MX2008007002A

MX2008007002A - Compuestos de benzotiazol etiquetados isotopicamente como agentes de impresion para proteinas amiloidogenicas

Info

Publication number: MX2008007002A
Application number: MXMX/A/2008/007002A
Authority: MX
Inventors: E Klunk William; A Mathis Chester Jr
Original assignee: E Klunk William; A Mathis Chester Jr; University Of Pittsburgh
Priority date: 2005-12-01
Filing date: 2008-05-30
Publication date: 2008-09-02

Abstract

La presente invención proporciona defluoro linezolid, impureza de linezolidad aislada, la preparación de los mismos y su uso como un estándar de referencia.

Description

COMPUESTOS DE BENZOTIAZOL ETIQUETADOS ISOTÓPICAMENTE COMO AGENTES DE IMPRESIÓN PARA PROTEÍNAS AMILOIDOGENICAS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona generalmente al campo de compuestos de benzotiazol etiquetados isotópicamente que son substratos para proteínas amiloidogénicas, por ejemplo, Aßl-41, una proteína amiloide, los depósitos cerebrales de la cual están asociadas con la enfermedad de Alzheimer . ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN I . Amiloidosis cerebral La enfermedad de Alzheimer ("AD" por sus siglas en inglés) es una enfermedad neurodegenerativa caracterizada por la pérdida de memoria y otras deficiencias cognitivas. McKhann et al., Neurology 34:939 (1984). Es la causa más común de demencia en los Estados Unidos de Norteamérica. La AD puede golpear a personas tan jóvenes como 40-50 años de edad, más aún, ya que la presencia de la enfermedad es difícil de determinar sin biopsia peligrosa del cerebro, el tiempo de inicio es también desconocido. La prevalencia de la AD se incrementa con la edad, con estimados de la población afectada que alcanza tan alto como 40-50% en edades de 85-90.

Evans et al., JAMA 262:2551 (1989); Katzman, Neurology, 43:13 (1993) . Los estudios sugieren que la deposición amiloide en REF.:193776 el cerebro es un evento causativo, temprano en la patogénesis de la enfermedad de Alzheimer (AD) . La progresión de la deposición amiloide resulta en la formación de placas neuríticas y ovillos neurofibrilares en regiones del cerebro que están implicados con el aprendizaje y la memoria. La placa neurítica de Alzheimer típica comprende las neuritas distróficas que rodean el núcleo del material amiloide. El componente principal del núcleo amiloide es una proteína así llamada amiloide-beta (Aß) . En la práctica, la AD es diagnosticada definitivamente a través de la examinación de tejido cerebral, usualmente en autopsia. Khachaturian, Arch. Neurol . 42: 1097 (1985); McKhann et al., Neurology 34: 939 (1984). Neuropatológicamente, esta enfermedad se caracteriza por la presencia de placas neuríticas (NP por sus siglas en inglés), ovillos neurofibrilares (NFT por sus siglas en inglés), y pérdida neuronal, junto con una variedad de otros descubrimientos. Mann, Mech. Ageing Dev. 31:213 (1985). Los cortes post-mortem de tejido cerebral de víctimas de la enfermedad de Alzheimer exhiben la presencia de amiloide en la forma de núcleos extracelulares proteináceos de las placas neuríticas que es característica de AD. Los núcleos amiloides de estas placas neuríticas están compuestos de una proteína llamada el ß-amiloide (Aß) que está dispuesta en una configuración de hoja beta plegada predominantemente. Mori et al., J. Biol.. Chem. 267: 17082 (1992); Kirschner et al., PNAS 83:503 (1986). Las placas neuríticas están en un aspecto temprano e no variado de la enfermedad. Mann et al., J. Neurol. Sci. 89: 169; Mann, Mech. Ageing Dev. 31: 213 (1985); Terry et al., j. Neuropathol . Exp. Neurol 46: 262 (1987). La deposición inicial de Aß ocurre probablemente bastante antes de que sean notables los síntomas clínicos. "Los criterios microscópicos mínimos" actualmente recomendados para el diagnóstico de AD son basados en el número de placas neuríticas encontradas en el cerebro. Khachaturian, Arch. Neurol., supra (1985). La evaluación de las cuentas de placa neurítica deben ser retrasadas hasta después de la muerte, sin embargo. Las placas neuríticas que contienen amiloides son una característica prominente de las áreas selectivas del cerebro en AD así como también en síndrome de Down y en personas homocigotas para el alelo de apolipoproteína E4 quienes son muy probables de desarrollar la AD. Corder et al., Science 261:921 (1993); Divry, P., J. Neurol. Psych. 27 : 643-657 (1927) ; Wisniewski et al., en Zi merman, H. M. (ed.): PROGRESS IN NEUROPATHOLOGY (Gruñe and Stratton, N.y. 1973) pág. 1-26. El amiloide cerebral es fácilmente demostrado por tinción de secciones del cerebro con tioflavina S o rojo Congo. Puchtler et al., J. Histochem. Cythochem. 10:35 (1962). El amiloide teñido con rojo Congo es caracterizado por una apariencia dicroica, que exhibe un color de polarización de amarillo-verde. El enlace dicroico es el resultado de la estructura de hoja beta plegada de las proteínas amiloides. Glenner, g. N. Eng. J. Med. 302: 1283 (1980). Una discusión detallada de la bioquímica o histoquímica del amiloide puede ser encontrada en Glenner, N.

Eng. J. Med. 302: 1333 (1980). De esta forma, el diagnóstico de AD ha sido logrado en su mayoría a través de la evaluación de criterios clínicos, biopsias cerebrales y estudios de tejido post-mortem. Los esfuerzos de investigación para desarrollar métodos para diagnosticar la enfermedad de Alzheimer in vivo incluyen (1) prueba genética, (2) métodos de inmuno ensayo y (3) técnicas de formación de imágenes. La evidencia de que las anormalidades en el metabolismo de Aß son necesarias y suficientes para el desarrollo de AD se basa en el descubrimiento de mutaciones de punto en la proteína precursora de Aß en varias familias raras con una forma dominante autosomal de AD. Ardí, Nature Genetics 1: 233 (1992); Ardí et al., Science 256: 184 (1992). Estas mutaciones ocurren cerca de los puntos de escisión N y C terminales necesarios para la generación de Aß a partir de su proteína precursora. St. George-Hyslop et al., Science 235:885 (1987); Kang et al., Nature 325: 733 (1987); Potter WO 92/17152. El análisis genético de un gran número de familias AD ha demostrado, sin embargo, que la AD es genéticamente heterogénea. St. George-Hyslop et al., Nature 347:194 (1990) . El enlace a los marcadores del cromosoma 21 es mostrado en solamente algunas familias con inicio temprano de AD y no en familias con inicio tardío de AD. Más recientemente un gen en el cromosoma 14 cuyo producto es predicho para contener dominios de transmembrana múltiples y se asemeja a una proteína membranal integral ha sido identificado por Shemngton et al., Nature 375:754-760 (1995) . Este gen puede tomarse en cuenta para hasta 70% de AD dominante autosomal de inicio temprano. Los datos preliminares sugieren que esta mutación del cromosoma 14 provoca un incremento en la producción de Aß . Scheuner et al., Soc. Neurosci. Abstr. 21: 1500 (1995) . Una mutación en un gen muy similar ha sido identificada en el cromosoma 1 en Volga Germán Kmdreds with early-onset A. Levy-Lahad et al., Science 269:973-977 (1995). El tamizado para el genotipo de apolipoproteína ha sido sugerido como un auxiliar en el diagnóstico de AD. Scott, Nature 366: 502 (1993); Roses, Ann. Neurol. 38:6-14 (1995). Se presentan dificultades con estas tecnologías, sin embargo, ya que el alelo de la apoliproproteína E4 es solamente un factor de riesgo para la AD, no un marcador de enfermedad. Está ausente en muchos pacientes de AD y presentes en mucha gente sin demencia viejos. Bird. Ann. Neurol. 38:2-4 (1995) . Los métodos de inmunoensayos han sido desarrollados para detectar la presencia de marcadores neuroquímicos en los pacientes con AD y para detectar una proteína amiloide con relación a la AD en fluido espinal cerebral. Warner, Anal. Chem. 59: 1203 A (198); No. de Patente Mundial 92/17152 por Potter; Glenner et al., Patente de los Estados Unidos de Norteamérica. 4,666,829. Estos métodos para diagnóstico de AD no han sido probados para detectar AD en todos los pacientes, particularmente en etapas tempranas de la enfermedad y son relativamente invasivos, requiriendo una toma de la médula espinal. También, se han hecho intentos para desarrollar anticuerpos monoclonales como sondas para formación de imágenes de Aß. Majocha et al., J. Nucí. Med., 33:2184 (1992) ; Majocha et al., solicitud WO 89/06242; y Majocha et al., Patente de los Estados Unidos de Norteamérica 5,231,000. La desventaja principal de las sondas de anticuerpo es la dificultad para obtener estas grandes moléculas entre la barrera sangre-cerebro. Usar anticuerpos para el diagnóstico in vivo de AD puede requerir anormalidades marcadas en la barrera de sangre-cerebro con el fin de ganar acceso en el cerebro. No hay evidencia funcional convincente que las anormalidades en la barrera sangre-cerebro existen confiablemente en la AD. Kalaria, Cerebrovascular & Brain Metabolism Reviews 4:226 (1992). El péptido de Aß ratioetiquetado ha sido usado para etiquetar placas tipo neuríticas, difusas, compactas en secciones del cerebro de AD. Ver Maggio et al., solicitud WO 93/04194. Sin embargo, estos péptidos comparten todos las desventajas de los anticuerpos. Específicamente, los péptidos no cruzan normalmente la barrera sangre-cerebro en cantidades necesarias para formación de imágenes y ya que estas sondas reaccionan con placas difusas, no pueden ser específicas para AD. Las placas neuríticas y ovillos neurofibrilares son dos de las marcas de constraste patológicas más características de la AD. Klunk and Abraham, Psychiatric Development, 6:121-152 (1988). Las placas ocurren tempranamente en la neocorteza donde son relativamente distribuidas uniformemente. Thal et al., Neurology 58:1791-1800 (2002). Los ovillos aparecen primero en áreas limbicas como la corteza transentorinal y progresan en un patrón topográfico predicible a la neocorteza. Braak and Braak, Acta Neuropathologica 82:239-259 (1991). Arnold et al., mapea la distribución de NFT y placas neuríticas en los cerebros de pacientes con AD. Arnold et al., Cereb. Cortez 1:103-116 (1991). Comparada con NFT, las placas neuríticas son, en general, más uniformemente distribuidas en toda la corteza, con las excepciones de notablemente unas cuantas placas neuríticas en perialocorteza límbica y alocorteza (las áreas con densidad de NFT mayor) . Por tinción con tioflavina S, los lóbulos temporales y occipitales tienen las densidades de placas neuríticas más altas, los lóbulos limbicos y frontales tienen las más bajas, y el lóbulo parietal es intermedio. Arraigada et al. Neurology 42:1681-1688 (1992). Arriaga et al. estudia la distribución topográfica de cambios patológicos del tipo de AD en los cerebros de individuos viejos que se presumen no tiene demencia. Sus observaciones sugieren que la mayoría de los individuos arriba de la edad de 55 tienen por lo menos unos cuantos NFT y placas. Los subtipos de SP inmunohistológicamente definidos tienen distintos patrones de distribución con placas Aß-inmunoreactivas presentes en áreas neocorticales mucho mayores que las áreas límbicas y placas inmunoreactivas Alz-50 que son no frecuentes y se limitan a aquellas áreas que contienen neuronas positivas a Alz-50 y NFT. Estos patrones sugieren una concepción en los procesos patológicos que llevan al NFT y SP en tanto envejecimiento y AD. Permanece el debate si las placas y ovillos son productos laterales del proceso neurodegenerativo encontrado en AD o si son la causa de muerte celular neuronal. Ross, Current Opinión in Neurobiol. 96:644-650 (1996); Terry, J. Of Neuropath. & Exp. Neurol. 55:1023-1025 (1996); Terry, J.

Neural Transmission-Suppl . 53:141-145 (1998). Es clara la evidencia que la pérdida de sinapsis hipocampal y neocortical se correlaciona bien con estados cognitivos pre-mórbidos . Algunos investigadores sugieren que la alteración de la estructura y función microtubular , provocada por la hiperfosforilación de la proteína asociada con microtúbulos, tau, juega el papel citológico clave en la pérdida de sinapsis en particular y AD en general. Terry, J. Of Neuropath. & Exp. Neurol. 55:1023-1025 (1996); Terry, J. Of Neural Transmisión-Suppl . 53:141-145 (1998). El daño oxidativo y la descomposición membranal han sido propuestos para jugar importantes papeles en la AD. Perry, Free Radical Biology & Medicine 28:831-834 (2000); Pettegrew et al., Annals of the New York Academy of Sciences 826:282-306 (1997). Los factores vasculares que incluyen hipoperfusión cerebral crónica, muy aguda han sido implicados también en la patogénesis de AD. De la Torre, Annals of the New York Academy of Sciences 903:424-436 (2000): Di Iori et al., Aging (Milano) 11:345-352 (1999). Mientras todos estos factores son probables para jugar el mismo papel en la patogénesis de AD, evidencia incrementada indica anormalidades en el procesamiento del péptido amiloide-beta (Aß) , un péptido de 4 kD que se agrega en una estructura de hoja ß-plegada, fibrilar. Glenner and Wong, Biochemical & Biophysical Research Communications 120:885-890 (1984). Se ha propuesto Aß para jugar un papel importante en la patogénesis de AD por varios razones: 1) los depósitos de Aß son los marcadores neuropatológicos más tempranos de AD en Síndrome de Down, y puede preceder a la formación NFT por varias décadas Mann et al., Neurodegeneration 1:201-215 (1992); Naslund, et al., JAMA 283:1571-1577 (2000). 2) la ß-amiloidosis es relativamente específica para AD y desórdenes relacionados cercanamente; Seikoe, Trends in Neurosciences 16:403-409 (1993); 3) Aß es tóxico para neuronas cultivadas, Yankner Neurobiol. Aging 13:615-616 (1992); Mattson et al., J. Neuroscience 12:376-389 (1992); Shearman et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 91:1470-1474 (1994), una toxicidad que parece ser dependiente a la estructura secundaria de ß-hoja y agregación en por lo menos oligómeros. Lambert et al., Proc. Nati. Acad. Sci. Usa 95: 6448-6453 (1989);Pike et al., J. Neuroscience 13:1676-1687 (1993), Simmons et al., Molecular Pharmacology 45:373-379 (1994). Aunque Aß existe seguramente en un equilibrio distribuido entre las fracciones de placas /fibrilares, monoméricas, oligoméricas, la forma oligomérica de Aß ha sido fuertemente implicada como el componente neurotóxico clave. Seikoe, Alzheimer disease, editado por R.D. Terry, et al., pág. 293-310 Lippincott Williams and Wilkins, Filadelfia (1999); Seikoe, Science 298, 789:91 (2002). El reconocimiento de los efectos tóxicos de Aß oligomérico ha formado una base para compromiso para algunos oponentes de la "hipótesis de cascada amiloide" de AD. Terry, Ann. Neurol. 49:684 (2001). Quizás la evidencia más fuerte para un papel de Aß en la patogénesis de AD viene del descubrimiento de mutaciones en el gen de la proteína precursora de amiloide (APP por sus siglas en inglés) lo cual lleva a algunas formas de AD familiar de inicio temprano. Goate et al., Nature 349:704-706 (1991). Además, todas las formas familiares de AD dominante autosomal tiene en común un nivel elevado de la forma de aminoácido 42 de más rápida agregación de Aß . Younkin Rinsho Shinkeigaku-Clinical Neurology 37:1099 (1997). En contraste, no se ha mostrado ninguna mutación en la proteína tau para que provoque AD. En su lugar mutaciones en tau (cromosoma 17) son enlazados a demencia frontotemporal con Parkinsonismo. Goedert et al., Neuron 21:955-958 (1998). La evidencia reciente ha mostrado una buena correlación entre los niveles de Aß en el cerebro y declinación cognitiva en AD y la deposición de amiloide parecer ser un evento muy temprano, quizás el primero en la patogénesis de AD, precediendo cualquier daño cognitivo. Naslund, et al., JAMA 283:1571-1577 (2000). La presencia de los depósitos amiloides puede modular un número de trayectorias bioquímicas que resultan en la deposición de todavía otras proteínas, la activación de la astroglía y microglía, y eventualmente la muerte celular neuronal, y disfunción cognitiva consecuente.

II. Amiloidosis localizada y sistémica La amiloidosis es una afección lentamente progresiva, la cual puede llevar a morbidez significativa y muerte. Un grupo diverso de procesos de enfermedad caen bajo la rúbrica "amiloidosis", la cual se caracteriza por depósitos de tejido extracelulares, en uno o más organismos, de varias proteínas fibrilares insolubles, genéricamente llamadas "amiloide" en cantidades suficientes para dañar la función normal. Los depósitos amiloides son extracelulares y no metabolizados o clarificados por el cuerpo. El amiloide puede ser distinguido gruesamente por una reacción de tinción similar a almidón con yodo; por lo tanto el nombre amiloide. Microscópicamente, se diferencia el amiloide por su distribución extracelular, por sus propiedades de tinción y ópticas cuando se tiñen con rojo Congo, y por su estructura fibrilar de proteína. De esta forma, bajo microscopía de luz, el amiloide es homogéneo, una substancia altamente refringente con una afinidad para el tinte rojo Congo, ambos en tejidos fijos y en vivo. Bajo microscopía de electrones, el amiloide consiste de fibrillas de 100 A° (10 nm) , no ramificadas lineales; bajo difracción de rayos X, tiene un patrón de cruzamiento beta. Las enfermedades asociadas con la amiloidosis son todas tipificadas por una acumulación de depósitos amiloides.

