MX2007016343A - Metodos y composiciones para ser blanco en ifnar2. - Google Patents

Abstract

Se proporcionan anticuerpos monoclonales Anti-IFNAR2 y metodos para utilizarlos.

Description

MÉTODOS Y COMPOSICIONES PARA SER BLANCO EM IFMA 2 SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud es una solicitud no provisional presentada bajo 37 CFR 1.53 (b) (1), que reclama prioridad bajo 35 USC 119 (e) de la solicitud provisional de patente de los E.U.A. No. de Serie 60/692,786 presentada en junio 22, 2005, los contenidos de la cual se incorporan aquí por referencia . CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere al campo de anticuerpos receptores de interferona anti-tipo I, y más particularmente a anticuerpos receptores de interferona anti-tipo I que bloquean el enlace de interferonas tipo I con el segundo componente (IFNAR2) del complejo receptor de interferona tipo I. ANTECEDENTES Las interferonas tipo I (IFNs) son citocinas que tienen efectos pleyotrópicos en una amplia variedad de tipos de células. IFNs se conocen mejor por su actividad anti-viral, pero también tienen funciones anti-bacterianas , anti-protozoarias, inmunomoduladoras y reguladores de crecimiento celular. Las interferonas de tipo I incluyen interferona- a (IFN- ) e interferona-/? ( IFtS- ß ) .

IFN- a humana (hlFN-a) es una familia heterogénea con al menos 23 polipéptidos mientras que hay solo un polipéptido IFN- ? (J. Inferieron Res., 13: 443-444 (1993)). Los sub-tipos hlFN-a muestran más de 70% de homología de secuencia de amino ácido, y hay aproximadamente 25% de identidad de amino ácidos con hlFN-/?. hIFNs-a y hlFN-/? comparten un receptor común . Dos componentes del complejo receptor hlFN-a se han identificado. El cDNA para el primer receptor hlFN-a. (hlFNARl) codifica una proteína receptora 63 kD (reportada en Uze et al., Cell, 60: 225-234 (1990)). Este receptor se somete a glicosilación extensa que le provoca migrar en electroforesis de gel como una proteína mucho más grande de 135 kD . El segundo receptor de interferona, hIFNAR2 (hIFN-a ?R de largo), es una proteína de 115 kD que media un complejo de señalización functional cuando se asocial con hlFNARl (reportado en Domanski et al., J. Biol. Chem., 270: 21606-21611 (1995)). Una variante de IFNAR2, el receptor IFN-a/ ? (hlFN- a ßR corto), es una proteína 55 kD que puede ligar a Tipo I hlFNs pero no puede formar un complejo funcional cuando se asocia con hlFNARl (reportado en Novick et al., Cell, 77: 391-400 (1994)). Este receptor IFU- a / ß parece ser una variante de combinación alterna de hIFNAR2. El producto de expresión hlFNARl no procesado está compuesto por 557 amino ácidos incluyendo un dominio extracellular (ECD) de 409 residuos, un dominio transmembrana de 21 residuos, y un dominio intracelular de 100 residuos como se muestra en la Figura 5 en la página 229 de Uze et al., supra. El ECD de IFNAR1 está compuesto por dos dominios, el dominio 1 y el dominio 2, que están separados por tres motivos prolina. Hay 19% de identidad de secuencia y 50% de homología de secuencia entre los dominios 1 y 2 (Uze et al . , supra) . Cada dominio (D200) está compuesto por aproximadamente 200 residuos y además puede ser subdividido en dos sub-dominios homólogos (SD100) de aproximadamente 100 amino ácidos. El producto de expresión hIFNAR2 no procesado está compuesto por 515 amino ácidos, incluyendo un dominio extracelular (ECD) de 217 residuos, un dominio transmembrana de 21 residuos, y una cola citoplásmica larga de 250 residuos como se ilustra en la Figura 1 en la página 21608 de Domanski et al., J. Biol . Chem. , 37 : 21606-21611 (1995) .

A través del uso de ratones con genes inoperativos knockout IFNAR1, IFNAR1 se ha mostrado que es esencial para la respuesta a IFNs de todo Tipo I (Muller et al., Science, 264: 1918-1921 (1994); Cleary et al., J. Biol. Chem., 269: 18747-18749 (1994)) y para la mediación de transducción de señal IFN específica de especie (Constantinescu et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91: 9602-9606 (1994)). Sin embargo, IFNAR2, no IFNAR1, juega un papel crucial en enlace de ligando (Cohén et al., Mol. Cell Biol. , 15: 4208 (1995)). Benoit et al., J. Immunol . , 150: 707-716 (1993) reportó una anti-IFNARl mAb, 64G12, que se encuentra e inhibe el enlace de IFN-cc2 (IFN-aA) y IFN-aB con células Daudi y para inhibir la actividad antiviral de IFN-a2, IFN- ? y IFN- (IFN-alIl) en células Daudi . Benoit et al . también reportó que 64G12 reconoce un epítope presente en el dominio 1 de IFNARl . Eid and Tovey, J. Inferieron Cytokine Res., 15: 205-211 (1995) reportan que 64G12 no puede inmunoprecipitar complejos receptores de IFN-a2-entrelazados a partir de células Daudi. Colamonici and Domanski, J. Biol . Chem. , 268 : 10895-10899 (1993) reportan un anti-IFNAR2 mAb (denotado el "IFNaR?l mAb") que bloquea el enlace de IFN-a2 (IFN-aA) con células Daudi y células U-266 y bloqueó la actividad antiproliferativa de diferentes interferonas tipo I en células Daudi utilizando ensayos de proliferación de células MTT. Diversos otros anticuerpos que interfieren con la interacción de receptor de interferona- interferona Tipo I también se han descrito. Ver, por ejemplo, las patentes de los E.U.A. Nos. US 5516515, 5919453, 5,643,749, 5821078, 5886153, 6458932, 6136309, 6713609, 6787634, WO9320187, W096/33735, EP0822830, EP495907, WO 95/07716, WO96/34096, EP 0537166 Bl, EP588177 A2 , EP588177 Bl , W09741229, EP927252, EP676413 Bl , WO2004/093908 , WO2004/094473 , y las publicaciones de patente de los E.U.A. Nos. 2003/0018174, y 2003/0166228. Los papeles jugados por la ruta de interferona Tipo I en diversas enfermedades empiezan a ser comprendidos. Estas enfermedades incluyen ^muchas manifestaciones de desregulación de complejo inmune. Ver, por ejemplo Schmidt & Ouyang, Lupus (2004), 13:348-352. Es claro que sería benéfico el tener composiciones y métodos que son efectivos para ser blanco y modular esta vía importante. La invención proporcionada aquí se relaciona a dichas composiciones y métodos.

Todas las referencias aquí citadas, incluyendo publicaciones y solicitudes de patentes, se incorporan aquí por referencia en su totalidad.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La invención proporciona anticuerpos novedosos capaces de ligar IFNAR2 y/o regular actividades biológicas asociadas con señalización de interferona Tipo I a través del segundo componente (IFNAR2) del complejo receptor interferona Tipo I. En un aspecto, la invención proporciona un polipéptido de inmunoglobulina aislado que comprende al menos uno, dos, tres, cuatro, cinco o todas las secuencias hipervariables (HVR) seleccionadas del grupo que consiste de secuencias de HC-HVR1, HC-HVR2, HC-HVR3, LC-HVRl, LC-HVR2 y LC-HVR3 de un anticuerpo producidas por la línea celular de hibridoma depositada en la Colección de Cultivos Tipo Americana (ATCC = American Tipo Culture Collection) bajo el No. de Acceso PTA-6242, PTA-6243 o PTA-6244, en donde el polipéptido de inmunoglobulina aislado específicamente liga IFNAR2 humano. Por ejemplo, en un aspecto, la invención proporciona un anticuerpo aislado que comprende al menos uno, dos, tres, cuatro, cinco o todas las secuencias hipervariables (HVR) seleccionadas del grupo que consiste de secuencias de HC-HVR1, HC-HVR2, HC-HVR3 , LC-HVRl, LC-HVR2 y LC-HVR3 de un anticuerpo producido por la línea celular de hibridoma depositado en American Type Culture Collection (ATCC) bajo el No. de Acceso PTA-6242, PTA-6243 o PTA-6244, en donde el anticuerpo aislado liga específicamente IFNAR2 humano. En una modalidad, la invención proporciona un anticuerpo aislado que comprende al menos uno, dos o todos los HC-HVR seleccionado del grupo que consiste de HC-HVR1, HC-HVR2 y HC-HVR3, y al menos uno, dos o todos los LC-HVR seleccionados del grupo que consiste de LC-HVRl, LC-HVR2 y LC-HVR3. En una modalidad, las secuencias HVR en un anticuerpo aislado de la invención son aquellas de un anticuerpo producido por la línea celular de hibridoma depositada en la American Type Culture Collection (ATCC) bajo el No. de Acceso PTA-6242. En una modalidad, las secuencias HVR en un anticuerpo aislado de la invención son aquellas de un anticuerpo que se produce por la línea celular de hibridoma depositada en la American Type Culture Collection (ATCC) bajo No. de Acceso PTA-6243. En una modalidad, las secuencias HVR en un anticuerpo aislado de la invención son aquellas de un anticuerpo producido por la línea celular de hibridoma depositada en American Tipo Culture Collection (ATCC) bajo No. de Acceso PTA-6244. En un aspecto, la invención proporciona un polipéptido de inmunoglobulina aislado que comprende secuencia de domino variable de cadena pesada y/o ligera de un anticuerpo producido por la línea celular de hibridoma depositada en American Type Culture Collection (ATCC) bajo el No. de Acceso PTA-6242, PTA-6243 o PTA-6244, en donde el polipéptido de inmunoglobulina aislado específicamente liga IFNAR2 humano. Por ejemplo, en un aspecto, la invención proporciona un anticuerpo aislado que comprende secuencias de dominio variable de cadena pesada y/o ligera de un anticuerpo producido por la línea celular de hibridoma depositada en American Type Culture Collection (ATCC) bajo el No. de Acceso PTA-6242, PTA-6243 o PTA-6244, en donde el anticuerpo aislado específicamente liga IFNAR2 humano. En una modalidad, el anticuerpo aislado comprende secuencia de dominio variable de cadena pesada y/o ligera de un anticuerpo producida por la línea celular de hibridoma depositada en la American Type Culture Collection (ATCC) bajo el No. de Acceso PTA-6242. En una modalidad, el anticuerpo aislado comprende secuencia de dominio variable de cadena pesada y/o ligera de un anticuerpo producido por la línea celular de hibridoma depositada en American Type Culture Collection (ATCC) bajo el No. de Acceso PTA-6243. En una modalidad, el anticuerpo aislado comprende secuencia de dominio variable de cadena pesada y/o ligera de un anticuerpo producida por la línea celular de hibridoma depositada en la American Type Culture Collection (ATCC) bajo No. de Acceso PTA-6244. En un aspecto, la invención proporciona un anticuerpo IFNAR2 codificado por una secuencia de codificación de anticuerpo de la línea celular de hibridoma depositada en la American Type Culture Collection (ATCC) bajo No. de Acceso PTA-6242, PTA-6243 o PTA-6244. En un aspecto, la invención proporciona un anticuerpo aislado que liga al mismo epítope en IFNAR2 humano como un anticuerpo producido por la línea celular de hibridoma depositada en la American Type Culture Collection (ATCC) bajo Nos. de Acceso PTA-6242, PTA-6243 y/o PTA-6244. En un aspecto, la invención proporciona un anticuerpo aislado que compite con un anticuerpo producido por la línea celular de hibridoma depositada en American Type Culture Collection (ATCC) bajo No. de Acceso PTA-6242, PTA-6243 y/o PTA-6244 para ligar a IFNAR2 humano. En una modalidad de un anticuerpo de la invención, el anticuerpo inhibe actividad anti-viral de interferona de leucocito humano. En una modalidad de un anticuerpo de la invención, el anticuerpo inhibe actividad anti-viral de alfa interferona humana. En una modalidad de un anticuerpo de la invención, al menos aproximadamente 10 µ g/ml del anticuerpo es forma IgG de longitud íntegra que inhibe al menos aproximadamente 25%, 40%, 50%, 75% o 90% de actividad anti-viral de aproximadamente 0.5 U/ml a aproximadamente 1000 U/ml de interferona de leucocito humano. En una modalidad, la interferona de leucocito es aproximadamente 10 U/ml. En una modalidad de un anticuerpo de la invención, al menos aproximadamente 10 /g/ml del anticuerpo es la forma IgG de longitud íntegra que inhibe al menos aproximadamente 25%, 40%, 50%, 75% o 90% de actividad anti-viral de aproximadamente 1000 U/ml de interferona a . En una modalidad de un anticuerpo de la invención, al menos aproximadamente 0.01, 0.04, 0.1, 0.4, 1.1, 3.3, 10 o 20 //g/ml del anticuerpo en forma IgG de longitud íntegra inhibe al menos aproximadamente 25%, 40%, 50%, 75% o 90% de actividad anti-viral de aproximadamente 25 U/ml de interferona ß . En una modalidad, la concentración de anticuerpo es al menos aproximadamente 10 µ g/ml . En una modalidad, al menos aproximadamente 10 µ /ml de un anticuerpo de la invención en forma IgG de longitud íntegra inhibe al menos aproximadamente 25% de actividad anti-viral de aproximadamente 25 U/ml de interferona ß . En una modalidad de un anticuerpo de la invención, la forma IgG de longitud íntegra del anticuerpo específicamente liga a IFNAR2 humano con una afinidad de enlace de aproximadamente 300 pM o menor. En una modalidad, la afinidad de enlace es aproximadamente 280 pM o mejor. En una modalidad, la afinidad de enlace es aproximadamente 200 pM o mejor. En una modalidad, la afinidad de enlace es aproximadamente 100 pM o mejor. En una modalidad, la afinidad de enlace es aproximadamente 60 pM o mejor. En una modalidad, un anticuerpo de la invención bloquea la actividad anti-viral de interferona a e interferona ß a título de anticuerpo substancialmente equivalente.

En una modalidad, un anticuerpo de la invención tiene potencia substancialmente equivalente in vi tro en bloqueo de actividad anti-viral de una primera interferona Tipo I (por ejemplo, interferona a ) y una segunda interferona Tipo I (por ejemplo, interferona ß ) . Por ejemplo, en una modalidad, una cantidad equivalente de un anticuerpo de la invención es capaz de bloquear al menos aproximadamente 50%, 75%, 85%, 90% o 95% de actividad anti-viral de una primera interferona Tipo I y una segunda interferona Tipo I, en donde las interferonas cada una se administran en su actividad anti-viral óptima aproximada respectiva en un bioensayo de célula WISH (por ejemplo, como se describe en los Ejemplos siguientes) , y en donde la segunda interferona de Tipo I es interferona ß . En una modalidad, la primer interferona Tipo I es interferona a . En una modalidad, la primera interferona Tipo I es interferona de leucocito. Un anticuerpo de la invención puede estar en cualquier cantidad de formas. Por ejemplo, un anticuerpo de la invención puede ser un anticuerpo quimérico, un anticuerpo humanizado o un anticuerpo humano. En una modalidad, un anticuerpo de la invención no es un anticuerpo humano, por ejemplo no es un anticuerpo producido en un xeno-ratón (por ejemplo, como se describe en W096/33735) . Un anticuerpo de la invención puede ser de longitud íntegra o su fragmento (por ejemplo, un fragmento que comprende un componente de enlace de antígeno) . En una modalidad, un anticuerpo de la invención no es un anticuerpo producido por línea celular de hibridoma que tiene Depósito ATCC No. HB-12426, 12427 y/o 12428, o un anticuerpo IFNAR2 descrito en las páginas 10895 a 10899 en Journal of Biological Chemistry, Volumen 268 publicado en 1993, o un anticuerpo IFNAR2 aislado descrito en las publicaciones del PCT W096/33735, WO96/34096, W09741229, patentes Europeas Nos. 588177 ,Bl, 927252, 676413, y/o patentes de los E.U.A. Nos. 6458932 y 6136309. En una modalidad, un anticuerpo de la invención no compite para ligar a IFNAR2 humano con un anticuerpo producido por la línea celular de hibridoma que tiene No. de Depósito de ATCC HB-12426, 12427 y/o 12428, o un anticuerpo IFNAR2 descrito en las páginas 10895 a 10899 en Journal of Biological Chemistry, Volumen 268 publicada en 1993, o un anticuerpo IFNAR2 aislado descrito en las publicaciones de PCT W096/33735, WO96/34096, W09741229, patentes Europeas Nos. 588177 Bl, 927252, 676413, y/o patentes de los E.U.A. Nos. 6458932 y 6136309. En una modalidad, un anticuerpo de la invención no liga al mismo epítope en IFNAR2 humano como un anticuerpo producido por la línea celular de hibridoma que tiene Depósito No. ATCC HB-12426, 12427 y/o 12428, o un anticuerpo IFNAR2 descrito en las páginas 10895 a 10899 en Journal of Biological Chemistry, Volumen 268 publicado en 1993, o un anticuerpo IFNAR2 aislado descrito en las publicaciones PCT W096/33735, WO96/34096, W09741229, patentes Europeas Nos. 588177 Bl, 927252, 676413, y/o patentes de los E.U.A. Nos. 6458932 y 6136309. En un aspecto, la invención proporciona composiciones que comprenden uno o más anticuerpos de la invención y un portador. En una modalidad, el portador es farmacéuticamente aceptable. En un aspecto, la invención proporciona ácidos nucleicos que codifican un polipéptido de inmunoglobulina (por ejemplo, un anticuerpo) de la invención . En un aspecto, la invención proporciona vectores que comprenden un ácido nucleico de la invención.

