MX2008004897A - Generacion y perfilado de anticuerpos terapeuticos derivados de hucal gold totalmente humanos especificos para cd38 humano - Google Patents

Abstract

La presente invención proporciona nuevos anticuerpos y métodos para utilizar regiones y anticuerpos recombinantes de unión a antígeno y fragmentos funcionales que contienen tales regiones de unión a antígeno que son específicos para CD38, las cuales juegan un rol integral en varios trastornos o condiciones. Estos métodos toman ventaja de anticuerpos recientemente descubiertos y suprimen propiedades de tales anticuerpos, tal como la capacidad para unirse a CD38 de origen de minipig (cerditos vietnamitas) y la capacidad para inducir, mediante reticulación, la eliminación específica de células que expresan CD38. Estos anticuerpos asícomo los nuevos métodos para utilizar esos anticuerpos pueden utilizarse para tratar, por ejemplo, malignidades hematológicas tales como mieloma múltiple.

Description

GENERACIÓN Y PERFILADO DE ANTICUERPOS TERAPÉUTICOS DERIVADOS DE HuCAL GOLD TOTALMENTE HUMANOS ESPECÍFICOS PARA CD38 HUMANO SUMARIO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a una región de unión a antígeno aislado que es específica para CD38, que comprende (i) una región H-CDR3 representada en la SEQ ID NO: 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 ó 106, o (ii) una región H-CDR3 que tiene al menos un sesenta por ciento de identidad con una región H-CDR3 representada en la SEQ ID NO: 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 ó 106. La presente invención se refiere además a un anticuerpo aislado o fragmento funcional del mismo que es específico para CD38, que comprende (i) una cadena pesada variable representada en la SEQ ID NO: 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 ó 106, o (ii) una cadena pesada variable que tiene al menos un sesenta por ciento de identidad con una cadena pesada variable representada en la SEQ ID NO: 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 ó 106. Adicionalmente, la presente invención se refiere a una región de unión a antígeno aislado que es específica para CD38, que comprende (i) una región L-CDR3 representada en la SEQ ID NO: 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 109 ó 110, o (ii) una región L-CDR3 que tiene al menos un sesenta por ciento de identidad con una región L-CDR3 representada en la SEQ ID NO: 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 109 ó 110. También, la presente invención se refiere a un anticuerpo aislado o fragmento funcional del mismo, que comprende (i) una cadena ligera variable representada en la SEQ ID NO: 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 109 ó 110, o (ii) una cadena ligera variable que tiene al menos un sesenta por ciento de identidad con una cadena ligera variable representada en la SEQ ID NO: 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 109 ó 110. La presente invención se refiere además a una cadena pesada variable de una región de unión a antígeno aislado que se encuentra codificada por (i) una secuencia de ácidos nucleicos que comprende la SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90 ó 91, o (ii) unas secuencias de ácidos nucleicos que se hibridan bajo condiciones de alta rigurosidad a la cadena complementaria de la SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90 ó 91, en donde dicha región de unión a antígeno es específica para CD38. La presente invención se refiere también a una cadena ligera variable de una región de unión a antígeno aislado que se encuentra codificada por (i) una secuencia de ácidos nucleicos que comprende la SEQ ID NO: 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 107 ó 108, o (ii) unas secuencias de ácidos nucleicos que se híbrida bajo condiciones de alta rigurosidad a la cadena complementaria de la SEQ ID NO: 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 107 ó 108, en donde dicho anticuerpo o fragmento funcional del mismo es específico para CD38. Además, la presente invención se refiere a una secuencia de ácidos nucleicos aislada que codifica para una región de unión a antígeno de un anticuerpo humano o fragmento funcional del mismo, que es específica para CD38. Adicionalmente, la invención se refiere a una secuencia de ácidos nucleicos que codifica para una cadena pesada variable de una región de unión a antígeno aislado, que comprende (i) una secuencia seleccionada del grupo que consiste de las SEQ ID NOS: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90 ó 91, o (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se híbrida bajo condiciones de alta rigurosidad a la cadena complementaria de la SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, - - 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90 ó 91, en donde dicha región de unión a antígeno es específica para CD38. La presente invención se refiere también a una secuencia de ácidos nucleicos que codifica para una cadena ligera variable de una región de unión a antígeno aislado, que comprende (i) una secuencia seleccionada del grupo que consiste de las SEQ ID NOS: 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 107 y 108, o (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se híbrida bajo condiciones de alta rigurosidad a la cadena complementaria de la SEQ ID NO: 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 107 ó 108, en donde dicha región de unión a antígeno es específica para CD38. La presente invención se refiere además a un método para inducir la citotoxicidad específica de células tumorales que expresan CD38, en donde dicha citotoxicidad específica se presenta mediante la reticulación de CD38, que comprende la etapa de incubar dichas células en presencia de una cantidad suficiente de un anticuerpo anti-CD38 humano o humanizado aislado o un fragmento funcional del mismo, en donde dicho anticuerpo anti-CD38 humano o humanizado comprende (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica para una cadena pesada representada en la SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90 ó 91, o (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se híbrida bajo condiciones de alta rigurosidad a la cadena complementaria de la SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90 ó 91, en donde dicho anticuerpo o un fragmento funcional del mismo, es específico para CD38. Adicionalmente, la presente invención se refiere a un método para inducir la citotoxicidad específica de células tumorales que expresan CD38, en donde dicha citotoxicidad específica se presenta mediante la reticulación de CD38, que comprende la etapa de incubar dichas células en presencia de una cantidad suficiente de un anticuerpo anti-CD38 humano o humanizado aislado o un fragmento funcional del mismo, en donde dicho anticuerpo anti-CD38 humano o humanizado comprende (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica para una cadena ligera representada en la SEQ ID NOS: 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 107 ó 108, o (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se híbrida bajo condiciones de alta rigurosidad a la cadena complementaria de la SEQ ID NO: 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 107 ó 108, en donde dicho anticuerpo o un fragmento funcional del mismo es específico para CD38. También, la presente invención se refiere a un método para inducir la citotoxicidad específica de células tumorales que expresan CD38, en donde dicha citotoxicidad específica se presenta mediante la reticulación de CD38, que comprende la etapa de incubar dichas células en presencia de una cantidad suficiente de un anticuerpo anti-CD38 humano o humanizado aislado o un fragmento funcional del mismo, en donde dicho anticuerpo anti-CD38 humano o humanizado o dicho fragmento funcional del mismo comprende (i) una secuencia de ácidos nucleicos de cadena pesada representada en la SEQ ID NO: 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 ó 106, o (ii) una cadena pesada variable que tiene al menos un sesenta por ciento de identidad con una cadena pesada variable representada en la SEQ ID NO: 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 ó 106. También, la presente invención se refiere a un método para inducir la citotoxicidad específica de células tumorales que expresan CD38, en donde dicha citotoxicidad específica se presenta mediante la reticulación de CD38, que comprende la etapa de incubar dichas células en presencia de una cantidad suficiente de un anticuerpo anti-CD38 humano o humanizado aislado o un fragmento funcional del mismo, en donde dicho anticuerpo anti-CD38 humano o humanizado comprende (i) una secuencia de aminoácidos de cadena ligera representada en la SEQ ID NO: 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 109 ó 110, o (ii) una cadena ligera variable que tiene al menos un sesenta por ciento de identidad con una cadena ligera variable representada en la SEQ ID NO: 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 109 ó 110. Además, la presente invención se refiere a un método para detectar la citotoxicidad específica de células tumorales que expresan CD38, mediante la reticulación de CD38, que comprende las etapas de: (i) administrar a un sujeto con necesidad del mismo una cantidad efectiva de un anticuerpo anti-CD38 humano o humanizado o un fragmento funcional del mismo, y (ii) detectar la actividad citotóxica específica de dicho anticuerpo anti-CD38 humano o humanizado o dicho fragmento funcional del mismo. También, la presente invención se refiere a un método para detectar la presencia de CD38 en un tejido o una célula de origen de minipig (cerditos vietnamitas) , que comprende las etapas de: (i) permitir que un anticuerpo anti-CD38 humano o humanizado o un fragmento funcional del mismo, entre en contacto con dicho CD38, y (ii) detectar la unión específica de dicho anticuerpo anti-CD38 humano o humanizado o un fragmento funcional del mismo, a dichas células CD38 de minipig (cerditos vietnamitas) , en donde dicho anticuerpo o fragmento funcional del mismo es capaz también de unirse específicamente al CD38 de origen humano. Además, la presente invención se refiere a un método A de detección del CD38 en un eritrocito que expresa CD38, que comprende las etapas de: (i) permitir que un anticuerpo anti-CD38 humano o humanizado o un fragmento funcional del mismo, entre en contacto con dicho eritrocito que expresa CD38, y (ii) detectar la unión específica de dicho anticuerpo anti-CD38 humano o humanizado o un fragmento funcional del mismo, a dichos eritrocitos que expresan CD38, en donde dicho anticuerpo o fragmento funcional del mismo es capaz también de unirse específicamente al CD38 humano de una célula o tejido diferente a los eritrocitos humanos. La presente invención se refiere también a un anticuerpo aislado o fragmento funcional del mismo de acuerdo con la presente invención, que comprende (i) una región H-CDR3 representada en la SEQ ID NO: 21 ó 22 o (ii) una región H-CDR3 que tiene al menos un sesenta por ciento de identidad con el mismo, y que es específica para CD38 humano y CD38 de mono tití. BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura la proporciona secuencias de ácidos nucleicos de varias regiones pesadas variables de anticuerpo para su uso en la presente invención. La Figura Ib proporciona secuencias de aminoácidos de varias regiones pesadas variables de anticuerpo para su uso en la presente invención. Las regiones CDR HCDR1, HCDR2 y HCDR3 se designan a partir de las terminales N a C en negrita. La Figura 2a proporciona secuencias de ácidos nucleicos de varias regiones ligeras variables de anticuerpo para su uso en la presente invención. La Figura 2b proporciona secuencias de aminoácidos de varias regiones ligeras variables de anticuerpo para su uso en la presente invención. Las regiones CDR LCDR1, LCDR2 y LCDR3 se designan a partir de las terminales N a C en negrita . La figura 3 proporciona secuencias de aminoácidos de regiones pesadas variables de varias secuencias del gen maestro de anticuerpo HuCAL en base a consenso. Las regiones CDR HCDR1, HCDR2 y HCDR3 se designan a partir de las terminales N a C en negrita. La Figura 4 proporciona secuencias de aminoácidos de regiones ligeras variables de varias secuencias del gen maestro de anticuerpo HuCAL en base a consenso. Las regiones CDR LCDR1, LCDR2 y LCDR3 se designan a partir de las terminales N a C en negrita. La Figura 5 proporciona la secuencia de aminoácidos de CD38 (SWISS-PROT número de acceso primario P28907). La Figura 6 proporciona las secuencias de nucleótido de las cadenas pesada y ligera de OKT10 quimérico. La Figura 7 proporciona la secuencia de ADN de pMORPH®_h_IgGl_l (bp 601-2100) (SEQ ID NO: 74). El vector se basa en los vectores pcDNA3.1+ (Invitrogen). La secuencia de aminoácidos de la secuencia relleno de VH se indica en negritas, mientras que los marcos de lectura final de la secuencia guía de VH y del gen de la región constante se imprimen en no negritas. Los sitios de restricción se indican arriba de la secuencia. Los sitios de estimulación previa de los iniciadores de secuenciado se encuentran subrayados . La Figura 8 proporciona la secuencia de ADN del vector de expresión de cadena ligera Ig kappa pMORPH®_h_Igk_l (bp 601-1400) (SEQ ID NO: 75) : El vector se basa en los vectores pcDNA3.1+ (Invitrogen). La secuencia de aminoácidos de la secuencia relleno de Vk se indica en negritas, mientras que los marcos de lectura final de la secuencia guía de Vk y del gen de región constante se imprimen en no negritas. Los sitios de restricción se indican arriba de la secuencia. Los sitios de estimulación previa de los iniciadores de secuenciado se encuentran subrayados. La Figura 9 proporciona la secuencia de ADN del vector de cadena ligera Ig lambda HuCAL pMORPH®_h_Igl_l (bp 601-1400) (SEQ ID NO: 76) : La secuencia de aminoácidos de la secuencia relleno de VI se indica en negritas, mientras que los marcos de lectura final de la secuencia guía de VI y del gen de región constante se imprimen en no negritas. Los sitios de restricción se indican arriba de la secuencia. Los sitios de estimulación previa de los iniciadores de secuenciado se encuentran subrayados . La Figura 10 proporciona diferentes combinaciones de cadenas pesada y ligera en el formato Fab/IgG para su uso en la presente invención. La Figura 11 proporciona un análisis de expresión de CD38 de linfocitos y eritrocitos obtenidos mediante FACS. Las PBMCs y los eritrocitos se aislaron a partir de sangre completa de macaco, macaco de la India y mono tití mediante centrifugación de pendiente de densidad seguida por análisis FACS utilizando anticuerpos Fab anti-CD38 MOR03087 (A, histogramas derechos, flecha delgada) y MOR03088 (B, histogramas derechos; flecha delgada) . Un anticuerpo Fab irrelevante (A & B, histogramas izquierdos; flecha negra) se utilizó como un control negativo. La Figura 12 proporciona un análisis de expresión CD38 de linfocitos y eritrocitos obtenidos mediante FACS. Las PBMCs y los eritrocitos se aislaron a partir de sangre completa de humano, macaco y mono tití mediante centrifugación de pendiente de densidad seguida por análisis - - FACS utilizando MOR03087 IgGl anti-CD38 (histogramas derechos; flecha blanca) . Un anticuerpo de control IgGl irrelevante (A & B, histogramas izquierdos; flecha negra) se utilizó como un control negativo. La Figura 13 proporciona una vista general comparativa de reactividad cruzada de diferentes anticuerpos anti-CD38. Las Figuras 14 (a) y 14 (b) delinean las regiones CDR y FR para ciertos anticuerpos para su uso en la invención, y comparan los aminoácidos en una posición dada entre sí y entre las secuencias de consenso correspondientes. