. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (EtOAc al 15% en hexanos) para proporcionar ter-butil éster del ácido (2'R,4S,4"R)-4-(2'-(4"-bencil-2"-oxo-oxazolidin-3"- carbonil) -pen - 4 ' - eni 1 } - 2 , 2-dimetiloxazolidin-3-carboxílico (3.12 g, 46%) como una espuma viscosa: IR (cm"1) 2978, 1782, 1685; *H RMN (CDC13, mezcla de isómeros) d 1.42 (s), 1.45 (s), 1.49 (s), 1.52 (s), 1.62-1.78 (m) , 1.80-2.01 (m), 2.23-2.49 (m), 2.51-2.56 (m), 2.76 (dd, J = 13.3, 9.7), 3.26 (dd, J = 13.3, 3.6), 3.58-3.64 (m) , 3.67 (d, J = 8.7), 3.90-3.98 (m), 4.02-4.15 (m) , 4.16-4.30 (m), 4.75-4.82 (m), 5.06-5.11 (m), 5.74-5.88 (m) , 7.22-7.36 (m); Anal. ( C26H36N206) C, H, N.

Preparación del intermediario ter butil éster del ácido (ÍS , 3 ' R) - {2- (1 ' - (2" , 4 "-dimetoxibencil) -2 ' -oxo-pirrolidin-3 ' -il) -1 -hidroximetiletil } -carbámico Se burbujeó ozono a través de una solución de ter-butil éster del ácido (2'R,4S,4"R)-4-(2'-(4"-bencil-2"-oxo-oxazolidin-3" -carbonil) -pent-4 ' -enil } -2, 2 -dimet iloxazolidin-3-carboxí lico (3.12 g, 6.60 mmol, 1 equiv.) en CH2C12 (200 mL) y CH3OH (0.535 mL, 13.2 mmol, 2.0 equiv.) a -78°C hasta que persistió un color azul. La mezcla de reacción después se purgó con argón hasta que llegó a ser incolora. Se adicionó sulfuro de metilo (4.85 mL, 66.0 mmol, 10 equiv.), y la mezcla se agitó a -78°C durante 3.5 h y después se mantuvo a 0°C durante 1 h adicional. Después de dividir la mezcla de reacción ^^^^^&; entre H20 (150 mL) y una mezcla 1:1 de EtOAc y hexanos (2 x 150 mL), las capas orgánicas combinadas se secaron con MgS04 y se filtraron por gravedad. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se utilizó inmediatamente sin purificación adicional.

El residuo anterior se disolvió en una mezcla 2:1 de THF y después EtOH (180 mL) a 23°C y se adicionaron secuencialment e clorhidrato de 2 , 4 -dimet oxibenci lamina (5.38 g, 26.4 mmol, 4.0 equiv.), acetato de sodio (2.17 g, 26.4 mmol, 4.0 equiv.) y cianobor ohidrat o de sodio (0.829 g, 13.2 mmol , 2.0 equiv.) . La suspensión resultante se agitó durante 19 h a 23°C y después se dividió entre HCl 0.5 M (150 mL ) y EtOAc (2 x 100 mL) . Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHC03 saturado a la mitad (100 mL ) , se secaron con Na2S04 y se concentraron a presión reducida. El residuo se pasó a través de una columna de gel de sílice corta (eluyendo con EtOAc al 50% en hexanos) para dar ter butil éster del ácido ( 3 ' R, 4 S ) - 4 - ( 1 ' - ( 2 " , 4 " -dimetoxibencí 1 ) -2 ' -oxo-pirrolidin-3 ' -ilmetil } -2 , 2-dimetil-oxazolidin-3-carboxílico contaminado con ( R) - ( + ) - 4 -benci 1-2-oxazolidinona .

Este material se disolvió en CH3OH (80 mL) y se adicionó TsOH-H20 (0.251 g, 1.32 mmol, 0.20 equiv.) . La mezcla de reacción se calentó a 50°C y se mantuvo a tal temperatura durante 4 h. Después de enfriar a 23°C, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida a volumen de -20 mL y se dividió entre NaHC03 saturado a la mitad (150 mL ) y una mezcla 9:1 de CH2C12 y CH3OH (2 x 150 mL) . Las capas orgánicas combinadas se secaron con Na2S04 y se concentraron a presión reducida. La purificación del residuo por cromatografía de columna instantánea (CH3OH al 3% en CH2C12) proporcionó ter butil ésterdelácido (lS,3'R)-{2-(l'-(2",4"-dimetoxibencil)-2 ' -oxo-pirrolidin-3 ' -il) -1-hidroximet iletil } -carbámico (0.92 g, 34%) como una espuma: IR (cm"1) 3347 (br), 2937, 1669; aH RMN (CDC13) d 1.44 (s, 9H), 1.62-1.77 (m, 2H) , 1.94-2.04 (m, 1H), 2.15-2.26 (m, 1H), 2.40-2.50 (m, 1H), 3.13-3.24 (m, 2H), 3.56-3.77 (m, 3H), 3.80 (s, 6H), 3.82-4.16 (m, 1H), 4.37 (d, 1H, J = 14.3), 4.45 (d, 1H, J = 14.3), 5.49 (d, 1H, J = 7.8 ) , 6.42-6.45 (m, 2H), 7.08-7.11 (m, 1H); Anal. ( C21H32N206 • H20 ) C, H, N.

Preparación del intermediario etil-3- { Boc-L- ( (N-2 , 4-dimetoxibencil) - (R) -pirrol-Ala) } -E-propenoato De una manera análoga a la conversión de ter butil éster del ácido ( ÍS , 3 ' S )-( 2 -( 1 '-( 2 ", 4 " -dimetoxibencil ) - 2 ' -oxo-p?rrolidin-3 ' -il ) -1-hidroximet iletil ) -carbámico a etil-3- (Boc-L- ( (N-2, 4 -dimetoxibencil) - (S) -pirrol-Ala ) } -E-propenoato descrita en el Ejemplo 33, se transformó el ter butil éster del ácido (lS,3'R)-(2-( 1 ' - (2" , 4 "-dimetoxibencil) -2 ' -oxo-pirrolidin-3 ' -il) - 1 -hidroximetiletil ) -carbámico en etil-3- { Boc-L- ( (N-2 , 4 -dimetoxibencil )-( R) -pirrol-Ala ) } -E-propenoato : IR ( cm" 1 ) 3307, 1713, 1674; :H RMN (CDC13) d 1.28 (t, 3H, J = 7.2), 1.45 (s, 9H), 1.57-1.82 (m, 2H), 2.02-2.19 (m, 2H), 2.42-2.55 (m, 1H), 3.11-3.25 (m, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 4.19 (q, 2H, J = 7.2), 4.32-4.50 (m, 3H), 5.97 (dd, 1H, J = 15.7, 1.4), 6.38 (d, 1H, J = 7.8), 6.42-6.47 (m, 2H), 6.86 (dd, 1H, J = 15.7, 5.1), 7.08-7.13 (m, 1H); Anal. (C25H36N207) C, H, N.

Preparación del intermediario etil-3- { Cbz-L-Leu-L-Phe-L- ( (N-2 , 4-dimetoxibencil) - (R) -Pirrol-Ala) } -E-propenoato Una solución de HCl en 1,4-dioxano (4.0 M, 6 mL) se adicionó a una solución de etil-3- { Boc-L- ( (N-2 , -dimetoxibencil) -(R)-pirrol-Ala) }-E-propenoato (0.233 g , 0.489 mmol , 1 equiv.) en 1,4-dloxano (6 mL) . Después de agitar 1.5 h, los volátiles se evaporaron para dar la sal de amina cruda, que se usó sin purificación adicional .

