BIOSENSOR LAMINADO Y SU METODO DE FABRICACION
CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a biosensores electroquímicos, y de manera más particular, a métodos y sistemas para fabricar biosensores. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Muchas personas requieren monitorizar diariamente sus niveles sanguíneos de glucosa. Varios sistemas disponibles permiten que las personas monitoricen de manera conveniente sus niveles sanguíneos de glucosa. Estos sistemas incluyen típicamente una tira desechable de prueba a la cual el usuario aplica una muestra de sangre, y un medidor que determina el nivel sanguíneo de glucosa. Entre las varias tecnologías disponibles para medir los niveles sanguíneos de glucosa, son deseables las tecnologías electroquímicas, al menos en parte debido a que se pueden usar pequeños volúmenes de muestra de sangre. En los sistemas basados en electroquímica, la tira de prueba incluye típicamente electrodos y una cámara de muestra que contiene constituyentes químicos, tal como una enzima de glucosa y un mediador de electrones. Cuando el usuario aplica una muestra de sangre a la tira de prueba, se atrae sangre a la cámara de muestra, y los constituyentes químicos reaccionan con la glucosa presente en la sangre. En los
Ref. 197183
sistemas electroquímicos amperométricos , el instrumento aplica un voltaje a los electrodos para provocar una reacción de reducción-oxidación. El medidor inicia una o más mediciones de corriente y calcula el nivel de glucosa en base a al menos una de las mediciones de corriente. Permanece una necesidad continua de desarrollar mediciones exactas de niveles sanguíneos de glucosa, que pueden ayudar a mantener la salud a largo plazo de muchos usuarios. Las áreas de ejemplo de desarrollo incluyen conflabilidad mejorada, facilidad de uso, y tolerancia fuerte a la pobre técnica de usuario en el diseño de medidores y tiras de prueba. Sin embargo, conforme llegan a ser más pequeños los tamaños de las muestras, también llegan a ser más pequeñas las dimensiones de la cámara de muestra y de los electrodos en la tira de prueba. A su vez, esto puede volver a los sistemas de prueba más sensibles a las variaciones de los componentes y de los procesos de fabricación, los factores ambientales, a los inconvenientes de las técnicas del usuario, al daño del manejo, etc. Por consiguiente, existe una necesidad continua de tiras de prueba de biosensor de bajo volumen, confiables, y también de un proceso de fabricación de tiras de prueba de biosensor, eficientes, de alto volumen de fabricación y de bajo costo. Se han propuesto varios métodos para fabricar biosensores. Un método por el estilo se describe en la
patente de los Estados Unidos número 6,875,327 de iyazaki et al . Miyasaki et al. describe un proceso de fabricación de biosensor por el cual se forma una capa conductora sobre un soporte. Se forman electrodos usando un láser para formar múltiples "hendiduras" en la capa conductora, separando eléctricamente electrodos de trabajo, el electrodo contador y el electrodo de detección. Después de la formación de los electrodos, los reactivos químicos se aplican de manera selectiva a la capa conductora. Aunque el diseño de electrodo descrito por Miyasaki et al., puede proporcionar un biosensor funcional, el proceso de fabricación se puede mejorar. De manera específica, el proceso de fabricación puede ser ineficiente, consumidor de tiempo o inadecuado para formar uno o más biosensores descritos en la presente descripción. La presente descripción se refiere a un método de fabricación diseñado para superar una o más de las limitaciones de la técnica anterior. BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención incluye un biosensor que tiene un primer componente conductor que incluye al menos un límite formado por una primera técnica de procesamiento y al menos un límite formado por una segunda técnica de procesamiento no la misma como la primera técnica de procesamiento. El biosensor también puede tener un segundo
componente conductor que incluye al menos un limite formado por la primera técnica de procesamiento y al menos un limite formado por una tercera técnica de procesamiento no la misma como la primera técnica de procesamiento. Adicionalmente, el biosensor tiene un tercer componente conductor que incluye al menos un limite formado por la segunda técnica de procesamiento y al menos un limite formado por la tercera técnica de procesamiento no la misma como la segunda técnica de procesamiento. Otra modalidad de la invención se refiere a un método para fabricar tiras de prueba. El método puede incluir formar una bobina que contiene una capa conductora y una capa base. El método incluye formar un primer componente conductor, en donde el primer componente conductor incluye al menos un limite formado por una primera técnica de procesamiento y al menos un limite formado por una segunda técnica de procesamiento no la misma como la primera técnica de procesamiento. Se puede formar un segundo componente conductor, en donde el segundo componente conductor incluye al menos un limite formado por la primera técnica de procesamiento y al menos un limite formado por una tercera técnica de procesamiento no la misma como la primera técnica de procesamiento. El método también incluye formar un tercer componente conductor, en donde el tercer componente conductor incluye al menos un limite formado por la segunda técnica de
procesamiento y al menos un limite formado por la tercera técnica de procesamiento no la misma como la segunda técnica de procesamiento. Otra modalidad de la invención se refiere a un método para fabricar tiras de prueba. El método puede incluir formar una bobina que contiene una capa conductora y una capa base, y formar una primera entalladura en la capa conductora, en donde la primera entalladura se puede formar usando un primer proceso de ablación con láser. El método también puede incluir formar una segunda entalladura en la capa conductora, en donde la segunda entalladura se puede formar usando un segundo proceso de ablación con láser que no es el mismo como el primer proceso de ablación con láser, y separar una o más tiras de prueba de la bobina usando un proceso de individualización. Los objetos y ventajas adicionales de la invención se expondrán en parte en la descripción que sigue, y en parte llegarán a ser obvios de la descripción, o se pueden aprender por la práctica de la invención. Los objetos y ventajas de la invención se realizarán y lograrán por medio de los elementos y combinaciones particularmente señaladas en las reivindicaciones anexas. Se va a entender que tanto la descripción general anterior como la siguiente descripción detallada son de ejemplo y explicación únicamente y no son restrictivas de la