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención se basa en el descubrimiento de nuevos anticuerpos y métodos para utilizar los anticuerpos, que son específicos para o tienen una alta afinidad para CD38 y pueden suministrar un beneficio terapéutico a un sujeto. Los anticuerpos, que pueden ser humanos o humanizados, pueden utilizarse en muchos contextos, que se describen más completamente en la presente. Los anticuerpos adecuados para su uso en la presente invención se describen en la US 60/614,471, que se incorpora en la presente mediante la referencia. Un anticuerpo "humano" o un fragmento de anticuerpo humano funcional se define en la presente como uno que no es quimérico (e.g., no "humanizado") y no (ya sea completa o parcialmente) de una especie no humana. Un anticuerpo humano o un fragmento de anticuerpo funcional puede derivarse de un humano o puede ser un anticuerpo humano sintético. Un "anticuerpo humano sintético" se define en la presente como un anticuerpo que tiene una secuencia derivada, completa o parcialmente, in silico de secuencias sintéticas que se basan en el análisis de secuencias de anticuerpo humano conocidas. El diseño in silico de una secuencia de anticuerpo humano o fragmento de la misma puede lograrse, por ejemplo, analizando una base de datos de secuencias de anticuerpo humano o fragmento de anticuerpo y diseñando una secuencia de polipéptido utilizando los datos obtenidos de las mismas. Otro ejemplo de anticuerpo humano o fragmento de anticuerpo funcional, es uno que se encuentra codificado por un ácido nucleico aislado de una biblioteca de secuencias de anticuerpo de origen humano (i.e., tal biblioteca basada en anticuerpos tomados de una fuente natural humana) . Un "anticuerpo humanizado" o fragmento de anticuerpo humanizado funcional se define en la presente como uno que (i) se deriva de una fuente no humana (e.g., un ratón transgénico que contiene un sistema heterólogo inmune) , cuyo anticuerpo se basa en una secuencia de línea germinal humana; o (ii) es quimérico, en donde el dominio variable se deriva de un origen no humano y el dominio constante se deriva de un origen humano o (iii) se injerta en la CDR, en donde las CDRs del dominio variable son de un origen no humano, mientras que una o más de las estructuras del dominio variable son de origen humano y el dominio constante (si existe) es de origen humano . Como se utiliza en la presente, un anticuerpo se "une específicamente a", es "específico a/para", o "reconoce específicamente" un antígeno ( aquí, CD38) si tal anticuerpo es capaz de discriminar entre tal antígeno y uno o más antígenos de referencia, dado que la especificidad de unión no es una propiedad absoluta sino relativa. En su forma más general (y cuando no se menciona una referencia definida) , "unión específica" se refiere a la capacidad del anticuerpo para discriminar entre el antígeno de interés y un antígeno no relacionado, como se determina, por ejemplo, de acuerdo con uno de los siguientes métodos. Tales métodos comprenden, pero no se limitan a, inmunotransferencia Western, pruebas ELISA, RÍA, ECL, IRMA, FACS, IHC y exploraciones de péptido. Por ejemplo, puede llevarse a cabo un análisis ELISA estándar. La marcación puede llevarse a cabo mediante revelado de color estándar (e.g., anticuerpo secundario con peróxido de rábano y bencidina de tetrametilo con hidrogenperóxido) . La reacción, en ciertos pozos, se marca mediante la densidad óptica, por ejemplo, a 450 nm. La base típica (= reacción negativa) puede ser de 0.1 OD; la típica reacción positiva puede ser de 1 OD. Esto significa que la diferencia positiva/negativa puede ser de más de 10 veces. Típicamente, la determinación de la especificidad de unión se lleva a cabo utilizando no un solo antígeno de referencia, sino un conjunto de aproximadamente tres a cinco antígenos no relacionados, tales como leche en polvo, BSA, transferrina o lo similar. Es posible que un anticuerpo sea "específico a" o "específico para" un antígeno de 2 o más células/tejidos o más especies, siempre que el anticuerpo cumpla con los criterios de unión para cada uno de dichos células/tejidos y especies, por ejemplo. Por consiguiente, un anticuerpo puede unirse específicamente al antígeno objetivo CD38 en varios tipos celulares y/o tejidos, e.g., eritrocitos, linfocitos aislados de sangre periférica, del bazo o nodos linfáticos. Adicionalmente, un anticuerpo puede ser específico tanto para CD38 de una especie como para CD38 de otra especie. La "unión específica" también puede referirse a la capacidad de un anticuerpo para discriminar entre el antígeno objetivo y uno o más antígenos cercanamente relacionados, que se utilizan como puntos de referencia, e.g., entre el CD38 y el CD157. Adicionalmente, la "unión específica" puede relacionarse con la capacidad de un anticuerpo para discriminar entre diferentes partes de su antígeno objetivo, e.g., diferentes dominios o regiones del CD38, tales como los epítopes en la región de terminal N o de terminal C del CD38, o entre uno o más residuos de aminoácido claves o estiramientos de residuos de aminoácido del CD38. También, como se utiliza en la presente, una "inmunoglobulina" (Ig) se define en la presente como una proteína que pertenece a la clase IgG, IgM, IgE, IgA o IgD (o cualquier sub-clase de las mismas) , e incluye todos los anticuerpos conocidos convencionalmente y fragmentos funcionales de los mismos. Un "fragmento funcional" de un anticuerpo/inmunoglobulina en la presente, se define como un fragmento de un anticuerpo/inmunoglobulina (e.g., una región variable de una IgG) que retiene la región de unión a antígeno. Una "región de unión a antígeno" de un anticuerpo, se encuentra típicamente en una o más regiones hipervariables de un anticuerpo, i.e., las regiones CDR-1, 2 y/o 3; sin embargo, las regiones variables de "estructura" también pueden jugar un importante papel en la unión a antígeno, tal como proporcionando un andamiaje para las CDRs. Preferentemente, la "región de unión a antígeno" comprende al menos los residuos de aminoácido 4 a 103 de la cadena ligera variable (VL) y 5 a 109 de la cadena pesada variable )VH), más preferentemente, los residuos de aminoácido 3 a 107 de VL y 4 a 111 de VH, y son particularmente preferidas las cadenas VL y VH completas (posiciones de aminoácidos 1 a 109 de VL y 1 a 113 de VH: numeración de acuerdo con la WO 97/08320) . Una clase preferida de inmunoglobulinas para su uso en la presente invención es IgG. los "fragmentos funcionales" de la invención incluyen el dominio de un fragmento F(ab')2, un fragmento Fab y scFv. El F(ab')2 o Fab puede fabricarse para minimizar o remover completamente las interacciones de disulfuro intermolecular que se presentan entre los dominios CH? y CL. El término "enlace original" como se utiliza en conexión con la presente invención, denota cualquier enlace que no haya experimentado el proceso de optimización. Un proceso de optimización se describe en cualquier parte en la presente especificación. El término "enlace" como se utiliza en conexión con la presente invención, puede utilizarse de manera sinónima al término "inmunoglobulina" o "anticuerpo". Un anticuerpo para su uso en la invención, puede derivarse de una biblioteca de anticuerpo recombinante que se basa en las secuencias de aminoácido que se han diseñado in silico y codificadas por ácidos nucleicos que se crean sintéticamente. El diseño in silico de una secuencia de anticuerpo se logra, por ejemplo, analizando la base de datos de secuencias humanas y diseñando una secuencia de polipéptidos utilizando los datos obtenidos de la misma. Los métodos para diseñar y obtener secuencias creadas in silico se describen, por ejemplo, en Knappik et al., J. Mol. Biol., (2000) 296:57; Krebs et al., J. Immunol . Methods (2001) 254:67; y la Patente de E.U. No. 6,300,064 expedida para Knappik et al., que se incorporan en la presente mediante la referencia en su totalidad. Anticuerpos para su Uso en la Invención A lo largo de este documento se hace referencia a los siguientes anticuerpos representativos para su uso en la invención: "números de anticuerpo" o "LACS" o "MOR" 3076 ó 03076, 3078 ó 03078, 3081 ó 03081, 3085 ó 03085, 3086 ó 03086, 3087 ó 03987, 3088 ó 03088, 3089 ó 03089, 3101 ó 03101, 3102 ó 03102, 3127 ó 03127, 3128 ó 03128, 3129 ó 03129, 3130 ó 03130, 3131 ó 03131, 6183 ó 06183, 6184 ó 06184, 6185 ó 06185, 6186 ó 06186, 6187 ó 06187, 6188 ó 06188, 6189 ó 06189, 6190 ó 06190, 6192 ó 06192, 6195 ó 06195, 6197 ó 06197, 6200 ó 06200, 6201 ó 06201, 6204 ó 06204, 6214 ó 06214, 6278 ó 06278, 6279 ó 06279. LAC 3076 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 1 (ADN) /SEQ ID NO: 16 (proteína) y una región ligera variable correspondiente a la SEQ ID NO: 31 (ADN) /SEQ ID NO: 46 (proteína). LAC 3078 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 2 (ADN) /SEQ ID NO: 17 (proteína) y una región ligera variable correspondiente a la SEQ ID NO: 32 (ADN) /SEQ ID NO: 47 (proteína). LAC 3081 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 3 (ADN) /SEQ ID NO: 18 (proteína) y una región ligera variable correspondiente a la SEQ ID NO: 33 (ADN) /SEQ ID NO: 48 (proteína). LAC 3085 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 4 (ADN) /?EQ ID NO: 19 (proteína) y una región ligera variable correspondiente a la SEQ ID NO: 34 (ADN) /SEQ ID NO: 49 (proteína). LAC 3086 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 5 (ADN) /SEQ ID NO: 20 (proteína) y una región ligera variable correspondiente a la SEQ ID NO: 35 (ADN) /SEQ ID NO: 50 (proteína). LAC 3087 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 6 (ADN) /SEQ ID NO: 21 (proteína) y una región ligera variable correspondiente a la SEQ ID NO: 36 (ADN) /SEQ ID NO: 51 (proteína). LAC 3088 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 7 (ADN) /SEQ ID NO: 22 (proteína) y una región ligera variable correspondiente a la SEQ ID NO: 37 (ADN) /SEQ ID NO: 52 (proteína). LAC 3089 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 8 (ADN) /SEQ ID NO: 23 (proteína) y una región ligera variable correspondiente a la SEQ ID NO: 38 (ADN) /SEQ ID NO: 53 (proteína). LAC 3101 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 9 (ADN) /SEQ ID NO: 24 (proteína) y una región ligera variable correspondiente a la SEQ ID NO: 39 (ADN) /SEQ ID NO: 54 (proteína). LAC 3102 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 10 (ADN) /SEQ ID NO: 25 (proteína) y una región ligera variable correspondiente a la SEQ ID NO: 40 (ADN) /SEQ ID NO: 55 (proteína). LAC 3127 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 11 (ADN) /SEQ ID NO: 26 (proteína) y una región ligera variable correspondiente a la SEQ ID NO: 41 (ADN) /SEQ ID NO: 56 (proteína). LAC 3128 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 12 (ADN) /SEQ ID NO: 27 (proteína) y una región ligera variable correspondiente a la SEQ ID NO: 42 (ADN) /SEQ ID NO: 57 (proteína). LAC 3129 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 13 (ADN) /SEQ ID NO: 28 (proteína) y una región ligera variable correspondiente a la SEQ ID NO: 43 (ADN) /SEQ ID NO: 58 (proteína). LAC 3130 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 14 (ADN) /SEQ ID NO: 29 (proteína) y una región ligera variable correspondiente a la SEQ ID NO: 44 (ADN) /SEQ ID NO: 59 (proteína). LAC 3131 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 15 (ADN) /SEQ ID NO: 30 (proteína) y una región ligera variable correspondiente a la SEQ ID NO: 45 (ADN) /SEQ ID NO: 60 (proteína). Además, los clones optimizados, que se derivan de los enlaces originales MOR03087 y MOR03088, comprenden lo siguiente: MOR06183 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 77 (ADN) SEQ ID NO: 92 (proteína) . MOR06184 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 78 (ADN) SEQ ID NO: 93 (proteína). MOR06185 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 79 (ADN) SEQ ID NO: 94 (proteína) . MOR06186 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 80 (ADN) SEQ ID NO: 95 (proteína). MOR06187 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 81 (ADN) SEQ ID NO: 96 (proteína) . MOR06188 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 82 (ADN) SEQ ID NO: 97 (proteína). MOR06189 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 83 (ADN) SEQ ID NO: 98 (proteína) . MOR06190 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 84 (ADN) SEQ ID NO: 99 (proteína). MOR06192 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 85 (ADN) SEQ ID NO: 100 (proteína) . MOR06195 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 86 (ADN) SEQ ID NO: 101 (proteína). MOR06197 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 87 (ADN) SEQ ID NO: 102 (proteína) . MOR06200 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 88 (ADN) SEQ ID NO: 103 (proteína). MOR06201 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 89 (ADN) SEQ ID NO: 104 (proteína) . MOR06204 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 90 (ADN) SEQ ID NO: 105 (proteína). MOR06214 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 91 (ADN) SEQ ID NO: 106 (proteína) . MOR06278 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 107 (ADN) SEQ ID NO: 109 (proteína). MOR06279 representa un anticuerpo que tiene una región pesada variable correspondiente a la SEQ ID NO: 108 (ADN) SEQ ID NO: 110 (proteína) . Los anticuerpos de la invención se caracterizaron en formato Fab y/o IgG y comprenden varias combinaciones de las cadenas ligera y pesada de enlaces optimizados y originales. La Figura 10 muestra varias combinaciones no limitantes que pueden utilizarse en conexión con la presente invención.

