MX2012012236A

MX2012012236A - Aplicacion combinada de energia y composicion topica para regular la condicion de la piel de mamiferos.

Info

Publication number: MX2012012236A
Application number: MX2012012236A
Authority: MX
Inventors: David John Weisgerber; Nikki Elizabeth Annunziata; Tia Janinne Maurer
Original assignee: Procter & Gamble
Priority date: 2010-04-19
Filing date: 2011-04-19
Publication date: 2012-11-23
Also published as: CN102858265A; EP2560568A1; CA2795677A1; JP2013524946A; KR20120139822A; BR112012026871A2; WO2011133539A2; EP2560568B1; KR101490573B1

Abstract

Un método para regular la condición de la piel de mamíferos por medio de las etapas de aplicar una primera composición para el cuidado personal en un área de la piel que se desea regular; la primera composición para el cuidado personal contiene una composición en gel; en otra etapa la energía se suministra a la dermis para calentar el colágeno en la dermis de modo que el colágeno calentado en la dermis caliente la epidermis y el estrato córneo hasta que el estrato córneo alcance una temperatura externa de aproximadamente 37 °C a aproximadamente 48 °C; después, se controla el suministro de energía a la dermis para mantener la temperatura del estrato córneo en el intervalo de aproximadamente 37 °C a aproximadamente 48 °C.

Description

APLICACIÓN COMBINADA DE ENERGÍA Y COMPOSICIÓN TÓPICA PARA REGULAR LA CONDICIÓN PE LA PIEL PE MAMÍFEROS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a aplicaciones combinadas de energía y composiciones tópicas a la piel de mamíferos para regular la condición de la piel. Además, se describen los regímenes para usar los dispositivos y métodos de suministro de energía con la máxima eficacia para determinar la eficiencia de un dispositivo de suministro de energía, la composición y el régimen.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El tratamiento de la piel para evitar o reducir los efectos del envejecimiento cronológico intrínseco y ambiental extrínseco en la piel es una industria comercial de miles de millones de dólares apoyada por una inversión en dólares aún mayor para el desarrollo y validación de nuevas tecnologías. Desde hace varias décadas se conoce la administración de energía electromagnética (EM) a la piel por medio de la aplicación de EM en la superficie de la piel y se ha ¡mplementado en una amplia variedad de formas y a través de diversos dispositivos de suministro. Generalmente, los métodos de tratamiento de la piel basados en EM pueden dividirse en procedimientos ablativos y no ablativos, si bien ambos aprovechan el efecto termolítico de la aplicación de energía EM.

Se encuentra disponible para los consumidores una variedad de productos destinados a mejorar la condición de la piel y retardar o prevenir los típicos signos del envejecimiento. Estos signos incluyen, por ejemplo, líneas finas, arrugas, hiperpigmentación, palidez, flaccidez, ojeras, hinchazón ocular, tono desparejo de la piel, poros abiertos, reducción en la velocidad de renovación de las células epidérmicas y descamación o exfoliación anormales. Sin embargo, para algunos consumidores, la amplia variedad de productos disponibles y los progresos en la tecnología del cuidado de la piel todavía no logran producir los resultados deseados, y otros sienten la necesidad de recurrir a procedimientos médicos más invasivos.

Los procedimientos ablativos, tales como el láser ablativo, han demostrado su eficacia para la eliminación o renovación cutánea morfológica general con láser, tal como en procedimientos de eliminación de cicatrices y tatuajes y, además, han demostrado su eficacia para el tratamiento y mejoramiento del aspecto de la piel envejecida y foto dañada. Si bien los procedimientos ablativos son efectivos para mejorar el aspecto de las líneas finas y arrugas en las áreas periorbital y perioral de la piel del rostro cosméticamente vulnerable, las desventajas principales incluyen períodos prolongados de curación y recuperación que imponen al consumidor un aspecto cosmético muy comprometido por periodos indeseablemente prolongados. Además, frecuentemente, los consumidores consideran que los efectos secundarios potenciales de infección, formación de cicatrices e irregularidades en la pigmentación que pueden producirse son cosméticamente inaceptables, particularmente, cuando se relacionan con la piel del rostro.

Por ello, los esfuerzos de investigación y desarrollo recientes se centraron en proveer a los consumidores tratamientos antienvejecimiento y de rejuvenecimiento de la piel no ablativos más económicos, más cómodos y más seguros. Los regímenes cosméticos que implican la administración de energía térmica a la piel con el fin de promover un mejor aspecto de esta son muy conocidos en la industria. La tecnología de suministro de energía electromagnética en la forma de dispositivos de mano previstos para que el consumidor los use en el hogar ha estado disponible en el mercado prácticamente por una década. Las mejoras y los avances en la tecnología están dirigidos a maximizar un beneficio inducido térmicamente en tejidos cutáneos destinos más profundos y, al mismo tiempo, minimizar el daño indeseable tanto en el tejido destino como en los tejidos periféricos y superficiales. Se cree que el tratamiento térmico selectivo induce la formación de colágeno nuevo y el daño térmico selectivo induce, entre otros, la remodelación de la matriz dérmica. Sin embargo, se conoce que las tecnologías actualmente disponibles producen efectos secundarios negativos prolongados e indeseables de daño problemático que incluyen sobrecalentamiento, quemaduras, eritema e irregularidades pigmentarias.

Anteriormente, la eficacia de estos dispositivos y composiciones se determinaba solamente por métodos externos. Es decir, una mejora visible en la capa externa de la piel era un indicio de la eficacia del dispositivo de suministro de energía. Sin embargo, existen pocos métodos para determinar el tiempo, la temperatura y la composición óptima para estos dispositivos de suministro de energía. Además, se acepta, generalmente, que muchos de los cambios visibles producidos en la superficie de la piel son el resultado de cambios que se producen debajo de la superficie en las capas dérmica y epidérmica de la piel. Es difícil conocer precisamente cómo controlar y maximizar el desempeño de un dispositivo si no se conoce el efecto que tiene en las capas subyacentes de la piel.

La fototermólisis selectiva en el tejido de la piel es una forma de tratamiento cosmético muy usada, particularmente, en tratamientos que comprenden la administración de energía de láser monocromático y energía de luz pulsada intensa (IPL, por sus siglas en inglés) de amplio espectro. En estas tecnologías se aplica energía óptica directamente a la superficie de la piel y la penetración se basa en la transmisión a través de la epidermis y absorción en la dermis. La piel oscura y las manchas hiperpigmentadas en la epidermis pueden evitar la transmisión e impedir la eficacia del tratamiento por medio de la absorción de energía y, además, se puede producir el sobrecalentamiento de las áreas pigmentadas y, en consecuencia, la formación de ampollas, quemaduras y otros efectos cosméticamente indeseables.

Además, como alternativa a la termólisis basada en EM se ha investigado la corriente de radiofrecuencia (RF) conducida eléctricamente como una modalidad de tratamiento cosmético para la piel. En la industria medicinal se conoce el uso de corriente de RF y radiofrecuencias pulsadas (pRF) aun cuando el uso de la corriente de RF como tecnología no ablativa de rejuvenecimiento de la piel para autoaplicación por parte del consumidor todavía es relativamente novedosa. Cuando se aplica corriente de RF a la piel se produce una transferencia de corriente de RF bipolar a través de dos electrodos que se colocan directamente en la piel. Por ello, la corriente pasa directamente a través de la capa dérmica conducida de un electrodo al otro electrodo, y se distingue de la aplicación de energía EM que atraviesa la epidermis y está limitada por factores que afectan la profundidad de la penetración de la longitud de onda.

En teoría, la administración de corriente de RF ofrece más ventajas significativas para el tratamiento de la piel que la aplicación de energía EM. A diferencia de la energía electromagnética, por ejemplo, la energía de RF conducida eléctricamente es independiente de los cromóforos y ello evita complicaciones y problemas de eficacia relacionados con la existencia de un diferencial de absorción entre la piel pigmentada y no pigmentada y los problemas que se producen en el tratamiento de la piel más oscura que contiene más melanina absorbente de energía y la piel más clara que puede reflejar longitudes de onda ópticas. En ambos casos se pone en peligro la regularidad de los resultados y el control térmico en la piel que contiene cromóforos aún es un factor problemático.

Sin embargo, la incapacidad de los investigadores para optimizar los parámetros necesarios para obtener un beneficio deseado sin que se produzca un daño indeseable en la piel puede impedir la administración de corriente de RF a la piel en niveles de energía adecuados para que el tratamiento térmico sea eficaz. La corriente de RF se suministra a través del tejido dérmico debajo de la superficie de la piel, mientras que el control del efecto por medio de sensores de temperatura o humedad se limita a la superficie accesible de la piel. La impedancia de la corriente de RF es una función de la composición del tejido y varios atributos del tejido de la piel que incluyen la densidad y la integridad del colágeno, el nivel de hidratación y lo similar. Si bien la distancia entre electrodos y el control de parámetros, tales como la longitud y frecuencia del pulso pueden ajustarse, teóricamente, para optimizar el efecto y evitar cuestiones de seguridad, es prácticamente imposible realizar dichos ajustes sin aprovechar algún aparato u otros medios para controlar los cambios en la condición del tejido. En el caso del suministro basado en energía E , la superficie de la piel alcanza, típicamente, las temperaturas de tratamiento más altas de modo que el control de la temperatura en la superficie pueda evitar el daño no deseado en el tejido subepidérmico. Sin embargo, en el caso de la corriente de RF los tejidos subepidérmicos alcanzan una temperatura de tratamiento más alta que la piel superficial de modo que el daño puede producirse en los tejidos más profundos sin manifestarse en la superficie en forma medible. Por lo tanto, fuera de un entorno clínico y bajo la supervisión de personal médico altamente capacitado y el uso de instrumentación sofisticada se han evitado, generalmente, los dispositivos y regímenes para uso personal por parte de los consumidores basados solamente en el suministro de corriente de RF, ya que aún existen consideraciones relacionadas con la seguridad en niveles de tratamiento eficaces sin que haya un mecanismo de control subepidérmico apropiado. Los dispositivos de mano para el suministro de energía que proveen corriente de RF como una única modalidad de tratamiento y previstos para que los consumidores los usen en el hogar son prácticamente desconocidos. Uno de esos dispositivos (STOP™, Ultragen Ltd) se comercializa en Europa para uso personal por parte de los consumidores, pero las tolerancias establecidas para el tratamiento con el dispositivo son tan bajas para evitar el daño indeseable que no puede obtenerse evidencia objetiva de la eficacia clínica en condiciones controladas.