invención, como se reivindica. BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Las siguientes figuras forman parte de la presente especificación y se incluyen para demostrar adicionalmente ciertos aspectos de la presente invención. La invención se puede entender mejor por referencia a una o más de estas figuras en combinación con la descripción detallada de las modalidades especificas presentadas en la presente: La Figura 1A es una vista en planta superior de una tira de prueba de acuerdo a una modalidad ilustrativa de la invención . La Figura IB es una vista en planta superior de una tira de prueba de acuerdo a otra modalidad ilustrativa de la invención . La Figura 2 es una vista en sección transversal de la tira de prueba de la Figura 1A, tomada a lo largo de la linea 2-2. La Figura 3 es una vista en planta superior aumentada del extremo proximal de una tira de prueba de acuerdo a una modalidad ilustrativa de la invención. La Figura 4A es una vista superior de una capa conductora de acuerdo a una modalidad ilustrativa de la invención . La Figura 4B es una vista superior de una capa conductora de acuerdo a otra modalidad ilustrativa de la
invención . La Figura 5 es una vista superior de una capa dieléctrica de acuerdo a una modalidad ilustrativa de la invención . DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN De acuerdo con una modalidad ilustrativa, se describe un diseño de biosensor, un método de fabricación y un método para medir un constituyente fluido. Muchas industrias tienen la necesidad comercial de monitorizar la concentración de constituyentes particulares en un fluido. La refinación de petróleo, la elaboración de vinos y lácteos son ejemplos de industrias donde es rutina la prueba de fluidos. En el campo de cuidado de la salud, las personas tal como los diabéticos, por ejemplo, tienen la necesidad de monitorizar un constituyente particular dentro de sus fluidos corporales usando un biosensor. Están disponibles varios sistemas que permiten a las personas probar un fluido corporal, tal como sangre, orina o saliva, para monitorizar de manera conveniente el nivel de un constituyente fluido particular, tal como por ejemplo, colesterol, proteínas y glucosa . Un biosensor puede incluir una tira de prueba, que puede ser desechable, que puede facilitar la detección de un constituyente particular de un fluido. La tira de prueba puede incluir un extremo proximal, un extremo distante y al
menos un electrodo. El extremo proximal en la tira de prueba puede incluir una cámara de muestra para recibir un fluido que se va a probar. La cámara de muestra se puede hacer de dimensiones y arreglar para extraer y retener una muestra de sangre en la cámara de muestra para hacer contacto con los electrodos por acción capilar. El extremo distante de la tira de prueba se puede configurar para conectar operativamente la tira de prueba a un medidor que puede determinar la concentración del constituyente fluido. La tira de prueba puede tener, cerca de su extremo distante, una pluralidad de contactos eléctricos que proporcionan conexión operativa entre los electrodos y el medidor. Los extremos de la tira de prueba pueden incluir además sección distinguible al tacto y/o visual mejorada, tal como por ejemplo, un ahusamiento, a fin de hacer más fácil que el usuario conecte de manera operativa la tira de prueba al medidor o aplique un fluido a la cámara de muestra. El por lo menos un electrodo puede incluir un electrodo de trabajo, un electrodo contador, y un electrodo de detección de relleno. Se puede colocar una barrera de difusión entre cualquiera de los electrodos adyacentes, tal como por ejemplo, el electrodo de trabajo y el electrodo contador. Se puede colocar una capa de reactivos en la cámara de muestra y puede cubrir al menos una porción del electrodo de trabajo, que también se puede colocar al menos
parcialmente en la cámara de muestra. La capa de reactivos puede incluir, por ejemplo, una enzima, tal como glucosa-oxidasa o glucosa-deshidrogenasa, y un mediador, tal como ferricianuro de potasio o hexaamina de rutenio, para facilitar la detección de glucosa en sangre. Se contempla que se pueden usar otros reactivos y/u otros mediadores para facilitar la detección de glucosa y otros constituyentes en sangre y otros fluidos. Configuración de la Tira de Prueba Con referencia a, las Figuras 1A y 2 muestran una tira 10 de prueba, de acuerdo con una modalidad ilustrativa de la presente invención. La tira 10 de prueba puede tomar la forma de una tira sustancialmente plana que se extiende desde un extremo proximal 12 a un extremo distante 14. En una modalidad, el extremo proximal 12 de la tira 10 de prueba puede ser más estrecho que el extremo distante 14 para proporcionar reconocimiento visual fácil del extremo distante 14. Por ejemplo, la tira 10 de prueba puede incluir una sección ahusada 16, en la cual el ancho completo de la tira 10 de prueba se ahúsa hacia abajo al extremo proximal 12, haciendo al extremo proximal 12 más estrecho que el extremo distante 14. Por ejemplo, si se aplica una muestra de sangre a una abertura en el extremo proximal 12 de la tira 10 de prueba, la provisión de la sección ahusada 16 y la elaboración del extremo proximal 12 más estrecho del extremo
distante 14 puede ayudar, en ciertas modalidades, al usuario a localizar la abertura donde se va a aplicar la muestra de sangre. Además, o de manera alternativa, se pueden usar otros medios visuales, tal como señales, muescas, contornos, texturas o similares. La tira 10 de prueba se representa en las Figuras 1A y 2 como que incluye una pluralidad de componentes conductores, tal como por ejemplo, electrodos. Un componente conductor puede incluir cualquier estructura configurada para conducir al menos parcialmente una señal eléctrica. En algunas modalidades, un componente conductor puede extenderse sustancialmente a lo largo de la longitud de la tira 10 de prueba para proporcionar un contacto eléctrico cerca del extremo distante 14 y una región conductora que conecta eléctricamente la región del extremo proximal 12 cerca del electrodo al contacto eléctrico. En la modalidad ilustrativa de las Figuras 1A y 2, la pluralidad de electrodos incluye un electrodo 22 de trabajo, un electrodo contador 24, un ánodo 28 de detección de relleno, y un cátodo 30 de detección de relleno. De manera correspondiente, los contactos eléctricos pueden incluir un contacto 32 de electrodo de trabajo, un contacto 34 de electrodo contador, un contacto 36 de ánodo de detección de relleno, y un contacto 38 de cátodo de detección de relleno colocados en el extremo distante 1 . Las regiones conductoras pueden incluir una región 40 conductora de
electrodo de trabajo, que conecta de manera eléctrica el extremo proximal del electrodo de trabajo 22 al contacto 32 de electrodo de trabajo, una región 42 conductora de electrodo contador, que conecta eléctricamente el extremo proximal del electrodo contador 24 al contacto 34 de electrodo contador, una región 44 conductora de ánodos de detección de relleno, que conecta eléctricamente el extremo proximal del ánodo 28 de detección de relleno al contacto 36 de detección de relleno, y una región 46 conductora de cátodo de detección de relleno que conecta eléctricamente el extremo proximal del cátodo 30 de detección de relleno al contacto 38 de cátodo de detección de relleno. En una modalidad, al menos un electrodo está alojado parcialmente dentro de la cámara de muestra para permitir el contacto con el fluido que se va a probar. Por ejemplo, las Figuras 1A y 2 representan la tira 10 de prueba como que incluye la ranura 52, que forma una porción de una cámara 88 de muestra en el extremo proximal 12. La ranura 52 puede definir una porción expuesta 54 del electrodo 22 de trabajo, una porción expuesta 56 del electrodo contador 24, una porción expuesta 60 del ánodo 28 de detección de relleno, y una porción expuesta 62 del cátodo 30 de detección de relleno. Adicionalmente , la modalidad ilustrativa se representa que incluya un conductor 48 de autoencendido opcional colocado cerca del extremo distante 14 para permitir
