MX2008006488A - Nuevos adyuvantes con base en conjugados de bisaciloxipropilcisteina y derivados y sus usos en composiciones farmaceuticas - Google Patents

Abstract

La presente invención se relaciona con nuevos adyuvantes y los usos en composiciones farmacéuticas, como en vacunas. En particular, la presente invención proporciona nuevos conjugados del tipo bisacicloxicisteinaútiles como adyuvantes y/o inmunomoduladores para la vacunación profiláctica y/o terapéutica en el tratamiento de enfermedades infecciosas, enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunes, tumores, alergias asícomo también para el control de la fertilidad en poblaciones de humanos o animales. Los compuestos son particularmenteútiles no solo como sistémicos, sino preferentemente como adyuvantes mucosos. Además, la invención se relaciona con sus usos como ingredientes activos en composiciones farmacéuticas.

Description

NUEVOS ADYUVANTES CON BASE EN CONJUGADOS DE BISACILOXIPROPILCISTEINA Y DERIVADOS Y SUS USOS COMPOSICIONES FARMACEUTICAS Campo de la Invención La presente invención se relaciona con nuevos adyuvantes del tipo bisaciloxipropilcisteina y los usos en composiciones farmacéuticas, como en vacunas. En particular, la presente invención proporciona nuevos compuestos útiles como adyuvantes y/o inmunomoduladores para vacunación profiláctica y/o terapéutica en el tratamiento de enfermedades infecciosas, enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunes , tumores, alergias así como también para el control de fertilidad en poblaciones de humanos o animales. Los compuestos son particularmente útiles no solo como adyuvantes sistémicos, sino preferentemente como adyuvantes mucosos. Además, la invención se relaciona con sus usos como ingredientes activos en composiciones farmacéuticas.

Antecedentes de la Invención Las enfermedades infecciosas son la principal causa de la morbilidad y mortalidad, que forma un tercio de las muertes que se presentan en el mundo cada año. Además, los agentes infecciosos son directamente responsables al menos del 15% de los cánceres nuevos, y también parecen estar REF..192914 involucrados en la patofisiologia de las enfermedades crónicas severas (p.ej., enfermedades inflamatorias, vasculares y degenerativas). Las enfermedades infecciosas tradicionales también son altamente costosas en términos de los costos asociados con la salud de los pacientes infectados y la pérdida en la productividad en el trabajo. Las principales estrategias usadas para prevenir las enfermedades infecciosas son la terapia y la profilaxis. La vacunación se ha vuelto la medida más efectiva con relación al costo para prevenir las infecciones. Sin embargo, aun existen muchas enfermedades en las cuales las vacunas no están disponibles o las vacunas disponibles no son completamente satisfactorias debido a la baja efectividad, alta reactogenicidad, baja estabilidad y/o altos costos. Así, aun existe una necesidad urgente tanto por vacunas nuevas como mejoradas. A pesar del hecho que las vacunas se han usado tradicionalmente para la profilaxis de enfermedades infecciosas, investigaciones recientes sugieren que también son una herramienta poderosa para la inmunoterapia de las enfermedades transmisibles (p.ej., infecciones con hepatitis viral, Helicobacter pylory, infecciones con virus del herpes, etc.). Además, las vacunas pueden usarse para la inmunoterapia o inmuno-profilaxis de las enfermedades autoinmunes, enfermedades inflamatorias, tumores alergias y para el control de la fertilidad en poblaciones de humanos y animales. En particular, la última solicitud parece requerir la provocación de las respuestas mucosas eficientes en un nivel del tracto reproductivo. Las enfermedades más infecciosas restringidas ya sea a las membranas mucosas o a los agentes etiológicos necesitan transitar la mucosa durante las etapas tempranas de la infección. Por lo tanto, es deseable obtener no solo una respuesta sistemática, sino también una respuesta inmune mucosa local como resultado de la vacunación, por medio de esto bloquear tanto la infección (es decir, colonización) como el desarrollo de la enfermedad. Esto puede originar una protección más eficiente contra la infección, facilitando también la erradicación de las enfermedades para los humanos son las únicas reservas (es decir, bloquear la transmisión a huéspedes susceptibles). Las vacunas administradas parenteralmente principalmente estimulan las respuestas sistémicas, mientras las vacunas administradas por una ruta mucosa copia la respuesta inmune provocada por las infecciones naturales y puede originar las respuestas mucosas y sistémicas eficientes. Debido a la aparente departamentalización del sistema inmune sistémico y mucoso, las vacunas administradas parenteralmente son menos efectivas para proteger contra patógenos mucosos (McGhee, J.R., Mestecky, J. Dertzbaugh, M.T. Eldridge, J.H., Hirasawa, M. and Kiyono, H. (1992) . The mucosal immune system: from fundamental concepts to vaccine development. Vaccine 10, 75-88). Así, la administración de inmunogenes a través de la ruta mucosa se requiere para lograr la protección total. Sin embargo, la mayoría de las vacunas disponibles se administran a través de la ruta parenteral, por medio de esto, provocar una inmunidad sistémica en el individuo. La administración de vacunas vía la ruta mucosa ofrece varias ventajas sobre la vacunación parenteral. Estas ventajas incluyen una fácil administración, la posibilidad de la auto-administración (p.ej., aplicación intranasal, rectal u oral), La eliminación de la opción de una infección cruzada indeseable debido al uso de agujas infectadas o trabajos no estériles, menores relaciones de efectos secundarios, mayor aceptación por el público, mejor confianza de los protocolos de vacunación (es decir, incremento de la eficacia total), logísticas de administración más simples y menores costos de suministro, que son particularmente adecuados para los programas de inmunización en masa. Sin embargo, la departamentalización con el nivel del sistema inmune mucoso tiene que tomarse en consideración. De hecho, las respuestas inmunes que pueden observarse que siguen a la vacunación intranasal pueden no ocurrir necesariamente después de la inmunización oral o intra-rectal . Por ejemplo, la vacunación oral puede no estimular las respuestas eficientes en los tractos genitourinario y/o respiratorio. Desafortunadamente, el suministro de antígenos por la ruta mucosa se asocia con un mayor problema, simplemente los antigenos suministrados por esta ruta generalmente tienen pobre inmunogenicidad . Esto es el resultado de diferentes mecanismos, tal como (i) eliminación del antígeno acelerado por los mecanismos de aislamiento del huésped no específico (p.ej., actividad ciliar, peristaltismo) , (ii) degradación del antígeno por enzimas locales, (iii) alteración del antígeno y/o modificación estructural como resultado del pH extremo (p.ej., acidez en el estómago, alcalinidad en el intestino) , (iv) pobre penetración del antígeno a través de la mucosa, (v) limitado acceso de los antígenos de la vacuna en las células que presentan antígeno, y (vi) tolerancia periférica local. Para superar estos problemas, se han usado diferentes estrategias, tal como entrampamiento o asociación del antígeno con partículas físicas o biológicas (p.ej., micropartículas , nanopartículas , fantasmas bacteriales), el uso de virosomas o partículas parecidas a las virales, el uso de liposomas o ISCOMS, el uso de plantas transgénicas , producción antígena por vehículos virales o bacterianos atenuados que actúan ya sea como vectores convencionales o como vehículos para las vacunas de ácido nucleico y/o su administración con adyuvantes mucosos. Sine embargo, a pesar del cuerpo pesado de la evidencia experimental generada en los estudios pre-clinicos durante los años pasados, casi no se han transferido candidatos al sistema de desarrollo de vacunas . El uso de adyuvantes óptimos juega un papel crucial en la vacunación. Los antígenos administrados sin adyuvantes solo rara vez median una respuesta inmune adecuada. Además, no solo la intensidad sino también importa la calidad de la respuesta inmune provocada. La estimulación de un patrón de inmunización incorrecto puede originar reacciones inmunopatológicas y exacerbación de los síntomas de infección. En este contexto, el adyuvante puede ayudar a asistir en la respuesta inmune deseada. En otras palabras, un adyuvantes puede modular la respuesta inmune o redirigir la respuesta inmune para balancear la respuesta inmune en la dirección deseada. Las sustancias referidas como "adyuvantes" son aquellas que se adicionan y/o formulan complementariamente en una inmunización con el antígeno actual (es decir, la sustancia que provoca la respuesta inmune deseada) a fin de mejorar la respuesta inmune mediada humoral y/o celular ("Lexikon der Biochemie und Molekularbiologie" , 1 Band, Spektrum, Akademischer Verlag 1995) . Esto es, los adyuvantes son compuestos que tienen propiedades inmunopotenciadoras , en particular, cuando se administran complementariamente con antígenos. El uso de muchos adyuvantes se basan únicamente en la experiencia, y el efecto puede no puede explicarse ni predecirse con exactitud. Los siguientes grupos de adyuvantes se usan tradicionalmente en particular: hidróxido de aluminio, emulsiones de aceites minerales, saponinas, detergentes, compuestos de silicona, tiourea, endotoxinas de bacterias gran-negativas , exotoxinas de bacterias gran-positivas, bacterias o partes que viven atenuadas o muertas o partes de estas. Una revisión sobre los adyuvantes mocosos actualmente conocidos y sistemas de suministro, p.ej., las partículas mencionadas antes, ICO s, liposomas y partículas similares a las virales, para vacunas a base de ADN y ARN se dan en Vajdy et al., immunol . Cell Biol . , 2004, 82617-627. En estas investigaciones actualmente disponibles en inmunopotenciación se revelan vacunas mucosas . Esto es, diferentes adyuvantes mucosos se han descrito los cuales deberían servir como una alternativa para los adyuvantes útiles para la administración sistémica, p.ej., véase Vajdy et al., supra . Estos adyuvantes mucosos incluyen enterotoxina lábil térmica y mutantes destoxificados de estas. En particular, los mutantes genéticamente destoxificados de enterotoxina lábil térmica de E. coli se ha desarrollado como adyuvantes mucosos útiles. Sin embargo, la toxina del cólera, de vibro cólera se conoce como un adyuvante útil para la vacunación mucosa. Además, se ha descrito la aplicación de los dinucleótidos de CpG no metilados. Se mostró que la CpG puede inclinar la respuesta inmune hacia una respuesta Thl y puede modular las respuestas inmunes existentes previamente. Las saponinas también se describen como sustancias inmunomoduladoras , predominantemente vía la inducción de citoquinas específicas que después modulan y/o activan la respuesta inmune. Desafortunadamente, la mayoría de los compuestos descritos antes que son útiles como adyuvantes mucosos no son utilizables debido a su toxicidad intrínseca, p.ej., el direccionamiento retrógrado en los tejidos neuronales de los toxoides bacterianos y/o toxinas en los derivados después de La vacunación nasal. Además, " como adyuvantes que pueden ser útiles en la vacunación mucosa se ha descrito los siguientes: La molécula MALP-2 y derivados de estos, como conjugados de bisaciloxipropilcisteina , p.ej., molécula de bispalmitoiloxipropilcisteina-PEG se sabe que representan estimulantes potentes de macrófagos. La utilidad del MALP-2 como un adyuvante se mostró previamente, véase, p.ej., WO2004/009125 y WO2003 /084568. En particular, se demostró que la MALP-2 puede actuar como un adyuvante efectivo que mejora la respuesta inmune, p.ej., fomentando una expresión mejorada de los anticuerpos IgA del antígeno específico.

