MX2007000319A - Análogos de wortmanina y métodos de usar los mismos en combinación con agentes quimioterapéuticos - Google Patents

Abstract

Se describen aquíanálogos novedosos de la wortmanina y su uso en la inhibición de la actividad de la Pl-3-cinasa en mamíferos y el tratamiento o prevención del cáncer y formación de tumores en un sujeto. Preferiblemente, los análogos de la wortmanina pueden ser administrados con otros agentes quimioterapéuticos en el tratamiento del cáncer.

Description

ANÁLOGOS DE LA WORTMANINA Y MÉTODOS DE USAR LOS MISMOS.

EN COMBINACIÓN CON AGENTES QUIMIOTERAPÉUTICOS REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud reclama prioridad de la Solicitud Provisional de EE.UU., No. 60/586,687, presentada el 9 de julio del 2004, intitulada "Análogos de la Wortraanina y Métodos de Usar los Mismos", incorporada aqui como referencia en su totalidad.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a análogos de la wort anina, y métodos de usar estos derivados solos o en combinación con agentes quimioterapéuticos para inhibir la actividad de la PI-3-cinasa y tratar ciertos tumores malignos y otros cánceres. La Wortmanina es un potente inhibidor conocido de la fosfotidiilinositol-3-cinasa (PI-3-cinasa) y agente contra el cáncer. La Wortmanina es un compuesto que ocurre naturalmente, aislado e caldos de cultivo del hongo Penicillium wortmannin y tiene la estructura mostrada en la patente de EE.UU., No. 5,480,906, la cual se incorpora aqui como referencia.

COMPENDIO DE LA INVENCIÓN Un aspecto de la presente invención proporciona novedosos análogos de la wortmanina y métodos de inhibir el cáncer en un sujeto, los cuales comprenden administrar a un sujeto una dosis efectiva farmacéuticamente de un análogo de la wortmanina.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Otro aspecto de la presente invención proporciona n método para inhibir la actividad de la PI-3-cinasa en mamíferos, por la administración de una cantidad efectiva de un análogo de la wortmanina . Otro aspecto de la presente invención proporciona el uso de los compuestos como agentes contra el cáncer (contra tumores) y también formulaciones farmacéuticas que incluyen el compuesto, en combinación con un portador, receptor o diluyente aceptable farmacéuticamente . Un aspecto más de la presente invención proporciona el uso de análogos de a wortmanina en combinación con agentes quimioterapéuticos para tratar el cáncer.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Para un entendimiento más completo de la naturaleza y las ventajas de la presente invención, se debe hacer referencia a la siguiente descripción detallada, tomada en relación con los dibujos acompañantes, en los cuales: La Figura 1A es una gráfica de la dependencia de la dosis del por ciento del control del fosfo-Akt del xenoinjerto HT-29 por los análogos de la Wortmanina de la presente invención. La Figura IB es una gráfica de la dependencia de la ruta del presente control del fosfor-Akt del xenoinjerto de HT-29, por el análogo de la wortmanina PX-866 de la presente invención; la Figura 2 es una gráfica de la concentración del PX-866 (en ng/ml) en el plasma del ratón, en seguida de la administración intravenosa, intraperitoneal y oral; la Figura 3 es una gráfica de la concentración del PX-866 y metabolitos (en ng/ml) en el plasma del ratón; la Figura 4 ilustra la actividad de los análogos de a wortmanina de la presente invención, en el panel de la linea celular de tumores humanos NC1, según se mide por la CI50; la Figura 5 es una gráfica que muestra la inhibición del fosfo-Akt de células del cáncer del colon HT-29 por los análogos de la wortmanina de la presente invención; la Figura 6 es una gráfica del volumen promedio del tumor (en mm3 ) en seguida del tratamiento con PX-866, un análogo de la wortmanina de la presente invención, solo o en combinación con la radiación en los xenoinjertos del ovario humano de OvCar-3; la Figura 7 es una gráfica que ilustra la potenciación de la actividad contra el tumor de gefitinib por PX-866; la Figura 8 es una gráfica de barras, que ilustra la inhibición del EGFR y fosfor-Akt en xenoinjertos del cáncer del pulmón de células no pequeñas A-549 fitinib y PX-866; la Figura 9 es una gráfica de barras de porcentaje de control de fosfo-Akt y fosfo-EGFR en A549 xenoinjertos del cáncer del pulmón con administración del PX-866 solo (intravenoso u oralmente) , o el gefitinib solo; la Figura 10 es una gráfica que ilustra el efecto del PX- 966 en la insulina del plasma y la tolerancia a la glucosa; la Figura HA es una gráfica del volumen del tumor medio (en mm3 ) en seguida del tratamiento con PX-866, un análogo de la wortmanina de la presente invención; y la Iressa, cuatro horas después en xenoinjertos del pulmón de células pequeñas A549. La Figura 11B es una gráfica del volumen medio del tumor (en mm3 ) en seguida del tratamiento con PX-866, un análogo de la Wortmanina de la presente invención, en combinación con Iressa en xenoinjertos del pulmón de células pequeñas A549; la Figura 12 es una gráfica del volumen medio del tumor (en mm3 ) en seguida del tratamiento con PX-866, un análogo de la wortmanina de la presente invención, solo o antes de la administración de Iressa, en xenoinjertos del tumor del pulmón humano A549; la Figura 13 es una gráfica del volumen medio del tumor (en mm3 ) en seguida del tratamiento con PX-866, un análogo de la wortmanina de la presente invención, solo o antes de la administración de la Iressa en células del cáncer del colon HT-28; la Figura 14 es una gráfica del volumen medio del tumor (en mm3 ) en seguida del tratamiento con PX-866, un análogo de la wortmanina de la presente invención, solo o en combinación con Avastin en los xenoinjertos thabdomyosarcom A-673 la Figura 15 es una gráfica en barras, que ilustra el porcentaje de folículos del cabello positivos pAkt, en la piel del ratón, en seguida de la administración de PX-866, Iressa o una combinación de los mismos; la Figura 16 muestra análogos de la wortmanina de la presente invención.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Antes de describir las presentes composiciones y métodos, se entenderá que esta invención no se limita a los procesos particulares composiciones y metodologías descritas, ya que ellas pueden variar. También se entenderá que la terminología usada en la descripción es con el fin de describir las versiones particulares o formas de realización únicamente, y no se intenta limitar el ámbito de la presente invención, el cual se limitará solamente por las reivindicaciones adjuntas.

Se debe notar también que, según se usa aqui y en las reivindicaciones anexas, las formas singulares "un" y "el", incluyen las referencias plurales, a no ser que el contexto dicte claramente otra cosa. Asi, por ejemplo, la referencia a un "fibroblasto" es una referencia a uno o más fibroblastos y sus equivalentes, conocidos por los expertos en la material, etc. A no ser que se defina de otra manera, todos los términos técnicos y científicos usados aqui, tienen los mismos significados como entiende comúnmente un experto ordinario en la materia. Aunque cualquier método y materiales similares o equivalentes a los descritos aqui se pueden usar en la práctica o prueba de modalidades de la presente invención, los métodos preferidos, dispositivos y materiales son ahora descritos. Todas las publicaciones mencionadas aqui se incorporan como referencia en su totalidad. Nada contenido aqui se debe interpretar como admitiendo que la invención no está intitulada a adelantar tal descripción, en virtud de una invención anterior. Los métodos aqui descritos para su uso, consideran el uso profiláctico al igual que el uso curativo en la terapia de una condición existente. Según se usa aquí, el término "alrededor" significa más o menos el 10% del valor numérico del número el cual se está usando. Por lo tanto, alrededor del 50% significa el intervalo del 45 al 55%.

La "administración", cuando se usa en conjunto con un medio terapéutico, significa administrar un medio terapéutico en forma sistémica o localmente, tal como directamente dentro o sobre un tejido objetivo, o administrar un medio terapéutico a un paciente, por lo cual tiene un impacto terapéutico positivo en el tejido al cual se dirige. Así, según se usa aquí, el término de "administración", cuando se usa en conjunto con un análogo de la wortmanina, puede incluir, pero no se limita a, proporcionar un análogo de la wortmanina dentro o sobre el tejido objetivo; proporcionar un análogo de la wortmanina sístémicamente a un paciente, por ejemplo, por inyección intravenosa, por lo cual el medio terapéutico llega al tejido o células objetivo. A "administración" de una composición puede ser acompañada por la inyección, administración tópica, administración oral o por otros métodos, solos o en combinación con otras técnicas conocidas. Tales técnicas en combinación incluyen el calentamiento, radiación y ultrasonido. Según se usa aquí, el término de "terapéutico" significa un agente utilizado para tratar, combatir, disminuir, prevenir o mejorar una condición indeseada o enfermedad de un paciente. En parte, modalidades de la presente invención se dirigen al tratamiento del cáncer y/o la disminución de los síntomas del cáncer.