que el medidor determine que está conectada operativamente una tira de prueba al medidor. La Figura IB es una vista en planta superior de la tira 110 de prueba de acuerdo a otra modalidad ilustrativa de la invención. Como se muestra, la tira 110 de prueba incluye una diferente configuración de electrodos, y una pluralidad de contactos 148 eléctricos codificados, colocados cerca de un extremo distante 114. La tira 110 de prueba puede tomar la forma de una tira sustancialmente plana que se extiende desde un extremo proximal 112 al extremo distante 114, en donde el extremo proximal 112 de la tira 110 de prueba puede ser más estrecho que el extremo distante 114 para proporcionar reconocimiento visual fácil del extremo distante 14. Por ejemplo, la tira 110 de prueba puede incluir una sección ahusada 116. La tira 110 de prueba representada en la Figura IB puede incluir una pluralidad de electrodos, tal como por ejemplo, un electrodo 122 de trabajo, un electrodo contador 124, y los electrodos 128, 130 de detección de relleno. De manera correspondiente, los contactos eléctricos pueden incluir un contacto 132 de electrodo de trabajo, un contacto 134 de electrodo contador, y los contactos 136, 138 de electrodo de detección de relleno colocados en el extremo distante 114. Las regiones conductoras pueden incluir una región 140 conductora de electrodo de trabajo, que conecta
eléctricamente el extremo proximal del electrodo de trabajo 122 al contacto 132 de electrodo de trabajo, una región 142 conductora de electrodo contador, que conecta eléctricamente el extremo proximal del electrodo contador 124 al contacto 134 de electrodo contador, y las regiones 144, 146 conductoras de detección de relleno que conectan eléctricamente los electrodos 128, 130 de detección de relleno a los contactos 136, 138 de detección de relleno. La tira 110 de prueba también puede incluir una ranura 152 configurada para recibir una muestra de fluido. Además, la tira 110 de prueba puede incluir una o más barreras de difusión (no mostrada), como se describe más adelante. En algunas modalidades, la tira 110 de prueba puede incluir uno o más contactos 148 eléctricos codificados configurados para codificar un código leíble, en donde el código leíble puede incluir la información de tira de prueba, la información de calibración o cualquier otro dato adecuado. Además, los contactos 148 eléctricos codificados pueden ser resistentes a arañazos o abrasión. De manera específica, la tira 110 de prueba puede incluir contactos 148 eléctricos codificados formados de dos o más capas de material conductor y/o semiconductor (no mostrado) . La información adicional con respecto a los contactos 49 eléctricos codificados, de codificación y de resistencia a la abrasión se describe en la solicitud de patente de los Estados Unidos co-poseída número
11/458,298, que se incorpora en la presente como referencia en su totalidad. La Figura 3 muestra una vista en planta superior de una tira de prueba de acuerdo a una modalidad ilustrativa. Como se muestra en la Figura 3, se puede formar una barrera 47 de difusión entre el electrodo 22 de trabajo y el ánodo 28 de detección de relleno y el cátodo 30 de detección de relleno. La barrera 47 de difusión puede separar de manera eléctrica la porción expuesta 54 del electrodo 22 de trabajo y la porción expuesta 60 del ánodo 28 de detección de relleno y la porción 62 expuesta del cátodo 30 de detección de relleno. En algunas modalidades, la tira 10 de prueba también puede incluir una barrera 49 de difusión formada entre el electrodo 22 de trabajo y el electrodo contador 24. La barrera 49 de difusión puede separar eléctricamente la porción expuesta 54 del electrodo 22 de trabajo y la porción expuesta 56 del electrodo contador 24. En otras modalidades, la tira 10 de prueba puede incluir una o más barreras de difusión colocadas entre cualquier electrodo adyacente. Se pueden configurar las barreras de difusión para mejorar la exactitud de la determinación de la concentración del constituyente al reducir la migración de los componentes electroquímicamente activos. Por ejemplo, las especies oxidadas o reducidas formadas por una reacción de reducción-oxidación en la detección de glucosa pueden migrar entre el
electrodo 22 de trabajo y el electrodo contador 24. Esta migración puede generar corriente parásita, reduciendo la exactitud de la determinación de la concentración de constituyente. El ancho de la barrera 49 de difusión puede proporcionar suficiente distancia para reducir los efectos de la migración de los componentes electroquímicamente activos entre la porción expuesta 54 del electrodo 22 de trabajo y la porción expuesta 56 del electrodo contador 24. La ecuación para determinar la distancia de difusión de un componente químico electroactivo se da por:
en donde d es la distancia de difusión, D es el coeficiente de difusión, y t es el tiempo. Por ejemplo, el coeficiente de difusión es -7.6 x 10~6 cm2/seg para ferricianuro de potasio y -8.8 x 10~6 cm2/seg para hexaamina de rutenio. Durante un tiempo de reacción ilustrativo de 5 segundos, el ferricianuro de potasio cargado puede migrar 87 micrómetros y la hexaamina de rutenio cargada puede cargar 93 micrómetros. Se ha encontrado que la corriente provocada por la migración de los componentes cargados se pueden reducir al separar el electrodo 22 de trabajo y el electrodo contador 24 por una distancia igual a o mayor que la distancia de difusión, tal como por ejemplo, aproximadamente 100 micrómetros para un biosensor que use ferricianuro de potasio o hexaamina de
rutenio. De acuerdo a la modalidad ilustrativa, la barrera 49 de difusión puede separar el electrodo 22 de trabajo y el electrodo contador 24 por al menos aproximadamente 100 micrómetros . En algunas modalidades, la distancia de difusión para un mediador dado es dependiente del tiempo de reacción. Por ejemplo, tiempos más cortos de reacción disminuyen la distancia de difusión. De manera subsiguiente, se puede disminuir el ancho de la barrera de difusión. Tiempos más prolongados de reacción incrementan la distancia de difusión, y de manera subsiguiente, pueden incrementar el ancho de la barrera de difusión. También se contempla que la distancia de difusión pueda variar dependiendo de otros factores relacionados al diseño y/o función de la tira 10 de prueba, tal como por ejemplo, la geometría, la energía superficial, y los factores ambientales. Como se muestra en la Figura 2, la tira 10 de prueba puede tener una construcción en general estratificada. Trabajando hacia arriba desde la capa de fondo, la tira 10 de prueba puede incluir la capa base 18 que puede extenderse sustancialmente a lo largo de la longitud completa o definir la longitud de la tira 10 de prueba. La capa base 18 se puede formar de un material eléctricamente aislante y puede tener un espesor suficiente para proporcionar soporte estructural a la tira 10 de prueba.