Además, se mostró que la MALP-2 puede activar las células dendríticas activas y las células-B, ambas juegan un papel importante en la inducción de una respuesta inmune humoral específica. Además estudios preliminares demuestran que una combinación de una proteína tat HIV-1 biológicamente activa y MALP-2 sintética puede ser una vacuna prometedora con el componente MALP-2 como un adyuvante efectivo p.ej., vía la ruta mucosa. Sin embargo, los conjugados de bisaciloxipropilcisteina que tienen una unidad de polialquileno como se describe en el documento WO 2004/009125, BPPcysPEG ó BPPcysMEPG se pueden obtener como moléculas polidispersas que son diferentes en tamaño de la unidad polialquileno y, de esta forma solo tiene una amplia variedad del tamaño molecular. Por lo tanto, no es posible purificar los conjugados de un solo tamaño por medio de técnicas conocidas y aplicables industrialmente . Existe una necesidad de proporcionar adyuvantes que son más estables y activos, es decir, que tiene una biodisponibilidad mejorada, así, permitiendo la reducción de la dosis de los adyuvantes en las vacunas. Además, existe una necesidad de proporcionar compuestos que tienen solubilidad mejorada en solventes hidrofílieos y que están mejorados en su tiempo de permanencia en el cuerpo, en particular, es más estable contra el mecanismo y la excreción. Además, se requieren nuevos compuestos que tienen una vida de anaquel mejorada . De esta forma, ninguno de estos adyuvantes mucosos descritos previamente se ha aprobado aun, pero actualmente, solo dos adyuvantes sistemicos recibieron aprobación para ser administrados en humanos y, por lo tanto, se usan para la preparación de vacunas en humanos. Estos adyuvantes son Alum y MF59. Sin embargo, ambos no son efectivos como adyuvantes mucosos . Se ha realizado una búsqueda intensiva en años recientes buscando adyuvantes novedosos, incluyendo aquellos para la ruta de administración mucosa. Solo unas pocas sustancias se han encontrado que son capaces de mejorar las respuestas mucosas. Entre estas, algunas actúan como vehículos para lo cual los antígenos deben estar unidos o fusionados a estos. Se han encontrado unos cuantos se pueden emplear universalmente adyuvantes "verdaderos" que se mezclan con los antígenos, como se describe anteriormente. Por lo tanto, aun existe la necesidad en la técnica previa por proporcionar nuevos compuestos útiles como adyuvantes, particularmente como adyuvantes mucosos y/o vacunas. En particular, existe una necesidad de adyuvantes mucosos que puedan provocar un fuerte respuesta inmune que representan una respuesta inmune balanceada o ajustada que involucra tanto los componentes humorales como los celulares, de esta forma, permitiendo la profilaxis efectiva o tratamiento de diferentes enfermedades y padecimientos, específicamente de enfermedades infecciosas o cáncer. Además, la biodisponibilidad de los adyuvantes debe ser buena con excelente estabilidad y actividad, así, permiten la reducción de la dosis y el incremento de la bioseguridad de los adyuvantes . De esta forma, el objetivo de la presente invención es la provisión de adyuvantes mucosos que pueden provocar y/o mejorar y/o modular la respuesta inmune (existente previamente) en un individuo o paciente. En particular, la invención se basa en el objetivo de desarrollar una variedad de adyuvantes novedosos, altamente activos, particularmente adyuvantes mucosos que no son tóxicos para los humanos y que pueden emplearse con una amplia variedad de ingredientes activos para que ayuden en las vacunas convencionales o novedosas tal como, en particular, vacunas profilácticas o vacunas terapéuticas, incluyendo vacunas de ADN y cáncer.

Breve Descripción de la Invención Este problema técnico se resuelve por la provisión de las modalidades que se caracterizan en las reivindicaciones.

La presente invención se relaciona generalmente con la provisión de nuevos conjugados o sales o solvatos de estos, útiles como compuestos inmunomoduladores , en particularmente, como adyuvantes, preferentemente como adyuvantes mucosos.

Además, la presente invención se relaciona con nuevos compuestos farmacéuticos que comprenden los conjugados como se describe en la presente con vehículo (s) farmacéuticamente aceptable ( s ) , opcionalmente juntos con los ingredientes adicionalmente activos . Esto es, la presente invención se relaciona con la provisión del uso de compuestos específicos o conjugados útiles como adyuvantes y/o inmunomoduladores en vacunación terapéutica o profiláctica. Los compuestos y conjugados son útiles como sistémicos y son particularmente útiles como adyuvantes mucosos que se aplican por medio de la mucosa del individuo . Los actuales inventores encontraron ahora que las formas específicas de los conjugados bisaciloxipropilcisteina son particularmente útiles como adyuvantes en vacunas para la vacunación terapéutica o profiláctica. En particular, los compuestos como se describen en la presente demuestran aplicabilidad como adyuvantes parenterales y, en particular, como adyuvantes mucosos con bajas dosis. Como se usa en la presente, el término "adyuvante" significa sustancias que se adicionan y/o formulan complementariamente en una inmunización con el antígeno activo, es decir, la sustancia que provoca la respuesta inmune deseada, a fin de mejorar o provocar o modular la respuesta inmune mediada de forma humoral y/o celular contra el antígeno activo. Preferentemente, el adyuvante de acuerdo con la presente invención también es capaz de mejorar o provocar la respuesta inmune innata. El término "terapia" o "tratamiento" se refiere a un proceso que se proyecta produzca un cambio benéfico en el padecimiento de un individuo similar a un mamífero, p.ej., un humano, por lo regular referido como un paciente, o animal. Un cambio benéfico puede, por ejemplo, incluir uno o más de: restauración de la función, reducción de los síntomas, limitación o retardo del progreso de una enfermedad, trastorno, o padecimiento o prevención, limitación o retardo del deterioro de un padecimiento, enfermedad, o trastorno del paciente. Esta terapia por lo general abarca la administración de un fármaco, entre otros. Como se usa en la presente, el término "sistema de suministro" se refiere a un sistema que es más inerte y tiene menos efecto inmunomoduladores que los adyuvantes y que puede proteger y suministrar la vacuna al sitio de interés a través del sitio de administración. En particular, el sistema de suministro permite una presentación más eficiente del antígeno en el sistema inmune. Ejemplos de los sistemas de suministro son los virus o partículas parecidas a los virus, ISCOM, nanopartículas , micropartículas , liposomas, virosomas, partículas como poliomas, vacunas atenuadas y partículas similares a virus.

Como se usa en la presente, el término "pegilado" se refiere a la conjugación de un radical de compuesto con los radical (es) conjugado (s) que contienen al menos dos unidades de polialquileno . En particular, el término pegilado se refiere a la conjugación del radical del compuesto con un radical conjugado que tiene al menos dos unidades de polietilenglicol . El término "pegilado" no incluye formas que tienen una pegilación lineal del residuo bisaciloxipropilcisteina . Como se usa en la presente, el término "mucosa" se refiere a la superficie mucosa del cuerpo tal como la nasal, oral, gastro-entérica , rectal, urinaria, conjuntiva, glandular, p.ej., glándula mamaria, mucosa epitelial. Como se usa en la presente, el término "conjugado" se refiere a los compuestos que comprenden un radical del conjugado y un radical del compuesto. El radical del compuesto es un residuo bisaciloxipropilcisteina. El término "radical conjuntivo" se refiere a un radical que se une al residuo bisaciloxipropilcisteina. El radical conjugado ayuda a incrementar la aplicación de los compuestos revelados en la presente . Como se usa en la presente, el término "estructura antígena" o "antigeno" se refiere a la estructura capaz de originar una respuesta inmune celular o humoral. La estructura antígena, también conocida como epítope es la parte del antígeno, que está presente por el MHC o moléculas similares al MHC . Además, el epitope o estructura antígena representa la parte de un antígeno reconocido por los anticuerpos dirigido contra el antígeno. Como se usa en la presente, el término "modula una respuesta inmune" se refiere a cualquier cambio del presente estado de la respuesta inmune. La respuesta inmune puede modularse en cuanto a que la respuesta se provoca o una respuesta inmune existente previamente se mejora o disminuye. Además, la respuesta inmune puede modularse al cambiar la respuesta inmune de una respuesta inmune más humoral a una más celular o viceversa. Además, la respuesta inmune puede modularse al cambiar o redirigir la respuesta de una respuesta Thl a Th2 o Th3 o viceversa, en particular una respuesta Thl/Th2 balanceada. Además, la modulación de la respuesta inmune puede abarcar la activación o mejora de la respuesta inmune innata. Como se usa en la presente, el término "individuo" o "paciente" que se usa en la presente intercambiablemente se refiere a un individuo o un paciente con necesidad de una terapia o profilaxis. Preferentemente, el paciente o individuo es un vertebrado, aun más preferentemente un mamífero, particularmente preferido es un humano. Como se usa en la presente, el término "vehículo" se refiere a un diluyente, adyuvante, excipiente, o vehículo.

En un primer aspecto, la presente invención se relaciona con el uso de un conjugado de bisaciloxipropilcisteina de acuerdo con la fórmula 1 : R2— OCO— CH— CH2— S— CH2~ CH— C0— L— R3 NH2 donde Ri y R2 pueden ser idénticos o diferentes y son radicales acilo; L es una radical de enlace seleccionado del grupo de NH, 0, S, Ó OCO; R3 es un radical conjugado enlazado covalentemente que comprende al menos dos unidades de polialquilenglicol de fórmula : gue puede ser idéntico o diferente; donde Xi es hidrógeno o un hidrocarburo gue puede contener heteroátomo ( s ) , p.ej., un grupo alguilo C1-C6 recto o ramificado o un grupo alcoxi C1-C6 recto o ramificado; R4 es independientemente cualquiera de hidrógeno, OH, grupo alguilo C1-C6 recto o ramificado, OR5 ó C0-R6,- R5 es independientemente cualquiera de hidrógeno, ó grupo alquilo Ci-C6 recto o ramificado; R6 es independientemente cualquiera de hidrógeno, OH, OR5 ó NR7R.8 ; R7 y Rs son independientemente cualquiera de hidrógeno o hidrocarburo que puede contener heteroátomo (s) y que puede formar un anillo; n es un entero de 1 a 100; x es independientemente un entero de 1 a 10; y es un entero de 0 a 10 como adyuvante (s) para la vacunación terapéutica o profiláctica . En un segundo aspecto, la presente invención se relaciona con un derivado de bisaciloxicisteina de acuerdo con la fórmula (1) donde Ri y R2 se define como antes, L es amino-3 ' -desoxiadenosina , amino-3 ' -desoxiguanosina , amino-3 '-desoxiinosina, o amino-3 ' -desoxixantina y R3 puede estar ausente o puede estar unido covalentemente con el residuo de purina, p.ej., en la posición 6 del anillo de purina y se define como se describe anteriormente. Preferentemente, el derivado es S- [2 , 3-bis (palmitoiloxi ) - (2S ó 2R) -propil ] -L-cisteinilcarboxi-3 ' -amino-3 ' -desoxiadenosina (BPPcysAda) .

Alternativamente, el derivado de bisaciloxicisteina de acuerdo con la fórmula (1) puede ser succinilado. Preferentemente, el conjugado se caracteriza en que los residuos Ri y R2, que pueden ser idénticos o diferentes, son independientemente un grupo acilo C7-C25, preferentemente grupos alquilo-C8-C22 , alquenilo-, alquinilo, y las posiciones insaturadas están preferentemente en la configuración cis, los residuos alquilo-, alquenilo-, y alquinilo pueden ser residuos lineales, ramificados o cíclicos que puede estar sustituido . Con el término "que puede estar sustituido" significa una sustitución con un grupo alquilo C1-C6 recto o ramificado o un grupo alcoxi C1-C6 recto o ramificado y/o con un halógeno, grupo hidroxilo o grupo carboxilo. El radical conjugado del conjugado de acuerdo con la presente invención es un radical conjugado tolerado fisiológicamente, enlazado covalentemente , que es adecuado para convertir el residuo bisaciloxipropilcisteina en una forma más soluble en agua. El radical conjugado se caracteriza en que proporciona una buena solubilidad en solventes hidrofílieos , como agua, y no es inmunogénico . Además, el radical de conjugado proporciona considerablemente mayor estabilidad a la proteasa, una disminución significativa en la inmunogenicidad y un decaimiento perceptible de la excreción renal. La nueva estructura pegilada cubre la molécula del fármaco casi completamente, protegiéndola así contra la degradación prematura por anticuerpos y enzimas endógenas. Además, con la ayuda del reactivo de enmascaramiento, el fármaco puede soportar ataques por el sistema inmune y procesos de degradación enzimática, puede alcanzar su destino sin impedimentos y ejerce eficientemente su efecto terapéutico. Así, la cantidad de adyuvante o ingrediente activo necesario para lograr los efectos deseados puede reducirse significativamente mientras se mejora la biodisponibilidad . En particular, el radical conjugado del conjugado en la presente, es un radical conjugado que contiene al menos dos unidades de polialquilenglicol que no están en una fila pero están presentes en una estructura ramificada. La estructura ramificada significa que las unidades se unen directa o indirectamente de forma covalente vía una molécula de ramificación y la molécula de ramificación se une directa o indirectamente con el residuo bisaciloxipropilcisteina de fórmula: la cual puede ser idéntica o diferente; donde Xi es hidrógeno o un hidrocarburo que puede contener heteroátomo ( s ) , como un grupo alquilo Ci-C6 recto o ramificado o un grupo alcoxi recto o ramificado; R4 es independientemente cualquiera de hidrógeno, OH, grupo alquilo C1-C6 recto o ramificado, OR5 ó CO-R6; R5 es independientemente cualquiera de hidrógeno, ó grupo alquilo Ci - C6 recto o ramificado; R6 es independientemente cualquiera de hidrógeno, OH , OR5 ó NR7R8 ; R7 y R8 son independientemente cualquiera de hidrógeno o hidrocarburo que puede contener heteroátomo ( s ) y que puede formar un anillo; n es un entero de 1 a 100; x es independientemente un entero de 1 a 10; y es un entero de 0 a 10. Preferentemente, n es un entero de 2 a 50, de forma preferida 2 a 10, en particular de 3 a 5. y se prefiere que sea un entero de 1 a 5 , en particular, de 1 a 3 , en otra modalidad preferida, y es 0. Preferentemente, x es un entero de 2, 3 ó 4, en particular 2. Xi es preferentemente ORg , N ( R9 ) 2 , SR9 ó COORg , en donde cada R9es individualmente hidrógeno, bencilo o alquilo d- C6 , preferentemente un grupo alcoxi recto o ramificado CI-CÉ, como un grupo metoxi, etoxi o propoxi . R es preferentemente un átomo de hidrógeno. De esta forma, la unidad de polialquilenglicol mencionado anteriormente puede contener preferentemente al menos dos subunidades de etilenglicol , propilenglicol , o butilenglicol o combinaciones de estos. La longitud de la cadena de cada una de las unidades de polialquilenglicol puede estar en el intervalo de 1 a 100 subunidades, preferentemente 2 a 50 subunidades, como 2 a 10, particularmente en el intervalo de 3 a 5 subunidades. Las unidades de polialquileno presentes en el conjugado de acuerdo con la presente invención no tienen un radical conjugado lineal pero al menos dos unidades están presentes en una forma ramificada, p.ej., mostrada en la Fig. 10 y 11.