Los depósitos amiloides son caracterizados por la presencia de una o más proteínas amiloidogénicas, las cuales se derivan de proteínas precursoras que tienen ya sea una estructura anormal o son incrementadas anormalmente en el suero. La causa de la producción amiloide y su deposición en tejidos es desconocida. En los tipos bioquímicos diferentes de amiloidosis, pueden variar los mecanismos etiológicos. En la amiloidosis secundaria, por ejemplo, un defecto en el metabolismo de la proteína precursora (el reactivo de fase aguda: amiloide A sérico) puede existir, mientras que en amiloidosis hereditaria parece estar presente una proteína genéticamente variada. En la amiloidosis primaria, una población monoclonal de células de médula produce fragmentos de o cadenas ligeras enteras que pueden ser procesadas anormalmente para formar el amiloide. Tres tipos principales de amiloide y varias formas menores comunes han sido definidas bioquímicamente. El primer tipo, el cual tiene una secuencia N-terminal es decir homologa a una porción de la región variable de una cadena ligera de inmunoglobulina, es llamada AL y ocurre en amiloidosis primaria y en amiloidosis asociada con mieloma múltiple. El segundo tipo tiene una secuencia N terminal única de una proteína no inmunoglobulina llamada proteína AA y ocurre en pacientes con amiloidosis secundaria. El tercer tipo, el cual se asocia con polineuropatía amiloide familiar, es usualmente una molécula de transtiretina (prealbúmina) que tiene una sola substitución de aminoácido. Otro amiloides hereditarios han sido encontrados para consistir de gelsolina mutante en algunas familias, apolipoproteína mutante A-l en varias otras familias, y otras proteínas mutantes en amiloide de la arteria cerebral hereditaria. En el amiloide asociado con hemodiálisis crónica, la 2-microglobulina ha constituido la proteína amiloide. El amiloide asociado con la edad en piel y con órganos endocrinos pueden representar otras formas bioquímicas de amiloidosis. El amiloide encontrado en las lesiones histopatológicas de la enfermedad de Alzheimer consiste de las proteínas. El análisis químico con relación a las varias formas de amiloidosis han llevado a la clasificación más refinada. Una proteína única, una pentraxina llamada AP (o AP sérica), está asociada universalmente con todas las formas de amiloide y forma la base de una prueba de diagnóstico. Tres formas clínicas sistémicas principales son reconocidas actualmente. La amiloidosis es clasificada como primaria o idiopática (forma AL) cuando no hay una enfermedad asociada, y secundaria, adquirida o reactiva (forma AA) cuando se asocia con enfermedades crónicas, ya sea infecciosa (tuberculosis, bronquiectasis, osteomielitis, lepra) o inflamatoria (artritis reumatoide, ileitis granulomatosa) . El amiloide es también asociado con mieloma múltiple (AL) , enfermedad de Hodgkin (AA) , otros tumores, y fiebre del Mediterráneo familiar (AA) . La amiloidosis puede acompañar al envejecimiento. El tercer tipo principal aparece en formas familiares no asociadas con otra enfermedad, con frecuencia con tipos distintivos de neuropatía, nefropatía, y cardiopatía . En la amiloidosis primaria (AL) , pueden estar implicados el corazón, pulmón, piel, lengua, glándula tiroides y tracto intestinal. Los "tumores" amiloides localizados pueden ser encontrados en el tracto respiratorio u otros sitios. Los órganos parenquimales (hígado, vaso, riñon) y el sistema vascular, especialmente el corazón, están implicados frecuentemente. La amiloidosis secundaria (AA) , muestra una predilección para el vaso, hígado, riñon, nodulos adrenales y linfáticos. Ningún sistema de órganos es prescindido, sin embargo, y la implicación vascular puede ser implicada, aunque la implicación clínicamente significativa del corazón es rara. El hígado y vaso con frecuencia son agrandados, firmes y con propiedades como el caucho. Los ríñones son usualmente agrandados. Las secciones del vaso tienen grandes áreas, translúcidas, cerosas donde los cuerpos malpigianos normales son reemplazados por amiloide pálido, produciendo el vaso sago. La amiloidosis hereditaria es caracterizada por neuropatía sensorial y motora periférica, con frecuencia neuropatía autonómica, y amiloide cardiovascular y renal. El síndrome de túnel carpiano y anormalidades vitreas pueden ocurrir. El amiloide asociado con ciertas malignidades (por ejemplo, mieloma múltiple) tiene la misma distribución como amiloide idiopático (AL) ; con otras malignidades (por ejemplo, carcinoma medular de la glándula tiroides) puede ocurrir solamente localmente en asociación con el tumor o en metástasis. El amiloide es encontrado frecuentemente en el páncreas de individuos con diabetes mellitus iniciada en la adultez . Mientras que puede sospecharse de amiloidosis en base a síntomas y signos clínicos específicos, puede ser diagnosticada definitivamente solamente por biopsia. Actualmente, la aspiración de un cojincillo de grasa abdominal subcutánea y la biopsia de mucosa rectal son las mejores pruebas de tamizado. Otros sitios útiles para la biopsia son la encía, piel, nervios, riñon e hígado. Las secciones de tejido deben ser teñidas con tinte de rojo Congo y se observan con un microscopio polarizado para la birrefringencia verde característica de amiloide. La AP sérica etiquetada isotópicamente ha sido usada en pruebas escintigráficas para confirmar la diagnosis de amiloidosis. Mejores metodologías de diagnóstico necesitan ser desarrolladas con el fin de proporcionar un diagnóstico temprano por lo mismo permitiendo un tratamiento efectivo. Hay alguna especulación de una conexión entre la inhibición de depósitos de amiloide y terapia de diabetes, ver, por ejemplo, la solicitud WO 02/16333. La formación de imágenes del páncreas para diagnosticar diabetes es una metodología adecuada para medir definitivamente los niveles de amiloide en el páncreas, una correlación la cual parece ser indicativa de un diagnosis de diabetes. III. Marcadores surrogados Se cree que la AD aflige algunos 4 millones de americanos y quizás 20-30 millones de personas en el mundo. La AD es reconocida como un problema de salud pública principal en naciones desarrolladas. Varios objetivos terapéuticos han surgido a partir de la elucidación en curso de la base molecular de la AD. Por ejemplo, cuatro inhibidores de colinesterasa han sido aprobados para el tratamiento simptomático de pacientes con AD-tacrina (Cognex, Warner-Lambert, Morris Plains, New Jersey) donepezil (Aricept, Eisai, Inc., Teaneck, New Jersey and Pfizer, Inc., New York, New York); rivagstigmina (Exelon, Novartis, Basel, Suiza); y galantamina (Reminyll, Janssen, Titusville, New Jersey) . Las terapias de AD nuevas potenciales que están siendo desarrollados actualmente implican inmunoterapia, inhibidores de secretasa o fármacos anti-inflamatorios. A la fecha, sin embargo, no se ha probado ningún fármaco disponible para modificar el curso de la declinación cognitiva . Un problema principal para desarrollar las terapias anti-amiloides se ejemplifica por la siguiente nota de (Hock et al., 2003, Neuron, 38:547-554), dirigida al uso de inmunoterapia como una terapia anti-amiloide "no sabemos si la carga de Aß-amiloide cerebral es reducida en nuestros pacientes en estudio; serán requeridas las técnicas de formación de imágenes in vivo para contestar esta pregunta". La capacidad para cuantificar la carga de amiloide antes del tratamiento y después seguir los efectos del tratamiento es crítico para el desarrollo eficiente de esta clase de fármacos . IV. Diagnosticar las formas prodromales de amiloidosis Una afección relacionada cercanamente a la enfermedad de Alzheimer (AD) es caracterizada por ya sea el daño de memoria aislada o daño en varios dominios cognitivos, pero no de suficiente severidad para cumplir los criterios de diagnóstico para la enfermedad de Alzheimer. Esta afección ha sido nombrada daño cognitivo leve (MCI por sus siglas en inglés) y puede representar una fase prodromal de daño cognitivo leve de AD. El daño cognitivo leve es definido como un estado intermediario o transicional a partir de un estado cognitivo normal para demencia. Los sujetos con un daño cognitivo leve tienen un daño a la memoria más allá del esperado para la edad y educación aún sin tener demencia. Hay alguna indicación que los pacientes diagnosticados con daño cognitivo leve progresaran a la AD. Hay algunas indicaciones que el daño cognitivo leve puede representar una afección heterogénea compleja y que algunos pacientes con daño cognitivo leve no desarrollaran la AD u otros desórdenes de demencia. Ha habido bastante de interés con respecto al límite de demencia para la AD. La mayor parte de interés trata con un estado límite o transicional entre el envejecimiento normal y la demencia, o más específicamente, la enfermedad de Alzheimer (AD) . Resúmenes de varios estudios han indicado que estos individuos están en un riesgo incrementado para desarrollar la AD que está en el intervalo de 1% a 25% al año. La variabilidad en estas proporciones refleja probablemente diferentes criterios de diagnóstico, instrumentos de medición, y tamaños pequeños de muestra. Ver Dawe et al., IntX J. Geriatr. Psychiatry 7:473 (1992). Los pacientes diagnosticados con MCI están llegando a ser el interés para pruebas de tratamiento. El estudio Cooperativo de enfermedad del Alzheimer, el cual es National Institute on Aging consortium of Alzheimer's Disease research groups, está embarcado en una prueba multicentro de agentes propuestos para alterar la progresión de pacientes con MCI para AD. Ver Grundman et al., Neurology, 1996, A403. Las cuestiones pueden originarse con respecto a los criterios de diagnóstico para MCI. Algunos investigadores creen que virtualmente todos estos pacientes con enfermedad leve tienen AD neuropatológicamente, y, por lo tanto, que esto no puede ser una distinción útil. Ver Morris, et al., Neurology, 41: 469 (1991). Otros notan que, mientras que muchos de estos pacientes progresan a la AD, no todos lo hacen y, consecuentemente, que la distinción es importante. Ver, Grundamn, ibid; Petersen et al., JAMA 273: 1274 (1995); Petersen et al., Ann N.Y. Acad. Sci. 802: 58 (1996). V. Substratos Para Proteínas Amiloidogénicas Los substratos potenciales para proteínas amiloidogénicos han sido postulados y se clasifican a partir de substancias de tinte, tales como rojo Congo y derivados de Chrysamine G (ver, por ejemplo, la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica No. 6,168,776) para secuenciar los péptidos específicos que han sido etiquetados para el propósito de formar imágenes de A-beta insoluble. Estos péptidos incluyen el péptido A-beta etiquetado por sí mismo, péptido de putrescina-gadolinio-A-beta, A-beta radioetiquetado, [11:LIn]A-beta, [125I]A-beta, A-beta etiquetado con radiación gamma que emite radioisótopos, derivados de A-beta-DTPA, putrescina radioetiquetada, ligandos a base de KVLFF y derivados de los mismos (ver, por ejemplo, la Publicación Internacional NO. WO 93/04194 y la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica NO. 6,331,440). La tioflavina T es un tinte básico descrito primero como un tinte amiloide selectivo en 1959 por Vassar and Culling (Arch. Pathol. 68:487 (1959)). Schwartz et al. (Zbl. Path. 106:320 (1964)) demostró primero el uso de Tioflavina S, un tinte ácido, como un tinte amiloide en 1964. Las propiedades de tanto Tioflavina T y tioflavina S han sido ya estudiadas en detalle. Keleny J. Histochem. Cytochem. 15:172 (1967); Burns et al., J. Path. Bact . 94:337 (1967); Guntern et al. Experientia 48:8 (1992); LeVine Meth. Enzymol. 309:274 (1999) . La tioflavina s es usada comúnmente en el estudio post-mortem de deposición de amiloide en el cerebro con AD donde ha sido mostrada para ser una de las técnicas más sensibles para demostrar las placas seniles. Vallet et al. Acta Neuropathol. 83: 170 (1992) . La tioflavina T ha sido usada frecuentemente como un reactivo para estudiar la agregación de proteínas amiloides solubles en las fibrillas beta-hoja. LeVine Prot . Sci. 2:404 (1993). Los derivados de amina cuaternarios relacionados a la tioflavina T han sido propuestos como agentes de formación de imágenes de amiloides, aunque no se ha presentado evidencia de captación de estos agentes en el cerebro. Caprathe et al. Patente de los Estados Unidos de Norteamérica 6,001,331. Existe una necesidad por lo tanto para benzotiazoles etiquetados isotópicamente que son capaces de cruzar la barrera cerebro sangre y que se enlazan a los depósitos amiloides insolubles para formación de imágenes en el diagnóstico de la enfermedad de Alzheimer. SUMARIO DE LA INVENCIÓN La presente invención satisface esta necesidad y otras por proporcionar, en una modalidad, un compuesto de enlace al amiloide de la Fórmula (I) o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo: En la fórmula (I), Y es H, N02, -NR'3+, F, Cl, Br, I o -(CR' )n-X, en donde X es F, Cl, Br o I. La variable n es un entero que se selecciona de 1-5. R' es H o un grupo alquilo inferior. R3-R10 son seleccionados independientemente a partir del grupo el cual consiste de H, F, Cl, Br, I, alquilo de C?~ C5, (CH2)?-3-OR??, CF3, -(CH2)?_3-X, -O- (CH2) 1-3-X, CN, -CO-Ru, -N(Rn)2, -N(R')3\ -N02, -C0-NR(Ru)2, -0-(CO)-Ru, ORn, SR„, COORn, Rph, -CR??=CR??-Rph y -C (Rn) 2-C (Ru) 2- Ph . Como se menciona anteriormente, X es F, Cl, Br o I. RPh es fenilo opcionalmente substituido con uno o más substituyentes seleccionados del grupo el cual consiste de F, Cl, Br, I, alquilo de C1-C5, (CH2) 1-3-ORu, CF3, -(CH2)?_3-X, -0- (CH2) 1-3-X, CN, -CO-R11, -N(R )2, -CO-N(R )2, -0-(CO)-Ru, 0Rn, SRu y COORn, en donde cada Rn es independientemente H o alquilo de C1-C5. Adicionalmente, el substituyente Y o R3-R10 comprende por lo menos una etiqueta detectable seleccionada del grupo el cual consiste de 131I, 123I, 124I, 125I, 6Br, 75Br, 18F, 19F, 1XC, 13C, 14C y 3H. En otra modalidad, se proporciona una composición farmacéutica la cual comprende una cantidad efectiva de un compuesto de enlace amiloide de acuerdo a la fórmula (I) como se describe anteriormente y un portador aceptable farmacéuticamente . Aún otra modalidad es un método para detectar el depósito amiloide in vivo. El método comprende (i) administrar a un mamífero una cantidad efectiva de un compuesto de enlace amiloide de acuerdo a la fórmula (I), en donde el compuesto puede enlazar cualquier depósito amiloide en el mamífero; y (ii) detectar el enlace del compuesto al depósito amiloide en el mamífero. Otra modalidad opcionalmente en combinación con cualquier otra modalidad descrita en la presente es el uso de un compuesto de la fórmula (I) para la detección de depósitos amiloides in vivo. En otra modalidad, la invención proporciona el uso de un compuesto de la fórmula (I) en la fabricación de un medicamento para la detección de depósito amiloide in vivo. Todavía otra modalidad es un método para detectar el depósito amiloide in vitro. El método comprende (i) poner en contacto un tejido corporal con una cantidad efectiva de compuesto de enlace amiloide de acuerdo a la fórmula (I), en donde el compuesto puede enlazar cualquier depósito amiloide en el tejido; y (ii) detectar el enlace del compuesto en el depósito amiloide en el tejido. Otra modalidad opcionalmente en combinación con cualquier otra modalidad descrita en la presente es el uso de un compuesto de la fórmula (I) para la detección de depósito amiloide in vitro. En otra modalidad, la invención proporciona el uso de un compuesto de la fórmula (I) en la fabricación de un medicamento para la detección de depósito amiloide in vitro. Una modalidad adicional es un método para distinguir un cerebro enfermo de Alzheimer a partir de cerebro normal. El método comprende (i) obtener tejidos a partir de (i) el cerebelo y (ii) otra área del mismo cerebro, de un mamífero normal y de un mamífero que se sospecha tiene la enfermedad de Alzheimer; (ii) poner en contacto los tejidos con un compuesto de enlace amiloide de la fórmula I; (üi) cuantificar el enlace amiloide al compuesto; (iv) calcular la proporción de (a) la cantidad de amiloide en el área del cerebro diferente al cerebelo con la (b) cantidad de amiloide en el cerebelo; y (v) comparar la proporción para un mamífero normal con la proporción para un mamífero que se sospecha tiene la enfermedad de Alzheimer. Otra modalidad opcionalmente en combinación con cualquier otra modalidad descrita en la presente es el uso de un compuesto de la fórmula (I) para distinguir un cerebro con enfermedad de Alzheimer a partir de un cerebro normal. En otra modalidad, la invención proporciona el uso de un compuesto de la fórmula (I) en la fabricación de un medicamento para distinguir un cerebro con enfermedad de Alzheimer a partir de un cerebro normal. Aún otra modalidad es un método para detectar depósitos amiloides en biopsia o tejidos humano o animal post-mortem. El método comprende las etapas de (a) incubar el tejido fijo con formalina o congelado en fresco con una solución de un compuesto de enlace de amiloide de la Fórmula (I) o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo para formar un depósito etiquetado y (b) detectar el depósito etiquetado . Otra modalidad opcionalmente en combinación con cualquier otra modalidad descrita en la presente es el uso de un compuesto de la fórmula (I) para detectar los depósitos amiloides en biopsia o tejido humano o animal post-mortem. En otra modalidad, la invención proporciona el uso de un compuesto de la fórmula (I) en la fabricación de un medicamento para detectar depósitos amiloides en biopsia o tejidos humano o animal post-mortem. En todavía otra modalidad, se proporciona un método para cuantificar la cantidad de amiloide en biopsia o tejido post-mortem. El método comprende las etapas de: a) incubar un derivado radioetiquetado de un compuesto de enlace amiloide de la fórmula (I) o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo con un homogenado de biopsia o tejido post-mortem, en donde por lo menos uno de los substituyentes en el compuesto es etiquetado con una radioetiqueta seleccionada del grupo el cual consiste de 125I, 3H, y un substituyente el cual contiene carbono, en donde por lo menos un carbono es 1 C; b) separar el derivado radioetiquetado no enlazado a tejido a partir del enlazado a tejido de un compuesto de la fórmula (I); c) cuantificar el derivado radioetiquetado enlazado a tejido de un compuesto de la fórmula (I); y d) convertir las unidades de derivado radioetiquetado enlazado a tejido de un compuesto de la fórmula (I) a unidades de microgramos de amiloide por 100 mg de tejido en comparación con un estándar.