En un aspecto, la invención proporciona métodos para utilizar- anticuerpos que tienen una región de unión a antígeno que pueden unirse específicamente a, o que tienen alta afinidad para una o más regiones del CD38, cuya secuencia de aminoácidos se representa por la SEQ ID NO: 71. Se dice que un anticuerpo tiene una "alta afinidad" para un antígeno si la medición de afinidad es de al menos 100 nM (afinidad monovalente del fragmento Fab) . Una región de anticuerpo o de unión a antígeno para su uso en la presente invención puede unirse preferentemente al CD38 con una afinidad de aproximadamente menos de 600 nM. Preferentemente, la región de anticuerpo o de unión a antígeno para su uso en la presente invención pueden unirse al CD38 con una afinidad de aproximadamente menos que 100 nM, más preferentemente menos que aproximadamente 60 nM, y aún más preferentemente menos que aproximadamente 30 nM. Son adicionalmente preferentes los usos de anticuerpos que se unen al CD38 con una afinidad de menos que aproximadamente 10 nM, y más preferentemente menos que aproximadamente 3 nM. Por ejemplo, la afinidad de un anticuerpo para su uso en la invención contra el CD38 puede ser de aproximadamente 10.0 nM ó 2.4 nM (afinidad monovalente del fragmento Fab). La Tabla 1 proporciona un sumario de afinidades de anticuerpos representativos, determinadas mediante resonancia de plasmón de superficie (Biacore) y análisis FACS Scatchard: - - Tabla 1: Afinidades de Anticuerpo Formato Fab; análisis en CD38 humano Fc-fusión 45-300 b: Formato IgGl; análisis con células Raji C: desviación estándar (n=3) D: desviación estándar (n=4) - - Con referencia a la Tabla 1, la afinidad de LACs se midió mediante resonancia de plasmón de superficie (Biacore) en CD38 humano Fc-fusión y mediante un procedimiento de citometría de flujo utilizando la línea celular Raji humana que expresa CD38. Los estudios Biacore se llevaron a cabo en antígeno directamente inmovilizado (proteína de fusión CD38-Fc) . El formato Fab de Lacs exhibió un rango de afinidad monovalente entre aproximadamente 30 y 596 nM en proteína de fusión CD38-FC inmovilizada. El formato IgGl se utilizó para la determinación de afinidad en base a células (FACS Scatchard) . La columna derecha de la Tabla 1 denota la resistencia de unión del LACS en este formato. Otra característica preferida de los anticuerpos preferidos para su uso en la invención, es su especificidad para un área dentro de la región de terminal N de CD38. Por ejemplo, el LACs de la invención puede unirse específicamente a la región de terminal N de CD38. Los anticuerpos de la presente invención se caracterizaron además como se muestra en las Tablas 2 y 3. Los sumarios se proveen de afinidades como lo determina la resonancia de plasmón de superficie (Biacore) y el análisis FACS Stachard. Adicionalmente, la unión FACS a eritrocitos humanos y los estudios de unión ELISA a la proteína de fusión CD38 Fc también se ha determinado. Las caracterizaciones muestran que diversos enlaces optimizados muestran una unión reducida a eritrocitos humanos y una más alta señal ELISA para el clon original. Adicionalmente los derivados de MOR03088 tienen una afinidad mejorada como se muestra por medio de FACS Scatchard y determinaciones de afinidad. Tabla 2: Caracterizaciones generales de clones madurados por afinidad: a- formato Fab formato IgG Células efectoras humanas & células objetivo RPMI8226 (relación E:T = 30:1) +: Citotoxicidad de células RPMI8226 en ADCC n.d.: no determinado - - *: experimento diferente Tabla 3: EC50 en FACS Scatchard, ADCC y CDC a: medición única b: media de 2 mediciones El tipo de epítope al cual se une el anticuerpo para uso en la invención, puede ser lineal (i.e., un estiramiento consecutivo de aminoácidos) o conformacional (i.e., múltiples estiramientos de aminoácidos). A fin de determinar si el epítope de un anticuerpo particular es lineal o conformacional, el trabajador experto puede analizar la unión de anticuerpos a péptidos sobrepuestos (e.g., péptidos de 13 mer con una sopreposición de 11 aminoácidos) que cubren diferentes dominios de CD38. LACS puede reconocer epítopes discontinuos o lineales en la región de terminal N del CD38. En combinación con el conocimiento proporcionado en la presente, el trabajador experto en la técnica sabrá cómo utilizar uno o más epítopes aislados de CD38 para generar anticuerpos que tienen una región de unión a antígeno que es específica para dichos epítopes (e.g., utilizando péptidos sintéticos de epítopes de CD38 o células que expresan los epítopes de CD38). Un anticuerpo para su uso en la invención es preferentemente de una especie de reacción cruzada con humanos y al menos otra especie no humana. La especie no humana puede ser de primate no humano, e.g., macaco de la India, baboon y/o macaco. Otra especie no humana puede ser minipig (cerditos vietnamitas), conejo, ratón, rata y/o hámster. Un anticuerpos que es de reacción cruzada con al menos otra especie además de la humana puede proporcionar mayor flexibilidad y beneficios sobre los anticuerpos anti-CD38 conocidos, para propósitos de conducir los estudios in vivo en múltiples especies con el mismo anticuerpo. Un anticuerpo que es de reacción cruzada con minipig (cerditos vietnamitas) y/o conejo, por ejemplo, puede ser un candidato para estudios de toxicología y seguridad. Preferentemente, un anticuerpo para su uso en la invención, no solo es capaz de unirse a CD38, sino que también es capaz de mediar la citotoxicidad de una célula que expresa CD38. Más específicamente, un anticuerpo para uso en la invención puede mediar su efecto terapéutico agotando las células positivas a CD38 (e.g., malignas) mediante funciones efectoras del anticuerpo. Estas funciones incluyen la citotoxicidad celular dependiente del anticuerpo (ADCC) y la citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) .

