MX2008006944A - Anticuerpos monoclonales humanos para o8e - Google Patents

Abstract

La presente descripción proporciona anticuerpos monoclonales aislados, particularmente anticuerpos monoclonales humanos que ligan específicamente a O8E con alta afinidad. Moléculas deácido nucleico que codifican los anticuerpos deésta descripción, vectores de expresión, células anfitrionas y métodos para expresar los anticuerpos deésta descripción también se proporcionan. También se proporcionan inmunoconjugados, moléculas biespecíficas y composiciones farmacéuticas que comprenden los anticuerpos deésta descripción. Esta descripción también proporciona métodos para tratar cáncer.

Description

ANTICUERPOS MONOCLONALES HUMANOS PARA Q8E REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud reclama prioridad de la Solicitud Provisional de Patente de los E.U.A. Número de Serie 60/748,914, presentada en diciembre 8, 2005, y la Solicitud Provisional de Patente de los E.U.A. Número de Serie 60/824,593, presentada en septiembre 5, 2006, ambas de las cuales aquí se incorporan por referencia. CAMPO TÉCNICO La presente descripción se refiere en general a los campos de inmunología y biología molecular. Más específicamente, aquí se proporcionan anticuerpos monoclonales anti-08E humanos, ácidos nucleicos que codifican anticuerpos monoclonales anti-08E humanos, métodos para preparar anticuerpos monoclonales anti-08E humanos y métodos para tratamiento de enfermedades, tales como cánceres, caracterizados por el crecimiento de células que expresan 08E. ANTECEDENTES Los cánceres de mama y de ovarios son la segunda y cuarta causas principales respectivamente de muertes por cáncer en mujeres en los E.U.A. (American Cáncer Society (2005) Cáncer facts and figures) . La American Cáncer Society (Sociedad Americana de Cáncer) ha estimado que, en los E.U.A. aproximadamente 40,000 mujeres morirán de cáncer de mama y aproximadamente 16,000 morirán de cáncer de ovarios en el 2005. Tumores epiteliales superficiales representan más de 80% de todas las malignidades de ovarios, que incluyen tumores serosos, tumores mucinosos, tumores endometroides y carcinomas de células claras (Seidman et al. "Blaustein' s Pathology of the Female Genital Tract" 791 -4 (Kurman, editor, 5a ed. New York, Springer- Verlag, 2002) . Los cánceres de ovarios frecuentemente se presentan en una etapa avanzada cuando la enfermedad metastásica se ha diseminado a sitios regionales y distantes (Pettersson, (1994) Int. Fed. OfGyn. and Obstetrics, Vol. 22; y Heintz et al (2001) J. Epidermiol . Biostat . 6: 107-38). De esta manera, mientras que la probabilidad de vida de desarrollar cáncer de mama es significativamente superior que para cáncer de ovarios, la tasa de supervivencia a cinco años para pacientes con cánceres de mama es sustancialmente mejor que para aquéllas con cáncer de ovarios . Las moléculas tipo B7 pertenecen a la superfamilia de inmunoglobulinas (Ig) . La porción extra celular de moléculas tipo B7 contienen dominios sencillos IgV y IgC comparten ~20%-40% de identidad de aminoácidos. Moléculas tipo B7 juegan papeles críticos en el control y ajuste fino de inmuo respuestas específicas de antígeno. 08E, también conocido como B7H4 , B7x y B7S1, es un miembro de la familia B7 y se considera que juega un papel tanto en la regulación inhibitoria y estimulatoria de respuestas de células T (Carreno et al, (2002) Ann. Rev. Immunol . 20:29-53 and Khoury et al, (2004) Immunity 20:529-538). 08E humano se ha cartografiado en el cromosoma 1 y comprende seis exones y conco intrones que se extienden 66 kb, de los cuales el exón 6 se utiliza para combinación alterna para generar dos transcripciones diferentes (Choi et al. (2003) J. Immunol. 171:4650-4654). 08E ejerce su función fisiológica al ligar a un receptor en células T, que a su vez induce freno del ciclo celular e inhibe la secreción de citocinas, el desarrollo de citotoxicidad y producción de citocina de células CD4+ y CD8+ T (Prasad et al. (2003) Immunity 18:863-873; Sica et al. (2003) Immunity 18:849-861; Wang et al (2004) Microbes Infect . 6:759-66; y Zang et al. (2003) Proc. Nati. Acad. Sci. U. S. A. 100: 10388-10392). Se ha sugerido que 08E puede hacer un atenuador de respuestas inflamatoria y puede servir para un papel en regulación a la baja de respuestas anti tumor e inmune específicas de antígeno (Zang et al. (2003) Proc Nati. Acad. Sci. U. S. A. 100: 10388-10392; Prasad et al (2003) Immunity 18: 863-873; Sica et al. (2003) Immunity 18: 849-861; Choi et al (2003) J. Immunol . 121: 4650-4654; y Carreno et al. (2003) Trends Immunol . 24: 524-7). ARNm 08E pero sin la expresión de proteína se ha detectado en un amplio intervalo de tejidos somáticos normales, incluyendo hígado, músculo esquelético, riñon, páncreas e intestino delgado (Sica et al. (2003) Immunity 1£:849-61 y Choi et al. (2003) J. Immunol . 121:4650-4). 08E es inducible al estimular células T, células B, monocitos y células dendríticas; sin embargo, el análisis inmunohistoquímico ha revelado poca expresión en varios tejidos periféricos excepto por tinción positiva en algunos cánceres de ovarios y de pulmón (Id.) . Además, 08E se sobre expresa consistentemente en cáncer de mama primario y metastásico, independientemente del grado o etapa de tumor, sugiriendo un papel crítico para esta proteína en la biología de cáncer de mama (Tringler et al. (2005) Clinical Cáncer Res. U: 1842-48). Ver también Patentes de los E.U.A. Números 6,962,980; 6,699,664; 6,468,546; 6,488,931; 6,670,463 y 6,528,253, las cuales se incorporan aquí por referencia en su totalidad. Una amplia variedad de modalidades terapéuticas están disponibles para el tratamiento de cánceres de mama y ovarios avanzados, incluyendo radioterapia, quimioterapia convencional con agentes antitumor citotóxicos, terapia de hormonas (inhibidores de aromatasa, análogos de hormonas de liberación de hormona luteínizante) , bisfosfonatos e inhibidores de traducción de señal (Smith (2002) Lancet, 360:790-2). Desafortunadamente, sin embargo muchas pacientes ya responden deficientemente o no responden de hecho a ninguna de estas modalidades terapéuticas. De esta manera, hay necesidad por identificar nuevos marcadores moleculares para y agentes terapéuticos contra cánceres de mama y ovarios. De acuerdo con esto, 08E representa un objetivo valioso para el tratamiento de cánceres, incluyendo cánceres de ovarios y mamá y una variedad de otras enfermedades caracterizadas por expresión de 08E. COMPENDIO La presente descripción proporciona anticuerpos monoclonales aislados, en particular anticuerpos monoclonales de secuencia humana, que ligan a 08E (a/k/a B7H4, B7S1 y B7x) y que exhiben numerosas propiedades convenientes. Estas propiedades incluyen enlaces de alta afinidad a 08E. También se proporcionan métodos para tratar una variedad de enfermedades medianas por 08E utilizando los anticuerpos y composiciones de esta descripción. En un aspecto, esta descripción se refiere a un anticuerpos monoclonal aislado o su porción de enlaces de antígeno, en donde el anticuerpo: (a) liga a 08E humano con una KD de lxlO"7 M o menos; y (b) liga a células CHO humanas transfectadas con 08E. En ciertas modalidades, el anticuerpo liga a una línea celular de tumor de un carcinoma de célula de mama, tales como la línea celular SKBR3 (ATCC Número de Acceso HTB-30) . Típicamente, el anticuerpo es un anticuerpo humano, aunque en modalidades alternas el anticuerpo puede ser un anticuerpo murino, un anticuerpo quimérico o anticuerpo humanizado. En una modalidad, el anticuerpo liga a 08E humano con una KD de 5 x 10~8 M o menos, liga a 08E humano con un KD de 2 x 10"8 M o menos, liga a 08E con un KD de 1 x 10"8 M o menos, liga a 08E humano con un KD de 5 x 10~9 M o menos, liga a 08E humano con un KD de 4 x 10~9 M o menos, liga a 08E humano con un KD de 3 x 10~9 M o menos o liga a 08E humano con un KD de 2 x 10"9 M o menos. En otra modalidad, el anticuerpo se internaliza por células de tumor de carcinoma de células de mama SKBR3 después de ligar a 08E expresado en esas células. En otra modalidad, esta descripción proporciona un anticuerpo monoclonal aislado o una porción de enlace de antígeno del mismo, en donde el anticuerpo compite en forma cruzada para enlace con 08E con un anticuerpo de referencia, en donde el anticuerpo de referencia: (a) liga a 08E humano con a KD de lxlO"7 M o menos; y (b) liga a células CHO humanas transfectadas con 08E. En diversas modalidades, el anticuerpo de referencia comprende : (a) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1; y (b) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 6; o el anticuerpo de referencia comprende: (a) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2; y (b) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7; o el anticuerpo de referencia comprende: (a) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3; y (b) una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 8; o el anticuerpo de referencia comprende: (a) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4; y (b) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9; o el anticuerpo de referencia comprende: (a) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5 (b) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10. En un aspecto, la descripción se refiere a un anticuerpo monoclonal aislado o su porción de enlace de antígeno, que comprende una región variable de cadena pesada que es el producto de o derivado del gen VH 4-34 (el producto de proteínas el cual se presenta aquí como SEQ ID NO: 51) , en donde el anticuerpo liga específicamente 08E. Esta descripción también proporciona un anticuerpo monoclonal aislado o su porción de enlace de antígeno, que comprende una región variable de cadena pesada que es el producto de o derivado del gen VH 3-53 humana (el producto de proteína del cual se presenta aquí como SEQ ID NO: 52), en donde el anticuerpo liga específicamente 08E. Esta descripción también proporciona un anticuerpo monoclonal aislado o su porción de enlace de antígeno, que comprende una región variable de cadena pesada que es el producto de o derivado de una combinación de genes VH 3-9/D3-10/JH6b humanas (el producto de proteína del cual se presenta aquí como SEQ ID NO: 53), en donde el anticuerpo específicamente liga 08E. Esta descripción aún más proporciona un anticuerpo monoclonal aislado o su porción de enlace de antígeno, que comprende una región variable de cadena ligera que es el producto de o derivada de un gen V? A27 humana (el producto de proteína del cual se presenta aquí como SEQ ID NO: 54), en donde el anticuerpo específicamente liga 08E. Esta descripción aún más proporciona un anticuerpo monoclonal aislado o su porción de enlace de antígeno, que comprende una región variable de cadena ligera que es el producto de o derivado de una combinación de genes V? L6/JK1 humanos (el producto de proteína del cual se presenta aquí como SEQ ID NO: 55), en donde el anticuerpo liga específicamente 08E. En otros aspectos, esta descripción proporciona un anticuerpo monoclonal aislado o su porción de enlace de antígeno, que comprende: (a) una región variable de cadena pesada de un gen VH 4-34, 3-53 o 3-9; y (b) una región variable de cadena ligera de un V? A27 o V? L6 humana; en donde el anticuerpo específicamente liga a 08E. En una modalidad relacionada, el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada de un gen VH 4-34 humano y una región variable de cadena ligera de un gen V? A27 humano. En otra modalidad relacionada, el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada de un gen VH 3-53 humana, y una región variable de cadena ligera de un gen V? A27 humano. Todavía en otra modalidad relacionada, el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada de un gen VH 3-9 humano, y una región variable de cadena ligera de un gen V? L6 humano. Todavía en otro aspecto, la presente descripción proporciona un anticuerpo monoclonal aislado o su porción de enlace de antígeno, que comprende: una región variable de cadena pesada que comprende las secuencias CDRl, CDR2 y CDR3 ; y una región variable de cadena ligera que comprende las secuencias CDRl, CDR2 y CDR3 , en donde: (a) la secuencia de región variable de cadena pesada CDR3 comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NOs: 21, 22, 23, 24 y 25 y sus modificaciones conservadoras,- (b) la secuencia de región variable de cadena ligera CDR3 comprende una secuencia de aminoácidos seleccionado del grupo que consiste de las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NOs : 36, 37, 38, 39 y 40 y sus modificaciones conservadoras; (c) el anticuerpo liga a 08E humano con una KD de lxlO"7 M o menos; (d) liga a células CHO humanas tranfectadas con 08E. Típicamente, la secuencia de región variable de cadena pesada CDR2 comprende una secuencia de aminoácidos seleccionado del grupo que consiste de secuencias de aminoácidos de SEQ ID NOs: 16, 17, 18, 19 y 20 y sus modificaciones conservadoras; y la secuencia de la región variable de cadena ligera CDR2 comprende una secuencia de aminoácidos seleccionado del grupo que consiste de secuencias de aminoácidos de SEQ ID NOs : 31, 32, 33, 34 y 35 y sus modificaciones conservadoras. Típicamente, la secuencia de la región variable de cadena pesada CDRl comprende una secuencia de aminoácidos seleccionado del grupo que consiste de secuencias de aminoácidos de SEQ ID NOs : 11, 12, 13, 14 y 15 y sus modificaciones conservadoras; y la secuencia de la región variable de cadena ligera CDRl comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NOs: 26, 27, 28, 29 y 30 y sus modificaciones conservadoras. Una combinación particular comprende: (a) una región variable de cadena pesada CDRl que comprende SEQ ID NO: 11; (b) una región variable de cadena pesada CDR2 que comprende SEQ ID NO: 16; (c) una región variable de cadena pesada CDR3 que comprende SEQ ID NO: 21; (d) una región variable de cadena ligera CDRl que comprende SEQ ID NO : 26; (e) una región variable de cadena ligera CDR2 que comprende SEQ ID NO: 31; y (f) una región variable de cadena ligera CDR3 que comprende SEQ ID NO: 36. Otra combinación particular comprende: (a) una región variable de cadena pesada CDRl que comprende SEQ ID NO: 12; (b) una región variable de cadena pesada CDR12 que comprende SEQ ID NO: 17; (c) una región variable de cadena pesada CDR3 que comprende SEQ ID NO: 22; (d) una región variable de cadena ligera CDRl que comprende SEQ ID NO: 27; (e) una región variable de cadena ligera CDR2 que comprende SEQ ID NO: 32; y (f) una región variable de cadena ligera CDR3 que comprende SEQ ID NO: 37. Otra combinación particular comprende: (a) una región variable de cadena pesada CDRl que comprende SEQ ID NO: 13; (b) una región variable de cadena pesada CDR2 que comprende SEQ ID NO : 18; (c) una región variable de cadena pesada CDR3 que comprende SEQ ID NO: 23; (d) una región variable de cadena ligera CDRl que comprende SEQ ID NO: 28; (e) una región variable de cadena ligera CDR2 que comprende SEQ ID NO: 33; y (f) una región variable de cadena ligera CDR3 que comprende SEQ ID NO: 38. Otra combinación particular comprende: (a) una región variable de cadena pesada CDRl que comprende SEQ ID NO : 14 ; (b) una región variable de cadena pesada CDR2 que comprende SEQ ID NO: 19; (c) una región variable de cadena pesada CDR3 que comprende SEQ ID NO: 24; (d) una región variable de cadena ligera CDRl que comprende SEQ ID NO: 29; (e) una región variable de cadena ligera CDR2 que comprende SEQ ID NO: 34; y (f) una región variable de cadena ligera CDR3 que comprende SEQ ID NO: 39. Otra combinación particular comprende: (a) una región variable de cadena pesada CDRl que comprende SEQ ID NO: 15; (b) una región variable de cadena pesada CDR2 que comprende SEQ ID NO: 20; (c) una región variable de cadena pesada CDR3 que comprende SEQ ID NO: 25; (d) una región variable de cadena ligera CDRl que comprende SEQ ID NO : 30; (e) una región variable de cadena ligera CDR2 que comprende SEQ ID NO: 35; y (f) una región variable de cadena ligera CDR3 que comprende SEQ ID NO: 40. Otros anticuerpos particulares de esta descripción o sus porciones de enlace de antígeno comprende : (a) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1; y (b) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 6. Otra combinación particular comprende: (a) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2; y (b) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7. Otra combinación particular comprende: (a) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3; y (b) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 8. Otra combinación particular comprende: (a) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4; y (b) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9. Otra combinación particular comprende: (a) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5; y (b) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10. En otro aspecto de esta descripción, anticuerpos o porciones de enlaces de antígeno de los mismos, se proporcionan que compiten para enlace con 08E con cualquiera de los anticuerpos anteriormente mencionados . Los anticuerpos de esta descripción por ejemplo pueden ser anticuerpos de longitud integra, por ejemplo de un isotipo IgGl, IgG2 o IgG4. En forma alterna, los anticuerpos pueden ser fragmentos de anticuerpos tales como fragmentos Fab, Fab1 o Fab ' 2 o anticuerpos de cadena sencilla (por ejemplo scFv) .

Esta descripción también proporciona un inmunoconjugado que comprende un anticuerpo de esta descripción o su porción de enlace de antígeno ligada a un agente terapéutico, tal como una citotoxina o un isótopo radiactivo. Esta descripción proporciona una molécula biespecífica que comprende un anticuerpo o su porción de enlace de antígeno, de esta descripción, enlazado con una segunda porción funcional que tiene una especificidad de enlace diferente que el anticuerpo o su porción de enlace de antígeno. Composiciones que comprenden un anticuerpo o su porción de enlace de antígeno o inmunoconj ugado o molécula biespecífica de ésta descripción y un portador farmacéuticamente aceptable también se proporcionan. Moléculas de ácido nucleico que codifica los anticuerpos o sus porciones de enlace de antígeno de esta descripción también se abarcan por esta descripción, así como vectores de expresión que comprenden estos ácidos nucleicos, células anfitrionas que comprenden estos vectores de expresión y métodos para producir anticuerpos anti- 08E utilizando dichas células anfitrionas. Aún más, esta descripción proporciona un ratón transgénico que comprende transgenes de cadena ligera y pesada de inmunoglobulina humana, en donde el ratón expresa un anticuerpo de esta descripción, así como los hibridomas preparados de este ratón, en donde el hibridoma produce el anticuerpo de esta descripción. Todavía en otro aspecto, esta descripción proporciona un método para tratar o evitar una enfermedad, caracterizado por el desarrollo de células de tumor que expresan 08E, que comprende administrar a un sujeto un anticuerpo anti-08E humano de la presente descripción en una cantidad efectiva para tratar o evitar la enfermedad. La enfermedad puede ser un cáncer, por ejemplo cáncer-carcinoma de células de mama. Todavía en otro aspecto, esta descripción proporciona un método para tratar un desorden auto inmune, que comprende administrar a un sujeto un anticuerpo anti-08E humano de la presente descripción en una cantidad efectiva para tratar el desorden auto inmune . Otras características y ventajas de la presente descripción serán aparentes de la siguiente descripción detallada y ejemplos que no habrán de considerarse como limitantes. Los contenidos de todas las referencias, entradas a Genbank, patentes y solicitudes de patente publicadas citadas a través de esta solicitud se incorporan expresamente aquí por referencia. BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS E IDENTIFICADORES DE SECUENCIA La figura 1A muestra la secuencia de nucleótidos (SEQ ID NO: 41) y la secuencia de aminoácidos (SEQ ID NO: 1) de la región variable de cadena pesada del anticuerpo monoclonal humano IG11. Las regiones CDRl (SEQ ID NO: 11), CDR2 (SEQ ID NO: 16) y CDR3 (SEQ ID NO: 21) están delineadas y se indican las derivaciones de línea germinal V y J. La figura IB muestra la secuencia de nucleótidos (SEQ ID NO: 46) y las secuencia de aminoácidos (SEQ ID NO: 6) de la región variable de cadena ligera del anticuerpo monoclonal humano IG11. Las regiones CDRl (SEQ ID NO: 26) , CDR2 (SEQ ID NO: 31) y CDR3 (SEQ ID NO: 36) están delineadas y se indican las derivaciones de línea germinal V y J. La figura 2A muestra la secuencia de nucleótidos (SEQ ID NO: 42) y la secuencia de aminoácidos (SEQ ID NO: 2) de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo monoclonal humano 2A7. Las regiones CDRl (SEQ ID NO: 12) , CDR2 (SEQ ID NO: 17) y CDR3 (SEQ ID NO: 22) están delineadas y se indican las derivaciones de línea germinal V, D, y J. La figura 2B muestra la secuencia de nucleótidos (SEQ ID NO: 47) y la secuencia de aminoácidos (SEQ ID NO: 7) de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo monoclonal humano 2A7. Las regiones CDRl (SEQ ID NO: 27), CDR2 (SEQ ID NO: 32) y CDR3 (SEQ ID NO: 37) están delineadas y se indican las derivaciones de línea germinal V y J. La figura 3A muestra la secuencia de nucleótidos (SEQ ID NO: 43) y la secuencia de aminoácidos (SEQ ID NO: 3) de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo monoclonal humano 2F9. Las regiones CDRl (SEQ ID NO: 13) , CDR2 (SEQ ID NO: 18) y CDR3 (SEQ ID NO: 23) se delinean y se indican las derivaciones de línea germinal V, D y J. La figura 3B muestra la secuencia de nucleótidos (SEQ ID NO: 48) y la secuencia de aminoácidos (SEQ ID NO: 8) de la región variable de cadena ligera del anticuerpo monoclonal humano 2F9. Las regiones CDRl (SEQ ID NO: 28), CDR2 (SEQ ID NO: 33) y CDR3 (SEQ ID NO: 38) se delinean y se indican las derivaciones de línea germinal V y J. La figura 4A muestra la secuencia de nucleótidos (SEQ ID NO: 44) y las secuencias de aminoácidos (SEQ ID NO: 4) de la región variable de cadena pesada del anticuerpo monoclonal humano 12E1. Las regiones CDRl (SEQ ID NO: 14), CDR2 (SEQ ID NO : 19) y CDR3 (SEQ ID NO: 24) se delinean y se indican las derivaciones de línea germinal V, D y J. La figura 4B muestra la secuencia de nucleótidos (SEQ ID NO: 49) y las secuencias de aminoácidos (SEQ ID NO: 9) de la región variable de cadena ligera del anticuerpo monoclonal humano 12E1. Las regiones CDRl (SEQ ID NO: 29), CDR2 (SEQ ID NO: 34) y CDR3 (SEQ ID NO: 39) se delinean y se indican las derivaciones de línea germinal V y J. La figura 5A muestra la secuencia de nucleótidos (SEQ ID NO: 45) y las secuencias de aminoácidos (SEQ ID NO: 5) de la región variable de cadena pesada del anticuerpo monoclonal humana 13D12. Las regiones CDRl (SEQ ID NO: 15), CDR2 (SEQ ID NO: 20) y CDR3 (SEQ ID NO: 25) se delinean y se indican las derivaciones de línea germinal V, D y J. La figura 5B muestra la secuencia de nucleótidos (SEQ ID NO: 50) y las secuencias de aminoácidos (SEQ ID NO: 10) de la región variable de cadena ligera del anticuerpo monoclonal humana 13D12. Las regiones CDRl (SEQ ID NO: 30), CDR2 (SEQ ID NO: 35) y CDR3 (SEQ ID NO: 40) se delinean y se indican las derivaciones de línea germinal V y J. La figura 6 muestra el alineamiento de la secuencia de aminoácidos de la región variable de cadena pesada de IG11 y 13D12 con la secuencia de aminoácidos VH 4-34 línea germinal humana (SEQ ID NO: 51) . La figura 7 muestra el alineamiento de la secuencia de aminoácidos de la región variable de cadena pesada de 2A7 y 2F9 con la secuencia de aminoácidos VH 3-53 de línea germinal humana (SEQ ID NO: 52) . La figura 8 muestra el alineamiento de la secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena pesada de 12E1 con la secuencia de aminoácidos VH 3-9/D3-10/JH6b de línea germinal humana combinada (SEQ ID NO: 53) . La figura 9 muestra el alineamiento de la secuencia de aminoácidos de la región variable de cadena ligera de IG11, 2A7 , 2F9 y 13D12 con la secuencia de aminoácidos V? A27 línea germinal humana (SEQ ID NO: 54) . La figura 10 muestra el alineamiento de la secuencia de aminoácidos de la región variable de cadena ligera de 12E1 con la secuencia de aminoácidos V? L6/JK1 de línea germinal humana combinada (SEQ ID NO: 55) . Las figuras HA y 11B muestran los resultados de experimentos ELISA que demuestran que anticuerpos monoclonales humanas contra 08E humano ligan específicamente 08E. La figura HA muestra resultados de una placa ELISA revestida con anticuerpos anti-08E humanos seguida por la adición de proteína 08E purificada y detección con anti-suero anti-08E de conejo. La figura 11B muestra resultados de una placa ELISA que se reviste con Fc anti-ratón seguido por anti-C9 monoclonal (0.6 µg/ml) , después titula con proteína penta-08E como se indica y seguido por anticuerpos anti-08E humanos a 1 µg/ml . La figura 12 muestra los resultados de experimentos de citometría de flujo que demuestran que el anticuerpo monoclonal humano anti-08E 2A7 liga con células CHO transfectadas con 08E. La figura 13 muestra los resultados de experimentos de citometría de flujo que demuestran expresión de 08E en células de carcinoma de mama SKBR3 así como células SKO V3 y HEK transfectadas con 08E. La figura 14 muestra los resultados de experimentos de internalización Hum-Zap que demuestran que anticuerpos monoclonales humanos contra 08E humanos pueden internalizarse en células CHO o 08E+. La figura 15 muestra resultados de experimentos de internalización Hum-Zap que demuestran que anticuerpos monoclonales humanos contra 08E humanos pueden internalizarse en células 08E+ SKBR3. La figura 16 muestra los resultados de estudios de cartografía de epítope con diversos anticuerpos monoclonales anti-08E humanos incluyendo IG11, 2A7 , 2F9 y 13D12. La figura 17 muestra los resultados de ensayos de citotoxicidad celular dependiente de anticuerpo (ADCC= antibody dependent cellular cytotoxicity) que demuestran que anticuerpos anti-08E monoclonales humanos exterminan a la línea celular de cáncer de mama humana SKBR3 en una forma dependiente de ADCC . La figura 18 muestra los resultados de ensayos de citotoxicidad celular dependiente de anticuerpo (ADCC= antibody dependent cellular cytotoxicity) que demuestra que los anticuerpos anti-08E monoclonales humanos exterminan células SK0V3 transfectadas con 08E en una forma dependiente de ADCC. La figura 19 muestra los resultados de ensayos de citotoxicidad celular dependiente de anticuerpo (ADCC= antibody dependent cellular cytotoxicity) que demuestran que los anticuerpos anti-08E monoclonales humanos exterminan la línea celular de cáncer de mama humana SKBR3 en una forma dependiente de concentración y ADCC. La figura 20 muestra los resultados de estudios in vivo en ratones SCID que muestran inhibición de crecimiento de tumor de tumores HEK-B7H4 por anticuerpos anti-08E. DESCRIPCIÓN DETALLADA La presente descripción se refiere a anticuerpos monoclonales aislados, particularmente anticuerpos monoclonales de secuencia humana que ligan específicamente 08E (a/k/a B7H4 , B7S1 y B7x) con alta afinidad. En ciertas modalidades, los anticuerpos de esta descripción se derivan de secuencias de línea germinal de cadena pesada y ligera particulares y/o comprenden características estructurales particulares tales como regiones CDR que comprenden secuencias de aminoácidos particulares. Esta descripción proporciona anticuerpos aislados, métodos para producir estos anticuerpos, inmuno-conjugados y moléculas biespecíficas que comprenden estos anticuerpos y composiciones farmacéuticas que contienen los anticuerpos, inmuno-conjugados o moléculas biespecíficas de esta descripción. Esta descripción también se refiere a métodos para utilizar los anticuerpos, tal como para detectar 08E, así como para tratar enfermedades asociadas con la expresión de 08E tal como cáncer. De acuerdo con esto, esta descripción también proporciona métodos para utilizar los anticuerpos anti-08E de esta descripción para tratar diversos cánceres, por ejemplo el tratamiento de carcinomas de células de mama, cánceres de mama metastásicos, carcinomas de células de ovarios, cánceres de ovarios metastásicos y carcinomas de células renales. A fin de que la presente descripción pueda comprenderse más fácilmente, ciertos términos se definen primero. Definiciones adicionales se establecen a través de la descripción detallada.

Los términos cevador "B7H4," "B7x" y "B7S1" se emplean aquí en forma intercambiable e incluyen variantes, isoformas, homólogos, ortólogos y parálogos de 08E humano. Por ejemplo, anticuerpos específicos para 08E pueden en ciertos casos reaccionar en forma cruzada con 08E de especies diferentes a humanas. En otras modalidades, los anticuerpos específicos para 08E humano pueden ser completamente específicos para 08E humano y pueden no exhibir especies u otros tipos de reactividad cruzada. El término "humana 08E" se refiere a la secuencia humana 08E, tal como la secuencia de aminoácidos completa de 08E humano que tiene Número de acceso Genbank NP_078902 (SEQ ID NO: 56) . 08E también se conoce en la técnica como, por ejemplo BL-CAM, B3 , Leu-14 y Lyb-8. La secuencia 08E humana puede diferir de 08E humano de SEQ ID NO: 56, al tener por ejemplo mutaciones conservadas o mutaciones en regiones no conservadas y el CD22 substancialmente tiene la misma función biológica que el 08E humano de SEQ ID NO-.56. Por ejemplo, una función biológica de 08E humano es tener un epítope en el dominio extracelular de 08E que se liga específicamente por un anticuerpo de la presente descripción o una función biológica de 08E humano que incluye por ejemplo inhibición de proliferación de células T, inhibición de producción de citosina, inhibición de producción de ciclos celular, o enlace a receptores de células T. Una secuencia de 08E humana particular generalmente será al menos 90 por ciento idéntica en secuencia de aminoácidos a 08E humano de SEQ ID NO.56 y contiene residuos aminoácidos que identifican la secuencia de aminoácidos como humana cuando se compara con las secuencias de aminoácidos 08E de otras especies (por ejemplo , murina) . En ciertos casos, una 08E humana puede ser al menos 95 por ciento o incluso al menos 96 por ciento, 97 por ciento, 98 por ciento, o 99 por ciento idéntica en secuencia de aminoácidos a 08E de SEQ ID NO: 56. En ciertas modalidades, una secuencia 08E humana exhibirá no mas de 10 diferencias de aminoácidos de 08E de SEQ ID NO: 56. En ciertas modalidades, el 08E humano puede exhibir no más de 5 o incluso no más de 4 , 3, 2, o 1 de diferencia de aminoácidos de 08E de SEQ ID NO: 56. El por ciento de identidad puede determinarse como se describe aquí . El término "respuesta inmune" se refiere a la acción de, por ejemplo linfocitos, células que presentan antígeno, células fagocíticas, granulocitos y macromoléculas solubles producidas por las células anteriores o el hígado (incluyendo anticuerpos, citosinas y complemento) que resultan en daño selectivo a, destrucción o eliminación del cuerpo humano de patógenos invasores, células o tejidos infectados con patógenos, células cancerosas o en el caso de auto-inmunidad o inflamación patológica, células o tejidos humanos normales . Una "ruta de transducción de señal" se refiere a la relación bioquímica entre una variedad de moléculas de transducción de señal que juega un papel en la transmisión de una señal de una porción de una célula a otra porción de una célula. Como se emplea aquí, la frase "receptor de superficie celular" incluye por ejemplo moléculas y complejos de moléculas capaces de recibir una señal y la transmisión de esta señal a través de la membrana de plasma de una célula. Un ejemplo de un "receptor de superficie de célula" de la presente descripción es el receptor 08E. El término "anticuerpo" como se refiere aquí incluye anticuerpos enteros y cualquier fragmento de enlace antígeno (es decir, "porción de enlace de antígeno") o sus cadenas sencillas. Un "anticuerpo" se refiere a una glicoproteína que comprende al menos 2 cadenas pesadas (H) y 2 cadenas ligeras (L) interconectadas por enlaces bisulfuro o su porción de enlace de antígeno. Cada cadena pesada comprende una región variable de cadena pesada (abreviada aquí como VH) en una región constante de cadena pesada. La región constante de cadena pesada comprende 3 dominios, CHI , CH2 y CH3. Cada cadena ligera comprende una región variable de cadena ligera (abreviada aquí como VL) y una región constante de cadena ligera. La región constante de cadena ligera comprende un dominio, CL. Las regiones VH y VL además pueden subdividirse en regiones de hipervariabilidad, denominadas regiones de determinación de complementariedad (CDR) , intercaladas con regiones que son más conservadas, denominadas regiones de marco (FR= framework regions) . Cada VH y VL esta compuesta por 3 CDRs y 4 FRs, dispuestos de extremo amino a extremo carboxi en el siguiente orden: FRl, CDRl, FR2 , CDR2 , FR3 , CDR3 , FR4. Las regiones variables de las cadenas pesadas y ligeras contienen un dominio de enlace que interactúa con un antígeno. Las regiones constantes de los anticuerpos pueden mediar el enlace de la inmunoglobulina en tejidos o factores anfitriones, incluyendo diversas células del sistema inmune (por ejemplo, células efectoras) y el primer componente (CIq) del sistema de complemento clásico. El término "porción de enlace de antígeno" de un anticuerpo (o "porción anticuerpo") como se emplea aquí, se refiere a uno o más fragmentos de un anticuerpo que retiene la capacidad para ligar específicamente a un antígeno (por ejemplo, 08E) . Se ha mostrado que la función de enlace antígeno de un anticuerpo puede realizarse por fragmentos de un anticuerpo de longitud íntegra. Ejemplos de fragmentos de enlace abarcados dentro del término "porción de enlace antígeno" de un anticuerpo incluye (i) un fragmento Fab, un fragmento monovalente que consiste de los dominios VL, VH, CL y CH1 ; (ii) un fragmento F(ab')2, un fragmento un bivalente que comprende dos fragmentos Fab enlazados por un puente bisulfuro en la región bisagra; (iii) un fragmento Fab ' , que esencialmente es un Fab con parte en la región bisagra (ver Fundamental Immunology (Paul ed. , 3rd ed. 1993); (iv) un fragmento Fd que consiste de los dominios VH y CHI ; (v) un fragmento Fv que consiste de los dominios VL y VH de un solo brazo de un anticuerpo, (vi) un fragmento dAb (Ward et al, (1989) Nature 341-544-546), que consiste de un dominio VH; y (vii) una región para determinación de complementariedad (CDR) aislada; y (viii) un nanocuerpo, una región variable de cadena pesada que contiene un dominio variable sencillo y dos dominios constantes. Además, aunque los dos dominios del fragmento Fv, V y VH, se codifican por genes separados, pueden unirse, utilizando métodos recombinantes, por un enlazador sintético que les permite elaborarlos de una sola cadena de proteína en donde las regiones V y VH se aparean para formar moléculas monovalentes (conocidas como Fv de cadena sencilla (scFv) ; ver por ejemplo, Bird et al. (1988) Science 242:423-426; y Huston et al. (1988) Proc. Nati. Acad Sci. USA 85:5879-5883;. Estos anticuerpos de cadena sencilla también se pretenden abarcados dentro del término "porción de enlace de antígeno" de un anticuerpo. Estos fragmentos de anticuerpo se obtienen utilizando técnicas convencionales conocidas por aquellos conocedores en la técnica y los fragmentos se criban para utilidad de la misma forma como los anticuerpos intactos. Un "anticuerpo aislado" como se emplea aquí, se pretende que se refiera a un anticuerpo que esta sustancialmente libre de otros anticuerpos que tienen diferentes especificidades antigénicas (por ejemplo un anticuerpo aislado que liga específicamente 08E esta sustancialmente libre de anticuerpos que ligan específicamente antígenos diferentes a 08E) . Un anticuerpo aislado que liga específicamente 08E puede sin embargo tener reactividad cruzada con otros antígenos, tales como moléculas 08E de otras especies. Aún más, un anticuerpo aislado puede estar sustancialmente libre de otro material celular y/o productos químicos. Los términos "anticuerpo monoclonal" o "composición de anticuerpo monoclonal" como se emplea aquí, se refiere a una preparación de moléculas de anticuerpo de una composición molecular sencilla. Una composición de anticuerpo monoclonal exhibe una especificidad de enlace y afinidad sencilla para un epítope particular. El término "anticuerpo humano" o "anticuerpo de secuencia humana" como se emplea aquí, se pretende que incluya anticuerpos que tienen regiones variables en donde tanto las regiones marco y CDR se derivan de secuencias de inmunoglobulina de línea germinal humana. Además, si un anticuerpo contiene una región constante, la región constante también se deriva de secuencias de inmunoglobulina de línea germinal humana. Los anticuerpos humanos pueden incluir posteriores modificaciones, incluyendo modificaciones naturales o sintéticas. Los anticuerpos humanas de esta descripción pueden incluir residuos de aminoácido no codificados por las secuencias de inmunoglobulina de línea germinal humana (por ejemplo, mutaciones introducidas por mutagénesis al azar o específica de sitio in vi tro o por mutación somática in vivo) . Sin embargo, el término "anticuerpo humano" como se emplea aquí, no se pretende que incluya anticuerpos en donde la secuencia CDR derivada de la línea germinal de otra especie de mamífero, tal como ratón, se han injertado en secuencias de marco humano. El término "anticuerpo monoclonal humano", que puede incluir el término "secuencia" después de "humano", se refiere a anticuerpos que exhiben una especificidad de enlace sencilla que tienen regiones variables en donde ambas regiones marco y CDR se derivan de secuencias de inmunoglobulina de línea germinal. En una modalidad, los anticuerpos monoclonales humanos se producen por un hibridoma que incluye una célula B que se obtiene de un animal no humano transgénico, por ejemplo un ratón transgénico que tiene un genoma que comprende un transgen de cadena pesada humana y un transgen de cadena ligera fusionados a una célula inmortalizada. El término "anticuerpo humano recombinante" como se emplea aquí, incluye todos los anticuerpos humanos que se preparan, expresan, crean o aislan por medio de recombinantes, tales como (a) anticuerpos aislados de un animal (por ejemplo, un ratón) que es transgénico o transcromosomal para genes de inmunoglobulina humana o un hibridoma de ahí preparado (descrito más a continuación) , (b) anticuerpos aislados de una célula anfitriona transformada para expresar el anticuerpo humano, por ejemplo de un transfectoma, (c) anticuerpos aislados de una biblioteca de anticuerpo humano combinatorio recombinante y (d) anticuerpos preparados, expresados, creados o aislados por cualesquiera otros medios que involucran combinar secuencias de gen de inmunoglobulina humana a otras secuencias de ADN. Estos anticuerpos humanos recombinantes tienen regiones variables en donde las regiones marco y CDR se derivan de las secuencias de inmunoglobulina de línea germinal humana. En ciertas modalidades, sin embargo, estos anticuerpos humanos recombinantes pueden someterse a mutagénesis in vi tro (o cuando un animal transgénico para secuencias IG humanas se emplea, mutagénesis somática in vivo) , y de esta manera las secuencias de aminoácidos de las regiones VH y VL de los anticuerpos recombinantes son secuencias que, mientras que se derivan de y relacionan a secuencias VH y VL de línea germinal humana, no pueden existir naturalmente dentro del repertorio de línea germinal de anticuerpo humano in vivo . Como se emplea aquí, "isotipo" se refiere a la clase de anticuerpo (por ejemplo IgM o IgGl) que se codifica por los genes de región constante de cadena pesada . Las frases "un anticuerpo que reconoce un antígeno" y "un anticuerpo específico para un antígeno" se amplían en forma intercambiable aquí con el término "un anticuerpo que liga específicamente a un antígeno" . El término "derivados de anticuerpo humano" se refieren a cualquier forma modificada del anticuerpo humano, por ejemplo un conjugado del anticuerpo y otro agente o anticuerpo. El término "anticuerpo humanizado" se pretende que se refiera a anticuerpos en donde secuencias CDR derivadas de la línea germinal de otra especie de mamífero, tal como ratón se han injertado en secuencias de marco humano. Modificaciones de región de marco adicionales pueden realizarse dentro de las secuencias de marco humano . El término "anticuerpo quimérico" se pretende que se refiera a anticuerpos en donde las secuencias de región variables se derivan de una especie y las secuencias de región constante se derivan de otra especie, tal como un anticuerpo en donde las secuencias de región variable se derivan de un anticuerpo de ratón y las secuencias de región constante se derivan de un anticuerpo humano. Como se emplea aquí, un anticuerpo "que liga específicamente a 08E humano" se pretende que se refiera a un anticuerpo que liga a 08E humano con una KD de 1 x 10"7 o menos, más típicamente 5 x 10"8 M o menos, más típicamente 3 x 10"8 M o menos, más típicamente 1 x 10~9 M o menos aún típicamente 5 x 10~9 M o menos. El término "substancialmente no liga" a una proteína o células como se emplea aquí, significa que no liga o no liga con alta afinidad a la proteína o células, es decir, liga a la proteína o células con una KD de 1 x 10"6 M o más, más preferiblemente 1 x 10~5 M o más, más preferiblemente 1 x 10"4 M o más, más preferiblemente 1 x 10"3 M o más, aún más preferiblemente 1 x 10"2 M o más. El término "Kassoc" o "Ka", como se emplea aquí, se pretende que se refiera a la velocidad de asociación de una interacción anticuerpo-antígeno particular en donde el término "KdiS" o "Kd, " como se emplea aquí se pretende que se refiera a la velocidad de disociación de una interacción de anticuerpo-antígeno particular. El término "KD" como se emplea aquí, se pretende que se refiera a la constante de disociación que se obtiene de la proporción de Kd a Ka (i.e. K/Ka) y se expresa como una concentración molar (M) . Valores KD para anticuerpos pueden determinarse utilizando métodos bien establecidos en la especialidad. Un método preferido para determinar la KD de un anticuerpo es al utilizar resonancia plasmón de superficie, típicamente utilizando un sistema biosensor tal como un sistema Biacore®. Como se emplea aquí, el término "alta afinidad" para un anticuerpo IgG se refiere a un anticuerpo que tiene una KD de 1 x 10~7 M o menos, más típicamente 5 x lO"8 M o menos, más típicamente 1 x 10"9 M o menos y aún más típicamente 5 x 10"9 M o menos para un antígeno objetivo. Sin embargo enlace de "alta afinidad" puede variar para otros isotipos de anticuerpo. Por ejemplo, enlace de "alta afinidad" para un isotipo IgM se refiere a un anticuerpo que tiene una KD de 10"6 M o menos, más típicamente 10~7 M o menos, aún más típicamente 10"8 M o menos . Como se emplea aquí, el término "sujeto" incluye cualquier humano o animal no humano. El término "animal no humano" incluye todos los vertebrados, por ejemplo mamíferos y no mamíferos, tales como primates no humanos, ovejas, perros, gatos, caballos, vacas, pollos, anfibios, peces, reptiles, etc. Como se emplea aquí, el término "08E" se emplea sinónimo con los términos "B7H4," "B7S1," y "B7x" ya que estos términos aparecen en forma diversa en la literatura científica. La secuencia de aminoácidos de 08E (B7H4) está disponible públicamente por referencia a los números de acceso GenBank AAZ17406, AAS13400, AAP37283, CAI12739 y CAI12737 y por referencia a (2003) Immunity 18:863-873; Sica et al. (2003) Immunity 18:849-861; y la patente de los E.U.A. número 6,891,030 cada uno de los cuales se incorpora aquí por referencia en su totalidad. Diversos aspectos de esta descripción se describen con mayor detalle en las siguientes sub-secciones.