Otra modalidad opcionalmente en combinación con cualquier otra modalidad descrita en la presente es el uso de un compuesto de la fórmula (I) para cuantificar la cantidad de amiloide en biopsia o tejido post-mortem. En otra modalidad, la invención proporciona el uso de un compuesto de la fórmula (I) en la fabricación de un medicamento para cuantificar la cantidad de amiloide en biopsia o tejido post-mortem. En otra modalidad, se proporciona un método para enlazar selectivamente un compuesto de enlace amiloide de la Fórmula (I) o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo a placas amiloides pero no ovillos neurofibrilares en tejido cerebral el cual contiene ambos. El método comprende poner en contacto las placas amiloides en enlace in vitro o ensayos de tinción con un compuesto de la Fórmula (I) en una concentración abajo de aproximadamente 10 nM. Otra modalidad opcionalmente en combinación con cualquier otra modalidad descrita en la presente es el uso de un compuesto de la fórmula (I) para enlazar selectivamente el compuesto a las placas amiloides pero no a ovillos neurofibrilares en tejido cerebral el cual contiene ambos. En otra modalidad, la invención proporciona el uso de un compuesto de la fórmula (I) en la fabricación de un medicamento para enlazar selectivamente el compuesto a placas amiloides pero no a ovillos neurofibrilares en tejido cerebral el cual contiene ambos. En aún otra modalidad, se proporciona un método para enlazar selectivamente in vivo un compuesto de enlace amiloide de la Fórmula (I) o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo a placas amiloides pero no a ovillos neurofibrilares en tejido cerebral el cual contiene ambos. El método comprende administrar una cantidad efectiva de un compuesto de la Fórmula (I) o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo de tal forma que la concentración sanguínea del compuesto administrado permanece abajo de aproximadamente 10 nM in vivo. Otra modalidad opcionalmente en combinación con cualquier otra modalidad descrita en la presente es el uso de un compuesto de la fórmula (I) para enlazar selectivamente in vivo el compuesto a placas amiloides pero no a ovillos neurofibrilares en tejido cerebral el cual contiene ambos. En otra modalidad, la invención proporciona el uso de un compuesto de la fórmula (I) en la fabricación de un medicamento para enlazar selectivamente in vivo el compuesto a placas amiloides pero no a ovillos neurofibrilares en tejido cerebral el cual contiene ambos. Todavía otra modalidad es un método in vivo o in vitro para detectar en un sujeto por lo menos un depósito amiloide el cual comprende por lo menos una proteína amiloidogénica . El método comprende las etapas de: (a) administar a un sujeto el cual sufre de una enfermedad asociada con amiloidosis, una cantidad detectable de una composición farmacéutica la cual comprende por lo menos un compuesto de enlace amiloide de la fórmula I o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo y un portador aceptable farmacéuticamente , y (b) detectar el enlace del compuesto a un depósito amiloide el cual comprende por lo menos una proteína amiloidogénica. Otra modalidad opcionalmente en combinación con cualquier otra modalidad descrita en la presente es el uso de un compuesto de la fórmula (I) para detectar en un sujeto por lo menos un depósito amiloide el cual comprende por lo menos una proteína amiloidogénica. En otra modalidad, la invención proporciona el uso de un compuesto de la fórmula (I) en la fabricación de un medicamento para detectar en un sujeto por lo menos un depósito amiloide el cual comprende por lo menos una proteína amiloidogénica. En todavía otra modalidad, se proporciona un método para identificar un paciente como prodromal para una enfermedad asociada con una deposición amiloide el cual comprende : (a) administrar al paciente, quien está presentando signos de demencia clínica o signos clínicos de un daño cognitívo leve, un compuesto de enlace amiloide de la fórmula (I) o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo, después (b) formar imágenes del paciente para obtener datos; y (c) analizar los datos para determinar los niveles amiloides en el paciente con referencia a un nivel normativo, por lo mismo identificando al paciente como prodromal para una enfermedad asociada con la deposición amiloides. Otra modalidad opcionalmente en combinación con cualquier otra modalidad descrita en la presente es el uso de un compuesto de la fórmula (I) para identificar un paciente como prodromal para una enfermedad asociada con deposición amiloide. En otra modalidad, la invención proporciona el uso de un compuesto de la fórmula (I) en la fabricación de un medicamento para identificar un paciente como prodromal para una enfermedad asociada con deposición amiloide. En otra modalidad, se proporciona un método para determinar la eficacia de la terapia en el tratamiento de amiloidosis. El método comprende: (a) administrar a un paciente en necesidad del mismo una cantidad efectiva de un compuesto de enlace amiloide de la fórmula (I) o una sal aceptable farmacéuticamente del mismos; (b) formar imágenes del paciente; después (c) administrar al paciente en necesidad del mismo por lo menos un agente anti-amiloide; (d) administrar subsecuentemente al paciente en necesidad del mismo una cantidad efectiva de un compuesto de la fórmula ( I ) : (e) formar imágenes del paciente; y (f) comparar los niveles de deposición amiloide en el paciente antes al tratamiento con por lo menos un agente anti-amiloide a niveles de deposición amiloide en el paciente después del tratamiento con el por lo menos agente anti-amiloide. Otra modalidad opcionalmente en combinación con cualquier otra modalidad descrita en la presente es el uso de un compuesto de la fórmula (I) para determinar la eficacia de terapia en el tratamiento de amiloidosis. En otra modalidad, la invención proporciona el uso de un compuesto de la fórmula (I) en la fabricación de un medicamento para determinar la eficacia de la terapia en el tratamiento de la amiloidosis. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención explota la capacidad de los derivados de benzotiazol etiquetados isotópicamente para cruzar la barrera de sangre cerebro in vivo y para enlazar a las proteínas amiloidogénicas . Un ejemplo de tal enlace es la capacidad de los compuestos de benzotiazol para enlazar a Aß depositado en placas neuríticas (pero no difusas), a Aß depositado en amiloide cerebrovascular, y a amiloide el cual consiste de la proteína depositada en NFT. Caracterización de enlace específico a péptido sintético Aß : Afinidad, cinéticas, enlace máximo Las características del enlace de derivado de benzotiazol son analizadas, usando Aß(l-40) y 2-(4'- [3H]metilamino-fenil) -benzotiazol ([3H]BTA-1 ) en solución salina amortiguada con fosfato (pH 7.4), como se describe previamente. Klunk et al., Life Sci. 69:1471 (2001); Mathis et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 12:295 (2002). La secuencia de aminoácido para Aß (1-40) es como sigue: Definiciones : "Alquilo" se refiere a un radical de hidrocarburo de cadena lineal o ramificada saturada. Los ejemplos incluyen sin limitación metilo, etilo, propilo, iso-propilo, butilo, iso-butilo, tert-butilo, n-pentilo, y n-hexilo. "Alquenilo" se refiere a un radical de hidrocarburo de cadena lineal o ramificado no saturado el cual comprende por lo menos un doble enlace carbono carbono. Los ejemplos incluyen sin limitación etenilo, propenilo, iso-propenilo, butenilo, iso-butenilo, tert-butenilo, n-pentenilo y n-hexenilo . "Alquinilo" se refiere a un radical de hidrocarburo de cadena lineal o ramificada insaturado el cual comprende por lo menos un triple enlace carbono carbono. Los ejemplos incluyen sin limitaciones etinilo, propinilo, iso-propinilo, butinilo, iso-butinilo, tert-butinilo, pentinilo y hexinilo. "Alcoxi" se refiere a un grupo alquilo enlazado a través de un enlace de oxígeno. "Inferior" usado en combinación con alquilo, alquenilo, alquinilo o alcoxi se refiere a porciones de Ci-Cß. "Halo" se refiere a radical de flúor, cloro, bromo, o yodo . "Halo radioactivo" se refiere a un halo radioactivo, es decir, radiofluoro, radiocloro, radiobromo o radioyodo.

"Cantidad efectiva" se refiere a la cantidad requerida para producir un efecto deseado. Ejemplos de una "Cantidad efectiva" incluyen cantidades que permiten la detección y formación de imágenes de depósitos amiloides in vivo o in vitro, que producen niveles de toxicidad y biodisponibilidad aceptables para uso farmacéutico, y/o prevenir la degeneración celular y toxicidad asociada con la formación fibrilar. "Portador aceptable farmacéuticamente" se refiere a un material aceptable farmacéuticamente, composición o vehículo, tales como un líquido o un agente de relleno sólido, diluyente, excipiente o material encapsulante de solvente, implicado en transportar o llevar el compuesto objeto a partir de un órgano, o porción del cuerpo, a otro órgano u porción del cuerpo. Cada portador es "aceptable" en el sentido de ser compatible con los otros ingredientes de la formulación y adecuado para uso con el paciente. Ejemplos de materiales que pueden servir como un portador aceptable farmacéuticamente incluyen sin limitación: (1) azúcares, tales como lactosa, glucosa y sacarosa; (2) almidones, tales como almidón de maíz y almidón de papa; (3) celulosa y sus derivados, tales como carboximetilcelulosa sódica, etilcelulosa y acetato de celulosa; (4) tragacanto en polvo; (5) malta; (6) gelatina; (7) talco; (8) excipientes, tales como mantequilla de cacao y ceras supositorias; (9) aceites, tales como aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón, aceite de cártamo, aceite de ajonjolí, aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de fríjol de soya; (10) glicoles, tales como propilenglicol; (11) polioles, tales como glicerina, sorbitol, manitol y polietilenglicol; (12) esteres, tales como oleato de etilo y laurato de etilo: (13) agar; (14) agentes de amortiguado, tales como hidróxido de magnesio e hidróxido de aluminio; (15) ácido algínico; (16) agua libre de pirógenos; (17) solución salina isotónica; (18) solución de Ringer; (19) alcohol etílico; (20) soluciones amortiguadas en pH; (21) poliésteres, policarbonatos y/o polianhídridos; y (22) otras substancias compatibles no tóxicas empleadas en formulaciones farmacéuticas como se identifica, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, 15a edición (Mack Publishing, Co., 1975), en las páginas 1405-1412 y 1461-1487, y The National Formulary XIV, 14a edición (American Pharmaceutical Association, 1975). "Sal aceptable farmacéuticamente" se refiere a una sal de ácido o base del compuesto inventivo, la sal que posee la actividad farmacológica deseada y ni es biológicamente ni indeseable de otra forma. La sal puede ser formada con ácidos que incluyen sin limitación acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, bencensulfonato, butirato de bisulfato, citrato, camforato, sulfonato de alcanfor, ciclopentanopropionato, digluconato, dodeciisulfato, etansulfonato, fumarato, glucoheptanoato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, bromhidrato, clorhidratdo, yodhidrato, 2-hidroxietano-sulfaonto, lactato, maleato, metansulfonato, 2-naftalensulfonato, nicotinato, oxalato, tiocianato, tosilato y undecanoato. Ejemplos de una sal base incluye sin limitación, sales de amonio, sales de metal alcalino tales como sales de sodio y potasio, sales de metal alcalino terreo tales como sales de calcio y magnesio, sales con bases orgánicos tales como sales de diciclohexilamina, N-metil-D-glucamina, y sales con aminoácidos tales como arginina y lisina. En algunas modalidades, los grupos que contienen nitrógeno básico pueden ser cuaternizados con agentes los cuales incluyen haluros de alquilo inferiores tales como cloruros, bromuros y yoduros de metilo, etilo, propilo y butilo; sulfatos de dialquilo tales como sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo y diamilo: haluros de cadena larga tales como cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo, miristilo y estearilo; y haluros de aralquilo tales como bromuros de fenetilo. "Profármaco" se refiere a un derivado del compuesto inventivo que sufre biotransformación, tales como metabolismo, antes de exhibir sus efectos farmacológicos. El profármaco es formulado con el objetivo de estabilidad química mejorada, aceptación y conformidad mejorada por el paciente; biodisponibilidad mejorada, duración prolongada de acción, selectividad mejorada a órganos, formulación mejorada (por ejemplo, hidrosolubilidad incrementada), y/o efectos laterales disminuidos (por ejemplo, toxicidad). El profármaco puede ser fácilmente preparado a partir del compuesto inventivo usando métodos convencionales, tales como aquellos descritos por Burger's Medicinal Chemistry and Drug Chemistry, 5a edición. Vol. 1 (1995), páginas 172-178 y 949-982. El término "parental" como se usa en la presente incluye inyección subcutánea, intravenosa, intraarterial, intramuscular, intraperitoneal, intratecal, intraventricular, intrasternal, intracranial e intraosea y técnicas de infusión . "Animal" se refiere a un organismo vivo el cual tiene sensaciones y el poder del movimiento voluntario, y el cual requiere para su existencia oxígeno y alimento orgánico. Los ejemplos incluyen, sin limitación, miembros de la especie humana, equina, porcina, bovina, murina, canina y felina. En el caso de un humano, un "animal" puede también ser referido como un "paciente". "Mamífero" se refiere a un animal vertebrado de sangre caliente. Un "sujeto" es un mamífero, tal como, por ejemplo, un humano. Un ejemplo específico es un humano que se sospecha tiene demencia.

"Tratamiento" se refiere a: (i) prevenir que ocurra una enfermedad, trastorno o afección en un animal que puede tener predisposición a la enfermedad, trastorno y/o afección pero que no se ha diagnostico aún como que lo tiene; (ii) inhibir la enfermedad, trastorno o afección, es decir, detener su desarrollo; y/o (iii) aliviar la enfermedad, trastorno o afección, es decir, provocar la regresión de la enfermedad, trastorno y/o afección. El término "terapia" incluye tratar y/o prevenir la enfermedad. El término "tratar" o "tratamiento" no significa necesariamente la cura total. Cualquier alivio de cualquier síntoma o efecto patológico indeseado de la enfermedad a cualquier grado o el retraso del progreso de la enfermedad puede ser considerado tratamiento. Adicionalmente, el tratamiento puede incluir acciones las cuales pueden empeorar la sensación total del paciente de estar mejorando o la apariencia. Por ejemplo, la administración de quimioterapia en pacientes con cáncer la cual puede dejar al paciente la sensación de "más enfermo" es todavía considerado como tratamiento . El término "prevenir" se refiere a disminuir la probabilidad de que un organismo contraiga o desarrolle una enfermedad asociada con la deposición amiloide. Por ejemplo, el término "evitar" se refiere a reducir el porcentaje de individuos quienes desarrollan la enfermedad con relación al grupo de control que no sufre administración de un agente anti-amiloide. Una "cantidad detectable" significa que la cantidad del compuesto detectable que es administrada es suficiente para permitir la detección de enlace del compuesto a amiloide . Una "cantidad efectiva de formación de imágenes" significa que la cantidad del compuesto detectable que es administrada es suficiente para permitir la formación de imágenes del enlace del compuesto a amiloide. El término "formación de imágenes in vivo" se refiere a cualquier método el cual permite la detección de un compuesto de benzotiazol etiquetado como se describe en la presente . El término "método in vivo o in vitro para detectar" se refiere a cualquier método el cual permite la detección de un derivado de benzotiazol etiquetado derivado de la fórmula (I) - El término "línea base" se refiere a la cantidad y distribución de una deposición amiloide del paciente antes al inicio de la terapia anti-amiloide. A menos que el contexto dicte claramente de otra forma, las definiciones de términos singulares pueden ser extrapoladas para aplicar a sus contrapartes plurales como pueda aparecer en la solicitud; similarmente, las definiciones de términos plurales pueden ser extrapoladas para aplicar a sus contrapartes singulares como aparecen en la aplicación. Agentes De Formación De Imágenes De Amiloides El agente de formación de imagen de amiloide de la presente invención es cualquier compuesto de la fórmula (I) o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo: en donde R', R3-R10 y son como se define anteriormente . Los compuestos de la fórmula (I), son también referidos en la presente como "compuestos de benzotiazol", "derivados de benzotiazol" o "agentes de formación de imágenes de amiloide", cada uno que tiene las siguientes características; (1) un enlace específico a Aß in vitro, (2) capacidad para cruzar una barrera de sangre cerebro no comprometida in vivo, (3) un enlace específico al depósito amiloide el cual comprende por lo menos una proteína amiloidogénica, en donde la proteína amiloidogénica se selecciona del grupo el cual consiste de AL, AH, ATTR, Aß2M, AA, Apoya, Apoya, Agel, Alys, Afib, ACys, ABri, ADan, APrP, ACal, A1APP, AANF, Apro, Ains, AMed, Aker, A(tbn), y Alac, (4) enlazar a Aß depositado en placas neuríticas (pero no difusas), a Aß depositado en amiloide cerebrovascular, y a amiloide el cual consiste de la proteína depositada en NFT y (5) son también no tóxicos en niveles de dosis apropiados y tienen una duración satisfactoria de efecto. En una modalidad, R3-R10 pueden ser independientemente seleccionados del grupo el cual consiste de H, F, Br, I, -N(Rn)2 y ORn. En combinación con esta o cualesquiera otra modalidades descritas en la presente, Rs y R9 pueden ser independientemente ORn. En otra modalidad opcionalmente en combinación con otras modalidades descritas en la presente, cada uno de R y Rio puede ser H. En aún otra modalidad, cada uno de R3, R4, R5 y R6 pueden ser H. En todavía otras modalidades de la invención, Y puede ser F, Cl, Br, Br, I o -N02. Un ejemplo específico de Y es F. En otra modalidad, el compuesto de enlace amiloide de la fórmula (I) proporciona para cada uno de R3, R5, y R6, R7, y Rio para ser H, y Rs y R9 son independientemente ORn. Compuestos ilustrativos de la fórmula (I) incluyen pero no se limitan a aquellos de la Tabla 1 posterior: Tabla 1 En otras modalidades, opcionalmente en combinación con cualquier otra modalidad descrita en la presente, la invención contempla los compuestos adicionales en la Tabla 2 posterior. Como con los compuestos prescritos por la fórmula (I), los siguientes compuestos son adecuados para los métodos, composiciones, y usos descritos en la presente: Tabla 2 l+jCH -^N -^ -\ I ^ ? X -OH Métodos de uso Los compuestos inventivos pueden ser usados para determinar la presencia, ubicación y/o cantidad de uno o más depósitos amiloides en un órgano o área corporal, incluyendo el cerebro, de un animal. Los depósitos amiloides incluyen, sin limitación , depósitos de Aß. Permitiendo que sea seguida la secuencia temporal de deposición amiloide, el compuesto inventivo puede además ser usado para correlacionar la deposición amiloide con el inicio de síntomas clínicos asociados con una enfermedad, trastorno o afección. Los compuestos inventivos pueden ser usados por último para diagnosticar una enfermedad, trastorno o afección caracterizados por deposición amiloide, tal como AD, AD familiar, síndrome de down, amiloidosis, diabetes mellitus del Tipo II, daño cognitivo leve, y homocigotos para el alelo de apolipoproteína E4. Los compuestos inventivos también pueden ser usados como marcadores surrogados para evaluar las terapias anti-amiloides.