En un aspecto, la invención proporciona células anfitrionas que comprenden un ácido nucleico o un vector de la invención. Un vector puede ser de cualquier tipo por ejemplo un vector recombinante tal como un vector de expresión. Cualquiera de una variedad de células anfitrionas puede emplearse. En una modalidad, una célula anfitriona es una célula procariótica, por ejemplo, E. coli . En una modalidad, una célula anfitriona es una célula eucariótica, por ejemplo una célula de mamífero tal como célula de Ovario de Hámster Chino (CHO) . En un aspecto, la invención proporciona métodos para producir un anticuerpo de la invención. Por ejemplo, la invención proporciona un método para producir un anticuerpo anti-IFNAR2 (que como se define aquí incluye de longitud íntegra y sus fragmentos) , el método comprende expresar en una célula anfitriona conveniente como un vector recombinante de la invención que codifica el anticuerpo (o su fragmento) , y recuperar el anticuerpo . En un aspecto, la invención proporciona un artículo de manufactura que comprende un recipiente; y una composición contenida dentro del recipiente, en donde la composición comprende uno o más anticuerpos anticuerpos de la invención. En una modalidad, la composición comprende un ácido nucleico de la invención. En una modalidad, una composición comprende un polipéptido de inmunoglobulina (por ejemplo, un anticuerpo) de la invención que además comprende un portador, que en algunas modalidades es farmacéuticamente aceptable. En una modalidad, un artículo de manufactura de la invención además comprende instrucciones para administrar la composición (por ejemplo, el anticuerpo) a un sujeto. En un aspecto, la invención proporciona un equipo que comprende un primer recipiente que comprende una composición que comprende uno o más anticuerpos de la invención; y un segundo recipiente que comprende un amortiguador. En una modalidad, el amortiguador es farmacéuticamente aceptable. En una modalidad, una composición que comprende un anticuerpo además comprende un portador, que en algunas modalidades es farmacéuticamente aceptable. En una modalidad, un equipo además comprende instrucciones para administrar la composición (por ejemplo, el anticuerpo) a un sujeto. En un aspecto, la invención proporciona el uso de un anticuerpo de la invención en la preparación de un medicamento para el tratamiento terapéutico y/o profiláctico de una enfermedad, tal como un desorden proliferativo celular o un desorden inmune (tal como autoinmune) . En un aspecto, la invención proporciona uso de un ácido nucleico de la invención en la preparación de un medicamento para el tratamiento terapéutico y/o profiláctico de una enfermedad, tal como un desorden proliferativo celular o un desorden inmune (tal como autoinmune) . En un aspecto, la invención proporciona uso de un vector de expresión de la invención en la preparación de un medicamento para el tratamiento terapéutico y/o profiláctico de una enfermedad, tal como un desorden proliferativo celular o un desorden inmune (tal como autoinmune) . En un aspecto, la invención proporciona el uso de una célula anfitriona de la invención en la preparación de un medicamento para el tratamiento terapéutico y/o profiláctico de una enfermedad, tal como un desorden proliferativo celular o un desorden inmune (tal como autoinmune) . En un aspecto, la invención proporciona uso de un artículo de manufactura de la invención en la preparación de un medicamento para el tratamiento terapéutico y/o profiláctico de una enfermedad, tal como un desorden proliferativo celular o un desorden inmune (tal como autoinmune) . dixdalOj En un aspecto, la invención proporciona uso de un equipo de la invención en la preparación de un medicamento para el tratamiento terapéutico y/o profiláctico de una enfermedad, tal como un desorden proliferativo celular o un desorden inmune (tal como autoinmune) . La invención proporciona métodos y composiciones útiles para modular estados de enfermedad asociados con la desregulación del eje de señalización interferona Tipo I/IFNAR2. Esta vía de señalización esta involucrada en múltiples funciones biológicas y fisiológicas. Anticuerpos de la invención son capaces de modular esta vía y por lo tanto son útiles para modular condiciones asociadas con aberraciones en uno o más de estas funciones biológicas y fisiológicas. De esta manera en un aspecto, la invención proporciona un método que comprende administrar a un sujeto un anticuerpo de la invención, con lo que se trata una condición patológica . En un aspecto, la invención proporciona un método para tratamiento de una enfermedad o condición asociada con sobre expresión y/o nivel de actividad anormalmente elevado de IFN- a , ß y/o IFNAR2, el método comprende administrar a un sujeto una cantidad efectiva de un anticuerpo de la invención, con lo que se trata la enfermedad/condición. En una modalidad, el sujeto es un mamífero. En una modalidad, el sujeto es humano. Métodos y composiciones de la invención pueden emplearse para tratar una variedad de enfermedades asociadas con sobre expresión y/o un nivel de actividad anormalmente alto de IFN-Q., ß y/o IFNAR2. Por ejemplo, en una modalidad, una enfermedad tratada por un método ó composición de la invención es una enfermedad autoinmune, por ejemplo diabetes melitus dependiente de insulina (IDDM); lupus sistémico eritematoso (SLE) (que puede incluir, por ejemplo, lupus nefritis), tiroiditis autoinmune, síndrome Sjogren, soriasis, enfermedad inflamatoria intestinal (por ejemplo, colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn) , artritis reumatoide y nefropatía IgA. En un aspecto, la invención proporciona un método para inhibir señalización IFNAR2/interferona Tipo I en una célula o tejido, el método comprende contactar la célula o tejido con una cantidad efectiva de un anticuerpo de la invención, con lo que la señalización interferona Tipo I/IFNAR2 en la célula o tejido se inhibe. En un aspecto, la invención proporciona un método para tratar una condición patológica asociada con la desregulación de la señalización de célula IFNAR2/interferona Tipo I en un sujeto, el método comprende administrar al sujeto una cantidad efectiva de un anticuerpo de la invención, con lo que la condición es tratada. En una modalidad, la condición patológica se asocia con regulación a la alza de expresión IFNAR2/interferona Tipo I. Métodos de la invención pueden utilizarse para afectar cualquier estado patológico conveniente, por ejemplo células y/o tejidos asociados con la desregulación de la vía de señalización IFNAR2/interferona Tipo I. En una modalidad, una célula que se hace objetivo en un método de la invención es una célula inmune. En una modalidad, la célula inmune es una célula T, célula B o monocito. En una modalidad, la inhibición de señalización de células IFNAR2/interferona Tipo I por un anticuerpo de la invención se asocia con inhibición de señalización a través de Tyk2 , Jakl, Statl y/o Stat2. En una modalidad, inhibición de la señalización de células IFNAR2/mterferona Tipo I por un anticuerpo de la invención, se asocia con inhibición de formación de complejo ISRE. En una modalidad, la inhibición de señalización de célula IFNAR2/interferona Tipo I por un anticuerpo de la invención se asocia con inhibición de la expresión de genes regulados por mterferona (por ejemplo, Mx-1, MHC I, CD69, Fas) . Métodos de la invención además pueden comprender etapas/agentes de tratamiento adicionales. Por ejemplo, en una modalidad, un paciente también puede ser administrado un esteroide (por ejemplo, para una enfermedad autoinmune) . En un aspecto, un anticuerpo de la invención se enlaza con una toxina tal como un agente citotóxico. Estas moléculas pueden formularse o administrarse en combinación con un agente aditivo/mejorador tal como un esferoide. En un aspecto, la invención proporciona un método para detectar presencia de IFNAR2 en una muestra, que comprende contactar la muestra con un anticuerpo de la invención. En un aspecto, la invención proporciona un método para diagnosticar una enfermedad que comprende determinar el nivel de IFNAR2 en una prueba de muestra de células de tejido al contactar la muestra con un anticuerpo de la invención, con lo que IFNAR2 ligado por el anticuerpo indica la presencia y/o cantidad de IFNAR2 en la muestra. En un aspecto, la invención proporciona un método para diagnosticar una enfermedad que comprende determinar el nivel de actividad biológica interferona Tipo I/IFNAR2 en una muestra de prueba de células de tejido al contactar la muestra con un anticuerpo de la invención, con lo que una disminución de la actividad biológica en la muestra comparada con una muestra de control indica la presencia y/o nivel incrementado de actividad biológica interferona Tipo I/IFNAR2 en la muestra de prueba . En otro aspecto, la invención proporciona un método para determinar si un individuo esta en riesgo de una enfermedad que comprende determinar el nivel de IFNAR2 en una muestra de prueba de células de tejido al contactar la muestra con un anticuerpo de la invención y de esta manera determinar la cantidad de IFNAR2 presente en la muestra, con lo que un nivel superior de IFNAR2 en la muestra de prueba, en comparación con una muestra de control que comprende tejido normal del mismo origen de célula que la muestra de prueba, es una indicación que el individuo esta en riesgo de la enfermedad. En una modalidad de métodos de la invención, el nivel de IFNAR2 se determina con base en la cantidad de polipéptido IFNAR2 indicado por la cantidad de IFNAR2 ligado por el anticuerpo en la muestra de prueba. Un anticuerpo empleado en el método puede opcionalmente ser etiquetado en forma detectable, conectado a un soporte sólido o semejante. En una modalidad de métodos de la invención, la cantidad de inhibición de actividad biológica de interferona Tipo 1/ IFNAR2 es determinada con base en la cantidad de actividad biológica asociada con señalización a través de la ruta de interferona/IFNAR2 por ejemplo a través de inhibición se señalización a través de Tyk2 , Jakl Statl y/o Stat2; a través de inhibición de formación de complejo ISRE y/o a través de inhibición de expresión de genes IFN regulados. En un aspecto, la invención proporciona un método para ligar un anticuerpo de la invención a IFNAR2 presente en un fluido corporal, por ejemplo sangre . Todavía en otro aspecto, la invención se dirige a un método para ligar a un anticuerpo de la invención a una célula que expresa IFNAR2, en donde el método comprende contactar la célula con el anticuerpo bajo condiciones que son adecuadas para ligar el anticuerpo con IFNAR2 y permitir el enlace entre ellos. En una modalidad, e enlace del anticuerpo con IFNAR2 en la célula inhibe una función biológica IFNAR2. En una modalidad, el anticuerpo no inhibe la interacción de IFNAR2 con su ligando. En una modalidad, el anticuerpo liga a una molécula IFNAR2 en la célula e inhibe el enlace de otra molécula con la molécula IFNAR2. En un aspecto, la invención proporciona un método para hacer blanco a un agente terapéutico con un tejido asociado con IFNAR2 en un anfitrión, el método comprende administrar al anfitrión el agente terapéutico en una forma que se enlaza con un anticuerpo de la invención, con lo que la gente se hace blanco al tejido asociado con IFNAR2 en el anfitrión. En una modalidad, el anticuerpo que liga IFNAR2 es capaz de ligar específicamente a IFNAR2 ubicado en una célula (ya sea in vi tro o in vivo) , por ejemplo en donde IFNAR2 ya esta presente en la superficie de una célula. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 muestra una ilustración gráfica de datos a partir de un bioensayo de interferona WISH en donde el efecto de neutralización de anticuerpos 1922 y 1923 se estima sobre un intervalo de concentraciones de interferona . La Figura 2 muestra una ilustración gráfica de datos para un bioensayo de interferona WISH en donde se estima el efecto de neutralización del anticuerpo 1922. El efecto se estima ya sea sobre un intervalo de concentraciones de interferona leucocito humano o un intervalo de concentraciones de anticuerpo. La Figura 3 muestra una ilustración gráfica de datos a partir de un bioensayo de interferona WISH en donde el efecto de neutralización del anticuerpo 1923 se estima. El efecto se estima sobre ya un intervalo de concentraciones de interferona leucocito humano o un intervalo de concentraciones de anticuerpo . La Figura 4 muestra una ilustración gráfica de datos a partir de un bioensayo de interferona WISH en donde el efecto de neutralización de anticuerpos 1922 y 1923 se estima contra interferona a o interferona ß . La Figura 5 muestra una ilustración gráfica de datos a partir de un bioensayo de interferona WISH en donde el efecto de neutralización del anticuerpo 1923 se estima sobre un intervalo de concentraciones de interferona ß . La Figura 6 muestra una ilustración gráfica de datos a partir de un bioensayo de interferona WISH en donde el efecto de neutralización del anticuerpo 1922 se estima sobre un intervalo de concentraciones de anticuerpo. La Figura 7 muestra una ilustración gráfica de datos a partir de un bioensayo de interferona WISH en donde el efecto de neutralización del anticuerpo 1923 se estima sobre un intervalo de concentraciones de anticuerpo. MODOS PARA LLEVAR A CABO LA INVENCIÓN Técnicas Generales La practica de la presente invención empleara a menos de que se indique de otra forma, técnicas convencionales de biología molecular (incluyendo técnicas recombinantes) , microbiología, biología celular, bioquímica e inmunología, que están dentro de la destreza de la técnica. Estas técnicas explican completamente en la literatura, tal como "Molecular Cloning: A Laboratory Manual", segunda edición (Sambrook et al., 1989); "Oligonucleotide Synthesis" (M. J. Gait, ed., 1984); "Animal Cell Culture" (R. I. Freshney, ed., 1987); "Methods in Enzymology" (Academic Press, Inc.); "Current Protocols in Molecular Biology" (F. M. Ausubel et al., eds., 1987, and periodic updates); "PCR: The Polymerase Chain Reaction", (Mullís et al., ed., 1994) ; "A Practical Guide to Molecular Cloning" (Perbal Bernard V., 1988); "Phage Display: A Laboratory Manual" (Barbas et al., 2001) . Definiciones Como se emplea aquí, los términos "interferona tipo I" y "interferona tipo I humano" se definen como todas las especies de interferona humana nativa y sintética que caen dentro de las clases humanas y sintéticas de interferona- a , interferona-? e interferona- ? y que ligan a un receptor celular común. Interferona- a humana natural comprende 23 o más proteínas cercanamente relacionadas codificadas por distintos genes con un alto grado de homología estructural (Weissmann and Weber, Prog. Nucí. Acid. Res. Mol. Biol., 33: 251 (1986); J. Inferieron Res., 13: 443-444 (1993)). El sitio IFN- humano comprende dos subfamilias. La primer subfamilia consiste de al menos 10 genes funcionales, no alelicos, incluyendo los genes que codifican IFN-A (IFN-2), IFN-B (IFN-8), IFN-C (IFN-10) , IFN-D (IFN-1), IFN-E (IFN-22), IFN-F (IFN-21) , IFN-G (IFN-5), IFN-16, IFN-17, IFN-4, IFN-6, IFN-7, y IFN-H (IFN-14) , y seudogenes que tienen al menos 80% de homología. La segunda subfamilia, „ o ? , contienen al menos 5 seudogenes y 1 gen funcional (denotado aquí como "IFN-II1" o "IFN-ÍÜ") que exhibe 70% de homología con los genes IFN-(Weissmann and Weber (1986)) . La IFN-/? humana en general se considera codificada por un solo gen de copia . Como se emplea aquí, los términos "primer receptor de interferona- humana (hlFN-)", "IFN-R" , "hlFNARl", "IFNAR1", y "cadena Uze" se definen como la proteína receptora de 557 amino ácidos clonado por Uze et al., Cell, 60: 225-234 (1990), incluyendo un dominio extracelular de 409 residuos, un dominio transmembrana de 21 residuos, y un dominio intracelular de 100 residuos, como se ilustra en la Figura 5 en la página 229 de Uze et al. En una modalidad, los términos anteriores incluyen fragmentos de IFNAR1 que contienen el dominio extracelular (ECD) (o fragmentos de ECD) de IFNAR1. Como se emplea aquí, los términos "segundo receptor de interferona- a humano (hIFN-a)", "IFN-a ßR" , "hIFNAR2", "IFNAR2", y "cadena Novick" se definen como la proteína receptora de 515 amino ácidos clonada por Domanski et al., J. Biol. Chem. 37: 21606-21611 (1995), incluyendo un dominio extracelular de 217 residuos, un dominio transmembrana de 21 residuos, y un dominio intracelular de 250 residuos, como se ilustra en la Figura 1 en la página 21608 de Domanski et al. En una modalidad, los términos anteriores incluyen fragmentos de IFNAR2 que contienen el dominio extracelular (ECD) (o fragmentos de ECD) de IFNAR2, y formas solubles de IFNAR2, tales como IFNAR2 ECD fusionada a cuando menos una porción de una secuencia de inmunoglobulina. Un anticuerpo "aislado" es aquel que se ha identificado y separado y/o recuperado de un componente de su ambiente natural . Componentes contaminantes de su ambiente natural son materiales que interferirán con usos de diagnostico terapéutico para el anticuerpo, y pueden incluir enzimas, hormonas y otros solutos proteinaceos o no proteinaceos . En una modalidad, el anticuerpo será purificado (1) a más de 95% en pesos del anticuerpo como se determina por ejemplo por el método de Lowry y en algunas modalidades más de 99% en peso, (2) a un grado suficiente para obtener al menos 15 residuos de secuencia de amino ácidos interna o N-terminal por uso por ejemplo de un secuenciador de copa de centrifugado o (3) a homogeneidad por SDS-PAGE bajo condiciones reductoras o no reductoras utilizando por ejemplo, azul Coomassie o tensión de plata. Anticuerpo aislado incluye el anticuerpo in si tu dentro de células recombinantes ya que al menos un componente del ambiente natural del anticuerpo no estará presente. De manera ordinaria sin embargo, el anticuerpo aislado se preparara por al menos una etapa de purificación. Como se emplea aquí, el término "anticuerpo anti-IFNAR2" se refiere a un anticuerpo que es capaz de ligar a IFNAR2. Como se emplea aquí un anticuerpo de la invención con la propiedad o capacidad de "bloquear el enlace de una interferona tipo I con IFNAR2" se define como un anticuerpo anti-IFNAR2 capaz de ligar a IFNAR2 tal que la capacidad IFNAR2 para ligar a uno o más interferona tipo I se deteriora o elimina. La frase "substancialmente similar," "substancialmente igual", "equivalente" o "substancialmente equivalente", como se emplea aquí, denota una grado de similaridad suficientemente elevado entre dos valores numéricos (por ejemplo, uno asociado con una molécula y el otro asociado con una molécula de referencia/comparadora) tal que una persona con destreza en la técnica considerara la diferencia entre los dos valores de poca o ninguna significancia biológica y/o estadística dentro del contexto de la característica biológica medida por los valores (por ejemplo, valores Kd, efectos antivirales, etc.) . La diferencia ente los dos valores de preferencia es menor que aproximadamente 50%, de preferencia menor que aproximadamente 40%, de preferencia menor que aproximadamente 30%, de preferencia menor que aproximadamente 20%, de preferencia menor que aproximadamente 10% como una función del valor de la molécula de referencia/comparadora . La frase "substancialmente reducida," o "substancialmente diferente", como se emplea aquí, denota una grado suficientemente alto de diferencia entre dos valores numéricos (en general uno asociado con una molécula y el otro asociado con una molécula de referencia/comparadora) tal que una persona con destreza en la técnica considerara la diferencia entre los dos valores que son de significancia estadística dentro del contexto de la característica biológica medida por los valores (por ejemplo, valores Kd, respuesta HAMA, actividad anti-viral). La diferencia ente los dos valores de preferencia es mayor que aproximadamente 10%, de preferencia mayor que aproximadamente 20%, de preferencia mayor que aproximadamente 30%, de preferencia mayor que aproximadamente 40%, de preferencia mayor que aproximadamente 50% como una función del valor para la molécula de referencia/comparadora. "Afinidad de enlace" en general se refiere a la fuerza de la suma total de interacciones no covalentes entre un solo sitio de enlace de una molécula (por ejemplo, un anticuerpo) y sus socio de enlace (por ejemplo, un antígeno) . A menos de que se indique de otra forma, como se empela aquí "afinidad de enlace" se refiere a afinidad de enlace intrínseca que refleja una interacción 1:1 entre miembros de un par de enlace (por ejemplo, anticuerpo y antígeno) . La afinidad de una molécula X para su socio Y puede en general ser representada por la constante de disociación (Kd) . La afinidad puede medirse por métodos comunes conocidos en la técnica, incluyendo aquellos aquí descritos. Anticuerpos de baja afinidad en general ligan antígeno lentamente y tienden a disociarse fácilmente, mientras que anticuerpos de alta afinidad en general ligan antígeno más rápido y tienden a permanecer ligados por más tiempo. Una variedad de métodos para medir afinidad de enlace se conocen en la técnica, cualquiera de los cuales puede utilizarse para los propósitos de la presente invención. Modalidades ilustrativas especificas se describen a continuación. %dixllal5b En una modalidad, la "Kd" o "valor Kd" de acuerdo con esta invención se mide por un ensayo de enlace de antígeno radioetiquetado (RÍA) realizado con la versión Fab de un anticuerpo de interés y su antígeno como se describe por el siguiente ensayo que mide afinidad de enlace de solución de Fabs para antígeno al equilibrar Fab con una concentración mínima de antígeno etiquetado con (125I) en la presencia de una serie de titulación de antígeno no etiquetado, después capturado antígeno ligado con una placa revestida con anticuerpo anti-Fab (Chen, et al., (1999) J. Mol Biol 293:865-881). Para establecer condiciones para el ensayo, se revisten placas de microtitulación (Dynex) durante la noche con 5 //g/ml de un anticuerpo anti-Fab de captura (Cappel Labs) en carbonato de sodio 50 mM (pH 9.6), y subsecuentemente bloquean con albúmina de suero bovino al 2% (p/v) en PBS por dos a cinco horas a temperatura ambiente (aproximadamente 23 grados C) .

En una placa no-adsorbante (Nunc #269620) , 100 pM o antígeno [125I] de 26 pM se mezcla con diluciones en serie de un Fab de interés (por ejemplo, consistente con la evaluación de un anticuerpo anti-VEGF, Fab-12, en Presta et al., (1997) Cáncer Res. 57:4593-4599). El Fab de interés después se incuba durante la noche; sin embargo, la incubación puede continuar por un mayor periodo (por ejemplo, 65 horas) para asegurar que se alcance equilibrio. Posteriormente, las mezclas se transfieren a la placa de captura para incubación a temperatura ambiente (por ejemplo, por una hora) . La solución después se retira y la placa se lava ocho veces con Tween- 20 al 0.1% en PBS. Cuando las placas se han secado, 150 / 1/pozo de agente scintillant (MicroScint-20 ; Packard) se agrega, y las placas se cuentan en un contador gamma Topcount (Packard) por diez minutos. Concentraciones de cada Fab que dan menos de o igual a 20% de enlace máximo se eligen para utilizar en los ensayos de enlace competitivo. De acuerdo con otra modalidad, la Kd o valor Kd se mide al utilizar ensayos de resonancia plasmon de superficie utilizando un BIAcore™-2000 o BIAcore™~3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ) a 25C con chips CM5 de antígeno inmovilizado a -10 unidades de respuesta (RU) . Brevemente, chips biosensores de dextran carboximetilados (CM5, BIAcore Inc.) se activan con hidrocloruro de N-etil-N' - (3-dimetilaminopropil) -carbodiimida (EDC) y N-hidroxisuccinimida (NHS) de acuerdo con las instrucciones de proveedor. El antígeno se diluye con acetato de sodio 10 mM, pH 4.8 en 5 //g/ml (-0.2 uM) antes de inyección a un gasto de flujo de 5 //l/minuto para lograr aproximadamente 10 unidades de respuesta (RU) de proteína acoplada. Después de la inyección de antígeno, etanolamina 1 M se inyecta para bloquear grupos sin reaccionar. Para mediciones cinéticas, diluciones en serie dobles de Fab (0.78 nM a 500 nM) se inyectan en PBS con Tween 20 al 0.05% (PBST) a 25 grados C a un gasto de flujo de aproximadamente 25 //l/min. Velocidades de asociación (kon) y velocidades de disociación (koff) se calculan utilizando un modelo de enlace Langmuir uno-a-uno simple (BIAcore Evaluation Software versión 3.2) por ajuste simultáneo del sensorgrama de asociación y disociación. La constante de disociación en equilibrio (Kd) se calcula como la proporción koff/kon. Ver, por ejemplo, Chen, Y. , et al., (1999) J. Mol Biol 293:865-881. Si la velocidad de asociación (on) excede 106 M"1 S'1 por el ensayo de resonancia plasmon de superficie anterior, entonces la velocidad de asociación puede determinarse al utilizar una técnica de neutralización fluorescente que mide el aumento o disminución en intensidad de emisión de fluorescencia (excitación = 295 nm; emisión = 340 nm, paso de banda de 16 nm) a 25 grados C de un anticuerpo de anti-antígeno 20 nM (forma Fab) en PBS, pH 7.2, en la presencia de concentraciones crecientes de antígeno como se mide en un espectrómetro, tal como un espectrofotómetro equipado con flujo tapón (Aviv Instruments) o un espectrofotómetro SLM-Aminico serie 8000 (ThermoSpectronic) con una cubeta roja de agitación. En una modalidad, una "velocidad de asociación" o "kon" de acuerdo con esta invención se determina con la misma técnica de resonancia plasmon de superficie descrita anteriormente utilizando un BIAcore™-2000 o un BIAcore™-3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ) a 25 grados C con chips CM5 de antígeno inmovilizado a -10 unidades de respuesta (RU) . Brevemente, chips biosensores de dextrano carboximetilado (CM5, BIAcore Inc.) se activan con hidrocloruro de N-etil-N' - (3-dimetilaminopropil) -carbodiimida (EDC) y N-hidroxisuccinimida (NHS) de acuerdo con las instrucciones del proveedor. Se diluye antígeno con acetato de sodio 10 mM, pH 4.8, en 5 ug/ml (-0.2 uM) antes de inyección a un gasto de flujo de 5 ul/minuto para lograr aproximadamente 10 unidades de respuesta (RU) de proteína acoplada. Siguiendo la inyección de etanolamina ÍM para bloquear grupos sin reaccionar. Para mediciones cinéticas, diluciones en serie dobles de Fab (0.78 nM a 500 nM) se inyectan en PBS con Tween 20 0.05% (PBST) a 25 grados C a un gasto de flujo de aproximadamente 25 //l/min. Velocidades de asociación (kon) y velocidades de disociación (kof£) se calculan utilizando un modelo de enlace Langmuir de uno-a-uno simple (BIAcore Evaluation Software versión 3.2) por ajuste simultáneo del sensorgrama de asociación y disociación. La constante disociación en equilibrio (Kd) se calcula como la proporción kof£ kon- Ver, por ejemplo Chen, Y., et al . , (1999) J. Mol Biol 293:865-881. Sin embargo, si la velocidad de asociación (on) excede 10s M"1 S"1 por el ensayo de resonancia plasmon de superficie anterior, entonces la velocidad de asociación (on) de preferencia se determina al utilizar una técnica de neutralización fluorescente que mide el aumento o disminución en intensidad de emisión de fluorescencia (excitación = 295 nm; emisión = 340 nm, paso de banda a 16 nm) a 25 grados C de un anticuerpo de ant-antígeno 20 nM (forma Fab) en PBS, pH 7.2, en la presencia de concentraciones crecientes de antígeno como se mide en un espectrómetro, tal como un espectrofotómetro equipado con flujo tapón (Aviv Instruments) o un espectrofotómetro SLM-Aminco serie 8000 (ThermoSpectronic) con un cubeta agitada. El término "vector", como se emplea aquí, se pretende para referirse a una molécula de ácido nucleico capaz de transportar otro ácido nucleico al cual se ha ligado. Un tipo de vector es un "plásmido" , que se refiere a un bucle de DNA de doble hebra circular en el cual segmentos de DNA adicionales pueden ligarse. Otro tipo de vector es un vector fago. Otro tipo de vector es un vector viral, en donde segmentos de DNA adicionales pueden ligarse en el genoma viral. Ciertos vectores son capaces de replicación autónoma en una célula anfitriona en la cual se introducen (por ejemplo, vectores bacterianos que tienen un origen bacteriano de replicación y vectores de mamífero episomales) . Otros vectores (por ejemplo, vectores de mamífero no-episomales) pueden integrarse en el genoma de una célula anfitriona ante introducción en la célula anfitriona, y de esta manera se replica junto con el genoma anfitrión. Aún más, ciertos vectores son capaces de dirigir la expresión de genes a los cuales se enlazan operativamente. Estos vectores se refieren aquí como "vectores de expresión recombinante" (o simplemente, "vectores recombinantes"). En general, los vectores de expresión de utilidad en técnicas de DNA recombinante a menudo están en la forma de plásmidos. En la presente especificación, "plásmido" y "vector" pueden utilizarse en forma intercambiable ya que el plásmido es la forma más comúnmente empleada de vector. "Polinucleótido", o "ácido nucleico", como se emplean aquí en forma intercambiable, se refieren a polímeros de nucleótidos de cualquier longitud e incluyen DNA y RNA. Los nucleótidos pueden ser deoxiribonucleótidos , ribonucleótidos, nucleótidos modificados o bases, y/o sus análogos, o cualquier substrato que puede incorporarse en un polímero por DNA o RNA polimerasa, o por reacción de síntesis. Un polinucleótido puede comprender nucleótidos modificados, tales como nucleótidos metilados y sus análogos . "Anticuerpos" (Abs) e "inmunoglobulinas" (Igs) son glicoproteínas que tienen las mismas características estructurales . Mientras que anticuerpos exhiben especificidad de enlace a un antígeno específico, inmunoglobulinas incluyen tanto anticuerpos como otras moléculas tipo anticuerpo que en general carecen de especificidad de antígeno. Polipéptidos del último tipo por ejemplo se producen a bajos niveles por el sistema linfático y a niveles incrementados por mielomas . Los términos "anticuerpo" e "inmunoglobulina" se utilizan en forma intercambiable en el sentido más amplio e incluyen anticuerpos monoclonales (por ejemplo, anticuerpos monoclonales intactos o de longitud íntegra) , anticuerpos policlonales, monovalentes, anticuerpos multivalentes, anticuerpos multiespecífieos (por ejemplo, anticuerpos biespecíficos siempre que exhiban la actividad biológica deseada) y también pueden incluir ciertos fragmentos de anticuerpo (como se describe con mayor detalle aquí) . Un anticuerpo puede ser quimérico, humano, humanizado y/o madurado por afinidad. Dependiendo de las secuencias de amino ácido de los dominios constantes en sus cadenas pesadas, los anticuerpos (inmunoglobulinas) pueden asignarse a diferentes clases. Hay cinco clases mayores de inmunoglobulinas: IgA, IgD, IgE, IgG y IgM, y varias de ellas pueden además ser divididas en subclases (isotipos), por ejemplo, IgG-1, IgG-2, IgA-1, IgA-2, y etc. Los dominios constantes de cadena pesada que corresponden a diferentes clases de inmunoglobulinas se denominan a , d , e , ? y µ , respectivamente. Las estructuras de sub-unidad y configuraciones tri-dimensionales de diferentes clases de inmunoglobulinas son bien conocidas y describen en general por ejemplo, en Abbas et al. Cellular and Mol. Immunology, 4th ed. (2000). Un anticuerpo puede ser parte de una mayor molécula de fusión, formada por asociación covalente o no-covalente del anticuerpo con una o más otras proteínas o péptidos. Los términos "anticuerpo de longitud íntegra" "anticuerpo intacto" y "anticuerpo entero" se emplean aquí en forma intercambiable, para referirse a un anticuerpo en su forma substancialmente intacta, no fragmentos de anticuerpo como se define a continuación. Los términos se refieren particularmente a un anticuerpo con cadenas pesadas que contienen la región Fc . "Fragmentos de anticuerpo" comprenden solo una porción de un anticuerpo intacto, en donde la porción de preferencia retiene cuando menos uno, de preferencia la mayoría o todas las funciones normalmente asociadas con aquella porción cuando está presente en un anticuerpo intacto. En una modalidad, un fragmento de anticuerpo comprende un sitio de enlace de antígeno del anticuerpo intacto y de esta manera retiene la capacidad por ligar el antígeno. En otra modalidad, un fragmento de anticuerpo, por ejemplo uno que comprende la región Fc, retiene al menos una de las funciones biológicas normalmente asociadas con la región Fc cuando está presente en un anticuerpo intacto, tal como un enlace FcRn, modulación de vida media de anticuerpo, función ADCC y enlace de complemento. En una modalidad, un fragmento de anticuerpo es un anticuerpo monovalente que tiene vida media in vi vo substancialmente similar a un anticuerpo intacto. Por ejemplo, este fragmento de anticuerpo puede comprender un brazo de enlace de antígeno ligado a una secuencia Fc capaz de conferir estabilidad in vivo al fragmento. El término "anticuerpo monoclonal" como se emplea aquí se refiere a un anticuerpo obtenido de una población de anticuerpos substancialmente homogéneos, es decir los anticuerpos individuales que comprenden la población son idénticos excepto por posible mutaciones de origen natural que pueden estar presentes en cantidades menores. Anticuerpos monoclonales son altamente específicos, dirigidos contra un solo antígeno. Además, en contraste con las preparaciones de anticuerpo policlonales que típicamente incluyen diferentes anticuerpos dirigidos contra diferentes determinantes (epítopes) , cada anticuerpo monoclonal se dirige contra un solo determinante en el antígeno. Los anticuerpos monoclonales aquí específicamente incluyen anticuerpos "quiméricos" en donde una porción de la cadena pesada y/o ligera es idéntica con u homologa con secuencias correspondientes en anticuerpos derivados de una especie particular o que pertenecen a una clase o sub-clase de anticuerpo particular, mientras que el resto de la o las cadenas es idéntico con y homólogo con secuencias correspondientes en anticuerpos derivados de otra especie o que pertenece a otra clase o sub-clase de anticuerpo, así como fragmentos de estos anticuerpos, siempre que exhiban la actividad biológica deseada (patente de los E.U.A. No. 4,816,567; y Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855 (1984)). Formas "humanizadas" de anticuerpos no-humanos (por ejemplo, murino) son anticuerpos quiméricos que contienen secuencia mínima derivada de inmunoglobulina no humana. En una modalidad, un anticuerpo humanizado es una inmunoglobulina humana (anticuerpo de recipiente) en donde los residuos de una región hipervariable del recipiente se reemplazan por residuos de una región hipervariable de una especie no humana (anticuerpo donador) tal como ratón, rata, conejo o primate no humano que tiene la especificidad, afinidad y/o capacidad deseadas. En algunas instancias, residuos de región marco (FR) de la inmunoglobulina humana se reemplazan por residuos no humanos correspondientes. Además, anticuerpos humanizados pueden comprender residuos que no se encuentran en el anticuerpo de recipiente o en el anticuerpo donador. Estas modificaciones se elaboran para refinar adicionalmente el desempeño de anticuerpo. En general, el anticuerpo humanizado comprenderá substancialmente todo de al menos uno, y típicamente dos dominios variables, en donde todo o substancialmente todo de los bucles hipervariables corresponden a aquellos de una inmunoglobulina no humana y todo o substancialmente todo de FRs son aquellos de una secuencia de inmunoglobulina humana. El anticuerpo humanizado opcionalmente también comprenderá al menos una porción de una región constante de inmunoglobulina (Fc) , típicamente la de una inmunoglobulina humana. Para mayores detalles, ver Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); and Presta, Curr. Op . Struct. Biol. 2:593-596 (1992). Ver también los siguientes artículos de revisión y referencias aquí citadas: Vaswani and Hamilton, Ann. Allergy, Asthma & Immunol . 1:105-115 (1998); Harris, Biochem. Soc. Transactions 23:1035-1038 (1995); Hurle and Gross, Curr. Op . Biotech. 5:428-433 (1994). dixl6a20 alexandra El término "región hipervariable", "HVR", o "HV" , cuando se utiliza aquí, se refiere a regiones de un dominio variable de anticuerpo que son hipervariables en secuencia y/o forman bucles estructuralmente definidos. Las letras "HC" y "LC" precedentes al término "HVR" o "HV" se refieren respectivamente a HVR o HV de una cadena pesada y cadena ligera. En general, anticuerpos comprenden seis regiones hipervariables; tres en (Hl, H2 , H3 ) , y tres de VL (Ll, L2 , L3 ) . Una cantidad de delineaciones de región hipervariable están en uso y están abarcadas aquí . Las Regiones de Determinación de Complementaridad (CDRs) de Kabat se basan en variabilidad de secuencia y son las más comúnmente empleadas (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD . (1991) . Chothia se refiere en su lugar a la ubicación de los bucles estructurales (Chothia y Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987). Las regiones hipervariables AbM representan un compromiso entre los CDRs de Kabat y los bucles estructurales de Chothia, y se utilizan por el programa para modelado de anticuerpo Oxford Molecular' s AbM antibody modeling software. Las regiones hipervariables de "contacto" se basan en un análisis de las estructuras de cristal complejo disponibles. Los residuos de cada una de estas regiones hipervariables se anotan a continuación.