Anticuerpos anti-08E Los anticuerpos de esta descripción se caracterizan por características o propiedades funcionales particulares de los anticuerpos. Por ejemplo, los anticuerpos ligan específicamente a 08E humano. Típicamente, un anticuerpo de esta descripción liga 08E con alta afinidad por ejemplo con una KD de 1 x 10"7 M o menos. Los anticuerpos anti-08E de esta descripción típicamente exhiben una o más de las siguientes características: (a) liga a 08E humano con una KD de 1 x 10"7 M o menos; (b) liga a células de CHO humanas transfectadas con 08E. Típicamente, el anticuerpo liga a 08E humano con una KD de 5 x 10"8 M o menos, liga a 08E humano con una KD de 2 x 10"8 M o menos, liga a 08E humano con una KD de 5 x 10"9 M o menos, liga 08E humano con una KD de 4 x 10"9 M o menos, liga 08E humano con una K0 de 3 x 10"9 M o menos, liga 08E humano con una KD de 2 x lO"9 M o menos o liga 08E humano con una KD de 1 x 10"9 M o menos. Ensayos estándar para evaluar la habilidad de enlace de los anticuerpos hacia 08E se conocen en la especialidad, incluyendo por ejemplo ELISAs, transferencias Western, RIAs y análisis de citometría de flujo. Ensayos convenientes se describen en detalle en los ejemplos. Las cinéticas de enlace (por ejemplo, afinidad de enlace) de los anticuerpos también pueden estimarse por ensayos estándar conocidos en la especialidad tales como por ELISA, análisis de sistemas Scatchard and Biacore®. Como otro ejemplo los anticuerpos de la presente descripción pueden ligar a una línea celular de tumor de carcinoma de mama, la línea celular SKBR3. Anticuerpos monoclonales IG11.2A7, 2F9. 12E1 y 13D12 Anticuerpos ejemplificados de esta descripción incluyen los anticuerpos monoclonales humanas IG119, 2A7 , 2F9, 12E1 y 13D12 aislados y caracterizados estructuralmente como se describe en los ejemplos 1 y 2. Las secuencias de aminoácidos VH de IG11, 2A7 , 2F9, 12E1 y 13D12 se muestran en SEQ ID NOs : 1, 2, 3, 4 y, 5 respectivamente. Las secuencias de aminoácidos VL de IG11, 2A7, 2F9, 12E1 y 13D12 se muestran en SEQ ID NOs : 6, 7, 8, 9 y 10, respectivamente. Dado que cada uno de estos anticuerpos puede ligar a 08E, las secuencias VH y VL pueden "mezclarse y acoplarse" para crear otras moléculas de enlace anti-08E de esta descripción. El enlace 08E de estos anticuerpos "mezclados y acoplados" puede probarse utilizando los ensayos de enlace descritos anteriormente y en los ejemplos (e.g., FACS o ELISAs) . Típicamente, cuando cadenas VH y V se mezclan y acoplan, una secuencia VH de un apareamiento V /VL particular se reemplaza con una secuencia VH estructuralmente similar. Igualmente, en forma típica una secuencia V de un apareamiento VH /VL particular se reemplaza con una secuencia VL estructuralmente similar. De acuerdo con esto, en un aspecto, esta descripción proporciona un anticuerpo monoclonal aislado o su porción de enlace de antígeno que comprende: (a) una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácido seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOs : 1, 2, 3, 4 y 5; y (b) una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOs: 6, 7, 8, 9 y 10; en donde el anticuerpo liga específicamente a 08E típicamente 08E humano. Combinaciones de cadenas pesadas y ligeras preferidas incluyen: (a) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1; y (b) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 6; o (b) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2; y (b) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7; o (c) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3; y (b) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 8 ; (d) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4; y (b) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9; o (e) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5; y (b) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10. En otro aspecto, esta descripción proporciona anticuerpos que comprenden los CDRls, CDR2s y CDR3s de cadena pesada y cadena ligera de IG11, 2A7 , 2F9, 12E1 y 13D12 o sus combinaciones. Las secuencias de aminoácidos de los CDRls VH de IG11, 2A7 , 2F9, 12E1 y 13D12 se ilustran en SEQ ID NOs: 11, 12, 13, 14 y 15, respectivamente. Las secuencias de aminoácidos de VH CDR2 de IG11, 2A7, 2F9, 12E1 y 13D12 se ilustran en SEQ ID Nos: 16, 17, 18, 19 y 20, respectivamente. Las secuencias de aminoácidos de los CDR3s VH de IG11, 2A7 , 2F9, 12E1 y 13D12 se ilustran en SEQ ID NOs : 21, 22, 23, 24 y 25, respectivamente. Las secuencias de aminoácidos de CDRls V? de IG11, 2A7, 2F9, 12E1 y 13D12 se ilustran en SEQ ID NOs: 26, 27, 28, 29 y 30, respectivamente. Las secuencias de aminoácidos de CDR2s V? de IG11, 2A7 , 2F9, 12E1 y 13D12 se ilustran en SEQ ID NOs: 31, 32, 33, 34 y 35, respectivamente. Las secuencias de aminoácidos de CDR3s V? de IG11, 2A7, 2F9, 12E1 y 13D12 se ilustran en SEQ ID NOs: 36, 37, 38, 39 y 40, respectivamente. Las regiones CDR se delinean utilizando el sistema Kabat (Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, E.U.A. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242) . Cada una de las secuencias de aminoácidos y nucleótidos anteriormente referidas de los anticuerpos humanos aquí designados como IG11, 2A7 , 2F9, 12E1 y 13D12 se presentan en la siguiente Tabla 1 y Listado de Secuencia. Tabla 1. Secuencias de regiones variables y constantes de cadena pesada y ligera y correspondientes CDRs de anticuerpos humanas IGl 15 2A7 , 2F9, 12E1 y 13D12 Dado que cada uno de los anticuerpos humanas designados IGH, 2A7 , 2F9, 12E1 y 13D12 pueden ligar a 08E y que la especificidad de enlace de antígeno se proporciona primordialmente por las regiones CDRl, CDR2 y CDR3, las secuencias CDRl, CDR2 y CDR3 VH y CDRl, CDR2 y CDR3 V? pueden ser "mezcladas y acopladas" (es decir, CDRs de diferentes anticuerpos pueden mezclarse y acoplarse aunque cada anticuerpo debe contener un CDRl, CDR2 y CDR3 VH y un CDRl, CDR2 y CDR3 V?) para crear otras moléculas de enlace anti-08E de esta descripción. El enlace 08E de estos anticuerpos "mezclados y acoplados" puede probarse utilizando los ensayos de enlace descritos anteriormente y en los ejemplos (por ejemplo FACS, ELISAs, análisis de sistema Biacore®) . Típicamente, cuando secuencias CDR VH se mezclan y acoplan, la secuencia CDRl, CDR2 y/o CDR3 de una secuencia VH particular se reemplaza con una o varia secuencias CDR estructuralmente similares. Igualmente, cuando la secuencia CDR V? se mezclan y acoplan, la secuencia CDRl, CDR2 y/o CDR3 de una secuencia V? particular típicamente se reemplaza con una o varias secuencias CDR estructuralmente similares. Igualmente, cuando las secuencias CDR V? se mezclan y acoplan, la secuencia CDRl, CDR2 y/o CDR3 de una secuencia V? particular típicamente se reemplaza con una o varias secuencias CDR estructuralmente similares. Será fácilmente aparente para la persona con destreza ordinaria en la especialidad que novedosas secuencias VH y VL pueden crearse al sustituir una o más secuencias de región CDR VH y/o V con secuencias estructuralmente similares de las secuencias CDR aquí descritas para anticuerpos monoclonales IG11, 2A7, 2F9, 12E1 y 13D12. De acuerdo con otro aspecto, esta descripción proporciona un anticuerpo monoclonal aislado o su porción de enlace de antígeno que comprende: (a) una región variable de cadena pesada CDRl que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOs: 11, 12, 13, 14 y 15; (b) una región variable de cadena pesada CDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de un grupo que consiste de SEQ ID NOs: 16, 17, 18, 19 y 20; (c) una región variable de cadena pesada CDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOs : 21, 22, 23, 24 y 25; (d) una región variable de cadena ligera CDRl que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOs: 26, 27, 28, 29 y 30; (e) una región variable de cadena ligera CDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de un grupo que consiste de SEQ ID NOs: 31, 32, 33, 34 y 35; y (f) una región variable de cadena ligera CDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOs : 36, 37, 38, 39 y 40; en donde el anticuerpo liga específicamente OSE, típicamente 08E humano. En una modalidad preferida, el anticuerpo comprende: (a) una región variable de cadena pesada CDRl que comprende SEQ ID NO: 11; (b) una región variable de cadena pesada CDR2 que comprende SEQ ID NO: 16; (c) una región variable de cadena pesada CDR3 que comprende SEQ ID NO: 21; (d) una región variable de cadena ligera CDRl que comprende SEQ ID NO: 26; (e) una región variable de cadena ligera CDR2 que comprende SEQ ID NO: 31; y (f) una región variable de cadena ligera CDR3 que comprende SEQ ID NO: 36; En otra modalidad preferida, el anticuerpo comprende : (a) una región variable de cadena pesada CDRl que comprende SEQ ID NO: 12; (b) una región variable de cadena pesada CDR2 que comprende SEQ ID NO: 17; (c) una región variable de cadena pesada CDR3 que comprende SEQ ID NO: 22; (d) una región variable de cadena ligera CDRl que comprende SEQ ID NO: 27; (e) una región variable de cadena ligera CDR2 que comprende SEQ ID NO: 32; (f) una región variable de cadena ligera CDR3 que comprende SEQ ID NO: 37. En otra modalidad preferida, el anticuerpo comprende : (a) una región variable de cadena pesada CDRl que comprende SEQ ID NO: 13; (b) una región variable de cadena pesada CDR2 que comprende SEQ ID NO: 18; (c) una región variable de cadena pesada CDR3 que comprende SEQ ID NO: 23; (d) una región variable de cadena ligera CDRl que comprende SEQ ID NO: 28; (e) una región variable de cadena ligera CDR2 que comprende SEQ ID NO: 33; y (f) una región variable de cadena ligera CDR3 que comprende SEQ ID NO: 38.

En otra modalidad preferida, el anticuerpo comprende : (a) una región variable de cadena pesada CDRl que comprende SEQ ID NO: 14; (b) una región variable de cadena pesada CDR2 que comprende SEQ ID NO: 19; (c) una región variable de cadena pesada CDR3 que comprende SEQ ID NO: 24; (d) una región variable de cadena ligera CDRl que comprende SEQ ID NO: 29; (e) una región variable de cadena ligera CDR2 que comprende SEQ ID NO: 34; y (f) una región variable de cadena ligera CDR3 que comprende SEQ ID NO: 39. En otra modalidad preferida, el anticuerpo comprende : (a) una región variable de cadena pesada CDRl que comprende SEQ ID NO: 15; (b) una región variable de cadena pesada CDR2 que comprende SEQ ID NO: 20; (c) una región variable de cadena pesada CDR3 que comprende SEQ ID NO: 25; (d) una región variable de cadena ligera CDRl que comprende SEQ ID NO: 30; (e) una región variable de cadena ligera CDR2 que comprende SEQ ID NO: 35; y (f) una región variable de cadena ligera CDR3 que comprende SEQ ID NO: 40. Es bien conocido en la técnica que el dominio CDR3 , independientemente de los dominios CDRl y/o CDR2 solo puede determinar la especificidad de enlace de un anticuerpo para un antígeno conato y que múltiples anticuerpos pueden generarse en forma pronosticable que tienen la misma especificidad de enlace con base en una secuencia CDR3 común. Ver por ejemplo Klimka et al, British J. of Cáncer 83 (2) : 252-260 (2000) (que describe la producción de un anticuerpo anti-humanizado utilizando solo el dominio variable de cadena pesada CDR3 anti-CD30 murino Ki-4) ; Beiboer et al, J. Mol. Biol. 296:833-849 (2000) (que describe anticuerpos de glicoproteína-2 epitelial recombinante (EGP- 2) utilizando solo la secuencia CDR3 de cadena pesada del anticuerpo anti-EGP2 MOC-31 murino); Rader et al, Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 95:8910-8915 (1998) (que describe un panel de anticuerpos a v ßz anti-integrina humanizado utilizando un dominio CDR3 variable de cadena pesada y ligera de un anticuerpo c v ß anti -integrina murino LM609 donde cada miembro de anticuerpo comprende una secuencia distinta fuera del dominio CDR3 y capaz de ligar el mismo epítope que el anticuerpo murino precursor con afinidades tan altas o superiores al anticuerpo murino precursor) ; Barbas et al, J. Am. Chem. Soc. 116:2161-2162 (1994) (que describe que el dominio CDR3 proporciona la contribución más significante al enlace de antígeno); Barbas et al, Proc. Nati Acad. Sci. U.S.A. 92:2529-2533 (1995) (que describe el injerto de secuencias CDR3 de cadena pesada de tres Fabs (SI-I, SI-40 y SI-32) contra un ADN de placenta humana sobre la cadena pesada de un Fab toxoide antitétano de esta manera reemplazando el CDR3 de cadena pesada existente y demostrando que el dominio CDR3 solo confiere especificidad de enlace); y Ditzel et al, J. Immunol . 157:739-749 (1996) (que describe estudios de injerto en donde la transferencia de solo el CDR3 de cadena pesada de un Fab LNA3 poliespecífico precursor a una cadena pesada de un anticuerpo Fab p313 de enlace toxoide IgG tétano no específico fue suficiente para retener especificidad de enlace del Fab precursor) . Cada una de estas referencias aquí se incorpora en su totalidad. De acuerdo con esto, dentro de ciertos aspectos, la presente descripción proporciona anticuerpos monoclonales que comprenden uno o más dominios CDR3 de cadena pesada y/o ligera de un anticuerpo no humano, tal como anticuerpo de ratón o rata, en donde el anticuerpo monoclonal es capaz de ligar específicamente a 08E.

Dentro de algunas modalidades, estos anticuerpos de la invención comprenden uno o más dominios CDR3 de cadena pesada y/o ligera de un anticuerpo no humano (a) son capaces de competir por enlace con; (b) retener las características funcionales; (c) ligar al mismo epítope; y/o (d) tienen una afinidad de enlace similar que el anticuerpo no humano precursor correspondiente. Dentro de otros aspectos, la presente descripción proporciona anticuerpos monoclonales que comprenden uno o más dominios CDR3 de cadena pesada y/o ligera de un primer anticuerpo humano tal como por ejemplo un anticuerpo humano obtenido de un animal no humano, en donde el primer anticuerpo humano es capaz de ligar específicamente a 08E y en donde el dominio CDR3 del primer anticuerpo humano reemplaza un dominio CDR3 en un anticuerpo humano que carece de la especificidad de enlace para 08E, para generar un segundo anticuerpo humano que es capaz de ligar específicamente a 08E. Dentro de algunas modalidades, estos anticuerpos de la invención comprenden uno o más dominios CDR3 de cadena pesada y/o ligera del primer anticuerpo humano (a) son capaces de competir para enlace con; (b) retener las características funcionales; (c) ligar al mismo epítope; y/o (d) tener una afinidad de enlace similar que el primer anticuerpo humano precursor correspondiente.

Anticuerpos que Tienen Secuencia de Línea Germinal Particulares En ciertas modalidades, un anticuerpo de esta descripción comprende una región variable de cadena pesada de un gen de inmunoglobulina de cadena pesada de línea germinal particular y/o una región variable de cadena ligera de un gen de inmunoglobulina de cadena ligera de línea germinal particular. Por ejemplo, en una modalidad preferida, la descripción proporciona un anticuerpo monoclonal aislado o su porción de enlace de antígeno, que comprende una región variable de cadena pesada que es el producto de o derivado de un gen VH 4-34 humano, en donde el anticuerpo liga específicamente 08E. En otra modalidad preferida, esta descripción proporciona un anticuerpo monoclonal aislado o su porción de enlace de antígeno, que comprende una región variable de cadena pesada que es el producto de o derivado de un gen VH 3-53 humano, en donde el anticuerpo liga específicamente 08E. En otra modalidad preferida, esta descripción proporciona un anticuerpo monoclonal aislado o su porción de enlace de antígeno, que comprende una región variable de cadena pesada que es el producto de o derivado de un gen VH 3-9/D3-10/JH6b humano combinado, en donde el anticuerpo liga específicamente a 08E.