En consecuencia, la acción de la RF en el tratamiento de la piel está prácticamente limitada a una función coadyuvante o preparativa en conjunto con otros procedimientos termolíticos. Por ejemplo, en 2002, Bitter y Mulholland ("Report of a new technique for enhanced non-invasive skin rejuvenation using a dual mode pulsed light and radio frequency energy sources: selective radiothermolysis," J. Cosmet Dermatol 2002; 1 : 142-145) propusieron un protocolo de tratamiento basado en una combinación de corriente de RF e IPL y reportaron los resultados basados en el tratamiento facial de 100 sujetos de prueba, si bien los autores no pudieron describir parámetros de diseño del tratamiento específicos. En ese estudio se reportó que la RF aumentaba los efectos del tratamiento con IPL. Algunos efectos secundarios reportados incluyeron efectos de pigmentación cosméticamente indeseables y el dolor percibido por el consumidor se controló por medio de enfriamiento superficial.

Además, la RF se ha propuesto e investigado como útil para el tratamiento cosmético de la piel junto con la aplicación de energía óptica dirigida. Generalmente, según el diseño de este protocolo de tratamiento, la RF se usa como complemento de la energía óptica y se aplica de conformidad con algún parámetro de la energía óptica. Por ejemplo, en Hammes y col. ("Electro-optical synergy (ELOS™) for nonablative skin rejuvenation: a preliminary prospective study," Journal of European Academy of Dermatology. and Venereology 2006, 20, 1070-1075), los autores se centran en una frecuencia de pulso coordinante entre la corriente de RF y la energía óptica y sugieren que entre estas formas de energía existe una sinergia que puede permitir el uso de niveles más bajos y menos invasivos de energía óptica y, además, sugieren que los efectos secundarios asociados con la aplicación exclusiva de RF se reducen o evitan por medio del protocolo combinado. Además, los regímenes que emplean estos dispositivos incluyen medios para enfriar mecánicamente la piel en respuesta al sobrecalentamiento o para evitar el sobrecalentamiento.

En otro ejemplo, la solicitud publicada de los EE. UU. núm. 2008/0033516 A1 de Altshuler describe la "fotobioestimulación controlada de la temperatura" del tejido de la piel que implica una combinación del calentamiento de la piel hasta una profundidad destino y la irradiación de un área destino con radiación electromagnética. Altshuler destaca las tecnologías existentes para los métodos de tratamiento de la piel basados en la fotoestimulación con un nivel de luz bajo, nivel de láser bajo, monocromático y cuasi monocromático que según se piensa aumentan, generalmente, la producción de ATP, la proliferación celular y la producción de proteínas, además de desencadenar una respuesta de crecimiento mediante inducción de una respuesta inflamatoria de nivel bajo, pero destaca reportes de resultados incongruentes y falta de confirmación clínica de la eficacia. Altshuler plantea que la aplicación de energía térmica puede mejorar la respuesta fotoestimuladora. Altshuler enseña que un volumen de piel puede experimentar hipertermia producida por cualquier fuente conocida para elevar la temperatura del volumen, preferentemente, hasta 37 °C a 45 °C y, específicamente, ejemplifica el calentamiento por medio de aire caliente, corriente eléctrica CA o CC, el uso de una fuente de calor conductor, radiación por ultrasonido o microondas o cualquier longitud o longitudes de onda de radiación de EM en el intervalo de 380-2700 nm. Sin embargo, en todas las modalidades de Altshuler, el efecto deseado para el tratamiento se obtiene por medio de energía EM. Altshuler enseña que el calor provee una mejora sinérgica en los efectos de fotoestimulación deseados, pero, además, sugiere que el calor en ausencia de EM puede producir una bioestimulación indeseable, por ejemplo, reducir la velocidad de la reparación del daño en el ADN inducido por radiación, la producción de proteínas de choque térmico que generan la tolerancia a aplicaciones de calor posteriores y la modificación de procesos enzimáticos que incluyen aquellos implicados en la regeneración y reparación del tejido de la piel y, generalmente, desaconseja el uso de calor en ausencia de luz como modalidad para el tratamiento de la piel. Altshuler no recomienda formas para superar las deficiencias relacionadas con la incapacidad para evaluar o controlar las condiciones subepidérmicas de la piel.

Además, la eficacia de los dispositivos disponibles actualmente siempre dependen del cumplimiento por parte del consumidor. Los consumidores disponen de poco tiempo por día para sus cuidados de belleza. Si bien los fabricantes de dispositivos desearían recomendar a los consumidores que usen los dispositivos por periodos prolongados para obtener el beneficio máximo, es muy probable que los consumidores no lo cumplan. Por lo tanto, existe un cierto equilibrio entre recomendar el uso prolongado del dispositivo y reconocer que los consumidores disponen de poco tiempo libre por día para usar el dispositivo.

Además, la experiencia del consumidor es importante cuando se diseña un dispositivo, una composición y un régimen. Por ejemplo, los sonogramas son procedimientos que se realizan comúnmente y proveen un beneficio médico importante. Pero el gel usado en los procedimientos de sonogramas es espeso y difícil de eliminar y ello es incómodo para el consumidor. Además, muchos dispositivos de suministro de energía calientan muy rápidamente o en exceso la parte externa de la piel y, por ello, el consumidor siente cierta incomodidad.

Por ello, existe una necesidad constante de lograr métodos para mejorar suficientemente la condición de la piel para evitar la necesidad de procedimientos más invasivos y los riesgos asociados con ellos. Y, existe una necesidad de lograr métodos mejores para determinar la eficacia de los dispositivos de suministro de energía y dichos métodos pueden usarse, después, para desarrollar experiencias más aceptables para el consumidor, y al mismo tiempo, lograr los resultados deseados que incluyen un mejor aspecto de la piel.

En la industria persiste la necesidad de dispositivos, terapias y regímenes de tratamiento y rejuvenecimiento de la piel no ablativos seguros y eficaces adecuados para uso personal por parte de los consumidores. Particularmente, persiste la necesidad de un medio para tratar el tejido de la piel subepidérmica mediante el mejoramiento de la síntesis del colágeno y la remodelación dérmica sin causar daños indeseables en el tejido destino tratado o en el tejido circundante. Existe una necesidad específica en la industria de métodos para evaluar y controlar los efectos de tratamientos realizados por el consumidor basados en corriente de RF para optimizar la administración de corriente de RF para proveer beneficios deseados y persiste la necesidad de terapias basadas en corriente de RF optimizadas que evitan los problemas asociados con las terapias basadas en EM y que no se basan en el enfriamiento mecánico en conjunto con el tratamiento.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a un método para regular la condición de la piel de mamíferos. La piel tiene al menos tres capas: una capa externa de estrato córneo; una epidermis; y una dermis. Y el método comprende las etapas de aplicar una primera composición para el cuidado personal en un área de la piel que se desea regular, en donde la primera composición para el cuidado personal comprende una composición en gel. Otra etapa comprende suministrar energía a la dermis para calentar el colágeno en la dermis de modo que el colágeno calentado en la dermis caliente la epidermis y el estrato córneo hasta que el estrato córneo alcance una temperatura externa de aproximadamente 37 °C a aproximadamente 48 °C. Después, se controla el suministro de energía a la dermis para mantener la temperatura del estrato córneo en el intervalo de aproximadamente 37 °C a aproximadamente 48 °C. La energía se puede suministrar de un dispositivo de energía de RF y la energía de RF se suministra a través de dos o más electrodos que entran en contacto con el estrato córneo a través de la composición en gel. Algunas veces se prefiere que el dispositivo de suministro de energía no emita luz y no produzca energía electromagnética. Y en una modalidad, la composición en gel tiene una conductividad eléctrica de aproximadamente 1000 a aproximadamente 2000 pS/cm.

En otra modalidad de la presente invención, cuando se activa el dispositivo de energía de RF este suministra la energía de RF en el intervalo de 35 % a aproximadamente 65 % de potencia total por aproximadamente 20 a aproximadamente 50 segundos, después, la potencia se incrementa a un valor de aproximadamente 65 % a aproximadamente 100 % por aproximadamente 20 a aproximadamente 50 segundos y, después, se controla el dispositivo de energía de modo que la temperatura del estrato córneo se mantenga en el intervalo de aproximadamente 37 °C a aproximadamente 48 °C.

En aun otra modalidad de la presente invención, el dispositivo de suministro de energía es un dispositivo de mano, y se aplica debajo del ojo de un consumidor y se mueve por debajo del ojo hasta justo por encima del área de patas de gallo y, después, se invierte la dirección, y el dispositivo de suministro de energía se mueve hacia adelante y atrás a lo largo de de este trayecto por un tiempo de aproximadamente 3 a aproximadamente 6 minutos. Este método puede repetirse por debajo del otro ojo del consumidor. Además, el dispositivo de suministro de energía puede aplicarse por encima del ojo de un consumidor y moverse arriba del ojo hasta justo debajo del área de patas de gallo y, después, se invierte la dirección y el dispositivo de suministro de energía se mueve hacia adelante y atrás a lo largo de este trayecto por un tiempo de aproximadamente 3 a aproximadamente 6 minutos. Este método puede repetirse por encima del otro ojo del consumidor.

Se describe un régimen de etapas múltiples que comprende las etapas de aplicar el dispositivo de suministro de energía debajo de un ojo de un consumidor y moverlo hasta justo por encima del área de patas de gallo en un movimiento continuo hacia atrás y adelante por un tiempo de aproximadamente 3 a aproximadamente 6 minutos, después, se aplica el dispositivo de suministro de energía por encima de un ojo del consumidor y se mueve hasta justo debajo del área de patas de gallo en un movimiento hacia atrás y adelante continuo por un tiempo de aproximadamente 3 a aproximadamente 6 minutos, se repite estas dos etapas en el otro ojo del consumidor de modo que cada área de patas de gallo adyacente a ambos ojos del consumidor se trate por un tiempo de aproximadamente 6 a aproximadamente 12 minutos. Este régimen de etapas múltiples puede completarse al menos una vez al día por un periodo del régimen de 3 a 5 días por semana, durante un tiempo de aproximadamente 3 semanas a aproximadamente 6 semanas. Después, el consumidor puede esperar un lapso de aproximadamente 2 a aproximadamente 8 meses y repetir el régimen de etapas múltiples por el periodo del régimen. Preferentemente, las líneas finas y arrugas alrededor de los ojos del consumidor se reducen visiblemente después de cada periodo del régimen.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Mientras que la descripción concluye con las reivindicaciones que indican, particularmente, y reivindican, distintivamente, la presente invención, se cree que el mismo se comprenderá mejor a partir de la siguiente descripción tomada en conjunto con las figuras adjuntas y en las cuales: La Figura 1 es una representación esquemática del daño de origen natural y el ciclo de reparación en la piel humana; la Figura 2A, 2B ilustra las propiedades del colágeno en el ser humano; la Figura 3 es una representación esquemática del modelo biológico de la eficacia de la administración de corriente de RF; la Figura 4A, 4B representa las veces de cambio promedio en 24 horas para los genes de la recopilación; la Figura 5A, 5B representa las veces de cambio promedio en 24 horas para los genes ilustrativos; la Figura 6A, 6B representa las veces de cambio promedio en 1 mes para los genes de la recopilación; la Figura 7A, 7B representa las veces de cambio promedio en 1 mes para los genes ilustrativos; la Figura 8A, 8B son dos gráficos de la transferencia de calor simple por RF; la Figura 9 es una representación esquemática de la transferencia de calor simple por RF; la Figura 10 es una representación esquemática del área de patas de gallo alrededor de los ojos de un consumidor; la Figura 1 es la zona A de la piel de un consumidor; la Figura 12 es la zona B de la piel de un consumidor; la Figura 13 es la zona C de la piel de un consumidor; la Figura 14 es la zona D de la piel de un consumidor; la Figura 15 es la zona E de la piel de un consumidor; y la Figura 16 es la zona F de la piel de un consumidor.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN En todas las modalidades de la presente invención, todos los porcentajes se expresan en peso de la composición total a menos que se indique específicamente de cualquier otra forma Todos los intervalos son relaciones en peso a menos que se indique específicamente de cualquier otra forma. Todos los intervalos son globales y combinables. La cantidad de dígitos significativos no expresa una limitación sobre las cantidades indicadas ni tampoco sobre la precisión de las mediciones. Debe entenderse que todas las cantidades numéricas están modificadas por la palabra "aproximadamente" a menos que se indique específicamente de cualquier otra forma. Debe entenderse que todas las mediciones se realizan a 25 °C y en condiciones del ambiente, en donde "condiciones del ambiente" se refiere a las condiciones que tienen lugar a una atmósfera de presión y a 50 % de humedad relativa.