Sin embargo, la expresión de CD38 no solo se encuentra en las células inmunes dentro del linaje mieloide (e.g., monocitos, granulocitos) y linfoide (e.g., células B y T activadas; células de plasma) , sino también en las células precursoras respectivas. Dado que es importante que esas células no se afecten por la citotoxicidad mediada por anticuerpos de células malignas, los anticuerpos de la presente invención son preferentemente no tóxicos para las células precursoras. Adicionalmente a sus actividades catalíticas como una ADP-ribosa ciclasa e hidrolasa, el CD38 despliega la capacidad de transducir señales de relevancia biológica (Hoshino et al., 1997; Ausiello et al., 2000). Esas funciones pueden inducirse in vivo, e.g., mediante interacciones del ligando receptor o mediante reticulación con anticuerpos anti-CD38 agonísticos, conduciendo, e.g., a la movilización del calcio, proliferación de linfocitos y liberación de citosinas. Preferentemente, los anticuerpos de la presente invención son anticuerpos no agonísticos. Variantes de Péptido Los anticuerpos para uso en la invención no se limitan a las secuencias de péptido específicas proporcionadas en la presente. Por el contrario, la invención también incorpora el uso de variantes de estos polipéptidos. Con referencia a la presente descripción y a las tecnologías y referencias convencionalmente disponibles, el trabajador experto será capaz de preparar, probar y utilizar las variantes funcionales de los anticuerpos descritos en la presente, mientras que apreciará las variantes que tienen la capacidad de mediar la citotoxicidad de una célula objetivo CD38+ dentro del alcance de la presente invención. Como se utiliza en este contexto, la "capacidad de mediar la citotoxicidad de una célula objetivo CD38+" significa una característica funcional adscrita a un anticuerpo anti-CD38 para su uso en la invención. La capacidad para mediar la citotoxicidad de una célula objetivo CD38+, incluye, por tanto, la capacidad para mediar la citotoxicidad de una célula objetivo CD38+, e.g., mediante ADCC y/o CDC, o mediante construcciones de toxinas conjugadas a un anticuerpo para su uso en la invención. Una variante puede incluir, por ejemplo, un anticuerpo que tiene al menos una región determinante de complementariedad alterada (CDR) (hipervariable) y/o un dominio/posición de estructura (FR) (variable), vis-á-vis una secuencia de péptido descrita en la presente. Para ilustrar mejor este concepto, sigue una breve descripción de la estructura de anticuerpo. Un anticuerpo se compone de dos cadenas de péptido, conteniendo cada una dominios constantes de una (cadena ligera) o tres (cadenas pesadas) y una región variable (VL, VH) , de las cuales la última se encuentra hecha en cada caso de hasta cuatro regiones FR y tres CDRs interespaciadas . El sitio de unión de antígeno se forma por una o más CDRs, sin embargo las regiones FR proporcionan la estructura estructural para las CDRs y, por tanto, juegan un importante papel en la unión a antígeno. Al alterar uno o más residuos de aminoácido en una CDR o región FR, el trabajador experto rutinariamente puede generar secuencias de anticuerpo mutadas o diversificadas, que pueden visualizarse contra el antígeno, por ejemplo, por nuevas propiedades mejoradas. Las Figuras 14a (VH) y 14b (VL) delinean las regiones CDR y FR para ciertos anticuerpos para su uso en la invención y comparan los aminoácidos en una posición dada entre sí, y con las secuencias correspondientes de consenso o de "gen maestro" (como se describe en la Patente de E.U. No. 6,300,064) . El trabajador experto será capaz de diseñar variantes de péptido, cuyo uso se encuentra dentro del alcance de la presente invención. Se prefiere que las variantes se construyan cambiando los aminoácidos dentro de una o más regiones de CDR; una variante también puede tener una o más regiones de estructura alteradas. Las alteraciones pueden efectuarse en las regiones de estructura. Por ejemplo, un dominio de FR de péptido puede alterarse en donde existe una desviación en un residuo en comparación con una secuencia de línea germinal. Además, las variantes pueden obtenerse utilizando un LAC como punto de partida para la optimización diversificando uno o más residuos de aminoácido en el LAC, preferentemente los residuos de aminoácido en una o más CDRs, y visualizando la recolección resultante de las variantes de anticuerpo por variantes con propiedades mejoradas. Es particularmente preferida la diversificación de uno o más residuos de aminoácido en CDR-3 de VL, CDR-3 de VH, CDR-1 de VL y/o CDR-2 de VH. La diversificación puede efectuarse sintetizando una recolección de moléculas de ADN utilizando tecnología de mutagénesis de trinucleótido (TRIM) (Virnekás, B., Ge, L., PlÚckthun, A., Schneider, K.C., ellnhofer G. , y Moroney S.E. (1994) Trinucleotide phosphoramidites : ideal reagents for the synthesis of mixed oligonucleotides for random mutagenesis. (Fosforamiditas de trinucleótidos : reactivos ideales para la síntesis de oligonucleótidos mezclados para mutagénesis aleatoria) Nucí. Acids Res., 22, 5600) . Variantes Conservadoras de Aminoácido Pueden producirse variantes de polipéptido que conservan la estructura molecular total de una secuencia de péptido de anticuerpo descrita en la presente. Dadas las propiedades de los aminoácidos individuales, algunas sustituciones racionales se reconocerán por el trabajador experto. Las sustituciones de aminoácido, i.e., "sustituciones conservadoras", pueden efectuarse, por ejemplo, en base a la similitud en polaridad, la carga, la solubilidad, la hidrofobicidad, la hidrofilicidad y/o la naturaleza amfifática de los residuos implicados. Por ejemplo, (a) los aminoácidos no polares (hidrófobos) incluyen alanina, leucina, isoleucina, valina, prolina, fenilalanina, triptofán, y metionina; (b) los aminoácidos polares neutros incluyen glicina, serina, treonina, cisteína, tirosina, asparagina y glutamina; (c) los aminoácidos cargados positivamente (básicos) incluyen arginina, lisina e histidina; y (d) los aminoácidos cargados negativamente (acídicos) incluyen ácido aspártico y ácido glutámico. Las sustituciones típicamente pueden efectuarse dentro de los grupos (a)-(d) . Adicionalmente, la glicina y la prolina pueden sustituirse una por la otra en base a su capacidad de fracturar las hélices alfa. De manera similar, ciertos aminoácidos, tales como alanina, cisteína, leucina, metionina, ácido glutámico, glutamina, histidina y lisina, se encuentran más comúnmente en las hélices alfa, mientras que valina, isoleucina, fenilalanina, tirosina, triptofán y treonina se encuentran más comúnmente en láminas en placas beta. Glicina, serina, ácido aspártico, asparagina y prolina se encuentran comúnmente en turnos. Algunas sustituciones preferidas pueden producirse entre los siguientes grupos: (i) S y T; (ii) P y G; y (iii) A, V, L, e I. dado el código genético conocido y las técnicas de ADN recombinantes y sintéticas, el científico experto puede construir fácilmente los ADNs que codifican para las variantes de aminoácido conservadoras. En un ejemplo particular, la posición 3 de aminoácido en las SEQ ID NOS: 5, 6, 7 y/o 8 puede cambiarse de una Q a una E. Como se utiliza en la presente, la "identidad de secuencia" entre dos secuencias de polipéptido indica el porcentaje de aminoácidos que son idénticos entre las secuencias. La "similitud de secuencia" indica el porcentaje de aminoácidos que son ya sea idénticos o que representan sustituciones de aminoácido conservadoras. Las secuencias de polipéptido preferidas de la invención tienen una identidad de secuencia en las regiones CDR de al menos 60%, más preferentemente de al menos 70% ó 80%, aún más preferentemente de al menos 90% y de mayor preferencia de al menos 95%. Los anticuerpos preferidos tienen también una similitud de secuencia en las regiones CDR de al menos 80%, más preferentemente de 90% y de mayor preferencia de 95%. Las secuencias de polipéptido preferidas de la invención tienen una identidad de secuencia en las regiones variables de al menos 60%, más preferentemente de al menos 70% ó 80%, aún más preferentemente de al menos 90% y de mayor preferencia de al menos 95%. Los anticuerpos preferidos también tienen una similitud de secuencia en las regiones variables de al menos 80%, más preferentemente de 90% y de mayor preferencia de 95%. Moléculas de ADN de la invención La presente invención se refiere también a los usos de las moléculas de ADN que codifican para un anticuerpo para su uso en la invención. Estas secuencias incluyen, pero no se limitan a, aquellas moléculas de ADN descritas en las Figuras la y 2a. Las moléculas de ADN de la invención no se limitan a las secuencias descritas en la presente, sino que incluyen las variantes de las mismas. Las variantes de ADN dentro de la invención pueden describirse por la referencia a sus propiedades físicas en hibridación. El trabajador experto reconocerá que el ADN puede utilizarse para identificar su complemento y, dado que el ADN es bicatenario, su equivalente u homólogo, utilizando técnicas de hibridación de ácido nucleico. También se reconocerá que la hibridación puede presentarse con menos del 100% de complementariedad. Sin embargo, dada la selección apropiada de las condiciones, las técnicas de hibridación pueden utilizarse para diferenciar entre las secuencias de ADN en base a su relatividad estructural para una sonda particular. Para guía concerniente a tales condiciones ver, Sambrook et al., 1989 (Sambrook J. Fritsch, E.F., y Maniatis T., (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Clonación Molecular: un manual de laboratorio) , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, EUA) y Ausubel et al., 1995 (Ausubel, F.M., Brent, R., Kingston, R.E., Moore, D.D., Sedman, J.G., Smith J.A., & Struhl K. eds. (1995). Current Protocols in Molecular Biology (Protocolos Actuales en Biología Molecular) New York: John Wiley and Sons) . La similitud estructural entre dos secuencias de polinucleótidos puede expresarse como una función de "rigurosidad" de las condiciones bajo las cuales dos secuencias se hibridarán entre sí. Como se utiliza en la presente, el término "rigurosidad" se refiere al grado en que las condiciones desfavorecen la hibridación. Las condiciones rigurosas desfavorecen fuertemente la hibridación, y solo las moléculas más estructuralmente relacionadas se hibridarán entre sí bajo tales condiciones. Por el contrario, las condiciones no rigurosas favorecen la hibridación de moléculas que despliegan un menor grado de relatividad estructural. La rigurosidad de hibridación, en consecuencia, se correlaciona directamente con las relaciones estructurales de dos secuencias de ácido nucleico. Las siguientes relaciones son útiles para correlacionar la hibridación y la relatividad (en donde Tm es la temperatura de fusión de una dupla de ácido nucleico) : a. Tm = 69.3 + 0.41 (G+C) % b. La Tm de una dupla de ADN disminuye por 1°C con cada incremento de 1% en el número de pares de base que no forman pares. c. (Tm)u2 - (Tm)ui = 18.5 log?0u2/ul en donde ul y u2 son las resistencias iónicas de dos soluciones. La rigurosidad de hibridación es una función de muchos factores, incluyendo la concentración total de ADN, la resistencia iónica, la temperatura, el tamaño de la sonda y la presencia de agentes que fracturan la unión al hidrógeno. Los factores que promueven la hibridación incluyen altas concentraciones de ADN, altas resistencias iónicas, bajas temperaturas, tamaño de sonda más largo y la ausencia de agentes que fracturan la unión al hidrógeno. La hibridación se lleva a cabo típicamente en dos fases: la fase de "unión" y la fase de "lavado". Primero, en la fase de unión, la sonda se une al objetivo bajo condiciones que favorecen la hibridación. La rigurosidad se controla comúnmente en esta etapa alterando la temperatura. Para alta rigurosidad, la temperatura se encuentra comúnmente entre 65°C y 70°C, a menos que se utilicen sondas cortas )< 20 nt) de oligonucleótido. Una solución de hibridación representativa comprende 6X SSC, 0.5% de SDS, 5X de solución de Denhardt y 100 ug de ADN vehículo no específico. Ver Ausubel et al., sección 2.9, suplemento 27 (1994). Por supuesto, se conocen muchas condiciones de amortiguador diferentes, y sin embargo, funcionalmente equivalentes. Cuando el grado de relatividad es menor, puede seleccionarse una temperatura más baja. Las temperaturas de unión de baja rigurosidad se encuentran entre aproximadamente 25°C y 40°C. La rigurosidad media se encuentra entre al menos aproximadamente 40°C a menos de aproximadamente 65°C. La alta rigurosidad se encuentra entre al menos aproximadamente 65°C. Segundo, el exceso de sonda se remueve mediante lavado. Es en esta fase que se aplican comúnmente condiciones de mayor rigurosidad. De aquí que, es esta etapa de "lavado" la que es más importante en la determinación de la relatividad mediante hibridación. Las soluciones de lavado contienen típicamente menores concentraciones de sal. Una solución de rigurosidad media ejemplar contiene 2X SSC y 0.1% de SDS. Una solución de lavado de alta rigurosidad contiene el equivalente (en resistencia iónica) de menos de aproximadamente 0.2 X de SSC, conteniendo una solución rigurosa preferida aproximadamente 0.1 X de SSC. Las temperaturas asociadas con diversas rigurosidades son las mismas tratadas anteriormente para la "unión". La solución de lavado también se reemplaza típicamente un número de veces durante el lavado. Por ejemplo, las condiciones de lavado de alta rigurosidad típicas comprenden lavar dos veces durante minutos a 55°C y tres veces durante 15 minutos a 60°C. Por consiguiente, la presente invención incluye el uso de moléculas de ácido nucleico que se hibridan a las moléculas descritas en las Figuras la y 2a bajo condiciones de unión y lavado de alta rigurosidad, en donde tales moléculas de ácido nucleico codifican para un anticuerpo o fragmento funcional del mismo para los usos descritos en la presente. Las moléculas preferidas (desde una perspectiva del ARNm) son aquellas que tienen al menos 75% ó 80% (preferentemente al menos 85%, más preferentemente al menos 90% y de mayor preferencia al menos 95%) de homología o de identidad de secuencia con una de las moléculas de ADN descritas en la presente. Aún otra clase de variantes de ADN, cuyo uso se encuentra dentro del alcance de la invención, puede describirse con referencia al producto que codifican (ver los péptidos listados en las figuras Ib y 2b) . estos genes funcionalmente equivalentes se caracterizan por el hecho de que codifican para las mismas secuencias de péptido encontradas en las figuras Ib y 2b, debido a la degeneración del código genético. Se reconoce que las variantes de moléculas de ADN proporcionadas en la presente pueden construirse en varias diferentes maneras. Por ejemplo, pueden construirse como ADNs completamente sintéticos. Los métodos para sintetizar eficientemente oligonucleótidos en el rango de 20 a aproximadamente 150 nucleótidos, se encuentran ampliamente disponibles. ver, Ausubel et al., sección 2.11, suplemento 21 (1993) . Los oligonucleótidos sobrepuestos pueden sintetizarse y ensamblarse de una manera primeramente reportada por Khorana et al., J. Mol. Biol., 72:209-217 (1971); ver también Ausubel et al., supra, Sección 8.2. los ADNs sintéticos se diseñan preferentemente con sitios de restricción convenientes fabricados en los extremos 5' y 3' del gen para facilitar la clonación en el vector apropiado. Como se indicó, un método para generar variantes es iniciar con uno de los ADNs descritos en la presente, y después conducir una mutagénesis dirigida al sitio. Ver Ausubel et al., supra, capítulo 8, suplemento 37 (1997). En un método típico, un ADN objetivo se clona dentro de un vehículo bacteriófago de ADN monocatenario. El ADN monocatenario se aisla y se híbrida con un oligonucleótido que contiene la(s) alteración (es) de nucleótido deseada (s). la cadena complementaria se sintetiza y el fago bicatenario se introduce dentro de un huésped. Algo de la progenie resultante contendrá el mutante deseado, lo que puede confirmarse utilizando secuenciado de ADN. Adicionalmente, se encuentran disponibles diversos métodos que incrementan la probabilidad de que el fago de la progenie será el mutante deseado. Estos métodos son muy conocidos por aquellos en el campo y se encuentran comercialmente disponibles los equipos para generar tales mutantes. Construcciones y expresión de ADN recombinante La presente invención proporciona además el uso de construcciones de ADN recombinante que comprenden una o más de las secuencias de nucleótidos de la presente invención. Las construcciones recombinantes se utilizan en conexión con un vector, tal como un plásmido o vector viral, dentro del cual se inserta una molécula de ADN que codifica para un anticuerpo para su uso en la invención. El gen codificado puede producirse mediante las técnicas descritas en Sambrook et al., 1989 y Ausubel et al., 1989. Alternativamente, las secuencias de ADN pueden sintetizarse químicamente utilizando, por ejemplo, sintetizadores . Ver, por ejemplo, las técnicas descritas en OLIGONUCLEOTIDE SYNTHESIS (Síntesis de oligonucleótidos) (1984, Gait ed. , IRL Press, Oxford), que se incorpora mediante la referencia en la presente en su totalidad. Las construcciones recombinantes de la invención se comprenden de vectores de expresión que son capaces de expresar los productos de ARN y/o proteínas de el (los) ADN(s) codificado (s) . El vector puede comprender además secuencias reguladoras, incluyendo un promotor operablemente enlazado al marco de lectura abierta (ORF) . El vector puede comprender además una secuencia de marcador elegible. Las señales secretorias de iniciación y bacterianas también pueden requerirse para la translación eficiente de secuencias de codificación del gen objetivo insertadas. La presente invención proporciona además el uso de células huésped que contienen al menos uno de los ADNs descritos en la presente. La célula huésped puede ser virtualmente cualquier célula para la cual se encuentran disponibles los vectores de expresión. Por ejemplo, puede ser una célula huésped eucariótica más alta, tal como una célula de mamífero, una célula huésped eucariótica más baja, tal como una célula de levadura, pero es preferentemente una célula procariótica tal como una célula bacteriana. La introducción de una construcción recombinante dentro de la célula huésped puede efectuarse mediante transfección de fosfato de calcio, DEAE, transfección mediada por dextrano, electroporación o infección por fago. Expresión Bacteriana Los vectores de expresión útiles para uso bacteriano se construyen insertando una secuencia de ADN estructural que codifica para una proteína deseada conjuntamente con señales de iniciación y terminación de translación adecuadas en una fase de lectura operable con un promotor funcional. El vector comprenderá uno o más marcadores fenotípicos elegibles y un origen de replicación para asegurar el mantenimiento del vector, y si se desea, para proporcionar una amplificación dentro del huésped. los huéspedes procarióticos adecuados para transformación incluyen E. coli, Bacillus subtilis, Salmonella typhimurium y varias especies dentro del género Pseudomonas, Stremptomyces y Staphilococcus . Los vectores bacterianos pueden ser, por ejemplo, a base de bacteriófagos, plásmidos o fagémidos . Estos vectores pueden contener un marcador elegible y un origen bacteriano de replicación derivado de plásmidos comercialmente disponibles que contienen típicamente elementos del muy conocido vector de clonación pBR322 (ATCC 37017). Después de la transformación de una cepa huésped adecuada y del crecimiento de la cepa huésped a una densidad celular apropiada, el promotor seleccionado se des-reprime/induce mediante los medios apropiados (e.g., desplazamiento de temperatura o inducción química) y las células se cultivan durante un período adicional. Las células se cosechan típicamente mediante centrifugación, se fracturan mediante medios físicos o químicos, y el extracto crudo resultante se retiene para purificación posterior. En sistemas bacterianos, puede seleccionarse ventajosamente un número de vectores de expresión al uso pretendido para la proteína que se expresa. Por ejemplo, cuando va a producirse una gran cantidad de tal proteína, para la generación de anticuerpos o para visualizar bibliotecas de péptido, por ejemplo, pueden ser deseables los vectores que dirigen la expresión de altos niveles de productos de proteína de fusión que se purifican fácilmente. Métodos Terapéuticos Los métodos terapéuticos implican la administración a un sujeto que necesita de un tratamiento, de una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo contemplado por la invención. Una cantidad "terapéuticamente efectiva" mediante la presente, se define como la cantidad de un anticuerpo que es de una cantidad suficiente para agotar las células positivas a CD38 en un área tratada de un sujeto, ya sea como una dosis única o de acuerdo con un régimen de dosis múltiple, solo o en combinación con otros agentes, lo cual conduce al alivio de una condición adversa, cantidad que aún es toxicológicamente tolerable. El sujeto puede ser un animal humano o no humano (e.g., conejo, rata, ratón, mono, u otro primate de menor orden) . Un anticuerpo para uso en la invención, puede coadministrarse con medicamentos conocidos, y en algunos ejemplos, el anticuerpo puede modificarse en sí. Por ejemplo, un anticuerpo podría conjugarse a una inmunotoxina o radioisótopo para incrementar adicionalmente de manera potencial su eficacia. Los trastornos y condiciones particularmente adecuados para tratamiento con un anticuerpo son mieloma múltiple (MM) y otras enfermedades hematológicas, tales como leucemia linfocítica crónica (CLL) , leucemia mielógena crónica (CML) , leucemia mielógena aguda (AML) , y leucemia linfocítica aguda (ALL) . Un anticuerpo también puede utilizarse para tratar una enfermedad inflamatoria tal como artritis reumatoide (RA) o lupus eritematoso sistémico (SLE) . Para tratar cualquiera de los trastornos anteriores pueden formularse las composiciones farmacéuticas para su uso de acuerdo con la presente invención, de la manera convencional utilizando uno o más vehículos o excipientes fisiológicamente aceptables. Un anticuerpo para su uso en la invención puede administrarse mediante cualquier medio adecuado, que puede variar, dependiendo del tipo de trastorno que se trata. Las vías de administración posibles incluyen la administración parenteral (e.g., intramuscular, intravenosa, intraarterial, intraperitoneal, o subcutánea) , intrapulmonar e intranasal, y, si se desea, para tratamiento inmunosupresor local, intralesional . Adicionalmente, un anticuerpo para su uso en la invención puede administrarse mediante infusión de impulso, e.g., con dosis declinadas del anticuerpo. Preferentemente, la dosis se proporciona mediante inyecciones, más preferentemente inyecciones intravenosas o subcutáneas, dependiendo, en parte, si la administración es breve o crónica. La cantidad que va a administrarse dependerá de una variedad de factores tales como los síntomas clínicos, el peso del individuo, y si se administran otras drogas. El técnico experto reconocerá que la vía de administración variará dependiendo del trastorno o condición que va a tratarse. La determinación de una cantidad terapéuticamente efectiva del nuevo polipéptido, de acuerdo con esta invención, dependerá con mucho de las características particulares del paciente, de la vía de administración y de la naturaleza del trastorno que se trata. Puede encontrarse una' guía general, por ejemplo, en las publicaciones de la Conference on Harmonisation y en REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, capítulos 27 y 28, pp . 484-528 (18a ed., Alfonso R. Gennaro, Ed., Easton, Pa.: Mack Pub. Co., 1990). Más específicamente, la determinación de una cantidad terapéuticamente efectiva dependerá de factores tales como la toxicidad y la eficacia del medicamento. La toxicidad puede determinarse utilizando métodos muy conocidos en la técnica y que se encuentran en las referencias anteriores. La eficacia puede determinarse utilizando la misma guía en conjunción con los métodos descritos abajo en los Ejemplos.' Métodos Diagnósticos El CD38 se encuentra altamente expresado en células hematológicas en ciertas malignidades; por tanto, puede emplearse un anticuerpo anti-CD38 para uso en la invención a fin de obtener una imagen de o visualizar un sitio de acumulación posible de células malignas en un paciente. A este respecto, un anticuerpo puede marcarse de manera detectable mediante el uso de radioisótopos, marcas de afinidad (tales como biotina, avidina, etc.) marcas fluorescentes, átomos paramagnéticos, etc. los procedimientos para lograr tal marcado son muy conocidos en la técnica. La aplicación clínica de anticuerpos en una visualización diagnóstica se revisa por Grossman, H.B., Urol. Clin. North Amer., 13:465-474 (1986)), Unger E.C., et al., Invest. Radiol . 20:693-700 (1985)), y Khaw B.A., et al., Science 209:295-297 (1980)). Los anticuerpos o regiones de unión a antígeno preferidos para su uso como un compuesto diagnóstico comprenden una secuencia de cadena pesada variable seleccionada del grupo que consiste de la SEQ ID NO: 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 ó 106, y/o una secuencia de cadena ligera variable seleccionada del grupo que consiste de la SEQ ID NO: 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 109 ó 110. La detección de focos de tales anticuerpos marcados de manera detectable puede ser indicativa de un sitio de desarrollo del tumor, por ejemplo. En una modalidad, este examen se efectúa removiendo las muestras de tejido o sangre e incubando tales muestras en presencia de los anticuerpos marcados de manera detectable. En una modalidad preferida, esta técnica se efectúa de manera no invasiva mediante el uso de visualización magnética, fluorografía, etc. Tal prueba diagnóstica puede emplearse en el monitoreo del éxito del tratamiento de enfermedades, en donde la presencia o ausencia de células positivas a CD38 es un indicador relevante. La invención también contempla el uso de un anticuerpo anti-CD38, como se describe en la presente, para el diagnóstico en una configuración ex vivo. Composiciones Terapéuticas y Diagnósticas Los anticuerpos para uso en la presente invención pueden formularse de acuerdo con métodos conocidos para preparar composiciones farmacéuticamente útiles, en donde un anticuerpo para uso en la invención (incluyendo cualquier fragmento funcional del mismo) se combina en una mezcla con un vehículo portador farmacéuticamente aceptable. Los vehículos adecuados y su formulación se describen, por ejemplo, en REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES (18a ed., Alfonso R. Gennaro, Ed. , Easton, Pa: Mack Pub. Co . , 1990). A fin de formar una composición farmacéuticamente aceptable adecuada para su efectiva administración, tales composiciones contendrán una cantidad efectiva de uno o más de los anticuerpos para su uso en la presente invención, conjuntamente con una cantidad adecuada del vehículo portador. Los anticuerpos o regiones de unión a antígeno preferidos de la invención para su uso como un compuesto diagnóstico, comprenden una secuencia de cadena pesada variable seleccionada del grupo que consiste de la SEQ ID NO: 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 ó 106, y/o una secuencia de cadena ligera variable seleccionada del grupo que consiste de la SEQ ID NO: 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 109 ó 110. Las preparaciones pueden formularse de manera adecuada para proporcionar una liberación controlada del compuesto activo. Las preparaciones de liberación controlada pueden lograrse mediante el uso de polímeros para compíejar o absorber el anticuerpo anti-CD38. El suministro controlado puede ejercerse seleccionando las macromoléculas apropiadas (por ejemplo, poliésteres, poliaminoácidos, polivinilo, pirrolidona, etilenovinil-acetato, metilcelulosa, carboximetilcelulosa, o sulfato de protamina) y la concentración de las macromoléculas así como los métodos de incorporación a fin de controlar la liberación. Otro método posible para controlar la duración de acción mediante preparaciones de liberación controlada es incorporar el anticuerpo anti-CD38 en partículas de un material polimérico tal como poliésteres, poliaminoácidos, hidrogeles, poli (ácido láctico) o copolímeros de vinilacetato de etileno.