En otra modalidad preferida, esta descripción proporciona un anticuerpo monoclonal aislado o una porción de enlace de antígeno del mismo, que comprende una región variable de cadena ligera que es el producto de o derivado de un gen V? A27 humano, en donde el anticuerpo liga específicamente a 08E. En otra modalidad preferida, esta descripción proporciona un anticuerpo monoclonal aislado o su porción de enlace de antígeno, que comprende una región variable de cadena ligera que es el producto de o derivado de un gen V? L6/JK1 humano combinado, en donde el anticuerpo liga específicamente 08E. Todavía en otra modalidad preferida, esta descripción proporciona un anticuerpo monoclonal aislado o su porción de enlace de antígeno, en donde el anticuerpo : (a) comprende una región variable de cadena pesada que es el producto de o derivado de un gen VH 4-34 humano, un gen VH 3-53 humano o un gen VH 3-9/D3-10/JH6b humano combinado (estos genes codifican las secuencias de aminoácido establecidas en SEQ ID NOs: 51, 52 y 53, respectivamente) ; (b) comprende una región variable de cadena ligera que es el producto de o derivado de un gen V? A27 humano o un gen V? L6/JK1 humano combinado (estos genes codifican las secuencias de aminoácidos establecidas en SEQ ID NOs : 54 y 55, respectivamente); y (c) el anticuerpo liga específicamente a 08E, típicamente 08E humano. Ejemplos de anticuerpos que tienen VH y V de VH 4-34 y V? A27 respectivamente son 1 Gl 1 y 13D12. Ejemplos de anticuerpos que tienen VH y VK de VH 3-53 y VK A27, respectivamente son 2A7 y 2F9. Un ejemplo de un anticuerpo que tiene VH y VK de VH 3-9/D 3-10/JH6b y VK L6/JK1, respectivamente es 12E1. Como se emplea aquí, un anticuerpo humano comprende regiones variables de cadena pesada o ligera que son el "producto de" o "derivado de", una secuencia de línea germinal particular si las regiones variables del anticuerpo se obtienen de un sistema que utiliza genes de inmunoglobulina de línea germinal humana. Estos sistemas incluyen inmunizar un ratón transgénico que transporta genes de inmunoglobulina humana con el antígeno de interés o cribar una biblioteca de genes de inmunoglobulina humana exhibidas en fago con el antígeno de interés. Un anticuerpo humano que es el "producto de" o "derivado de" una secuencia de inmunoglobulina de línea germinal humana puede ser identificado como tal al comparar la secuencia de aminoácidos del anticuerpo humano con las secuencias de aminoácidos de inmunoglobulina de línea germinal humana y seleccionar la secuencia de inmunoglobulina de línea germinal humana que es la más cercana en secuencia (es decir mayor por ciento de identidad) a la secuencia de anticuerpo humano. Un anticuerpo humano que es el "producto de" o "derivado de" una secuencia inmunoglobulina de línea germinal humana particular, puede contener diferencias de aminoácidos en comparación con la secuencia de línea germinal debido por ejemplo a mutaciones somáticas de origen natural o introducción intencional de mutación dirigida del sitio. Sin embargo, un anticuerpo humano selecto típicamente es al menos 90% idéntico en secuencia de aminoácidos con una secuencia de aminoácidos codificada por un gen de inmunoglobulina en línea germinal humana y contiene residuos de aminoácidos que identifican el anticuerpo humano como humano cuando se comparan con la secuencia de aminoácidos de inmunoglobulina de línea germinal de otras especies (por ejemplo secuencias de línea germinal murina) . En ciertos casos, un anticuerpo humano puede ser al menos 95% o incluso al menos 96%, 97%, 98% o 99% idéntico en secuencia de aminoácidos a la secuencia de aminoácidos codificada por el gen de inmunoglobulina en línea germinal. Típicamente, un anticuerpo humano derivado de una secuencia de línea germinal humana particular exhibirá no más de 10 diferencias de aminoácidos de la secuencia de aminoácidos codificada por el gen de inmunoglobulina en línea germinal humana. En ciertos casos, el anticuerpo humano puede no exhibir más de 5 o no más de 4 , 3, 2 o 1 de diferencia aminoácidos de la secuencia de aminoácidos codificada por el gen de inmunoglobulina de línea germinal. Anticuerpos Homólogos Todavía en otra modalidad, un anticuerpo de ésta descripción comprende regiones variables de cadena pesada y ligera que comprenden secuencias de aminoácidos que son homologas a las secuencias de aminoácidos de los anticuerpos preferidos aquí descritos y en donde los anticuerpos retienen las propiedades funcionales deseadas de los anticuerpos anti-08E de ésta descripción. Por ejemplo, esta descripción proporciona un anticuerpo monoclonal aislado o su porción de enlace de antígeno, que comprende una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera, en donde: (a) la región variable de cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 80% homologa a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOs : 1 , 2, 3, 4; y 5 ; (b) la región variable de cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 80% homologa a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOs: 6, 7, 8; 9 y 10; (c) el anticuerpo liga a 08E humano con un KD de 1 x 10"7 M o menos; y (d) el anticuerpo liga a células CHO humanas transfectadas con 08E. En diversas modalidades, el anticuerpo por ejemplo puede ser un anticuerpo humano, un anticuerpo humanizado o un anticuerpo quimérico. En otras modalidades, las secuencias de aminoácidos VH y/o VL pueden ser 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% homologas a las secuencias anteriormente establecidas. Un anticuerpo que tiene las regiones VH y VL que tiene alta homología (es decir 80% o mayor) a las regiones VH y VL de las secuencias anteriormente establecidas, pueden obtenerse por mutagénesis (por ejemplo mutagénesis mediada por PCR o dirigida al sitio) de moléculas de ácido nucleico que codifican SEQ ID NOs: 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 4S, 49 y 50, seguido por prueba del anticuerpo alterado codificado para función retenida (es decir las funciones establecidas en (c) y (d) anteriormente) , utilizando los ensayos funcionales aquí descritos. Como se emplea aquí, el por cientos de homología entre dos secuencias aminoácido es equivalente al por ciento de identidad entre las dos secuencias. El por ciento de identidad entre las dos secuencias es una función del número de posiciones idénticas compartidas por las secuencias (es decir % de homología # de posiciones idénticas/número total de posiciones x 100) , tomando en cuenta el número de espacios y la longitud de cada espacio, que requiere ser introducidos para alineamiento óptimo de las dos secuencias. La comparación de secuencias y determinación de por ciento de identidad entre las dos secuencias puede lograrse utilizando un algoritmo matemático como se describe en los ejemplos no limitantes a continuación. El por ciento de identidad entre las dos secuencias de aminoácidos puede determinarse utilizando el algoritmo de E. Meyers y . Miller (Comput. Appl Biosci., 4:11-17 (1988)) que se ha incorporado en el programa ALIGN program (versión 2.0), utilizando una tabla de residuos de peso PAM120, una penalidad de longitud de espacio de 12 y una penalidad de espacio de 4. Además, el por ciento de identidad entre las dos secuencias de aminoácidos puede determinarse utilizando el algoritmo de Needleman and Wunsch (J. Mol. Biol. 48:444-453 (1970)) que se ha incorporado en el programa GAP en el paquete de soporte lógico o programa GCG (disponible en http://www.gcg.com) utilizando una matriz Blossum 62 o una matriz PAM250 y un peso de espacio de 16, 14, 12, 10, 8, 6 o 4 y un peso de longitud de 1, 2, 3, 4, 5 o 6. En forma adicional o alterna, las secuencias de proteína de la presente descripción pueden además utilizarse como una "secuencia de interrogación" para realizar una búsqueda contra bases de datos públicas por ejemplo para identificar secuencias relacionadas. Estas búsquedas pueden realizarse utilizando el programa XBLAST (versión 2.0) de Altschul, et al. (1990) J. Mol Biol. 215:403-10. Búsqueda de proteína BLAST puede realizarse con el programa XBLAST, calificación = 50, longitud de palabra = 3 para obtener las secuencias de aminoácidos homologas a las moléculas de anticuerpo de esta descripción. Para obtener alineamientos espaciados para propósitos de comparación, Gapped BLAST espaciada puede utilizarse como se describe en Altschul et al, (1997) Nucleic Acids Res. 25 (17) : 3389-3402. Cuando se utilizan los programas BLAST y BLAST Espaciado, los parámetros predefinidos de los programas respectivos (por ejemplo XBLAST y NBLAST) pueden emplearse. Ver http://www.ncbi.nlm.nih.gov. Anticuerpos con Modificaciones Conservadoras En ciertas modalidades, un anticuerpo de esta descripción comprende una región variable de cadena pesada que comprende CDRl, CDR2 y CDR3 secuencias y una región variable de cadena ligera que comprende las secuencias CDRl, CDR2 y CDR3 , en donde uno o más estas secuencias CDR comprende secuencias de aminoácido especificadas con base en los anticuerpos preferidos aquí descritos (por ejemplo IG11, 2A7 , 2F9, 12E1 o 13D12) o sus modificaciones conservadoras y en donde los anticuerpos retienen las propiedades funcionales deseadas de los anticuerpos anti-08E de esta descripción. De acuerdo con esto, esta descripción proporciona un anticuerpo monoclonal aislado o su porción de enlace de antígeno, que comprende una región variable de cadena pesada que comprende secuencias CDRl, CDR2 y CDR3 y una región variable de cadena ligera que comprende las secuencias CDRl, CDR2 y CDR3 , en donde: (a) la secuencia CDR3 de región variable de cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de secuencias de aminoácidos de SEQ ID NOs : 21, 22, 23, 24 y 25 y sus modificaciones conservadoras; (b) la secuencia CDR3 de región variable de cadena ligera comprende una secuencia aminoácidos seleccionados del grupo que consiste de las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NOs : 36, 37, 38, 39 y 40 y sus modificaciones conservadoras; (c) el anticuerpo liga a 08E humano con una KD de lxlO"7 M o menos; y (d) el anticuerpo liga a células CHO humanas tranfectadas con 08E. En una modalidad preferida, la secuencia CDR2 de región variable de cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de secuencias de aminoácidos de SEQ ID NOs: 16, 17, 18, 19 y 20 y sus modificaciones conservadoras; y la secuencia de CDR2 de región variable de cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de secuencias de aminoácidos de SEQ ID NOs: 31, 32, 33, 34 y 35 y sus modificaciones conservadoras. En otra modalidad preferida, la secuencia CDRl de región variable de cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NOs: 11, 12, 13, 14 y 15 y sus modificaciones conservadoras, y la secuencia CDRl de la región variable de cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de secuencias de aminoácidos de SEQ ID NOs: 26, 27, 28, 29 y 30 y sus modificaciones conservadoras . En diversas modalidades, el anticuerpo por ejemplo puede ser anticuerpos humanos, anticuerpos humanizados o anticuerpos quiméricos. Como se emplea aquí, el término "modificaciones de secuencias conservadoras" se pretende que se refiere a modificaciones de aminoácidos que no afectan significativamente o alteran las características de enlace del anticuerpo que contiene la secuencia de aminoácidos. Estas modificaciones conservadoras incluyen sustituciones, adiciones y eliminaciones de aminoácidos. Modificaciones pueden introducirse en un anticuerpo de esta descripción por técnicas estándar conocidas en la especialidad, tales como mutagénesis dirigida al sitio y mutagénesis mediada por PCR. Sustituciones de aminoácidos conservadoras son aquellas en donde el residuo de aminoácido se reemplaza con un residuo aminoácidos que tiene una cadena lateral similar. Familias de residuos aminoácidos que tienen cadenas laterales similares se han definido en la técnica. Estas familias incluyen los aminoácidos con cadenas laterales básicas (por ejemplo lisina, arginina, histidina) , cadenas laterales acídicas (por ejemplo ácido aspártico, ácido glutámico), cadenas laterales polares sin carga (por ejemplo glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteina, triptofano) , cadenas laterales no polares (por ejemplo alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina) , cadenas laterales de ramificación beta (por ejemplo treonina, valina, isoleucina) y cadenas laterales aromáticas (por ejemplo tirosina, fenilalanina, triptofano, histidina) . De esta manera, uno o más residuos aminoácido dentro de la región CDR de un anticuerpo de esta descripción, pueden ser remplazados con otros residuos aminoácidos de la misma familia de cadena lateral y el anticuerpo alterado puede probarse para función retenida. Anticuerpos que Ligan al Mismo Epítope que los Anticuerpos Anti-08E de esta descripción En otra modalidad, esta descripción proporciona anticuerpos que ligan al mismo epítope en 08E humano como cualquiera de los anticuerpos monoclonales 08E de esta descripción (es decir anticuerpos que tienen la capacidad para competencia cruzada para enlace con 08E con cualquiera de los anticuerpos monoclonales de esta descripción) . En modalidades preferidas, el anticuerpo de referencia para estudios de competencia cruzada, puede ser un anticuerpo monoclonal IG11 (que tienen secuencias VH y VL como se muestra en SEQ ID NOs : 1 y 6, respectivamente) o anticuerpo monoclonal 2A7 (que tiene secuencias VH y VL como se ilustra en SEQ ID NOs: 2 y 7, respectivamente) o el anticuerpo monoclonal 2F9 (que tienen secuencias VH y VL como se ilustra en SEQ ID NOs : 3 y 8, respectivamente) o el anticuerpo monoclonal 12E1 (que tienen secuencias VH y VL como se ilustra en SEQ ID NOs: 4 y 9, respectivamente) o el anticuerpo monoclonal 13D12 (que tienen las secuencias VH y VL como se muestra en SEQ ID NOs: 5 y 10, respectivamente). Estos anticuerpos de competencia cruzada pueden identificarse con base en su capacidad por competencia cruzada con IG11, 2A7, 2F9, 12E1 o 13D12 en ensayos de enlace de 08E estándar. Por ejemplo, el análisis de sistema BIAcore®, ensayos ELISA y citometría de flujo pueden emplearse para demostrar la competencia cruzada con los anticuerpos de la presente descripción. La capacidad de un anticuerpo de prueba para inhibir el enlace por ejemplo de IG11, 2A7 , 2F9, 12E1 o 13D12 a 08E humano demuestra que el anticuerpo de prueba puede competir con IG11, 2A7 , 2F9, 12E1 o 13D12 para ligar a 08E humano y de esta manera liga al mismo epítope en 08E humano que IG11, 2A7 , 2F9, 12E1 o 13D12. En una modalidad preferida, el anticuerpo que liga al mismo epítope en 08E humano que IG11, 2A7 , 2F9, 12E1 o 13D12 es un anticuerpo monoclonal humano. Estos anticuerpos monoclonales humanos pueden prepararse y aislarse como se describe en los Ejemplos. Anticuerpos de Ingeniería y Modificados Un anticuerpo de esta descripción además puede prepararse utilizando un anticuerpo que tiene uno o más de las secuencias VH y/o VL aquí descritas como material de partida para diseñar un anticuerpo modificado, este anticuerpo modificado puede tener propiedades alteradas del anticuerpo de partida. Un anticuerpo puede diseñarse al modificar uno o más residuos dentro de una o ambas regiones variables (es decir VH y/o VL) , por ejemplo dentro de una o más regiones CDR y/o dentro de una o más regiones marco. Adicionalmente o en forma alterna, un anticuerpo puede diseñarse al modificar residuos dentro de la o las regiones constantes, por ejemplo para alterar la o las funciones efectoras del anticuerpo. Un tipo de ingeniería de región variable que puede realizarse es injerto de CDR. Los anticuerpos interactúan con antígenos objetivo en forma predominante a través de residuo aminoácido que se ubican en las 6 regiones de determinación de complementariedad pesadas y ligeras (CDRs) . Por esta razón, las secuencias de aminoácido dentro de CDRs son más diversas entre anticuerpos individuales que las secuencias fuera de las CDRs. Debido a que las secuencias CDR son responsables para la mayoría de las interacciones antígeno-anticuerpo, es posible expresar anticuerpos recombinantes que imitan las propiedades de anticuerpos de origen natural específicos al construir vectores de expresión que incluyen secuencias CDR de anticuerpo de origen natural específico injertado en secuencias marco de un anticuerpo diferente con propiedades diferentes. (Ver, por ejemplo, Riechmann, L. et al. (1998) Nature 332:323-327; Jones, P. et al. (1986) Nature 321:522-525; Queen, C. et al (1989) Proc. Nati. Acad. See . U.S.A. 86:10029-10033; patente de los E.U.A. Número 5,225,539 otorgada a Winter y las patentes de los E.U.A. Número 5,530,101; 5,585,089; 5,693,762 y 6,180,370 otorgadas a Queen et al). De acuerdo con esto, otra modalidad de esta descripción se refiere a un anticuerpo monoclonal aislado o su porción de enlace de antígeno, que comprende una región variable de cadena pesada que comprende secuencias CDRl, CDR2 y CDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOs: 11, 12, 13, 14 y 15; SEQ ID NOs : 16, 17, 18, 19 y 20; y SEQ ID NOs : 21, 22, 23, 24 y 25; respectivamente y una región variable de cadena ligera que comprende las secuencias CDRl, CDR2 y CDR3 que comprende una secuencia de aminoácido seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOs: 26, 27, 28, 29 y 30; SEQ ID NOs : 31, 32, 33, 34 y 35; y SEQ ID NOs: 36, 37, 38, 39 y 40; respectivamente. De esta manera, estos anticuerpos contienen las secuencias CDR VH y VL de anticuerpos monoclonales IG11, 2A7 , 2F9, 12E1 o 13D12 sin embargo pueden contener diferentes secuencias marco de estos anticuerpos. Estas secuencias marco pueden obtenerse de bases de datos de ADN públicas o referencias públicas que incluyen secuencias de genes de anticuerpos de línea germinal. Por ejemplo, secuencias de ADN de línea germinal para genes de región variable de cadena ligera y cadena pesada humana pueden encontrarse en la base de datos de secuencia de línea germinal humana "VBase" (disponible en Internet de www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase), así como en Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, E.U.A. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; Tomlinson, I. M., et al. (1992) "The Repertoire of Human Germline VH Sequences Reveáis about Fifty Groups of VH Segments with Different Hypervariable Loops" J. Mol. Biol. 227:776- 798; and Cox, J. P. L. et al (1994) "A Directory of Human Germ-line VH Segments Reveáis a Strong Bias in their Usage" Eur. J. Immunol . 24:827-836; los contenidos de cada una de las cuales se incorporan expresamente aquí por referencia. Como otro ejemplo, las secuencias de ADN de línea germinal para genes de región variable de cadena pesada y cadena ligera humanas pueden encontrarse en las base de datos Genbank. Por ejemplo, las siguientes secuencias de línea germinal de cadena pesada encontradas en ratón HCo7 HuMAb están disponibles en los números de acceso Genbank acompañantes: 1-69 (NG_0010109, NT_024637 y BC070333), 3-33 (NG_0010109 y NT_024637) y 3-7 (NG_0010109 y NT 024637). Como otro ejemplo, las siguientes secuencias de línea germinal de cadena pesada encontradas en el HCol2 HuMAb de ratón están disponibles en los números de acceso Genbank acompañantes: 1-69 (NGJ3010109, NT_024637 y BC070333), 5-51 (NG_0010109 y NT_024637), 4-34 (NG_0010109 y NT_024637), 3-30.3 (CAJ556644) y 3-23 (AJ406678) . Secuencias de proteína-anticuerpo se comparan contra una base de datos de secuencia de proteína compilada, utilizando una de los métodos de búsqueda de similaridad de secuencia denominados BLAST Gapped (Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Research 25:3389-3402), que es bien conocido por aquellos con destreza en la técnica. BLAST es un algoritmo heurístico en que un alineamiento estadísticamente significante entre la secuencia de anticuerpo y la secuencia de base de datos es probable que contenga pares de segmentos de alta calificación (HSP= high-scoring segment pairs) de palabra alineadas. Pares de segmentos cuyas calificaciones no pueden mejorarse por extensión o recorte se denominan un acierto (hit) . Brevemente, las secuencias de nucleótidos de origen de VBASE (http://vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbasel/list2.php) se traducen en la región entre e incluyendo la región marco FRl a FR3 se retiene. Las secuencias de bases de datos tienen una longitud promedio de 98 residuos. Secuencias duplicadas que son correspondencias exactas sobre toda la longitud de la proteína se retiran. Una búsqueda BLAST para proteínas utilizando el programa BLAST con valores predefinidos, parámetros standard, excepto en filtro de baja complejidad, que se desactiva, y la matriz de sustitución de BLOSUM62, filtran los 5 aciertos superiores produciendo correspondencias de secuencia. Las secuencias de nucleótido se traducen en todos los 6 marcos y el marco 5 codones de parada en el segmento de acoplamiento de la secuencia de base de datos se considera el acierto potencial. Esto a su vez se confirma utilizando el programa BLAST tbiastx, que traduce la secuencia de anticuerpo en todos los 6 marcos y compara aquellas traducciones con la secuencia de nucleótido VBASE traducida dinámicamente en todos los 6 marcos. Las identidades son correspondencias de aminoácido exactas entre la secuencia de anticuerpo y la base de datos de proteína sobre toda la longitud de la secuencia. Los positivos (identidades + correspondencia de sustitución) no son idénticos sino sustituciones de aminoácidos guiadas por la matriz de sustitución BLOSUM62. Si la secuencia de anticuerpo corresponde con 2 de las secuencias de base de datos con la misma identidad, el acierto con más positivos hará que la decisión sea el acierto de secuencia de correspondencia. Secuencias marco preferidas para utilizar en los anticuerpos de esta descripción, son aquellas estructuralmente similares a las secuencias marco empleadas por anticuerpos selectos de esta descripción, por ejemplo similar a las secuencias marco VH 4-34 (SEQ ID NO: 51) y/o las secuencias marco VH 3-53 (SEQ ID NO: 52) y/o las secuencias marco combinadas VH 3-9/D3-10/JH6b (SEQ ID NO: 53) y/o las secuencias marco V? A27 (SEQ ID NO: 54) y/o las secuencias marco VK L6/JK1 (SEQ ID NO: 55) combinadas utilizadas por los anticuerpos monoclonales preferidos de esta descripción. Las secuencias CDRl, CDR2 y CDR3 VH y las secuencias CDRl, CDR2 y CDR3 , V? pueden injertarse en regiones marco que tienen la secuencia de identidad como se encuentra en el gen de inmunoglobulina de línea germinal del cual las secuencia marco se deriva o las secuencias CDR pueden injertarse en las regiones marco que contienen una o más mutaciones en comparación con las secuencias de línea germinal. Por ejemplo, se ha encontrado que en ciertos casos, es benéfico mutar residuos dentro de las regiones marco para mantener o mejorar la habilidad de enlace DE antígeno del anticuerpo (ver por ejemplo patentes de los E.U.A. Números 5,530,101; 5,585,089; 5,693,762 y 6,180,370 otorgadas a Queen et al). Otro tipo de modificación de región variable es mutar residuo aminoácido dentro de las regiones CDRl, CDR2 y/o CDR3 , VH y/o V? para de esta manera mejorar una o más propiedades de enlace (por ejemplo afinidad) del anticuerpo de interés. Mutagénesis dirigida de sitio o mutagénesis mediada por PCR pueden realizarse para introducir la o las mutaciones y el efecto en el enlace de anticuerpo u otra propiedad de interés funcional, pueden evaluarse en ensayos in vi tro o in vivo como se describe aquí y proporciona en los ejemplos. Modificaciones conservadoras típicas (como se discutió anteriormente) se introducen. Las mutaciones pueden ser sustituciones adiciones o eliminaciones de aminoácidos pero típicamente son sustituciones. Aún más, típicamente no más de uno, dos, tres, cuatro o cinco residuos dentro de una región CDR se alteran. De acuerdo con esto, en otra modalidad, esta descripción proporciona anticuerpos monoclonales anti-08E aislados o sus porciones de enlace de antígeno, que comprenden una región variable de cadena pesada que comprende: (a) una región CDRl VH que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOs: 11, 12, 13, 14 y 15 o una secuencia de aminoácido que tienen uno, dos, tres, cuatro o cinco sustituciones deleciones o adiciones de aminoácidos en comparación con SEQ ID NOs: 11, 12, 13, 14 y 15; (b) una región CDR2 VH que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionado del grupo que consiste de SEQ ID NOs: 16, 17, 18, 19 y 20 o una secuencia de aminoácidos que tiene uno, dos, tres, cuatro o cinco sustituciones, deleciones o adiciones de aminoácidos en comparación con SEQ ID NOs : 16, 17, 18, 19 y 20; (c) una región CDR3 VH que comprende una secuencia de aminoácido seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOs: 21, 22, 23, 24 y 25 o una secuencia de aminoácidos que contiene uno, dos, tres, cuatro o cinco sustituciones deleciones o adiciones de aminoácidos en comparación con SEQ ID NOs : 21, 22, 23, 24 y 25; (d) una región CDRl V? que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOs: 26, 27, 28, 29 y 30 o una secuencia de aminoácidos que tiene uno, dos, tres, cuatro o cinco sustituciones deleciones o adiciones de aminoácidos en comparación con SEQ ID NOs: 26, 27, 28, 29 y 30; (e) una región CDR2 V? que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOs : 31, 32, 33, 34 y 35 o una secuencia de aminoácidos que tiene uno, dos, tres, cuatro o cinco sustituciones deleciones o adiciones de aminoácidos en comparación con SEQ ID NOs : 31, 32, 33, 34 y 35; y (f) una región CDR3 V? que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOs: 36, 37, 38, 39 y 40 o una secuencia de aminoácidos que tiene uno, dos, tres, cuatro o cinco sustituciones, deleciones o adiciones de aminoácidos en comparación con SEQ ID NOs: 36, 37, 38, 39 y 40. Los anticuerpos de ingeniería o diseño de esta descripción incluyen aquellos en donde las modificaciones se han realizado a residuos marco dentro de VH y/o V?, por ejemplo para mejorar las propiedades del anticuerpo. Típicamente, estas modificaciones de marco se realizan para disminuir la inmunogenizidad del anticuerpo. Por ejemplo, un enfoque es "mutar de regreso" uno o más residuos de marco a la secuencia de línea germinal correspondiente. Más específicamente, un anticuerpo que se ha sometido a mutación somática puede contener residuos marco que difieren de la secuencia de línea germinal de la cual se derivó el anticuerpo. Estos residuos pueden ser identificados al comparar las secuencias marco de anticuerpo a las secuencias de línea germinal de las cuales se deriva el anticuerpo. Por ejemplo, para IG11, el residuo aminoácido #71 (dentro de FR3) de VH es una alanina mientras que este residuo en la secuencia de línea germinal VH 4-34 correspondiente es una valina. Para regresar la secuencia de región de marco a su configuración de línea germinal, las mutaciones somáticas pueden "mutar de regreso" a la secuencia de línea germinal por ejemplo por mutagénesis dirigida por sitio o mutagénesis mediada por PCR (por ejemplo, residuo #71 de FR3 de VH de IG11 puede ser "mutado de regreso" de alanina a valina) . Estos anticuerpos "mutados de regreso" también se pretenden abarcados por esta descripción. Como otro ejemplo, para IG11, el residuo aminoácido #81 (dentro de FR3) de VH es una arginina mientras que este residuo en la secuencia de línea germinal VH 4-34 correspondiente es una lisina. Para regresar las secuencias de región marco a su configuración de línea germinal, por ejemplo el residuo #81 de FR3 de el VH de IG11 puede "mutarse de regreso" de arginina a lisina. Estos anticuerpos "mutados de regreso" también se pretenden abarcados por esta descripción. Como otro ejemplo, para 13D12, el residuo aminoácido #83 (dentro de FR3) de VH es una asparagina mientras que este residuo en la secuencia de línea germinal VH 4-34 correspondiente es una serina. Para regresar las secuencias de región marco a su configuración de línea germinal, por ejemplo el residuo #83 de FR3 de VH de 13D12 puede ser "mutado de regreso" de asparagina a serina. Estos anticuerpos "mutados de regreso" también se pretenden abarcados por esta descripción. Como otro ejemplo, para 2A7 , el residuo aminoácido #67 (dentro de FR3) de VH es una valina, mientras que este residuo en la secuencia de línea germinal VH 3-53 correspondiente es una fenilalanina. Para regresar las secuencias de región de marco a su configuración de línea germinal, por ejemplo el residuo #67 de FR3 de VH de 2A7 puede "mutarse de regreso" desde valina a fenilalanina. Estos anticuerpos "mutados de regreso" también se pretenden abarcados por esta descripción. Como otro ejemplo para 2F9, el residuo aminoácido #28 (dentro de FRl) de VH es una isoleucina mientras que este residuo en la secuencia de línea germinal VH 3-53 correspondiente es una treonina. Para regresar la secuencia de región marco a su configuración de línea germinal, por ejemplo el residuo #28 de FRl de VH de 2F9 puede ser "mutado de regreso" de isoleucina a treonina. Estos anticuerpos "mutados de regreso" también se pretenden abarcados por esta descripción. Como otro ejemplo, para 12E1, el residuo aminoácido #23 (dentro de FRl) de VH es una valina mientras que este residuo en la secuencia de línea germinal VH 3-9 correspondiente es una alanina. Para regresar las secuencias de región marco a su configuración de línea germinal, por ejemplo el residuo #23 de FRl de VH de 12E1 puede ser "mutado de regreso" de valina a alanina. Estos anticuerpos "mutados de regreso" también se pretenden abarcados por esta descripción. Como otro ejemplo para IG11, el residuo aminoácido #7 (dentro de FRl) de V? es una fenilalanina mientras que este residuo en la secuencia de línea germinal Vk A27 correspondiente es una serina. Para regresar las secuencias de región marco a su configuración de línea germinal, por ejemplo el residuo #7 de FRl de Vk de IG11 puede ser "mutado de regreso" de fenilalanina a serina. Estos anticuerpos "mutados de regreso" también se pretenden abarcados por esta descripción. Como otro ejemplo para IG11, el residuo aminoácido #47 (dentro de FR2) de Vk es una a valina mientras que este residuo en la secuencia de línea germinal Vk A27 correspondiente es una leucina. Para regresar las secuencias de región marco a su configuración de línea germinal, por ejemplo el residuo #47 de FR2 de Vk de IG11 puede ser "mutado de regreso" de valina a leucina. Estos anticuerpos "mutados de regreso" también se pretenden abarcados por esta descripción. Otro tipo de modificación marco involucra el mutar uno o más residuos dentro de la región marco o incluso dentro de una o más regiones CDR, para retirar epítopes de célula T para de esta manera reducir la inmunogenicidad potencial del anticuerpo. Este enfoque también se refiere como "desinmunización" y se describe con mayor detalle en la publicación de patente de los E.U.A. Número 20030153043 otorgada a Carr et al. Anticuerpos de ingeniería de esta descripción también incluyen aquellos en donde modificaciones se han realizado a residuo aminoácido para aumentar o disminuir las respuestas inmunogénicas a través de modificaciones de aminoácidos que alteran la interacción de un epítope de célula T en el anticuerpo (ver por ejemplo las patentes de los E.U.A. Números 6,835,550; 6,897,049 y 6,936249) . Además o en forma alterna a modificaciones realizadas dentro de las regiones marco o CDR, los anticuerpos de esta descripción pueden diseñarse para incluir modificaciones dentro de la región Fc, típicamente para alterar una o más propiedades funcionales del anticuerpo tales como vida media en suero, fijación de complemento, enlace de receptor Fc y/o citotoxicidad celular dependiente de antígeno. Además, un anticuerpo de esta descripción puede ser modificado químicamente (por ejemplo una o más porciones químicas pueden conectarse al anticuerpo) o modificado para alterar su glicocilación, de nuevo para alterar una o más propiedades funcionales del anticuerpo. Cada una de estas modalidades se describe con mayor detalle a continuación. La numeración de los residuos en la región Fc es la del índice EU de Kabat . En una modalidad, la región bisagra de CH1 se modifica de manera tal que el número de residuo cisteína en la región bisagra se altere, por ejemplo aumenta o disminuye. Este enfoque se describe más en la patente de los E.U.A. Número 5,677,425 por Bodmer et al. El número de residuo cisteína en la región bisagra de CH1 se altera por ejemplo para facilitar el armado de las cadenas pesadas y ligeras o para incrementar o disminuir la estabilidad del anticuerpo. En otra modalidad, la región bisagra Fc del anticuerpo se muta para disminuir la vida media biológica del anticuerpo. Más específicamente, una o más mutaciones de aminoácidos se introducen en la región de interfase de dominio CH2-CH3 del fragmento Fc-bisagra de manera tal que el anticuerpo tenga deteriorado el enlace de Estafilococcil proteína A (SpA) respecto al enlace SpA de dominio Fc-bisagra nativo. Este enfoque se describe con mayor detalle en la patente de los E.U.A. número 6,165,745 otorgada a Ward et al. En otra modalidad, el anticuerpo se modifica para incrementar su vida media biológica. Son posibles varios enfoques. Por ejemplo uno o más de las siguientes mutaciones puede introducirse: T252L, T254S, T256F, como se describe en la patente de los E.U.A. número 6,277,375 otorgada a Ward. En forma alterna, para aumentar la vida media biológica, el anticuerpo puede alterarse dentro de la región CHl o CL para contener un epítope de enlace de receptor de recuperación que se toma de dos bucles de un dominio CH2 de una región Fc de un IgG, como se describe en las patentes de los E.U.A. números 5,869,046 y 6,121,022 otorgadas a Presta et al. Todavía en otras modalidades, la región Fc se altera al reemplazar al menos un residuo de aminoácido con un residuo aminoácido diferente para alterar la o las funciones efectoras del anticuerpo. Por ejemplo, uno o más aminoácidos seleccionados del residuo aminoácido 234, 235, 236, 237, 297, 318, 320 y 322 pueden reemplazarse con un residuo aminoácido diferente de manera tal que el anticuerpo tenga una afinidad alterada para un ligando efector pero retenga la habilidad de enlace de antígeno del anticuerpo precursor. El ligando efector al cual se altera la afinidad puede ser por ejemplo un receptor Fc o el componente Cl del complemento. Este enfoque se describe con mayor detalle en las patentes de los E.U.A. números 5,624,821 y 5,648,260, ambas por Winter et al. En otro ejemplo, uno o más aminoácidos seleccionados de residuo aminoácido 329, 331 y 322 pueden reemplazarse con un residuo aminoácido diferente de manera tal que el anticuerpo tenga enlace Clq alterado y/o citotoxicidad dependiente de complemento (CDC) reducida o abolida. Este enfoque se describe con mayor detalle en la patente de los E.U.A. número 6,194,551 otorgada a Idusogie et al . En otro ejemplo, uno o más residuo aminoácido dentro de las porciones de aminoácido 231 y 239 se alteran para de esta manera alterar la capacidad del anticuerpo para fijar el complemento. Éste enfoque se describe más en la publicación de PCT WO 94/29351 por Bodmer et al . Todavía en otro ejemplo, la región Fc se modifica para aumentar la capacidad del anticuerpo en mediar la citotoxicidad dependiente de anticuerpo (ADCC) y/o aumentar la afinidad del anticuerpo por un receptor Fc/ al modificar uno o más aminoácidos en las siguientes posiciones: 238, 239, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 324, 326, 327, 329, 330, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 o 439. Este enfoque se describe más en la publicación de PCT WO 00/42072 por Presta. Aún más, los sitios de enlace IgG humano para Fc/RI, Fc/RII y Fc^RIII y FcRn se han cartografiados y variantes con enlace mejorado se han descrito (ver Shields, R.L. et al (2001) J. Biol. Chem. 276:6591-6604). Mutaciones específicas en las posiciones 256, 290, 298, 333, 334 y 339 se mostraron que mejoran enlace a Fc ? RUI . Adicionalmente, los siguientes mutantes de combinación se mostró que mejoran el enlace Fc RIII: T256A/S298A, S298A/E333A, S298A/K224A y S298A/E333A/K334A. Todavía en otra modalidad, la glicosilación de un anticuerpo se modifica. Por ejemplo, un anticuerpo aglicosilado puede elaborarse (es decir, el anticuerpo carece de glicosilación) . La glicosilación puede alterarse por ejemplo para incrementar la afinidad del anticuerpo por antígeno. Estas modificaciones carbohidrato pueden lograrse por ejemplo al alterar uno o más sitios de glicosilación dentro de la secuencia de anticuerpo. Por ejemplo, una o más substituciones de aminoácido pueden elaborarse que resultan en eliminación de uno o más sitios de glicosilación marco de región variable para de esta manera eliminar glicosilación en ese sitio. Esta aglicosilación puede aumentar la afinidad del anticuerpo por antígeno. Este enfoque se describe con mayor detalle en las patentes de los E.U.A. números 5,714,350 y 6,350,861 por Co et al.

En forma adicional o alterna, un anticuerpo puede elaborarse que tiene un tipo alterado de glicosilación tal como un anticuerpo hipofucosilado que tiene cantidades reducidas de residuos fucosilo o un anticuerpo que tiene estructuras GlcNac bisectantes incrementadas. Estos patrones de glicosilación alterados se ha demostrado que incrementan la capacidad ADCC de los anticuerpos. Estas modificaciones carbohidrato pueden lograrse por ejemplo al expresar el anticuerpo en una célula anfitpona con maquinaria de glicosilación alterada. Células con maquinaria de glicosilación alterada se han descrito en la especialidad y pueden emplearse como células anfitrionas en las que se expresen anticuerpos recombinantes de esta descripción para de esta manera producir un anticuerpo con glicosilación alterada. Por ejemplo, las líneas celulares Ms704, Ms705 y Ms709 carecen del gen de fucosiltransferasa, FUT8 (alpha (1,6) fucosyltransferase) , de manera tal que anticuerpos expresados en las líneas celulares Ms704, Ms705 y Ms709 carecen de fucasa?? en sus carbohidratos. Las líneas celulares FUT8 ' Ms704, Ms705 y Ms709 se crearon por la ruptura dirigida del gen FUT8 en células CHO/DG44 utilizando dos vectores de reemplazo (ver publicación de patente de los E.U.A. número 20040110704 por Yamane et al. y Yamane-Ohnuki et al. (2004) Biotechnol Bioeng 87:614-22). Como otro ejemplo, EP 1,176,195 por Hanai et al. describe una línea celular con un gen FUT8 funcionalmente roto, que codifica una fucosiltransferasa de manera tal que anticuerpos expresados en dicha línea celular exhiben hipofucosilación al reducir o eliminar la enzima relacionada al enlace alfa 1, 6. Hanai et al. también describe líneas celulares que tienen baja actividad enzimática para agregar fucosa a la N-acetilglucosamina que liga a la región Fc del anticuerpo o no tiene la actividad enzimática, por ejemplo, la línea celular de mieloma de rata YB2/0 (ATCC CRL 1662) . La publicación de PCT WO 03/035835 por Presta describe una línea celular CHO variante, células Lee 13 con reducida capacidad para conectar fucosa a carbohidratos enlazados a Asn (297), también resultando en hipofucosilación de anticuerpos expresados en esa célula anfitriona (ver también Shields, R.L. et al (2002) J. Biol. Chem. TJT. lßlZZ-lßlAQ) ) . La publicación de PCT WO 99/54342 por Urnana et al. describe líneas celulares diseñadas para expresar glicosiltransferasas con modificación de glicoproteína (e.g., beta (1 , 4) -N-acetylglucosaminyltransferase III (GnTIII)) tal que anticuerpos expresados en las líneas celulares de ingeniería exhiben incrementadas estructuras GlcNac disectantes?? que resultan en actividad a veces incrementada de los anticuerpos (ver también Umana et al. (1999) Nat. Biotech. 17:176-180). En forma alterna, los residuos fucosa del anticuerpo pueden escindirse utilizando una enzima fucosidasa. Por ejemplo, la fucosidasa alfa-L-focosidasa retira residuos fucosilo de anticuerpos (Tarentino, A.L. et al (1975) Biochem. 14:5516-23) . Otra modificación de los anticuerpos presentes que se contempla por esta descripción es la modificación con PEG. Un anticuerpo puede ser modificado con PEG para por ejemplo incrementar la vida media biológica (en suero) del anticuerpo. Para modificar con PEG un anticuerpo, el anticuerpo, o su fragmento, típicamente se reacciona con polietilenglicol (PEG) , tal como un éster reactivo o derivado aldehido de PEG, bajo condiciones donde uno o más grupos PEG se conectan al anticuerpo o al fragmento de anticuerpo. Típicamente, la modificación con PEG se lleva a cabo mediante una reacción de acilación o una reacción de alquilación con una molécula PEG reactiva (o un polímero soluble en agua reactivo análogo) . Como se emplea aquí, el término "polietilenglicol" se pretende que abarque cualquiera de las formas de PEG que se han empleado para derivatizar otras proteínas, tales como mono(Cl-ClO) alcoxy- o ariloxy- polietilenglicol o polietilenglicol maleimida. En ciertas modalidades, el anticuerpo a modificar con PEG es un anticuerpo aglicosilado . Métodos para modificar con PEG proteína se conocen en la especialidad y pueden ser aplicados a los anticuerpos de esta descripción. Ver por ejemplo EP 0 154 316 por Nishimura et al. y EP 0401 384 por Ishikawa et al. Métodos de Ingeniería de Anticuerpos Como se discutió anteriormente, los anticuerpos anti-08E que tienen secuencias VH y V? aquí descritas, pueden utilizarse para crear nuevos anticuerpos anti-08E al modificar las secuencias VH y/o V? o la o as regiones constantes conectadas. De esta manera, en otro aspecto de esta descripción, las características estructurales del anticuerpo anti-08E de esta descripción, por ejemplo IG11, 2A7, 2F9, 12E1 o 13D12 , se utilizan para crear anticuerpo anti-08E estructuralmente relacionados que retienen al menos una propiedad funcional de los anticuerpos de esta descripción, tal como enlace a 08E humano. Por ejemplo, una o más regiones CDR de IG11, 2A7 , 2F9, 12E1 o 13D12 o sus mutaciones, pueden combinarse en forma recombinante con regiones marco conocidas y/u otras CDRs para crear anticuerpos anti-08E adicionales de ingeniería recombinante de esta descripción, como se discutió anteriormente. Otros tipos de modificaciones incluyen aquellos descritos en la sección previa. El material de partida para el método de ingeniería es uno o más de las secuencias VH y/o V? que aquí se proporcionan o una o más regiones CDR de los mismos. Para crear el anticuerpo de ingeniería, no es necesario de hecho preparar (es decir, expresar una proteína) un anticuerpo que tenga una o más de las secuencias VH y/o V? que aquí se proporcionan o uno o más de sus regiones CDR. Por el contrario, la información contenida en la o las secuencias se utiliza como el material de partida para crear una o unas secuencias de "segunda generación" derivadas de la o las secuencias originales y después la o las secuencias de "segunda generación" se preparan y expresan como una proteína. De acuerdo con esto, en otra modalidad, esta descripción proporciona un método para preparar un anticuerpo anti-08E que comprende: (a) proporcionar: (i) una secuencia de anticuerpo de región variable de cadena pesada que comprende una secuencia CDRl seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOs: 11, 12, 13, 14 y 15, una secuencia CDR2 seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOs: 16, 17, 18, 19 y 20 y/o una secuencia CDR3 seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOs: 21, 22, 23, 24 y 25; y/o (ii) una secuencia de anticuerpo de región variable con cadena ligera que comprende una secuencia CDRl seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOs: 26, 27, 28, 29 y 30, una secuencia CDR2 seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOs: 31, 32, 33, 34 y 35 y/o una secuencia CDR3 seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOs : 36, 37, 38, 39 y 40; (b) Alterar al menos un residuo de aminoácido dentro de la secuencia de anticuerpo con región variable de cadena pesada y/o la secuencia de anticuerpo con región variable de cadena ligera para crear cuando menos una secuencia de anticuerpo alterada; y (c) Expresar la secuencia de anticuerpo alterada como una proteína. Técnicas de biología molecular estándar pueden emplearse para preparar y expresar la secuencia de anticuerpo alterada. Típicamente, el anticuerpo codificado por la o las secuencias de anticuerpo alteradas es aquel que retiene 1, algunas o todas las propiedades funcionales de los anticuerpos anti-08E aquí descritos, estas propiedades funcionales incluyen pero no están limitadas a : (i) liga a 08E humano con una KD de 1 x 10"7 M o menos ; (ii) liga células CHO humanas transectadas con 08E.