El término de "inhibición" incluye la administración de un compuesto de la presente invención para prevenir el inicio de los síntomas, aliviando estos síntomas, o eliminando la enfermedad, condición o desorden. Un aspecto de la presente invención se refiere a los análogos de la wortmanina de la siguientes fórmulas generales: en las cuales Y es un heteroátomo y Rl o R2 son alquilo insaturado, alquilo no lineal, o alquilo sustituido, que incluye un alquilo ramificado o alquilo cíclico. Preferiblemente, el análogo de la wortmanina corresponde a la fórmula química seleccionada del grupo que consiste de los compuestos presentados en la Figura 16. Más preferiblemente, Rl o R2 es un alquilo disustituido, tal como el PX-866 y PX-867. La producción biosintetica de la wortmanina es bien conocida en el arte los análogos son sintetizados de esta wortmanina. La patente de EE.UU., No. 5,480,906, que se incorpora aquí como referencia en su totalidad, describe esquemas típicos sintéticos. Adicionalmente, la wortmanina se produce por la fermentación de cualquiera de un número de microorganismos descritos previamente, tal como Talaromyces wortmannin y Panicillium wortmannin . Myrothecium roridium y Fusarium . En seguida de la fermentación, la wortmanina se extrae y purifica por método conocidos. Preferiblemente, la wortmanina es sintetizada microbialmente y aislada en forma sustancialmente pura desde un cultivo de fermentación (uno de tales cultivos de fermentación se identifica como A24603.1) . El cultivo de la cepa bajo condiciones aeróbicas sumergidas, en un medio de cultivo adecuado, hasta que se produce una cantidad recuperable de la wortmanina, obtiene esta wortmanina. La wortmanina puede ser recuperada usando varios procedimientos de aislamiento y purificación, conocidos en el arte. El medio usado para el crecimiento del cultivo puede ser uno de un número de medios. Por economía en la producción, el rendimiento óptimo y la facilidad de aislamiento del producto, sin embargo, fuentes de carbono preferidas en la fermentación a grande escala, son la glucosa y almidón soluble, tal como el almidón de maíz. La maltosa, ribosa, xilosa, fructora, galactosa, mañosa, manitol, dextrina de papa, oleato de metilo, aceites, tal como el aceite de soya y similares, peden también ser usados.

Fuentes de nitrógeno preferidas son la caseína hidrolizada por enzimas y la harina de semilla de algodón, aunque la leche pepsinizada, harina de soya digerido, harina de pescado, licor de maíz macerado, extracto de levadura, caseína hidrolizada con ácido, extracto de carne, y similares, pueden también ser usados . Aunque las sales inorgánicas nutrientes, que pueden ser incorporadas en el medio de cultivo, son las sales solubles acostumbradas, capaces de suministrar el calcio, magnesio, sodio, amonio, cloruro, carbonato, sulfato, nitrato, zinc e iones similares. Elementos traza esenciales, necesarios para el crecimiento y desarrollo del organismo, también deben ser incluidos en el medio de cultivo. Los elementos traza ocurren comúnmente como impurezas en otros constituyentes el medio, en cantidades suficientes ara cumplir con los requisitos del crecimiento en el organismo. Para la producción de cantidades sustanciales de la wortmanina, la fermentación aeróbica sumergida en bio-reactores es preferida. Cantidades pequeñas de la wortmanina pueden ser obtenidas por el cultivo en un matraz agitado. Debido a que el retraso de tiempo en la producción, asociada comúnmente con la inoculación de bio-reactores grandes, con la forma de espora del organismo, es preferible usar el inoculo vegetativo. Este inoculo vegetativo es preparado por inocular un volumen pequeño del medio de cultivo con fragmentos en forma de esporas o micelales del organismo, para obtener un cultivo fresco, que crece activamente, del organismo. Este medio de inoculo vegetativo puede ser el mismo como el usado para fermentaciones mayores, pero otros medios son también adecuados . En seguida de su producción, la wortmanina puede ser recuperada del medio de fermentación por métodos usados en el arte. La wortmanina producida durante la fermentación del organismo A24603.1, por ejemplo, ocurre principalmente en el caldo. Típicamente, la wortmanina puede ser recuperada de la biomasa por una variedad de técnicas. Una técnica preferida implica la filtración del caldo de fermentación tal con un filtro de cerámica. El filtrado es diluido con un solvente orgánico, tal como el acetato de etilo y concentrado. El concentrado se suspende en alcohol hasta que ocurre la cristalización y la solución es filtrada, lavada y secada. Para confirmación, el material cristalino se disuelve en un solvente orgánico y se somete a cromatografía en un absorbente de gel de sílice de fase inversa (Cs o C?8) . Las fracciones se diluyen en un regulador orgánico-acuoso, tal como 60% de acetonitrilo. La wortmanina puede además ser manipulada para llegar a los compuestos de la presente invención. Aunque la síntesis de los análogos particulares de la wortmanina se ilustran abajo, otros esquemas sintéticos comunes en la técnica permitirán a un experto ordinario en la materia a sintetizar compuestos, de acuerdo con la presente invención, y los esquemas sintéticos señalados aquí de ninguna manera, se considerarán como limitativos. Para el tratamiento terapéutico de las indicaciones especificadas, un análogo de la wortmanina de la presente invención, puede ser administrado como tal, o puede ser compuesto y formulado en composiciones farmacéuticas en formas de dosis unitarias para la administración parenteral, transdermal, rectal, nasal, intravenosa local o, preferiblemente, la administración oral. Estas composiciones farmacéuticas se preparan en una manera bien conocida en el arte y comprenden un portador farmacéutico y al menos un compuesto activo, seleccionado del grupo que consiste del término de "compuestos activos", según se usa a través de toda la especificación, se refiere a al menos un compuesto seleccionado de los compuestos de las fórmulas o sus sales aceptables farmacéuticamente . Los compuestos son efectivos en un amplio intervalo de dosis y, por ejemplo, la dosificaciones por día caerán normalmente dentro del intervalo de 0.001 a 10 mg/kg, más usualmente en el intervalo de 0.01 a 1 mg/kg. Sin embargo, se entenderá que la cantidad efectiva administrada será determinada por el médico a la luz de las circunstancias pertinentes, que incluyen la condición que se va a tratar, la selección del compuesto que se va a administrar y la ruta d administración escogida, y, por lo tanto, los intervalos de dosis anteriores no intentan limitar el ámbito de la invención de alguna manera. En tal composición, el compuesto activo se conoce como el "ingrediente activo". Al obtener las composiciones, el ingrediente activo usualmente será mezclado con un portador, o diluido por un portador, o encerrado dentro de un portador, que puede estar en la forma de una cápsula, saquito, papel u otro contenedor. Cuando el portador sirve como un diluyente, puede ser un material sólido, semisólido o líquido que actúa como un vehículo, excipiente o medio para el ingrediente activo. Así, la composición puede estar en la forma de tabletas, pildoras, polvos, pastillas, saquitos, cápsulas, elíxires, emulsiones, soluciones, jarabes, suspensiones, cápsulas de gelatina suaves y duras, soluciones inyectables estériles y polvos empacados estériles. Algunos ejemplos de portadores, excipientes y diluentes adecuados incluyen la lactosa, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, almidones, goma acacia, alginatos de fosfato de calcio, silicato de calco, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, celulosa, goma de tragaanto, gelatina, jarabe, metil-celulosa, metil- y propilhidroxbenzoatos, talco, estearato de magnesio, agua y aceite mineral. Las formulaciones pueden incluir adicionalmente agentes lubricantes, agentes humectantes, agentes de emulsiona iento y de suspensión, agentes preservativos, agentes endulzadores o agentes de sabor. Las composiciones pueden ser formuladas para así proporcionar la liberación rápida, sostenida o retardada del ingrediente activo, después de la administración al paciente, empleando procedimientos bien conocidos en el arte. Para la administración oral, un compuesto puede ser mezclado con portadores y diluyentes, moldeado en tabletas, o encerrado en cápsulas de gelatina. Las mezclas pueden, alternativamente, ser disueltas en líquidos, tal como una solución acuosa de glucosa al 10%, una solución salina isotónica, agua estéril, o similares, y administrada intravenosa ete o por inyección. Por "aceptable farmacológicamente" se entiende que el portador, diluyente o excipiente debe ser compatible con los otros ingredientes de la formulación y no perjudicial al receptor. La entrega local de cantidades inhibidoras del compuesto activo para el tratamiento del cáncer puede ser por una variedad de técnicas, que administran el compuesto en o cerca del sitio proliferativo. Ejemplos de técnicas de entrega local no se intentan ser limitativos, sino ser ilustrativo de las técnicas disponibles. Ejemplos incluyen los catéteres de entrega local, portadores específicos del sitio, implantes, inyección directa o aplicaciones directas. La entrega local por un catéter permite la administración de un agente farmacéutico directamente al sitio proliferativo. La entrega local por un implante describe la colocación quirúrgica de una matriz que contiene el agente farmacéutico en la lesión proliferativa. La matriz implantada libera el agente farmacéutico por difusión, reacción química o activadores de solventes . Otro ejemplo es la entrega de un agente farmacéutico por el sellado endoluminal polimérico. Esta técnica usa un catéter para aplicar un implante polimérico a la superficie interior del lumen. El agente farmacéutico incorporado en el implante del polímero biodegradable es así liberado en el sitio quirúrgico. Se describe en la solicitud de patente PCT WO 90/01969 (Schindler, 23 de agosto de 1989) . Un ejemplo final de la entrega local por un implante es por inyección directa de vesículas o icroparticulados en el sitio proliferativo. Estos microparticulados pueden estar compuestos de sustancias, tal como proteínas, lípidos, carbohidratos o polímeros sintéticos. Estos microparticulados tienen el agente farmacéutico incorporado a través de la microparticula o sobre la micropartícula como un recubrimiento. Sistemas de entrega que incorporan microparticulados se describen por Lange, Science 249: 1527-1533 (septiembre de 1990). Sci., 26:809 (1981). La entrega local por portadores específicos del sitio describe adjuntar el agente farmacéutico a un portador, el cual dirigirá la droga a la lesión proliferativa. Ejemplos de esta técnica de entrega incluye el uso de portadores, tal como la ligadura de proteína o un anticuerpo monoclonal.