Técnicas de Formación de Imágenes Un método de esta invención determina la presencia y ubicación de depósitos amiloides en un órgano o área corporal, tal como el cerebro de un paciente. El método comprende la administración de una cantidad detectable de una composición farmacéutica la cual contiene un compuesto de enlace amiloide de la presente invención llamado "compuesto detectable", o una sal del mismo soluble en agua aceptable farmacéuticamente, a un paciente. Una "cantidad detectable" significa que la cantidad del compuesto detectable que se administra es suficiente para permitir la detección de enlace al compuesto al amiloide. Una "cantidad efectiva de formación de imágenes" significa que la cantidad del compuesto detectable que se administra es suficiente para permitir la formación de imágenes de enlace del compuesto al amiloide. La invención emplea agentes de formación de imágenes de amiloide los cuales, junto con técnicas de neuroformación de imágenes no invasivas tales como espectroscopia de resonancia magnética (MRS por sus siglas en inglés) o formación de imágenes (MRI) o formación de imágenes por gamma tal como tomografía de emisión de positrones (PET por sus siglas en inglés) o tomografía computarizada de emisión de fotones sencillos (SPECT por sus siglas en inglés), son usados para cuantificar la deposición amiloide in vivo. El método implica formación de imágenes de un paciente para establecer una línea base de deposición amiloide. Para la formación de imágenes por rayos gamma, la radiación emitida a partir del órgano o área que es examinada es medida y expresada ya sea como enlace total o como una proporción en la cual se normaliza el enlace total en un tejido para (por ejemplo, dividida por) el enlace total en otro tejido del mismo sujeto durante el mismo procedimiento de formación de imágenes in vivo. El enlace total in vivo es definido como la señal total detectada en un tejido por una técnica de formación de imágenes in vivo sin la necesidad para corrección por una segunda inyección de una cantidad idéntica de compuesto etiquetado junto con un gran exceso de compuesto no etiquetado, pero de otra forma químicamente idéntico. El método puede además comprender por lo menos una sesión de formación de imágenes de un paciente después de la administración de una terapia anti-amiloide. El método puede también comprender formar imágenes de un paciente antes y después del tratamiento con por lo menos un agente anti-amiloide. La formación de imágenes puede ser realizada en cualquier momento durante el tratamiento. Para propósitos de formación de imágenes in vivo, el tipo de instrumento de detección disponible es un factor principal para seleccionar una etiqueta dada. Por ejemplo, los isótopos radioactivos y 19F pueden ser usados para formación de imágenes in vivo en los métodos de la presente invención. El tipo de instrumento usado guiará la selección del radionucleótido o isótopo estable. Por ejemplo, el radionucleótido elegido debe tener un tipo de descomposición detectable por un tipo dado de instrumento. Otra consideración se relaciona a la vida media del radionucleótido. La vida media debe ser suficientemente larga de tal forma que es todavía detectable en el momento de la captación máxima por el objetivo, pero suficientemente corta de tal forma que el huésped no retiene la radiación dañina. Los compuestos radioetiquetados de la invención pueden ser detectados usando formación de imágenes por radiación gamma en donde se detecta la radiación gamma de la longitud de onda apropiada. Los métodos de formación de imágenes por radiación gamma incluyen, pero no se limitan a, SPECT y PET. En una modalidad, tal como para la detección por SPECT, la radioetiqueta elegida carecerá de emisión de particulados, pero producirá un gran número de fotones en un intervalo de 140-200 keV. Para la detección por PET, la radioetiqueta será un radionucleótido de emisión de positrones tales como 19F el cual se destruirá para formar dos rayos gamma de 511 keV que pueden ser detectados por la cámara de PET. En la presente invención, se hacen los compuestos de enlace de amiloide/agentes de formación de imágenes los cuales son útiles para formación de imágenes in vivo y cuantificación de deposición amiloide. Estos compuestos no son usados junto con técnicas de neuroformación de imágenes no invasivas tales como espectroscopia de resonancia magnética (MRS) o formación de imágenes (MRI), tomografía de emisión de positrones (PET) y tomografía computarizada de emisión de fotones sencillos (SPECT). De acuerdo con esta invención, los compuestos de benzotiazol pueden ser etiquetados con 19F o 13C para MRS/MRI por técnicas de química orgánica conocidas en la técnica. Por ejemplo, ver ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY: REACTION, MECHANISMS AND STRUCTURE, 3a edición. (1985), los contenidos de la cual se incorporan en la presente para referencia. Los compuestos de benzotiazol pueden también ser radioetiquetados con 18F, uO 75Br o 76Br para PET por técnicas bien conocidas en la técnica y son descritos por Fowler, J and Wolf, A. en POSITRÓN EMISIÓN TOMOGRAPHY AND AUTORADIOGRAPHY 391-450 (Raven Press, 1986), los contenidos de la cual se incorporan en la presente para referencia. Los compuestos de benzotiazol también pueden ser radioetiquetados con 123I para SPECT por cualquiera de las varias técnicas conocidas en la técnica. Ver, por ejemplo, Kulkarni, Int. J. Rad. Appl. & Inst. (Parte B) 18:647 (1991), los contenidos de los cuales son incorporados en la presente para referencia. Además, los compuestos de benzotiazol pueden ser etiquetados con cualquier isótopo de yodo radioactivo adecuado, tal como, pero no se limitan a 131I, 125I o 123I, por yodinación de un derivado de amino diazotizado directamente por medio de un yoduro de diazonio, ver Greenbaum, F. Am. J. Pharm. 108: 17(1936) o por conversión de la amina diazotizada inestable al triazeno estable, o por conversión de un precursor halogenado no radioactivo a un derivado de estaño trialquilo estable el cual entonces puede ser convertido al compuesto de yodo por varios métodos bien conocidos en la técnica. Ver, Satyamurthy and Barrio, J. Org. Chem. 48:4394 (1983), Goodman et al., J. Org. Chem. 49:2322 (1984) y Mathis et al., J. Labell. Comp. And Radiopharm. 1994: 905; Chumpradit et al., J. Med. Chem. 34:877 (1991); Zhuang et al., J. Med. Chem. 37:1406 (1994); Chumpradit et al., J. Med. Chem. 37:4245 (1994) . Por ejemplo, un triazeno estable o derivado de trialquilo de benzotiazol es reaccionado con un agente halogenante el cual contiene 131I, 125I, 123I, 76Br, 75Br, 18F o 19F. De esta forma, los derivados de estaño tri-alquilo de benzotiazol son precursores novedosos para la síntesis de muchos de los compuestos radioetiquetados dentro de la presente invención. Como tal, estos derivados de estaño trialquilo son contemplados como una modalidad de esta invención . Los compuestos de benzotiazol también pueden ser radioetiquetados con radioetiquetas de metal conocidas, tales como, por ejemplo, Technetium-99m (99mTc) . La modificación de los substituyentes para introducir ligandos que enlazan tales iones metálicos puede ser efectuada sin experimentación prolongada por alguien con experiencia ordinaria en la técnica de radioetiquetado. El benzotiazol radioetiquetado con metal puede entonces ser usado para detectar depósitos amiloides. Preparar derivados radioetiquetados de Tc99m es bien conocido en la técnica. Ver, por ejemplo, Zhuang et al., "Neutral and stereospecific Tc-99m complexes: [99mTc]N-benzyl-3, -di- (N-2-mercaptoethyl) -amino-pyrrolidines (P-BAT)" Nuclear Medicine & Biology 26 (2 ): 217-2 , (1999); Oya et al., "Small and Neutral Tc(v)0 BAT, complejos de bisaminoetanotiol (N2S2) para desarrollar nuevos agentes de formación de imágenes cerebrales" Nuclear Medicine & Biology 25 (2 ): 135-40, (1998); and Hom et al., "Technetium-99m-labeled receptor-specific small-molecule radiopharmaceuticals ; recent developments and encouraging results" Nuclear Medicine & Biology 24 (6) :485-98, (1997). Los métodos de la presente invención pueden usar isótopos que son detectables por espectroscopia de resonancia magnética nuclear para propósitos de formación de imágenes in vivo y espectroscopia. Los elementos útiles en espectroscopia de resonancia magnética incluyen pero no se limitan a 19F y 13C. Tales radioisótopos para propósitos de esta invención pueden ser beta-emisores, gamma-emisores, positrón emisores y emisores de rayos X. Estos radioisótopos incluyen 131I, 123I, 18F, C, 75Br y 76Br. Los isótopos estables adecuados para uso en formación de imágenes por resonancia magnética (MRI) o espectroscopia (MRS), de acuerdo a esta invención, incluyen 19C y 13C. Los radioisótopos adecuados para cuantificación in vitro de amiloide en homogenados de biopsia o tejido post-mortem incluyen 1 5I, 14C y 3H . Radioetiquetas de ejemplo son l ?C o 18F para uso en formación de imágenes in vivo por PET. 123I para uso en formación de imágenes por SPECT. 19F para MRS/MRI y 3H o 14C para estudios in vitro. Sin embargo, cualquier método convencional para visualizar agentes de formación de imágenes puede ser utilizado de acuerdo con esta invención. De acuerdo a una modalidad de la invención la cual se relaciona a un método para detectar depósitos amiloides en biopsia o tejido post-mortem, el método incluye incubar el tejido fijo con formalina con una solución de un compuesto de enlace amiloide de benzotiazol de la presente invención. En una modalidad, la solución es 25-100% de etanol, (con el resto que es agua) saturada con un compuesto de enlace amiloide de benzotiazol de acuerdo a la presente invención. Ante incubación, el compuesto tiñe o etiqueta el deposito amiloide en el tejido, y el depósito teñido o etiquetado puede ser detectado o visualizado por cualquier método estándar. Tal medio de detección incluye técnicas microscópicas tales como microscopia de campo brillante, fluorescencia, láser confocal, y polarización cruzada. El método para cuantificar la cantidad de amiloide en biopsia o tejido post-mortem implica incubar un derivado etiquetado de benzotiazol de acuerdo a la presente invención, o una sal no tóxica, soluble en agua del mismo, con homogenado de biopsia o tejido post-mortem. El tejido es obtenido y homogenizado por métodos bien conocidos en la técnica. En una modalidad, la etiqueta es radioetiqueta, aunque otras etiquetas tales como enzimas, compuestos quimioluminiscentes e inmunofluorescentes son bien conocidos para los técnicos expertos. Radioetiquetas de ejemplo incluyen pero no se limitan a 125I, 14C y 3H los cuales están contenidos en un substituyente substituido en uno de los compuestos de las presentes fórmulas descritas en la presente. El tejido que contiene depósitos amiloides enlazará a los derivados etiquetados de los compuestos de enlace amiloide de benzotiazol de la presente invención. El tejido enlazado es entonces separado a partir del tejido no tejido no enlazado por cualquier mecanismo conocido para el técnico experto, tal como filtración. El tejido enlazado puede entonces ser cuantificado a través de cualquier medio conocido para el técnico experto. Las unidades de derivado de benzotiazol radioetiquetado enlazado a tejido pueden entonces ser convertidas a unidades de microgramos de amiloide por 100 mg de tejido por comparación con una curva estándar generada por incubar cantidades conocidas de amiloide con el derivado de benzotiazol radioetiquetado. El método para distinguir un cerebro con enfermedad de Alzheimer a partir de un cerebro normal comprende obtener tejido a partir de (a) el cerebelo y (b) otra área del mismo cerebro, diferente del cerebelo, a partir de sujetos normales y de sujetos que se sospecha tienen la enfermedad de Alzheimer. Tales sujetos son hechos en homogenados separados usando métodos bien conocidos para el técnico experto, y entonces son incubados con un compuesto de enlace amiloide de benzotiazol radioetiquetado de la fórmula (I) . La cantidad de tejido la cual se enlaza al compuesto de enlace amiloide de benzotiazol radioetiquetado es entonces calculada para cada tipo de tejido (por ejemplo, cerebelo, no cerebelo, normal, anormal) y la proporción para el enlace de tejido no de cerebelo a cerebelo es calculado para tejido a partir de normal a tejido a partir de pacientes que se sospecha tienen la enfermedad de Alzheimer. Estas proporciones son entonces comparadas. Si la proporción a partir del cerebro que se sospecha tiene enfermedad de Alzheimer es arriba de 90% de las proporciones obtenidas a partir de cerebros normales, se hace el diagnóstico de la enfermedad de Alzheimer. Las proporciones normales pueden ser obtenidas a partir de datos obtenidos previamente, o alternativamente, pueden ser recalculados al mismo tiempo que se estudia el tejido de cerebro con sospecha. La capacidad de los compuestos presentes para enlazar específicamente a ovillos neurofibrilares sobre las placas amiloides es particularmente evidente en concentraciones menores a 10 nM, lo cual incluye el intervalo de concentración in vivo de radiotrazas de la PET. En estas bajas concentraciones, las cuales contienen solamente ovillos y no placas, el enlace significativo no resulta cuando se compara con tejido de cerebro de control que no contiene ni placas ni ovillos. Sin embargo, la incubación de homogenados del tejido cerebral que contiene principalmente plaquetas y algunos ovillos con compuestos radioetiquetados de las fórmulas descritas en la presente, resulta en un incremento significativo en el enlace cuando se compara con el tejido de control sin placas o ovillos. Estos datos sugieren que una ventaja de estos compuestos es su especificidad para depósitos de Aß en concentraciones menores a 10 nM. Estas bajas concentraciones son detectables en estudios de PET, haciendo posible la detección por PET usando compuestos radioetiquetados de las fórmulas descritas en la presente las cuales son específicas para depósitos de Aß . El uso de tales compuestos permite la detección por PET en depósitos de Aß tales como aquellos encontrados en placas y amiloides cerebrovascular. Ya que se ha reportado que los niveles de Aß en la corteza frontal son incrementados antes a la formación de ovillos, esto puede sugerir que los compuestos radioetiquetados de la presente invención, usados como trazas de PET, pueden ser específicos para los cambios más tempranos en la corteza de AD. Naslund et al., JAMA 283: 1571 (2000) . Método para Detectar los Depósitos Amiloides in vivo Como se menciona anteriormente, la invención además proporciona, en una modalidad, un método para detectar depósitos amiloides in vivo, el cual comprende: (i) administrar a un animal una cantidad efectiva de un compuesto de acuerdo a la fórmula (I), en donde el compuesto enlaza a cualquier depósito amiloide en el animal; y (ii) detectar el enlace del compuesto al depósito amiloide en el animal. Después de que ha transcurrido suficiente tiempo para que el compuesto enlace al depósito amiloide, por ejemplo 30 minutos a 48 horas después de la administración, el enlace puede ser detectado por cualquier medio conocido en la técnica. Ejemplos de medios de detección incluyen, sin limitación, ensayos (tales como ensayos inmunométricos, calorimétricos, densitométricos, espectrográficos, y cromatográficos) , las técnicas de neuroformación de imágenes no invasivas (tales como espectroscopia de resonancia magnética nuclear (MRS), formación de imágenes por resonancia magnética (MRI), y técnicas de formación de imágenes por radiación gamma tales como tomografía computarizada de emisión de fotones sencillos (SPECT) y tomografía de emisión de positrones (PET) . Para la formación de imágenes por radiación gamma, la radiación emitida a partir del órgano o área que es examinada es medida y expresada ya sea como enlace total o como una proporción en la cual se normaliza el enlace total en un tejido para (por ejemplo, dividida por) el enlace total en otro tejido del mismo sujeto durante el mismo procedimiento de formación de imágenes in vivo. El enlace total in vivo es definido como la señal total detectada en un tejido por una técnica de formación de imágenes in vivo sin la necesidad para corrección por una segunda inyección de una cantidad idéntica de compuesto etiquetado junto con un gran exceso de compuesto no etiquetado, pero de otra forma químicamente idéntico. El tipo de instrumento de detección disponible puede ser un factor para seleccionar el isótopo de carbono o halo radioactivo. Por ejemplo, el isótopo radioactivo debe tener un tipo de descomposición que sea detectable por un instrumento dado. Otra consideración se relaciona a la vida media del radionucleótido. La vida media debe ser suficientemente larga de tal forma que el radioisótopo es todavía detectable en el momento de la captación máxima por el objetivo, pero suficientemente corta de tal forma que el huésped no retiene la radiación dañina. Para la detección por SPECT, el radioisótopo seleccionado puede carecer de emisión de particulados, pero puede producir un gran número de fotones en un intervalo de 140-200 keV. Para la detección por PET, el radioisótopo seleccionado puede ser un radioisótopo de emisión de positrones, el cual se destruirá para formar dos rayos gamma de 511 keV que pueden ser detectados por la cámara de PET. Los radioisótopos útiles incluyen sin limitación: 125I, 14C y 3H para cuantificación in vitro de amiloide en homogenados de biopsia o tejido post-mortem; nC y 18F para PET en formación de imágenes in vivo; 123I para formación de imágenes por SPECT; 18F para MRS/MRI; 3H o 14C para estudios in vitro; y 18F y 13C para espectroscopia de resonancia magnética. En una modalidad, se efectúa la detección por formación de imágenes por radiación gamma, formación de imágenes por resonancia magnética, o espectroscopia por resonancia magnética. En otra modalidad, la formación de imágenes por radiación gamma es PET o SPECT. Método para detectar el depósito amiloide in vitro Esta invención además proporciona un método para detectar el depósito amiloide in vitro el cual comprende: (i) poner en contacto un tejido corporal con una cantidad efectiva de un compuesto de acuerdo a la fórmula (I), en donde el compuesto puede enlazar cualquier depósito amiloide en el tejido; y (ii) detectar el enlace del compuesto al depósito amiloide en el tejido. El enlace puede ser detectado por cualquier medio conocido en la técnica. Ejemplos de medios de detección incluyen, sin limitación, técnicas microscópicas, tales como microscopía de campo brillante, fluorescencia, láser confocal y polarización cruzada. En una modalidad, el tejido es biopsia o tejido post-mortem que es fijado en formalina o congelado en fresco.