De acuerdo a la modalidad ilustrativa de la Figura 2, una capa conductora 20 se puede colocar en al menos una porción de la capa base 18. La capa conductora 20 puede comprender una pluralidad de electrodos. En la modalidad ilustrativa, la pluralidad de los electrodos incluye un electrodo 22 de trabajo, un electrodo contador 24, un ánodo 28 de detección de relleno, y un cátodo 30 de detección de relleno. Adicionalmente, la modalidad ilustrativa se representa con la capa conductora 20 que incluye un conductor 48 de autoencendido colocado en la capa base 18 cerca del extremo distante 14. Además, la barrera 49 de difusión puede ser una región no conductora formada en la capa conductora 20. Se contempla que la barrera 49 de difusión se puede formar al cortar al menos parcialmente la capa conductora 20 entre el electrodo 22 de trabajo y el electrodo contador 24. La siguiente capa de la tira 10 de prueba ilustrativa es una capa 64 separadora dieléctrica colocada en la capa conductora 20. La capa 64 separadora dieléctrica puede estar compuesta de un material eléctricamente aislante, tal como poliéster. La capa separadora dieléctrica 64 puede cubrir porciones del electrodo 22 de trabajo, del electrodo contador 24, del ánodo 28 de detección de relleno, del cátodo 30 de detección de relleno, y de las regiones conductoras 40-46, pero en la modalidad ilustrativa de la Figura 2 no cubre los contactos eléctricos 32-38, y/o el conductor 48 de
autoencendido . Por ejemplo, la capa 64 separadora dieléctrica puede cubrir una porción sustancial de la capa conductora 20 en la misma, desde una linea próxima de contacto 32 y 34 al extremo proximal 12, excepto por la ranura 52 que se extiende desde el extremo proximal 12. Una cubierta 72, que tiene un extremo proximal 74 y un extremo distante 76, se muestra en la Figura 2 como que está colocada en el extremo proximal 12 y se configura para cubrir la ranura 52 y forma parcialmente la cámara 88 de muestra. La cubierta 72 se puede unir a la capa separadora dieléctrica 64 mediante una capa 78 de adhesivo. La capa 78 de adhesivo puede incluir un adhesivo poliacrilico u otro y puede consistir de secciones colocadas en la cubierta 72 en lados opuestos de la ranura 52. Una discontinuidad 84 en la capa 78 de adhesivo se extiende desde el extremo distante 70 de la ranura 52 a una abertura 86. La cubierta 72 se puede colocar en la capa separadora 64 tal que el extremo proximal 74 de la cubierta 72 se puede alinear con el extremo proximal 12 y el extremo distante 76 de la cubierta 72 se puede alinear con la abertura 86, cubriendo de este modo la ranura 52 y la discontinuidad 84. Adicionalmente, la cubierta 72 se puede componer de un material eléctricamente aislante, tal como poliéster. La cubierta 72 también puede ser transparente . La ranura 52, junto con la capa base 18 y la
cubierta 72, pueden definir la cámara 88 de muestra en la tira 10 de prueba para recibir una muestra fluida, tal como una muestra de sangre, para medición en la modalidad ilustrativa. Un extremo proximal 68 de la ranura 52 puede definir una primera abertura en la cámara 88 de muestra, a través de la cual se introduce la muestra de fluido. En el extremo distante 70 de la ranura 52, la discontinuidad 84 puede definir una segunda abertura en la cámara 88 de muestra, para desfogar la cámara 88 de muestra conforme la muestra entra a la cámara 88 de muestra. La ranura 52 se puede dimensionar tal que una muestra de sangre aplicada a su extremo proximal 68 se atraiga y mantenga en la cámara 88 de muestra por acción capilar, con la discontinuidad 84 que desfoga la cámara 88 de muestra a través de la abertura 86, conforme entra la muestra de sangre. En algunas modalidades, la cubierta 72 puede incluir uno o más agujeros, o desfogues (no mostrado), configurados para permitir el flujo de fluido en la cámara 88. Además, la ranura 52 se puede hacer de dimensiones de modo que el volumen de la muestra de sangre que entra a la cámara 88 de muestra por acción capilar sea aproximadamente 1 microlitro o menos. Se puede colocar una capa 90 de reactivos en la cámara 88 de muestra. En la modalidad ilustrativa, la capa 90 de reactivos hace contacto con la porción expuesta 54 del electrodo 22 de trabajo. También se contempla que la capa 90
de reactivos puede hacer contacto o no con la barrera 49 de difusión y/o la porción expuesta 56 del electrodo contador 24. La capa 90 de reactivos puede incluir componentes químicos para permitir que se determine de manera electroquímica el nivel de glucosa u otro analito en el fluido, tal como una muestra sanguínea. Por ejemplo, la capa 90 de reactivos puede incluir una enzima específica para glucosa, tal como glucosa-deshidrogenasa o glucosa-oxidasa , y un mediador, tal como ferricianuro de potasio o hexaamina de rutenio. La capa 90 de reactivos también puede incluir otros componentes, tal como materiales amortiguadores (por ejemplo, fosfato de potasio), aglutinantes poliméricos (por ejemplo, hidroxipropil-metil-celulosa, alginato de sodio, celulosa microcristalina , óxido de polietileno, hidroxiet ilcelulosa , y/o alcohol poliviní lico) , y agentes tensioactivos (por ejemplo, Tritón X-100 o Surfynol 485) . Los componentes químicos de la capa 90 de reactivos pueden reaccionar con la glucosa de la muestra sanguínea de la siguiente manera. La glucosa-oxidaza inicia una reacción que oxida la glucosa hacia ácido glucónico y reduce el ferricianuro a ferrocianuro . Cuando se aplica un voltaje apropiado al electrodo 22 de trabajo, con relación al electrodo contador 24, el ferrocianuro se oxida a ferricianuro, generando de ese modo una corriente que está relacionada a la concentración de glucosa en la muestra de sangre.