La entrega local por aplicación directa incluye el uso de aplicaciones tópicas. Un ejemplo de una entrega local por aplicación directa es aplicando el agente farmacéutico al tumor arterial o el área dejada detrás después de la resección del tumor. La formulación de análogos de la wortmanina es bien conocida en el arte, como es el proceso de fermentación. Más bien que suministrar un detalle exhaustivo respecto al esquema sintético o la formulación, la presente invención se relaciona con los artesanos expertos para el uso de esas técnicas de formulaciones y sintéticas comunes con el fin de sintetizar los compuestos de la siguiente fórmula general: en las cuales Y es un heteroátomo y Rl o R2 son alquilos insaturados, alquilos no lineales, o alquilos sustituidos, que incluyen un alquilo ramificado o alquilo cíclico. Preferiblemente, el análogo de la wortmanina corresponde a la fórmula química seleccionada del grupo que consiste de los compuestos presentados en la Figura 16.

Los análogos de la wortmanina y las composiciones farmacéuticas que contienen los mismos, pueden ser útiles en la inhibición del PI-3K y útiles en el tratamiento y/o prevención del cáncer. Otro aspecto de la presente invención proporciona el uso de los análogos de la wortmanina en combinación con agentes quimioterapéuticos en el tratamiento y/o prevención del cáncer. Los análogos de la wortmanina pueden ser administrados antes de, durante o en seguida de a administración de un agente quimioterapéutico. Agentes quimioterapéuticos incluyen tanto los agentes citotóxicos como los agentes objetivo contra tumores. Agentes citotóxicos ejemplares incluyen, pero no se limitan a, la gemcitabina (Gemzar®) , paclitaxel (Taxol®) y cisplatn (Platnol®) . Ejemplos de agentes objetivo contra tumores incluyen, pero no se limitan a, gefitinib (Iressa®) , erlotinib (Tarceva®) , trastuzumab (Herceptin®) , cetuxima (Webitux®) y bevciizumab (Avastatin®) . En ciertas modalidades, la formulación farmacéutica puede contener tanto un análogo de la Wortmanina como un agente quimioterapéutico en combinación. En otras modalidades, el análogo de la wortmanina y el agente quimioterapéutico pueden ser administrados separadamente, o antes de, sustancialmente simultáneamente con, o después de la administración del otro agente. En otro aspecto de la presente invención, se proporciona un método de inhibir el PI-3K por la administración de una cantidad efectiva terapéuticamente de un análogo de un análogo de la wortmanina de la fórmula general siguiente: en las cuales Y es un heteroátomo y Rl o R2 son alquilos insaturados, alquilos no lineales, o alquilos sustituidos, que incluye un alquilo ramificado o alquilo cíclico. Preferiblemente, el análogo de la wortmanina corresponde a la fórmula química seleccionada del grupo que consiste de los compuestos presentados en la Figura 16. Más preferiblemente, Rl o R2 son alquilos disustituidos. En una modalidad, el análogo de wortmanina es el PX-866 y P-867. El análogo de la wortmanina puede ser administrado antes de, sustancialmente en forma simultánea con o después de la administración del agente quimioterapéutico. En otro aspecto de la presente invención, se proporciona un método de inhibición del PI-3K, por la administración de una cantidad efectiva terapéuticamente de un análogo de la wortmanina de la siguiente fórmula general: en las cuales Y es un heteroátomo y Rl o R2 son alquilos insaturados, alquilos no lineales, o alquilos sustituidos, que incluye un alquilo ramificado o alquilo cíclico en combinación con un agente quimioterapéutico. Preferiblemente, Rl o R2 del análogo de wortmanina son alquilos disustituidos, y el agente quimioterapéutico se selecciona del grupo que consiste del gemcitabine (Ge zar®) , paclitaxel (Taxol®) y cisplatin (Platinol®) . Agentes objetivo contra el tumor ejemplares incluyen pero no se limitan a, gafitinib (Iressa®) , erlotinib (Tarceva®) , trastuzumab (Herceptin®) , cetuximab (Erbiitux®) y bevaciszumab (Avastatin®) . En una modalidad más preferida, el método comprende administrar el PX- 867 y gefitinib. El análogo de wortmanina puede ser administrado antes de, sustancialmente en forma simultánea con o después de la administración del agente quimioterapéutico. En otro aspecto de la presente invención, se proporciona un método para tratar o prevenir el cáncer por la administración de una cantidad efectiva terapéuticamente de un análogo de la wortmanina de la siguiente formula general : en las cuales Y es un heteroátomo y Rl o R2 son alquilos insaturados, alquilos no lineales, o alquilos sustituidos, que incluye un alquilo ramificado o alquilo cíclico. Preferiblemente, el análogo de la wortmanina corresponde a la fórmula química seleccionada del grupo que consiste de los compuestos presentados en la Figura 16. Más preferiblemente, Rl y R2 son alquilos disustituidos. En una modalidad, el análogo de la wortmanina es el PX-866 y PX-867. Este análogo de la Wortmanina puede ser administrado antes de, sustancialmente en forma simultánea con o después de la administración del agente quimioterapéutco . En otro aspecto de la presente invención, se proporciona un método para tratar o prevenir el cáncer, por la administración de una cantidad efectiva terapéuticamente de un análogo de la wortmanina de la siguiente fórmula general: en las cuales Y es un heteroátomo y Rl o R2 son alquilos insaturados, alquilos no lineales, o alquilos sustituidos, que incluye un alquilo ramificado o alquilo cíclico, en combinación con un agente quimioterapéutico. Preferiblemente, Rl o R2 del análogo de la wortmanina son alquilos disustítuidos, y el agente quimioterapéutico se selecciona del grupo que consiste de gamcitabine (Gemzar®) , paclitaxel (Taxol®) y cisplatin (Platinol®) . agentes objetivos ejemplares contra tumores incluyen, pero no se limitan a, gefitinib (Iressa®) , erlotinib (Tarceva®) , trastuzumab (Herceptin®) , cetuximab (Erbitux®) y bevecizumab (Avastin®=. En una modalidad más preferida, el método comprende administrar el P-866 y gafitinib. En otra modalidad más preferida, el método comprende administrar el PX-867 y gefitinib. El análogo de la wortmanina puede ser administrado antes de, sustancialmente en forma simultánea con o después de la administración del agente quimioterapéutico .