En otra modalidad, el tejido es homogenizado . En aún otra modalidad, el compuesto de la invención está en una solución que además comprende 25-99% de etanol, con el resto de la solución que es agua. En aún otra modalidad, la solución comprende 0-50% de etanol y 0.0001 a 100 µM del compuesto. En aún otra modalidad, el método además comprende (iii) separar a partir del tejido el depósito amiloide enlazado al compuesto; y (iv) cuantificar el depósito amiloide enlazado al compuesto inventivo. El depósito amiloide enlazado puede ser separado a partir de tejido por cualquier medio conocido en la técnica, tal como filtración. La cantidad del depósito amiloide enlazado puede ser convertida a unidades de µg del depósito amiloide por 100 mg de tejido en comparación con la curva estándar generada por incubar cantidades conocidas de amiloide con el compuesto inventivo o sal aceptable farmacéuticamente, hidrato o solvato o profármaco. Método para distinguir el cerebro con enfermedad de Alzheimer a partir del cerebro normal Esta invención además proporciona un método para distinguir un cerebro con enfermedad de Alzheimer a partir de un cerebro normal el cual comprende: (i) obtener tejidos a partir de (a) el cerebelo y (b) otra área del mismo cerebro, de un animal normal y de un animal que se sospecha tiene la enfermedad de Alzheimer; (ii) poner en contacto los tejidos con un compuesto de acuerdo a la fórmula I; (iii) cuantificar el enlace amiloide al compuesto; (iv) calcular la proporción de la cantidad de amiloide en el área del cerebro diferente al cerebelo con la cantidad de amiloide en el cerebelo; y (v) comparar la proporción para un animal normal con la proporción para un animal que se sospecha tiene la enfermedad de Alzheimer. Puede ser hecho un diagnóstico de la enfermedad de Alzheimer si la proporción para un animal que se sospecha tiene la enfermedad de Alzheimer está, por ejemplo, arriba de 90% de la proporción para un animal normal. Para este método, un animal "normal" es uno que no sufre de enfermedad de Alzheimer .

Administración y Composiciones Farmacéuticas De acuerdo a la presente invención, puede ser administrada una composición farmacéutica la cual comprende un agente de formación de imágenes amiloide de la fórmula (I) a sujetos en quienes se anticipa formación amiloide o fibrilar amiloide, por ejemplo, pacientes diagnosticados clínicamente con la enfermedad de Alzheimer u otra enfermedad asociada con la deposición amiloide. La administración al sujeto puede ser local o sistémica y realizada, por ejemplo, intravenosa, intraarterial, intratecalmente (por medio del fluido espinal) o similares. La administración también puede ser intradérmica o intracavitaria, dependiendo del sitio corporal bajo examinación. Después de que ha transcurrido un tiempo suficiente Después de que ha transcurrido suficiente tiempo para que el compuesto enlace al amiloide, por ejemplo 30 minutos a 48 horas, se examina el área del sujeto por técnicas de formación de imágenes de rutina tales como MRS/MRI, SPECT, formación de imágenes por escintilación planar, PET y cualesquiera técnicas de formación de imágenes emergentes, también. El protocolo exacto variará necesariamente dependiendo de factores específicos para el paciente, como se indica anteriormente, y dependiendo del sitio corporal bajo examinación, método de administración y tipo de etiqueta usada; la determinación de los procedimientos específicos puede ser de rutina para el técnico experto. Para formación de imágenes del cerebro, como un ejemplo, la cantidad (enlace total o específico) del compuesto de benzotiazol etiquetado radioactivamente o análogo de la presente invención es medida y comparada (como una proporción) con la cantidad de compuesto de benzotiazol etiquetado enlazado al cerebelo del paciente. Esta proporción es entonces comparada con la misma proporción en cerebro normal de igual edad. Para la formación de imágenes de órganos, como otro ejemplo, la cantidad (enlace total o específico) del derivado de tioflavina etiquetado radioactivamente enlazado o análogo de la presente invención se mide y se compara (como una proporción) con la cantidad del derivado de tioflavina etiquetado enlazado al órgano del paciente. Esta proporción es entonces comparada con la misma proporción en el órgano normal de la misma edad. Los agentes de formación de imágenes de amiloide de la presente invención pueden ser administrados en la forma de composiciones inyectables, como se indica anteriormente, pero pueden también ser formulados en sistemas de suministro de fármaco bien conocidos (por ejemplo, oral, rectal, parental (intravenosa, intramuscular, o subcutánea), intracisternal, intravaginal, intraperitoneal, local (polvos, ungüentos o gotas), o como una dispersión bucal o nasal) . Una composición típica para tal propósito comprende un portador aceptable farmacéuticamente. Por ejemplo, la composición puede contener aproximadamente 10 mg de albúmina sérica humana y de aproximadamente 0.5 a 500 microgramos del compuesto de benzotiazol etiquetado por mililitro de amortiguador de fosfato que contiene NaCl. Otros portadores aceptables farmacéuticamente incluyen soluciones acuosas, excipientes no tóxicos, incluyendo sales, conservadores, amortiguadores y similares, como se describe, por ejemplo en REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 15a Ed. Easton Mack Publishing Co . pág. 1405-1412 y 1461-1487 (1975) y THE NATIONAL FORMULARY XIV. 14a edición. Washington: American Pharmaceutical Association (1975), los contenidos de los cuales se incorporan en la presente para referencia. Ejemplos de solventes no acuosos son propilenglicol, polietilenglicol, aceite vegetal y esteres orgánicos inyectables tales como oleato de etilo. Los portadores acuosos incluyen agua, soluciones alcohólicas/acuosas, soluciones salinas, vehículos parentales tales como cloruro de sodio, dextrosa de Ringer, etc. Los vehículos intravenosos incluyen regeneradores de fluidos y nutrientes. Los conservadores incluyen agentes antimicrobianos, anti-oxidantes, quelantes y gases inertes.

El pH y la concentración exacta de los varios componentes de la composición farmacéutica son ajustados de acuerdo con las experiencias de rutina en la técnica. Ver, Goodman and Gilman 's THE PHARMACOLOGIAL BASIS FOR THERAPEUTICS (7a edición) . El protocolo de barrido de PET puede comprender un barrido corporal total estándar (el cual cubre de la cabeza a la pelvis) completado 15-60 minutos después de la inyección del radiofarmacéutico, o un barrido sobre un área particular corporal (por ejemplo, corazón, pulmones, hígado, ríñones). Este protocolo de barrido es análogo al barrido de oncología de PET de área total o área corporal focalizada realizado con [F-18]2-fluoro-2-deoxiglucosa ( FDG por sus siglas en inglés). Es decir, el radiofarmacéutico específico a amiloide es inyectado intravenosamente, el tiempo es asignado para distribución del radiotrazador en todo el cuerpo, la captación del radiotrazador en el órgano de interés, y aclaración a partir de la sangre y otros órganos en los cuales está ausente el amiloide, y se realiza un barrido de 20-40 minutos sobre el cuerpo entero o sobre un área corporal particular para formar las imágenes del radiotrazador enlazado a amiloide. Además, el barrido de formación de imágenes puede ser usado para dirigir subsecuentemente el muestreo de biopsia del tejido barrido. Generalmente, la dosis del compuesto de benzotiazol etiquetado detectablemente de acuerdo a la fórmula (I) variará dependiendo de las consideraciones tales como edad, afección, sexo, y grado de la enfermedad del paciente, contraindicaciones, si las hay, terapias concomitantes y otras variables, para ser ajustadas por un médico experto en la técnica. Los niveles de dosis en el orden de aproximadamente 0.001 µg/kg/día a aproximadamente 10,000 mg/kg/día de un compuesto inventivo son útiles para los métodos inventivos. En una modalidad, el nivel de dosis es aproximadamente 0.001 µg/kg/día a aproximadamente 10 µg/kg/día. En otra modalidad, el nivel de dosis es aproximadamente 0.01 µg/kg/día a aproximadamente 1.0 µg/kg/día. En aún otra modalidad, el nivel de dosis es aproximadamente 0.1 mg/kg/día a aproximadamente 100 mg/kg/día. El nivel de dosis específico para cualquier paciente particular variará dependiendo de los varios factores, incluyendo la actividad y la posible toxicidad del compuesto específico empleado; la edad, peso corporal, salud general, sexo y dieta del paciente; el tiempo de administración; la velocidad de excreción; la combinación de fármacos, y la forma de administración. Típicamente, los resultados del efecto de dosis in vitro proporciona una pauta útil en las dosis apropiadas para administración al paciente. Los estudios en modelos animales son también útiles. Las consideraciones para determinar los niveles de dosis apropiados son bien conocidos en la técnica y están dentro de la experiencia de un médico ordinario. Cualquiera régimen de administración conocido para regular el tiempo y secuencia de suministro de fármaco puede ser usado y repetido como sea necesario para efectuar el tratamiento en los métodos inventivos. El régimen puede incluir el pretratamiento y/o co-administración con agentes terapéuticos adicionales. En una modalidad, los compuestos de acuerdo a la fórmula (I) son administrados en un animal que se sospecha tiene o está en riesgo de desarrollar una enfermedad, trastorno o afección caracterizados por deposición amiloide. Por ejemplo, el animal puede ser un humano envejecido. En otra modalidad, los compuestos inventivos enlazan a Aß con una constante de disociación (KD) de aproximadamente 0.0001 µM a aproximadamente 10.0 µM cuando se mide por enlace al péptido de Aß sintético o tejido cerebral de AD. Esta invención además proporciona una composición farmacéutica la cual comprende: (i) una cantidad efectiva de por lo menos un compuesto inventivo; y (ii) un portador aceptable farmacéuticamente La composición puede comprender uno o más ingredientes aceptables farmacéuticamente, incluyendo sin limitación uno o más agentes de humectación, agentes de amortiguamiento, agentes de suspensión, agentes lubricantes, emulsificadores, desintegradores, absorbentes, conservadores, tensioactivos, colorantes, saborizantes, edulcorantes y agentes terapéuticos. La composición puede ser formulada en una forma sólida, líquida, gel o de suspensión para: (1) una administración oral como, por ejemplo, una poción (solución o suspensión acuosa o no acuosa), tableta (por ejemplo, objetivada para absorción bucal, sublingual o sistémica), bolo, polvo, granulo, pasta para aplicación en la lengua, cápsula de gelatina dura, cápsula de gelatina suave, aspersión en la boca, emulsión y microemulsión; (2) administración parental por inyección subcutánea, intramuscular, intravenosa o epidural como, por ejemplo, una solución estéril, suspensión o formulación de liberación sostenida; (3) aplicación tópica como, por ejemplo, una crema, ungüento, parche de liberación controlada o dispersión aplicada a la piel; (4) administración intravaginal o intrarrectal como, por ejemplo, un pesario, crema o espuma; (5) administración sublingual, (6) administración ocular, (7) administración transdérmica, o (8) administración nasal. En una modalidad, la composición puede ser formulada por administración intravenosa y el portador incluye un regenerador de fluido y/o nutriente. En otra modalidad, la composición es capaz de enlazar específicamente al amiloide in vivo, es capaz de cruzar la barrera sangre cerebro, no es tóxica en niveles de dosis apropiados y/o tiene una duración satisfactoria de efecto. En aún otra modalidad, la composición comprende aproximadamente 10 mg de albúmina sérica humana y de aproximadamente 0.5 a 500 mg del compuesto inventivo por mililitro de amortiguador de fosfato que contiene NaCl. Además, los presentes compuestos de benzotiazol pueden ser usados en un método para determinar la eficacia de terapia en el tratamiento de amiloidosis. El método implica el uso de formación de imágenes de amiloide como un marcador surrogado. Los marcadores surrogados son un tipo especial de biomarcador que pueden ser usados en lugar de mediciones clínicas como un punto final clínico para propósitos de aprobación de fármacos. Por ejemplo, la medición de los niveles de colesterol es ahora un marcador surrogado aceptado de aterosclerosis. La presente invención implica el uso de formación de imágenes de amiloide como un marcador surrogado de eficacia para terapias anti-amiloides. El método presente proporciona un medio de evaluación del éxito de las terapias anti-amiloides. En algunas modalidades, el método presente proporciona un medio para evaluar el éxito clínico de las terapias anti-amiloides En algunas modalidades, el método puede ser usado para evaluar el éxito clínico en sujetos dañados ligeramente con pocos o ningún síntomas a seguir. El método básico para determinar la eficacia de la terapia en el tratamiento de amiloidosis implica: (a) administrar a un paciente en necesidad del mismo una cantidad efectiva de un compuesto de la fórmula (I) o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo como se describe anteriormente; (b) formar imágenes del paciente; después (c) administrar al paciente en necesidad del mismo por lo menos un agente anti-amiloide; (d) administrar subsecuentemente al paciente en necesidad del mismo una cantidad efectiva de un compuesto de la fórmula ( I ) : (e) formar imágenes del paciente; y (f) comparar los niveles de deposición amiloide en el paciente antes al tratamiento con por lo menos un agente anti-amiloide a niveles de deposición amiloide en el paciente después del tratamiento con el por lo menos agente anti-amiloide. La etiqueta detectable incluye cualquier átomo o porción el cual puede ser detectado usando una técnica de formación de imágenes conocida para aquellos expertos en la técnica. Típicamente, se selecciona la etiqueta detectable a partir del grupo que consiste de 3H, 131I, 125I, 123I, 76Br, 5Br, 18F, CH2-CH2-X*, 0-CH2-CH2-XX CH2-CH2-CH2-XX. 0-CH2-CH2-CH2-X* (en donde X*=131I, 123I, 76Br, 75Br, o 18F) , 19F, 125I, un substituyente elcual contiene carbono seleccionado del grupo el cual consiste de alquio inferior, (CH2)nOR', CF3, CH2-CH2X, 0-CH2-CH2X, CH2CH2CH2X, 0-CH2-CH2-CH2-X (EN DONDE x=F, Cl, Br o I), CN (C=0)-R', (C=0)-R', (C=0)N(R')2, 0(CO)R', COOR', CR'=CR'-RP y CR2 ' -CR2 ' -RPh en donde por lo menos un carbono es l ?C , 13C o 14C y un grupo quelante (con el grupo de metal quelante) de la forma W-L* o V-W-L*, en donde V se selecciona del grupo el cual consiste de -COO-, -CO-, -CH20- y -CH2NH-; W ees ~(CH2)n donde n=0,l,2,3,4 ó 5; y L* es En donde M* es 99mTc. En una modalidad, la etiqueta detectable es radioetiqueta . Terapias anti-amiloides Otra modalidad de la invención es un método para determinar la eficacia de terapia en el tratamiento de amiloidosis en un paciente en necesidad del mismo. El método comprende administrar un compuesto de la fórmula (I) y entonces someter a formación de imágenes del paciente. Después de la formación de imágenes, por lo menos se administra un agente anti-amiloide/terapia anti-amiloide al paciente. La cantidad administrada, la ruta de administración, y la duración de la terapia son determinados por un experto en la técnica en base a la edad, peso y afección del paciente. Tales determinaciones están dentro de la experiencia del practicante técnico. Cantidades adecuadas incluyen, pero no se limitan a 0.01 a 100 mg/kg. Las rutas adecuadas de administración incluyen, pero no se limitan a oral, subcutánea e intravenosa. Las duraciones adecuadas de terapia incluyen, pero no se limitan a una dosis sencilla a cuatro dosis por día dadas indefinidamente. Los tiempos adecuados para formación de imágenes incluyen, pero no se limitan a inmediatamente después de la primera dosis a diez años después de la dosis más reciente. Tiempos de ejemplo para formación de imágenes incluyen pero no se limitan a aquellos entre 7 días y 6 meses después de la dosis más reciente. Un "agente anti-amiloide" o una "terapia anti-amiloide" es cualquier agente o combinación de agentes que tratan o evitan la amiloidosis. Ejemplos de enfermedades asociadas con la deposición amiloide, amiloidosis, incluyen la enfermedad de Alzheimer, Síndrome de Down, diabetes mellitus tipo 2, amiloidosis de hemorragia cerebral hereditaria (Dutch), amiloide A (reactiva), amiloidosis secundaria, MCI, fiebre mediterránea familiar, nefropatía amiloide familiar con urticaria y sordera (Síndrome de Muckle-wells ) , cadena L lambda amiloide o cadena L kappa amiloide (idiopática, mieloma o asociada a macroglobulinemia) A beta 2M (hemodiálisis crónica), ATTR (polineuropatía amiloide familiar (Portuguesa, japones, sueca)), cardiomiopatía amiloide familiar (Danish), amiloide cardiaco aislado, amiloidosis senil sistémica, AIAPP o insulinoma de amilina, factor naturético atrial (amiloide atrial aislado) , procalcitonina (carcinoma medular de la tiroides), gelsolina (amiloidosis familiar (Finlandesa)), cistatina C (hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis (islandia)), Aapo-A-I (polineuropatía amiloidótica familiar Iowa), Aapo-a-II (senecencia acelerada en ratones), amiloide asociado a fibrinógeno; y Asor o Pr P-27 (scrapie, enfermedad de Creutzfeld Jacob, síndrome de Gertsmann-Straussler-Scheinker, encefalitis espongiforme bovina) o en casos de personas quines son homocigotas para el alelo apolipoproteína E4, y la afección asociada con la capacidad de ser homocigoto para el alelo de apolipoproteína E4 o enfermedad de Huntington. La invención contempla enfermedades asociadas con deposición de placa amiloide. En una modalidad, la enfermedad asociada con la deposición amiloide es AD.