Esta sal de amina se disolvió en DMF (4 mL) y se enfrió a 0 ° C . Se adicionaron secuencialmente Cbz-L-Leu-L-Phe-OH (0.202 g, 0.490 mmol, 1 equiv.), DIEA (0.255 mL, 1.46 mmol, 3 equiv.) y HATU (0.186 g, 0.489 mmol, 1 equiv. ) . Después de agitar 1.5 h, la mezcla de reacción se diluyó con MTBE (100 mL ) , se lavó con KHS04 al 5%, NaHC03 saturado y salmuera (10 mL) , se secó con MgS04 y se evaporó. La purificación del residuo por cromatografía de columna instantánea (gradiente de elución, EtOAc al 60-75% en hexanos) proporcionó etil-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L- ( (N-2, 4 -dimetoxibencil) - (R) -Pirrol-Ala) } -E-propenoato (0.208 g, 55%) como un sólido blanco (después de la evaporación de Et20) : pf = 174-176°C; IR (cr1) 3287, 1713, 1649; XH RMN (CDC13) d 0.84-0.91 (m, 6H), 1.29 (t, 3H, J = 7.2), 1.42-1.66 (m, 4H), 1.67-1.77 (m, 1H), 1.84-1.95 (m, 1H), 2.20-2.12 (m, 1H) , 2.33-2.45 (m, 1H), 3.04-3.23 (m, 4H), 3.78 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 4.15-4.29 (m, 1H), 4.17 (q, 2H, J = 7.2), 4.31 (d, 1H, J = 14.5), 4.40 (d, 1H, J = 14.5), 4.67-4.84 (m, 2H), 5.05 (d, 1H, J = 12.1), 5.11 (d, 1H, J = 12.1), 5.35 (d, 1H, J = 8.1), 5.76 (dd, 1H, J = 15.6, 1.6), 6.42-6.46 (m, 2H), 6.74-6.81 (m, 1H), 6.75 (dd, 1H, J = 15.6, 5.0), 7.06-7.10 (m, 1H), 7.15-7.24 (m, 5H), 7.29-7.36 (m, 5H), 8.79 (d, 1H, J = 5.9) ; Anal. (C43H5)N409) C, H, N.

Preparación del producto et?l-3- { Cbz-L-Leu-L-Phe-L-( (R) -Pirrol-Ala) } -E-propenoato Se convirtió et 11 - 3- { Cbz -L-Leu-L- Phe-L- (( N-2 , 4 -dimetoxibencil) - (R) -Pirrol-Ala) }-E-propenoato al producto et?l-3-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((R)-P?rrol-Ala) } -E-propenoato de una manera análoga a la conversión de et?l-3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((N-2,4-d?metox?benc?l)-(S)-Pir rol-Ala ) } -E-propenoato al producto et 11 - 3 - ( Cbz-L-Leu-L- Phe-L- ( (S) -Pirrol-Ala) } -E-propenoato descrita en el Ejemplo 34: IR (cm"1) 3290, 1702, 1642; !H RMN (CDC13) d 0.85-0.92 (m, 6H), 1.30 (t, 3H, J = 7.2), 1.35-1.49 (m, 1H) , 1.52-1.71 (m, 3H), 1.73-1.94 (m, 2H), 2.15-2.26 (m, 1H), 2.32-2.43 (m, 1H), 3.02-3.18 (m, 2H), 3.19-3.29 (m, 2H), 4.15-4.27 (m, 1H), 4.18 (q, 2H, J = 7.2), 4.65-4.74 (m, 1H), 4.76-4.85 (m, 1H), 5.07 (d, 1H, J = 12.3) , 5.12 (d, 1H, J = 12.3) , 5.18-5.25 (m, 1H) , 5.76-5.84 (m, 2H) , 6.64-6.78 (m, 2H) , 7.15-7.40 (m, 10H) , 7.91-7.98 (m, 1H) ; Anal. (C34H44N407) C, H, N.

Ejemplo 37 - Preparación del compuesto (A-28) : etil-3-{ Cbz -L-Leu-L-Phe-L-1- (2-imidazolidon) Ala) -E-propenoato Preparación del intermediario etil-3- { Cbz -L-Leu-L-Phe-L-Boc-aminoAla } -E-propenoato Se adicionó ( carbet oximet i len ) t r i f eni 1 f os f or ano (1.20 g, 3.28 mmol, 1.2 equiv.) a una solución de Cbz-L- Leu-L- Phe-L-N-Boc-aminoalaninal (preparado como se describió en Webber et al., J . Med . Chem . 1998, vol. 41, 2786) (1.60 g, 2.73 mmol, 1 equiv.) en THF (55 mL) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. Los volátiles después se removieron i n va cu o , y el residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea eluyendo con (gradiente de elución, CH3OH al 0-1.5% en CH2C12) para dar et il- 3- { Cbz-L-Leu-L- Phe-L-N- Boc-aminoAla ) -E-propenoato (0.968 g, contaminado con óxido de t ri feni 1 fos fina ) . Este material se usó sin purificación adicional.

Preparación del intermediario etil-3- { Cbz-L-Leu-L-Phe-L- (2 -Boc- 2 -aminoetil) aminoAla } -E-propenoato Una solución de HCl en 1,4-dioxano (4.0 M, 10 mL) se adicionó a una solución de etil-3- { Cbz-L-Leu-L- Phe-L-Boc-aminoAla } -E-propenoato (0.95 g, 1.46 mmol, 1 equiv.) en el mismo disolvente (20 mL) a 23 ° C . La mezcla de reacción se agitó a tal temperatura durante 1.5 h, y después se adicionó HCl adicional en 1,4-dioxano (4.0 M, 10 mL ) . Después de agitar durante toda la noche, los volátiles se removieron i n va c u o y el residuo se trituró con Et20 (20 mL ) . Los sólidos resultantes se filtraron y se lavaron con Et20 (3 x 10 mL) para dar la sal de amina cruda (0.63 g, 73%, 1.05 mmol) como un sólido blanco.

Este material se disolvió en CH30H (10 mL) y después se adicionaron secuencialmente N-Boc-2 -aminoet anal (preparado como se describió en Bi schofberger et al., J. Org . Chem . 1988, vol. 53, 3457) (0.19 g, 1.16 mmol, 1.1 equiv.) y NaBH3CN (0.069 g, 1.05 mmol, 1.0 equiv.) . La mezcla de reacción se agitó a 23°C durante toda la noche, y después los volátiles se removieron a presión reducida. El residuo se disolvió en EtOAc (25 mL ) y la capa orgánica se lavó con agua (25 mL) y salmuera (25 mL) y después se secó con MgS04 y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (gradiente de elución, CH3OH al 0-3% en CH2C12) para proporcionar etil-3- (Cbz-L-Leu-L-Phe-L- ( 2 -Boc-2 -aminoetil ) aminoAla } -E-propenoato (0.32 g, 44%) como un sólido amorfo blanco: R£ = 0.20 (CH30H al 5% en CHC13) ; IR (cr1) 1712, 1649, 1537, 1252, 1175; JH RMN (DMSO-d6) d 0.79 (d, 3H, J = 6.6), 0.82 (d, 3H, J = 6.6), 1.21 (t, 3H, J = 7.0), 1.26-1.37 (m, 13H), 1.46-1.54 (m, 1H), 2.56-2.60 (m, 2H), 2.82-2.97 (m, 4H), 3.98-4.04 ( , 1H), 4.10 (q, 2H, J = 7.0), 4.42-4.49 (m, 2H), 4.98 (d, 1H, J = 12.5), 5.04 (d, 1H, J = 12.9), 5.59 (d, 1H, J = 15.8), 6.73-6.75 (m, 1H), 6.77 (dd, 1H, J = 15.8, 4.8), 7.20-7.34 (m, 10H), 7.41 (d, 1H, J = 8.1), 7.97 (d, 1H, J = 7.0), 8.07 (d, 1H, J = 7.0); Anal. (C37H53N508- 0.50H2O) C, H, N.