En una modalidad más, se proporciona un compuesto que comprende un metabolito activo de un análogo de la wortmanina y métodos de usar el mismo. En una modalidad preferida, el metabolito activo es seleccionado del grupo que consiste del carbonilo reducido y la forma diacetilada reducida del carbonilo de los análogos de la wortmanina. En una modalidad preferida, el metabolito activo se selecciona del grupo que consiste del carbonilo reducido PX-866 y el carbonilo reducido diacetilado PX-866. La supervivencia aumentada de células es una característica fundamental de las células del cáncer y limita la efectividad de la terapia del cáncer. Un mecanismo importante para la supervivencia aumentada de células en muchos cánceres es mediado por la fosfatidilinositol-3-cinasa (PtdIns-3-cinasa) / Akt (cinasa B de proteína) , que señalan la trayectoria que es activada por el receptor y las cinasas de tirosina de proteína oncogénicas . Ocho mamíferos PtdIns-3-cinasas se dividieron en 3 clases principales; Clase I membrana Ptdlns del PtdIns-3-cinasa-fosforilato, para dar Ptdlns (3, 4, 5) P3, el cual alista la Akt de cinasa de la citoplasmiserina / treonina por unirse a su dominio de homología de pleckstrina (PH) . La Akt asociada con la membrana se activa por fosforilación de Ser473 por la cinasa-1 dependiente de la fosfoinositida (PDK1) asociada con la membrana y la fosforilación de Thrl08 por la segunda PDK2 caracterizada incompletamente. La Akt activada se desprende de la membrana del plasma y se mueve al citoplasma y el núcleo, donde fosforila una batería de objetaos para prevenir la expresión de los genes muertos, e induce la supervivencia de las células. La actividad de PtdIns-3-cinasa se aumenta en el cáncer del pulmón de células pequeñaza humanas, cánceres del ovario, cabeza cuello, tracto urinario, del colon y cervicales. La proteína supresora del tumor PTEN (diez oncocromosomas suprimidos, homólogos de la fosfatasa y tensina)una especificidad doble tirosina-treonina / PtdIns-3-fosfatasa, previene la acumulación de PsIns (3,4,5)P3 y atenúale señalamiento de Ptdlns-3cínasa (8) . PTRN es mutado o suprimido en una variedad de cánceres humanos, que incluyen los cánceres de la próstata avanzado, endometrial, renal, glial, melanoma y del pulmón de células pequeñas. PX-866 potencia la actividad contra tumores de gefitinib. La familia de cinasa de proteína tiene más de 800 miembros humanos entre los cuales las cinasas de tirosina de proteína receptoras son objetaos frecuentemente de la terapia del cáncer. Ellas incluyen el receptor del factor de crecimiento epidermal (EGR, ErbB-1, HERÍ) , que, cuando se activa por unión de ligadura a su dominio extracelular, homo o heterodi eriza con cualquiera de 3 otros miembros de familia, ErbB-2 (HER2) , ErbB-3 (HER3) y EbB-4 (GER4), conduciendo a la autofosforilación de los residuos de Cterminaltirosina citoplásmica. Estos transductores de la señal de reclutamiento de las fosforilaciones conducen a la activación de las trayectorias de señalización que incluyen la trayectoria Ras . MWK-MAPK, el camino de la trayectoria STAT y la trayectoria de supervivencia de PtdIns-3-cinasa / Alt. El EGFR se amplifica o sobre-expresa en un amplio intervalo de cánceres humanos, donde se cree juegan un papel importante en la progresión del tumor. En el cáncer del pulmón (nsc) no de células pequeñas,, la expresión EHFR se correlaciona con la supervivencia disminuida del paciente. Un número de inhibidores de moléculas pequeñas de a cinasa EGFR al igual que los anticuerpos monoclonales EGFR se encuentran bajo desarrollo o aprobación para el uso clínico. Gefitinib ZD 1839, Iressa®) es un inhibidor de EGFR de molécula pequeña, que, cuando se administra a pacientes con cáncer del pulmón nsc que recae ha mostrado un régimen de respuesta del 10 al 20% y estabiliza la enfermedad en otro 20 al 30% de los pacientes. Sin embargo, la adición de gefitinib a la quimioterapia en pacientes sin tratar con cáncer del pulmón nac no tiene algún efecto en la sobrevivencia general, tiempo de progresión o régimen de respuesta. Una mayoría, pero no todos, los pacientes del cáncer del pulmón nac, que responden a agente sencillo gefitinib contienen mutaciones somáticas de significado funcional desconocido en el dominio de la cinasa de la tirosina EGFR. Sin embargo, hay también pacientes con cáncer del pulmón nac que no han mutado receptores EGFR quienes pueden derivar el beneficio de Gefitinib y otros inhibidores EGFR. Asimismo, aunque las mutaciones activadas de EGFR son raras en el cáncer colorrectal humano y glioblastoma, algunos de estos tumores pueden se responsivos de los inhibidores de EGFR. Un estudio reciente a mostrado que PX-866 potencia la actividad contra tumores de gefitinib, que inhibe el crecimiento celular y regula en forma descendente la señalización de PtdIns-3-cinasa solamente en las líneas celulares del cáncer del pulmón nac con la expresión ErbB-3. Esto se debe a que LtdIns-3-cinasa se acopla a ErbB-3, conduciendo a la activación de la señalización de PtdIns-3-cinasa / Akt solamente en las líneas celulares del cáncer del pulmón con cualquier tipo silvestre o mutante del receptor EGFR, y ErbB-3. El Gefitinib es capaz de bloquear a asociación de PtdIns-3-cinasa con ErbB-3, así previniendo la activación de PtdIns-3-cinasa / Akt en estas líneas celulares. El papel central de PtdIns-3-cinasa en la determinación de la respuesta al gefitinib sugiere que un inhibidor de PtdIns-3-cinasa puede proveer una estrategia para aumentar la actividad contra el tumor de la gefitinib en resistencia a los tumores del cáncer del pulmón nac, que no expresan ErbB-3. El PX-866 es un novedoso inhibidor de PtdIns-3-cinasa que es actualmente el desarrollo preclínico avanzado como un agente contra tumores. La línea celular del cáncer del pulmón nsc humano de A-549 con Nras activos mutantes que no expresan ErbB-3 y es resistente al gefitinib se usó. Se encontró que en los xenoinjertos del tumor A-549, el gefitinib no inhibe la señalización de PtdIns-3-cinasa / Akt y la administración del PX- 866 o intravenosamente (iv) u oralmente (po) , potencia marcadamente la actividad contra el tumor de gefitinib. La toxicidad de la administración por período prolongado de EX866 mostró que aumenta la glucosa en la sangre, asociada con una disminución en la sensibilidad a la insulina. Esta invención y las modalidades que ilustran el método y materiales usados, pueden ser mejor entendidas con referencia a los ejemplos no limitativos siguientes.

EJEMPL01 Éster 4-dialilaminometilen-6-hidroxi-l-V-metoximetil-103, 133-dimetil-3,7,17-trioxo-l,3,4,7,10,113, 12, 13,14V, 15, 16, 17-dodecahidro-2-oxa-ciclopeta [V] fenantren-11-ilo (djm2-166) del ácido acético (djm2-166) A una solución de ña wortmanina (10.7 mg, 25.0 mol) en CH2C12 (125 :1) se agregó una solución de carga 0.2M, preparada recientemente, de dialilamina (138 :L, 27.5 :mol) en CH2C12. La mezcla de reacción se agitó a la temperatura ambiente durante 1 hora. El solvente y la amina en exceso se removieron al vacío, y el producto se purificó por cromatografía en Si02 (hexanos / acetato de etilo, 1:9) para dar djm2-166 (0.9 mg, 17 :mol, 68%), como un aceite de color naranja: [V]D =630 (c 0.0015, CH2C12, 23 C) ; IR (KBr) 3391, 1743, 1695, 1685, 1622, 1569, 1222, 1111, 1100 cm"1; x H NMR * 8.20 (s, 1 H) , 6.81 (s, 1 H) , 6-06 (dd, 1 H, J=l ? , 4.8 Hz) , 5.85 (br s, 1 H) , 5.62 (br, 1 H) , 5.44-5.04 (m, 4 H) , 4.48 (dd, 1 H, J"=7.2, 1.9 Hz), 4.05-3.60 ( , 4 H) , 3.26 (s, 3 H) , 3.27-3.20 (m, 1 H) , 3.16 (dd, 1 H, J=10.9, 7.2 Hz) , 3.00-2.90 (m, 2 H) , 2.59 (dd, 1 H, J=19.4, 8.6 Hz) , 2.40 (dd, 1 H, J=14.4, 7.7 Hz) , 2.35-2.07 ( , 2 H) , 2.07 (s, 3 H) , 1.83 (dd, 1 H, J=14.4, 4.7 Hz) , 1.54 (s, 3 H) , 0.86 (s, 3 H) ; 13C NMR * 217.0, 178.5, 169.6, 164.8, 156.3, 151.5, 139.0, 136.9, 132.2, 131.3, 127.7 ( 2 C) , 119.2, 89.0, 81.9, 73.1, 67.6, 59.1, 50.9 (2 C), 48.9, 42.3, 42.2, 37.5, 36.0, 24.6, 22.2, 20.8, 16.1; MS (El) m/z (intensidad reí. ) 525 (M\ 11), 466 (17), 391 (15), 350 (14), 323 (13), 266 (17), 239 (17), 60 (100); HRMS (El) C29H35 08 cale; 525.2363, : £ nc. 525.2386.

EJEMPLO 2 Éster 6-hidroxi-lV-metoximetil-103, 133-dimetil-3, 7, 17- trioxo-4-pirrolidin-l-il-metilen-l, 2, 3, 7, 10, 113, 12, 13, 14V, , 16, 17- dodecahidro-2-oxa-ciclopenta [V] fenantren-11-ilo del ácido acético (djm2.157) A una solución de ña wortmanina (30.0 mg, 70.0 mol) en CH2C12 (200 :1) se agregó pirrolidina (7.0 1, 84 mol) en CH2C12 La mezcla de reacción se agitó a la temperatura ambiente durante 1 hora. El solvente y el tiol en exceso se removieron al vacío, y el producto se purificó por cromatografía en Si02 (hexanos / acetato de etilo, 9:1, luego 1:1) ) para dar djm2-167 (30 mg, 60.6 :mol, 86%), como un aceite de color naranja:: [V]D-390 (c 0.0073, 60.6 :mol, 86%) as an orange oil: [V]D -390 (c 0.0073, CH2C12, 23 C) ; IR (KBr) 3337, 1740, 1684, 1617, 1570, 1261, 1221, 1099, 1018 cm.sup.-l; .sup.l H NMR * 8.29 (s, 1 H) , 6.72 (s, 1 H), 6.07 (dd, 1 H, J=6 . 9 , 4 . 8 Hz), 4.47 (dd, 1 H, J=7.0, 1.9 Hz) , 3.80-3.70 (m, 2 H) , 3.25 (s, 3 H) , 3.25-3.14 (m, 2 H) , 3.02-2.90 (m, 2 H) , 2.69 (br s, 1 H) , 2.58 (dd, 1 H, J=19.1, 8.4 Hz), 2.39 (dd, 1 H, L4.6, 7.8 Hz) , 2.32-2.08 (m, 2 H) , 2.06 (s, 3 H) , 1.99-1.95 ( , 5H) , 1.84 (dd, 1 H, J=14.5, 4.2 Hz) , 1.56 (s, 3 H) , 0.86 (s, 3 H) ; .sup.l3C NMR * 217.5, 178.9, 169.9, 164.9, 153.9, 151.3, 137.6, 137.1, 129.2, 89.4, 82.1, 73.3, 67.7, 59.3, 55.2, 49.2 (2 C) , 42.6, 42.4, 37.8, 36.3, 25.6 {2 C) , 24.5, 22.4, 21.0, 16.3; MS (El) m/z ( int reí. ) 499 (M.sup.H-, 1), 439 (2), 365 (7) , 167 (35) , 149 (100); HRMS (El) Calculado para C27H33N08 499.2206, Encontrado 499.2191.