Bucle Kabat AbM Chothia Contacto Ll L24-L34 L24-L34 L26-L32 L30-L36 L2 L50-L56 L50-L56 L50-L52 L46-L55 L3 L89-L97 L89-L97 L91-L96 L89-L96 Hl H31-H35B H26-H35B H26-H32 H30 -H35B (Numeración Kabat) Hl H31-H35 H26-H35 H26-H32 H30-H35 (Numeración Chothia) H2 H50-H65 H50-H58 H53-H55 H47-H58 H3 H95-H102 H95-H102 H96-H101 H93-H101 Residuos "Marco" o "FR" son aquellos residuos de dominio variable diferentes a los residuos de región hipervariable aquí definidos. La "región variable" o "dominio variable" de un anticuerpo se refiere a los dominios amino-terminales de cadena pesada o ligera del anticuerpo. Estos dominios en general son las partes más variables de un anticuerpo y contienen los sitios de enlace de antígeno. Un "anticuerpo humano" es aquél que posee una secuencia amino ácidos que corresponde a la de un anticuerpo producido por un humano y/o se ha elaborado utilizando cualquiera de las técnicas para producir anticuerpos humanos como se describe aquí. Esta definición de un anticuerpo humano excluye específicamente un anticuerpo humanizado que comprende residuos de enlace de antígeno no humano. Un anticuerpo "madurado de afinidad" es aquel con una o más alteraciones en uno o más de sus HVRs que resulta en una mejora en la afinidad del anticuerpo por antígeno, en comparación con un anticuerpo precursor que no posee esa o esas alteraciones. En una modalidad, un anticuerpo madurado de afinidad tiene afinidades nanomolares o incluso picomolares para el antígeno objetivo. Anticuerpos madurados por afinidad se producen por procedimientos conocidos en la técnica. Marks et al. Bio/Technology 10:779-783 (1992) describe maduración de afinidad por entremezclado del dominio VH y VL. Mutagénesis aleatoria de CDR y/o residuos marco se describen por: Barbas et al. Proc Nat. Acad. Sci, USA 91:3809-3813 (1994); Schier et al. Gene 169:147-155 (1995) Yelton et al. J. Immunol . 155:1994-2004 (1995) Jackson et al., J. Immunol . 154 (7) : 3310-9 (1995) y Hawkins et al, J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992) Un anticuerpo de "bloqueo" o un anticuerpo "antagonista" es aquel que inhibe o reduce la actividad biológica del antígeno que liga. Anticuerpos de bloqueo preferidos o anticuerpos antagonistas substancialmente o en forma completa inhiben la actividad biológica del antígeno. Un "anticuerpo agonista" como se emplea aquí, es un anticuerpo que imita al menos una de las actividades funcionales de un polípéptido de interés. Un "desorden" es cualquier condición que se beneficia del tratamiento con un anticuerpo de la invención. Este incluye desordenes o enfermedades crónicos y agudos incluyendo aquellas condiciones patológicas que predisponen al mamífero al desorden en cuestión. Ejemplos no limitantes de desórdenes a tratar aquí incluyen desórdenes inflamatorios inmunológicos u otros relacionados a interferona. Una "enfermedad autoinmune" aquí, es una enfermedad o desorden no maligno que surge de y se dirige contra los propios tejidos de un individuo. Las enfermedades autoinmunes aquí específicamente excluyen enfermedades condiciones malignas o cancerosas, especialmente excluyendo linfoma de célula B, leucemia linfoblástica aguda (ALL), leucemia linfocítica crónica (CLL) , leucemia de células pilosas y leucemia mieloblástica crónica. Ejemplos de enfermedades o de desórdenes autoinmunes incluyen pero no están limitados a respuestas inflamatorias tales como enfermedades inflamatorias de la piel incluyendo soriasis y dermatitis (por ejemplo dermatitis atópica); escleroderma sistémica y esclerosis; respuestas asociadas con enfermedad inflamatoria intestinal (tales como enfermedad de Crohn y colitis ulcerativa) ; síndrome de tensión respiratoria) incluyendo síndrome de tensión respiratoria de adulto; ARDS); dermatitis; meningitis; encefalitis; uveitis; colitis; glomerulonefritis; condiciones alérgicas tales como eczema y asma y otras condiciones que involucran infiltración de célula T y respuestas inflamatorias crónicas; aterosclerosis; deficiencia de adhesión de leucocitos; artritis reumatoide; lupus sistémico eritematoso (SLE) (incluyendo pero no limitado a lupus nefritis, lupus cutánea); diabetes mellitus (por ejemplo diabetes mellitus tipo I o diabetes mellitus dependiente de insulina) ; esclerosis múltiples; síndrome de Reynaud; tiroidits autoinmune; tiroiditis de Hashimoto; encefalomielitis alérgica; síndrome de Sjogren; diabetes de inicio juvenil; y respuestas inmunes asociadas con hipersensibilidad aguda y retardada mediada por citosinas y linfocitos T típicamente encontrados en tuberculosis, sarcoidosis, polimiositis , granulomatosis y vasculitis; anemia perniciosa (enfermedad de Addison) ; enfermedades que involucran diapedesis de leucocitos; desorden inflamatorio del sistema nervioso central (CNS) ; síndrome de lesión de múltiples órganos; anemia hemolítica (incluyendo pero no limitada a crioglobinemia o anemia positiva de Coombs) ; miastemia gravis; enfermedades mediadas por complejo antígeno-anticuerpo; enfermedad de membrana basal anti -glomerular ; síndrome antifosfolípido; neuritis alérgica; enfermedad de Grave; síndrome miastémico Lambert-Eaton; pemfigoide bulosa; pemfigus; poliendocrinopatías autoinmunes; enfermedad de Reiter; síndrome de rigidez muscular; enfermedad de Behcet; arteritis de células gigantes; nefritis del complejo inmune; nefropatía IgA; polineuropatías IgM; púrpura trombocitopénica inmune (ITP) o trombocitopenia autoinmune etc. Los términos "desorden proliferativo celular" y "desorden proliferativo" se refieren a desórdenes que están asociados con cierto grado de proliferación de células anormales. Como se emplea aquí, "tratamiento" se refiere a intervención clínica en un intento por alterar el curso natural del individuo o células que se tratan, y puede realizarse ya sea para profilaxis o durante el curso de patología clínica. Efectos deseables de tratamiento incluyen el evitar la ocurrencia o recurrencia de enfermedad, alivio de síntomas, disminución de cualesquiera consecuencias patológicas directas o indirectas de la enfermedad, evitar o disminuir la inflamación y/o daño a tejido/órganos, disminuir la velocidad de avance de la enfermedad, mejora o paliado del estado de la enfermedad y remisión o prognosis mejorada. En algunas modalidades, anticuerpos de la invención se utilizan para retardar el desarrollo de una enfermedad o desorden. Una "cantidad efectiva" se refiere a una cantidad efectiva, en dosis y por periodos de tiempo necesarios, para lograr el resultado terapéutico o profiláctico deseado. Una "cantidad terapéuticamente efectiva" de una sustancia/molécula de la invención puede variar de acuerdo con factores tales como el estado de la enfermedad, edad, sexo, y peso del individuo y la capacidad de la sustancia/molécula para producir una respuesta deseada en el individuo. Una cantidad terapéuticamente efectiva también es aquella en la cual cualesquiera efectos tóxicos o nocivos de la sustancia/molécula son rebasados por los efectos benéficos terapéuticos. Una "cantidad profilácticamente efectiva" se refiere a una cantidad efectiva, a dosis y por periodos de tiempo necesarios para lograr el resultado profiláctico deseado. En forma típica pero no necesaria, ya que una dosis profiláctica se utiliza en sujetos antes de o en una etapa temprana de la enfermedad, la cantidad profilácticamente efectiva será menor que la cantidad terapéuticamente efectiva. El término "agente citotóxico" como se emplea aquí, se refiere a una sustancia que inhibe o evita la función de células y/o provoca destrucción de las células. B. MÉTODOS GENERALES En general, la invención proporciona anticuerpos IFNAR2 que son útiles para tratamientos de desórdenes inmunomediados en donde un bloqueo parcial o total de actividad interferona tipo I se desea. En una modalidad, los anticuerpos IFNAR2 de la invención se utilizan para tratar desórdenes auto-inmunes, tales como aquellos anteriormente indicados. En otra modalidad, los anticuerpos IFNAR2 aquí proporcionados se utilizan para tratar rechazo de injerto o enfermedad de injerto contra anfitrión. Las propiedades únicas de los anticuerpos anti-IFNAR2 de la invención los hacen particularmente útiles para efectuar niveles objetivo de inmuno-supresión en una paciente. Para pacientes que requieren intervención aguda, los anticuerpos anti-IFNAR2 que aquí se proporcionan, que provocan ablasión de amplio espectro de actividad interferona tipo I pueden utilizarse para efectuar el compromiso más grande posible de una respuesta inmune indeseada. Para pacientes que requieren mantenimiento de inmuno-supresión, los anticuerpos anti-IFNAR2 aquí proporcionados que bloquean uno o más especies (pero no necesariamente todas) de interferona tipo I, o que bloquean diferentes especies de interferona tipo I en diversas proporciones, pueden utilizarse para efectuar compromiso parcial del sistema inmune del paciente a fin de reducir el riesgo de inmuno-respuestas indeseables mientras que dejan algunos componentes de la inmunidad mediada por interferona tipo I del paciente intacta a fin de evitar efectos secundarios indeseables tales como infección. En otro aspecto, los anticuerpo anti-IFNAR2 de la invención encuentran utilidad como reactivos para detección y aislamiento de IFNAR2, tal como detección de la expresión IFNAR2 en diversos tipos y tejidos de célula incluyendo la determinación de densidad de receptor IFNAR2 y distribución en poblaciones celulares, y clasificación de células con base en la expresión de IFNAR2. Todavía en otro aspecto, los presentes anticuerpos anti-IFNAR2 son útiles para el desarrollo de antagonistas tipo I con patrones de actividad de bloqueo de interferona tipo I similares a aquellos de los presentes anticuerpos.