Preparación del producto etil-3- { Cbz-L-Leu-L-Phe-L-1-(2-imidazolidon) Ala) -E-propenoato Se adicionó TFA (0.8 mL) a una solución de etil-3- (Cbz-L-Leu-L-Phe-L- (2-Boc-2-aminoetil) aminoAla}-E-propenoato (0.29 g, 0.42 mmol, 1 equiv.) en CH2C12 (£ mL ) y la mezcla de reacción se agitó a 23°C durante 2 h. Los volátiles se removieron i n va c u o y el residuo se disolvió en EtOAc (25 mL) y se lavó con solución de NaHCOj saturado (25 mL), agua (25 mL) y salmuera (25 mL ) . La capa orgánica se secó con MgS04 y se concentró para dar la diamina cruda (0.23 g, 92%, 0.39 mmol) como un sólido amorfo de color canela.

Este material se disolvió en THF (4 mL) , se adicionó carbonildiimidazol (0.06 g, 0.36 mmol, 0.92 equiv.) y la mezcla de reacción se agitó a 23°C durante 3.5 h. El disolvente se removió in va cuo y el residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (gradiente de elución, CH3OH al 0-2% en CH2C12) para dar et?l-3-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-l- (2-imidazolidon) Ala)-E-propenoato (0.12 g, 54%) como un sólido amorfo blanco: pf = 161-164°C; R£ = 0.21 (CH3OH al 5% en CHC13); IR (cm" 1701, 1647, 1535, 1277; JH RMN (DMSO-d6) d 0.79 (d, 3H, J = 6.6), 0.82 (d, 3H, J = 6.6), 1.21 (t, 3H, J = 7.0), 1.27-1.35 (m, 2H), 1.48-1.52 (m, 1H), 2.79-2.86 (m, 1H), 2.92-3.05 (m, 3H), 3.14-3.19 (m, 2H), 3.25-3.30 (m, 2H), 3.98-4.03 (m, 1H), 4.10 (q, 2H, J = 7.0), 4.47-4.49 (m, 1H), 4.59-4.63 (m, 1H), 4.97-5.02 (m, 2H), 5.72 (d, 1H, J = 15.8), 6.37 (s, 1H), 6.71 (dd, 1H, J = 15.8, 5.5), 7.15-7.39 (m, 10H), 7.42 (d, 1H, J = >d-H 1*8--? . 8.1) , 8.00 (d, 1H, J = 8.1) , 8.18 (d, 1H, J = 8.1) Anal. (C33H43N507) C, H, N.

Eiemplo 38 - Síntesis de los intermediarios 01. 02 y 03 Preparación del intermediario l-acet?l-3-(tpfen?lfosfan?l?d?n)-p?rrol?d?n-2-ona 2 , 4 -dibromobut i r ida (preparada de acuerdo a Ikuta et al., J. Med. Chem, 1987, vol. 30, 1995) (46.1 g, 188.2 mmol) en THF (1 L) se enfrio a 0°C y se trato con una solución de bi s ( tpmet 11 si 11 lamida ) de sodio (40.9 g, 244.6 mmol) en THF (200 mL) . La solución se mantuvo a 0°C durante 2.5 h, y después se vertió en salmuera (800 mL), se extrajo con acetato de etilo (2 L), y se seco (MgS04) . La evaporación produjo 25.5 g de 3-bromo-pir rol ?d?n-2 -ona como un aceite cafe. Este material se trato con Ac20 (76 mL) y se sometió a reflujo 5 horas.

La evaporación seguido de la purificación (filtración en gel de sílice, eluyente EtOAc) produjo 28 g de 1-acet i 1 - 3-br omo-pi r r ol idin-2 -ona como un aceite obscuro. Se adicionaron THF (272 mL) y trifenilfosfina (42.8 g, 16.3 mmol) y la solución resultante se sometió a reflujo durante 8 horas. Debido al enfriamiento a 23°C, se formó y se colectó por filtración un precipitado de bromuro de l-acet?l-3- (trifenilfosfanil) -pirrolidin-2-ona (27.1 g) . La concentración del agua madre, seguido por el enfriamiento a 0°C, produjo un adicional de 6.6 g. El material combinado en CH2C12 (1 L) se lavó con NaOH ÍN (100 mL) y después salmuera (2 x 100 mL) . La evaporación de la capa orgánica produjo 26.9 g (37% global) de 1 - a ce 111 - 3 - ( t r i f en i 1 f o s f an i 1 i din ) -pi r r ol idin-2 -ona como un aceite de color canela. :H RMN (CDC13) d 7.76-7.32 (15H, m), 3.90-3.85 (2H, m), 2.50 (3H, s) , 2.56-2.30 (2H, m) .

Preparación del intermediario metil éster del ácido 2-t-butoxicarbonil-3- (t-butildimetilsilanoxi) -propiónico Se trató metil éster de Boc-D-serina (20.0 g, 91.2 mmol) en DMF (300 mL) con imidazol (18.6 g, 273.7 mmol) y después TBSCI (13.0 g, 86.7 mmol) . La solución se mantuvo a temperatura ambiente (ta) durante 18 h, y después se lavó con cloruro de amonio acuoso saturado (300 mL) y se extrajo con acetato de etilo (800 mL) . La capa orgánica se lavó con salmuera (300 mL) y después se secó (MgS04), para producir 30.2 g (100%) de metil éster de l ácido 2 -t -butoxi carbon i l - 3 - ( t -but i ldimet ils i lanoxi ) -propiónico como un aceite incoloro. H RMN (CDC13) d 5.32 (1H, d, J = 8.3), 4.33 (1H, dt, J = 8.8, 2.7), 4.02 (1H, dd, J = 10.1, 2.6), 3.80 (1H, dd, J = 9.8, 3.1), 3.72 (3H, s), 1.43 (9H, s), 0.85 (9H, s) , 0.0 (6H, s) .

Preparación del intermediario t-butil éster del ácido (1- (l-acetil-2-oxo-pirrolidin-3-ilidenmetil) -2- (t-butildime ilsilaniloxi) -etil } -carbámico Metil éster del ácido 2 -t-butoxicarboni 1- 3- ( t-but i ldimet i ls i lanoxi ) -propiónico (12.7 g, 38.0 mmol) en tolueno (190 mL) se enfrió a -78°C y se trató con una solución de hidruro de diisobutilaluminio (15.6 L, 87.4 mmol) en tolueno (175 mL) . La temperatura interna se mantuvo por debajo de -70°C. La solución se mantuvo a -78°C durante un adicional de 90 min., y después se adicionó metanol (7.7 mL, 190 mmol) . Se adicionó 1-acetil-3- (trifenilfosfanilidin) -p?rrolidin-2-ona (11.1 g, 28.6 mmol) en CH2C12 (50 mL) a -78°C, y la solución resultante se dejó calentar a temperatura ambiente y se mantuvo durante 30 minutos. Se adicionó una solución de tartrato de sodio potasio (150 g) en agua (600 mL) y se agitó vigorosamente durante 30 minutos. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (4 x 250 mL) , se secó (MgS04) y se evaporó. La purificación por cromatografía en gel de sílice produjo 7.04 g (60%) de t-butil éster del ácido { 1 - ( 1 - a c e t i 1 - 2 - o x o - p i r r o 1 i d i n - 3 -ilidenmetil) -2- (t-butildimetilsilaniloxi) -etil } -carbámico como un aceite incoloro. 1H RMN (CDC13) d 6.59 (1H, dt, J = 8.7 , 2.9), 4.98 (1H, d, J = 6.8), 4.37-4.25 (1H, m), 3.77 (2H, t, J = 7.3), 3.70-3.58 (2H, m), 2.90-2.80 (1H, m) , 2.75-2.60 (1H, m), 5.53 (3H, s), 1.41 (9H, s) , 0.87 (9H, s) , 0.04 (6H, s) .