Las propiedades funcionales de los anticuerpos alterados pueden estimarse utilizando ensayos estándar disponibles en la técnica y/o aquí descritos, tales como aquellos establecidos en los ejemplos (por ejemplo citometría de flujo, ensayos de enlace) . En ciertas modalidades de los métodos de ingeniería de anticuerpos de esta descripción, pueden introducirse mutaciones al azar o selectivamente sobre todo o parte de la secuencia de codificación de anticuerpo anti-08E y los anticuerpos anti-08E modificados resultantes pueden cribarse Para actividad de enlace y/u otras propiedades funcionales como aquí se describe. Métodos mutacionales se han descrito en la especialidad. Por ejemplo, la publicación PCT WO 02/092780 por Short describe métodos para cribar Mutaciones de anticuerpo utilizando mutagénesis de saturación, ensamblado de ligación sintética o sus combinaciones. En forma alterna, la publicación de PCT número WO 03/074679 por Lazar et al. describe utilizar métodos de criba computacional para optimizar las propiedades físico químicas de los anticuerpos. Moléculas de Ácido Nucleico que Codifican Anticuerpos de Esta Descripción Otro aspecto de esta descripción se refiere a moléculas de ácido nucleico que codifican los anticuerpos de esta descripción. Los ácidos nucleicos pueden estar presentes en células enteras, en un lisado celular o en una forma parcialmente purificada o substancialmente pura. Un ácido nucleico se "aisla" o "vuelve sustancialmente puro" cuando se purifica aparte de otros componentes celulares u otros contaminantes, por ejemplo otros ácidos nucleicos celulares o proteínas, por técnicas estándar, incluyendo tratamiento alcalino/SDS, bandas CsCl, cromatografía en columna, electroforesis en gel de agarosa y otros bien conocidos en la especialidad. Ver F. Ausubel, et al, ed. (1987) Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York. Un ácido nucleico de esta descripción puede ser por ejemplo ADN o ARN y puede no contener secuencias intrónicas. En una modalidad preferida, el ácido nucleico es una molécula de ADNc. Ácidos nucleicos de esta descripción pueden obtenerse utilizando técnicas de biología molecular estándar. Para anticuerpos expresados por hibridomas (por ejemplo, hibridomas preparados por ratones transgénicos que transportan genes de inmunoglobulina humana como se describe más a continuación) ADNcs que codifican las cadenas ligeras y pesadas del anticuerpo elaboradas por el hibridoma pueden obtenerse por amplificación PCR estándar o técnicas de clonación de ADNc. Para anticuerpos obtenidos de una biblioteca de genes de inmunoglobulina (por ejemplo utilizando técnicas de exhibición fago) , ácido nucleico que codifica el anticuerpo puede recuperarse de la biblioteca. Moléculas de ácido nucleico preferidas de esta descripción son aquellas que codifican las secuencias VH y V? de los anticuerpos monoclonales IG11, 2A7 , 2F9, 12E1 o 13D12. Secuencias de ADN que codifican las secuencias VH de IG11, 2A7, 2F9, 12E1 y 13D12 se ilustran en SEQ ID NOs: 41, 42, 43, 44 y 45, respectivamente. Secuencias de ADN que codifican las secuencias VL de IG11, 2A7 , 2F9, 12E1 y 13D12 se ilustran en SEQ ID NOs : 46, 47, 48, 49 y 50, respectivamente. Una vez que los fragmentos de ADN que codifican los segmentos VH y VL se obtienen, estos fragmentos de ADN pueden manipularse adicionalmente por técnicas de ADN recombinante estándar por ejemplo para convertir los genes de región variable en genes de cadena de anticuerpo de longitud integra, en genes de fragmento Fab o en un gen ScFv. En estas manipulaciones, un fragmento de ADN que codifica VL- o VH- se enlaza operativamente con otro fragmento de ADN que codifica otra proteína, tal como una región constante de anticuerpo o un enlazador flexible. El término "enlazado operativamente", como se emplea en este contexto, se pretende que signifique que los dos fragmentos de ADN se unen de manera tal que las secuencias de aminoácidos codificadas por los dos fragmentos de ADN permanecen en-cuadro. El ADN aislado que codifica la región VH puede convertirse a un gen de cadena pesada de longitud íntegra por enlace operativo de ADN que codifica VH con otra molécula de ADN que codifica regiones constantes de cadena pesada (CHl, CH2 y CH3) . Las secuencias de genes de región constante con cadena pesada humana se conocen en la especialidad (ver Kabat, E. A., el al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, E.U.A. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242) y fragmentos de ADN que abarcan estas regiones, pueden obtenerse por amplificación PCR estándar. La región constante de cadena pesada puede ser una región constante IgGl , IgG2 , IgG3 , IgG4 , IgA, IgE, IgM o IgD, pero más típicamente es una región constante IgGl o IgG4. Para un gen de cadena pesada- fragmento Fab, el ADN que codifica VH puede enlazarse operativamente a otra molécula de ADN que codifica solo la región constante CH1 de cadena pesada. El ADN aislado que codifica la región VL puede convertirse a un gen de cadena ligera en longitud íntegra (así como el gen de cadena ligera Fab) por enlace operativo del ADN que codifica VL con otra molécula de ADN que codifica la región constante de cadena ligera, CL. Las secuencias de los genes de región constante de cadena ligera humana se conocen en la técnica (ver Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, E.U.A. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242) y fragmentos de ADN que abarcan estas regiones pueden obtenerse por amplificación PCR estándar. La región constante de cadena ligera puede ser una región constante kappa o lambda pero más típicamente es una región constante kappa. Para crear un gen scFv, los fragmentos de ADN que codifican VH- y VL- se enlazan operativamente con otro fragmento que codifica un enlanzador flexible, por ejemplo codificar la secuencia de aminoácidos (Gly4 Ser) 3, de manera tal que las secuencias VH Y VL puedan ser expresadas como una proteína de cadena sencilla contigua, con las regiones VL y VH unidas por el enlazador flexible (ver por ejemplo, Bird et al (1988) Science 242:423- 426; Huston et al. (1988) Proc. Nati. Acad. Set USA 85:5879-5883; McCafferty et al, (1990) Nature 348:552-554). Producción de Anticuerpos Monoclonales de esta descripción. Anticuerpos monoclonales (mAbs) de la presente descripción pueden producirse por una variedad de técnicas, incluyendo metodología de anticuerpo monoclonal convencional, por ejemplo la técnica de hibridización celular somática estándar de Kohler and Milstein (1975) Nature 256: 495. Aunque se prefieren procedimientos de hibridización celular somática, en principio, otras técnicas para producir anticuerpo monoclonal pueden emplearse, por ejemplo transformación viral u oncogénica de linfocitos B. El sistema animal preferido para preparar hibridomas es el sistema murino. La producción de hibridomas en el ratón es un procedimiento muy bien establecido. Protocolos y técnicas de inmunización para aislamiento de esplenocitos inmunizados para fusión se conocen en la técnica. Socios de fusión (por ejemplo células de mieloma murino) y procedimientos de fusión también son conocidos. Anticuerpos quiméricos o humanizados de la presente descripción pueden prepararse con base en la secuencia de un anticuerpo monoclonal murino preparado como se describió anteriormente. ADN que codifica las inmunoglobulinas de cadena pesada y ligera puede obtenerse del hibridomas no humano de interés y diseñarse para contener secuencias de inmunoglobulina humana utilizando técnicas de biología molecular estándar. Por ejemplo, para crear un anticuerpo quimérico, las regiones variables murinas pueden enlazarse a regiones constantes humana utilizando métodos conocidos en la especialidad (ver por ejemplo la patente de los E.U.A. Número 4,816,567 otorgada a Cabilly et al.). Para crear un anticuerpo humanizado las regiones CDR murinas pueden ser insertadas en un marco humano utilizando métodos conocidos en la técnicas (ver por ejemplo la patente de los E.U.A. Número 5,225,539 otorgada a Winter y las patentes de los E.U.A. Números 5,530,101; 5,585,089; 5,693,762 y 6,180,370 otorgadas a Queen et al). En una modalidad preferida, los anticuerpos de esta descripción son anticuerpos monoclonales humanos. Estos anticuerpos monoclonales humanos dirigidos contra 08E pueden generarse utilizando ratones transgénicos o transcromosómicos que transportan partes del sistema inmune humano en vez del sistema de ratón. Estos ratones transgénicos y transcromosómicos incluyen ratones aquí referidos como el HuMAb mouse y KM mouse respectivamente y se refieren colectivamente aquí como "ratones Ig humanos" . El HuMAb mouse® (Medarex, Inc.) contiene minisitios de genes de inmunoglobulina humana que codifican secuencias de inmunoglobulina de cadena pesada humana ( µ y ? ) y cadena ligera K sin re-arreglar junto con mutaciones dirigidas que inactivan los sitios de cadena µ y K endógenos (ver por ejemplo Lonberg, et al. (1994) Nature 368(6474): 856-859). De acuerdo con esto, el ratón exhibe reducida expresión de IgM de ratón o K y en respuesta a inmunización, los transgenes de cadena pesada y ligera humanos introducidos se someten a cambio de clase y mutación somática para generar IgGx: monoclonal humano de alta afinidad (Lonberg, N. et al. (1994), supra; reviewed in Lonberg, N. (1994) Handbook of Experimental Pharmacology 113: 49-101; Lonberg, N. and Huszar, D. (1995) Intern. Rev. Immunol 13: 65-93 and Harding, F. and Lonberg, N. (1995) Ann. N Y. Acad. Sd. 764:536-546) . La preparación y uso de ratones HuMab y las modificaciones genómicas transportadas por estos ratones se describen adicionalmente en Taylor, L. et al. (1992) Nucleic Acids Research 20:6287- 6295; Chen, J. et al (1993) International Immunology 5: 647-656; Tuaillon et al (1993) Proc. Nati Acad ScL USA 90:3720-3724; Choi et al. (1993) Nature Genetics 4:117-123; Chen, J. et al. (1993) EMBO J. 12: 821-830; Tuaillon et al. (1994) J. Immunol. 152:2912-2920; Taylor, L. et al (1994) International Immunology 6: 579-591; and Fishwild, D. et al. (1996) Nature Biotechnology 14: 845-851, todos los contenidos de los cuales aquí se incorporan específicamente por referencia. Ver además, las patentes de los E.U.A. Números 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; ,633,425; 5,789,650; 5,877,397; 5,661,016; 5,814,318; 5,874,299; y 5,770,429; todas otorgadas a Lonberg y Kay; la patente de los E.U.A. Número 5,545,807 otorgada a Surani et al; las publicaciones de PCT Números WO 92/03918, WO 93/12227, WO 94/25585, WO 97/13852, WO 98/24884 y WO 99/45962, todas otorgadas a Lonberg Y Kay; y la publicación PCT Número WO 01/14424 otorgada a Korman et al . En otra modalidad, anticuerpos humanos de esta descripción pueden desarrollarse utilizando un ratón que transporta secuencias de inmunoglobulina humana o en transgenes y transcromosomas, tales que un ratón que transporta un transgen de cadena pesada humana y un trancromosoma de cadena ligera humana. Estos ratones, aquí referidos como el "KM mouse®" se describen en detalle en la publicación del PCT WO 02/43478 otorgada a Ishida et al . Aún más, sistemas de animales transgénicos alternos que expresan genes de inmunoglobulina humana están disponibles en la técnica y pueden utilizarse para desarrollar anticuerpos anti-08E de esta descripción. Por ejemplo, un sistema transgénico alterno referido como el Xenomouse (Abgenix, Inc.) puede utilizarse; esos ratones se describen por ejemplo en las patentes de los E.U.A. Números 5,939,598; 6,075,181 ; 6,114,598; 6, 150,584 y 6,162,963 otorgadas a Kucherlapati et al. Aún más, sistemas de animales transcromosómicos alternos que expresan genes de inmunoglobulina humana están disponibles en la técnica y pueden emplearse para desarrollar anticuerpos anti-08E de esta descripción. Por ejemplo, ratones que transportan tanto un transcromosoma de cadena pesada humana como un transcromosoma de cadena ligera humana, referidos como "IC mice" pueden emplearse; estos ratones se describen en Tomizuka et al. (2000) Proc. Nati. Acad. Sel USA 97:722-727. Como otro ejemplo, vacas que transporta transcromosomas de cadena pesada y ligera humana se han descrito en la técnica (Ruroiwa et al (2002) Nature Biotechnology 20:889-894) y pueden utilizarse para desarrollar anticuerpos anti-08E de esta descripción. Anticuerpos monoclonales humanos de esta descripción también pueden prepararse utilizando métodos de exhibición fago para cribar bibliotecas de genes de inmunoglobulina humana. Estos métodos de exhibición fago para aislar anticuerpos humanos se establecen en la especialidad. Ver por ejemplo: Las patentes de los E.U.A Números 5,223,409; 5,403,484; y 5,571,698 otorgadas a Ladner et al; las patentes de los E.U.A Números 5,427,908 y 5,580,717 otorgadas a Dower et al; las patentes de los E.U.A Números 5,969,108 y 6,172,197 otorgadas a McCafferty et al; y las patentes de los E.U.A Números 5,885,793; 6,521,404; 6,544,731; 6,555,313; 6,582,915 y 6,593,081 otorgadas a Griffiths et al. Anticuerpos monoclonales humanos de esta descripción también pueden prepararse utilizando ratones SCID en los cuales células inmunes humanas se han reconstituido de manera tal que una respuesta de anticuerpo humano pueda generarse ante inmunización. Estos ratones se describen en por ejemplo las patentes de los E.U.A. Números 5,476,996 y 5,698,767 otorgadas a Wilson et al . Inmunización de Ratones Ig Humanos Cuando ratones Ig humanos se emplean para desarrollar anticuerpos humanos de esta descripción, estos ratones pueden inmunizarse con una línea celular que expresa 08E, una preparación purificada o enriquecida de antígeno 08E y/o 08E recombinante o una proteína de fusión 08E, como se describe por Lonberg, N. et al. (1994) Nature 368(6474): 856-859; Fishwild, D. et al (1996) Nature Biotechnology 14: 845-851; y las publicaciones del PCT WO 98/24884 y WO 01/14424. Típicamente, los ratones serán de 6-16 semanas de edad ante la primer inmunización. Por ejemplo, una preparación purificada o recombinante (5-50 µ g) de antígeno 08E puede emplearse para inmunizar intraperitonealmente los ratones Ig humanos. Procedimientos detallados para generar anticuerpos monoclonales totalmente humanos 08E se describen en el Ejemplo 1 siguiente. La experiencia acumulativa con diversos antígenos ha mostrado que los ratones transgénicos responden cuando inicialmente se inmunizan intraperitonealmente (IP) con antígeno en adyuvante completo de Freund' s, seguido por inmunizaciones IP cada semana salteada hasta un total de 6) con antígeno en adyuvante de Freund ' s incompleto. Sin embargo, adyuvantes diferentes a Freund ' s también se encuentran efectivos. Además, células enteras en la ausencia de adyuvantes se encuentran altamente inmunogénicos. La respuesta inmune puede supervisarse sobre el curso del protocolo de inmunización con muestras de plasma obtenidas, por ejemplo por sangrados retro-orbitales. El plasma puede cribarse por ELISA y ratones con títulos suficientes de inmunoglobulina humana anti-08E pueden emplearse para fusiones (como se describe en el Ejemplo 1) . Los ratones pueden ser reforzados intravenosamente con antígeno, tres días antes de sacrificio y remoción del bazo. Se espera que 2 a 3 infusiones por cada inmunización pueda requerirse ser realizadas. Entre 6 y 24 ratones típicamente se inmunizan por cada antígeno usualmente se emplean tanto cepas HCo7 como HCol2. La generación de las cepas de ratones HCo7 y HC0I2 se describen en la patentes de los E.U.A. Número 5,770,429 y el Ejemplo 2 de la publicación de PCT WO 01/09187, respectivamente. Además, ambos transgenes HCo7 y HCol2 pueden ser desarrollados en conjunto en un solo ratón que tiene dos diferentes transgenes de cadena pesada humana (HCo7/HCol2) . En forma alterna o adicional, la cepa de KM mouse puede emplearse, como se describe en la publicación del PCT WO 02/43478. Generación de Hibridomas que Producen Anticuerpos Monoclonales Humanos de esta descripción Para generar hibridomas que producen anticuerpos monoclonales humanos de esta descripción esplenocitos y/o células de nodos linfáticos de ratones inmunizados pueden aislarse y fusionarse a una línea celular inmortalizada apropiada, tal como la línea celular de mieloma de ratón. Los hibridomas resultantes pueden cribarse para la producción de anticuerpos específicos de antígeno. Por ejemplo, suspensiones de células sencillas de linfocitos esplénicos de ratones inmunizados pueden fusionarse a un tercio del número de células de mieloma de ratón que no secretan Sp2/0 (ATCC, CRL 1581) con PEG al 50%. En forma alterna, las suspensiones de células sencillas de linfocitos esplénicos de ratones inmunizados puedo fusionarse a una cantidad igual de células de mieloma de ratón Sp2/0 utilizando un método de electrofusión basado en campo eléctrico, utilizando un electroporador de fusión celular con cámara grande de Cyto Pulse (Cyto Pulse Sciences, Inc., Glen Burnie, MD) . Las células se revisten a aproximadamente lxlO5 células/pozo en placa de microtitulación de fondo plano, seguido por una incubación de dos semanas en medio selectivo que contiene suero bovino fetal al 10% (Hyclone, Logan, UT) , P388DI al 10% (ATCC, CRL TIB-63) medio acondicionado, origen 3-5% (IGEN) en DMEM (Mediatech, CRL 10013, con alto contenido de glucosa, L-glutamina y piruvato de sodio) mas HEPES 5 mM, 2-mercaptoetanol 0.055 mM, 5 mg/ml de gentamicina y lx HAT (Sigma, CRL P-7185) . Después de aproximadamente 1-2 semanas, las células pueden cultivarse en medio en donde se reemplaza HAT con HT. Pozos individuales pueden entonces cribarse por ELISA o FECS para anticuerpos IgM e IgG monoclonales humanos. Los ciónos positivos pueden entonces cribarse para anticuerpos 08E positivos en proteína recombinante 08E por ELISA o en células que expresen 08E, por ejemplo células transfectadas CHO-08E por FACS. Una vez que ocurre el crecimiento de hibridoma extenso, puede observarse el medio usualmente después de 10-14 días. Los hibridomas que secretan anticuerpo pueden revestirse, cribarse de nuevo y si aún son positivos para IgG humano, los anticuerpos monoclonales pueden ser subclonados al menos dos veces por dilución limitante. Los subclonos estables pueden entonces cultivarse in vi tro para generar pequeñas cantidades de anticuerpo en medio de cultivo de tejido para caracterización. Para purificar anticuerpos monoclonales humanos, hibridomas selectos pueden desarrollarse en matraces de centrifugado de dos litros para purificación de anticuerpo monoclonal. Los sobrenadantes pueden filtrarse y concentrarse antes de cromatografía de afinidad con proteína A-sefarose (Pharmacia, Piscataway, N.J.). IgG eluido puede verificarse por electroforesis en gel y cromatografía de líquido de alto desempeño para asegurar pureza. La solución amortiguadora puede intercambiarse en PBS y la concentración puede determinarse por OD280 utilizando un coeficiente de extensión 1.43. Los anticuerpos monoclonales pueden tomarse en alícuotas y almacenarse a -80 grados C. Generación de Transfectomas que Producen Anticuerpos Monoclonales de esta descripción. Anticuerpos de esta descripción también puede producirse en un transfectoma de célula anfitriona utilizando por ejemplo una combinación de técnicas de ADN recombinante y métodos de transfección de genes como es bien conocido en la técnica (por ejemplo, Morrison, S. (1985) Science 229:1202). Por ejemplo, para expresar los anticuerpos o sus fragmentos de anticuerpos, ADNs que codifican cadenas pesadas y ligeras de longitud parcial o completa, pueden obtenerse por técnicas de biología molecular estándar (por ejemplo amplificación PCR o clonación de ADNc utilizando un hibridoma que exprese el anticuerpo de interés) y los ADNs pueden insertarse en los vectores de expresión de manera tal que los genes se enlacen operativamente en secuencias de control de transcripción y traducción. En este contexto, el término "enlazado operativamente" se pretende que signifique que un gen de anticuerpo se liga en un vector tal que la secuencias de control de transcripción y traducción dentro del vector, sirvan a su función pretendida de regular la transcripción y traducción del gen anticuerpo. El vector de expresión de la secuencias de control de expresión se eligen compatibles con la célula anfitriona de expresión utilizada. El gen de cadena ligera de anticuerpo y el gen de cadena pesada de anticuerpo pueden insertarse en el vector separado, o más típicamente, ambos genes se insertan en el mismo vector de expresión. Los genes de anticuerpo se insertan en el vector de expresión por métodos estándar (por ejemplo ligación de sitios de restricción complementarios en el fragmento de gen de anticuerpo y vector o ligación de extremo romo si no hay presentes sitios de restricción) . Las regiones variables de cadena ligera y pesada de los anticuerpos aquí descritos pueden utilizarse para crear genes de anticuerpo de longitud íntegra de cualquier isotipo de anticuerpo al insertarlos en vectores de expresión que ya codifican regiones constantes de cadena ligera y constantes de cadena pesada del isotipo deseado de manera tal que el segmento VH se enlaza operativamente con el o los segmentos CH dentro del vector y el segmento V se enlaza operativamente al segmento CL dentro del vector. En forma adicional o alterna, el vector de expresión recombinante puede codificar un péptido de señal que facilita la secreción de la cadena de anticuerpo de una célula anfitriona. El gen de cadena de anticuerpo puede clonarse en el vector de manera tal que el péptido de señal se enlaza en-cuadro al término amino del gen de cadena de anticuerpo. El péptido de señal puede ser un péptido de señal inmunoglobulina o un péptido de señal heteróloga (es decir un péptido de señal y una proteína no-inmunoglobulina) . Además de los genes de cadena de anticuerpo, los vectores de expresión recombinante de esta descripción transportan secuencias regulatorias que controlan la expresión de los genes de cadena de anticuerpo en una célula anfitriona. El término "secuencia regulatoria" se pretende que incluya promotores, mejoradores y otros elementos de control de expresión (por ejemplo señales de poliadenilación) que controlan la transcripción o traducción de los genes de cadena de anticuerpo. Estas secuencias regulatorias se describen por ejemplo en (Gene Expression Technology. Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA (1990) ) . Se aprecia por aquellos con destreza en la técnica que el diseño del vector de expresión, incluyendo la selección de secuencias regulatorias, puede depender de factores tales como la selección de la célula anfitriona a transformar, el nivel de expresión de proteína deseada, etc. Secuencias regulatorias preferidas para expresión de célula anfitriona en mamífero incluyen elementos virales que dirigen altos niveles de expresión de proteína en células de mamífero, tales como promotores y/o mejoradores derivados de citomegalovirus (CMV), Virus de Simio 40 (SV40) , adenovirus (por ejemplo el promotor tardío mayor de adenovirus (AdMLP) y polioma. En forma alterna, secuencias regulatorias no virales, pueden emplearse, tales como el promotor ubicuitina o promotor ß - globina. Aún más, elementos regulatorios compuestos de secuencias de diferentes fuentes, tales como el sistema promotor SR< que contiene secuencias del promotor temprano SV40 y la repetición terminal larga del virus de leucemia de células T humana Tipo 1 (Takebe, Y. et al (1988) Mol. Cell. Biol. 8:466-472). Además de los genes de cadena de anticuerpo y secuencias regulatorias, los vectores de expresión recombinante de esta descripción pueden transportar secuencias adicionales tales como secuencias que regulan replicación del vector en células anfitrionas (por ejemplo orígenes de replicación) y genes marcadores seleccionables. El gen marcador seleccionable facilita la selección de células anfitrionas en las cuales se ha introducido el vector (ver por ejemplo las patentes de los E.U.A Números 4,399,216, 4,634,665 y 5,179,017, todas por Axel et al) . Por ejemplo, típicamente el gen marcador seleccionable confiere resistencia a drogas tales como G418, higromicina o metotrexato, en una célula anfitriona en la cual se ha introducido el vector. Genes marcadores seleccionables preferibles incluyen el gen de dihidrofolato reductaza (DHFR) ) para utilizar en células anfitrionas dhfr- con selección/amplificación de metotrexato) y el gen neo (para selección G418) . Para expresión de las cadenas ligera y pesada, el o los vectores que codifican las cadenas pesada y ligeras se transfectan en una célula anfitriona por técnicas estándar. Las diversas formas del término "transfección" se pretende que abarquen una amplia variedad de técnicas comúnmente empleadas para la introducción de ADN exógeno en una célula anfitriona procariótica o eucariótica, por ejemplo electroporación, precipitación de fosfato de calcio, transfección DEAE-dextrano y semejantes. Aunque teóricamente es posible expresar los anticuerpos de esta descripción en cualquiera células huéspedes o anfitrionas procarióticas o eucarióticas, la expresión de anticuerpos en células eucarióticas y más típicamente células anfitrionas de mamífero es la más preferida debido a que estás células eucarióticas y en particular células de mamífero son más probable que las células procarióticas ensamblen y secreten un anticuerpo adecuadamente doblado e inmonológicamente activo. La expresión procariótica de genes de anticuerpo se ha reportado ineficaz para producir alto rendimiento de anticuerpo activo (Boss, M. A. and Wood, C. R. (1985) Immunology Today 6:12-13). Células anfitrionas de mamífero preferidas para expresar los anticuerpos recombinantes de esta descripción incluyen células de Ovario de Hámster chino (células CHO = Chínese Hámster Ovary) (incluyendo células dhfr-CHO, desertas por Urlaub and Chasin, (1980) Proc.

Nati. Acad. ScL USA 77:4216-4220, utilizadas con un marcador seleccionable DHFR, por ejemplo como se describe en R. J. Kaufman and P. A. Sharp (1982) Mol. Biol. 752:601-621), células de mieloma NSO, células COS y células SP2. En particular, para utilizar con las células de mieloma NSO, otro sistema de expresión preferido es el sistema de expresión de gen GS descrito en WO 87/04462, WO 89/01036 y EP 338,841. Cuando vectores de expresión recombinante que codifican los genes de anticuerpo se introducen en células anfitrionas de mamífero, los anticuerpos se producen al cultivar las células anfitrionas por un periodo de tiempo suficiente para permitir expresión del anticuerpo en las células anfitrionas, o más típicamente, secreción del anticuerpo en el medio de cultivo en donde se desarrollan las células anfitrionas. Los anticuerpos pueden recuperarse del medio de cultivo utilizando métodos de purificación de proteínas estándar. Caracterización de Enlace de Anticuerpo con Antígeno Los anticuerpos de esta descripción pueden probarse para ligar a 08E, por ejemplo citometría de flujo. Brevemente, células que expresan 08E se recolectan frescas de matraces de cultivo de tejido y se prepara una sola suspensión celular. Suspensiones celulares que expresan 08E ya son teñidas con anticuerpo primario directamente o después de fijación con paraformaldehído al 1% en PBS. Aproximadamente un millón de células se resuspenden en PBS que contienen BSA al 0.5% y 50-200 g/ml de anticuerpo primario e incuban en hielo por 30 minutos. Las células se lavan dos veces con PBS que contienen BSA al 0.1%, NaN3 al 0.01%, resuspenden en 100 µ l de IgG anti -humano-cabra conjugado-FITC diluido 11:100 (Jackson Immuno Research, West Grove, PA) e incuban en hielo por 30 minutos adicionales. Las células de nuevo se lavan dos veces, resuspenden en 0.5 ml de amortiguador de lavado y analizan para tinción fluorescente en un citómetro FACSCalibur (Becton-Dickinson, San José, CA) . En forma alterna, anticuerpos de esta descripción pueden probarse para ligar a 08E por ELISA estándar. Brevemente, placas de microtitulación se revisten con 08E purificado a 0.25 µg/ml en PBS después bloquean con albúmina de suero bovino al 5% en PBS. Diluciones de anticuerpo (por ejemplo, diluciones de plasma de ratones inmunizados con 08E) se agregan a cada pozo e incuban por 1-2 horas a 37 grados C. Las placas se lavan con PBS/Tween y después incuban con reactivo secundario (por ejemplo, para anticuerpos humanos, un reactivo policlonal específico de Fc IgG cabra-antihumano) conjugado a fosfatasa alcalina por 1 hora a 37 grados C. Después de lavar, las placas se revelan con substrato pNPP (1 mg/ml) y analizan a OD de 405-650.

Típicamente, los ratones que desarrollan los más altos títulos se utilizarán para fusiones. Un ensayo ELISA o FACS, como se describió anteriormente, también puede utilizarse para cribar hibridomas que muestran reactividad positiva con inmunógeno 08E. Hibridomas que ligan con alta avidez a 08E se subclonan y caracterizan adicionalmente. Un clon de cada hibridoma, que retiene la reactividad de las células precursoras (por ELISA o FACS) , puede seleccionarse para producir un banco de células de 5-10 ampolletas almacenado a -140 grados C y para purificación de anticuerpo. Para purificar anticuerpos anti-08E, hibridomas selectos pueden desarrollarse en matraces giratorios de dos litros para purificación de anticuerpo monoclonal.

Los sobrenadantes pueden filtrarse y concentrarse antes de cromatografía de afinidad con proteína A-sepharose (Pharmacia, Piscataway, NJ) . IgG eluído puede verificarse por electroforesis en gel y cromatografía de líquido de alto desempeño para asegurar pureza. La solución amortiguadora puede intercambiarse en PBS y la concentración puede determinarse por OD280 utilizando coeficiente de extinción 1.43. Los anticuerpos monoclonales pueden tomarse en alícuotas y almacenarse a -80 grados C.