Debe entenderse que las etapas de los métodos descritos en cualquiera de las reivindicaciones anexas a la presente sobre el particular pueden realizarse en cualquier orden a menos que se especifique de alguna otra manera. Por ejemplo, en un método reivindicado que enumere las etapas (a), (b) y (c), la etapa (c) puede llevarse a cabo antes de las etapas (a) y (b) o entre ellos. Más aún, las etapas individuales, aunque descritas como etapas distintas, pueden llevarse a cabo durante períodos que se superponen parcial o complemente.

En la presente descripción, "regular la condición de la piel" significa mejorar la condición de la piel o regular profilácticamente la condición de la piel, e incluye, por ejemplo, proteger el tejido contra la radicación ultravioleta, y regular los signos del envejecimiento de la piel. En la presente descripción, "mejorar la condición de la piel de mamíferos" significa un cambio positivo perceptible a la vista o al tacto en la apariencia y la sensación del tejido. Las condiciones que pueden regularse o mejorarse incluyen, pero no se limitan a, una o más de las siguientes: reducir la apariencia de arrugas y líneas profundas y gruesas, líneas finas, grietas, protuberancias y poros abiertos; engrosamiento de la piel (p. ej., la formación de capas epidérmicas, dérmicas o subdérmicas de la piel y, donde resulta aplicable, las capas queratinosas de las uñas y del tallo del cabello, para reducir la atrofia de la piel, del cabello o de las uñas); aumentar la circunvolución de los bordes dérmicos-epidérmicos (conocidos, además, como puentes interpapilares); impedir la pérdida de la elasticidad de la piel o del cabello, por ejemplo, mediante la pérdida, daño o inactivación de la elastina funcional de la piel, lo que produce condiciones tales como elastosis, flaccidez, pérdida de la retracción de la piel o del cabello con la deformación; reducción de la adiposis; cambios en la coloración de la piel, el cabello o las uñas, por ejemplo, ojeras, manchas (tales como manchas rojas desparejas debido a, por ejemplo, rosácea), palidez, decoloración provocada por telangiectasia o vascularizaciones aracnoideas, sequedad, fragilidad y encanecimiento.

Como se usa en la presente descripción, "signos del envejecimiento de la piel" incluyen, pero no se limitan a, las manifestaciones perceptibles visuales y táctiles externas, así como a otros macro o microefectos debidos al envejecimiento de la piel. Estos signos pueden ser la consecuencia de procesos que incluyen, pero no se limitan a, desarrollo de interrupciones en la textura, tales como arrugas y arrugas profundas y gruesas, líneas finas, líneas en la piel, grietas, protuberancias, poros abiertos, aspereza o rugosidad; descamación; sequedad; pérdida de la elasticidad de la piel; decoloración (incluidas las ojeras); manchas; palidez; regiones de piel hiperpigmentada, tales como manchas seniles y pecas; queratosis; diferenciación anormal; hiperqueratinización; elastosis; ruptura del colágeno y otros cambios histológicos en el estrato córneo, la dermis, la epidermis, el sistema vascular (p. ej., telangiectasia o vascularizaciones aracnoideas) y los tejidos subyacentes (p. ej., grasa o músculos), especialmente los próximos a la piel.

Como se usa en la presente descripción, "hiperpigmentación" se refiere a un área de la piel en la cual la pigmentación es mayor que la del área adyacente (p. ej., un área pigmentada, una mancha de envejecimiento y lo similar).

En la presente descripción, "composición de cuidado personal" significa composiciones apropiadas para aplicación tópica en la piel de mamíferos. Las composiciones para el cuidado personal descritas en la presente descripción pueden contener uno o más activos para el cuidado de la piel. Como se usan en la presente descripción, "activos para el cuidado de la piel" o "activos" significan compuestos que contribuyen a regular la condición de la piel y de la piel de otros mamíferos, por ejemplo, al brindarle un beneficio o mejora a la piel.

Como se usa en la presente descripción, "dispositivo de suministro de energía" significa cualquier dispositivo usado para suministrar energía a la piel o el cabello de mamíferos. En la presente descripción, "suministro de energía" significa que la superficie o las capas de la piel están expuestas a la energía proveniente de un dispositivo de suministro de energía, que puede penetrar las capas deseadas de la piel, incluidos el tallo del cabello o folículo capilar.

Como se usa en la presente descripción, "nivel continuo" significa que la energía suministrada por el dispositivo, o salida de energía, permanece en un nivel esencialmente constante entre el momento de la activación del dispositivo y el momento de desactivación del dispositivo.

Como se usa en la presente descripción, "pulsada" significa que entre el momento de la activación del dispositivo y el momento de desactivación del dispositivo, la salida de energía varía de manera predecible, caracterizada por períodos de salida más alta (pulsos) que alternan con períodos de salida más baja. El comienzo de los pulsos puede ser abrupto o gradual. "Predecible" significa que las intensidades de los picos de pulsos, las formas de los pulsos, las duraciones de los pulsos y las separaciones temporales entre los pulsos son prácticamente idénticos. La duración de los pulsos y los intervalos entre los pulsos pueden variar.

Como se usa en la presente descripción, "de mano" significa que el dispositivo tiene un peso y un tamaño adecuados para que pueda sostenerse cómodamente en la mano de un ser humano adulto normal.

La piel humana puede dividirse en dos capas estructurales principales: la epidermis y la dermis subepidérmica o subyacente. La epidermis con el estrato córneo sirve como una barrera biológica para el ambiente. Las células formadoras de pigmento, denominadas melanocitos, están presentes en la capa basilar de la epidermis y se considera que son los determinantes principales del color de la piel.

La dermis subyacente provee el soporte estructural principal de la piel. Está compuesta, principalmente, por una proteína extracelular denominada colágeno. El colágeno se produce por medio de los fibroblastos y se sintetiza como una hélice triple con tres cadenas polipeptídicas conectadas con uniones químicas lábiles al calor y estables al calor. Cuando el tejido que contiene colágeno se calienta se producen alteraciones en las propiedades físicas de esta matriz de proteínas a una temperatura característica. La transición estructural de la contracción del colágeno y la remodelación de la matriz de colágeno se producen con calor.

Dentro de la piel se produce cierta actividad de reparación para promover la producción continua de colágeno. Durante el envejecimiento, el daño puede producirse con mayor velocidad que la actividad de reparación o la velocidad a la cual se produce el daño puede ser prácticamente constante, pero la actividad de reparación se hace más lenta. En cualquiera de los casos, el resultado es la reducción del colágeno y un peor aspecto que se manifiesta por medio de signos de envejecimiento que incluyen la presencia de defectos en la superficie, tales como líneas finas, arrugas y manchas hiperpigmentadas. El ciclo de actividad de reparación normal y el impacto producido en el aspecto con el tiempo se ilustran en las Figuras 1 y 3.

En la Figura 1 los cuadros representan las causas normales de producción de colágeno. Por muchas razones, el aumento del colágeno en la piel y la velocidad de reparación y remplazo de esta contribuyen a que la piel exhiba un aspecto más voluminoso, saludable y atractivo. La proliferación y remodelación dérmica regular se produce naturalmente, pero, desafortunadamente, estos procesos se hacen más lentos a medida que envejecemos. Además, el colágeno se produce cuando la piel está dañada, por ejemplo, después de la inflamación o del ataque, por ejemplo, de la radiación solar. Los círculos en la Figura 1 representan algunos de los mecanismos de formación del colágeno y de control de su formación. La actividad de las MMP y de la citocina son solamente dos cantidades medibles que ayudan a controlar el ciclo de reparación y renovación del colágeno.

La Figura 3 es una representación esquemática del modelo biológico de acción doble para la eficacia del Elure 20. La piel 21 se divide en tres capas, el estrato córneo 30, la epidermis 32 y la dermis 34. La remodelación del colágeno y producción de colágeno nuevo se produce en la capa dérmica. El ataque normal 22 a la piel 21 se produce constantemente e incluye el envejecimiento normal, el ataque de UV, los cambios en el pH, los ataques químicos y otros. Los ataques normales 22 producen daño en el colágeno 24. Igualmente, se produce inflamación normal de nivel bajo 26 que genera actividad de la citocina, HSP y HSF. En última instancia, la energía térmica de nivel bajo repetida produce una mayor actividad de MMP 36 en la producción de fragmentos de colágeno. El aumento en el calor causa una regulación en alza 38 de la actividad celular que genera la formación y reparación del colágeno. Ambos mecanismos 36 y 38 generan la formación y remodelación de colágeno saludable 28.

Si bien la medición del colágeno indica que su temperatura de fusión es de hasta 50 °C, el ciclo de reparación puede alterarse y mejorarse si se agrega calor en niveles más bajos. La escisión térmica de la reticulación del enlace de hidrógeno intramolecular se produce por el equilibrio entre los eventos de escisión y los eventos de relajación (reformación de enlaces de hidrógeno). Para que se produzca este proceso no se requieren fuerzas externas. En consecuencia, la escisión térmica de los enlaces de hidrógeno intramoleculares produce tensión intermolecular. La contracción de la estructura terciaria de la molécula reticulada crea el vector de contracción intermolecular inicial. Las curvas de calentamiento del modelo de RF se ilustran en las Figuras 8A, 8B y 9.