Por ejemplo, anticuerpos anti-IFNAR2 de la invención pueden utilizarse para determinar e identificar otros anticuerpos que tienen las mismas características de enlace IFNAR2 y/o capacidades de bloqueo antiviral. Como un ejemplo adicional, anticuerpos anti-IFNAR2 de la invención pueden utilizarse para identificar otros anticuerpos anti-IFNAR2 que ligan substancialmente el o los mismos epítopes de IFNAR2 que los anticuerpos aquí ejemplificados, incluyendo epítopes lineales y de conformación. Los anticuerpos anti-IFNAR2 de la invención pueden utilizarse en ensayos de transducción de señal IFNAR2 para cribar antagonistas de molécula pequeña de IFNAR2 que exhibirán efectos farmacológicos similares para bloquear el enlace de interferonas tipo I en IFNAR2. La generación de anticuerpos candidato puede lograrse utilizando destrezas rutinarias en la técnica, incluyendo aquellas aquí descritas, tales como la técnica de hibridoma y criba de las bibliotecas de expresión en fago de moléculas de enlace. Estos métodos están bien establecidos en la técnica . Brevemente, los anticuerpos anti-IFNAR2 de la invención pueden elaborarse al utilizar bibliotecas combinatorias para cribar ciónos de anticuerpo sintéticos con la o las actividades deseadas. En principio, ciónos de anticuerpos sintéticos se eligen por bibliotecas de expresión en fago que contienen fago que expresa diversos fragmentos de región variable de anticuerpo (Fv) fusionados a proteína de revestimiento fago. Estas bibliotecas fago se seleccionan por cromatografía de afinidad contra el antígeno deseado. Ciónos que expresan fragmentos Fv capaces de ligar al antígeno deseado se adsorben al antígeno y de esta manera se separan de los ciónos sin enlace en la biblioteca. Los ciónos de enlace después se eluyen del antígeno y de esta manera pueden ser además enriquecidos por ciclos adicionales de adsorsión/elusión de antígeno. Cualquiera de los anticuerpos anti-IFNAR2 de la invención pueden obtenerse al diseñar un procedimiento de criba de antígeno conveniente para seleccionar el clon fago de interés seguido por construcción de un clon de anticuerpo anti-IFNAR2 de longitud íntegra utilizando las secuencias Fv del clon fago de interés y secuencias de región constante (Fc) convenientes descritas en Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Quinta Edición, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), vols. 1-3. Ver también PCT Pub . WO03/102157, y las referencias ahí citadas. En una modalidad, anticuerpos anti-IFNAR2 de la invención son monoclonales . También abarcados dentro del alcance de la invención, están fragmentos de anticuerpos tales como los fragmentos Fab, Fab1, Fab'-SH y F(ab')2, y sus variaciones de los anticuerpos anti-IFNAR2 que aquí se proporcionan. Estos fragmentos de anticuerpo pueden ser creados por medios tradicionales, tales como digestión enzimática, o pueden generarse por técnicas recombinantes, estos fragmentos de anticuerpo pueden ser quiméricos, humanos o humanizados. Estos fragmentos son útiles para propósitos de diagnóstico y terapéutico aquí establecidos. Anticuerpos monoclonales pueden obtenerse de una población de anticuerpos substancialmente homogéneos, es decir los anticuerpos individuales que comprenden la población son idénticos excepto por mutaciones de origen natural posibles que pueden estar presentes en menores cantidades. De esta manera, el modificador "monoclonal" indica el carácter del anticuerpo que no es una mezcla de anticuerpos discretos . Los anticuerpos monoclonales anti-IFNAR2 de la invención pueden elaborarse utilizando una variedad de métodos conocidos en la técnica, incluyendo el método de hibridoma primero descrito por Kohier et al., Nature, 256:495 (1975), o de forma alterna se pueden elaborar por métodos de DNA recombinante (por ejemplo Patente de los E.U.A. No. 4,816,567) . Vectores, Células Anfitrionas y Métodos recombinantes Para producción recombinante de un anticuerpo de la invención, el ácido nucleico que lo codifica se aisla e inserta en un vector replicable para mayor clonación (amplificación de DNA) o para expresión. DNA que codifica el anticuerpo se aisla fácilmente y secuencia utilizando procedimientos convencionales (por ejemplo al utilizar sondas oligonucleótido que son capaces de ligar específicamente a genes que codifican las cadenas pesada y ligera del anticuerpo) . Muchos vectores están disponibles. La selección de vector depende en parte de la célula anfitriona a utilizar. En general, células anfitrionas preferidas son ya sea de origen procariótico o eucariótico (generalmente de mamífero) . Generación de Anticuerpos Utilizando Células Anfi trionas Procarióticas : Construcción de Vector Secuencias polinucleótido que codifican componentes polipéptido del anticuerpo de la invención pueden obtenerse utilizando técnicas recombinante estándar. Secuencias polinucleótido deseadas pueden aislarse y secuenciarse de células productoras de anticuerpo tales como células de hibridoma. En forma alterna, polinucleótidos pueden sintetizarse utilizando sintetizador de nucleótido o técnicas PCR. Una vez obtenidas, secuencias que codifican los polipéptidos se insertan en un vector recombinante capaz de replicación y expresión de polinucleótidos heterólogos en anfitriones procarióticos. Muchos vectores que están disponibles y conocidos en la técnica pueden utilizarse para el propósito de la presente invención. La selección de un vector apropiado dependerá primordialmente del tamaño de los ácidos nucleicos a insertarse en el vector y la célula anfitriona particular a transformarse con el vector. Cada vector contiene diversos componentes, dependiendo de su función (amplificación o expresión de polinucleotido heterólogo o ambos) y su compatibilidad con la célula anfitriona particular en la que reside. Los componentes de vector en general incluyen pero no están limitados a: un origen de reaplicación, un gen marcador de selección, un promotor, un sitio de enlace de ribosoma (RBS), una secuencia de señal, el inserto de ácido nucleico heterólogo, y una secuencia de terminación de transcripción. En general, vectores plásmido contienen secuencias de control y replicón, que se derivan de especies compatibles con la célula anfitriona, se utilizan en conexión con estos anfitriones. El vector ordinariamente transporta un sitio de replicación, así como secuencias de marcado, que son capaces de proporcionar selección fenotípica en células transformadas. Por ejemplo, E. Coli se transforma típicamente utilizando pBR322, un plásmido derivado de una especie E. coli . pBR322 contiene genes que codifican resistencia a ampicilina (Amp) y tetraciclina (Tet) y de esta manera proporciona medios fáciles para identificar células transformadas. pBR322, sus derivados u otros plásmidos microbianos o bacteriófago también puede contener, o ser modificado para contener promotores que pueden utilizarse por el organismo microbiano para expresión de proteínas endógenas. Ejemplos de derivados pBR322 utilizados para expresión de anticuerpos particulares se describen en detalle por Cárter et al., patente de los E.U.A. No. 5,648,237. Además, vectores fago que contienen secuencias de control y replicón que son compatibles con el microorganismo anfitrión pueden utilizarse como vectores de transformación en conexión con estos anfitriones. Por ejemplo, bacteriófago tal como IGEM.TM.-11 pueden utilizarse para producir un vector recombinante que puede ser utilizado para transformar células anfitrionas susceptibles tales como LE392 E. coli . El vector de expresión de la invención puede comprender dos o más pares promotor-cistrón, que codifican cada uno de los componentes polipéptido. Un promotor es una secuencia regulatoria sin traducción ubicada corriente arriba (5') a un cistrón que modula su expresión. Promotores procarióticos típicamente caen en dos clases, inducibles y constitutivos. Un promotor inducible es un promotor que inicia niveles de transcripción incrementados del cistrón bajo su control, en respuesta a cambios en la condición de cultivo, por ejemplo la presencia o ausencia de un nutriente o cambio en temperatura. Una gran cantidad de promotores reconocidos por una variedad de células anfitrionas potenciales son bien conocidos . El promotor selecto puede enlazarse operativamente con DNA cistrón que codifica la cadena ligera o pesada al retirar el promotor de la fuente DNA mediante digestión de encima de restricción e insertar la secuencia promotora aislada en el vector de la invención. Tanto la secuencia promotora nativa como muchos promotores heterólogos pueden utilizarse para dirigir amplificación y/o expresión de los genes objetivo. En algunas modalidades, promotores heterólogos se utilizan, ya que en general permiten mayor trascripción y superiores rendimientos de gen objetivo expresado en comparación con el promotor polipéptido objetivo nativo . Promotores adecuados para utilizar con anfitriones procarióticos incluyen el promotor PhoA, los sistemas promotores ?-galactamasa y lactosa, un sistema promotor triptofano (trp) y promotores híbridos tales como el promotor tac o tre . Sin embargo, otros promotores que son funcionales en bacterias (tales como otros promotores bacterianos o fago conocidos) son igualmente adecuados. Sus secuencias nucleótido se ha publicado, de esta manera permitiendo a una persona con destreza en la técnica ligarlos operativamente con cistrones que codifican las cadenas ligera y pesada objetivo (Siebenlist et al. (1980) Cell 20: 269) utilizando enlazadores o adaptadores para suministrar cualesquiera sitios de restricción requeridos . En un aspecto de la invención, cada cistrón dentro del vector recombinante comprende un componente de secuencia de señal de secreción que dirige la translocación de los polipéptidos expresados a través de una membrana. En general, la secuencia de señal puede ser un componente del vector, o puede ser parte del DNA polipépido objetivo que se inserta en el vector. La secuencia de señal seleccionada para propósitos de esta invención deberá ser aquella que se reconozca y procese (es decir, escinda por una señal peptidasa) por la célula anfitriona. Para células anfitrionas procarioticas que no reconocen y procesan las secuencias de señal nativas a los polipéptidos heterólogos, la secuencia de señal se sustituye por una secuencia de señal procariótica seleccionada por ejemplo del grupo que consiste de fosfatasa alcalina, penicilinasa, Ipp, o líderes de enterotoxina termoestables II (STII) LamB, PhoE, PelB, OmpA y MBP. En una modalidad de la invención, las secuencias de señal utilizadas en ambos cistrones del sistema de expresión son secuencias de señal STII o sus variantes. En otro aspecto, la producción de las inmunoglobulinas de acuerdo con la invención, puede ocurrir en el citoplasma de la célula anfitriona y por lo tanto no requiere la presencia de secuencias de señal de secreción dentro de cada cistrón. En ese aspecto, cadenas ligeras y pesadas de inmunoglobulina se expresan, pliegan y ensamblan para formar inmunoglobulinas funcionales dentro del citoplasma. Ciertas cepas anfitrionas (por ejemplo las cepas E. coli trxB-) proporcionan condiciones de citoplasma que son favorables para formación de enlace disulfuro, de esta manera permitiendo un plegado y ensamblado adecuado de las subunidades de proteína expresada. Proba and Pluckthun Gene, 159:203 (1995). Anticuerpos de la invención también pueden producirse al utilizar un sistema de expresión en el que la proporción cuantitativa de los componentes polipéptido expresados pueden modularse a fin de llevar al máximo el rendimiento de anticuerpos secretados y adecuadamente ensamblados de la invención. Esta modulación se logra al menos en parte por modulación simultánea de fuerzas de traducción para los componentes polipéptido. Una técnica para modular la fuerza de traducción se describe por Simmons en la patente de los E.U.A. No. 5,840,523. Utiliza variantes para la región de inicio de traducción (TIR) dentro de un cistrón. Para una TIR determinada, una serie de variantes de secuencia de aminoácido o ácido nucleico puede crearse con un intervalo de fuerzas de traducción, proporcionando de esta manera un medio conveniente por el cual se ajusta este factor al nivel de expresión deseado de la cadena específica. Variantes TIR puede generarse por técnicas de mutagénesis convencional que resultan en cambios de codón que pueden alterar la secuencia de aminoácidos, aunque cambios silenciosos de la secuencia de nucleótido se prefieren. La alteración en la TIR puede incluir por ejemplo alteraciones en el número o espaciamiento de secuencias Shine-Dalgarno, junto con alteraciones en la secuencia de señal . Un método para generar secuencias de señal mutantes es la generación de un "banco de codones" al inicio de una secuencia de codificación que no cambia la secuencia de aminoácido de la secuencia de señal (es decir, los cambios son silenciosos) . Esto puede lograrse al cambiar la tercer posición de nucleótido de cada codón; adicionalmente, algunos aminoácidos tales como leucina, serina y arginina tienen múltiples primeras y segundas posiciones que pueden agregar complejidad para producir el banco. Este método de mutagénesis se describe en detalle en Yansura et al. (1992) METHODS: A Companion to Methods in Enzymol. 4:151-158. De preferencia, un conjunto de vectores se genera con un intervalo de fuerzas de TIR para cada cistrón. Este conjunto limitado proporciona una comparación de niveles de expresión de cada cadena así como el rendimiento de los productos de anticuerpo deseados bajo diversas combinaciones de fuerza TIR. Fuerzas TIR pueden determinarse por cuantificación del nivel de expresión de un gen reportero como se describe en detalle por Simmons y colaboradores en la patente de los E.U.A. No. 5, 840,523. Con base en la comparación de fuerza de traducción, las TIRs individuales deseadas se eligen para combinarse en las construcciones de vector de expresión de la invención. Células anfitrionas procarióticas adecuadas para expresión de anticuerpo de la invención incluyen Archaebacteria y Eubacteria, tales como organismos Gram-negativos o Gram-positivos. Ejemplos de bacterias útiles incluyen (e.g., E. coli), Bacilli (e.g., B. subtilis), Enterobacteria, especies de Pseudomonas (e.g., P. aeruginosa), Salmonella typhimurium, Serratia marcescans, Klebsiella, Proteus, Shigella, Rhizobia, Vitreoscilla, or Paracoccus. En una modalidad, se utilizan células Gram-negativas. En una modalidad, células de E. Coli se utilizan como anfitriones para la invención. Ejemplos de cepas de E. Coli incluyen la cepa W3110 (Bachmann, Cellular and- Molecular Biology, vol. 2 (Washington, D.C.: American Society for Microbiology, 1987), pp. 1190-1219; Depósito ATCC No. 27,325) y sus derivados, incluyendo la cepa 33D3 que tiene el genotipo W3110 ? fhuA ( ? tonA) ptr3 lac Iq lacL8 ? ompT (nmpc-fepE) degP41 kan" (Patente de los E.U.A. No. 5,639,635). Otras cepas y sus derivados, tales como E . Coli 294 (ATCC 31,446), E. coli B, E. coli?. 1776 (ATCC 31,537) and E. coli RV308 (ATCC 31,608) son también adecuadas. Estos ejemplos son ilustrativos en vez de limitantes. Métodos para construir derivadas de cualquiera de las bacterias anteriormente mencionadas que tienen genotipos definidos se conocen en la técnica y se describen, por ejemplo en Base et al., Proteins, 8:309-314 (1990). En general es necesario seleccionar las bacterias apropiadas tomando en consideración la replicabilidad del replicón en las células de una bacteria. Por ejemplo, las especies E. Coli , Serratia , or Salmonella pueden ser empleadas convenientemente como el anfitrión cuando plásmidos bien conocidos tales como pBR322, pBR325, pACYC177, o pKN410 se utilizan para suministrar el replicón. Típicamente, la célula anfitriona deberá secretar cantidades mínimas de encimas proteoliticas e inhibidores de proteasa adicionales puede convenientemente incorporarse en el cultivo celular. Producción de Anticuerpo Células anfitrionas se transforman con los vectores de expresión anteriormente descritos y cultivan en medio nutriente convencional modificado como sea apropiado para inducir promotores, selecciones transformantes o amplificar los genes que codifican las secuencias deseadas. La transformación significa introducir DNA en el anfitrión procariótico de manera tal que el DNA sea replicable, ya sea como un elemento extracromosomal o por integración cromosomal . Dependiendo de la célula anfitriona empleada, la transformación se realiza utilizando técnicas estándar apropiadas a estas células . El tratamiento de calcio que emplea cloruro de calcio en general se utiliza para células bacterianas que contienen substanciales barreras a la pared celular. Otro método para transformación emplea polietilen glicol/DMSO. Todavía otra técnica empleada es la electroporación . Células procarióticas empleadas para producir los polipéptidos de la invención se desarrollan en medio que se conoce en la técnica y son adecuados para el cultivo de las células anfitrionas selectas. Ejemplos de medios convenientes incluyen caldo luria (LB) más los suplementos nutrientes necesarios. En algunas modalidades, los medios también contienen un agente de selección, elegido con base a la construcción del vector de expresión, para permitir selectivamente el crecimiento de células procarióticas que contienen el vector de expresión. Por ejemplo, se agrega ampicilina a medio para desarrollo de células que expresan el gen de resistencia a ampicilina. Cualesquiera suplementos necesarios además de fuentes de carbono, nitrógeno y fosfato inorgánico también pueden incluirse a concentraciones apropiadas introducidas solo o como una mezcla con otro suplemento o medo tal como una fuente de nitrógeno complejo. Opcionalmente, el medio de cultivo puede contener uno o más agentes reductores seleccionados del grupo que consiste de glutationa, cisteína, cistamina, tioglicolato, ditioeritritol y ditiotreitol . Las células anfitrionas procarióticas se cultivan a temperaturas convenientes. Para crecimiento de E. Coli por ejemplo la temperatura preferida tiene un intervalo de aproximadamente 20 °C a aproximadamente 39°C, de preferencia de aproximadamente 25 °C a aproximadamente 37 °C, de preferencia a aproximadamente 30 °C. El pH del medio puede ser cualquier pH en el intervalo de aproximadamente 5 a aproximadamente 9, dependiendo primordialmente del organismo anfitrión. Para E. Coli , el pH puede ser de aproximadamente 6.8 a aproximadamente 7.4, o a aproximadamente 7.0. Si se utiliza un promotor inducible en el vector de expresión de la invención, se induce expresión de proteína bajo condiciones adecuadas para la activación del promotor. En un aspecto de la invención, promotores PhoA se emplean para controlar la transcripción de los polipéptidos. De acuerdo con esto, las células anfitrionas transformadas se cultivan en un medio limitante de fosfato para inducción. En una modalidad, el medio limitante de fosfato es el medio C.R.A.P (ver, por ejemplo, Simmons et al., J. Immunol . Methods (2002), 263:133-147) . Una variedad de otros inductores puede utilizarse, de acuerdo con la construcción del vector empleada, como se conoce en la técnica. En una modalidad, los polipéptidos expresados de la presente invención son secretados en y recuperados del periplasma de las células anfitrionas. La recuperación de proteína típicamente involucra descomponer el microorganismo, generalmente por medios tales como choque osmótico, sonicación o lisis. Una vez que se rompen las células, pueden retirarse desechos celulares o células enteras mediante centrifugación o filtración. Las proteínas pueden ser adicionalmente purificadas por ejemplo por cromatografía de resina-afinidad. En forma alterna, las proteínas pueden transportarse en el medio de cultivo y aislarse ahí. Las células pueden retirarse del cultivo y el sobrenadante de cultivo se filtra y concentra para mayor purificación de las proteínas producidas. Los polipéptidos expresados pueden ser además aislados e identificados utilizando métodos comúnmente conocidos tales como electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE) y ensayo de transferencia Western. En un aspecto de la invención, la producción de anticuerpos se realiza en gran cantidad por un proceso de fermentación. Diversos procedimientos de fermentación de alimentar por lotes a gran escala están disponibles para producir proteínas recombinantes. Fermentaciones a gran escala tiene cuando menos 1000 litros de capacidad, de preferencia de aproximadamente 1,000 a 100,000 litros de capacidad. Estos termentadores utilizan impulsores-agitadores para distribuir oxígeno y nutrientes, en especial glucosa (la fuente preferida de carbono/energía) . La fermentación a escala pequeña se refiere en general a fermentación en un fermentador que no es más de aproximadamente 100 litros en capacidad volumétrica y puede estar en el intervalo de aproximadamente 1 litro a aproximadamente 100 litros. En un proceso de fermentación, la inducción de expresión de proteína típicamente se inicia después de que la célula se ha desarrollado bajo condiciones convenientes a una densidad deseada, por ejemplo una OD550 de aproximadamente 180-220, en esa etapa las células están en la fase estacionaria temprana. Una variedad de inductores puede emplearse, de acuerdo con la construcción de vector empleada, como se conoce en la técnica y describió anteriormente. Las células pueden desarrollarse por periodos más cortos antes de inducción. Las células usualmente se inducen por aproximadamente 12-50 horas, aunque el tiempo de inducción más largo o más corto puede emplearse. Para mejorar el rendimiento y calidad de producción de los polipéptidos de la invención, puede modificarse diversas condiciones de fermentación. Por ejemplo, para mejorar el adecuado ensamblado y plegado de los polipéptidos de anticuerpos secretados, vectores adicionales que sobreexpresan proteínas chaperonas, tales como proteínas de Dsb (DsbA, DsbB, DsbC, DsbD y/o DsbG) o FkpA (una peptidilprolil cis, trans- isomerasa con actividad chaperona) pueden utilizarse para co-transformar las células procarióticas anfitrionas. Las proteínas chaperonas se ha demostrado que facilitan el plegado y solubilidad adecuados de las proteínas heterólogas producidas en células anfitrionas bacterianas. Chen et al. (1999) J Bio Chem 274:19601-19605; Georgiou et al., Patente de los E.U.A. No. 6,083,715; Georgiou et al., Patente de los E.U.A. No. 6,027,888; Bothmann and Pluckthun (2000) J. Biol. Chem. 275:17100-17105; Ramm and Pluckthun (2000) J. Biol. Chem. 275:17106-17113; Arie et al. (2001) Mol. Microbiol. 39:199-210. Para minimizar la proteólisis de proteínas heterólogas expresadas (en especial aquellas que son proteolíticamente sensibles) , ciertas células anfitrionas deficientes por enzimas proteolíticas pueden emplearse para la presente invención. Por ejemplo, cepas de células anfitrionas pueden modificarse para efectuar la o las mutaciones genéticas en los genes que codifican proteasas bacterianas conocidas tales como Proteasa III, OmpT, DegP, Tsp, Proteasa I, Proteasa Mi, Proteasa V, Proteasa VI y sus combinaciones . Algunas cepas deficientes en proteasa E. col i están disponibles y describen por ejemplo en, Joly et al. (1998), supra; Georgiou et al., patente en los E.U.A. Número 5,264,365; Georgiou et al., patente en los E.U.A. Número 5,508,192; Hará et al., Microbial Drug Resistance, 2:63-72 (1996). En una modalidad, cepas de E. coli deficientes para enzimas proteolíticas y transformadas con plásmidos que sobre expresan una o más proteínas chaperonas, se utilizan como células anfitrionas en el sistema de expresión de la invención , Purificación de An ti cuerpo En una modalidad, la proteína de anticuerpo producida aquí se purifica adicionalmente para obtener preparaciones que son substancialmente homogéneas para mayores ensayos y usos . Métodos de purificación de proteína estándar conocidos en la técnica pueden emplearse. Los siguientes procedimientos son ejemplares de procedimientos de purificación convenientes: fraccionación en columnas de inmunoafinidad o intercambio de iones, precipitación con etanol, HPLC de fase inversa, cromatografía en sílice o en una resina de intercambio de cationes tal como DEAE, cromatoenfoque, SDS-PAGE, precipitación de sulfato de amonio y filtración de gel utilizando por ejemplo Sephadex G-75. En un aspecto, Proteína A inmovilizada en una fase sólida se utiliza para purificación de inmunoafinidad de los productos de anticuerpo de la invención. La Proteína A es una proteína de pared celular de 41 KD de Staphylococcus áureas , que liga con alta afinidad a la región Fc de anticuerpos. Lindmark et al (1983) J. Immunol . Meth. 62:1-13. La fase sólida en la cual la Proteína A se inmoviliza puede ser una columna que comprende una superficie de vidrio o sílice, o una columna de vidrio con poro controlado o una columna de ácido silícico. En algunas aplicaciones, la columna se reviste con un reactivo tal como glicerol, para evitar en forma posible adherencia no especifica de contaminantes. Como la primera etapa de purificación, la preparación derivada del cultivo celular como se describió anteriormente puede ser aplicada en una fase sólida inmovilizada con Proteína A para permitir enlace específico del anticuerpo de interés a la Proteína A. La fase sólida entonces se elabora para retirar contaminantes ligados no específicamente con la fase sólida. Finalmente, el anticuerpo de interés se recupera de la fase sólida mediante elución. Generación de anti cuerpos utilizando células anfi trionas eucarióticas Los componentes vector generalmente incluyen pero no están limitados a uno o más de los siguientes: una secuencia de señal, un origen de replicación, uno o más genes marcadores, un elemento mejorador, un promotor y una secuencia de fin de transcripción . (i ) Componente de secuencia de señal Un vector para utilizar en una célula anfitriona eucariótica también puede contender una secuencia de señal u otro polipéptido que tiene un sitio de escisión específico en el extremo N de la proteína madura o polipéptido de interés. La secuencia de señal heteróloga seleccionada en general es aquella que se reconoce y proceso (es decir escinde por una señal peptidasa) por la célula anfitriona. En expresión de célula de mamífero, secuencias de señal de mamífero así como líderes de secreción viral, por ejemplo la señal gD de herpes simplex, están disponibles. El DNA para ésta región precursora se liga en cuadro de lectura para codificación de DNA del anticuerpo . (i i ) Origen de repli cación En general, un componente de origen de replicación no se requiere para vectores de expresión de mamíferos. Por ejemplo, el origen SV40, puede emplearse típicamente sólo debido a que contiene el promotor temprano. (i i i ) Componente de gen de selección Vectores de expresión y clonación pueden contener un gen de selección, también denominado un marcador seleccionable. Genes de selección típicos codifican proteínas que (a) confieren resistencia a antibióticos u otras toxinas, por ejemplo ampicilina, neomicina, metotrexato o tetraciclina, (b) deficiencias auxotróficas de complemento, cuando sea relevante, o (c) suministrar nutrientes críticos no disponibles de medio complejo. Un ejemplo de un esquema de selección utiliza una droga para frenar el crecimiento de una célula anfitriona. Aquellas células que se transforman exitosamente con un gen heterólogo producen una proteína que confiere resistencia a droga y de esta manera sobreviven el régimen de selección. Ejemplos de esta selección dominante utilizan las drogas neomicina, ácido micofenólico e hidromicina . Otro ejemplo de marcadores de selección convenientes para células de mamífero son aquellos que permiten la identificación de células competentes para absorber el ácido nucleico anticuerpo tales como DHFR, timidina cinasa, metalotionina-I y II (por ejemplo genes de metalotionina de primate), adenosina deaminasa, ornitina descarboxilasa, etc. Por ejemplo, células transformadas con el gen de selección DHFR pueden ser primero identificadas al cultivar todos los transformantes en un medio de cultivo que contiene metotrexato (Mtx) , un antagonista competitivo de DHFR. Células anfitrionas apropiadas cuando DHFR de tipo silvestre se emplea, incluyen por ejemplo la línea celular de ovario de hámster Chino (CHO) deficiente en actividad de DHFR (por ejemplo ATCC CRL- 9096) . En forma alterna, células anfitrionas (particularmente anfitrionas tipo silvestre que contienen DHFR endógeno) transformadas o cotransformadas con consecuencias de DNA que codifican un anticuerpo, proteínas DHFR de tipo silvestre y otro marcador seleccionable tal como aminoglicosido 3 '- fosfotransferasa (APH) pueden seleccionarse por crecimiento celular en medio que contiene un agente de selección para el marcador seleccionable tal como un antibiótico aminoglicosidico, por ejemplo canamicina, neomicina o G418. Ver Patente de los E.U.A. Número 4,965,199. (iv) Componente promotor Vectores de expresión y clonación usualmente contienen un promotor que se reconoce por el organismo anfitrión y se enlaza operativamente con ácido nucleico que codifica un polipéptido de interés (por ejemplo un anticuerpo) . Secuencias promotoras se conocen para eucariótas . Virtualmente todos los genes eucarióticos tienen una región rica en AT ubicada aproximadamente 25 a 30 bases corriente arriba del sitio en donde se inicia la transcripción. Otra secuencia encontrada 70 a 80 bases corriente arriba del inicio de transcripción de muchos genes es una región CNCAAT en donde N puede ser cualquier nucleótido. En el extremo 3' de la mayoría de los genes eucarióticos está una secuencia AATAAA que puede ser la señal para adición de la cola poli A al extremo 3' de la secuencia de codificación. Todas estas secuencias se insertan convenientemente en vectores de expresión eucarióticos. La transcripción de polipéptido de anticuerpo de vectores en células anfitrionas de mamífero puede ser controlada por ejemplo por promotores obtenidos de los genomas de virus tales como virus polioma, virus de viruela aviar, adenovirus (tal como Adenovirus 2), virus de papiloma bovino, virus de sarcoma aviar, citomegalovirus, un retrovirus, virus de hepatitis-B y Virus del Simio 40 (SV40), de promotores de mamíferos heterólogos, por ejemplo el promotor actina o un promotor de inmunoglobulina o de promotores del choque térmico, siempre que estos promotores sean compatibles con los sistemas de células anfitrionas. Los promotores iniciales y posteriores del virus SV40 se obtienen convenientemente como un fragmento de restricción SV40 que también contiene el origen de replicación viral SV40. El promotor temprano inmediato del citomegalovirus humano se obtiene convenientemente como un fragmento de restricción HindIII E. Un sistema para expresión de DNA en anfitriones de mamífero utilizando el virus de papiloma bovino como vector, se describe en la Patente de los E.U.A. Número 4,419,446. Una modificación de este sistema se describe en la Patente de los E.U.A. Número 4,601,978. Ver también Reyes et al., Nature 297:598-601 (1982) o la expresión de cDNA interferona ß humana en células de ratón bajo el control de un promotor timidina cinasa del virus de herpes simplex. En forma alterna, la repetición terminal larga del Virus Rous Sarcoma puede utilizarse como el promotor. (v) Componente de elemento mejorador La transcripción de DNA que codifica un polipéptido de anticuerpo de la invención por superiores eucariotas a menudo puede incrementarse al insertar una secuencia mejoradora en el vector. Muchas secuencias mejoradoras ahora se conocen de genes de mamífero (globina, elastasa, albúmina, a fetoproteína e insulina) . Típicamente sin embargo se utilizará un mejorador de un virus de célula eucariótica. Ejemplos incluyen el mejorador SV40 en el lado posterior del origen de replicación (bp 100-270) , el mejorador promotor de indicio de citomegalovirus, el mejorador de polioma en el lado posterior del origen de replicación y mejoradores de adenovirus. Ver también Yaniv, Nature 297:17-18 (1982) en elementos de mejora para activación de promotores eucarióticos. El mejorador puedes ser combinado en el vector en una posición 5 ' o 3 ' a la secuencia de codificación de anticuerpo polipéptido, pero en general se ubica en un sitio 5' desde el promotor . (vi ) Componente de terminación de transcripción Vectores de expresión utilizados en células anfitrionas eucarióticas, típicamente también contendrán secuencias necesarias para la terminación de transcripción y para estabilizar mRNA. Estas secuencias comúnmente están disponibles de las regiones sin traducción 5' y ocasionalmente 3' de DNAs o cDNAs virales o eucarióticos. Estas regiones contienen segmentos nucleótidos transcritos, fragmentos poliadenilados en la porción sin traducción de mRNA que codifica un anticuerpo. Un componente de terminación de transcripción útil es la región de poliadenilación de hormona de crecimiento bovino. Ver WO94/11026 y el vector de expresión allí descrito . (vii ) Selección y transformación de células anfi trionas Células anfitrionas convenientes para clonar o expresar el DNA en los vectores presentes incluyen células eucarióticas superiores aquí descritas incluyendo células anfitrionas de vertebrados. La propagación de células de vertebrados en cultivo (cultivo de tejido) se ha vuelto un procedimiento rutinario. Ejemplos de líneas celulares anfitrionas de mamíferos útiles son líneas CV1 de riñon de mono transformado por SV40 (COS-7, ATCC CRL 1651) ; línea de riñon embriónico humano (293 o células 293 subclonadas para crecimiento en cultivos de suspensión, Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977) ) ; células de riñon de hámster bebe (BHK, ATCC CCL 10) ; células de ovario de hámster sino/ -DHFR (CHO, Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)); células sertoli de ratón (TM4, Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980) ); células de riñon de mono (CV1 ATCC CCL 70) ; células de riñon de mono verde africano (VERO-76, ATCC CRL-1587); células de carcinoma cervical humano (HELA, ATCC CCL 2); células de riñon canino (MDCK, ATCC CCL 34) ; células de hígado de rata búfalo (BRL 3A, ATCC CRL 1442) ; células de pulmón humano (W138, ATCC CCL 75); células de hígado humano (Hep G2 , HB 8065) ; tumor de mama de ratón (MMT 060562, ATCC CCL51); células TR1 (Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)); células MRC 5; células FS4 ; y una línea de hepatoma humano (Hep G2 ) . Células anfitrionas se transforman con los vectores de clonación de expresión anteriormente descritos para producción de anticuerpo y cultivan en medio nutriente convencional modificado como sea apropiado para inducir promotores, seleccionar transformantes o amplificar los genes que codifican las secuencias deseadas . (viii ) Cul tivo de las células anfi trionas Las células anfitrionas utilizadas para producir un anticuerpo en esta invención pueden ser cultivadas en una variedad de medios. Medios comercialmente disponible tal como Ham's FIO (Sigma), Medio Escencial Mínimo ( (MEM) , (Sigma) , RPMI-1640 (Sigma), y Medio Eagle ' s Modificado con Dulbecco's ( (DMEM) , Sigma) son adecuados para cultivar las células anfitrionas. Además, cualquiera de los medios descritos en Ham et al., Meth. Enz. 58:44 (1979), Barnes et al., Anal. Biochem.102 : 255 (1980), Patentes de los E.U.A. Números 4,767,704; 4,657,866; 4,927,762; 4,560,655; o 5,122,469; WO 90/03430; WO 87/00195; o Patente de Reexpedición de los E.U.A. Número 30,985 pueden utilizarse como medio de cultivo para las células anfitrionas. Cualquiera de estos medios puede ser suplementado según sea necesario con hormonas y/u otros factores de crecimiento (tales como insulina, transferina, o factores de crecimiento epidérmico) , sales (tales como cloruro de sodio, calcio, magnesio y fosfato) , amortiguadores (tales como HEPES) , nucleótidos (tales como adenosina y timidina) , antibióticos (tales como la droga GENTAMYCINR) , elementos en trazas (definidos como compuestos inorgánicos usualmente presentes a concentraciones finales en el intervalo micromolar) y glucosa o una fuente de energía equivalente. Cualesquiera otros suplementos necesarios también pueden incluirse a concentraciones apropiadas que serán conocidos por aquellos con destreza en la técnica. Las condiciones de cultivo tales como temperatura, pH y semejantes son aquellas previamente empleadas con la célula anfitriona seleccionada para expresión, y serán aparentes a la persona con destreza en la técnica. (ix) Puri fi cación de anti cuerpo Cuando se utilizan técnicas recombinantes, el anticuerpo puede producirse en forma intracelular, o secretado directamente al medio. Si el anticuerpo se produce en forma intracelular, como una primer etapa, los desechos de partículas, ya sean de células anfitrionas o fragmentos lisados, en general se retiran por ejemplo mediante centrifugación o ultrafiltración. Cuando el anticuerpo se secreta al medio, sobrenadantes de estos sistemas de expresión en general primero se concentran utilizando un filtro para concentración de proteína comercialmente disponible, por ejemplo una Unidad de Ultrafiltración Amicon o Millipore Pellicon. Un inhibidor de proteasa tal como PMSF puede incluirse en cualquiera de las etapas anteriores para inhibir la proteólisis y pueden incluirse antibióticos para evitar el crecimiento de contaminantes adventicios. La composición de anticuerpo preparada a partir de células puede purificarse utilizando por ejemplo cromatografía de hidroxilapatita, electroforesis en gel, diálisis y cromatografía por afinidad, con la cromatografía de afinidad que es una técnica de purificación generalmente aceptable. La conveniencia de los reactivos de afinidad tales como Proteína A como un ligando de afinidad depende de la especie e isotipo de cualquier dominio Fc de inmunoglobulina que está presente en el anticuerpo. La Proteína A puede utilizarse para purificar anticuerpos que se basan en cadenas pesadas ? l , ? 2 , ? 3 o ? 4 humano (Lindmark et al., J. Immunol . Meth. 62:1-13 (1983)) . La Proteína G se recomienda para todos los isotipos de ratón y para ? 3 humano (Guss et al., EMBO J. 5:15671575 (1986)). La matriz en la cual el ligando de afinidad se conecta es más a menudo agarosa, pero están disponibles otras matrices. Matrices mecánicamente estables tales como vidrio de poro controlado o poli (estirendivinil) benzeno permiten más rápidos gastos de flujo y tiempos más cortos de procesamiento que los que pueden lograrse con agarosa. Cuando el anticuerpo comprende un dominio CH3 , la resina Bakerbond ABXRresin (J. T. Baker, Phillipsburg, NJ) es útil para purificación. Otras técnicas para purificación de proteína tales como fraccionación en una columna de intercambio de iones, precipitación con etanol, HPLC de Fase Inversa, cromatografía en sílice, cromatografía en heparina cromatografía en SEPHAROSMR en una resina de intercambio de aniones o cationes (tal como una columna de ácido poliaspártico) , cromato enfoque, SDS-PAGE, y precipitación con sulfato de amonio, también están disponibles dependiendo del anticuerpo a recuperar. Después de cualquiera o cualesquiera etapas de purificación preliminares, la mezcla que comprende el anticuerpo de interés y contaminantes puede someterse a adicionales etapas de purificación según sea necesario, por ejemplo por cromatografía de interacción hidrofóbica de bajo pH utilizando un amortiguador de elusión a un pH entre aproximadamente 2.5-4.5, en general realizado a bajas concentraciones de sal (por ejemplo con sal de aproximadamente 0-0.25M) .