Particularmente la subunidad de polialquilenglicol preferida es un residuo de metoxipolialquilenglicol-carbonilo en donde el radical alquileno es un radical alquileno o propileno . Por lo tanto, la forma pegilada como se define en la presente permite el incremento de la solubilidad en solventes hidrofílieos y ambiente hidrof lico. Además, el radical conjugado permite proteger el radical compuesto, es decir, el radical adyuvante mucoso activo, contra la degradación enzimática, modificación estructural debido al cambio del pH, remoción mecánica, etc. Así, principalmente se incrementa la estabilidad del compuesto. Otro efecto benéfico de conjugación es el incrementar el tiempo de retención en el individuo, p.ej., para retrasar la excreción renal, mientras es bien tolerado, p.ej., no es inmunogénico, por el organismo. Así, el conjugado de acuerdo con la presente invención muestra una biodisponibilidad mejorada mientras permite la reducción de la dosis necesaria para provocar el efecto deseado. Además, los conjugados o derivados de acuerdo con la presente invención mantienen su actividad aun después de un almacenamiento de 2 meses a temperatura ambiente, como se muestra en la Fig. 12. Específicamente, el radical conjugado comprende al menos cuatro cadenas que tienen unidades de polialquilenglicol . El conjugado puede ser un compuesto ramificado en donde cada brazo contiene una unidad de polialquilenglicol. Particularmente, preferidos son los radicales de conjugado en donde la unidad de polialquilenglicol es una unidad de polietileno, polipropileno o polibutilenglicol . En una modalidad particularmente preferida, el radical del compuesto que se une covalentemente con el radical del conjugado es un radical ramificado en donde al menos dos brazos que contienen unidades de polietilenglicol que tienen de 3 a 5 subunidades de etilenglicol y un grupo metoxi en el extremo libre del grupo de polietilenglicol. En particular, el radical ramificado comprende de 4 ó 6 u 8 brazos cada uno tienen 3 subunidades de etilenglicol y un grupo metoxi en el extremo libre del grupo de polietileno. En particular, el conjugado se caracteriza en que el radical del conjugado es 4 brazos PEG ( ( S ) -10-amino-6 , 9 , 13 , 16-tetraoxo-N,N' , 8, 14-tetraquis (3 , 6 , 9 , 12-tetraoxatridec-l-il ) -5,8,14, 17-tetraazahenicosan-1 ,21- diamida) , 6 brazos PEG o 8 brazos PEG como se describe en WO 2004108634 que se incorpora en la presente en su totalidad. Otro radical del conjugado adecuado que comprende al menos dos unidades de polietileno se puede obtener, p.ej., de celares GmbH, Berlín, véase htt ; / /www . celares . com o Nektar Therapeutics , www. nektar . com/peg y ejemplos específicos se muestran en la Figura 9. Una modalidad particularmente preferida es el compuesto de fórmula (2) se muestra en la Figura 11. Los conjugados descritos en la presente pueden estar en forma de sales no tóxicas farmacéuticamente aceptables de estas. Las sales incluyen las sales de adición ácidas, como las sales con ácidos inorgánicas (p.ej., ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, y ácido fosfórico) o con ácidos orgánicos (p.ej., ácido acético, ácido propiónico, ácido maleico, ácido olecico, ácido palmítico, ácido cítrico, ácido succínico, ácido tartárico, ácido fumárico, ácido glutámico, ácido pantoténico, ácido laurilsulfónico, ácido metansulfónico , y ácido itálico). Los conjugados pueden estar en forma de solvatos de estos (p.ej., hidratos). Además, los conjugados pueden formar sales con iones catiónicos, como iones metálicos, en particular álcalis o iones de metales alcalinotérreos , o NH4+. Preferentemente el conjugado de acuerdo con la presente invención es un conjugado de S- [2 , 3-bis (aciloxi )- (2S) -propil ] -L-cisteinilcarboxi , preferentemente un conjugado de S- [2, 3-bis (palmitoiloxi ) - (2S) -propil] -L-cisteinilcarboxi . En otra modalidad el conjugado es un S-[2,3-bis (aciloxi )-( 2R) -propil ] -L-cisteinilcarboxi , preferentemente un conjugado de S- [2 , 3-bis (palmitoiloxi) - (2S) -propil] -L-cisteinilcarboxi . Los conjugados como se describen anteriormente pueden usarse adicionalmente como un inmunomodulador en una composición farmacéutica para prevenir o tratar enfermedades infecciosas, cánceres, tumores, enfermedades autoinmunes o alergias, o procesos inflamatorios crónicos o agudos o control de la fertilidad en poblaciones de humanos o animales . La síntesis de conjugados puede realizarse por medio de métodos conocidos por la persona con experiencia en la técnica. Por ejemplo, un grupo hidroxilo puede convertirse en un residuo de halógeno, p.ej., Cl, Br, I y este residuo puede reaccionar con conjugados modificados que tienen un grupo amino libre. Por ejemplo, la síntesis de los conjugados pegilados se describen en Veronese F.M., Biomaterials 22 (2001), 405-417 y Rodera Y., et al., Prog. Polym, Sci . (1998), 23, 1233-1271 que se incorpora en la presente como referencia . En una modalidad preferida, el/los conjugado (s) o sales o solvatos de estos son útiles como adyuvante(s) mucoso(s), en particular, para la administración intra-nasal, intra NALT, oral, intra-rectal , conjuntiva, intra-vaginal , intratecal, intra-bronquial , intra-pulmonar , o intra-uretral, la administración en los conductos lácteos del pecho o por inhalación. Se prefiere particularmente la administración intra-nasal o la administración por inhalación usando formulaciones en aerosol adecuadas . Las formulaciones en aerosol útiles para la administración de vacunas son conocidas en la técnica. Los conjugados o sales o solvatos de estos también son adecuados como adyuvante(s) sistémico ( s ) . De esta forma, los adyuvantes descritos en la presente también son aplicables como adyuvante(s) parenteral ( es ) , en particular, en la administración subcutánea, tópica (vacunación transcutánea) , intravenosa, intradérmica, tópica, o intramuscular. El adyuvante de la invención puede unirse por todos los métodos conocidos por una persona con experiencia al antígeno o molécula activa proyectada para la vacunación, se incorporan juntas con la última en partículas físicas (p.ej., micropartículas , nanopartículas , liposomas, ISCOMS, polímeros) o biológicas (bacterias, partes de bacterias) o virosomas o mezclado con el antígeno. Por ejemplo, el adyuvante puede formularse complementariamente o mezclarse con el antígeno. Para unirse a un vehículo también es posible proporcionar moléculas de transporte o proteínas de transporte como vehículos . El/los conjugado (s) o sales o solvatos de estos esta(n) presente (s) preferentemente en una preparación con el componente de vacunación activo (p.ej., el antígeno) que es adecuado y se provee por administración intra-nasal, intra-NALT, (nasal asociado con el tejido linfoide) , atomizado, oral, intra-rectal , conjuntivo, intravaginal , intra-uretral o para administración en los conductos lácteos del pecho. Particularmente, la preparación se proporciona en formulación adecuada para recibirse por medio del tracto respiratorio o el tracto gastrointestinal. Alternativamente, el adyuvante mucoso de la invención puede estar presente en un kit para la administración complementaria con una vacuna por medio de una de las rutas mencionadas anteriormente y adaptada por lo tanto donde sea apropiado. Esto es la vacuna puede administrarse simultánea, secuencial o separadamente con el componente de vacunación activo. Así, los conjugados de acuerdo con la presente invención se dirigen a la respuesta inmune hacia una respuesta inmune Thl/Th2 balanceada. También, los conjugados pueden inclinarse a la respuesta inmune al mejorar la respuesta inmune Th2. En otra modalidad, la presente invención se relaciona con métodos para tratar individuos afectados con una enfermedad o padecimiento que puede tratarse al modular la respuesta inmune que comprende administrar al individuo una cantidad efectiva de un compuesto farmacéutico que comprende los conjugados, sales o solvatos de estos como se definen en la presente como un adyuvante, particularmente como adyuvantes mucosos junto con un componente de vacunación activo, y, opcionalmente , un vehículo farmacéuticamente aceptable . Preferentemente, el método se relaciona con el tratamiento de individuos afectados con una enfermedad infecciosa en donde la enfermedad infecciosa se produjo por un agente infeccioso seleccionado entre aquellos que causan enfermedad en humanos o animales al nivel del tracto respiratorio, tracto gastrointestinal, tracto genitourinario, sistema osteoarticular, piel o mucosa. Los conjugados o sales o solvatos de estos como se define en la presente son particularmente útiles como adyuvantes mucosos para activar o mejorar en vitro y/o in vivo el antígeno que presenta función de antígeno que presenta las células para una intervención terapéutica o profiláctica. Esto significa que, los adyuvantes pueden estimular macrófagos, pueden estimular o mejorar la respuesta inmune humoral, p.ej., mejorar o estimular la producción de anticuerpos. Además, los adyuvantes también pueden mejorar o estimular la respuesta inmune celular, p.ej., incrementando la proliferación de células T. Además, es posible usar el/los adyuvante (s) para estimulación ex vivo en cultivo celular, p.ej., para la producción de células dendr ticas, etc. Estas células obtenidas por la estimulación ex vivo pueden usarse para transferir células autólogas en el trasplante o como una vacuna a base de células contra enfermedades o padecimientos, como las enfermedades y padecimientos mencionados anteriormente, incluyendo cáncer, enfermedades autoinmunes o alergias . Además, los conjugados de acuerdo con la presente invención son útiles para marcar células in vi tro, ex vivo y/o in vivo que expresan por ejemplo Toll como el sistema receptor, incluyendo pero no limitándose a receptor TRl , TR2 y/o TLR-6 para una intervención profiláctica o terapéutica en el paciente. Preferentemente, el uso del conjugado de acuerdo con la presente invención permite mejorar la eficacia de la vacuna al marcar las células que expresan el receptor Toll 2 y/o Toll 6. Asi, en caso del uso de los conjugados o sales o solvatos de estos como se define en la presente como un adyuvante, la composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención es preferentemente una vacuna, que comprende los compuestos o conjugados o sales o solvatos de estos como adyuvante (s) farmacéuticamente aceptables junto con el compuesto de vacunación activo (p.ej., el antigeno) y, opcionalmente , un vehículo, diluyente, conservador, adyuvante farmacéuticamente aceptable en lugar del adyuvante de acuerdo con la presente invención, inmmunomodulador o excipiente. El compuesto de vacunación activo puede ser cualquier compuesto adecuado para provocar, mejorar o modular una respuesta inmune en un individuo. El compuesto de vacunación activo es particularmente adecuado para la administración intra-nasal, intra NALT, oral, intra-rectal , conjuntiva, intra-vaginal , pulverizada, o intra-uretral , o administración en los conductos lácteos del pecho. Por ejemplo, el compuesto de vacunación activo, el ingrediente activo de la composición farmacéutica, comprende al menos uno o más antígenos diferentes en forma de péptidos, proteínas, polisacáridos , glicolípidos , o ADN que los codifican o fantasmas bacterianos o vacunas atenuadas. Preferentemente, el/los antígeno(s) son antígeno(s) tumoral(es) o antígeno(s) derivados de los agentes infecciosos. Los agentes infecciosos incluyen aquellos agentes que normalmente ingresan al organismo del paciente al cruzar la membrana mucosa. La composición farmacéutica que comprende adyuvante (s) de acuerdo con la presente invención, un compuesto de vacunación activo, opcionalmente vehículo adicional, diluyente, conservador, adyuvante en lugar de adyuvante de acuerdo con la presente invención, inmunomodulador o excipiente puede contener adicionalmente compuestos, como compuestos similares a una o más moléculas antiinflamatorias, moléculas anti-angiogénicas , moléculas citotóxicas, moléculas inmunomoduladoras , preferentemente quimoquinas , citoquinas, ligando CD40, moléculas co-estimuladoras o anticuerpos o mezclas de estos. Sin embargo, los conjugados y sales y solvatos de estos como se define en la presente para el uso como adyuvantes también pueden ser un compuesto de una composición farmacéutica provista en una formulación adecuada para la administración parenteral, en particular, en administración subcutánea, transmuscular (vacunación tópica) , intravenosa, intradérmica o intramuscular. Además, los compuestos de acuerdo con la presente invención son útiles en terapia de tumores que incluyen la generación in vi tro o cebado in vi tro de las células autólogas para la transferencia de células adoptivas en terapia y trasplante del tumor. Sin embargo, los adyuvantes son útiles para la inducción de la tolerancia cruzada contra los compuestos microbianos, como endotoxinas, para proteger contra el choque séptico u otras formas severas de enfermedades inducidas por compuestos microbianos. Además, los compuestos por si mismos como se definen en la presente pueden mostrar una actividad farmacéutica, p.ej., son útiles en la profilaxis y tratamiento de diferentes enfermedades y padecimientos, como cáncer, enfermedades infecciosas, choque séptico, procesos inflamatorios crónicos, enfermedades autoinmunes, alergias, etc. Por lo tanto, los conjugados o sales o solvatos de estos también son útiles para la preparación de un fármaco para prevenir o tratar enfermedades infecciosas, choque séptico, cáncer, tumores, enfermedades autoinmunes, alergias, o procesos inflamatorios crónicos o agudos . Los conjugados de acuerdo con la presente invención y las sales o solvatos de estos pueden usarse como ingredientes activos en compuestos farmacéuticos útiles para la prevención o tratamiento de enfermedades infecciosas, choque séptico, tumores, enfermedades autoinmunes, alergias, o procesos inflamatorios crónicos o agudos. En particular, los conjugados o sales o solvatos de estos están contenidos en compuestos farmacéuticos útiles para prevenir o tratar el cáncer y/o tumores, tal como melanoma, próstata, pecho, colorectal, estómago, garganta, y cuello, cáncer pancreático, cervical, ovárico, óseo, leucemia y pulmón; infecciones virales, tal como hepatitis B, hepatitis C, virus de inmunodeficiencia humana, helicobacter pylori, virus herpes, etc.; infecciones bacterianas, tal como tuberculosis, lepra y listeriosis, e infecciones parasitarias, como malaria. De esta forma, en otro aspecto, la presente invención se relaciona con composiciones farmacéuticas que comprenden conjugados o sales o solvatos de estos como se define en la presente, en particular, conjugados que contienen al menos un radical del conjugado que comprende al menos dos unidades polialquilenglicol , como se define en la presente o sales o solvatos de estos y opcionalmente , un vehículo farmacéuticamente aceptable. Estas composiciones farmacéuticas comprenden una cantidad terapéuticamente efectiva de los conjugados y, opcionalmente, un vehículo farmacéuticamente aceptable. La composición farmacéutica puede administrarse con un vehículo fisiológicamente aceptable a un paciente, como se describe en la presente. En una modalidad específica, el término " farmacéuticamente aceptable" significa proveerse por una agencia reguladora u otras farmacopeas generalmente reconocidas para uso en animales, y más en particular, en humanos. El término "vehículo" se refiere a un diluyente, adyuvante, excipiente, o vehículo con el cual se administra terapéuticamente. Estos vehículos farmacéuticos pueden ser líquidos estériles, tal como agua y aceites, que incluyen aquellos de origen del petróleo, animal, vegetal o sintéticos, tal como aceite de cacahuate, aceite de semilla de soya, aceite mineral, aceite de ajonjolí, y los similares. El agua es un vehículo preferido cuando la composición farmacéutica se administra de forma intravenosa. Las soluciones salinas y soluciones acuosas de dextrosa y glicerol pueden emplearse como vehículos líquidos, particularmente para soluciones inyectables. Los excipientes farmacéuticos adecuados incluyen almidón, glucosa, lactosa, sucrosa, gelatina, malta, arroz, harina, tiza, gel de sílice, estearato de sodio, monoestearato de glicerol, talco, cloruro de sodio, leche desnatada seca, glicerol, propileno, glicol, agua, etanol y los similares. La composición, si se desea, también puede contener cantidades menores de agentes humectantes o emulsionantes, o agentes tampones de pH . Estas composiciones pueden tomar la forma de soluciones, suspensiones, emulsiones, tabletas, pildoras, cápsulas, polvos, formulaciones de liberación sostenida y los similares. La composición puede formularse como supositorio, con los aglutinantes tradicionales y vehículo tal como triglicéridos . La formulación oral puede incluir vehículos estándar tal como grados farmacéuticos de manitol, lactosa, almidón, estearato de magnesio, sacarina de sodio, celulosa, magnesio, carbonato, etc. Ejemplos de vehículos farmacéuticos adecuadas se describen en "Remington's Pharmaceutical Science" por E.W. Martin (18th ed. , Mack Publishing Co., Easton, PA (1990)). Estas composiciones contendrán una cantidad terapéuticamente efectiva de los conjugados y sales o solvatos de estos, preferentemente en forma purificada, junto con una cantidad adecuada de vehículo a fin de proporcionar la forma para la administración propia al paciente. La formulación se ajustaría al modo de administración.