Preparación del intermediario t-butil éster del ácido { 2 -hidroxi-1 - (2 -oxo-pirrolidin-3-ilidenmetil) -etil}-carbámico t-butil éster del ácido ( 1- ( 1-acet i 1-2 -oxo-p i r r o l i d i n - 3 - i l i d e n m e t i l ) - 2 - ( t -butildimet ilsilaniloxi ) -etil } -carbámico (9.18 g, 22.2 mmol) en THF (150 mL) se trató con TBAF (22.2 mL de una solución 1M en THF, 22.2 mmol) a 0°C y se mantuvo durante 1 hora. Una solución de cloruro de amonio acuoso saturado se adicionó y se agitó durante 10 min, y después la solución se extrajo con acetato de etilo (2 x 200 mL ) . La capa orgánica se secó (MgS04) y después se evaporó. La purificación por cromatografía en gel de sílice produjo 4.82 g (73%) de un aceite incoloro. Este material se tomó en metanol (160 mL), se trató con carbonato de potasio (223 mg, 1.62 mmol) y se mantuvo durante 1 h a temperatura ambiente. La mezcla después se trató con ácido cítrico sólido (311 mg, 1.62 mmol) y se adicionó acetato de etilo (800 mL) . La solución se filtró a través de gel de sílice. La evaporación produjo 4.30 g (73% global) de t-butil éster del ácido )2-hidroxi-l-(2-oxo-pirrolidin-3-ilidenmetil)-etil}-carbámico como un aceite incoloro. l RMN (CDC13) d 7.03 (1H, br, s), 6.35 (1H, dt, J = 8.6, 2.6), 5.37 (1H, d, J = 6.5), 4.40-4.20 (1H, m), 3.66 (br s, 3H), 3.4 (2H, t, J = 6.7), 3.10-2.80 (1H, m), 2.80-2.70 (1H, m), 1.41 ( 9H, s) .

Preparación del intermediario t-butil éster del ácido {2-hidroxi-l- (2-oxi-pirrolidin-3-ilmetil) -e til ) -carbámico (mezcla de diastereómeros) (Ql) Se trató t-butil éster del ácido ( 2 -hidroxi- 1- ( 2- ,4-L oxo-pirrolidin-3-ilidenmetil) -etil}-carbámico (4.30 g, 16.8 mmol) en acetato de etilo (168 mL ) con 5% de paladio sobre carbono (1.78 g) y se hidrogenó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla se filtró y después se evaporó para producir 3.92 g (91%) de t-butil éster del ácido (2-hidroxi-l-(2-oxi-pirrolid?n-3-ilmetil ) -etil } -carbámico como un aceite incoloro (mezcla de diastereómeros 1.5:1) : :H RMN (CDC13) d 6.99 (1H, s), 5.49 (1H, d, J = 8.4) , 3.70-3.50 (3H, m), 3.38-3.20 (2H, m) , 2.60-2.20 (2H, m) , 2.00-1.70 (2H, m), 1.65-1.45 (1H, m) , 1.37 (9H, s) .

Preparación del intermediario t-butil éster del ácido {2-hidroxi-l- (R-2-oxi-pirrolidin-3-ilmetil) -e il } -carbámico (Q2) Se trató t-butil éster del ácido ( 2 -hidroxi- 1 - ( 2 -oxo-pi rrolidin- 3-i 1 idenmetil ) -etil ) -carbámico (98 mg , 0.39 mmol) en metanol (5 mL) con ( R) -BINAP-RuCl (19 mg , 0.02 mmol) y después se puso bajo una atmósfera de hidrógeno (1200 psi) a 50°C durante 48 h. La solución se evaporó y después se filtró a través de gel de sílice (eluyente MeOH al 10%-EtOAc) . La evaporación produjo 75 mg (75%) de t-butil éster del ácido { 2-hidroxi- 1 - ( R-2 -oxi -pi r rol idin-3 -i lmet i 1 ) -etil ) -carbámico como un aceite incoloro (mezcla de diastereomer os 9:1) : *H RMN (CDC13) d 6.32 (1H, br), 5.40 (1H, d, J = 7.5), 3.82 (1H, br s), 3.71-3.63 (2H, m) , 3.34-3.31 (2H, m), 2.45-2.30 (2H, m) , 2.09-1.86 (2H, m), 1.70-1.63 (1H, m), 1.42 ( 9H, s) .

Preparación del intermediario t-butil éster del ácido {2-h?drox?-l- (S-2-ox?-p?rrol?d?n-3-?lmet?l) -etil) -carbamico (Q3) Se trato t-butil ester del acido ( 2 -hidr0x1 - 1 - ( 2 -oxo-p?rrol?dm-3-?l?denmet?l) -etil } -carbamico ( 0.10 g, 0.39 mmol) en metanol (5 mL) con ( S ) -BINAP-RuCl (19 mg , 0.02 mmol) y después se puso bajo una atmosfera de hidrogeno (1200 psi) a 50°C durante 48 h. La solución se evaporo y después se filtro a través de gel de sílice (eluyente MeOH al 10%-EtOAc) . La evaporación produjo 74 mg (74%) de t-butil ester del acido { 2-h?drox?- 1 - ( S-2 -oxi-pirrol ?d?n-3 -ílmet íl ) -et 11 ) -carbamico como un aceite incoloro (mezcla de días t ereomeros 9:1) : X H RMN (CDCI3) d 6.66 (1H, br s), 5.51 (1H, d, J = 8.2), 3.72-3.57 (3H, m) , 3.34-3.31 (2H, m), 2.52-2.33 (2H, m), 2.20-1.86 (1H, m) , 1.86-1.70 (1H, m), 1.62-1.50 (1H, m) , 1.40 ( 9H, s) . *"*"ii -A* Los resultados de las pruebas bioquímicas y biológicas realizadas usando varios compuestos de la invención se describen posteriormente.

EVALUACIÓN BIOQUÍMICA Y BIOLÓGICA Inhibición de Proteasa 3C de rinovirus Se prepararon soluciones de reserva (50 mM , en DMSO) de varios compuestos; las diluciones estuvieron en el mismo disolvente. Las proteasas 3C de rinovirus recombinantes (ver Birch et al., "Purification of recombinant human rhinovirus 14 3C protease expressed in Escherichia coli", Pro t ei n Expr . Pur . 1995, 65(5), 609-618) de los serotipos 14, 16 y 2 se prepararon mediante los siguientes procedimientos cr orna tográ fieos estándares: (1) intercambio iónico usando Q Sepharose Fast Flow de Pharmacia; (2) cromatografía de afinidad usando Affi-Gel Blue de Biorad y (3) dimensionamiento usando Sephadex G-100 de Pharmacia. Cada muestra de prueba contuvo DMSO al 2%, tris 50 mM pH 7.6, EDTA 1 mM, un compuesto de prueba a la concentración indicada, aproximadamente 1 µM de sustrato y proteasa 50-100 nM. Los valores de kob3/I se obtuvieron de las reacciones iniciadas por la adición de la enzima en lugar del sustrato. La actividad de RVP se midió en la prueba de transferencia de energía por resonancia de fluorescencia. El sustrato fue (N terminal) DABCYL-(Gly-Arg-Ala-Val-Phe-Gln-Gly-Pro-Val-Gly) -EDANS . En el péptido no cortado, la fluorescencia EDANS se apagó por el radical DABCYL próximo. Cuando el péptido se cortó, el apagado se relevó y la actividad se midió como un aumento en la señal de fluorescencia. Los resultados se analizaron usando los programas de cálculo no lineales estándares (Enzfit), y se muestran en las Tablas 1 y 2 posteriores. En la Tabla 1, todos los resultados son para la proteasa 3C de rinovirus de serotipo 14 de HRV (producido del clon de ADNc infeccioso construido por el Dr. Robert Rueckert, Institute for Molecular Virology, University of Wisconsin, Madison, Wisconsin) . La Tabla 2 muestra la actividad de inhibición de proteasa de los compuestos contra las proteasas de los varios rinovirus del serotipo, a parte del serotipo 14 de RVP. Los resultados en la columna designada koba/[I] se midieron del progreso de las curvas en los experimentos de comienzo de la enzima.