Para determinar si los anticuerpos monoclonales anti-08E selectos ligan a epítopes únicos, cada anticuerpo puede ser biotinilado utilizando reactivos comercialmente disponibles (Pierce, Rockford, IL) . Estudios de competencia utilizando anticuerpos monoclonales sin etiquetar y anticuerpos monoclonales biotinilados, pueden realizarse utilizando placas ELISA revestidas 08E como se describe anteriormente. Enlace mAb biotinilado puede ser detectado con una sonda de estrepavidina-fosfatasa alcalina. En forma alterna, estudios de competencia pueden realizarse utilizando anticuerpo radio-etiquetado y anticuerpos de competencia sin etiquetar pueden detectarse en un análisis Scatchard, como se describe adicionalmente en los siguientes ejemplos. Para determinar el isotipo de anticuerpos purificados, ELISAs de isotipo pueden realizarse utilizando reactivos específicos para anticuerpos de un isotipo particular. Por ejemplo, para determinar el isotipo de un anticuerpo monoclonal humano, pozos de placas de microtitulación pueden revestirse con 1 µg/ml de inmunoglobulina anti-humano durante la noche a 4 grados C. Después de bloquear con BSA al 1%, las placas se reaccionan con 1 µ g /ml o menos de anticuerpos monoclonales de prueba o controles de isotipo purificados, a temperatura ambiente por una o dos horas. Los pozos pueden entonces reaccionarse ya sea con cualquiera de sondas conjugadas de fosfatasa alcalina específica de IgGl humano o IgGl humano. Placas se revelan y analizan como se describió anteriormente. IgGs humanos anti-08E pueden además probarse por reactividad con antígeno 08E por transferencia Western. Brevemente, 08E puede prepararse y someterse a electroforesis en gel de poliacrilamida dodecil sulfato de sodio. Después de electroforesis, los antígenos separados se transfieren a membranas de nitrocelulosa, bloquean con suero bovino fetal al 10% y sondean con anticuerpos monoclonales para probar. Enlace IgG humano puede detectarse utilizando fosfatasa alcalina IgG anti-humano y revelarse con tabletas de substrato BCIP/NBT (Sigma Chem. Co., St . Louis, Mo.). Propiedades Físicas de Anticuerpo Los anticuerpos de la presente descripción además pueden caracterizarse por diversas propiedades físicas de los anticuerpos anti-08E. Diversos ensayos pueden emplearse para detectar y/o diferenciar clases distintas de anticuerpos con base en sus propiedades físicas . En algunas modalidades, los anticuerpos de la presente descripción pueden contener uno o más sitios de glicosilación ya sea en la región variable de cadena ligera o cadena pesada. La presencia de uno o más sitios de glicosilación en la región variable puede resultar en inmunogenicidad incrementada del anticuerpo o una alteración del pK del anticuerpo debido a enlace antígeno alterado (Marshall et al (1972) Aram Rev Biochem 41:673-702; Gala FA and Morrison SL (2004) J Immunol 172:5489-94; Wallick et al (1988) J Exp Med 168: 1099- 109; Spiro RG (2002) Glycobiology 12:43R-56R; Parekh et al (1985) Nature 316:452-7; Mimura et al. (2000) Mol Immunol 37:697-706) . Se ha conocido que ocurre glicosilación en motivos que contiene una secuencia anN-X-S/T. Glicosilación de región variable puede probarse utilizando un ensayo Glycoblot, que escinde el anticuerpo para producir un Fab y después prueba glicosilación utilizando un ensayo que mide la oxidación de peryodato y formación de base de Schiff. En forma alterna, glicosilación de región variable puede probarse utilizando cromatografía de luz Dionex (Dionex-LC) , que escinde sacáridos de un Fab en monosacáridos y analiza el contenido de sacárido individual. En algunos casos, se prefiere tener un anticuerpo anti-08E que no contenga glicosilación de región variable. Esto puede lograrse ya sea al seleccionar anticuerpos que no contienen el motivo de glicosilación en la región variable o al mutar residuos dentro del motivo de glicosilación utilizando técnicas estándar bien conocidas en la especialidad. En una modalidad preferida, los anticuerpos de la presente descripción no contienen sitios de isomerismo asparagina. Una desamidación o efecto de ácido isoaspártico puede ocurrir en secuencias N-G o D-G, respectivamente. La desamidación o efecto de ácido isoaspártico resulta en la creación de ácido isoaspártico que disminuye la estabilidad de un anticuerpo al crear una estructura acodada de un extremo carboxi de cadena lateral en vez de la cadena principal . La creación de ácido isoaspártico puede medirse utilizando un ensayo iso-quant, que utiliza HPLC de fase inversa para probar ácido isoaspártico. Cada anticuerpo tendrá un punto isoeléctrico (pi) único, pero en general anticuerpos caerán en el intervalo de pH entre 6 y 9.5. El pl para un anticuerpo IgGl típicamenten cae dentro del rango de pH de 7-9.5 y pl para un anticuerpo IgG4 típicamente cae dentro del rango de pH de 6-8. Anticuerpos pueden tener un pl que está fuera de este intervalo. Aunque los efectos se conocen en general, hay especulación de que anticuerpos con un pl fuera del intervalo normal pueden tener algo de desdoblado e inestabilidad bajo condiciones in vivo . El punto isoeléctrico puede probarse utilizando ensayos de enfoque isoeléctrico capilar, que crean un gradiente de pH y pueden utilizar enfoque láser para incrementar la precisión (Janini et al (2002) Electrophoresis 23:1605-11; Ma et al (2001) Chromatography 53:S75-89; Hunt et al (1998) J Chromatog?? A 800:355-67). En algunos casos, se prefiere tener un anticuerpo anti-08E que contiene un valor pl que cae en el intervalo normal . Esto puede lograrse ya sea al seleccionar anticuerpos con un pl en el intervalo normal o al mutar residuos de superficie cargada utilizando técnicas estándar bien conocidas en la especialidad. Cada anticuerpo tendrá una temperatura de fusión que es indicativa de estabilidad térmica (Krishnamurthy R and Manning MC (2002) Curr Pharm Biotechnol 3_:361-71). Una estabilidad térmica superior indica mayor estabilidad de anticuerpo total in vivo . El punto de fusión de un anticuerpo puede ser medido utilizando técnicas tales como calorimetría de exploración diferencial (Chen et al (2003) Pharm Res 20:1952-60; Ghirlando et al (1999) Immunol Lett 68:47-52) . TM? indica la temperatura del desdoblado inicial del anticuerpo. TM2 indica la temperatura de desdoblado completo del anticuerpo. En general, se prefiere que TM1 de un anticuerpo de la presente descripción sea mayor a 60 grados C, de preferencia mayor que 65 grados C, aún más preferiblemente mayor que 70 grados C. En forma alterna, la estabilidad térmica de un anticuerpo puede medirse utilizando dicroismo circular (Murray et al. (2002) J. Chromatography Sci 40:343-9). En una modalidad preferida, se eligen anticuerpos que no se degradan rápidamente. La fragmentación de un anticuerpo anti-08E puede medirse utilizando electrofóresis capilar (CE = capillary electrophoresis) y MALDI-MS, como bien se comprende en la técnica (Alexander AJ and Hughes DE (1995) Anal Chem 67:3626-32) . En otra modalidad preferida, se eligen anticuerpos que tienen efectos de agregación mínimos. La agregación puede llevar a disparo de una respuesta inmune indeseada y/o propiedades farmacocinéticas alteradas o desfavorables. En general, son aceptables anticuerpos con agregación de 25% o menos, de preferencia 20% o menos, aún más preferible 15% o menos, aún más preferiblemente 10% o menos e incluso más preferiblemente 5% o menos. La agregación puede medirse por varias técnicas bien conocidas en la especialidad, incluyendo cromatografía de líquido con alto desempeño (HPLC = high performance liquid chromatography) en columna de exclusión de tamaño (SEC = size-exclusion column) y dispersión de luz para identificar monómeros, dímeros, trímeros o multímeros. Inmunoconj ugados En otro aspecto, la presente descripción caracteriza un anticuerpo anti-08E o su fragmento, conjugado a una porción terapéutica, tal como una citotoxina, una droga (por ejemplo un inmunosupresor) o una radiotoxina. Estos conjugados se refieren aquí como " inmunoconjugados " . Los inmunoconj ugados que incluyen una o más citotoxinas se refieren como "inmunotoxinas". Una citotoxina o agente citotóxico incluye cualquier agente que sea nocivo a (por ejemplo, extermine) las células. Ejemplos incluyen taxol, citochalasina B, gramicidina D, bromuro de etidio, emetina, mitomicina, etoposido, tenoposido, vincristina, vinblastina, colchicina, doxorubicina, daunorubicina, dihidroxi antracina diona, mitoxantrona, mitramicina, actinomicina D, 1-dehidrotestosterona, glucocorticoides, procaina, tetracaina, lidocaina, propranolol y puromicina y sus análogos u homólogos. Agentes terapéuticos también incluyen, por ejemplo antimetabolitos (por ejemplo, metotrexato, 6 -mercaptopurina, 6-tioguanina, citarabina, 5-fluorouracil decarbazina) , agentes alquilantes (por ejemplo, mecloretamina, tiotepa, clorambucil, melfalan, carmustina (BSNU) y lomustina (CCNU) , ciclofosfamida, busulfan, dibromomannitol , estreptozotocina, mitomocina C y cis-diclorodiamina platino (II) (DDP) cisplatina), antraciclinas (por ejemplo daunorubicina (anteriormente daunomicina) y doxorubicina), antibióticos (por ejemplo, dactinomicina (anteriormente actinomicina) , bleomicina, mitramicina y antramicina (AMC) ) y agentes anti -mitóticos (por ejemplo, vincristina y vinblastina) . Otros ejemplos preferidos de citotoxinas terapéuticas que pueden conjugarse a un anticuerpo de esta descripción incluyen duocarmicinas, calicheamicinas, maytansinas y aurisatinas y sus derivados. Un ejemplo de un conjugado de anticuerpo calicheamicina está comercialmente disponible de (Mylotarg™; Wyeth-Ayerst) . Citoxinas pueden conjugarse con anticuerpos de esta descripción utilizando tecnología de enlazador disponible en la especialidad. Ejemplos de tipos de enlazadores que se han empleado para conjugar una citotoxina a un anticuerpo incluyen pero no están limitados a, hidrazonas, tioéteres, esteres, disulfuros y enlazadores que contienen péptido. Un enlazador puede seleccionarse que por ejemplo es susceptible a escisión por bajo pH dentro del compartimiento lisosomal o susceptible a escisión por proteasas, tales como proteasas que de preferencia se expresan en tejido de tumor tales como catepsinas (por ejemplo, catepsinas B, C, D) . Para mayor discusión de tipos de citotoxinas, enlazadores y métodos para conjugar agentes terapéuticos con anticuerpos, ver también Saito, G. et al. (2003) Adv. Drug Deliv. Rev. 55:199- 215; Trail, P.A. et al (2003) Cáncer Immunol . Immunother. 52:328-337; Payne, G. (2003) Cáncer Cell 3:207-212; Alien, T.M. (2002) Nat. Rev. Cáncer 2:750-763; Pastan, I and Kreitman, R. J. (2002) Curr. Opin. Investig. Drugs 3:1089-1091; Senter, P.D. and Springer, CJ. (2001) Adv. Drug Deliv. Rev. 53:247-264. Anticuerpos de la presente descripción también pueden ser conjugados a un isótopo radioactivo para genera radiofarmacéuticos citotóxicos, también referidos como radioinmunoconjugados . Ejemplos de isótopos radioactivos que pueden ser conjugados con anticuerpos para utilizar en forma de diagnóstico o terapéuticamente, incluyen pero no están limitados a, yodo131, yodo125, indio111, itrio90 y lutecio177. Métodos para preparar radioinmunconjugados se establecen en la especialidad. Ejemplos de radioinmunoconjugados están comercialmente disponibles, incluyendo Zevalin™ (IDEC Pharmaceuticals) y Bexxar™ (Corixa Pharmaceuticals) y pueden utilizarse métodos similares para preparar radioinmunoconjugados empleando los anticuerpos de esta descripción. Los conjugados de anticuerpo de esta descripción pueden utilizare para modificar una respuesta biológica determinada y la porción de droga no habrá de considerarse como limitada a agentes quimio terapéuticos clásicos. Por ejemplo, la porción de droga puede ser una proteína o polipéptido que posee una actividad biológica deseada. Estas proteínas pueden incluir, por ejemplo una toxina enzimáticamente activa o su fragmento activo, tal como abrina, ricina A, exotoxina de pseudomonas o toxina de difteria; una proteína tal como factor de necrosis de tumor o interferona- ? ; o modificadores de respuesta biológica tales como por ejemplo, linfocinas, interleucina-1 ("IL-I"), interleucina-2 ("IL-2"), interleucina-6 ("IL-6"), factor de estímulo de colonia de macrófagos de granulocitos ("GM-CSF" = granulocyte macrophage colony stimulating factor) , factor de estímulo de colonia de granulocitos ("G-CSF" = granulocyte colony stimulating factor) u otros factores de crecimiento. Técnicas para conjugar esta porción terapéutica con anticuerpos son bien conocidas, ver, por ejemplo, Arnon et al, "Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cáncer Therapy" , in Monoclonal Antibodies And Cáncer Therapy, Reisfeld et al, (eds.), pp. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985); Hellstrom et al, "Antibodies For Drug Delivery", in Controlled Drug Delivery (2nd Ed.), Robinson et al. (eds.), pp . 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987) ; Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cáncer Therapy: A Review", in Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al, (eds.), pp. 475-506 (1985); "Analysis, Results and Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cáncer Therapy", in Monoclonal Antibodies For Cáncer Detection And Therapy, Baldwin et al. (eds.), pp . 303-16 (Academic Press 1985) and Thorpe et al, "The Preparation And Cytotoxic Properties Of Antibody-Toxin Conjugates", Immunol . Rev., 62:119-58 (1982). Moléculas Biespecíficas En otro aspecto, la presente descripción caracteriza moléculas biespecíficas que comprenden un anticuerpo anti-08E o su fragmento, de esta descripción. Un anticuerpo de esta descripción o sus porciones de enlace de antígeno, pueden derivatizarse o enlazarse con otra molécula funcional, por ejemplo otro péptido o proteína (por ejemplo, otro anticuerpo o ligando para receptor) para generar una molécula biespecífica que liga con al menos dos sitios de enlace diferentes o moléculas objetivo. El anticuerpo de esta descripción de hecho puede ser derivatizado o enlazado a más de otra molécula funcional para generar moléculas multiespecíficas que ligan a más de dos sitios de enlace diferentes y/o moléculas objetivo; estas moléculas multiespecíficas también se pretenden abarcadas por el término "molécula biespecífica" como se emplea aquí. Para crear una molécula biespecífica de esta descripción, un anticuerpo de esta descripción puede ser enlazado funcionalmente (por ejemplo, por acoplamiento químico, fusión genética, asociación no covalente o de otra forma) , con una o más de otras moléculas de enlace, tales como otro anticuerpo, fragmento de anticuerpo, péptido o mimético de enlace, tal que resulte una molécula biespecífica. De acuerdo con esto, la presente descripción incluye moléculas biespecíficas que comprenden al menos una primer especificidad de enlace para 08E y una segunda especificidad de enlace para un segundo epítope objetivo. En una modalidad particular de esta descripción, el segundo epítope objetivo es un receptor Fc, por ejemplo, Fc/RI humano (CD64) o un receptor Fca humano (CD89) . Por lo tanto, esta descripción incluye moléculas biespecíficas capaces de ligar tanto a las células efectoras que expresan Fc R o FcaR (por ejemplo, monocitos, macrófagos o células polimorfonucleares (PMNs) ) y a células objetivo que expresan 08E. Estas moléculas biespecíficas hacen blanco en células que expresan 08E con células efectoras y disparan las actividades de células efectoras mediadas por receptor Fc, tales como fagocitosis de células que expresan 08E, citotoxicidad mediada por células dependientes de anticuerpo (ADCC = antibody dependent cell-mediated cytotoxicity) , liberación de citocina a generación de anión superóxido. En una modalidad de esta descripción en donde la molécula biespecífica es multiespecífica, la molécula además puede incluir una tercer especificidad de enlace, además de una especificidad de enlace anti-Fc y una especificidad de enlace anti-08E. En una modalidad, la tercer especificidad de enlace es una porción de factor anti-mejora (EF) , por ejemplo una molécula que liga a una proteína superficial involucrada en actividad citotóxica y de esta manera aumenta la respuesta inmune contra la célula objetivo. La "porción de factor anti-mejora" puede ser un anticuerpo, fragmento de anticuerpo funcional o un ligando que liga a una molécula determinada, por ejemplo un antígeno o receptor y de esta manera resulta en mejora del efecto de los determinantes de enlace para el receptor Fc o antígeno de célula objetivo . La "porción de factor anti-mejora" puede ligar a un receptor Fc o un antígeno de célula objetivo. En forma alterna, la porción de factor anti-mejora puede ligar a una entidad que es diferente de la entidad a la cual la primera y segunda especificidades de enlace se ligan. Por ejemplo, la porción del factor anti-mejora puede ligar a una célula T citotóxica (por ejemplo vía CD2, CD3, CD8, CD28, CD4 , CD40, ICAM-I u otra célula inmune que resulta en una respuesta inmune incrementada contra la célula objetivo) . En una modalidad, las moléculas biespecíficas de esta descripción comprenden como especificidad de enlace al menos un anticuerpo o su fragmento de anticuerpo, incluyendo por ejemplo un Fab, Fab F(ab')2, Fv, Fd, dAb o un Fv de cadena sencilla. El anticuerpo también puede ser un dímero de cadena ligera o de cadena pesada o cualquier fragmento mínimo de los mismos tal como un Fv o una construcción de cadena sencilla como se describe por Ladner et al en la patente de los E.U.A. No. 4,946,778, los contenidos del cual se incorporan expresamente por referencia. En una modalidad, la especificidad de enlace para un receptor Fc; se proporciona por un anticuerpo monoclonal, el enlace del cual no se bloquea por inmunoglobulina G humana (IgG) . Como se emplea aquí, el término "receptor IgG" se refiere a cualquiera de los ochos genes de cadena ? ubicados en el cromosoma 1. Estos genes codifican un total de doces isoformas de receptor soluble o transmembrana que se agrupan en tres clases de receptor Yc ? Fc?RI (CD64), Fc RII (CD32) y Fc/RIII (CD 16). En otra modalidad preferida, el receptor Fc ? es un Fc ? RI de alta afinidad humano. El Fc/RI humano es una molécula de 72 kDa, que muestra alta afinidad para IgG monomérico (108 - 109M_1) . La producción y caracterización de ciertos anticuerpos monoclonales anti -Fe/ preferidos se describen por Fanger et al en la publicación PCT WO 88/00052 y en la patente de los E.U.A. No. 4,954,617, las enseñanzas de las cuales aquí se incorporan completamente por referencia. Estos anticuerpos ligan a un epítope de Fc/RI, Fc/RII o Fc ? RU I en un sitio que es distinto del sitio de enlace Fc/ del receptor y de esta manera, su enlace no se bloquea substancialmente por niveles fisiológicos de IgG. Anticuerpos anti-Fc/RI específicos útiles en esta descripción son mAb 22, mAb 32, mAb 44, mAb 62 y mAb 197. El hibridoma que produce mAb 32 está disponible de la American Type Culture Collection, ATCC Accession No. HB9469. En otra modalidad, el anticuerpo receptor anti-Fc/ es una forma humanizada del anticuerpo monoclonal 22 (H22) . La producción y caracterización del anticuerpo H22 se describe por Graziano, R.F. et al. (1995,) J Immunol 155 (10): 4996-5002 y la publicación PCT WO 94/10332. La línea celular que produce el anticuerpo H22 se depositó en la American Type Culture Collection bajo la designación HA022CL1 y tiene el no. de acceso CRL 11177. Todavía en otras modalidades preferidas, la especificidad de enlace para un receptor Fc se proporciona por un anticuerpo que liga a un receptor IgA humano, por ejemplo un receptor Fc- a (FcarRI (CD89) ) , el enlace del cual típicamente no se bloquea por inmunoglobulina A humana (IgA) . El término "receptor IgA" se pretende que incluya el producto de gen de un a -gen (Fc RI) ubicado en el cromosoma 19. Este gen se conoce que codifica varias isoformas de transmembrana combinadas en forma alterna de 55 a 110 kDa. FcaRI (CD89) se expresa en forma constitutiva en monocitos/macrófagos, granulocitos eosinofílieos y neutrofílieos, pero no en otras poblaciones de células no efectoras. FcaRI tiene afinidad de medio (~ 5 x 107 M"1) tanto para IgAl como IgA2 , que se aumenta ante exposición a citocinas tales como G-CSF o GM-CSF (Morton, H.C. et al. (1996) Critical Reviews in Immunology 1_6: 423-440) . Cuatro anticuerpos monoclonales específicos de FcarRI, identificados como A3 , A59, A62 y A77, que ligan FcarRI fuera del dominio de enlace ligando IgA, se han descrito (Monteiro, R.C. et al. (1992) J Immunol . 148:1764). FcaRI y Fc/RI son receptores de activación preferidos para utilizar en las moléculas biespecíficas de esta descripción debido a que son (1) expresadas primordialmente en células efectoras inmune, por ejemplo monocitos, PMNs, macrófagos y células dendríticas; (2) expresadas en altos niveles (por ejemplo, 5,000-100,000 por célula) ; (3) mediadores de actividades citotóxicas (por ejemplo, ADCC, fagocitosis); (4) median presentación de antígeno mejorado de antígenos, incluyendo auto-antígenos, dirigidos a ellos. Mientras que se prefieren anticuerpos monoclonales humanos, pueden emplearse otros anticuerpos en las moléculas biespecíficas de esta descripción, incluyen por ejemplo anticuerpos monoclonales murinos, quiméricos y humanizados. Las moléculas biespecíficas de la presente descripción pueden prepararse al conjugar las especificidades de enlace constituyentes, por ejemplo las especificidades de enlace anti-FcR y anti-08E, utilizando los métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, cada especificidad de enlace de la molécula biespecífica puede generarse por separado y después conjugarse con otra. Cuando las especificidades de enlace son proteínas o péptidos, una variedad de agentes de acoplamiento o entrelazamiento pueden utilizarse para conjugación covalente. Ejemplos de agentes de entrelazamiento incluyen proteína A, carbodiimida, N-succinimidil-S-acetil-tioacetato (SATA), 5, 5 ' -ditiobis (ácido 2-nitrobenzoico) (DTNB), o-fenilendimaleimida (oPDM) , N-succinimidil-3- (2-piridilditio) propionato (SPDP) y sulfosuccinimidil 4- (N-maleimidometil) ciclohaxan-1-carboxilato (sulfo-SMCC) (ver por ejemplo, Karpovsky et al (1984) J. Exp. Med. 160:1686; Liu, MA et al (1985) Proc. Nati. Acad. ScL USA 82:8648). Otros métodos incluyen aquellos descritos por Paulus (1985) Behring Ins. Mitt. No. 78, 118-132; Brennan et al (1985) Science 229:81-83) and Glennie et al. (1987) J Immunol 139: 2367-2375) . Agentes de conjugación preferidos son SATA y sulfo-SMCC, ambos disponibles de Pierce Chemical Co . (Rockford, IL) . Cuando las especificidades de enlace son anticuerpos, pueden conjugarse mediante enlace sulfhidrilo de la región bisagra de extremo C de las dos cadenas pesadas. En una modalidad particularmente preferida, la región bisagra se modifica para contener un número non de residuos sulfhidrilo, típicamente uno, antes de conjugación. En forma alterna, ambas especificidades de enlace pueden codificarse en el mismo vector y expresarse y ensamblarse en la misma célula anfitriona. Este método es particularmente útil cuando la molécula biespecífica es una mAb x mAb, mAb x Fab, Fab x F(ab')2 o proteína de ligando x Fab de fusión. Una molécula biespecífica de esta descripción puede ser una molécula de una sola cadena que comprende un anticuerpo de una sola cadena y un determinante de enlace o una molécula biespecífica de una sola cadena que comprende dos determinantes de enlace. Moléculas biespecíficas pueden comprender al menos dos moléculas de cadena sencilla. Métodos para preparar moléculas biespecíficas se describen por ejemplo en la patente de los E.U.A. No. 5,260,203; patente de los E.U.A. No. 5,455,030; patente de los E.U.A. No. 4,881,175; patente de los E.U.A. No. 5,132,405; patente de los E.U.A. No. 5,091,513; E.U.A. patente de los E.U.A. No. 5,476,786; patente de los E.U.A. No. 5,013,653; patente de los E.U.A. No. 5,258,498; y patente de los E.U.A. No. 5,482,858. El enlace de las moléculas biespecíficas a sus objetivos específicos puede confirmarse por ejemplo por ensayo inmunosorbente enlazado con enzima (ELISA) , radio-inmuno-ensayo (RÍA), análisis FACS, bioensayo (por ejemplo inhibición de crecimiento) o ensayo de Transferencia Western. Cada uno de estos ensayos generalmente detecta la presencia de complejos de proteína-anticuerpo de interés particular al emplear un reactivo etiquetado (por ejemplo un anticuerpo) específico para el complejo de interés. Por ejemplo, los complejos FcR-anticuerpo pueden detectarse utilizando por ejemplo, un anticuerpo enlazado con enzima o fragmento de anticuerpo que reconoce y liga específicamente a los complejos anticuerpo-FcR. En forma alterna, los complejos pueden ser detectados utilizando cualquiera de una variedad de otros inmunoensayos. Por ejemplo, el anticuerpo puede ser etiquetado en forma radioactiva y utilizado en un radio- immuno-ensayo (RÍA) (ver, por ejemplo, Weintraub, B., Principies of Radioimmunoassays, Seventh Training Course on Radioligand Assay Techniques, The Endocrine Society, March, 1986, que se incorpora aquí por referencia) . El isótopo radioactivo puede ser detectado por estos medios tales como el uso de un contador / o un contador de destelleo o por autoradiografía . Composiciones Farmacéuticas En otro aspecto, la presente descripción proporciona una composición, por ejemplo una composición farmacéutica, que contiene uno o una combinación de anticuerpos monoclonales o sus porciones de enlace de antígeno, de la presente descripción, formuladas en conjunto con un portador farmacéuticamente aceptable. Estas composiciones pueden incluir uno o una combinación de (por ejemplo, dos o más diferentes) anticuerpos o inmunoconjugados o moléculas bioespecíficas de esta descripción. Por ejemplo, una composición farmacéutica de esta descripción puede comprender una combinación de anticuerpos (o inmunoconjugados o biespecíficos) que ligan a diferentes epítopes en el antígeno objetivo o que tienen actividades complementarias. Composicones farmacéuticas de esta descripción también pueden administrarse en terapia de combinación, es decir combinarse con otros agentes. Por ejemplo, la terapia de combinación puede incluir un anticuerpo anti-08E de la presente descripción combinado con al menos otro agente anti-inflamatorio o inmunosupresor. Ejemplos de agentes terapéuticos que pueden emplearse en terapia de combinación se describen con mayor detalle a continuación en la sección en los usos de anticuerpos de esta descripción. Como se emplea aquí, "portador farmacéuticamente aceptable" incluye cualquiera y todos los solventes, medio de dispersión, revestimientos, agentes antibacterianos y antifungales, agentes isotónicos y de retardo de absorción y semejantes que sean fisiológicamente compatibles. Típicamente, el portador es adecuado para administración intravenosa, intramuscular, subcutánea, parenteral, espinal o epidérmica (por ejemplo, por inyección o infusión) . Dependiendo de la ruta de administración, el compuesto activo, es decir anticuerpo, inmunoconj ugado o molécula biespecífica, puede ser revestido en un material para proteger el compuesto de la acción de ácidos y otras condiciones naturales que pueden inactivar al compuesto. Los compuestos farmacéuticos de esta descripción pueden incluir una o más sales farmacéuticamente aceptables. Una sal farmacéuticamente aceptable se refiere a una sal que retiene la actividad biológica deseada del compuesto precursor y no imparte ningunos efectos toxicológicos indeseados (ver por ejemplo, Berge, S.M., et at (1977) J. Pharm. Sci. 66:1-19) . Ejemplos de estas sales incluyen sales de adición de ácido y sales de adición base. Sales de adición de ácido incluyen aquellos derivadas de ácidos inorgánicos no tóxicos tales como clorhídrico, nítrico, fosfórico, sulfúrico, bromhídrico, yodhídrico, fosforoso y semejantes, así como de ácidos orgánicos no tóxicos tales como ácidos mono- y carboxílicos alifáticos, ácidos alcanóicos fenilo substituidos, ácidos hidroxialcanóicos, ácidos aromáticos, ácidos alifáticos y aromáticos sulfónicos y semejantes. Sales de adición base incluyen aquellos derivadas de metales alcalino térreos, tales como sodio, potasio, magnesio, calcio y semejantes, así como de aminas orgánicas no tóxicas tales como N,N'-dibenziletilenediamina, N-metilglucamina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, etilenediarnina, procaína y semejantes . Una composición farmacéutica de esta descripción también puede incluir un antioxidante farmacéuticamente aceptable. Ejemplos de antioxidantes farmacéuticamente aceptables incluyen: (1) antioxidantes solubles en agua tales como ácido ascórbico, hidrocloruro de cisteina, bisulfato de sodio, metabisulfito de sodio, sulfito de sodio y semejantes; (2) antioxidantes solubles en aceite, tales como ascorbil palmitato, hidroxianisol butilado (BHA) , hidroxitolueno butilado (BHT) , lecitina, propil galato, alfa-tocoferol y semejantes; y (3) agentes quelantes de metal, tales como ácido cítrico, ácido etilendiamin tetracético (EDTA), sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico y semejantes. Ejemplos de portadores acuosos y no acuosos convenientes que pueden emplearse en las composiciones farmacéuticas de esta descripción incluyen agua, etanol, polioles (tales como glicerol, propilen glicol, polietilen glicol y semejantes) y sus mezclas convenientes, aceites vegetales, tales como aceite de oliva y esteres orgánicos inyectables como etil oleato. Fluidez adecuada puede mantenerse por ejemplo por el uso de materiales de revestimiento, tales como lecitina, por el mantenimiento del tamaño de partículas requerido en el caso de dispersiones y por el uso de surfactantes. Estas composiciones también pueden contener adyuvantes tales como conservadores agentes humectantes, agentes emulsificantes y agentes dispersantes. La prevención de la presencia de microorganismos puede asegurarse tanto por procedimientos de esterilización, arriba y por inclusión de diversos agentes antibacteriales y antifungales, por ejemplo parabeno, clorobutanol, fenol ácido sórbico y semejantes. También puede ser conveniente el incluir agentes isotónicos tales como azúcares, cloruro de sodio y semejantes en las composiciones. Además, absorción prolongada de la forma farmacéutica inyectable puede lograrse por una inclusión de agentes que retardan la absorción tales como monoestearato de aluminio, y gelatina. Portadores farmacéuticamente aceptables incluyen soluciones o dispersiones acuosas estériles y polvos estériles para la preparación extemporánea de soluciones y dispersiones inyectables estériles. El uso de estos medios y agentes para sustancias farmacéuticamente activas se conoce en la técnica. Excepto en cuanto a cualquier agente o medio convencional que sea incompatible con el compuesto activo su uso en las composiciones farmacéuticas de esta descripción se contempla. Compuestos activos suplementarios también pueden incorporarse en las composiciones. Composiciones terapéuticas típicamente deben ser estériles y estables bajo las condiciones de fabricación y almacenamiento. La composición puede formularse como una solución, microemulsión, liposoma u otra estructura ordenada adecuada para alta concentración de droga. El portador puede ser un medio solvente o de dispersión que contiene por ejemplo agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilen glicol y polietilen glicol líquido y semejantes) y mezclas convenientes de los mismos. La fluidez adecuada puede mantenerse por ejemplo por el uso de un revestimiento tal como lecitina, por el mantenimiento del tamaño de partículas requerido en el caso de dispersión y por el uso de surfactantes. En muchos casos, será preferible el incluir agentes isotónicos, por ejemplo azúcares, polialcoholes tales como manitol, sorbitol o cloruro de sodio en la composición. Una absorción prolongada de las composiciones inyectables puede lograrse al incluir en la composición un agente que retarde la absorción, por ejemplo sales monoestearato y gelatina. Soluciones inyectables estériles pueden prepararse por incorporación del compuesto activo en la cantidad requerida en un solvente apropiado con uno o una combinación de ingredientes anteriormente citados, como se requiere después de microfiltración-esterilización. En general, se preparan dispersiones al incorporar el compuesto activo en un vehículo estéril que contenga un medio de dispersión básico y los otros ingredientes requeridos de esos anteriormente citados. En el caso de polvos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, los métodos preferidos de preparación son secado al vacío y secado por congelamiento (liofilización) que producen un polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente deseado adicional de una solución filtrada estéril previamente del mismo. La cantidad de ingrediente activo que puede combinarse con un material portador para producir una sola forma de dosis variará dependiendo del sujeto que se trata y el modo de administración particular. La cantidad de ingrediente activo que puede combinarse con un material portador para producir una sola forma de dosis en general será aquella cantidad de la composición que produzca un efecto terapéutico. En general, de 100 por ciento, esta cantidad estará en el intervalo de aproximadamente 0.01 por ciento aproximadamente noventa y nueve por ciento de ingrediente activo, típicamente de aproximadamente 0.1 por ciento a aproximadamente 70 por ciento, más típicamente aproximadamente 1 por ciento a aproximadamente 30 por ciento de ingrediente activo en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable. Regímenes de dosis se ajustan para proporcionar la respuesta óptima deseada (por ejemplo, una respuesta terapéutica). Por ejemplo, puede administrarse un solo bolo, varias dosis divididas pueden administrarse con el tiempo o la dosis puede reducirse o incrementarse proporcionalmente como se indica por las exigencias de la situación terapéutica. Es especialmente ventajoso el formular composiciones parenterales en formas de dosis unitarias para facilidad de administración y uniformidad de dosis. La forma de dosis unitaria como se emplea aquí, se refieren a unidades físicamente discretas adecuadas como dosis unitarias para los sujetos a tratar; cada unidad contiene una cantidad predeterminada de compuesto activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el portador farmacéutico requerido. La especificación para las formas de dosis unitarias de esta descripción se dicta por y es directamente dependiente de (a) las características únicas del compuesto activo y el efecto terapéutico particular a lograr y (b) las limitaciones inherentes en la técnica de formulación de este compuesto activo para tratamiento de la sensibilidad del individuo. Para administración del anticuerpo, las dosis están en intervalos de aproximadamente 0.0001 a aproximadamente 100 mg/kg y más usualmente 0.01 a 25 mg/kg, del peso corporal del anfitrión. Por ejemplo dosis pueden ser de 0.3 mg/kg de peso corporal, 1 mg/kg de peso corporal, 3 mg/kg de peso corporal, 5 mg/kg de peso corporal, o 10 mg/kg de peso corporal o dentro del intervalo de 1-10 mg/kg. Dosis superiores, por ejemplo, 15 mg/kg de peso corporal, 20 mg/kg de peso corporal o 25 mg/kg de peso corporal pueden empelarse según se requiera. Un régimen de tratamiento ejemplar involucra la administración una vez por semana, una vez cada dos semanas, una vez cada tres semanas, una vez cada cuatro semanas, una vez al mes, una vez cada tres meses o una vez cada tres o seis meses. Regímenes de dosis particulares para un anticuerpo anti-08E de esta descripción incluyen 1 mg/kg de peso corporal o 3 mg/kg de peso corporal mediante administración intravenosa cuando el anticuerpo que se suministra utilizando uno de los siguientes programas de dosis: (i) cada cuatro semanas por seis dosis, después cada tres meses; (ii) cada tres semanas; (iii) 3 mg/kg de peso corporal una vez seguido por 1 mg/kg de peso corporal cada tres semanas. En algunos métodos, dos o más anticuerpos monoclonales anti-08E de esta descripción con diferentes especificidades de enlace se administran simultáneamente, en cuyo caso la dosis de cada anticuerpo administrado cae dentro de los intervalos indicados. El anticuerpo usualmente se administra en múltiples ocasiones. Intervalos entre dosis sencillas pueden ser por ejemplo semanal, mensual, cada tres meses o anualmente. Los intervalos también pueden ser irregulares como se indica al medir niveles del anticuerpo en sangre al antígeno objetivo en el paciente. En algunos métodos, las dosis se ajustan para lograr una concentración de anticuerpo en plasma de aproximadamente 1-1000 µg /ml y en algunos métodos aproximadamente 25- 300 µg /ml . En otros métodos, uno o más anticuerpos monoclonales anti-08E de esta descripción se administran simultáneamente con un anticuerpo que tenga una especificidad de enlace distinta tal como por ejemplo anti-CTLA-4 y/o anti-PD-1, en cuyo caso la dosis de cada anticuerpo administrado cae dentro de los intervalos indicados . En forma alterna, el anticuerpo puede administrarse como una formulación de liberación sostenida, en cuyo caso se requiere una administración menos frecuente. Dosis y frecuencia varían dependiendo de la vida media del anticuerpo en el paciente. En general, anticuerpos humanos muestran la más larga vida media, seguido por anticuerpos humanizados, anticuerpos quiméricos y anticuerpos no humanos. La dosis y frecuencia de administración pueden variar dependiendo de si el tratamiento es profiláctico o terapéutico. En aplicaciones profilácticas, una dosis relativamente baja se administra a intervalos relativamente infrecuentes sobre un periodo prolongado de tiempo. Algunos pacientes, continúan recibiendo tratamiento por el resto de sus vidas. En aplicaciones terapéuticas, una dosis relativamente alta a intervalos relativamente cortos en ocasiones se requiere hasta que se reduzca o termine el avance de la enfermedad y típicamente hasta que el paciente muestra una mejora parcial o completa de los síntomas de la enfermedad. Posteriormente, al paciente se le puede administrar un régimen profiláctico. Niveles de dosis actuales de los ingredientes activos en las composiciones farmacéuticas de la presente descripción pueden variarse para obtener una cantidad del ingrediente activo que es efectiva para lograr la respuesta terapéutica deseada para un particular paciente, composición y modo de administración, sin ser tóxico para el paciente. El nivel de dosis selecto dependerá de una variedad de factores farmacocinéticos incluyendo la actividad de las composiciones particulares de la presente descripción empleada o su éster, sal o amida, la ruta de administración, el tiempo de administración, la velocidad de secreción del compuesto particular que se emplea, la duración del tratamiento, otras drogas compuestos y/o materiales empleados en combinación con las composiciones particulares utilizadas, la edad, sexo, peso, condición, salud general e historia médica previa del paciente que se trata y factores semejantes bien conocidos en las técnicas médicas . Una "dosis terapéuticamente efectiva" de un anticuerpo anti-08E de este descripción típicamente resulta en una disminución en la severidad de los síntomas de la enfermedad, un aumento en frecuencia y duración de periodos libres de síntomas de la enfermedad o una prevención de deterioro o incapacidad debido a la aflicción de la enfermedad. Por ejemplo, para el tratamiento de tumores 08E+, una "dosis terapéuticamente efectiva" típicamente inhibe crecimiento celular o crecimiento de tumor en al menos aproximadamente 20%, más típicamente en al menos aproximadamente 40%, aún más típicamente en al menos aproximadamente 60% y aún todavía más típicamente en al menos aproximadamente 80% respecto a los sujetos sin tratar. La capacidad de un compuesto para inhibir crecimiento de tumor puede valuarse en un sistema en modelo de animal predictivo de la eficacia en tumores para humanos. En forma alterna, esta propiedad de una composición puede evaluarse al examinar la capacidad del compuesto para inhibir, dicha inhibición in vi tro por ensayos conocidos para la persona con destreza. Una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto terapéutico puede disminuir el tamaño de tumor o de otra forma mejorar los síntomas en un sujeto. Una persona con destreza ordinaria en la técnica será capaz de determinar estas cantidades con base en factores tales como el tamaño del sujeto, la severidad de los síntomas del sujeto, y la composición o ruta de administración particular selecta. Una composición de la presente descripción puede administrarse mediante una o más rutas de administración utilizando uno o más de una variedad de métodos conocidos en la técnica. Como se apreciará por la persona con destreza en la especialidad, la ruta y/o modo de administración variará dependiendo de los resultados deseados. Rutas preferidas de administración para anticuerpos de este descripción incluyen intravenosa, intramuscular, intradérmica, intraperitonial , subcutánea, espinal u otras rutas de administración parenteral por ejemplo por inyección o por infusión. La frase "administración parenteral" como se emplea aquí, significa modos de administración diferentes a administración enteral y tópica, usualmente por inyección e incluye sin limitación intravenosa, intramuscular, intrarterial , intratecal, intracapsular, intrabrital, intracardiaca, intradérmica, intraperitonial, transtraqueal , subcutáneas, subcuticular, intrarterial, subcapsular, subaragnoidea, intraespinal , epidural, intraesternal e infusión. De forma alterna, un anticuerpo de esta descripción puede administrarse mediante una ruta no parenteral tal como tópica, epidérmica o mucosal de administración, por ejemplo intranasal, oral, vaginal, rectal, sublingual o tópica. Los compuestos activos pueden prepararse con portadores que protegerán al compuesto contra una rápida liberación, tal como una formulación de liberación controlada, incluyendo implantes, parches transdérmicos y sistemas de suministro microencapsulados. Polímeros biocompatibles, biodegradables pueden emplearse tales como etilen vinil acetato, polianhídridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoéteres y ácido poliláctico. Muchos métodos para la preparación de estas formulaciones están patentados o en general son conocidos por aquellos conocedores en la técnica. Ver, por ejemplo, Sustained and Controlled Reléase Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978. Composiciones terapéuticas pueden administrarse con dispositivos médicos conocidos en la especialidad. Por ejemplo, en una modalidad, preferida, una composición terapéutica de este descripción puede administrarse con un dispositivo de inyección hipodérmica sin aguja tal como los dispositivos descritos en las patentes de los E.U.A. Números 5,399,163; 5,383,851; 5,312,335; 5,064,413; 4,941,880; 4,790,824; o 4,596,556. Ejemplos de bien conocidos implantes y módulos útiles en la presente descripción incluyen: la patente de los E.U.A. Número 4,487,603, que describe una bomba de microinfusión implantable para surtir medicamento a una velocidad controlada; patente de los E.U.A. Número 4,486,194, que describe un dispositivo terapéutico para administrar medicamentos a través de la piel; patente de los E.U.A. Número 4,447,233, que describe una bomba de infusión de medicamento para suministrar medicamento a una velocidad de infusión precisa; la patente de los E.U.A. Número 4,447,224, que describe un aparato de infusión implantable de flujo variable para suministro de droga continua; patente de los E.U.A. Número 4,439,196, que describe un sistema de suministro de drogas osmótico que tiene compartimentos de múltiples cámaras; y la patente de los E.U.A. Número 4,475,196, que describe un sistema para suministro de droga osmótica. Estas patentes se incorporan aquí por referencia. Muchos otros de estos implantes, sistemas de suministro y módulos se conocen por aquellos con destreza ordinaria en la técnica. En ciertas modalidades, los anticuerpos monoclonales humanos de esta descripción pueden formularse para asegurar una adecuada distribución in vivo . Por ejemplo, la barrera de sangre-cerebro (BBB = blood-brain barrier) excluye muchos compuestos altamente hidrofílicos. Para asegurar que los compuestos terapéuticos de esta descripción crucen la BBB (si se desea), pueden ser formulados, por ejemplo, en liposomas. Para métodos de fabricar liposomas, ver, por ejemplo, las Patentes de los E.U.A. números 5,374,548; y 5,399,331. Los liposomas pueden comprender una o más porciones que se transportan selectivamente en células u órganos específicos, de esta manera mejoran el suministro de droga dirigido (ver, por ejemplo, V. V. Ranade (1989) J. Clin. Pharmacol. 29:685) . Porciones de blanco ejemplares incluyen folato o biotina (ver, por ejemplo, la Patente de los E.U.A. numero 5,416,016 otorgado a et al); manosidas (Umezawa et al, (1988) Biochem. Biophys. Res.