La estructura dérmica está mayormente comprendida por colágeno 1 , 50, Figuras 2A y 2B. Los fibroblastos expresan el colágeno como procolágeno 52, una proteína de una sola cadena. Cuando se produce la expresión, el procolágeno 52 se ensambla al colágeno 1 50 y se pliega en una conformación de hélice triple denominada "tropocolágeno" 54. Este proceso se ilustra en las Figuras 2A y 2B.

La reticulación del colágeno puede ser intramolecular (enlace de hidrógeno o covalente) o intermolecular (enlaces iónicos o covalentes). Las causas de la desnaturalización del colágeno como una función de la edad incluyen el ataque de energía térmica, el ataque mecánico, los efectos del pH en la colagenasa y la velocidad de la MMP, el estado de hidratación y la alteración general en el equilibrio natural de las microfibrillas de colágeno que pueden "entrelazarse" o "separarse" y, por lo tanto, son más vulnerables a la degradación por la acción de la MMP. Si bien estos representan múltiples tipos de ataques, la velocidad de todos ellos puede controlarse por medio de la temperatura. Además, el ciclo de recambio del colágeno normal puede regularse dentro de un intervalo de temperatura de <37 °C - 43 °C.

La escisión de enlaces de colágeno se produce, además, a temperaturas más bajas, pero a una velocidad menor. La escisión térmica de nivel bajo se asocia, frecuentemente, con el fenómeno de relajación en el cual los enlaces se vuelven a formar sin mucho cambio en la longitud molecular.

La remodelación dérmica es un fenómeno biofísico que se produce a niveles celulares y moleculares. La contracción molecular o desnaturalización parcial del colágeno implica la aplicación de una fuente de energía que desestabiliza el eje longitudinal de la molécula mediante escisión de los enlaces lábiles al calor de la hélice triple. En consecuencia, se crea un esfuerzo para romper los enlaces intermoleculares de la matriz. Este es, prácticamente, un proceso extracelular, mientras que la contracción celular requiere un periodo de tiempo para la migración y multiplicación de fibroblastos en un área dañada. Una respuesta curativa implica, generalmente, un proceso inflamatorio inicial que consiste en la infiltración de glóbulos blancos o leucocitos que eliminan los restos celulares. Después de ello, los fibroblastos proliferan en el sitio de la lesión y/o se produce un aumento en el recambio con un incremento final en el colágeno disponible para la deposición. Las células de fibroblastos se diferencian en miofibroblastos contráctiles que son la fuente de contracción del tejido celular blando. Después de la contracción celular, el colágeno se deposita como una matriz de soporte estática en la estructura del tejido blando tensada. La deposición y remodelación posterior de esta matriz de cicatriz incipiente provee el medio para alterar la consistencia y geometría del tejido blando para propósitos estéticos.

En la industria se conoce la aplicación de energía térmica para iniciar la cascada de daño y reparación y, en última instancia, lograr una mejora en el aspecto superficial de la piel; sin embargo, las tecnologías disponibles actualmente se asocian con deficiencias conocidas. Por ejemplo, los dispositivos de suministro láser usan longitudes de onda de luz específicas que penetran la piel, se unen a cromóforos específicos y, a través de un proceso denominado fototermólisis selectiva, eliminan varios colores y pigmentos de la piel. Los láseres son equipos grandes y costosos, solamente tratan problemas o colores específicos en la piel, son propensos a causar quemaduras de láser y cicatrices, pueden causar hiper y/o hipopigmentación y pueden provocar lesiones oculares al usuario y a los pacientes. Los sistemas de luz de banda ancha intensa emiten múltiples longitudes de onda de luz y, a través de la fototermólisis selectiva mejoran, además, la decoloración de la piel y, a través del calentamiento de la piel, producen una mejora no específica en la textura de la piel. Los sistemas son, además, más grandes y costosos, las mejoras en las texturas y arrugas de la piel son mínimas y existe, además, el riesgo de producir quemaduras en la piel, hipo o hiperpigmentación y cicatrices. Generalmente, la energía electromagnética se aplica a través de la epidermis y la penetración está limitada por factores de pigmentación en la superficie y composición de la capa dérmica.

En la industria del tratamiento de la piel se conocen, además, las tecnologías de radiofrecuencia. La tecnología de RF usa corriente eléctrica para calentar la dermis y estimular la producción de colágeno y fibras de elastina que afirman y tensan la piel. Sin embargo, la tecnología de última generación exhibe desventajas considerables debido a la incapacidad para optimizar los parámetros del tratamiento. La aplicación de corriente de RF crea un gradiente térmico en la piel que es inverso a otras tecnologías de suministro de energía térmica. La administración de corriente de RF se realiza entre electrodos colocados en la piel a cierta distancia entre ellos. La corriente es conducida entre los electrodos, a través de la dermis, de modo que la temperatura de la dermis sube más rápidamente que la temperatura en la superficie de la piel. Dado que la mayoría de los dispositivos para medir parámetros de la piel están diseñados para la medición en la superficie de la piel, la dermis puede calentarse excesivamente antes de la medición.

Por consiguiente, en la industria se ha evitado el tratamiento por medio de corriente de RF en ausencia de enfriamiento térmico rápido, enfriamiento mecánico u otras tecnologías diseñadas para controlar el calentamiento interno.

Sin embargo, el uso de avances recientes en la biotecnología de la genómica y proteonómica ha permitido a los inventores de la presente invención desarrollar métodos para evaluar los efectos de la administración dérmica de corriente de RF. Particularmente, los inventores de la presente invención analizaron un grupo de genes potenciales identificados como implicados en la matriz de colágeno dérmico, inflamación dérmica y remodelación y en la diferenciación epidérmica. Las firmas genéticas y los constituyentes de matrices génicas basados en los perfiles de expresión génica resultantes se determinaron mediante análisis y revisión de la regulación diferencial de los genes potenciales cuando se exponen a parámetros, condiciones y regímenes de tratamiento con corriente de RF.

La energía suministrada en las capas de la piel y/o dentro de ellas puede estar en la forma de energía de RF que incluye, por ejemplo, ondas y microondas de radiofrecuencia. Los dispositivos de energía de RF ilustrativos se describen en las patentes de los EE. UU. núms.: 6,889,090; 6,702,808; 6,662,054; 5,569,242; 5,755,753; 6,241 ,753; 6,430,446; 6,350,276; 5,919,219; 5,660,836; 6,413,255; 6,228,078; 5,366,443; y 6,766,202.

El método de la presente invención comprende la etapa de aplicar una primera composición para el cuidado personal y, opcionalmente, una segunda composición para el cuidado personal en un área de la piel del mamífero. La primera y segunda composiciones para el cuidado personal pueden encontrarse en una variedad de formas que incluyen, pero no se limitan a, lociones, cremas, sueros, espumas, geles, atomizadores, ungüentos, mascarillas, barras, humectantes, parches, polvos o toallitas. En una modalidad, la primera composición para el cuidado personal se aplica antes o durante el suministro de energía. En una modalidad alternativa, la segunda composición para el cuidado personal se aplica después de la aplicación de la primera composición y del suministro de energía. Opcionalmente, el método de la presente invención puede comprender la etapa de aplicar una tercera composición para el cuidado personal en la piel del mamífero, en donde la tercera composición comprende un agente acondicionador. En una modalidad, la tercera composición para el cuidado personal se aplica antes de la aplicación de la primera composición para el cuidado personal. Preferentemente, la tercera composición para el cuidado personal se aplica por lo menos 24 horas antes del suministro de energía. En una modalidad alternativa, la primera composición para el cuidado personal se aplica dos veces por día, y la energía se suministra una vez al día; alternativamente, una vez por semana y, alternativamente, una vez al mes. En una modalidad, la primera composición para el cuidado personal se aplica en la piel dos veces por día, y la energía se suministra en la piel por semana.

Las composiciones para el cuidado personal primera, segunda y tercera pueden contener una variedad de ingredientes; pueden encontrarse ejemplos no limitantes de ellos en el CTFA International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook (Diccionario y manual internacional de ingredientes cosméticos de la CTFA), décima edición (2004).

Las composiciones de la presente invención pueden comprender de 50 % a 99.9 % de un portador dermatológicamente aceptable. El portador de la presente invención puede estar en la forma de una emulsión. En la presente descripción, "emulsiones" contienen, generalmente, una fase acuosa y una fase aceitosa. Los aceites pueden derivarse de animales, plantas o petróleo, pueden ser naturales o sintéticos, y pueden incluir aceites de silicona. Los portadores de emulsiones incluyen, pero no se limitan a, aceite en agua, agua en aceite, agua en aceite en agua, y aceite en agua en emulsiones de silicona. En una modalidad, el portador dermatológicamente aceptable comprende una emulsión de aceite en agua y, alternativamente, una emulsión de silicona en agua. La emulsión puede comprender, además, un humectante, por ejemplo, glicerina y un emulsificante no iónico, catiónico y/o aniónico. Los emulsionantes adecuados se describen, por ejemplo, en la patente de los EE. UU. núm. 3,755,560 concedida a Dickert y col., patente de los EE. UU. núm. 4,421 ,769 concedida a Dixon y col. y en McCutcheon's Detergents and Emulsifiers, edición norteamericana, páginas 3 7-324 (1986).

Se puede usar una amplia variedad de cantidades de las composiciones de la presente invención para mejorar la condición de la piel. La cantidad de composición para el cuidado personal que se aplica en la piel puede variar dependiendo del lugar del cuerpo y del beneficio deseado. Las cantidades ilustrativas incluyen de 0.1 mg/cm2 a 40 mg/cm2. Una cantidad de aplicación útil es de 0.5 mg/cm2 a 10 mg/cm2.

Puede inducirse un cambio de temperatura simultáneamente en la piel o alternativamente, en una composición aplicada a la superficie de la piel. Este cambio de temperatura es adicional a cualquier cambio de temperatura inducido por la misma energía suministrada. Por ejemplo, la piel puede calentarse antes del suministro de energía o, alternativamente, la piel puede enfriarse antes, durante o después del suministro de energía.

El uso de paneles genéticos y firmas genéticas después del tratamiento combinado con una investigación de consumo extensa permitió desarrollar zonas de régimen que optimizan el tamaño del área de tratamiento y también determinar el tiempo de tratamiento óptimo. En contraposición a las enseñanzas de la industria se descubrió que el uso del dispositivo sobre áreas extensas no es el mejor método de tratamiento. Cuando se trata un área demasiado grande, la porción inicial puede enfriarse y recuperarse antes de que el consumidor pase el dispositivo otra vez sobre ella. Si se trata un área demasiado pequeña, existe el riesgo de que el consumidor trate en exceso el área y genere un daño innecesario. Además, el tratamiento propiamente dicho requiere mucho trabajo por parte del consumidor y la división del tratamiento en secciones distintas hace que para el consumidor sea más fácil cumplir el régimen. Igualmente, para el consumidor es mucho más agradable si la composición para el cuidado personal usada con el dispositivo se puede aplicar en un área pequeña, tratar el área y, después, eliminar cualquier resto de composición para el cuidado personal. En cambio, la experiencia del tratamiento puede ser desagradable para el consumidor si coloca la composición para el cuidado personal en todo el rostro o incluso en la mitad del rostro. Esto, a su vez, tiene un efecto negativo en el cumplimiento por parte del consumidor.