Habrá de notarse que, en general técnicas y metodologías para preparar anticuerpos para utilizar en investigación, prueba y uso clínico están bien establecidas en la especialidad, consistentes con lo anterior y/o según se considere apropiada para una persona con destreza en la técnica para el anticuerpo particular de interés. Ensayos de Actividad Anticuerpos de la invención pueden caracterizarse por sus propiedades físicas/químicas y funciones biológicas por diversos ensayos conocidos en la técnica. Anticuerpos purificados pueden ser más caracterizados por una serie de ensayos incluyendo pero no limitados a secuenciado N-terminal, análisis de aminoácidos, cromatografía líquida con alta presión-exclusión de tamaños sin desnaturalización (HPLC), espectrometría de masas, cromatografía de intercambio de iones y digestión de papaína. Cuando sea necesario, se analizan los anticuerpos por su actividad biológica. En algunas modalidades, se prueban anticuerpos de la invención por su actividad de enlace de antígeno. Los ensayos de enlace de antígeno que se conocen en la técnica y pueden emplearse aquí incluyen sin limitación cualesquiera ensayos de enlace directos o competitivos utilizando técnicas tales como transferencias western, radioinmunoensayos, ensayo inmunosorbente enlazado con enzima (ELISA = enzyme linked immnosorbent assay) , inmunoensayos "emparedado", ensayos de inmunopresipitación, inmunoensayos fluorescentes, e inmunoensayos de proteína A. En una modalidad, la invención contempla un anticuerpo alterado que posee algunas pero no todas las funciones efectoras, que lo hacen un candidato conveniente para muchas aplicaciones en donde la vida media del anticuerpo in vivo es importante sin embargo ciertas funciones efectoras (tales como complemento ADCC) son innecesarias o nocivas. En ciertas modalidades, las actividades Fc del anticuerpo se miden para asegurar que solo se mantengan las propiedades deseadas. Ensayos in vi tro y/o in vivo de citotoxicidad pueden realizarse para confirmar la reducción/agotamiento de actividades CDC y/o ADCC. Por ejemplo, ensayos de enlace de repceptor Fc (FcR) pueden conducirse para asegurar que el anticuerpo carece de enlace Fc/R (por lo tanto probable que carece de la actividad ADCC) pero retiene actividad de enlace FcRn. Las células primarias para mediar ADCC, células NK, expresan sólo Fc^RIII, mientras que los monocitos expresan Fc^RI, Fc^RII y Fc^RIII. La expresión FcR en células hematopoyéticas se resume en la Table 3 en la página 464 de Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991) . Un ejemplo de un ensayo in vi tro para estimar actividad ADCC de una molécula de interés se describe en las Patentes de los E.U.A. Números 5,500,362 o ,821,337. Células efectoras útiles para estos ensayos icluyen células mononucleares de sangre periférica (PBMC) y células Destructoras Naturales (NK) . En forma alterna o adicionalmente, la actividad ADCC de la molécula de interés puede estimarse in vivo, por ejemplo en un modelo de animal tal como el descrito en Clynes et al . PNAS (USA) 95:652-656 (1998). Ensayos de enlace Clq también pueden llevarse acabo para confirmar que el anticuerpo es incapaz de ligar Clq y por lo tanto carece de la actividad CDC. Para estimar actividad de complemento un ensayo CDC, por ejemplo como se describe en Gazzano-Santoro et al., J. Immunol . Methods 202:163 (1996), puede realizarse. Enlace FcRn y determinaciones de vida media/liberación in vivo también pueden realizarse utilizando métodos conocidos en la técnica. Anti cuerpos Humani zados La invención abarca anticuerpos humanizados. Diversos métodos para humanizar anticuerpos no humanos, se conocen en la técnica. Por ejemplo, un anticuerpo humanizado puede tener uno o más residuos aminoácidos introducidos en el de una fuente que no es humana. Estos residuos aminoácidos no humanos a menudo se refieren como residuos de "importación" que típicamente se toman de un dominio variable de "importación". La humanización puede realizarse esencialmente siguiendo el método de Winter y colaboradores (Jones et al. (1986) Nature 321:522-525; Riechmann et al. (1988) Nature 332:323-327; Verhoeyen et al. (1988) Science 239:1534-1536), al sustituir secuencias de región hiper variable por secuencias correspondientes de un anticuerpo humano. De acuerdo con esto, estos anticuerpos "humanizados" son anticuerpos quiméricos (patente en los E.U.A. Número 4,816,567) en donde sustancialmente menos que un dominio variable humano intacto sea sustituido por la secuencia correspondiente de una especie no humana. En la práctica, anticuerpos humanizados típicamente son anticuerpos humanos en donde algunos residuos de región hiper variable y posiblemente algunos residuos FR se sustituyen por residuos de sitios análogos en anticuerpos de roedor. La selección de dominios variables humanos, tanto ligeros como pesados a utilizarse para producir los anticuerpos humanizados puede ser importante para reducir la antigenizidad. De acuerdo con el método así denominado de "mejor ajuste", la secuencia del dominio variable de un anticuerpo roedor se criba contra toda la biblioteca de secuencias de dominio variable humano conocidas. La secuencia humana que es más cercana a la del roedor se acepta entonces como el marco humano para el anticuerpo humanizado (Sims et al. (1993) J. Immunol . 151:2296; Chothia et al. (1987) J. Mol. Biol. 196:901. Otro método utiliza un marco particular derivado de la secuencia consenso de todos los anticuerpos humanos de un subgrupo particular de cadenas no pesadas o ligeras. El mismo marco puede utilizarse para varios anticuerpos humanizados diferentes (Cárter et al. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285; Presta et al. (1993) J. Immunol . , 151:2623.

Además generalmente es conveniente que se humanicen anticuerpos con retención de alta afinidad para el antígeno y otras propiedades biológicas favorables. Para lograr esta meta, de acuerdo con un método, se preparan anticuerpos humanizados por un proceso de análisis de las secuencias precursoras y diversos productos humanizados conceptuales utilizando modelos tridimensionales de las secuencias precursoras y humanizadas. Modelos de inmunoglobulina tridimensionales están comúnmente disponibles y son familiares para aquellos con destreza en la técnica. Están disponibles programas de computadora que ilustran y exhiben probables estructuras de conformación tridimensional de secuencia de inmunoglobulina candidato selectas. La inspección de estas expresiones permite análisis del papel probable a los residuos en el funcionamiento de la secuencia de inmunoglobulina candidato, es decir el análisis de residuos que influencian la capacidad de la inmunoglobulina candidato para ligar a su antígeno. De esta manera, residuos FR puede seleccionarse y combinarse de las secuencias del recipiente e importación de manera tal que la característica de anticuerpo deseada tal como afinidad incrementada por él o los antígenos objetivo, se logre. En general, los residuos de región hiper variable están involucrados directa y más sustancialmente para influenciar el enlace de antígeno. Variantes de Anticuerpo En un aspecto, la invención proporciona anticuerpos que comprenden modificaciones en la interfase de polipéptido Fc que comprenden la región Fc, en donde las modificaciones facilitan y/o promueven heterodimerización. Estas modificaciones comprenden introducción de una protuberancia en un primer polipéptido Fc y una cavidad en un segundo polipéptido Fc, en donde la protuberancia se ubica en la cavidad para promover el complejado del primer y segundo polipéptidos Fc . Métodos para generar anticuerpos con estas modificaciones se conocen en la especialidad, por ejemplo como se describe en la Patentes de los E.U.A. Número 5,731,168. En algunas modalidades, la o las modificaciones de secuencia de aminoácidos de los anticuerpos aquí descritos se contemplan. Por ejemplo, puede ser conveniente el mejorar la afinidad de enlace y/u otras propiedades biológicas del anticuerpo. Variantes de secuencia de aminoácidos del anticuerpo se preparan al introducir cambios de nucleótido apropiados en el ácido nucleico de anticuerpo o por síntesis de péptido. Estas modificaciones incluyen por ejemplo deleciónes de y/o inserciones dentro y/o sustituciones de, residuos dentro de la secuencia de aminoácido del anticuerpo. Cualquier combinación de deleción, inserción y sustitución puede realizarse para llegar a la construcción final, siempre que la construcción final posea las características deseadas. Las alteraciones de aminoácido pueden introducirse en la secuencia de aminoácidos anticuerpo sujeto al tiempo que se elabora la secuencia. Un método útil por identificación de ciertos residuos o regiones del anticuerpo que son sitios preferidos para mutagénesis se denomina "mutagénesis de exploración de alanina" como se describe por Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085. Aquí, un residuo o grupo de residuos objetivo se identifica (por ejemplo residuos cargados tales como arg, asp, his, lys, y glu) y reemplaza por un aminoácido de carga neutra o negativa (por ejemplo alanina o polialanina) para afectar la interacción de los aminoácidos con el antígeno. Esos sitios aminoácido que demuestran sensibilidad funcional a las sustituciones se refinan al introducir adicionales u otras variantes en, o para, los sitios de sustitución. De esta manera, mientras que el sitio de introducir una variación de secuencia de aminoácidos se predetermina, la naturaleza de la mutación per se no requiere ser predeterminada. Por ejemplo, para analizar el desempeño de una mutación en un sitio dado, se realiza mutagénesis aleatoria o de exploración ala en el codón de inicio o región y las inmunoglobulinas expresadas se criban por la actividad deseada. Inserciones de secuencia de aminoácidos incluyen fusiones amino- y/o carboxilo-terminales en el intervalo de longitud desde un residuo a polipéptidos que contienen cien o más residuos, así como inserciones intra secuencia de residuos aminoácidos sencillos o múltiples. Ejemplos de inserciones terminales incluyen un anticuerpo con un residuo metionilo N-terminal o el anticuerpo fusionado a un polipéptido citotóxico. Otras variantes de inserción de la molécula de anticuerpo incluyen la fusión del extremo N- o C- del anticuerpo a una enzima (por ejemplo para ADEPT) o un polipéptidos que aumenta la vida media en suero del anticuerpo . Otro tipo de variante es una variante de sustitución de aminoácido. Estas variantes tienen cuando menos un residuo aminoácido en la molécula de anticuerpo reemplazado por un residuo diferente. El sitio de mayor interés para mutagénesis de sustitución incluye las regiones hipervariables, pero también se contemplan alteraciones FR . Sustituciones conservadoras se ilustran en la Tabla A bajó el encabezado de "sustituciones preferidas". Si estas sustituciones resultan en un cambio en actividad biológica, entonces más cambios sustanciales, denominados "sustituciones ejemplares" en la Tabla A o como se describe adicionalmente a continuación con referencia a clases de aminoácidos, pueden introducirse y los productos cribarse. TABLA A Modificaciones sustanciales de las propiedades biológicas del anticuerpo se logran por selección de sustituciones que difieren significativamente en su efecto para mantener (a) la estructura principal del polipéptido en el área de la sustitución por ejemplo como una conformación de hoja o helicoidal, (b) la carga o hidrofobicidad de la molécula en el sitio objetivo, o (c) el volumen de la cadena lateral . Los aminoácidos pueden agruparse de acuerdo con similitudes en las propiedades de sus cadenas laterales (in A.L. Lehninger, in Biochemistry, second ed . , pp . 73-75, Worth Publishers, New York (1975)) : (1) no polar: Ala (A), Val (V), Leu (L) , He (I), Pro (P) , Phe (F) , Trp (W) , Met (M) (2) polar sin carga: Gly (G) , Ser (S) , Thr (T) , Cys (C) , Tyr (Y) , Asn (N) , Gln (Q) (3) acidico: Asp (D) , Glu (E) (4) básico: Lys (K) , Arg (R) , His (H) En forma alterna, residuos de origen natural pueden ser divididos en grupos con base en propiedades de cadena lateral comunes: (1) hidrofóbica: Norleucine, Met, Ala, Val, Leu, He; (2) hidrofílica neutra: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; (3) acídica: Asp, Glu; (4) básica: His, Lys, Arg; (5) residuos que influencian la orientación de cadena: Gly, Pro; (6) aromática: Trp, Tyr, Phe. Substituciones no conservadoras involucraran intercambio de un miembro de una de estas clases por otra clase. Estos residuos sustituidos también pueden introducirse en los hitos de sustitución conservadores o más preferiblemente en los sitios restantes (no conservados) . Un tipo de variantes de substitución involucra substituir uno o más residuos de región hipervariable de un anticuerpo precursor (por ejemplo un anticuerpo humanizado o humano) . En general, la o las variantes resultantes seleccionadas para mayor desarrollo tendrán propiedades biológicas mejoradas respecto a el anticuerpo precursor del cual se generan. Una forma conveniente para generar estas variantes de substitución involucra maduración de afinidad utilizando expresión en fago. Brevemente, varios sitios de región hipervariable (por ejemplo los 6-7 sitios) son mutados para generar todas las substituciones amino posibles en cada sitio. Las variantes de anticuerpo así generadas se exhiben en una forma monovalente de partículas fago filamentosas como fusiones al producto gen III de M13 empacado dentro de cada partícula. Las variantes exhibidas fago después se criban por su actividad biológica (por ejemplo afinidad de enlace) como se describe aquí. A fin de identificar sitios de región hipervariable candidatos para modificación, puede realizarse mutagenesis de exploración alanina para identificar residuos de región hipervariable que contribuyen en forma significativa a enlace de antígeno. En forma alterna o adicionalmente, puede ser benéfico analizar una estructura de cristal del complejo antígeno-anticuerpo para identificar puntos de contacto entre el anticuerpo y antígeno. Estos residuos de contacto y residuos vecinos, son candidatos para substitución de acuerdo con las técnicas conocidas en la especialidad, que incluyen aquellos aquí elaborados. Una vez que estas variantes se generan, el panel de variantes se somete a criba como se describe aquí y anticuerpos con propiedades superiores en uno o más ensayos relevantes pueden seleccionarse para mayor desarrollo. Moléculas de ácido nucleico que codifican variantes de secuencia amino ácido del anticuerpo 0 se preparan por una variedad de métodos conocidos en la técnica. Estos métodos incluyen, pero no están limitados a, aislamiento de una fuente natural (en el caso de variantes de secuencia de amino ácido de origen natural) o preparación por mutageneis derivada por oligonucleótido (o dirigida por sitio) , mutagenesi PCR y mutagenesis de cassette de una variante previamente preparada o una versión no variante del anticuerpo. Puede ser conveniente introducir una o más modificaciones de aminoácido en una región Fc de anticuerpos de la invención, de esta manera generando una variante de región Fc . La variante de región Fc puede comprender una secuencia de región Fc humana (por ejemplo una región IgGl , IgG2 , IgG3 o IgG4 Fc humana) que comprende una modificación de aminoácido (por ejemplo una sustitución) en una o más posiciones de aminoácidos incluyendo la de una cisteína bisagra. De acuerdo con esta descripción y las enseñanzas en la técnica, se contempla que en algunas modalidades, un anticuerpo de la invención puede comprender una o más alteraciones en comparación con el anticuerpo contra parte de tipo silvestre, por ejemplo en la región Fc . Estos anticuerpos sin embargo retendrán sustancialmente las mismas características requeridas para utilidad terapéutica en comparación con su contraparte de tipo silvestre. Por ejemplo, se considera que ciertas alteraciones puede elaborarse en la región Fc que resultarán en enlace alterado (es decir ya sea mejorado o disminuido) Clq y/o Citotoxicidad Dependiente del Complemento (CDC), por ejemplo cómo se describe en W099/51642. Ver también Duncan & Winter Nature 322:738-40 (1988); Patentes de los E.U.A Número 648,260; Patentes de los E.U.A Número 5,624,821; y W094/29351 referente a otros ejemplos de variantes de región Fc . Inmunocon j ugados En otro aspecto, la invención proporciona inmunoconjugados, o conjugados de anticuerpo-droga (ADC) que comprenden un anticuerpo conjugado con un agente citotóxico tal como un agente quimioterapéutico como una droga, un agente inhibidor de crecimiento, una toxina (por ejemplo, una toxina enzimáticamente activa de origen bacteriano fungal de planta o animal, o sus fragmentos) o un isótopo radioactivo (es decir, un radioconjugado) . El uso de conjugados anticuerpos-droga para el suministro local de agentes citotóxicos o cotistáticos , es decir drogas para exterminar o inhibir células de tumor en el tratamiento de cáncer (Syrigos and Epenetos (1999) Anticancer Research 19:605-614; Niculescu-Duvaz and Springer (1997) Adv. Drg Del. Rev. 26:151-172; patente de los E.U.A. número 4,975,278) permiten el suministro dirigido de la porción de droga a tumores, y acumulación intracelular ahí, en donde la administración sistémica de estos agentes de droga no conjugados puede resultar en niveles de toxicidad inaceptables a células normales así como las células de tumor que se buscan eliminar (Baldwin et al., (1986) Lancet pp.