Commun. 153:1038); anticuerpos (P.G. Bloeman et al. (1995) FEBS Lett. 357:140; M. Owais et al. (1995) Antimicrob. Agents Chemother. 39:180); receptor de proteína A surfactante (Briscoe et al. (1995) Am. J. Physiol. 1233:134); pl20 (Schreier et al (1994) J. Biol. Chem. 269:9090); ver también K. Keinanen; M.L. Laukkanen (1994) FEBS Lett. 346:123; Jj . Killion; LJ . Fidler (1994) Immunomethods 4:273. Usos y Métodos de esta descripción Los anticuerpos, particularmente los anticuerpos humanos, composiciones de anticuerpo y métodos de la presente descripción tienen numerosas utilidades de diagnostico y terapéuticas in vi tro y in vivo que involucran, por ejemplo, detección de 08E, tratamiento de cáncer o mejora de respuesta inmune por bloqueo de 08E. En una modalidad preferida, los anticuerpos de la presente descripción son anticuerpos humanos. Por ejemplo, estas moléculas pueden administrarse a células en cultivo, in vi tro o ex vivo o a sujetos humanos, por ejemplo, in vivo, para tratar, evitar y diagnosticar una variedad de desordenes o para mejorar la inmunidad en una variedad de situaciones. Como se emplea aquí, el término "sujeto" se pretende que influya animales humanos y no humanos. El término "animales no humanos" incluye todos los vertebrados, por ejemplo, mamíferos y no mamíferos, tales como primates no humanos, ovejas, perros, gatos, vacas, caballos, pollos, anfibios y reptiles. Sujetos preferidos incluyen pacientes humanos que tienen desordenes asociados con expresión de 08E o que requieren mejora de una respuesta inmune. Los métodos son particularmente convenientes para tratar pacientes humanos que tienen un desorden asociado con expresión 08E aberrante. Los métodos también son particularmente convenientes para tratar pacientes humanos que tienen un desorden que puede ser tratado por aumento de la inmuno respuesta medida por célula T. Para logar mejora específica de antígeno de inmunidad, los anticuerpos anti-08E pueden administrarse junto con un antígeno de interés. Cuando anticuerpos a 08E se administran junto con otro agente, los dos pueden administrarse ya sea en orden o simultáneamente. Dado el enlace específico de los anticuerpos de esta descripción para 08E, los anticuerpos de esta descripción pueden utilizarse para detectar específicamente expresión 08E en la superficie de células y aún más, pueden utilizarse para purificar 08E mediante purificación de inmunoafinidad. Cáncer 08E se expresa en una variedad de cánceres humanos, incluyendo carcinomas de células de mama, canceres de mama metastáticos, carcinomas de célula de ovarios, canceres de ovarios metastáticos y carcinomas de células renales (Tringler et al (2005) Clinical Cáncer Res. U: 1842-48; Salceda et al. (2005) Exp Cell Res. 306:128-41; Tringler et al. (2006) Gynecol Oncol. 100:44-52; Krambeck et al. (2006) Proc Nati Acad Sci USA 103:10391-6; Chen et al. (2006) Kidney Int. Epub; Sun et al. (2006) Lung Cáncer 53:143-51; Bignotti et al. (2006) Gynecol Oncol. 103:405-16; Kryczek et al. (2006) J Exp Med 203:871-81; Simón et al. (2006) Cáncer Res. 66:1570-5) . Un anticuerpo anti-08E puede emplearse solo para inhibir el crecimiento de tumores cancerosos. En forma alterna, un anticuerpo anti-08E puede emplearse en conjunto con otros agentes inmunogenicos, tratamientos de cáncer estándar u otros anticuerpos, como se describe a continuación . El atenuador de linfocitos B y T (BTLA = B and T lymphocyte attenuator) se encontró como receptor para 08E y tiene un efecto inhibitorio en respuestas inmunes, similar a antígeno de linfocito T citotóxico-4 (CTLA-4) y muerte programada-1 (PD-I) (Carreno and Collins (2003) Trends Immunol 24:524-7) . 08E funciona al regular en forma negativa la inmunidad de células T por la inhibición de proliferación de células T, producción de citosina y producción de ciclo celular (Choi et al . (2003) J Immunol . 171:4650-4). Una proteína de fusión 08E-Ig inhibe la activación de célula T, mientras que el bloqueo de 08E con anticuerpos pueden mejorar la inmuno respuesta en el paciente (Sica et al., (2003) Immunity 18:849- 61) . En un aspecto, la presente descripción se refiere a tratamiento de un sujeto in vivo que utilizan un anticuerpo anti-08E tal que se inhiba el crecimiento de tumores cancerosos. Un anticuerpo anti-08E puede utilizarse solo para inhibir el crecimiento de tumores cancerosos. En forma alterna, un anticuerpo anti-08E puede utilizarse en conjunto con otros agentes inmunogénicos, tratamientos de cáncer estándar u otros anticuerpos, como se describe a continuación. De acuerdo con esto, en una modalidad, esta descripción proporciona un método que inhibir el crecimiento de células de tumor en un sujeto, que comprende administrar a el sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo anti-08E o una porción de enlace de antígeno del mismo. De preferencia, el anticuerpo es un anticuerpo anti-08E humano (tal como cualquiera de los anticuerpos anti-humano 08E humano descritos aquí) . En forma adicional o alterna, el anticuerpo puede ser un anticuerpo anti-08E quimérico o humanizado . Canceres preferidos cuyo crecimiento puede ser inhibido utilizando los anticuerpos de esta descripción incluyen canceres que típicamente responden a inmunoterapia. Ejemplos no limitantes de canceres preferidos para tratamientos incluyen cáncer de mama (por ejemplo, carcinoma de célula de mama) , cáncer de ovario (por ejemplo, carcinoma de células de ovario) y carcinoma de células renales (RCC renal cell carcinoma) . Ejemplos de otros canceres que pueden ser tratados utilizando los métodos de esta descripción incluyen melanoma (por ejemplo, melanoma maligno metastático) , cáncer de próstata, cáncer de colon, cáncer pulmonar, cáncer de huesos, cáncer pancreático, cáncer de piel, tumores del cerebro, leucemias crónicas o agudas incluyendo leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica, leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfocitica crónica, linfomas (por ejemplo, linfoma de Hodgkin y no Hodgkin, linfoma linfocítico, linfoma de CNS primario, linfoma de célula T) carcinomas nasofaríngeos, cáncer de cabeza y cuello, melanoma maligno intraocular o cutáneo, cáncer uterino, cáncer rectal, cáncer de la región anal, cáncer estomacal, cáncer testicular, cáncer uterino, carcinoma de los tubos de falopio, carcinoma del endometrio, carcinoma del cerviz, carcinoma de la vagina, carcinoma de la vulva, cáncer del esófago, cáncer del intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, cáncer de la glándula tiroides, cáncer de la glándula paratiroides, cáncer de la glándula mamaria, sarcoma de tejido suave, cáncer de la uretra, cáncer del pene, tumores sólidos infantiles, cáncer de vejiga, cáncer de riñon o uretra, carcinoma de mama-pelvis, neoplasma del sistema nervioso central (CNS = central nervous system) , angiogenesis de tumor, tumor de eje espinal, glioma del tronco cerebral, adenoma pituitario, sarcoma de Kaposi, cáncer epidermoide, cáncer de células escamosas, cánceres inducidos ambientalmente incluyendo aquellos inducido por asbestos, por ejemplo, mesotelioma y combinaciones de esos canceres . Opcionalmente, anticuerpos de 08E pueden combinarse con un agente inmunogénico, tal como células cancerosas, antígenos de tumor purificados (incluyendo proteínas recombinantes, péptidos y moléculas de carbohidrato) , células y células transfectadas con genes que codifican citosina de estimulo inmune (He et al, J. I munol . 173:4919-28 (2004)) . Ejemplos no limitantes de vacunas de tumor que pueden emplearse incluyen péptidos de antígenos de melanoma, tales como péptidos de gplOO, antígenos MAGE, Trp-2, MARTI y/o tirosinaza o células de tumor transfectadas para expresar la citosina GM-CSF. En humanos, algunos tumores han mostrado ser inmunogenicos tales como melanomas. Se anticipa que al elevar el umbral de activación de células T 08E, se pueden activar tumores en respuestas en el anfitrión. Bloqueo 08E probablemente no es efectivo cuando se combina con un protocolo de vacunación. Muchas estrategias experimentales para vacunación contra tumores se han diseñado (ver, Rosenberg, "Development of Cáncer Vaccines" ASCO Educational Book Spring: 60-62 (2000) ; Logothetis, ASCO Educational Book Spring: 300-302 (2000) ; Khayat, ASCO Educational Book Spring: 414-428 (2000) ; Foon, ASCO Educational Book Spring: 730-738 (2000) ; ver también Restifo and Sznol, Cáncer Vaccines, Ch. 61, pp . 3023-3043 in De Vita et al. (ed.) Cáncer: Principies and Practice of Oncology, Fifth Edition (1997) ) . En una de estas estrategias, se prepara una vacuna utilizando células de tumor autologas o alogeneicas. Típicamente, estas vacunas celulares son más efectivas cuando las células de tumor se transducen para expresar GM-CSF. GM-CSF se ha mostrado que es un activador potente de presentación de antígeno para vacunación de tumor (Dranoff et al. Proc. Nati. Acad. Sci U.S.A. 90: 3539-43 (1993) ) . El estudio de expresión de genes y patrones de expresión de genes a gran escala en diversos tumores han llevado a la definición de los así llamados antígenos específicos de tumor (Rosenberg, Immunity 10:281-7 (1999)). En muchos casos, estos antígenos específicos de tumor son antígenos de diferenciación expresados en los tumores y en la célula de la cual surge el tumor, por ejemplo antígenos de melanocitos gplOO, antígenos MAGE y Trp-2. De manera más importante, muchos de estos antígenos pueden mostrarse como los objetivos de células T específicas de tumos que se encuentran en el anfitrión. El bloqueo 08E puede emplearse en conjunto con una colección de proteínas y/o péptidos recombinantes expresados en un tumor a fin de generar una respuesta inmune a estas proteínas. Estas proteínas normalmente se ven por el sistema inmune como auto-antígenos y por lo tanto son tolerantes a estos. El antígeno de tumor también puede incluir la proteína telomerasa, que se requiere para la síntesis de telomeresa de cromosomas y que se expresa en más del 85% de canceres humanos y solo en una cantidad limitada de tejidos somáticos (Kim et al, Science 266:2011-2013 (1994)). (Estos tejidos somáticos pueden protegerse de ataque inmune por diversos medios) . Antígeno de tumor también pueden ser "neo-antígenos" expresados en células de cáncer debido a mutaciones somáticas que alteran la secuencia de proteínas o crean proteínas de fusión entre dos secuencia no relacionadas (es decir en el cromosoma Philadelphia) o idiotipo de tumores de célula B. Otras vacunas de tumor puede incluir las proteínas de virus implicados en canceres humanos tales como virus de de papiloma humano (HPV Human Papilloma Viruses) , virus de hepatitis (HBV y HCV Hepatitis Viruses) y virus de sarcoma de kaposi (KHSV Kaposi ' s Herpes Sarcoma Virus) . Otra forma de antígeno específico de tumor que puede emplearse en conjunto con el boque o 08E son proteínas de choque térmico purificadas (HPS heat shock proteins) aisladas del propio tejido de tumor. Estas proteínas de choque de térmico contiene fragmentos de proteínas de las células de tumor y estos HSPs son altamente eficientes para suministrar a células que presentan antígeno para producir inmunidad de tumor (Suot and Srivastava Science 269:1585-1588 (1995)); Tamura et al. Science 278:117- 120 (1997)). Células dendríticas (DC Dendritic cells) son células que presentan antígeno potente que pueden emplearse para cebar respuestas específicas de antígeno. DC ' s pueden producirse ex vivo y cargarse con diversos antígenos de proteína y péptido así como extractos de células de tumor (Nestle, F. et al. (1998) Nature Medicine 4: 328-332). DCs también puede transducirse por medios genéticos para expresar estos antígenos de tumor por igual. DCs también se han fusionado directamente con células de tumor con propósitos de inmunización (Kugler, A. et al. (2000) Nature Medicine 6:332-336). Como un método de vacunación, la inmunización DC puede ser combinado en forma efectiva con bloqueo PD-I para activar respuestas anti-tumor más potentes. El bloqueo 08E también puede combinarse con tratamientos de cáncer estándar. El bloqueo 08E puede combinarse efectivamente con regímenes quimioterapéuticos. En estos casos, puede ser posible el reducir la dosis de reactivo quimioterapéutico administrado (Mokyr, M. et al. (1998) Cáncer Research 58: 5301-5304) . Un ejemplo de esta combinación es un anticuerpo anti-08E en combinación con decarbazina para el tratamiento de diversos canceres. Otro ejemplo de esta combinación es un anticuerpo anti-08E en combinación con interleucina-2 (IL-2) para el tratamiento de diversos canceres. El raciocinio científico tras el uso combinado del bloqueo 08E y quimioterapia es que la muerte celular, esto es una consecuencia de la acción citotóxica de la mayoría de los compuestos quimioterapéuticos, deberá resultar en niveles incrementados de antígeno de tumor en la ruta de presentación de antígeno. Otras terapias de combinación que pueden resultar en sinergia con bloqueo 08E a través de muerte celular son radiación, cirugía y privación de hormonas . Cada uno de estos protocolos crea una fuente de antígeno de tumor en el anfitrión. Inhibidores de angiogenesis también pueden combinarse con bloqueo de 08E. La inhibición de angiogenesis lleva a muerte de célula de tumor que puede alimentar antígeno de tumor en las rutas de presentación de antígeno anfitrión. Anticuerpos de bloqueo 08E también pueden emplearse en combinación con anticuerpos biespecíficos que hacen blanco a células efectoras que expresan receptor gama Fc o alfa Fc para células de tumor (ver por ejemplo, las Patentes de los E.U.A. Números 5,922,845 y 5,837,243). Anticuerpos biespecíficos pueden emplearse para hacer blanco dos antígenos separados. Por ejemplo anticuerpos biespecíficos de receptor anti-Fc/antígeno anti tumor (por ejemplo, Her-2/neu) se han empleado para hacer blanco de macrófagos en sitios de tumor. Este blanco puede activar en forma más efectiva respuestas específicas de tumor. El brazo de células T de estas respuestas seria aumentado por él usos de bloqueo 08E. En forma alterna, el antígeno puede suministrarse directamente a DCs por el uso de anticuerpos biespecíficos que ligan a antígeno de tumor y un marcador de superficie celular específico de células dendríticas. Los tumores evaden la vigilancia inmune del anfitrión por una gran variedad de mecanismos. Muchos de estos mecanismos pueden ser superados por la inactivación de proteínas que se expresan por los tumores y que son inmunosupresoras . Éstos incluyen entre otros TGF-beta (Kehrl, J. et al (1986) J. Exp. Med. 163: 1037-1050), IL-10 (Howard, M. & O'Garra, A. (1992) Immunology Today 13: 198-200) y Fas ligand (Hahne, M. et al (1996) Science TH: 1363-1365) . Anticuerpos a cada una de estas entidades pueden emplearse en combinación con anti-PD-1 para contra-atacar los efectos del agente inmunosupresor y favorecer respuestas inmunes de tumor por el anfitrión.

Otros anticuerpos que pueden emplearse para activar respuesta inmune de anfitrión pueden utilizarse en combinación con anti-08E. Estos incluyen moléculas en la superficie de células dentríticas que activan la función DC y presentación de antígeno. Anticuerpos anti-CD40 son capaces de sustituir efectivamente la actividad auxiliar de célula T (Ridge, J. et al. (1998) Nature 393: 474-478) y pueden emplearse en conjunto con anticuerpos 08E. Activar anticuerpos a moléculas co-estimulatorias de célula T tales como CTLA-4 (por ejemplo, Patente de los E.U.A. Número 5,811,097), OX-40 (Weinberg, A. et al. (2000) Immunol 164: 2160-2169), 4-1BB (Melero, I. et al. (1997) Nature Medicine 3: 682-685 (1997), PD-I (del Rio et al. (2005) Eur J Immunol 35:3545-60) e ICOS (Hutloff, A. et al (1999) Nature 397: 262-266) también puede proporcionar niveles incrementados de activación de célula T. Trasplante de médula ósea actualmente se utiliza para tratar una variedad de tumores de origen hematopoyético. Mientras que la enfermedad de injerto contra anfitrión es una consecuencia de este tratamiento, puede obtenerse beneficio terapéutico de respuesta de injerto contra tumor. El bloqueo 08E puede utilizarse para incrementar la efectividad de las células T específicas de tumor injertado en donador.

También hay varios protocolos de tratamiento experimentales que involucran activación ex vivo y expansión de células T específicas de antígeno y transferencia adoptiva de estas células en recipientes a fin de que células T especificas de antígeno contra tumor (Greenberg, R. & Riddell, S. (1999) Science 285: 546-51). Estos métodos también pueden emplearse para activar respuesta de células T a agentes infecciosos tales como CMV. Activación ex vivo en la presencia de anticuerpos anti-08E puede esperarse que incremente la frecuencia y actividad de las células T transferidas en forma adoptiva. Dada la expresión de 08E en diversas células de tumor, los anticuerpos humanos, composiciones de anticuerpo y métodos de la presente descripción pueden utilizarse para tratar un sujeto con un desorden tumorigénico, por ejemplo un desorden caracterizado por la presencia de células de tumor que expresan 08E incluyendo por ejemplo cáncer de mama (por ejemplo carcinoma de célula de mama) cáncer de ovario (por ejemplo carcinoma de células de ovario), y cáncer renal. Ejemplos de otros cánceres que pueden ser tratados utilizando los métodos de la presente descripción incluyen melanoma (por ejemplo, melanoma maligno metastásico) , cáncer de próstata, cáncer de colon y cáncer pulmonar, cáncer de huesos, cáncer pancreático, cáncer de piel, cáncer de cabeza o cuello, melanoma maligno cutáneo o mtraocular, cáncer uterino, cáncer rectal, cáncer de la región anal, cáncer del estómago, cáncer testicular, cáncer uterino, carcinoma de los tubos de Falopio, carcinoma del endometrio, carcinoma de la cérvix, carcinoma de la vagina, carcinoma de la vulva, enfermedad de Hodgkm, lmfoma no-Hodgkm, leucemia linfocítica aguda (ALL = Acute Lymphocytic Leukemia) , leucemia lmfocítica crónica (CLL = chronic lymphocytic leukemia) , lmfoma de Burkitt, lmfoma de grandes células anaplásticas (ALCL = anaplastic large-cell lymphomas) , mieloma múltiple, lmfoma de células T cutáneas, lmfomas de células escindidas pequeñas nodulares, lmfomas lmfocíticos, lmfomas de célula T periféricas, lmfoma de Lennert, lmfomas mmunoblásticos, leucemia/lmfomas de células T (ATLL = T-cell leukemia/lymphomas) , leucemia de células T de adulto (T-ALL = adult T- cell leukemia) , cánceres de lmfomas foliculares entroblásticos/ centrocíticos (cb/cc) , 1miomas de células grandes difusos de linaje B, linfoma de célula T tipo lmfadenopatía angio munoblástica (AILD angioimmunoblastic lymphadenopathy -like T cell lymphoma) , linfomas basados en cavidad corporal asociado con HIV, carcinomas embrionales, carcinomas no diferenciados de riño faringe (por ejemplo tumor de Schmincke) , enfermedad de Castleman, sarcoma de Kaposi, mieloma múltiple, macroglobulinemia de Waldenstrom y otros linfomas de célula B, cáncer del esófago, cáncer del intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, cáncer de glándula tiroide, cáncer de glándula paratiroide, cáncer de glándula adrenal, sarcoma de tejido suave, cáncer de uretra, cáncer del pene, leucemias crónicas o agudas incluyendo leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica, leucemia linfoblástica aguada, leucemia linfocítica crónica, tumores sólidos infantiles, linfoma linfocítico, cáncer de vejiga, cáncer de riñon o uretra, carcinoma de pelvis renal, neoplasma del sistema nervioso central (CNS = central nervous system) , linfoma CNS primario, glioblastoma, tumores del cerebro, carcinomas nasofaríngeos, angiogénesis de tumor, tumor de eje espinal, glioma del tronco cerebral, adenoma pituitario, sarcoma de Kaposi, cáncer epidermoide, cáncer de célula escamosa, linfoma de célula T, cánceres inducidos ambientalmente incluyendo aquellos inducidos por asbesto y combinaciones de dichos cánceres. La presente descripción también es útil para el tratamiento de cánceres metastásicos. De acuerdo con esto, en una modalidad, esta descripción proporciona un método para inhibir el crecimiento de células de tumor en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva del anticuerpo anti-08E o su porción de enlace de antígeno. Típicamente, el anticuerpo es un anticuerpo anti-08E humano (tal como cualquiera de los anticuerpos 08E anti-humanos descritos aquí) . En forma adicional o alterna, el anticuerpo puede ser un anticuerpo anti-08E humanizado o quimérico. Enfermedades Infecciosas Otros métodos de esta descripción se emplean para tratar pacientes que han sido expuestos a particulares toxinas o patógenos. De acuerdo con esto, otro aspecto de esta descripción proporciona un método para tratar una enfermedad infecciosa en un sujeto, que comprende administrar al sujeto un anticuerpo anti-08E o su porción de enlace antígeno, de manera tal que el sujeto se trate por la enfermedad infecciosa. De preferencia, el anticuerpo es un anticuerpo 08E antihumano (tal como cualquiera de los anticuerpos anti-08E humanos aquí descritos. En forma adicional o alterna, el anticuerpo puede ser un anticuerpo quimérico o humanizado . Similar a su aplicación a tumores como se discutió anteriormente, el bloqueo 08E mediado por anticuerpo puede utilizarse solo o como un adyuvante, en combinación con vacunas, para estimular la respuesta inmune a patógenos, toxinas y auto-antígenos . Ejemplos de patógenos para los cuales puede ser particularmente útil este enfoque terapéutico, incluyen patógenos para los cuales actualmente no hay vacuna efectiva o patógenos para los cuales las vacunas convencionales son menos que completamente efectivas. Éstos incluyen pero no están limitados a HIV, Hepatitis (A, B, & C) , Influenza, Herpes, Giardia, Malaria, Leishmania, Staphylococcus aureus, Pseudomonas Aeruginosa. El bloqueo PD-I es particularmente útil contra infecciones establecidas por agentes tales como HIV que presentan antígenos alterados en el curso de las infecciones. Estos epítopes novedosos se reconocen como extraños al tiempo de administración 08E anti-humano, de esta manera provocando una fuerte respuesta de células T que no se humedecen o impregnan por señales negativas a través de 08E. Algunos ejemplos de virus patogénicos que provocan infecciones tratables por métodos de esta descripción incluyen HIV, hepatitis (A, B o C) , virus del herpes (por ejemplo, VZV, HSV-I, HAV-6, HSV-II y CMV, virus Epstein Barr) , adenovirus, virus de influenza, flavivirus, ecovirus, rinovirus, virus coxsackie, cornovirus, virus respiratorio sincitial, virus de paperas, rotavirus, virus de sarampión, virus de rubéola, parvovirus, virus de vaccinia, virus HTLV, virus de dengue, papilomavirus, virus molluscum, virus de polio, virus de rabia, virus JC y virus de encefalitis arboviral . Algunos ejemplos de bacterias patogénicas que provocan infecciones tratables por métodos de esta descripción incluyen clamidia, bacteria rickettsial, micobacteria, estafilococos, estreptococos, neumonococos , meningococos y conococos, klebsiella, proteus, serratia, pseudomonas, legionela, difteria, salmonela, bacill??, colera, tétano, botulismo, ántrax, plaga, leptospirósis y bacteria de enfermedad de Lymes. Algunos ejemplos de hongos patogénicos que provocan infecciones tratables por los métodos de esta descripción incluyen clamidia, bacteria de rickettsial, micobacterias, estafilococos, estreptococos, neumococos, meningococos y gonococos, klebisiella, proteus, serratia, pseudomonas, legionela, difteria, salmonela, bacilos, cólera, tétano, butulismo, ántrax, plaga, leptospirosis y bacteria de enfermedad de Lymes. Algunos ejemplos de hongos patogénicos que provocan infecciones tratables por los métodos de esta descripción incluyen Candida (albicans, krusei, glabrata, tropicalis, etc.), Cryptococcus?? neoformans, Aspergillus (fumigatus, niger, etc.), Genus Mucorales (mucor, absidia, rhizophus) , Sporothrix schenkii, Blastomyces dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis e Histoplasma capsulatum. Algunos ejemplos de parásitos patogénicos que provocan infecciones tratables por los métodos de esta descripción incluyen Entamoeba histolytica, Balantidium coli, Naegleriafowleri , Acanthamoeba sp., Giardia lambía, Cryptosporidium sp . , Pneumocystis carinii, Plasmodium vivax, Babesia microti, Trypanosoma brucei, Trypanosoma cruzi, Leishmania donovani , Toxoplasma gondi, Nippostrongylus brasiliensis. En todos los métodos anteriores, el bloqueo de 08E puede combinarse con otras formas e inmunoterapia tal como tratamiento de citosina (por ejemplo, interferonas, GM-CSF, G-CSF, IL-2) o terapia de anticuerpo biespecífico, que proporciona una presentación mejorada de antígenos de tumor (ver, por ejemplo, Holliger (1993) Proc. Nati. Acad. ScL USA 90:6444-6448; Poljak (1994) Structure 2:1121-1123). Reacciones Autoinmunes Anticuerpos anti-08E pueden provocar y amplificar respuestas autoinmunes. Sin duda, la inducción de respuestas anti-tumor utilizando células de tumor y vacunas de péptido revelan que muchas respuestas anti-tumor involucran reactividades anti-propias??anti-self (despigmentación observada en melanoma B16 modificado anti-CTLA-4 + GM-CSF- en van Elsas et al. supra; despigmentación en ratones vacunados Trp-2 (Overwijk, W. et al. (1999) Proc. Nati. Acad. ScU U.S.A. 96: 2982-2987) ; prostatitis autoinmune evocada por vacunas de células de tumor Hurwitz, A. (2000) supra), vacuna de antígeno péptido-melanoma y vitíligo observado en pruebas clínicas en humanos (Rosenberg, SA and White, DE (1996) J. Immunother Emphasis Tumor Immunol 19 (1): 81-4). Por lo tanto es posible considerar utilizar bloqueo anti-08E en conjunto con diversas auto-proteínas a fin de diseñar protocolos de vacunación para generar eficientemente respuestas inmune contra estas auto-proteínas para tratamiento de enfermedad. Por ejemplo, la enfermedad de Alzheimer involucra una acumulación inapropiada de péptido Aß en depósitos amiloides en el cerebro; respuestas de anticuerpo contra amiloide son capaces de liberar estos depósitos amiloide (Schenk et al., (1999) Nature 400: 173- 177). Otras auto-proteínas también pueden utilizarse como objetivos tales como IgE para el tratamiento de alergia y asma y TNFa para artritis reumatoide. Finalmente, respuestas de anticuerpo a diversas hormonas pueden inducirse por el uso de anticuerpo anti-08E. Neutralizar respuestas de anticuerpo a hormonas reproductivas pueden utilizarse para anticoncepción. Neutralizar respuesta de anticuerpo a hormonas y otros factores solubles que se requieren para el crecimiento de tumores particulares también puede considerarse como posibles blancos de vacunación. Métodos análogos como se describió anteriormente para el uso de anticuerpo anti-08E pueden emplearse para inducción de respuestas autoinmune terapéuticas para tratar pacientes que tienen una acumulación inapropiada de otros auto-antígenos, tales como depósitos amiloides, incluyendo Aß en enfermedad de Alzheimer, citosinas tales como TNFa e IgE. Vacunas Anticuerpos anti-08E pueden emplearse para estimular inmunorespuestas específicas de antígeno por coadministración de un anticuerpo anti-08E con un antígeno de interés (por ejemplo, una vacuna) . De acuerdo con esto, en otro aspecto, esta descripción proporciona un método para mejorar una respuesta inmune a un antígeno en un sujeto, que comprende administrar al sujeto: (i) el antígeno; y (ii) un anticuerpo anti-08E o un su porción de enlace de antígeno, tal que una respuesta inmune al antígeno en el sujeto se mejore. De preferencia, el anticuerpo es un anticuerpo 08E anti-humano humano (tal como cualquiera de los anticuerpos anti-08E humanos aquí descritos) . En forma adicional o alterna, el anticuerpo puede ser un anticuerpo quimérico o humanizado. El antígeno puede ser por ejemplo un antígeno de tumor, un antígeno viral, un antígeno bacterial o un antígeno de un patógeno. Ejemplos no limitantes de estos antígenos incluyen aquellos discutidos en las secciones anteriores, tales como los antígenos de tumor (o vacunas de tumor) discutidos anteriormente o antígenos de los virus, bacterias u otros patógenos descritos anteriormente. Rutas convenientes de administración de las composiciones de anticuerpo (por ejemplo anticuerpos monoclonales humanos, moléculas multiespecíficas y biespecíficas e inmunoconj ugados) de esta descripción in vivo e in vi tro son bien conocidas en la especialidad y pueden seleccionarse por aquellos con destreza ordinaria. Por ejemplo, las composiciones de anticuerpo pueden ser administradas por inyección (por ejemplo intravenosa o subcutánea) . Dosis convenientes de las moléculas empleadas dependerán de la edad y peso del sujeto y la concentración y/o formulación de la composición de anticuerpo. Como se describió previamente, anticuerpos anti-08E humanos de esta descripción pueden ser coadministrados con uno o más otros agentes terapéuticos, por ejemplo un agente citotóxico, un agente radiotóxico o un agente inmunosupresor. El anticuerpo puede enlazarse al agente (como un inmuno complejo) o puede ser administrado por separado del agente. En este último caso (administración separada) , el anticuerpo puede ser administrad antes, después o concurrentemente con el agente o puede ser coadministrado con otras terapias conocidas, por ejemplo una terapia anti-cáncer, por ejemplo radiación. Estos agentes terapéuticos incluyen entre otros, agentes antineoplásticos tales como doxorubicina (adriamicina) , cisplatina bleomicina sulfato, carmustina, clorambucil, decarbazina y ciclofosfamida hidroxiurea que por sí mismas son sólo efectivas a niveles que son tóxicos o subtóxicos para un paciente. Cisplatina se administra intravenosamente como 100 mg/dosis una vez cada cuatro semanas y adriamicina se administra intravenosamente como una dosis de 60-75 mg/m 1 una vez cada 21 días. La coadministración de los anticuerpos anti-08E humanos o sus fragmentos de enlace de antígeno de la presente descripción con agentes quimioterapéuticos proporciona dos agentes anti-cáncer que operan mediante mecanismos diferentes que producen un efecto citotóxico a células de tumor humano. Esta coadministración puede resolver problemas debido al desarrollo de resistencia a drogas o un cambio en la antigenicidad en las células de tumor que los hará no reactivos con el anticuerpo. También dentro del alcance de la presente descripción están equipos que comprenden las composiciones de anticuerpo de esta descripción (por ejemplo anticuerpos humanos moléculas bispecíficas o multiespecíficas o inmunoconjugadas) e instrucciones para uso. El equipo puede además contener cuando menos un reactivo adicional o uno o más anticuerpos humanos adicionales de esta descripción (por ejemplo un anticuerpo humano que tiene una actividad complementaria que liga a un epítope en antígeno 08E distinto del primer anticuerpo humano) . Los equipos típicamente incluyen una etiqueta que indica el uso pretendido de los contenidos del equipo. El término etiqueta incluye cualquier escritura o material registrado que se suministra en o dentro del equipo o que de otra forma acompaña al equipo. Terapia de Combinación En una modalidad, la presente descripción proporciona un método para tratar una enfermedad hiperproliferativa, que comprende administrar un anticuerpo 08E y un CTLA-4 y/o anticuerpo PD-1 a un sujeto. En modalidades adicionales, el anticuerpo anti-08E se administra a una dosis subterapéutica, el anti-CTLA-4 y/o anticuerpo PD-I se administra a una dosis subterapéutica o ambos se administran a una dosis subterapéutica. En otra modalidad, la presente descripción proporciona un método para alterar un evento adverso asado con el tratamiento de una enfermedad hiperproliferativa con un agente inmunoestimulatorio que comprende administrar un anticuerpo anti-08E y una dosis subterapéutica de anti-CTLA-4 y/o anticuerpo anti-PD-1 a un sujeto. En ciertas modalidades, el sujeto es humano. En ciertas modalidades, el anticuerpo anti-CTLA- 4 es un anticuerpo monoclonal de secuencia humana 10D1 y el anticuerpo anti-PD-1 es un anticuerpo monoclonal de secuencia humana, tal como 17D8, 2D3 , 4H1 , 5C4 y 4A11. El anticuerpo monoclonal de secuencia humana 10D1 se ha aislado y está caracterizado estructuralmente como se describe en la Patente de los E.U.A. Número 6,984,720. Anticuerpos monoclonales de secuencia humana 17D8, 2D3 , 4H1 , 5C4 y 4A11 se han aislado y caracterizado estructuralmente como se describe en la Solicitud de Patente de los E.U.A. Número de Serie 60/679,466. El anticuerpo anti-08E, anti-CTLA-4 y los anticuerpos monoclonales anti-PD-1 (mAbs) y anticuerpos de secuencia humana de esta descripción pueden producirse por una variedad de técnicas incluyendo metodología de anticuerpo monoclonal convencional, por ejemplo la técnica de hibridización de célula somática estándar de Kohler y Milstein (1975) Nature 256:495. Cualquier técnica para producir anticuerpo monoclonar puede emplearse, por ejemplo transformación viral u oncogénica de linfocitos B. Un sistema animal para preparar hibridomas es el sistema murino. Producción de hidromas en el ratón es un procedimiento muy bien establecido. Protocolos y técnicas de inmunización para aislar esplenocitos inmunizados para fusión, se conocen en la técnica. Socios de fusión (por ejemplo, células de mieloma murino) y procedimientos de fusión también se conocen (ver, por ejemplo, Harlow and Lañe (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor New York) . La combinación de anticuerpos es útil para mejora de una respuesta inmune contra una enfermedad hiperproliferativa por bloqueo de 08E y PD-I y/o CTLA-4. En una modalidad preferida, los anticuerpos de la presente descripción son anticuerpos humanos. Por ejemplo, estas moléculas pueden administrarse a células en cultivo, in vi tro o ex vivo o a sujetos humanos, por ejemplo in vivo, para mejorar la inmunidad en una variedad de situaciones. De acuerdo con esto, en un aspecto, esta descripción proporciona un método para modificar una respuesta inmune en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una combinación de anticuerpo o combinación de porciones de enlace de antígeno del mismo, de esta descripción de manera tal que la respuesta inmune en el sujeto se modifique. De preferencia, la respuesta se mejora, estimula o regula en forma ascendente. En otra modalidad, la presente descripción proporciona un método para alterar eventos adversos asociados con el tratamiento de una enfermedad hiperproliferativa con un agente terapéutico inmunoestimulatorio, que comprende administrar un anticuerpo anti-08E y una dosis sub- terapéutica de anticuerpo anti-CTLA-4 o anti-PD-1 a un sujeto. El bloqueo de 08E, PD-I y CTLA-4 por anticuerpos puede mejorar la respuesta inmune a células cancerosas en el paciente. Cánceres cuyo crecimiento puede ser inhibido utilizando los anticuerpos de la presente descripción incluyen cánceres que responden típicamente a inmunoterapia. Ejemplos representativos de cánceres para tratamiento con la terapia de combinación de la presente descripción incluyen melanoma (por ejemplo, melanoma maligno metastásico), cáncer renal, cáncer de próstata, cáncer de mama, cáncer de colon y cáncer de pulmón. Ejemplos de otros cánceres que pueden ser tratados utilizando los métodos de la presente descripción incluyen cáncer de huesos, cáncer pancreático, cáncer de piel, cáncer de la cabeza o el cuello, melanoma maligno intraocular o cutáneo, cáncer uterino, cáncer de ovarios, cáncer recta, cáncer de la región anal, cáncer en el estómago, cáncer testicular, cáncer uterino, carcinoma de los tubos de falopio, carcinoma del endometrio, carcinoma de la cervix, carcinoma de la vagina, carcinoma de la vulva, Enfermedad de Hodgkin, linfoma no-Hodgkin, cáncer del esófago, cáncer del intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, cáncer de la glándula tiroides, cáncer de la glándula paratiroides, cáncer de la glándula adrenal, sarcoma de tejido suave, cáncer de la uretra, cáncer del pene, leucemias crónicas o agudas incluyendo leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica, leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfocítica crónica, tumores sólidos infantiles, linfomas linfocíticos, cáncer de la vejiga, cáncer del riñon o uretra, carcinoma de la pelvis renal, neoplasma del sistema nervioso central (CNS5 = central nervous system) linfoma de CNS primario, angiogénesis de tumor, tumor de eje espinal, glioma de tronco cerebral, adenoma pituitario, sarcoma de Kaposi, cáncer epidermoide, cáncer de células escamosas, linfoma de célula T, cánceres inducidos ambientalmente incluyendo aquellos inducidos por asbestos y combinaciones de estos cánceres. La presente descripción también es útil para tratamiento de cánceres metastásicos. En ciertas modalidades, la combinación de anticuerpos terapéuticos aquí discutidos puede administrarse concurrentemente como una sola composición en un portador farmacéuticamente aceptable o concurrentemente como composiciones separadas con cada anticuerpo en un portador farmacéuticamente aceptable. En otra modalidad, la combinación de anticuerpos terapéuticos puede administrarse secuencialmente. Por ejemplo, un anticuerpo anti-08E y un anticuerpo anti-PD-1 puede administrarse secuencialmente, tal como anti-08E se administra primero y anti-PD-1 segundo o anti-PD-1 se administra primero y anti-08E segundo. Además, si más de una dosis dé la terapia de combinación se administra secuencialmente, el orden de la administración secuencial puede invertirse o mantenerse en el mismo orden en cada punto en tiempo de la administración, administraciones secuenciales pueden combinarse con administraciones concurrentes o cualquier combinación de las mismas. Por ejemplo, la primera administración de un anticuerpo anti-08E y anticuerpo anti-PD-1 en combinación puede ser concurrente, la segunda administración puede ser secuencial con el anti-08E primero y anti-PD-1 segundo y la tercer administración puede ser secuencial con anti-PD-1 primero y anti-08E segundo, etc. Otro esquema de dosis representativo puede involucrar una primera administración que es secuencial con anti-PD-1 primero y anti-08E segundo y administraciones subsecuentes pueden ser concurrentes. Opcionalmente, la combinación de anticuerpos anti-08E y anti-CTLA-4 y/o anti-PD-1 puede además combinarse con un agente inmunogénico, tales como células cancerosas, antígenos de tumor purificado (incluyendo proteínas recombinantes, péptidos y moléculas de carbohidrato) , células y células transfectadas con genes que codifican citocinas inmuno estimulatorias (He et al. (2004) J. Immunol . 173:4919-28). Ejemplos no limitantes de vacunas de tumor que pueden emplearse incluyen péptidos de antígenos de melanoma, tales como péptidos de gplOO, antígenos MAGE, Trp-2, MARTI y/o tirosinasa o células de tumor transfectadas para expresar la citocina GM-CSF (discutida más a continuación) . Un bloqueo combinado de 08E y PD-I y/o CTL A-4 puede además combinarse con un protocolo de vacunación. Muchas estrategias experimentales para vacunación contra tumores se han diseñado (ver Rosenberg, S. (2000) Development of Cáncer de Vaccines, ASCO Educational Book Spring: 60-62; Logothetis, C, 2000, ASCO Educacional Book Spring: 300-302; Khayat, D. (2000) ASCO Educational Book Spring: 414-428; Foon, K. (2000) ASCO Educational Book Spring: 730-738; ver también Restifo y Sznol, Cáncer de Vaccines, Ch. 61, pp . 3023-3043 in De Vita et al (eds.), 1997, Cáncer de: Principies and Practice of Oncology. Fifth Edition) . En una de estas estrategias, se prepara una vacuna utilizando células de tumor autólogo o alogenéico. Estas vacunas celulares se han mostrado que son más efectivas cuando las células de tumor se transducen para expresar GM-CSF. GM-CSF se ha mostrado que es un activador potente de presentación de antígeno para vacunación de tumor (Dranoff et al. (1993) Proc. Nati Acad. Sci U.S.A. 90: 3539-43) . El estudio de expresión de gen y patrones de expresión de gen a gran escala en diversos tumores ha llevado a la definición de los así denominados antígenos específicos de tumor (Rosenberg (1999) Immunity 10:281-7) . En muchos casos, estos antígenos específicos de tumor son antígenos de diferenciación expresados en los tumores y en la célula de la cual surgió el tumor, por ejemplo antígenos de melanocitos gplOO, antígenos de MAGE y Trp-2. De manera más importante, muchos de estos antígenos pueden mostrarse como los objetivos de células T específicas de tumor que se encuentran en el anfitrión. En ciertas modalidades, un bloqueo combinado de 08E y PD-I y/o CTL A-4 utilizando las composiciones de anticuerpo aquí descritas, puede utilizarse en conjunto con una colección de proteínas y/o péptidos recombinantes expresados en un tumor a fin de generar una respuesta inmune a estas proteínas. Estas proteínas normalmente se ven por el sistema inmune como auto-antígenos y por lo tanto, son tolerantes a ellos. El antígeno de tumor puede también incluir la proteína telomerasa, que se requiere para la síntesis de telomeros de cromosomas y que se expresa en más de 85% de cánceres humanos y solo en una cantidad limitada de tejido somáticos (Kim et al. (1994) Science 266: 2011-2013). (Estos tejidos somáticos pueden ser protegidos de ataque inmune por diversos medios) . El antígeno de tumor también pueden ser "neo-antígenos" expresados en células de cáncer debido a mutaciones somáticas que alteran la secuencia de proteína o crean proteínas de fusión entre dos secuencias no relacionadas (es decir., bcr-abl en el cromosoma Philadelphia) o idiotipo de tumores de célula B. Otras vacunas de tumor pueden incluir las proteínas de virus implicados en cánceres humanos tales como Virus de Papiloma Humano (HPV) , Virus de Hepatitis (HBV y HCV) y virus Sarcoma Herpes Kaposi (KHSV) . Otra forma de antígeno específico de tumor que puede emplearse en conjunto con bloqueo 08E son proteínas de choque térmico purificadas (HSP) aisladas del propio tejido de tumor. Estas proteínas de choque térmico contienen fragmentos de proteínas de las células de tumor y estas HSPs son altamente eficientes para suministrar a células que presentan antígeno para producir inmunidad de tumor (Suot & Srivastava (1995) Science 269:1585-1588; Tamura et al. (1997) Science 278:117-120). Células dendríticas (DC) son células que presentan antígeno potentes que pueden utilizarse para cebar respuestas específicas de antígeno. DC ' s pueden producirse ex vivo y cargarse con diversos antígenos de proteína y péptido así como extractos de células de tumor (Nestle et al. (1998) Nature Medicine 4: 328-332). DCs también pueden transducirse por medios genéticos para expresar estos antígenos de tumor por igual. DCs también se han fusionado directamente a células de tumor para propósitos de inmunización (Kugler et al. (2000) Nature Medicine 6:332-336). Como un método de vacunación, inmunización DC puede ser combinada adicionalmente en forma efectiva con un bloqueo combinado de 08E y PD-I y/o CTLA-4 para activar respuestas anti-tumor más potentes. Un bloqueo combinado 08E y PD-I y/o CTLA-4 también puede ser adicionalmente combinado con tratamientos de cáncer estándar. Por ejemplo, un bloqueo combinado 08E y PD-I y/o CTLA-4 puede ser combinado efectivamente con regímenes quimioterapéuticos. En estos casos, como se observa con la combinación de anticuerpos anti-08E y anti-CTLA-4 y/o anti-PD-1, puede ser posible reducir la dosis de otro reactivo quimioterapéutico administrado con la combinación de la presente descripción (Mokyr et al. (1998) Cáncer de Research 58: 5301-5304). El raciocinio científico tras el uso combinado de bloqueo 08E y PD-I y/o CTLA-4 con quimioterapia es que la muerte celular, que es una consecuencia de la acción citotóxica de la mayoría de los compuestos quimioterapéuticos, habrá de resultar en niveles incrementados de antígeno de tumor en la ruta de presentación de antígeno. Otras terapias de combinación que puedan resultar en sinergia con un bloqueo combinado de 08E y PD-I y/o CTLA-4 a través de muerte celular incluyen radiación, cirugía, y privación de hormonas. Cada uno de estos protocolos crea una fuente de antígeno de tumor en el anfitrión. Inhibidores de angiogénesis también pueden combinarse con un bloqueo combinado de 08E y PD-I y/o CTLA-4. La inhibición de angiogénesis lleva a muerte de células de tumor, lo que también puede ser una fuente de antígeno de tumor para alimentar en rutas de presentación de antígeno anfitrión. Una combinación de anticuerpos para bloqueo de 08E y PD-I y/o CTLA-4 también puede utilizarse en combinación con anticuerpos bi-específicos que hacen blanco en células efectoras que expresan receptor F a o Fc/ a células de tumor (ver, por ejemplo la patente de los E.U.A. Nos. 5,922,845 y 5,837,243). Anticuerpos biespecíficos pueden utilizarse para ser blanco en dos antígenos separados. Por ejemplo, anticuerpos biespecíficos receptor anti-Fc/antígeno anti-tumor (e.g., Her- 2/neu) se han empleado para hacer blanco en macrófagos a sitios de tumor. Este blanco puede activar más efectivamente respuestas específicas de tumor. El brazo de célula T de estas respuestas sería aumentado por el uso de un bloqueo combinado de 08E y PD-I y/o CTLA-4. En forma alterna, el antígeno puede suministrarse directamente a DCs por el uso de anticuerpos biespecíficos que ligan a antígeno de tumor y/o un marcador de superficie celular específico de célula dendrítica. En otro ejemplo, una combinación de anticuerpos anti-PD-1 y anti-CTLA-4 puede utilizarse en conjunto con anticuerpos anti-neoplasticos , tales como Riruxan (rituximab) , Herceptin" (trastuzumab) , Bexxar° (tositumomab) , Zevalin (ibritumomab) , Campath S ® (alemtuzumab) , Lymphocide (eprtuzumab) , Avastin (bevacizumab) y Tarceva (erlotinib) y semejantes. A manera de ejemplo y no deseando estar ligados por teoría, el tratamiento con un anticuerpo anti-cáncer o un anticuerpo anti-cáncer conjugado con una toxina, puede llevar a muerte de células de cáncer (por ejemplo, células de tumor) lo que potenciará una respuesta inmune mediada por 08E, CTLA-4 o PD-I. En una modalidad ejemplar, un tratamiento de una enfermedad hiperproliferativa (por ejemplo, un tumor de cáncer) puede incluir un anticuerpo anti-cáncer en combinación con anticuerpos anti-08E y anti-PD-1 y/o anti-CTLA-4, en forma concurrente o secuencial o cualquier combinación de los mismos, que puede potenciar respuestas inmune anti-tumor por el anfitrión. Tumores evaden la vigilancia inmune del anfitrión en una gran variedad de mecanismos. Muchos de estos mecanismos pueden superarse por la inactivación de proteínas, que se expresan por los tumores y que son inmunosupresoras . Estas incluyen entre otras, TGF-/? (Kehrl, J. et al. (1986) J Exp. Med. 163: 1037-1050), IL-10 (Howard, M. & O'Garra, A. (1992) Immunology Today 13: 198-200) y ligando Fas (Hahne, M. et al. (1996) Science 274: 1363-1365). En otro ejemplo, anticuerpos a cada una de estas entidades pueden además ser combinados con una combinación anti-08E y anti-PD-1 y/o anti-CTLA-4 para contra-atacar los efectos de los agentes inmunosupresores y favorecer respuestas inmune a anti-tumor por el anfitrión. Otros anticuerpos que pueden utilizarse para activar la respuesta inmune del anfitrión además pueden utilizarse en combinación con una combinación anti-08E y anti-PD-1 y/o anti-CTLA-4. Estas incluyen moléculas en la superficie de células dendríticas que activan la función DC y presentación de antígeno. Anticuerpos anti-CD40 son capaces de substituir efectivamente la actividad auxiliar de célula T (Ridge, J. et al. (1998) Nature 393: 474-478) y se ha demostrado eficacias en conjunto con anti-CTLA-4 (Ito, N. et al. (2000) Immunobiology 201 (5) 527-40) . Activación de anticuerpos en moléculas coestimulatorias de célula T, tales como OX-40 (Weinberg, A. et al. (2000) Immunol 164: 2160-2169), 4-1BB (Melero, I. et al. (1997) Nature Medicine 3: 682-685 (1997), PD-I (del Rio et al. (2005) Eur J Immunol . 35:3545-60) and ICOS (Hutloff, A. et al. (1999) Nature 397: 262-266) también pueden proporcionar niveles incrementados de activación de célula T. Transplante de médula ósea actualmente se emplea para tratar una variedad de tumores de origen hematopoyético. Mientras que la enfermedad de injerto contra anfitriones es una consecuencia de este tratamiento, puede obtenerse beneficio terapéutico de respuestas de injerto contra tumor. Un bloqueo combinado de 08E y PD-I y/o CTLA-4 puede utilizarse para incrementar la efectividad de las células T específicas de tumor injerto en donador. Hay varios protocolos de tratamiento experimental que involucran activación y expansión ex vivo de células T específicas de antígeno y transferencia adoptiva de estas células en recipientes a fin de que las células T específicas de antígeno contra tumor (Greenberg, R. & Riddell, S. (1999) Science 285: 546-51). Estos métodos también pueden emplearse para activar respuestas de célula T a agentes infecciosos tales como CMV. Activación ex vivo en la presencia de anticuerpos anti-08E y anti-PD-1 y/o anti-CTLA-4 puede esperarse que aumente la frecuencia y actividad de las células T transferidas en forma adoptiva. Como se establece aquí, los órganos pueden exhibir eventos adversos inmuno relacionados después de terapia de anticuerpo terapéutica inmunoestimulatoria, tal como el tracto Gl (diarrea y colitis) y la piel (sarpullido y prurito) después de tratamiento con un anticuerpo anti-CTLA-4. Por ejemplo, eventos adversos inmuno-relacionados gastrointestinal no colónicos también se han observado en el esófago (esophagitis) , duodeno (duodenitis) e ileo (ileitis) después de tratamiento de anticuerpo anti-CTLA-4. En ciertas modalidades, la presente descripción proporciona un método para alterar un evento adverso asociacon con tratamiento de una enfermedad hiperproliferativa con un agente inmunoestimulatorio, que comprende administrar a un anticuerpo anti-08E y una dosis subterapéutica de anticuerpo anti-CTLA-4 a un sujeto. Por ejemplo, los métodos de la presente descripción proporcionan un método para reducir la incidencia de diarrea o colitis inducida por anticuerpo terapéutica inmunoestimulatoria administrando un esteroide no absorbible al paciente . Debido a que cualquier paciente que reciba un anticuerpo terapéutico inmunoestimulatorio está en riesgo por desarrollar colitis o diarrea inducida por este anticuerpo, esta población completa de pacientes es adecuada para terapia de acuerdo con los métodos de la presente descripción. Aunque se han administrado esteroides para tratar enfermedad de intestino inflamatorio (IBD = inflammatory bowel disease) y evitar exacerbaciones de IBD, no se han empleado para evitar (disminuir la incidencia de) IBD en pacientes que no se les ha diagnosticado IBD. Los efectos secundarios significantes asociados con esteroides, incluso esteroides no absorbibles, han disuadido el uso profiláctico. En modalidades adicionales, una combinación de bloqueo 08E y PD-I y/o CTLA-4 (es decir, anticuerpos terapéuticos inmunoestimulatorios anti-08E y anti-PD-1 y/o anti-CTLA-4) pueden además combinarse con el uso de cualquier esteroide no absorbible. Como se emplea aquí, un "esteroide no-absorbible" es un glucocorticoide que exhibe metabolismo de primer paso extenso de manera tal que siguiendo el metabolismo en el hígado, la biodisponibilidad del esteroide es baja, es decir menos de aproximadamente 20%. En una modalidad de esta descripción, el esteroide no absorbible es budesonida. Budesonida es un glucocorticoesteroide de acción local, que se metaboliza extensamente, primordialmente por el hígado, después de administración oral. ENTOCORT EC* (Astra-Zeneca) es una formulación oral dependiente de pH y tiempo de budesonida desarrollada para optimizar el suministro de la droga al ileon??ileum y a través del colon. ENTOCORT £0* está aprobada en los E.U.A., para el tratamiento de enfermedad de Crohn ligera a moderada que involucra el ileon y/o colon ascendente. La dosis oral usual de ENTOCORT EC para el tratamiento de la enfermedad de Crohn es de 6 a 9 mg/día. ENTOCORT EC* se libera en los intestinos antes de absorberse y retenerse en la mucosa del intestino. Una vez que pasa a través del tejido objetivo de la mucosa intestinal, ENTOCORT EC se metaboliza extensamente por el sistema citochrome P450 en el hígado a metabolitos con actividad glucocorticoide despreciable. Posteriormente, la biodisponibilidad es baja (aproximadamente 10%) . La baja biodisponibilidad de budesonida resulta en una proporción terapéutica mejorada en comparación con otros glucocorticoides con metabolismo de primer paso menos extenso. Budesonida resulta en menos efectos adversos, incluyendo menos supresión pituitaria-hipotalámica, que los corticosteroides de acción sistémica. Sin embargo, la administración crónica de ENTOCORT EC* puede resultar en efectos glucocorticoides sistémicos tales como hipercorticismo y supresión adrenal. Ver PDR 58th ed. 2004; 608-610. En modalidades aún adicionales, una combinación de bloqueo de 08E y PD-I y/o CTL A-4 (es decir, anticuerpos terapéuticos inmunoestimulatorios anti-08E y anti-PD-1 y/o anti-CTLA-4) en conjunto con un esteroide no absorbible, puede ser adicionalmente combinada con un salicilato. Los salicilatos incluyen agentes 5-ASA tales como por ejemplo: sulfasalazina (AZULFIDINE', Pharmacia & UpJohn) ; olsalazina (DIPENTUM", Pharmacia & UpJohn) ; ® balsalazida (COLAZAL , Salix Pharmaceuticals, Inc.); y ® mesalamina (ASACOL , Procter & Gamble Pharmaceuticals; PENTASA"', Shire US; CANASÁ", Axcan Scandipharm, Inc.; ROWASA®, Solvay) . De acuerdo con los métodos de la presente descripción, un salicilato administrado en combinación con anticuerpos anti-08E y anti-PD-1 y/o anti-CTLA-4 y un esteroide no absorbible puede incluir cualquier administración superpuesta o secuencial de salicilato y el esteroide no absorbible con el propósito de disminuir la incidencia de colitis inducida por los anticuerpos inmunoestimulatorios . De esta manera, por ejemplo métodos para reducir la incidencia de colitis inducida por los anticuerpos inmunoestimulatorios de acuerdo con la presente descripción abarca administrar un salicilato y un no-absorbible en forma concurrente secuencial (por ejemplo un salicilato se administra 6 horas después de un esteroide no absorbible) o cualquier combinación de los mismos. Además, de acuerdo con la presente descripción, un salicilato y un esteroide no-absorbible pueden administrarse por la misma ruta (por ejemplo ambos se administran oralmente) o por diferentes rutas (por ejemplo un salicilato se administra oralmente y un esteroide no-absorbible se administra rectalmente) , que pueden diferir de la o las rutas empleadas para administrar los anticuerpos anti-08E, anti-PD-1 y anti-CTLA-4. Las composiciones (por ejemplo anticuerpos humanos, moléculas multiespecíficas y biespecíficas e inmunoconjugados) de esta descripción que tienen sitios de enlace de complemento, tales como porciones de IgGl, -2 o -3 o IgM que ligan complemento, también pueden utilizarse en la presencia de complemento. En una modalidad, tratamiento ex vivo de una población de células que comprenden células blanco o un agente de enlace de esta descripción y células efectoras apropiadas, pueden suplementarse por la adición de complemento o complemento que contiene suero. Fagocitosis de células blanco revestidas con un agente de enlace de esta descripción puede mejorarse al ligar proteínas de complemento. En otra modalidad, células blanco revestidas con las composiciones (por ejemplo anticuerpos humanos, moléculas multiespecíficas y biespecíficas) de esta descripción, también pueden lisarse por complemento. Todavía en otra modalidad, las composiciones de esta descripción no activan complemento. Las composiciones (por ejemplo anticuerpos humanos, moléculas multiespecíficas y biespecíficas e inmunoconjugados) de esta descripción también pueden administrarse junto con complemento. De acuerdo con esto, dentro del alcance de esta descripción están composiciones que comprenden anticuerpos humanos, moléculas multiespecíficas o biespecíficas y suero o complemento. Estas composiciones son ventajosas ya que el complemento se ubica en proximidad inmediata a los anticuerpos humanos, moléculas multiespecíficas o biespecíficas . En forma alterna, los anticuerpos humanos, moléculas multiespecíficas o biespecíficas de esta descripción y el complemento o suero pueden administrarse por separado. De acuerdo con esto, pacientes tratados con composiciones de anticuerpo de esta descripción pueden ser administradas adicionalmente (antes de, simultáneamente con o después de administración de un anticuerpo humano de esta descripción) con otro agente terapéutico, tal como un agente citotóxico o radiotóxico, que mejora o aumenta el efecto terapéutico de los anticuerpos humanos. En otras modalidades, el sujeto puede ser tratado adicionalmente con un agente que modula, por ejemplo mejora o inhibe, la expresión o actividad de receptores Fcy o receptores Fcy por ejemplo al tratar al sujeto con una citocina. Citocinas preferidas para administración durante el tratamiento con la molécula multiespecífica incluyen un factor de estímulo de colonia de granulocitos (G- CSF) , factor de estímulo de colonia de macrófago-granulocito (GM-CSF) ; interferona-? (IFN-?) y factor de necrosis de tumor (TNF) . Las composiciones (por ejemplo anticuerpos humanos, moléculas multiespecíficas y biespecíficas) de esta descripción también pueden emplearse para hacer blanco en células que expresan FcyR u 08E, por ejemplo para etiquetar estas células. Para este uso, el agente de enlace puede enlazarse a una molécula que puede detectarse. De esta manera, esta descripción proporciona métodos para localizar células ex vivo o in vi tro que expresan receptores Fc tales como FcyR o 08E. La etiqueta detectable puede ser por ejemplo un radioisótopo, un compuesto fluorescente, una enzima o un co-factor de enzima . En una modalidad particular, esta descripción proporciona métodos para detectar la presencia de antígeno 08E en una muestra o medir la cantidad de antígeno 08E que comprende contactar la muestra y una muestra de control, con un anticuerpo monoclonal humano, o su porción de enlace de antígeno, que ligue específicamente 08E, bajo condiciones que permiten formación de un complejo entre el anticuerpo o su porción y 08E. La formación de complejos se detecta entonces, en donde una formación de complejo de diferencia entre la muestra comparada con la muestra de control es indicativa de la presencia del antígeno 08E en la muestra. En otras modalidades, esta descripción proporciona métodos para tratar un desorden mediado por 08E en un sujeto. Todavía en otra modalidad, inmunoconj ugados de esta descripción pueden emplearse para hacer blanco en compuestos (por ejemplo agentes terapéuticos, etiquetas, citotoxinas, inmunosupresores de radiotoxinas, etc.) a células que tienen receptores de superficie celular 08E por enlace de estos compuestos con el anticuerpo. Por ejemplo, un anticuerpo anti-08E puede conjugarse con UPT5 como se describe en las solicitudes de patente de los E.U.A. Números de serie 10/160,972, 10/161,233, 10/161,234, 11/134,826, 11/134,685 y la solicitud de patente provisional de los E.U.A. Número de serie 60/720,499 y/o cualquiera de los compuestos toxina descritos en las patentes de los E.U.A. Número 6,281,354 y 6,548,530, publicaciones de patentes de los E.U.A. Números 20030050331, 20030064984, 20030073852 y 20040087497 o publicados en WO 03/022806, que aquí se incorporan por referencia en sus totalidades. De esta manera, esta descripción también proporciona métodos para localizar células ex vivo o in vivo que expresan 08E (por ejemplo, con una etiqueta detectable tal como un radioisótopo, un compuesto fluorescente, una enzima o un co-factor de enzima) . En forma alterna, los inmunoconj ugados pueden emplearse para exterminar células que tienen receptores de superficie celular 08E al hacer blanco en citotoxinas o radiotoxinas a 08E. La presente descripción además se ilustra por los siguientes ejemplos que no habrán de considerarse como adicionalmente limitantes. Los contenidos de todas las figuras y todas las referencias de patentes y solicitudes de patente publicadas citadas a través de esta solicitud se incorporan expresamente aquí por referencia. EJEMPLOS EJEMPLO 1 Generación de anticuerpos monoclonales humanos contra 08E Este ejemplo describe la generación de anticuerpos monoclonales humanos que ligan específicamente a 08E humano (a/k/a B7H4 , B7S 1 y B7x) . Antígeno Células CHO y HEK-293 se transfectaron con 08E utilizando métodos de transfección recombmante standard y utilizan como antígeno para inmunización. Además, 08E recombmante solo también se emplea como antígeno para inmunización. HuMAb Mouse® y KM Mouse® transgénicos. Anticuerpos monoclonales humanos completos a 08E se prepararon utilizando las cepas HCo7 y HCol2 del HuMAb Mouse® transgénico y la cepa KM de ratones transcromosómicos transgénicos, cada una de las cuales expresa genes de anticuerpo humano. En cada una de estas cepas de ratón, el gen de cadena ligera K de ratón endógeno ha sido separado en forma homocigota como se describe en Chen et al. (1993) EMBO J. 12:811-820 y el gen de cadena pesada de ratón endógeno se ha separado en forma homocigota como se describe en el ejemplo 1 de la publicación de PCT WO 01/09187. Cada una de estas cepas de ratón transporta un transgen de cadena ligera K humana, KCo5 como se describe en Fishwild et al. (1996) Nature Biotechnology .14:845-851. La cepa HCo7 transporta el transgen de cadena pesada humana HCo7 como se describe en las patentes de los E.U.A. Números 5,545,806; 5,625,825; y ,5,545,807. La cepa HCo 12 transporta el transgen de cadena pesada humano HCo 12 como se describe en el ejemplo 2 de la publicación de PCT WO 01/09187. La cepa KM Mouse® contiene el transcromosoma SC20 como se describe en la publicación de PCT WO 02/43478. Inmunizaciones HuMAb y KM: Para generar anticuerpos monoclonales completamente humanos a 08E, ratones de HuMAb Mouse" y KM Mouse se inmunizaron con células transfectadas CH0-08E, células transfectadas HEK293-08E y/o proteína 08E recombinante purificada. Esquemas de inmunización generales para HuMAb Mouse® se describen en Lonberg, N. et al (1994J Nature 368(6474): 856-859; Fishwild, D. et al. (1996) Nature Biotechnology 14: 845-851 y la publicación de PCT WO 98/24884. Los ratones son de 6 a 16 semanas de edad ante la primer infusión de antígeno. Una preparación recombinante purificada (5-50 µg) de proteína 08E se utiliza para inmunizar los HuMAb mice™ y KM mice™.