Alternativamente, en lugar de incorporar estos agentes en partículas poliméricas, es posible atrapar estos materiales en microcápsulas preparadas, por ejemplo, mediante técnicas de coacervación o mediante polimerización interfacial, por ejemplo, hidroximetilcelulosa o microcápsulas de gelatina y microcápsulas de poli (metilmetacrilato) , respectivamente, o en sistemas coloidales de suministro de droga, por ejemplo, liposomas, microesferas de albúmina, microemulsiones, nanopartículas y nanocápsulas o en macroemulsiones . Tales técnicas se describen en Remington's Pharmaceutical Sciences (1980) . Los compuestos pueden formularse para administración parenteral mediante inyección, e.g., mediante inyección rápida o infusión continua. Las formulaciones para inyección pueden presentarse en forma de dosis unitaria, e.g., en ampolletas, o en envases de dosis múltiple, con un preservativo agregado. Las composiciones pueden tomar formas tales como suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos y pueden contener agentes de formulación tales como agentes de suspensión, de estabilización y/o de dispersión. Alternativamente, el ingrediente activo puede encontrarse en forma de polvo para su constitución con un vehículo adecuado, e.g., agua estéril libre de pirógeno, antes de su uso. Si se desea, las composiciones pueden presentarse en un empaque o dispositivo dispensador, que puede contener una o más formas de dosis unitaria que contienen el ingrediente activo. El empaque, por ejemplo, puede comprender lámina de metal o plástico, tal como un empaque de ampolla. El empaque o dispositivo dispensador puede acompañarse por instrucciones para administración. La invención se comprende además mediante la referencia a los siguientes ejemplos de trabajo, que pretenden ilustrar y, por tanto, no limitan la invención. EJEMPLOS Lineas celulares Las siguientes líneas celulares se obtuvieron de la European Collection of Cell Cultures (ECACC) , la Germán Collection of Microorganisms (DSMZ) o la American Type Culture Collection (ATCC) ; línea celular de hibridoma que produce el anticuerpo monoclonal CD38 de IgGl de ratón OKT10 (ECACC, #87021903), células Jurkat (DSMZ, ACC282), LP-1 (DSMZ, ACC41), RPMI8226 (ATCC, CCL-155) , HEK293 (ATCC, CRL- 1573), CHO-K1 (ATCC, CRL-61), Raji (ATCC, CCL-86) y OPM2 (DSMZ, ACC50) . Células y condiciones de cultivo Todas las células se cultivaron bajo condiciones estandarizadas a 37°C y a 5% de C02 en un incubador humidificado. Las líneas celulares LP-1, RPMI8226, Jurkat y Raji se cultivaron en RPMI1640 (Pan Biotech GmbH, #P04-16500) suplementadas con 10% de FCS (PAN Biotech GmbH, #P30-3302), 50 U/ml de penicilina, 50 ug/ml de estreptomicina (Gibco, #15140.122) y 2 mM de glutamina (Gibco, #25030-024) y, en el caso de las células Jurkat y Raji, tuvo que agregarse adicionalmente 10 mM de Hepes (Pan Biotech GmbH, #P05-01100) y 1 mM de piruvato de sodio (Pan Biotech GmbH, #P04-43100) . Las CHO-K1 y HEK293 se cultivaron en DMEM (Gibco, #10938-025) suplementado con 2 mM de glutamina y 10% de FCS. Los transfectantes estables de CHO-K1 CD38 se mantuvieron en presencia de G418 (PAA GmbH, Pll-012) mientras que para HEK293 fue esencial la adición de 1 mM de piruvato de sodio. Después de la transfección transitoria de HEK293 el 10% de FCS se reemplazó con IgG FCS ultra bajo (Invitrogen, #16250-078) . La línea celular OKT10 se cultivó en IDMEM (Gibco, #31980-022) suplementado con 2 mM de glutamina y 20% de FCS.