Los benzotiazoles presentes de acuerdo a la fórmula (I) pueden ser usados para formación de imágenes amiloides que sirven como un marcador surrogado de eficacia para terapia anti-amiloide. La administración de un agente de formación de imágenes amiloide para establecer una línea base de deposición amiloide y subsecuente formación de imágenes de un paciente tanto antes y después del tratamiento del paciente con un agente anti-amiloide permite la determinación de la eficacia de la terapia anti-amiloide. El método puede ser usado para determinar la eficacia de cualquier tratamiento anti-amiloide ya que el agente de formación de amiloide puede ser administrado, y el paciente puede ser sometido a formación de imágenes, antes y después de cualquier terapia anti-amiloide. El método contempla determinar las terapias anti-amiloides las cuales son ineficaces para tratar las enfermedades asociadas con la deposición amiloide, así como también las terapias anti-amiloides las cuales son efectivas para tratar enfermedades asociadas con deposición amiloide. Una persona con experiencia ordinaria en la técnica puede determinar las condiciones y dosificación de la terapia anti-amiloide de acuerdo a los protocolos apropiados. Por lo tanto, la presente invención contempla determinar la eficacia de terapias anti-amiloides que no son conocidas, así como también terapias que están aún por descubrirse. Terapias anti-amiloides no limitantes de ejemplo son descritas posteriormente . En algunas modalidades, la eficacia de los inhibidores de acetilcolinesterasa en el tratamiento de la amiloidosis puede ser determinada por el método presente. La terapia de acetilcolinesterasa es basada en estudios de patrones de degeneración en AD que identifica disminuciones substanciales entre grupos de neuronas en el cerebro anterior basal. Estas células todas usan el transmisor de acetilcolina, y su perdida significa que menos acetilcolina está siendo liberada en sus terminales primarias en la corteza. Se han desarrollado varios fármacos, tales como tacrina, donepezil, rivastigmina y galantamina en base a estos descubrimientos, y se hipotetiza que trabajan inhibiendo la enzima acetilcolinesterasa (Ingram, V., American Scientist, 2003, 91(4): 312-321). En otras modalidades, la eficacia de una terapia anti-amiloide que objetiva enzimas responsables para la formación de fragmentos dañinos de proteína precursora de amiloide (APP) en el tratamiento de amiloidosis es determinada por los compuestos inventivos de acuerdo a la metolodología descrita. En algunas modalidades, los fragmentos dañinos de la proteína precursora amiloide (APP) es el péptido Aß desdoblado. Por ejemplo, la sobreproducción de los fragmentos de Aßl-41 es considerada por algunos científicos para ser una causa raíz de la AD. El fragmento Aßl-41 es formado por la escisión de APP por la enzima ß-secretasa (BACE1) (la cual produce la terminación amino) y la enzima ?-secretasa (la cual escinde la terminación carboxilo de APP) . Los inhibidores de estas enzimas secretasa pueden ser usados como terapias anti-amiloides (Ingram, V., American Scientist. 2003, 91 (4 ): 312-321 ) . En algunas modalidades, la eficacia de las estrategias inmunoterapéuticas en el tratamiento de amíloidosis puede ser determinada por el método presente. La inmunoterapia trabaja por usar el sistema inmunológico del paciente para ubicar y destruir las placas amiloides y muchas estrategias de inmunoterapia están siendo actualmente fijadas por los científicos. Las estrategias inmunoterapéuticas pueden ser ya sea pasivas o activas. Por ejemplo, en inmunoterapia activa, un paciente puede recibir una inyección o una aplicación de dispersión nasal del péptido de Aß, llevando a una respuesta inmunológica anti-amiloide. La inmunoterapia pasiva, por otra parte, puede implicar derivar la proteína beta-amiloide, usando en su lugar antisuero que ha sido ya producido en respuesta al beta amiloide. La inmunoterapia, la cual implica anticuerpos contra el péptido Aß, ha sido estudiada para el tratamiento de AD. Por ejemplo, AN-1792 es una preparación de amiloide-beta sintético preagrgado (Aß; 1-42 de longitud) junto con el adyuvante QS- 21 (Hock, C. et al., 2003, Neuron, 38:547-554). Aproximadamente 300 pacientes con AD han sido tratados con esta preparación antes a la suspensión de la prueba clínica debido a los efectos laterales (Birmingham, K, and Frantz, S., 2002, Nature Medicine, 8:199-200). En otras modalidades, la eficacia de las estrategias neuroprotectoras en el tratamiento de amiloidosis es determinada por el método presente. Por ejemplo, muchos médicos recomiendan que el paciente tome altas dosis (1000-2000 IU/día) de vitamina E. Otros tipos de estrategias neuroprotectoras que han sido sugeridas para el tratamiento de amiloidosis son altas dosis de vitamina C, modulares de canal de calcio, depuradores de radicales libres y quelantes de iones metálicos (Seikoe, et al, Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol., 2003, 43:545-84). En algunas modalidades, la eficacia de los estrategias con fármacos anti-inflamatorios (NSAID por sus siglas en inglés) en el tratamiento amiloidosis es determinada por el método presente. Los tratamientos que implican NSAID son basados en evidencia de que una respuesta inflamatoria celular en la corteza es producida por la acumulación progresiva del péptido de Aß. Fármacos antiinflamatorios de ejemplo son prednisona, inhibidores de ciclooxigenasa no específicos, e inhibidores de ciclooxigenasa-2. (Clark, M., et al., Annals of Interna! Medicine, 2003, 138 (5) : 00- 10 ; y Ardí, John, Annu. Rev. Med. 2004, 55:15-25) . En algunas modalidades, el método presente puede determinar la eficacia de terapias que disminuyen el colesterol, incluyendo, pero no limitadas a, inhibidores de la coenzima B reductasa de 3-hidroxi-3-met ilglutarilo (estatinas). Los tratamientos que implican fármacos que disminuyen el colesterol (tales como estatinas) se basan en evidencia epidemiológica que los pacientes tratados con estatinas tienen una menor incidencia de AD que las estatinas pueden alterar el metabolismo de Aß para disminuir los niveles de Aß (Wolozin, B (2002) Colesterol and Alzheimer's disease. Biochemical Society Transactions . 30:525-529). Los fármacos de estatina que disminuyen el colesterol de ejemplo incluyen lovastatina, pravastatina, rosuvastatina, fluvastatina, atorvastatina y simvastatina. Otros fármacos que disminuyen el colesterol incluyen niacina, colestiramina, fenofibrato, colesevelam y ezetimibe. En otras modalidades, se determina la eficacia de las moléculas pequeñas que elimina la neurotoxicidad de la Aßl-42 agregado en el tratamiento de amiloidosis por el método presente. Tal fármaco, cuando se administra, por ejemplo, temprano en la progresión de la enfermedad, puede "destoxificar" el péptido de Aß que se acumula gradualmente antes de que cualquier daño permanente inflija a las neuronas. (Clark M., et al., Annals of Infernal Medicine, 2003, 138 (5) :400-410) . En algunas modalidades, la eficacia de los "péptidos decoy" en el tratamiento de amiloidosis es determinada por el método presente. Los péptidos decoy son moléculas pequeñas que se enlazan al péptido de Aßl-42 agregado y lo fuerzan a asumir una estructura no tóxica. Péptidos decoy de ejemplo son péptidos pequeños (5, 6, ó 9 aminoácidos), seleccionados a partir de bibliotecas grandes de fragmentos de proteínas por su capacidad para formar una asociación fuerte con Aßl-42 etiquetada. (Clark, M., et al., Annals of infernal Medicine, 2003, 138 ( 5 ): 400-410 ) . En otras modalidades, la eficacia de la modulación de homesteasis de colesterol en el tratamiento de amiloidosis es determina por el método presente. El uso crónico de fármacos que disminuyen el colesterol ha sido asociado recientemente con una menor incidencia de AD. Concurrentemente, las dietas altas en colesterol han sido mostradas para incrementar la patología de Aß en animales, y los fármacos que disminuyen el colesterol han sido mostrados para reducir la patología en ratones transgénicos con APP. Las pruebas clínicas están en marcha para estudiar el efecto de la modulación de homeostasis de colesterol en el tratamiento de AD. (Ardí, John, Annu. Rev. Med., 2004, 55:15-25) .

Ciertas modalidades tales como una nombrada m266 (DeMattos, RB, Bales, KR, Cummins, DJ, Dodart, JC, Paul, SM, Holtzman, DM (2001) "Peripheral anti-A beta antibody alters CNS and plasma A beta clearance and decreases brain A beta burden in a mouse model of Alzheimer disease" Proc. Nati. Acad. Sci. Usa 98:8850-8855) o moléculas diferentes a los anticuerpos (Matsuoka, Y. Saito, M, LaFrancois, J, Saito, Gaynor, K, Olm, V, Wang, L, Casey, E, Lu, Y, Shiratori, C, Lemere, C, Duff, K (2001) "Novel therapeutics approach for the treatment of Alzheimer ' s disease by peripheral administration of agents with an affinity to beta-amyloid" Journal of Neuroscience, 23:29-33) son creídos para disminuir los amiloides cerebrales por enlazar Aß en la sangre, por lo mismo creando un "sumidero periférico" y cambiar el equilibrio de Aß a partir del cerebro a la sangre, donde se elimina del cuerpo. Tales agentes son referidos en la presente como "agentes de sumidero periféricos". Evaluación de la eficacia de la terapia anti-amiloide La metodología que emplea los benzotiazoles de acuerdo a la Fórmula (I) para determinar la eficacia en el tratamiento de amiloidosis comprende administrar al paciente en necesidad del mismo un compuesto de la Fórmula (I) y someter a formación de imágenes al paciente. Después de la formación de imágenes, se administra por lo menos un agente anti-amiloide al paciente. Entonces, se administra una cantidad efectiva de un compuesto de la Fórmula (I) al paciente y se somete a formación de imágenes al paciente otra vez. Finalmente, se comparan los niveles de línea base de la deposición amiloide en el paciente antes del tratamiento con el agente anti-amiloide con los niveles de deposición amiloide en el paciente después del tratamiento con el agente anti-amiloide. Tal comparación está dentro de la experiencia de un practicante experto. En algunas modalidades, los niveles de deposición amiloide en el paciente antes del tratamiento con el agente anti-amiloide serán superiores que los niveles de deposición de amiloide en el paciente después del tratamiento con el agente anti-amiloide. Tal resultado indica que el agente anti-amiloide/ la terapia con anti-amiloide es efectivo en el tratamiento de enfermedades asociados con deposición amiloide . Por ejemplo, AN-1792 es una preparación de amiloide-beta sintético preagregado (Aß; 1-42 de longitud) junto con el adyuvante de QS-21. Aproximadamente 300 pacientes con AD han sido tratados con esta preparación antes a la suspensión de las pruebas clínicas debido a los efectos laterales (Birmingham, K and Frantz, S., 2002, Nature Medicine, 8:199-200). A pesar de esta desventaja, se ha incrementado el optimismo sobre este procedimiento por dos descubrimientos. Primero, en la única autopsia reportada aún publicada con respecto al paciente con Ad tratado con AN-1792, hay varios descubrimientos inusuales severos los cuales incluyen: (i) áreas extensivas de neocorteza con muy pocas placas de Aß; (ii) áreas de corteza que son evitadas de placas de Aß que contienen densidades de ovillos, hilos neurofilos y angiopatia amiloide cerebral (CAÁ por sus siglas en inglés) similares a AD no inmunizada, pero carecen de neuritos distróficos asociados a plaquetas y glomérulos de astrositos; (iii) en algunas regiones evitadas de placas, se asocia la Aß-inmunoreactividad con microglia (Nicoll, J. Et al., 2003, Nature Medicine, 9:448-452). Segundo, en un pequeño subgrupo de 30 pacientes tratados con AN-1792, aquellos pacientes quienes generan anticuerpos contra Aß, como se determina por ensayo de inmunoreactividad de placa amiloide a tejido (TAPIR) muestra velocidades significativamente menores de declinación de funciones cognitivas y actividades de vida diaria, como se indica por el Mini Mental State Examination, the Disability Assessment for Dementia, and the Visual Paired Associates Test of delayed recall from the Wechsler Memory Scale, como se compara con pacientes sin tales anticuerpos. Hock et al., Neuron 38: 547-54 (2003) . En otra modalidad, la invención contempla administrar un compuesto de acuerdo con la fórmula (I) a un paciente en un método de formación de imágenes de depósitos amiloides en el cerebro de pacientes quienes no cumplen con los criterios para el diagnóstico de AD. Estos incluyen pero no se limitan a pacientes que presentan signos clínicos de demencia o pacientes con un daño cognitivo leve, tales como, por ejemplo, pacientes que presentan un trastorno de demencia de etiología cuestionable, donde los datos a partir de formación de imágenes amiloides de pacientes revela que ciertos depósitos amiloides son un síntoma premonitorio de AD u otro trastorno de deposición amiloide. Otra modalidad de la presente invención es un método para identificar un paciente como prodromal para un diagnóstico clínico estándar de una enfermedad de deposición amiloide. El método comprende el uso de agentes de formación de imágenes amiloide para obtener datos cuantitativos y cualitativos de un paciente. La formación de imágenes amiloide cuantitativa y cualitativa, de acuerdo con la presente invención, debe permitir un diagnóstico más temprano y más exacto de enfermedades de depósito amiloide, y debe auxiliar en el desarrollo de terapias anti-amiloides. El paciente objetivo para esta metodología puede ser un paciente que presenta signos de demencia clínica o paciente que exhibe signos clínicos de daño cognitivo leve. Un experto en la técnica puede reconocer que el practicante puede aplicar criterios diferentes para una determinación de signos de demencia clínica. Tales criterios incluyen, pero no se limitan a Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders, 3a edición (DSM-III) Alzheimer's Disease diagnostic and Treatment Center (ADDTC) , International Statistical Classification of Diseases, 10a Revisión (ICD-10), National Institute Of Neurological Disorders and Stroke-Association Internationale pour la Recherche et l'Enseignment en Neurosciences (NINDS-AIREN) y Diagnostic and Statistical Manual of Mental disorders, 4a edición (DSM-IV). Ver Pohjasvaara et al., Stroke, 2000 31: 2952-2957. La oligomerización clínica de un paciente como daño cognitivo leve está también dentro de la experiencia del practicante. La prueba de un paciente para elucidar tal afección implica realizar una serie de pruebas mentales. Los métodos para diagnóstico clínico son ampliamente resumidos y son discutidos en, por ejemplo, Petersen, et al., Arch. Neurol. Vol. 56, pág. 303-308, March 1999. En base a la prueba clínica única, los sujetos identificados con MCI pueden convertir a un diagnosis de AD (en una proporción de aproximadamente 10-15% por año) , permanecen como MCI, o revierten al diagnóstico de "normal" (10-15% por año). Larrieu, S. Letenneur, L., Orgogozo, JM, Fabrigoule, C, Amieva, H, Le, C, Barberger-Gateau, P. Dartigues, JF (1926) Incidence and outcome of mild cognitive impairment in a population-based prospective cohort .