(Mar. 15, 1986) :603-05; Thorpe, (1985) "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cáncer Therapy: A Review," in Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications, A. Pinchera et al. (ed.s), pp. 475-506) . Eficacia máxima con toxicidad mínima se busca de esta manera. Tanto anticuerpos policlonales como anticuerpos monoclonales se han reportado como útiles en estas estrategias (Rowland et al., (1986) Cáncer Immunol . Immunother., 21:183-87). Drogas empleadas en estos métodos incluyen daunomicina, doxorubicina, metotrexato y vindesina (Rowland et al., (1986) supra). Toxinas empleadas en los conjugados de anticuerpo-toxina incluyen toxinas bacterianas tales como toxina difteria, toxinas de plantas tales como ricina, toxinas de moléculas pequeñas tales como geldanamicina (Mandler et al (2000) Jour. of the Nat. Cáncer Inst . 92(19) :1573-1581; Mandler et al (2000) Bioorganic & Med. Chem. Letters 10:1025-1028; Mandler et al (2002) Bioconjugate Chem. 13:786-791), mantansinoides (EP 1391213; Liu et al., (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:8618-8623), y caliceamicina (Lode et al (1998) Cáncer Res. 58:2928; Hinman et al (1993) Cáncer Res. 53:3336-3342) . Las toxinas pueden efectuar sus efectos citotóxicos y citostáticos por mecanismos incluyendo enlace de tubulina, enlace de DNA, o inhibición de topoisomerasa. Algunas drogas citotóxicas tienden a ser inactivas o menos activas cuando se conjugan con grandes anticuerpos o ligandos receptores de proteínas . ZEVALIN® (ibritumomab tiuxetan, Biogen/Idec) es un conjugado de anticuerpo-radioisótopo compuesto por un anticuerpo monoclonal kappa IgGl murino dirigido contra el antígeno CD20 que se encuentra en la superficie de linfocitos B normales y malignos y radioisótopo 11:LIn o 90Y ligado por un quelador-enlazador tiourea (Wiseman et al (2000) Eur. Jour. Nucí. Med. 27 (7) : 766-77 ,- Wiseman et al (2002) Blood 99 (12 ): 4336-42 ; Witzig et al (2002) J. Clin. Oncol. 20 (10) : 2453-63 ; Witzig et al (2002) J. Clin. Oncol. 20 (15) : 3262-69) . Aunque ZEVALIN tiene actividad contra linfoma no-Hodgkins de célula B (NHL) , la administración resulta en citopenias severas y prolongadas en la mayoría de los pacientes. MYLOTARGMR (gemtuzumab ozogamicina, Wyeth Pharmaceuticals), un conjugado de droga anticuerpo compuesto por un anticuerpo hu CD33 enlazado a caliceamicina, fue aprobado en 2000 para el tratamiento de leucemia mieloide aguda por inyección (Drugs of the Future (2000) 25(7) :686; patentes de los E.U.A. números 4970198; 5079233; 5585089; 5606040; 5693762; 5739116; 5767285; 5773001). Cantuzumab mertansina (Immunogen, Inc.), un conjugado de droga anticuerpo compuesto por el anticuerpo huC242 enlazado mediante un enlazador disulfuro SPP con la porción de droga metansinoide, DM1, se prueba para el tratamiento de cánceres que expresan CanAg, tales como de colon, pancreático, gástrico y otros. MLN-2704 (Millennium Pharm., BZL Biologics, Immunogen Inc.), un conjugado de anticuerpo droga compuesto del antígeno de membrana específico anti-próstata (PSMA) , anticuerpo monoclonal enlazado con la porción de droga maytansinoide, DM1 se prueba para el tratamiento potencial de tumores de próstata. Los péptidos de auristatina, auristatina E (AE) y monometilauristatina (MMAE) , análogos sintéticos de dolastatina, se conjugaron en anticuerpos monoclonales quiméricos cBR96 (específicos a Lewis Y en carcinomas) y cAClO (específico a CD30 en malignidades hematológicas) (Doronina et al (2003) Nature Biotechnology 21 (7) : 778-784) están bajo desarrollo terapéutico. Agentes quimioterapéuticos útiles en la generación de inmunoconjugados se describen aquí (anteriormente) . Toxinas enzimáticamente activas y sus fragmentos que pueden emplearse incluyen cadena difteria A, fragmentos activos sin enlace de toxina difteria, cadena exotoxina A (de Pseudomonas aeruginosa) , cadena ricina A, cadena abrina A, cadena modeccina A, alfa-sarcina, proteínas de Aleurites fordii, proteínas diantina, proteínas de Phytolaca americana (PAPI, PAPII, y PAP-S) , inhibidor de mormodica charantia, curcina, crotina, inhibidor de sapaonaria officinalis, gelonina, mitogelina, restrictocina, fenomicina, enomicina, y los tricotenos . Ver por ejemplo WO 93/21232 publicado en Octubre 28, 1993. Una variedad de radionúclidos están disponibles para la producción de anticuerpos radioconjugados . Ejemplos incluyen 212Bi, 131I, 131In, 90Y, y 186Re . Conjugados de un anticuerpo y agentes citotóxicos se elaboran utilizando una variedad de agentes de acoplamiento de proteínas disfuncionales tales como N-succinimidil-3- (2-piridilditiol) propionato (SPDP) , iminotiolano (IT) , derivados bifuncionales de imidoésteres (tales como dimetil adipimidato HCl), esteres activos (tales como disuccinimidil suberato) , aldehidos tales como glutaraldehído, compuestos bis-azido (tales como bis (p-azidobenzoil ) hexanediamina) , derivados bis-diazonio (tales como bis- (p-diazoniumbenzoil ) -etilenediamina) , diisocianatos (tales como tolueno 2 , 6-diisocianato) , y los compuestos de flúor bis-activos (tales como 1 , 5-difluoro-2 , 4-dinitrobenzene) . Por ejemplo, una inmunotoxina ricina puede prepararse como se describe en Vitetta et al., Science, 238: 1098 (1987) . Ácido 1- isotiocianatobencil-3 -metildietilen triaminepentaacético (MX-DTPA) etiquetado con carbono 14 es un agente quelante ejemplar para conjugar radionucleótido con el anticuerpo. Ver WO94/11026. Conjugados de un anticuerpo y una o más toxinas de molécula pequeña, tales como calicheamicina, maytansinoides, dolostatinas, aurostatinas, un tricoteno y CC1065 y los derivados de estas toxinas que tienen actividad de toxina también se contemplan aquí . Maitansina y maytansinoides En algunas modalidades, el inmunoco jugado comprende un anticuerpo de la invención conjugado con una o más moléculas maytansinoide . Los maitansinoides son inhibidores mitóticos que actúan al inhibir la polimerización de tubulina. La maitansina primero se aisló del arbusto africano del este Mai tenus serra ta (Patente de los E.U.A. número 3,896,111). Subsecuentemente, se descubrió que ciertos microbios también producen maitansinoides, tales como maitansinol y C-3 maitansinol esteres (Patente de los E.U.A. número 4,151,042). Maitansinol sintético y sus derivados y análogos se describen por ejemplo en las Patenetes de los E.U.A. números 4,137,230; 4,248,870; 4,256,746 4,260, 608 4,265,814; 4,294,757; 4,307,016 4,308,268 4,308,269; 4,309,428; 4,313,946 4,315, 929 4,317,821; 4,322,348; 4,331,598 4,361, 650 4,364, 866; 4,424,219; 4,450,254 4,362, 663 y 4,371, 533. Porciones de droga maytansinoide son porciones de droga atractivas en conjugados de droga anticuerpo debido a que son: (i) relativamente accesibles para preparar por fermentación o modificación química, derivatización de productos de fermentación, (ii) suceptibles a derivatización con grupos funcionales adecuados para conjugar a través de enlazadores no disulfuro con anticuerpos, (iii) estables en plasma y (iv) efectivos contra una variedad de líneas celulares de tumor. Modalidades ejemplares de porciones de droga maytansinoide incluyen DM1; DM3; y DM4. inmunoconjugados que contienen maytansinoides , métodos para producirlos y su uso terapéutico se describe por ejemplo en las patentes de los E.U.A. números 5,208,020, 5,416,064 y la patente Europea EP 0 425 235 Bl, las descripciones de las cuales aquí se incorporan expresamente por referencia. Liu et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:8618-8623 (1996) describen inmunoconjugados que comprenden un maytansinoide designado DM1 enlazado al anticuerpo monoclonal C242 dirigido contra cáncer colorectal humano. El conjugado se encontró que es altamente citotóxico hacia células de cáncer de colon cultivado, y mostró actividad anti-tumor en un ensayo de crecimiento de tumor in vivo. Chari et al., Cáncer Research 52:127-131 (1992) describe inmunoconjugados en donde un maytansinoide se conjuga mediante u enlazador disulfuro con el anticuerpo murino A7 que liga con un antígeno en líneas de células de cáncer de colon humano, o con otro anticuerpo monoclonal murino TA.l que liga el oncogen HER-2/neu. La citotoxicidad del conjugado maytansinoide TA.l se probó in vitro en la línea celular de cáncer de mama humano SK-BR-3 que expresa 3X105 de antígeno de superficie HER-2 por célula. El conjugado de droga logra un grado de citotoxicidad similar a la droga maytansinoide libre que puede incrementarse al aumentar el número de moléculas maytansinoide por molécula de anticuerpo. El conjugado maytansinoide A7 mostró baja citotoxicidad sistémica en ratones. Conjugados de anticuerpos-maytansinoide pueden prepararse por enlace químico de un anticuerpo con una molécula de maytansinoide sin disminuir significativamente la actividad biológica ya sea del anticuerpo o la molécula de maytansinoide. Ver por ejemplo la patente de los E.U.A. número 5,208,020 (la descripción de la cual aquí se incorpora expresamente por referencia) . Un promedio de 3-4 moléculas maytansinoide conjugadas por moléculas de anticuerpo ha mostrado eficacia para mejorar la citotoxicidad de células objetivo sin afectar negativamente la función o solubilidad del anticuerpo, aunque incluso una molécula de toxina/anticuerpo se esperaría que mejore la citotoxcicidad frente al uso de anticuerpo desnudo. Maytansinoides son bien conocidos en la técnica y pueden sintetizarse por técnicas conocidas o aislarse de fuentes naturales. Se describen maytansinoides convenientes por ejemplo en la patente de los E.U.A. número 5,208,020, y en otras patentes y publicaciones que no son patentes referidas previamente. Maytansinoides preferidos son maytansinol y análogo de maytansinol modificados en el anillo aromático o en otras posiciones de la molécula maytansinol, tales como diversos maytansinol esteres . Hay muchos grupos de enlace conocidos en la técnica para producir conjugados anticuerpo-maytansinoide, incluyendo por ejemplo aquellos descritos en la patente de los E.U.A. número 5,208,020 o la patente EP 0 425 235 Bl, Chari et al., Cáncer Research 52:127-131 (1992), y la solicitud de patente de los E.U.A. número de serie 10/960,602, presentada en Octubre 8, 2004, las descripciones de las cuales aquí se incorporan expresamente por referencia. Conjugados de anticuerpo-maytansinoide que comprenden el componente enlazador SMCC pueden prepararse como se describe en la solicitud de patente de los E.U.A. número de serie 10/960,602, presentada en Octubre 8, 2004. los grupos de enlace incluyen grupos disulfuro, grupos tioéter, grupos de ácido lábil, grupos fotolábiles, grupos lábiles peptidasa o grupos lábiles esterasa, como se describe en las patentes anteriormente identificadas, grupos disulfuro y tioéter se prefieren. Grupos de enlace adicionales se describen y ejemplifican aquí. Conjugados del anticuerpo y maitansinoide pueden elaborarse utilizando una variedad de agentes de acoplamiento de proteína bifuncionales tales como N-succinimidil-3- (2-piridilditio) propionato (SPDP), succinimidil-4- (N-maleimidometil) ciclohexan-1-carboxilato, iminotiolano (IT), derivados bifuncionales de imidoésteres (tales como HCL), esteres activos (tales como disuccinimidil suberato) , aldehidos (tales como glutaraldehído) , compuestos de bis-azida (tales como bis (p-azidobenzoil ) hexandiamina) , derivados de bis-diazonio (tales como bis- (p-diazoniobenzoil ) -etilendiamina) , diisocianatos (tal como toluen 2, 6-diisocianato) , y compuestos de flúor bis-activos (tales como 1, 5-difluoro-2, -dinitrobenceno) . Agentes de acoplamiento preferidos particularmente incluyen N-succinimidil-3- (2-piridilditio) propionato (SPDP) (Carlsson et al., Biochem. J. 173:723-737 [1978]) y N-succinimidil-4-(2-piridiltio) pentanoato (SPP) para proporcionar un enlace disulfuro. El enlazador puede conectarse a la molécula maitansinoide en diversas posiciones, dependiendo del tipo de enlace. Por ejemplo, puede formarse un enlace éster por reacción con un grupo hidroxilo utilizando técnicas de acoplamiento convencionales. La reacción puede ocurrir en la posición C-3 que tiene un grupo hidroxilo, la posición C-14 modificada con hirdoximetilo, la posición C-15 modificada con un grupo hidroxilo, y la posición C-20 que tiene un grupo hidroxilo. En una modalidad preferida, el enlace se forma en la posición C-3 de maitansinol o un análogo maitansinol. Auristatinas y dolostatinas En algunas modalidades, el inmunoconjugado comprende un anticuerpo de la invención conjugado a dolastatinas o análogos y derivados peptídicos de dolastatina, las auristatinas (patentes de los E.U.A. números 5635483; 5780588). Dolastatinas y auristatinas se ha mostrado que interfieren con la dinámica de microtúbulos, hidrólisis GTP y división nuclear y celular (Woyke et al (2001) Antimicrob. Agents and Chemother. 45 (12 ): 3580-3584) y tienen actividad anticáncer (patente de los E.U.A. número 5663149) y antifungal (Pettit et al (1998) Antimicrob. Agents Chemother. 42:2961-2965). La porción de droga dolastatina o auristatina puede conectarse al anticuerpo a través de el extremo N (ammo) o el extremo C (carboxil) de la porción de droga peptídica (WO 02/088172) . Modalidades de auristatma ejemplares incluyen las porciones de droga monometil auristatma enlazada con extremo N DE y DF, descritas en "Monomethylvalme Compounds Capable of Conjugation to Ligands", solicitud de patente de los E.U.A. número de serie 10/983,340, presentada en Noviembre 5, 2004, la descripción de la cual se incorpora expresamente por referencia en su totalidad. Modalidades de auristatma ejemplares son MMAE y MMAF Modalidades ejemplares adicionales que comprenden MMAE o MMAF y diversos componentes enlazadores (descritos adic onalmente aquí) Ab-MC-vc- PAB-MMAF, Ab-MC-vc-PAB-MMAE, Ab-MC-MMAE y Ab-MC-MMAF. Típicamente, porciones de droga basadas en péptido pueden prepararse al formar un enlace péptido entre dos o más aminoácidos y/o fragmentos péptido.

Estos enlaces péptido pueden prepararse por ejemplo de acuerdo con el método de síntesis de fase líquida (ver E. Schróder and K. Lübke, "The Peptides", volume 1, pp 76-136, 1965, Academic Press) que es bien conocido en el campo de química de péptidos. Las porciones de droga auristatina/dolastatina pueden prepararse de acuerdo con los métodos de: patente de los E.U.A. número 5635483; patente de los E.U.A. número 5780588; Pettit et al (1989) J. Am. Chem. Soc. 111:5463-5465; Pettit et al (1998) Anti-Cancer Drug Design 13:243-277; Pettit, G.R., et al. Synthesis, 1996, 719-725; y Pettit et al (1996) J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1 5:859-863. Ver también Doronina (2003) Nat Biotechnol 21 (7) : 778-784 ; "Monomethylvaline Compounds Capable of Conjugation to Ligands", solicitud de patente de los E.U.A. número de serie 10/983,340, presentada en noviembre 5, 2004, aquí incorporada por referencia en su totalidad (describiendo por ejemplo enlazadores y métodos para preparar compuestos de monometilvalina tales como MMAE y MMAF conjugados con enlazadores) . Calicheami cina En otras modalidades, el inmunoconjugado comprende un anticuerpo de la invención conjugado con una o más moléculas de caliqueamicina . La familia de antibióticos caliqueamicina son capaces de producir estructuras de DNA de doble hebra en concentraciones sub-picomolar . Para la preparación de conjugados de la familia caliqueamicina, ver Patentes de los E.U.A. números 5,712,374, 5,714,586, 5,739,116, 5,767,285, 5,770,701, 5,770,710, 5,773,001, 5,877,296 (todas a American Cyanamid Company) . Análogos estructurales de caliqueamicina que pueden utilizarse incluyen pero no están limitados a ? i1 , OL -A , cc 3 X , N-acetil-?' i1, PSAG y ? t (Hinman et al. Cáncer Research 53: 3336-3342 (1993), Lode et al. Cáncer Research 58: 2925-2928 (1998) y las Patentes de los E.U.A. anteriormente mencionadas otorgadas a American Cyanamid) . Otra droga antitumor con la que puede conjugarse el anticuerpo es QFA que es un antifolato. Tanto caliqueamicina como QFA tienen sitios de acción intracelular y no cruzan fácilmente la membrana de plasma. Por lo tanto, la absorción celular de estos agentes a través de internalización mediada por anticuerpo mejora enormemente sus efectos citotóxicos . Otros agentes citotóxicos Otros agentes antitumor que pueden conjugarse con los anticuerpos de la invención incluyen BCNU, estreptozoicma, vmcristina y 5-fluorouracilo, la familia de agentes conocida colectivamente como complejo LL-E33288 descrita en la patentes de los E.U.A. números 5,053,394, 5,770,710, así como esperamicmas (patente de los E.U.A. número 5,877,296) . Toxinas enzimáticamente activa y sus fragmentos que pueden utilizarse incluyen cadena difteria A, fragmentos activos sin enlace de toxina difteria, cadena exotoxma A (de Pseudomonas aerugmosa) , cadena nema A, cadena abrma A, cadena modecema A, alfa-sarcma, proteínas de Aleuptes fordn, proteínas de ant a, proteínas de Phytolaca americana (PAPI, PAPII, y PAP-S) , inhibidor de momordica charantia, curc a, crotina, inhibidor de sapaonapa officmalis, gelolma, mitogelma, restptocma, fenomicma, enomicma y los tricotenos . Ver por ejemplo WO 93/21232 publicado en octubre 28, 1993. La presente invención además contempla un inmunoconj ugado formado entre un anticuerpo y un compuesto con actividad nucleolítica (por ejemplo, una ribonucleasa o una DNA endonucleasa tal como deoxiribonucleasa; DNasa) . Para destrucción selectiva del tumor, el anticuerpo puede comprender un átomo altamente radioactivo. Una variedad de isótopos radioactivos están disponibles para la producción de anticuerpos radioconjugados . Ejemplos incluyen At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 e isótopos radioactivos de Lu . Cuando el conjugado se utiliza para diagnóstico, puede comprender un átomo radioactivo para estudios escintigráficos, por ejemplo tc99m o I123, o una etiqueta de espín para formación de imagen por resonancia magnética nuclear (RMN) también conocida como formación por resonancia magnética, mri (mri = magnetic resonance imaging) , tal como yodo-123 de nuevo, yodo-131, ind?o-111, flúor-19, carbon-13, n?trógeno-15, oxígeno-17, gadolinio, manganeso o hierro. Las radio- u otras etiquetas pueden incorporarse en el conjugado en formas conocidas, por ejemplo, el péptido puede ser biosmtetizado o puede sintetizarse por síntesis de aminoácidos químicos utilizando precursores de aminoácidos convenientes que involucran por ejemplo flúor-19 en lugar de hidrógeno. Etiquetas tales como tc99m o I123, Re186, Re188 y In111 puede conectarse mediante un residuo cisteína en el péptido. Itr?o-90 puede conectarse mediante un residuo lisina. El método IODOGEN (Fraker et al (1978) Biochem. Biophis. Res. Commun. 80: 49-57 puede utilizarse para incorporar yodo-123. "Monoclonal Antibodies in Immunoscintigraphy" (Chatal,CRC Press 1989) describe otros métodos en detalle . Conjugados del anticuerpo y agente citotóxico pueden elaborarse utilizando una variedad de agentes de acoplamiento de proteína bifuncionales tales como N-succinimidil-3- (2-piridilditio) propionato (SPDP), succinimidil-4- (N-maleimidometil) ciclohexano-1-carboxilato, iminotiolano (IT), derivados bifuncionales de imidoésteres (tales como dimetil adipimidato AHL) , esteres activos (tales como disuccinimidil suberato) , aldehidos (tales como glutaraldehído), compuestos bis-azido (tales como bis (p-azidobenzoil ) hexanediamina) , derivados bis-diazonio (tales como bis- (p-diazoniobenzoil) -etilendiamina), diisocianatos (tales como tolueno 2, 6-diisocianato) , y compuestos de flúor bis-activo (tales como 1, 5-difluoro-2 , 4-dinitrobenceno) . Por ejemplo, una inmunotoxina ricina puede prepararse como se describe en Vitetta et al. Science 238: 1098 (1987). Ácido l-isotiocianatobenzil-3-metildietilen triaminpentaacético etiquetado con carbono 14 (MX-DTPA) es un agente quelante ejemplar para conjugar radionucleótido al anticuerpo. Ver WO94/11026. el enlazador puede ser un "enlazador escindible" que facilita la liberación de la droga citotóxica en la célula, por ejemplo, un enlazador ácido lábil, enlazador sensible a peptidasa, enlazador fotolábil, enlazador dimetilo o enlazador que contiene disulfuro (Chari et al. Cáncer Research 52: 127-131 (1992); Patente de los E.U.A. número 5,208,020) puede emplearse . Los compuestos de la invención contemplan expresamente pero no están limitados a ADC preparado con reactivos entrelazadores : BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB , SMPH, sulfo-EMCS, sulfo-GMBS, sulfo-KMUS, sulfo-MBS, sulfo-SIAB, sulfo-SMCC, and sulfo-SMPB, and SVSB (succinimidil- (4-vinilsulfona) benzoato) que está comercialmente disponible (por ejemplo de Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL., U.S.A). ver páginas 467-498, 2003-2004 Applications Handbook and Catalog. Preparación de conjugados de droga anticuerpo En los conjugados de droga anticuerpo (ADC) de la invención, un anticuerpo (Ab) se conjuga con una o más porciones de droga (D) , por ejemplo aproximadamente 1 a aproximadamente 20 porciones de droga por anticuerpo a través de un enlazador (L) . El ADC de la fórmula I puede prepararse por varias rutas empleando reacciones, condiciones y reactivos de química orgánica conocidos por aquellos con destreza en la técnica, incluyendo; (1) reacciones de un grupo nucleofílico de un anticuerpo con un reactivo enlazador bivalente para formar Ab-L, mediante un enlace covalente, seguido por reacción con una porción de droga D; y (2) reacción de un grupo nucleofílico de una porción de droga con un reactivo enlazador bivalente, para formar D-L, mediante un enlace covalente, seguido por reacción con el grupo nucleofílico de un anticuerpo. Métodos adicionales para preparar ADC se describen aquí .

Ab- (L-D), El enlazador puede estar compuesto por uno o más componentes enlazadores . Componentes enlazadores ejemplares incluyen 6-maleimidocaproilo ("MC"), maleimidopropanoilo ("MP"), valina-citrullina ("val-cit"), alanina- fenilalanina ("ala-phe"), p-aminobenziloxicarbonilo ("PAB"), N-Succinimidil 4- (2-piridiltio) pentanoato ("SPP"), N-Succinimidil 4- (N-maleimidometil) ciclohexano-1 carboxilato ("SMCC"), y N-Succinimidil (4-iodo-acetil) aminobenzoato ("SIAB") . Componentes enlazadores adicionales se conocen en la técnica y algunos se describen aquí. Ver también "Monomethylvaline Compounds Capable of Conjugation to Ligands", solicitud de patente de los E.U.A. número de serie 10/983,340, presentada en Noviembre 5, 2004, los contenidos de la cual aquí se incorporan por referencia en su totalidad. En algunas modalidades, el enlazador puede comprender residuos aminoácido. Componentes enlazadores aminoácido ejemplares incluyen un dipéptido, un tripéptido, un tertrapéptido o un pentapéptido . Dipéptidos ejemplares incluyen: valina-citrulina (vc o val-cit), alanina-fenilalanina (af o ala-phe). Tripéptidos ejemplares incluyen: glicina-valina-citrullina (gly-val-cit) y glicina-glicina-glicina (gly-gly-gly) . Residuos aminoácido que comprenden un componente enlazador aminoácido incluyen aquellos de origen natural, así como aminoácidos menores y análogos de aminoácidos que no son de origen natural tales como citrulina. Componentes enlazadores de aminoácido pueden diseñarse y optimizarse en su selectividad para escisión enzimática por una enzima particular, por ejemplo una proteasa asociada con tumor, catepsina B, C y D o una plasmina proteasa. Estructuras de componentes enlazadores ejemplares se ilustran a continuación (en donde la línea ondulada indica sitios de conexión covalente con otros componentes de ADC) : MPEG Componentes enlazadores ejemplares adicionales y abreviaturas incluyen (en donde el anticuerpo (Ab) y el enlazador se ilustran y p es 1 a aproximadamente 8) : MC-val-cit MC-val-cit-PAB Grupos nucleofílicos en anticuerpos incluyen pero no están limitados a: (i) grupos amina N-terminal, (11) grupos de amina de cadena lateral, por ejemplo lisina, (111) grupos tiol de cadena lateral, por ejemplo cisteína y (ív) grupos azúcar hidroxilo o amino en donde el anticuerpo está glicosilado . Grupos amina tiol e hidroxilo son nucleofílicos y capaces de reaccionar para formar enlaces covalentes con grupos electrofílicos en porciones enlazadoras y reactivos enlazadores incluyendo: (i) esteres activos tales como NHS esteres, HOBt esteres, haloformatos y haluros de ácido; (n) haluros de alquilo y bencilo tales como haloacetamidas; (ni) aldehidos, cetonas, grupos carboxilo y maleimida Ciertos anticuerpos tienen disulfuros mtercadena reducibles, es decir puentes cisteína. Anticuerpos pueden hacerse reactivos para conjugación con reactivos enlazadores por tratamiento con un agente reductor tal como DTT (dithiothreitol) . Cada puente cisteína de esta manera formará de manera teórica, dos nucleófilos tiolreactivos . Grupos nucleofílicos adicionales pueden introducirse en anticuerpos a través de la reacción de lisinas con 2-iminotiolano (reactivo de Traut) resultando en conversión de una amina en un tiol . Grupos tiol reactivos pueden introducirse en el anticuerpo (o su fragmento) al introducir uno, dos, tres, cuatro o más residuos cisteína (por ejemplo preparar anticuerpos mutantes que comprenden uno o más residuos aminoácido cisteína no nativos) . Conjugados de anticuerpo droga de la invención también pueden producirse por modificación del anticuerpo para introducir porciones electrofílicas , que pueden reaccionar con sustituyentes nucleofílicos en el reactivo enlazador o droga. Los azúcares de anticuerpos glicosilados pueden ser oxidados, por ejemplo con reactivos oxidantes peryodato, para formas grupos aldehido cetona que pueden reaccionar con el grupo amina o reactivos enlazadores o porciones de droga. Los grupos de base Schiff imina resultantes pueden formar un enlace estable, o pueden ser reducidos, por ejemplo por reactivos borohidruro para formar enlaces de amina estable. En una modalidad, la reacción de la porción carbohidrato de un anticuerpo glicosilado ya sea con galactosa oxidasa o meta-peryodato de sodio puede dar por resultado grupos carbonilo (aldehido y cetona) en la proteína que pueden reaccionar con grupos apropiados en la droga (Hermanson, Bioconjugate Techniques) . En otra modalidad, proteínas que contienen residuos serina o trionina n-terminales pueden reaccionar con meta-peryodato de sodio resultando en producción de un aldehido en lugar del primer aminoácido (Geoghegan & Stroh, (1992) Bioconjugate Chem. 3:138-146; US 5362852). Este aldehido puede reaccionarse con una porción de droga o un nucleófilo enlazador. Igualmente, grupos nucleofílicos en una porción de droga incluyen pero no están limitados a: grupos amina, tiol, hidroxilo, hidrazida, oxima, hidrazina, tiosemicarbazona, carboxilato de hidrazina, y arilhidrazida capaces de reaccionar para formar enlaces covalentes con grupos electrofílicos en porciones enlazadoras y reactivos enlazadores incluyendo: (i) esteres activos tales como esteres NHS, esteres HOBt, haloformiatos , y haluros de ácido; (ii) haluros de alquilo y benzilo tales como haloacetamidas; (iii) aldehidos, cetonas, grupos carboxilo, y maleimida.