En la determinación de la concentración de glucosa en una muestra sanguínea, la barrera 49 de difusión puede mejorar la exactitud de la determinación al reducir la migración de uno o más componentes de la capa 90 de reactivos. Un componente cargado por oxidación o reducción, tal como por ejemplo, examina de rutenio, puede migrar entre el electrodo 22 de trabajo y el electrodo contador 24. La migración o "transposición" de los componentes cargados puede generar corriente parásita, reduciendo la exactitud de la determinación de la concentración de glucosa. El ancho de la barrera 49 de difusión se diseña para proporcionar distancia suficiente para limitar la migración de los constituyentes cargados entre la porción expuesta 54 del electrodo 22 de trabajo y la porción expuesta 56 del electrodo contador 24. Como se representa en la Figura 2, la posición y dimensiones de las capas de la tira 10 de prueba ilustrativa pueden dar por resultado que la tira 10 de prueba tenga regiones de diferentes espesores. De las capas por arriba de la capa base 18, el espesor de la capa separadora 64 puede constituir un espesor sustancial de la tira 10 de prueba. De esta manera, el extremo distante de la capa separadora 64 puede formar un resalto 92 en la tira 10 de prueba. El resalto 92 puede delinear una sección delgada 94 de la tira 10 de prueba que se extiende desde el resalto 92 al extremo distante 14, y una sección gruesa 96 de la tira 10 de prueba
se extiende desde el resalto 92 al extremo proximal 12. Los elementos de la tira 10 de prueba usados para conectarla eléctricamente al medidor (no mostrado) , específicamente, los contactos eléctricos 32-38 y el conductor 48 de autoencendido, pueden estar localizados todos en la sección delgada 94. Por consiguiente, el medidor se puede hacer de un tamaño y configurar para recibir la sección 94 relativamente delgada pero no la sección 96 relativamente gruesa. Esto puede ayudar al usuario a insertar el extremo correcto en la tira 10 de prueba, es decir, el extremo distante 14 de la sección 94 relativamente delgada, y puede impedir que el usuario inserte el extremo erróneo, es decir, el extremo proximal 12 en la sección 96, relativamente gruesa, en el medidor. La tira 10 de prueba se puede hacer de un tamaño para fácil manejo. Por ejemplo, la tira 10 de prueba puede medir aproximadamente 35 mm de largo (es decir, desde el extremo proximal 12 al extremo distante 14) y aproximadamente 9 mm de ancho. De acuerdo a la modalidad ilustrativa, la capa base 18 puede ser un material de poliéster de aproximadamente 0.25 mm de grueso y la capa separadora dieléctrica 64 puede ser de aproximadamente 0.094 mm de grueso y cubrir porciones del electrodo 22 de trabajo. La capa 78 de adhesivo puede incluir un adhesivo poliacrílico u otro y tener un espesor de aproximadamente 0.013 mm. La
cubierta 72 se puede componer de un material eléctricamente aislante, tal como poliéster, y puede tener un espesor de aproximadamente 0.095 mm. La cámara 88 de muestra se puede hacer de dimensiones de modo que el volumen de la muestra de fluido es aproximadamente 1 microlitro o menos. Por ejemplo, la herradura 52 puede tener una longitud (es decir, desde el extremo proximal 12 al extremo distante 70) de aproximadamente 3.56 mm, un ancho de aproximadamente 1.52 mm, y una altura (que se puede definir sustancialmente por el espesor de la capa separadora dieléctrica 64) de aproximadamente 0.13 mm. Las dimensiones de la tira 10 de prueba para uso adecuado se pueden determinar fácilmente por un experto en la técnica. Por ejemplo, un medidor con manejo automatizado de tiras de prueba puede utilizar una tira de prueba más pequeña de la de 9 mm de ancho. Aunque las Figuras 1A, IB y 2 muestran una modalidad ilustrativa de la tira 10 de prueba, se pueden usar otras configuraciones, otros componentes químicos y otros arreglos de electrodos. Por ejemplo, también se puede usar diferentes arreglos de electrodo de trabajo, electrodo contador y/o barreras de difusión. En la configuración mostrada en las Figuras 1A y 2, el electrodo 22 de trabajo, el electrodo contador 24 y las barreras 47, 49 de difusión se separan por límites en general alineados en el eje x, perpendicular a la longitud de la tira 10 de prueba en el eje
y. De manera alternativa, el electrodo 22 de trabajo, el electrodo contador 24 y la barrera 49 de difusión se pueden separar por limites en general alineados en el eje y, paralelo a la longitud de la tira 10 de prueba. También se contempla que el electrodo 22 de trabajo, el electrodo contador 24 y la barrera 49 de difusión se puedan alinear en cualquier ángulo con relación a la longitud de la tira 10 de prueba . Fabricación de las Tiras de Prueba Las Figuras 4A, 4B, y 5 muestran una estructura de tira de prueba fabricada parcialmente a fin de mostrar varios pasos en un método ilustrativo para formar una tira de prueba. En cada una de las Figuras 4A, 4B, y 5, la forma exterior de la tira de prueba que se formará en el proceso completo de fabricación se muestra como una linea punteada. Aunque estas figuras muestran pasos para fabricar la tira 10 de prueba, como se muestra en las Figuras 1A, 4B, y 2, se da a entender que se puede usar pasos similares para fabricar tiras de prueba que tengan otras configuraciones de componentes. Las tiras 10 de prueba se pueden fabricar al formar una pluralidad de tiras 10 de prueba en un arreglo a lo largo de una bobina de material de sustrato. El proceso ilustrativo de fabricación emplea la capa base 18 cubierta por la capa conductora 20. La capa conductora 20 y la capa
base 18 pueden estar en la forma de una bobina, tal como por ejemplo, una cinta, trama, hoja u otra estructura similar. La capa conductora 20 puede comprender cualquier material conductor o semiconductor adecuado, tal como, oro, plata, paladio, carbón, óxido de estaño y otros conocidos en la técnica. El material conductor puede ser de cualquier espesor adecuado y se puede unir a la capa base 18 por cualquier medio adecuado. La capa conductora 20 se puede formar por escritura directa, chisporroteo, impresión por esparcido, impresión por contacto o cualquier método adecuado de fabricación. Un modelo de ejemplo es escritura directa de electrodos como se describa en la solicitud de patente provisional co-pendiente comúnmente asignada número 60/716,120 "Biosensor con Electrodo Escrito Directo", presentada el 13 de Septiembre de 2005, la descripción de la cual se incorpora de este modo en la presente como referencia en su totalidad. Otro proceso de ejemplo es impresión con esparcido como se describe en la patente de los Estados Unidos comúnmente asignada número 6,743,635 "Sistema y Métodos para Percepción de Glucosa Sanguínea" presentada el 1° de Noviembre de 2002, la descripción de la cual se incorpora de este modo en la presente como referencia en su totalidad. Como se representa en la modalidad ilustrativa mostrada en las Figuras 4A, 4B, la tira 10, 110 de prueba