Típicamente, el vehículo farmacéutica o terapéuticamente adecuado es un medio de vehículo que no interfiere con la efectividad de la actividad biológica de los ingredientes activos y que no son tóxicos para el huésped o paciente. En otra modalidad preferida, la composición se formula de acuerdo con los procedimientos de rutina como una composición farmacéutica adaptada para la administración intravenosa en seres humanos. Típicamente, las composiciones para la administración intravenosa son soluciones en tampón acuoso isotónico estéril. Donde es necesaria la composición también puede incluir un agente de solubilidad y un anestésico local tal como lidocaína para disminuir el dolor en el sitio de la inyección. Generalmente, los ingredientes se suministran ya sea de forma separada o mezclada, junto en una forma de dosificación unitaria, por ejemplo, como un polvo liofilizado seco o agua libre e de concentrados en un recipiente sellado herméticamente tal como una ámpula o bolsita que indica la cantidad de agente activo. Donde la composición será administrada por infusión, este puede surtirse con una botella de infusión, que contiene agua o solución salina grado farmacéutico estéril. Donde la composición se administra por inyección, una ámpula de agua estéril para la inyección o solución salina puede proporcionarse a fin de que los ingredientes puedan mezclarse previo a la administración.

La composición farmacéutica que se usa en conexión con la invención puede formularse como formas neutras o sales. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen aquellas formas con aniones tal como aquellas derivadas de los ácidos clorhídrico, fosfórico, acético, oxálico, tartárico, etc., y aquellas formadas con cationes tal como aquellas derivas de sodio, potasio, amonio, calcio, hidróxidos férricos, isopropilamina, trietilamina, 2 -etilaminoetanol , histidina, procaína, etc. " Cantidades terapéutica o farmacéuticamente aceptables" que se aplican a las composiciones de la actual versión se refiere a la cantidad de la composición suficiente para inducir un resultado biológico deseado. Este resultado puede ser el alivio de los signos, síntomas, o causas de una enfermedad, o cualquiera de otras alteraciones, de un sistema biológico. En la presente invención, el resultado por lo regular involucrará un incremento en las respuestas inmunológicas a la infección o una eliminación de las respuestas a los procesos inflamatorios. En ensayos in vitro puede emplearse opcionalmente para ayudar a identificar los intervalos de dosificación óptimos. La dosis precisa que será empleada en la formulación también dependerá de la ruta de administración, y la seriedad de la enfermedad o trastorno, y será decidida de acuerdo con la evaluación de la persona con práctica y cada circunstancia del paciente. Dosis efectivas pueden extrapolarse de las curvas de dosis-respuesta derivadas de los sistemas de prueba del modelo in vitro o animal. Preferentemente, la composición farmacéutica se administra directamente o en combinación con un adyuvante . El término "administrado" significa administración de una dosis terapéuticamente efectiva de la composición farmacéutica antes mencionada que comprende los conjugados y sales y solvatos de estos como se define en la presente para un individuo. "Cantidad terapéuticamente efectiva significa una dosis que produce los efectos para la cual se administra. La dosis exacta dependerá del propósito del tratamiento, y será comprobable por una persona con experiencia en la técnica usando técnicas conocidas . Como se sabe en la técnica y descrito anteriormente, los ajustes para el suministro sistémico contra el suministro localizado, edad, peso corporal, salud general, sexo, dieta, tiempo de administración, interacción de fármaco y severidad del padecimiento puede ser necesario, y será comprobable con experimentación de rutina por las personas con experiencia en la técnica. Aun en otra modalidad, la presente invención se relaciona con métodos para tratar individuos que padecen de enfermedades infecciosas, choque séptico, tumores, enfermedades autoinmunes, alergias, o procesos inflamatorios crónicos o agudos que comprenden el paso de administrar al individuo una cantidad efectiva de un compuesto farmacéutico que comprende un conjugado o sales o solvatos de estos como el ingrediente activo, y, opcionalmente, un vehículo farmacéuticamente aceptable. En particular, el método es útil para prevenir o tratar cáncer y/o tumores tal como, melanoma, cáncer de próstata, pecho, colorectal, estómago, garganta, y cuello, pancreático, cervical, ovárico, óseo, leucemia y pulmón; infecciones virales, tal como hepatitis B, hepatitis C, virus de inmunodeficiencia humana, helicobacter pylori, virus herpes, etc.; infecciones bacterianas, tal como tuberculosis, lepra y listeriosis, e infecciones parasitarias, como malaria. Además, la composición farmacéutica puede contener compuestos adicionales, p.ej., compuestos parecidos a una o más moléculas anti-inflamatorias , moléculas anti-angiogénicas , moléculas citotóxicas, moléculas inmunomodulador , preferentemente quimoquinas, citoquinas, ligando CD40, moléculas co-estimuladoras o anticuerpos o mezclas de estos. Además, la composición farmacéutica descrita en la presente puede caracterizarse en que los componentes de la composición farmacéutica están asociados y/o incorporados y/o recubiertos con una partícula física, preferentemente micropartícula, nanopartícula, liposoma, ISCOM, copolímero y/o partícula biológica, preferentemente fantasmas bacterianos . Los métodos son aplicables tanto a la terapia humana como a las aplicaciones veterinarias. Los compuestos descritos en la presente que tienen la actividad terapéutica deseada pueden administrarse en un vehículo fisiológicamente aceptable a un paciente, como se describe en la presente. Dependiendo de la manera de introducción, los compuestos pueden formularse en una variedad de formas como se revela enseguida. La concentración del compuestos terapéuticamente activo en la formulación puede variar desde aproximadamente 0.1-100 % en peso. Los reactivos pueden administrarse solos o en combinación con otros tratamientos . La administración de la composición farmacéutica puede hacerse en una variedad de formas que se revelan anteriormente, incluyendo, pero no limitándose a, oral, subcutánea, transcutánea, (vacunación tópica) , intradérmica, intravenosa, intra-arterial , intranodal, intramedular, intratecal, intraventricular, intranasal, conjuntiva, intrabronquial , transdérmica, intrarectal, intraperitoneal , intramuscular, intrapulmonar, vaginal, rectal, o intraocularmente . En algunos casos, por ejemplo, en el tratamiento de heridas e inflamación, el agente farmacéuticamente efectivo puede aplicarse directamente como una solución de pulverización seca. El médico y los factores clínicos determinarán el régimen de dosis. Una dosis típica puede estar, por ejemplo, en el intervalo de 0.001 a 1000 pg; sin embargo, dosis por debajo o arriba de este intervalo de ej emplificación será concebido, especialmente considerando loa factores mencionados anteriormente. Sin embargo, el uso de los conjugados que tienen múltiples unidades de polialquileno permite reducir la cantidad requerida de los conjugados por dosis para obtener la inmunomodulación efectiva o adyunvaticidad en individuos. En particular, usando conjugados que tienen múltiples unidades de polialquileno, como la molécula mostrada en la Figura 10, BPPcysGlyc4armPEG, es posible reducir la dosis de los adyuvantes significativamente cuando se compara con el BPPcysPEG. Aun en otro aspecto, la presente invención se relaciona con el uso de/1 los conjugado (s) o sales o solvatos de estos como se define en la presente en una preparación farmacéutica para controlar la fertilidad en poblaciones de humanos o animales . Finalmente, la presente invención se relaciona con kits que comprenden los conjugados de acuerdo con la presente invención o sales o solvatos de estos. En particular, el kit es útil para la preparación de composiciones farmacéuticas. Opcionalmente el kit contiene instrucciones para preparar la composición farmacéutica.