Preparación de suspensiones unicelulares a partir de sangre periférica Todas las muestras de sangre se tomaron después del consentimiento informado. Las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) se aislaron mediante Histopaque®-1077 (Sigma) de acuerdo con las instrucciones del fabricante de donantes sanos. Las células de glóbulos rojos se agotaron a partir de estas suspensiones celulares mediante incubación en amortiguador de lisis ACK (0.15 M de NH4C1, 10 mM de KHC03, 0.1 M de EDTA) durante 5 minutos a temperatura ambiente o un derivado comercial (Bioscience, #00-4333) . Las células se lavaron dos veces con PBS y después se procesaron adicionalmente para citometría de flujo o ADCC (ver abajo) . Citometria de flujo ("FACS") Todas las coloraciones se llevaron a cabo en placas de cultivo de 96 pozos de fondo redondo (Nalge Nunc) con 2 x 105 células por pozo. Las células se incubaron con anticuerpos Fab o IgG a las concentraciones indicadas en 50 ul de amortiguador FACS (PBS, 3% de GCS, 0.02% de NaN3) durante 40 minutos a 4°C. Las células se lavaron dos veces y después se incubaron con IgG (H +L) F(ab')2 de cabra antihumano o cabra anti-ratón conjugado con P-ficoeritrin (PE) (Jackson Immuno Research), diluido a 1:200 en amortiguador FACS, durante 30 minutos a 4°C. las células se lavaron de nuevo, se resuspendieron en 0.3 ml de amortiguador FACS y después se analizaron mediante citometría de flujo en un FACSCalibur (Becton Dickinson, San Diego, CA) . Para los análisis Stachard en base a FACS las células RPMI8226 se colorearon con 12 diluciones diferentes (l:2n) iniciando a una concentración final de 12.5 ug/ML (IgG). Al menos dos mediciones independientes se utilizaron para cada concentración y los valores KD se extrapolaron a partir de las intensidades de fluorescencia media de acuerdo con Chamow et al., (1994) . Resonancia de plasmón de superficie Las constantes de cinética Kon y KQff se determinaron con diluciones en serie de la unión de Fab respectiva a la proteína de fusión de CD38-Fc covalentemente inmovilizada utilizando el instrumento BlAcore 3000 (Biacore, Uppsaka, Suecia) . Para la inmovilización de antígeno covalente se utilizó química de acoplamiento de amina EDC-NHS estándar. Para el acoplamiento directo de la proteína de fusión Fc de CD38, se recubrieron chips señor CM5 (Biacore) con -600-700 RU en 10 mM de amortiguador de acetato, pH 4.5. Para la célula de flujo de referencia se utilizó una cantidad respectiva de HSA (albúmina de suero humano) . Las mediciones de cinética se efectuaron en PBS (136 mM NaCl, 2.7 mM de KCl, 10 mM de Na2HP0 , 1.76 mM de KH2P04 pH 7.4) a una tasa de flujo de 20 ul/min, utilizando un rango de concentración de Fab de 1.5-500 nM. El tiempo de inyección para cada concentración fue de 1 minuto, seguido por una fase de disociación de 2 minutos. Para la regeneración se utilizaron 5 ul de 10 mM de HCl. Todos los sensogramas se ajustaron localmente utilizando software de evaluación BIA 3.1 (Biacore) . EJEMPLO 1 : Generación de anticuerpos a partir de bibliotecas HuCAL Para la generación de anticuerpos terapéuticos contra CD38, se llevaron a cabo selecciones con la biblioteca de despliegue fago MorphoSys HuCAL GOLD®. La HuCAL GOLD® es una biblioteca de Fab en base al concepto HuCAL® (Knappik et al., 2000, Krebs et al., 2001), en el cual todas las seis CDRs se diversifican, y que emplea la tecnología Cys Display™ para enlazar fragmentos Fab a la superficie fago (Lóhning, 2001). A. Rescate del Fagémido, amplificación y purificación fago La biblioteca de fagémido HuCAL GOLD® se amplificó en medio 2 x TY conteniendo 34 ug/ml de cloranfenicol y 1% de glucosa (2 x TY-GC) . Después de una infección fago de auxilio (VCSM13) a un OD600 de 0.5 (30 minutos a 37°C sin agitación; 20 minutos a 37°C agitando a 250 rpm), las células se giraron (4120 g; 5 minutos; 4°C) , se resuspendieron en 2 x TY/34 ug/ml de cloranfenicol/50 ug/ml de canamicina, y se cultivaron durante la noche a 22°C. Los fagos se precipitaron en PEG a partir del sobrenadante, se resuspendieron en PBS/20% glicerol, y se almacenaron a -80°C. la amplificación fago entre dos rondas de lavado en batea se condujo como sigue: Las células TG1 en fase mid-log se infectaron con los fagos eluidos y se colocaron en placas sobre agar LB suplementado con 1% de glucosa y 34 ug/ml de cloranfenicol (LB-CG) . Después de una incubación durante la noche a 30°C, las colonias se rasparon, se ajustaron a un OD600 de 0.5 y se agregó el fago auxiliar como se describió anteriormente . B. Lavados en batea con HuCAL GOLD® Para las selecciones de HuCAL GOLD® se dividieron los fagos de anticuerpo en tres depósitos correspondientes a diferentes genes maestros VH (depósito 1: VH1/5 lambda kappa, depósito 2: VH3 lambda kappa, depósito 3: VH2/4/6 lambda kappa) . Estos depósitos se sometieron individualmente a 3 rondas de lavado en batea de las células completas en células CHO-Kl que expresan CD38 seguido por la elución de pH y una etapa de post-absorción en células CHO-Kl CD38-negativo para el agotamiento de los fagos de anticuerpo irrelevantes. Finalmente los fagos de anticuerpo restantes se utilizaron para infectar células TG1 de E. coli. Después de la centrifugación, la pildora bacteriana se resuspendió en medio 2 x TY, se colocó en placas de agar y se incubó durante la noche a 30°C. Los clones seleccionados se rasparon entonces de las placas, los fagos se rescataron y se amplificaron. La segunda y tercera rondas de selecciones se llevaron a cabo como la inicial. Los insertos que codifican para Fab de los fagos HuCAL GOLD® seleccionados se sub-clonaron dentro del vector de expresión pMORPH®x9_Fab_FS (Rauchenberger et al., 2003) para facilitar la rápida expresión del Fab soluble. El ADN de los clones seleccionados se digirió con Xbal y EcoRI cortando así el inserto que codifica para Fab (ompA-VLCL y phoA-Fd) y se clonó dentro del vector Xbal/EcoRI cortado pMORPH®x9_Fab_FS. El Fab expresado en este vector contiene dos marcas de terminal C (FLAG™ y Strep-tag® II) para su detección y purificación. EJEMPLO 2 : Análisis biológicos ' La citotoxicidad celular dependiente del anticuerpo (ADCC) y la citotoxicidad dependiente del complemento se midió de acuerdo con un protocolo publicado en base al análisis de citometría de flujo (Naundorf et al., 2002) como sigue. ADCC: Para las mediciones de ADCC, las células objetivo (T) se ajustaron a 2.0E+05 células/ml y se marcaron con 100 ng/ml de Calcein AM (Molecular Probes, C-3099) en medio RPMI1640 (Pan Biotech GmbH) durante 2 minutos a temperatura ambiente. La calceina residual se removió mediante 3 etapas de lavado en medio RPMI1640. En paralelo, las PBMC se prepararon como una fuente para células efectoras (citotóxicos naturales) (E) , ajustadas a 1.0E+07 y mezcladas con las células objetivo marcadas para producir una relación final de E:T de 50:1 o menos, dependiendo de las condiciones del análisis. Las células se lavaron una vez y la mezcla celular se resuspendió en 200 ul del medio RPMI1640 conteniendo el anticuerpo respectivo a diferentes diluciones. La placa se incubó durante 4 horas bajo condiciones estandarizadas a 37°C y 5% de C02 en un incubador humidificado. Previo al análisis FACS, las células se marcaron con yoduro de propidio (Pl) y se analizaron mediante citometría de flujo (Beckton Dickinson) . Se contaron entre 50.000 y 150.000 eventos para cada análisis. La siguiente ecuación dio lugar a la actividad citotóxica [en %] : EDA X 100 ELA + EDA con EDA = eventos de células muertas (calceina + células coloreadas con Pl) , y ELA = eventos de células vivas (células coloreadas con calceina) CDC: Para las mediciones de CDC, se agregaron transfectantes 5.0E+04 CD38 CHO-Kl a una placa de pozos de microtitulación (Nunc) conjuntamente con una dilución de 1:4 de suero humano (Sigma #S-1764) y el anticuerpo respectivo. Todos los reactivos y células se diluyeron en medio RPMI1640 (Pan Biotech GmbH) suplementado con 10% de FCS. La mezcla de reacción se incubó durante 2 horas bajo condiciones estandarizadas a 37°C y 5% de C02 en un incubador humidificado. Como controles negativos sirvieron ya sea el complemento termoinactivado o los transfectantes de CD38 sin anticuerpo. Las células se marcaron con Pl y se sometieron a análisis FACS. En total se contaron 5000 eventos y el número de células muertas en diferentes concentraciones de anticuerpo utilizadas para la determinación de los valores EC50. La siguiente ecuación dio lugar a la actividad citotóxica [en •s j . con ED = eventos de células muertas (células coloreadas con Pl), y ELC = eventos de células vivas (no coloreadas) Se utilizaron los valores de citotoxicidad de un total de 12 diferentes diluciones de anticuerpo (l:2n) en triplicado en ADCC y en duplicado en CDC para cada anticuerpo a fin de obtener los valores EC-50 con un software de análisis estándar (PRISM®, Graph Pad Software) . EJEMPLO 3: Generación de transfectantes CD38 estables y proteínas de fusión Fc de CD38 A fin de generar proteínas CD38 para lavado en batea y visualización tuvieron que establecerse dos diferentes sistemas de expresión. La primera estrategia incluyó la generación de proteína de fusión Fc de CD38 que se purificó a partir de los sobrenadantes después de una transfección transitoria de células HEK293. La segunda estrategia implicó la generación de una línea celular CHO-KI estable para alta expresión de superficie de CD38, para utilizarse en la selección de fagos de anticuerpo mediante lavado en batea de células completas. Como una etapa inicial, se utilizaron células Jurkat (DSMZ ACC282) para la generación de ADNc (Invitrogen) seguido por la amplificación de la secuencia de codificación de CD38 completa utilizando iniciadores complementarios a los primeros 7 y a los últimos 9 codones de CD38, respectivamente (iniciador MTE001 & MTE002rev; Tabla 4). El análisis de secuencia del inserto CD38 confirmó la secuencia de aminoácidos publicada por Jackson et al., (1990) excepto por la posición 49, que reveló una glutamina en lugar de una tirosina como se describió por Nata et al., (1997). Para la introducción de sitios de restricción de endonucleasa y la clonación dentro de diferentes derivados del vector de expresión pcDNA3.1 (Stratagene), el producto de PCR purificado sirvió como plantilla para la re-amplificación del gen completo (iniciadores MTE006 & MTE007rev. Tabla 4) o una parte (iniciadores MTE004 & MTE009rev, Tabla 4) del mismo. En el último caso, se amplificó un fragmento que codifica para el dominio extracelular (aa 45 a 300) y se clonó en marco entre una secuencia humana guía Vkappa y una secuencia humana Fc-gamma 1. Este vector sirvió como un vector de expresión para la generación de proteína de fusión FC de CD38 soluble. Otro derivado de pcDNA3.1 sin secuencia guía se utilizó para la inserción del gen CD38 de longitud total. En este caso, un codón de paro en frente de la región de codificación de Fc y la secuencia guía faltante dieron lugar a la expresión de superficie de CD38. Las células HEK293 se transfectaron de manera transitoria con el vector de proteína de fusión de Fc para la generación de la proteína de fusión Fc de CD38 soluble, e, en el caso del derivado de longitud total, las células CHO-Kl se transfectaron para la generación de una línea celular estable que expresa CD38. Tabla 4; *conduciendo hacia un codón de paro (TGA) en la orientación de sentido. EJEMPLO 4 : Clonación, expresión y purificación de HuCAL® IgGl: A fin de expresar la IgG de longitud total, los fragmentos del dominio variable de las cadenas pesada (VH) y ligera (VL) se subclonaron a partir de vectores de expresión Fab dentro de vectores pMORPH®_hIg apropiados (ver Figuras 7 a 9) . Se utilizaron pares de restricción de endonucleasa Blpl/Mfel (preparación de inserto) y BlpI/EcoRI (preparación de vector) para subclonar el fragmento del dominio VH dentro de pMORPH®_hIgGl . Los pares de enzimas EcoRV/Hpal (inserto lambda) y EcoRV/BsiWI (inserto kappa) se utilizaron para subclonar el fragmento del dominio VL dentro de los vectores pMORPH®_hIgkappa_l o pMORPH®_h_Iglambda_l . Las construcciones de IgG resultantes se expresaron en células HEK293 (ATCC CRL-1573) mediante transfección transitoria utilizando técnica de co-precipitación estándar de fosfato de calcio-ADN. Las IgGs se purificaron a partir de los sobrenadantes del cultivo celular mediante cromatografía de afinidad mediante una columna de proteína A Sepharose. Además, el procesamiento aguas abajo incluyó un intercambio de amortiguador mediante filtración en gel y filtración estéril de IgG purificada. El control de calidad reveló una pureza de >90% mediante SDS-PAGE de reducción y de >90% de IgG monomérica determinada por cromatografía analítica de exclusión de tamaño. El contenido de endotoxinas del material se determinó mediante un análisis de cinética en base a LAL (Cambrex European Endotoxin Testing Service, Bélgica) . EJEMPLO 5 : Generación y producción de OKT10 quimérico (chOKTIO; SEQ ID NOS: 72 y 73) Para la construcción de chOKTIO se amplificaron las regiones VH y VL de ratón mediante PCR utilizando el ADNc preparado a partir de la línea celular de hibridoma murino OKT10 (ECACC #87021903) . Se utilizó un conjunto de iniciadores como se publicó (Dattamajumdar et al., 1996; Zhou et al., 1994). Se utilizaron los productos de PCR para Topócloning (Invitrogen; vector pCRII) y las colonias únicas se sometieron a análisis de secuencia (iniciador inverso M13) que reveló dos diferentes secuencias de cadena ligera kappa y una secuencia de cadena pesada. De acuerdo con las alineaciones de secuencia (base de datos de la secuencia de EMBL-nucleótido) y la literatura (Krebber et al., 1997) una de las secuencias kappa pertenece a un repertorio intrínseco del socio de fusión de célula de tumor X63Ag8.653 y por tanto no pertenece al anticuerpo OKT10. En consecuencia se utilizó solamente la nueva secuencia kappa y el fragmento VH único para clonación posterior. Ambos fragmentos se re-amplificaron para la adición de sitios de restricción de endonucleasa seguido por la clonación dentro de los vectores de expresión de IgGl pMORPH® respectivos. Las secuencias para la cadena pesada (SEQ ID NO: 72) y la cadena ligera (SEQ ID NO: 73) se proporcionan en la Figura 6. Las células HEK293 se transfirieron transitoriamente y el sobrenadante se analizó en FACS para la unión del anticuerpo OKT10 quimérico a la línea celular Raji que sobre-expresa CD38 (ATCC). EJEMPLO 6 : Análisis de reactividad cruzada mediante FACS (MOR 03087 y MOR 03088) 1. Materiales y Métodos Las Figuras 11 y 12 muestran los análisis FACS de linfocitos y eritrocitos: las muestras de sangre tratadas con EDTA se obtuvieron de humanos sanos (después de obtener el consentimiento informado) y de primates no humanos (macacos de la India, macacos y mono titís) y se sometieron a centrifugación de pendiente de densidad utilizando el sistema de separación celular Histopaque de acuerdo con las instrucciones del distribuidor (Sigma) . Para el análisis FACS, se incubaron las células de la interfase (fracción PBMC) y la pildora (fracción de eritrocitos) con anticuerpos HuCAL® anti-CD38 en diferentes formatos. En la Figura 13 se muestra una revisión de los perfiles de reactividad cruzada de diferentes anticuerpos anti-CD38. 2. Sumario y conclusión: Los resultados muestran que entre todos los anticuerpos CD38 solamente MOR03087 y MOR03088 mostraron reactividad cruzada a PBMCs de mono tití. Sorprendentemente, la expresión de CD38 en eritrocitos de mono tití es casi no detectable en comparación con la fuerte expresión en eritrocitos de macaco y macaco de la India. Por tanto, la expresión de CD38 en eritrocitos de mono tití y en PBMCs es más reflejante que en la situación humana, en donde la expresión de CD38 es baja en eritrocitos y de moderada a alta en PBMCs. El mono tití, en consecuencia, se considera adecuado como modelo para estudiar la toxicidad de moléculas que se unen a CD38. En base al estudio anterior, se decidió optimizar adicionalmente los enlaces MOR03087 y MOR03088, como se describe en otra parte en la especificación, ver, e.g., el párrafo referente a "Anticuerpos para uso en la invención". Una persona experta en la técnica esperaría que también los anticuerpos derivados de los originales muestren un perfil de reactividad cruzada comparable. Referencias : Antonelli, A., Baj . , G., Marchetti., P., Fallahi, P., Surico, N., Pupilli, C, Malavasi, F., Ferrannini, P., (2001). Human anti-CD38 autoantibodies raise intracellular calcium and stimulate insulin reléase in human pancreatic islets. (Los auto-anticuerpos anti-CD38 humanos dan lugar al calcio intracelular y estimulan la liberación de insulina en isletas pancreáticas humanas) Diabetes 50:985-991. Ausiello C.M., Urbani F., Lande R., la Sala A., Di Cario B., Baj G., Surico N., Hilgers J. , Deaglio S., Funaro A., Malavasi F., (2000) Functional topography of discrete domains of human CD38. (Topografía funcional de dominios discretos de CD38 humano) . Tissue Antigens (Antígenos de tejido) 2000 Dic; 56 ( 6) : 539-47. Chamow S.M., Zhang D.Z., Tan X.Y., Mathre S.M., Marsters S.A., Peers D.H., Byrn R.A., Ashknazi A., Junghans R.P., (1994). Humanized bispecific immunoadhesin-antibody that retargets CD3+ effectors to kill HIV-1-infected cells. (anticuerpo de inmunoadhesina humanizado biespecífico que re dirige los efectores CD3+ para destruir células infectadas con VIH-1) . J. Immunol., 1994 Nov 1; 153 ( 9) : 4268-80. Dattamajumdar A.K., Jacobsen D.P., Hood L.E., Osman G.E., (1996). Rapid cloning of rearranged mouse immunoglobulin variable genes. (Clonación rápida de genes variables de inmunoglobulina de ratón re-ordenados) .