puede incluir una pluralidad de componentes eléctricos, tal como por ejemplo, los electrodos 22, 122, 24, 124, 28, 128 y 30, 130 colocados en la capa 20, 120 conductora y que se extiende sustancialmente desde el extremo proximal 12, 112 al extremo distante 14, 114. Los componentes eléctricos de la tira 10, 110 de prueba se pueden formar parcialmente al formar un trazo 80, 180. Por ejemplo, el trazo 80 se puede indicar por las lineas sólidas en la capa conductora 20 como se muestra en la Figura 4A. El trazo 80, 180 puede definir al menos parcialmente uno o más limites de uno o más componentes eléctricos de la tira 10, 110 de prueba. En algunas modalidades, los componentes eléctricos de la tira de prueba se pueden formar al menos parcialmente por una o más técnicas de procesamiento. Por ejemplo, uno o más limites de algunos componentes eléctricos se pueden formar al menos parcialmente por cualquier proceso usado para formar la capa conductora, tal como, escritura directa, chisporroteo, impresión con estarcido e impresión por contacto. También se contempla que se puede usar una técnica de procesamiento para definir de manera más precisa los limites de algunos componentes eléctricos, tal como por ejemplo, ablación con láser. En otras modalidades, una técnica de procesamiento puede incluir laminación, grabado con ácido o un proceso de separación física, tal como por ejemplo, estampado y corte.
En algunas modalidades, el trazo 80, 180 se pueden formar por un proceso de ablación, tal como por ejemplo, ablación con láser donde la ablación con láser puede incluir cualquier dispositivo adecuado para la remoción de la capa conductora en el tiempo apropiado y con la precisión y exactitud apropiadas. Se pueden usar varios tipos de láseres para fabricación del sensor, tal como por ejemplo, láseres de estado sólido (por ejemplo Nd:YAG y de titanio-zafiro), láseres de vapor de cobre, láseres de diodo, láseres de dióxido de carbono y láseres excimer. Estos láseres pueden ser capaces de generar una amplia variedad de longitudes de onda en las regiones ultravioleta, visible e infrarroja. Por ejemplo, el láser excimer proporciona longitud de onda de aproximadamente 248 nm, un láser de Nd:YAG fundamental da aproximadamente 1064 nm, una longitud de onda de Nd:YAG triplicada en frecuencia es aproximadamente 355 nm y un láser de Ti ¡zafiro está en aproximadamente 800 nm. La potencia de salida de estos láseres puede variar y usualmente está en el intervalo de aproximadamente 10-100 vatios. De manera alternativa, se puede formar el trazo 80, 180 por proceso de ablación con láser en combinación con otros procesos adecuados conocidos en la técnica. El proceso de ablación con láser puede incluir un sistema de láser. El sistema de láser puede incluir una fuente de láser. El sistema de láser puede incluir además
medios para formar el trazo 80, 180 tal como por ejemplo, una haz enfocado, una máscara proyectada u otra técnica adecuada. El uso de un haz de láser enfocado puede incluir un dispositivo capaz de movimiento rápido y exacto controlado para mover el haz de láser enfocado con relación a la capa conductora 20, 120. Por ejemplo, se puede usar un escáner tal como HurryScan (ScanLabs) para dirigir el haz de láser en aplicaciones de escritura directa. El uso de una máscara puede comprender un haz de láser que pasa a través de la máscara para cortar de manera selectiva regiones especificas de la capa conductora 20, 120. Una máscara individual puede definir el trazo 80, 180 o se pueden requerir múltiples máscaras para formar el trazo 80, 180. Para formar el trazo 80, 180, el sistema de láser puede moverse con relación a la capa conductora 20, 120. De manera especifica, el sistema de láser, la capa conductora 20, 120, o tanto el sistema de láser como la capa conductora 20, 120 pueden moverse para permitir la formación del trazo 80, 180 por la ablación con láser. Los dispositivos de ejemplo disponibles para las técnicas de ablación incluyen un sistema de láser disponible de LasX Industries, hite Bear Lake, Minnesota y sistemas de micromáquinado con láser de Exitech, Ltd. (Oxford, Reino Unido) . En algunas modalidades, el trazo 80, 180 puede incluir una o más entalladuras que aislan al menos
parcialmente de forma eléctrica los componentes eléctricos adyacentes de la tira 10, 110 de prueba. Una entalladura puede formar una región eléctricamente aislante, lineal y/o curvilínea entre componentes eléctricos adyacentes. También se contempla que una entalladura puede incluir una vuelta de cualquier ángulo, tal como por ejemplo, un ángulo ortogonal por lo que la entalladura forma una horma en "L". Una entalladura puede aislar parcialmente de forma eléctrica componentes eléctricos adyacentes. En algunas modalidades, una entalladura puede aislar parcialmente de forma eléctrica componentes eléctricos adyacentes puesto que los componentes eléctricos pueden permanecer eléctricamente conectados después de la formación de la entalladura. Por ejemplo, como se muestra en la Figura 4A, el contacto 34 de electrodo contador y el contacto 38 de cátodo de repetición de relleno pueden permanecer eléctricamente conectados después de la formación de una entalladura 57 que separa parcialmente los dos componentes eléctricos. El contacto 34 de electrodo contador y el contacto 38 de cátodo de detección de relleno se pueden aislar eléctricamente de forma subsiguiente por un proceso de separación como se describe más adelante, por lo que la tira 10 de prueba se separa de la bobina laminada a lo largo de la línea punteada como se muestra en la Figura 4A. En algunas modalidades, se pueden usar una o más