En una modalidad preferida de esta, el kit contiene los conjugados de acuerdo con la presente invención o sales o solvatos de estos como un adyuvante y un antígeno que comprende una estructura de antígeno y, opcionalmente, un vehículo farmacéuticamente aceptable, diluyente, conservador, adyuvantes en lugar de los conjugados de acuerdo con la presente invención, inmunomoduladores o excipientes e instrucciones para preparar una vacuna. Estas y otras modalidades se revelan y abarcan por las reivindicaciones y la descripción y los ejemplos de la presente invención. Otra literatura que se relaciona con cualquiera de los métodos, usos y compuestos que serán empleados de acuerdo con la presente invención puede recuperarse de las librerías públicas, usando por ejemplo dispositivos electrónicos. Por ejemplo, la base de datos pública "Medline" puede utilizarse las que están disponibles en el internet, por ejemplo bajo http; //www.ncbi .nlm.nih.gov/PubMed/medline .html . Otras bases de datos y direcciones, tal como htt ; / /www?ncbi .nlm. nih . gov/ , http ; / /www . infobiogen. fr/ , http : / /www. tigr . org/ , se conocen por personas con experiencia en la técnica y pueden también obtenerse usando, p.ej., http ; / /www. google .de . Una revisión de la información de patente en biotecnología y un examen de las fuentes relevantes de patente información útil para la búsqueda retrospectiva y para el actual conocimiento se da en Berks, TIBTECH 12 (1994) , 352-364.

Breve Descripción de las Figuras Figuras 1A-1C: muestran los resultados para los estudios in vitro usando las células dendríticas primarias. Los cultivos de células dendríticas derivados principalmente de médula ósea se obtuvieron del ratón BALB/c por maduración in vitro de los precursores usando el recombinante GM-CSF (5xl04 U/ml) . Las células dendríticas maduras se estimularon con 10 ng/ml de lipopolisacáridos (LPS) de E. coli o 50 y 100 ng/ml de BPPcysGlyc4armPEG y BPPcysAda, respectivamente. Después, las células se marcaron dobles con anticuerpos específicos para CDllc (marcador de la célula dendrítica) en combinación con anticuerpos anti-CD40, anti-CD54, anti-CD80, anti-CD86, anti-MHC clase I, o anti-MHC clase II. La expresión de CD40, CD80, CD54, CD86, anti-MHC clase I, y MHC clase II en las células que dependen de CD-llc se analizaron por citometría de flujo. Figuras 2A-2C: ilustran las respuestas celulares de las células del bazo estimuladas nuevamente usando diferentes concentraciones de BPPcysGlyc4armPEG o BPPcysAda como adyuvantes. Las respuestas proliferantes de la célula T de las células del bazo del ratón Balb/c se estimularon de nuevo in vitro durante 4 días en presencia de diferentes concentraciones hasta 40 pg/ml de BPPcysGlyc4armPEG o hasta 20 yg/ml de BPPcysAda. Los resultados se contaron por minuto 2A y 2C y los índices de estimulación (muestras cpm/cpm en células no estimuladas de control) (2B) . Figuras 3A-3C: demuestran las respuestas celulares estimuladas que siguen a la vacunación usando diferentes concentraciones de BPPcysGlyc4armPEG como adyuvante. Las respuestas proliferantes de las células T ß-galactosidasa específica de las células del bazo del ratón inmunizado por las rutas i.p. o i.n. ya sea con solo ß-galactosidasa (30 yg/dosis) o ß-galactosidasa mezclada con diferentes dosis de BPPcysGlyc4armPEG o BPPcysPEG en los días, 0, 14 y 28. En el día 38 posterior a la inmunización primaria se sacrificaron y se volvieron a estimular las células del bazo in vitro durante 4 días en presencia de diferentes concentraciones de ß-galactosidasa soluble. Los resultados se expresaron como incorporación de la timidina y como índices de estimulación (muestras cpm/cpm en células no estimuladas de control) 3A después de la administración i.n. o como incorporación de timidina y como índices de estimulación muestras cpm/ cpm en células no estimuladas de control) 3B después de la administración parenteral . 3C muestra el' índice de estimulación para BPPcysAda. Figura 4: muestra la dependencia de la concentración en la activación macrófaga determinada por medio de la producción de monóxido de nitrógeno (determinado espectroscópicamente a OD 550 nm) . Liberación de NO de los macrofagos estimulados nuevamente usando diferentes concentraciones (diluciones en serie) del activador de macrofagos BPPcysGlyc4armPEG como adyuvante. Se muestra como control positivo, la liberación de NO de macrofagos en respuesta a las diluciones en serie de Malp-2 y en respuesta a las moléculas de 4armPEG (control negativo) . Figuras 5A-5D: ilustran las respuestas humorales que siguen a la vacunación usando BPPcysGlyc4armPEG y BPPcysAda, respectivamente, como adyuvante. Los ratones se inmunizaron por ruta intranasal (i.n.) y subcutánea, transcutánea (vacunación tópica) (s.c.) ya sea con ß-galactosidasa (30 g sola o ß-galactosidasa mezclada con BPPcysGlyc4armPEG o BPPcysAda los días 0, 14, y 28. En el día 38 posterior a la inmunización, se recolectaron las muestras de suero y se determinó la titulación de los anticuerpos ß-galactosidasa específicos por ELISA. Se usó como un control, un grupo en donde los animales se inmunizaron con solo ß-galactosidasa 5A. En 5B y 5C la cinética del suero específico del antígeno IgG se muestra en la vacunación intranasal 5B y la vacunación parenteral 5C, respectivamente. 5D demuestra que la vacunación i.n. ó s.c. usando los resultados de BPPcysAda en una expresión mejorada del IgG específico del antígeno. Las diferencias fueron significantes estadísticamente con p<0.05 (*) con respecto a los ratones que recibieron solo el antígeno. Se muestra una salida representativa de cuatro experimentos independientes. La SEM se indica por líneas verticales. Figuras 6A-6B: muestran la expresión IgA secretoria ß-gal-específica en pulmón y lavados vaginales del ratón inmunizado i.n. Las diferencias fueron estadísticamente significantes con p<0.05 (*) con respecto a los ratones que recibieron solo el antígeno. Se muestra una salida representativa de cuatro experimentos independientes . La SEM se indica por líneas verticales. Figuras 7A-7D: muestran los perfiles Th en ratones vacunados después de la nueva estimulación in vitro. Las citoquinas secretadas por las células del bazo nuevamente estimuladas in vitro se determinaron en ratones inmunizados por CBA. Los resultados se expresaron como relaciones de concentración de citosina (IL-10 la citosina detectada más prominente 7B y 7D y el índice de estimulación 7A y 7C . Figuras 8A-8B: proporcionan el análisis de isótopos IgG beta-gal en sueros de ratones inmunizados. Los isótopos IgG específicos anti-beta-Gal de los grupos inmunizados con PBS, (control) beta-Gal + ya sea BPPcysGlyc4armPEG o BPPcysPEG (Fig. 8A) o BPPcysAda o Ada sola (Fig. 8B) , o solo beta-Gal de ratones inmunizados por la ruta i.n. o s.c. se determinaron por ELISA. Los resultados se expresaron y el punto final de la titulación. Las titulaciones IgG representan la media de cinco animales por grupo experimental. Las diferencias fueron estadísticamente significantes con p<0.05 (*) con respecto a los ratones que recibieron solo el antígeno. Se muestra una salida representativa de cuatro experimentos independientes. La SEM se indica por líneas verticales. Figuras 9A-9B: proveen el perfil de las citosina (IFNy, IL-4 e IL-2) secretado por las células del bazo nuevamente estimuladas in vitro de los ratones vacunados ya sea con BPPcysGlyc4armPEG o BPPcysMPEG 9A, o BPPcysAda 9B y el modelo del antígeno ß-gal (30 pg) solo. Los resultados se expresaron como unidades que forman manchas con sin fondo en los grupos inmunizados con respecto a los ratones de control no inmunizados. Las diferencias fueron estadísticamente significativas a p<0.05 (*) con respecto a los ratones que recibieron solo el antígeno. Figura 10: proporciona ejemplos específicos de las unidades de polialquileno usables como partes del radical del conjugado de acuerdo con la presente invenc i ón . Figura 11: 11 muestra un conjugado particularmente preferido de acuerdo con la presente invención, BPPcysGlyc4armPEG . Figura 12: demuestra que el BPPcysGlyc4armPEG es estable después del almacenamiento durante 2 meses a temperatura ambiente. Figura 13: es un esquema de la síntesis del BPPcysGlyc4armPEG.

Descripción Detallada de la Invención Ejemplos Síntesis de BPPCysAda Se disolvió 0.1 mmol (~ 27 mg) de 3'-amino-3'-desoxiadenosina (3 '-Ada) en 10 mi de D SO al excluir la humedad. Después de esto se incubó la 3 ' -Ada durante 30 minutos con 0.125 mmol de BPPCysGlyc (112 mg) , 0.12 mmol de diisopropilcarbodiimida (DIC, 18.6 µ?) y 0.12 mi 1-hidroxibenzoltriazol (HOBt , 16.2 mg) . Después de la incubación toda la noche el compuesto se secó a vacío, el resto se mezcló con metanol y dejó un resto de un polvo sólido blanco amorfo (67 mg, rendimiento 59%). 47 mg de este compuesto se añadió con 1 mi de piperidina al 20% (en dimetilformamida (DMF) ) y se secó a vacío después de 15 minutos. La sustancia apenas perceptible se limpio por cromatografía en columna (SC) que se llenó con gel de sílice (eluyente: diclorometano y metanol con una relación de 9:1). Después de estos pasos, se obtuvieron 22 mg (rendimiento del 60%) de un polvo sólido blanco amorfo. La estructura química se analizó por """H-RMN y análisis espectral de masas. Existen dos posibilidades para optimizar la solubilidad y estabilidad del BPPCysAda: a) la fosforilación selectiva del grupo 5 ' -OH ó b) pegilación de la posición 6 de la estructura de anillo de la adenina .