Con referencia a la Figura 10 en donde se identifica el área de patas de gallo 60 del consumidor 62 con un círculo con guiones, esta área se encuentra por encima y por debajo de los ojos 64 y adyacente a la esquina externa de cada ojo. Se sabe que las áreas de patas de gallo 60 son propensas a formar arrugas y líneas finas a medida que el humano envejece y están sujetas a ataques ambientales. La Figura 11 muestra la Zona A 70 en donde las flechas dentro de la Zona A demuestran un trayecto de tratamiento ilustrativo para el dispositivo (no se ilustra). Los tiempos del tratamiento se indican anteriormente. La Figura 10 ilustra la Zona B 72 que está sobre el mismo ojo del consumidor 62 y se superpone al área de patas de gallo 60. Las flechas ilustrativas muestran un trayecto de tratamiento posible. Al definir la Zona A 70 y la Zona B 73 de esta manera el área de patas de gallo 60 se trata el doble que la porción sin patas de gallo de las Zonas A y B. Este es un descubrimiento importante porque la mayor parte de las líneas finas y arrugas en el rostro de un consumidor que necesita tratamiento está en el área de las patas de gallo.

Las Figuras 13 y 14 ilustran Zonas C 74 y D 76 en el otro ojo 64 del consumidor 62. Como es de esperar, estas áreas de tratamiento son prácticamente similares y se tratan de la misma manera que las Zonas A y B.

En las Figuras 15 y 16 se ilustra un protocolo de tratamiento alternativo en donde las Zonas E 80 y F 82 se ilustran en el consumidor 62.

Estas áreas de tratamiento con forma de "C" tratan el área de patas de gallo 60, Figura 10, solamente una vez en cada pasada, pero el área de tratamiento con forma de "C" más grande permite que cada área de la piel tratada se enfríe un poco antes de hacer otra pasada con el dispositivo. Por lo tanto, esto es más cómodo para el consumidor, pero el área de patas de gallo 60, Figura 10, se trata solamente durante un ciclo de tratamiento.

Opcionalmente, puede usarse una segunda composición para el cuidado personal en conjunción con el método anteriormente descrito. La segunda composición para el cuidado personal puede usarse entre períodos de tratamiento sucesivos, que emplean la primera composición para el cuidado personal y el dispositivo térmico. La segunda composición para el cuidado personal comprende, preferentemente, por lo menos un activo para el cuidado de la piel que no está presente en la primera composición para el cuidado personal.

La aplicación de RF y los regímenes de tratamiento que comprenden la administración de corriente de RF a través de la dermis pueden diseñarse, por primera vez, de modo que optimicen los efectos deseados para el tratamiento con RF. Cuando se realizó el análisis y la revisión de los datos de la expresión génica se descubrió, sorprendentemente, que el conjunto de datos de genes potenciales podría reducirse a tres subconjuntos específicamente útiles para optimizar los regímenes de tratamiento y proveer un aumento en el colágeno dérmico y la remodelación dérmica inducida por el esfuerzo hormético deseado, sin que se produzca una respuesta al daño de la citocina inflamatoria más problemática. Como bien conocen los inventores de la presente invención, esta es la primera vez que la genómica se ha aplicado al tratamiento cosmético que emplea tecnología de corriente de RF. Los perfiles de expresión revelan que la administración controlada y optimizada provee un esfuerzo hormético que inicia y mantiene la remodelación dérmica deseable y al mismo tiempo evita el daño tradicional asociado con los efectos biológicos no deseables. La presente invención provee matrices génicas, firmas genéticas, métodos de análisis y regímenes optimizables novedosos basados en estos descubrimientos.

Los genes investigados como genes potenciales incluyen los genes asociados con la integridad de la matriz dérmica (FBN1 , FBLN1 , TNXB, FN1, LOXL2, COL3A1 , COL1A1 , ELN y LOXL1), los genes asociados con la remodelación iniciada por inflamación dérmica (TIMP2, IL1A, TIMP1 , TNF, MMP1 , MMP9, MMP3, SOD2 y IL1B) y los genes asociados con la función de barrera epidérmica (KRT2, KRT6A, CLDN1 , LOR, FLG, IVL, DRT10, AQP3 y KRT14). Los subconjuntos derivados del análisis de los datos de expresión para estos genes se indican en la Tabla 1 (marcadores dérmicos), Tabla 2 (marcadores de remodelación de la matriz, es decir, iniciadores positivos de esfuerzo hormético) y Tabla 3 (marcadores de una respuesta a la citocina inflamatoria, es decir, daño fuera de la respuesta de reparación).

Un perfil de expresión génica provee información sobre la respuesta celular a un conjunto de condiciones. Los genes contienen las instrucciones para elaborar ARN mensajero (ARNm). Sin embargo, en cualquier momento, cada célula fabrica ARNm solamente a partir de una fracción de los genes que contiene. Se dice que un gen está "activado" si se usa para producir ARNm y, en cualquier otro caso, se dice que está "desactivado". El término "regulación" se refiere al desencadenamiento de una condición transcripcional que es diferente del estado de control de un gen. Por ejemplo, "regulación en alza" puede incluir solamente la activación o puede referirse al aumento de una velocidad transcripcional con respecto a un valor inicial de velocidad obtenido de una condición de control o referencia.

En la identificación del perfil de expresión se mide la cantidad relativa de ARNm expresada en dos o más condiciones experimentales. Los niveles alterados de ARNm sugieren una necesidad modificada para la proteína codificada por el ARNm. Por ejemplo, se observa una mayor transcripción de catalizadores de enzimas o cofactores en respuesta a mayores niveles del sustrato de la enzima en el ambiente celular.

Generalmente, un perfil de expresión génica incluye aquellos genes que exhiben diferencias significativas en condiciones experimentales modificadas. Esto es, típicamente, un subconjunto de algunos conjuntos de datos que pueden incluir el genoma completo. Para un tipo de célula, un grupo de genes cuyo patrón de expresión combinado es exclusivamente característico para una condición determinada constituye una firma genética de la condición. Las firmas genéticas pueden usarse, por ejemplo, para seleccionar pacientes que pueden beneficiarse a partir de un tratamiento específico o para diseñar protocolos de tratamiento destinados a maximizar una firma deseada.

Los perfiles de expresión génica para el conjunto de datos de genes potenciales pueden determinarse con el uso de una micromatriz. Las micromatrices de ADNc ilustrativas están disponibles comercialmente y pueden adquirirse de compañías tales como Agilent Technologies, Affymetrix Inc. (Santa Clara, Calif.), Nanogen (San Diego, Calif.) y Protogene Laboratories (Palo Alto, Calif.). La tecnología de hibridación específica que puede practicarse, además, para generar los perfiles de expresión usados en los métodos de la presente descripción incluye la tecnología descrita en las patentes de los EE. UU. núms. 5,143,854; 5,288,644; 5,324,633; 5,432,049; 5,470,710; 5,492,806; 5,503,980; 5,510,270; 5,525,464; 5,547,839; 5,580,732; 5,661 ,028; 5,800,992; cuyas descripciones se incorporan en la presente descripción como referencia; y también en las patentes WO 95/21265; WO 96/31622; WO 97/10365; WO 97/27317; patente europea núm. 373 203; y EP 785 280. Generalmente, en estos métodos, una matriz de ácidos nucleicos "sonda" que incluye una sonda para cada gen determinante del fenotipo cuya expresión se ensaya se pone en contacto con los ácidos nucleicos destino tal como se indicó anteriormente. El contacto se realiza en condiciones de hibridación, por ejemplo, condiciones de hibridación rigurosas y, después, se elimina el ácido nucleico no unido. El patrón resultante de ácido nucleico hibridado provee información relacionada con la expresión para cada gen de la sonda, en donde la información de la expresión indica si el gen se expresa o no y, típicamente, en qué nivel, y en donde los datos de expresión, es decir, el perfil de expresión, pueden ser cualitativos y cuantitativos. Alternativamente, el perfil de expresión se determina por medio de PCR cuantitativa u otros métodos cuantitativos para medir el ARNm.

Una modalidad de la invención provee un panel genético que comprende genes regulados en la piel de mamíferos en respuesta a la generación de una corriente de radiofrecuencia en un volumen de tejido de la piel de mamíferos suficiente para calentar el volumen de tejido hasta una temperatura de tratamiento. Se selecciona al menos un gen de la Tabla 1 o Tabla 2 y al menos un gen de la Tabla 3. En modalidades específicas se selecciona al menos un gen de cada una de las tres tablas. Se contempla que todos los paneles genéticos de conformidad con la invención incluyan al menos un gen de la Tabla 3, ya que el cambio en la falta de expresión en estos genes indica la falta de una "mala" respuesta al daño. Las sondas pueden diseñarse para dirigirse a cada gen que constituye una matriz génica de la invención para construir micromatrices muy específicas útiles para diseñar, analizar, adaptar o controlar regímenes de tratamiento para obtener el efecto deseado o la validación del régimen de tratamiento en sujetos tratados. Se contemplan micromatrices que comprenden un conjunto de sondas de ácido nucleico inmovilizadas capaces de hibridarse a y detectar genes que constituyen un panel genético de conformidad con la invención.

Como se usa en la presente descripción, una "sonda" se refiere a un oligonucleótido, polinucleótido o molécula de ADN independientemente de que sea natural o sintética que es capaz de hibridarse específicamente a un ácido nucleico con secuencias complementarias a la sonda. Las sondas de la presente invención se refieren específicamente a los oligonucleótidos unidos a un soporte sólido en el sustrato de la micromatriz de ADN. Una sonda puede ser monocatenaria o bicatenaria. La sonda contiene, típicamente, 15-25 o más nucleótidos, si bien puede contener menos nucleótidos. Las sondas de la presente descripción se seleccionan de modo que sean complementarias a cadenas diferentes de una secuencia de ácido nucleico destino particular y, por lo tanto, deben ser suficientemente complementarias para poder hibridarse específicamente con sus cadenas destino respectivas en un conjunto de condiciones predeterminadas. Por lo tanto, no es necesario que la secuencia de sondas refleje la secuencia complementaria exacta del destino. Por ejemplo, un fragmento de nucleótidos no complementario puede unirse al extremo 5' o 3' de la sonda con el resto de la secuencia de la sonda complementario a la cadena destino. Alternativamente, las bases no complementarias o secuencias más largas pueden estar entremezcladas en la sonda, siempre que la secuencia de sondas sea suficientemente complementaria a la secuencia del ácido nucleico destino para hibridarse específicamente con ella.