En forma alterna, una proteína de fusión que comprende el anticuerpo y agente citotóxico puede elaborarse por ejemplo por técnicas recombinantes o síntesis de péptido. La longitud de DNA puede comprender regiones respectivas que codifican las dos porciones del conjugado, ya sea adyacentes entre sí o separadas por una región que codifica un péptido enlazador que no destruye las propiedades deseadas del conjugado. Todavía en otra modalidad, el anticuerpo puede conjugarse con un "receptor" (tal como estreptavidina) para utilizar en pre-blanco de tumor en donde el conjugado anticuerpo-receptor se administra al paciente, seguido por remoción de conjugados y ligar de la circulación utilizando un agente de liberación y después administración de un "ligando" (por ejemplo avidina) que se conjuga a un agente citotóxico (por ejemplo un radionúclido) . Anticuerpo (Ab) -MC-MMAE puede prepararse por conjugación de cualquiera de los anticuerpos que se proporcionan aquí con MC-MMAE como sigue. Anticuerpo, disuelto en borato de sodio 500mM y cloruro de sodio 500mM a pH 8.0 se trata con exceso de ditiotreitol lOOmM (DTT) . Después de incubación a 37 grados C por aproximadamente 30 minutos, el amortiguador se intercambia por elusión sobre resina Sephadex G25 y eluye con PBS con DTPA lmM. El valor tiol/Ab se verifica al determinar la concentración de anticuerpo reducida de la absorbancia a 280 nm de la solución y la concentración de tiol por reacción con DTNB (Aldrich, Milwaukee, Wl) y determinacón de la absorbancia a 412 nm. El anticuerpo reducido disuelto en PBS se enfría en hielo. El reactivo enlazador droga maleimidocaproil -monometil auristatina E (MMAE) , es decir MC-MMAE, disuelto en DMSO, se diluye en acetonitrilo y agua a concentraciones conocidas y agrega al anticuerpo reducido enfriado 2H9 en PBS. Después de aproximadamente una hora, un exceso de maleimida se agrega para neutralizar la reacción y terminar en extremo cualesquiera grupos tiol anticuerpo sin reaccionar. La mezcla de reacción se concentra por ultra filtración centrífuga y 2H9-MC-MMAE se purifica y desalifica por elusión a través de resina G25 en PBS, filtra a través de filtros de 0.2 µ m bajo condiciones estériles y congela para almacenamiento . Anticuerpo-MC-MMAF puede prepararse por conjugación de cualquiera de los anticuerpos que se proporcionan aquí con MC-MMAF siguiendo el protocolo que se proporciona para la preparación de Ab-MC-MMAE.

Anticuerpo-MC-val-cit-PAB-MMAE se prepara por conjugación de cualquiera de los anticuerpos que se proporcionan aquí con MC-val-cit-PAB-MMAE siguiendo el protocolo que se proporciona para la preparación de Ab-MC-MMAE. Anticuerpo-MC-val-cit-PAB-MMAF se prepara por conjugación de cualquiera de los anticuerpos que se proporcionan aquí con MC-val-cit-PAB-MMAF siguiendo el protocolo que se proporciona para la preparación de Ab-MC-MMAE. Anticuerpo-SMCC-DMl se prepara por conjugación de cualquiera de los anticuerpos que se proporcionan aquí con SMCC-DMl como sigue. Anticuerpo purificado se derivatiza con (Succinimidil 4- (N-maleimidometil) ciclohexano-1-carboxilato (SMCC, Pierce Biotechnology, Inc) para introducir el enlazador SMCC. Específicamente, se trata anticuerpo a 20 mg/mL en fosfato de potasio 50mM / cloruro de sodio 50mM / EDTA 2mM, pH 6.5 con 7.5 equivalentes molares de SMCC (20 mM en DMSO, 6.7 mg/mL). Después de agitar por 2 horas bajo argón a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se filtra a través de una columna Sephadex G25 equilibrada con fosfato de potasio 50mM / cloruro de sodio 50mM / EDTA 2 mM, pH 6.5. Fracciones que contienen anticuerpo se reúnen y ensayan. Anticuerpo-SMCC preparado así se diluye con fosfato de potasio 50mM / cloruro de sodio 50mM / EDTA 2mM, pH 6.5, a una concentración final de aproximadamente 10 mg/ml, y reacciona con una solución de lOmM de DM1 en dimetilacetamida. La reacción se agita a temperatura ambiente bajo argón 16.5 horas. La mezcla de reacción de conjugación se filtra a através de una columna de filtración de gel Sephadex G25 (1.5 x 4.9 cm) con 1 x PBS a pH 6.5. La proporción de droga DM1 a anticuerpo (p) puede ser aproximadamente 2 a 5, como se mide por la absorbancia a 252 nm y a 280 nm. Ab-SPP-DMl se prepara por conjugación de cualquiera de los anticuerpos que aquí se proporcionan con SPP-DM1 como sigue. Anticuerpo purificado se derivatiza con N-succinimidil-4- (2-piridiltio) pentanoato para introducir grupos ditiopiridilo . Anticuerpo (376.0 mg, 8 mg/mL) en 44.7 mL de amortiguador de fosfato de potasio 50mM (pH 6.5) que contiene NaCl (50 mM) y EDTA (1 mM) se trata con SPP (5.3 equivalentes molares en 2.3 mL de etanol) . Después de incubación por 90 minutos bajo argón a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se filtra en gel a través de una columna Sephadex G25 equilibrada con citrato de sodio 35 mM, NaCl 154 mM, EDTA 2 mM. Fracciones que contienen anticuerpos se reunieron y ensayaron. El grado de modificación del anticuerpo se determina como se describió anteriormente. Anticuerpo-SPP-Pi (aproximadamente 10 moles de grupos 2-tiopiridina liberable) se diluye con el amortiguador citrato de sodio 35 mM, pH 6.5, a una concentración final de aproximadamente 2.5 mg/mL. DM1 (1.7 equivalentes, 17 //moles) en dimetilacetamida 3.0 mM (DMA, 3% v/v en la mezcla de reacción final) se agrega entonces a la solución de anticuerpo. La reacción avanza a temperatura ambiente bajo argón por aproximadamente 20 horas. La reacción se carga en una columna de filtración de gel Sephacril S300 (5.0 cm x 90.0 cm, 1.77 L) equilibrada con citrato de sodio 35 mM, NaCl 154 mM, pH 6.5. El gasto de flujo puede ser aproximadamente 5.0 mL/min y 65 fracciones (20.0 mL cada una) se recolectan. El número de moléculas de droga DM1 enlazadas por molécula de anticuerpo (p' ) se determina al medir la absorbancia a 252 nm y 280 nm, y puede ser aproximadamente 2 a 4 porciones de droga DM1 por anticuerpo 2H9. Anticuerpo-BMPEO-DMl se prepara por conjugación de cualquiera de los anticuerpos que se proporcionan aquí con BMPE0-DM1 como sigue. El anticuerpo se modifica por el reactivo bis-maleimido BM(PE0)4 (Pierce Chemical), dejando un grupo maleimido sin reaccionar en la superficie del anticuerpo. Esto puede lograrse al disolver BM(PE0)4 en una mezcla etanol/agua al 50% a una concentración de 10 mM y agregar un exceso molar de 10 veces a una solución que contiene anticuerpo salino amortiguado con fosfato a una concentración aproximada de 1.6 mg/ml (10 micromolar) y permitir que reaccione por una hora para formar un intermediario anticuerpo-enlazador, 2H9-BMPEO. Exceso de BM(PEO)4 se retira por filtración de gel (columna HíTrap, Pharmacia) en citrato 30 mM, pH 6 con amortiguador NaCl 150 mM. Un exceso 10 veces molar aproximado de DM1 se disuelve en dimetil acetamida (DMA) y agrega al intermediario 2H9-BMPEO. Dimetil formamida (DMF) también puede emplearse para disolver el reactivo de porción droga. La mezcla de reacción se deja que reacciones durante la noche antes de filtración en gel o diálisis en PBs para retirar DM1 sin reaccionar. La filtración en gel en columnas S200 en PBS se emplea para retirar agregados de alto peso molecular y proporcionar 2H9-BMPEO-DM1 purificado.

Derivados de Anticuerpo Anticuerpos de la invención pueden ser adicionalmente modificados para contener porciones no proteináseas adicionales que se conocen en la técnica y están fácilmente disponibles. En una modalidad, las porciones adecuadas para derivatización del anticuerpo son polímeros solubles en agua. Ejemplos no limitantes de polímeros solubles en agua incluyen pero no están limitados a polietilen glicol (PEG) , copolímeros de etilen glicol/propilen glicol, carboximetilcelulosa, dextran, polivinil alcohol, polivinil pirrolidona, poli-1, 3-dioxolano, poli-1 , 3 , 6-trioxano, copolímero de etileno/anhídrido maleico, poliaminoácidos (ya sea homopolímeros o copolímeros al azar) , y dextrano o poli (n-vinil pirrolidona) polietilen glicol, homopolímeros de propropilen glicol, copolímeros de prolipropilen óxido/etilen óxido, polioles polietoxilados (por ejemplo, glicerol), polivinil alcohol, y sus mezclas. Polietilen glicol propionaldehído puede tener ventajas para fabricación debido a su estabilidad en agua. El polímero puede ser de cualquier peso molecular, y puede ser ramificado o sin ramificar. El número de polímeros conectados al anticuerpo puede variar y si más de un polímero se conecta o se agrega pueden ser iguales o diferentes moléculas. En general, el número y/o tipo de polímeros empleados para derivatización puede determinarse en base en consideraciones incluyendo pero no limitadas a las propiedades particulares o funciones del anticuerpo a mejorar, ya sea que el derivado de anticuerpo se utilice en una terapia bajo condiciones definidas, etc . Formulaciones Farmacéuticas Formulaciones terapéuticas que comprenden un anticuerpo de la invención, se preparan para almacenamiento al mezclar un anticuerpo que tiene el grado de pureza deseado con portadores excipientes o estabilizantes farmacéuticamente aceptables opcionales (Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)), en la forma de formulaciones liofilizadas o soluciones acuosas. Portadores excipientes o estabilizantes aceptables no son tóxicos para recipientes a las dosis y concentraciones empleadas, e incluyen amortiguadores tales como fosfato, citrato y otros ácidos orgánicos; antioxidantes incluyendo ácido ascórbico y metionina; conservadores (tales como cloruro de octadecilmetilbencil amonio; cloruro de hexametonio; cloruro de benzalconio; cloruro de benzetonio; fenol, butil o benzil alcohol; alquil parabenos tales como metil o propil parabeno; catecol; resorcinol; ciciohexanol; 3-pentanol; and m-cresol); polipéptidos de bajo peso molecular (con menos de aproximadamente 10 residuos); proteínas, tales como albúmina, suero, gelatina o inmunoglobulinas; polímeros hidrofílicos tales como polivinilpirrolidona; amino ácidos tales como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina, o lysina; monosacáridos, disacaridos y otros carbohidratos incluyendo glucosa, mañosa o dextrinas; agentes quelantes tales como EDTA; azucares tales como sacarosa, manitol, trehalosa o sorbitol; contra-iones formadores de sal tales como sodio; complejos de metal (por ejemplo complejos de proteína-Zn) ; y/o surfactantes no-ionicos tales como TWEEN™, PLURONICS™ o polietilen glicol (PEG) . La presente formulación también puede contener más de un compuesto activo según sea necesario para la indicación particular a tratar, de preferencia aquellos con actividad complementarias que no afectan adversamente entre sí. Estas moléculas están convenientemente presentes en combinación en cantidades que son efectivas para el propósito pretendido. Los ingredientes activos también pueden ser atrapados en micro cápsulas preparadas por ejemplo, por técnicas de coacervación o por polimerización interfacial, por ejemplo hidroximetilcelulosa o micro cápsulas de gelatina y micro cápsulas de poli-(metilmetacrilato) respectivamente en sistemas de suministro de droga coloidal (por ejemplo, liposomas, microesferas de albúmina, microemulsiones, nano-partículas y nanocápsulas ) o en macroemulsiones. Estas técnicas se discuten en Remington's Pharmaceutical Sciences 16ava edición, Osol, A. Ed. (1980) . Las formulaciones a emplearse para administración in vivo deben ser estériles. Esto se logra fácilmente por filtración a través de membranas de filtración estéril . Pueden elaborarse preparaciones de liberación sostenida. Ejemplos convenientes de preparaciones de liberación sostenida incluyen matrices semi-permeables de polímeros hidrfóbicos sólidos que contienen la inmunoglobulina de la invención, estas matrices están en la forma de artículos conformados, por ejemplo películas o micro cápsulas. Ejemplos de matrices de liberación sostenida incluyen poliésteres, hidrogeles (por ejemplo, poli (2-hidroxyetil-metacrilato) , o poli (vinilalcohol ) ) , o polilactidas (Patente de los E.U.A. No. 3,773,919), copolimeros de ácido L-glutámico y etil-L-glutamato, etilen-vinil acetato no degradable, copolimeros de ácido láctico-ácido glicólico degradables tales como LUPRON DEPOTMR (microesferas inyectables compuestas por copolimero de ácido láctico-ácido glicólico y leuprolida acetato), y ácido poli-D- (-) -3-hidroxibutírico. Mientras que polímeros tales como etilen-vinil acetato y ácido láctico-ácido glicólico permiten la liberación de moléculas por más de 100 días, ciertos hidrogeles liberan proteínas por periodos de tiempo más cortos. Cuando inmunoglobulinas encapsuladas permanecen en el cuerpo por largo tiempo, pueden desnaturalizarse o agregarse como resultado de exposición a humedad a 37 grados C, resultando en pérdida de actividad biológica y posibles cambios en inmunogenicidad. Estrategias racionales pueden diseñarse para estabilización dependiendo del mecanismo involucrado. Por ejemplo, si el mecanismo de agregación se descubre que es una formación de enlace S-S intermolecular a través de intercambio tiodisulfuro, la estabilización puede lograrse al modificar residuos sulfhidrilo, liofilizar a partir de soluciones acídicas, controlar el contenido de humedad utilizando aditivos apropiados y desarrollando composiciones de matriz de polímero específicas . Usos Un anticuerpo de la invención puede emplearse por ejemplo en métodos terapéuticos in vi tro, ex vivo e in vivo . Anticuerpos de la invención pueden utilizarse como un antagonista para bloquear parcial o completamente la actividad antigénica específica in vi tro, ex vivo ylo in vivo . Aún más, al menos algunos de los anticuerpos de la invención pueden neutralizar la actividad antigénica de otras especies. De acuerdo con esto, los anticuerpos de la invención pueden utilizarse para inhibir una actividad de antígeno específica, por ejemplo en un cultivo celular que contiene el antígeno, en sujetos humanos o en otros sujetos mamíferos que tienen el antígeno con el cual reacciona en forma cruzada un anticuerpo de la invención (por ejemplo chimpancé, mandril, tití, cynomolgus y rhesus, cerdo o ratón) . En una modalidad, un anticuerpo de la invención puede emplearse para inhibir actividades de antígeno al contactar el anticuerpo con el antígeno de manera tal que se inhiba la actividad de antígeno. En una modalidad, el antígeno es una molécula de proteína humana . En una modalidad, un anticuerpo de la invención puede utilizarse en un método para inhibir un antígeno en un sujeto que sufre de un desorden en el que la actividad de antígeno es nociva, que comprende administrar al sujeto un anticuerpo de la invención tal que la actividad de antígeno en el sujeto, se inhiba. En una modalidad, el antígeno es una molécula de proteína humana y el sujeto es un sujeto humano. En forma alterna, el sujeto puede ser un mamífero que exprese el antígeno con el cual liga un anticuerpo de la invención. Aún más, el sujeto puede ser un mamífero en el cual se ha introducido el antígeno (por ejemplo por administración del antígeno o por expresión de un transgen antígeno) . Un anticuerpo de la invención puede administrarse a un sujeto humano para propósitos terapéuticos. Aún más, un anticuerpo de la invención puede administrarse a un mamífero no humano que expresa un antígeno con el cual reaccione en forma cruzada el anticuerpo (por ejemplo un primate, cerdo o ratón) para propósitos veterinarios o como un modelo de animal de enfermedad humana. Respecto a esto último, estos modelos de animales pueden ser útiles para evaluar la eficacia terapéutica de anticuerpos de la invención (por ejemplo prueba de dosis y cursos de administración en tiempo) . Anticuerpos de la invención pueden utilizarse para tratar, inhibir y retardar el avance de evitar/retardar la recurrencia de mejorar o evitar enfermedades, desórdenes o condiciones asociadas con expresión anormal y/o actividad de interferonas tipo I/IFNAR2, incluyendo pero no limitados a desórdenes inflamatorios autoinmunes y otros inmunológicos . En un aspecto, un anticuerpo bloqueador de la invención es específico a IFNAR2, e inhibe actividad IFNAR2 al bloquear o interferir con la interacción ligando-receptor que involucra IFNAR2, de esta manera inhibiendo la ruta señal correspondiente y otros eventos celulares o moleculares asociados. La invención también caracteriza anticuerpos específicos de receptor que no evitan necesariamente (o sólo evitan parcialmente) enlace de ligando, pero interfieren significativamente con activación de receptor, de esta manera inhibiendo cualesquiera respuestas que se iniciarían por enlace de ligando. En ciertas modalidades, un inmunoconjugado que comprende un anticuerpo conjugado con un agente citotóxico, se administra al paciente. En algunas modalidades, el inmunoconjugado y/o antígeno al cual se liga es/son internalizados por la célula, resultando en una eficacia terapéutica incrementada del inmunoconjugado para exterminar la célula objetivo a la cual se liga. En una modalidad, el agente citotóxico hace blanco o interfiere con ácido nucleico en la célula objetivo. Ejemplos de estos agentes citotóxicos incluyen cualquiera de los agentes quimioterapéuticos aquí anotados (tales como un maitansionoide o una caliqueamicina) , un isótopo radioactivo o una ribonucleasa o una DNA endonucleasa . Anticuerpos de la invención pueden utilizarse ya sea solos o en combinación con otras composiciones en una terapia. Por ejemplo, un anticuerpo de la invención puede ser coadministrado con otro anticuerpo y/o agentes adyuvantes/terapéuticos (por ejemplo esteroides) . Por ejemplo, un anticuerpo de la invención puede combinarse con un antiinflamatorio y/o antiséptico en un esquema de tratamiento, por ejemplo para tratar cualquiera de las enfermedades aquí descritas, incluyendo desórdenes inflamatorios autoinmunes y otros inmunológicos . Estas terapias combinadas anteriormente anotadas incluyen administración combinada (en donde los dos o más agentes se incluyen en las mismas o separadas formulaciones) , y administración separada, en cuyo caso la administración del anticuerpo de la invención puede ocurrir antes de y/o después de administración de la terapia o terapias auxiliares. Un anticuerpo de la invención (y agente terapéutico auxiliar) puede administrarse por cualesquiera medios convenientes, incluyendo parenteral, subcutánea, intraperitoneal, intrapulmonar o intranasal y si se desea para tratamiento local, administración intralesión. Infusiones parenterales incluyen administración intramuscular, intravenosa, intraarterial , intraperitoneal o subcutánea. Además, el anticuerpo se administra convenientemente por infusión de pulso, particularmente con dosis decresciente del anticuerpo. La dosificación puede ser por cualquier ruta conveniente, por ejemplo por inyecciones, tales como inyecciones intravenosas o subcutáneas, dependiendo en parte de si la administración es breve o crónica. La composición de anticuerpo de la invención será formulada, dosificada y administrada en una forma consistente con la buena práctica médica. Factores para consideración en este contexto incluyen el desorden particular que se trata, el mamífero particular a tratar, la condición clínica del paciente individual, la causa del desorden, el sitio de suministro del agente, el método de administración, el programa de administración y otros factores conocidos a los practicantes médicos. El anticuerpo no requiere, pero opcionalmente se formula con uno o más agentes actualmente empleados para evitar o tratar el desorden en cuestión. La cantidad efectiva de estos otros agentes depende de la cantidad de anticuerpos de la invención presentes en la formulación, el tipo de desorden o tratamiento y otros factores anteriormente discutidos. Estos en general se emplean en las mismas dosis y con las rutas de administración que se describe aquí, o aproximadamente de 1 a 99% de las dosis aquí descritas, o en cualquier dosis y por cualquier ruta que se determine empírica/clínicamente apropiada. Para la prevención o tratamiento de enfermedad, la dosis apropiada de un anticuerpo de la invención (cuando se utiliza sólo o en combinación con otros agentes tales como agentes quimioterapéuticos) , dependerá del tipo de enfermedad a tratar, el tipo de anticuerpo, la severidad y curso de la enfermedad, si el anticuerpo se administra para propósitos preventivos o terapéuticos, terapia previa, la historia clínica del paciente y respuesta al anticuerpo, y la discreción del médico a cargo. El anticuerpo se administra convenientemente al paciente a un tiempo o sobre una serie de tratamientos. Dependiendo del tipo y severidad de la enfermedad, aproximadamente 1 µg/kg a 15 mg/kg (por ejemplo 0.1 mg/kg- 10 mg/kg) del anticuerpo puede ser una dosis candidato inicial para administración al paciente, ya sea por ejemplo por una o más administraciones separadas o por infusión continua. Una dosis diaria típica puede estar en el intervalo de aproximadamente 1 //g/kg a 100 mg/kg o más, dependiendo de los factores anteriormente mencionados . Para administraciones repetidas durante varios días o más, dependiendo de la condición, el tratamiento será generalmente sostenido hasta que ocurra una supresión deseada de síntomas de la enfermedad. Una dosis ejemplar del anticuerpo estará en el rango de aproximadamente 0.05 mg/kg hasta aproximadamente 10 mg/kg. De esta manera, una o más dosis de aproximadamente 0.5 mg/kg, 2.0 mg/kg, 4.0 mg/kg o 10 mg/kg (o cualquier combinación de las mismas) puede administrarse al paciente. Estas dosis pueden administrarse intermitentemente, por ejemplo cada semana o cada tres semanas (por ejemplo de manera tal que el paciente reciba de aproximadamente 2 a aproximadamente 20, o por ejemplo aproximadamente 6 dosis del anticuerpo) . Una dosis de carga superior inicial, seguida por una o más dosis inferiores pueden administrarse. Un régimen de dosis ejemplar que comprende administrar una dosis de carga inicial de aproximadamente 4 mg/kg, seguido por una dosis de mantenimiento semanal de aproximadamente 2 mg/kg del anticuerpo. Sin embargo, pueden ser útiles otros regímenes de dosis. El avance de esta terapia se supervisa fácilmente por técnicas y ensayos convencionales . Artículos de Manufactura En otro aspecto de la invención, se proporciona un artículo de manufactura que contiene materiales útiles para el tratamiento, prevención y/o diagnóstico de los desordenes anteriormente descritos. El artículo de manufactura comprende un recipiente y una etiqueta o inserto de empaque en o asociado con el recipiente. Recipientes convenientes incluyen por ejemplo botellas, ampolletas, jeringas, etc. Los recipientes pueden formarse de una variedad de materiales tales como vidrio o plástico. El recipiente contiene una composición que sea efectiva para tratar la condición y puede tener un puerto de acceso estéril (por ejemplo el recipiente puede ser una bolsa de solución intravenosa o ampolleta que tiene un tapón perforable por una aguja de inyección hipodérmica) . Cuando menos un agente activo en la composición es un anticuerpo de la invención. La etiqueta o inserto de empaque indica que la composición se utiliza para tratar la condición selecta. Aún más, el artículo de manufactura puede comprender (a) un primer recipiente con una composición ahí contenida, en donde la composición comprende un anticuerpo de la invención; y (b) un segundo recipiente con una composición ahí contenida, en donde la composición comprende un agente citotóxico u otro terapéutico adicional. El artículo de manufactura en esta modalidad de la invención además puede comprender un inserto de empaque que indica que las composiciones puedan emplearse para tratar una condición particular. En forma alterna, o adicionalmente, el artículo de manufactura además puede comprender un segundo (o tercer) recipiente que comprende un amortiguador farmacéuticamente aceptable tal como agua para inyección bacteriostática (BWFI = bacteriostatic water for injection), salino amortiguado con fosfato, solución de Ringer y solución de dextrosa. Además puede incluir otros materiales convenientes desde un punto de vista comercial y del usuario, incluyendo otros amortiguadores, diluyentes, filtros, agujas y jeringas. Los siguientes son ejemplos de los métodos y composiciones de la invención. Se entiende que diversas otras modalidades pueden practicarse dada la descripción general que se proporcionó anteriormente. EJEMPLO MATERIALES Y MÉTODOS Generación de anti cuerpos a IFNAR2 Anticuerpos a IFNAR2 se generaron esencialmente como se describe en la publicación de los E.U.A. Número 2003-0018174, publicada en Enero 23, 2003. Determinación de las afinidades de mAbs Chips biosensor CM5 (Biacore cat# BR-1000-14; Neuchatel, Suiza) se emplearon para el ensayo de afinidad de enlace en un instrumento Biacore 3000. La inmovilización de la proteína ECD del receptor de anticuerpo interferona humano 2 (IFNAR2) fusionada con un IgGl (IFNAR2.ECD . IgGl) , producido en células CHO, el chip se realizó utilizando el amortiguador acetato de sodio lOmM pH 4.8. Anticuerpos a la cadena de receptor beta se utilizaron como analitos en el ensayo. Cada anticuerpo estuvo en el intervalo de 500 nM a 0.69 nM en una serie de 1/3 diluciones en serie en PBS más Tween20® 0.05%. El enlace se realizó a 37 grados C con una velocidad de disociación de 60 minutos para las 2 concentraciones de analitos máximas. Entre cada inyección de un analito, el chip se regeneró con dos inyecciones de ácido clorhídrico 20mM. La KD se midió al ajustar las ka/kd de cinética simultáneamente utilizando el modelo de enlace 1:1 (Langmuir) . Ensayo antiviral Experimentos consistentes con el siguiente protocolo se realizaron para medir actividad antiviral mediada por interferona y habilidad de diversos anticuerpos para neutralizar esta actividad. Líneas celulares sensibles a ECMV (por ejemplo la línea celular WISH) se exterminan por el virus en cultivo de tejido. Si hay presente interferona (IFN) durante la incubación con ECMV, las células se protegen contra exterminio por el virus . Actividad de neutralización de anticuerpos receptores anti-IFN puede estimarse al agregar los anticuerpos con interferona en cultivos de tejido. Actividad de neutralización de un anticuerpo puede determinarse con base en su capacidad para bloquear la actividad protectora de interferona. Materiales : (todos los cálculos en volumen siguientes corresponden a preparaciones para volumen final total de ÍL) Fibroblastos WISH (humano) MEDIO DE FIBROBLASTO Medio: MEM Eagle (ATCC#30-2003 ) 900 ml (ya contiene aminoácidos no esenciales, L-glu 2 mM, piruvato de sodio 1 mM, y 1500 mg/L de bicarbonato de Na) suero bovino fetal al 10% (FCS) (termo inactivado) lOOml HEPES 10 mM 10ml(lM) Penicilina/Estreptomicina IX lOml Medio D DMEM (alto glu) 900ml FCS al 10% (Hl) lOOml Bicarbonato de sodio 0.4% 53ml (7.5%) HEPES 4 mM 4ml (ÍM) L-glutamina 40mM 20ml (200mM) Penicilina/Estreptomicina (IX) lOml (10X) Medio de Bioensayo DMEM (alto glu) 900ml FCS al 2% (Hl) lOOml Bicarbonato de sodio?.4% 53ml (7.5%) HEPES 4 mM 4ml (ÍM) L-glutamina 40mM 20ml(200 mM) Penicilina/Estreptomicina (IX) 10 ml (10X) Virus EMC (de encefalomiocarditis de ratón, ATCC VR-129B) , almacenado a -80 grados C; almacenado en aliquotas de 1 ml (título es -3.25 x 108 PFU/ml). Solución de violeta cristal (0.5%) Placas con fondo plano de 96 -pozos Sistema de filtro de vacío/múltiple lavador de placas de múltiples pozos de 12-pozos Procedimientos : Fibroblastos se cultivaron en medio FIBROBLAST. Día. 1 : 1 . Fibroblastos se sembraron en placas de 96 pozos a 2 x 105 células/ml (100 / 1/pozo) en Medio D e incubaron a 37 grados C, C02 al 5% por 18-24 h. Día 2 : 1. Diluciones de IFN (por ejemplo IFN-a (ya sea producido en casa en Genentech, Inc. o adquirido de PBL (Piscataway, New Jersey) ) y leucocito-interferona (Sigma®; St . Louis, MO) ) en medio D se realizaron con y sin anticuerpos neutralizantes, 100 µ l de cada dilución se agrega a cada pozo (200 µ l volumen final) . Las placas después se incubaron a 37 grados C, C02 al 5% por 18-24 hrs. Día 3 : 1. Todos los pozos se aspiraron para retirar Medio D (diluciones +/- IFNAR2 Ab como se indica en los conjuntos/gráficas de datos) . Medio de bioensayo se agrega de cada pozo (100 l /pozo). 2. Todos los pozos, excepto pozos de control se probaron con virus EMC (100 µ l EMC/well -> 200 /íl de volumen final en Medio de Bioensayo) Células WISH: 5 µ l en 1 ml = 1 MOI Para cada placa que requiere virus (100 //1/pozo = 7 ml) 35 µ l (virus sin diuluir) en 6965 µ l de medio de bioensayo. 3. Células de nuevo se incuban a 37 grados C, C02 al 5% por 18-24 horas (en un incubador dedicado para trabajo viral) . Día 4 : 1. Medio se aspiró y tiñó con violeta cristal al 0.5% (290 µ l por pozo) por 10-30 min y después se enjuago con agua destilada (2X) . 2. Se leyeron placas a 540 nm después de secado . RESULTADOS Neutral la zación de ínter fer onas por anticuerpos IFNAR2 en bioensayos antivirales Anticuerpos generados contra IFNAR2 se probaron por su habilidad para neutralizar el efecto antiviral de 1000 U/ml de IFN-G. con respecto a células de fibroblastos WISH tratadas con virus. Datos para los anticuerpos 1922 y 1923 se ilustran en la Tabla A y muestra gráficamente en la Figura 1. Experimentos de control consisten de (i) células desarrolladas en la presencia de IFN- a ; (n) células desarrolladas en la presencia de IFN-a y un anticuerpo anti-IFN-a bloqueador conocido; (iii) el crecimiento de células no estimuladas (es decir, sin adición de interferona Tipo I); (iv) crecimiento de células en la ausencia de virus. Un tercer anticuerpo, anticuerpo 1924, también se probó por su habilidad para neutralizar interferona- a . Anticuerpo 1924 fue capaz de neutralizar interferona- a aunque con actividad menos robusta que los anticuerpos 1922 y 1923 cuando se prueban a la misma concentración de anticuerpo (datos no mostrados). El anticuerpo 1924 también se caracterizó genéricamente en Chuntharapai et al., J. Immunol . (1999), 163:766-773 (anticuerpo referido como "3B2" en la Tabla 1) . El anticuerpo que expresa línea de células de hibridoma 1924 ahora se ha depositado en ATCC, como se indica a continuación. TABLA A Anticuerpos generados contra IFNAR2 también robaron por su habilidad para neutralizar el efecto antiviral de interferona leucocito humano en diversas concentraciones respecto a células de fibroblastos WISH tratados con virus. Datos para los anticuerpos 1922 se ilustran en la Tabla B y muestran gráficamente en la Figura 2. Datos para anticuerpos 1923 se muestran en la Tabla C e ilustran gráficamente en la Figura 3. Experimentos de control consistieron de (i) células desarrolladas en la presencia de interferona a2 (1000 U/ml; Sigma) y Ab 1922 o Ab 1923 (10 ug/ml); (iii) células desarrolladas en la presencia de interferona 2 (10 U/ml; PBL); (iv) células desarrolladas en la presencia IFN-/ (10 U/ml) y anticuerpo 1922 o 1923 (10 ug/ml); (v) crecimiento de células no estimuladas (es decir, sin adición de interferonas Tipo I); (vi) crecimiento de células en la ausencia de virus. TABLA B ¿£. - lililí Itlj 0.504 __?¿¿ I _ u ug,'n_ 500 U .3 Z: ¿. 0.4655 - n: LL- ' GG.J. 10 . r: _ "I "|C / r 'l".l_ •J . J3; "i ' "4 ./r:._ sin 0 105 .056 j .1 25 estimule sin virus 2 -c. — 2 .45" 2 .622 TABLA C Anticuerpos también se probaron para la habilidad para neutralizar efectos protectores antivirales de IFN- ?. Datos para anticuerpos 1922 y 1923, probados a una concentración de 10 ug/ml contra ya sea IFN-a (a 1000 U/ml) o IFN-y? (a 25 U/ml), se ilustra en la Tabla D siguiente y en la Figura 4. Experimentos de control también consisten de: (i) viabilidad celular en la presencia de IFN-a sólo; (ii) crecimiento celular en la presencia de IFN-/? sólo; (iii) viabilidad de células no estimuladas; (iv) viabilidad de células en la ausencia de virus.