EJEMPLO 3 Éster de 4- [ (bencilmetilamino)metilen] -6-hidroxi-lV-metoximetil-103, 13 3-dimetil-3, 7, 17- trioxo- 1, 3, 4, 7, 10, 113, 12, 13, 14V, 15, 17, 17-dodecahidro-2-oxa-ciclo-penta [V] fenantren-11-ilo del ácido acético djm2-181) A una solución de la wortmanina (10.7 mg, 25.0 mol) en CH2C12 (125 1) se agregó una solución 0.2M recién preparada de la N-metilbencilamina (195 1, 37.0 mol) en CH2C12. La mezcla de reacción se agitó a la temperatura ambiente durante 2 horas. El solvente se removió al vacío y el producto se purificó por cromatografía en Si02 (hexanos / acetato de etilo, 1:9) para dar el djm2-181 (13.3 mg, 24.2 :mol, 97%) como un aceite na. — ranja: [V]D -835 (c 0.0014, CH2C12, 23 C) ; IR (neto) 1742, 1685, 1618, 1589, 1575, 1224 cm"1; XH NMR * 8.36 (br s, 1 H) , 7.36-7.27 (m, 5H) , 6.60 (bs s, 1 H) , 6.10-6.00 (m, 1 H) , 4.68-4.63 ( , 1 H) , 4.53-4.47 (m, 2 H) , 3.25 (s, 3 H), 3.25-3.11 (m, 2 H) , 2.99-2.84 (m, 2 H) , 2.71 (br, 2 H) , 2.55 (dd, 1 H, J=19.5, 8.9 Hz) , 2.38 (dd, 1 H, J L4.4, 7.6 Hz) , 2.32-2.05 (m, 2 H) , 2.05 (s, 3 H) , 1.85 (br s, 1 H) , 1.80 (dd, 1 H, J L4.5, 4.7 Hz), 1.52 (s, 3 H) , 0.82 (s, 3 H) ; 13C NMR * 217.3, 178.9, 169.9, 164.7, 158.3, 151.7, 138.8, 137.1, 134.9, 129.0 (3 C) , 128.6, 128.1 (2 C) , 88.7, 82.2, 73.4, 67.9, 64.3, 59.4, 49.1, 42.7, 42.5, 37.8 (2 C) , 36.3, 25.2, 22.5, 21.1, 16.3; MS (El) m/z (Intensidad reí. ) 549 (M+, 14), 489 (37) , 415 (15) , 120 (23) , 91 (100) ; HRMS (El) Calculado para C3? H3sN08 549.2363, Encontrado 549.2340.

EJEMPLO 4 Se probó la farmacodinámica de varios análogos de la Wortmanina. En particular, el efecto de la dosis de PX-866, PX-867 y PX-881 se midieron en la inhibición de HT-29 xenoinjerto fosfor- Akt . La Figura 1A ilustra que la inhibición se aumento conforme aumentaba la dosis del análogo de la wortmanina. El PX-866 resultó exhibía la actividad inhibidora más grande. El efecto de la ruta de administración en la actividad inhibidora de PX-866 con el tiempo fue también medido. El PX-866 se administró intraperitoneal, . intravenosa y oralmente. COmo se muestra en la Figura IB, notablemente, la formulación oral de PX-866 parece proporciona una inhibición más consistente por un período de tiempo mayor. La farmacocinética de las administraciones intravenosa, intraperitoneal y oral de PX-966 in vivo se midió y se ilustra en la Figura 2. Basado en lo anterior, parece que la vida media de PX-866 es alrededor de 16 horas. El metabolismo de PX-866 en seguida de la administración oral se observó. Generalmente, PX-866 es metabolizado en un carbonilo reducido y en metabolitos desacetilados reducidos en carbonilo, como se ilustra abajo.

Como se muestra en la Figura 3, el componente más abundante es PX-866, seguido por el metabolito reducido en carbonilo, y luego el metabolito desacetilado reducido en carbonilo, sin embargo, en seguida de alrededor de 40 minutos de administración, parece que el PX-866 reducido en carbonilo es además metabolizado al metabolito desacetilado reducido en carbonilo. Con base en lo anterior, el H del metabolito mayor es alrededor de al menos 3 horas .

EJEMPLO 6 La inhibición del cáncer del colon HT-29 llama el fosfo-Akt, según se midió por el porcentaje de control, se midió por la administración de PX-966 y PX-867. Los resultados se ilustran en la Figura 5.

EJEMPLO 7 La actividad contra el tumor de los análogos de la wortmanina se midieron. Como se muestra en la Tabla 1 siguiente, los análogos exhibieron la actividad contra tumores derivados del ovario, colon y el pulmón in vivo .

Tabla 1 *T/C = Prueba/control +óptimos como porcentaje y el día entre paréntesis: p< 0.05 comparado al régimen de crecimiento del tumor de control tratado sin drogas.

EJEMPLO 8 La actividad contra el tumor de la radiación sola, PX-866 solo o en combinación con la radiación, se midieron en OvCar-3 xenoinjertos del ovario humano en ratones, como se muestra en la Figura 6. La radiación se administró diariamente durante 5 días y se comparó con la administración del PX-866 a 8 y 12.5 mg/kg, ip diariamente durante 5 días o en combinación con la radiación. Los resultados se midieron en términos del volumen medio del tumor.

EJEMPLO 9 La actividad contra el tumor de varias drogas citotónicas solas o en combinación con PX-866 se midieron Los agentes citotónicos incluyen la gemcitabina, Taxol y cisplatin. Como se muestra en la siguiente Tabla 2, el PX-866 aumentó significantemente el porcentaje de inhibición del crecimiento del tumor y el retardo en el crecimiento sobre el tratamiento con los agentes citotóxicos solos en las líneas de células de cáncer pancreático, del ovario, del pulmón y el colon. Tabla 2 EJEMPLO 10 Materiales y Métodos. Compuestos . PX-866 (ácido acético (1S, 4E, 10R, 11R, 13B, 14R) - [4-dialilaminometileno-6-hidroxi-l-metoximetil-10, 13-dimetil-3, 7, 17-trioxo-l, 3, 4, 7, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17- dodecahidro-2-oxa-ciclopennta [a] fenantren-11-ilo-éster) se sintetizó como se describió previamente (21) . Para la administración iv a ratones, PX-866 se disolvió en 10 mg/ml en etanol al 5% en 0.9% de NaCl, y para la administración oral (po) al 5% mg/ml en etanol al 5% en agua. Se obtuvo el Gefitinib de Astra Zeneca (Macclefiels, Reino Unido) y se suspendió en 7.5 mg/ml en 0.1% de Tween 20 en agua para la administración oral Anti-fosfoSer473-Anticuerpo Aly purificado del conejo, anticuerpo anti-Akt, antifosfo Tyrl086-receptor-EGD anticuerpo y anti-EGFR anticuerpo se obtuvieron de Cell Signaling Technology (Beverly, MA) . pllOa / p85a recomvbinante humano, , pllOß / p85a, pl20/ y pllO*/ p85a PtdIns-3-cinasas se obtuvieron de üpstate (Charlottesville, VA) . El clorhidrto de metformina se obtuvo de Spectrum Chemical 8Garena, CA) , clorhidrato de pioglitazone y la insulina humana recombinante de Sigma Chemical (St. Louis) . Células , e obtuvieron las células del cáncer del pulmón, células no pequeñas A-549, de American Tissue Type Collection (Rockville, MD) . Las células crecieron en aire humidificado al 95%, 5% de C02 a 37 °C en medio Eagle modificado Dulbecco (SMEM) suplementado con 10% de suero de bovino fetal (fbs) . Todas las líneas celulares se probaron para estar libres de micoplasma usando un equipo PCR ELISA (Roche Diagostics le, Indianápolis, IN) . Medición de PtdIns-3-cinasa . La capacidad del PX-866 para inhibir pll0a/P85a recombinanate y pll0ß/p85a humano recombinante, pl20 (y pll0*/p85a se midió por [32 P] (fosforilaación dependiente de -ATP de Ptdlns como se describió por Stirdivant et al (22) . La inhibición de PtdIns-3-cinasa celular se midió como la relación de fosfoSer473 -Akt al Akt total, medido por la mancha Western, como se describió previamente. Estudios Antitumor. Aproximadamente 107 células del cáncer del pulmón A-54 nsc en el log de crecimiento celular se inyectaron subcutáneamente en una solución salina regulada con 0.2 mi de fosfato en los flancos de varios ratones inmunodeficientes (scid) . Cuando los tumores alanzaron 100 ó 600 mm3 , los ratones se estratificaron en grupos de 8 animales que tienen aproximadamente volúmenes promedio iguales de tumores, y se inició la administración de droga. La dosificación fue cada tercer día con gefitinib a 75 mg/kg po; PX-866 a 4, 9 ó 12 mg/kg iv; PX-866 a 1, 2, 5 y 3 mg/kg po, o PX.866 administrado 4 horas o antes de la gefitinib. Los animales se pesaron semanalmente y se midieron los diámetros de los tumores dos veces por semana en ángulos rector (d corto, d largo) con calibradores electrónicos y se calcularon los volúmenes por la fórmula v = (d corto) 2 x (d largo) 3. Cuando el tumor alcanzó 2,000 mm3 o más, o llegó a ser necrótico, los animales se eutanizaron. Estudios farmacodinámicos . 107 células del cáncer del pulmón A-549 nsc, se inyectaron subcutáneamente dentro de los flancos de ratones scid machos y se permitieron crecer a aproximadamente 100 mm3. Los ratones se administraron con PX-866, 12 mg/kg iv, 3 mg/kg po y gefitinib 75 g/kg po, cada tercer DÍA durante 5 días. Los tumores se removieron 24 horas después de la última dosis y se congelaron inmediatamente en líquido N2. Para el ensayo, los tumores se homogeneizaron en 50 mM de regulador HEPES, pH de 7.5, 50 mM de NaCl, 1% de Nonidet P40 y 0.35% de desoxicolato de sodio y se realizó la prueba de mancha Western usando anticuerpos antifosfoSer473-Akt y antiAkt . La actividad de Akt se expresó como la relación de fosfo-Ser473-Akt al Akt total. .Estudios de la toxicidad. Ratones scid macho se administraron con PX-866 a 10 mg/kg iv, 3 y 1.5 mg/kg po, cada tercer día durante 14 dosis. Ratones C57B1/6 se administran con PX-866 a 3 mg/kg po, cada tercer día durante 15 dosis Los ratones se sacrificaron 24 horas después de la última dosis y cambios en el peso corpóreo, se midieron los linfocitos de la sangre, neutrófilos, glóbulos rojos, plaquetas, conteos, glucosa en el suero, aspartame amino transferasa (AST) y amino alanina transferasa (ALT) . Estudios de Tolerancia a la glucosa . 6 Ratones hembra C5781, ayunaron durante la noche y se administraron una sola dosis de D8+) glucosa (1 mg/kg) como una solución de 0.1 g/ml, po. La sangre se recogió a 0, 10, 20, 30, 60, 90, 120 y 180 minutos y la glucosa del plasma se midió usando un equipo de medir glucosa en la sangre (Sigma Chemical) Co., St . Louis MO) para obtener un área de glucosa del plasma bajo la curva (AUC 0-180 minutos) . Los ratones se administraron con BX-866, 10 mg/kg po, como una sola dosis y la glucosa se suministró 4 horas después, o 3 mg/kg de PX-866 po cada tercer día durante 20 dosis y esta glucosa se administró 24 horas y 8 días después de la última dosis. La metformina se administró a 250 mg/kg po diariamente durante 5 días (24) y 10 mg/kg de pioglitazona ip diariamente durante 7 días (35) antes de la administración de la glucosa, Se administró la insulina recombinante humana a 0.075 :g/kg ip (26) al mismo tiempo como la administración de la glucosa. Formación de colonias de la médula . Después del sacrificio, se extrajeron las médulas de los ratones desde cada fémur y lo glóbulos rojos se sometieron a lisis con 0.2% de NaCl hipotónico, seguido por la adición de 1.6% de NaCl hipertónico. Aproximadamente 20,000 células se colocaron en una placa en lml de Methocult™ GF M3434 (Stemcell) Technologies Inc, Vancouver. BC, Canadá) que contiene 1% de metilcelulosa en el Medio Esencial Mínimo de Isocove, 15% fbs, 1% de albúmina del suero del bovino, 10 : g/ml de insulina humana recombinante, 2'' : g/ml de transferrina humana, 10 mM de ß-mercaptoetanol, 2 mM de L-glutamina, 50 ng/ml del factor celular de tallo en, 10 ng/ml de interleucina-3 recombinante del ratón 10 ng/ml de interleucina-6 recombinante humana y 3 unidades/mi de eritropolietina recombinante. Las células se colocaron en placas por triplicado y crecieron a 37 °C y 5$ de C02 en un medio húmedo durante 14 días, antes de clasificar. Las colonias (> 40 células / colonia) o racimos (3-40 células) se clasificaron y crecieron de la unidad que forma colonias de granulocito, eritroide, macrófago, megacariocito (CFÜ-GEMM; unidades que revientan (BFÜ-E) , unidades que forman colonias granulocito macrófago (CFU-GM) evaluadas usando criterios estándar. Las observaciones cualitativas se hicieron en niveles anteriores de células sencillas. Resultados . Inhibición de PtdIns-3-cinasa . La capacidad de PX-866 en inhibir las PtdIns-3-cinasas recombinantes, comparada a la inhibición por la wortmanina se muestran en la Tabla 3. El PX- 866 y la wortmanina son inhibidores potentes de PllOa, pl20 ( y pllO, pero, a diferencia de la wortmanina, PX-866 es un inhibidor pobre de pllOß.