Otra modalidad de la invención incluye métodos para proveer un beneficio en la piel de un mamífero. El beneficio comprende inducir la formación de colágeno y/o la remodelación dérmica en una capa dérmica de la piel del mamífero sin que haya una respuesta de la citocina inflamatoria que daña la piel, y el método comprende generar una corriente de radiofrecuencia en un volumen de tejido de la piel del mamífero durante un ciclo de tratamiento suficiente para calentar el volumen de tejido hasta una temperatura de tratamiento y al mismo tiempo evitar la regulación en alza de la expresión de los genes enumerados en la Tabla 3. La corriente de RF puede generarse una pluralidad de veces durante un ciclo de tratamiento.

Como se usa en la presente descripción, los términos "tratar" y "tratamiento" y lo similar se refieren, generalmente, a obtener un efecto cosmético o estético deseado respaldado por una respuesta biológica dirigida. Como se usa en la presente descripción, "tratamiento" se refiere al tratamiento en un mamífero, particularmente, un ser humano e incluye: (a) prevenir o evitar el desarrollo de una condición cosméticamente indeseable en la piel, por ejemplo, líneas finas, arrugas, manchas hiperpigmentadas y otras irregularidades de la piel producidas por el envejecimiento o impacto cronológico o ambiental en la piel, (b) inhibir, mejorar o retrasar el desarrollo de una condición cosméticamente indeseable en la piel; (c) revertir o producir la regresión de la condición cosméticamente indeseable en la piel.

Durante un periodo de tratamiento puede aplicarse uno o más ciclos de tratamiento de conformidad con la invención. Los ciclos de tratamiento pueden ser tan cortos como sea necesario para lograr la respuesta deseada. En modalidades específicas el ciclo de tratamiento es de aproximadamente un minuto o menos, mientras que en otras modalidades específicas el ciclo de tratamiento es mayor que aproximadamente un minuto. En otras modalidades específicas, un ciclo de tratamiento dura de aproximadamente 1 a aproximadamente 6 minutos y en otras modalidades, de aproximadamente 2 a aproximadamente 6 minutos. Un periodo de tratamiento de conformidad con la invención comprende uno o más ciclos de tratamiento y, en modalidades específicas, es de al menos una semana y comprende al menos un ciclo de tratamiento. En otras modalidades específicas, el periodo de tratamiento es de una semana a 12 semanas. En modalidades más específicas, el periodo de tratamiento es de 3 a 8 semanas. En ciertas modalidades, cada semana de un periodo de tratamiento comprende de uno a seis ciclos de tratamiento, si bien se entiende en la industria que esto puede variar en función de las características únicas del individuo tratado.

Generalmente, si bien la administración de corriente de RF genera una mayor temperatura en la dermis que en la superficie de la piel, la temperatura de la piel se mide más convenientemente y no invasivamente en la superficie. Por consiguiente, en ciertas modalidades, una temperatura de tratamiento, definida en la presente descripción como la temperatura del volumen de tejido a través del cual pasa la corriente de RF, genera una temperatura de la superficie de la piel en el volumen de tejido menor que aproximadamente 45 °C. En modalidades más específicas, la temperatura de tratamiento genera una temperatura de la superficie de la piel en el volumen de tejido de aproximadamente 37 °C a aproximadamente 43 °C.

Los beneficios deseados de conformidad con la invención pueden evaluarse mediante la extracción de ARNm de una muestra obtenida del volumen de tejido a través del cual pasa la corriente de RF; y la determinación de un perfil de expresión de un panel genético que consiste en al menos un gen seleccionado de la Tabla 1 y/o Tabla 2 y al menos un gen seleccionado de la Tabla 3. Un perfil de expresión que refleja la regulación en alza de genes seleccionados de las Tablas 1 y/o 2 y, prácticamente, ningún cambio en la expresión de genes seleccionados de la Tabla 3 es indicativo del suministro de un beneficio.

Generalmente, la regulación de genes de conformidad con la invención se refleja en la información de veces de cambio de la expresión. En la industria se conocen varios métodos disponibles para analizar experimentos basados en micromatrices con el fin de identificar genes que se expresan en forma diferente en distintas condiciones y la elección de los métodos puede afectar el conjunto de los genes identificados. Se cree que el valor de las veces de cambio provee los resultados más reproducibles. El valor de las veces de cambio puede definirse como la relación entre las observaciones promedio del control y del tratamiento (o como la diferencia entre los datos logarítmicos promedio del control y del tratamiento). Por lo tanto, un valor de veces de cambio de 1 indica que no se produjo cambio durante la observación del control. Un valor de veces de cambio positivo indica un aumento en la expresión en un periodo que se menciona en la presente descripción como regulación en alza y un valor de veces de cambio negativo indica una reducción en la expresión en un periodo de tiempo que se menciona en la presente descripción como regulación en baja. La significancia de un valor de veces de cambio puede determinarse mediante métodos estadísticos comunes.

De conformidad con ciertos aspectos de la invención, el beneficio puede optimizarse mediante el ajuste de la temperatura de tratamiento y/u otros parámetros del tratamiento en respuesta al perfil de expresión en donde la regulación en alza de los genes seleccionados de la Tabla 1 y/o Tabla 2 se maximiza mientras que la expresión de genes seleccionados de la Tabla 3 se mantiene, prácticamente, sin cambio. Los regímenes de tratamiento de la invención pueden comprender tratamientos de mantenimiento en donde un beneficio se mantiene más allá del periodo de tratamiento por uno o más tratamientos de mantenimiento; cada tratamiento de mantenimiento comprende al menos un ciclo de mantenimiento.

Los regímenes de tratamiento de la piel de la invención contemplan la aplicación de energía térmica por medio de corriente de RF conducida eléctricamente a través de un dispositivo de mano para el suministro de corriente de RF. Los dispositivos de suministro de RF preferidos de conformidad con la invención proveen RF como una corriente conducida eléctricamente entre dos electrodos colocados sobre la piel a cierta distancia entre ellos. El dispositivo de suministro que logra los beneficios de la invención conduce la corriente de radiofrecuencia a través del volumen de tejido sin la presencia de radiación electromagnética en frecuencias de luz visible o infrarroja del espectro electromagnético y sin el uso de fuentes de luz monocromáticas o policromáticas suplementarias dirigidas hacia el volumen de tejido y, además, sin aplicar enfriamiento mecánico.

Ciertas modalidades de la invención son capaces de evaluar la eficacia de cualquier dispositivo de suministro de energía o combinación de tecnologías de suministro de energía para proveer beneficios de conformidad con la invención. Por consiguiente, los métodos específicos para evaluar la eficacia del tratamiento de un dispositivo de suministro de energía diseñado para proveer a la piel un beneficio mediante el calentamiento de la piel comprenden: tratar la piel mediante la aplicación del dispositivo de suministro de energía; extraer el ARNm de una muestra de la piel tratada; y generar un perfil de expresión para un panel genético de conformidad con la invención. Como se ilustra en el Ejemplo 3, más abajo, existen dispositivos de suministro de corriente de RF que comprenden tolerancias de especificaciones de parámetros que se pueden ajustar para producir el perfil de expresión de conformidad con la invención. Un dispositivo adecuado es fabricado por Syneron. Un ejemplo de un dispositivo no diseñado para alcanzar las metas de respuesta genómica de la presente invención es un dispositivo personal de mano para el suministro de RF fabricado por Ultragen Ltd para su distribución en Europa con la marca STOP™. Con este dispositivo que se ilustra, además, en el Ejemplo 3 para fines comparativos, no se obtiene la regulación en alza de los genes de las Tablas 1 y 2. Las especificaciones del dispositivo están diseñadas para obtener un régimen basado en la aplicación de una cantidad prácticamente menor de energía térmica en un área más extensa de la piel y, posiblemente, no alcance los niveles requeridos para lograr el efecto homeótico positivo alcanzado por los dispositivos y regímenes de conformidad con la presente invención.

De conformidad con otra modalidad de la invención se proveen métodos para analizar un régimen de tratamiento de la piel del rostro. Los métodos se analizan para determinar la eficacia en la provisión de un beneficio de remodelación dérmica y/o colágeno a la piel de un mamífero sin estimular la respuesta de la citocina inflamatoria que daña la piel de conformidad con otra modalidad. Los métodos comprenden, generalmente, tratar la piel del rostro de conformidad con un régimen de tratamiento; extraer el ARNm de una muestra de la piel del rostro tratada; generar un perfil de expresión génica para un panel genético de conformidad con la invención; comparar el perfil de expresión génica con un perfil de referencia; y determinar que el régimen de tratamiento del rostro es eficaz, en donde el perfil de expresión refleja la regulación en alza de genes seleccionados de la Tabla 1 y/o Tabla 2 y una falta considerable de regulación de genes seleccionados de la Tabla 3. En modalidades específicas, el régimen de tratamiento de la piel del rostro comprende generar una corriente de radiofrecuencia pulsada a través de un primer volumen de tejido de la piel del rostro durante un ciclo de tratamiento con un dispositivo generador de corriente de radiofrecuencia. El régimen de tratamiento puede comprender mover el dispositivo generador de corriente de radiofrecuencia y generar una corriente de radiofrecuencia pulsada a través de un volumen de un segundo tejido de la piel del rostro durante el ciclo de tratamiento.

En los métodos de análisis se seleccionan áreas de piel para verificar la concordancia con características de áreas de tratamiento destino, particularmente, del rostro. Las áreas cosméticamente vulnerables de la piel del rostro incluyen las áreas periorbital y perioral. Por consiguiente, la estructura de la piel del rostro alrededor de la oreja, conocida como la piel periauricular, está cerca de las áreas destino del tratamiento, pero en esa área las manchas que pueden producirse debido a procedimientos de biopsias menores no son fácilmente visibles. Por lo tanto, en aspectos de la invención que requieren biopsia la muestra necesaria se obtiene por medio de la biopsia de piel periauricular tratada y la referencia se obtiene por medio de la biopsia de piel periauricular pretratada o no tratada. Generalmente, la piel periauricular pretratada o no tratada de referencia comprende la piel prácticamente adyacente a la piel periauricular tratada. En modalidades muy específicas, el perfil de expresión de genes seleccionados de la Tabla 1 y/o Tabla 2 exhibe un valor de veces de cambio sobre la referencia estadísticamente mayor que uno.

Notablemente, la presente invención puede proveer beneficios a la piel de otras partes distintas al rostro; sin embargo, en los ejemplos ilustrativos se destaca la piel del rostro ya que impone mayores desafíos de tratamiento cosmético porque los efectos del daño y envejecimiento cronológico y ambiental se manifiestan con mayor facilidad y es inicialmente más delgada y más vulnerable que la piel de otras áreas del cuerpo. Además, la piel del rostro es un área de mucha importancia estética para los consumidores de tecnologías de tratamiento cosmético.