TABLA D IFN- a Ab 1922 0.186 0 . 258 lOOOu/ml] Ab 1923 0.177 0 . 297 IFN- ? Ab 1922 0.337 0 . 163 [25u/ml] Ab 1923 0.974 0 . 99 Controles IFN-a 2.505 2.313 [lOOOU/ml] IFN- 7 1.566 1.611 [25U/ml] sin estímulo 0.73 0.591 sin virus 2.768 2.201 TABLA D ( CONTINUA) repl ica repl ica 4 Prom 3 0 . 222 ? - £? 0.383 0.285666667 .00 Ou/ ni 0.317 0.272333333 ¿ ou/ r... 1 0.988 L ent - e_es 2.587 2.593 2.4995 1.691 1.746 1.6535 0.379 0.563 0.56575 2.392 2.911 2.568 Anticuerpo 1922 también se probó para la habilidad para neutralizar los efectos protectores antivirales de IFN- ? (PBL, número de catálogo 1400-2) sobre un intervalo de concentraciones de interferona. Datos ilustrados en la Tabla E siguiente y la Figura 5. Experimentos de control también consisten de: (i) viabilidad celular en la presencia de IFN-a sólo (@ 1000 U/ml) ; (ii) viabilidad celular en IFN-a (@1000 U/ml) y anticuerpo 1922 (@10 ug/ml); (iii) viabilidad de células no estimuladas; y (iv) viabilidad de células en la ausencia de virus. TABLA E Condiciones replica 1 Ab 1922 (10 500 U/ml 0.333 ug/ml) + IFN- ? 250 U/ml 0.192 (PBL) 100 U/ml 0.268 50 U/ml 0.234 U/ml 0.177 1 U/ml 0.084 Controles IFN- ? (1000 2.127 U/ml) IFN- ? + Ab 1922 0.12 sin estímulo 0.185 sin virus 2.47 TABLA E (CONTINÚA) .eDi-Cet J •o rene di rep.i s ¿. 500 U/ml c ¿ Ü . ¿i?J i o 250 U/n! 0.251 0.277 .00 U/nl 0.15266666' ?0 "J.'nl Ü . y ¿.¿. 1 ¡ J U • n . _ J •' n_ i /ni) :F -Í 0. i 2 fc U .2L1 0.131 s n estimule 0.21266666' sin virus 2.60 S353333 Los anticuerpos 1922 y 1923 también se probaron por habilidad para neutralizar los efectos protectores antivirales de IFN- ? (PBL, número de catálogo 11400-2) sobre un intervalo de concentraciones de anticuerpo. Datos para el anticuerpo 1922 se ilustran en la Tabla F siguiente y Figura 6. Datos para el anticuerpo 1923 se ilustran en la tabla G siguiente y Figura 7. Experimentos de control también consistieron de: (i) crecimiento celular en la presencia de interferona-(1000 U/ml); (ii) viabilidad celular en la presencia de interferona- a y Ab 1922 (Tabla F) , o interferona-j5 y Ab 1922 (Tabla G) ; (iii) viabilidad celular de células no estimuladas; y (iv) viabilidad de células en la ausencia de virus.

TABLA F replica 1 IFN- ? Ab 1922 10 ug/ml 0.105 humano (25 3.3 ug/ml 0.086 u/mi : 1.1 ug/ml 0.123 0.4 ug/ml 0.568 0.1 ug/ml 2.369 0.04 ug/ml 2.187 0.01 ug/ml 2.304 0.005 2.21 ug/ml Controles IFN- ? 2.334 (1000 U/ml) IFN- ? + Ab 0.084 1922 sin 0.098 estímulo sin virus 2.804 TABLA F (CONTIN rer._ ca ¿ reD¿?ca z> ? remedie 11 n , <-. U . Uc oceto ' 0. 5S333533 0.158 0.209 6666" 0.91"333533 2. 55 . IJo ce c o ¿. . -»3ijjjjj 2.041353553 ¿.. ¿. O JJjOJO !? . In "1 *9 0.125 ?< . lp 0.133 TABLA G humana Ab l923 20 0.11 IFN-9 (25 10 0.131 U/mi] 3.3 0.307 1.1 0.72 0.4 1.678 0.1 2.578 0.04 2.729 0.01 1.506 Controles IFN--? (25 2.97 U/ml) IFN-/? + Ab 0.137 1922 20 sin 0.176 estímulo sin virus 3.597 replica 2 replica 3 promedio 0.117 0.168 0.131666667 0.2 0.149 0.16 0.389 0.301 0.332333333 0.685 0.646 0.683666667 1.137 1.741 1.518666667 2.211 2.82 2.536333333 2.56 2.969 2.752666667 2.743 1.649 1.966 2.982 2.976 0.11 0.097 0.114666667 0.096 0.193 0.155 3.269 3.463 3.443 Afinidad de enlace de anticuerpos a IFNAR2 estimado por análisis Biacore Afinidades de enlace de Ab 1992 y 1923 a IFNAR2.ECD . IgGl humano se determinaron por Biacore. Mientras que no se observa enlace a murino a IgGl y IgG2a, Ab 1922 y 1923 muestran alta afinidad de enlace a IFNAR2.

TABLA H ANTICUERPO AFINIDAD DE ENLACE Anticuerpo sin enlace control 1 Anticuerpo sin enlace control 2 Ab 1922 58 pM Ab 1923 280 pM Anticuerpo de sin enlace control 3 Los siguientes hibridomas se han depositado con la Colección de Cultivos Tipo Americano (American Type Culture Collection, 12301 Parklawn Drive, Rockville, MD, USA (ATCC) : Líneas Celulares Número de Acceso ATCC Fecha de Depósito Anticuerpo 1922 (1C7.8.8) PTA- 6242 octubre 5, 2004 Anticuerpo 1923 (2B4.10.6) PTA-6243 octubre 5, 2004 Anticuerpo 1924 (3B2.5.7) PTA-6244 octubre 5, 2004 Estos depósitos se realizaron bajo las disposiciones del tratado de Budapest en el reconocimiento internacional del depósito de microorganismos con el propósito de procedimientos de patente y sus reglamentos (Tratado de Budapest) . Esto asegura el mantenimiento de un depósito viable por 30 años a partir de la fecha de depósito. Estas líneas celulares se harán disponibles por ATCC bajo los términos del Tratado de Budapest, y sujeto a un convenio entre Genentech, Inc. y ATCC, que asegura disponibilidad permanente y sin restricción de las líneas celulares al público ante expedición de la Patente de los E.U.A. pertinente o al dejar abierta al público cualquier solicitud de los E.U.A. o extranjera, lo que suceda primero, y asegura la disponibilidad de las líneas celulares a una determinada por el comisionado de patentes y marcas de los E.U.A. a quien tenga derecho de acuerdo con 35 USC §122 y las reglas del Comisionado de conformidad (incluyendo 37 CFR §1.14 con referencia particular a 886 OG 638) . La cesionaria de la presente solicitud ha convenido en que si las líneas celulares depositadas se perdieran o destruyeran cuando se cultivan bajo condiciones convenientes, serán reemplazados rápidamente ante notificación con un espécimen de la misma línea celular. La disponibilidad de las líneas celulares depositadas no habrá de considerarse como una licencia para practicar la invención en contravención con los derechos otorgados bajo la autoridad de cualquier gobierno de acuerdo con sus leyes de patentes .

Claims (38)

1. REIVINDICACIONES 1. Un anticuerpo aislado que comprende cuando menos una secuencia hipervariable (HVR) seleccionado del grupo que consiste de HC-HVR1, HC-HVR2, HC-HVR3, LC-HVRl, LC-HVR2 y LC-HVR3 de un anticuerpo producido por la línea celular de hibridoma depositada en la Colección de Cultivo Tipo Americano (ATCC = American Type Culture Collection) bajo Número de Acceso PTA-6242, PTA-6243 o PTA-6244, en donde el anticuerpo aislado liga receptor alfa interferona humana 2 (IFNAR2) .
2. 2. Un anticuerpo aislado que comprende secuencia de dominio variable de cadena pesada y/o ligera del anticuerpo producida por la línea celular de hibridoma depositada en la Colección de Cultivo Tipo Americana (ATCC) bajó el Número de Acceso PTA-6242, PTA-6243 o PTA-6244, en donde el anticuerpo aislado liga receptor alfa interferona humana 2 (IFNAR2) .
3. 3. Un polipéptido de inmunoglobulina que comprende al menos una secuencia hipervariable (HVR) seleccionado del grupo que consiste de HC-HVR1, HC-HVR2, HC-HVR3, LC-HVRl, LC-HVR2 y LC-HVR3 de un anticuerpo producido por la línea celular de hibridoma depositada en la Colección de Cultivo Tipo Americana (ATCC) bajo Número de Acceso PTA-6242, PTA-6243 o PTA-6244, en donde el polipéptido de inmunoglobulina liga el receptor alfa interferona humana 2 (IFNAR2) .
4. 4. Un polipéptido la inmunoglobulina que comprende secuencia de dominio variable de cadena ligera y/o pesada de un anticuerpo producido por la línea celular de hibridoma depositada en la Colección de Cultivo Tipo Americana (ATCC) bajó el Número de Acceso PTA-6242, PTA-6243 o PTA-6244, en donde el polipéptido de inmunoglobulina liga receptor alfa interferona humana 2 (IFNAR2) .
5. 5. Un anticuerpo aislado que liga el mismo epítope en IFNAR2 humano que el anticuerpo producido por la línea celular de hibridóma depositada en la Colección de Cultivo Tipo Americana (ATCC) bajó el Número de Acceso PTA-6242, PTA-6243 o PTA-6244.
6. 6. Un anticuerpo aislado que compite por el anticuerpo producido por la línea celular de hibridóma depositada en la Colección de Cultivo Tipo Americana (ATCC) bajó el Número de Acceso PTA-6242, PTA-6243 o PTA-6244 para ligar IFNAR2 humano.
7. 7. El anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el anticuerpo inhibe actividad antiviral de interferona de leucosito humano.
8. 8. El anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el anticuerpo inhibe actividad antiviral de interferona alfa humana.
9. 9. El anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque al menos aproximadamente 10 ug/ml del anticuerpo en forma IgG de longitud integra inhibe al menos aproximadamente 25% de actividad antiviral desde 0.5 U/ml a aproximadamente 1000 U/ml de interferona de leucocito humano.
10. 10. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque la interferona de leucocito es de aproximadamente 10 U/ml .
11. 11. El anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque al menos aproximadamente 10 ug/ml del anticuerpo en forma IgG de longitud integra inhibe al menos aproximadamente 25% de actividad antiviral de aproximadamente 1000 U/ml de interferona a .
12. 12. El anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque al menos aproximadamente 0.01 ug/ml del anticuerpo en forma IgG de longitud integra inhibe al menos aproximadamente 25% de actividad antiviral de aproximadamente 25 U/ml de interferona ß -
13. 13. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque la concentración de anticuerpo es al menos aproximadamente 10 U/ml .
14. 14. El anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque al menos aproximadamente 10 ug/ml del anticuerpo en forma IgG de longitud integra inhibe al menos aproximadamente 25% de actividad antiviral de aproximadamente 25 U/ml de interferona ß .
15. 15. El anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque forma IgG de longitud interna del anticuerpo liga específicamente IFNAR2 humana con afinidad de enlace de 300 pM o mejor.
16. 16. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque la afinidad de enlace es 280 pM o mejor.
17. 17. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque la afinidad de enlace es 200 pM o mejor.
18. 18. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque la afinidad de enlace es 100 pM o mejor.
19. 19. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque la afinidad de enlace es 60 pM o mejor.
20. 20. El anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el anticuerpo bloquea actividad antiviral de interferona e interferona ß a un título de anticuerpos sustancialmente equivalente.
21. 21. El anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque una cantidad equivalente del anticuerpo es capaz de bloquear al menos 75% de actividad antiviral y una primer interferona Tipo I y una segunda interferona Tipo I en donde las interferonas cada una se administran a su cantidad antiviral óptima respectiva en bioensayo de células WISH y en donde la segunda interferona Tipo I es interferona ß .
22. 22. El anticuerpo IFNAR2 de la reivindicación 21, caracterizado porque la primer interferona Tipo I es interferona a .
23. 23. El anticuerpo IFNAR2 de la reivindicación 21, caracterizado porque la primer interferona Tipo I es una interferona de leucocito humano .
24. 24. El anticuerpo aislado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el anticuerpo no es un anticuerpo producido por línea celular de hibridóma que tiene el Depósito ATCC No. HB-12426, 12427 y/o 12428, o un anticuerpo IFNAR2 descrito en las páginas 10895 a 10899 en Journal of Biological Chemistry, Volumen 268 publicado en 1993, o un anticuerpo IFNAR2 aislado descrito en las publicaciones PCT W096/33735, WO96/34096, W09741229, Patentes Europeas Nos. 588177 Bl, 927252, 676413, y/o Patentes de los E.U.A. Nos. 6458932 y 6136309.
25. 25. El anticuerpo aislado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el anticuerpo no compite para enlace con IFNAR2 humano con un anticuerpo producido por línea celular de hibridóma que tiene Depósito ATCC No. HB-12426, 12427 y/o 12428, o un anticuerpo IFNAR2 descrito en las páginas 10895 a 10899 en Journal of Biological Chemistry, Volumen 268 publicado en 1993, o en el anticuerpo IFNAR2 aislado descrito en las publicaciones PCT W096/33735, WO96/34096, W09741229, Patentes Europeas Nos. 588177 Bl, 927252, 676413, y/o Patentes de los E.U.A. Nos. 6458932 y 6136309.
26. 26. El anticuerpo aislado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el anticuerpo no liga al mismo epítope en IFNAR2 con un anticuerpo producido por la línea celular de hibridoma que tiene números de Depósito ATCC HB-12426, 12427 y/o 12428, o un anticuerpos IFNAR2 descrito en las páginas 10895 a 10899 en Journal of Biological Chemistry, Volumen 268 publicado en 1993, o un anticuerpo IFNAR2 aislado descrito en las publicaciones PCT W096/33735, WO96/34096, W09741229, Patentes Europeas Nos. 588177 Bl, 927252, 676413, y/o Patentes de los E.U.A. Nos. 6458932 y 6136309.
27. 27. Un anticuerpo IFNAR2 codificado por una secuencia de codificación de anticuerpo de línea celular de hibpdoma depositada en la Colección de Cultivo Tipo Americana (ATCC) bajó el Número de Acceso PTA-6242, PTA-6243 o PTA-6244.
28. 28. Una molécula de ácido nucleico que codifica el anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes.
29. 29. Una célula anfitriona que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica el anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones precedentes .
30. 30. Una línea celular capaz de producir el anticuerpo IFNAR2 de cualquiera de las reivindicaciones precedentes.
31. 31. Un método para producir el anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque comprende cultivar una célula anfitriona que comprende un ácido nucleico que codifica el anticuerpo bajo condiciones en donde se produce el anticuerpo.
32. 32. Comprende una cantidad efectiva del anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes y un portador.
33. 33. Un método para diagnóstico de la presencia de IFNAR2 en una muestra, que comprende contactar la muestra con un anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes.
34. 34. Un método para tratamiento de una enfermedad o condición asociada con la expresión IFN-a , ß y/o IFNAR2, el método se caracteriza porque comprende administrar al paciente una cantidad efectiva de un anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes.
35. 35. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque el paciente es un paciente mamífero
36. 36. El método de conformidad con la reivindicación 36, caracterizado porque el paciente es humano .
37. 37. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque la enfermedad es enfermedad auto inmune.
38. 38. El método de conformidad con la reivindicación 37, caracterizado porque la enfermedad se elige del grupo que consiste de diabetes mielitus dependiente de insulina (IDDM) ; lupus sistémico eritematoso (SLE) , tiroiditis autoinmune, síndrome de Sjogren, soriasis, enfermedad inflamatoria intestinal (por ejemplo, colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn), artritis reumatoide y nefropatia IgA.