Tabla 3 - Inhibición de Ptdlns-3-cinasas por PX-866 y la wortmanina Estudios de cultivo de células . Fosfo-Akt inhibido con PX-866 en células de cáncer del pecho humano en medios que contienen 10% de fbs con una CI50 de 25 nM. Gefitinib solamente inhibió fosfo-Akt en células que se privaron del suero durante 24 horas y luego se estimularon con EGF 25 ng/ml, pero no en medios con 10% de fbs. Esto sugiere que la trayectoria de a PtdIns-3-cinasa es estimulada por factores de crecimiento en el suero, además de EGF. Los estudios de la inhibición del crecimiento celular confirmaron los reportes previos que las células A-540 son resistentes a la inhibición del crecimiento por gefitinib, con una CI50 de 1.1 :M, PX-866 a concentraciones hasta de 100 nM no aumentaron la inhibición del crecimiento por gefitinib. Estudios antitumores in vivo . La administración de gefinitib a 75 mg/kg po cada tercer día a ratones con 100 mm3 de xenoinjertos del cáncer del pulmón nsc humano inhibieron el crecimiento de xenoinjertos con un T/C del 51% al final del periodo de dosis (Figura 7) , PX-866 es aproximadamente 4 veces más potente como un agente contra tumores cuando se da oral que dado iv, y las dosis se ajustaron convenientemente (Tabla 4) . Ratones scid hembra se implantaron subcutáneamente en el flanco con 107 células del cáncer del pulmón nac humano A-549. Los tumores se permitieron crecer a un volumen medio de 100 mm3 antes de iniciar el tratamiento de drogas cada tercer día durante 14 dosis. La actividad antitumor se expresó como el % en volumen del tumor tratado / tumor de control (TC% ) al final del período de dosis . Había 8 ratones en cada grupo, toas las diferencias son p<0. 01.

Tabla 4 - Actividad antitumor de PX-866 en combinación con gefitinib Tratamiento y Dosis Programa Tumor PX-866 ruta I mg/kg T/C% 4 hrs antes de gefinitib Tumor T/C% gefitinib 75 QOD x 14 50.8 o PX-866 IV 4 QOD x 14 65.3 20 . 5 PX-866 IV QOD x 14 31.5 22 . 3 PX-866 PO QOD x 14 54.8 40 . 8 PX-866 PO 2.5 QOD x 14 40.8 18 . 1 Cuando se administra solo a ratones con 100 mm3 de xenoinjertos de tumor A549, PX-866 inhibió el crecimiento del tumor con T/C% del 31% a 9 mg/kg iv y 41% a 2.5 mg/kg po. Los estudios preliminares mostraron que PX-866 en combinación con gefitinib en un programa de días alternativo fue más activo cuando se administra 4 horas antes más bien que 24 horas antes del gefitinib (datos no mostrados) . Usando PX-866 se administró 4 horas antes de gefitinib, la combinación dio una T/C% de 33% a 9 mg/kg de PX-866 iv y 18% a 2.5 mg/kg de PX-866 po. El crecimiento del tumo se mantuvo estacionario durante la primera mitad del período de tratamiento con PX-866 y luego comenzó a aumentar lentamente hacia el final del periodo (Figura 7. La combinación aumentó a actividad antitumor como se observó con xenoinjertos del tumor A-549 muy grandes de 600 mm3 (Figura 7B) . Inhibición del tumor EGFR y Señalización de PdyIms-3-cinasa . La administración de gefitinib, 75 mg/kg po, a ratones con xenoinjertos de tumor A-549, cada tercer día durante 5 días, inhibió el tumor fosfo-EHGR por 43%, pero no afectó significantemente el tumor fosfo-Akt (Figura 8) . FX-866, 12 m/kg, v o 3 mg/kg po, cada tercer día durante 5 días, no afectó en forma significante el tumor fosfo-EGFR, pero inhibió el tumor fosfo-Akt por 51% y 48%, respectivamente. La combinación del gefitinib y PX-866 inhibió tanto el tumor fosfo-RGFR como el tumor fosfo-Akt. Efectos similares se vieron en el segundo estudio, ilustrado en la Figura 9. Así, en los xenoinjertos del tumor A-549 las trayectorias de EGFR y PtdIns-3-cinasa parece funcionan independientemente y se inhiben selectivamente por gefinitib y PX-866, respectivamente. La toxicidad de la administración de PX-866 por período largo . La toxicidad de a administración por periodo prolongado de PX-866 a ratones scid se resume en la Tabla 5. os valores son el promedio de 4 ratones por grupo ± SE- Tabla 5 - Toxicidad de la administración de PX-866 por período largo *p=0.5, ** p<0.01 comparado al valor de control Hubo una ganancia disminuida en el peso del cuerpo sobre las 4 semanas de tratamiento con PX-866 a 10 mg/kg, iv, y 3 mg/kg, po, al 83% y 28% de la ganancia del peso de control, respectivamente (p 0.05). Hubo un aumento significante en el conteo de leucocitos en seguida de la administración oral de PX-866, debido primariamente al conteo de neutrófilos de la sangre aumentados. Todos los cambios en el peso corpóreo, glucosa en plasma y conteo de células sanguíneas regresó a la normal por 9 días después de detener el tratamiento. La disminución del peso corpóreo y un aumento en la glucosa en sangre se confirmaron en dos estudios adicionales, usando los ratones scid, pero el aumento en el conteo de las células de la sangre fue menos pronunciado en estos estudios (datos no mostrados) . P-866 y tolerancia a la glucosa . Con el fin de obtener mayor visión en el mecanismo para el aumento en la glucosa en plasma por PX-866, se realizaron estudios en niveles de insulina y en la tolerancia a la glucosa en seguida de la dosis oral de 1 g de glucosa/kg, a ratones en ayunas C57B1/6 (Figura 10) . La administración de PX-866 como una sola dosis de 10 mg/kg po, causó un aumento en los niveles de insulina en plasma por hasta 5 horas. PX-866 también diminuyó la tolerancia a la glucosa n los ratones, conduciendo a un aumento en la glucosa del plasma, particularmente en los puntos de tempo después de 1 hora de la administración de la glucosa, donde la glucosa del plasma disminuyó en ratones no tratados, pero aumento en los ratones tratados con PX-866. Los resultados expresados como AUC 0-180 minutos para todos los estudios de tolerancia a la glucosa se muestran en la Tabla 6 siguiente. Los valores son el promedio ± Desviación estándar de 4 ratones por grupo Tabla 6 - Efectos de PX-866 en la tolerancia a la glucosa en ratones p < 0.05 comparado a control sin tratar b p < 0.05 comparado a control tratado con droga sin PX-866 c p < 0.05 comparado a PX-866 solo d p < 0.05 comparado a PX-866 crónico solo El tratamiento con insulina a altas dosis superó el aumento en glucosa en el plasma, causado por PX-866 y disminuyó significantemente la glucosa en 0-180 min en tanto el control como en ratones tratados con PX-866. la metformina, droga antihiperglucémica, no tuvo efecto en el aumento de la glucosa en sangre por PX-866, pero la droga tiazolidindiona hipoglucémica, pioglitazie bloqueó casi completamente el aumento (figura 10 y tabla 6) . el tratamiento por período largo con PX-866 a 9 mg/kg iv, cada tercer día, durante 15 dosis, dio un aumento en los niveles de glucosa no en ayunas (+ S.E, n= 4), de 133.7 ± 16 mg/dl, en ratones de control a 269.4 + 27.8 mg/dl (p < 0.05) en ratones tratados con PX-866. el tratamiento también dio un aumento en la glucosa en plasma AUC 0-180 min, 24 horas después de la última dosis de PX-966, pero recuperó los valores de control 8 días después de la última dosis (Tabla 4). la Pioglitazona disminuyó significantemente la glucosa AUC 0-120 min, 24 horas después de la última dosis del tratamiento de PX-866 por período largo a un valor no diferente significantemente al control (tabla 4) . PC-866 y neutrófilos aumentados . Cuando PX-866 se administró a ratones C57B1/6 a 3 mg/kg po, cada tercer día durante 15 dosis, hubo un aumento significante en el conteo de neutrófilos (± DE, n = 4) de 1.2 ± 0.3 K/ : 1 en ratones de control, a 3.7 + 1.8 K/ :1 en ratones tratados con PX-866 (p < 0.05), pero sin cambio significante en cualquiera de los otros elementos de la sangre. Las unidades que forman colonias en la médula no mostraron un cambio significante en la línea eritroide CFU-GENNN, BFU-E o CFU-R y una disminución pequeña, pero significante en la mieloide CFU-GM (± .E., n = 4) de 388 ± 52 colonias por 60,000 células de la médula colocadas en la laca en los ratones de control a 168 ± 59 colonias (p < 0.05) en los ratones tratados con PX-866. Al mismo tempo hubo un aumento en los números de leucocitos individuales en los cultivos de ratones tratados con PX-866, que sugieren la adhesión de células alteradas. Discusión. La sensibilidad de las líneas celulares del cáncer del pulmón nsc a la inhibición del crecimiento por Gefitinib está asaociada con la inhibición de .la autoosforilación de EGFR estimulada por RGF con regulación descendente de la superficie de células, regulación ascendente de ERK1/2. e inhibición de Ptdlns-3-cinasa/Señalización Akt. La trayectoria de PtdIns-3-cinasa/Akt es una trayectoria crítica para la supervivencia de células de cáncer.