Prueba de Cultivo Celular Hl-HeLa Antirrinoviral En esta prueba de protección celular, la capacidad de los compuestos para proteger las células contra la infección por HRV se midió por el método de reducción de teñido XTT, que se describe en Weinslow et al., J. Na t i . Cá n cer In s t . 1989, vol. 81, 577-586.

Las células Hl-HeLa se infectaron con HRV-14 a una multiplicidad de infección (m.o.i) de 0.13 (partículas de virus /célula ) o infectadas falsamente sólo con el medio. Las células infectadas o falsamente infectadas se resuspendieron a 8 x 105 células por mL, y se incubaron con las concentraciones apropiadas de los compuestos a ser probados. Dos días después, se adicionó XTT/PMS a las placas de prueba y la cantidad de forma z an producida se cuant i f i có espectrofotométricamente a 450/650 nm. El valor EC50 se calculó como la concentración del compuesto que aumentó el porcentaje de la producción de formazan en las células infectadas con el virus tratadas con el compuesto, hasta 50% de la producida por las células infectadas falsamente libres del compuesto. El 50% de la dosificación citotóxica (CC50) se calculó como la concentración del compuesto que disminuyó el porcentaje de formazan producido en las células falsamente infectadas tratadas con el compuesto hasta 50% del producido por las células falsamente infectadas libres del compuesto. El índice terapéutico (IT) se calculó dividiendo el valor CC50 entre el valor EC50.

Todas las cepas del rinovirus de humano (HRV) para el uso en esta prueba se adquirieron de American Type Culture Collection (ATCC), excepto para el serotipo 14 de HRV (producido del clon de ADNc infeccioso construido por el Dr. Robert Rueckert, Institute for Molecular Virology, University of Wisconsin, Madison, Wisconsin) . Las reservas de HRV se propagaron y las pruebas virales se realizaron en las células Hl-HeLa (ATCC) . Las células se crecieron en el medio mínimo esencial con 10% de suero de bovino fetal, disponible en Life Technologies (Gaithersburg, MD) .

Los compuestos se probaron contra los compuestos de control WIN 51711, WIN 52084 y WIN 54954 (obtenidos de Ste ling-Winthrop Pharmaceut ical s ) , Pirodavir (obtenido de Janssen Pharmaceuticals), y Pleconaril (preparado de acuerdo al método descrito en Diana et al., J . Med . Ch em . 1995, vol. 38, 1355) . Los resultados antivirales obtenidos para los compuestos de prueba se muestran en las Tablas 1 y 3, en donde todos los resultados son para el serotipo 14 de HRV a menos que se observe lo contrario entre paréntesis. La designación "ND" indica que un valor no se determino para tal compuesto.

Tabla 1. Actividad vs . Serotipo 14 de HRV Compues o Inhibición Protección de proteasa celular koba/[I] (M"1 EC50 (µM) s"') Ejemplo 15 (A-12) 59300 0.4 E j emplo 16 (A-13) 95800 0.2 Ejemplo 19 (B-3) 465000 0.18 Ejemplo 21 (A-14) 54500 0.48 Ejemplo 22 (A-15) 237100 0.22 E emplo 23 (A-16) 172800 0.45 Ej emplo 24 (A-17) 167000 0.06 E j emplo 25 (A-18) 292000 1.5 Ej emplo 26 (A-19) 27750 25.1 E j emplo 27 (A-20) 1020 12.6 Ejemplo 28 (A-21) 17800 2.5 Ejemplo 29 (A-22) 2400 ND Ejemplo 30 (A-23) 26000 ND Prueba de Cultivo Celular Anticoxsackieviral Virus coxsackie de tipos A-21 (CAV-21) y B3 (CVB-3) se adquirieron de American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD) . Las reservas de virus se propagaron y las pruebas antivirales se desa rollaron en células Hl-HeLa (ATCC) . Las células se crecieron en el medio mínimo esencial con 10% de suero de bovino fetal (Life, Technologies, Gaithersburg, MD) .

La capacidad de los compuestos para proteger a las células contra la infección por CAV-21 o CVB-3 se midió por el método de reducción de teñido XTT. Este método se describe en Weislow et al., J. Na t i . Cá n ce r In s t . 1989, vol. 81, 577-586. Las células Hl-HeLa se infectaron con CAV-21 o CVB-3 a una multiplicidad de infección (m.o.i.) de 0.025 o 0.075, respectivamente, o infectados falsamente sólo con el medio. Las células Hl-HeLa se colocaron en placas a 4 x 10" células por pozo en una placa de 96 pozos y se incubaron con las concentraciones apropiadas del compuesto de prueba. Un día (CVB-3) o dos días (CAV-21) después, se adicionó XTT/PMS a las placas de prueba y la cantidad de formazan producida se cuantificó espectrofotométricamente a 450/650 nm . Se calculó EC50 como la concentración del compuesto que aumentó la producción de formazan en las células infectadas con el virus, tratadas con el compuesto a 50% del producido por las células no infectadas, libres del compuesto. El 50% de la dosificación citotóxica (CC50) se calculó como la concentración del compuesto que disminuyó la producción de formazan en las células no infectadas tratadas con el compuesto a 50% del producido en las células no infectadas libres del compuesto. El índice terapéutico (IT) se calculó dividiendo el valor CC50 entre el valor EC50.

Los compuestos se probaron contra los compuestos de control WIN 54954 (obtenidos de St er 1 ing-Wint hr op Pharmaceuticals), Pirodavir (obtenido de Janssen Pharmaceuticals), y Pleconaril (preparado de acuerdo a Diana et al., J. Med . Ch em . 1995, vol. 38, 1355) . Los resultados antivirales obtenidos para los compuestos de prueba contra CAV-21 y CVB-3 se muestran en la Tabla 4.

Pruebas de Cultivos Celulares Anti-ecovirales y Enterovirales Echovirus de tipo 11 (EV 11) y enterovirus de 70 (EV 70) se adquirieron de ATCC (Rockville, MD) . Las reservas de virus se propagaron y las pruebas antivirales se desarrollaron en células MRC-5 (ATCC) .

Las células se crecieron en el medio mínimo esencial _¿U8&»„A- con 10% de suero de bovino fetal (Life, Technologies, Gaithersburg, MD) . $0* La capacidad de los compuestos para proteger a las células contra la infección por EV 11 o EV 70 se midió por el método de reducción de teñido XTT (Weislow et al., J . Na t i . Cá n ce r In s t . 1989, vol. 81, 577-586) . Las células MRC-5 se infectaron con EV 11 o EV 70 a una m.o.i. de 0.003 o 0.004, respectivamente, o infectados falsamente sólo con el medio. Las células infectadas o no infectadas se adicionaron a 1 x 104 células por pozo y se incubaron con las concentraciones apropiadas del compuesto. Cuatro días después, se adicionó XTT/PMS a las placas de prueba y la cantidad de formazan producida se cuantificó espectrofotométricamente a 450/650 nm. Se calculó EC50 como la concentración del compuesto que aumentó la producción de formazan en las células infectadas con el virus, tratadas con el compuesto a 50% del producido por las células no infectadas, libres del compuesto. El 50% de la dosificación citotóxica (CC50) se calculó como la concentración del compuesto que disminuyó la producción de formazan en las células no infectadas tratadas con el compuesto a 50% del producido en las células no infectadas libres del compuesto. El índice terapéutico -¿¡^¿^l^.

(IT) se calculo dividiendo e.l valor CC50 entre el valor EC50.

Los compuestos se probaron contra los compuestos de control Pirodavir (obtenido de Janssen Pharmaceut icals ) , y Pleconaril (preparado de acuerdo a Diana et al., J . Med . Ch em . 1995, vol. 38, 1355) . Los resultados antivirales obtenidos para los compuestos de prueba contra la cepa EV 11 y EV 70 se muestran posteriormente en la Tabla 5.

Mientras que la invención se ha descrito en términos de las modalidad#é preferidas y ejemplos específicos, los expertos en el arte reconocerán que pueden hacerse varios cambios y modificaciones sin salirse del espíritu y alcance de la invención. De esta manera, la invención debería entenderse que no se limita a la descripción detallada anteriormente, sino que como se define por las reivindicaciones anexas y sus equivalentes Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes.