Síntesis de BPPcysGlyc4armPEG Se disolvieron 433 mg (0.48 mmol) del compuesto 2 (véase la figura 13) en 10 mi de diclorometano anhidro (DCM) . Después de la incubación, se adicionaron a la solución 80 MI de diisopropilcarbodiimia (0.52 mmol) 3 y 52 mg de hidroxibenzotriazol anhidro (0.38 mmol) 4. Después de 15 minutos, la solución se completó con 216 mg de 4armPEG (0.17 mmol) de Celares 1 y 2.5 mi de dimetilformamida anhidra (DMF) . Después de mezclar la solución toda la noche bajo exclusión de humedad, la prueba se concentró vía un evaporador rotatorio. El residuo se disolvió en una pequeña cantidad de DCM (aproximadamente 100 µ?) y se purificó por cromatografía en columna con gel de sílice y DCM/metanol con una relación de 95:5/90:10. El compuesto protegido fMOC 6 se disolvió en 3 mi de DMF que se completó con piperidina (20%) y después de 10 minutos se concentró. El compuesto 6 se purificó por cromatografía en columna con gel de sílice y DCM/metanol en una relación de 95:5 y 85:15. Posteriormente, 200 mg (60% del compuesto 1) compuesto purificado 6 se caracterizó por análisis espectral de RMN y EM. 1. Estimulación in Vitro de las células dendríticas de murino derivados principalmente de la médula ósea con BPPcysGlyc4armPEG ó BPPcysAda Protocolo experimental: se obtuvieron los cultivos de células dendríticas derivadas principalmente de médula ósea de ratones BALB/c después de la maduración in Vitro de los precursores en presencia del recombinante GM-SCF (5xl04 U/ml) , de acuerdo con los protocolos establecidos. Las células dendríticas se estimularon con 10 ng/ml de lipopolisacárido de E. coli (LPS) ó 5 ng/ml de BPPcysGLYc4armPEG, después se analizaron células con estimulación de 12, 24 y/o 48 h por citometría de flujo para evaluar la expresión de los marcadores superficiales que son relevantes por su capacidad de presentación de antígeno. A fin de identificar los compuestos que pueden tener potencial como adyuvantes para aplicaciones in vivo en el campo de la vacunación, se estableció un primer tamizado in Vitro se basa en el uso de cultivos primarios de células dendríticas derivadas de médula ósea. Se seleccionaron células dendríticas ya que representan las células que presentan el antígeno más eficiente y juegan un papel importante en las respuestas inmunes primarias. De hecho, son las únicas células de este tipo capaces de activar las células T restantes que inician las respuestas inmunes primarias in vivo. De esta forma, los cultivos celulares dendríticos se trataron con los radicales probados o LPS, que se usaron como un control positivo. Se tomaron con diferentes intervalos de tiempo, se coloreó con anticuerpos específicos etiquetados fluorescentes por marcadores celulares críticos para el antígeno que presenta capacidades de células dendríticas, y se analizó por citometría de flujo. Los resultados obtenidos (Fig. 1A-1C) demostraron que en contraste con el control positivo, la expresión de CD54, y las moléculas de estimulación complementarias CD86 y CD80 se regularon en células dendríticas BPPcysGlyc4armPEG . Por otra parte, el efecto en la expresión del CD40 fue marginal, si hay alguno. Las moléculas de estimulación complementarias proporcionaron señales que, además de la presentación de los epítopes procesados por las moléculas de MHC clase II, son esenciales para la activación eficiente de las células T. Se ha reportado previamente que la adyunvaticidad de los adyuvantes mucosos bien establecidos, como la toxina del cólera, involucra la regulación selectiva de la expresión de las moléculas estimuladoras complementarias. Para probar la capacidad estimulante del BPPCysAda en la maduración y activación del DC derivado de médula ósea, los DC's inmaduros se estimularon in Vi tro con BPPCysAda, Los marcadores superficiales en DC dependientes de CDllc+ se investigaron por análisis FACS después de 16 o 40 h de tratamiento previo. Como se muestra en la Fig. IB la incubación previa con 50 ng/ml de BPPCysAda originó una expresión mejorada de las moléculas MHC clase I y II. La expresión de la molécula estimulante complementaria CD86 también se reguló después de la estimulación con BPPCysAda. La DC estimulada con BPPCysAda también mostró una expresión mejorada de la molécula de adhesión ICAM-1 (CD54) . No se observaron diferencias en la expresión de los marcadores superficiales cuando la concentración de MALP-2 mejoró a 10 ng/ml (no se muestra) . Los resultados obtenidos demuestran que la incubación previa en DC inmaduro con BPPCysAda originó la activación celular con expresión mejorada de MHC clase I y II, DC86 y DC54. 2. BPPCysGlyc4armPEG o BPPCysAda estimulan in Vitro las respuestas proliferantes mediadas por células T eficientes Protocolo experimental: Se extrajeron bazos y se combinaron para' el análisis de las respuestas inmunes celulares. Las células crecieron en RPMI 1640 complementadas con suero -de ternero fetal al 10%, 100 U/ml de penicilina, 50 µg/ml de estreptomicina, 5xl0~5 M de 2 -mercaptoetanol y 1 mM de L-glutamina (GIBCO BRL, Karlsruhe, Alemania) y se mantuvo a 37 SC en una atmósfera de C02 humidificada al 5%. Las suspensiones del bazo y nodulos linfáticos se ajustaron a 5xl06 células/ml en medio completo, se sembraron las células con 100 µ? por pozo en una placa de microtitulación de 96 pozos con fondo plano (Nunc) y se incubaron las placas por 4 días en presencia de diferentes concentraciones de ß-Gal soluble. Cada concentración se probó por cuadruplicado. Durante las 18 h finales del cultivo, se adicionó lpCi de [3H]timidina (Amersham Internacional, Freiburg, Alemania) a cada pozo. Después se recolectaron las células en filtros de papel (Filtermat A; Wallac, Freiburg, Alemania) al usar un recolector de células (Inotech, Wohlen, Suiza) , y la cantidad de [3H]timidina incorporada en el ADN de las células proliferantes se determinó por un contador de escintilación beta (Wallac 1450, Micro-Trilux) . Los resultados se expresaron como la media aritmética de la [3H]timidina tomada en cpm. Las respuestas inmunes mediadas por las células T se investigaron 48 h al medir la proliferación de las células recuperadas de los bazos después de la nueva estimulación con BPPcysGlyc4armPEG ó BPPcysAda. Se eligieron las células del bazo estimuladas con 4armPEG o Ada como el control negativo. La administración de BPPcysGlyc4armPEG ó BPPcysAda activaron la inducción de una respuesta proliferante eficiente con niveles sistémicos (células del bazo) con alto índice de estimulación (Fig. 2A-2C) . 3. BPPCysGlyc4armPEG o BPPCysAda estimulan las respuestas proliferantes mediadas por células T eficientes cuando se administran complementariamente con antigenos solubles Protocolo experimental: Se les extrajeron los bazos de ratones hembra BALB/c (H-2d, Harían Winkelmann) de 6 semanas de edad y se combinaron para el análisis de las respuestas inmunes celulares. Las células crecieron en RP I 1640 complementadas con suero de ternero fetal al 10%, 100 U/ml de penicilina, 50 yg/ml de estreptomicina, 5xl0~5 M de 2-mercaptoetanol y 1 mM de L-glutamina (GIBCO BRL, Karlsruhe, Alemania) y se mantuvo a 37 -C en una atmósfera de C02 humidificada al 5%. Las suspensiones del bazo y nodulos linfáticos se ajustaron a 5xl06 células/ml en medio completo, se sembraron las células con 100 µ? por pozo en una placa de microtitulación de 96 pozos con fondo plano (Nunc) y se incubaron las placas por 4 días en presencia de diferentes concentraciones de ß-Gal soluble. Cada concentración se probó por cuadruplicado. Durante las 18 h finales del cultivo, se adicionó lyCi de [3H]timidina (Amersham Internacional, Freiburg, Alemania) a cada pozo. Después se recolectaron las células en filtros de papel (Filtermat A; allac, Freiburg, Alemania) al usar un recolector de células (Inotech, ohlen, Suiza), y la cantidad de [3H]timidina incorporada en el ADN de las células proliferantes se determinó por un contador de escintilación beta (Wallac 1450, Micro-Trilux) . Los resultados se expresaron como la media aritmética de la [3H]timidina tomada en cpm. Las respuestas inmunes mediadas por las células T se investigaron en el día 38 h al medir la proliferación de las células recuperadas de los bazos después de la nueva estimulación in vitro con ß-galactosidasa mezclada con diferentes cantidades de BPPcysGlyc4armPEG ó BPPcysAda . Treinta y ocho días después de la vacunación, las células del bazo se purificaron, se estimularon de nuevo in Vitro en presencia de 20 pg/ml de ß-galactosidasa y su capacidad proliferante se estimó al medir la incorporación de [3H]timidina en su ADN usando un contador de escintilación beta. Las células de bazo de los animales inmunizados por inyección s.c. de ß-gal sola, que se eligen como el control positivo, exhibió una respuesta proliferante significativa comparada con el grupo no inmunizado (Fig. 3A) . Otro incremento en la proliferación se notó en las células del bazo de los animales administrados complementariamente con BPPcysGlyc4armPEG y antígeno (p < 0.05). De notarse, se observó la respuesta proliferante de células T más fuerte con las células del bazo de ratones inmunizados con BPPcysGlyc4armPEG y ß-gal por la ruta i.n. y/o s.c. Mientras la administración i.n. de ß-gal sola falló al inducir la proliferación celular detectable, la administración complementaria de la BPPcysGlyc4armPEG disparó la inducción de una respuesta proliferante eficiente con niveles sistémicos (células del bazo) , mostrado por el incremento del índice de estimulación (Fig. 3B) . El uso del nuevo adyuvante mucoso BPPcysGlyc4armPEG con dosis de 0.54 nmol ó 2.71 nmol, respectivamente, originó un incremento estadísticamente significativo (p < 0.05) de la proliferación de células T. Además, como se demostró en la Fig. 3a, BPPcysGlyc4armPEG con dosis de 10 veces por debajo de las dosis de BPPcysGlycPEG origina los mismos niveles de estimulación. 4. Prueba de liberación de monoxido de nitrógeno En resumen los macrófagos peritoneales de ratones C3H/HeJ se usaron como la fuente de macrófagos. Se cultivaron en placas de 96 pozos de microtitulación y se estimuló simultáneamente con rlFN-? y una dilución serial del activador macrófago. En la medida en que sea necesario (es decir, R-Malp-2 /estándar) , los activadores macrófagos se disolvieron en octilglucósido 25 nM en el primer paso de dilución y después se diluyó más con el medio. Después del tiempo de incubación de 45-48 horas, se redujo el nitrato con nitrato reductasa y se determinó el monoxido de nitrógeno con la sustancia de inicio, como la suma de nitrato y nitrito, usando reactivo de Griess. 1 unidad (U) /mi se define como la dilución en la cual se realiza la estimulación máxima. Los resultados de la prueba de activación del macrófago se muestran en la Figura 4. Puede verse de la figura que el BPPcysGlyc4armPEG, es decir, un activador de macrófago de acuerdo con esta invención, tiene un potencial marcadamente más alto para activar macrófagos que tiene el Malp-2 conocido. La Figura 4 muestra que el BPPcysGlyc4armPEG logra fácilmente el mismo grado de activación de macrófagos con una concentración que es aproximadamente 10 a 100 veces menor que el de Malp-2. La Figura 4 además muestra que este entendimiento y activación inesperada en el caso del BPPcysGlyc4armPEG no es notablemente mejorado al adicionar un solubilizante , en este caso el octilglucósido , mientras se requiere una adición para el efecto del Malp-2 se muestre óptimamente. El conjugado de BPPcysGlyc4armPEG novedoso de acuerdo con esta invención, por lo tanto no requiere ningúna solubilización adicional y posiblemente la desventaja fisiológica por medio de un solvente orgánico o detergente. Otra ventaja del BPPcysGlyc4armPEG comparado con el Malp-2 es mayor estabilidad, que puede atribuirse al hecho de la protección del 4armPEG.