Ratones transgénicos se inmunizaron dos veces con antígeno en adyuvante completo de Freund ya sea en forma intraperitonial (IP) o subcutánea (Se) , seguido por inmunización IP o SC de 3 a 21 días (hasta un total de 11 inmunizaciones) con el antígeno en adyuvante incompleto de Freund. La respuesta inmune se supervisa por sangrados retrorbitales . El plasma se criba por ELISA (como se describe a continuación) y ratones con título suficiente de inmunoglobulina humana anti-08E se utilizaron para fusiones. Ratones se reforzaron intravenosamente con antígeno 3 y 2 días antes de sacrificio y retirar el vaso. Típicamente, 10-35 fusiones para cada antígeno se realizaron. Varias docenas de ratones se inmunizaron para cada antígeno. Selección de HuMb Mice™ o KM Mice™ que producen anticuerpos Anti-08E: Para seleccionar anticuerpos que producen HuMab Mice ™ o KM mice™ que ligan suero de 08E de ratones inmunizados se probaron por ELISA como se describe por Fishwild, D. et al. (1996) (supra) . Brevemente, placas de microtitulación se revistieron con 08E recombinante purificado a 1-2 µg /ml en PBS, 50 µl/pozos incubados a 4°C durante la noche después bloquearon con 200 µl/pozo de suero de pollo al 5% en PBS/Tween (0.05%). Diluciones de plasma de ratones inmunizados 08E se agregaron a cada pozo e incubaron por 1-2 horas a temperatura ambiente. Las placas se lavaron con PBS/Tween y después se incubaron con un anticuerpo policlonal IgG Fc de cabra-antihumano conjugado con peroxidasa de rábano picante (HRP= horseradish peroxidase) por una hora a temperatura ambiente. Después de lavar todas las placas se revelaron con sustrato ABTS (Sigma, A- 1888, 0.22 mg/ml) y analizaron por espectrofotómetro a OD 415-495. Ratones que desarrollaron los títulos más altos de anticuerpos anti-08E se emplearon para fusiones. Se realizaron fusiones como se describe a continuación y se probaron sobrenadantes de hibridoma para actividad anti- 08E por ELISA y FACS. Generación de hibridomas que producen anticuerpos monoclonales humanos a 08E: Los esplenocitos de ratón, aislados de HuMab mice™ y KM mice™ se fusionaron con PEG a una línea celular de mieloma de ratón ya sea utilizando PEG con base en protocolos standard. Los hibridomas resultantes después se cribaron por la producción de anticuerpos específicos de antígeno. Suspensión de células sencillas de linfocitos esplénicos para ratones inmunizados se fusionaron a un cuarto del número de células de mieloma de ratón que no secretan SP2/0 (ATCC, CRL 1581) con PEG al 50% (Sigma) . Las células se revistieron a aproximadamente lxlO5 células/pozo en placa de microtitulación de fondo plano, seguido por una incubación de aproximadamente dos semanas en medio selectivo que contiene suero bovino fetal al 10% (Hyclone, Logan, UT) , medio acondicionado P388DI al 10% (ATCC, CRL TIB-63), origen 3-5% (IGEN) en DMEM (Mediatech, CRL 10013, con alta glucosa, L-glutamina y piruvato de sodio) más HEPES 5mM, 2-mercaptoetanol 0.055 mM, gentamicina 50mg/ml y lx HAT (Sigma, CRL P-7185) .

Después de una o dos semanas, las células se cultivaron en medio en donde HAT se reemplazo con HT. Pozos individuales después se cribaron por ELISA y FACS (descritos anteriormente) para anticuerpos IgG monoclonales anti-08E humanos. Los ciónos positivos después se cribaron para anticuerpos positivos 08E en proteína recombinante 08E por ELISA o en células que expresan 08E, por ejemplo células transfectadas CHO-08E por FACS. Brevemente, células que expresan 08E se cosecharon en fresco de matraces de cultivo de tejido y se preparo una suspensión de célula sencilla. Suspensiones de células que expresan 08E ya se tiñeron con anticuerpo primario directamente o después de fijación con paraformaldeido al 1% en PBS. Aproximadamente un millón de células se resuspendieron en PBS que contiene BSA al 0.5% y 50-200 µg/ml de anticuerpo primario e incubaron en hielo por 30 minutos. Las células se lavaron dos veces con PBS que contiene BSA a 0.1%, NaN3 a 0.01%, resuspendieron en 100 µl de IgG cabra-antihumano conjugado con FITC diluido 1:100 (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA) e incubaron en hielo por 30 minutos adicionales. Las células de nuevo se lavaron dos veces, resuspendieron en 0.5 ml de amortiguador de lavado y analizaron para tinción fluorescente en el citómetro FACSCalibur (Becton-Dickinson, San José, CA) . Una vez que ocurrió el crecimiento de hibridoma extenso, se supervisó medio usualmente después de 10-14 días. Se revistieron los hibridomas que secretan anticuerpo, cribaron de nuevo y si aún son positivos para IgG humano, se subclonaron anticuerpos monoclonales anti-08E al menos dos veces por dilución limitante. Los subclonos estables después se cultivaron in vi tro para generar pequeñas cantidades de anticuerpo en medio de cultivo de tejido para mayor caracterización. Ciónos de hibridoma IGl 1, 2A7, 2F9, 12E1 y 13D12 se seleccionaron para posterior análisis. EJEMPLO 2 Caracterización estructural de anticuerpos monoclonales humanos IGU, 2A7 , 2F9 , 12E1 y 13D12 Este ejemplo describe análisis de secuencia de cinco (5) anticuerpos monoclonales humanos que ligan específicamente 08E.

Las secuencias de cADN que codifican las regiones variables de cadena pesada y ligera de los anticuerpos monoclonales IGIl, 2A7 , 2F9, 12E1 y 13D12 se obtuvieron de los hibridomas IGl 1, 2A7 , 2F9, 12E1 y 13D12 respectivamente utilizar la técnica PCR standard y fueron secuenciadas utilizando técnicas de secuenciado de ADN standard. Las secuencias de nucleótidos y aminoácidos en la región variable de cadena pesada de IG11 se muestran en la figura IA y en SEQ ID NOs: 41 y 1, respectivamente. Las secuencias de nucleótidos y aminoácido de la región variable de cadena ligera de IG11 se ilustran en la figura IB y en SEQ ID NO: 46 y 6, respectivamente. Comparación de la secuencia de inmunoglobulina de cadena pesada IG11 con las secuencias de cadena pesada de inmunoglobulina de línea germinal humana conocidas demostró que la cadena pesada IG11 utiliza un segmento VH de la línea germinal humana VH 4-34. El alineamiento de la secuencia IG11 VH con la secuencia VH 4-34 de línea germinal se ilustra en la figura 6. Adicional análisis de la secuencia IG11 VH utilizando el sistema Kabat de la determinación de región CDR lleva a delinear las regiones CDRl, CDR2 y CD3 de cadena pesada como se muestra en las figuras IA y 6 y en SEQ ID NOs : 11, 16 y 21 respectivamente.

La comparación de secuencia de inmunoglobulina de cadena ligera IG11 con las secuencias de cadena ligera de inmunoglobulina de línea germinal humana conocidas demostraron que la cadena ligera IG11 utiliza un segmento VL de la línea germinal humana VK A27. El alineamiento de IG11 VL de la secuencia VK A27 en línea germinal se ilustra en la figura 9. Mayor análisis de la secuencia IG11 VL utilizando el sistema Kabat de la determinación de región CDR lleva a la delineación de las regiones CDRl, CDR2 y CD3 de cadena ligera como se muestra en las figuras IB y 9 y en SEQ ID NOs: 26, 31 y 36, respectivamente . Las secuencias de nucleótidos y amino ácidos de la región variable de cadena pesada de 2A7 se ilustran en la Figura 2A y en SEQ ID NO: 42 y 2, respectivamente. Las secuencias de nucleótidos y amino ácido de la región variable de cadena ligera de 2A7 se ilustran en la Figura 2B y en SEQ ID NO: 47 y 7, respectivamente. La comparación de la secuencia de inmunoglobulina de cadena pesada 2A7 a las secuencias de cadena pesada de inmunoglobulina de línea germinal humana conocidas demuestra que la cadena pesada 2A7 utiliza un segmento VH de la línea germinal humana VH 3-53 y un segmento JH de línea germinal humana JH 6b. El alineamiento de la secuencia 2A7 VH a la secuencia de línea germinal VH 3-53 se ilustra en la Figura 7. Mayor análisis de la secuencia 2A7 VH utilizando el sistema Kabat de la determinación de región CDR lleva a la delineación de las regiones CDRl, CDR2 y CD3 de cadena pesada como se ilustra en las Figuras 2A y 7 y en SEQ ID NOs: 12, 17 y 22, respectivamente. Comparación de la secuencia de inmunoglobulina de cadena ligera 2A7 con las secuencias de cadena ligera de inmunoglobulina de línea germinal humana conocidas demuestra que la cadena ligera 2A7 utiliza un segmento VL de la línea germinal humana VK A27. El alineamiento de la secuencia 2A7 VL a la secuencia VK A27 de línea germinal se ilustra en la Figura 7. Mayor análisis de la secuencia 2A7 VL utilizando el sistema Kabat de la determinación de región CDR lleva a la delineación de las regiones CDRl, CDR2 y CD3 de cadena ligera como se ilustra en las Figuras 2B y 9 y en SEQ ID NOs : 27, 32 y 37, respectivamente. Las secuencias de nucleótidos y amino ácidos de la región variable de cadena pesada de 2F9 se ilustran en la Figura 3A y en SEQ ID NO: 43 y 3, respectivamente . Las secuencias de nucleótidos y amino ácido de la región variable de cadena ligera de 2F9 se ilustran en la Figura 3B y en SEQ ID NO: 48 y 8, respectivamente. Comparación de la secuencia de inmunoglobulina de cadena pesada 2F9 con las secuencias de cadena pesada de inmunoglobulina de línea germinal humana conocida demuestra que la cadena pesada 2F9 utiliza un segmento VH de la línea germinal humana VH 3-53 y un segmento JH de la línea germinal humana JH 6b. El alineamiento de la secuencia 2F9 VH con la secuencia de línea germinal VH 3-53 se ilustra en la Figura 7. Mayor análisis de la secuencia 2F9 VH utilizando el sistema Kabat la determinación de región CDR lleva a la delineación de las regiones de cadena pesada CDRl, CDR2 y CD3 como se ilustra en las Figuras 3A y 7 y en SEQ ID NOs: 13, 18 y 23, respectivamente. La comparación de la secuencia de inmunoglobulina de cadena ligera 2F9 con las secuencias de cadena ligera de inmunoglobulina de línea germinal humana conocidas demuestra que la cadena ligera 2F9 utiliza un segmento VL de la línea germinal humana VK A27. El alineamiento de la secuencia 2F9 VL a la secuencia VK A27 de línea germinal se ilustra en la Figura 9. Mayor análisis de la secuencia 2A7 VL utilizando el sistema Kabat de la determinación de región CDR lleva a la delineación de las regiones CDRl, CDR2 y CD3 de cadena ligera como se muestra en las Figuras 3B y 9 y en SEQ ID NOs : 28, 33 y 38, respectivamente.

Las secuencias de nucleótidos y amino ácido de la región variable de cadena pesada de 12E1 se ilustran en la Figura 4A y en SEQ ID NO: 44 y 4, respectivamente. Las secuencias de nucleótidos y amino ácido de la región variable de cadena ligera de 12E1 se ilustran en la Figura 4B y en SEQ ID NO: 49 y 9, respectivamente. Comparación de la secuencia de inmunoglobulina de cadena pesada 12E1 con las secuencias de cadena pesada de inmunoglobulina de línea germinal humana conocida demuestra que la cadena pesada 12E1 utiliza un segmento VH de la línea germinal humana VH 3-9, un segmento D JH de la línea germinal humana 3-10 y un segmento JH de una línea germinal humana JH 6b. El alineamiento de la secuencia 12E1 VH, con la secuencia VH 3-9 de línea germinal se ilustra en la Figura 8. Mayor análisis de la secuencia 12E1 VH utilizando el sistema Kabat la determinación de región CDR lleva a la delineación de las regiones CDRl, CDR2 y CD3 de cadena pesada como se ilustra en las Figuras 3A y 8 y en SEQ ID NOs: 14, 19 y 24, respectivamente. La comparación de la secuencia de inmunoglobulina de cadena ligera 12E1 con las secuencias de cadena ligera de inmunoglobulina de línea germinal humana conocidas demuestra que la cadena ligera 12E1 utiliza un segmento VL de la línea germinal humana VK L6 y un segmento JK de la línea germinal humana JK 1. El alineamiento de la secuencia 12E1 VL con la secuencia VK L6 de línea germinal se ilustra en la Figura 10. Mayor análisis de la secuencia 12E1 VL utilizando el sistema Kabat de la determinación de regiones CDR lleva a la delineación de las regiones CDRl, CDR2 y CD3 de cadena pesada como se muestra en las Figuras 3B y 10 y en SEQ ID NOs: 29, 34 y 39, respectivamente. Las secuencias de nucleótidos y amino ácido de la región variable de cadena pesada de 13D1 se ilustran en la Figura 5A y en SEQ ID NO: 45 y 5, respectivamente. Las secuencias de nucleótidos y amino ácido de la región variable de cadena ligera de 13D122 se ilustran en la Figura 5B y en SEQ ID NO: 50 y 10, respectivamente. La comparación de la secuencia de inmunoglobulina de cadena pesada 13D12 con las secuencias de cadena pesada de inmunoglobulina de línea germinal humana conocida demuestra que la cadena pesada 13D12 utiliza un segmento VH de la línea germinal humana VH 4-34. El alineamiento de la secuencia 13D12 VH con la secuencia VH 4-34 de línea germinal se ilustra en la Figura 6. Mayor análisis de la secuencia 13D12 VH utilizando el sistema Kabat de la determinación de región CDR lleva la delineación de las regiones CDRl, CDR2 y CD3 de cadena pesada y como se muestra en las Figuras 5A y 6 y en SEQ ID NOs : 15, 20 y 25, respectivamente. La comparación de la secuencia de inmunoglobulina cadena ligera 13D12 con las secuencias de cadena ligera de inmunoglobulina de línea germinal humana conocidas demuestra que la cadena ligera 13D12 utiliza un segmento VL de la línea germinal humana VK A27. El alineamiento de la secuencia 13D12 VL con la secuencia VK A27 de línea germinal se ilustra en la Figura 9. Mayor análisis de la secuencia 13D12 VL utilizando el sistema Kabat de la determinación de región CDR lleva a la del eación de las regiones CDRl, CDR2 y CD3 de cadena ligera como se ilustra en las Figuras 5B y 9 y en SEQ ID NOs: 30, 35 y 40, respectivamente. EJEMPLO 3 Caracterización de Especificidad de Enlace de Anticuerpos Monoclonales Humanos Anti -08E Este ejemplo describe una comparación de anticuerpos ant?-08E a ligar a 08E mmunopurificado realizado por ELISA estándar para examinar especificidad de enlace para 08E. 08E etiquetado His y etiquetado myc recombmante se reviste en una placa durante la noche, después prueba para enlace contra los anticuerpos monoclonales humanos ant?-08E 2A7 , 12E1 y 13D12. Se realizaron procedimientos ELISA estándar. Los anticuerpos monoclonales humanos anti-08E se agregaron a una concentración de 1 g/ml y titularon en forma descendente a diluciones en serie 1:2. Anticuerpo policlonal IgG (Fc o específico de cadena kappa) cabra-anti-humano conjugado con peroxidasa de rábano picante (HRP) se utiliza como un anticuerpo secundario. B7H4-Ig recombinante se purifica de sobrenadantes de células 293T transfectadas con una construcción B7H4-Ig por cromatografía utilizando proteína A. Una placa ELISA se reviste con los anticuerpos humanos, seguido por adición de proteína purificada y después detección con el anti suero anti-B7H4 de conejo. Ver, Figura HA. Proteína Penta-B7H4 recombinante con etiqueta C-9 se purifica de sobrénadantes de células 293T transfectadas con una construcción Penta-B7H4 -C9 por cromatografía utilizando una columna de afinidad 2A7. Una placa ELISA se reviste con Fc anti-ratón, seguido por anti-C9 monoclonal (0.6 ug/ml) , después titula Penta-B7H4 como se indica, después los anticuerpos humanos a 1 ug/ml. Fc anti-ratón revestido o cubierto seguido por M-anti-C9 (0.6 ug/ml), después Penta-B7H4 titulado como se indica, después humanos a 1 ug/ml. Ver, Figura 11B. Los anticuerpos monoclonales humanos anti-08E 2A7, 12E1 y 13D12 ligan con alta especificidad a 08E.