Claims (79)

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de la formula I: caracterizado porque: Y es N(Ry)-, -C(Ry) (Ry)-, -O-, donde cada Ry es independientemente -H o alquilo inferior; Ri es -H, -alquilo, -OH , -SH un grupo 0- alquilo; R2 y R3son cada uno independientemente H; «ilhA-.. en donde n es un entero de 0 a 5 , Aj es CH o N, A2 y cada A3 se seleccionan independientemente de C(R41) (R j), N(R41), S, S(O), S(0)2 y O, y A4 es NH o NR„, en donde cada R41 es independientemente H o alquilo inferior, con la condición de que no mas que dos heteroatomos se presenten consecutivamente en el anillo representado anteriormente formado por Aj, A2, (A3)n, A4 y C =0, y al menos uno de R2 y R3 es O NH, R5 y R6 son cada uno independientemente H, F, un grupo alquilo, un grupo cicloalqui lo , un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, o un grupo heteroaplo; R7 y R8 son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalqui lo , un grupo .^¡jfc-? heterocicloalquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, -0R„, eSR17, -NR17R18, -NRj9NR17R18 , o -NR17OR18, en donde ^, R18 y R19 son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo , un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, o un grupo acilo, con la condición de que al menos uno de R7 y R8 sea un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, -OR17, -SR17, -NR17R18, -NR19NR17R1B, o -NR17OR18; R9 es un heterociclo de cinco miembros que tiene de uno a tres heteroátomos seleccionados de O, N, S, y Z y Zj son cada uno independientemente H, F, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo he t er ocicloalquilo , un grupo arilo, un grupo heteroarilo, -C(0)R21, -C02R21, -CN, -C ( O ) NR21R22, C (O) NR21OR22, -C(S)R21, -C (S) NR2jR22, -N02, -SOR21, -S02R21, -S02NR21R22, -SO (NR21) (OR22) , -SONR21, -S03R21, -PO(OR21)2, -PO(R21) (R22) , -PO(NR21R22) (OR23) , - PO ( NR21R22 ) ( NR23R24 ) , -C (O) NR21NR22R23 o -C (S) NR21NR22R23, en donde R21, R22, R23 y R24 son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalqui lo , un grupo heterocicloalquilo, un **-*- -' grupo arilo, un grupo het eroa ilo, un grupo acilo, o un grupo tioacilo, o donde cuar wquiera de dos de R21, R22, R23 y R24, junto con el o los átomos que se enlazan, forman un grupo heterocicloalquilo, con la condición de que Z y Zj no sean ambos H; o Z¡ y Rj, junto con los átomos a los que se enlazan, forman un grupo cicloalquilo o heterocicloalquilo; o Z y Zj, junto con los átomos a los que se enlazan, forman un grupo cicloalquilo o heterocicloalquilo ; o un profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal farmacéuticamente aceptable o solvato del mismo .

2. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 1, caracterizado porque R2 y R3 son cada uno independientemente H; en donde n es un entero de 0 a 5, cada R41 es independientemente H o alquilo inferior, y la estereoquímica en el carbono representada con un asterisco (*) podría ser R o S, con la condición de que al menos uno de R2 y R3 es

3. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable 'de acuerdo a la reivindicación 1, caracterizado porque Y es -N(Ry)-, en donde Ry es H o alquilo inferior.

4. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 3, caracterizado porque: Z y Z ¡ son cada uno independientemente H, F, un grupo alquilo, -C(0)R2j y -C(0)NR21, R22, en donde R21 y R22 son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, un grupo acilo o un grupo tioacilo o R2j y R22, junto con los átomos a los que se enlazan, forman un grupo de heterocicloalquilo con la condición de que Z y Zj no sean ambos H; o Zj y Ri, juntos con los átomos a los que se enlazan, forman un grupo cicloalquilo o heterocicloalquilo; o Z y Zj, junto con los átomos a los que se enlazan, forman un grupo cicloalquilo o heterocicloalquilo.

5. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la á^,.:aa-í-: . reivindicación 3, caracterizado porque R¡ es H, F o

6. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 3, caracterizado porque al menos uno de R2 o R, es

7. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 6, caracterizado porque uno de R5 es H y el otro es alquilo o arilo.

8. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 3, caracterizado porque uno de R5 y R6 es H y el otro es alquilo o arilo.

9. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente * activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 3, caracterizado porque uno de R5 y R6 es H y el otro es fenilmetilo insustituido o sustituido.

10. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 3, caracterizado porque R7 y R8 son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo het erocicloalquilo , un grupo arilo o un grupo heteroarilo.

11. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 3, caracterizado porque uno de R7 y Re es H y el otro es alquilo o arilo.

12. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 3, caracterizado porque uno de R7 y R8 es H y el otro es 2-propilo, 2 -met il-2-pr opi lo , 2-met?l-l- propilo, fenilmetilo o naft ilmet ilo .

13. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 3, caracterizado porque R9 es un heterociclo de cinco miembros que tiene al menos un heteroátomo de nitrógeno y un heteroátomo de oxígeno.

14. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 3, caracterizado porque R9 se selecciona de 1 , 2-oxazolilo, 1 , 3-oxa zol i lo y 1 , 2 , 4 -oxadia zoli lo sustituido e insustituido.

15. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 3, caracterizado porque R9 es 3-isoxazolilo o 5-isoxa zol i lo insustituido o sustituido con uno a dos sustituyentes seleccionados de metilo y halógenos .

16. Un compuesto de acuerdo a la reivindicación 3 de la fórmula I-A" caracterizado porque R1( R2, R6, R7, R9, Ry, Z y Zl son como se definen en la reivindicación 3, o un profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mi smo .

17. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 16, caracterizado porque R2 es H ,NH2 Or yJ A. > O. N X3

18. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 16, caracterizado porque: es H o met ilo; Rj es H, F o metilo; Z y Zj son cada uno independientemente H, F, -C02R2¡, -CN y -C(0)NR2j, R22, en donde R21 y R22 son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, un grupo acilo o un grupo tioacilo o R21 y R22, junto con los átomos a los que se enlazan, forman un grupo de heterocicloalquilo con la condición de que Z y Zj no sean ambos H; o Zj y Rj, juntos con los átomos a los que se enlazan, forman grupo cicloalquilo heterocicloalquilo; o Z y Zj, junto con los átomos a los que se enlazan, forman un grupo cicloalquilo o heterocicloalquilo; es fenilmetilo insustituido o sustituido; R7 es alquilo o arilo; y R9 es 3- i soxa zol ilo o 5-isoxa zol i lo insustituido o sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados de metilo y halógenos.

19. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 18, caracterizado porque R7 se ^frü-?.»- selecciona de 2-propilo, 2 -metil-2 -propi lo , 2-metil-l-propilo, fenilmetilo y naf t gpet ilo .

20. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 16, caracterizado porque Ry, Rj y Z son cada uno H , y : R2 es CH2CH2C (O) NH2, R6 es CH2Ph, R7 es CH2CH(CH3)2, Z, es C02CH2CH3, y R9 es & R2 es CH2CH2C (O) NH2, R6 es CH2Ph, R7 es CH2CH(CH3)2, Zl es C02CH2CH3, y R9 es R2 es CH2CH2C (O) NH2, R6 es xr R7 es C (CH3) 3, Zj es C02CH2CH3, y R9 es R2 es CH2CH2C (O) NH2, R6 es xx' R7 es C (CH3) Zj es C02CH2CH3 y R9 es £ *- X. R? es CH (CH3)2, Z, es C02CH2CH3, y R9 es R2 es CH2CH2C (O) NH2, R6 es Fx R7 es CH2 (CH3) 2, Zj es C02CH2CH3, y R9 es T- R, es X, R6 es XX' T® R7 es C(CH3)3, Zl es C02CH2CH3,„ y R9 es R, es y R6 es xr R7 es CH2(CH3)2, Z1 es C02CH2CH3, y R9 es A> R, es A Rs es " R7 es C (CH3) 3, Zj es C02CH2CH3 y R9 es

21. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 16, caracterizado porque Ry es CH3, Rj y Z son cada uno H y: R2 es CH2CH2C (O) NH2, R6 es XX' R7 es A •TVr"* Zj es C02CH2CH3 y R9 es > R2 es CH2CH2C (O) NH2, R& ? CH2Ph, R7 es CH2CH (CH3) ; es CH2CH2C (O) NH2, R6 es FXT R, es A y R9 es R2 es CH2CH2C (O) NH2 XX' R7 es CH2CH(CH3)2, y R9 es n NA es CH2CH2C (O) NH2, R6 es XX' R7 es )T\-

22. Un compuesto, profarmaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 16, caracterizado porque se selecciona del grupo que consiste de. jA"- »A-

23. Un compuesto, .rgxof ármaco , metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 1, caracterizado porque Y es -CH2-.

24. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 23, caracterizado porque Z y Z1 son cada uno independientemente H, F, alquilo inferior, -C02R2j, y -C(0)NR21, R22, en donde R21 y R22 son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, un grupo acilo o un grupo tioacilo o R21 y R22, junto con los átomos a los que se enlazan, forman un grupo de heterocicloalquilo con la condición de que Z y Zj no sean ambos H; o Zj y Rj, juntos con los átomos a los que se enlazan, forman un grupo cicloalquilo o heterocicloalquilo; o Z y Zj, junto con los átomos a los que se enlazan, forman un grupo cicloalquilo o heterocicloalquilo;

25. Un compuesto, -jprof ármaco , metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 23, caracterizado porque Rj es H, F o meti lo .

26. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 23, caracterizado porque al menos uno de R2 y R3 es

27. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 26, caracterizado porque uno de R5 y R6 es H y el otro es alquilo o arilo.

28. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato -*&•— •-• farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 23, caracterizado porque uno de R5 y R6 es H y el otro es alquilo o arilo.

29. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 23, caracterizado porque uno de R5 y R6 es H y el otro es fenilmetilo insustituido o sustituido .

30. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 23, caracterizado porque uno de R, y R8 son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalqui lo , un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo o un grupo heteroarilo.

31. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 23, caracterizado porque uno de R7 y R8 es H y el otro es alquilo o arilo.

32. Un compuesto, «tótofármaco , metabolito farmacéuticamente ac ti v o, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 23, caracterizado porque uno de R7 y R8 es H y el otro es 2-propilo, 2 -met il-2 -propí lo , 2-met il- 1 -propilo , fenilmetij-o o naf t ilmet ilo .

33. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 23, caracterizado porque R9 es un heterociclo de cinco miembros que tiene al menos un heteroátomo de nitrógeno y un heteroátomo de oxígeno.

34. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 33, caracterizado porque R9 es 1,2-oxazolilo, 1 , 3-oxa zolilo o 1 , 2 , 4 -oxadia zolilo ínsustituido o sustituido.

35. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 34, caracterizado porque R9 es 3- soxazolilo o 5 -isoxazol ilo, issus ti tuido o sustituido con uno o dos sustituyente?seleccionado ):s de metilo y halógenos .

36. Un compuesto de acuerdo a la reivindicación 23 de la fórmula I-B": caracterizado porque Rlr R2, R6, R7, R9, Z y Z3 son como se definen en la reivindicación 23, o un profármaco, metabolito farmacéuticamente activo sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

37. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 36, caracterizado porque R2 es <- -N O.-^ . A™1 JO . ,X>

38. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 36, caracterizado porque: Rj es H, F o metilo; Z y Zx son cada uno independientemente H, F, -C02R2j, -CN y -C(0)NR21, R22, en donde R2i y R22 son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo , un grupo het erocicloalqui lo , un grupo arilo, un grupo heteroarilo, un grupo acilo o un grupo tioacilo o R21 y R22, junto con los átomos a los que se enlazan, forman un grupo de heterocicloalquilo con la condición de que Z y Z¡ no sean ambos H; o Z3 y Rjf juntos con los átomos a los que se enlazan, forman un grupo cicloalquilo o heterocicloalquilo; o Z y Z3, junto con los átomos a los que se enlazan, forman un grupo cicloalquilo o heterocicloalquilo; R, se selecciona de R6 es fenilmetilo msustituido o sustituido; R7 es alquilo o aplo; y R9 es 3-?soxa zol ilo o 5-i soxazolilo insustituido o sustituido con uno o dos sus t i tuyentes seleccionados de metilo y halógenos.

39. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 38, caracterizado porque R, se selecciona de 2-propilo, 2-met il-2-propilo , 2-metil-l-propilo, fenilmetilo y naf t ilmet i lo .

40. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 36, caracterizado porque Rj es H y: R2 es CH2CH2C (O) NH2, R6 es XX' R7 es CH(CH3)2, Z es H, Z: es C02CH2CH3, y R9 es R, es X XX' R7 es CH(CH3)2, Z es H, Zx es t.Cp2CH2CH3 y R9 es A R, es y, .JO" R7 es CH(CH3)2, Z y Zj juntos son •6 en donde el grupo carbonilo es cis al hidrógeno de Rj y R, es >\r R, es y Rs es XX' R7 es CH(CH3)2, Z es H Zj es C02CH2CH3 y R9 es

41 Un compuesto de acuerdo a la reivindicación 1 de la formula o un profarmaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable del

42 Un compuesto, profarmaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 1, caracterizado porque Y es -O- .

43. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 42, caracterizado porque Z y Z, son cada uno independientemente H, F, alquilo inferior -CO¡R21, y -C(0)NR2j, R22, en donde R21 y R22 son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, un grupo acilo o un grupo tioacilo o R21 y R22, junto con los átomos a los que se enlazan, forman un grupo de heterocicloalquilo con la condición de que Z y Z 1 no sean ambos H; o Zj y R1; juntos con los átomos a los que se enlazan, forman un grupo cicloalquilo o heterocicloalquilo; o Z y Z1; junto con los átomos a los que se enlazan, forman un grupo cicloalquilo o heterocicloalquilo;

44. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 42, caracterizado porque R, es H, F o metilo .

45. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 42, caracterizado porque al menos uno de R2 y R3 es

46. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 45, caracterizado porque uno de R5 y R6 es H y el otro es alquilo o arilo.

47. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 42, caracterizado porque uno de R5 y R6 es H y el otro es alquilo o arilo.

48. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a . la reivindicación 42, caracterizado porque uno de R5 y R6 es H y el otro es fenilmetilo insustituido o sustituido.

49. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la rei indicación 42, caracterizado porque R7 y R8 son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo o un grupo heteroarilo.

50. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 42, caracterizado porque uno de R7 y R8 es H y el otro es alquilo o arilo.

51. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 42, caracterizado porque uno de R7 y R8 es H y el otro es 2-propilo, 2-met il-2 -pr opi lo , 2-metil-1-propilo, fenilmetilo o naf tilmetilo .

52. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 42, caracterizado porque R9 es un heterociclo de cinco miembros que tiene al menos un heteroátomo de nitrógeno y un heteroátomo de oxígeno.

53. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 42, caracterizado porque R9 se selecciona de 1 , 2 -oxa zoli lo , 1 , 3-oxa zol ilo y 1,2,4-oxadiazolilo sustituido e insustituido.

54. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 42, caracterizado porque R9 es 3-isoxazolilo o 5-isoxa zolilo insustituido o sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados de metilo y halógenos . S?

55. Un compuesto de acuerdo a la reivindicación 42, de la fórmula I-C": caracterizado porque R1( R2, R6, R7, R9, Z y Zj son como se definen en la reivindicación 42, o un profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mi smo .

56. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 55, caracterizado porque R2 es O^N Ar"' A> 0.^N .X)

57. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 55, caracterizado porque: Rj es H, F o metilo; Z y Zj. son cada uno independientemente H, F, -C02R21, -CN y -C(0)NR2J, R22, en donde R21 y R22 son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, un grupo acilo o un grupo tioacilo o R21 y R22, junto con los átomos a los que se enlazan, forman un grupo de heterocicloalquilo con la condición de que Z y Z 1 no sean ambos H; o Zi y Rlf juntos con los átomos a los que se enlazan, forman un grupo cicloalquilo o heterocicloalquílo; o Z y Zj, junto con los átomos a los que se enlazan, forman un grupo cicloalquilo o heterocicloalquilo; se selecciona de ?**-N o^ A"4 A O R6 es fenilmetilo insustituido o sustituido; R7 es alquilo o arilo; y R9 es 3-i soxazolilo o 5-isoxa zoli lo insustituido o sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados de metilo y halógenos.

58. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 57, caracterizado porque R7 se . > B y$SlSl~y selecciona de 2-propilo, 2-met?l-2-propi lo , 2-metil-l-propilo, fenilmetilo y naftijßet lio .

59. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente acept ais 1 e de acuerdo a la reivindicación 55, caracterizado porque Ri es H, Z y: R2 es CH2CH2C (O) NH2, R6 es CXX R7 es CH (CH3) 2, Z es H, Zj es C02CH2CH3, y R9 es jA>" X - . XX' R7 es CH(CH3)2, Z, es C02CH2CH3 y R9 es k?-

60. Un compuesto seleccionado del grupo que consiste de : y o un profármaco, sal farmacéuticamente aceptable, metabolito o solvato farmacéuticamente activo del

61. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a las reivindicaciones 1 a 60, caracterizado porque tiene una actividad ant ipicornavi r al que corresponde a un EC50 menor o igual a 100 µM en una prueba de cultivo celular Hl-HeLa .

62. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a las reivindicaciones 1 a 60, caracterizado porque tiene una actividad ant i r r inovi ral que corresponde a un EC50 menor o igual a 10 µM en una prueba de cultivo celular Hl-HeLa .

63. Un compuesto que tiene una fórmula seleccionada del grupo que consiste de: caracterizado porque: Rj, R.,, Z y Zj son como se definen en la reivindicación 1, n e s 1 o 2 ; Ry es H o alquilo inferior. R6 es alquilo, cicloalqui lo , heterocicloalqui lo , arilo o heteroaplo; R7 es alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, -0R17, -SRI7, -NR17R18, -NR?9NR¡7R?8 o -NR?7OR?ß, en donde Ra7, Rlß y R19 son cada uno independientemente H, alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo o acilo; y R9 es un heterociclo de cinco miembros que tiene de uno a tres heteroátomos seleccionados de O, N y S o un profármaco, sal farmacéuticamente aceptable, metabolito o solvato farmacéuticamente activo del mismo.

64. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 62, caracterizado porque: Ri es H, F o alquilo; Ry es H o metilo; R6 es un grupo alquilo opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de alquilo o arilo; R7 es alquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo o heteroarilo; R9 es un heterociclo de cinco miembros que tiene de uno a tres heteroátomos seleccionados de O, N y S, en donde al menos uno de los heteroétomos es nitrógeno, que es insustituido o sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados de los grupos alquilo inferior y halógenos; o un profármaco, sal farmacéuticamente aceptable, metabolito o solvato farmacéuticamente activo del mi smo .

65. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 63, caracterizado porque: R6 es arilmetilo o ar ilt iomet ilo ; R7 es un grupo alquilo; R9 es 3 -i soxa zol i lo o 5- i soxa zol ilo insustituido o sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados de metilo y halógenos; y ..L¿&--..,. .-'. fc,L Z es H y Zi es -C02R21, -CN o -C(0)NR21, R22, en donde R2? y R22 son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, un grupo acilo o un grupo tioacilo o R21 y R22, junto con los átomos a los que se enlazan, forman un grupo de heterocicloalquilo o Z y Zx juntos forman un éster o amida cíclico.

66. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 65, caracterizado porque: R6 es arilmetilo o ariltiometilo; y R7 se selecciona de 2-propilo, 2 -met i 1 -2 -propi lo , 2-metil-l-propilo y arilmetilo.

67. Un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 66, caracterizado porque Rj es fenilmetilo, en donde el radical fenilo tiene opcionalment e de uno a tres sustituyentes seleccionados de halógeno, alquilo inferior y alcoxi inferior.

68. Un compuesto de acuerdo a la reivindicación 63, caracterizado porque se selecciona del grupo que consiste de: o un profármaco, sal farmacéuticamente aceptable, metabolito o solvato farmacéuticamente activo del

69. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende: (a) una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos un agente ant ipicornaviral que es un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable como se define en las reivindicaciones 1 o 60; y (b) un transportador, diluyente, vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.

70. Un método para tratar una condición de enfermedad en mamífero mediada por la actividad de proteasa ant ipicorna vir a 1 , caracterizado porque comprende: administrar a un mamífero con la necesidad del mismo una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable como se define en las reivindicaciones 1 o 60.

71. Un método para inhibir la actividad de una proteasa 3C ant ipicorna viral , caracterizado porque comprende: poner en contacto la proteasa 3C ant ipicorna vi ral con una cantidad efectiva de al menos un compuesto, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo, sal o solvato farmacéuticamente aceptable como se define en las reivindicaciones 1 o 60.

72. Un método como se define en las reivindicaciones 71, caracterizado porque la proteasa 3C ant ipicornaviral es una proteasa rinoviral.

73. Un compuesto de la fórmula: caracterizado porque: p es un entero de 0 a 5; Au es CH o N, A12 y cada uno de A13 se seleccionan independientemente de C(R6j) (R6j), N(R61), S, S(O), S(0)2 y O, y A4 es NH o NR61, en donde cada R61 es independientemente H, alquilo, acilo o arilo, con la condición de que no más de dos heteroátomos se presenten consecutivamente en el anillo formado por Ap) cada R141 es independientemente H o alquilo inferior; R52, R53 y R54 se seleccionan cada uno independientemente de H, hidroxilo, alquilo, acilo y arilo o cualquiera de dos de R52, R53 y R54 juntos forman =0 o =C(R57) (R58) , en donde R57 y R58 se seleccionan cada uno independientemente de H, alquilo, C02 ( Cj-CG) alquilo , C (0) N (C?-C6) alquilo y C02(arilo); y R55 Y R56 son cada uno independientemente H o un grupo protector apropiado para el nitrógeno; o una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto .

74. Un compuesto de la fórmula: caracterizado porque: p es un entero de 0 a 5; R5 ! es H, alquilo, acilo o arilo; R52, R53 y R54 se seleccionan cada uno independientemente de H, hidroxi, alquilo, acilo y arilo o cualquiera de dos de R52, R53 y R54 juntos forman =0 o =C(R57) (R58), en donde R57 y R58 se seleccionan cada uno independientemente de H, alquilo, C02 ( C3-C6) alquilo , C (O) N (Cj-C alquilo y C02(ar?lo); y R55 y R56 son cada uno independientemente H o un grupo protector apropiado para el nitrógeno; o una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto .

75. Un compuesto o sal farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 74, caracterizado porque p es 1 o 2.

76. Un compuesto o sal farmacéuticamente aceptable de acuerdo a la reivindicación 75, caracterizado porque R52, R53 y R54 se seleccionan cada uno independientemente de H, alcoxi, hidroxi y carbonilo.

77. Un compuesto de acuerdo a la reivindicación 74, seleccionado del grupo que consiste teaáto.. -Hfc*. caracterizado porque P„ es un grupo protector apropiado para el nitrógeno y q es 1 o 2; sal farmacéuticamente aceptable del compuesto .

78. Un compuesto de acuerdo a la reivindicación 74, seleccionado del grupo que consiste de: caracterizado porque BOC es t-butiloxicarbonilo; o una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto.

79. Un compuesto que tiene la fórmula: caracterizado porque BOC es t-but íloxi carboni lo .