Neurology. 59:1594-1599). Por lo tanto, hay considerable incertidumbre prognóstica ahocicada con este diagnóstico clínico. La capacidad para identificar la presencia o ausencia de deposición amiloide cerebral en un sujeto diagnosticado clínicamente con MCI tiene el potencial para incrementar bastante la exactitud de prognosis para conversión a AD. La categoría de enfermedades asociadas con deposición amiloide incluyen pero no se limita enfermedad de Alzheimer, Síndrome de Down, diabetes mellitus tipo 2, amiloidosis de hemorragia cerebral hereditaria (Dutch), amiloide A (reactiva), amiloidosis secundaria, fiebre mediterránea familiar, nefropatía amiloide familiar con urticaria y sordera (Síndrome de Muckle-wells ) , cadena L lambda amiloide o cadena L kappa amiloide (idiopática, mieloma o asociada a macroglobulinemia) A beta 2M (hemodiálisis crónica), ATTR (polineuropatía amiloide familiar (Portuguesa, japonesa, sueca)), cardiomiopatía amiloide familiar (Danish), amiloide cardiaco aislado, amiloidosis senil sistémica, AIAPP o insulinoma de amilina, factor naturético atrial (amiloide atrial aislado), procalcitonina (carcinoma medular de la tiroides) , gelsolina (amiloidosis familiar (Finlandesa)), cistatina C (hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis (islandia)), AApo-A-I (polineuropatía amiloidótica familiar Iowa) , AApo-a-II (senecencia acelerada en ratones), amiloide asociado a fibrinógeno; y Asor o Pr P-27 (scrapie, enfermedad de Creutzfeld Jacob, síndrome de Gertsmann-Straussler-Scheinker, encefalitis espongiforme bovina) o en casos de personas quienes son homocigotas para el alelo apolipoproteína E4, y la afección asociada con la capacidad de ser homocigoto para el alelo de apolipoproteína E4 o enfermedad de Huntington. En una modalidad, la enfermedad asociada con deposicón de amiloide es una enfermedad de deposición placa. La enfermedad específica asociada la deposición amiloide es AD. De acuerdo a la invención, por lo tanto, una metodología básica para identificar un paciente como prodromal para una enfermedad de deposición amiloide comprende : (a) administrar al paciente, quien está presentando signos de demencia clínica o presentando signos clínicos de un daño cognitivo leve, en necesidad del mismo una cantidad efectiva del compuesto de la Fórmula I descrito anteriormente o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo; (b) someter a formación de imágenes al paciente para obtener datos; y (c) analizar los datos para determinar los niveles amiloides en el paciente con referencia a un paciente normal.

Una modalidad se relaciona a un método para diagnosticar un paciente el cual está presentando demencia con etiología cuestionable. El método comprende determinar si las demencias de la etiología cuestionables son probables para ser AD u otro trastorno de deposición amiloide en base al descubrimiento de deposición amiloide. El método comprende administrar a un paciente un compuesto de la Fórmula (I), someter a formación de imágenes al paciente para obtener datos y determinar si la demencia de etiología cuestionable es AD en base al descubrimiento de deposición amiloide. El término "trastorno de demencia de etiología cuestionable" se refiere a la afección en la cual una persona presenta una evaluación clínica (la cual consiste de evaluaciones neurológicas, psiquiátricas, médicas y neurosicológicas comúnmente empleadas por aquellos expertos en la técnica para diagnosticar personas con trastornoes de demencia) y, después de esa evaluación clínica, el evaluador encuentra evidencia de que puede estar presente algún trastorno de demencia (en base a la evidencia de conformidades de memoria subjetiva, descripción de conformaciones de memoria por familiares informantes con las desviaciones personales, del funcionalmente normal, o comportamiento deficiente en pruebas neurosicológicas y clínicas usadas por aquellos expertos en la técnica) , pero, puede no encontrar evidencia suficiente para algún trastorno de demencia definido clínicamente (tal como AD, demencia frontotemporal, demencia con cuerpos de Lewy, demencia vascular, seudodemencia debido a la depresión principal, enfermedad de Creutzfeld Jacob u otros conocidos por aquellos expertos en la técnica) o encuentra que la persona muestra evidencia de más de un trastorno de demencia al grado que la distinción entre dos (o más) trastornoes de demencia es cuestionable en este proceso. Esta modalidad de la invención emplea agentes de formación de imágenes amiloides los cuales, junto con técnicas de neuroformación de imágenes no invasivas tales como espectroscopia de resonancia magnética (MRS) , o formación de imágenes (MRI), o formación de imágenes por radiación gamma tales como tomografía de emisión de positrones (PET) o tomografía computarizada de emisión de fotones senicllos (SPECT), se usan para cuantificar la deposición amiloide in vivo. Estas técnicas de formación de imagen adquieren datos en muchas regiones cerebrales. Se logra la cuantificación en regiones específicas por delinear "regiones de interés o ROÍ". De acuerdo con esta modalidad, los datos obtenidos a partir de pacientes que usan una de las técnicas de formación de imágenes mencionadas anteriormente pueden ser comparados con datos a partir de paciente normales con la conclusión basada en criterios los cuales distinguen al paciente como prodromal a un diagnóstico clínico estándar de una enfermedad de deposición amiloide. Usando el mismo protocolo, se pueden comparar los datos obtenidos a partir de técnicas de formación de imágenes aplicados a los pacientes con el fin de: Definir un trastorno de demencia de etiología cuestionable como es causada por enfermedad de deposición amiloide; Distinguir la enfermedad de Alzheimer a partir de demencia frontotemporal ; Monitorear unpaciente para determinar el inicio de la enfermedad de Alzheimer; Diagnosticar la enfermedad de Alzheimer en un paciente diagnóstico clínicamente con daño cognitivo leve; Identificar un paciente como prodromal a la enfermedad de Alzheimer; Identificar un paciente como que tiene una enfermedad asociada con un trastorno de deposición amiloide en donde el paciente está presentando un trastorno de demencia de etiología cuestionable o Identificar un paciente el cual tiene la enfermedad de Alzheimer en donde el paciente está presentando un trastorno de demencia de etiología cuestionable. Análisis de datos de Formación de imágenes Los datos obtenidos pueden ser expresados cuantitativamente en términos de valor de captación estandarizado (SUV por sus siglas en inglés) o en términos de parámetros de modelación farmacocinética tales como proporción de volumen de distribución Logan ( DVR por sus siglas en inglés) para un tejido de referencia tal como cerebelo. Los sujetos quienes tienen más de una desviación estándar arriba de un valor de control típico de SUV o DVR pueden ser considerados para tener una prueba "positiva" y se consideran para ser prodromales para un diagnóstico clínico de una enfermedad de deposición amiloide tal como AD. Específicamente, los sujetos pueden ser considerados "positivos" si su SUV promedio en 40-46 minutos es mayor a 1.0 en corteza frontal, parietal o posterior cingulada. Este valor es claramente separado de pacientes con AD a partir de controles en el estudio humano inicial (Klunk, et al., 2004, Ann, Neurol., 55 ( 3) : 306-319 (ver la Figura 2). Similarmente, los sujetos pueden ser considerados "positivos" si su valor DVR de Logan excede 1.5 en corteza cingulada frontal, parietal o posterior (ver la Figura 3) . Estas áreas cerebrales y cortes exactos son dados solamente como ejemplos y además el trabajo puede describir áreas cerebrales adicionales que son útiles y los valores de corte pueden ser refinados y otras técnicas de modelación (tales como modelación de compartimiento, análisis gráfico, modelación de tejido de referencia o análisis espectral) pueden ser aplicadas para determinar los cortes. Además, los datos de barrido pueden ser interpretados cualitativamente a partir de imágenes tales como aquellas en la Figura 1 que reflejan la distribución de cerebro regional de ya sea SUV, DVR de Logan u otros parámetros en los cuales alguien con experiencia ordinaria en la técnica de interpretación de los barridos de PET puede determinar que la cantidad cualitativa y la distribución de amiloide es consistente con una fase prodromal de una enfermedad de deposición amiloide diagnosticada clínicamente. En otra modalidad de la invención, la detección in vivo o in vitro se efectúa, en relación al sujeto el cual tiene o quien está en riesgo de tener por lo menos un deposito amiloide (es decir, un depósito comprendido de por lo menos una proteína amiloidogénica), por medio de una metodología que comprende: (a) administrar a un sujeto el cual sufre de una enfermedad asociada con amiloidosis, una cantidad detectable de una composición farmacéutica la cual comprende por lo menos un compuesto de la Fórmula (I) como se describe anteriormente y sales aceptables farmacéuticamente del mismo; y (b) detectar el enlace del compuesto a un depósito amiloide el cual comprende por lo menos una proteína amiloidogénica, en donde la proteína amiloidogénica se selecciona del grupo el cual consiste de AL, AH, ATTR, Aß2M, AA, AApoAI, AApoAII, AGel, ALys, AFib, ACys, ABri, ADan, APrP, ACal, A1APP, AANF, APro, AIns, AMed, AKer, A(tbn), y Llac. En la amiloidosis sistémica primaria (AL) la proteína amiloidogénica puede ser conformada anormalmente a cadenas ligeras de inmunoglobulina monoclonales (k o ?) producidas por células plasmáticas clónales. Las fibrillas depositadas en ríñones, corazón, hígado y otros órganos/tejidos. En unos cuantos casos, las fibrillas de amiloidosis de cadena inmunoglobulina contienen solamente las secuencias de cadena pesada más que las secuencias de cadena ligera. En esa circunstancia, la enfermedad es nombrada "amiloidosis de cadena pesada " (AH) . En la amiloidosis transtiretina, la proteína precursora es la secuencia normal o mutada TTR, una proteína de transporte sintetizada en el hígado y plexo coroide. TTR es un tetrámero de 4 subunidades idénticas de 127 aminoácidos cada uno. TTR de secuencia normal forma depósitos amiloides en los ventrículos cardiacos de individuos envejecidos (>70 años de edad) ; esta enfermedad es también llamada "amiloidosis cardiaca senil". La prevalencia de amiloidosis cardiaca de TTR se incrementa progresivamente con la edad, afectando a 25% o más de la población mayor de 90 años. La ATTR de secuencia normal puede ser encontrada en autopsia incidental, o puede provocar síntomas clínicos (por ejemplo, falla cardiaca y arritmias). Mutaciones de punto en TTR incrementan la tendencia de TTR para formar amiloides. Las mutaciones TTR amiloidogénicas son heredadas como una enfermedad dominante autosomal con penetración variable. Más de 60 mutaciones de TTR amiloidogénicas son conocidas. Las mutaciones TTR más prevalentes son TTR Val30Met (común en Portugal, Jaón, Suecia), y TTR Vall22Ile (portada por 3.9% de americanos africanos). Las mutaciones TTR amiloidogénicas provocan depósitos principalmente en los nervios periféricos, corazón, tracto gastrointestinal, y cuerpo vitreo. En la amiloidosis de ß2-microglobulina, la proteína precursora es una ß-microglobulina normal (ß2M) , la cual es el componente de cadena ligera del complejo de histocompatibilidad principal. En la fijación clínica, se asocia Aß2M con pacientes en diálisis y, raramente, con pacientes con falla renal quienes no tienen diálisis. ß2M es normalmente catalizado en el riñon. En pacientes con falla renal, la proteína se acumula en el suero. Las membranas de diálisis convencionales no remueven ß2M; por lotanto, los niveles séricos pueden alcanzar tanto como 30-60 veces los valores de intervalo de referencia en pacientes con hemodiálisis. Los órganos típicos implicados incluyen el ligamento carpial y, posiblemente, las membranas sinoviales (llevando a artrofias y quistes óseos) y el corazón, tracto gastrointestinal, hígado, pulmones, próstata, nodulos adrenales y lengua. La amiloidosis amiloide (AA) es la forma más común de amiloidosis sistémica mundial. Ocurre en el transcurso de una enfermedad inflamatorio crónica de ya sea etiología infecciosa o no infecciosa. En AA, el riñon, hígado, y bazo son los sitios principales de implicamiento . La amiloidosis de apolipoproteína AI (AApoAI) es una amiloidosis dominante autosomal provcada por mutaciones punto en el gen de apoAI . Usualmente, esta amiloidosis es un amiloide renal prominente. Algunos parientes tienen enfermedad cardiaca o neuropatía periférica. ApoAI (probablemente de secuencia normal) también es el precursor fibril en placas amiloides localizadas en la aorta de gente envej ecida . La amiloidosis de apolipoproteína AII (Apoya) es una amiloidosis dominante autosomal provocada por mutaciones punto en el gen apoya. Los dos parientes descritos con este trastorno han portado cada uno una mutación de punto en el codon de terminación, llevando a la producción de una proteína anormalmente larga. La proteína precursora en amiloidosis de gelsolina (AGel) es la proteína moduladora de actina gelsolina. Las fibrillas amiloides incluyen un fragmento de gelsolina que contiene una mutación de punto. La amiloidosis de fibrinógeno (Afib) es una amiloidosis dominante autosomal provocada por mutaciones de punto en el gen de cadena alfa de fibrinógeno. La amiloidosis de lisozima (ALys) es una amiloidosis dominante autosomal provocada por mutaciones de punto en el gen de lisozima. La proteína precursora en amiloidosis de cistatina C (Asís) es cistatina C, la cual es un inhibidor de proteasa de cisteína que contiene una mutación de punto. Esta afección es nombrada clínicamente HCHWA, tipo islandia. Asís es dominante autosomal. La presentación clínica incluye infartos múltiples y cambios de estado mental que inician en la segunda o tercer década de vida. La patogénesis es una de la cistatina mutante que es amplicamente distribuida en tejidos, pero las fibrillas se forman solamente en los vasos cerebrales; por lo tanto, se cree que las condiciones locales juegan un papel en la formación de fibrillas. La proteína precursora en amiloidosis de proteína de priones (APrP) es una proteína de priones, la cual es una glicoproteína de membrana plasmática. La etiología es ya sea infecciosa (es decir, kuru) o genética (es decir, enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (CJD) , síndrome de Gerstmann-Stráusler-Scheinker (GSS), insominio familiar fatal (FFI)). La unidad infecciosa es la proteína prion, la cual induce un cambio conformacional en una proteína homólogoa codificada por un gen cromosomal huésped. Los pacientes con CJD, GSS y FFI portan mutaciones amiloidogénicas dominantes autosomales en el gen de proteína de priones, por lo tanto, amiloidosis se forma incluso en la ausencia de un accionador infeccioso. En amiloide de calcitonina (ACal), la proteína precursora es calcitonina, una hormona regulatoria de calcio sintetizada por la tiroides. Los pacientes con carcinoma medular de la tiroides pueden desarrollar deposición amiloide localizada en los tumores, los cuales consisten de procalcitonina de secuencia normal (ACal). La patogénesis declarada es producción de calcitonina local incrementada, llevando a una concentración local suficientemente alta del péptido que provoca la polimerización de formación fibrilar. En amiloidosis de polipéptido de amiloide de islote (AIAPP) , la proteína precursora es un polipéptido amiloide de islote (IAPP), también conocido como amilina. IAPP es una proteína secretada por las células beta de islote que son almacenadas con insulina en los granulos secretorios y liberados en conexión con la insulina. Normalmente, IAPP modula la actividad de insulina en músculo esquelético. El amiloide de IAPP es encontrado en insulinomas y en el páncreas de muchos pacientes con diabetes mellitus tipo 2. La amiloidosis de factor natriurético atrial esta asociada con la proteina precursora, el factor natriurético atrial (ANF por sus siglas en inglés), una sal de control de hormonas y homestasis de agua, la cual es sintetizada por el atrio cardiaco. Los depósitos amiloides son localizados en el atrio cardiaco. Esta afección es altamente prevaleciente en gente de edad. La amiloidosis del factor natriurético atrial (AANF por sus siglas en inglés) es más común en pacientes con falla cardiaca congestiva de larga duración, presumiblemente ya que la producción de ANF persiste. En amiloide de prolactina (APro) , la prolactina, o fragmentos de prolactina, son encontrados en el amiloide de pituitaria. Esta afección es con frecuencia observada en gente de edad y ha sido también reportada en un amiloidoma en un paciente con un tumor de pituitaria que produce prolactina. Los amiloides de la piel reaccionan con algunos anticuerpos antiqueratina para generar una forma localizada de amiloidosis. Sin embargo, la identidad exacta de las fibrillas no es confirmada químicamente en amiloide de queratina, pero se refieren a proteínas de amiloide de queratina (AKer) . El amiloide medial aórtico ocurre en la mayoría de la gente de más de 60 años. El amiloide de medina (AMed) es derivado de un fragmento proteolítico de lactadherina, una glicoproteína expresada por epitelio mamario.

La demencia británica familiar (FBD por sus siglas en inglés) se caracteriza neuropatológicamente por deposición de una proteína formadora de amiloide única, ABri. Es un fragmento de una forma anormal de una proteína precursora de BRI. En la demencia Danés Familiar (FDD por sus siglas en inglés), una duplicación de decámero se origina entre los codones 265 y 266 en la región 3' del gen BRI se nombra un péptido amiloide ADan, 11 residuos más grandes que el péptido del tipo silvestre producido a partir del gen BRI normal. Los depósitos de ADan han sido encontrados distribuidos ampliamente en los casos de CNS de FDD. Los depósitos de ADan son predominantemente agregados no fibrilares. Los péptidos de ABRi y ADan son fragmentos derivados de una proteína precursora anclada a membrana, más grande, nombrada proteína precursora de BRI, y codificada por el gen BRI en el cromosoma 13. El tumor de Pindborg se caracteriza por la producción de grandes cantidades de amiloide y la presencia de cuerpos laminares calcificados. La proteína amiloide asociada con este síndrome no se han nombrado todavía pero es comúnmente referida como A(tbn). Las fibrillas amiloides pueden ser formadas en la ausencia de componente amiloide P sérico (SAP) y proteoglicanos de sulfato de heparina a partir de varios polipéptidos naturales, tales como insulina. Esto da origen a la proteína amiloide, AIns, el precursor de la cual es insulina . Otra proteína, la lactoferrina, es reportada como la proteína fibrilar principal en amiloiosis corneal subepitelial familiar. Se presume que ya sea una anormalidad estructural o una concentración anormalmente incrementada en el suero da origen a la proteína amiloide Alac. Las proteínas amiloidogénicas son detectadas por los presentes compuestos de tioflavina. Los compuestos de tioflavina objetivan por lo menos una proteína amiloidogénica la cual se deriva de por lo menos un precursor de proteína seleccionado del grupo el cual consiste de cadena ligera de inmunoglobulina, cadena pesada de inmunoglobulina, transtiretina, ß2-microglobulina, (Apo) suero AA, Apolipoproteína Ai, Apolipoproteína AII, gelsolina, lisozima, fibrinógeno, alfa-cadena, cistatina C, ABriPP, ADanPP, proteína de prion, ( Pro) calcitonina, polipéptido de amiloide de islote, factor natriurético atrial, prolactina, insulina, lactadherina, querato-epitelina, tumor de Pindborg asociado a la proteína precursora de (tbn) y lactoferrina) . Son estos objetivos de proteína los cuales dan origen a diferentes síndromes o enfermedades de tejidos afectados. Ver Buxbaum, Curr. Opin. Rheumatol 16:67-75 (2003). Ver también, Merlín and Westermark, J Intern Med 255:159-178 (2004).