. Administración complementaria intranasal e intraperitoneal de BPPcysGlyc armPEG o BPPcysAda con un antigeno soluble estimula las respuestas humorales sistémicos eficientes Protocolo experimental: Se adquirieron ratones BALB/c (H-2d) hembras de seis-ocho semanas de edad de Harían Winkelmann GMBH (Corchen, Alemania) y se trataron de acuerdo con las guías locales y de la Comunidad Europea. Grupos de 5 ratones cada uno se inmunizó el día 1, 14 y 28 con 50yg de ß-gal (Boerhinger, Mannheim, Alemania), solo o con 0.54 o 2.71 nmol de BPPcysGlyc4armPEG sintético, 4 nmol BPPcysPEG o BPPcysAda (10 yg, 10.8 nmol) o Ada solo (10 yg) . Por inmunización intranasal (i.n.), se aplicaron lOyl a cada nariz, mientras para la inyección s.c. ß-gal con o sin BPPcysGlyc4armPEG se volvió a suspender en 250 yl de PBS . Se recolectaron las muestras de suero a diferentes puntos del tiempo (día 0, 13, 27 y 38) después de la inmunización y se almacenaron a -202C previo a la determinación de los anticuerpos ß-gas específicos. Se recubrieron las placas de prueba de 96 pozos Nunc-Immuno MaxiSorp (Nurc, Roskilde, Dinamarca) con 100 yl de ß-gal (Boeringer, Mannheim, Alemania) con 5 yg/ml en tampón de carbonato 0.005 M (pH 9.6) por pozo. Se adicionaron series de diluciones al doble de los sueros o lavados en PBS con BSA al 1% y Tween20 (100 yl/pozo) , y las placas se incubaron durante 2 h a 37 SC. Después de lavar, se adicionó IgG de cabra anti-ratón ?-cadena específica biotinilada (Sigma Chemie, Deisenhofen, Alemania), y se incubaron las placas durante 1 h adicional a 372C. Después de cuatro lavadas, se adicionaron 100 yl de esteptavidina conjugada con peroxidasa (Pharmingen) a las células y las placas se incubaron a 372C durante 30 minutos. Después de cuatro lavadas, las reacciones se desarrollaron con ABTS en tampón de citrato-fosfato 0.1 M (pH 4.35) que contiene H202 al 0.01%. Se expresaron los tituladotes de punto final como el log2 reciproco de la última dilución, esto dio una densidad óptica a 405 nm de 0.1 unidades por arriba de los valores de los controles negativos después de 15 a 30 minutos de incubación.

Considerando los resultados alentadores obtenidos en los estudios preliminares, se decidió analizar en detalle las respuestas inmunes obtenidas al estimular con BPPcysGlyc4armPEG como adyuvante por las dos rutas más efectivas, es decir, s.c. e i.n., y para compararla con un adyuvante mucoso bien establecido. Asi, se evaluó la' capacidad del BPPcysGlyc4armPEG para estimular las respuestas inmunes humorales eficientes, al determinar las titulaciones del suero de los anticuerpos ß-gal-especificos en ratones vacunados. Como se muestra en las Figs . 5A-5D, la administración i.n. de la ß-gal únicamente (30 pg/dosis) originó la inducción de titulaciones del anticuerpo muy bajas, aun después del segundo incremento. En contraste, en presencia de BPPcysGlyc4armPEG ó BPPcysAda, la administración i.n. de la ß-gal indujeron los títulos muy altos de IgG específicos en todos los ratones listos después de una dosis (Fig. 5 A y Fig. B) . La cinética y la eficacia total de las respuestas de anticuerpos obtenidos usando BPPcysGlyc4armPEG fue similar a los observados al administrar ß-gal por la ruta s . c . También se observó una adyunvaticidad significativa cuando se administró BPPcysGlyc4armPEG o BPPcysAda por la ruta s.c. Específicamente la inyección complementaria de BPPcysGlyc4armPEG o BPPcysAda origina los títulos de IgG ß-gal-específieos en comparación con los animales inmunizados solo con ß-gal (Fig. 5C y Fig. 5D) . Esta diferencia ya estuvo presente después de la primera inmunización y se mantuvo con las inyecciones de incremento. Se detectaron títulos de anticuerpo similares en el día 38 en animales inmunizados ya sea por la ruta i.n. o la s.c. sin embargo, las respuestas primarias que siguen a la administración complementaria BPPcysGlyc4armPEG fueron más pronunciadas con la inmunización i.n. 6. Administración complementaria intranasal de BPPcysGlyc4armPEG o BPPcysAda con un antígeno soluble estimula la eficiencia de las respuestas del anticuerpo mucoso Protocolo experimental: El día 38, se sacrificaron los ratones y se realizó el muestreo final. Los lavados pulmonares y vaginales se obtuvieron al inundar los órganos con 1 mi de PBS complementada con EDTA 50 mM, BSA al 0.1% y PMSF 10 mM. Los lavados después se centrifugaron para remover los restos (10 min a 3000 x g) , y los fluidos sobrenadantes se almacenaron a -209C. Para determinar la concentración del IgA total presente en los lavados pulmonares y vaginales, se incubaron diluciones en serie de las muestras correspondientes en placas de microtitulación que se recubrieron previamente con IgA de cabra anti-ratón (Sigma Chemie) , que captura anticuerpos (100 µ/????) . Diluciones en serie del IgA de ratón purificadas (Sigman Chemie) se usaron para generar una curva estándar. Para investigar la capacidad del BPPcysGly4armPEG o BPPcysAda para estimular las respuestas mucosas contra los antígenos administrados complementariamente en la ruta i.n. se analizó la producción del IgA ß-gal-espec fico en lavados pulmonares y vaginales (Fig. 6A) o para BPPcysAda (Fig. 6B) de animales inmunizados. Se usó como control BPPcysMPEG . Este compuesto comprende la conjugación de BPPcys con un tipo PEG que tiene un peso molecular mayor (peso molecular promedio 5000 Da) en lugar del PEG comúnmente usado (peso molecular promedio 2000 Da) . Mientras la inmunización i.n. con ß-gal sola falló al estimular la producción de niveles detectables de IgA ß-gal especifico en los lavados pulmonares, se detectó un incremento significativo en los niveles de IgA antígeno especifico en animales inmunizados con ß-gal y BPPcysGly4armPEG (fig. 6A) . La administración complementaria del BPPcysGly4armPEG originó la estimulación de la producción eficiente de IgA también en sitios de la mucosa distante, que se demostró por la presencia de concentraciones significativas de la IgA ß-gal específica en los lavados vaginales (Fig. 6A) . No se observaron diferencias estadísticamente significativas en los niveles de los anticuerpos ß-gal-específieos mocosos entre animales inmunizados con diferentes dosis de BPPcysGly4armPEG . Los mismos resultados se han obtenido usando BPPcysAda (10 g), véase la Figura 6B. En ratones BALB/c la administración intranasal de las diferentes dosis de BPPcysAda más ß-Gal provocaron mayores niveles significativos de las respuestas IgA ß-Gal específico en Lavados Broncoalveolares (BAL) y lavados vaginales (VL) así como también de las respuestas igG ß-Gal-específico en los sueros que no se administró intranasal con OVA solo. Adicionalmente, la administración intranasal de ß-Gal con BPPcysAda mejora significativamente los niveles de IgGl e IgG2 ß-Gal u Ova-específico (no se muestra). Además, se indujeron niveles significativos tanto de IL-2 como IL-4 en todos los grupo administrados complementariamente con BPPcysAda (Fig. 6B) . 7. Análisis de los patrones de la célula T auxiliar estimulada al usar BPPcysGly4armPEG Protocolo experimental: Isotipo ELISA: Se recubrieron placas MaxiSorp Nunc-inmuno de 96 pozos (Nunc, Roskilde, Dinamarca) con 100 µ? de ß-gal (Boehringer, Mannheim, Alemania) con 5 g/ml en tampón de carbonato 0.05 M (pH 8.2) por pozo. Se adicionaron (100 µ?/????) de diluciones en serie al doble de los sueros y los lavados en PBS con BSA 1% y Tween 0.05% y las placas se incubaron durante 2 h a 378C. Después del lavado, se adicionaron IgGl o IgG2a de rata anti-ratón conjugada con biotina (Pharmingen, Hamburgo, Alemania) para determinar las subclases IgG. Las placas se incubaron durante 1 h adicional a 37 BC. Después de cuatro lavados, se adicionaron 100 µ? de estreptavidina conjugada con peroxidasa (Pharmigen) a las células y las placas se incubaron a 37 aC durante 30 minutos. Después de cuatro lavados, las reacciones se desarrollaron con ABTS en tampón de citrato-fosfato 0.1 M (pH 4.35) que contiene H202 0.01%. Para determinar la concentración de las subclases IgG en el suero, curvas estándar se obtuvieron al recubrir los pozos con un IgG de cabra anti-ratón isotipo específico, y después al incubar con anticuerpo IgGl ó IgG2a de ratón purificados (Dianota, Hamburgo, Alemania) . El patrón de las diferentes subclases de los isotipos IgG antígeno específico ß-gal presentes en los sueros de los ratones vacunados se muestra en las Figs . 8A-8B. La Fig. 8A muestra los resultados para la administración intranasal de ß-Gal solo ß-Gal y ya sea BPPcysMPEG ó BPPcysGlyc4armPEG . El protocolo de vacunación fue idéntico al protocolo descrito en el Ejemplo 2. Que puede ser evaluado en las Figs . 8A-8B, la cantidad de anticuerpos de antígeno específico del subtipo igGl y el isotipo IgG2a se incrementó fuertemente después de la administración intranasal del antígeno usando BPPcysGlyc4armPEG o BPPcysAda como adyuvante mocoso. Además, también en caso de administración sistémica, en la presente administración subcutánea, la expresión del isotipo IgGl así como también del isotipo IgG2a se incrementó fuertemente para BPPcysAda, véase la Fig. 8B. Los datos representan el título promedio de un grupo de 5 animales. Así, el uso de c-diAMP provoca una fuerte respuesta del anticuerpo de antígeno específico. El disparo puede verse no solo después de la administración nasal sino también después de la administración parenteral .

Inmunoensayo fluorescente con citometría: Los sobrenadantes del cultivo de las células de proliferación se recolectaron el día 2 y 4, y se almacenaron a -702C. Se realizaron determinaciones de IFN-?, IFNa, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10 y IL-12 se desarrollaron por el análisis del inmunoensayo fluorescente con citometría usando el kit comercial de BD, de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se generó una curva estándar para cada citoquina al usar las correspondientes citoquinas de murino recombinantes (Pharmingen) . Las sondas se incubaron a temperatura ambiente durante 2 horas. Las sondas después se analizaron por citometria de flujo como se describe por el protocolo de BD.