En un estudio por Ono et al., gefitinib inhibió la señalización de PdtIns-3-cinasa/ Akt inducido por EGF, según se mide por los niveles de fosfo-Akt, en casi todas las líneas celulares del cáncer del pulmón nsc, sin embargo, sólo unas cuantas líneas (3/11) mostraron inhibición del fosfo-Akt bajo condiciones de crecimiento simuladas por el suero. Estos resultaos sugieren que muchos factores de líneas celulares del cáncer del pulmón nac además de RGF , son responsables de la activación de la señalización de Ptdns-3-cinasa / Akt. Las células de tumores con este fenotipo pueden mostrar responsabilidad limitada a las actividades de los inhibidores EGFR. Engelman et al, han reportado recientemente que ErbB-3 acopla la señalización de EGRF a la activación de PtdIns-3-cinasa / Akt. y que gefitinib inhibe fosfo-Akt y el crecimiento celular solamente en las líneas de células del cáncer del pulmón nsc, que expresan EGFR o el tipo silvestre o mutantes, y ErbB-3. Sin embargo, la expresión KrbB-3 forzada no suministra células del cáncer del pulmón nsc sensibles al gefitinib, lo que sugiere que trayectorias además de EDFR deben activar la señalización de PtdIns-3-cinasa en células deficientes de ErbB-3. Otros miembros de la familia receptora de ErbB puede también acoplarse con ErbB-3 para activar la PtdIns-3-cinasa y promover el fenotipo del cáncer. Razonamos que la inhibición de la PtdIns-3-cinasa puede ofrecer una estrategia racional para potenciar la actividad contra el tumor de la gefitinib en las líneas celulares del cáncer del pulmón nsc resistentes al gefitinib. Para los presentes estudios la línea celular del cáncer del pulmón nsc A-549 que está entre las más resistentes a las líneas de cáncer del pulmón nsc al gefitinib, que no expresa ErbB-3 se escogió. La deficiencia en PTEN puede también hacer a las células resistentes a la inhibición del crecimiento de gefitinib presumiblemente a través de la activación constitutiva de la señalización e PtdIns-3-cinasa / Akt. in embargo, las anormalidades genéticas de PTE son relativamente raras en el cáncer del pulmón y las células A-549, como la mayoría de las líneas celulares del cáncer del pulmón nsc, tienen el tipo silvestre PTEN y niveles activados no constitutivamente de fosfo-Akt. para inhibir la PtdIns-3-cinasa usamos PX-866 que se ha mostrado regulan en forma descendente el tumor fosfo-Akt y exhiben una actividad antitumor en un número de modelos de xenoinjertos de tumores humanos, cuando se suministran o intravenosa u oralmente. Se ha encontrado que PX-866 administrado iv o po, inhibe el crecimiento de xenoinjertos del tumor del pulmón nac A-540, el ratones scid, tan efectivamente como el gefitinib. Ambos agentes parece ser más activos cuando se administran por período largo, dando al tumor un T/C alrededor del 50%. Sin embargo, cuando el PX-866 se administra junto con el gefitinib, el crecimiento del tumor A-540 parece ser retenido estacionario durante la primera parte del tratamiento y aumenta sólo levemente durante la última parte di tratamiento. Esto se ha visto con tumores tanto de 100 mm3 como con tumores grandes de 600 mm3 avanzados, El gefinitib falló en inhibir el fosfo-Akt en xenoinjertos de tumores A-549. En los estudios de cultivos celulares A-549 el gefitinib tampoco inhibió las células de fosfo-Akt bajo las condiciones de crecimiento estimuladas por el suero y fue sólo inhibidor en EH simulado, células A-549 privadas de suero. En contraste, el PX-866 inhibió fosfo-Akt de las células A-549 bajo condiciones de crecimiento estimulados por el suero y en xenoinjertos de tumores humanos A-549. El Gefitinib inhibió fosfo-EGFR en los xenoinjertos de tumores humanos A-549 y el PX-866 no lo hizo. Así, el PX-866 potenció la actividad antitumor del gefitinib contra aún otros xenoinjertos de tumores A-549 muy grandes, dando el control completo del crecimiento del tumor en las etapas tempranas del tratamiento. La inhibición del crecimiento del tumor se asocia con la inhibición de la señalización de la PtdIns-3-cinasa/Akt por PX-866 que no se observó con el gefitinib solo. Un estudio previo ha reportado LY294002. un inhibidor de la PtdIns-3-cinasa no específico y relativamente tóxico, con potencial limitado para el desarrollo clínico, administrado ip potencia la actividad antitumor del gefitinib contra xenoinjertos celulares del glioma humano U87© EHGR de 6 a 100 mm3 , que coexpresan el tipo silvestre y el tumor mutante derivado de EGFR activado. En este estudio, ni el gefitinib ni LY294002 mostraron solos una actividad antitumor. La toxicidad mayor de la administración prolongada de PX-866 fue la hiperglucemia y la tolerancia disminuida a la glucosa, que se invierte cuando se detiene la administración de la droga. Las señales de insulina son dependientes predominantemente por la PdtIns-3-cinasa isoforma pllOß, pero también por pllOa, mientras las señales de crecimiento son dependientes de la PtedIns-3-cinasa pllOa. El PX-866 es un inhibidor más potente que la PdtIns-3-cinasa pllOa en comparación con la wortmanina pero, a diferencia de esta sortmanina, el PX-866 es un inhibidor mas pobre que la PtdIns-3-cinasa ñllOB. La administración aguda de PX-886 a los ratones disminuyen la tolerancia a la glucosa al mismo tiempo que los niveles de plasma de insulina se aumentan, lo que sugiere una disminución de la sensibilidad a la insulina. Esto es similar al fenotipo de ratones deficientes en la isoforma Akt2 que incluye la hiperglucemia marcada, hiperinsulinemia y una habilidad sin dañar de la insulina a menor glucosa en la sangre. En el presente estudio, una alta dosis de insulina fue capaz de superar el aumento en la glucosa en sangre causado por PX-866. La metformina, una droga ampliamente usada para el tratamiento de la hiperglucemia el tipo 2 de diabetes, disminuye la glucosa en sangre por estimular la proteincinasa activada por AMP (AMPK) corriente abajo de la Ptdlns-3-cinasa para aumentar la oxidación del ácido graso y disminuir la síntesis de triglicéridos, producción hepática de la glucosa y utilización de la glucosa. La AMPK media la estimulación de la captación de glucosa a través de a translocación del transportador 4 de la glucosa GUT-4) a la membrana del plasma. Se ha sugerido que un activador de la AMPK, tal como la metformina, puede aumentar la sobrevivencia de la célula de tumor si se usa con agentes, tal como la PtdIns-3-cinasa o inhibidores de Akt que dañan la utilización de la glucosa. Se ha encontrado que la metformina no tiene efecto en la tolerancia a la glucosa disminuid causada por PX-866. Se debe notar que una trayectoria paralela mediada por reclutar el proto-oncógeno Cbl al receptor de insulina activado, también aumenta la captación de glucosa por la insulina. En contraste con la metformina, la pioglitazona, droga hiperglucémica de la tiazolindinediona invirtió los efectos inhibidores de la administración de PX-866 tanto aguda como crónica en la tolerancia a la glucosa. Las tiazolidendionas sensibilizan el cuerpo a los efectos metabólicos de la insulina por actuar como ligaduras para la peroxisoma, receptor ? activado por el proliferador (PPAR?) el factor de transcripción que está presente en niveles altos en el tejido adiposo. El PPAR? también induce la diferenciación de las células de tumor y la activación del PPAR? por la pioglitazona, se ha reportado inhibe el crecimiento de A-659 xenoinjerto del tumor del pulmón nsc en ratone scid. Mientras todos los detalles de la señalización de la insulina a través de la PdtIns-3-cinasa y los efectos de las drogas que disminuyen la glucosa, tal como la metformina y pinglitazona permanecen ser elucidados, parece que la hiperglucemia causada por la inhibición de la PtdIns-3-cinasa por PX-866 es responsiva a la insulina y pioglitazona, lo cual puede ser importante para el uso clínico de PX-866. La selectividad de PX-866 como un inhibidor de pllOa con relación a pllOß, a diferencia de la wortmanina, la cual inhibe tanto pllO como pllOß puede también explicar los efectos inhibidores del crecimiento más pronunciado de PX-866, y la capacidad de la insulina y pioglitazona a invertir la hiperglucemia inducida por PX-866. Los otros efectos farmacológicos de la administración del PX-866 fue un aumento en la circulación de neutrofilos al miso tiempo hay una disminución en la formación de colonias de CFU-GM de la médula. La disminución en CFU-GM inducida por el PX-866 es consistente con la sensibilidad disminuida al factor de estímulo de colonias de macrófagos de granulocitos (GM-CSF) observada en macrófagos derivados de la médula de ratones inconscientes -/- p85. El aumento en la circulación de neutrófilos por PX-866 puede reflejar la movilización aumentada de las células progenituras en la circulación periférica, tal vez asociadas con la adhesión de células disminuida como se ve en ratones inconscientes -/- p85a. En resumen el inhibidor P-966 de PtdIns-3-cinasa, que muestra selectividad para pllOa comparado con pllOßparece potencia la actividad antitumor de gefitinib inhibidor de EGFR contra xenoinjertos del cáncer del pulmón nsc A-465 aún mayores, con el control del crecimiento del tumor sustancialmente completa en las etapas primeras de tratamiento. Este efecto terapéutico de PX-866 se asocia con la inhibición de la fosforilación del tumor Akt, que no se ve con el gefitinib solo. La mayor toxicidad de PK866 crónica fue una hiperglucemia relacionada con el objetivo con una disminución reversible en la tolerancia a la glucosa, debido a la sensibilidad disminuida a la insulina. La tolerancia a la glucosa disminuida fue insensible a la metformina inhibidora de AMPK pero se invirtió por la insulina y la pioglitazona activadora de PPAR?. El PX-866 de período prolongado también causó conteos aumentados de neutrófilos, aparentemente debido a la movilización vascular. Así, el PX-866 por inhibir la señalización de PtdIns-3-cinasa/Akt puede tener utilidad clínica en aumentar la respuesta a inhibidores de EGFR tal como gefitinib en pacientes con cáncer del pulmón nsc que no responden a la terapia con inhibidores de EGFR.