En ciertas modalidades, el beneficio provisto por la aplicación de corriente de RF puede aumentar o mejorar por la aplicación de una composición o activo cosmético en la piel del rostro en combinación con la generación de la corriente de radiofrecuencia pulsada. El activo o composición puede tener un efecto potenciador o sinérgico en los perfiles de expresión génica de conformidad con la invención. Los ejemplos no limitantes de activos cosméticos adecuados incluyen propionato de retinol y derivados de este, cafeína, ácido hialurónico y, generalmente, extractos vegetales.

Los métodos de análisis de conformidad con la invención comprenden, prácticamente, los mismos parámetros que los métodos de tratamiento de conformidad con la invención con respecto a ciclos de tratamiento, periodos de tratamiento, temperaturas de tratamiento y dispositivos de suministro, ajustados para las tolerancias del análisis deseadas.

De conformidad con otras modalidades de la invención se provee una firma genética de genes que se expresan en una forma diferente adecuada para identificar un beneficio cosmético para la piel. El beneficio comprende la inducción de la formación de colágeno y/o la remodelación dérmica en una capa dérmica de la piel de un mamífero sin que haya una respuesta de la citocina inflamatoria que daña la piel; la firma genética comprende al menos un gen seleccionado de la Tabla 1 , Tabla 2 y Tabla 3. Generalmente, una firma genética es un subconjunto de genes obtenidos a partir de un conjunto de datos de genes relacionados con una característica, rasgo o función biológica específica. Las firmas genéticas pueden obtenerse a partir de todo un conjunto de datos genéticos o una parte de este y las firmas de conformidad con la invención pueden comprender información de al menos aproximadamente dos genes o cualquier cantidad de genes hasta el número que constituye el conjunto de datos total. Cuando se usa un subconjunto del conjunto de datos, el subconjunto puede comprender genes regulados en alza, genes regulados en baja, genes prácticamente no regulados o combinaciones de estos.

Los siguientes ejemplos se proveen para ilustrar ciertas características y ventajas de diversas modalidades de la invención y no deberían interpretarse como limitantes del alcance de esta.

Ejemplos Ejemplo 1 : Protocolo de tratamiento Este ejemplo ilustra el tratamiento de la región periauricular de la piel del rostro con el fin de realizar evaluaciones genómicas e histológicas. Por lo tanto, todos los tratamientos son administrados por un técnico en un entorno hospitalario para propósitos de control. Los tratamientos se administran en cuatro zonas dentro del área de tratamiento por un total de 16 minutos con 4 minutos por zona, 3 veces a la semana durante seis semanas. El protocolo se basa en un estudio de rostro/cuello dividido en un diseño de control dentro de los parámetros del sujeto, en donde el tratamiento se aplica solamente en la región periauricular de un lado y un tratamiento placebo que consiste en gel combinado con un dispositivo sin potencia se aplica en la región periauricular correspondiente del otro lado. Los tratamientos se controlan con cámaras de captación de imágenes térmicas para asegurar que la temperatura de la superficie de la piel destino de 40-43 CC se alcance dentro del primer minuto y se mantenga, pero no se exceda durante cada tratamiento de 4 minutos.

El sitio de tratamiento está ubicado y centrado justo debajo de la oreja. El sitio tiene un ancho de aproximadamente 3.81 cm (1.5 pulgadas) y una longitud de aproximadamente 10.2 cm (4 pulgadas). Si un área de piel tratada es demasiado seca o se calienta demasiado se puede aplicar una cantidad adicional de gel. El rostro y el cuello del sujeto están limpios y libres de lociones, perfumes y lo similar. El cabello se sujeta con sujetadores hacia atrás del área de tratamiento.

Tratamiento con el dispositivo: 1. Se aplica una bomba (aproximadamente 1.4 g de gel) en el sitio de tratamiento y se dispersa en forma uniforme sin frotar. Se puede aplicar una bomba de gel adicional en la mejilla encima del área de tratamiento según sea necesario durante el tratamiento para enfriar la piel si se calienta demasiado, según lo que manifieste el sujeto. 2. El dispositivo se enciende y el temporizador se configura en 4 minutos. 3. El cabezal del aplicador del dispositivo se aplica en la piel y se mueve a lo largo del sitio de tratamiento con un movimiento de atrás hacia adelante y un toque ligero. La conectividad se mantiene mientras se maneja el cabezal del dispositivo a través del área de tratamiento. El contacto apropiado con la piel se indica por medio de una lente en el aplicador que debería parpadear en rojo para indicar el contacto.

La imagen de la cámara térmica se controla durante el tratamiento. Dentro de los 30-60 segundos, la piel en el área de tratamiento alcanza la temperatura óptima de 40-43 °C. Los patrones de color en la imagen térmica indican temperatura. Generalmente, a medida que el dispositivo se calienta, el aplicador se mueve rápidamente a través de la piel para evitar la incomodidad producida por el aumento de la temperatura. A medida que el tratamiento avanza, el movimiento se hace más lento para mantener la temperatura ideal. Se advierte a los sujetos que sentirán que el dispositivo está caliente, pero que no los quemará. La temperatura es mayor que 43 °C si la imagen térmica muestra áreas de color rojo sólido. La temperatura se controla por medio del aumento de la velocidad del tratamiento en el movimiento de atrás hacia adelante, por medio de un ligero aumento del tamaño del área de tratamiento, por medio de la variación del movimiento de atrás hacia adelante con un patrón en ocho o por medio de la adición de más gel al tocar el cabezal del aplicador de modo que se deposite gel extra en la mejilla para esta eventualidad.

Si el área de tratamiento no logra alcanzar la temperatura óptima o si se enfría, el movimiento de atrás hacia adelante debería hacerse más lento hasta que el volumen del área de tratamiento esté a la temperatura destino.

Ejemplo 2: Protocolo de biopsia Este ejemplo ilustra el protocolo de biopsia relativamente moderado usado para recolectar muestras para propósitos de evaluación y control de conformidad con ciertos aspectos de la invención y confirma datos descritos en la presente descripción.

Se realizó un estudio clínico de biopsia con un dispositivo de suministro de corriente de RF en 30 mujeres adultas. Se suministraron tratamientos en la región periauricular (alrededor de la oreja) de la piel del rostro. En la industria de la cosmética la piel periauricular se conoce como un sustituto perorbital adecuado. Los tratamientos se administraron clínicamente con un dispositivo Syneron V8 (ver el Ejemplo 3) y un perfil de calentamiento de cuatro minutos como el perfil destino. El tratamiento se aplicó tres veces a la semana durante un total de seis semanas. Se realizaron biopsias para revisar la histología de la piel como una función del tratamiento y para generar un perfil genómico. Procedimiento de biopsia: Se tomó una biopsia de 4 mm del área periauricular de ambos lados derecho e izquierdo del cuello (esta área está ubicada justo debajo de la oreja). Con una aguja estéril de calibre 30 se inyectó un anestésico que contenía xilocaína al 2 % con epinefrina justo debajo de la piel de la cual se iba a tomar la biopsia. Una vez que el sujeto indica que el área está adormecida se toma una biopsia por punción del tamaño apropiado por medio de técnicas asépticas estándar seguidas del cierre de la sutura. Se usa una solución acuosa al 20 % de cloruro de aluminio a partir de la homeostasis, según se necesita. Después de la biopsia se controla el sitio de la punción para determinar la curación normal y las suturas se eliminan después de 7 días. Manejo de la muestra después de la biopsia: El tejido biopsiado se divide en dos muestras separadas, una para la prueba de expresión genética y la otra para la evaluación histológica. La muestra se divide en mitades iguales en una línea paralela a una línea trazada desde el estrato córneo hasta la dermis. El manejo de la muestra se realiza de conformidad con estándares industriales.

Ejemplo 3: Extracción v análisis del ARNm Este ejemplo ilustra la identificación y análisis del biomarcador de ARN que respalda ciertas modalidades de la invención que incluyen matrices génicas, firmas genéticas y el descubrimiento del modelo biológico que guía el diseño del régimen de suministro de RF.

Se tomaron biopsias de 4 mm de conformidad con el Ejemplo 2 de ambos lados del rostro/cuello justo debajo de la oreja, tal como se describió anteriormente 2 veces, una vez a las 24 horas después del tratamiento final y otra a las 4 semanas posteriores al tratamiento.

Las muestras biopsiadas se transfirieron a tubos de centrífuga de 2 mi que contenían 1.5 mi de reactivo de almacenamiento de tejido (solución RNA/ate/®, invitrogen, Life Technologies, Carlsbad, CA). Los tubos se refrigeraron durante la noche a 2-8 °C. El reactivo de almacenamiento se eliminó y las muestras se colocaron en un congelador a -80 °C hasta el procesamiento. Inmediatamente antes del procesamiento, las muestras se extrajeron del congelador y se añadió 1.5 mi de solución monofásica de fenol e isotiocianato de guanidina (reactivo TRIzol®, Invitrogen, Life Technologies, Carlsbad, CA) y una perla de carburo de tungsteno de 3 mM (3 mM Tungsten Carbide beads, Qiagen, núm. de catálogo 69997) en cada tubo. Las muestras se homogenizaron inmediatamente en un molino mezclador (Qiagen Inc.) con cuatro agitaciones de 3 minutos a 30/segundo, girando el adaptador después de cada una. Las muestras se centrifugaron por 10 minutos a 12,000 rpm para eliminar la suciedad. Después, el sobrenadante se transfirió a tubos pesados de gel Phase Lock precentrifugados (Phase Lock gel heavy tubes, Eppendorf, New York, NY, catálogo núm. 0032-005-152), se añadió 300 µ? de cloroformo (Sigma) y los tubos se agitaron vigorosamente sin exceso de vórtice. Las muestras se centrifugaron por 10 minutos a 12,000 rpm y, después, el sobrenadante se transfirió a tubos de centrífuga de 2 mi nuevos.

Las condiciones de aglutinación se ajustaron mediante la adición de 800 µ? de etanol al 70 % y los tubos se mezclaron por agitación en el vórtice y, después, se centrifugaron por un corto tiempo. Se transfirió 830 mi de la muestra a una minicolumna de centrifugación RNeasy en un colector al vacío y se aplicó vacío. La muestra restante (aprox. 21.1 mm (830 mil) se transfirió a la misma columna RNeasy y se aplicó vacío. Para eliminar los contaminantes se pipeteó en secuencia 700 µ? y 500 µ? de regulador RW1 en la columna RNeasy y, después de cada enjuague, se aplicó vacío.