técnicas de procesamiento de ablación con láser para formar un trazo. Por ejemplo, una primera técnica de procesamiento de ablación con láser puede utilizar un primer haz de láser de un primer ancho y una segunda técnica de procesamiento de ablación con láser puede utilizar un segundo haz de láser de un segundo ancho, en donde el primero y segundo anchos pueden ser diferentes. El primer haz de láser se puede usar para formar uno o más limites de componentes eléctricos contiguos y el segundo haz de láser se puede usar para formar una o más barreras de difusión, y/o otros componentes eléctricos. En algunas modalidades, el ancho del segundo haz de láser puede ser al menos tan ancho como la distancia de difusión para el reactivo especifico usado para la tira 10 de prueba. Por ejemplo, se puede usar un segundo haz de láser de ~100 micrómetros de ancho para formar la barrera 49 de difusión al remover al menos parcialmente el material de la capa conductora 20 entre el electrodo 22 de trabajo y el electrodo contador 24. Además, se puede usar un segundo haz de láser de ~100 micrómetros de ancho para formar uno o más limites de los contactos 148 eléctricos de codificación, en tanto que se puede usar un primer haz de láser de ~20 micrómetros de ancho para formar uno o más limites del electrodo 122 de trabajo, el electrodo contador 124, y/o los electrodos 128, 130 de detección de relleno. En algunas modalidades, una primera técnica de
procesamiento por ablación con láser puede utilizar un primer haz de láser generado por un primer tipo de láser y una segunda técnica de procesamiento de ablación con láser puede utilizar un segundo haz de láser generado por un segundo tipo de láser, en donde el primero y segundo tipos de láseres pueden ser diferente. Como se describe anteriormente, se pueden usar varios tipos de láseres para formar varias entalladuras en las tiras de prueba. Por ejemplo, se puede formar una entalladura por un láser que opera en el espectro infrarrojo en tanto que se puede formar otra entalladura por un láser que opera en el espectro ultravioleta. Como se muestra en la Figura 4B, se puede usar un láser que opera en el espectro infrarrojo para formar una entalladura 101, en tanto que se puede usar un láser que opera en el espectro ultravioleta para formar una entalladura 103. En algunas modalidades, la entalladura 101 puede formar un limite de uno o más componentes conductores en el extremo distante 114, tal como por ejemplo, los contactos eléctricos 132, 134, 136, 138 y/o 148. Además, la entalladura 103 puede formar un limite de uno o más componentes conductores en el extremo proximal 116, tal como por ejemplo, los electrodos 122, 124, 128 y/o 130. En otras modalidades, una primera técnica de procesamiento de ablación con láser puede utilizar un primer haz de láser generado a una primera potencia y una segunda técnica de procesamiento de ablación con láser puede utilizar
un segundo haz de láser generado a una segunda potencia, en donde la primera y segunda potencias de láser pueden ser diferentes. Por ejemplo, un láser puede tener suficiente potencia para remover material a una profundidad deseada, en tanto que otro láser puede remover material a una profundidad más pequeña o más grande. También, un láser puede ser de potencia suficiente para penetrar una o más capas de material, en tanto que otro láser puede ser capaz de penetrar menos o más capas de material. Como se describe anteriormente, la tira 10, 110 de prueba puede incluir contactos eléctricos formados de dos o más capas de material conductor y/o semiconductor, como se describe por la Solicitud de Patente de los Estados Unidos No. 11/458,298. Para ejemplo ilustrativo, se puede configurar un primer proceso de ablación con láser para remover dos o más capas de material conductor y/o semiconductor para formar la entalladura 101, en tanto, se puede configurar un segundo proceso de ablación con láser para remover menos material a una menor potencia para formar la entalladura 103. Por ejemplo, un láser de Fibra TR fabricado por SP1 ( Southampton, RU) que opera a una potencia adecuada se puede usar para formar la entalladura 101. Esta técnica de fabricación puede permitir la formación de componentes conductores en el extremo proximal 116 a resolución apropiada para el proceso electroquímico requerido y formación de componentes
conductores en el extremo distante 114 que requiere ablación de mayor potencia para penetrar el material de múltiples capas. También, se pueden aplicar diferentes procesos de ablación con láser en diferentes etapas durante un proceso de fabricación. Por ejemplo, la entalladura 101 se puede formar después del depósito de una o más capas de material conductor y/o semiconductor en tanto que la entalladura 103 se puede formar antes de este proceso de depósito. Por lo tanto, se pueden usar diferentes técnicas de procesamiento, tal como láseres que operan a diferentes potencias, diferentes anchos de haz, que son de tipo diferente, etc., para formar uno o más limites de uno o más componentes conductores. Por ejemplo, se puede usar un haz de AVIA-X fabricado por Coherent (Santa Clara, CA) para formar la entalladura 103 cuando se opera a una primera potencia de láser, y la entalladura 101 cuando se opera a una segunda potencia de láser mayor que la primera potencia de láser. En algunas modalidades, se pueden formar barreras de difusión por una pluralidad de entalladuras. Por ejemplo, la barrera 49 de difusión se puede formar al menos parcialmente por las entalladuras 51, 53 y 55, donde las entalladuras 51 y 53 pueden ser de cualquier ancho menor que el ancho de la barrera 49 de difusión. El ancho y/o trayectoria de una o más entalladuras usadas para formar la barrera 49 de difusión puede ser suficiente para formar una