Para caracterizar el tipo de respuesta Th estimulada que sigue a la inmunización, se midió el contenido de IFN-?, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12 e IFNOÍ en los sobrenadantes de las células de bazo estimuladas de nuevo in Vitro (Fig. 7). Entre estas citoquinas, se encontró IL-10 que es la más predominante, sugiriendo que se estimuló un patrón de respuesta Th2 dominante. Los niveles de IL-10 fueron significativamente mayores en ratones vacunados con BPPcysGlyc4armPEG por ruta i.n. De hecho, la fuerte estimulación de la secreción de IL-10 es congruente con el papel jugado por esta citoquina en la inhibición de la síntesis de citoquina por las células Thl , el incremento de la proliferación de las células B y la estimulación de la producción de igA. Para la BPPcysAda, la producción de IL-10 se incrementó significativamente en el bazo. Un nivel muy alto de IL-10 se indujo al incrementar la dosis del antígeno ß-Gal, mientras los niveles de IFNy, TNFa, IL-2 e IL-6 mostraron solo un débil incremento en la secreción de citoquina en respuesta al antígeno ß-Gal ene 1 bazo. Para evaluar la respuesta inmune celular epítope específica inducida por la administración complementaria de BPPcysAda vía la ruta intranasal, subcutánea o intramuscular, se analizaron las células T CD8+ que producen IFNy después de estimular los esplenocitos con el MHC el. I restringieron los péptidos ß-Gal (TPHPARIGL) u (OVA) (SINFE L) . El número de células T CD8+ que secretan IFNy disminuyó significativamente en comparación con los grupos inmunizados con ß-Gal o los grupos tratados solo con OVA (no se muestra) . Estos resultados demostraron que la administración complementaria mucosa y parenteral de BPPcysAda induce una respuesta inmune demoni zada Th2 Interesantemente, aunque la menor secreción de Thl-citoquinas IL-2 e lFN-? también fue estimulada en células de ratones vacunados con ß-Gal y BPPcysGlyc4armPEG ó BPPcysAda por la ruta i.n. Estos resultados confirman que, aunque las respuestas del tipo Th2 son frecuentes, el BPPcysGlyc4armPEG ó BPPcysAda también ayudan a estimular las células Thl. 8. Análisis de los patrones de células T auxiliares estimuladas al usar BPPcysGlyc4armPEG ó BPPcysAda como adyuvante por Elispot Protocolo experimental: Se extrajeron los bazos y se combinaron para análisis de las respuestas inmunes celulares. Las células crecieron en RPMI 1640 complementado con suero de ternero fetal al 10%, 100 U/ml de penicilina, 50 pg/ml de estreptomicina, 5xl0~5 M de 2-mercaptoetanol y L-glutamina ImM (GIBCO BRL, Kalsruhe, Alemania) y se mantuvo a 372C en una atmósfera de C02 con 5% de humedad. Las suspensiones de las células del bazo y nodulo linfático se ajustaron a 5xl06 células/ml en medio completo, las células se sembraron con 100 µ? por pozo en una placa de microtitulación de 96 pozos con fondo plano (Nunc) y se incubaron las placas durante 4 días en presencia de diferentes concentraciones de ß-gal. Se recubrió la placa ELISPOT con 100 µ?/???? del anticuerpo de captura purificado con 10 µg/ml en tampón de recubrimiento, se incubó a 4SC durante toda la noche. Después de 6x pasos de lavado, se bloquearon las placas con 200 µ?/???? de RPMl-1640 completo a temperatura ambiente durante 1 hora. Las células activadas se sembraron" con 100 µ? por pozo y se incubaron a 372C, en un incubador humidificado con C02 al 5% durante 24 horas o 48 horas. Después de 5x pasos de lavado con tampón de lavado y lx paso con agua destilada, 100 µ?/???? del anticuerpo de detección biotinilado con una concentración de 1 µ /??1 en el Ensayo del Diluyente se adicionó e incubó a temperatura ambiente durante 2 horas. Después de otros pasos de lavado se adicionaron 100 µ?/???? del AV-HRP con dilución 1/1000 en el Ensayo diluyente y se incubó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Después de otros pasos de lavado se adicionaron 100 µ?/???? de la Solución del Sustrato AEC y se desarrolló a temperatura ambiente durante 20-60 minutos hasta que aparecieron las manchas visibles. Después de los pasos de lavado con (3x) con 200 µ?/???? de agua destilada, las placas se secaron con aire y analizaron al contar las manchas por el lector ELISPOT. Cada concentración se probó por triplicado. Se observó un incremento en el número de células que producen IFNy en animales inmunizado con ß-Gal y BPPcysglyc4armPEG o BPPcysAda (Fig. 9A y 9B) , en respuesta a la nueva estimulación con un péptido que comprende el epitope inmunodominante restringido MHC clase I de la ß-Galactosidasa . Además, fue mostrada una expresión mejorada de las células que producen IL-2 e IL-4 en ratones inmunizados con la ß-Gal y BPPcysglyc4armPEG o BPPcysAda por la ruta i.n. y aun por la s . c . Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (32)

1. Reivindicaciones Habiéndose descrito la invención como antecede se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Conjugado bisaciloxipropilcisteina de conformidad con la fórmula 1 :
2. I R2— OCO— CH— CH2— S— CH2~CH— CO— L— R3 I
3. NH2 caracterizado porque Ri y R2 pueden ser idénticos o diferentes y son radicales acilo ; L es una radical de enlace seleccionado del grupo de NH, 0, S, ó OCO; R3 es un radical conjugado enlazado covalentemente que comprende al menos dos unidades de polialquilenglicol de fórmula :
4. Xi— [(CHF x— 0]n~-(CHR4)- que puede ser idéntico o diferente; donde Xi es hidrógeno o un hidrocarburo que puede contener heteroátomo ( s ) ;
5. R4 es independientemente cualquiera de hidrógeno, OH, grupo alquilo Ci-C6 recto o ramificado, 0R5 ó CO-R6; R5 es independientemente cualquiera de hidrógeno, ó grupo alquilo Ci-C6 recto o ramificado; R6 es independientemente cualquiera de hidrógeno, OH, 0R5 ó NR7R8; R7 y Rg son independientemente cualquiera de hidrógeno o hidrocarburo que puede contener heteroátomo ( s ) y que puede formar un anillo; n es un entero de 1 a 100; x es independientemente un entero de 1 a 10; y es un entero de 0 a 10 2. Conjugado bisaciloxipropilcisteina de conformidad con fórmula 1 :
6. I R2— OCO— CH— CH2— S— CH2~-CH— CO— L— R3 I
7. NH2 caracterizado porque Ri y R2 pueden ser idénticos o diferentes y son radicales acilo; L es un amino-3 ' -desoxiadenosina, amino-3 '- desoxiguanosina, amino-3 ' -desoxiinosina, o amino-3 '- desoxixantina y
8. R3 puede estar ausente o puede estar enlazado covalentemente con el residuo de purina y es al menos una unidad de polialquilenglicol de fórmula: que puede ser idéntico o diferente; donde Xi es hidrógeno o un hidrocarburo que puede contener heteroátomo ( s ) ; R4 es independientemente cualquiera de hidrógeno, OH, grupo alquilo C1-C6 recto o ramificado, 0R5 ó CO-R6; R5 es independientemente cualquiera de hidrógeno, ó grupo alquilo Ci-C6 recto o ramificado; R6 es independientemente cualquiera de hidrógeno, OH, OR5 ó NR7R8; R7 y Re son independientemente cualquiera de hidrógeno o hidrocarburo que puede contener heteroátomo (s) y que puede formar un anillo; n es un entero de 1 a 100; x es independientemente un entero de 1 a 10; y es un entero de 0 a 10 3. Conjugado de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque los residuos Ri y R2, que pueden ser idénticos o diferentes, son un grupo acilo C7-C25 . 4. Conjugado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 3, caracterizado porque el grupo acilo es un alquilo C8-C22 recto, cíclico o ramificado, alquenilo Cs-C22 recto, cíclico o ramificado, o alquinilo C8-C22 recto, cíclico o ramificado que puede estar opcionalmente sustituido. 5. Conjugado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque el conjugado es un conjugado de S- [ 2 , 3 -bis ( aciloxi )-( 2S ) -propil ] -L-cisteinilcarboxi , un conjugado de S- [2 , 3-bis (palmitoiloxi ) -(2S) -propil] -L-cisteinilcarboxi . 6. Conjugado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque el conjugado es un conjugado S- [2 , 3-bis (aciloxi )-( 2R) -propil ] -L-cisteinilcarboxi , preferentemente un conjugado de S-[2,3-bis (palmitoiloxi) - (2S) -propil] -L-cisteinilcarboxi . 7. Conjugado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque en R3 las unidades de polialquilenglicol están compuestas de unidades de etilenglicol , propilenglicol y/o butilenglicol o combinaciones de estos y n es un entero desde 3 a 50. 8. Conjugado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque Xi es independientemente un grupo metoxi o etoxi .
9. 9. Conjugado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque en R3 las unidades de polialquilenglicol son unidades de metoxipolietilenglicol , en donde n es independientemente desde 3 a 10, preferentemente desde 3 a 4.
10. 10. Conjugado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque el radical conjugado es ( S ) -10-amino-6 ,9,13, 16-tetraoxo-N, ' , 8 , 14-tetraquis (3,6,9, 12-tetraoxatridec-l-il ) -5,8,14,17-tetraazahenicosan-1 , 21-diamida .
11. 11. Conjugado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizado porque el conjugado es el conjugado de conformidad con la fórmula (2) :
12. 12. Composición farmacéutica, caracterizada porque comprende un conjugado como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 y un vehículo, diluyente, conservador, adyuvantes, inmunomoduladores o excipientes farmacéuticamente aceptables.
13. 13. Uso de un conjugado como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 para la preparación de una composición farmacéutica para prevenir o tratar enfermedades infecciosas, choque séptico, cáncer, tumores, enfermedades autoinmunes, alergias, o procesos inflamatorios crónicos o agudos .
14. 14. Uso de un conjugado como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 para la preparación de una composición farmacéutica para controlar la fertilidad en poblaciones de humanos o animales.
15. 15. Uso de de conformidad con la reivindicación 13 en donde las enfermedades infecciosas se producen por un agente infeccioso seleccionado entre aquellas que causan la enfermedad humana o animal a nivel del tracto respiratorio, tracto gastrointestinal, tracto genitourinario, sistema osteoarticular , sistema cardiovascular, sistema neuronal, piel y mucosa.
16. 16. Uso de un conjugado como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 para activar o mejorar in vitro y/o in vivo el antígeno que presenta función de células que presentan antígeno para una intervención terapéutica o profiláctica .
17. 17. Uso de un conjugado como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 para estimular los macrófagos y células dendríticas y la producción de anticuerpos, o la preparación de vacunas a base de células como estimulantes inmunes .
18. 18. Uso de un conjugado como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 para marcar células in vi tro, ex vivo y/o in vivo que expresan las moléculas del receptor como Toll, como receptor TLR-1 , TLR-2 y/o TLR-6 para una intervención profiláctica o terapéutica.
19. 19. Uso de un conjugado como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 para mejorar la eficacia de la vacuna al marcar células que expresan el receptor Toll 2 y/o Toll 6.
20. 20. Composición farmacéutica, caracterizada porque comprende un compuesto o conjugado como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 como un adyuvante, un ingrediente farmacéuticamente activo y un vehículo, diluyente, conservador, adyuvantes farmacéuticamente aceptables en lugar de los compuestos o conjugados como se definen en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, inmunomoduladores o excipientes.
21. 21. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 20, caracterizada porque es una vacuna profiláctica y/o terapéutica.
22. 22. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 20 ó 21, caracterizada porque el/los ingrediente ( s ) activos comprenden al menos uno o más antígenos diferentes en forma de péptidos, proteínas, polisacáridos , glicolípidos , o ADN que los codifica y/o sistemas que proveen antígenos tal como virosomas, partículas físicas, preferentemente micropartículas , nanopartículas , liposoma, ISCOM, copolímero y/o partícula biológica, fantasmas bacterianos, partículas similares a virus (VLP) partículas similares a polioma PLP o vacunas atenuadas.
23. 23. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 22, caracterizada porque los antígenos son antígeno(s) de tumor o antígeno(s) derivado (s) de agentes infecciosos para prevenir o tratar enfermedades infecciosas, choque séptico, cáncer, tumores, enfermedades autoinmunes, alergias, o procesos inflamatorios crónicos o agudos.
24. 24. Composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20 a 23, caracterizada porque el adyuvante se mezcla o formula complementariamente con el antígeno.
25. 25. Composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20 a 24, caracterizada porque además comprende una o más moléculas antiinflamatorias, moléculas angiogénicas , moléculas citotóxicas, moléculas inmunomoduladoras , preferentemente quimioquinas , citoquinas, ligando CD40, moléculas estimulantes complementariamente o antibióticos o mezclas de estos .
26. 26. Composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20 a 25, caracterizada porque el/los antígeno (s) y/o conjugado se asocia y/o incorpora y/o recubre con una partícula física, preferentemente micropartículas , nanopartículas , liposoma, ISCOM, copolímero y/o' partícula biológica, fantasmas bacterianos, virosomas, partículas similares a virus (VLP) partículas similares a polioma PLP o vacunas atenuadas.
27. 27. Composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20 a 26, caracterizada porque se provee en una formulación adecuada para la administración mucosa, en particular, para la administración intranasal, intra NALT, oral, intra-rectal , intra-pulmonar, intra-bronquial , intra-tecal, conjuntiva, intra-vaginal o intra-uretra, la administración en los conductos lácteos del pecho o por inhalación.
28. 28. Composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20 a 26, caracterizada porque se provee una formulación adecuada para la administración parenteral, en particular, en administración subcutánea, transcutánea (vacunación tópica) , intravenosa, intradérmica o intramuscular.
29. 29. Composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20 a 28, caracterizada porque es una composición combinada para uso simultáneo, separado o secuencial para prevenir o tratar enfermedades infecciosas, cánceres, tumores, enfermedades autoinmunes, o alergias, o procesos inflamatorios crónicos o agudos o para controlar la fertilidad en poblaciones humanas o animales.
30. 30. it, caracterizado porque comprende un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11.
31. 31. Kit de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque comprende el compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 como un adyuvante y una estructura antígena y, opcionalmente, un vehículo farmacéuticamente aceptable, diluyente, conservador, adyuvantes en lugar de conjugados como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, inmunomoduladores o excipientes.
32. 32. Composición farmacéutica que contiene un conjugado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, caracterizado porque es inmunomodulador para prevenir o tratar enfermedades infecciosas, cánceres, tumores, enfermedades autoinmunes, o alergias, o procesos inflamatorios crónicos o agudos o para controlar la fertilidad en poblaciones humanas o animales.