EJEMPLO 10 Estudios ulteriores de los efectos de la administración de PX-866 y gefitinib se ilustran abajo. El presente ejemplo ilustra los efectos de la combinación de PX-866 y el gefitinib (Iressa®) a dosis mayores. Como se muestra en la Figura 11, el PX-966 se administró 4 oras antes de la administración de Iressa® (Véase la Figura HA) y 24 horas en seguida de la administración de Gefitinib (Véase la Figura 11B) en xenoinjertos del pulmón de células pequeñas A549. El PX-866 fue también administrado sustancialmente en forma simultánea con el gefitinib en xenoinjertos del pulmón de células pequeñas A-549. La actividad contra el tumor de PX-866 con gefitinib en el cáncer del colon HT-29 fue también medida. COmo se ve en la Figura 13, el PX-866 aumentó el efecto antitumor del gefitinib.

Este gefitinib se administro a 75 mg/kg oral solo. El PX-866 se administro oralmente a 2 mg/kg solo o 4 horas antes de la administración del gefitinib. EJEMPLO 12 Se midió el efecto antitumor de la administración del PX- 866 con bevacizumab (Avastatin®) . Wl PX-866 se administró a varis dosis intraavenosamente u oralmente, cada tres días, solo o en combinación con bevacizumab. Como se muestra en la Figura 14, la terapia en combinación aumentó significantemente la actividad antitumor de bevacizumab.

EJEMPLO 13 La Figura 15 ilustra la inhibición de PX-866 de fosfor-Akt en la el del ratón, solo o en combinación con el gefitinib. Se entenderá que los ejemplos y las formas de realización descritos aquí, son para fines de ilustración únicamente y que varias modificaciones o cambios en detalle serán sugeridos a las personas expertas en la materia y serán incluidos dentro del espíritu y punto de vista de esta solicitud y el ámbito de las reivindicaciones anexas. Todas las publicaciones, patentes y solicitudes de patentes aquí citadas se incorporan en la presente como referencia en su totalidad, para todo propósito.

Claims (23)

1. REIVINDICACIONES 1- Un compuesto de la fórmula: ra* en que Y es un heteroátomo y Rl o R2 es un alquilo insaturado, alquilo no lineal o alquilo sustituido, respectivamente, y un agente quimioterapéutico.
2. 2- El compuesto de la reivindicación 1, en que dicho Rl o R2 es un alquilo disustituído.
3. 3- El compuesto de la reivindicación 1, en que dicho agente quimioterapéutico se selecciona del grupo que consiste de un agente citotóxico y un agente objetivo contra los tumores .
4. 4- El compuesto de la reivindicación 2, en que dicho agente citotóxico se selecciona del grupo que consiste de: gemcitabine, paclitaxel y cisplatin.
5. - El compuesto de la reivindicación 2, en que dicho agente objetivo contra tumores se selecciona del grupo que consiste de: gefitinib, erlotinib, trastuzumab, cetuximab y bevacizumab.
6. - El compuesto de la reivindicación 1, en que dicho compuesto es :
7. - El compuesto de la reivindicación 1, en que dicho compuesto es :
8. - El compuesto de la reivindicación 1, en que dicho compuesto es:
9. 9- El uso del compuesto reclamado en la reivindicación 1, para la fabricación de un medicamento para tratar el cáncer.
10. 10- El uso de la reivindicación 9, en que dicho medicamento se administra intravenosamente.
11. 11- El uso de la reivindicación 9, en que dicho medicamento es el PX-866 y dicho agente quimioterapéutico es el gefitinib.
12. 12- El uso de la reivindicación 9, en que dicho medicamento es el PX-866 y dicho agente quimioterapéutico es el bevacizumab.
13. 13- El uso de la reivindicación 9, en que dicho medicamento es el PX-866 y dicho agente quimioterapéutico es el gefitinib.
14. 14- El uso de la reivindicación 9, en que dicho medicamento es el PX-867 y dicho agente quimioterapéutico es el bevacizumab.
15. 15- El uso de la reivindicación 9, que además comprende administrar un agente contra la hiperglucemia.
16. 16- El uso de la reivindicación 9, en que dicho compuesto se administra oralmente.
17. 17- El uso de la reivindicación 9, en que dicho compuesto se administra intravenosamente.
18. 18- El uso de la reivindicación 9, en que dicho medicamento es el PX-866 y dicho agente quimioterapéutico es el gefitinib.
19. 19- El uso de la reivindicación 9, en que dicho medicamento es el PX-866 y dicho agente quimioterapéutico es el bevacizumab.
20. 20- El uso de la reivindicación 9, en que dicho medicamento es el PX-867 y dicho agente quimioterapéutico es el gefitinib.
21. 21- El uso de la reivindicación 9, en que dicho medicamento es el PX-867 y dicho agente quimioterapéutico es el bevacixu ab.
22. 22- El uso de la reivindicación 9, que <además comprende administrar un agente contra la hiperglucemia.
23. 23- Una composición, la cual comprende un compuesto de la fórmula: en que Y es un heteroátomo y Rl o R2 es un alquilo insaturado, alquilo no lineal o alquilo sustituido, respectivamente, y un agente quimioterapéutico.