región que aisla eléctricamente el electrodo 22 de trabajo y el electrodo contador 24. Por ejemplo, la distancia entre las entalladuras 51 y 53 puede definir el ancho de la barrera 49 de difusión y de esta manera la distancia de separación entre el electrodo 22 de trabajo y el electrodo contador 24. La barrera 49 de difusión puede estar contigua con al menos un limite de uno o más componentes eléctricos, tal como por ejemplo, el electrodo 22 de trabajo y el electrodo contador 24. Como se muestra en la Figura 4A, los limites contiguos con la barrera 49 e difusión, el electrodo 22 de trabajo y el electrodo contador 24 pueden incluir los limites formados por las entalladuras 51, 53 y 55. Los limites no contiguos con la barrera 49 de difusión pueden incluir los limites entre la región 42 conductora de electrodo contador y la región 46 conductora de cátodo de detección de relleno, la región 46 conductora de cátodo de detección de relleno y la región 44 conductora de ánodo de detección de relleno, y la región 44 conductora de ánodo de detección de relleno y la región 40 conductora de electrodo de trabajo. Después de la formación de los componentes eléctricos de la tira 10 de prueba, se puede aplicar la capa 64 separadora dieléctrica a la capa conductora 20, como se ilustra en la Figura 5. La capa separadora 64 se puede aplicar a la capa conductora 20 de varias maneras diferentes. En un planteamiento ilustrativo, la capa separadora 64 se
proporciona como una hoja o trama suficientemente larga y formada apropiadamente para cubrir múltiples trazos 80 de tiras de prueba. En este planteamiento, la parte inferior de la capa separadora 64 se puede revestir con un adhesivo para facilitar la unión a la capa conductora 20. Las porciones de la superficie superior de la capa separadora 64 también se pueden revestir con un adhesivo a fin de proporcionar la capa 78 de adhesivo en cada una de las tiras 10 de prueba. Se pueden cortar varias ranuras, formar o perforar de la capa separadora 64 para formarla antes, durante o después de la aplicación de la capa separadora 64 a la capa conductora 20. Por ejemplo, como se muestra en la Figura 5, la capa separadora 64 puede tener una ranura pre-formada 98 para cada estructura de tira de prueba. La capa separadora 64 entonces se puede colocar sobre la capa conductora 20, como se muestra en la Figura 5, y laminar a la capa conductora 20. Cuando la capa separadora 64 se coloca de manera apropiada en la capa conductora 20, las porciones 54-62, expuestas de electrodo son accesibles a través de la ranura 98. De manera similar, la capa separadora 64 deja expuestos los contactos 32-38 y el conductor 48 de autoencendido después de la laminación. De manera alternativa, la capa separadora 64 se puede aplicar de otras maneras. Por ejemplo, la capa separadora 64 se puede moldear por inyección sobre la capa base 18. La capa separadora 64 también se puede acumular en
la capa base 18 al imprimir con estarcido capas sucesivas de un material dieléctrico a un espesor apropiado, por ejemplo, aproximadamente 0.0127 centímetros (0.005 pulgadas). Un material dieléctrico de ejemplo comprende una mezcla de compuestos de silicón y acrílico, tal como la "Composición 5018 de Conmutador de Membrana" disponible de E.I. DuPont de Nemours & Co., ilmington, Del. Se pueden usar, sin embargo, otros materiales. En algunas modalidades, se pueden formar una o más entalladuras después de la aplicación de la capa separadora 64 a la capa base 18. Por ejemplo, la capa separadora 64 se puede aplicar a la capa base 18 tal que la capa separadora 64 cubra al menos parcialmente uno o más contactos eléctricos 132, 134, 136, 138 y/o 148. Después de la aplicación de la capa separador 64, se pueden formar una o más entalladuras 101 por cualquier técnica adecuada de procesamiento configurada para remover suficiente material de la capa separadora 64 y la capa conductora 120, tal como por ejemplo, ablación con láser usando un láser infrarrojo o de alta energía. En otras modalidades, se puede formar la entalladura 101 después de la aplicación de una segunda capa conductora o capa semiconductora al extremo distante de la tira de prueba, como se describe por la Solicitud de Patente de los Estados Unidos No. 11/458,298. Se pueden emplear otras técnicas de procesamiento, incluyendo grabado con ácido.
La capa 90 de reactivos entonces se puede aplicar a cada estructura de tira de prueba después de la formación de la capa separadora 64. En un planteamiento ilustrativo, la capa 90 de reactivo se aplica por micro-pipetiado de una composición acuosa sobre la porción expuesta 54 del electrodo 22 de trabajo y dejándola secar para formar la capa 90 de reactivos. También se contempla que la capa 90 de reactivos puede hacer contacto o no con la barrera 49 de difusión y/o porción expuesta 56 del electrodo contador 24. Una composición acuosa de ejemplo tiene un pH de aproximadamente 6 y contiene 2 % en peso de alcohol polivinilico, fosfato de potasio 0.1 M, 0.05 % en peso de Tritón X-100, haxaamina de rutenio 0.15 M, 0.7 % de hidroxietilcelulosa (tal como NATROSOLMR) , y aproximadamente 2500 unidades de glucosa-oxidasa por mL. De manera alternativa, se pueden usar otros métodos, tal como impresión con estarcido para aplicar la composición usada para formar la capa 90 de reactivos. En otras modalidades, la capa 90 de reactivos se puede aplicar antes o concurrente con la aplicación de la capa separadora 64. La cubierta 72 entonces se puede unir a la capa separadora 64, donde la cubierta 72 se construye para cubrir la ranura 52. La cubierta 72 puede incluir la capa 78 de adhesivo configurada para adherirse a la capa separadora 64. Después de la unión de la cubierta 72, se pueden separar
tiras 10 de prueba individuales de la bobina laminada. En una modalidad ilustrativa, el proceso de separación puede incluir estampado o "perforado" de tarjetas de prueba individuales en un proceso de "individualización". Por ejemplo, el proceso de individualización puede incluir ablación con láser, estampado, corte o grabado con ácido. Además, se pueden formar uno o más agujeros de cubierta (no mostrados) en la cubierta 72 para proporcionar desfogue adecuado de la cámara 88 de muestra. Se puede formar un agujero de cubierta por cualquier técnica adecuada de procesamiento, tal como por ejemplo, ablación con láser, estampado, corte o grabado con ácido. En algunas modalidades, el agujero de cubiertas puede formar usando un láser de bióxido de carbono u otro tipo de láser operado a una energía apropiada. Anteriormente, se han descrito varias modalidades de la presente invención. Los expertos en la técnica entenderá, sin embargo, que se puede hacer cambios y modificaciones a estas modalidades sin apartarse en el espíritu y alcance verdadera de la invención, que se definen por las reivindicaciones. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la presente invención, es el que resulta claro a partir de la presente descripción de la invención.