Immunogenetics 43, 141-151. Ellis J.H., Barber K.A., Tutt A., Hale C, Lewis A.P., Glennie M.J., Stevenson G.T., y Crowe J. (1995).

Engineered anti-CD38 monoclonal antibodies for immunotherapy of múltiple mieloma (Anticuerpos monoclonales anti-CD38 fabricados para la inmunoterapia de mieloma múltiple) . J.

Immunol., 155:925-937. Ferrero E., Orciani M., Vacca P., Ortolan E., Crovella S., Titti F. , Saccuci F., Malavasi F., (2004). Characterization and phylogenetic epitope mapping of CD38 ADPR cyclase in the cynomolgus macaque. (Caracterización y trazado del epítope filogenético de CD38 ADPR ciclasa en el macaco). BMC I munology 5:21. Flavell D.J., Boehm D.A., Noss A., Warnes S.L., y Flavell S.U., Therapy of human T-cell acute lymphoblastic leukaemia with a combination of anti-CD7 and anti-CD38-saporin immunotoxins is significantly better than therapy with each individual immunotoxin, (La terapia de leucemia linfoblástica aguda de célula T humana con una combinación de inmunotoxinas de saporina anti-CD7 y anti-CD38 es significativamente mejor que la terapia con cada inmunotoxina individual) Br. J. Cáncer 84:571-578 (2001). Funaro A., Spagnoli G.C., Ausiello C.M., Alessio M., Roggero S., Delia D. , Zaceólo M., y Malavasi F. , (1990). Involvement of the multilineage CD38 molecule in a unique pathway of cell activation and proliferation (Implicación de la molécula CD38 de linaje múltiple en una trayectoria única de activación y proliferación celular). J. Immunol., 145, 2390-2396. Golay J. , Zaffaroni, Luisella, Vaccari T., Lazzari M., Borleri G.M., Bernasconi D., Tedesco F., Rambaldi Al., Introna M., (2000). Biological response of B lymphoma to anti-CD20 monoclonal antibody in vitro; CD55 and CD59 regúlate complement-mediated cell lysis. (Respuesta biológica del linfoma B al anticuerpo monoclonal anti-CD20 in vitro; CD55 y CD59 regulan la lisis celular mediada por el complemento). Blood 95:3900-3908. Hayashi T., Treon S.P., Hideshima T., Tai Y. T., Akiyama M., Richardson R. , Chauhan D., Grewal I.S., Anderson K.C., (2003). Recombinant humanized anti-CD40 monoclonal antibody triggers autologous antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity against múltiple mieloma. (El anticuerpo monoclonal anti-CD40 humanizado recombinante desencadena la citotoxicidad autóloga mediada por la célula dependiente del anticuerpo contra el mieloma múltiple). Br. J. Heamatol., 121, 592-596. Hoshino S., Kukimoto I., Kontani K., Inoue S., Kanda Y., Malavasi F. , Katada T., (1997). Mapping of the catalytic and epitopic sites of human CD38/NAD+glycohydrolase to a functional domain in the carboxyl terminus. (Trazado de los sitios catalíticos y epitópicos de CD38/NAD+glicohidrolasa a un dominio funcional en la terminal carboxilo). J. Immunol., 158 (2) : 741-7. Jackson D.G., Bell J.L., (1990). Isolation of a cDNA encoding the human CD38 (TÍO) molecule, a cell surface glycoprotein with an unusual discontinous pattern of expression during lymphocyte differentiation. (Aislamiento de un ADNc que codifica para la molécula de CD38 humano (TÍO) , una glicoproteína de superficie celular con un patrón discontinuo inusual de expresión durante la diferenciación de linfocitos). J. I munol., 144 (7 ): 2811-5. Knappik A., Ge L., Honegger A., Pack P., Fischer M., Wellnhofer G.,, Hoess A., olle J. , Pluckthun A., y Virnekas B., (2000). Fully synthetic human combinatorial antibody libraries (HuCAL) based on modular consensus frameworks and CDRs randomized with trinucleotides . (Bibliotecas de anticuerpo combinatorio humano totalmente sintéticas (HuCAL) en base a las estructuras de consenso modulares y a las CDRs aleatorizadas con trinucleótidos) . J. Mol. Biol., 296, 57-86. Kono K., Takahashi A., Ichihara F. , Sugai H., Fujii H., y Matsumoto Y., (2002). Impaired antibody-dependent cellular cytotoxicity mediated by Herceptin in patients with gastritic cáncer. (citotoxicidad celular dañada dependiente del anticuerpo mediada por herceptin en pacientes con cáncer gástrico). Cáncer Res., 62, 5813-5817. Konopleva M., Estrov Z., Zhao S., Andreeff M., Mehta K. , (1998). Ligation of cell surface CD38 protein with agonistic monoclonal antibody induces a cell growth signal in mieloid leukemia cells. (La ligación de una proteína de CD38 de superficie celular con anticuerpos monoclonales agonísticos induce una señal de crecimiento celular en células de leucemia mieloides) . J. Immunol., 161 ( 9) : 4702-8. Krebber A., Bornhauser S., Burmester J. , Honegger A., illuda J. , Bossard H.R., Pluckthun A., (1997). Reliable cloning of functional antibody variable domains from hybridomas and spleen cell repertoires employing a reengineered phage display system. (Clonación confiable de dominios variables de anticuerpo funcional de repertorios de hibridomas y células de bazo empleando un sistema de despliegue fago re-fabricado). J. Imm. Meth., 201, 35-55. Krebs B., Rauchenberger R., Reiffert S., Rothe C, Tesar M., Thomassen E., Cao M., Dreier T., Fischer D., Hoss A., Inge L., Knappik A., Marget M., Pack P., Meng X.Q., Schier R., Sohlemann P., Winter J., Wolle J., y Kretzschmar T., (2001). High-throughput generation and engineering of recombinant human antibodies. (Generación y fabricación de alto rendimiento de anticuerpos recombinantes humanos) . J. Immunol Methods 254, 67-84. Lóhning C, (2001). Novel methods for displaying (poli) peptides/proteins on bacteriophage partióles via disulfide bonds . (Nuevos métodos para desplegar (poli) péptidos/proteínas en partículas de bacteriófago mediante uniones de disulfuro). WO 01/05950. Malavasi F. , Caligaris-Cappio F., Milanese C, Dellabona P., Richiardi P., Carbonara A. O., (1984). Characterization of a murine monoclonal antibody specific for human early lymphohemopoietic cells. (Caracterización de un anticuerpo monoclonal murino específico para células linfohemopoyéticas humanas tempranas). Hum. Immunol., 9:9- . Maloney D.G., Smith B., y Rose A., (2002).

Rituximab: Mechanism of action and resistance. (Rituximab: Mecanismo de acción y resistencia). Sem. Oncol., 29, 2-9. Marchetti P., Antonelli A., Lupi R. , Marselli L., Fallahi P. , Nesti C, Baj G., Ferrannini E., (2002).

Prolongued in vitro exposure to autoantibodies against CD38 impairs the function and survival of human pancreatic islets.

(La prolongada exposición in vitro a auto-anticuerpos contra CD38 daña la función y supervivencia de isletas pancreáticas humanas). Diabetes 51, 474-477. Mehta K., Ocanas L., Malavasi F., Marks J.W., Rosenblum M.G., (2004). Retinoic acid-induced CD38 antigen as a target for immunotoxin-mediated killing of leukemia cells. (Antígeno CD38 inducido por ácido retinoico como un objetivo para la citotoxicidad de células de leucemia mediadas por inmunotoxinas). Mol. Cáncer Ther., 3, 345-352. Namba M., Otsuki T., Morí M., Togawa A., Wada H., Sugihara T., Yawata Y., Kimoto T., (1989). Establishment of five human myeloma cell lines. (Establecimiento de cinco líneas celulares de mieloma humano) . In vitro cell dev.

Biol., 25:723. Nata K., Takamura T., Karasawa T., Kumagai T., Hashioka W., Tohgo A., Yonekura H., Takasawa S., Nakamura S., Okamoto H., (1997). Human gene encoding CD38 (ADP-ribosyl cylase/cyclic ADP-ribose hydrolase) : organization, nucleotide sequence and alternative splicing. (Gen humano que codifica para CD38 (ADP-ribosil ciclasa/ADP-ribosa hidrolasa cíclica) : organización, secuencia de nucleótidos y división alternativa). Gene 18-6 (2) : 285-92. Naundorf S., Preithner S., Mayer P., Lippold S., Wolf A., Hanakam F. , Fichtner I., Kufer P., Raum T., Riethmüller G., Baeuerle P.A., Dreier T., (2002). Int. J. Cáncer 100, 101-110. Pluckthun A., y Pack P., (1997). New protein engineeering approaches to multivalent and bispecific antibody fragments. (Nuevos procedimientos de fabricación de proteínas para fragmentos de anticuerpo multivalentes y biespecíficos) . Immunotechnology 3(2):83-105. Rauchenberger R., Borges E., Thomassen-Wolf E., Rom E., Adar R. , Yaniv Y., Malka M., Chumakov I., Kotzer S., Resnitzky D. , Knappik A., Rieffert S., Prasler J. , Jury K., Waldherr D., Bauer S., Kretzschmar T., Yayon A., Rothe C, (2003) . Human combinatorial Fab library yielding specific and functional antibodies against the human fibroblasr growth factor receptor 3. (Biblioteca Fab combinatoria humana que produce anticuerpos específicos y funcionales contra el receptor 3 del factor de crecimiento de fibroblasto humano) . J. Biol. Chem., 278 (40) : 38194-205. Reff M.E., Carner K. , Chambers K.S., Chinn P.C., Leonard J.E., Raab R., Newman R.A., Hanna N., Anderson D.R., 81994). Depletion of B cells in vivo by a chimeric mouse human monoclonal antibody to CD20. (Agotamiento de células B in vivo mediante un anticuerpo monoclonal de ratón-humano para CD20) . Blood 83:435-445. Santin A.D., Bellone S., Gokden M., Palmieri M., Dunn D., Agha J. , Román J.J., Hutchins L., Pecorelli S., O'Brian T., Cannon M.J., Parham G.P., (2002). Overexpression of HER-2/Neu in Uterine serous papillary cáncer. (Sobreexpresión de HER-2/Neu en cáncer papilar seroso uterino). Cl. Cáncer Res., 8:1271-1279. Shinkawa T., Nakamura K. , Yamane N., Shoji-Hosaka E., Kanda Y., Sakurada M., Uchida K., Anazawa H., Satoh M., Yamasaki M., Hanai N., Shitara K. , (2003). The absence of fucose oligosaccharides shows the critical role of enhancing antibody-dependent cellular cytotoxicity. (La ausencia de oligosacáridos de fucosa muestra el papel crítico de mejoramiento de la citotoxicidad celular dependiente del anticuerpo). J. Biol. Chem., 278, 3466-3473. Zhou ?., Fisher R.J., Papas T.S., (1994).

Optimization of primer sequences for mouse scFv repertoire display library construction. (Optimización de secuencias iniciadoras para la construcción de bibliotecas de despliegue del repertorio de scFv de ratón). Nucleic Acids Res., 22:888-889.