Se dan los siguientes ejemplos para ilustrar la presente invención. Debe ser entendido, sin embargo, que la invención no se limita a condiciones o detalles específicos descritos en estos ejemplos. En toda la especificación, cualesquiera y todas las referencias para un documento disponible públicamente, incluyendo las patentes de los Estados de Norteamérica, son incorporados específicamente para referencia como se indicia totalmente en la presente. Ejemplos Ejemplos de síntesis Ejemplo 1: Síntesis de 5-metoxi-2- (4 ' -fluorofenil) benzotiazol Esquema de reacción: reactivos y condiciones: a. NasS.9H20, reflujo, 20 horas, b. 4-fluorobenzaldehído, DMSO, 110°C, 5 horas. a. 2-amino-4-metoxitiofenol : Se lleva a reflujo una mezcla de 4-cloro-3-nitroanisol (5.0 g, 26.7 mmoles) y Na2S.9H20 (17.3, 72.1 mmoles) en agua (45 mi) bajo nitrógeno con agitación por 20 horas. Se enfría la mezcla de reacción a temperatura ambiente y se neutraliza con HCl al 5% a pH 7. Se extrae la solución acuosa con acetato de etilo (20 mi x3) . Se combinan los extractos y se secan con MgS04 y se evapora a sequedad para dar el compuesto deseado (4.1 g, 98.9%). b. 5-metoxi-2- ( 4 ' -fluorofenil) benzotiazol : Una mezcla de 2-aminno-4-metoxifenol (50 mg, 0.33 mmoles) y 4- fluorobenzaldehído (45 mg, 0.36 mmoles) en DMSO (1 mi) se calienta en 110°C por 5 horas. Se enfría la mezcla de reacción a temperatura ambiente, se vacía en agua (5 mi) , y se extrae con acetato de etilo (3 x 2 mi) . Se combinan los extractos y se lavan con agua, se secan en MgS04, se evaporan a sequedad, y se purifica el residuo con TLC preparativa (hexanos: acetato de etilo 4:1) para dar el compuesto deseado como un sólido color crema (35 mg, 40.9%) . XH-NMR (300 MHz, acetona-d6) d: 8.13-8.20(m, 2H) , 7.94(d, J=8.8 Hz, 1H) , 7.56(d, J=2. Hz, 1H) , 7.32(t, J1=J2=8.7 Hz, 2H), 7.10(dd, J?=2. Hz, J2=8.8 Hz, 1H), 3.93(s, 3H) . Ejemplo 2: Síntesis de 6-metoxi-2- (2 ' -hidroxi-4 ' -fluorofenil) benzotiazol H3C C *- HsCO?? b-F Se agrega el ácido polifosfórico ("PPA") a una mezcla de ácido 2-hidroxi-4-fluorobenzoico (61 mg, 0.39 mmoles) y 2-amino-5-metoxitiofenol (93 mg, 0.6 mmoles). Se calienta la mezcla en 140°C por 2.5 horas con agitación. Después de enfriamiento a temperatura ambiente, se agrega lentamente NaHC03 saturado en la mezcla para neutralizar PPA, y se extrae la mezcla con EtOAc. Se combinan las capas orgánicas y se evaporan a sequedad. Se separa el residuo usando TLC de gel de sílice preparativa (hexano/acetato de etilo 3/1) para dar el producto título (25 mg, 0.091 mmoles, rendimiento 93%). XH-NMR (300 MHz, CDCI3, ppm): d 12.68(br, 1H) , 7.82(d, 1H) , 7.57(dd, 1H) , 7.31(d, 1H), 7.07(dd, 1H) , 6.76(dd, 1H), 6.41(m, 1H) , 3.88(s, 3H) . Ejemplo 3: Síntesis de 6-metoxi-2- (4 ' -fluorofenil) benzoatizol Esquema de reacción: DMSO, 120°C, 2 horas Una mezcla de 2-amino-5-metoxifenol (155 mg, 1 mmoles) y 4-fluorobenzaldehído (123 mg, 1 mmol) en DMSO (2 mi) se calienta a 120°C por 2 horas. Se enfría la mezcla de reacción a temperatura ambiente, se vacía en agua (10 mi), y se extrae con acetato de etilo (3 x 10 mi) . Se combinan los extractos y se lavan con agua, se secan en MgS04, se evaporan a sequedad, y se purifica el residuo usando una columna rápida (hexanos/acetato de etilo 95/5) para dar el compuesto deseado como un sólido color crema (103 mg, 39.8%) . XH-NMR (300 MHz, acetona-d6 ppm) d: 8.14 (dd, Jl=5.3 Hz, J2=9.0 Hz, 2H) , 7.92(d, J=8.9 Hz, 1H) , 7.63(d, J=2.5 Hz, 1H), 7.33(t, J?=J2=8.7 Hz, 2H) , 7.15(dd, Jx=2.6 Hz, J2=8.9 Hz, 1H) , 3.91 (s, 3H) . Ejemplo 4: Síntesis de 2- (2 ' -amino-4 ' -fluorofenil)benzotiazol esquema de reacción: PPA, 130°C, 18 horas. Se calienta la mezcla de ácido 2-amino-4-fluorobenzoico (310 mg, 2 mmoles), 2-aminotiofenol (250 mg, 2 mmoles) y PPA (~2 g) en 130°C por 18 horas con agitación.

Después del enfriamiento a temperatura ambiente, se agrega NaHC03 saturado a la mezcla para neutralizar PPA, y se extrae la solución con EtOAc. Se combinan los extractos y se evaporan a sequedad, y se purifica el residuo con una columna rápida (hexano/acetato de etilo 4/1) para dar el producto deseado (140.7 mg, rendimiento 28.8%). XH-NMR (300 MHz, DMSO-d6 ppm) : d 8.30-8.09 (m, 2H) , 7.79(dd, Jx=6.4 Hz, J2=8.8 Hz, 1H) , 7.71(s, 2H, NH2) , 7.49-7.64 (m, 2H) , 6.75(dd, Jx=2.6 Hz, J2=11.8 Hz, 1H) , 6.58(dt, J?=J2=8.3 Hz, J3=2.6 Hz, 1H) .

Otros compuestos de benzotiazol descritos en las Tablas 1 y 2 anteriores son hechos por procedimientos análogos usando transformaciones orgánicas de rutina y substituciones conocidas para aquellos expertos en la técnica. Ejemplos Biológicos Estudios de entrada de cerebro de ratón Se diluye [F-18]-6-metoxi-2- (4" -fluorofenil) benzotiazol en etanol con solución salina normal para hacer una solución la cual contiene aproximadamente 50 µcuries por mi. Los ratones Webser Swiss del tipo silvestre son pesados, inyectados con aproximadamente 30 µcuries por medio de la vena de la cola lateral, y se sacrifican después de tiempos diferentes de la inyección. Se toma una muestra sanguínea entera por medio punción cardiaca en el momento de la muerte, y se remueve rápidamente el cerebro a partir de cada ratón también para determinar el grado de metabolismo [18F]fluoruro . Estas fracciones son ensayadas en un contador de pozos de gamma junto con una porción calibrada del inyectado, y se corrigen las muestras de descomposición al tiempo de la inyección. Se pesan las muestras, y se determina el porcentaje de dosis inyectada por gramo de tejido (%ID/g) y se normaliza para el peso corporal del ratón ( (%ID*kg/)g) .

Estudios de entrada de cerebro de babuino Se anestesian un babuino de 40 kg, se inmoviliza, y se le coloca un ventilador. Se coloca el babuino en un barredor de PET para formación de imágenes del cerebro, y se realiza un barrido de transmisión para corregir la atenuación. Se inyecta el babuino intravenosamente con una solución la cual contiene 8 mCi de [F-18]-6-metoxi-2- (4 ' -fluorofenil) benzotiazol, y se somete a formación de imágenes el cerebro en una serie de desviaciones de tiempo de colección de datos incrementada sobre una postinyección de 2 horas. Después de la adquisición de datos, se reconstruyen las imágenes y se dibujan las regiones de interés. Las curvas de actividad tiempo corregida de descomposición y atención (TAC por sus siglas en inglés) son generadas para cada una de las regiones para determinar el transcurso de tiempo cuantitativo de radioactividad en cada región cerebral. Estas TAC indican excelente penetración cerebral del radiotrazador y rápida eliminación de la radioactividad a partir del cerebro del babuino. Estas propiedades in vivo combinadas con la afinidad relativamente alta del ligando in vitro para amiloide agregado indican que el compuesto es un agente de formación de imágenes amiloide potencialmente útil. Caracterización de afinidad de enlace para péptido sintético de Aß Las características de enlace del derivado de benzotiazol son analizadas usando Aß(l-40) y 2-(4'- [3H]metilamino-fenil ) benzotiazol ([3H]BTA-1) en solución salina amortiguada con fosfato (pH 7.4), como se describe previamente. Klunk et al., Life Scie. 69:1471 (2001); Mathis et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 12:295 (2002). La tabla posterior enlista las constantes deinhibición (ki) de compuestos de benzotiazol de ejemplo mostrados para competición de enlace [3H]BTA-1 a partir de Aß(l-40). Los compuestos con valores Ki debajo de 2nM son de ejemplo para uso en radiotrazadores de Pet in vivo. 12 14 Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones:

1. Un compuesto de enlace amiloide de la Fórmula (I) o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo: caracterizado porque Y es H, -NR'3+, F, Cl, Br, I o -(CR'2)n-X; en donde X es F, Cl, Br o I; y n es 1-5. R' es H o un grupo alquilo inferior. R3-R10 son seleccionados independientemente a partir del grupo el cual consiste de H, F, Cl, Br, I, alquilo de C?~ C5, (CH2)?-3-OR??, CF3, -(CH2)?-3-X, -O- (CH2) 1-3-X, CN, -CO-Ru, -N(Rn)2, -N(R')3+, -N02, -CO-NR(Rn)2, -0-(CO)-Rn, ORn, SRn, COORn , Rph , -CR??=CR??-Rph y -C ( Ru ) 2-C ( Ru ) 2-Rph en donde X es F, Cl , Br o I ; y Rph es fenilo opcionalmente substituido con uno o más substituyentes seleccionados del grupo el cual consiste de F, Cl, Br, I, alquilo de C1-C5, (CH2) 1-3-ORu, CF3, -(CH2)?-3- X, -0-(CH2)?-3-X, CN, -CO-Ru, -N(Rn)2, -CO-N(Ru)2, -O- (CO) -Rn, ORu, SRn y COORn, cada Rn es independientemente H o alquilo de C?~C5; y Y o R3-R10 comprende por lo menos una etiqueta detectable seleccionada del grupo el cual consiste de 131I, 1231, 124I, 125I, 75Br, 75Br, 18F, 19F, X1C, 13C, 14C y 3H .

2. El compuesto de enlace amiloide de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque cada uno de R3, R4, R5 y R5, R7, y R10 es H, y R8, y Rg son independientemente ORn-

3. El compuesto de enlace amiloide de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque Y comprende la etiqueta detectable.

4. El compuesto de enlace amiloide de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el compuesto es seleccionado del grupo el cual consiste de: 25

5. El compuesto caracterizado porque se selecciona del grupo el cual consiste de:

6. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende (i) una cantidad efectiva de un compuesto de enlace amiloide de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-6; y (ii) un portador aceptable farmacéuticamente.

7. Un método para detectar el depósito amiloide in vivo, caracterizado porque comprende: (i) administrar a un mamífero una cantidad efectiva de un compuesto de enlace amiloide de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en ' donde el compuesto puede enlazar cualquier depósito amiloide en el mamífero; y (ii) detectar el enlace del compuesto al depósito amiloide en el mamífero.

8. Un método para detectar el depósito amiloide in vitro caracterizado porque comprende: (i) poner en contacto un tejido corporal con una cantidad efectiva de compuesto de enlace amiloide de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1- 5, en donde el compuesto puede enlazar cualquier depósito amiloide en el tejido; y (ii) detectar el enlace del compuesto al depósito amiloide en el tejido.

9. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque además comprende, (iii) separar a partir del tejido el depósito amiloide enlazado al compuesto; y (iv) cuantificar el depósito amiloide enlazado al compuesto inventivo.

10. Un método para distinguir un cerebro con enfermedad de Alzheimer a partir de cerebro normal caracterizado porque comprende: (i) obtener tejidos a partir de (i) el cerebelo y (ii) otra área del mismo cerebro, de un mamífero normal y de un mamífero que se sospecha tiene la enfermedad de Alzheimer; (ii) poner en contacto los tejidos con un compuesto de enlace amiloide de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-5; (iii) cuantificar el enlace amiloide al compuesto; (iv) calcular la proporción de (a) la cantidad de amiloide en el área del cerebro diferente al cerebelo con la (b) cantidad de amiloide en el cerebelo; y (v) comparar la proporción para un mamífero normal con la proporción para un mamífero que se sospecha tiene la enfermedad de Alzheímer.

11. El método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque la proporción de (i) enlace del compuesto a un área cerebral diferente al cerebelo a (ii) enlace del compuesto al cerebelo, en el sujeto, es comparada con la proporción en sujetos normales.

12. Un método para detectar los depósitos amiloides en biopsia o tejido humano o animal post-mortem, caracterizado porque comprende las etapas de: (a) incubar el tejido fijo con formalina o congelado en fresco con una solución de un compuesto de enlace de amiloide de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-5; y (b) detectar el depósito etiquetado.

13. Un método para cuantificar la cantidad de amiloide en biopsia o tejido post-mortem caracterizado porque comprende las etapas de: a) incubar un derivado radioetiquetado de un compuesto de enlace amiloide de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-5; b) separar el derivado radioetiquetado no enlazado a tejido a partir del enlazado a tejido del compuesto; c) cuantificar el derivado radioetiquetado enlazado a tejido del compuesto; d) convertir las unidades de derivado radioetiquetado enlazado a tejido de un compuesto de a unidades de microgramos de amiloide por 100 mg de tejido en comparación con un estándar.

14. Un método para enlazar selectivamente un compuesto de enlace amiloide de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo a placas amiloides pero no ovillos neurofibrilares en tejido cerebral el cual contiene ambos, caracterizado porque comprende poner en contacto las placas amiloides en ensayos de tinción o enlace in vitro con un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-5 en una concentración abajo de aproximadamente 10 nM .

15. Un método para enlazar selectivamente in vivo un compuesto de enlace amiloide de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo a placas amiloides pero no ovillos neurofibrilares en tejido cerebral el cual contiene ambos, caracterizado porque comprende administrar una cantidad efectiva de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-5 o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo de tal forma que la concentración sanguínea del compuesto administrado permanece abajo de aproximadamente 10 nM.

16. Un método ín vivo o ín vitro para detectar en un sujeto por lo menos un depósito amiloide el cual comprende por lo menos una proteína amiloidogénica, caracterizado porque comprende las etapas de: (c) administrar a un sujeto el cual sufre de una enfermedad asociada con amiloidosis, una cantidad detectable de una composición farmacéutica la cual comprende por lo menos un compuesto de enlace amiloide de conformidad con las reivindicaciones 1-5, o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo y un portador aceptable farmacéuticamente ; y (d) detectar el enlace del compuesto a un depósito amiloide el cual comprende por lo menos una proteína amiloidogénica .

17. Un método para identificar un paciente como prodromal para una enfermedad asociada con deposición amiloide caracterizado porque comprende:; (a) administrar al paciente, quien está presentando signos de demencia clínica o signos clínicos de un daño cognitivo leve, un compuesto de enlace amiloide de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-5 o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo; entonces (b) someter a formación de imágenes al paciente para obtener datos; y (c) analizar los datos para determinar los niveles amiloides en el paciente con referencia al nivel normativo, por lo mismo identificando el paciente como prodromal para una enfermedad asociada con deposición amiloide.

18. Un método para determinar la eficacia de terapia en el tratamiento de amiloidosis, caracterizado porque comprende: (a) administrar al paciente en necesidad del mismo una cantidad efectiva de compuesto de enlace amiloide de conformidad con cualquiera de la reivindicaciones 1-5 o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo; (b) someter a formación de imágenes al paciente; después (c) administrar al paciente en necesidad del mismo por lo menos un agente anti-amiloide; (d) administrar subsecuentemente al paciente en necesidad del mismo una cantidad efectiva de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1- 5; (e) someter a formación de imágenes al paciente; y (f) comparar los niveles de deposición amiloide en el paciente antes del tratamiento con el por lo menos agente anti-amiloide a niveles de deposición amiloide en el paciente después del tratamiento con el por lo menos agente anti-amiloide.