La columna de centrifugación RNeasy se transfirió a un nuevo tubo de recolección de 0.05 mm (2 mil), el tubo se centrifugó por 2 minutos a 14,000 rpm y la columna se transfirió a un nuevo tubo de recolección de 1.5 mi. El etanol residual se aspiró desde el borde interior de cada columna. Se pipeteó treinta µ? de agua libre de ribonucleasa precalentada directamente sobre la membrana RNeasy y la membrana se incubó por 5 minutos y, después, se centrifugó por 2 minutos a 14,000 rpm. Después, se recolectó el eluato y, de este modo, se proporcionó ARN en agua listo para usar.

Después del aislamiento, se determinó el rendimiento del ARN con el estuche RNA 6000 Nano LabChip® núm. 5065-4476 disponible de Agilent Technologies, Inc. de Santa Clara, CA. Se evaluó el ARN por medio de RT-PCR de una etapa. Para el análisis del biomarcador de RT-PCR el ARN se diluyó hasta una concentración final de 5 ng/pocillo.

El ARN purificado se convirtió en ADNc con un estuche RT-PCR (QScript™ One-Step Fast MGB qRT-PCR disponible de Quanta BioScience, Inc., Gaithersburg, MD). Después, se mezcló quinientos nanogramos de ARN con la mezcla de enzima/regulador QScript y la mezcla se procesó en un ciclador térmico de conformidad con las instrucciones del estuche. Después, se mezcló 1 µ? del ADNc resultante con la mezcla maestra Quanta Perfecta Master Mix y se colocó en alícuotas a través de una placa matriz común (Custom RT Profiler™ PCR Array disponible de SABiosciences, Corp., Federick, MD) que contenía iniciadores validados previamente para los siguientes genes: KRT2, KRT6A, CLDN1 , LOR, FLG, IVL, KRT10, AQP3, KRT14, FBN1 , FBNL1 , TNXB, FN1 , LOXL2, COL3A1 , COL1A1 , ELN, LOXL1 , TIMP2, IL1A, TIMP1 , TNF, MMP1 , MMP9, MMP3, SOD2 y IL1B. Después, las placas matrices se sellaron y se procesaron en un ciclador térmico (StepOnePlus™ Real-Time PCR System Upgrade de Applied Biosystems, Inc. Foster City, CA).

Los datos se analizaron con el programa de análisis de datos provisto por SABiosciences de Frederick, MD.

Los datos de las veces de cambio de la expresión para los 27 genes de la compilación enumerados anteriormente a los tiempos destino de 24 horas y 4 semanas se indican en las Figuras 4A, 4B y Figuras 6A, 6B, respectivamente, anteriores. Los genes asociados con la matriz dérmica se agrupan como 90 y 91 , los genes asociados con la remodelación de la inflamación dérmica se agrupan como 92 y 93 y los genes asociados con la diferenciación epidérmica se agrupan juntos como 94 y 95. Los datos de las veces de cambio para los genes ilustrativos se indican en las Figuras 5A colágeno 1A1 , 5B elastina y Figura 7A colágeno 1A1 y 7B elastina. Debe observarse la regulación conjunta entre muchos de los genes de colágeno 1A1 y los genes de elastina.

Los datos de las veces de cambio se revisaron y analizaron en los agrupamientos. Sorprendentemente, se descubrió que cuando los genes que exhibían una regulación muy baja en respuesta al tratamiento estaban segregados (IL1A, IL1 B y TNF), estos comprendían los genes de respuesta a la citocina inflamatoria, mientras que los genes relacionados con la síntesis y recambio de colágeno y remodelación térmica se regulaban en alza en las condiciones de tratamiento. Los genes seleccionados en función de la información de veces de cambio se indican, por consiguiente, en las Tablas 1 , 2 y 3 incluidas más abajo.

Además, sorprendentemente, se descubrió que el impacto positivo del régimen de tratamiento en la expresión de genes a los 24 meses se mantuvo prácticamente sin disminución hasta 1 mes antes de la fecha objetivo. Los tratamientos de mantenimiento pueden ser deseables para mantener los efectos genómicos por periodos mayores que este.

Se contempla que el perfil de expresión génica refleja una regulación en alza corriente abajo en los productos de la traducción. Si bien el valor de veces de cambio observado puede ser relativamente bajo, se ha encontrado que la regulación en alza sostenida en la síntesis de ciertas proteínas y enzimas durante un periodo prolongado confiere a la piel un beneficio cosmético prácticamente perdurable.

Ejemplo 4: Composición para el cuidado personal A continuación se incluye una composición para el cuidado personal ilustrativa para usar con los dispositivos de la presente invención.

Las dimensiones y los valores descritos en la presente descripción no deben interpretarse como estrictamente limitados a los valores numéricos exactos mencionados. En lugar de ello, a menos que se especifique de cualquier otra forma, cada una de esas dimensiones significará tanto el valor mencionado como también un intervalo funcionalmente equivalente que comprenda ese valor. Por ejemplo, una dimensión descrita como "40 mm" se refiere a "aproximadamente 40 mm".

Todos los documentos citados en la Descripción detallada de la invención, en su parte relevante, se incorporan en la presente como referencia; la cita de cualquier documento no debe interpretarse como una admisión de que este constituye una industria anterior con respecto a la presente invención. En la medida que cualquier significado o definición de un término en este documento escrito contradiga cualquier significado o definición del término en un documento incorporado como referencia, deberá regir el significado o definición asignados al término en este documento escrito.

Aunque se han ilustrado y descrito modalidades particulares de la presente invención, será evidente para los expertos en la industria que se pueden hacer diversos cambios y modificaciones sin alejarse del espíritu y alcance de la invención. Por lo tanto, se ha pretendido abarcar en las reivindicaciones anexas todos los cambios y las modificaciones que están dentro del alcance de esta invención.

Tabla 1 Marcadores dérmicos Tabla 2 Marcadores de remodelación de la matriz M P3 (SEQ ID Familia de metaloproteinasa de la Degrada la fibronectina, laminina, NO: 14) matriz (MMP) de proteínas colágenos III, IV, IX y X, y los proteoglicanos del cartílago. Se piensa que la enzima está implicada en la reparación de heridas, avance de aterosclerosis e iniciación de tumores.

Tabla 3 Marcadores de la respuesta a la citocina ¡nflamatoria IL1 A (SEQ ID Un miembro de la familia de Estimula la proliferación de timocitos NO: 17) citocinas interleucina 1 ; producida mediante la inducción de la liberación de por monocitos y macrófagos como IL-2, la maduración y proliferación de una proproteína que se procesa células B y la actividad del factor de proteoliticamente y se libera en crecimiento de fibroblastos. Las proteínas respuesta la lesión celular y, por lo IL-1 están implicadas en la respuesta tanto, induce la apoptosis. inflamatoria y se identifican como pirógenos endógenos y se reporta que estimulan la liberación de prostaglandina y colagenasa a partir de células sinoviales

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1. Un método no terapéutico para regular la condición de la piel de mamíferos, en donde la piel tiene al menos tres capas: un capa externa de estrato córneo; una epidermis; y una dermis; el método comprende las etapas de: (a) aplicar una primera composición para el cuidado personal en un área de la piel que se desea regular, en donde la primera composición para el cuidado personal comprende una composición en gel; y (b) suministrar energía a la dermis para calentar el colágeno en la dermis de modo que el colágeno calentado en la dermis caliente la epidermis y el estrato córneo hasta que el estrato córneo alcance una temperatura externa de aproximadamente 37 °C a aproximadamente 48 °C, en donde el suministro de energía a la dermis se controla para mantener la temperatura del estrato córneo en el intervalo de aproximadamente 37 °C a aproximadamente 48 °C.

2. El método de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque la energía se suministra de un dispositivo de energía de RF y la energía de RF se suministra a través de dos o más electrodos que entran en contacto con el estrato córneo a través de la composición en gel.

3. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque cuando se activa el dispositivo de energía de RF este suministra la energía de RF en el intervalo de 35 % a aproximadamente 65 % de potencia total por aproximadamente 20 a aproximadamente 50 segundos, después, la potencia se incrementa a un valor de aproximadamente 65 % a aproximadamente 100 % por aproximadamente 20 a aproximadamente 50 segundos, después, se controla el dispositivo de energía de modo que la temperatura del estrato córneo se mantenga en el intervalo de aproximadamente 37 °C a aproximadamente 48 °C.

4. El método de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque el dispositivo de suministro de energía es un dispositivo de mano y se aplica debajo del ojo de un consumidor y se mueve debajo del ojo hasta justo por encima del área de patas de gallo y, después, se invierte la dirección, y el dispositivo de suministro de energía se mueve hacia adelante y atrás a través de este trayecto por un tiempo de aproximadamente 3 a aproximadamente 6 minutos.

5. El método de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque el dispositivo de suministro de energía es un dispositivo de mano y se aplica por encima del ojo de un consumidor y se mueve sobre el ojo hasta justo por debajo del área de patas de gallo y, después, se invierte la dirección, y el dispositivo de suministro de energía se mueve hacia adelante y atrás a través de este trayecto por un tiempo de aproximadamente 3 a aproximadamente 6 minutos.

6. El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado además porque el método se repite debajo del otro ojo del consumidor.

7. El método de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado además porque el método se repite por encima del otro ojo del consumidor.

8. El método de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque la composición en gel tiene una conductividad eléctrica de aproximadamente 1000 a aproximadamente 2000 pS/cm.

9. El método de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque el dispositivo es un dispositivo de mano y se usa en un régimen de etapas múltiples que comprende las etapas de aplicar el dispositivo de suministro de energía debajo de un ojo de un consumidor y moverlo hasta justo por encima del área de patas de gallo en un movimiento continuo hacia atrás y adelante por un tiempo de aproximadamente 3 a aproximadamente 6 minutos, después, se aplica el dispositivo de suministro de energía por encima de un ojo del consumidor y se mueve hasta justo debajo del área de patas de gallo en un movimiento hacia atrás y adelante continuo por un tiempo de aproximadamente 3 a aproximadamente 6 minutos, se repite estas dos etapas en el otro ojo del consumidor de modo que cada área de patas de gallo adyacente a ambos ojos del consumidor se trate por un tiempo de aproximadamente 6 a aproximadamente 12 minutos.

10. El método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado además porque el régimen de etapas múltiples se completa al menos una vez al día por un periodo de régimen de 3 a 5 días por semana durante un periodo de aproximadamente 3 semanas a aproximadamente 6 semanas.

11. El método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado además porque el consumidor espera un lapso de aproximadamente 2 a aproximadamente 8 meses y, después, repite el régimen de etapas múltiples por el periodo del régimen.

12. El método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado además porque las líneas finas y arrugas alrededor de los ojos del consumidor se reducen visiblemente después de cada periodo de régimen.

13. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque el dispositivo de suministro de energía de RF no emite luz y no produce energía electromagnética.