EJEMPLO 4 Caracterización de enlace de anticuerpo anti -08E con 08E expresado en la superficie de líneas celulares de carcinoma de cáncer de mama Este ejemplo describe una prueba de anticuerpos anti-08E para ligar a cotransfectantes CH0-08E (a/k/a B7H4, B7S1 y B7x) células de carcinoma de células de mama que expresan 08E en su superficie celular por citometría de flujo. Una línea celular CHO transfectada con 08E así como la línea celular de carcinoma de células de mama SKBR3 (numero de acceso ATCC HTB-30) se probó para enlace de anticuerpo. El enlace del anticuerpo monoclonal humano anti-08E HuMAb 2A7 se estima al incubar lxlO5 células con 2A7 a una concentración de 1 µ g/ml . Las células se lavaron y el enlace se detecta con un IgG Ab anti-humano etiquetado con FITC. Se realizaron análisis citometricos de flujo utilizando citometria de flujo FACScan (Becton Dickinson, San José, CA) . Los resultados se ilustran en las Figuras 12 y 13. Estos datos demuestran que el los HuMAbs anti-08E ligan a las células CHO que expresan 08E y a una línea celular de carcinoma-célula de mama ejemplar. EJEMPLO 5 Análisis Scatchard de afinidad de enlace de anticuerpos monoclonales anti -08E Este ejemplo describe la prueba de anticuerpos monoclonales humanos IG1 1, 2F9, 2A7 , 12E1 y 13D12 para afinidad de enlace a una línea celular HEK transfectada con 08E utilizando análisis Scatchard. Células HEK se transfectaron con 08E de longitud íntegra utilizando técnicas estándar y desarrollan en medio RPMI que contiene suero bovino fetal al 10% (FBS) . (Figura 12 presenta análisis FACs de estas células HEK-08E con 2A7 anticuerpo monoclonal humano anti-08E 2A7) . Las células se tripsinizaron y lavaron una vez en amortiguador de enlace basado en Tris (Tris 24 mM pH 7.2, NaCl 137 mM, KCl 2.7 mM, Glucosa 2 mM, CaCl2 lmM, MgCl2 lmM, BSA 0.1%) y las células se ajustaron a 2 x 10s células/ml en amortiguador de enlace. Placar Millipor (MAFB NOB) se revistieron con leche deshidratada descremada al 1% en agua y almacenaron a 4 grados C durante la noche. Las placas se lavaron tres veces con 0.2 ml de amortiguador de enlace. Cincuenta microlitros de amortiguador solo se agregan a los pozos de enlace máximo (enlace total) . Veinticinco microlitros de amortiguador solo se agregan a los pozos de control (enlace no específico) . Concentraciones variantes de anticuerpo 125?-anti-08E se agregan a todos los pozos en un volumen de 25 µ l . (En algunos casos, anticuerpos etiquetados FITC se emplearon para titulación ya que el material sin etiquetar no esta disponible, el enlace puede estar comprometido en estos casos) . Concentraciones variantes de anticuerpo no etiquetado a un exceso de 100 veces se agregan en volumen de 25 µ l a pozos de control 25 µ l de células de CHO transfectadas 08E (2 X 106 células/ml) en amortiguador de enlace se agregan a todos los pozos. Las placas se incuban por 2 horas a 200 RPM en un agitador a 4 grados C. Al terminar la incubación de las placas de Millipore lavan tres veces con 0.2 ml de amortiguador de lavado frió (Tris 24mM pH 7.2, NaCl 500 mM, KC15 2.7mM Glucosa 2mM, CaCl2 lmM, MgCl2 lmM, BSA al 0.1%). Los filtros se retiran y cuentan en un contador gama. La evaluación del enlace de equilibrio se realiza utilizando para métodos de enlace de un solo sitio con le programa Prism (San Diego, CA) . Datos se analizaron por regresión no lineal utilizando una respuesta de dosis sigmoidal (PRIZM™) y resultan en calculo de una EC50, que se utiliza para jerarquizar los anticuerpos como se ilustra en la Tabla 2. Los valores EC50 calculados en estos experimentos son medidas cualitativas de afinidad de anticuerpo y no representan afinidades absolutas para 08E. Tabla 2 * Valores SUPERIOR e INFERIOR ajustados como constantes para compensar la curva incompleta. EJEMPLO 6 Internali za i n de anticuerpo monoclonal anti -08E Este ejemplo demuestra la prueba de HuMAbs ant?-08E para la habilidad de internalizar en células de carcinoma de mama y CHO que expresan 08E utilizando un ensayo de ternalización Hum-Zap. El ensayo Hum-Zap para la mternalización de un anticuerpo humano primario a través de enlace de un anticuerpo secundario con afinidad para IgG humano conjugado con la toxina saporma. La línea celular de cáncer-carcinoma de mama que expresa 08E SKBR3 se sembró a 1.25xl04 células/pozo en 100 µ l pozos durante la noche. Los anticuerpos HuMAb ant?-08E IGl 1, 2F9, 2A7 , 12E1 o 13D12 se agregan a los pozos a una concentración de 10 pM. Un anticuerpo de control isotipo que no es específico para 08E se emplea como un control negativo, Se agrega el Hum-Zap (Advanced Target g Systems, San Diego, CA, IT-22-25) a una concentración de 11 nM y las placas se deja que incuben por 72 horas. Las placas después de pulsan con 1.0 Ci de 3H-timidina por 24 horas, recolectan y leen en un aparato Top Count Scintillation Counter (Packard Instruments, Meriden, CT) . Los resultados se presentan a continuación en la Tabla 3 y en las Figuras 14-15. Los anticuerpos anti-08E IGl 1, 2F9, 2A7 , 12E1 y 13D12 mostraron una disminución dependiente de concentración de anticuerpo en incorporación de 3H-timidina en células de cáncer-carcinoma de mama SKBR3 que expresan 08E. Estos datos demuestran que los anticuerpos anti-08E IG1 1, 2F9, 2A7 , 12E1 y 13D12 internalizan en la línea de células de cáncer de carcinoma de mama. Tabla 3 El rango para eficiencia de internalización se promedio sobre tres experimentos en SKBR3 y dos experimentos en CHO-08E. Los rangos de internalización, junto con EC50s para enlace a CHO-08E, se presenta en las Tablas 4 y 5. Los resultados muestran que la eficiencia de internalización no se correlaciona directamente con la afinidad de enlace, lo que sugiere que la internalización es dependiente de epitope. Tabla 4 Eficiencia de Internalización Clasificada por Internalización en la Línea de Célula Carcinoma de Mama SBKR3 Tabla 5 Eficiencia de Internalización Clasificada por Internalización en la Línea de Célula CH0-08E La actividad de internalización de los conjugados de saporina en CH0-08E se mide con una respuesta de dosis a través de un intervalo de -500 pM a 1 pM utilizando anticuerpos monoclonales humanos 2A7 , 2F9 y IG1 1. Como se ilustra en la Figura 14, la internalización fue muy eficiente con EC50s en el intervalo de pM bajo. Una línea de células precursoras CHO y Hu IgG-SAP se emplearon como controles negativos y no mostraron toxicidad de fondo significante o internalización no específica. Conjugados anti-08E directos a SAP se utilizaron con las células SKBR3. El porcentaje de internalización (contra control) como una función de dosis Ig-SAP se presenta en la Figura 15. EJEMPLO 7 Evaluación de exterminio celular de un anticuerpo anti-08E conjugado con toxina en líneas celulares de carcinoma-célula de mama. Este ejemplo describe la prueba de anticuerpos monoclonales anti-08E conjugados con una toxina por la habilidad para exterminar una línea de célula de carcinoma-células de mama 08E+ en un ensayo de proliferación celular. Los anticuerpos HuMAb anti-08E IGl 1, 2F9, 2A7, 12E1 o 13D12 pueden conjugarse a una toxina mediante un enlazador, tal como un enlazador peptidilo, hidrazona o disulfuro. Una línea celular de cáncer-carcinoma de mama que expresa 08E, tal como SKB R3 , se siembra entre aproximadamente 1 y 3xl04 células/pozos en pozos de 100 µ l por 3 horas. Un conjugado de toxina-anticuerpo anti-08E se agrega a los pozos a una concentración de partida de 30 nM y titula en forma descendente a diluciones seriales de 1:3. Un anticuerpo de control de isotipo que no es específico para 08E se utiliza como un control negativo. Las placas se permiten incubar por 69 horas. Las placas después se pulsan con 1.0 /Ci de 3H-timidina por 24 horas, recolectan y leen en un aparato Top Count Scintillation Counter (Packard Instruments, Meriden, CT) . Anticuerpos anti-08E se espera que muestren una disminución dependiente de concentración de toxina-anticuerpo en incorporación de 3H-timidina en células de cáncer-carcinoma de mama que expresan 08E. Estos datos demuestran que los anticuerpos anti-08E IGl 1, 2F9, 2A7 , 12E1 y 13D12 son potencialmente citotóxicos para células de cáncer-carcinoma de mama cuando se conjugan con una toxina . EJEMPLO 8 Evaluación de actividad ADCC de anticuerpo anti -08E Este ejemplo describe la prueba de anticuerpos monoclonales anti-08E por la habilidad para exterminar líneas celulares 08E+ en la presencia de células efectoras mediante citotoxicidad celular dependiente de anticuerpo (ADCC) en un ensayo de citotoxicidad por fluorescencia . Células efectoras humanas se preparan a partir de sangre entera como sigue. Células mononucleares de sangre periférica humanas se purificaron de sangre entera heparinizada por separación de Ficoll -paque estándar. Las células se resuspendieron en medio RPMI 1640 que contiene FBS al 10% y 200 U/ml de IL-2 humano e incubaron durante la noche a 37 grados C. El día siguiente, las células se recolectaron y lavaron cuatro veces en medio de cultivo y resuspendieron a 2 x 107 células/ml. Células 08E+ objetivo se incubaron con reactivo BATDA (Perkin Elmer, Wellesley, MA) a 2.5 µ l BATDA por 1 x 106 células objetivo /mL por 20 minutos a 37 grados C. Las células objetivo se lavaron cuatro veces, se centrifugan y llevan a un volumen final de lxlO5 células/ml. La línea celular 08E+ SKBR3 así como una línea celular KS0V3 transfectada con 08E se probaron para ADCC especificado anticuerpo con los anticuerpos monoclonales anti-08E humanos utilizando el análisis de emisión de fluorescencia Delfia como sigue. Cada línea celular objetivo (100 µ l de células objetivo etiquetadas) se incuban con 50 µ l de células efectoras y 50 µ l de anticuerpo. Una proporción de objetivo a efector de 1:50 se utiliza a través de los experimentos. En todos los estudios, un control de isotipo IgGl humano se emplea como un control negativo. Después de un centrifugado de pulso de 2000 rpm y una incubación de una hora a 37 grados C, se recolectaron los sobrenadantes, centrifugan rápidamente de nuevo y 20 µ l del sobrenadante se transfieren a una placa de fondo plana, a la cual 180 µ l de solución Eu (Perkin Elmer, Wellesley, MA) se agregan y leen en un lector RubyStar (BMG Labtech) . El % de lisis se calcula como sigue: (liberación de muestra liberación espontánea * 100) / (liberación máxima liberación espontánea) , en donde la liberación espontánea es la fluorescencia de los pozos que solo contienen células objetivo y liberación máxima es la fluorescencia de pozos que contienen células objetivo y que se han tratado con Triton-X al 2%. El % de lisis de citotoxicidad celular para las células SKBR3 con anticuerpos anti-08E IGI 1, 2F9 y 2A7 se presenta en la Figura 17; el % de lisis de citotoxicidad celular para la línea celular transfectada SKOV3-08E con anticuerpos anti-08E IGIl5 2F9 y 2A7 están presentes en la Figura 18; y % de lisis de citotoxicidad celular dependiente de concentración para las células SKBR3 con anticuerpos anti-08E 2F9 y 2A7 se presentan en la Figura 19. Ambas líneas que expresan 08E+ SKBR3 y SKOV3-08E muestran citotoxicidad mediada por anticuerpo con los anticuerpos HuMAb anti-08E IG1 1, 2F9 y 2A7. Estos datos demuestran que los anticuerpos HuMAb anti-08E muestran citotoxicidad específica a células que expresan 08E+. EJEMPLO 9 Tratamiento de modelo de xeno- injerto de tumor in vivo utilizando anticuerpos anti -08E conjugados con ci totoxina y desnudos . Este ejemplo describe el tratamiento in vivo de ratones implantados con un tumor de carcinoma de céluas de mama con anticuerpos anti-08E conjugados con toxina para examinar el efecto in vivo de los anticuerpos en crecimiento de tumor. SKBR3 u otras células de carcinoma de células de mama convenientes se expanden in vi tro utilizando procedimientos de laboratorio estándar. Ratones desnudos atímicos Ncr machos (Taconic, Hudson, NY) entre 6-8 semanas de edad se implantan subcutáneamente en el flanco derecho con 7.5xl06 de ACHN o células A-498 en 0.2 ml de PBS/Matrigel (1:1) por ratón. Ratones son pesados y medidos para tumores tri-dimensionalmente utilizando un calibrador electrónico, dos veces semanalmente después de implante. Volúmenes de tumor se calculan como altura x ancho x longitud. Ratones con tumores ACHN que promedian 270 mm3 o tumores A498 que promedian 110 mm3 se distribuyen al azar en grupos de tratamiento. Los ratones son dosificados intraperitonealmente con vehículo PBS, anticuerpo de control de isotipo conjugado con toxina o HuMAb anti-08E conjugado con toxina el día 0. Ejemplos de compuestos de toxina que pueden ser conjugados con los anticuerpos de la presente descripción se describen en la solicitud de patente de los E.U.A. pendiente designada MEDX-0034US4. Los ratones que reciben anti-08E HuMAb se prueban con tres compuestos de toxina diferentes. Los ratones se supervisan para crecimiento de tumor por 60 días posteriores a dosificación. Los ratones se someten a eutanasia cuando los tumores alcanzan el punto extremo de tumor (2000 mm3) . Anticuerpos anti-08E convenientes conjugados a una toxina extienden el tiempo promedio para alcanzar el volumen de punto extremo de tumor (2000 mm3) y frenan el avance de crecimiento de tumor. De esta manera, el tratamiento con este conjugado de toxina-anticuerpo anti-08E tiene efecto inhibitorio in vivo directo en el crecimiento de tumor. EJEMPLO 10 Inmunohistoquímica con anti -08E HuMAb 2A7 Este ejemplo describe que anti-08E HuMAb 2A7 reconoce 08E por inmunohistoquímico utilizando ensayos de tejido de ratón normal (IMGENEX Histo-Array; Imgenex Corp., San Diego, CA) . Para inmunohistoquímica, se emplearon núcleos de tejido de 2,000 µ m . Después de secar por 30 minutos, las secciones se fijaron con acetona (a temperatura ambiente por 10 minutos) y secan al aire por 5 minutos. Placas se enjuagan en PBS y después pre-incuban con suero de cabra normal al 10% en PBS por 20 minutos y subsecuentemente se incuban con 10 /g/ml de 2A7 fitcilado en PBS con suero de cabra normal al 10% por 30 minutos a temperatura ambiente. A continuación, los porta objetos se lavaron tres veces con PBS e incuban por minutos con anti-FITC de ratón (10 /g/ml DAKO) a temperatura ambiente. Los porta objetos se lavaron de nuevo con PBS e incuban con conjugado HRP anti-ratón Cabra (DAKO) por 30 minutos a temperatura ambiente. Los porta objetos se lavaron de nuevo 3x con PBS. Diaminobenzidina (Sigma) se emplea como un substrato, resultando en tinción café. Después de lavar con agua destilada, los porta objetos se contra-tiñeron con hematoxilina por 1 minutos. Subsecuentemente, los porta objetos se lavaron por 10 segundos en agua destilada corriente y montaron en glicergel (DAKO) . Los resultados de estos estudios se presentan en la Tabla 6. Tabla 6 Inmunoreactividad de 08E en Conjunto de Tejido de Ratón Normal Estos datos y datos correspondientes recolectados para anticuerpos anti-08E IG1 1 y 2F9, demuestran que inmunoreactividad de 08E fuerte a intensa (3+, 4+) está presente en células tipo enteroendócrinas en el colon e intestino delgado, así como en el fluido de lumen de vesículas seminal; inmunoreactividad 08E débil a moderada (1+ , 2+) se revela en neuronas del cerebro, en neurópilos y fibras de cerebro y pons, en la materia blanca de cerebelo, en las células epiteliales de cripta de intestino delgado y en un pequeño número de grandes células linfoides en el bazo; inmunoreactividad 08E débil (1+) se demostró en epitelio de superficie de colon, células de Purkinje en cerebelo y epitelio acinar de glándula salival y páncreas; inmunoreactividad 08E equívoca a débil se muestra en epitelio de transición de vejiga urinaria, espermatocitos primarios de testículos y plexo nervioso en el estómago; y todos los otros órganos exhiben tinción negativa a equívoca, que incluyen piel, hígado, corazón, pulmón, timo, riñon, útero, ovario, epidídimo, lengua y músculos esqueléticos. EJEMPLO 11 Producción de HuMAbs desfucosilados Este ejemplo demuestra que la producción de anti-08E HuMAbs carecen de residuos fucosilo. Anticuerpos con cantidades reducidas de residuos fucosilo se han demostrado que incrementan la habilidad ADCC del anticuerpo. La línea celular CHO Ms704-PF, que carece del gen fucosiltransferasa FUT 8 (Biowa, Inc., Princeton, NJ) , se somete a electroporación con un vector que expresa las cadenas pesadas y ligeras de un anti-08E HuMAb. Ciónos resistentes a droga se eligen por crecimiento en medio Ex-Cell 325-PF CHO (JRH Biosciences, Lenexa, KS) con L-glutamina 6 mM y 500 µ g/ml G418 (Invitrogen, Carlsbad, CA) . Los ciónos se criban para expresión IgG por ensayo ELISA estándar. Dos ciónos separados se producen, B8A6 y B8C11, que tienen velocidades de producción en el intervalo de 1.0 a 3.8 picogramos por célula por día. EJEMPLO 12 Evaluación de actividad ADCC de anticuerpo anti -08E des fucosi lado Este ejemplo describe la prueba de anticuerpos monoclonales anti-08E desfucosilados y no-desfucosilados para la habilidad en exterminar células 08E+ en la presencia de células efectoras mediante citotoxicidad celular dependiente de anticuerpo (ADCC) en un ensayo de citotoxicidad por fluorescencia. Anticuerpos monoclonales anti-08E humanos se desfucosilan como se describió anteriormente. Células efectoras humanas se preparan a partir de sangre entera como sigue. Células mononucleares de sangre periféricas humanas se purifican a partir de sangre entera heparinizada por separación Ficoll-paque estándar. Las células se resuspenden en medio RPMIl 640 que contiene FBS al 10% (medio de cultivo) y 200 U/ml de IL-2 humano e incubó durante la noche a 37 grados C. Al día siguiente, las células se recolectan y lavan una vez en medio de cultivo y resuspenden a 2 x 107 células/ml. Células 08E+ objetivo se incuban con reactivo BATDA (Perkin Elmer, Wellesley, MA) a 2.5 µ l BATDA por 1 x 106 células objetivo/mL en medio de cultivo suplementado con probenecid 2.5 mM (medio de ensayo) por 20 minutos a 37 grados C. Las células objetivo se lavan cuatro veces en PBS con HEPES 20 mM y probenecid 2.5 mM, sedimentan por centrifugado y llevan a un volumen final de lxlO5 células/ml en medio de ensayo. La línea celular 08E+ ARH-77 (leucemia de linfoblastos B humanos; No. de acceso ATCC CRL-1621) se prueba para ADCC específico de anticuerpo al anticuerpo monoclonal anti-08E humano desfucosilado y no desfucosilado utilizando el análisis de emisión de fluorescencia Delfia como sigue. La línea celular objetivo ARH77 (100 µ l de células objetivo etiquetadas) se incuba con 50 µ 1 de células efectoras y 50 µ 1 ya sea de anticuerpo I Gil o I Gil desfucosilado. Una proporción de objetivo a efector de 1:100 se utiliza. Un control de isotipo IgGl humano se utiliza como un control negativo. Después de un centrifugado de pulso de 2100 rpm e incubación por una hora a 37 grados C, los sobrenadantes se recolectan, centrifugan rápidamente de nuevo y 20 µ l de sobrenadante se transfieren a una placa de fondo plano a la cual 180 µ l de solución Eu (Perkin Elmer, Wellesley, MA) se agregan y leen en un lector de placa Fusión Alpha TRF (Perkin Elmer) . El % de lisis se calcula como sigue: (liberación de muestra - liberación espontánea * 100) / (liberación máxima - liberación espontánea) , en donde la liberación espontánea es la fluorescencia de pozos que solo contienen células objetivo y la liberación máxima es la fluorescencia de pozos que contienen células objetivos y se han tratado con Lysol al 3%. La línea celular que expresa 08E+ ARH-77 mostrará una citotoxicidad mediada por anticuerpos con el anticuerpo HuMAb anti-08E IGIl y un por ciento incrementado de lisis específica asociada con la forma desfucosilada del anticuerpo anti-08E IG11. De esta manera, anticuerpos HuMAb anti-08E desfucosilados aumentan la citotoxicidad específica a células que expresan 08E+. EJEMPLO 13 Internalización de anticuerpos de HuMab anti - 08E por análisis de tinción de inmuno fluorescencia Las líneas de células objetivo 08E+ SKBR3 (cáncer de mama humano, ATCC# HTB-30) y ZR-75 (cáncer de mama humano, ATCC# CRL- 1500) se utilizaron para probar internalización de los anticuerpos HuMab anti-08E, 2A7C11, IG1 IH1 y 2F9E6 al ligar a las células utilizando tinsión de inmunofluorescencia. Células SKBR3 y ZR-75 (104 por 100// 1 por pozo en placas de 96 pozos) , reconectadas de matraz de cultivo de tejido mediante tratamiento con tripsina a 0.25%/EDTA, se incubaron con cada uno de anticuerpos HuMab anti-08E a //g/ml en amortiguador FACS (PBS + 5% FBS5, medio) por 30 minutos en hielo. Un control de isotipo IgGl humano se empleó como un control negativo. Después de 2 x lavados con medio, las células se resuspendieron en el medio (100 µ l por pozo) y después incubaron con anticuerpo secundario anti -humano-cabra conjugado con PE (Jackson ImmunoResearch Lab) a dilución 1:00 en hielo por 30 minutos. Después de lavado con medio, las células fueron ya formadas en imagen inmediatamente bajo un microscopio fluorescente (Nikon) a 0 minutos o incubaron a 37 grados C por varios tiempos. Las imágenes de la morfología celular e intensidad de inmunofluorescencia de las células teñidas se tomaron en diferentes puntos en tiempo como se indica en las siguientes figuras. La fluorescencia sólo fue observada en las células teñidas con anticuerpos HuMab anti-08E. No se detectó fluorescencia con el anticuerpo de control IgG. También se obtuvieron resultados similares con anticuerpos HuMab anti-08E conjugados con FITC directo en los ensayos. El los datos de formación de imagen mostraron la aparición de la fluorescencia en la membrana de superficie celular con todos los tres anticuerpos HuMab anti-08E a 0 minutos. En incubación de 30 minutos, la intensidad de fluorescencia de membrana disminuyó significativamente mientras que la tinsión incrementó dentro de las células. Al punto de 120 minutos, la fluorescencia en la membrana desapareció y en su lugar apareció presente en compartimientos intracelulares. Los datos demuestran que los anticuerpos HuMab anti-08E pueden ser internalizados específicamente al ligar a células de tumor endógenas que expresan anti-08E. EJEMPLO 14 Eficacia de Anticuerpos Anti -OSE en tumores HEK-B7H4 en ratones SCID. En este Ejemplo, ratones SCID implantados con tumores HEK-B7H4 se tratan in vivo con anticuerpos anti-08E desnudos para examinar el efecto in vivo de los anticuerpos en crecimiento de tumor. Ratones inmunodeficientes, con inmunodeficiencia severa combinada (SCID = severe combined immune deficient) que carecen de linfocitos B y T funcionales se emplearon para estudiar crecimiento de tumor. Células de la línea celular de tumor HEK transfectada con B7H4 se implantaron subcutáneamente a 5 millones de células/ratón en (50% v/v) . Cada ratón recibió un inoculo de 0.2 ml de células el día 0. Los ratones se verificaron para crecimiento de tumor a partir del día 10 y supervisaron dos veces semanalmente para crecimiento de tumor por aproximadamente 6 semanas. Cuando los tumores alcanzaron aproximadamente 130 mm3, los ratones se distribuyeron aleatoriamente por volumen de tumor en 3 grupos. Los ratones fueron tratados ya sea con 10 mg/kg de anticuerpo anti-08E desnudos 2A7 , un anticuerpo de control isotipo o amortiguador de formulación como un control negativo. Los animales fueron dosificados por inyección intraperitoneal cada 5 días por 5 inyecciones. Utilizando un calibrador electrónico, se midieron los tumores tridimensionalmente (altura x ancho x longitud) y se calculó el volumen de tumor. Los ratones fueron sometidos a eutanasia cuando los tumores alcanzaron un volumen de 1500 mm3 o mostraron más de 15% de pérdida de peso. Los resultados se ilustran en la Figura 20. El crecimiento de tumor se inhibe por tratamiento con el anticuerpo anti-08E 2A7. La inhibición de crecimiento de tumor promedio para el grupo tratado con 2A7 fue 63% el día 34. Los tumores reanudaron el crecimiento después de que se interrumpió la dosis. Estos resultados muestran que los anticuerpos anti-08E son efectivos para tratar tumores que expresan anti-08E in vivo . EJEMPLO 15 Inmunohistoquímica utilizando un anticuerpo anti - 08 E La habilidad del anti-B7H4 HuMAb 2A7 para reconocer B7H4 por inmunohistoquímica se examinó utilizando biopsias clínicas de cáncer de ovarios, cáncer de pulmón, cáncer de mama y cáncer de cabeza y cuello. Para inmunohistoquímica, secciones congeladas de 5 µ m se emplearon (Ardáis Inc, USA) . Después de secar por 30 minutos, las secciones se fijaron con acetona (a temperatura ambiente por 10 minutos) y secaron al aire por 5 minutos. Portaobjetos se enjuagaron en PBS y después se pre-incubaron con suero de cabra normal al 10% en PBS por 20 minutos y subsecuentemente incubaron con 10 //g/ml anticuerpo fictilado en PBS con suero de cabra normal al 10% por 30 minutos a temperatura ambiente. A continuación, los portaobjetos se lavaron tres veces con PBS e incubaron por 30 minutos con anti -FITC ratón (10 //g/ml DAKO) a temperatura ambiente. Los portaobjetos se lavaron de nuevo con PBS e incubaron con conjugado HRP cabra anti-ratón (DAKO) por 30 minutos a temperatura ambiente. Los portaobjetos se lavaron de nuevo 3x con PBS. Diaminobenzidina (Sigma) se utilizan como substrato que resulta en tinsión café. Después de lavar con agua destilada, los portaobjetos fueron contra teñidos con hematoxilina por 1 minutos. Subsecuentemente, los portaobjetos se lavaron por 10 segundos en agua corriente destilada y montaron en glycergel (DAKO) . Tinsión inmunohistoquímica de biopsias clínicas exhibe tinsión positiva en muestras de cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer de ovarios y cáncer de cabeza y cuello. EJEMPLO 16 RT-PCR cuantitativo en tejidos normales y de cáncer Diversas muestras de tejidos normales y cancerosas se cribaron para expresión ARNm 08E utilizando PCR transcriptasa inversa cuantitativa (RT-PCR) . Expresión de ARNm es indicativa de expresión de proteína 08E. Para RT-PCR cuantitativo, los siguientes cebadores 08E se emplearon: B7-H4.3: AGGATGGAATCCTGAGCTGCACTT ; B7 -H4.4 : TCCGACAGCTCATCTTTGCCTTCT como se dispone por Operon (Huntsville, AL) . Se emplearon condiciones de reacción estándar (5 µ l de plantilla ADNc a 1 ng/ µ 1 , cebador corriente arriba a 0.1 µ l a 40 /M, cebador corriente abajo 0.1 µ l a 40 //M, 6 /il de mezcla 2X SYBR Green PCR (Applied Biosystems # 4367659) y 0.8 µ l de agua). El ADNc se amplifica por 40 ciclos utilizando condiciones PCR estándar en un ABl Prism 7900HT (Applied Biosystems, Foster City, CA) . Los resultados RT-PCR cuantitativos se ilustran en la Tabla 7 siguiente. Las muestras con conteos indeterminados representan valores que estuvieron por debajo de un umbral de fluorescencia. Tumores de mama, de ovarios y cabeza y cuello se demostró que expresan 08E, con los niveles más altos de expresión que se ven en algunas muestras de cáncer de ovarios y cabeza y cuello. Esto demuestra que hay expresión incrementada de 08E en muestras de tumor de mama, ovarios y cabeza y cuello respecto a tejido normal. Tabla 7 Expresión RT-PCR cuantitativa en tejidos normales y de cáncer La presente descripción no habrá de limitarse en alcance por las modalidades específicas aquí descritas. Sin duda, diversas modificaciones de esta descripción además de aquellas descritas aquí serán aparentes para aquellos con destreza en la técnica a partir de la descripción anterior y las figuras acompañantes. Estas modificaciones se pretende que caigan dentro del alcance de las reivindicaciones anexas. Patentes, solicitudes de patentes, publicaciones, descripciones de productos y protocolos se citan en esta solicitud, las descripciones de las cuales se incorporan aquí referencia en su totalidad para todos los propósitos.

Claims (44)

1. REIVINDICACIONES 1. Un anticuerpo monoclonal humano aislado o su porción de enlace de antígeno, caracterizado porque el anticuerpo: (a) liga a 08E humano con una KD de 1 x 10~7 M o menos; y (b) liga a una línea celular de tumor-carcinoma de célula de mama.
2. 2. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque es un anticuerpo de longitud íntegra de un isotipo IgGl o IgG4.
3. 3. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque es un fragmento de anticuerpo o un anticuerpo de cadena sencilla.
4. 4. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el anticuerpo liga a 08E humano con una KD de 5.5 x 10~9 M o menos.
5. 5. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el anticuerpo liga a 08E de humano con una KD de 3xl0"9 M o menos.
6. 6. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el anticuerpo liga a 08E de humano con una KD de 2xl0"9 M o menos.
7. 7. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el anticuerpo está internalizado .
8. 8. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la línea celular de tumor-carcinoma-célula de mama se elige del grupo que consiste de la línea celular SKBR3.
9. 9. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el anticuerpo carece de residuos fucosa.
10. 10. Un anticuerpo monoclonal aislado o su porción de enlace de antígeno, en donde el anticuerpo compite en forma cruzada para enlace con 08E con un anticuerpo de referencia, en donde el anticuerpo de referencia: (a) liga a 08E humano con una KD de 1 x 10"7 M o menos; y (b) liga a una línea celular de tumor-carcinoma-célula de mama.
11. 11. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el anticuerpo de referencia comprende: (a) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1; y (b) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 6.
12. 12. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el anticuerpo comprende: (a) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2; y (b) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7.
13. 13. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el anticuerpo comprende: (a) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3; y (b) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 8.
14. 14. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el anticuerpo comprende: (a) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4; y (b) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9.
15. 15. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el anticuerpo comprende: (a) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5; y (b) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10.
16. 16. Un anticuerpo monoclonal aislado o su porción de enlace de antígeno, que comprende una región variable de cadena pesada que es el producto de o derivado de un gen VH 4-34 humano, un gen VH 3-53 humano o un gen VH 3-9, en donde el anticuerpo liga específicamente a 08E.
17. 17. Un anticuerpo monoclonal aislado o su porción de enlace de antígeno, que comprende una región variable de cadena ligera que es el producto de o derivado de un gen V? A 17 humano o gen V? L16 humano, en donde el anticuerpo liga específicamente a 08E.
18. 18. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende: (a) una región variable de cadena pesada CDRl que comprende SEQ ID NO: 11; (b) una región variable de cadena pesada CDR2 que comprende SEQ ID NO: 16; (c) una región variable de cadena pesada CDR3 que comprende SEQ ID NO: 21; (d) una región variable de cadena ligera CDRl que comprende SEQ ID NO: 26; (e) una región variable de cadena ligera CDR2 que comprende SEQ ID NO: 31; y (f) una región variable de cadena ligera CDR3 que comprende SEQ ID NO: 36.
19. 19. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende: (a) una región variable de cadena pesada CDRl que comprende SEQ ID NO: 12; (b) una región variable de cadena pesada CDR2 que comprende SEQ ID NO: 17; (c) una región variable de cadena pesada CDR3 que comprende SEQ ID NO: 22; (d) una región variable de cadena ligera CDRl que comprende SEQ ID NO: 27; (e) una región variable de cadena ligera CDR2 que comprende SEQ ID NO: 32; y (f) una región variable de cadena ligera CDR3 que comprende SEQ ID NO: 37.
20. 20. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende: (a) una región variable de cadena pesada CDRl que comprende SEQ ID NO: 13; (b) una región variable de cadena pesada CDR2 que comprende SEQ ID NO: 18; (c) una región variable de cadena pesada CDR3 que comprende SEQ ID NO: 23; (d) una región variable de cadena ligera CDRl que comprende SEQ ID NO: 28; (e) una región variable de cadena ligera CDR2 que comprende SEQ ID NO: 33; y (f) una región variable de cadena ligera CDR3 que comprende SEQ ID NO: 38.
21. 21. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende: (a) una región variable de cadena pesada CDRl que comprende SEQ ID NO: 14; (b) una región variable de cadena pesada CDR2 que comprende SEQ ID NO: 19; (c) una región variable de cadena pesada CDR3 que comprende SEQ ID NO: 24; (d) una región variable de cadena ligera CDRl que comprende SEQ ID NO: 29; (e) una región variable de cadena ligera CDR2 que comprende SEQ ID NO: 34; y (f) una región variable de cadena ligera CDR3 que comprende SEQ ID NO: 39.
22. 22. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende: (a) una región variable de cadena pesada CDRl que comprende SEQ ID NO: 15; (b) una región variable de cadena pesada CDR2 que comprende SEQ ID NO: 20; (c) una región variable de cadena pesada CDR3 que comprende SEQ ID NO: 25; (d) una región variable de cadena ligera CDRl que comprende SEQ ID NO: 30; (e) una región variable de cadena ligera CDR2 que comprende SEQ ID NO: 35; y (f) una región variable de cadena ligera CDR3 que comprende SEQ ID NO: 40.
23. 23. Un anticuerpo monoclonal aislado o su porción de enlace de antígeno que comprende: (a) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1; y (b) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 6; en donde el anticuerpo liga específicamente 08E.
24. 24. Un anticuerpo monoclonal aislado o su porción de enlace de antígeno que comprende: (a) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2; y (b) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7; en donde el anticuerpo liga específicamente 08E.
25. 25. Un anticuerpo monoclonal aislado o su porción de enlace de antígeno que comprende: (a) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3; y (b) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 8; en donde el anticuerpo liga específicamente 08E.
26. 26. Un anticuerpo monoclonal aislado o su porción de enlace de antígeno que comprende: (a) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4; y (b) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9; en donde el anticuerpo liga específicamente 08E.
27. 27. Un anticuerpo monoclonal aislado o su porción de enlace de antígeno que comprende: (a) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5; y (b) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10; en donde el anticuerpo liga específicamente 08E.
28. 28. Una composición que comprende el anticuerpo o su porción de enlace de antígeno de conformidad con la reivindicación 1, y un portador farmacéuticamente aceptable .
29. 29. Un inmunoconjugado que comprende el anticuerpo o su porción de enlace de antígeno, de conformidad con la reivindicación 1, enlazado a un agente terapéutico .
30. 30. Una composición que comprende el inmunoconj ugado de la reivindicación 29, y un portador farmacéuticamente aceptable.
31. 31. El inmunoconj ugado de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque el agente terapéutico es una citotoxina.
32. 32. Una composición que comprende el inmunoconj ugado de la reivindicación 31, y un portador farmacéuticamente aceptable.
33. 33. El inmunoconjugado de conformidad con la reivindicación 29, caracterizado porque el agente terapéutico es un isótopo radioactivo.
34. 34. Una composición que comprende el inmunoconj ugado de conformidad con la reivindicación 33, y un portador farmacéuticamente aceptable.
35. 35. Una molécula de ácido nucleico aislado que codifica el anticuerpo o su porción de enlace de antígeno, de conformidad con la reivindicación 1.
36. 36. Un vector de expresión que comprende la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 35.
37. 37. Una célula anfitriona que comprende el vector de expresión de la reivindicación 36.
38. 38. Un método para preparar un anticuerpo anti- 08E que comprende expresar el anticuerpo en la célula anfitriona de conformidad con la reivindicación 39, y aislar el anticuerpo de la célula anfitriona.
39. 39. Un método para tratar o evitar una enfermedad, caracterizado por crecimiento de células de tumor que expresan 08E, que comprende administrar a un sujeto el anticuerpo o su porción de enlace de antígeno de conformidad con la reivindicación 1, en una cantidad efectiva para tratar o evitar la enfermedad.
40. 40. El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque la enfermedad es un cáncer.
41. 41. El método de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque el cáncer es un carcinoma de células de mama.
42. 42. El método de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque el cáncer es cáncer de ovarios .
43. 43. El método de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque el cáncer es cáncer de riñon.
44. 44. El método de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque el cáncer es cáncer de cabeza y cuello.