Claims (44)

1. REIVINDICACIONES 1. Una región de unión a antígeno aislado que es específica para CD38, que comprende (i) una región H-CDR3 representada en la SEQ ID NO: 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 ó 106, o (ii) una región H-CDR3 que tiene al menos un sesenta por ciento de identidad con una región H-CDR3 representada en la SEQ ID NO: 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 ó 106.
2. 2. Una región de unión a antígeno aislado, de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende además (i) una región H-CDR2 representada en la SEQ ID NO: 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 ó 106, o (ii) una región H-CDR2 que tiene al menos un sesenta por ciento de identidad con una región H-CDR2 representada en la SEQ ID NO: 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 ó 106.
3. 3. Una región de unión a antígeno aislado de acuerdo con la reivindicación 2, que comprende además (i) una región H-CDR1 representada en la SEQ ID NO: 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 ó 106, o (ii) una región H-CDR1 que tiene al menos un sesenta por ciento de identidad con una región H-CDR1 representada en la SEQ ID NO: 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 ó 106.
4. 4. Un anticuerpo aislado o fragmento funcional del mismo que es específico para CD38, que comprende (i) una cadena pesada variable representada en la SEQ ID NO: 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 ó 106, o (ii) una cadena pesada variable que tiene al menos un sesenta por ciento de identidad con una cadena pesada variable representada en la SEQ ID NO: 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 ó 106.
5. 5. Una región de unión a antígeno aislado que es específica para CD38, que comprende (i) una región L-CDR3 representada en la SEQ ID NO: 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 109 ó 110, o (ii) una región L-CDR3 que tiene al menos un sesenta por ciento de identidad con una región L-CDR3 representada en la SEQ ID NO: 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 109 ó 110.
6. 6. Una región de unión a antígeno aislado de acuerdo con la reivindicación 5, que comprende además (i) una región L-CDR2 representada en la SEQ ID NO: 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 109 ó 110, o (ii) una región L-CDR2 que tiene al menos un sesenta por ciento de identidad con una región L-CDR2 representada en la SEQ ID NO: 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 109 ó 110.
7. 7. Una región de unión a antígeno aislado de acuerdo con la reivindicación 6, que comprende además (i) una región L-CDRl representada en la SEQ ID NO: 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 109 ó 110, o (ii) una región L-CDRl que tiene al menos un sesenta por ciento de identidad con una región L-CDRl representada en la SEQ ID NO: 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 109 ó 110.
8. 8. Un anticuerpo aislado o fragmento funcional del mismo, que comprende (i) una cadena ligera variable representada en la SEQ ID NO: 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 109 ó 110, o (ii) una cadena ligera variable que tiene al menos un sesenta por ciento de identidad con una cadena ligera variable representada en la SEQ ID NO: 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 109 ó 110.
9. 9. Una inmunoglobulina aislada de acuerdo con la reivindicación 4 u 8, que es una IgG.
10. 10. Una inmunoglobulina aislada de acuerdo con la reivindicación 9, que es una IgGl.
11. 11. Una cadena pesada variable de una región de unión a antígeno aislado que se encuentra codificada por (i) una secuencia de ácidos nucleicos que comprende la SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90 ó 91, o (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se híbrida bajo condiciones de alta rigurosidad a la cadena complementaria de la SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90 ó 91, en donde dicha región de unión a antígeno es específica para CD38.
12. 12. Una cadena ligera variable de una región de unión a antígeno aislado que se encuentra codificada por (i) una secuencia de ácidos nucleicos que comprende la SEQ ID NO: 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 107 ó 108, o (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se híbrida bajo condiciones de alta rigurosidad a la cadena complementaria de la SEQ ID NO: 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 107 ó 108, en donde dicho anticuerpo o fragmento funcional del mismo es específico para CD38.
13. 13. Una secuencia de ácidos nucleicos aislada que codifica para una región de unión a antígeno de un anticuerpo humano o fragmento funcional del mismo, que es específica para CD38.
14. 14. Una secuencia de ácidos nucleicos que codifica para una cadena pesada variable de una región de unión a antígeno aislado, que comprende (i) una secuencia seleccionada del grupo que consiste de las SEQ ID NOS: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90 ó 91, o (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se híbrida bajo condiciones de alta rigurosidad a la cadena complementaria de la SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, '85, 86, 87, 88, 89, 90 ó 91, en donde dicha región de unión a antígeno es específica para CD38.
15. 15. Una secuencia de ácidos nucleicos que codifica para una cadena ligera variable de una región de unión a antígeno aislado, que comprende (i) una secuencia seleccionada del grupo que consiste de las SEQ ID NOS: 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 107 y 108, o (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se híbrida bajo condiciones de alta rigurosidad a la cadena complementaria de la SEQ ID NO: 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 107 ó 108, en donde dicha región de unión a antígeno es específica para CD38.
16. 16. Un vector que comprende una secuencia de ácidos nucleicos de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 13-15.
17. 17. Una célula aislada que comprende un vector de acuerdo con la reivindicación 16.
18. 18. Una célula aislada de acuerdo con la reivindicación 17, en donde dicha célula es bacteriana.
19. 19. Una célula aislada de acuerdo con la reivindicación 17, en donde dicha célula es de mamífero.
20. 20. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo o fragmento funcional del mismo de acuerdo con la reivindicación 4 u 8, y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable para la misma.
21. 21. Un método para tratar un trastorno o condición asociado con la presencia no deseada de células CD38+. que comprende administrar a un sujeto con necesidad del mismo una cantidad efectiva de la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 20.
22. 22. Un método de acuerdo con la reivindicación 21, en donde dicho trastorno o condición es una enfermedad hematológica.
23. 23. Un método de acuerdo con la reivindicación 22, en donde dicha enfermedad hematológica se toma de la lista de mieloma múltiple, leucemia linfocítica crónica, leucemia mielógena crónica, leucemia mielógena aguda y leucemia linfocítica aguda.
24. 24. Un método de acuerdo con la reivindicación 21, en donde dicho trastorno o condición es una enfermedad inflamatoria.
25. 25. Un método de acuerdo con la reivindicación 24, en donde dicha enfermedad inflamatoria se toma de la lista de artritis reumatoide y lupus eritematoso sistémico.
26. 26. Una región de unión a antígeno aislado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-3 y 5-7, en donde dicha identidad de secuencia es de al menos 80%.
27. 27. Un método para inducir la citotoxicidad específica de células tumorales que expresan CD38, en donde dicha citotoxicidad específica se presenta mediante la reticulación de CD38, que comprende la etapa de incubar dichas células en presencia de una cantidad suficiente de un anticuerpo anti-CD38 humano o humanizado aislado o un fragmento funcional del ' mismo, en donde dicho anticuerpo anti-CD38 humano o humanizado comprende (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica para una cadena pesada representada en la SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88,.89, 90 ó 91, o (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se híbrida bajo condiciones de alta rigurosidad a la cadena complementaria de la SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90 ó 91, en donde dicho anticuerpo o un fragmento funcional del mismo, es específico para CD38.
28. 28. Un método para inducir la citotoxicidad específica de células tumorales que expresan CD38, en donde dicha citotoxicidad específica se presenta mediante la reticulación de CD38, que comprende la etapa de incubar dichas células en presencia de una cantidad suficiente de un anticuerpo anti-CD38 humano o humanizado aislado o un fragmento funcional del mismo, en donde dicho anticuerpo anti-CD38 humano o humanizado comprende (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica para una cadena ligera representada en la SEQ ID NOS: 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 107 ó 108, o (ii) unas secuencias de ácidos nucleicos que se hibridan bajo condiciones de alta rigurosidad a la cadena complementaria de la SEQ ID NO: 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 107 ó 108, en donde dicho anticuerpo o un fragmento funcional del mismo es específico para CD38.
29. 29. Un método para inducir la citotoxicidad específica de células tumorales que expresan CD38, en donde dicha citotoxicidad específica se presenta mediante la reticulación de CD38, que comprende la etapa de incubar dichas células en presencia de una cantidad suficiente de un anticuerpo anti-CD38 humano o humanizado aislado o un fragmento funcional del mismo, en donde dicho anticuerpo anti-CD38 humano o humanizado o dicho fragmento funcional del mismo comprende (i) una secuencia de aminoácidos de cadena pesada representada en la SEQ ID NO: 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 ó 106, o (ii) una cadena pesada variable que tiene al menos un sesenta por ciento de identidad con una cadena pesada variable representada en la SEQ ID NO: 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 ó 106.
30. 30. Un método para inducir la citotoxicidad específica de células tumorales que expresan CD38, en donde dicha citotoxicidad específica se presenta mediante la reticulación de CD38, que comprende la etapa de incubar dichas células en presencia de una cantidad suficiente de un t anticuerpo anti-CD38 humano o humanizado aislado o un fragmento funcional del mismo, en donde dicho anticuerpo anti-CD38 humano o humanizado comprende (i) una secuencia de aminoácidos de cadena ligera representada en la SEQ ID NO: 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 109 ó 110, o (ii) una cadena ligera variable que tiene al menos un sesenta por ciento de identidad con una cadena ligera variable representada en la SEQ ID NO: 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 109 ó 110.
31. 31. Un método para detectar la citotoxicidad específica de células tumorales que expresan CD38, mediante la reticulación de CD38, que comprende las etapas de: (i) administrar a un sujeto con necesidad del mismo una cantidad efectiva de un anticuerpo anti-CD38 humano o humanizado o un fragmento funcional del mismo, y (ii) detectar la actividad citotóxica específica de dicho anticuerpo anti-CD38 humano o humanizado o dicho fragmento funcional del mismo.
32. 32. Un método, de acuerdo con la reivindicación 31, en donde dichas células tumorales son de origen humano, de minipig (cerditos vietnamitas) o de conejo.
33. 33.' Un método para detectar la presencia de CD38 en un tejido o una célula de origen de minipig (cerditos vietnamitas), que comprende las etapas de: (i) permitir que un anticuerpo anti-CD38 humano o humanizado o un fragmento funcional del mismo, entre en contacto con dicho CD38, y (ii) detectar la unión específica de dicho anticuerpo anti-CD38 humano o humanizado o un fragmento funcional del mismo, a dichas células CD38 de minipig (cerditos vietnamitas) , en donde dicho anticuerpo o fragmento funcional del mismo es capaz también de unirse específicamente al CD38 de origen humano.
34. 34. Un método de acuerdo con la reivindicación 33, en donde dicho CD38 de origen de minipig (cerditos vietnamitas) se encuentra comprendido dentro de un tipo celular aislado seleccionado del grupo que consiste de sangre periférica, monocito, eritrocito, linfocito, timocito, células muscular, célula de cerebelo, célula de páncreas, célula de nodo linfático, célula de amígdala, célula de bazo, célula de próstata, célula de piel y una célula de la retina.
35. 35. Un método de acuerdo con la reivindicación 34, en donde dicho anticuerpo anti-CD38 humano o humanizado o un fragmento funcional del mismo comprende (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica para una cadena pesada representada en la SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90 ó 91, y/o una secuencia de ácidos nucleicos que codifica para una cadena ligera representada en la SEQ ID NO: 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 107 ó 108 o (ii) una secuencia que tiene al menos el sesenta por ciento de identidad en las regiones de cadena pesada representadas en la SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90 ó 91, y/o una secuencia que tiene al menos el sesenta por ciento de identidad en las regiones de cadena ligera representadas en la SEQ ID NO: 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 107 ó 108.
36. 36. Un método para detectar el CD38 en un eritrocito que expresa CD38, que comprende las etapas de: (i) permitir que un anticuerpo anti-CD38 humano o humanizado o un fragmento funcional del mismo, entre en contacto con dicho eritrocito que expresa CD38, y (ii) detectar la unión específica de dicho anticuerpo anti-CD38 humano o humanizado o un fragmento funcional del mismo, a dichos eritrocitos que expresan CD38, en donde dicho anticuerpo o fragmento funcional del mismo es capaz también de unirse específicamente al CD38 humano de una célula o tejido diferente a los eritrocitos humanos.
37. 37. Un método de acuerdo con la reivindicación 36, en donde dicho anticuerpo o fragmento funcional del mismo es capaz también de unirse específicamente a CD38 humano de una célula que es un linfocito humano.
38. 38. Un método de acuerdo con la reivindicación 36, en donde dicho anticuerpo anti-CD38 humano o humanizado o un fragmento funcional del mismo comprende (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica para una cadena pesada representada en la SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89', 90 ó 91, y/o una secuencia de ácidos nucleicos que codifica para una cadena ligera representada en la SEQ ID NO: 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 107 ó 108 o (ii) una secuencia que tiene al menos el sesenta por ciento de identidad en las regiones de cadena pesada representadas en la SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90 ó 91, y una secuencia que tiene al - - menos el sesenta por ciento de identidad en las regiones de cadena ligera representadas en la SEQ ID NO: 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 107 ó 108.
39. 39. Un método de acuerdo con la reivindicación 36, en donde dicho anticuerpo anti-CD38 humano o humanizado o un fragmento funcional del mismo comprende (i) una secuencia de aminoácidos de cadena pesada representada en la SEQ ID NO: 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 ó 106 y/o una secuencia de aminoácidos de cadena ligera representada en la SEQ ID NO: 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 109 ó 110, o (ii) una secuencia que tiene al menos el sesenta por ciento de identidad en las regiones de cadena pesada representadas en la SEQ ID NO: 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 ó 106 y una secuencia que tiene al menos el sesenta por ciento de identidad en las regiones de cadena ligera representadas en la SEQ ID NO: 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 109 ó 110.
40. 40. Una composición diagnóstica que comprende un anticuerpo o un fragmento funcional del mismo de acuerdo con la reivindicación 4 u 8; y un vehículo o excipiente aceptable.
41. 41. Un anticuerpo aislado o un fragmento funcional del mismo de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende (i) una región H-CDR3 representada en la SEQ ID NO: 21 ó 22 o (ii) una región H-CDR3 que tiene al menos un sesenta por ciento de identidad con el mismo, y que es específica para CD38 humano y CD38 de mono tití.
42. 42. Un anticuerpo aislado o un fragmento funcional del mismo de acuerdo con la reivindicación 5, que comprende (i) una región L-CDR3 representada en la SEQ ID NO: 51 ó 52 o (ii) una región L-CDR3 que tiene al menos un sesenta por ciento de identidad con el mismo, y que es específica para CD38 humano y CD38 de mono tití.
43. 43. Una cadena pesada variable de una región de unión a antígeno aislado de acuerdo con la reivindicación 11, que se encuentra codificada por (i) una secuencia de ácidos nucleicos que comprende la SEQ ID NO: 6 ó 7 o (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se híbrida bajo condiciones de alta rigurosidad a una cadena complementaria de la misma, cuya región de unión a antígeno es específica para CD38 humano y CD38 de mono tití.
44. 44. Una cadena ligera variable de una región de unión a antígeno aislado de acuerdo con la reivindicación 12, que se encuentra codificada por (i) una secuencia de ácidos nucleicos que comprende la SEQ ID NO: 36 ó 37 o (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se híbrida bajo condiciones de alta rigurosidad a una cadena complementaria de la misma, cuya región de unión a antígeno es específica para CD38 humano y CD38 de mono tití.